Dissertations / Theses: 'Protéines de choc thermique – Immunologie'

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Cellier, Mathieu. "Elaboration de modèles expérimentaux pour l'étude des stress cellulaires dans les interactions hôte - agent pathogène." Montpellier 2, 1992. http://www.theses.fr/1992MON20205.

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Abstract:

Au cours de processus infectieux, les interactions entre pathogenes intracellulaires et macrophages peuvent declencher des reactions cellulaires apparentees a la reponse au choc thermique. Ces reactions impliquant des proteines specifiques appelees proteines de stress (hsp) ont ete etudiees en utilisant comme modele la lignee leucemique humaine u937 et la bacterie brucella. Nous avons montre qu'un choc thermique sub-lethal permet d'induire la differenciation des cellules myelomonocytaires. Les resultats obtenus suggerent une adaptation fonctionnelle au stress des cellules monocytaires permettant d'accelerer leur maturation en macrophages lors d'etats febriles. Les hsp majeure dnak (hsp70) et dnaj (hsp40), groe1 (hsp60) et groes (hsp10) de brucella ovis ont ete clonees. L'operon dnak-j a ete sequence; il est exprime dans e. Coli et permet de complementer un mutant deficient en dnak. La dnak de brucella ovis est d'autre part apparue comme un antigene majeur au cours de l'infection. La caracterisation moleculaire d'un fragment de hsp60 a permis de preciser la taxonomie du genre brucella. La conservation structurale des hsp70 au cours de l'evolution a permis d'analyser l'origine phylogenetique de brucella ovis

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Anquetil-Behra, Carole. "Les protéines de choc thermique chez les mammifères." Paris 5, 1992. http://www.theses.fr/1992PA05P203.

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Moutaoufik, Mohamed Taha. "Étude de la structure et de la fonction de la petite protéine de choc thermique DmHsp27." Doctoral thesis, Université Laval, 2017. http://hdl.handle.net/20.500.11794/30306.

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Abstract:

Les petites protéines de choc thermique (sHsps : small heat shock proteins) sont présentes en nombre variable dans tous les organismes. Le génome de Drosophila melanogaster encode 12 sHsps, avec une expression au cours de développement, une localisation intracellulaire et une spécificité de substrats différents. DmHsp27 est l’une des rares sHsps à avoir une localisation nucléaire avant et après un choc thermique. Cette localisation nucléaire est inhabituelle, d’autant plus qu’aucune fonction spécifique de cette protéine n’a encore été identifiée. Les mécanismes responsables de la localisation nucléaire de DmHsp27 ainsi que sa probable fonction dans le noyau restent peu connus. L’étude des orthologues de DmHsp27 chez les insectes a permis de déterminer que la localisation nucléaire n’est pas spécifique à DmHsp27 et d’autres sHsps chez les insectes présentent le même signal de localisation nucléaire que DmHsp27. Le réseau d’interaction de DmHsp27 nous laisse croire que cette protéine ne joue pas seulement le rôle de chaperon moléculaire, mais qu’elle est probablement impliquée dans différents processus nucléaires. Au niveau structurel, contrairement aux sHsps chez les métazoaires, DmHsp27 forme deux populations d'oligomères non en équilibre. Des mutations indépendantes de trois arginines hautement conservées au niveau du domaine alpha-cristallin (R122, R131 et R135) à la glycine affectent l’oligomérisation par formation d’une seule population de grand poids moléculaire. In vitro, l'activité de chaperon de DmHsp27WT est comparable à celle de ses deux populations isolées et à celle des mutants R122G, R131G et R135G utilisant la luciférase comme substrat. Cependant, dans un essai de protection contre l’aggrégation de l’insuline, l'activité de chaperon de DmHsp27 est inférieure à celle des mutants R122G et R131G. Une stratégie de délétion et mutation a été utilsée pour étudier le rôle de la région N-terminale sur l’oligomérisation et la fonction chaperon de DmHsp27. Tel que déterminé par chromatographie d'exclusion et gel natif, des mutations au niveau de F29, G30 et G32 présentent des structures oligomériques différentes de celle du type sauvage. Aucun de ces mutants sauf l'élimination complète de la région N-terminale n’a montré une perte d'activité chaperon, suggérant un rôle important dans la reconnaissance et liaison de substrat. Étonnamment, les deux glycines (G30 et G32) conservées chez les orthologues de DmHsp27 agissent comme régulateurs négatifs de l'activité chaperon; leurs mutations améliorent grandement la prévention d’agrégation d’insuline. La différence du rendement de la protéine sauvage et des mutants G30R et G32R à prévenir l’agrégation de l’insuline à 20 °C et à 42 °C a permis d’établir un lien entre la structure et la fonction chaperon de DmHsp27 et de définir le mode d’action de DmHsp27 suite au stress thermique. En résumé, cette étude a permis de caractériser DmHsp27 et ses mutants au niveau du domaine alpha cristallin et de la région N-terminale et a donné un aperçu d’un nouveau mécanisme de protection contre l’agrégation des sHsps. Le rôle de chaperon moléculaire joué par DmHsp27 et son induction durant le développement embryonnaire laisse cependant présumer que cette protéine remplit d’autres fonctions cellulaires importantes.
Small heat shock proteins are present in varying numbers in all organisms. In Drosophila melanogaster there are 12 sHsps, which have distinctive developmental expression patterns, intracellular localizations and substrate specificities. DmHsp27 is one of the very few sHsps that have a nuclear localization before and after heat shock. This nuclear localization is unusual, especially since no specific function has yet been identified. The mechanisms responsible for the nuclear localization of DmHsp27 and its function in the nucleus remain poorly understood. First, the study of DmHsp27 orthologs helped to determine that nuclear localization is not specific to DmHsp27 and other sHsps in insects have the same nuclear localization signal as DmHsp27. The DmHsp27 interaction network leads to believe that this protein does not only play the role of chaperone, but it is also involved in various nuclear processes. Second, unlike metazoan sHsps, DmHsp27 forms two populations of oligomers not in equilibrium. Mutations of highly conserved arginine residues in the ACD domain in mammalian sHsps has been reported to be associated with protein conformational defects and intracellular aggregation. Independent mutation of three highly conserved arginines (R122, R131 and R135) to glycine in DmHsp27 results in only one population of higher molecular weight form. In vitro, the chaperone-like activity of wild type DmHsp27 was comparable with that of its two isolated populations and to the single population of the R122G, R131G and R135G using luciferase as substrate. However, using insulin, the chaperone-like activity of wild type DmHsp27 was lower than that of R122G and R131G mutants. Finaly, we established the importance of the N-terminal region for oligomerization and we investigated the heat activation under in vitro experimental conditions using size exclusion chromatography and gradient native gels electrophoresis. By deletion strategy, we have examined the role of the N-terminal region and delineated a motif (FGFG) important for the oligomeric structure and chaperone-like activity of this sHsp. Deletion of the full N-terminal domain, resulted in total loss of chaperon-like activity; intriguingly deletion of the (FGFG) at position 29 to 32 or single mutation of G30R and G32R enhanced oligomerization and chaperoning capacity under non heat shock conditions using the insulin assay suggesting the importance of this site for chaperone activity. Unlike mammalian sHsps heat activation of DmHsp27 leads to enhanced dissociation/association of oligomers to form large structures about 1000 kDa. We suggest a new mechanism of heat activation for DmHsp27. In summary, this study characterized DmHsp27 and mutant in the alpha crystallin domain and the N-terminal region and provided an overview of a new protection mechanism. The role played by DmHsp27 as molecular chaperone and its induction during embryonic development, suggest that this protein may perform other important cellular functions

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Lanneau, David. "Rôle des protéines de choc thermique HSP90 et HSP70 dans la différenciation macrophagique." Phd thesis, Université de Bourgogne, 2010. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00560535.

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Abstract:

La synthèse des protéines de choc thermique (HSPs) est un moyen de défense développé par la cellule pour faire face aux diverses agressions auxquelles elle peut être soumise. En tant que chaperons, les HSPs participent aux mouvements intracellulaires des protéines, préviennent l'agrégation des protéines altérées, éliminent les protéines anormales et contribuent à la conformation correcte des peptides nouvellement synthétisées. Mon équipe d'accueil s'intéresse aux rôles des HSPs dans des processus cellulaires tels que l'apoptose et la différenciation cellulaire. Le but de mon travail de thèse consiste à étudier le rôle des protéines de choc thermique HSP90 et HSP70 au cours de la différenciation des monocytes en macrophages. J'ai dans un premier temps étudié l'implication de HSP90 dans la différenciation macrophagique. c-IAP1 est un membre de la famille des protéines inhibitrices de l'apoptose impliqué dans la régulation de l'apoptose, dans le cycle cellulaire et dans la signalisation cellulaire. Nous avons précédemment montré que c-IAP1 migre du noyau vers le cytoplasme au cours de la différenciation cellulaire. Nous démontrons dans ce travail que c-IAP1 est une protéine cliente de la protéine de choc thermique HSP90β. Dans trois différents modèles de différenciation, ces protéines interagissent et migrent ensemble du noyau vers le cytoplasme au cours de la différenciation cellulaire. L'inhibition de HSP90 ou la déplétion spécifique de l'isoforme β par des siRNA conduisent à sa dégradation par le protéasome. La fonction de chaperon moléculaire de HSP90 envers c-IAP1 est spécifique de l'isoforme β car la déplétion de l'isoforme α n'a pas d'effets sur c-IAP1. De plus l'inhibition de HSP90 ou la déplétion de HSP90β bloquent la différenciation cellulaire tout comme la déplétion de c-IAP1 par siRNA. La deuxième partie de montre travail a consisté à étudier le rôle de HSP70 dans la différenciation macrophagique. Nous montrons que cette protéine est fortement induite après stimulation des cellules par le facteur de croissance M-CSF et que son inhibition bloque la différenciation des monocytes en macrophage. HSP70 interagit avec la protéine Spi-1/Pu.1, facteur de transcription clé de la différenciation macrophagique. L'expression de Spi-1/Pu.1 augmente également au cours de la différenciation macrophagique et ce de manière similaire à celle de HSP70. Ceci suggère l'implication des facteurs de transcription responsables de l'induction des HSPs, les Heat Shock Factor (HSF). L'étude du promoteur de Spi-1/Pu.1 a révélé la présence d'une séquence ressemblant fortement aux éléments de réponse classiques sur lesquels se fixe HSF1. HSF1 est capable de se fixer sur le promoteur de Spi-1/Pu.1 et l'inhibition de HSF1 bloque l'expression de Spi-1/Pu.1. HSF1 participe donc au contrôle de l'expression de Spi-1/Pu.1 lors de la différenciation macrophagique. HSP90 et HSP70 sont donc essentielles à la différenciation macrophagique. Comprendre les mécanismes cellulaires impliqués dans les voies de différenciation se révèle extrêmement important puisque des altérations des mécanismes de l'hématopoïèse sont retrouvées dans plusieurs types de leucémies (leucémies aiguës myéloblastiques et leucémies myélo-monocytaires chroniques). Connaître le rôle des HSPs dans la différenciation cellulaire permettrait donc de développer de nouvelles stratégies thérapeutiques pour le traitement de ces pathologies.

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Moullintraffort, Laura. "Structures quaternaires et fonctions de la Hsp90, protéine de choc thermique de 90 kDa." Rennes 1, 2012. http://www.theses.fr/2012REN1S008.

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Abstract:

La Hsp90 est une protéine chaperon qui intervient en conditions physiologiques à des étapes tardives du repliement protéique, selon un « cycle de chaperonnage » du dimère régulé par l'ATP et des protéines co-chaperons. La Hsp90, qui possède de nombreuses protéines clientes impliquées dans les processus d'oncogenèse, est devenue une cible pour le développement de traitement anti-cancéreux. La Hsp90 s'oligomérise in vitro sous l'influence de la température (oligomères stables) ou des cations divalents (oligomères en équilibre dynamique). Ces oligomères semblent être actifs en conditions de stress. Nous avons démontré que l'activité protectrice de la Hsp90 vis-à-vis d'une protéine cible labile, la tubuline, est ATP-indépendante. Ces travaux ont permis la mise au point d'un test d'activité chaperon permettant le criblage de nouveaux inhibiteurs. Nous avons ensuite caractérisé biochimiquement les stoechiométries d'association des oligomères et avons résolu la structure de l'hexamère de Hsp90 par cryo-microscopie électronique. Cette structure quaternaire en forme de nid pourrait accueillir des protéines cibles. P23, un co-chaperon inhibiteur de l'activité ATPase de la Hsp90, se lie principalement au niveau du dimère. Aha1, un activateur, possède une plus grande affinité pour les oligomères de Hsp90. Ceci suggère un rôle de ces structures quaternaires. Enfin, nous avons démontré qu'en conditions de stress thermique modéré, l'oligomérisation stable est prédominante, et que la présence de nucléotides permet le maintien des oligomères en équilibre dynamique. Cette régulation renforce le caractère fonctionnel des oligomères, qui seraient les espèces actives en tant que chaperon
Hsp90 is a chaperone protein involved in late-stage protein folding under physiological conditions, according to a « chaperone cycle » of the dimer regulated by ATP and co-chaperone proteins. Hsp90 has many client proteins that are mainly involved in oncogenesis, thus making Hsp90 a target for the development of new anti-cancer drugs. Hsp90 self-oligomerizes in vitro under the influence of temperature (irreversible oligomers) or divalent cations (oligomers in a dynamic equilibrium). These oligomers are supposed to be active as chaperones under stress conditions. We demonstrated that the protective effect of Hsp90 towards a labile protein, tubulin, is ATP-independent. This finding allowed us to design a chaperone activity test for new Hsp90 inhibitors screening. We then characterized biochemically the stoichiometries of the oligomers association, and resolved the Hsp90 hexamer's structure by cryo-electron microscopy. This quaternary structure exhibits a nest-like shape that could bind a substrate protein. P23, a co-chaperone known as an Hsp90 ATPase inhibitor, binds mainly the Hsp90 dimer, whereas Aha1 an activator, has a greater affinity for the oligomeric species. This suggests a function of these quaternary structures. Finally, we demonstrated that under mild heat shock conditions, irreversible oligomers are predominating, and that nucleotide binding reverses the process, maintaining the oligomers in a dynamic equilibrium. This regulation strengthens the functionality of the Hsp90 oligomers, which would be the quaternary structures endowed with chaperone activity

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Maurel, Sébastien. "Rôle des protéines de choc thermique dans la régulation du facteur de transcription HIF." Phd thesis, Université de Bourgogne, 2011. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00704624.

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Abstract:

HIF1α et HIF2α sont des protéines largement impliquées dans le développement de pathologies posant des problèmes majeurs de santé publique, comme le cancer. Leur activité, qui est régulée prioritairement par leur stabilité via le système ubiquitine-protéasome, coordonne de nombreux processus cellulaires susceptibles de favoriser le développement de ces maladies. Un enjeu récent de la recherche thérapeutique est d'identifier des partenaires protéiques pouvant réguler les protéines HIFα, afin de mettre au point des thérapies ciblées. Les protéines de choc thermique (HSPs) sont une classe de protéines dont une des fonctions essentielles est de réguler l'homéostasie protéique dans la cellule, en interagissant avec le protéasome. Certaines d'entre elles, HSP27 et HSP90, ont la faculté de pouvoir réguler spécifiquement la stabilité de nombreuses protéines souvent elles-mêmes impliquées dans l'apparition de ces pathologies. L'objectif de ce travail était de savoir si ces deux HSPs peuvent contrôler la stabilité de la protéine HIF2α. Nos résultats suggèrent qu'HSP27 pourrait stimuler la dégradation de HIF2α en favorisant son ubiquitination. Ce résultat est surprenant, en raison du rôle connu d'HSP27 dans la progression tumorale. Il est donc nécessaire de le confirmer et d'en préciser les processus biologiques sous-jacents. D'autre part, nos autres résultats semblent confirmer qu'HIF2α est une protéine cliente d'HSP90. De plus, nous montrons pour la première fois que l'inhibition d'HSP90 par le 17-DMAG diminue la production de VEGF dépendante de HIF2α. Des travaux récents suggèrent qu'HIF2α a un rôle prédominant dans la progression tumorale, et peut constituer une cible globale de choix dans plusieurs types de cancer. Il conviendrait d'évaluer la capacité des inhibiteurs d'HSP90 à supprimer des fonctions de HIF2α nouvellement décrites, comme son rôle dans la maintenance des cellules souches cancéreuses.

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Vidal, Vincent. "Caractéristiques moléculaires et fonctionnelles d'une protéine mitochondriale de choc thermique de type hsp70 chez Phaseolus vulgaris." Toulouse 3, 1992. http://www.theses.fr/1992TOU30087.

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Abstract:

Au laboratoire, sont etudies les problemes lies a l'intervention du calcium dans la chaine de transduction de signaux extracellulaires chez les vegetaux. Dans ce contexte, a partir d'une banque d'adnc de haricot, un travail de clonage de calciproteines a ete entrepris. Le but de cette these a ete de caracteriser le produit d'un de ces clones sur les plans structural et fonctionnel. Le clone retenu code pour une proteine de choc thermique de masse moleculaire de 70 kda ou hsp70 qui comprend une extension de sequence en n-terminal. A l'aide d'experiences d'import dans des organites isoles des produits de transcription-traduction in vitro, il a ete demontre que le clone code pour le precurseur d'une hsp70 mitochondriale ou mthsp70. L'immunodetection, a l'aide d'anticorps site-specifique, a montre que cette proteine s'accumule dans la matrice sous forme de complexes de 270 et 420 kda. L'expression de mthsp70 est constitutive, cependant, lors d'un choc thermique, son expression est regulee au niveau post-transcriptionnel car le taux de son arnm augmente fortement sans variation apparente de la quantite de mthsp70. La caracterisation fonctionnelle a montre que mthsp70 est d'une part, phosphorylee de maniere calcium dependante, la forme phosphorylee etant un oligomere de 170 kda, d'autre part, affine pour l'atp et le calcium suggerant un mecanisme d'autophosphorylation. Ainsi, une hsp70 codee par un gene nucleaire et specifiquement vectorisee vers les mitochondries a ete caracterisee. Par son aptitude a s'associer a des proteines, elle pourrait intervenir dans les mecanismes de protection d'enzymes-cles, l'interaction reversible etant sous controle de la phosphorylation

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Capon, Alexandre. "Suture cutanée assistée par Laser : étude des mécanismes d'accélération de la cicatrisation sur modèle animal et sur la peau humaine." Lille 2, 2003. http://www.theses.fr/2003LIL2MT19.

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Pla-Brunet, Mathilde. "Rôle de la protéine de choc thermique HSP27 dans les processus d'ubiquitination et de sumoylation." Dijon, 2008. http://www.theses.fr/2008DIJOMU09.

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Abstract:

La protéine de choc thermique HSP27 est un chaperon ATP indépendant qui s’accumule dans les cellules suite à divers stress et qui leur permet ainsi de survivre dans des conditions défavorables. Les fonctions intracellulaires d’HSP27 sont modulées par sa capacité à s’oligomériser. Dans ce travail, nous démontrons qu’HSP27 en fonction de son état d’oligomérisation peut être impliqué dans 2 processus de modifications post-traductionnelles apparentés : l’ubiquitination et la SUMOylation. Tout d’abord, nous avons démontré que, en réponse à divers stress, p27Kip1, une protéine régulatrice du cycle cellulaire (inhibitrice de CDK), s’accumule d’abord dans les cellules puis diminue lorsque les cellules commencent à mourir. Ces observations sont associées à une augmentation de l’expression d’HSP27 qui sous forme de petits oligomères favorise l’ubiquitination de p27Kip1 et sa dégradation par le protéasome. Les petits oligomères d’HSP27 semblent donc faciliter la transition G1/S du cycle cellulaire et pourraient donc permettre aux cellules quiescentes de reprendre un cycle. Par la suite, nous avons déterminé que, dans des conditions de stress, les grands oligomères d’HSP27s’accumulent dans le noyau, se lient à HSF1, facteur de transcription responsable de l’expression inductible des HSP, et à la SUMO E2 ligase Ubc9, et favorisent de ce fait la SUMOylation par SUMO-2/-3 d’HSF1. En conséquence, HSF1, tout en conservant sa capacité de liaison à l’ADN, perd sa capacité de transactivation. Ces données nous montrent qu’HSP27 permet une boucle d’autorégulation ne��gative de l’activité transcriptionnelle d’HSF1, et mettent en relief l’étroite collaboration entre HSP et HSF1
The small heat shock protein HSP27 is a chaperone ATP independent that accumulates in cells in response to various stresses and that enables the cells to survive in adverse conditions. The intra-cellular functions of Hsp27 are modulated by its ability to form small or large oligomers according to its phosphorylation status. In this work, we demonstrate that HSP27 according to its oligomerization status may be involved in 2 related post-translational modifications mechanisms: ubiquitination and SUMOylation. At first, we have shown that, in response to various stresses, p27Kip1, a protein regulating the cell cycle (CDK inhibitor), first accumulates in cells then decreases when the cells begin to die. These observations are associated with an enhanced expression of HSP27 that in the form of small oligomers promotes ubiquitination of p27Kip1 and its proteasomal degradation. HSP27 small oligomers seem to facilitate the transition G1/S and could therefore enable quiescent cells to re-enter the cell cycle. Thereafter, we demonstrated that, under stress, large oligomers of HSP27 store in the nucleus, bind to HSF1, the transcription factor responsible for the inducible expression of HSP, and the E2 SUMO ligase Ubc9 and thus promote SUMOylation of HSF1 by SUMO-2/-3. Accordingly, HSF1, while keeping its DNA binding ability, loses its transactivation capacity. These data demonstrate that HSP27 exerts a feedback inhibition of HSF1 transactivation activity, enlighten the strictly regulated interplay between HSP and HSF1

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Lepecuchel, Lydia. "Interaction de la troisième région hypervariable des molécules HLA-DR avec la protéine de choc thermique HSP73." Aix-Marseille 2, 2002. http://www.theses.fr/2002AIX22048.

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Moalic, Jean-Marie. "Réponses biologiques du myocarde ventriculaire à des modifications hémodynamiques d'origine mécanique ou hormonale : [thèse en partie soutenue sur un ensemble de travaux]." Grenoble 1, 1990. http://www.theses.fr/1990GRE10092.

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Abstract:

Differents mecanismes d'adaptation sont developpes par le myocarde ventriculaire adulte en reponse a une surcharge hemodynamique: activation globale de la synthese d'arn et de proteines totales et modifications specifiques transitoires ou permanentes de l'expression genetique. L'activation de la synthese d'arn et de proteines induite par une stenose aortique experimentale chez le rat associe une activation parallele de la synthese de 2 proteines contractiles majeures, la chaine lourde de la myosine et l'actine, et une augmentation parallele du niveau de synthese d'arn total et de poly(a)#+ arn. Les genes c-myc et c-fos et le gene hsp68, codant pour une proteine thermo-inductible, dont les produits de transcription ne sont pas detectes dans le ventricule normal adulte sont transitoirement exprimes dans le cur isole perfuse battant a un niveau relatif qui varie en fonction du debit coronaire ou de la pression de perfusion. In vivo, l'administration de phenylephrine ou de vasopressine induit aussi l'accumulation de ces sequences dans le myocarde ventriculaire adulte. Cette reponse cardiaque a des drogues hypertensives semble faire intervenir des recepteurs membranaires specifiques, car l'administration d'angiotensine ii n'induit pas l'accumulation de ces marn dans le ventricule de rat adulte dont la densite en recepteurs de l'angiotensine ii semble etre faible. L'expression transitoire de ces arn messagers dans plusieurs modeles de surcharge hemodynamique aigue suggere une participation des sequences inductibles a la regulation des processus de croissance impliques dans le developpement de l'hypertrophie cardiaque

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Bourrelle-Langlois, Maxime. "Caractérisation des petites protéines de stess/small heat shock proteins du cyanophage S-ShM2 (HspSP-ShM2) et de son hôte Synechococcus WH7803 (HspS-WH7803)." Master's thesis, Université Laval, 2016. http://hdl.handle.net/20.500.11794/26763.

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Abstract:

Les petites protéines de stress/Small heat shock proteins (sHsps) sont des chaperons moléculaires ATP-indépendants ubiquitaires retrouvées chez les procaryotes et eucaryotes. Elles sont dynamiques structurellement et la majorité d’entre elles possèdent la capacité de former de gros complexes oligomériques. Également, elles protègent les cellules du stress protéotoxique causé par divers facteurs de stress abiotiques en prévenant l’agrégation des protéines dénaturées et en promouvant leur repliement par les chaperons moléculaires ATP dépendants tels que Hsp70/DnaK. Récemment, la présence de gènes de sHsp (HspSP-ShM2) chez des virus marins et plus précisément chez des cyanophages infectant le genre Synechococcus sp. et Prochlorococcus sp ont été caractérisés in silico. Au niveau de sa séquence, la sHsp de 18 kDa de Synechococcus sp. montre un domaine alpha crystallin de 92 acides aminés hautement conservé au sein des sHsps, une région C-terminale contenant le motif CAM canonique de type (L-X-I/L/V) et une région N-terminale relativement courte. Nous avons établi grâce à la chromatographie par exclusion stérique (SEC) et le système de Fast Protein Liquid Chromatography (FPLC) sa capacité à former des complexes oligomériques de haut poids moléculaires (600 kDa et 200kDa). De plus, nous avons démontré qu’elle prévient l’agrégation de la citrate synthase, la malate dehydrogenase et la luciférase en condition de stress thermique suggérant qu’elle possède une faible spécificité et un large spectre de protéines clientes/substrats. La prévention complète de l’agrégation a été obtenue à différents ratios (sHsp:substrat) selon le substrat, ce qui indique qu’il y aurait possiblement des interactions différentes et uniques avec chacun d’eux. Nous avons ensuite mis en évidence la formation d’hétéro-oligomères stables et solubles entre HspSP-ShM2 et son substrat dans les mêmes conditions, ce qui est en accord avec les caractéristiques des sHsps en général. Quant à elle, la sHsp de la cyanobactérie Synechococcus WH7803 (HspS-WH7803) possède un poids moléculaire de 15 kDa et montre une capacité à former des tétramères (60 kDa) sur essai de SEC par FPLC en présence de Triton™X-100 pour le maintien de sa solubilité. Contrairement à HspS-ShM2, HspS-WH7803 ne démontre aucune activité protectrice sur l’agrégation des substrats mentionnés précédement à différents ratios molaires. Finalement, des analyses par SEC/FPLC suggèrent la formation de complexes hétéro-oligomériques entre HspSP-ShM2 et celle de son hôte, HspS-WH7803 de Synechococcus WH7803. Cette interaction entre les sHsps pourrait soit optimiser ou inhiber l’activité de chaperon moléculaire et la réponse au stress de son hôte dans le but de favoriser le cycle viral.
Small heat shock proteins (sHsps) are ubiquitous ATP-independent molecular chaperones found in prokaryotes and eukaryotes. They are structurally dynamic and most of them have the ability to form large oligomeric complexes and to protect cells from proteotoxic stresses by preventing aggregation of non-native proteins and promoting their refolding via ATP-dependent chaperones such as Hsp70/DnaK. Recently, the presence of a sHsp gene (HspSP-ShM2) in marine viruses has been reported using bioinformatics tools. More precisely, the gene has been found in cyanophages infecting cyanobacteria of the genre Synechococcus sp. and Prochlorococcus sp. The Synechococcus phage sHSP has a MW of 18 kDa and shows the highly conserved core alpha crystalline domain of 92 amino acids and relatively short N- and C-terminal arms, the later containing the classical CAM domain (L-X-I/L/V). We established its oligomeric profile using a size exclusion chromatography (SEC) and Fast Protein Liquid Chromatography (FPLC) system and demonstrated its ability to form large oligomeric complexes in native conditions (600 kDa and 200kDa). Furthermore, we report its capacity to prevent the aggregation of citrate synthase, malate dehydrogenase and luciferase suggesting that it has a weak specificity and wide range of protein substrates. The complete prevention of aggregation was achieved at different ratios (sHsp:substrate) depending on the substrate indicating that the sHSP may have different and unique interactions with each of its clients. We also showed the formation of a stable and soluble hetero-oligomeric complex of the phage sHSP and its substrates under heat stress, which is in accordance with the characteristics of sHSP in general. The cyanobacteria Synechococcus WH7803 15 kDa sHSP (HspS-WH7803) shows the ability to form tetramers in the presence of Triton™X-100 for the maintenance of its solubility using the SEC/FPLC method. For its capability to prevent the aggregation of different substrates, HspS-WH7803 demonstrates no chaperon like activity in all the assays and molar ratios used. Finally, SEC/FPLC results indicate the possible formation of a hetero-oligomeric complex between the sHSP of the phage and the one from its host Synechococcus WH7803 (HspS-WH7803). This interaction could either optimize the chaperone activity and the stress response of its host or inhibit the host sHSP to facilitate the viral life cycle.

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Michiel, Magalie1980. "Analyses structurales et fonctionnelles des petites protéines de choc thermique : le cas des alpha-cristallines." Paris 6, 2008. http://www.theses.fr/2008PA066487.

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Abstract:

Le but de cette étude était de définir les caractéristiques physico-chimiques, critiques pour l’intégrité structurale et fonctionnelle des petites protéines de choc thermique (ou small heat shock proteins ou sHsps), natives ou pathogènes. Les sHsps sont exprimées chez la plupart des êtres vivants, chez l’homme il en existe 11, où elles interviennent dans la gestion des stress. Ces protéines ont en commun un domaine « -cristalline » très conservé, la formation de larges oligomères, une structure dynamique liée à l’échange de sous-unités et une activité de type chaperon moléculaire. Certaines mutations ponctuelles des sHsps sont liées à des cataractes, des myopathies et des neuropathies. Les sHsps peuvent jouer un rôle dans l’apoptose et certains cancers et être associées aux plaques séniles. Je me suis intéressée aux -cristallines humaines et bovines et à la Hsp26 de levure. Le développement de méthodes biochimiques et l’optimisation de protocoles d’expression et de purification constituent la première étape de ce travail. La diffusion dynamique et statique de la lumière (DLS, MALS) et la diffusion des rayons X aux petits angles (SAXS) ont été les principaux outils utilisés pour l’étude de la structure quaternaire et des transitions conformationnelles des sHsps. J’ai élaboré des tests et comparé l’activité protectrice des sHsps vis-à-vis de cibles modèles et physiologiques. J’ai analysé différents mutants, comme le mutant pathologique R120G de l’B-cristalline. Enfin, j’ai analysé la capacité des sHsps à échanger des sous-unités par des techniques de chromatographie. Ces résultats contribuent à mieux définir la relation dynamique-structure-fonction-dysfonction des sHsps.

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Lecomte, Sylvain. "Implication des facteurs de choc thermique HSF1 et HSF2 dans la réponse à l'inhibition du protéasome." Rennes 1, 2010. http://www.theses.fr/2010REN1S059.

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Abstract:

Les cellules d’un tissu sont soumises à des variations de leur environnement qui sont susceptibles de perturber leur équilibre et de provoquer un stress. Afin de se défendre, elles se sont dotées de mécanismes adaptatifs spécifiques du type de composants affectés (lipides, acides nucléiques, protéines). Ce travail s’est intéressé au stress protéotoxique provoqué par une inhibition du protéasome. La réponse mise en place se caractérise par une surexpression des protéines de choc thermique (HSPs) qui est dépendante d’un événement transcriptionnel impliquant les facteurs de transcription HSF. Ce travail s’est focalisé sur le rôle d’HSF1 et d’HSF2 dans cette réponse. Nous avons montré qu’HSF1 est primordial pour l’induction des HSPs alors qu’HSF2 intervient dans l’expression des sous-unités du protéasome. De plus, nos résultats montrent que les isoformes d’HSF2 ont des rôles opposés sur l’activité transcriptionnelle d’HSF1 et que la quantité relative de ces isoformes est régulée par l’inhibition du protéasome. Ce dernier est une cible dans la lutte contre le cancer et des traitements le ciblant existent. Cependant, des cancers résistent et le développement d’inhibiteurs d’HSF2 pourrait être envisagé pour augmenter l’effet de ces drogues
Cells of a tissue are subject to changes in their environment that can disrupt their balance and to cause stress. To defend themselves, the cells are equipped with adaptive mechanisms specific to the type of affected components (lipids, nucleic acids, proteins). This work focused on proteotoxic stress caused by proteasome inhibition. The established answer is characterized by an overexpression of heat shock proteins (HSPs) which is dependent on a transcriptional event involving transcription factors HSF. This work has focused on the role of HSF1 and HSF2 in response to proteasome inhibition. We have shown that HSF1 is essential for the induction of Hsps whereas HSF2 mediate proteasome subunit expressions. Moreover, data obtained have show that HSF2 isoforms have opposite roles in transcriptional activity of HSF1 and the relative amount of these two isoforms is regulated by proteasome inhibition. Proteasome is a target in the fight against cancer and treatments targeting it exist. However cancers are resistant and development of inhibitors of HSF2 could be a valuable approach to increase the therapeutic effect of these drugs

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Thoraval, Didier. "Construction d'une banque gène-protéine et étude de la synthèse des protéines heat shock chez la levure Saccharomyces cerevisiae." Bordeaux 2, 1992. http://www.theses.fr/1992BOR28180.

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Tbarka, Noureddine. "Purification et caractérisation de la protéine 90 KD de choc thermique : associée au récepteur des hormones glucocorticoï͏̈des du rat." Lille 1, 1989. http://www.theses.fr/1989LIL10089.

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Prénéta, Rachel. "Contribution à l'étude de la phosphorylation des protéines chez trois espèces bactériennes." Lyon 1, 2003. http://www.theses.fr/2003LYO10155.

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Abstract:

Chez Klebsiella pneumoniae, nous avons montré que deux gènes successifs,yor5 et yco6, localisés au sein de l'opéron cps impliqué dans la synthèse de la capsule, codent respectivement deux enzymes d'activités opposées, une phosphotyrosine-protéine phosphatase, Yor5, et une protéine-tyrosine kinase, Yco6. De plus, Yco6 s'est avéré être un substrat endogène de Yor5. Chez Rhizobium meliloti, nous avons retrouvé une activité protéine-tyrosine kinase portée par la protéine Exop impliquée dans la biosynthèse d'un exopolysaccharide majeur, qui joue un rôle essentiel dans la mise en place de la symbiose entre la bactérie et la plante. Toutefois, aucune activité phosphotyrosine phosphatase n'a été observée. Ces résultats nous ont conduits à émettre l'hypothèse d'une relation entre la phosphorylation des protéines sur la tyrosine et la synthèse de la capsule. Ches Mycobacterium tuberculosis, nous avons montré que les deux protéines de choc thermique HspX et Hsp71, ont la capacité de s'autophosphoryler respectivement sur les résidus séryles et thréonyles. Puis à partir d'alignements de séquences, nous avons observé, que la protéine PknG possède les domaines conservés des protéine-sérine/thréonine kinase eucaryotes. Nous avons ensuite montré que PknG s'autophosphoryle sur la sérine et que cette protéine est sensible aux inhibiteurs spécifiques cde ce type de protéines. Une intervention de la phosphorylation ATP-dépendante sur la sérine ou sur la thréonine, dans la mise en place des mécanismes de survie de la bactérie au sein de son hôte, semble donc envisageable.

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Mandon, Céline. "Mise au point d'un bioessai à cellules entières, pour la détection de pollutions, basé sur la technologie du promoteur de stress." Lyon 1, 2005. http://www.theses.fr/2005LYO10276.

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Abstract:

L'objectif de ce travail est la mise au point d'un bioessai luminescent, permettant d'apprécier rapidement la toxicité globale d'un milieu complexe, grâce à des systèmes biologiques génétiquement modifiés. Le principe est basé sur l'association d'un promoteur de stress (hsp22 ou hsp23 de drosophile) et d'un gène rapporteur, codant une protéine bioluminescente (luciférase) ou fluorescente (EGFP), insérés dans une matrice cellulaire. Les premiers essais, réalisés grâce à des levures, ont montré que cet organisme ne correspondait pas aux critères de sensibilité de ce système. La génération de promoteurs génétiquement manipulés a permis de produire des clones recombinants de lignées cellulaires humaines (HeLa ou HepG2) et d''améliorer les performances du test. Les résultats en présence de composés toxiques tels que des métaux lourds, des perturbateurs endocriniens et d'échantillons environnementaux, ont permis l'induction de la transcription du gène rapporteur avant la manisfestatin de cytotoxicité

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Séguin, Samuel. "Le chaperon HspB8 Bag 3 pour stimuler la dégradation des protéines à polyglutamine par macroautophagie." Master's thesis, Université Laval, 2008. http://hdl.handle.net/20.500.11794/20167.

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Abstract:

HSPB8 appartient à la famille des petites protéines de choc thermique (sHSP ou HSPB) qui contient 10 membres HSPB 1-10. In vitro, HspB8 favorise la dégradation de l'Huntingtine mutée (Htt43Q), une protéine encline à agréger. HspB8 est un chaperon moléculaire capable de reconnaître des substrats protéiques mal repliés pour permettre leur repliement ou leur dégradation. HspB8 forme un complexe stable et stoechiométrique avec Bag3 (2 : 1), un cochaperon de Hsp70. Surexprimées, Bag3 et/ou HspB8 induisent la conversion de LC3-I en LC3-II indiquant que la macroautophagie est stimulée et bloquent l'agrégation de Htt43Q. Nous avons cherché dans cette étude, à déterminer si la formation du complexe HspB8-Bag3 est essentielle dans l'accomplissement de ce phénomène. Bag3 possède un domaine WW peu caractérisé, un domaine riche en proline capable d'interagir avec PLCy l , et un domaine BAG interagissant avec Hsp70 et Bcl-2. Le co-chaperon Bag3 étant modulaire, nous avons recherché quels domaines d'interaction fonctionnels lui sont essentiels. Afin de localiser le site de liaison à HspB8, nous avons réalisé des délétions systématiques des différentes régions de Bag3. L'interaction des différents délétants de 6His-Bag3 avec HspB8 a été analysée par co-puri fi cation au Nickel. Leur capacité à bloquer l'accumulation de Htt43Q dans les fractions solubles et insolubles au SDS et à augmenter le ratio LC3-II/I, marqueur de l'autophagie, a été évaluée. Nous avons déterminé que le site de liaison à HspB8 était constitué de deux motifs répétés de 14 acides aminés très conservés (B8bdl et B8bd2) depuis le poisson jusqu'à l'Homme. Dans les HEK-293T, en l'absence d'interaction avec HspB8, Bag3 est toujours capable de stimuler la macroautophagie et la dégradation de Htt43Q, bien qu'aucune activité de chaperon moléculaire ne lui soit associée in vitro. L'analyse des autres délétants suggère que l'extrémité N-terminale ainsi que la région riche en proline seraient essentielles pour l'activité de Bag3 envers Htt43Q, bien qu'elles ne le seraient pas pour stimuler la macroautophagie. Le domaine C-terminal de Bag3 serait responsable de la stimulation de la macroautophagie et sa délétion bloquerait aussi la dégradation de Htt43Q. La protéine Bag3, en permettant la dégradation des protéines mal conformées (comme Htt43Q) par macroautophagie, jouerait un rôle prépondérant dans le contrôle de la qualité des protéines.

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Mehdi, Sadia. "Heat shock cognate protein 70 (HSC70) est un nouveau partenaire pour la protéine Huntingtin interacting protein-1 related (HIP1R)." Master's thesis, Université Laval, 2011. http://hdl.handle.net/20.500.11794/26307.

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Abstract:

"Mémoire présenté à la Faculté des études supérieures et postdoctorales de l'Université Laval comme exigence partielle du programme de maîtrise en Médecine Expérimentale offert à l'Université du Québec à Chicoutimi en vertu d'un protocole d'entente avec l'Université Laval pour l'obtention du grade de Maître ès sciences (M.Sc.)"
Huntingtin interacting protein-1 (HIP1) et Huntingtin interacting protein-1-related (HIP1R) ont été identifiées comme des protéines intervenant dans l’endocytose médiée par les vésicules de clathrine par leurs interactions avec d ’autres protéines endocytaires. Pour mieux comprendre les rôles attribués à HIP1/R dans cette machinerie, nous avons procédé à l’identification de nouveaux partenaires d ’interaction. Au cours de notre étude, nous avons identifié HSC70 (Heat-shock Cognate Protein70) comme un nouveau partenaire pour les domaines TALIN des deux protéines par des essais de pull-down et analyse par spectrométrie de masse. Au cours de cette étude nous avons identifié également que l’association d ’HSC70 avec le domaine TALIN d ’HIPIR, compromet sa sédimentation avec les filaments d ’actine. HIP1R est une composante du manteau de clathrine, son interaction avec HSC70 l’a impliquée dans le démantèlement des vésicules. Dans cette étude, nous avons vérifié l’intervention d ’HIPIR dans le démantèlement de la clathrine suite à son interaction avec HSC70 et la relation de ce mécanisme avec la perte d ’interaction avec l’actine.

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Khazzaka, Aline. "Les protéines de choc thermique-70 kDa (HSPs 70) chez le porc suite à un stress." Lyon 1, 2006. http://www.theses.fr/2006LYO10186.

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Abstract:

Les protéines de choc thermique (hsps) sont des familles de protéines parfaitememnt conservées à travers l'évolution des sxpèces, induites par un choc thermique ou bien par d'autres stresseurs environnementaux. Ce sont des chaperons moléculaires, elles protègent les cellules du stress et facilitent le reploiement et la maturation des protéines cellulaires. Le présent travail consite à étudier la réponse au stress des hsps 70 chez le porc de génotypes NN, Nn et nn au locus halothane (HAL) au niveau sanguin, musculaire et cellulaire. In vitro, le génotype HAL affecte la réponse hsps 70 à tous les niveaux étudiés dans ce travail. Un préconditionnement au stress (c'est à dire le traitement préalable de l'organisme avant le stress proprement dit dans le but de surexpreimer précocement les hsps 70) protège les fibroblastes en culture contre le stress thermique. Il confère une réponse normale des hsps 70 au stress chez les porcs nn. Par contre, les études in vivo n'ont pas montré de relations entre les hsps 70, le préconditionnement au stress et la qualité de la viande chez le porc
Heat shock proteins (hsps) consist of a family of conserved proteins induced by heat shock and other environmental stressors. They play a role of molecular chaperones protecting cells against stress and facilitating the fording and the maturation of cellular proteins. The aim of this work was to study the hsps 70 response to stress in pigs of the three halothane (HAL) genotypes (NN, Nn and nn) in the blood, the semi-membranous muscles and cultured fibroblasts. HAL affected the hsps 70 response in vitro at different levels of the organism. Preconditioning leads to an overexpression of hsps 70 protecting cells from heat damage. It confers a normal hsps 70 response to stress in the nn animals. In vivo studies did not show any corelation between hsps 70, preconditioning and meat quality in pigs

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Guilbert, Solenn. "Le rôle d'HSPB8 dans le contrôle de qualité des protéines en réponse à un stress protéotoxique." Doctoral thesis, Université Laval, 2017. http://hdl.handle.net/20.500.11794/28128.

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Abstract:

Les protéines de choc thermique (HSP) jouent un rôle crucial dans le maintien de l’intégrité du protéome et le contrôle de qualité des protéines. BCL-2-associated athanogene 3 (BAG3) est un co-chaperon moléculaire particulier qui peut s’associer avec différents systèmes d’HSPs : les chaperons HSPA (HSC/HSP70) et HSPB, en particulier HSPB8. Bien que l’implication des HSPA dans les fonctions de BAG3 associées au contrôle de qualité soit caractérisée, le rôle d’HSPB8 demeure incompris. Ainsi l’objectif de cette thèse est de préciser l’implication d’HSPB8 dans le contexte du stress protéotoxique engendré par l’inhibition du protéasome qui conduit à la séquestration des protéines polyubiquitinées à l’agrésome et à leur dégradation par autophagie. Nous avons mis en évidence un rôle précoce d’HSPB8 dans la séquestration des protéines ubiquitinées, qui ne semble pas requérir sa liaison à BAG3 mais qui potentialiserait la formation de l’agrésome. Nos résultats suggèrent qu’HSPB8 favorise des modifications post-traductionnelles sur p62/SQSTM1, dont la phosphorylation sur la sérine 349, et son couplage au co-chaperon BAG3. Cela faciliterait la formation de micro-agrégats cytoplasmiques et de l’agrésome ainsi que l’activation de la voie de signalisation protectrice Nrf2 suite à la séquestration de la protéine adaptatrice Keap1. De plus, nous avons mis en évidence une déstabilisation des interactions entre BAG3, HSPB8 et p62/SQSTM1 avec le mutant BAG3 (P209L) dont la mutation est localisée sur un des motifs de liaison à HSPB8. L’expression de ce mutant s’accompagne d’une diminution de l’activation de la voie Nrf2 en réponse au stress qui pourrait contribuer au mécanisme pathologique dans les myopathies associées à cette mutation. Enfin, une analyse dynamique de la disparition de l’agrésome suggère que son élimination requiert une étape de désagrégation qui serait suivie par sa dégradation par voie autophagique. Nous avons montré un rôle de BAG3 dans la disparition de cette structure suggérant que le co-chaperon agit via sa fonction dans l’autophagie. En revanche, HSPB8 ne semble pas participer pas à cette activité de dégradation de l’agrésome, et pourrait au contraire l’inhiber. Ainsi, cette étude met en évidence un nouveau rôle d’HSPB8 dans la séquestration précoce de protéines dénaturées, grâce à laquelle HSPB8 pourrait participer à la formation d’une plateforme facilitant la signalisation aux voies de stress. HSPB8 coopère avec BAG3 au ciblage des protéines dénaturées à l’agrésome, en vue de leur dégradation par autophagie, en favorisant notamment le couplage de BAG3 à un de ses partenaires clé, l’adaptateur autophagique p62/SQSTM1. De plus, le complexe HSPB8-BAG3 prend part à l’activation de voies de signalisation protectrice en réponse au stress ce qui pourrait avoir des implications dans les maladies musculaires associées aux mutations de BAG3 ainsi que dans le contexte du cancer.
Heat shock protein (HSP) play crucial role in the maintenance of the proteome integrity and in protein quality control. BCL-2-associated athanogene 3 (BAG3) is a unique co-chaperone that interacts with different systems of chaperones, including the HSPA (HSC/HSP70) and HSPB families, in particular HSPB8. While the role of HSPA chaperones in BAG3-related functions in protein quality control has been well characterized, the exact contribution of HSPB8 remains incompletely understood. The objective of this thesis is to characterize HSPB8 function in BAG3-related activities in the context of cellular stress in response to proteasome inhibition, which lead to the sequestration of polyubiquitinated protein in a quality control deposit through the aggresome-autophagy pathway and in which BAG3 has previously been involved. Here we have discovered an early function of HSPB8 in response to stress that contributes to the controlled aggregation of polyubiquitinated proteins in a BAG3-independent manner, but that would facilitate efficient targeting of polyubiquitinated protein aggregates to the aggresome, which is BAG3-dependent. Our results suggest that HSPB8 functions in part, by modulating p62/SQSTM1 molecular assemblies and facilitating their coupling to BAG3. This, in turn, would promote microaggregate and aggresome formation and signaling to an important arm of the oxidative defense regulated by Nrf2. Besides, a BAG3 (P209L) mutant, located within an HSPB8-binding motif, appears to disturb the association between BAG3 and p62/SQSTM1, leading to down-modulation of stress-induced Nrf2 activation, a process that could contribute to the development of severe myofibrillar myopathies. Moreover, analyses of the dynamic of aggresome clearance during the recovery period suggest that it involves a first step of disaggregation followed by its catabolic degradation. We found that while BAG3 would contribute to aggresome clearance by a mechanism involving its autophagic function, HSPB8 appeared not to be involved and could rather slow down the process. In conclusion, this thesis highlight a novel role for HSPB8 in the spatial sequestration of harmful proteins, which could provide a platform to cross talk with stress signaling pathways. HSPB8 would uniquely cooperate with BAG3 in the targeting of microaggregates to the aggresome-autophagy pathway, in part, by favoring the coupling of BAG3 to the stress sensor p62/SQSTM1. Furthermore, this work has uncovered a novel role for the HSPB8-BAG3 chaperone complex in mounting of an efficient stress response, which may have implications in BAG3-related diseases, including myofibrillar myopathy and cancer.

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Sevin, Margaux. "Rôle des protéines de choc thermique dans les néoplasies myéloprolifératives : implication de HSP27 dans la myélofibrose." Thesis, Bourgogne Franche-Comté, 2017. http://www.theses.fr/2017UBFCI009/document.

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Abstract:

La myélofibrose (MF) est la plus agressive des néoplasies myéloprolifératives (NMP). Elle porte à elle seule le plus mauvais pronostic pour les patients puisqu’elle s’accompagne d’une fibrose de la moelle osseuse évoluant vers une insuffisance médullaire. Les inhibiteurs de la kinase JAK2 ont apporté de nouveaux espoirs pour le traitement des NPM mais leurs effets ont été essentiellement bénéfiques sur les symptômes et non sur la fibrose elle-même ni sur le cours de la maladie. Plus récemment, la protéine de choc thermique 90 (HSP90) - connue pour stabiliser JAK2 - est apparue comme une cible thérapeutique prometteuse pour les NMP. Cependant, les inhibiteurs de la HSP90 ont montré une toxicité importante accompagnée d’une expression compensatoire des HSPs inductibles (i.e HSP70, HSP27), connues pour favoriser l’émergence de phénomène de résistance. Par ailleurs, des études ont montré que HSP27 était fortement exprimée chez les patients présentant une fibrose pulmonaire idiopathique ou rénale montrant l’importance de HSP27 dans les processus fibrotiques. Sur la base de l’ensemble de ces données, nous avons évalué d’une part l'efficacité chez l’animal d'un oligonucléotide inhibiteur spécifique de HSP27 appelé OGX-427 (en essai clinique dans plusieurs cancers). D’autre part, nous avons déterminé le niveau d’expression intra- et extracellulaire de HSP27 chez des patients atteints de MF. L'effet de l'OGX-427 a été évalué dans deux modèles murins de myélofibrose, laquelle est induite soit par la sécrétion excessive de thrombopoïétine (TPOhigh) soit par la mutation JAKV617F. Nous avons mis en évidence dans les souris traitées par l’OGX-427, une réduction de la taille de la rate, de la prolifération mégacaryocytaire et de l’hématopoïèse extramédullaire par rapport aux souris contrôles, révélant ainsi un effet bénéfique de l’inhibition de HSP27 sur la progression de la maladie. De toutes récentes observations complémentaires à ce travail ont également montré une diminution de la fibrose réticulinique dans la moelle osseuse de souris JAKV617F. Au niveau moléculaire, nous démontrons que l'effet prolifératif induit par la voie de signalisation exacerbée - JAK2/STAT5 - est régulé par HSP27 via des interactions directes. Pour finir, nous avons détecté une augmentation de l'expression de HSP27 aussi bien dans les progéniteurs circulants CD34+ que dans le sérum des patients atteints de NMP avec MF. Ce travail révèle pour la première fois le rôle intra et extracellulaire de HSP27 dans la physiopathologie de la MF et le bénéfice thérapeutique potentiel de l’utilisation des inhibiteurs de HSP27 dans cette maladie
Myelofibrosis (MF) is the most aggressive myeloproliferative neoplasms (MPN) with the highest degree of morbidity and mortality, including progressive bone marrow fibrosis resulting into bone marrow failure. JAK2 kinase inhibitors have been successfully used for a few years in MPN and more particularly for MF treatment. Nevertheless, their beneficial effects are mainly restricted on symptoms and not on the course of the disease. Recently, heat shock protein 90 (HSP90) - known to stabilize JAK2 - has been reported as a promising therapeutic target in MPN. However HSP90 inhibitors show toxicity and induce the expression of stress-inducible proteins such as HSP70 and, most likely HSP27 as previously shown in other cancers. In addition, we and others have shown that HSP27, was strongly expressed in patients with idiopathic pulmonary or kidney tubulointerstitial fibrosis, underlying a relevant role of HSP27 in fibrotic processes. Taking into account both the beneficial effects of HSP inhibitors in leukemia and in MPN, and the possible implication of HSP27 in fibrosis, we have evaluated here the status of HSP27 in MF patient’s samples and assess the effectiveness of an HSP27 oligonucleotide inhibitor called OGX-427 in murine models. We report here the effect of OGX-427 in two murine models of thrombopoietin- and JAKV617F-induced myelofibrosis. OGX-427 limited the progression of the disease associated with a reduction of spleen weight and of megakaryocytic expansion. And more recently, our additional results show a decrease of reticulin fibrosis in JAK2V617F’s bone marrow. We show that HSP27 regulates JAK2/STAT5 proliferative effect through direct interactions, and we report an increase expression of HSP27 both in CD34+ circulating progenitors and in the serum of patients with NMP with fibrosis. Taking altogether, this work supports that extra and intracellular HSP27 plays a key role of in the pathophysiology in MF and highlight the potential therapeutic benefit of HSP27 inhibitors in this disorder

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Duval, Amélie. "Rôle des protéines de choc thermique et de CXCR4 dans la survie des cellules hématopoïétiques malignes." Saint-Etienne, 2007. http://www.theses.fr/2007STET008T.

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Abstract:

L'apoptose, mort cellulaire génétiquement programmée, est un phénomène complexe où les protéines de choc thermique (HSP) et les cytokines jouent un rôle central. De plus, l'apoptose tient une grande place dans la physiopathologie des différents cancers hématologiques. Ainsi les syndromes myélodysplasiques (SMD) se caractérisent par une apoptose médullaire augmentée alors que les cellules de leucémie lymphoïde chronique (LLC) présentent au contraire une apoptose défectueuse. Au cours de ce travail de thèse nous avons étudié l'expression des HSP dans les cellules myélodysplasiques. Nous avons montré que les cellules blastiques de SMD surexpriment plusieurs HSP par rapport aux cellules normales et nous avons mis en évidence des corrélations entre l'expression des HSP et plusieurs caractères cliniques et biologiques. Nous avons également étudié l'impact de la chimiokine anti-apoptique SDF-1 sur les SMD et les LLC. Les cellules de SMD se sont révélées insensibles à l'effet de la chimiokine ce que nous avons pu mettre en relation avec un défaut de modulation de l'expression des protéines de la famille Bcl-2. Enfin notre étude par microarray sur l'expression des gènes des voies apoptotiques dans les LLC nous a permis de mettre en évidence l'implication importante des gènes de la famille du TNF (Tumor Necrosis Factor) dans l'effet anti-apoptotique de SDF-1 sur les cellules de LLC.

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Arnal, Marie-Edith. "Implication des protéines du choc thermique intestinales dans le dialogue hôte-microbiote et conséquences sur la résistance intestinale aux agressions." Rennes, Agrocampus Ouest, 2014. http://www.theses.fr/2014NSARB246.

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Le tube digestif est colonisé par le microbiote à la naissance, période clef de la mise en place du dialogue hôte-microbiote. Ce dialogue joue un rôle important dans l’homéostasie intestinale notamment grâce aux protéines du choc thermique (HSPs) intestinales, système de protection cellulaire inductible par le microbiote. Ma thèse a eu pour but d’étudier ces HSPs, en situation de perturbation et de restauration du microbiote chez le porcelet et le jeune porc adulte. Pour cela, dans une première étude, un antibiotique (amoxicilline) a été administré oralement à des truies gestantes (ATB) afin de perturber la composition de leur microbiote et celle de leurs descendants. Ce traitement a effectivement modifié les microbiotes. Il a aussi diminué les niveaux de protéine HSP70 jéjunale et iléale, et a augmenté ceux des HSP27 et HSP70 coliques des porcelets. La sensibilité de l’intestin grêle pourrait donc être plus élevée que celle du côlon vis-à-vis d’agressions. Dans une seconde étude, un probiotique (Lactobacillus amylovorus) a été administré oralement en période néonatale à des porcelets nés de mères ATB afin de tester sa capacité à atténuer ou à modifier les altérations intestinales observées chez les descendants nés de mères ATB. Le probiotique a diminué les niveaux d’HSP27 et HSP70 iléales chez les porcelets, et les niveaux d’HSP27 coliques des jeunes adultes. Ainsi, il a accentué les changements de HSPs observés chez les porcelets nés de mères ATB et a eu des effets distants sur le côlon. En conclusion, des modifications néonatales du microbiote affectent les HSPs inductibles (et la biologie intestinale) des descendants, avec des effets à plus long terme dépendant du modèle expérimental. L’analyse des mécanismes sous-jacents et du microbiote permettra d’approfondir ces observations
The gut is colonized by microbes at birth, a key period in the establishment of the hostmicrobiota crosstalk. This crosstalk plays an important role in intestinal homeostasis, especially as far as gut microbiota-inducible cytoprotective heat shock proteins (HSPs) are concerned. The aim of my PhD thesis was to study these HSPs, in situation of disturbance and restoration of the microbiota in piglet and young adult pig offspring. For this, in a first study, an antibiotic (amoxicillin) was administered orally to gestating sows (ATB) in order to disturb composition of their microbiota and that of their offspring. This treatment actually changed both mother and offspring microbiota. It also decreased HSP70 protein levels in the jejunum and ileum, and increased HSP27 and HSP70 in the colon of piglets. Sensitivity to aggressions may be higher in the intestine than in the colon. In a second study, a probiotic (Lactobacillus amylovorus) was administered orally during the neonatal period to newborn piglets born to ATB sows, in order to test its capacity to mitigate or change the intestinal alterations observed in the offspring born to ATB mothers. The probiotic decreased HSP27 and HSP70 protein levels in the ileum of the piglets, and HSP27 in the colon of the young adult pigs. Thus, it actually accentuated HSPs changes observed in offspring born to ATB mothers. In conclusion, neonatal microbiota modifications affect HSPs (and intestinal biology) in offspring, in the short and/or long term, depending on the experimental model. Underlying mechanisms and microbiota analysis will allow deepening these observations

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Dréano, Michel. "Expression de gènes d'intérêt biotechnologique sous contrôle de promoteurs de gènes de protéines de choc thermique dans les cellules eucaryotes." Dijon, 1990. http://www.theses.fr/1990DIJOS045.

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Abstract:

Toute cellule vivante soumise à une agression extérieure réprime ses synthèses endogènes de mARN et de protéines, et surexprime un nombre limite de protéines appelées Heat schok proteins (HSP). Le promoteur HSP de la protéine 70-kda a été isolé, et inséré dans un vecteur contenant un gène d'intérêt biotechnologique. Lorsque le plasmide est introduit dans des cellules eucaryotes, la synthèse de la protéine codée par le gène est régulée de la même façon que celle des HSP endogènes. Ce système a été utilisé pour la production de différentes protéines, certaines sont sécrétées : hormone de croissance humaine (hGH), protéine d'enveloppe du virus de l'hépatite B (HBS), lysozyme de poulet (LYS), d'autres présentent une activité enzymatique : bêta-galactosidase, urokinase humaine ou de souris, et d'autres réagissent avec des protéines circulantes, soit des anticorps, soit des protéines plasmatiques, HBS et urokinase humaine et de souris. L'étude de la cellule hôte a conduit à des lignées recombinantes produisant une protéine sous contrôle du promoteur hsp70. Un autre mode d'amplification au niveau génique, le gène de la dihydrofolate reductase ou de séquences du virus du papillome bovin, n'interfère pas avec l'inductibilité du promoteur hsp. Des lignées maintiennent leur production lorsqu'elles sont cultivées dans des milieux sans serum, facilitant l'isolement de la protéine pure. La masse cellulaire peut être amplifiée par le passage en tumeur dans la souris nude. Les cellules dissociées de la tumeur et mises en culture maintiennent la même sécrétion protéique que celui des cellules parentes. L'application du choc thermique à la souris porteuse de la tumeur induit "In Vivo" la sécrétion plasmatique de la protéine recombinante, cas de l'hGH. L'injection de cellules tumorales à un animal hôte immunocompétent induit la synthèse de l'anticorps correspondant, par exemple l'ac-hGH. Dans ce cas la, même. . .

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Dabbaghizadeh, Afrooz. "Structure and function of mitochondrial small heat shock protein 22 in Drosophila melanogaster." Doctoral thesis, Université Laval, 2018. http://hdl.handle.net/20.500.11794/34491.

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Abstract:

Les petites protéines de choc thermique (sHsps) ont été découvertes initialement chez Drosophila. Les membres de cette famille sont des chaperons moléculaires sont présentsdans la plupart des organismes eucaryotes et procaryotes et certains virus. En plus d’être induites en réponse à la plupart des stresseurs dont un choc thermique, elles sont également exprimés en absence de stress. Les sHsps forment des structures dynamiques s'assemblant en oligomères et elles sont essentielles durant les conditions de stress en empêchant l'agrégation des protéines dénaturées et en favorisant leur repliement par des chaperons moléculaires dépendants de l'ATP. Le génome de Drosophila melanogastercode pour 12 sHsp, qui ont des profils d'expression développementaux, des localisations intracellulaires diverses et des spécificités de substrats distincts. DmHsp22 est jusqu'à présent la seule sHsp localisée dans les mitochondries avant et après un choc thermique. Elle est préférentiellement régulée lors du vieillissement et en réponse à la chaleur et aux stress oxydants. La surexpression de DmHsp22 augmente la durée de vie et la résistance au stress et sa régulation négative est préjudiciable. C'est un chaperon efficace, qui pourrait être impliqué dans la réponse mitochondriale au dépliement protéique (UPRMT). Cependant, le mécanisme exact de son action est mal compris. Structurellement, DmHsp22 forme une population d'oligomères semblable aux nombreux sHsps de métazoaires et différente deDmHsp27. L'alignement des séquences de la région ACDde DmHsp22 avec des sHsp de drosophile et d'autres organismes a démontré la présence de trois résidus d'arginine hautement conservés dans ce domaine. Une forte conservationde ces résidus suggère leur implication possible dans la structure et la fonction de DmHsp22. La substitution des résidus d'arginine hautement conservés dans les sHsps de mammifères est associée à certaines pathogenèses et déclenche des changements de conformation des protéines ainsi que l'agrégation des protéines intracellulaires. La mutation de l'arginine en glycine au niveau de trois résidus hautement conservés d'ACD dans DmHsp22 (R105, R109, R110) résulte en une population oligomérique qui, dans le cas de R110G, perturbe la structure et provoque la formation de petits oligomères. Bien que DmHsp22 ainsi que les mutants aient été caractérisés comme des chaperons efficaces in vitro, les mécanismes d'action exacts dans les mitochondries et l'information sur le comportement protecteur nécessitent la détermination du réseau d’interaction in vivo. Nous avons utilisé la technique capture d’immunoaffinité (CIA) pour récupérer 60 protéines qui interagissent spécifiquement avec DmHsp22 in vivo pendant le traitement normal et thermique, dans le surnageant des cellules de mammifères exprimant la DmHsp22. L’CIA effectuée sur la fraction mitochondriale a permis d’identifies 39 protéines qui interagissent spécifiquement avec DmHsp22. La combinaison de l’IAC avec l'analyse par spectroscopie de masse de mitochondries de cellules HeLa transfectées avec DmHsp22 a conduit à l'identification de partenaires de liaison à DmHsp22 dans des conditions de normales et de choc thermique. L'interaction entre DmHsp22 et deux autres chaperons mitochondriaux a été validée par immunobuvardage. Notre approche a montré que les cellules HeLa exprimant DmHsp22 augmentent la consommation d'oxygène mitochondrial et les teneurs en ATP, ce qui confère un nouveau rôle à DmHsp22 dans les mitochondries. En outre, l'activité d’une luciférase exogène a légèrement augmenté dans les cellules HeLa exprimant DmHsp22 après que l'activité enzymatique ait été réduite à la suite de l'exposition à la chaleur. En résumé, ce projet a permis de caractériser la structure oligomérique de DmHsp22 et un certain nombre de mutants dans le domaine alpha cristallin tout en fournissant un rôle potentiel mécanistique dans l’homéostase mitochondriale. La détermination du réseau mitochondrial de DmHsp22 suggère son importance dans cette organelle non seulement en tant que chaperon moléculaire, mais aussi en tant que protéine impliquée dans plusieurs fonctions cellulaires significatives.
The small heat shock proteins (sHsps) were first discovered in Drosophila. Members of this family are molecular chaperones and are present in most eukaryotic and prokaryotic. Although, they are induced in response to most of the stressors including heat shock, they are also expressed in absence of stress. SHsps for mdynamic structures that assemble into oligomers which are essential during stress conditions by preventing aggregation of denatured proteins and promoting their folding by ATP dependent molecular chaperones. Drosophila melanogaster genome encodes 12 sHsps, that have developmental expression patterns, diverse intracellular localizations and distinct substrate specificities. DmHsp22 is up to now the only sHsp localized in mitochondria before and after heat shock. It is preferentially regulated during ageing and in response to heat and oxidative stresses. Over-expression of DmHsp22 increases lifespan and resistance to stress and its down-regulation is detrimental. It is an efficient chaperone and could be involved in the mitochondrial unfolding protein response (UPRMT). However, the exact mechanism of its action is poorly understood. Structurally, DmHsp22 forms one population of oligomers similar to the many metazoan sHsps but DmHsp27. Sequence alignment of DmHsp22 with sHsps in Drosophilaand other organisms at the alpha crystalline domain (ACD) region demonstrated the presence of three highly conserved arginine residues in this domain. Strong conservation of these residues suggest their possible involvement in structure and function of DmHsp22. Substitution of highly conserved arginine residues in mammalian sHsps is associated with some pathogenesis and triggers protein conformational changes as well as intracellular protein aggregation. Mutation of arginine to glycine at three highly conserved residues of ACD in DmHsp22 (R105, R109, R110) results in one oligomeric population as well which in the case of R110G disrupts the structure and causes formation of smaller oligomers. Although DmHsp22 as well as mutants have been characterized as effective in vitro chaperones, the exact mechanism(s) of action in mitochondria and information about protective behavior requires defining of in vivoprotein interacting network. We have used immunoaffinity conjugation (IAC) technique to recover 60 proteins that specifically interact with DmHsp22 in vivo during normal and heat treatment using cell extract of mammalian cells expressing DmHsp22. The IAC performed on mitochondrial fraction identified 39 proteins that specifically interact with DmHsp22. Combination of IAC with mass spectroscopy analysis of mitochondria of HeLa cells transfected with DmHsp22 resulted in identification of DmHsp22-binding partners under normal andunder heat shock conditions. Interaction between DmHsp22 and two other mitochondrial chaperones was validated by immunoblotting. Our approach showed that HeLa cells expressing DmHsp22 increase maximal mitochondrial oxygen consumption and ATP contents which provides a new mechanistic role for DmHsp22 in mitochondria. Further more, exogenous luciferase activity slightly increased in HeLa cells expressing DmHsp22 after the enzyme activity reduced as a result of exposure to heat. In summary, this project has characterized the oligomeric structure of DmHsp22 and a number of mutants inthe alpha crystalline domain while providing a potential mechanistic role in mitochondrial homeostasis. Determining mitochondrial network of DmHsp22 suggest its importance in this organelle not only as a molecular chaperone but also as a protein involved in several significant cellular functions.

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Parcellier, Arnaud. "Hsp27 : un chaperon moléculaire impliqué dans le triage des protéines." Dijon, 2005. http://www.theses.fr/2005DIJOMU03.

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Abstract:

HSP27 appartient à la catégorie des petites protéines de choc thermique (sHSP) et elle est fréquemment surexprimée dans les cellules cancéreuses. C'est un chaperon moléculaire capable de former des grands ainsi que des petits oligomères, et qui possède une fonction antipoptotique reconnue. Dans ce travail, nous avons démontré que le rôle d'HSP27 dans la survie cellulaire pouvait aussi s'expliquer par son action sur le système ubiquitine / protéasome. En effet, HSP27 peut augmenter l'activité du protéasome en réponse à divers stress cellulaire et peut participer à la dégradation d'I-kBα, inhibiteur du facteur de survie NF-kB. Cet effet renforce son rôle protecteur lors de l'apoptose en permettant à NF-kB d'augmenter l'expression de nombreux gènes antiapoptotiques. De plus, nous avons observé dans d'autres conditions qu'HSP27 sous forme de petits oligomères pouvait accroître l'ubiquitination et la dégradation de l'inhibiteur du cycle cellulaire p27kip1. Ceci a pour effet de permettre un passage accéléré des cellules en phase S et pourrait contribuer au pouvoir tumorigène exercé par HSP27.

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Regnacq, Matthieu. "Etude d'un nouveau gène heat shock dont l'expression est associée à l'entrée en phase stationnaire chez la levure saccharomyces cerevisiae : le gène HSP30." Bordeaux 2, 1992. http://www.theses.fr/1992BOR28213.

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Sand, Olivier. "Rôle des protéines de choc thermique DnaK, DnaJ et GrpE dans la transcription tardive du bactériophage Mu." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 1995. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/212581.

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Fedhila, Sinda. "Contribution des métalloprotéases InhA et des protéines de choc thermique Clp à la virulence de Bacillus thuringiensis." Paris, Institut national d'agronomie de Paris Grignon, 2002. http://www.theses.fr/2002INAP0032.

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Guimond, Marie-Odile. "Analyse moléculaire de la localisation cellulaire de la petite protéine de choc thermique Hsp27 de Drosophila melanogaster." Thesis, Université Laval, 2004. http://www.theses.ulaval.ca/2004/22332/22332.pdf.

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Abstract:

La petite protéine de choc thermique Hsp27 chez Drosophila melanogaster est localisée au noyau. Dans le but d’identifier la séquence peptidique responsable de cette localisation, la mutagenèse dirigée d’un signal potentiel de localisation nucléaire bipartite situé entre les acides aminés 42 et 59 a été effectuée, et les vecteurs obtenus ont été transfectés dans des cellules de mammifères HeLa. Il s’est avéré que la mutation des arginines 54, 55 et 56 de la protéine occasionne une diminution importante de la localisation nucléaire, bien qu’on observe toujours des résidus nucléaires localisés au niveau de structures granulaires. La localisation au niveau de structures granulaires est également observée avec la protéine sauvage. Des analyses avec des marqueurs de corps nucléaires ont donc été effectuées afin de déterminer si ces granules contenant Hsp27 correspondaient à des corps nucléaires connus. Il a été observé que la protéine colocalise avec le facteur d’épissage SC35 au niveau des "speckles" nucléaires. Ces observations s’avéreront utiles dans l’identification de fonctions pour la protéine Hsp27.

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Schmitt, Élise. "Hsp70 : une cible dans la thérapie anti-cancéreuse." Dijon, 2006. http://www.theses.fr/2006DIJOMU13.

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Abstract:

HSP70 est une protéine de choc thermique surexprimée dans les cellules cancéreuses. Elle inhibe le processus apoptotique permettant la survie des cellules exposées à divers stress. Cette fonction protectrice d’HSP70 implique l’interaction et la neutralisation des protéines Apaf-1 et AIF. Nous avons montré qu’ADD70, un peptide contenant la séquence d’AIF nécessaire à son interaction avec HSP70, se lie et neutralise HSP70 dans le cytosol. Il sensibilise les cellules cancéreuses à la mort induite par une grande variété de stimuli apoptotique. In vivo, l’expression, de ce peptide par les cellules tumorales diminue leur tumorigénicité chez des animaux syngéniques immunocompétents sans affecter leur croissance chez des animaux immunodéficients. De plus, ADD70 sensibilise les cellules cancéreuses coliques de rat et les cellules de mélanome de souris au cisplatine, un agent anti-cancéreux. Ces données nous montrent l’intérêt de cibler l’interaction AIF/HSP70 dans la thérapie anti-cancéreuse
HSP70 is a heat shock protein overexpressed in several cancer cells. It prevents apoptosis, thereby increasing the survival of cells exposed to a wide range of lethal stimuli. These protective functions of HSP70 involve its interaction with and neutralization of Apaf-1, implicated in caspase activation, and AIF, involved in caspase-independent cell death. We have shown that a peptide containing the AIF sequence involved in its interaction with HSP70, binds to and neutralizes HSP70 in the cytosol, thereby sensitizing cancer cells to apoptosis induced by a variety of death stimuli. The expression of ADD70 in tumor cells decreases their tumorigenicity in syngeneic animals without affecting their growth in immunodeficient animals. In addition, ADD70 sensitizes rat colon cancer cells and mouse melanoma cells to the chemotherapeutic agent cisplatin. Altogether, these data indicate the potential interest of targeting the HSP70 interaction with AIF for cancer therapy

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Kim, Hyun-Ju. "Transcriptomic and proteomic studies on longevity induced by over-expression of HSP22 in drosophila melanogaster." Doctoral thesis, Québec : Université Laval, 2008. http://www.theses.ulaval.ca/2008/25824/25824.pdf.

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Ecochard, Laurent. "Influence des modifications d'activité contractile et des altérations du potentiel de phosphorylation sur l'expression de la protéine de choc thermique Hsp72." Lyon 1, 2000. http://www.theses.fr/2000LYO10207.

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Chaufour, Sylvain. "Fonctions de la petite protéine de stress humaine lors de traitements par des agents différenciants et chimiothérapeutiques." Lyon 1, 1997. http://www.theses.fr/1997LYO10148.

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Abstract:

Les petites protéines de stress (shsp) sont induites lorsque les cellules sont soumises à des perturbations physiologiques. Sur le plan biologique, l'activation des shsp conduit à protéger les cellules contre des stress physiques ainsi que contre l'action cytotoxique d'agents chimiques et de cytokines. Les shsp peuvent aussi influencer l'activité proliférative des cellules transformées. L'activité moléculaire des shsp reste cependant mal connue. L'objectif de ce travail a été de caractériser les modifications biochimiques subies par la petite protéine de stress humaine hsp27, ainsi que le rôle de cette protéine pendant la différenciation cellulaire et lors de traitements chimio thérapeutiques anticancéreux. Des expériences pratiquées sur la lignée cellulaire humaine hl-60 ont montre que la différenciation monocytaire et granulocytaire de ces cellules s'accompagne d'une augmentation de l'expression de la shsp humaine (hsp27) et de modifications biochimiques (phosphorylation et oligomérisation) de cette protéine. Une réduction partielle du taux d'hsp27, au moment de la différenciation, altère fortement la phase d'arrêt de la prolifération des cellules hl-60. Lors d'un traitement chimio thérapeutique par la doxorubicine, la surexpression de la protéine hsp27 peut être étroitement associée à un phénomène de résistance contre cet agent. La conception et l'utilisation de formes mutantes de la protéine hsp27 ont permis de montrer que la protection associée à hsp27 dépend de la capacité de la protéine a s'oligomériser mais reste indépendante de sa capacité à être phosphorylée. Au niveau moléculaire, hsp27 semble favoriser, de manière indirecte, la mise en place de mécanismes de détoxification et de défense des cellules contre l'action cytotoxique de la doxorubicine (réduction de l'accumulation de la dox et du fer, optimisation du système de détoxification lie au glutathion). Bien que la fonction moléculaire de la petite protéine de stress reste en grande partie controversée et mal définie, les données obtenues suite à ce travail tendent, à la lumière de certaines données bibliographiques, à accréditer une fonction de chaperon moléculaire exercée par hsp27, sous forme d'oligomères, en suggérant par ailleurs que la phosphorylation d'hsp27 régule activement l'état d'oligomérisation de la protéine.

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Ekaza, Euloge. "Identification et caractérisation des ClpATPases ClpA & ClpB de la bactérie pathogène Brucella Suis." Montpellier 2, 2001. http://www.theses.fr/2001MON20089.

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Potier, Patrick. "Dégradation in vivo et in vitro des protéines chez une bactérie psychrotrophe du genre Arthrobacter : influence de la température sur les activités protéolytiques intracellulaires." Lyon 1, 1988. http://www.theses.fr/1988LYO10081.

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Berchet, Véronique. "L'adaptation des protéines aux basses températures chez une bactérie psychrotolérante : facteur d'élongation G et protéines d'acclimatation au froid." Lyon 1, 2000. http://www.theses.fr/2000LYO10073.

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Abstract:

Le premier objectif de cette thèse était de déterminer les caractéristiques structurales impliquées dans l'adaptation de la protéine EF-G aux basses températures. Le gène Fus codant pour EF-G a été cloné et séquencé chez la bactérie psychrotrophe arthrobacter SP. SI55 et un modèle de la structure tridimensionnelle de la protéine a été construit. La comparaison de la séquence primaire et de la structure de la protéine psychrotrophe avec celles de ses homologues mésophiles et thermophiles a permis d'identifier plusieurs facteurs structuraux qui pourraient conférer à la protéine psychrotrophe une structure plus flexible lui permettant d'être active à basses températures : diminiution du contenu en résidus proline et arginine et du caractère hydrophobe, disparition de liaisons inoniques inter-et intradomaines et augmentation du nobmre de résidus polaires et chargés en surface favorisant les interactions avec le solvant. Des changements, identifiés au niveau du domaine catalytique et des sites d'interactions avec les ribosomes, pourraient avoir un effet sur la fixation et sur l'hydrolyse des substrats et sur la vitesse d'élongation à basses température. Après surexpression dans E. COLI, la protéine EF-G d'arthrobacter SP. SI55 a été purifiée en vue d'étudier ses propriétés biochimiques et structurales. Le deuxième objectif était d'étudier le rôle et la synthèse de protéines d'acclimatation au froid (CAPS) chez des bactéries psychrotrophes et psychrophiles. Aucun mutant artrhobacter SP. SI55, délété du gène Capa n'a été obtenu. L'hypothèse est en faveur d'une forte létalité des mutants. Un gène de type Capa a été identifié chez plusieurs souches psychrotrophes et psychrophiles. La protéine capa n'est pas exprimée dans E. COLI, quelles que soient les conditions expérimentales.

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Bertaux, Lionel. "Protéines de choc thermique et cellules dendritiques apoptotiques dans l'induction d'une protection vaccinale vis-à-vis de toxoplasma gondii." Tours, 2004. http://www.theses.fr/2004TOUR3801.

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Abstract:

Toxoplasma gondii, protozoaire intracellulaire obligatoire, infecte tous les animaux à sang chaud. Nous avons développé une approche vaccinale avec la protéine HSP70. Le projet de purifier cette protéine chargée en peptides de T. Gondii à partir de DC murines sensibilisées avec de l'extrait parasitaire (TAg) a été abandonné en raison de problèmes de rendement de purification. Nous avons utilisé la HSC73/HSP70 recombinante en fusion avec l'antigène SAG1 du toxoplasme en vaccination ADN ou sous forme protéique complexée avec un peptide issu de la protéine SAG1. L'immunisation de souris CBA/J avec ces différentes formes de la HSP70 n'a induit qu'une faible réponse humorale et cellulaire non associée à une protection. Enfin, nous avons développé une stratégie de vaccination avec des CD apoptotiques induites en apoptose. L'immunisation de souris CBA/J avec ces CD apoptotiques sensibilisées par du TAg induit une réponse humorale et cellulaire associée à une protection de 70%.

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Lapointe, Gabriel. "Translocation de certains RNP cytoplasmiques «solubles» à la fraction insoluble de la matrice cellulaire résiduelle lors d'un stress thermique." Thesis, Université Laval, 2004. http://www.theses.ulaval.ca/2004/22140/22140.pdf.

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Abstract:

L’une des premières réponses observées lorsque des cellules sont soumises à un stress est la diminution de la traduction suite à la destruction des polyribosomes. Les ARNm, qui auparavant étaient traduits, ne sont pas détruits durant ce processus. Il est donc possible d’observer l’accumulation d’une réserve d’ARNm et de mRNP réprimées sous forme de granules de stress intimement liées à la matrice cellulaire résiduelle. La présence de plusieurs protéines impliquées dans la stabilisation et la destruction des ARNm et des protéines soulève l’hypothèse que ces granules de stress servent aussi de site de triage afin de ne conserver que les RNP résistantes au stress. Ces granules cytoplasmiques étant peu connus, nous avons cherché à mieux connaître les RNP impliquées dans ce phénomène. Nos tentatives d’isoler les granules de stress n’ayant pas réussi, vu leur forte association avec la matrice cellulaire résiduelle, nous avons concentré nos efforts sur la comparaison des profils protéiques de la matrice cellulaire résiduelle avant et après un choc thermique. Cette approche nous a permis d’observer une augmentation de la concentration de plusieurs protéines de la matrice cellulaire, protéines qui pourraient être identifiées dans le futur.

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Demers, Martine. "Expression des petites protéines de choc thermique, Hsp, heat shock protein, dans les gonades de Drosophila melanogaster et Drosophila hydei." Thesis, National Library of Canada = Bibliothèque nationale du Canada, 1998. http://www.collectionscanada.ca/obj/s4/f2/dsk2/ftp01/MQ33612.pdf.

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Joly, Anne Laure. "Rôle des protéines de choc thermique de la famille HSP90 dans le développement de la maladie du greffon contre l'hôte." Thesis, Dijon, 2011. http://www.theses.fr/2011DIJOS070.

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Abstract:

Trouver des solutions thérapeutiques permettant de limiter le développement de la maladie du greffon contre l’hôte tout en conservant l’effet GvL est actuellement un des enjeux crucial de la recherche en hématologie. La GvH est la complication majeure chez les patients ayant subit une greffe allogénique de cellules hématopoïétiques (CH). Elle se caractérise par la reconnaissance des organes du patient comme non-soi par le nouveau système immunitaire mis en place. Les lymphocytes T sont les principaux effecteurs de la GvH mais ils permettent aussi la prise de greffe ainsi que l’éradication d’une partie des cellules malignes. Les dommages tissulaires liés au conditionnement préparatoire à la greffe favorisent cette allo-reconnaissance en fournissant aux cellules présentatrices d’antigènes quantité de peptides allogéniques. Les protéines de choc thermique (HSP) ont été très conservées au cours de l’évolution de part leur rôle primordial dans la préservation de l’intégrité cellulaire. Ainsi, elles permettent aux cellules de résister à différents stress (chimio-/radiothérapie, UV, hypoxie…) en protégeant de nombreuses protéines de l’agrégation mais aussi, en bloquant le déclenchement d’une apoptose précoce. Depuis quelques années, les HSP sont de plus en plus décrites comme protectrices de l’organisme. En effet, en cas de stress conduisant à la mort cellulaire, les HSP sont sécrétées dans le milieu extracellulaire où leur interaction avec d’autres cellules telles que les cellules immunitaires permet d’alarmer l’organisme quant au danger potentiellement présent pour lui. Cet effet, bénéfique en cas d’infection par exemple, peut se révéler néfaste dans divers pathologies inflammatoires. Notre équipe étant très spécialisée dans l’étude des HSP, nous avons voulu étudier grâce à un modèle murin mimant le développement de la GvH, le rôle de ces protéines dans ce contexte particulier. Nous avons d’abord voulu savoir si l’inhibition des HSP pouvait moduler le développement de la maladie. L’inhibiteur d’HSP90, 17AAG (17-allylamino-17-demethoxygeldanamycine), en empêchant HSP90 de stabiliser les kinases clés des voies de survie/prolifération induit la mort des lymphocytes T s’activant au contact de l’hôte. Un traitement court permet de prévenir le développement de la maladie dans notre modèle. D’autre part, nous avons pu observer que le conditionnement préparatoire à la greffe favorisait l’expression extracellulaire d’une autre HSP, gp96 (glycosylated protein 96). Cette protéine, en interaction avec le complément C3, agirait comme signal de danger en favorisant la présentation des peptides du receveur aux lymphocytes du donneur via leur présentation par les macrophages. A terme, ces travaux pourraient mener à de nouvelles stratégies thérapeutiques pour les patients atteints de désordres inflammatoires tels que la GvH ou des pathologies auto-immunes
Hematopoietic cells transplantation (HCT) is often used as a curative approach for hematopoietic malignancies. Unfortunately, GvHD, for graft versus host disease, is the major lethal complication for patients undergoing HCT. Mature T-cells present in the graft recognize residual malignant cells and therefore decrease the risk of death related to relapse of cancer. This is the graft versus tumor effect. But when GvHD develops, those cells also recognize patient’s organs leading to organ failures. Irradiation and/or chemotherapy used as conditioning regimen also promote GvHD development. In fact, damaged tissues induce the secretion of danger signals, and the presence of apoptotic cells provides big quantities of allogeneic peptides to phagocytes. Therefore, new strategies, allowing the distinction between GvHD and the GvT effect are highly needed. Heat shock proteins (HSPs) have been conserved through evolution because of their crucial role in cell survival. During stressful conditions, (chemo-/radiotherapy, UV, hypoxia, …), they prevent protein aggregation and block untimely apoptosis. HSPs are more and more described as danger signals. Upon lethal stress, HSPs are secreted in the extracellular medium where they interact with immune cells to signal lethal danger to the organism. Although helpful during infection for example, this process could be deleterious during inflammatory pathologies such as GvHD. Our team is competent in studying the role of HSPs in different physio-pathological contexts. Thus we used an in vivo model that mimic GvHD development to determine the role of HSPs in GvHD. First, we tested HSPs inhibitors in our model. We observed that HSP90 inhibitor, 17AAG (17-allylamino-17-demethoxygeldanamycine) treatment, prevents GvHD development. In fact, upon host-reactive T-cells activation, 17AAG is able to block survival/proliferation pathways through destabilization of crucial kinases, client proteins of HSP90. Secondly, we observed that another HSP, gp96 (glycosylated protein 96) acts as a danger signal during GvHD through interaction with complement C3. Moreover, extracellular gp96 provides allogeneic peptides to macrophages that will present them at their surface for T-cell activation. Those results could lead to new therapeutic strategies for patients undergoing inflammatory disorders such as GvHD or auto-immune diseases

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Perrin, Clarisse. "Streptococcus thermophilus : réponses physiologiques aux températures basses et étude de deux protéines de choc froid : premières étapes de la cartographie protéomique." Nancy 1, 1999. http://docnum.univ-lorraine.fr/public/SCD_T_1999_0267_PERRIN.pdf.

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Abstract:

Streptococcus thermophilus est une bactérie lactique entrant dans la fabrication de certains produits laitiers. Lors de la technologie de fabrication, les levains sont soumis à différents stress comme les montées et descentes en températures. La réponse au choc froid chez Sc. Thermophilus a été étudiée aux niveaux physiologiques et synthèse protéique. Les cellules en phase exponentielle de croissance cultivées à 42°C, exposée à 15 ou à 20°C ont leur temps de génération multipliés respectivement par 60 et 16 fois. L'électrophorèse bidimensionnelle sur minigel a été mise au point afin d'étudier l'expression protéique en condition de choc froid. Deux protéines de choc froid ont été mises en évidence : - Une protéine de 21,5 kDa a été purifiée en trois étapes (fractionnement par précipitation au sulfate d'ammonium, chromatographie échangeuse d'anions, et HPLC en phase inverse). L'extrémité N-terminale de 21 résidus acides aminés déterminée par dégradation d'Edman ne présente aucune homologie avec les séquences actuellement connues dans les banques de données ; - Une protéine de 7,5 kDa, dont le microséquençage de l'extrémité N-terminale a permis de caractériser cette protéine comme étant homologue à la protéine de choc froid ubiquitaire CspA d'E. Coli. En parallèle des travaux réalisés sur la réponse au choc froid, l'étude des profils protéiques obtenus par électrophorèses bidimensionnelles de Sc. Thermophillus a été réalisée afin de proposer une cartographie protéomique préliminaire, avec le positionnement de 12 protéines caractérisées par dégradation d'Edman.

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Cao, Hanwei. "Transfection in vitro et in vivo dans les cellules animales de plasmides encapsulés dans des liposomes et induction de l'expression de gènes hétérologues controlés par le promoteur de choc thermique hsp70." Dijon, 1991. http://www.theses.fr/1991DIJOS032.

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Abstract:

Huit différents types de culture de cellules animales ont été transfectés à l'aide d'une méthode fondée sur l'encapsulation des plasmides recombinés dans les liposomes en utilisant soit des lignées établies, soit des cultures primaires. De plus, la transfection a été réalisée in vivo c'est-à-dire chez le rat. En même temps, l'étude a porté sur le système d'expression génétique inductible par la chaleur contrôlé par le promoteur du gène de la protéine de choc thermique hsp70 de l'homme ou celui de la drosophile. Les résultats expérimentaux montrent que sous l'effet d'un choc thermique les cellules expriment des gènes respectivement bactériens, viraux ou humains contrôlés par le promoteur hsp70. Dans une condition optimale d'induction thermique, le niveau d'expression génétique a été augmenté jusqu'a un millier de fois par rapport au témoin. Après sélection, cinq lignées de cellules transfectées stables ont été obtenues. Une lignée transformée de fibroblastes hépatiques de rat, la lignée IIB, résultant d'une co-transfection par les plasmides pEJ et p17HBN, portant respectivement les gènes de l'oncogène Ha-ras et de l'hGH, sécrétait d'une façon continue reproductible, 3000 ng à 7000 ng d'hGH par 10 puissance 6 cellules par 24 h selon les conditions de culture. Ces cellules transformées par co-transfection de l'oncogène Ha-rasEJ ont produit une tumeur transplantable chez la souris nude apres injection sous-cutanee de 10 puissance 6 cellules. Dans le cas de la transfection in vivo, les gènes utilisés ont été exprimés chez des rats.

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Moulin, Emilie. "Diversity-oriented synthesis of pochonins : a privilege scaffold for ATPase and kinase inhibition." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2006. https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2006/MOULIN_Emilie_2006.pdf.

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Abstract:

Les pochonines A-F sont six molécules récemment décrites appartenant à la famille des lactones résorcyliques à 14 chaînons et qui présentent une activité contre le virus de l’herpès. Notre intérêt initial pour ces dérivés était fondé sur l’observation que plusieurs autres lactones résorcyliques sont connues pour leur potentiel biologique comme inhibiteurs de kinases ou d’ATPases. Par ailleurs le radicicol, de structure proche, est un puissant inhibiteur de la protéine de choc thermique HSP90, cible privilégiée pour la chimiothérapie en raison de son rôle fondamental dans la maturation fonctionnelle de nombreux oncogènes. Une synthèse de la pochonine C et sa conversion en radicicol ont été réalisées en respectivement sept et huit étapes, à partir de trois fragments facilement accessibles. Des synthèses alternatives de ces composés ont également été réalisées en utilisant des réactifs supportés et des réactions sur phase solide. A partir d’une analyse théorique de la dynamique moléculaire du radicicol et de ses analogues connus, une corrélation entre l’inhibition de HSP90 et l’énergie libre du conformère bioactif a été établie, permettant ainsi l’identification de la pochonine D comme inhibiteur potentiel de cette protéine. La synthèse totale de la pochonine D en utilisant des réactifs supportés a permis de confirmer cette hypothèse et de montrer que celle-ci est quasiment aussi active contre HSP90 que le radicicol (IC50 (radicicol) = 20 nM, IC50 (pochonine D) = 80 nM). Considérant les similarités structurales entre les pochonines D et A, nous avons également synthétisé la pochonine A pour son évaluation en tant qu’inhibiteur de HSP90, celle-ci présentant effectivement une activité de l’ordre du nanomolaire. La chimie développée à l’aide de réactifs supportés pour la synthèse des pochonines naturelles (A et D en particulier) nous a ensuite permis de préparer une banque de molécules fondée sur le même squelette et présentant cinq points de diversité, de manière à étudier les relations structure-activité sur différentes cibles. L’évaluation biologique de cette bibliothèque de 100 molécules pour l’inhibition d’un panel de 24 kinases et de HSP90 a révélé plusieurs composés actifs et sélectifs, démontrant ainsi le potentiel de la famille des lactones résorcyliques pour l’inhibition de kinases et d’ATPases
Pochonins A − F are six new members of the 14-membered resorcylic acid lactones (RALs) family which were identified in a Herpes Simplex Virus replication assay. Our interest in the pochonins stems from the observation that several other RALs are known to inhibit ATPases or kinases. Among them, radicicol was shown to be a potent inhibitor of HSP90 (Heat Shock Protein 90) whose activity is required for the functional maturation of a number of oncogenes, thus making this protein an attractive target for chemotherapy. A modular synthesis of pochonin C and its conversion to radicicol is presented. Both natural products are prepared in seven and eight steps, respectively, from three readily available fragments. Alternative syntheses of these compounds were also achieved using a combination of polymer-bound reagents and reactions on solid phase. Based on a molecular dynamics/minimization of radicicol and several known analogs, a correlation between the HSP90-inhibitory activity and the free energy of the bioactive conformer was established, leading to the identification of pochonin D as a potential inhibitor of HSP90. Its synthesis using polymer-bound reagents allowed us to confirm this finding and pochonin D was shown to be nearly as potent an HSP90 inhibitor as radicicol. Considering their closely-related structure, pochonin A was also synthesized and tested for HSP90 inhibition. The polymer-assisted chemistry developed for the pochonins syntheses enabled us to prepare a library based on the pochonin scaffold bearing five points of diversity, allowing us to extend beyond the modifications of the natural resorcylic acid lactones. Testing the library for its inhibition against a panel of 24 kinases at 10 µM and against HSP90 reveals several hits, thereby demonstrating the potential of the resorcylides towards the inhibition of therapeutically relevant kinases and ATPases. These syntheses of the pochonins were also the first reported in the literature allowing us to confirm structural assignments and to provide optical rotations as well as to define the stereochemistry of pochonin C’s carbon bearing the chlorine atom

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Piton, Valérie. "Induction combinée des gènes c-fos, hsp 70 et activation du gène gfap au cours de crises épileptiques provoquées par le soman, un neurotoxique organophosphore." Montpellier 1, 1997. http://www.theses.fr/1997MON1T012.

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Al, Refaii Abdalla. "Rôle des protéines Chaperonnes dans la Biogénèse des Ribosomes d' Escherichia coli." Paris 7, 2009. http://www.theses.fr/2009PA077081.

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Abstract:

La protéine chaperonne DnaK (= HSP70) d'Escherichia coli figure en bonne place parmi les facteurs extra-ribosomiques intervenant, avec l'aide de ses deux co-chaperonnes DnaJ et GrpEfdans la biogénèse des sous-unités 308 et 508. En l'absence de DnaK ou DnaJ, les étapes finales de l'assemblage des ribosomes (particules précurseurs 21S￫ 30S et 32S ￫ 45S￫ 50S) sont ralenties, à la température normale (30°C - 37°C). A haute température (44°C), elles sont carrément bloquées, et les particules 21 S, 32S et 45S s'accumulent. Il s'agit là de réels précurseurs, qui peuvent être convertis en sous-unités 308 et 508 actives : la chaperonne DnaK n'est donc pas strictement nécessaire à la biogénèse des ribosomes, mais l'accélère considérablement. Les particules 218 contiennent un ARN ribosomique (ARNr) précurseur 163 non mature (contenant des extra-séquences aux deux bouts 3' et 5'), ou mature seulement du coté 5', mais jamais du coté 3'. Ce qui démontre que la maturation de l'ARNr 168 durant l'assemblage de la sous-unité 303 est séquentielle, démarrant à l'extrémité 5', et ne s'intéressant à l'extrémité 3' qu'à un stade ultérieur. L'autre grande famille de protéines de choc thermique, celle des chaperonines GroEL et GroES, intervient aussi dans la biogénèse des ribosomes, puisqu' une carence en DnaK peut être en partie compensée par une surexpression de GroEL/GroES, ce qui suggère l'implication d'un réseau de chaperonnes dans la biogénèse des ribosomes. Plutôt qu'un rôle direct de DnaK sur tel ou tel constituant (ARNr ou protéine), il est possible que DnaK exerce un effet thermo-protecteur sur un facteur, naturellement thermosensible, d'assemblage du ribosome. Il en résulterait un couplage, clairement visible à haute température, entre le contrôle post-traductionnel de la qualité des protéines, une des principales fonctions exercées par DnaK, et la biogénèse des ribosomes
In E. Coli strains carrying null mutations in either the dnaK or dnaJ genes, the late stages of 30S and 50S ribosomal subunit biogenesis are slowed down in a temperature-dependent manner. At high temperature (44°C), 32S and 458 particles (precursors to 50S subunits) and 21S particles (precursors to 303 subunits) accumulate. The latter are shown by 3'5'RACE analysis to contain unprocessed or partially processed 163 rRNA at the 5' end, but the 3' end was never processed. This implies that maturation of 163 rRNA starts at the 5'- terminus, and that the 3'-terminus is only trimmed at a later step. At normal temperatures (30°C-37°C), ribosome assembly in both mutants is not arrested but is significantly delayed, as shown by pulse-chase analysis. Assembly defects are partially compensated by an overexpression of other HSPs, which occurs in the absence of their negative regulator DnaK, or by a plasmid-driven overexpression of GroES/GroEL, suggesting the involvement of a network of chaperones in ribosome biogenesis

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Gonin, Sandrine. "Étude comparative de la réponse au stress de fibroblastes NIH 3T3 normaux ou transformés par l'antigène T du virus SV40." Lyon 1, 1999. http://www.theses.fr/1999LYO10106.

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Abstract:

Afin de mieux comprendre les événements mis en jeu dans la réponse à différents traitements des cellules à caractère tumoral, nous avons choisi comme système d'étude, in vitro, des fibroblastes de souris nih 3t3 normaux ou transformés par différents oncogènes. Nous avons déterminé les mécanismes moléculaires impliqués dans la sensibilité, en particulier au choc thermique et au stress oxydant, des cellules transformées. La forte sensibilité à la chaleur des cellules transformées par l'antigène t du virus sv40 ou les oncogènes v-fos, v-src et c-ha-ras a été corrélée à une altération de l'expression des gènes codant pour la protéine de stress hsp25 et, dans certains cas, pour la protéine hsp70. La survie des cellules exprimant l'antigène t du virus sv40 est également fortement diminuée lors d'un traitement par l'adriamycine couplé à un choc thermique ou par l'étoposide, drogues couramment utilisées en thérapie anticancéreuse. Par ailleurs, les cellules exprimant l'antigène t du virus sv40 présente une forte sensibilité à un stress oxydant induit par la ménadione qui résulte d'une altération de l'expression de certaines enzymes détoxiquantes des radicaux libres oxygénés. La protéine p53 et la voie de signalisation fas/apo-1 ont un rôle très important dans le processus de mort des cellules transformées, observé lors d'un traitement par la ménadione. Enfin, nous avons également analyse l'influence de la petite protéine de stress humaine hsp27 sur le phénotype transformé et la survie des fibroblastes nih 3t3 normaux ou transformes par l'antigène t du virus sv40. La protéine hsp27 interfère avec le phénotype transforme des cellules exprimant l'antigène t du virus sv40. De plus, les lignées exprimant hsp27 résistent mieux à un traitement par la staurosporine ou la ménadione par comparaison avec les lignées témoins.

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Guinez, Céline. "Implication de l'activité lectinique des HSP70 dans la protection des protéines O-GlcNAc vis-à-vis de la dégradation protéasomale." Lille 1, 2006. https://ori-nuxeo.univ-lille1.fr/nuxeo/site/esupversions/54e6347d-7312-4bf2-817c-ed516a27259e.

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Abstract:

La O-GlcNAc, une modification post-traductionnelle dynamique, semble intervenir dans la dégradation protéasomale. Le système ubiquitine-protéasome permet la dégradation régulée de protéines ubiquitinées. Les protéines de choc thermique Hsp70 jouent un rôle fondamental dans cette régulation. Elles empêchent l'agrégation des protéines lors d'un stress, tentent de les remettre en conformation et le cas échéant, induisent leur ubiquitination et leur dégradation. Nous avons mis en évidence l'activité lectinique des Hsp70 vis-à-vis des résidus de GlcNAc. Cette activité est modulable en fonction de nombreux stress et est particulièrement induite lors d'un stress thermique ou nutritionnel. Nous avons alors émis l'hypothèse d'une protection des protéines O-GIcNAc vis-àvis de la dégradation protéasomale par les Hsp70. Ceci nous a conduit à étudier la relation entre O-GlcNAc et ubiquitine. La mise en évidence de la glycosylation de E1, enzyme impliquée dans le processus d'ubiquitination, suggère que cette enzyme pourrait être le dénominateur commun entre les deux modifications. L'identification de deux acides aminés potentiellement impliqués dans le site lectinique par des expériences de "docking" ont permis l'élaboration d'un mutant dont les capacités de fixation de la GlcNAc sont partiellement abolies. En conclusion, l'ensemble de ces résultats suggère que la O-GIcNAc puisse être un signal de sauvegarde des protéines en cas de stress, via l'interaction lectinique des hsp70, permettant ainsi leur remise en conformation. Ce système pourrait constituer l'homologue cytosolique du cycle gluco/dégluco du réticulum endoplasmique.

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Dissertations / Theses on the topic 'Protéines de choc thermique – Immunologie'

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