Tesis sobre el tema "Cefalosporina"

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Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
A peritonite em equinos permanece como enfermidade de alta ocorrência e letalidade, sendo necessárias estratégias terapêuticas mais efetivas e inovadoras que resultem no aumento da taxa de sobrevida dos animais acometidos. O objetivo deste estudo foi avaliar por estudo clínico randomizado a evolução da concentração da ceftriaxona no líquido peritoneal após administração pela via intraperitoneal (IP) e intravenosa, a utilização do cateter Tenckhoff, e da via intraperitoneal em equinos. Foram utilizados dez equinos jovens, divididos em dois grupos de 5 animais. Ambos os grupos foram submetidos a procedimento laparoscópico para implantação do cateter Tenckhoff. O grupo intraperitoneal (GIP) recebeu 25 mg/Kg de Ceftriaxona diluída em 1 litro de Solução Fisiológica à 0,9% (SF) por via IP a cada 24 horas, durante 5 dias. Para os animais do grupo intravenoso (GIV) foi administrado 25 mg/Kg de ceftriaxona por via intravenosa e 1 litro de SF via intraperitoneal a cada 24 horas, durante 5 dias. Os animais foram acompanhados clínica e laboratorialmente, através: de hemograma, fibrinogênio e concentração plasmática do fármaco; avaliação macroscópica, físicoquímica, citológica e concentração do fármaco no líquido peritoneal; avaliação ultrassonográfica e laparoscópica a fim de se avaliar alterações relacionadas à permanência do cateter ou ainda à aplicação intraperitoneal da ceftriaxona. A utilização intraperitoneal do fármaco não desencadeou processo inflamatório local ou sistêmico e resultou em concentrações peritoneais acima da concentração inibitória mínima por períodos superiores à 24 horas. O cateter Tenckhoff mostrou-se como uma via adequada para administração de soluções intraperitoneais e não foram observadas complicações decorrentes de sua utilização, amplificando-se as possibilidades de utilização da via intraperitoneal.
Peritonitis persists with high incidence and mortality in horses, requiring more innovative and effective therapeutic strategies. The aim of this randomized clinical trial study was to evaluate ceftriaxone peritoneal fluid concentration after intraperitoneal (IP) and intravenous administration, Tenckhoff’s catheter use, and intraperitoneal route in horses. Ten adult horses were divided into two groups of five animals. Both groups underwent laparoscopy for Tenckhoff’s catheter insertion. The intraperitoneal group (GIP) received 25 mg/kg of ceftriaxone diluted in 1 liter of 0.9% saline solution (SS) intraperitoneally every 24 hours for 5 days. For the intravenous group (GIV) was administered 25 mg/kg of ceftriaxone intravenously and 1 liter of SS every 24 hours for 5 days. Both groups were followed clinically and biochemically through: complete blood count, fibrinogen and plasmatic drug concentration; macroscopic, physical chemistry, cytological and drug concentration in peritoneal fluid ; sonographic and laparoscopic evaluation in order to assess the catheter permanence effects and the aggression potential of the drug to peritoneum. Intraperitoneal use of the drug did not induce local or systemic inflammation and resulted in concentrations above minimum inhibitory concentration for longer than 24 hours. The Tenckhoff catheter proved to be an appropriate route for intraperitoneal solutions administration and no complications from its use was observed, amplifying the possibilities for intraperitoneal route using.
FAPESP: 2013/13799-7

Orientador: Carlos Alberto Hussni
Resumo: A peritonite em equinos permanece como enfermidade de alta ocorrência e letalidade, sendo necessárias estratégias terapêuticas mais efetivas e inovadoras que resultem no aumento da taxa de sobrevida dos animais acometidos. O objetivo deste estudo foi avaliar por estudo clínico randomizado a evolução da concentração da ceftriaxona no líquido peritoneal após administração pela via intraperitoneal (IP) e intravenosa, a utilização do cateter Tenckhoff, e da via intraperitoneal em equinos. Foram utilizados dez equinos jovens, divididos em dois grupos de 5 animais. Ambos os grupos foram submetidos a procedimento laparoscópico para implantação do cateter Tenckhoff. O grupo intraperitoneal (GIP) recebeu 25 mg/Kg de Ceftriaxona diluída em 1 litro de Solução Fisiológica à 0,9% (SF) por via IP a cada 24 horas, durante 5 dias. Para os animais do grupo intravenoso (GIV) foi administrado 25 mg/Kg de ceftriaxona por via intravenosa e 1 litro de SF via intraperitoneal a cada 24 horas, durante 5 dias. Os animais foram acompanhados clínica e laboratorialmente, através: de hemograma, fibrinogênio e concentração plasmática do fármaco; avaliação macroscópica, físicoquímica, citológica e concentração do fármaco no líquido peritoneal; avaliação ultrassonográfica e laparoscópica a fim de se avaliar alterações relacionadas à permanência do cateter ou ainda à aplicação intraperitoneal da ceftriaxona. A utilização intraperitoneal do fármaco não desencadeou processo inflamatório local ou sistêmico e res... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
Doutor

Orientador: João Lucio de Azevedo
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Made available in DSpace on 2018-07-19T15:48:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vialta_Airton_D.pdf: 7068425 bytes, checksum: 35be95d571d938d79e669c7ef9161e46 (MD5) Previous issue date: 1994
Doutorado
Doutor em Genetica

Orientador: Francisco Mangeri Filho
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos
Made available in DSpace on 2018-07-21T16:46:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RuizParedes_Roger_M.pdf: 10721166 bytes, checksum: 4ba0b45a5394a0e54b82fc1c3b5416a2 (MD5) Previous issue date: 1996
Resumo: No processo total de obtenção de cephalosporin C, a purificação ocupa a segunda etapa, sendo a primeira fase a produção em meio de cultura pelo fungo Cephalosporium acremonium. O processo de purificação é efetuado em colunas de troca iônica. Neste trabalho foi proposto um modelo matemático para descrever o comportamento do processo de adsorção, obtido a partir de balanços de massa e equações cinéticas de adsorção por troca iônica, determinadas previamente em resina XAD-2, levando em consideração a resistência à transferência de massa externa e interna assim como a dispersão axial. As equações analíticas descritivas do processo foram transformadas em algoritmos numéricos aplicando os métodos numéricos de Crank-Nicholson para as equações diferenciais parciais e Runge-Kutta de 4ª ordem para as equações diferenciais ordinárias. O programa foi desenvolvido em linguagem Turbo-Pascal, para calcular a distribuição de concentração de cephalosporin na coluna, fase líquida e fase sólida, com o tempo, usando as equações numéricas. Verificou-se as influências dos parâmetros cinéticos e operacionais na eficiência da coluna, através de um estudo paramétrico, onde observou-se que a porosidade do leito, concentração da cephalosporin e diâmetro da coluna são os parâmetros de maior sensibilidade. Por outro lado, parâmetros como Qm (capacidade máxima de adsorção), KI e K2 (constantes cinéticas de adsorção) devem ser otimizados previamente, através da escolha do adsorvente e condições de adsorção adequadas. Verificou-se que o comprimento da coluna e a velocidade superficial, quando incrementados, melhoram a eficiência da coluna. Foi verificado que a dispersão axial, é desprezível e que o aumento tanto da difusividade efetiva como do coeficiente de transferência de massa, melhoram a eficiência do processo. Demonstrou-se igualmente que a coluna de adsorção de leito fixo apresenta considerável estabilidade, tendo em conta que nenhum parâmetro afeta significativamente a operação da coluna. Em outros termos, pode-se dizer que a eficiência do processo é relativamente pouco afetada dentro da amplitUde de alteração efetuada dos parâmetros. Com relação aos problemas de limitações do processo de adsorção dentro da coluna, observou-se que este é limitado pela transferência de massa interna, ou seja a difusão é a etapa limitante do processo. Finalmente a resina XAD-2 utilizada neste estudo apresenta uma baixa eficiência, sendo uma desvantagem de sua utilização na adsorção da cephalosporin C
Abstract: In the "cephalosporin C" production process, the purification is the second step, after the antibyotic been produced by Cephalosporium acremonium in submerged cultures. The purification is carried on in ionic exchange columns. In this work a mathematical model to describe the adsorption process is suggested. The model was obtained from a mass balance and kinetic equations for ionic exchange adsorption, previously determinated in XAD-2 resin. Resistance to the internal and external mass transfer and axial dispersion were also considered in the model. The analytic equations to describe the process were transformed to numeric algorithms using Crank-Nicholson method for the partial differential equations and the 4th order Runge - Kutta method for ordinary differential equations. The computer program was developed using Turbo Pascal language to calculate the distribution of cephalosporin in the column as a time function, both in the liquid phase and in the solid phase. The influence of kinetics and operation parameters in the column efficiency was verified by means of a parametric study. It was observed that the main parameters were the bed porosity, the cephalosporin concentration, and the column diameter. On the other hand, some parameters as Qm (maximum capacity of adsorption), Kl and K2 (kinetics constants of adsorption) must be previously optimized in terms of adsorbent selection and appropriated adsorption conditions. It was also verified that the increase in the column length and the superficial velocity intrances the column efficiency. lt was demonstrated that the fixed bed adsorption column is stable considering that there is no critical parameter for the column operation. It was verified that the axial dispersion is not significant, and the increase both in the effective diffusivity and in the mass transfer coefficient gives a better process efficiency. It was observed that the adsorption process limitation in the column is caused by internal mass transfer, that is the diffusion is the process critical step. Finally, the XAD-2 resin used in this work show low efficiency. Which is a disadvantage in the cephalosporin C adsorption process
Mestrado
Mestre em Engenharia de Alimentos

Orientador: Francisco Maugeri Filho
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos
Made available in DSpace on 2018-07-23T11:18:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Burkert_CarlosAndreVeiga_M.pdf: 3149742 bytes, checksum: 25383c6fba6e203a2114052975f0f713 (MD5) Previous issue date: 1998
Resumo: A cefalosporina C é um importante antibiótico ß - lactâmico, obtida por cultivo de fungos do gênero Cephalosporium, constituindo a matéria-prima para a síntese de inúmeros antibióticos de largo espectro de ação microbiana, sendo que sua recuperação e purificação constitui a etapa mais onerosa do processo. Neste trabalho realizou-se um estudo experimental a respeito da separação de cefalosporina C em coluna de leito fixo contendo Amberlite XAD-2 como adsorvente, verificando o comportamento das curvas de ruptura em diferentes condições geométricas e operacionais (relação comprimento do leito - diâmetro da coluna L/?, relação diâmetro da partícula - diâmetro da coluna dp/?, velocidade superficial v), bem como o efeito destas variáveis sobre a eficiência de utilização do leito da coluna, quantidade de cefalosporina C adsorvida e produtividade, através da determinação do fator de sensibilidade. Foi proposto um modelo matemático para a adsorção de cefalosporina C em coluna de leito fixo que considerou a resistência externa e. interna à transferência de massa, assim como a dispersão axial. Este modelo foi obtido a partir de balanços de massa e equações cinéticas de adsorção (isoterma de Langmuir), com resolução numérica através do método de Crank¬Nicolson para as equações diferenciais parciais, utilizando matrizes tridiagonais, e do método de Runge-Kutta de 4ª ordem para as equações diferenciais ordinárias. Para o ajuste dos parâmetros do modelo matemático aplicou-se o método simplex geométrico flexível de NELDER & MEAD (I965), conhecido como método dos poliedros flexíveis ou simplex modificado. Os resultados experimentais mostraram que o aumento de L/O e a redução de dp/? e v melhoraram a eficiência de utilização do ,leito da coluna e a quantidade de cefalosporina C adsorvida no tempo de ruptura. A produtividade foi incrementada com o aumento de L/O e v, e com a redução de dp/?. Além disso, foi observado que o processo de adsorção é limitado pela transferência de massa interna, sendo que a difusão intraparticular é a etapa limitante do processo. Finalmente, o ajuste dos parâmetros do modelo matemático mostrou que as estimativas iniciais adotadas para as constantes cinéticas e de equilíbrio da isoterma de Langmuir foram satisfatórias e, que a curva de ruptura foi muito afetada pela difusividade efetiva e porosidade do leito.
Abstract: Cephalosporin C is a ß - lactam antibiotic, produced by Cephalosporium in submerged culture, constituting the raw material of several synthetic antibiotics. Its purification is the most expensive step of the process. In this work, an experimental investigation on cephalosporin C separation in fixed bed column with Amberlite XAD-2, describing the behavior of breakthrough curves at different conditions (bed depth - column diameter ratio L/e, particle size - column diameter ratio dp/? , superficial velocity v), was carryed out. The effect of these variables in the bed utilisation efficiency, adsorbed cephalosporin C and productivity was analyzed using the sensitivity factor. A mathematical model for the cephalosporin C adsorption in fixed bed column was suggested, considering internal and external mass transfer resistances and axial dispersion. This model was obtained from a mass balance and kinetic equations of adsorption (Langmuir isotherm). The numerical resolution was obtained using Crank-Nicolson method for the partial differential equations and 4th order Runge-Kutta method for the ordinary differential equations. The model parameters fitting was performed using simplex method (NELDER & MEAD, 1969). The experimental results showed that an increase in L/ ? and a decrease in d/e and v lead to an improve in the bed utilisation efficiency and in adsorbed cephalosporin C at the time to breakthrough. Productivity was increased with an increase in L/ ? and v, and with a decrease dp/?. Moreover, it was observed that adsorption process is limited by internal mass transfer. Intraparticle diffusion is the process critical step. The fitted parameters showed that the initial estimates for the kinetics and equilibrium constants according to a Langmuir isotherm were satisfactory. Finally, the effective diffusivity and bed porosity affected considerably the breakthrough curves.
Mestrado
Mestre em Engenharia de Alimentos

Orientador: Gil Eduardo Serra
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos
Made available in DSpace on 2018-07-23T22:32:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Andrietta_MariadaGracaStupiello_D.pdf: 4521244 bytes, checksum: 4888bd9055f2da9976f68ec3bac3eafd (MD5) Previous issue date: 1998
Resumo: Este trabalho teve como objetivo estudar um meio de cultivo industrial para produção de cefalosporina C, utilizando a linhagem C-1 O de Cephalosporium acremonium (A TCC 11550) em experimentos conduzidos em frascos agitados. Foram testadas diferentes fontes de proteína padronizadas, de uso indicado para fermentações industriais, fornecidas pela QUEST INTERNACIONAL - Divisão SHEFFIELD, constituídas à base de soja (Hy-Soy), lacto albumina (Edamin'S), caseína (N-Z Amine A e N-Z Amine As), milho (Hydrolyse Com Gluten ) e algodão (Hydrolyse Cottonseed). As fontes protéicas foram adicionadas a um meio basal, em quantidade equivalente a 4g/1 de nitrogênio total. O meio de cultivo que apresentou uma maior produção de cefalosporina C ( 0,63 gll) foi formulado à base de soja, sendo o meio à base de caseína (N-Z Amine A) o que apresentou uma menor produção do antibiótico. A partir disto foi feito um estudo de cinética da produção de cefalosporina C com esses dois meios de cultivo. Os resultados confirmaram a soja como melhor substrato para produção do antibiótico e mostraram também, ser esta a matéria prima mais produtiva, uma vez que com 144 horas de fermentação houve a produção de 0,93 gll de cefalosporina C. A caseína precisou de 192 horas de fermentação para produzir apenas 0,64 gll do antibiótico. Para os dois substratos testados foi verificada ainda a degradação do antibiótico após o pico de máxima produção. Em uma segunda etapa do trabalho foi avaliada a associação de fontes protéicas na formulação do meio de cultivo. Além de Hy-Soy e Edamin'S, que foram as que apresentaram os melhores resultados na primeira fase, foi introduzido um extrato protéico padronizado, à base de soja (Samprosoy), que é produzido no Brasil pela SANTISTA ALIMENTOS divisão SAMBRA. Neste experimento foram formulados sete diferentes meios de cultivo contendo 4 g/l de N total. Os resultados mostraram um sinergismo na associação de Samprosoy, Hy-Soy e Edamin'S, com uma maior produção do antibiótico (1,43 g/l em 144 horas). Esta composição foi utilizada como ponto central (36 g/l de saca rose, 27 gI1 de glicose e 4 g/l de N total) na primeira fase da otimização do meio de cultivo utilizando planejamento fatorial completo de dois níveis e três variáveis. As variáveis estudadas foram a concentração de sacarose, glicose e nitrogênio, e a variável resposta foi a concentração de cefalosporina C no caldo fermentado. Os resultados obtidos mostraram que maiores concentrações de glicose e nitrogênio levam a um aumento na produção do antibiótico, sendo a variação da concentração de sacarose não significativa na produção da cefalosporina C. Em uma segunda fase da otimização do meio de cultivo o ponto central foi deslocado de modo que esse meio apresentasse maiores concentrações de glicose e nitrogênio (37 g/l de glicose e 6 g/l de N total) e menor quantidade de sacarose (26 g/l). Confirmou-se que altas concentrações de glicose (acima de 45 g/l) e nitrogênio (acima de 6 g/l) direcionam a um aumento na produção, e que a concentração de sacarose não influencia no aumento da produção do antibiótico. Em uma última etapa foi conduzida uma fermentação simultânea em fermentador e em frascos agitados para o estudo do efeito da aeração na produção de cefalosporina C. Parte do meio preparado e inoculado no fermentador foi transferido para frascos Erlenmayer. Os resultados mostram que no fermentador a quantidade de cefalosporina C produzida foi 2,82 vezes maior que as obtidas em frascos agitados. A diferença certamente está associada ao nível constante da concentração de oxigênio no meio de fermentação, possível de se controlar no fermentador, mas não em frascos agitados.
Abstract: The purpose of this work was to study an industrial growing medium for cephalosporin C production in a shaker, using the C-1 O strain of Cephalosporuium acremonium (A TCC 11550). Different sources of standard protein have been tested, all of which recommended for industrial fermentation, and provided by QUEST INTERNACIONAL¬SHEFFIELD Division, soy-based (Hy Soy), Lactoalbumin (Edamin'S), casein (N-Z Amine and N_Z Anime A), com (Hidrolyse Com Gluten) and cotton (Hydrolyse Cottonseed). The protein sources were added to a basic medium amounting to 4 g/l of the total nitrogen. The growing medium that reached the highest cephalosporin C production (0.63 g/l) was soy-based, and the medium that had the lowest amount of the antibiotic was the casein-based (N-Z Amine A). These two growing mediums were then used for a kinetic study of cephalosporin C production. The results have confirmed soybean as the best substratum for the antibiotic production as well as the most productive raw material, since there was a 0.93 g/l cephalosporin C production within 144 hours of fermentation. The casein took 192 hours of fermentation to produce only 0.64 g/l of the antibiotic. It has been observed for both substrata that there was a degradation of the antibiotic after the maximum production peak was reached. In the second stage of the trial, the association of protein sources in the growing medium formulation was evaluated. In the addition to Hy-Soy and Edamin'S, proteins that presented the best results in the first stage, a standard soy-based proteinic extract (Samprosoy) produced in Brazil by SANTISTA ALIMENTOS - SAMBRA division was introduced. Seven different growing mediums containing 4 g/l of total N were formulated. The results have showed a synergism in the association among Samprosoy, Hy-Soyand Edamin'S, with a higher antibiotic production (1,43 g/l within 144 hours). This composition was used as a central point (36 g/l sucrose, 27 g/l glucose and 4 g/l of total N) at the first optimization stage of growing medium a complete two-Level and three-variable factorial design. The variable studied was the sucrose, glucose and nitrogen concentration, and the response variable was the cephalosporin C concentration in the fermented broth. The results have shown that higher glucose and nitrogen concentration have led to an increase in the antibiotic production, even though the variation in sucrose concentration was insignificant for cephalosporin C production. In the second stage of growing medium optimization the central point was dislocated in order to present higher glucose and nitrogen concentrations (37 g/l of glucose and 6 g/l of N total) and lower sucrose concentration (26 g/l). It has been confirmed that high glucose (over 45 g/l) and nitrogen (over 6 g/l) concentration result in an increase in the production, and that sucrose concentration has no effect in the increase of antibiotic production. In the last stage, a simultaneous fermentation in a fermenter and in a shaker was performed for the purpose of studying the aeration effect in cephalosporin C production. Part of the medium prepared and inoculated in the fermenter was transferred to Erlenmeyer flasks. The results have shown that in the fermenter, the amount of cephalosporin C produced was 2.82 times higher than in the shaker. The difference is surely associated with the constant oxygen concentration level in the fermentation medium, which was possible to the controlled in the fermenter but not in the shaker.
Doutorado
Doutor em Tecnologia de Alimentos

Orientador: Francisco Maugeri Filho
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos
Made available in DSpace on 2018-07-24T16:52:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barboza_Marlei_D.pdf: 9565363 bytes, checksum: ed8d36a68ddb2eda52aae98c1e609714 (MD5) Previous issue date: 1998
Resumo: As cefalosporinas assim como as penicilinas fazem parte de um grupo de antibióticos ß-lactâmicos produzidos por microrganismos. A cefalosporina C é produzida por mutantes do fungo Cephalosporium acremonium, e tem como característica determinante para seleção de processos de purificação, sua natureza hidrofílica, que dificulta sua extração por intermédio de compostos orgânicos. Desta forma, uma das técnicas mais utilizadas para purificação de cefalosporina C é adsorção cromatográfica. Através de simulações em computador, foi avaliado neste trabalho, um processo não convencional para purificação de cefalosporina C. O processo consiste basicamente em dois tanques agitados interligados por um reciclo, onde num primeiro estágio ocorre a adsorção e no segundo estágio a eluição do produto. Para realização deste objetivo, foi necessário estudar experimentalmente o comportamento cinético de adsorção e dessorção de cefalosporina C em resina polimérica, Amberlite XAD-2. O efeito da temperatura e do eluente (etanol) em solução foi verificado, sendo que o abaixamento da temperatura favorece a adsorção. Foram classificadas as isotermas e a cinética de adsorção na presença de etanol nas temperaturas de 10°C, 15°C e 25°C. Ensaios de adsorção em tanque agitado, permitiram determinar as constantes cinéticas, a difusividade efetiva da cefalosporina C no interior da resina e coeficiente de resistência à transferência de massa externo. Com o modelo matemático do processo contínuo e os dados cinéticos obtidos, foram realizadas simulações a respeito da dinâmica de operação, definindo-se as variáveis mais influentes. O processo foi avaliado, com base nas respostas fornecidas, sendo elas: fator de concentração (FC); fator de purificação (FP) e porcentagem de recuperação (%RC). A otimização foi feita pelo método de análise de superfície de resposta, fornecendo modelos empíricos, para os cálculos de %RC, FP e FC, dentro das faixas de operação estudas. O processo apresentou recuperação em tomo de 80%, um produto 10 vezes purificado, saindo no 2° estágio 1,6 vezes mais concentrado. Estes valores indicam, o potencial de aplicação do processo para purificação de cefalosporina C.
Abstract: The cephalosporins and penicilins are constitued of the ß-lactam antibiotics group produced by microorganism. The cephalosporin C is produced by Cephalosporillm acremollillm a mutant strain, and its hidrophilic nature make the extraction process by organic compounds more difficult, so the chromatographic adsorption is a good technique to be applyied in cephalosporin C purification process with a large potential of success. Cephalosporin C purification by non-conventional process: was evaluated using computer simulation. The process is composed for two stirred tank reactors with recycle system, the adsorption occurs in the first stage and the elution of the product takes place in the second stage. The cephalosproin C adsorption and desorption kinetics in non-polar polystyrene macroporous resin were studied to achieve this aim. The temperature and eluate (ethanol) effects in solution were verified and it was noted the adsorption process is more efficient decreasing the temperature. The isotherms and kinetic adsorption in the presence of ethanol was obtained at 10°C, 15°C and 25°C. Bath adsorption experiments allows to determine the kinetic constants, the effective pore diffusion coefficient of the cephalosporin C in the particle as well as the mass transfer coefficient. The most influent parameters were defined through dynamic simulation performed by a deterministic mathematic model of the continuous process and the kinetics data. Based in the concentration factor (CF), purification factor (PF) and recovery yield (%RC) the process performance was evaluated. The surface response analyse was used for the otimization and generates the supplying %RC, PF and CF model which are valid in the considered ranges. The process shown more than 80% for RC, 10 for PF and 1,6 for FC. These values shows a promising potential of the proposed technique to cephalosporin C purification.
Doutorado
Doutor em Engenharia de Alimentos

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:55:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DoutAAF.pdf: 3275307 bytes, checksum: f45ed0ce056382979fefde457b9cfe5f (MD5) Previous issue date: 2003-10-10
The scope of the current work was to investigate the effect of glucose, amonium acetate, DL-methionine, phosphorus, oleic acid and salt solution on the maximum specific growth rate (µmax), as well as the effect of sucrose and DL-methionine on the specific cefalosporin C production rate (µp), by Cephalosporium acremonium ATCC 48272, using factorial design and response surface techniques. The initial medium of fermentation was used according to factorial design and the experiments were carried out in shaker flasks at controlled temperature at 28 °C, initial pH of 7,0+0,1 and agitation speed 250 rpm. For both specific rate the variables involved were correlated by a fitted second order model. The canonic and surface response analysis showed a maximum specific growth rate of 0.22 h-1 obtained when glucose and amonium acetate concentration, were 4.2 , 2.5 g/L, respectively, and specific cefalosporin C production rate of 1.12 mgCPC/gcel.h when sucrose and DL-methionine concentration, were 10.5, 2.5 g/L, respectively, for a celular concentration of 14.0 g/L. The experimental design showed to be very efficcient in evaluating the bioprocess, as long as high values of µmax e µp were obtained in comparison with literature data. The feedforward neural network (FNN) was employed for modelling and simulation the effect of glucose, amonium acetate, DL-methionine, phosphorus, oleic acid and salt solution on the maximum specific growth rate. The network topologies were used with 6 neurons in the input layer, 22 hidden layer and 1 output layer. The data base for training the FNN was obtained from results of the factorial designs processed with a backpropagation learning algorithm. The surfaces response obtained by simulations for all range of glucose and amonium acetate concentrations showed inhibitory effect for the two substrates on the maximum specific growth rate. The results of the simulation are in good agreement with the experimental and statistical model results.
Neste trabalho verificou-se o efeito das variáveis concentração de glicose, acetato de amônio, DL-metionina, fósforo, ácido oléico e solução de sais na velocidade específica máxima de crescimento (µmax), assim como sacarose e DL-metionina na velocidade específica de produção do antibiótico cefalosporina C (µp), pelo fungo Cephalosporium acremonium ATCC 48272, usando como ferramenta estatística a técnica de planejamento experimental e a análise por superfície de resposta. Na otimização destas variáveis, os ensaios foram conduzidos de acordo com os planejamentos fatoriais, fracionário, completo e composto central, em fermentações em incubador rotatório, variando as concentrações iniciais dos nutrientes do meio, a 28 oC, pH 7,0+0,1, com agitação de 250 rpm. Para ambos os casos, um modelo ajustado de 2a ordem foi o que melhor correlacionou as variáveis. Os resultados da otimização mostraram que uma velocidade máxima de crescimento de 0,22 h-1 pode ser atingida para uma concentração de glicose e acetato de amônio em torno de 4,20 e 2,5 g/L, respectivamente, e uma velocidade específica de produção de cefalosporina C de 1,12 mgCPC/gcel.h para uma concentração de sacarose de 10,5 g/L e DL-metionina 2,5 g/L com uma massa celular média, para produção, de 14,0 g/L. O planejamento estatístico mostrou-se uma ferramenta bastante eficiente para avaliação do bioprocesso, pois com a realização dos ensaios propostos, foi possível obter valores de µmax e µp superiores aos encontrados na literatura. Desenvolveu-se um modelo baseado na técnica de redes neurais para a simulação de todo o domínio das concentrações de glicose, acetato de amônio, DL-metionina, fósforo, ácido oléico e solução de sais na velocidade específica máxima de crescimento. A rede que melhor representou os valores experimentais foi uma do tipo "feedforward", com três camadas e 22 neurônios na camada oculta, treinada com o algoritmo de retropropagação, por um conjunto de resultados obtidos através de ensaios do planejamento estatístico. As superfícies obtidas pela simulação em amplo domínio de concentrações de glicose e acetato de amônio, mostraram que o crescimento do microrganismo segue um modelo cinético de inibição por este dois nutrientes, prevendo altos valores de µmax para concentrações de glicose e acetato de amônio, comparáveis com os obtidos pelo modelo estatístico.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-26. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:45Z : No. of bitstreams: 1 Publico-10833.pdf: 1360435 bytes, checksum: a345766b88aa33fb633cad88c29a3a08 (MD5)
Conselho Nacional para o Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)
Introducao: A hiper-producao de AmpC associada a impermeabilidade de membrana externa em Enterobacter spp. pode contribuir no fenotipo de resistencia a cefalosporinas de quarta geracao e aos carbapenemicos. O objetivo do estudo foi caracterizar os mecanismos de resistencia a cefepima e a ertapenem em 11 amostras de E. cloacae subespecie cloacae isoladas de hemoculturas no Hospital sao Paulo. Materiais e Metodos: O perfil de sensibilidade foi avaliado por disco difusao e pela tecnica de diluicao em agar, de acordo com o CLSI. A analise das proteinas de membrana externa (OMPs) foi realizada pela tecnica de SDS-PAGE. A similaridade genetica foi avaliada pela tecnica de PFGE e o coeficiente similaridade entre os padroes de PFGE obtidos foi calculado pelo programa Bionumerics. Os isolados foram tambem testados contra cefepima, ertapenem, imipenem e meropenem na presenca e na ausencia dos inibidores de bomba de efluxo PAƒÀN (25 ƒÊg/ml) e reserpina (20 ƒÊg/ml), pela tecnica de diluicao em agar. Foram realizados testes de hidrolise, disco-aproximacao para a deteccao fenotipica de ESƒÀL e testes de inducao para a deteccao de AmpC induzida. A presenca de genes codificadores de ESƒÀL, carbapenemases e AmpC plasmidiais foram avaliados pela tecnica de PCR e confirmadas por sequenciamento, bem como a presenca de integrons. Os niveis de expressao de ampC, ompC e ompF foram medidos pela PCR em tempo real. Resultados: Todos os isolados de E. cloacae subespecie cloacae foram resistentes as cefalosporinas, aztreonam, associacoes com inibidores de ƒÀ-lactamases, tetraciclina, ciprofloxacina e amicacina por disco difusao. A tecnica de diluicao em agar demonstrou altas CIMs para cefotaxima (CIM50, > 256 ƒÊg/mL), ceftazidima (CIM50, 256 ƒÊg/mL) e cefepima (CIM50, 256 ƒÊg/mL). Todos os isolados foram sensiveis a imipenem (CIM50, 0.25 ƒÊg/mL) e meropenem (CIM50, 0.25 ƒÊg/mL). Entretanto, 7 isolados apresentaram CIMs de 4 ƒÊg/ml para ertapenem, 3 isolados foram resistentes (CIMs de 8 ƒÊg/ml) e um isolado foi sensivel (CIM de 2 ƒÊg/ml). Quatro padroes de PFGE foram encontrados entre os isolados de E. cloacae subespecie cloacae multirresistentes. Pelo programa Bionumerics, 3 clusters foram observados com coeficiente de similaridade acima de 80%. Todas as amostras foram positivas para ESƒÀL no teste de hidrolise e no disco aproximacao. Os resultados da PCR apresentaram amplificacao para blaTEM e blaCTX-M. Hiperexpressao do gene ampC foi detectado em todos os isolados pela qRT-PCR. Somente uma amostra apresentou uma pequena diminuicao da expressao de OmpC. Atraves do gel de SDS-PAGE foi observado um perda de uma proteina de 43 kDa quando comparado ao controle sensivel. Nenhuma reducao significativa nas CIMs para ƒÀ-lactamicos foi observado na presenca dos inibidores de bomba de efluxo. Conclusoes: Os resultados mostraram que a hiper-producao de AmpC associada a producao de ESBL sao os responsaveis pelos altos niveis de resistencia a cefepima e a perda de uma proteina de 43 kDa associada a hiper-producao de AmpC provavelmente foram os responsaveis pela diminuicao da sensibilidade a ertapenem verificada entre os isolados de E. cloacae subespecie cloacae.
Background: The overproduction of AmpC in Enterobacter spp. can contribute to resistance phenotype to fourth-generation cephalosporins and to carbapenens. The mechanisms of resistance to cefepime and ertapenem were studied among 11 E. cloacae subespecie cloacae clinical isolates from blood cultures isolated at Sao Paulo Hospital. Methods: Susceptibility testing by disk diffusion and agar dilution techniques was performed according to CLSI. Analysis of outer membrane protein (OMP) was performed by SDS-PAGE. The genetic relatedness was evaluated by PFGE and the dendogram was obtained by Bionumerics program. The isolates were also tested against cefepime, ertapenem, imipenem and meropenem with and without of PAƒÀN (25 ƒÊg/ml) and reserpine (20 ƒÊg/ml), an efflux pump inhibitors by agar dilution. Genes for ESƒÀLs, carbapenemases and plamidial AmpCs were screened by PCR and confirmed by sequencing. The expression level of ampC, ompC and ompF genes was measured by real time PCR (qRT-PCR). Results: All isolates were resistant to cephalosporins, aztreonam, ƒÀ-lactamases association inhibitors, tetraciclin, ciprofloxacin and amikacin, by disk diffusion. All isolates showed high resistant phenotype to cefotaxime (MIC50, > 256 ƒÊg/mL), ceftazidime (MIC50, 256 ƒÊg/mL), and cefepime (MIC50, 256 ƒÊg/mL) but they were susceptible to imipenem (MIC50, 0.25 ƒÊg/mL) and meropenem (MIC50, 0.25 ƒÊg/mL). Seven isolates showed ertapenem MICs of 4 ƒÊg/ml, while other three isolates showed MICs of 8 ƒÊg/ml and one isolate showed MIC of 2 ƒÊg/ml. Four clusters were founded by the Bionumerics program. The PCR results showed amplification for blaTEM and blaCTX-M. Hyperexpression of ampC was detected in all isolates by qRT-PCR. Only one sample showed a decreased in the OmpC expression. The loss of an OMP of 43 kDa was observed for all isolates in the SDS-PAGE technicque compared to the susceptible control. No significant reduction for â-lactam’s MICs was observed in the presence of PAâN. Conclusions: The results showed that the hyperproduction of AmpC coupled with ESBL production were responsible for the high resistant rates to cefepime. The hyperproduction of AmpC coupled with the loss of an OMP of 43 kDa is likely to be responsible for the reduced susceptibility to ertapenem in the E. cloacae subespecie cloacae isolates, which seems not to be associated with efflux systems.
TEDE
BV UNIFESP: Teses e dissertações

Orientador: Maria Helena Andrade Santana
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica
Made available in DSpace on 2018-07-23T11:08:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gomes_LedaMariadeSouza_D.pdf: 4411705 bytes, checksum: f7b72ffd75c1d44a2fec3441e1684626 (MD5) Previous issue date: 1998
Resumo: o bioprocesso para a obtenção de cefalosporina C foi realizado abordando os aspectos de composição do meio, produtividades específicas e caracterização reológica em processos conduzidos em batelada e batelada alimentada. O processo em batelada foi feito em frascos agitados e em reator do tipo tanque agitado de 5 litros, com controle de pH, temperatura, agitação e aeração. Nas fermentações em frascos agitados verificou-se a resposta da linhagem de Cephalosporium acremonium ATCC 48272 em meio sintético, com diferentes fontes de carbono, empregando-se meios contendo glicose, frutose e sacarose. O meio com glicose e sacarose, na relação de 27:36 proporcionou à linhagem um melhor desempenho com relação à produtividade que foi de 0,18 mgcpc/gcél.h.Nos ensaios em biorreator de tanque agitado, em batelada, foi usada a relação de 27:36 de glicose e sacarose, e nos bioprocessos em batelada alimentada foi verificada a influência da relação da glicose e sacarose como fontes de carbono no meio empregando as relações 81:100; 27:126 e 26:187. A melhor produtividade específica obtida nos processos em batelada alimentada foi de 0,62 mgcpc/gcél.hpara o cultivo glicose e sacarose na relação de 81:100. A produtividade específicado processo em batelada foi de 0,74 mgcpc/gcél.h para relação de glicose/sacarose de 27:36. A caracterização reológica dos caldos em viscosímetro de cilindros concêntricos apresentou, para cada bioprocesso estudado, comportamento Newtoniano e pseudoplástico, para tempos distintos de fermentação. O índice de consistência (K) atingiu valor máximo no intervalo entre 3O e 40 horas de fermentação, e o índice de escoamento (n) para todos os ensaios mostrou semelhantes valores. As fotomicrografias realizadas durante os processos mostraram uma correspondência entre as formas das células e as fases do processo: fase inicial de crescimento celular, fase de esgotamento de glicose e formação de cefalosporina C
Abstract: Bioprocess for cephalosporin C production in fed-batch fermentor was studied concermng medium composition, specific productivity and rheological characterization. The batch process was performed in shake flasks and in 5 liters stirred tank reactor provided with pH, temperature, aeration and agitation control. In the shake flask experiments the performance of the strain Cephalosporium acremonium ATCC 48272, was examined with media containing glucose, fructose and sucrose. The medium with glucose and sucrose at the ratio 27:36 enable the best behavior concerning specific productivity, 0.18 mgcpc/gcél.h. In the runs carried out in stirred tank biorreactor the 27:36 ratio for glucose and sucrose was utilized, while in the fed-batch experiments the effect of different glucose ratios, 81:100; 27:126; 26:187 was examined. The higher specific productivity (0.62 mgcpdgcél.h) was observed for the experiment with 81:100 ratio glucose:sucrose. For the batch process with 27:36 glucose:sacarose ratio, the specific productivity was 0.74 mgcpdgcél.h. The rheological characterization of the mash were made in concentric cylinders viscometer. For each bioprocess it presented Newtonian and pseudoplastic behavior depending on the fermentation time. The consistency index (K) reached its maximum value between 3Oand 40 hours fermentation time, while the flow behavior index (n) showed similar values for all experiments. The photomicrographs taken during the process showed a relationship between the three cell morphologies and the three bioprocess phases: initial phase, glucose depletion phase and cephalosporin C production phase
Doutorado
Desenvolvimento de Processos Químicos
Doutor em Engenharia Química

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária
O objectivo deste estudo foi o de avaliar os efeitos da administração conjunta do Ceftiofur (Naxcel®, na dose de 6,6 mg/Kg PV por animal, 1 mL por 30 Kg PV, via subcutânea) e de uma PGF2α (Dinolytic®, 5 mL por animal, correspondente a 25 mg de Dinoprost Trometamina, via intramuscular) entre as 0-12 horas pós-parto, nos índices reprodutivos de um efectivo de bovinos leiteiros da raça Holstein-Frísia, na ilha de São Miguel, Açores. Foram utilizados dois grupos de fêmeas, recém paridas (critérios de exclusão: animais que desenvolveram prolapsos uterinos ou que tiveram resolução do parto por cesariana), em que um dos grupos foi sujeito ao tratamento (n=10) e o outro serviu de grupo de controlo (n=17), não tendo sido tratado. Foram avaliados nos dois grupos o intervalo parto-1ª IA e parto-IA fecundante, a taxa de gestação tendo em conta o número de lactações, número de serviços realizados, índice de concepção e taxa de gestação ao primeiro serviço. Após a análise estatística dos resultados, verificou-se não haver diferenças significativas (p>0,05) entre os dois grupos, muito possivelmente devido ao reduzido número da amostra (n=27). Ainda assim, no que diz respeito aos intervalos parto-1ª IA e parto-IA fecundante, verificou-se um ganho de dias em aberto nos animais sujeitos ao tratamento contrariamente ao verificado no grupo de controlo. Relativamente ao número de animais gestantes ao diagnóstico por palpação rectal, parece ter havido melhores resultados nas vacas tratadas. No entanto, pouco se pode concluir acerca deste parâmetro em animais multíparos e primíparos, muito provavelmente devido à escassez da amostra. Também parece terem sido atingidos melhores resultados quanto ao número de serviços por animal, com as vacas que foram sujeitas ao tratamento. No que se refere ao índice de concepção e taxa de gestação ao primeiro serviço, o grupo de animais tratado obteve resultados numericamente melhores que o grupo não tratado. Deste modo, e como pouco se poderá efectivamente concluir, com base no tratamento estatístico, acerca dos efeitos desta terapêutica sobre os índices reprodutivos analisados, outros estudos prospectivos deverão ser realizados com uma amostra maior e com um desenho experimental mais completo, de forma a incluir um maior número grupos em análise, para se avaliar da eventual diferença entre tratamentos com os fármacos, isoladamente.
ABSTRACT - The effect of a joint administration of Ceftiofur and PGF2α, between 0-12 hours after calving, on reproductive indices in cows of Holstein-Friesian breed, in Azores - The objective of this study was to evaluate the effects of a joint administration of Ceftiofur (Naxcel®, 6.6 mg/Kg of BW per animal, 1mL by 30Kg of BW, subcutaneously) and PGF2α (Dinolytic®, 5mL per animal, corresponding to 25 mg of Dinoprost Trometamine, intramuscular), given 0-12 hours after calving, on the reproductive indices of Holstein-Frisian dairy cows, in the island of São Miguel, Azores. It was evaluated in both groups, the interval calving-1st AI and calving-1st fertile AI, pregnancy rate in both groups taking into account the number of lactations, number of services performed, conception rate and pregnancy rate to first service. After statistical analysis, we found no significant differences (p>0.05) between the two groups, most likely due to the small sample size (n = 27). Still, with regard to the interval calving-1st AI and calving-1st fertile AI, there was an open day gain in treated cows, contrary to which was found in the control group. For the number of pregnant animals at pregnancy diagnosis by rectal palpation, it is likely to obtain better results in treated animals, however, little can be concluded about this parameter in multiparous and primiparous cows, probably due to the small number of females in study. Animals that were subjected to treatment also appear to achieve better results in the number of services per animal. In concern about conception rate and pregnancy rate to first service, the group of treated animals, also achieved results, considerably, better than the untreated group. Therefore, and as we were not able to conclude much, based on statistics, about the effects of this treatment on those reproductive indices, in the future studies it could be suggested to be settled on a prospective way, with a larger sample and a more complete experimental design, which may include more groups to record any possible difference with the pharmaceutical products alone.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:05:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)
O Enterobacter spp. é um patógeno clinicamente importante em infecções de corrente sangüínea, e está freqüentemente associado à resistência às cefalosporinas de amplo espectro. Neste microrganismo, a resistência geralmente ocorre devido à desrepressão do gene ampC, mas outros mecanismos de resistência também podem existir, como a produção de beta-lactamases de espectro ampliado mediada por plasmídios (ESBL), o que limita as opções da terapêutica antimicrobiana. Objetivos: A análise do perfil de sensibilidade, da resistência à cefalosporina de quarta geração, da similaridade genética, e da adequação da terapia antimicrobiana entre amostras de Enterobacter spp. isoladas em infecções de corrente sangüínea no complexo Hospital São Paulo/ UNIFESP, em 2003 e 2004. Métodos: Um total de 93 amostras de bacteremia, consecutivamente coletadas entre janeiro de 2003 e março de 2004, foram testadas quanto ao perfil de sensibilidade para 7 agentes antimicrobianos, utilizando a metodologia do Etest e, seguindo o procedimento para os testes de ágar difusão, descritos pelo NCCLS. Foram utilizadas fitas de Etest ESBL screen para a detecção de beta-lactamases de espectro ampliado nos isolados de Enterobacter spp.. As amostras de Enterobacter spp. resistentes à cefepima foram selecionadas para a avaliação da similaridade genética através da ribotipagem automatizada, e os dados clínicos e demográficos dos pacientes com hemocultura positiva para esses isolados foram avaliados quanto a adequação da terapia antimicrobiana. Resultados: As taxas de resistência em Enterobacter spp. variaram de 28% para ceftazidima, 18,3% para cefotaxima e 12,9% para cefepima. O imipenem foi o antimicrobiano mais ativo (100% de sensibilidade), mesmo contra os isolados AmpC estavelmente desreprimidos. A ordem decrescente de atividade (% sensibilidade) contra os 93 isolados testados foi: imipenem (100%) >amicacina (86,0%) >cefepima (84,9%) = gatifloxacina (84,9%) >piperacilina/tazobactam (81,7%) >ceftazidima (72,0%) >cefotaxima (68,8%). Apenas 46,2% dos isolados de Enterobacter spp. resistentes à ceftazidima apresentaram sensibilidade à cefepima. A resistência cruzada com outros antimicrobianos foi comum entre as amostras resistentes à ceftazidima e àquelas resistentes à cefepima. A produção de ESBL foi encontrada em 5 isolados de Enterobacter spp.. Foram observados 7 ribotipos distintos entre as 14 amostras de Enterobacter spp. resistentes à cefepima. Os pacientes com bacteremia por Enterobacter spp. resistente à cefepima, em sua maioria, possuíam doença de base potencialmente ou rapidamente fatal e xvi encontravam-se internados em unidades de terapia intensiva ou unidades cirúrgicas. Cinco entre 16 pacientes com bacteremia por Enterobacter spp. com sensibilidade reduzida à cefepima receberam terapia antimicrobiana inicial apropriada. A taxa de mortalidade foi maior no grupo com terapia antimicrobiana empírica inadequada comparado aquele com terapia antimicrobiana adequada. Conclusões: Este estudo mostrou altas taxas de resistência à cefepima em Enterobacter spp. isolados de bacteremia, devido a presença de mecanismos adicionais de resistência além da produção de ESBL, e sugere que o uso prévio das cefalosporinas de amplo espectro pode estar relacionado com a emergência de isolados resistentes, e que a terapia antimicrobiana empírica inadequada pode estar associada a maior mortalidade entre esses pacientes. A grande variabilidade genética encontrada entre as amostras de Enterobacter spp. resistentes à cefepima alerta à importância da política do uso apropriado dos agentes antimicrobianos, particularmente das cefalosporinas de amplo espectro, para restringir a seleção de isolados resistentes.
Background: Enterobacter spp. is an important clinical pathogen in nosocomial bloodstream infections that frequently exhibits resistance to high spectrum cephalosporins. In this microrganism, resistance is usually due to derepression of AmpC locus, but other resistance mechanisms can also occur, like plasmid-encoded extended-spectrum beta-lactamases (ESBLs), which makes antimicrobial therapy options much more limited. Purpose: The main objectives of this study were to evaluate susceptibility profile, fourth-generation cephalosporin resistance, genetic similarity, and antimicrobial therapy adequacy among Enterobacter spp. isolated from bloodstream infections at Hospital São Paulo complex, in 2003 and 2004. Methods: A total of 93 bloodstream isolates consecutively collected between January 2003 and March 2004 were susceptibility tested for 7 broad-spectrum agents by using Etest and following the NCCLS procedures for agar difusion tests. ESBL Etest strips for the detection of extended-spectrum beta-lactamases were used to determine ESBL phenotypes in Enterobacter spp. strains. The bloodstream cefepime-resistant Enterobacter spp. were further selected for molecular typing by automated ribotyping, and the medical records of all patients with positive blood culture for these cefepime resistant pathogens were examined to evaluate antimicrobial therapy adequacy and the effect of inappropriate empirical antibiotic therapy on patients outcome. Results:. Resistance rates among Enterobacter spp. ranged from 28% for ceftazidime, 18,3% for cefotaxime and 12,9% for cefepime. Imipenem showed the highest susceptibility rate (100.0% susceptible) and was active even against the stably derepressed AmpC-producers. The overall rank order of spectrum (% susceptible) was: imipenem (100%) amikacin (86,0%) >cefepime (84,9%) = gatifloxacin (84,9%) >piperacillin/tazobactam (81,7%) >ceftazidime (72,0%) >cefotaxime (68,8%). Only 46,2% of ceftazidime-resistant Enterobacter spp. were susceptible to cefepime. Co-resistance to other antimicrobial agents was common amog ceftazidime-resistant and cefepime-resistant isolates. Five strains of Enterobacter spp. were phenotypically detected as ESBL producers. Seven distinct ribotyping patterns were observed among the 14 cefepime-resistant Enterobacter spp.. Most of cefepimeresistant Enterobacter spp. bacteremias were from patients with severe comorbidities and admitted in intensive care units or surgical units. Of the 16 patients infected with cefepime-susceptibility-reduced Enterobacter spp., 5 received appropriate initial antimicrobial therapy. The mortality rate was higher in the inadequately treated group. Conclusions: This study shows high rates of cefepime resistance in bloodstream Enterobacter spp. isolates due to the presence of additional mechanisms of antimicrobial resistance, other than ESBL production; and suggests that previous broadspectrum cephalosporin administration could be related to resistance emergence, and empirical inappropriate antimicrobial therapy could adversely affect patients outcome. The great genomic variability found among cefepime-resistant Enterobacter spp. highlights the importance of appropriate use of antimicrobial agents, particularly broadspectrum cephalosporins, to restrict selection of resistant isolates.
BV UNIFESP: Teses e dissertações

Orientadores: Angelica Zaninelli Schreiber, Plinio Trabasso
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas
Made available in DSpace on 2018-08-08T13:17:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nowakonski_AngelaVon_M.pdf: 1399484 bytes, checksum: ee465090318f9325ffdc02d5497ae055 (MD5) Previous issue date: 2007
Resumo: Bacteriemias são ocorrências relacionadas a diferentes processos patológicos e em grande parte associadas a infecções hospitalares. Podem ser causadas por diferentes tipos de microrganismos, sendo os Gram negativos, em especial, os bacilos, responsáveis por grande número destas. O diagnóstico laboratorial envolve coleta de hemoculturas, isolamento e identificação do agente e avaliação de sua sensibilidade aos antimicrobianos. Com o aumento da sobrevida de pacientes com doenças de base muito graves e o uso indiscriminado de antimicrobianos de amplo espectro, são crescentes os relatos de desenvolvimento de resistência dos microrganismos aos antimicrobianos em uso. Trata-se este de estudo retrospectivo que buscou avaliar a prevalência e o perfil de resistência dos principais bacilos Gram negativos isolados a partir de hemoculturas de pacientes adultos, internados no HC-UNICAMP frente a antimicrobianos selecionados e correlação da tendência da resistência aos antimicrobianos com a estimativa de utilização destes antibióticos durante o período de 2000 a 2004. Neste período, os bacilos Gram negativos mais prevalentes foram Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter cloacae, Pseudomonas aeruginosa e Acinetobacter baumanii. Foi possível observar ao longo do período estudado uma alteração no perfil de freqüência dos bacilos Gram negativos encontrados nas hemoculturas, havendo permuta de Enterobacter cloacae por cepas de Klebsiella pneumoniae ao longo do tempo. O consumo aumentado de cefalosporinas de terceira e quarta geração no HC-UNICAMP pôde ser correlacionado de forma significativa a uma maior taxa de resistência de Klebsiella pneumoniae resistente. O aumento no consumo de quinolonas pôde ser correlacionado de forma significativa com aumento de resistência dos bacilos Gram negativos até o ano de 2002, excetuando a Klebsiella pneumoniae que manteve os níveis de resistência até 2004
Abstract: Bacteriemias are events related to different diseases, mostly hospital infections. They can be caused by many different microorganisms, but the Gram negative bacilli are often responsible for them. The laboratory diagnosis includes blood sampling, isolation and identification of the microorganism, and evaluation of its susceptibility to the available antibiotics. Increases in prevalence of these resistant pathogens in hospitals are frequently related to high selective pressure commonly used in hospitalized patients, almost always represented by older and debilitated individuals. This is a retrospective study of the prevalence and resistance of pathogens isolated from the blood of patients in the Hospital das Clínicas UNICAMP, during the years 2000-2004, and the correlation of the intensive use of some proposed antibiotics. During this period the most commonly isolated microorganisms were: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter cloacae, Pseudomonas aeruginosa and Acinetobacter baumanii. We observed an alteration of this profile during the study, having Klebsiella pneumoniae replaced the Enterobacter cloacae 's score. The increasing utilization of broad expect rum cephalosporin's in HC UNICAMP was related to the highest resistance of Klebsiella pneumoniae to these drugs. The ever increasing use of quinolones could be related in a very considerable way to the increasing resistance of all Gram negative bacilli until the year of 2002, when it declined but not for Klebsiella pneumoniae which was prolonged during all the time of the study
Mestrado
Patologia Clinica
Mestre em Ciências Médicas

Introdução: As enzimas do grupo AmpC degradam cefalosporinas e cefamicinas e não são inibidas pelo ácido clavulânico, sulbactam ou tazobactam. Podem ser codificadas por genes de localização plasmidial ou cromossômica. A sua detecção tem importância epidemiológica, pois a expressão concomitante à perda de porinas em Enterobactérias pode levar à resistência aos carbapenêmicos, fármacos amplamente utilizados no tratamento de infecções graves. Os relatos de detecção de AmpC plasmidial no Brasil são escassos, mas a análise do perfil de sensibilidade de Escherichia coli isoladas de casos de infecções urinárias de pacientes atendidos em um laboratório privado da cidade de São Paulo, no período de 2006 à 2010, evidenciou um aumento considerável de resistência à cefoxitina, um marcador para expressão de AmpC plasmidial. Em 2006 a frequência era de 0,03% e em 2011 foi de 0,65%. Uma das hipóteses para esse aumento é a disseminação de clones ou de genes que codificam AmpC, transferidos em plasmídeos. Objetivo: Caracterizar os determinantes genéticos em E. coli com fenótipo compatível com produção de AmpC plasmidial. Material e métodos: Foram estudadas todas as E. coli isoladas de cultura de urina, não sensíveis à cefoxitina, detectadas no Fleury Medicina e Saúde em São Paulo, no período de 02 de janeiro a 01 de fevereiro de 2012. Os isolados foram avaliados fenotipicamente quanto à pureza, identificação da espécie e bloqueio enzimático com discos de cefoxitina e ceftazidima adicionados de ácido fenilborônico. A presença de genes que codificam AmpCs plasmidiais foi avaliada utilizando-se dois métodos distintos de PCR. Foi realizado o sequenciamento dos genes detectados. O desempenho do bloqueio enzimático com ácido fenilborônico foi determinado utilizando-se a PCR como padrão ouro. O perfil plasmidial e a clonalidade foram avaliados respectivamente por lise alcalina e ERIC-PCR. Resultados e conclusões: De um total de 2.494 E. coli 12 albergavam genes de AmpC plasmidial; a frequência de AmpC plasmidial foi portanto de 1,8% em pacientes hospitalizados 0,46% em pacientes ambulatoriais. O sequenciamento dos genes que codificam AmpCs plasmidiais evidenciou tratarem-se de 11 blaCMY-2 e uma blaCMY-4. O melhor desempenho do teste fenotípico com cefoxitina, ceftazidima e ácido fenilborônico foi obtido quando utilizados um mínimo de 5 mm de diferença entre o halo de inibição com o disco adicionado de ácido fenilborônico e puro para cefoxitina e ceftazidima. Com esses parâmetros a sensibilidade foi de 100,0%, a especificidade de 100%, o valor preditivo positivo 100 % e valor preditivo negativo 100%. Foi observada a presença e disseminação de três grupos clonais de E. coli produtoras de CMY entre hospitais na cidade de São Paulo.
Introduction: AmpC enzymes can degrade cephalosporins and cephamycins and are not inhibited by clavulanic acid, sulbactam or tazobactam. They can be encoded by genes of plasmid or chromosomal location. Detecting these enzymes is epidemiologically important because their expression and concomitant porins loss in Enterobacteriaceae can lead to resistance to carbapenems, antimicrobials widely used to treat serious infections. Reports of detection of plasmidial AmpCs in Brazil are scarce, but the analysis of the susceptibility profile of Escherichia coli isolated from cases of urinary tract infection in patients attended in a private laboratory, located at the city of São Paulo, from 2006 to 2010 indicated a considerable increase in cefoxitin resistance, a marker for plasmidial AmpC expression. In 2006 the rate was 0.03% and in 2011 it was 0.65%. One hypothesis for this increase was the spread of clones or genes encoding AmpC transferred into plasmids. Objective: To characterize the genetic determinants in E. coli presenting a phenotype consistent with plasmidial AmpC production. Material and Methods: We studied all E. coli not susceptible to cefoxitin isolated in urine cultures at Fleury Medicine and Health, in São Paulo, during the period from January 2nd to February 1st 2012. The isolates were phenotypically evaluated for purity, species identification and enzymatic blockage with cefoxitin and ceftazidime disks with added phenylboronic acid. The presence of genes encoding plasmidial AmpCs was evaluated using two different PCR methods. Sequencing of the genes detected was obtained. The performance of the enzymatic blockage with phenylboronic acid was determined using PCR as a gold standard. The plasmid profile and clonality were evaluated respectively by alkaline lysis and ERIC-PCR. Results and conclusions: Among 2,494 E. coli isolates, 12 had genes encoding for plasmidial AmpC; consequently the frequency of plasmidial AmpC in E. coli was 1.8% in inpatients and 0.46% in outpatients. Sequencing of the genes encoding plasmidial AmpCs showed them to be blaCMY-2 and just one blaCMY-4. The better performance of the phenotypic test was obtained when at least 5 mm inhibition zone difference was observed between the disc of cefoxitin and ceftazidime with added phenylboronic acid. With these parameters the sensitivity was 100%, specificity 100%, positive predictive value 100% and negative predictive value 100%. The presence and the dissemination of three clonal groups of CMY producing E. coli was observed among hospitals located at the city of São Paulo

Las bacterias resistentes a antibióticos, y en concreto a betalactamasas de espectro extendido (BLEEs), se han convertido en un problema grave. Su prevalencia ha incrementado rápidamente a nivel mundial debido a una diseminación pandémica de plásmidos y a la introducción de genes de resistencia a BLEEs en clones exitosos (Coque, Baquero et al. 2008, Brolund 2014). Según la Organización Mundial de la Salud (OMS), los antimicrobianos más críticos en sanidad humana y animal son las cefalosporinas de tercera generación, las fluoroquinolonas, los macrólidos y los aminoglicósidos (Collignon, Powers et al. 2009, Collignon, Conly et al. 2016). Por lo tanto, esta tesis se ha centrado en las resistencias a cefalosporinas, y en particular resistencias a BLEEs y betalactamasas tipo AmpC. La mayoría de las investigaciones se han centrado en la epidemiología de las resistencias a antibióticos en medicina humana y veterinaria; sin embargo, en los últimos años ha habido un aumento de los estudios dirigidos a bacterias multiresistentes que circulan en ambientes naturales actuando como reservorios (Allen, Donato et al. 2010). Una vez las bacterias están presentes en el ambiente, pueden transmitirse a los humanos. A través de los estudios incluidos en la actual tesis, hemos investigado la aparición y los mecanismos de diseminación de Escherichia coli resistentes a cefalosporinas de diferentes nichos ecológicos; pollos de engorde como ejemplo de animales de producción, moscas (Musca domestica) como vectores mecánicos y reservorios de genes de resistencia que contribuyen a la diseminación de resistencias en el ambiente de granja; y finalmente, cigüeñas blancas (Ciconia ciconia) como ejemplo de vectores de larga distancia y centinelas de la presión humana. Con este enfoque, intentamos entender la transmisibilidad de las resistencias entre nichos diferentes; e identificar los clones, los genes de resistencia y los plásmidos involucrados.
Bacteria resistant to antimicrobials, and specifically to extended-spectrum beta-lactamases (ESBLs), have become of increasing concern. Its prevalence has increased fast worldwide due to a pandemic dissemination of plasmids and the introduction of ESBL resistance genes into successful clones (Coque, Baquero et al. 2008, Brolund 2014). According to the World Health Organization (WHO), the most critical antimicrobials in human and animal health are third-generation cephalosporins, fluoroquinolones, macrolides and aminoglycosides (Collignon, Powers et al. 2009, Collignon, Conly et al. 2016). Therefore, this thesis has focused in resistance to cephalosporins and particularly to ESBLs and AmpC type of resistance. Due to the overuse of antimicrobials in humans and veterinary medicine, the emergence of multi-drug resistance has increased in the last decades. Most of the research has focused on the epidemiology of antibiotic resistance in human and veterinary medicine; however, in the last years it has been an increasing attention on how multiresistant bacteria circulates in natural environments and how these niches can act as reservoirs of resistant traits (Allen, Donato et al. 2010). Once the resistant bacteria are present in the environment, it can easily get in contact with humans. Through the studies compiled in this thesis, we have investigated the occurrence and mechanisms of dissemination of cephalosporin resistance (CR) Escherichia coli from different ecological niches; broilers as an example of food-producing animals, houseflies (Musca domestica) as mechanical vectors and reservoir of resistance genes contributing to the spread of resistance in the farm environment; and finally white storks (Ciconia ciconia) as an example of long-distance vectors and sentinels of human pressure. With this approach, we intend to understand the transmissibility of these resistances among different niches; and identify clones, resistance genes and plasmids involved.

El objetivo principal de esta tesis fue evaluar si existe asociación entre el consumo de antimicrobianos en granjas convencionales de porcino, y la presencia de enterobacterias resistentes a cefalosporinas (RC), como Escherichia coli y Salmonella spp. A la vez, se evaluó si la granja era un reservorio de genes de RC, si éstos estaban asociados a plásmidos transferibles y si dichos plásmidos eran similares a los que están presentes en cepas humanas. Para ello se realizaron tres estudios. En el Estudio 1 se evalúo si los tratamientos con ceftiofur y posteriormente con amoxicilina eran factores de riesgo en la emergencia de E. coli RC en una granja de cerdos de engorde. Para ello se seleccionaron 100 lechones de 7 días de edad y se dividieron en dos grupos, un grupo control (n=50) y otro grupo tratado parenteralmente con ceftiofur en dosis única (n=50). Durante el período de engorde, ambos grupos fueron subdivididos en dos grupos. A dos de ellos se les administró un segundo tratamiento con amoxicilina en pienso. Los grupos formados fueron: grupo sin tratar, grupo tratado con amoxicilina, grupo tratado con ceftiofur y grupo tratado con ceftiofur y amoxicilina. Durante eltratamiento con ceftiofur se recolectaron muestras fecales antes del tratamiento (día 0), día 2, 7, 14, 21 y 42 después del tratamiento, mientras que durante el tratamiento con amoxicilina, el muestreo se extendió a 73 días después tratamiento. Se seleccionaron E. coli RC y los aislados fueron analizados por electroforesis de campo pulsado (PFGE) y concentraciónmínima inhibitoria (MIC) a 14 antimicrobianos. Además se detectó la presencia de genes de RC y se tipificaron los replicones de los plásmidos. Ambos tratamientos generaron un incremento en la prevalencia de E. coli RC, el cual fue estadísticamente significativo en los grupos tratados, disminuyendo la RC después del tratamiento. Un total de 47 aislados de E. coli RC fueron recolectados durante el estudio; en ellos se encontraron los siguientes genes de resistencia; CTX-M-1 (15), CTX-M-14 (10), CTX-M-9 (4), CTX-M-15 (2) y SHV-12 (5), mayormente asociados a plásmidos conjugativos de los grupos de incompatibilidad IncI1 e IncN. El tratamiento con ceftiofur y amoxicilina fue asociado con la emergencia de E. coli RC durante el curso del tratamiento. Sin embargo, al final del ciclo productivo, antes de que los animales partieran a matadero, no se aislaron cepas de E. coli RC. Los estudios 2 y 3 se llevaron a cabo en ocho granjas de cerdos de engorde convencionales en las que se aplicaban programas de medicina preventiva basados en el uso de antimicrobianos. En ellas se estudió la emergencia de E. coli RC (Estudio 2) y Salmonella RC (Estudio 3) depues del tratamiento con ceftiofur y tulatromicina durante la lactación. Cuatro granjas se trataron con ceftiofur y otras cuatro con tulatromicina. En cada granja, 70 lechones de 7 días de edad fueron divididos en dos grupos; grupo control (n =30) y grupo tratado (n = 40). Se recolectaron muestras fecales a día 0 (antes del tratamiento), día 2,7 y 180 después del tratamiento. Las madres también fueron muestreadas a día 0. Además, se evaluó si los recuentos de E. coli RC con respecto a la población total de E. coli, aumentaban con el uso del tratamiento. En cinco de las ochos granjas, los lechones de 7 días de edad excretaban E. coli RC antes de ser tratados. La prevalencia de animales positivos a E. coli RC fue disminuyendo a medida que aumentaba la edad de los animales. Las tres granjas restantes fueron negativas durante todo elestudio independientemente del tratamiento aplicado. Los resultados mostraron gran variabilidad en la frecuencia de animales positivos en las diferentes granjas. Un aumento transitorio de E. coli RC se observó en los recuentos 48 horas después de haber aplicado el tratamiento con ceftiofur. Sin embargo, otros factores de riesgo, como la presencia de madres positivas y la edad de los animales parecen tener una mayor relevancia en la persistencia de E. coli RC, que el tratamiento aplicado. El Estudio 3, además de evaluar el efecto del tratamiento con ceftiofur o tulatromicina en la emergencia de Salmonella RC investigó la presencia de cepas de Salmonella multirresistentes. Se caracterizaron genotípica y fenotípicamente los aislados obtenidos y se determinó la presencia de diferentes genes de resistencia, así como los plásmidos que portaban dichos genes de RC. Se aislaron 66 cepas de Salmonella en 5 de las ocho granjas. De estas, 49 fueron multirresistentes y 4 de ellas contenían genes blaCTX-M albergados en plásmidos conjugativos de la familia IncI1. Estas cepas RC fueron aisladas en una misma granja antes que los animales fueran tratados con ceftiofur, ydesaparecieron durante el curso del tratamiento. Los genes tet(A) (77%), sul1 (27%), y tet(B) (23%) fueron los más prevalentes, y 10 aislados contenían qnrB que confiere baja susceptibilidad a fluoroquinolonas. En este estudio no se pudo establecer una relación directa entre el uso de ceftiofur y laemergencia de Salmonella RC. Sin embargo la mayoría de los aislados fueron multirresistetes conjuntamente a ampicilina, estreptomicina, sulfamidas y tetraciclinas. Estos antimicrobianos son frecuentemente usados en los programas de medicina preventiva veterinaria. En conjunto, hemos observado un aumento transitorio de cepas de E. coli RC durante el tratamiento con ceftiofur, cosa que no observamos con Salmonella. Sin embargo, cepas RC, tanto de E. coli como de Salmonella, fueron aisladas de animales de siete días antes de someterlos a tratamiento, sugiriendo la circulación de estas cepas en la granja. Hubo animales que partieron a matadero excretando E. coli RC y Salmonella multirresistentes con genes y plásmidos similares a los encontrados en cepas de origen humano. Por lo tanto, nuestros estudios indican que la granja es un reservorio de cepas multirresistentes que pueden llegar al consumidor si entran en la cadena alimentaria. Para minimizar la emergencia de bacterias resistentes, es importante hacer un uso más racional de los antimicrobianos, así como definir estrategias para reducir la circulación de cepas resistentes, tanto dentro de las granjas, como en sistemas integrados de producción.
The main objective of this thesis was to evaluate the association between management practices in relation with antimicrobial consumption in pig farms and the emergence of cephalosporin resistant (CR) E. coli and Salmonella. Moreover, the studies intended to elucidate if the farm was a reservoir of resistance genes harboured in transferable plasmids similar to those found in the community. For this purpose, three studies have been conducted. Study 1 evaluated if the treatments with ceftiofur and amoxicillin are risk factors for the emergence of CR E. coli in a convencional pig farm during the rearing cycle. One-hundred seven-day-old piglets were divided into two groups, control (n=50) and parenterally treated with ceftiofur (n=50). During the fattening period, both groups were subdivided in two. Asecond treatment with amoxicillin was administered in-feed to two of the groups; untreated group, group treated with amoxicillin, group treated withceftiofur and group treated with ceftiofur and amoxicillin. During treatment with ceftiofur, faecal samples were collected before treatment (day 0) and at days 2, 7, 14, 21 and 42 post-treatment, whereas with amoxicillin, the sampling was extended 73 days post-treatment. CR E. coli isolates were genotypically and phenotypically characterised by PFGE, and MIC. The presence of CR genes was assessed and plasmids analysed by replicon typing. Both treatments generated an increase in the prevalence of CR E. coli, which was statistically significant in the treated groups. Resistance diminished after treatment. A total of 47 CR E. coli were recovered during the study period, 15 contained blaCTX-M-1, 10 blaCTX-M-14, four blaCTX-M-9, two blaCTX-M-15 and five blaSHV-12. The treatment with ceftiofur and amoxicillin was associated to the emergence of CR E. coli during the course of the treatment. However, by the finishing time CR E. coli were not recovered from the animals. Study 2 and 3 were conducted in eight conventional pig farms that applied preventive veterinary programmes based on antimicrobial use. In four of these farms, 7-day-old piglets were treated with ceftiofur and in the remaining four with tulathromycin. At each farm, 70 7-day-old piglets weredivided into two groups; a control group (n = 30) and a treated group (n = 40). Faecal samples were taken at day 0 (before medication), 2, 7 and 180 days post-treatment (time of slaughter). Sows were also sampled at day 0. Study 2 also assessed the dynamics of CR E. coli populations during the life cycle. In five of the eight farms, 7-day-old piglets excreted CR E. coli before treatment. The occurrence of CR E. coli positive animals decreased with increasing piglets’ age. The remaining three farms were negative for CR E. coli during the study period. Results demonstrated great variability in the frequency of positive animals between farms, independently of treatment. The treatment with ceftiofur resulted in a transitory increase in the counts of CR E. coli after 48 hours. However, other risk factors, such as the presence of CR E. coli in sows, and the age of the animals had a more relevant role in shedding of CR E. coli than the treatment. Study 3 assessed the effect of the treatments with ceftiofur or tulathromycin in the emergence of CR Salmonella and multiresistant Salmonella. Phenotypic and genotypic characterization of the Salmonella isolates were performed. A total of 66 Salmonella isolates were recovered from five of the eight farms. Of them, 49 were multiresistant and four contained blaCTX-M genes harboured in conjugative plasmids of the IncI1 family. They were recovered from the same farms before treatment with ceftiofur. tet(A) (77%), sul1 (27%), and tet(B) (23%) genes were the most prevalent, and 10 isolates also presented qnrB. A direct relation was not established between the use of ceftiofur and the occurrence of CR Salmonella. However, multidrug resistant was common, especially for ampicillin, streptomycin, sulphonamides and tetracycline.These antimicrobials are the most frequently used in preventive veterinary programmes in Spain. Overall, the treatment with ceftiofur resulted in atransitory increase in both, the proportion of animals shedding CR E. coli and the counts. We did not observed the same increase in prevalence for CR Salmonella. However, CR E. coli and CR Salmonella were detected in 7-day¬old piglets before administration of any treatment, suggesting the presence of resistant strains circulating in the farm. Some of the animals departed to the abattoir excreting CR E. coli and Salmonella with a multiresistant phenotype. CR genes were associated to transferrable plasmids with similar replicons to those found in isolates of human origin. These results indicatedthat the farm is a reservoir of resistant genes and plasmid that can reach the consumer via the food chain. To minimize the emergence of resistant bacteria and protect the consumer health, a more rational use of antimicrobials should be implemented in intensive farming. Intervention strategies should be develop to reduce the re-circulation of resistant isolates within pig farms, as well as within integrated production systems.

Neste trabalho, foram desenvolvidos e validados métodos qualitativos e quantitativos para o controle de qualidade de cefpiroma, antibiótico β-lactâmico de amplo espectro utilizado, principalmente, no tratamento de infecções graves e episódios febris em pacientes com neutropenia, na forma farmacêutica pó para solução injetável. A substância química de referência utilizada nas análises foi caracterizada por espectrofotometria no infravermelho e por espectroscopia de ressonância magnética nuclear. A análise qualitativa foi realizada por cromatografia em camada delgada, determinação da faixa de fusão, espectrofotometria nas regiões do ultravioleta e do infravermelho e cromatografia líquida de alta eficiência, possibilitando a identificação da amostra. A determinação quantitativa foi realizada através dos métodos: espectrofotometria no ultravioleta, cromatografia líquida de alta eficiência e ensaio microbiológico pelo método de difusão em ágar – cilindros em placas, delineamento 3 x 3. Os métodos propostos foram validados segundo guias oficiais e demonstraram ser específicos, lineares, precisos e exatos. Os resultados obtidos demonstraram não haver diferença significativa entre os métodos quando comparados estatisticamente pela análise de variância (ANOVA). Outro objetivo deste trabalho foi o estudo da estabilidade da cefpiroma na forma farmacêutica reconstituída com água para injetável. Os fatores de degradação avaliados foram temperatura (40 ºC) e luz (UVC – 254 nm). Os estudos acelerados de estabilidade demonstraram que a cinética de degradação térmica e fotoquímica foi de primeira ordem. Um produto de degradação térmica foi isolado e identificado, por ressonância magnética nuclear, espectrofometria no infravermelho e espectroscopia de massa, como sulfato de 6-7-diidro-5H-ciclopenta[b]piridinium.
The aim of this study was the development and validation of analytical methods to the determination of cefpirome in powder for injectable preparation and the stability study of the drug after reconstitution of the pharmaceutical dosage form with injectable water. Cefpirome is a fourth-generation cephalosporin active against a broad spectrum of gram-negative and gram-positive bacterial infections and its principal indication is in the treatment of patients’ septic shock or several sepsis. The substance used as reference standard in the analysis was characterized by infrared spectroscopy and nuclear magnetic resonance. The qualitative analysis was performed by thin layer chromatography, melting range determination, infrared and ultraviolet spectroscopy and high performance liquid chromatography, allowing the identification of samples. The quantitative determination was performed by ultraviolet spectrophotometry, high performance liquid chromatography and cylinder-plate microbiological assay (3 x 3). The proposed methods were validated following official guides and all of them demonstrated to be specific, linear, precise and accurate. The obtained results were analyzed by the ANOVA method and they are not statistically different. The degradation factors evaluated were the temperature (40 ºC) and light (UVC – 254 nm) and the accelerated stability demonstrated that the degradation kinetics from thermal and photo degradation were first-order reactions. A thermal degradation product was isolated and identified, by nuclear magnetic resonance, infrared spectroscopy and mass spectrometry, as 6-7-dihidro-5Hcyclopenta[ b]pyridinium sulfate.

Orientador: Thales Rocha Mattos Filho
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-07-23T22:35:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DelFiol_FernandodeSa_D.pdf: 4760278 bytes, checksum: 853766cfdc5b5cbf6645a51ee1d9593d (MD5) Previous issue date: 1998
Resumo: Desde a década de 40, com o advento da antibioticoterapia clínica, há relatos de microrganismos resistentes às drogas. Essa resistência é preocupante na medida em que torna-se cada vez mais difícil o tratamento de determinadas infecções associadas a esses microrganismos. Estudos têm sido realizados no sentido de encontrar novas drogas ou associações, ou ainda novas terapias para tentar minimizar o aparecimento e a manifestação de resistência. Assim, o intuito deste trabalho foi avaliar a associação de ácido clavulânico (inibidor de 'beta '-lactamases, normalmente associado à penicilinas), à cefalosporinas, na tentativa de aumentar sua ação bactericida frente à bactérias produtoras ou não de 'beta '-lactamases. Para tanto, foram utilizados 160 ratos, divididos em grupos de 8 animais nos quais foram implantados cirurgicamente, na região dorsal, esponjas de PVC. Decorridos 7 dias do implante, cada grupo recebeu doses previamente estabelecidas de: cefalexina (75 e 150 mg/kg - grupos 1 e 2); cefalexina + ácido clavulânico (75 / 37,5 e 150 / 75 mg/kg - grupos 7 e 8); cefriaxona (40 e 80 mg/kg - grupos 3 e 4); cefriaxona + ácido clavulânico (40 / 20 e 80 / 40 mg/kg - grupos 9 e 10) e ainda ácido clavulânico isoladamente (20 e 60 mg/kg - grupos 5 e 6). Uma hora após a administração das drogas os tecidos granulomatosos, formados pelo implante da esponja de PVC, foram retirados e dispostos em meio de cultura em placas de Petri, previamente inoculadas com '10 POT. 8' u.f.c. de Staphylococcus aureus não produtores de 'beta '-lactamase (ATCC 25923) (grupos 1 a 10) em ágar Müller Hinton. O mesmo procedimento acima descrito foi repetido (grupos 11 a 20), alterando-se porém o microrganismo, utilizando-se agora Staphy/ococcus aureus produtores de 'beta '-Iactamase (cepa de campo). Após 24h de incubação, os halos de inibição formados, quando formados, foram medidos e anotados para posterior análise Esse estudo foi designado como ex vivo. Paralelamente, foi realizado estudo in vitro das mesmas associações testadas ex vivo,para avaliar a reprodutibilidade do teste e dos resultados. Para os testes in vitro, foi realizada uma escala de diluições contendo: o microrganismo, meio de cultura e ainda diluições decrescentes da(s) droga(s) a ser(em) testada(s), ou seja determinação de CIM (Concentração Inibitória Mínima). A análise estatística dos dados obtidos, mostrou que: sem a presença de 'beta '-lactamase, a cefalexina, apresenta melhores resultados que a cefriaxona, o que inverte-se quando o microrganismo em questão é produtor de 'beta '-lactamase (P<0,05). Ainda, a adição de ácido clavulânico não interfere na ação antibiótica das drogas quando não há presença de 'beta '-lactamase e, em presença da enzima, a associação mostrou-se sinérgica, aumentando a ação bactericida das drogas (P<0,05), revelando-se útil quando o microrganismo mostra-se resistente pela presença da 'beta '-lactamase. Os resultados dos testes ex vivo realizados mostraram reprodutibilidade quando comparados com os resultados dos testes in vitro
Abstract: Since the 40's decade, with the coming of the clinical chemotherapy, there are already reports of bacterial resistance to drugs. This resistance is preoccupying, since it becomes more and more difficult the treatment certain infections associated to the those microrganisms. Countless attempts take place in the sense of finding new drugs or associations, or still new therapies trying minimize the emergence and the resistance manifestation. In that way, the aim of this study was to evaluate the association of clavulanic acid, a 'beta '-lactamases inhibitor that usually comes associated to penicillins, to cephalosporins, in the attempt of increasing its bactericidal action against bacterias producer or not of 'beta '-lactamases. Therefore, 160 rats were used, which receive surgicaly implants of PVC sponges. After 7 days of the implants, the animais received doses previously established of cephalexin (75 and 150 mg/kg - groups 1 and 2); cephalexin + clavulanic acid (75 / 37,5 and 150/75 mg/kg - groups 7 and 8); ceftriaxone (40 and 80 mg/kg - groups 3 and 4); ceftriaxone + clavulanic acid (40 / 20 and 80 1 40 mg/kg - groups 9 and 10) and still clavulanic acid separately (20 and 60 mg/kg - groups 5 and 6). One hour after the administration, the formed tissue was retired and disposed in Petri dishes, previously inoculated with '10 POT. 8' c.f.u. of Staphylococcus aureus ('beta '-lactamase producers [clinical isolate] or no producers [ATCC 25923]) in Muller Hinton Agar. After 24h of incubation, the formed inhibition halos were measured and scored for posterior analysis. Parallelly to that an in vitro study of the same ex vivo associations tested was accomplished in the attempt of reproducing the results. For the tests in vitro, a scale of dilutions was accomplished contends the microrganism, media and still decreasing dilutions of the drugs to be tested, an MIC. The statistical analysis show: in the 'beta '-lactamase absence, the cephalexin presents better results than the ceftriaxone, what is inverted when the microrganism in subject is producer of 'beta '-lactamase (P<0,05). Still, the addition of clavulanic acid doesn't interfere in the antibiotic action of the drugs when there is 'beta '-lactamase absence. In presence of the enzyme, the association was shown sinergic, increasing the bactericide action of the drugs, being revealed useful when the microrganism show resistance
Doutorado
Farmacologia
Doutor em Odontologia

Orientadores : Antonia Teresinha Tresoldi, Sergio Tadeu Martins Marba
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas
Made available in DSpace on 2018-08-03T04:41:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Calil_Roseli_D.pdf: 18214531 bytes, checksum: 34edf672722ba36adee4c14567b0b030 (MD5) Previous issue date: 2001
Resumo: A emergência de infecções por bactérias multirresistentes na unidade neonatal do CAISM/UNICAMP em 1995, especialmente Enterobacter Cloacae, estimulou esse estudo, cujo objetivo foi descrever a colonização bacteriana em recém-nascidos admitidos no berçário de alto risco, identificando aqueles colonizados por cepas multirresistentes e suas características. Os objetivos específicos foram estudar o tempo de ocorrência da colonização, conhecer a incidência e prevalência da colonização por bactérias multirresistentes, avaliar os fatores de risco para colonização por bactérias multirresistentes e a eficácia das medidas de controle da colonização e infecção por estas cepas multirresistentes na unidade neonatal. Este estudo foi conduzido de outubro de 1995 a dezembro de 1999, sendo dividido em quatro fases: estudo transversal estabelecendo a prevalência de colonização por bactérias multirresistentes, estudo longitudinal de colonização com medidas de intervenção, estudo transversal mensal de colonização durante seis meses e vigilância das infecções hospitalares identificando a ocorrência de infecções por bactérias multirresistantes (Staphylococcus aureus resistante a oxacilina e bactérias gram negativas resistentes a aminoglicosídeos e/ou cefalosporinas de terceira geração). Amostras para cultura para pesquisa de colonização foram colhidas com 24 horas, 72 horas, sete dias de vida e semanalmente até a alta hospitalar, através de swab retal, umbilical e aspirado traqueal em crianças intubadas. As medidas de intervenção foram: a) treinamento apropriado de toda equipe multidisciplinar com ênfase na redução de transmissão cruzada de microoganismos e uso racional de antibióticos, b) supressão do uso de cefalosporinas de terceira geração. Fatores de risco foram avaliados através de um modelo de regressão logística com análise univariada e multivariada. Na primeira fase, 32% (10/31) dos pacientes estavam colonizados por bactérias multirresistentes (29% por Enterobacter cloacae). Na segunda fase, 342 pacientes foram avaliados e foram colhidas, para pesquisa de colonização, 896 amostras através de swab umbilical, 898 através de swab retal e 106 amostras de aspirado traqueal, com uma positividade de 63%, 81,4% e 51,8% respectivamente. Em 5,3% dos pacientes não foram isoladas bactérias. As bactérias que colonizaram os recém-nascidos com maior freqüência foram Staphylococcus coagulasenegativa, Streptococcus sp, Escherichia coZi,Enterobacter cloacae, Klebsiella pneumoniae e Staphylococcus aureus. A incidência de colonização por bactérias gram-negativas não consideradas da flora normal como Enterobacter cloacae e Klebsiella pneumoniae elevou-se de acordo com o tempo de hospitalização do recém-nascido. Avaliando o perfil de resistência bacteriana, a bactéria multirresistente isolada com maior freqüência foi Enterobacter cloacae, presente em 10,8% dos recém-nascidos. A incidência mensal de colonização por Enterobacter c/oacae multirresistente foi de 10% em novembro de 1995, 15,6% em dezembro, 14,7% em janeiro de 1996 e diminuiu até 1,8% em abril. A análise multivariada através de regressão logística indicou como fatores de risco para colonização por E.cloacae o uso de antibiótico e nutrição parenteral. Na terceira fase do estudo, durante seis meses, foi identificada colonização por Enterobacter cloacae somente em dois pacientes. Na quarta fase do estudo, a análise do padrão de resistência das infecções hospitalares de 1995 a 1999, indicou uma redução das infecções por bactérias multirresistentes de 18 casos em 1995 para 2 casos ao ano até 1999. Estes resultados demonstraram que as medidas adotadas para o controle da colonização e infecção por bactérias multirresistentes foram efetivas
Abstract: The emergence of multiresistant bacteria infections m a neonatal unit during 1995, especially Enterobacter cloacae, stimulated this study. The aim of this study was to describe the bacterial colonization m newborns admitted in high risk nursery of CAISM/UNICAM identifying the multirresistant strain and the babies' features. The specific purposes were to study the time occurence of colonization, to know the incidence and prevalence of multirresistant bacteria colonization, to evaluate the risk factors for multirresistant strain colonization and the efficacy of measures to control colonization and nosocomial infection by multirresistant in a neonatal unit of a university hospital. This study was conducted from October 1995 to December 1999 in four phases: a cross-sectional study; a longitudinal study with intervention measures; monthly cross-sectional studies and determination of nosocomial infections caused by multiresistant bacteria (oxacillin-resistant S. aureus and gram-negative bacteria resistant to either aminoglycosides and/or third generation cepbalosporins). Umbilical and rectal swabs were cultured at ages 24 hours, 72 hours, one week and weekly thereafter until hospital discharge. Cultures of tracheal aspirates were also obtained from intubated babies at the same periods. The intervention measures were: a) appropriated training of the whole health care team, emphasizing measures to reduce cross-colonization and the importance of rational usage of antibiotics; b) supression of third generation cepbalosporins usage. Risk factors were analyzed through univariate and multivariate logistic regression. In the first phase, 32% (l 0/31) of the patients were colonized by multiresistant bacteria (29% by multiresistant Enterobacter cloacae). In the second phase, 342 patients were evaluated and it was collected for the colonization research , 896 umbilical swabs, 898 rectal swabs and 106 tracheal aspirates,with the respective positivity, 63.2%, 81.4% and 51.8%. No bacterium was isolated m 5.3% of the patients. The most frequent bacteria that colonized by the newborns were coagulase-negative Sthaphylococcus, Streptococcus sp, Escherichia coli, Enterobacter cloacae, Klebsiella pneumoniae and Staphylococcus aureus. The gram negative bacterium colonization not considered of the "normal" flora (Enterobacter cloacae, Klebsiella pneumoniae) increased with the duration of hospitalization. Evaluating the bacterial resistance profile,the most frequent multiresistant bacterium was Enterobacter cloacae that was found m 10.8% (37/342) of the newborns. The monthly incidence of patients colonized by multirresistant E. cloacae,was 10% in November 1995, 15.6% in January 1996 and it decreased to 1.8% in April 1996. A logistic regression model of multivariate analysis indicated parenteral nutrition and antibiotic usage as risk factors for colonization by multiresistant Enterobacter cloacae. In the third phase, for six-month period, only two patients were colonized by multiresistant Enterobacter cloacae. In the fourth phase, the analysis of bacterial resistance profile, indicated a reduction of nosocomial infections due to multiresistant bacteria from 18 cases in 1995 to two cases per year until 1999. These results have shown that the measures adopted were effective
Doutorado
Pediatria
Doutor em Saude da Criança e do Adolescente

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária
A resistência a antibióticos em Escherichia coli é um problema crescente a nível global, em humanos e animais. Antibióticos criticamente importantes (CI) são aqueles que vão de encontro aos critérios da OMS 1 (única ou uma das poucas terapêuticas disponíveis para tratar infecções graves em humanos) e 2 (antibacterianos utilizados para tratar doenças provocadas por microrganismos que podem ser transmissíveis por fontes não-humanas ou doenças causadas por organismos que podem adquirir genes de resistência de fontes não-humanas). O objectivo deste estudo foi de avaliar taxa de colonização com E. coli resistente a antibióticos em cães saudáveis, particularmente às cefalosporinas de terceira geração. Foram isoladas 135 E. coli de canídeos (n=151) no período de Novembro de 2010 a Janeiro de 2011, no Hospital Veterinário da Tapada. Os cães incluídos no estudo eram saudáveis e não tinham história de consumo de antibióticos no mês anterior à colheita da amostra. As zaragatoas foram inoculadas em água peptonada e incubadas 18horas, sendo depois semeadas em agar MacConkey com um disco de cefotaxima 30μg. Foram seleccionadas colónias típicas de E. coli, preferencialmente as que cresciam junto ao disco, e identificadas pelo método de PCR gadA/B, específico para E. coli. Os testes de susceptibilidade e a sua interpretação foram realizados de acordo com os critérios CLSI. Existiam 51% isolados totalmente susceptíveis, e 49% tinham pelo menos uma resistência adquirida. A prevalência de resistência da E. coli à amoxicilina (Aml) foi de 43%, ao trimetoprim/sulfametoxazol (Sxt) 30%, à cefoxitina (Fox) 25%, à amoxicilina/ácido clavulânico (Amc) 24%, à cefotaxima (Ctx) 18%, à enrofloxacina (Enr) 16% e à gentamicina (Cn) 4%. Multirresistência, definida como resistência a três ou mais classes de antibióticos, estava presente em 23 isolados (17%). Dentro dos isolados multirresistentes, existia resistência a classes de antibióticos criticamente importantes: 17 isolados eram resistentes à cefotaxima e 21 à enrofloxacina. Os perfis mais frequentes de multirresistência eram Amc-Aml-Ctx-Enr-Fox-Sxt (n=9) e Aml-Ctx-Enr-Sxt (n=3). Entre as estirpes de E. coli, 3,7% (n=5) eram produtoras de ESBL (“Extended Spectrum Betalactamases”), possuindo o gene blaCTX-M. Neste estudo foi demonstrado que existe uma frequência elevada de resistência em estirpes de E. coli isoladas de cães saudáveis. Estes resultados mostram que estirpes de E. coli multirresistentes e produtoras de ESBL estão a aumentar e podem comprometer a eficácia terapêutica. Além disso, a resistência às classes de antibióticos criticamente importantes é relevante. É da máxima importância preservar a utilidade destes agentes antibacterianos, já que a resistência teria um impacto relevante na saúde humana devido ao contacto próximo entre animais de companhia e os seus donos. Palavras-chave: Cefalosporinas de terceira geração, resistência, ESBL, cães saudáveis.
ABSTRACT – STUDY OF THIRD GENERATION CEPHALOSPORIN’S RESISTANCE IN ESCHERICHIA COLI ISOLATES OF CANINE ORIGIN - Antimicrobial resistance among Escherichia coli is an increasing global problem in humans and animals. Critically important (CI) antimicrobials are those that met WHO criteria 1 (Sole therapy or one of few alternatives to treat serious human disease) and 2 (Antibacterial used to treat diseases caused by organisms that may be transmitted via non-human sources or diseases causes by organisms that may acquire resistance genes from non-human sources). The aim of this study was to determine the rate of colonization with antimicrobial resistant E. coli particularly to 3rd generation cephalosporins (3GC) among healthy dogs. One-hundred and thirty-five E. coli were isolated from dogs (n=151), between November 2010 and January 2011, at Hospital Veterinário da Tapada. The dogs included in the study were healthy with no history of antimicrobial consumption in the month before they were sampled. Swabs were inoculated in peptone water and incubated 18h and then sub-cultured onto MacConkey agar with a 30μg cefotaxime disk. Colonies typical of E. coli were selected preferentially from around the disk and identified by specific gadA/B E. coli gene PCR. Susceptibility testing and interpretation was performed using disc diffusion method according to CLSI guidelines. Full susceptible isolates were 51% and 49% had at least one acquired resistance. The resistance rate of E. coli for amoxicillin (Aml) was 43%, 30% trimethoprim/sulfamethoxazole (Sxt), 25% cefoxitin (Fox), 24%, amoxicillin/clavulanate (Amc), 18% cefotaxime (Ctx), 16% enrofloxacin (Enr), and 4% gentamicin (Cn). Multidrug-resistance (MDR) defined by resistance to 3 or more antimicrobial classes was present in 23 isolates (17%). Within MDR isolates, resistance to CI antimicrobial classes was present in 17 isolates to 3GC and 21 to enrofloxacin. The most frequent multiresistance profiles were AmlR-AmcR-EnrR-SxtRCtxR- FoxR (n=9) and Aml-Ctx-Enr-Sxt (n=3). Among E. coli strains, 3,7% (n=5) were extended-spectrum-β-lactamases (ESBL) producers, harbouring the blaCTX-M gene. In this study we showed a high frequency of resistance in veterinary E. coli strains from healthy dogs. Our results demonstrated that multidrug-resistant E. coli and ESBL producing strains are increasing and may compromise effective therapeutic options. Furthermore, resistance to CI antimicrobial classes is relevant. It is of prime importance that the utility of such antibacterial agents should be preserved, as resistance would have an important impact on human health due to the close and direct contact between pets and owners.

Orientador: Ronilson Agnaldo Moreno
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas
Made available in DSpace on 2018-08-05T05:47:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maluly_HellenDeaBarros_M.pdf: 7988282 bytes, checksum: 2d5724c0002bc95aaec9c7de5cbd35bd (MD5) Previous issue date: 2005
Resumo: O Objetivo deste estudo foi comparar a bioequivalência do Cefadroxil - cápsula (500mg) da Apotex do Brasil Ltda (formulação teste) and Cemmox@do Laboratório Bristol-Myers Squibb (formulação de referencia) em voluntários sadios de ambos os sexos. Este estudo foi necessário para comercialização deste medicamento. O estudo foi aleatorizado, cruzado, com dois períodos e duas seqüências (2x2) e com uma semana de intervalo entre as doses (wash out), onde os mesmos voluntários receberam, em cada período a formulação teste e a formulação de referência. A seqüência de tratamento foi determinada por uma lista de aleatorização, automaticamente produzida pela Medicines Clinical Trials Control System. As amostras de plasma foram coletadas num intervalo de 36 horas. As concentrações de Cefadroxil foram analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a um detector de UV-visível. A partir da curva da concentração de Cefadroxil no plasma vs tempo foram obtidos os parâmetros farmacocinéticos: 'ASC IND. 0-t¿, 'ASC IND. 0-INFINITO¿ e 'C IND. max¿. As médias geométricas de CefadroxiI / 'Cefamox MARCA REGISTRADA¿ 500 mg em porcentagem foram: 105.58% (90% CI=102.17%; 109.10%) para 'ASC IND. 0-t¿, 104.74% (90% CI= 101.55%; 108.02%), para 'ASC IND. 0-INFINITO¿ 112.08% (90% CI=10S.59%; 118.97%) para 'C IND. max¿.Sendo 90% o intervalo de confiança para 'C IND. max¿, 'ASC IND. 0-t¿, 'ASC IND. 0-INFINITO¿ estiverem entre 80-125% do intervalo proposto pela RDC 135 (ANVISA/mai 2003), conclui-se que o Cefadroxil - cápsulas (500 mg) foi bioequivalente ao Cefamox MARCA REGISTRADA¿ ,de acordo com as porcentagens e extensão da absorção
Abstract: The objective of this study is to compare the bioequivalence of Cefadroxil- capsule 500 mg ¿ formulated by Apotex of Brazil Ltda (test formulation) and Cefamox by LaboratoryBristol-Myers Squibb (reference formulation) in volunteers of both sexes. This study was necessary for the commercialization of medicines. The study was conducted with a randomized two-period crossover design (2x2) and a one-week washout period, the same volunteers received, in each period, a test formulation or a reference formulation. The treatment sequence was determined by a randomization list, automatically produced by Medicines Clinical Trials Control System. Plasma samples were obtained over a 36-hour interval. Cefadroxil concentrations were analyzed by combined high pressure liquid chromatography and UV-visible detection (HPLC-UV). From the Cefadroxil plasma concentration vs time curves the following pharmacokinetic parameters were obtained: 'AUC IND. 0-t ', 'AUC IND. 0-INFINITO¿ and 'C IND. max¿. The Geometric mean of Cefadroxil / Cefamox 500 mg for individual percentage ratio was 105.58% (90% CI=102.17%; 109.10%) for an area under the cefadroxil plasma concentration versus time curves (0-t), 104.74% (90% CI= 101.55%; 108.02%), for an area under the cefadroxil plasma concentration versus time curves ('0-INFINITO¿), and 112.08% (90% CI=105.59%; 118.97%) for maximum observed plasma concentration. Conclusion: Since 90% CI for both 'C IND. max¿, 'AUC IND. 0-t ', and 'AUC IND. 0-INFINITO¿ were within the 80-125% interval proposed by the RDC 135 (ANVISA/may 2003), it was conc1uded that Cefadroxil - capsule 500 mg was bioequivalent to Cefamox, according to both the rate and the extension of absorption
Mestrado
Mestre em Farmacologia

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-12-06Bitstream added on 2014-06-13T20:40:26Z : No. of bitstreams: 1 moreno_ah_dr_arafcf.pdf: 734221 bytes, checksum: 23d30186e23eb1eee2cdbb3e636c93ab (MD5)
Universidade Estadual Paulista (UNESP)
A ceftazidima é uma cefalosporina semi-sintética de terceira geração com grande atividade antibacteriana, muito usada no tratamento de infecções bacterianas freqüentes, incluindo espécies de Proteus e Pseudomonas aeruginosa e foi considerada fármaco de escolha para infecções graves causadas por espécies de Klebsiella, Enterobacter, Proteus, Providencia, Serratia e Haemophylus. Entre elas, infecções biliares, ósseas e nas articulações, fibrose cística (infecções do trato respiratório), endoftalmites, infecções em pacientes imunodeprimidos (neutropênicos), meningite, peritonite, pneumonia, septicemia, infecções da pele (queimaduras e ulcerações) e infecções do trato urinário. As propriedades favoráveis da ceftazidima são penetração eficiente na parede celular bacteriana, resistência à degradação enzimática pelas bactérias, amplo espectro de atividade, toxicidade muito baixa, extensa penetração nos tecidos, estabilidade metabólica e baixa taxa de ligação a proteínas plasmáticas. A ceftazidima é de administração injetável como sal sódico ou em solução com arginina, sendo amplamente distribuída nos tecidos e fluidos; ela atravessa a placenta e é distribuída no leite materno. A penetração no humor aquoso do olho é relativamente boa após administração sistêmcia de ceftazidima. Há algumas evidências de que concentrações suficientes para terapia de infecções oculares causadas por microrganismos gram-positivos ou gram-negativos podem ser obtidas após administração sistêmica. Apesar de a ceftazidima ser bem estudada no que se refere à atividade terapêutica e comercialização, há somente um método oficial farmacopéico para sua quantificação por cromatografia líquida de lata eficiência.
Ceftazidime is a semisynthetic cephalosporin of the third generation with high antibacterial activity, widely used in the treatment of commonly-occurring bacterial infections, including indole-positive Proteus species and Pseudomonas aeruginosa and have been considered to be the drugs of choice for serious infections caused by Klebsiella, Enterobacter, Proteus, Providencia, Serratia and Haemophylus species. They include biliarytract infections, bone and joint infections, cystic fibrosis (respiratory-tract infections), endophthalmitis, infections in immunocompromised patients (neutropenic patients), meningitis, peritonitis, pneumonia, septicaemia, skin infections (including burns, ulceration) and urinary-tract infections. The favorable properties of ceftazidime include efficient penetration of the bacterial cell wall, resistance to bacterial enzyme degradation, a broad spectrum of activity, very low toxicity, extensive tissue penetration, metabolic stability, and a low degree of serum protein binding. Ceftazidime is administrated by injection as the sodium salt or in solution with arginine and is widely distributed in body tissues and fluids; it crosses the placenta and is distributed into breast milk. Penetration into the aqueous humor of the eye is relatively good after systemic administration of ceftazidime. There is some evidence that concentrations sufficient for therapy of ocular infections due to gram-positive and certain gram-negative microorganisms can be achieved after systemic administration. Although ceftazidime has been studied in terms of therapeutic activity and commercialized, there is only one official pharmacopoeial monograph on its quantification by high performance liquid chromatography.

Submitted by TIAGO CASELLA null (tiago_casella@yahoo.com.br) on 2016-11-23T17:21:44Z No. of bitstreams: 1 Tese - biblioteca.pdf: 2980158 bytes, checksum: 5d23fec311f66bb459c291f4a63a4749 (MD5)
Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-11-29T11:28:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 casella_t_dr_sjrp.pdf: 2980158 bytes, checksum: 5d23fec311f66bb459c291f4a63a4749 (MD5)
Made available in DSpace on 2016-11-29T11:28:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 casella_t_dr_sjrp.pdf: 2980158 bytes, checksum: 5d23fec311f66bb459c291f4a63a4749 (MD5) Previous issue date: 2016-11-03
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
A resistência a cefalosporinas de espectro estendido (ESC) mediada pela produção de β-lactamases de espectro estendido (ESBL) por Enterobacteriaceae é um problema de saúde pública global. Neste contexto, o aumento da resistência a ESC entre Escherichia coli isoladas de animais de produção é uma questão importante, uma vez que bactérias comensais de animais de produção podem contaminar os produtos alimentícios e chegar ao intestino humano via cadeia alimentar. O Brasil é um importante produtor e o maior exportador de carne de frango no mundo. Assim, é de extrema importância monitorar a presença dessas bactérias neste setor alimentar. No presente estudo, foi realizada uma comparação do genótipo de resistência a ESC em E. coli isoladas a partir de carnes de frango no Brasil e na França, considerando que não há relação comercial de carne de frango entre esses dois países. Esta abordagem pode ser útil para compreender as dinâmicas dos fatores de resistência na cadeia de produção de frangos. Além disso, linhagens isoladas do trato gastrointestinal de frangos no Brasil foram também estudadas. Para isso, amostras de carnes de frango de diferentes pontos do varejo e swabs de cloaca de frangos de três diferentes fazendas foram coletadas no Estado de São Paulo, Brasil. Também, amostras de carnes de frango de diferentes pontos do varejo de Lyon, França, foram amostradas. As amostras de carne e os swabs de cloaca de frangos foram inoculados em ágar MacConkey acrescido com ESC. As colônias foram identificadas por sistema automatizado, e a suscetibilidade aos antimicrobianos foi testada por disco-difusão. PCR para detecção de genes blaESBL e blapAmpC e para a determinação dos grupos filogenéticos de E. coli foram realizadas. Os genes bla foram sequenciados e os plasmídeos foram caracterizados pelo esquema PBRT e por southern blot/hibridação de géis de PFGE-S1. Quase todas as carnes de frango apresentaram, ao menos, uma linhagem de E. coli resistente a ESC, e 53,8% dos frangos analisados também estavam colonizados por E. coli resistente a ESC. Resistência a aminoglicosídeos, fenicóis, quinolonas, sulfonamidas, tetraciclina e trimetoprim também foi detectada. Um total de 60 linhagens isoladas de amostras do Brasil foram estudadas, e o gene blaCTX-M-2 foi o principal responsável pela resistência a ESC, mas blaCTX-M-55, blaCMY-2, blaCTX-M-15 e blaCTX-M-8 também foram detectados. De 77 linhagens isoladas de amostras de carne de frango da França, o gene blaCTX-M-1 foi o principal responsável pela resistência a ESC, mas blaTEM-52, blaCMY-2 e blaSHV-12 também foram detectados. A maioria dos blaCTX-M-2 estão associados à ISCR1 e a integrons complexos de classe 1, e blaCTX-M-1, blaCTX-M-15, blaCTX-M-55, e os oito blaCMY-2 do Brasil estão precedidos pela ISEcp1. O gene blaCTX-M-8 está associado à IS10. Nas amostras do Brasil, um gene blaCTX-M-2 é carreado por um plasmídeo IncHI2/P, blaCTX-M-8 por um plasmídeo IncI1, um gene blaCTX-M-15 por um plasmídeo IncX1, e os genes blaCTX-M-55 por plasmídeos IncFII ou IncN/FII. Nas amostras de carnes de frango da França, os genes blaCTX-M-1 são carreados por plasmídeos IncI1 ou IncFII, blaTEM-52 por plasmídeos IncI1 ou IncX1, blaCMY-2 por plasmídeos IncA/C ou IncK, e o gene blaSHV-12 por um plasmídeo IncI1. Todos os quatro principais grupos filogenéticos de E. coli (A, B1, B2, D) foram detectados, porém o filogrupo D foi predominante entre as linhagens do Brasil, e os filogrupos D, A e B1 foram igualmente distribuídos nas linhagens recuperadas na França. Em resumo, E. coli presentes na cadeia de produção de frangos carreiam genes de ESBL e de AmpC plasmideal, e genes, plasmídeos e linhagens resistentes a antimicrobianos parecem ser específicos em cada região geográfica.
Resistance to extended spectrum cephalosporins (ESC) mediated by the production of extended-spectrum β-lactamases (ESBL) by Enterobacteriaceae is a global public health concern. In this context, the raise in ESC-resistance among Escherichia coli isolated from food-producing animals is an important issue, since commensal bacteria from producing animals may contaminate food products and reach the human gut through the food chain. Brazil is an important producer and the greatest exporter of chicken meat in the world, so, it is of utmost importance to monitor the presence of these bacteria in this food sector. In this study, a comparison of the resistance genotype to ESC in E. coli isolated from chicken meat produced in Brazil and France was performed, considering that there is no commercial relationship of chicken meats between these countries. This approach may be useful to understand the dynamics of the resistance factors in chicken production chain. Also, isolates from cloacal swabs collected in Brazil were studied. For this, samples of chicken meat from different markets and chicken cloacal swabs from three separate farms were sampled in the State of São Paulo, Brazil. In addition, chicken meat samples were acquired from markets in Lyon, France. Meat samples and cloacal swabs were inoculated on MacConkey agar supplemented with ESC. Colonies were identified by an automated system, and antimicrobial susceptibility was tested by disc diffusion. PCRs for detection of blaESBL and blapAmpC genes were performed and phylogenetic groups were determined. The bla genes were sequenced, and plasmids were characterized by rep-typing and southern blot/hybridization on S1-PFGE gels. Almost all pieces of chicken meat presented at least one ESC-resistant E. coli, and 53.8% of chickens were also colonized by ESC-resistant E. coli. Resistance to phenicols, quinolones, aminoglycoside and sulphonamides was also detected. A total of 60 strains isolated from Brazilian samples was studied and the blaCTX-M-2 gene was the main responsible for the ESC-resistance, but blaCTX-M-55, blaCMY-2, blaCTX-M-15 and blaCTX-M-8 were also detected. From 77 strains isolated from chicken meat samples from France, the blaCTX-M-1 gene was the main responsible for ESC-resistance, but blaTEM-52, blaCMY-2 and blaSHV-12 were also detected. Most of blaCTX-M-2 were associated to ISCR1 and complex class 1 integrons, and blaCTX-M-1, blaCTX-M-15, blaCTX-M-55, and the eight blaCMY-2 from Brazil were preceded by ISEcp1. The blaCTX-M-8 gene was associated to IS10. In samples from Brazil, one blaCTX-M-2 gene was harbored by an IncHI2/P plasmid, blaCTX-M-8 was carried by an IncI1 plasmid, one blaCTX-M-15 was carried by an IncX1 plasmid, and the blaCTX-M-55 genes were harbored by IncFII or IncN/FII plasmids. In chicken meats from France, the blaCTX-M-1 genes were harbored by IncI1 or IncFII plasmids, blaTEM-52 were carried by IncI1 or IncX1 plasmids, blaCMY-2 were carried by IncA/C or IncK plasmids, and the blaSHV-12 gene was harbored by an IncI1 plasmid. All four major phylogenetic groups (A, B1, B2, D) were present, but phylogroup D was predominant among strains from Brazil, and phylogroups D, A and B1 were equally distributed in strains recovered in France. In summary, E. coli in the chicken production chain carry genes for ESBL and plasmidic AmpC, and genes, plasmids and antimicrobial resistant strains seem to be specific for each geographic region.

Orientador: Mara Corrêa Lelles Nogueira
Coorientador: Gabriel Osvaldo Gutkind
Coorientador: Jean-Yves Madec
Banca: Angelo Berchieri Junior
Banca: Renata Katsuko Takayama Kobayashi
Banca: Leonardo Neves de Andrade
Banca: Nilton Erbet Lincopan Huenuman
Resumo: A resistência a cefalosporinas de espectro estendido (ESC) mediada pela produção de β- lactamases de espectro estendido (ESBL) por Enterobacteriaceae é um problema de saúde pública global. Neste contexto, o aumento da resistência a ESC entre Escherichia coli isoladas de animais de produção é uma questão importante, uma vez que bactérias comensais de animais de produção podem contaminar os produtos alimentícios e chegar ao intestino humano via cadeia alimentar. O Brasil é um importante produtor e o maior exportador de carne de frango no mundo. Assim, é de extrema importância monitorar a presença dessas bactérias neste setor alimentar. No presente estudo, foi realizada uma comparação do genótipo de resistência a ESC em E. coli isoladas a partir de carnes de frango no Brasil e na França, considerando que não há relação comercial de carne de frango entre esses dois países. Esta abordagem pode ser útil para compreender as dinâmicas dos fatores de resistência na cadeia de produção de frangos. Além disso, linhagens isoladas do trato gastrointestinal de frangos no Brasil foram também estudadas. Para isso, amostras de carnes de frango de diferentes pontos do varejo e swabs de cloaca de frangos de três diferentes fazendas foram coletadas no Estado de São Paulo, Brasil. Também, amostras de carnes de frango de diferentes pontos do varejo de Lyon, França, foram amostradas. As amostras de carne e os swabs de cloaca de frangos foram inoculados em ágar MacConkey acrescido com ESC. As colônias foram identificadas por sistema automatizado, e a suscetibilidade aos antimicrobianos foi testada por disco-difusão. PCR para detecção de genes blaESBL e blapAmpC e para a determinação dos grupos filogenéticos de E. coli foram realizadas. Os genes bla foram sequenciados e os plasmídeos foram caracterizados pelo esquema PBRT e por southern blot/hibridação de...
Abstract: Resistance to extended spectrum cephalosporins (ESC) mediated by the production of extended-spectrum β-lactamases (ESBL) by Enterobacteriaceae is a global public health concern. In this context, the raise in ESC-resistance among Escherichia coli isolated from foodproducing animals is an important issue, since commensal bacteria from producing animals may contaminate food products and reach the human gut through the food chain. Brazil is an important producer and the greatest exporter of chicken meat in the world, so, it is of utmost importance to monitor the presence of these bacteria in this food sector. In this study, a comparison of the resistance genotype to ESC in E. coli isolated from chicken meat produced in Brazil and France was performed, considering that there is no commercial relationship of chicken meats between these countries. This approach may be useful to understand the dynamics of the resistance factors in chicken production chain. Also, isolates from cloacal swabs collected in Brazil were studied. For this, samples of chicken meat from different markets and chicken cloacal swabs from three separate farms were sampled in the State of São Paulo, Brazil. In addition, chicken meat samples were acquired from markets in Lyon, France. Meat samples and cloacal swabs were inoculated on MacConkey agar supplemented with ESC. Colonies were identified by an automated system, and antimicrobial susceptibility was tested by disc diffusion. PCRs for detection of blaESBL and blapAmpC genes were performed and phylogenetic groups were determined. The bla genes were sequenced, and plasmids were characterized by rep-typing and southern blot/hybridization on S1-PFGE gels. Almost all pieces of chicken meat presented at least one ESC-resistant E. coli, and 53.8% of chickens were also colonized by ESC-resistant E. coli. Resistance to phenicols, quinolones, aminoglycoside and ...
Doutor

La resistència als antimicrobians és un procés natural, que com a conseqüència del seu ús ha afavorit la selecció de mutants, l'adquisició de gens de resistència i el sobrecreixement de bacteris intrínsecament resistents als antimicrobians.
Els β-lactàmics són una de les famílies més emprades en la pràctica clínica, essent el mecanisme enzimàtic el mecanisme de resistència més important. En enterobacteris els enzims que prenen més importància són les β-lactamases d'espectre ampliat (BLEA) i les cefamicinases (pAMPCt).
L'objectiu d'aquest treball fou determinar la prevalença d'aquests enzims en els enterobacteris aïllats a L'Hospital de la Santa Creu i Sant Pau en el període comprés entre 1994 i 2004.
Els estudis de sensibilitat en Escherichia coli i Klebsiella pneumoniae mostren un clar increment de la resistència a cefalosporines de tercera generació (C3G) i aztreonam, fruit d'una major prevalença de soques portadores de BLEA i pAMPCt. La prevalença de soques productores de BLEA en el decenni 1994-2004 ha estat del 1,1% i del 1,6%, respectivament. Les BLEA més freqüents en E. coli han estat les del grup CTX-M (77,5%), essent l'enzim CTX-M-9 el més descrit (43%) mentre que en K. pneumoniae tant les BLEA del grup CTX-M com les SHV han tingut una prevalença similar (50%). K. pneumoniae portador de BLEA ha estat, i encara és, majoritàriament, un patogen nosocomial. En ambdues espècies, les pAMPCt han presentat, respectivament, una prevalença del 0,16%.i del 0,22% amb una clara presència de soques portadores de CMY-2.
Els estudis de sensibilitat mostren que en les espècies amb una β-lactamasa cromosòmica induïble tipus AmpC (Enterobacter, Citrobacter freundii i Morganella morganii) no hi ha hagut un increment de la resistència a C3G, indicatiu d'una possible desrepressió de l'enzim, essent el percentatge de soques amb fenotip de desrepressió del voltant del 30% en Enterobacter i C. freundii i del 7,5% en M. morganii.
En Klebsiella oxytoca el principal mecanisme implicat és la hiperproducció de llur β-lactamasa cromosòmica que confereix resistència a l'aztreonam. La prevalença d'aquest mecanisme ha incrementat d'un 4% a un 44%. Per altra banda, s'han trobat dues soques productores de BLEA (CTX-M-9 i CTX-M-32).
En Proteus mirabilis, s'ha pogut observat al llarg dels deu anys un lleuger increment de la resistència a l'associació amoxicil·lina-àcid clavulànic i de manera puntual l'aparició de soques productores de pAmpCt (tres soques amb CMY-2) o de BLEA (una soca amb CTX-M-1).
En Salmonella enterica cal destacar l'aïllament de tres soques productores de BLEA (dues CTX-M-9 i una CTX-M-14) i una soca productora de CMY-2.
La resistència a carbapenems ha estat pràcticament nul·la en totes les espècies estudiades. Malauradament, la resistència als β-lactàmics va associada a la resistència a d'altres famílies d'antimicrobians. Les soques productores de BLEA presentaven uns percentatges de resistència a fluoroquinolones, tetraciclina, trimetoprim-sulfametoxazol, cloramfenicol i aminoglicòsids, del 84%, 56%, 52%, 35% i 14%, respectivament mentre que les soques productores de cefamicinasa presentaven uns percentatges de resistència a cloramfenicol, fluoroquinolones, aminoglicòsids, trimetoprim-sulfametoxazol i tetraciclina del 85%, 77%, 67%, 57%, i, 56%, respectivament. De l'estudi de les resistències associades dels antibiòtics no β-lactàmics a la producció de BLEA o pAmpCt no s'ha obtingut un patró predominant associat a cada tipus de β-lactamasa.
Antimicrobial resistance is a natural process but the abuse and misuse of antimicrobial agents has favored the selection of mutants, the acquisition of resistance and the overgrowth of bacteria intrinsically resistant to these drugs. β-lactams (as cephalosporins) are one of the most widely used agents in clinical practice and their main mechanism of resistance by the bacteria is the production of enzymes known as β-lactamases. In Enterobacteriaceae, the Extended-Spectrum-β-lactamases (ESBLs) and plasmid-mediated AmpC enzymes (pAmpCt) are the most relevant of these enzymes.
The aim of this study was to determine the prevalence and diversity of Extended-Spectrum-β-lactamases (ESBLs) and plasmid-mediated AmpC enzymes (pAmpCt) isolated from Enterobacteriaceae at Hospital de la Santa Creu i Sant Pau between 1994 and 2004.
Results of the susceptibility studies in Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae showed a clear increase in third generation cephalosporins (C3G) and aztreonam resistance due to a major prevalence of ESBLs- and pAmpCt-producing strains. The prevalence of ESBL-producing strains from 1994 to 2004 was between 1.11% and 1.6%. In E. coli, the ESBL CTX-M-type was the most frequent (77.5%) due to CTX-M-9-producing strains (43%). In K. pneumoniae, the CTX-M-type as well as the SHV-type had the same prevalence (50%). The prevalence of pAmpC-t in both species increased from 0.16% to 0.22%, with a clear presence of the CMY-2 enzyme.
We did not observe an increase in C3G resistance in the chromosomally-depressed AmpC beta-lactamase-producing strains such as Enterobacter, Citrobacter freundii or Morganella morganii. Prevalence was about 30% in Enterobacter and C. freundii and 7.5% in M. morganii.
In Klebsiella oxytoca, the main mechanism involved in β-lactam resistance was the depression of its chromosomal β-lactamase, observable because the strains become resistant to aztreonam. The prevalence of this mechanism increased from 4 to 44%. We also found two ESBL-producing strains (CTX-M-9 and CTX-M-32).
In Proteus mirabilis, we isolated one ESBL-producing strain (CTX-M-1), and observed a slight increase in coamoxiclav resistance due to three CMY-2 producing strains.
In Salmonella enterica three ESBL- producing strains (two CTX-M-9 and one CTX-M-14) and one CMY-2-producing strain were found.
β-lactam resistance was associated with other antimicrobial drug resistance. ESBL-producing strains showed rates of resistance to fluoroquinolones, tetracycline, trimethoprim-sulfamethoxazole, chloramphenicol and aminoglycosides of 84%, 56%, 52%, 35% and 14%, respectively. pAmpCt-producing strains showed rates of resistance to chloramphenicol, fluoroquinolones, aminoglycosides, tetracycline and trimethoprim-sulfamethoxazole of 85%, 77%, 67%, 57% and 56%, respectively. No predominant pattern was associated to β-lactams resistance in ESBL or pAmpCt-producing strains.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico
The currently incorrect and excessive consumption of pharmaceuticals and surfactants, mainly domestic usage, has become a concern to the scientific community around the world, due to the environmental consequences with regard to the bacterial resistance (characteristic of antibiotics), and alteration of hormonal systems (provoked by the degradation products of nonylphenols polyethoxylates (NPEO)). Hence, research about the behaviour of these xenobiotics has become necessary. In this study, the degradation of cephalosporins (cefazolin and ceftazidime) in synthetic solution and in hospital wastewater by photolysis was investigated as well as the removal of non-ionic surfactant nonylphenol ethoxylate (NP9EO) by electrocoagulation, in synthetic solution and also as a component of effluent discharge, evaluating the possible formation of the endocrine disruptor 4-nonylphenol (NP). In addition to the studies of degradation, methodologies of determination were adapted with the objective of evaluating the presence of these contaminants ih hospital wastewater. The studied process parameters were: concentration of cefazolin, ceftazidime, NP9EO and NP (measured by high performance liquid chromatography - HPLC and liquid chromatography with detector coupled to a mass spectrometer - LC-MS), dissolved organic carbon (DOC), chemical oxygen demand (COD), toxicity (luminescent test by Vibrio fischeri) and biodegradability (Closed Bottle Test (CBT) and Manometric Respirometry test). The methodology of determination and pre-concentration, adapted for the substances employed, demonstrated to be adequate. The concentration of NP9EO in the effluent collected exhibited a variation between 0,075 mg L-1 and 4.1 mg L-1. The compound NP was not detected in any of the samples. Due to difficulty in the determination of beta-lactamics antibiotics (which can be susceptible to hydrolysis) it was not possible to find the cephalosporins in hospital effluent. Initial studies were carried out with the aim to investigate the products of transformation of these compounds in complex matrices. It was verified the possibility of the presence of species generated from the cephalosporanic antibiotics in the effluent. For the photolysis experiments of the antibiotics in synthetic solution, a reactor with a capacity of 1 L, with a cooling system and mercury lamp (150 W) was used. Solutions containing 10 mg L-1 of cefazolin and ceftazidime in differents pH (4, 7 and 9) were submeted for 1 hour to the process and degradations up to 90% were reached. The kinetics of reaction proved to be of the first order. The decay of DOC reached around 75% in one hour of photoprocess. In hospital effluent, cephalosporins degradations of over 96% were found, after 1 hour of photolysis, and almost no decay of COD, lower than 10%, was observed. The experiments of electrocoagulation of the synthetic solution and hospital effluent containing NP9EO were carried out in stirred tank reactor, 500 mL capacity, with cooling, aluminum electrodes and distance between electrodes of 3.5 cm. Current of 1.5 A was applied in solutions containing 20 and 40 mg L-1. Removal of the NP9EO in synthetic solution was 95% after 30 min, proving to be the first order of kinetics. The presence of NP was not identified in eletrocoagulated solution for 30 min, but the formation of other by-products of degradation such as NP1EC, also recognized for having estrogenic activity probably occurred. In hospital effluent, removal of NP9EO was 89% while the COD reached a decay of 26% after 30 min of electrocoagulation. In order to evaluate the biodegradability of cephalosporins, before and after photolysis, Closed Bottle Test (CBT) was employed. Similarly the manometric respirometry test was used to predict the biodegradability of NP9EO before and after electrocoagulation process. According to the tests, all xenobiotics investigated, can not be classified as readily biodegradable. Toxicity tests with Vibrio fischeri were applied to the pharmaceuticals, before and after the photolysis experiments; An increase in toxicity was observed, but more extensive tests should be realized. It was verified that direct photolysis can degrade quickly, the two cephalosporins in both aqueous solution and in hospital wastewater, but the results of toxicity showed a higher toxicity of photolysis products. It was also observed that species originated form the cephalosporins may be present in the effluent. It is not known whether these species generated, (as the products formed after photolysis), are more toxic, so further research on the behavior of these drugs should be performed. The NP9EO was removed successfully by electrocoagulation, in aqueous solution and hospital effluent and there is no formation of the endocrine disruptor NP, after applying this treatment. However, degradation products were detected, and there is a possibility NP1EC formation, that similar to NP, can cause changes in hormone systems. Despite the formation of some by-products, through improved experimental conditions for electrocoagulation, it was concluded, that this process is very suitable for recalcitrant effluents treatments and can reasonably remove the organic matter, especially when used with other concomitant treatments.
O consumo atual excessivo e equivocado de medicamentos e surfactantes, principalmente de uso doméstico, vêm preocupando a comunidade científica de todo o mundo, em especial, devido às conseqüências ambientais relacionadas à resistência bacteriana (característica dos antibióticos) e à alteração de sistemas hormonais (também induzidas pelos produtos de degradação dos nonilfenóis polietoxilados, NPEO). Desta forma, pesquisas sobre o comportamento destes xenobióticos no ambiente tornam-se necessárias. Neste trabalho, estudou-se a degradação de cefalosporinas (cefazolina e ceftazidima), em solução sintética e em efluente hospitalar, por meio de fotólise, e, a remoção do surfactante não-iônico nonilfenol etoxilado (NP9EO), através de eletrocoagulação, em solução sintética e, também, como constituinte de efluente hospitalar - avaliando-se a possível formação do disruptor endócrino 4-nonilfenol (NP). Além dos estudos de degradação, metodologias de determinação foram adaptadas com o intuito de avaliar a presença de tais contaminantes no efluente hospitalar. Os parâmetros de processo estudados foram: concentração de cefazolina, ceftazidima, NP9EO e NP (determinada por meio de cromatografia líquida de alta eficiência - HPLC - e cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas LC-MS), carbono orgânico dissolvido (COD), demanda química de oxigênio (DQO), toxicidade (teste de luminescência por meio de Vibrio fischeri) e biodegradabilidade (Closed Bottle Test (CBT) e Teste Respirométrico Manométrico). As etapas de determinação e pré-concentração adotadas para as substâncias estudadas se mostraram adequadas. A concentração do NP9EO nas amostras de efluente coletadas variou de 0,075 mg L-1 a 4,1 mg L-1. O composto NP não foi detectado em nenhuma das amostras. Devido à dificuldade de determinação de antibióticos b-lactâmicos, conhecidos pela susceptibilidade à hidrólise, não foi possível encontrar cefalosporinas no efluente hospitalar. Estudos iniciais foram conduzidos com o objetivo de investigar os produtos de transformação destes compostos em matrizes complexas. Foi verificado a possibilidade da presença de espécies formadas a partir dos antibióticos cefalosporânicos no efluente. Para os experimentos de fotólise dos antibióticos, em solução sintética, foi utilizado um reator com capacidade para 1 L, com sistema de resfriamento e lâmpada de mercúrio (150 W). Soluções contendo 10 mg L-1 de cefazolina e ceftazidima em diferentes pH (4, 7 e 9) foram submetidas a 1 h de processo, e degradações superiores a 90% foram alcançadas. A cinética de reação demonstrou ser de primeira ordem. O abatimento de COD, foi da ordem de 75%, em 1 hora de fotoprocesso. Em efluente hospitalar, degradações acima de 96% foram obtidas para as cefalosporinas, após 1 hora de fotólise, mas quase não houve decaimento de DQO (abaixo de 10%). Os experimentos de eletrocoagulação da solução sintética e efluente hospitalar contendo NP9EO foram feitos em reator tipo tanque agitado, de 500 mL de capacidade, com resfriamento, eletrodos de alumínio e distância entre os eletrodos de 3,5 cm. Foi aplicada corrente de 1,5 A em soluções contendo 20 e 40 mg L-1. A remoção do NP9EO em solução sintética foi de 95%, em 30 min, verificando-se cinética de reação de primeira ordem. A presença de NP não foi detectada na solução eletrocoagulada por 30 min, mas, provavelmente, ocorreu a formação de outros subprodutos de degradação, como o NP1EC, também conhecido por possuir atividade estrogênica. Em efluente hospitalar, a remoção do NP9EO foi de 89%, enquanto que a DQO obteve decaimento de 26%, após 30 min de eletrocoagulação. Com o objetivo de avaliar a biodegradabilidade das cefalosporinas, antes e após a fotólise, foi empregado Closed Bottle Test (CBT). Da mesma maneira, o teste respirométrico manométrico foi utilizado para prever a biodegradabilidade do NP9EO, antes e após eletrocoagulação. De acordo com os testes, todos os xenobióticos investigados, não podem ser classificados como prontamente biodegradáveis. Testes de toxicidade com Vibrio fischeri foram aplicados aos fármacos, antes e após os experimentos de fotólise; um aumento de toxicidade foi observado, porém, testes mais abrangentes precisam ser realizados. Verificou-se que a simples fotólise consegue degradar, rapidamente, as cefalosporinas, tanto em solução sintética como em efluente hospitalar, mas os resultados de toxicidade demonstraram maior toxicidade dos produtos de fotólise (após tratamento de 60 min apenas). Ainda foi observado que espécies originadas das cefalosporinas podem estar presente no efluente. Não foi possível determinar-se se estas espécies geradas podem ser mais tóxicas (assim como os produtos pósfotólise), sendo necessária pesquisa mais aprofundada neste ponto. O NP9EO foi removido com sucesso através de eletrocoagulação, em solução aquosa e no efluente hospitalar e não há a formação do disruptor endócrino NP após a aplicação deste tratamento. No entanto, foram detectados produtos de degradação e existe a possibilidade da formação do NP1EC, que, assim como o NP, pode causar alteração em sistemas hormonais. Apesar da formação de alguns subprodutos, pode-se concluir que a eletrocoagulação é um processo bastante adequado para o tratamento de efluentes recalcitrantes desde que seja adequadamente otimizado para obter-se o resultado desejado, podendo eliminar em grande parte a carga orgânica, especialmente, se aplicada associada a outros tratamentos complementares.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-04-04Bitstream added on 2014-06-13T20:33:02Z : No. of bitstreams: 1 pedroso_tm_me_arafcf_parcial.pdf: 91662 bytes, checksum: f5c6c2b00880819f56fc5a7a78654f9d (MD5) Bitstreams deleted on 2015-04-13T18:26:27Z: pedroso_tm_me_arafcf_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-04-13T18:27:06Z : No. of bitstreams: 1 000712772.pdf: 1022206 bytes, checksum: 44846063b688caab618840158e9fc515 (MD5)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
Os antimicrobianos têm um papel fundamental no controle de doenças infecciosas. As cefalosporinas se mantêm como uma classe de antimicrobianos que se sobressaem pela sua importância terapêutica, elevada frequência de utilização, segurança e efetividade contra um amplo espectro microbiano. A cefazolina sódica (CFZ) é um agente antimicrobiano β-lactâmico, classificada como cefalosporina de primeira geração, muito utilizado como agente terapêutico e na profilaxia perioperatória. Neste trabalho foram desenvolvidos novos métodos analíticos para análise qualitativa e para a quantificação de cefazolina sódica, visando a obtenção de métodos mais rápidos, mais seguros para os operadores, mais econômicos e de fácil execução, que são essenciais para a análise desta cefalosporina na indústria farmacêutica. Na análise qualitativa, a cefazolina foi estudada quanto a sua solubilidade, ponto de fusão, pH, espectrofotometria na região do ultravioleta (UV) e na região de infravermelho (IV), cromatografia em camada delgada e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), possibilitando a identificação da amostra. Para quantificação do fármaco três métodos foram validados. O método espectrofotométrico na região do ultravioleta foi validado utilizando o comprimento de onda de 270 nm, com faixa linear de concentração de 8 a 28 μg/mL utilizando água purificada como solvente, o teor foi de 99,10% e a exatidão foi de 100,56%. Ensaio microbiológico por método turbidimétrico utilizou o micro-organismo Staphylococcus aureus ATCC 26923, com faixa linear de 6 a 11,46 μg/mL e apresentou potência de 100,07% e exatidão foi 99,92%. A validação do método por CLAE foi realizada empregando fase móvel composta por água purificada e acetonitrila (60:40 v/v), com pH 8 ajustado com trietilamina (TEA), no comprimento de onda...
The antimicrobials have a crucial role in the control of infectious diseases. Cephalosporins remain one class of antimicrobials that stand out for their therapeutic importance, high frequency of use, safety and effectiveness against a broad microbial spectrum. Cefazolin sodium (CFZ) is a β-lactam antimicrobial agent, classified as first-generation cephalosporin, often used as a therapeutic agent and for perioperative prophylaxis. In this work, new analytical methods were developed for qualitative and quantitative analysis of cefazolin sodium in lyophilized powder, seeking obtain method faster, safer for operators, more economical and easiness of implementation, which are essential for the analysis of this cephalosporin in pharmaceutical industry. For qualitative analysis, several methods were performed, including analyzes of solubility, melting point and pH; ultraviolet (UV) and infrared (IR) spectrophotometry; thin layer chromatography and high performance liquid chromatography (HPLC) allowing the identification of samples. For quantification of the drug, three analytical methods were validated. The spectrophotometric method in the ultraviolet region was validated at 270 nm, with a linear range of concentration from 8 to 28 mg/mL, using purified water as solvent, the content of 99.10% accuracy of 100.56%. In the microbiological assay by turbidimetric method, Staphylococcus aureus ATCC 26923 was used as microrganism test, with linear range from 6 to 11.46 mg/mL, the method presented potency of 100.07% and accuracy of 99,92%. Validation of the HPLC method consisted of mobile phase composed of purified water and acetonitrile (60:40 v/v), adjusted to pH 8 with triethylamine (TEA), and detection wavelength of 270 nm, yielding a retention time of 3.6 minutes in the linear range evaluated from 30 to 80 μg/mL, content... (Complete abstract click electronic access below)

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Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Universidade Estadual Paulista (UNESP)
A cefuroxima sódica (CAS 56238-63-2) é uma cefalosporina de segunda geração, indicada nas infecções provocadas por micro-organismos Gram-positivos e Gram-negativos. Apesar deste fármaco ser altamente estudado e pesquisado no que concerne à atividade antimicrobiana, farmacocinética e farmacodinâmica, há poucos estudos na literatura em relação ao desenvolvimento de metodologia analítica para esta cefalosporina. Desta forma, pesquisas envolvendo métodos analíticos são de fundamental importância e altamente relevantes para otimizar sua análise na indústria farmacêutica e garantir a qualidade do produto já comercializado. Neste trabalho foram desenvolvidas e validadas técnicas de análise para cefuroxima sódica forma farmacêutica injetável: (i) espectrofotometria na região do UV a 280,0 nm com faixa de concentração 5,0 a 14,0 μg/mL, utilizando água como solvente, com exatidão de 100,82% e teor de 99,49%; (ii) doseamento microbiológico, método de difusão em ágar na faixa de concentração de 30,0 a 120,0 μg/mL, utilizando Micrococcus luteus ATCC 9341, com exatidão de 100,77% e teor de 99,96%; (iii) doseamento microbiológico, método turbidimétrico na faixa de concentração de 30,0 a 120,0 μg/mL, utilizando Micrococcus luteus ATCC 9341, com exatidão 100,21% e teor de 99,97%; (iv) espectrofotometria na região do visível a 510,0 nm, com concentração de 100,0 a 300,0 μg/mL utilizando o-fenantrolina como ligante, com exatidão de 99,98% e teor de 99,82%; (v) espectrofotometria na região do IV, com exatidão de 99,83% e teor de 100,25%; (vi) acidimetria, com exatidão de 100,32% e teor de 100,51%; (vii) volumetria em meio nãoaquoso, com exatidão de 100,40% e teor de 100,86%; (viii) iodometria, com exatidão de 99,97% e teor de 100,27%; (ix) cromatografia líquida de alta eficiência com detector UV a 280,0 nm, utilizando metanol:água (70:30) como fase...
Cefuroxime sodium (CAS 56238-63-2) is a second generation cephalosporin indicated in the infections caused by Gram-positive and Gram-negative microorganisms. Although this drug highly to be studied and to be searched with respect to the antimicobial pharmacokinetics and pharmacodynamics activity, there are few studies in relation to the development of analytical methodology for this cephalosporin in literature. In such a way, research involving highly excellent analytical methods is very important to optimize its analysis in the pharmaceutical industry and to guarantee the commercialized product quality. In this work, analytical methods for determination of cefuroxime injectable were validated: (i) UV spectrophotometry at 280 nm with concentration range of 5.0 a 14.0 μg/mL using water as solvent, with accuracy of 100.8% and quantitation of 99.49%; (ii) microbiological assay, agar diffusion method and (iii) turbidimetric method at concentration range 30.0 to 120.0 μg/mL, using Micrococcus luteus ATCC 9341 as indicator microorganism, accuracy 100.77%, quantitation of 99.96% and accuracy of 100.21% and quantitation 99.97%, respectively; (iv) visible spectrophotometric method at 510.0 nm with concentration range of 100.0 at 300.0 μg/mL, using o-phenantrolin as reagent, with accuracy of 99.98% and quantitation of 99.82%; (v) IR spectrophotometry, accuracy of 99.83% and quantitation of 100.25%; (vi) acidimetry, accuracy of 100.32% and quantitation of 100.51%; (vii) volumetry ina a non aqueous, accuracy of 100.40% and quantitation of 100.86%; (viii) iodometry accuracy of 99.97% and quantitation of 100.27%; (ix) HPLC method with UV detector at 280.0 nm using methanol and water (70:30), v/v) as mobile phase and concentration range of 10.0 a 15.0 μg/mL, flow of 0.8 ml/min, accuracy of 100.10% and quantitation of 99.84% and mean retention time of 1.8 minutes. Preliminary study of sodium cefuroxime...(Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Hérida Regina Nunes Salgado
Banca: Armando da Silva Cunha Junior
Banca: Marlus Chorilli
Resumo: Os antimicrobianos têm um papel fundamental no controle de doenças infecciosas. As cefalosporinas se mantêm como uma classe de antimicrobianos que se sobressaem pela sua importância terapêutica, elevada frequência de utilização, segurança e efetividade contra um amplo espectro microbiano. A cefazolina sódica (CFZ) é um agente antimicrobiano β-lactâmico, classificada como cefalosporina de primeira geração, muito utilizado como agente terapêutico e na profilaxia perioperatória. Neste trabalho foram desenvolvidos novos métodos analíticos para análise qualitativa e para a quantificação de cefazolina sódica, visando a obtenção de métodos mais rápidos, mais seguros para os operadores, mais econômicos e de fácil execução, que são essenciais para a análise desta cefalosporina na indústria farmacêutica. Na análise qualitativa, a cefazolina foi estudada quanto a sua solubilidade, ponto de fusão, pH, espectrofotometria na região do ultravioleta (UV) e na região de infravermelho (IV), cromatografia em camada delgada e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), possibilitando a identificação da amostra. Para quantificação do fármaco três métodos foram validados. O método espectrofotométrico na região do ultravioleta foi validado utilizando o comprimento de onda de 270 nm, com faixa linear de concentração de 8 a 28 μg/mL utilizando água purificada como solvente, o teor foi de 99,10% e a exatidão foi de 100,56%. Ensaio microbiológico por método turbidimétrico utilizou o micro-organismo Staphylococcus aureus ATCC 26923, com faixa linear de 6 a 11,46 μg/mL e apresentou potência de 100,07% e exatidão foi 99,92%. A validação do método por CLAE foi realizada empregando fase móvel composta por água purificada e acetonitrila (60:40 v/v), com pH 8 ajustado com trietilamina (TEA), no comprimento de onda... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
Abstract: The antimicrobials have a crucial role in the control of infectious diseases. Cephalosporins remain one class of antimicrobials that stand out for their therapeutic importance, high frequency of use, safety and effectiveness against a broad microbial spectrum. Cefazolin sodium (CFZ) is a β-lactam antimicrobial agent, classified as first-generation cephalosporin, often used as a therapeutic agent and for perioperative prophylaxis. In this work, new analytical methods were developed for qualitative and quantitative analysis of cefazolin sodium in lyophilized powder, seeking obtain method faster, safer for operators, more economical and easiness of implementation, which are essential for the analysis of this cephalosporin in pharmaceutical industry. For qualitative analysis, several methods were performed, including analyzes of solubility, melting point and pH; ultraviolet (UV) and infrared (IR) spectrophotometry; thin layer chromatography and high performance liquid chromatography (HPLC) allowing the identification of samples. For quantification of the drug, three analytical methods were validated. The spectrophotometric method in the ultraviolet region was validated at 270 nm, with a linear range of concentration from 8 to 28 mg/mL, using purified water as solvent, the content of 99.10% accuracy of 100.56%. In the microbiological assay by turbidimetric method, Staphylococcus aureus ATCC 26923 was used as microrganism test, with linear range from 6 to 11.46 mg/mL, the method presented potency of 100.07% and accuracy of 99,92%. Validation of the HPLC method consisted of mobile phase composed of purified water and acetonitrile (60:40 v/v), adjusted to pH 8 with triethylamine (TEA), and detection wavelength of 270 nm, yielding a retention time of 3.6 minutes in the linear range evaluated from 30 to 80 μg/mL, content... (Complete abstract click electronic access below)
Mestre

La meningitis pneumocòcica és una malaltia associada a una elevada mortalitat (20-40) i a l'aparició de seqüeles neurològiques en un 30% dels pacients, nens i adults, que sobreviuen.
Des del punt de vista farmacològic, és una malaltia complicada:
- La penetració dels antibiòtics a través de la barrera hematoencefàlica és reduïda.
- Es genera una resposta inflamatòria greu en l'espai subaracnoidal, responsable del dany cerebral associat.
- L'aparició de soques de "S.pneumoniae" multiresistents no garanteix l'eficàcia del tractament empíric.
En els darrers anys s'han detectat soques amb un elevat nivell de resistència a cefalosporines de tercera generació (C3G). La baixa prevalença d'aquests aïllaments dificulta per una banda, el coneixement del seu comportament in vivo i per l'altra, la valoració de l'eficàcia dels tractaments estàndard.
En aquesta tesi s'ha demostrat la capacitat d'una soca de "S.pneumoniae" amb un elevat nivell de resistència a C3G a l'hora d'induir meningitis i provocar una resposta inflamatòria greu en el LCR en el model animal. Els nostres experiments demostren que l'adquisició de resistència antibiòtica no ha alterat ni la patogenicitat ni la virulència d'aquestes soques.
Les combinacions ceftriaxona més vancomicina, ceftriaxona més rifampicina i rifampicina més vancomicina es van revelar eficaces en la meningitis pneumocòcica per una soca amb un elevat grau de resistència a C3G, tant per la millora de l'eficàcia com per l'atenuació de la resposta inflamatòria respecte a les monoteràpies. Aquests resultats reforcen les recomanacions dels experts i proporcionen una base experimental per a que siguin aplicables en meningitis causades per "S. pneumoniae" sigui quin sigui el seu nivell de resistència a beta-lactàmics.
La fosfomicina ha demostrat una elevada penetració a través de la barrera hematoencefàlica en el model animal en conill. No obstant, el desenvolupament de resistència antibiòtica en el model experimental descarta el seu ús en monoteràpia. A més a més, en base als fracassos terapèutics observats proposem revisar els punts de tall de la sensibilitat de "S. pneumoniae" a fosfomicina en la infecció meníngia.
Les combinacions de fosfomicina estudiades han demostrat una excel·lent activitat envers dues soques de pneumococ resistent a beta-lactàmics, així com un efecte protector davant el desenvolupament de mutants resistents. A partir dels nostres resultats, recomanaríem com alternatives terapèutiques la combinació fosfomicina més ceftriaxona en pacients amb intolerància a glicopèptids o amb insuficiència renal; i la combinació fosfomicina més vancomicina en pacients al·lèrgics a beta-lactàmics.

La pasta tri antibiótica ha demostrado tener efectividad sobre Enterococcus faecalis, bacteria anaerobia facultativa identificada como una de las causas frecuentes del fracaso endodontico. La pasta es una preparación extemporánea, pero como tal no ha sido evaluada en su estabilidad. El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de la variación en la preparación y conservación de dos pastas medicadas sobre la actividad antibacteriana contra Enterococcus faecalis. Se inoculó la bacteria en 3 placas de Agar Bilis Esculina, en cada placa se realizaron 3 pozos para las pastas Tri-antibiótica, Tri-antibiótica Cefaclor y suero fisiológico. El estudio se realizó en la mañana, donde se aplicaron pastas recién preparadas, y en la tarde, con pastas preservadas por 6 horas. El experimento se repitió en dos fechas más, con insumos conservados por 14 y 28 dias respectivamente. Los resultados demostraron que las pastas tri-antibiótica y tri-antibiótica Cefaclor tienen actividad antibacteriana similar sobre Enterococcus faecalis, mientras el suero fisiológico no tuvo actividad antibacteriana. Las pastas preparadas con insumos recién obtenidos tienen mayor actividad antibacteriana en comparación con las pastas preparadas con insumos conservados. Las pastas aplicadas inmediatamente y las preservadas por 6 horas no tuvieron diferencias significativas en su actividad antibacteriana.
Tesis

Orientador: Mara Correa Lelles Nogueira
Banca: Doroti de Oliveira Garcia
Banca: Aripuanã S. Aranha Watanabe
Banca: Nilton Erbet Lincopan Huenuman
Banca: Mânlio Tasso de Oliveira Mota
Resumo: O gênero Enterobacter compreende bactérias anaeróbias facultativas, fermentadores de glicose e ubíquo na natureza. Atualmente, existem 28 espécies de Enterobacter spp que podem ser identificadas por métodos bioquímicos, moleculares ou por espectrometria de massa. As infecções mais causadas por Enterobacter spp são de pele e tecidos moles, pneumonias e bacteremias, e, para o tratamento destas, os antimicrobianos mais utilizados são carbapênemicos, cefalosporinas e quinolonas. Entretanto, a resistência aos antimicrobianos tem aumentado no gênero Enterobacter, principalmente, devido à mecanismos enzimáticos codificados por genes plasmidiais. Os objetivos deste estudo foram avaliar o perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos, investigar genes de beta-lactamases (blaTEM-like, blaSHVlike, blaVEB-like, blaPER-like, blaGES-like, blaCTX-M-like), carbapenemases (blaKPC, blaIMP, blaVIM, blaNDM, blaGES e blaOXA-48) e de enzimas que conferem resistência as quinolonas (qnrA, qnrB, qnrS, -Ib-cr e qepA) e determinar a similaridade genética entre os isolados de Enterobacter spp. Sessenta isolados de Enterobacter spp resistentes aos carbapenêmicos, cefalosporinas de terceira e quarta geração e quinolonas provenientes de pacientes admitidos em diferentes unidades de internação do Hospital de Base de São José do Rio Preto (HB) foram encaminhados ao laboratório CIM-Centro de Investigação de Microrganismos da Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto (FAMERP), onde foram realizadas a extração de DNA, a investigação dos genes por PCR e a tipagem molecular por ERIC-PCR. O gene de resistência blaKPC foi detectado em 22% dos isolados. Os genes blaTEM-like e blaCTX-Mlike em 82% e blaSHV-like em 3% dos isolados respectivamente. O grupo 1 de CTX-M foi detectado em 56,5%, do grupo 2 em 41,3% e do grupo 8/25 em 2,2% dos isolados. Os genes de resistência a quinolonas detectados foram qnrA, qnrB e qnrS em 40%, 22% 2% dos isolados...
Abstract: The Enterobacter genus comprises facultative anaerobic bacteria, glucose fermenters and ubiquitous in nature. Currently, there are 25 species of Enterobacter spp and two which can be identified by biochemical, molecular methods or by mass spectrometry. Infections caused by Enterobacter spp are skin and soft tissues, bacteremia and pneumonia, and for the treatment of these, the most commonly used antimicrobials are carbapenems, cephalosporins and quinolones. However, antimicrobial resistance has increased the Enterobacter spp mainly due to enzymatic mechanisms encoded by plasmid genes. The objectives of this study were to evaluate the antimicrobial susceptibility profile, investigate beta-lactamase genes (blaTEM-like, blaSHV-like, blaVEB-like, blaPER-like, blaGES-like, blaCTX-M-like), carbapenemases (blaKPC, blaIMP, blaVIM, blaNDM, blaGES and blaOXA-48) and enzymes that confer resistance to quinolones (qnrA, qnrB, qnrS, aac (6') - Ib-cr and qepA) and determine the genetic similarity among isolates of Enterobacter spp. Sixty isolates of Enterobacter spp resistant to carbapenems, cephalosporins ( third and fourth generation) and quinolones from patients admitted to the Base Hospital (HB), were send Laboratory - Microorganisms Research Centre the School of Medicine of São José do Rio Preto (FAMERP), where DNA extraction, the investigation of genes and molecular typing by ERIC-PCR were carried out. The blaKPC resistance gene was detected in 22% of the isolates. The genes blaTEM-like and blaCTX-M-like 82%, blaSHV-like 3% of the isolates. The group 1 CTX-M was detected in 56.5%, of group 2 in 41.3% and 8/25 group at 2.2% of the isolates. The quinolone resistance genes qnrA, qnrB, and qnrS were detected in 40% 22% 2% of the isolates, respectively. The ERIC-PCR typing by genetic generated twelve groups (G1 to G12) for E. cloacae and one group (G1) for E. aerogenes, horizontal transfer of resistance genes in some groups was observed, but the ...
Mestre

Made available in DSpace on 2016-06-07T17:12:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-03. Added 1 bitstream(s) on 2016-06-07T17:16:51Z : No. of bitstreams: 1 000864235_20180603.pdf: 404032 bytes, checksum: b266e22e2d4df6bf0f07ab059b407663 (MD5) Bitstreams deleted on 2018-06-05T12:59:17Z: 000864235_20180603.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2018-06-05T13:00:21Z : No. of bitstreams: 1 000864235.pdf: 10314327 bytes, checksum: 5298ad6b602124ea408b4e80fcc3351c (MD5)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
O gênero Enterobacter compreende bactérias anaeróbias facultativas, fermentadores de glicose e ubíquo na natureza. Atualmente, existem 28 espécies de Enterobacter spp que podem ser identificadas por métodos bioquímicos, moleculares ou por espectrometria de massa. As infecções mais causadas por Enterobacter spp são de pele e tecidos moles, pneumonias e bacteremias, e, para o tratamento destas, os antimicrobianos mais utilizados são carbapênemicos, cefalosporinas e quinolonas. Entretanto, a resistência aos antimicrobianos tem aumentado no gênero Enterobacter, principalmente, devido à mecanismos enzimáticos codificados por genes plasmidiais. Os objetivos deste estudo foram avaliar o perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos, investigar genes de beta-lactamases (blaTEM-like, blaSHVlike, blaVEB-like, blaPER-like, blaGES-like, blaCTX-M-like), carbapenemases (blaKPC, blaIMP, blaVIM, blaNDM, blaGES e blaOXA-48) e de enzimas que conferem resistência as quinolonas (qnrA, qnrB, qnrS, -Ib-cr e qepA) e determinar a similaridade genética entre os isolados de Enterobacter spp. Sessenta isolados de Enterobacter spp resistentes aos carbapenêmicos, cefalosporinas de terceira e quarta geração e quinolonas provenientes de pacientes admitidos em diferentes unidades de internação do Hospital de Base de São José do Rio Preto (HB) foram encaminhados ao laboratório CIM-Centro de Investigação de Microrganismos da Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto (FAMERP), onde foram realizadas a extração de DNA, a investigação dos genes por PCR e a tipagem molecular por ERIC-PCR. O gene de resistência blaKPC foi detectado em 22% dos isolados. Os genes blaTEM-like e blaCTX-Mlike em 82% e blaSHV-like em 3% dos isolados respectivamente. O grupo 1 de CTX-M foi detectado em 56,5%, do grupo 2 em 41,3% e do grupo 8/25 em 2,2% dos isolados. Os genes de resistência a quinolonas detectados foram qnrA, qnrB e qnrS em 40%, 22% 2% dos isolados...
The Enterobacter genus comprises facultative anaerobic bacteria, glucose fermenters and ubiquitous in nature. Currently, there are 25 species of Enterobacter spp and two which can be identified by biochemical, molecular methods or by mass spectrometry. Infections caused by Enterobacter spp are skin and soft tissues, bacteremia and pneumonia, and for the treatment of these, the most commonly used antimicrobials are carbapenems, cephalosporins and quinolones. However, antimicrobial resistance has increased the Enterobacter spp mainly due to enzymatic mechanisms encoded by plasmid genes. The objectives of this study were to evaluate the antimicrobial susceptibility profile, investigate beta-lactamase genes (blaTEM-like, blaSHV-like, blaVEB-like, blaPER-like, blaGES-like, blaCTX-M-like), carbapenemases (blaKPC, blaIMP, blaVIM, blaNDM, blaGES and blaOXA-48) and enzymes that confer resistance to quinolones (qnrA, qnrB, qnrS, aac (6') - Ib-cr and qepA) and determine the genetic similarity among isolates of Enterobacter spp. Sixty isolates of Enterobacter spp resistant to carbapenems, cephalosporins ( third and fourth generation) and quinolones from patients admitted to the Base Hospital (HB), were send Laboratory - Microorganisms Research Centre the School of Medicine of São José do Rio Preto (FAMERP), where DNA extraction, the investigation of genes and molecular typing by ERIC-PCR were carried out. The blaKPC resistance gene was detected in 22% of the isolates. The genes blaTEM-like and blaCTX-M-like 82%, blaSHV-like 3% of the isolates. The group 1 CTX-M was detected in 56.5%, of group 2 in 41.3% and 8/25 group at 2.2% of the isolates. The quinolone resistance genes qnrA, qnrB, and qnrS were detected in 40% 22% 2% of the isolates, respectively. The ERIC-PCR typing by genetic generated twelve groups (G1 to G12) for E. cloacae and one group (G1) for E. aerogenes, horizontal transfer of resistance genes in some groups was observed, but the ...

Enterobacteriaceae are the most frequently pathogens isolated from clinical specimens. Third generation cephalosporins and fluoroquinolones constitute the main therapeutic choices for infections caused by these microorganisms. Although the infections caused by ESBL and AmpC-producing Enterobacteriaceae are commonly seen among in-hospital patients, during the last years, these organisms have been increasingly reported in the community and health care-associated infections. This study aimed at evaluating the frequency, risk factors and clinical impact of third generation-resistant Enterobacteriaceae isolated in samples collected within 48 hours following hospital admission. By using an observational, prospective, controlled design, all adult patients (age 18 years) in whom were isolated Enterobacteriaceae in samples collected within 48 hours following the admission at the University Hospital of the Universidade Federal de Minas Gerais, during August 2011 to July 2012 were considered for potential inclusion. Of the 238 patients with isolated within the first 48 hours, 62 (26.05%) were colonized or infected with resistant Enterobacteriaceae to third-generation cephalosporins (Case Group), and 176 (73.95%) were colonized or infected with susceptible Enterobacteriaceae to third-generation cephalosporins. For each case, two controls with susceptible Enterobacteriaceae were selected sequentially at the same day (Control Group), totalizing 124 controls. Considering all patients, there was a predominance of females, and the mean age was 50.2 years (± 19.98 years). In a multivariate analysis, male gender (OR, 2.56; CI 95%, 1.19 5.47, P=0.016), presence of stoma (OR, 5.09; CI 95%, 1.46-17.75; P=0.010), and previous hospitalization in the past 6 months (OR, 5.16; CI 95%, 2.43-10.97; P< 0.001) were independent risk factors for infection due to Enterobacteriaceae resistant to third generation cephalosporins. Infection caused by these microorganisms was associated with higher frequency of inappropriate empirical therapy (73,3% vs. 10,3%, P<0,001), worse clinical outcomes, as increased frequency of admission in ICU or Emergency Room (44.1% vs. 22.6%, P=0.003), lower incidence of partial or complete resolution of infection (63.3% vs. 79.1%, P=0.049) and longer hospital stays (13 days vs. 5 days, P<0,001). Considering the independent risk factors, a score was calculated. We observed that the probability of isolating resistant enterobacteria increased in proportion to the values of the score, from 26.1% for 1point to 93.5% for 5 points. In conclusion, we observed a high frequency of Enterobacteriaceae resistant to third-generation cephalosporins were isolated at the hospital admission. Considering the risk factors identified in this study, and the harmful clinical consequences of these microorganisms, the protocols of empiric antibiotic therapy for patients with serious infections should be reviewed.
Enterobacteriaceae são os patógenos mais frequentemente isolados em amostras clínicas e, juntamente com as fluoroquinolonas, as cefalosporinas de terceira geração representam os principais antibióticos utilizados para o tratamento de infecções causadas por esses microrganismos. Embora a resistência a antibióticos proporcionada pela produção de ESBL e AmpC nessa família de bactérias seja frequentemente relatada em ambiente hospitalar, nos últimos anos tem-se observado a disseminação de isolados resistentes nas infecções comunitárias e naquelas associadas à assistência a saúde. Esse estudo teve como objetivo avaliar a frequência, os fatores de risco e os impactos na evolução clínica da presença de Enterobacteriaceae resistentes às cefalosporinas de terceira geração isoladas em amostras coletadas nas primeiras 48 horas de internação em um hospital universitário. Para tal, utilizou-se um delineamento prospectivo, controlado, de observação. Todos os pacientes adultos (idade 18 anos) nos quais houve isolamento de enterobactérias em amostras obtidas durante as primeiras 48 horas de internação no Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Minas Gerais, no período de agosto de 2011 a julho de 2012, foram considerados para potencial inclusão. Do total de 238 pacientes com isolados nas primeiras 48 horas, 62 (26,05%) apresentavam-se colonizados ou infectados por enterobactérias resistentes às cefalosporinas de terceira geração (Grupo Casos) e 176 (73,95%) estavam colonizados ou infectados por enterobactérias sensíveis às cefalosporinas de terceira geração. Para cada caso, dois pacientes nos quais houve isolamento de enterobactérias sensíveis foram selecionados sequencialmente na mesma data (Grupo Controle), totalizando 124 controles. Considerando-se todos os pacientes avaliados, houve predomínio do sexo feminino, e a média de idade foi de 50,2 anos (± 19,98 anos). Na comparação dos dois grupos, o sexo masculino (OR, 2,56; IC95%, 1,19 - 5,47; P=0,016), a presença de estoma (OR, 5,09; IC 95%, 1,46-17,75; P=0,010), e a internação prévia nos últimos seis meses (OR, 5,16; IC 95%, 2,43-10,97; P< 0,001) mostraram-se fatores de risco independentes para o isolamento de Enterobacteriaceae resistentes às cefalosporinas de terceira geração. O isolamento dessas bactérias esteve associado a maior frequência de terapia antibiótica empírica inapropriada (73,3% vs. 10,3%, P<0,001); a piores resultados clínicos, como maior frequência de internação em CTI ou Sala de Emergência (44,1% vs. 22,6%, P=0,003), menor frequência de resolução parcial ou completa da infecção (63,3% vs. 79,1%, P=0,049) e a um maior tempo de internação (13 dias vs. 5 dias, P<0,001). Considerando-se os fatores de risco independentes acima descritos, um score de risco foi criado. Observou-se que a probabilidade de isolamento de enterobactérias resistentes aumentou proporcionalmente aos valores do score, de 26,1% para 1 ponto a 93,5% para 5 pontos. Concluindo, observou-se uma elevada frequência de isolamento de Enterobacteriaceae resistentes às cefalosporinas de terceira geração à admissão hospitalar. Considerando-se os fatores de risco identificados nesse estudo e as consequências clínicas do isolamento desses agentes, os protocolos de terapia antibiótica empírica de pacientes com infecções graves deveriam ser revistos.

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária
Os antibióticos β-lactâmicos são os mais usados, tanto na medicina veterinária como humana. O mecanismo de resistência mais comum a esta classe de antibióticos é a produção de β-lactamases (β-lactamases de espectro alargado - ESBLs, cefalosporinases - AmpCs e carbapenemases) por bactérias de Gram negativo. Os objectivos deste trabalho foram: detectar a presença e quantificar a colonização nosocomial do trato gastrointestinal por bactérias de Gram negativo produtoras de β-lactamases, em cães submetidos a tratamento cirúrgico e identificar quais os factores de risco responsáveis pela colonização e pelo aumento da carga bacteriana. Recolheram-se amostras fecais a 43 cães pertencentes ao grupo de controlo do ambiente (C1ca, n=43) e a 25 cães do grupo de cirurgia: na admissão ao hospital no dia da cirurgia (C1cx, n=25) e após a cirurgia (C2cx, n=22). As recolhas foram realizadas no Hospital Escolar da FMV-ULisboa, entre Fevereiro e Julho de 2014. As amostras foram processadas no Laboratório de Resistência aos Antibióticos e Biocidas (LRAB). Foram isoladas bactérias resistentes às cefalosporinas de 3ª geração (3CG) a partir do meio de MacConkey com 2μg/ml de cefotaxima e bactérias resistentes aos carbapenemos a partir do meio de MacConkey com 2μg/ml de meropenem. Foram realizados testes fenotípicos (Testes de Susceptibilidade aos Antibacterianos [TSA] pelo método de difusão em disco) e testes genotípicos (Polymerase Chain Reactions [PCRs]), de forma a identificar qual o mecanismo de resistência presente nas bactérias isoladas. Nas estirpes resistentes às 3CG, verificou-se um aumento significativo de animais colonizados em C2cx (73%, n=16/22), relativamente a C1cx (P=0,007) e a C1ca (P=0,017). O número de animais colonizados foi também significativamente superior no grupo C1ca (P=0,030) relativamente aos cães em C1cx. As contagens foram significativamente superiores em C2cx comparativamente a C1cx(P=0,004) e a C1ca(P<0,0001), e em C1ca relativamente a C1cx (P=0,0006). Entre os possíveis factores de risco analisados o factor residente (P=0,030) foi o único significativo para o aumento do número de animais colonizados com estirpes resistentes às 3CG e o factor tempo de contacto com a FMV(P=0,001) para o aumento da carga bacteriana. A resistência aos carbapenemos em C1cx foi de 4% (n=1), em C2cx de 23% (n=5) e no grupo C1ca foi de 2% (n=1). As β-lactamases mais prevalentes foram as ESBLs, foram detectadas apenas duas AmpCs plasmídicas e não foram detectadas Carbapenemases. Este trabalho vem reforçar a importância da aplicação de sistemas de controlo de colonização e de infecção nosocomial, para assim melhorar os cuidados de saúde animal e proteger a Saúde Pública.
ABSTRACT – NOSOCOMIAL COLONIZATION BY RESISTANT β-LACTAMASES PRODUCERS GRAM NEGATIVE BACTERIA IN DOGS - β-Lactam antibiotics are the most frequently used both in human and veterinary medicine. The most common resistant mechanism to this class of antibiotics is the production of β- lactamases (Extended Spectrum β-lactamases - ESBLs, Cephalosporinases - AmpCs and Carbapenemases) by Gram negative bacteria. The aim of this study was to detect the presence and quantify nosocomial colonization of the gastrointestinal tract by β-lactamase producing Gram negative bacteria on dogs treated surgically and identify the risks factors responsible for the colonization and the increased bacterial quantification. Fecal samples were collected from 43 dogs belonging to the environmental control group (C1ca, n=43) and 25 dogs from the surgery group: on admission to the hospital before surgery (C1cx, n=25) and after surgery (C2cx, n=22). The samples were collected at the FMV-ULisboa Veterinary Teaching Hospital between January and July 2014. The samples were treated in the FMV-ULisboa Laboratory of Resistance to Antibiotics and Biocids. Bacteria resistant to 3rd generation cephalosporins (3CG) were isolated from MacConkey medium with 2μg/μl cefotaxime and carbapenem resistant bacteria were isolated from MacConkey medium with 2μg/μl of meropenem. Phenotypic tests (Antibacterial Susceptibility Testing using the disk diffusion method) and genotypic tests (Polymerase Chain Reactions) were used in order to identify the resistant mechanism in isolated bacteria. There was a significant increase of 3CG resistant strains colonized dogs in C2cx (73%, n=16/22) comparing to C1cx (P=0,007) and C1ca (P=0,017). The number of colonized dogs was also significantly higher in C1ca group (P=0,030) comparing to the C1cx. The bacteria number were significantly higher in C2cx comparing to C1cx(P=0,004) and C1ca group (P<0,0001), and in C1ca group comparing to C1cx (P=0,0006). The resident risk factor was the only one significant (P=0,030) for the increase of colonized animals with 3CG resistant strains and FMV contact time (since when dogs come to FMV) risk factor was the only one significant (P=0,001) for the increased bacterial quantification. The carbapenem resistance bacteria colonization in the dogs of C1cx was 4% (n=1) and in C2cx was 23% (n=5) and in C1ca group was 2% (n=1). The most prevalent β-lactamases were the ESBLs, only two plasmid mediated AmpC were detected and none Carbapenemases. This study enhances the importance of nosocomial colonization and infection control systems, in order to improve animal health and safeguard Public Health.

Orientador: Hérida Regina Nunes Salgado
Banca: Thalita Pedroni Formariz Pilon
Banca: Marlus Chorilli
Resumo: A ceftriaxona sódica é um antimicrobiano semi-sintético de terceira geração, pertencente ao grupo das cefalosporinas, de uso parenteral. Atua impedindo a síntese da parede bacteriana, sendo altamente estável à maioria das β-lactamases. É o fármaco de escolha para o tratamento de infecções gonocócicas, também é indicado no tratamento de meningite, entre outras infecções. Há poucos estudos na literatura em relação ao desenvolvimento e validação de métodos analíticos para a quantificação da ceftriaxona sódica, visando solventes ecologicamente recomendados, segurança ao analista, menor tempo de análise e custo, como também, viabilidade e facilidade de execução do método. Baseado nestas necessidades, o intuito do trabalho foi desenvolver e validar métodos quantitativos físico-químicos para a análise da ceftriaxona sódica pó para solução injetável empregando as técnicas de cromatografia líquida de alta eficiência e espectrofotometria na região do infravermelho, como também a determinação da potência do medicamento pelo método microbiológico por turbidimetria, sendo todos os métodos propostos indicativos de estabilidade. O método por espectrofotometria na região do infravermelho foi realizado obtendo-se pastilhas de brometo de potássio com massa total de 150 mg, na faixa de concentração de 0,40 a 1,20 mg/pastilha, o teor encontrado foi de 94,18% e a exatidão de 100,44%. O método por cromatografia líquida de alta eficiência foi validado utilizando fase móvel constituída por água e ác... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
Abstract: Ceftriaxone sodium is a third generation semi-synthetic antibiotic, belonging to the group of cephalosporins, for parenteral use. It acts to prevent the synthesis of the bacterial wall, being highly stable to most β-lactamases. It is the drug of choice for the treatment of gonococcal infections; it is also indicated in the treatment of meningitis, among other infections. There are few studies in the literature regarding the development and validation of analytical methods for the quantification of ceftriaxone sodium, aiming at environmentally-friendly solvents, analyst safety, less analysis time and cost, feasibility and easy method execution. Based on these needs, the aim of the work was to develop and validate quantitative physicochemical methods for the analysis of ceftriaxone sodium in powder solution for injection through the techniques of high-performance liquid chromatography and infrared spectroscopy, also the potency of the drug was determined by the microbiological method by turbidimetry, all proposed methods are indicative of stability. The method by infrared spectrophotometry was carried out with potassium bromide pellets with a total mass of 150 mg in the concentration range of 0.40 to 1.20 mg/pellet were prepared, the content found was 94.18% and accuracy of 100.44%. The high-performance liquid chromatography was validated using mobile phase constituted by water and orthophosphoric acid in the concentration of 0.20% and ethanol 87:13 (v/v), in the linear range evaluated from 20.00 to 120.00 μg/mL, the drug had a mean retention time of 4.40 minutes with UV detection at wavelength 260 nm, the content found was 98.11% and the accuracy of 99.53%. The microbiological method by turbidimetry was validated in the concentration range of 100.00 to 196.00 μg/mL, using Staphylococcus aureus... (Complete abstract click electronic access below)
Mestre

Atividades antropogênicas relacionadas ao uso massivo de antibacterianos tem favorecido para que ambientes aquáticos sejam importantes locais para seleção e/ou disseminação de bactérias multirresistentes (MR). O objetivo do estudo foi monitorar a ocorrência de bactérias MRs em ambientes aquáticos públicos no estado de SP, caracterizando genótipos de resistência adquirida. Foram analisados 50 isolados de bactérias gram-negativas, recuperadas de amostras de água, sendo que 70% dos isolados apresentaram perfil de MR, identificando-se os genes blaCTX-M-2 (n= 5), blaCTX-M-9 (n= 1), blaCTX-M-15 (n= 2), blaKPC-2 (n= 3), qnrB (n= 1), oqxA (n= 3), oqxB (n= 3) e, aac(6)1b-cr (n= 7). Destaca-se a primeira detecção de A. calcoaceticus produtora de KPC-2. Ambientes aquáticos de acesso público podem ser importantes fontes para a disseminação e/ou transmissão de uma ampla variedade de espécies bacterianas MRs tanto para seres humanos como para ecossistemas associados, sendo que a presença de genótipos endêmicos sugere contaminação por esgoto doméstico e/ou hospitalar.
Anthropogenic activities related to the massive use of antibacterial has contributed to the selection and spread of multidrug-resistant (MDR) into the aquatic environment. This study aimed to monitor the occurrence of MDR bacteria in public aquatic environments, in the state of São Paulo, characterizing genotypes of acquired resistance. Of the 50 gram-negative isolates, recovered of water samples, 70% exhibited a MDR profile. Indeed, blaCTX-M-2 (n= 5), blaCTX-M-9 (n= 1), blaCTX-M-15 (n= 2)-, blaKPC-2 (n= 3)-, qnrB (n= 1)-, oqxA (n= 3)-, oqxB (n= 3)- and aac(6)-1b-cr (n = 7) genes were identified. Noteworthy is the first the detection of KPC-2-producing Acinetobacter calcoaceticus. Aquatic environments, with public access, may be important sources for the dissemination and/or transmission of a wide variety of MDR bacterial species to both humans and associated ecosystems. Moreover, the presence of endemic genotypes suggests contamination by domestic and/or hospital sewage.

O presente estudo visou determinar a prevalência de bactérias Gram-negativas produtoras de produzem b-lactamases de amplo espectro (ESBL) e resistência adquirida a quinolonas mediada por plasmídeos (PMQR) em animais de estimação, investigando o potencial papel destes hospedeiros como portadores assintomáticos. Em 2012, foram coletadas 216 amostras (fezes e saliva) de 108 animais de companhia (29 gatos e 79 cães) abrigados em casas de família, um centro de acolhimento de animais abandonados, e no Centro de Controle de Zoonoses da Cidade de São Paulo. Do total de cepas estudadas, 85% apresentaram fenótipo sugestivo de PMQR; enquanto que 62% dos isolados exibiram um fenótipo característico e sugestivo para produção de ESBL, sendo na sua maioria identificadas como E. coli. Dentre os isolados, 14 carregaram variantes do gene blaCTX-M, 9 foram positivos para o gene blaTEM, e 6 foram positivos para blaSHV. Em relação às cepas resistentes às Q/FQ, 56% (n= 43) foram positivas para a presença do gene qnr, o qual foi identificado em 11 espécies diferentes. Os resultados apresentados demostram que animais de companhia podem ser portadores assintomáticos de cepas produtoras de ESBL e PMQR.
The present study aimed to determine the prevalence of Gram-negative bacteria producing b-lactamases producing broad-spectrum (ESBL) and acquired resistance to quinolones mediated by plasmids (PMQR) in pets, investigating the potential role of these hosts as asymptomatic carriers. In 2012, 216 samples (feces and saliva) of 108 companion animals (29 cats and 79 dogs) housed in shelters or a Zoonosis Control Center were collected from São Paulo city. Of the total strains studied, 85% had a phenotype suggestive for PMQR; while 62 % of the isolates exhibited a characteristic phenotype and suggestive for ESBL-producing genes, with the most identified as E. coli. Among the isolates, 14 carried variants blaCTX -M gene 9 were positive for blaTEM gene, and 6 were positive for blaSHV. Regarding resistant Q/FQ isolates, 56% (n = 43) were positive for the presence of qnr gene, which was identified on 11 different species. The results presented demonstrate that pets can be asymptomatic carriers of ESBL producing strains and PMQR.

Este trabalho objetivou o desenvolvimento e validação de métodos analíticos para determinação de ceftiofur pó para solução injetável e o estudo da fotoestabilidade do fármaco. Os métodos por cromatografia em camada delgada, cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), espectrofotometria no ultravioleta (UV) foram utilizados para análise qualitativa do fármaco na forma farmacêutica. A determinação quantitativa foi realizada através dos métodos cromatografia líquida de alta eficiência, espectrofotometria no ultravioleta e ensaio microbiológico método de difusão em ágar - cillindros em placas, delineamento 3x3, avaliando-se os parâmetros descritos pelas guias de validação. Os resultados obtidos através destes métodos foram comparados estatisticamente por ANOVA, que indicou não haver diferenças estatisticamente significativas entre os mesmos. Estudo preliminar da estabilidade do ceftiofur frente a degradação alcalina, ácida, oxidativa e fotolítica mostrou a oxidação, a temperatura, a luz e a condição alcalina como fatores importantes da degradação. O fármaco é instável às radiações UV-C, em maior grau, e UV-A (degradação menos intensa), em solução. A cinética de fotodegradação do ceftiofur sódico em solução aquosa demonstrou cinética de primeira ordem de reação.
The aim of this study was the development and validation of analytical methods to the determination of ceftiofur sodium in powder for injectable preparation and the photostability study of the drug after reconstitution of the pharmaceutical dosage form with injectable water. Thin-layer chromatography (TLC), high performance liquid chromatography (HPLC) and ultraviolet spectrophotometry (UV), methods were employed to the qualitative analysis of the drug in pharmaceutical formulation. The quantitative determination was performed through the validation of HPLC, UV spectrophotometry and microbiological assay 3x3 using the cylinder plate, evaluating the guidances validation parameters. The results obtained by three methods were compared by ANOVA, which indicated that they are equivalent. Preliminary study of ceftiofur through alkaline, acid, oxidative and fotolitic degradation shows sensibility to oxidation, light and alkaline medium. The drug is unstable to UV-C and UV-A radiations, both in solution, being the degradation on UV-C more intense. The photodegradation kinetics of ceftiofur sodium solutions show first-order kinetic of reaction.

Descrever a prevalência das espécies bacterianas isoladas nas infecções urinárias comunitárias. Descrever os perfis de susceptibilidade aos antibióticos de uso oral utilizado frente às bactérias isoladas nas infecções urinárias comunitárias. Avaliar a prevalência de fenótipos de resistência bacterianos através dos resultados dos testes de susceptibilidade e dos rastreamentos específicos utilizados. Amostras colhidas exclusivamente no atendimento ambulatorial com contagens de unidades formadoras de colônias entre 100.000 a ≥1.000.000 por mililitro (UCF/ml) Com ou sem piúria no exame de elementos anormais na urina e sedimentoscopia (EAS). Foram analisados retrospectivamente os resultados de urinoculturas e dos testes de susceptibilidade a antimicrobianos, realizados em um Laboratório da rede privada na cidade do Rio de janeiro, de pacientes atendidos em ambulatórios e com quadros de ITU. As amostras de urina coletadas englobavam basicamente os seguintes bairros: Botafogo, Barra da Tijuca, Ipanema, Copacabana, Tijuca e Centro. Foram analisados um total de 8.475 culturas de urina divididas em 7.286 urinas de pacientes femininos e 1.189 de pacientes masculinos entre Janeiro de 2006 a Dezembro de 2012. As amostras foram todas coletadas na Cidade do Rio de Janeiro e englobavam basicamente os seguintes bairros: Botafogo, Barra da Tijuca, Ipanema, Copacabana, Tijuca e Centro. Encontramos um percentual de resistência de 27% para ciprofloxacina frente à Escherichia coli que com 68.23% é a principal etiologia encontrada na ITU na comunidade os resultados das três fluoroquinolonas avaliadas no estudo, ciprofloxacina (2 geração), levofloxacina (3 geração) e norfloxacina (2 geração), acharemos respectivamente 27%, 25% e 20% de resistência em Escherichia coli. O uso de fluoroquinolonas em infecções urinárias comunitárias e consequentemente os achados de padrões de resistência neste estudo, reforçam o que já foi descrito em outros trabalhos. A cefalosporina de 2 geração (cefuroxima), demonstrou percentuais de resistência bastante satisfatórios frente as principais etiologias. Em Escherichia coli o percentual foi de 2%, em Klebsiella pneumoniae 3% e em Proteus mirabilis não houve nenhum achado de resistência. Uma das vantagens da cefuroxima é ser ativa quanto à produção de beta lactamase, conferindo um espectro maior frente a possíveis produtoras desta enzima. Seu esquema posológico é de 250mg duas vezes ao dia por 7 dias para infecções urinárias não complicadas. O meio mais eficaz de melhorar a administração antimicrobiana provavelmente envolverá um programa abrangente que incorpora múltiplas estratégias e colaboração entre as diversas especialidades dentro de uma determinada instituição de saúde. Neste contexto, a observação periódica da incidência bacteriana com seus respectivos índices de resistência aos antimicrobianos por sitio de infecção e correlação com os antibióticos mais comumente utilizados, é mandatória para o sucesso terapêutico.
Describe the prevalence of bacterial species isolated from community acquired urinary tract infections and to describe the bacterial susceptibility profiles to oral antimicrobials. The prevalence of resistant phenotypes was also evaluated. Samples were taken from outpatients whose urine cultures showed >= 100,000 Colony Forming Units per milliliter (CFU/ml) with or without pyuria on direct examination of urine sediment samples. Urine culture results were retrospectively reviewed and antimicrobial susceptibility testing performed in a private clinical laboratory located in Rio de Janeiro. A total of 8475 urine cultures performed between January 2006 and December 2012 were analyzed. Female urine samples represented 7286 samples while male samples represented 1189 samples. Escherichia coli was found as the main etiology among urinary tract infections, (68,23%) showing 27% of ciprofloxaxin resistance, 25% Levofloxacin resistance and 20% Norfloxacin resistance. The use of fluoroquinolones in community acquired urinary tract infections and the resistance patterns found in this present study reinforces what has been described by other authors. A second generation cephalosporin (cefuroxime) showed resistance in main etiologies - E. coli 2% and K. pneumoniae 3%, while Proteus mirabilis showed no resistance at all. Among the main advantages of cefuroxime is the activity against the production of beta lactamases. The regimen dosage is 250mg twice a day for 7 days to treat uncomplicated urinary tract infections. The most effective way to improve antimicrobials administration is to develop a comprehensive program that incorporates multiple strategies and collaborative work between different medical specialties inside a healthcare institution. In such a context, the bacterial incidence rates and antimicrobial resistance rates should be closely observed and correlated to infection sites for better achievement of success in antimicrobial therapy.

Mestrado em Biologia Molecular e Celular
A prevalência de isolados bacterianos, da família Enterobacteriaceae, resistentes a cefalosporinas de largo espectro, produtores de β-lactamases de largo espectro (ESBLs) e/ou AmpCs tem vindo a aumentar. Tem sido também reportada a coocorrência de genes que codificam para ESBLs e genes que conferem resistência a outras classes de antibióticos. Esta situação tem como consequências a limitação de opções terapêuticas e o insucesso da terapia, traduzindo-se em taxas de mortalidade e morbilidade mais elevadas. Este trabalho focou-se na caracterização molecular de 46 isolados clínicos resistentes a antibióticos, pertencentes à família Enterobacteriaceae. Os isolados foram previamente obtidos no Hospital Infante D. Pedro, Centro Hospitalar do Baixo Vouga, E.P.E., e foram selecionados para análise com base na suspeita de produção de ESBLs e/ou AmpCs, de acordo com o sistema automático Vitek2®. Os isolados foram caraterizados em termos de diversidade genotípica, presença de genes de resistência e elementos genéticos móveis. Foram observados determinantes genéticos responsáveis pela resistência a β-lactâmicos (blaTEM, blaSHV, blaCTX-M e blaCMY), fluoroquinolonas (qnrA, qnrB e aac(6’)-ib -cr), sulfonamidas (sul1 e sul2) e aminoglicosídeos (aac(6’)-ib ). O gene blaTEM foi o mais prevalente (97,8%), enquanto o gene blaSHV foi o menos prevalente (6,5%) entre os isolados. A variante blaCMY do gene blaAmpC foi a mais frequente em contexto adquirido (n=10 isolados). A variante blaCTX-M-15 foi observada na maioria (94,4%) dos isolados blaCTX-M + e surge associada à sequência de inserção ISEcp1. Foram identificados genes codificantes para o fenótipo de resistência a aminoglicosídeos (aadA1, aadA2, aadA5 e aadB), trimetoprim (dfrA1, dfrA12, dfrA15 e dfrA17), cloranfenicol (catB3) e estreptotricina (sat2) nas regiões variáveis dos integrões de classes 1 e 2, presentes em 34 e 1 isolados, respetivamente. Além dos integrões, foram encontrados outros elementos genéticos móveis como sequências de inserção, nomeadamente, ISEcp1 e plasmídeos conjugativos pertencentes aos grupos IncF, IncK, IncB/O e IncI1. Foram realizados ensaios de conjugação para 8 isolados blaCTX-M-15 + e 7 isolados blaCMY +, originando 2 e 3 transconjugantes, respetivamente. Com este trabalho foi possível concluir que a resistência às cefalosporinas de 3ª geração neste hospital está predominantemente associada a mecanismos de resistência adquirida. Os resultados referentes à tipagem molecular, recorrendo a BOX-, ERIC- e rep-PCR, sugerem que a disseminação de produtores de ESBLs e/ou AmpCs neste hospital será policlonal, dada a variabilidade intra-espécies observada. Não se identificaram clones prevalentes em diferentes serviços ou associados à comunidade. De facto, a disseminação dos determinantes de resistência parece estar relacionada com transferência de elementos genéticos móveis, nomeadamente dos replicões IncB/O, K, I1 e Frep. A presença de integrões nestes isolados resulta com frequência em fenótipos de multirresistência. Serão necessários mais estudos para caracterizar os elementos genéticos móveis com maior detalhe. O estudo aqui apresentado repre senta uma contribuição importante para a definição de estratégias de controlo da disseminação de bactérias resistentes a cefalosporinas de largo espectro no Hospital Infante D. Pedro.
The prevalence of Enterobacteriaceae isolates displaying resistance to broad-spectrum cephalosporins, harboring extended-spectrum β-lactamases (ESBLs) and/or AmpC enzymes is increasing. Moreover, the co-occurrence of ESBLs and genes conferring resistance to other antibiotic classes is frequently reported. This situation leads to a limitation of therapeutic options and unsuccessful therapy and consequently to higher rates or mortality and morbidity. This work focused on the molecular characterization of 46 antibiotic resistant clinical isolates belonging to Enterobacteriaceae family. These isolates were previously obtained from Hospital Infante D. Pedro, Centro Hospitalar do Baixo Vouga, E.P.E., and were selected for analysis based on the suspicion of ESBL and/or AmpC production provided by the Vitek2® Automatic System. The isolates were characterized in terms of genetic diversity, resistance genes and mobile genetic elements. Genetic determinants conferring resistance to β-lactams (blaTEM, blaSHV, blaCTX-M and blaCMY), fluoroquinolones (qnrA, qnrB and aac(6’)-ib -cr), sulfonamides (sul1 and sul2) and aminoglycosides (aac(6’)-ib) were observed. blaTEM was the most prevalent gene (97.8%) while blaSHV gene was the least prevalent (6.5%) among isolates. blaCMY variant of the blaAmpC genes was the most frequent in an acquired context (n=10 isolates). blaCTX-M-15 variant was found in the majority of the isolates that tested positive for the blaCTX-M gene (94.4%) and is frequently associated with the insertion sequence ISEcp1. Resistance genes coding resistance phenotype to aminoglycosides (aadA1, aadA2, aadA5 and aadB), trimetoprim (dfrA1, dfrA12, dfrA15 and dfrA17), chloramphenicol (catB3), and streptothricin (sat2) were also identified in the variable regions of class 1 and 2 integrons, found in 34 and 1 isolates, respectively. Aside from integrons, other mobile genetic elements like insertions sequences, ISEcp1 and conjugative plasmids belonging to groups IncF, IncK, IncB/O and IncI1, were also identified. Mating assays were performed for 8 blaCTX-M-15 + isolates and 7 blaCMY + isolates, originating 2 e 3 transconjugants, respectively. It was possible to conclude that resistance to 3rd generation cephalosporins in this hospital is predominantly associated with acquired mechanisms. Molecular typing results, obtained by BOX-, ERIC- and rep-PCR, suggest a non-clonal dissemination of the ESBL and/or AmpC-producing isolates, based on the high intra-species diversity observed. Clones prevalent in the hospital or prevalent in the community were not identified. In fact, the dissemination of the resistance determinants seems to be related to the transference of mobile genetic elements, namely IncB/O, K, I1 and Frep replicons. Also, the presence of integrons often results in a multidrug phenotype. Further studies need to be conducted to identify these elements with more detail. This study represents an important contribution to the development of effective strategies aiming to reduce the dissemination of broad - spectrum cephalosporins resistant bacteria in Hospital Infante D. Pedro.

A presente dissertação pretende realçar a importância das cefalosporinas e carbapenemos no combate a infeções causadas por bactérias Gram-negativas, fazendo uma abordagem dos mecanismos de ação e das estratégias de otimização das moléculas, bem como da sua utilização terapêutica e espetro de atividade. São também abordados os diferentes mecanismos de desenvolvimento de resistência por parte de bactérias Gram-negativas face às β-lactamas. A descoberta da cefalosporina C em 1940 e o posterior isolamento do seu núcleo ativo (ácido 7-aminocefalosporânico ou 7-ACA) foi o ponto de partida para o desenvolvimento de análogos semissintéticos com atividade antibacteriana superior. Surgiram então as cefalosporinas de primeira, segunda, terceira, quarta e quinta geração, apresentando maior eficácia contra bactérias Gram-negativas e estabilidade acrescida face às β-lactamases. Os carbapenemos foram desenvolvidos a partir da tienamicina, isolada a partir de S. cattleya em 1976. Estes apresentam um espetro de ação bastante alargado. São ativos contra bactérias Gram-positivas e Gram-negativas e possuem também uma elevada resistência face às β-lactamases, sendo considerados como a última linha na terapêutica de infeções graves e causadas por bactérias multirresistentes. É de grande importância o estudo dos mecanismos que geram resistência em cada uma das espécies bacterianas de modo a compreender de que forma podemos intervir para retardar o desenvolvimento de resistências, bem como quais as estratégias a utilizar no futuro de modo a prevenir as resistências bacterianas. Nas últimas décadas, emergiu sobretudo o desenvolvimento de resistência por parte de bactérias Gram-negativas face a cefalosporinas e carbapenemos. Assim, urge o estudo dos processos que conduzem a resistências bacterianas de modo a encontrar caminhos que permitam contrariar o seu desenvolvimento e disponibilizar novas terapêuticas.

De forma a otimizar o enchimento de cefalosporinas foi aplicado um tratamento estatístico aos pesos dos frascos testados durante o controlo em processo de lotes produzidos, de forma não só a avaliar a consistência do processo e sugerir ações de otimização, como também foram criados e validados métodos de espectroscopia de Raman para identificação dos contentores individuais das matérias-primas usadas, para ser usado como alternativa do método atual de identificação por infravermelho, de forma a otimizar tempos de análise. Um dos objetivos deste trabalho consistiu na aplicação do controlo estatístico do processo para a resolução dos problemas inerentes ao processo do enchimento das Cefalosporinas. De forma a manter a uniformidade de conteúdo nos lotes cheios, durante o enchimento destas formas sólidas é necessário fazer controlo de peso dos frascos cheios com produto, no entanto inerente ao processo de enchimento por vezes ocorrem desvios nos pesos. Independentemente de os desvios serem inerentes ao processo de enchimento e às características das matérias-primas usadas que interferem na fluidez do pó na máquina de enchimento, há ações que podem ser consideradas para melhorar o processo, e neste caso propõe-se a alteração das válvulas de filtração. Os resultados obtidos na aplicação do SPC ao lote ‘’A’’ da ceftriaxona mostram que o processo se encontra em sob-controlo estatístico, com os parâmetros de média e desvio padrão estimados, (nas cartas de controlo) de 1,164 e 0,017 respetivamente. Os dados são Normalmente distribuídos, com os resultados de p-value obtidos, nos testes de K-S e Qui-quadrado, 0,10 e 0,78 respetivamente. O processo é capaz, pois o valor de índice de capacidade (Cpk) é 1,874 > 1,33 e com capacidade potencial (Cp) de 2,278 > 1,33. Outro objetivo tem a ver com o facto das diretivas Europeias requererem a identificação de todos os contentores recebidos num lote de matéria-prima. As matérias-primas das cefalosporinas vêm em contentores estéreis, por isso a identificação por infravermelho destes contentores é feita durante o processo de enchimento dos lotes. Como forma de minimizar o tempo de execução desta identificação, sugeriu a técnica de espectroscopia de Raman, por ser uma técnica semelhante e que permite uma leitura direta da amostra que sai da produção contida num frasco. A implementação da técnica de espetroscopia de Raman permitiu uma redução do tempo de análise em 66% para 60 segundos relativamente a espetroscopia de infravermelho. Para implementação da identificação por Raman foram criados métodos por cefalosporina, que foram posteriormente validados. Foi validade a seletividade relativamente à identificação das cefalosporinas por espetroscopia de Raman.