Tesis sobre el tema "CEPACs"

A demanda crescente de água doce de boa qualidade são problemas atuais e mundiais, além do descaso com os dejetos lançados nos ambientes aquáticos que comprometem a qualidade dos recursos hídricos. Um dos parâmetros que atesta a potabilidade da água é a presença de cianobactérias e cianotoxinas. Cianobactérias são microrganismos procariontes aeróbicos fotoautróficos que sintetizam as cianotoxinas. Estes compostos podem ser classificados de acordo com seus mecanismos de ação em hepatotóxicos, neurotóxicos e dermatotóxicos. Por sua diversidade, representam diferentes riscos não só ao ecossistema e a outros organismos dos ambientes aquáticos, como também aos seres humanos. Esse projeto visou o isolamento e cultivo de cepas de cianobactérias produtoras de toxinas para a investigação da biossíntese desses compostos. Com este intuito, foram realizadas coletas de água em três reservatórios no estado de São Paulo e um no Paraná. Cepas de cianobactérais foram isoladas, identificadas e analisadas quanto à produção de toxinas. Uma cepa de Microcystis aeruginosa (LTPNA 02) produtora de microcistinas (MC-LR, MC-RR, MC-YR, MC-LF, MC-LW e desm-MC-LR e desm- MC-RR) foi escolhida para ser estudada frente diferentes condições de cultivo e ter o seu crescimento, produção de toxinas e expressão gênica estudados. Foram utilizados os meios de cultura já referidos na literatura: ASM-1 (N:P=1, 10 e 20), MLA (N:P=10), Bold 3N (N:P=16) e BG-11 (N:P=10 e 100). Para acompanhar o crescimento, dois métodos foram utilizados: contagem de células e espectrofotometria. As toxinas foram quantificadas por LC-MS - QTrap. A análise da expressão gênica foi realizada por reação de PCR em tempo real pelo método de quantificação relativa ΔΔCt. Foi observada diferença no crescimento da cepa estudada nos diferentes meios de cultivo empregados. A contagem das células permitiu a identificação das fases logarítmica e total de crescimento. Durante a fase logarítmica, três experimentos demonstraram diferenças estatísticas quando comparadas ao controle (p<0,05). Ao se avaliar o crescimento total, quatro experimentos foram menores (p<0,01). As leituras das absorvâncias e a contagem de células demonstraram alta correlação Para ambas as leituras em 680 nm e 750 nm o coeficiente de correlação (r) esteve entre 0,93 e 0,99. A quantificação das microcistinas (MC) foi realizada por LC-MS - QTrap. Foram quantificadas as variantes MC-LR, MR-RR e MC-YR. Apesar da relação toxina/célula ser distinto para cada experimento, não representou grande variação naqueles realizados com meio ASM-1 (N:P 1; 10 e 20), meio MLA (N:P=10) e BG11(N:P=10). O experimento realizado em Bold3N (N:P=16,6) apresentou menor concentração de toxina/célula e as variantes MC-LR e MC-YR não foram detectadas. Por outro lado, o experimento realizado em BG-11 (N:P=100) apresentou a maior relação toxina por célula. Estes resultados sugerem que o excesso de nitrato seja um fator estressante para o desenvolvimento e crescimento da cepa de M. aeruginosa avaliada e ao mesmo tempo um fator estimulante para a produção das toxinas analisadas. Os experimentos que avaliaram a expressão dos genes 16S e mcyB em relação ao gene da ficocianina (controle endógeno) foram realizados em meio ASM-1 (N:P=10 e 100) e BG 11 (N:P= 10 e 100). Os parâmetros anteriores, como crescimento e produção de toxinas também foram avaliados. Novamente foram encontradas diferenças entre as fases de crescimento e produção de toxina, porém a expressão dos genes avaliados não demonstrou variação significativa entre os experimentos. Porém ambos os genes avaliados demonstraram menor expressão nos experimentos condizidos em (N:P=100).
There is a great concern these days about potable and good quality water due to the increase of the population needs and also to the arising problems with contamination caused by anthropogenic sources. The presence of cyanobacteria and cyanotoxins are some parameters that attest water potability. Cyanobacteria are prokaryotic aerobic photoautotrophic microorganisms that may synthesize cyanotoxins. These compounds can be classified as hepatotoxic, neurotoxic and dermatotoxic according to their action mechanisms. Because of their diversity, they may represent different risks, not only to their ecosystem and other aquatic living organisms, but also to human beings. The aim of this project was the isolation and cultivation of cyanotoxin-producing cyanobacteria for further investigation on the biosynthesis of these compounds. Water samples from three different reservoirs in São Paulo state and one in Paraná state were collected in order to isolate cyanobacteria strains and accomplish their identification and to evaluate the toxin production. The Microcystis aeruginosa (LTPNA 02) microcystin producer strain (MCLR, MC-RR, MC-YR, MC-LF, MC-LW, desm-MC-LR and desm-MC-RR) was chosen to be grown in different cultivation conditions and later analyzed for its growth rate, toxin production and gene expression. All culture media used in this research were chosen according to the literature: ASM-1 (N:P=1, 10 and 20), MLA (N:P=10), Bold 3N (N:P=16) and BG-11 (N:P=10 and 100). To evaluate growth rate, two techniques were used: cell counting and absorbance determination in two different wavelengths (680 nm and 750 nm). Toxins were quantified by LC-MS in a hybrid triple-quadrupole instrument (Qtrap). Gene expression was assessed by real time PCR, using the ΔΔCt relative quantification method. Cell counting allowed total growth and logarithmic phase identification. During the last, three experiments showed statistical difference from control group (p<0,05). Four experiments resulted in a lower total growth rate (p<0,05). A high correlation between cell counting and absorbance levels was found for both wavelengths tested. Correlation coefficients (r) were from 0,93 to 0,99. Three microcystin variants (MC-LR, MR-RR e MC-YR) were quantified by LC-MS. The toxin content per cell was calculated and showed no statistc variation among those experiments performed on ASM-1 (N:P 1; 10 and 20), MLA (N:P=10) and BG-11 (N:P=10). The lowest toxin/cell concentration was found for Bold3N (N:P=16,6) medium, where MC-LR and MC-YR production was not detected. On the other hand, the experiment with BG-11 (N:P=100) medium showed the highest toxin/cell content. These results suggest that high levels of nitrate in the culture medium may be a stressing factor for the development and growth of the M. aeruginosa tested strain, as well as a disturbing factor for microcystin production. Gene expression experiments regarding 16S and mycB genes using the phycocyanin gene as endogen control were performed on ASM-1 (N:P=10 and 100) and BG 11 (N:P= 10 and 100) media, along with the evaluation of growth rate and toxin production. Differences between growth rates and toxin production were once more observed, however gene expression did not show a significant variation among experiments.

Um total de 123 isolados de Pasteurella multocida provenientes de suínos foi avaliado através da PCR para pesquisa de genes codificadores de capsula, toxina dermonecrótica e outros fatores de virulência. As amostras foram caracterizadas como tipo capsular A (78,8 %) e tipo capsular D (21%). Nenhum dos isolados foi positivo para presença de toxina dermonecrótica. Os genes codificadores dos fatores de virulência pesquisados foram observados nas freqüências de 93,5 % para nanB, 92,7% para psl, 91,9% para oma87 e nanH, 87,8% para sodA,87% para hghA,83,7% para ompH, 82,9% para sodC, 79,7% para ptfA e exbBD tonB,73,2% para hgbB, 14,6% para pfhA e 4,9% para tbpA. Estes achados são compatíveis com o descrito na literatura internacional.
A total of 123 Pasteurella multocida strains from swine was evaluated through PCR to detect capsular, dermonecrotic toxin codifying genes and others virulence factors. The strains were identified as capsular type A (78.8 %) and capsular type D (21%). None of isolates were positive to dermonecrotic toxin gene. The virulence factors genes were detected in the following frequency: 93.5 % to nanB, 92.7% to psl, 91.9% to oma87 and nanH, 87.8% to sodA, 87% to hghA, 83.7% to ompH, 82.9% to sodC, 79.7% to ptfA and exbBD tonB, 73.2% to hgbB, 14.6% to pfhA and 4.9% to tbpA. These findings were in accordance with international literature.

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Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
A hidrólise de polissacarídeos presentes na biomassa lignocelulosica libera grande quantidade de pentoses, cuja fermentação a etanol poderia ser um complemento ao etanol obtido pela fermentação da glicose oriunda da sacarificação da celulose (etanol 2G). Entretanto, apesar dos esforços em pesquisa, esta ainda é uma tecnologia a ser desenvolvida. Por outro lado, o uso das pentoses como substrato para obtenção de outros bioprodutos com maior valor agregado que o etanol é uma via alternativa economicamente sustentável. O presente projeto propôs o estudo de cepas de leveduras assimiladoras xilose focando os metabólitos gerados a partir do uso desse açúcar como única fonte de carbono. Para esse estudo, foram selecionadas as leveduras Pichia kluyveri G1.1; Hanceniaspora sp. G4.1; Hanceniaspora sp. G7.1; Candida oleophila G10.1; Metschnikowia koreensis G18 com base nos potenciais de assimilação de xilose por elas apresentados em trabalho prévio. Os dados mostraram que as cepas Hanceniaspora sp. G4.1, Hanceniaspora sp. G7.1 e C. oleophila G10.1 consumiram 100% da xilose do meio em 120 h. M. koreensis G18 consumiu aproximadamente 70% em 96 h e a cepa P. kluyveri G1.1, foi a que apresentou menor taxa de consumo de xilose (50% em 120 h). A avaliação qualitativa dos ácidos orgânicos secretados pelas cepas nesses cultivos revelou a presença dos ácidos oxálico, cítrico, maleico, tartárico, málico, pirúvico, lático, fumárico, acético, propiônico, isobutírico e butírico nos meios de cultura das leveduras. Em cultivos utilizando meios com diferentes valores de pH iniciais e concentrações de xilose, constatou-se a influência desses fatores sobre a produção de ácidos orgânicos por M. koreensis G18, porém, não foram significantes para as demais leveduras
The hydrolysis of polysaccharides from lignocellulosic biomass releases high quantity of pentoses, whose fermentation to ethanol could be a complement that obtained by fermentation of glucose derived from cellulose saccharification (2G ethanol). However, despite efforts in research, this is still a technology in development. Moreover, the use of pentoses as a substrate for obtaining value-added bioproducts is an alternative to ethanol and an economically viable route. This project proposes the study of xylose assimilating yeast focused on metabolites generated from the use of xylose as carbon source. Pichia kluyveri G1.1; Hanceniaspora sp. G4.1; Hanceniaspora sp. G7.1; Candida oleophila G10.1; Metschnikowia koreensis G18 were selected for this study based on their potential of assimilation of xylose studied in previous work. The data showed that Hanceniaspora sp. G4.1, Hanceniaspora sp. G7.1 and C. oleophila G10.1 consumed 100% of xylose from the culture medium in 120 h. M. koreensis G18 consumed approximately 70% in 96 h and P. kluyveri G1.1 was the strain that presented the lowest xylose consumption rate ( 50% in 120 h). Qualitative evaluation of the organic acids secreted by strains in these cultures revealed the presence of oxalic, citric, maleic, tartaric, malic, pyruvic, lactic, fumaric, acetic, propionic, isobutyric, and butyric acid. In cultivation using culture media with different initial pH values and concentrations of xylose it was observed that these factors influence the production of organic acids by M. koreensis G18, however, were not significant for other yeasts

Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-10-07Bitstream added on 2014-12-02T11:21:32Z : No. of bitstreams: 1 000793449.pdf: 1774627 bytes, checksum: f954bbd302ea6c81ed822df1b34b08b2 (MD5)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
Durante a estocagem de leites fermentados, as bactérias probióticas devem manter-se viáveis, para que resultem em benefício para a saúde do consumidor. A composição da cultura lática utilizada para a fermentação e os ingredientes adicionados ao leite influenciam a viabilidade dos probióticos durante a estocagem refrigerada. Além disso, é importante que os probióticos sobrevivam às condições adversas encontradas durante a passagem pelo trato gastrointestinal (TGI). A presença de medicamentos de diferentes tipos no TGI também pode suprimir ou reduzir o efeito terapêutico dos micro-organismos probióticos. O principal objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito da composição da cultura e de diferentes matrizes na qualidade tecnológica de leite fermentado e o efeito de medicamentos comerciais sobre a sobrevivência dos probióticos. Para melhor distribuição e realização dos experimentos, o trabalho foi dividido em quatro partes. Na primeira parte foi estudado o efeito da composição da cultura lática durante a fermentação, por meio da produção de ácidos orgânicos, consumo de lactose e cinética de acidificação, e durante a estocagem de leites fermentados, avaliando-se o pH, sinérese, viabilidade dos micro-organismos (S. thermophilus, Lactobacillus acidophilus e Bifidobacterium animalis subsp. lactis), sobrevivência dos probióticos às condições simuladas do TGI, características sensoriais dos produtos e concentração dos ácidos orgânicos. As bactérias que produziram a maior quantidade de ácido lático foram as homofermentativas S. thermophilus e L. acidophilus. Os produtos fermentados contendo B. animalis subsp. lactis apresentaram os maiores teores de ácido acético ao final da fermentação. Apenas L. acidophilus foi capaz de metabolizar o citrato, enquanto os teores de piruvato aumentaram ligeiramente durante a fermentação. A cinética de fermentação foi influenciada pela composição da ...
During storage of fermented milk, probiotic bacteria must retain their viability in order to promote health benefits to the consumer. The composition of the culture used during fermentation and the ingredients added to milk can influence the viability of probiotics during refrigerated storage. Furthermore, it is important that probiotics survive to the harsh conditions during the passage through the gastrointestinal tract (GIT). The presence of different drugs in the GIT can also suppress or reduce the therapeutic effect of probiotic microorganisms. The main objective of this study was to evaluate the effect of the composition of the culture and different matrices on the quality of fermented milk and the effect of medications on the survival of commercial probiotics strains. The work was divided in four parts for better distribution and execution of experiments. In the first part, it was studied the effect of the composition of culture during fermentation through the production of organic acids, lactose consumption and kinetics of acidification and during storage, evaluating the pH, syneresis, viability of microorganisms (S. thermophilus , Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium animalis subsp.), survival of probiotics against simulated GIT conditions, sensory characteristics and concentration of the organic acids. The bacteria that produced the largest amount of lactic acid were the homofermentatives S. thermophilus and L. acidophilus. Fermented products containing B. animalis subsp. lactis showed the highest levels of acetic acid at the end of fermentation. Only L. acidophilus was able to metabolize citrate, while the levels of pyruvate rose slightly during fermentation. The kinetics of acidification was influenced by the composition of lactic acid culture. The higher pH values at the end of storage were obtained for treatments with probiotic cultures. The syneresis reduced during storage and the lowest value was observed in the ...
FAPESP: 09/12808-7

Made available in DSpace on 2015-04-17T15:02:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 786983 bytes, checksum: eac9b468ba5f066caa74a9a3589e7b0c (MD5) Previous issue date: 2013-02-27
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES
Staphylococcus aureus is widespread in nature and is the bacteria most often found in skin infections, although it is able to colonize many organ in the human body. This pathogen can also to contaminate food and staphylococcal food poisoning is one of foodborne diseases more common around the world. This study aimed to isolate and characterize samples of S. aureus isolates from surface preparation of meat and vegetables in public hospitals located in the city of João Pessoa - Paraíba - Brazil, as the production of lipase, protease, antibiotic resistance profile and detection of mecA. Further, evaluation was made in the production of lipase strains of S. aureus isolated from animals (udder and nasal cavities), food (cottage cheese) and infected human wounds (hospital). It was observed lipase production in isolates from human wounds (43/50) animals (16/30), cheese (34/41), bench preparation of meat (24/24) and surface preparation plant (22 / 24). All isolates surface preparation of meat, vegetables and cheese produced protease precipitation with zones of diameters ranging from <0.5 to 4 mm. Among the 48 S. aureus isolates from food processing surfaces tested, 100% were sensitive to chloramphenicol, norfloxacin and methicillin. Twelve isolates were resistant to erythromycin and tetracycline, whereas all isolates were resistant to penicillin and streptomycin. The fragment corresponding t the mecA gene was not identified among isolates. The lipolytic and proteolytic activities, as well as antibiotic resistance (even those already with no therapeutic value) constitute important epidemiological and genetic markers may contribute to the characterization of samples environment or host-specific, and, if performed periodically to distinguish those new strains endemic.
Staphylococcus aureus está disseminado na natureza de forma variável, e apresenta-se como a bactéria mais frequentemente encontrada em infecções de pele, todavia é capaz de colonizar quase todos os órgãos do corpo humano. Esse patógeno também pode contaminar alimentos. Intoxicação alimentar estafilocócica é uma das doenças veiculadas por alimentos mais comuns em todo o mundo. Este estudo teve como objetivo isolar e caracterizar amostras de S. aureus isolados de superfícies de preparo de carne e vegetais de hospitais públicos situados na cidade de João Pessoa Paraíba Brasil, quanto a produção de lipase, protease, perfil de resistência a antimicrobianos e detecção de gene mecA. Ainda, foi realizada a avaliação da produção de lipase de cepas de S. aureus isoladas de animais (úbere e fossas nasais), alimentos (queijo ricota) e de feridas humana infectadas (ambiente hospitalar). Foi observada a produção de lipase nos isolados de feridas humanas (43/50), animais (16/30), queijo (34/41), bancada de preparo de carne (24/24) e bancada de preparo de vegetais (22/24). Todas as cepas isoladas de bancada de corte de carne, vegetais e de queijo produziram protease com zonas de precipitação de diâmetros variando de < 0,5 a 4 mm. Dentre 48 S. aureus isolados de superfícies de processamento de alimentos testados, 100% foram sensíveis a clorafenicol, norfloxacina e meticilina. Doze isolados foram resistentes a eritromicina e tetraciclina, enquanto todos os isolados foram resistentes à estreptomicina e penicilina. Nas reações de amplificação não foi identificado o fragmento correspondente ao gene mecA entre os isolados avaliados. As atividades lipolítica e proteolítica, bem como resistência a antibióticos (mesmo para aqueles já sem valor terapêutico) se constituem em importantes marcadores genéticos e epidemiológicos podendo contribuir para a caracterização de amostras ambiente ou hospedeiro-específicas, bem como, se realizada periodicamente, para se distinguir novas linhagens daquelas endêmicas.

Orientador: Ana Lúcia Barretto Penna
Banca: Mirna Lúcia Gigante
Banca: Graziele Aparecida Chiuchi Garcia
Banca: Kátia Sivieri
Banca: Ana Carolina Conti e Silva
Resumo: Durante a estocagem de leites fermentados, as bactérias probióticas devem manter-se viáveis, para que resultem em benefício para a saúde do consumidor. A composição da cultura lática utilizada para a fermentação e os ingredientes adicionados ao leite influenciam a viabilidade dos probióticos durante a estocagem refrigerada. Além disso, é importante que os probióticos sobrevivam às condições adversas encontradas durante a passagem pelo trato gastrointestinal (TGI). A presença de medicamentos de diferentes tipos no TGI também pode suprimir ou reduzir o efeito terapêutico dos micro-organismos probióticos. O principal objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito da composição da cultura e de diferentes matrizes na qualidade tecnológica de leite fermentado e o efeito de medicamentos comerciais sobre a sobrevivência dos probióticos. Para melhor distribuição e realização dos experimentos, o trabalho foi dividido em quatro partes. Na primeira parte foi estudado o efeito da composição da cultura lática durante a fermentação, por meio da produção de ácidos orgânicos, consumo de lactose e cinética de acidificação, e durante a estocagem de leites fermentados, avaliando-se o pH, sinérese, viabilidade dos micro-organismos (S. thermophilus, Lactobacillus acidophilus e Bifidobacterium animalis subsp. lactis), sobrevivência dos probióticos às condições simuladas do TGI, características sensoriais dos produtos e concentração dos ácidos orgânicos. As bactérias que produziram a maior quantidade de ácido lático foram as homofermentativas S. thermophilus e L. acidophilus. Os produtos fermentados contendo B. animalis subsp. lactis apresentaram os maiores teores de ácido acético ao final da fermentação. Apenas L. acidophilus foi capaz de metabolizar o citrato, enquanto os teores de piruvato aumentaram ligeiramente durante a fermentação. A cinética de fermentação foi influenciada pela composição da ...
Abstract: During storage of fermented milk, probiotic bacteria must retain their viability in order to promote health benefits to the consumer. The composition of the culture used during fermentation and the ingredients added to milk can influence the viability of probiotics during refrigerated storage. Furthermore, it is important that probiotics survive to the harsh conditions during the passage through the gastrointestinal tract (GIT). The presence of different drugs in the GIT can also suppress or reduce the therapeutic effect of probiotic microorganisms. The main objective of this study was to evaluate the effect of the composition of the culture and different matrices on the quality of fermented milk and the effect of medications on the survival of commercial probiotics strains. The work was divided in four parts for better distribution and execution of experiments. In the first part, it was studied the effect of the composition of culture during fermentation through the production of organic acids, lactose consumption and kinetics of acidification and during storage, evaluating the pH, syneresis, viability of microorganisms (S. thermophilus , Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium animalis subsp.), survival of probiotics against simulated GIT conditions, sensory characteristics and concentration of the organic acids. The bacteria that produced the largest amount of lactic acid were the homofermentatives S. thermophilus and L. acidophilus. Fermented products containing B. animalis subsp. lactis showed the highest levels of acetic acid at the end of fermentation. Only L. acidophilus was able to metabolize citrate, while the levels of pyruvate rose slightly during fermentation. The kinetics of acidification was influenced by the composition of lactic acid culture. The higher pH values at the end of storage were obtained for treatments with probiotic cultures. The syneresis reduced during storage and the lowest value was observed in the ...
Doutor

O rotavírus é um patógeno comum, principal causador de gastroenterite em crianças em todo o mundo, acometendo, principalmente, crianças abaixo de 24 meses de idade. A infecção é responsável por aproximadamente 45% das doenças diarréicas severas em bebês e crianças, tanto em países desenvolvidos quanto em países em desenvolvimento. Este trabalho foi proposto no sentido de isolar/adaptar cepas de rotavírus humano em cultura de células MA-104 (rim fetal de macaco verde africano), a partir de amostras de campo. Para este propósito utilizou-se culturas de células em tubos de vidro, inoculadas com materiais fecais positivos para rotavírus, clarificados e descontaminados. Cinqüenta e três extratos fecais clarificados foram inoculados em cultura de células, sendo que os materiais foram submetidos à no mínimo três passagens cegas sucessivas, para permitir a adaptação, antes de considerá-las não adaptáveis. A comprovação do isolamento das cepas foi realizada através de: a) observação do efeito citopático (ECP), b) reação de imunofluorescência indireta (RIF), c) ensaio de plaque (EP) e reação em cadeia da polimerase associada à transcriptase reversa (RT-PCR). Doze amostras processadas apresentaram resultados compatíveis com a adaptação viral em cultura de células, demonstrado através do efeito citopático (ECP) típico de rotavírus, além da apresentação de fluorescência específica granular e de distribuição, predominantemente, perinuclear nas culturas submetidas à RIF. O isolamento viral foi também comprovado através da capacidade das cepas desenvolverem plaques, assim como pela possibilidade das cepas serem amplificadas por RT-PCR. O EP possibilitou ainda a demonstração de plaques com variação de diâmetro.
Rotaviruses are the single most important cause of severe diarrheal illness in infants and young children in both developed and developing countries worldwide. They affect mainly, children less than 24 months of age. Rotavirus gastroenteritis is responsible for approximately 45% of severe infection in infants and young children throughout the world. This study was proposed to isolate and to adapt human strains of rotavirus in MA-104 (African Green monkey fetal kidney) cell culture. Clarified and decontaminated fecal homogenates positive for rotavirus (by commercial kits, polyacrylamide gel electrophoresis, electron microscopy, and RT-PCR) were submitted to cell culture inoculation. Fifty-three positive fecal specimens were submitted to at least three blind passages in cell culture before discarded as non-cultivable. The isolation/adaptation procedure was monitored by the development of the cytopathic effect (CPE), immunofluorescence assay (IFA), plaque assay (PA) and RT-PCR. Twelve specimens demonstrated evidence of cell culture adaptation when monitored by the observation of the typical rotavirus CPE. Moreover, granular specific fluorescence with a predominant perinuclear distribution was demonstrated when infected cultures were submitted to IFA. The strains isolation was also confirmed by the development of plaque with varied diameter, as well as, by the amplification of the genoma of adapted virus by RT-PCR.

A diarreia neonatal é um dos principais problemas sanitários que acomete leitões em todo o mundo. Em sistemas intensivos de produção o rotavírus suíno grupo A (RVA) é uma das principais etiologias de diarreia em leitões lactentes e recém-desmamados. A caracterização dos genotipos das cepas de RVA detectadas em surtos de diarreia é de grande importância para a identificação de novos genotipos virais, para a análise da diversidade genética, identificação de eventos de ressortimento e transmissão interespécies. O objetivo deste estudo foi realizar análises filogenéticas em três cepas de RVA identificadas em fezes diarreicas de leitões. As duas cepas virais do primeiro estudo (BRA381 e BRA382) foram selecionadas durante um estudo retrospectivo de genotipagem realizado em amostras fecais diarreicas positivas para o RVA pela técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida, por apresentarem resultados negativos em testes de genotipagem utilizando primers genotipo-específico para os principais protótipos de RVA de origem humana e animal (bovino e suíno). A cepa viral do segundo estudo (BRA843) foi selecionada para a análise de todos os genes por ser uma cepa G4P[6] diferente do protótipo suíno, a cepa Gottfried. No primeiro estudo os produtos da RT-PCR dos genes VP7 (G) e VP4 (P) foram sequenciados e a análise filogenética possibilitou a identificação do genotipo G26P[13] e G26P[X] nas cepas BRA381 e BRA382, respectivamente. G26 é um genotipo raro que, até então, somente havia sido identificado em cepas de RVA suíno da Ásia (Japão e China) e, possivelmente, em uma cepa de origem humana da Tailândia. O genotipo P[13] é o terceiro genotipo mais comum em RVA suíno, porém a associação G26P[13] ainda não havia sido descrita em cepas de RVA em todo o mundo. No segundo estudo, a análise dos 11 genes de uma cepa (BRA843) de RVA suíno G4-IX P[6]-If, anteriormente caracterizada como distinta do protótipo G4P[6] (Gottfried) de origem suína, revelou estreita relação com cepas de RVA detectadas em suínos e também com cepas detectadas em humanos e animais provenientes de ressortimento com cepas suínas. Estas características sugerem que a cepa BRA843 seja de origem suína. A constelação de genotipos (G4-P[6]-I5-R1-C1-M1-A8-C1-T7-E1-H1) identificada nesta cepa brasileira de RVA suíno tem estrutura Wa-like com genotipos comumente detectados em cepas de RVA de origem suína. O genotipo T7 é um genotipo raro que foi primeiramente descrito na cepa de RVA UK (protótipo) de origem bovina. Posteriormente, o genotipo T7 foi relatado em cepas de RVA de humanos provenientes de ressortimento com cepas suínas e bovinas. Recentemente, o genotipo T7 foi também identificado em cepas de RVA suíno reforçando a origem suína deste genotipo. No Brasil, este é o primeiro estudo com análise de todos os genes de uma cepa suína de RVA G4P[6], bem como a primeira descrição de uma cepa G4P[6] suína detectada em um hospedeiro suíno carreando o genotipo T7. Os dois estudos revelaram a complexidade de genotipos de RVA circulantes em rebanhos suínos brasileiros, bem como a importância da análise de todos os genes para a compreensão dos mecanismos de evolução das cepas de rotavírus e o papel dos suínos como reservatórios de uma constelação de genotipos de RVA passíveis de infectar tanto animais quanto humanos.
Neonatal diarrhea is a major health problem that affects piglets worldwide. In intensive pig production systems, the porcine group A rotavirus (RVA) is one of the main causes of diarrhea in suckling and recently weaned piglets. The characterization of genotypes of the RVA strains detected in diarrhea outbreaks is important for the identification of new genotypes, for the analysis of genetic diversity, identification of reassortment and interspecies transmission events. The aim of this study was to perform the phylogenetic analysis of three RVA strains identified in diarrheic fecal samples of piglets. The two strains from the first study (BRA381 and BRA382) were selected during a retrospective genotyping study performed in RVA-positive diarrheic fecal samples by polyacrylamide gel electrophoresis technique, by negative results in genotyping assays using genotype-specific primers for the main RVA prototypes of human and animal origin (bovine and porcine). The strain from the second study (BRA843) was chosen for analysis of the all genes for being a G4P[6] strain different to porcine prototype, the Gottfried strain. In the first study, the RT-PCR products of the VP7 (G) and VP4 (P) genes were sequenced and the phylogenetic analysis allow the identification of the genotype G26P[13] and G26P[X] in the BRA381 and BRA382 strains, respectively. G26 is a rare genotype, which until then, had only been identified in porcine RVA strains from Asia (Japan and China) and, probably, in a human origin strain from Thailand. P[13] is the third most common genotype in porcine RVA, but the combination G26P[13] had not still been reported in RVA strains worldwide. In the second study, the analysis of the all genes of a G4-IX P[6]-If porcine RVA strain (BRA843), previously characterized as distinct from the G4P[6] porcine prototype (Gottfried), revealed close relationship with RVA strains detected in pigs and also with porcine-like human and porcine-like animal RVA strains. These characteristics suggest that BRA843 strain is a porcine strain. The genotype constellation (G4-P[6]-I5-R1-C1-M1-A8-C1-T7-E1-H1) identified in this Brazilian porcine RVA field strain has the Wa-like structure with genotypes commonly detected in porcine RVA strains. T7 is a rare genotype that was first described in the UK RVA strain (prototype) of bovine origin. Afterwards, the T7 genotype was identified in human RVA strains derived from reassortment with porcine and bovine RVA strains. Recently, the T7 genotype was also identified in porcine RVA strains reinforcing the porcine origin of this genotype. In Brazil, this is the first study where all genes of a porcine G4P[6] RVA strain were analyzed, as well as, the first description of G4P[6] porcine RVA strain detected in a pig host bearing the T7 genotype. The two studies reveals the complexity of RVA genotypes circulating in Brazilian pig herds, as well as, the importance of analyzing all genes for understanding the mechanisms of evolution of the RVA strains and the role of pigs as reservoirs of a RVA genotype constellation able to infect both animals and humans.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-05-10T14:07:13Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese - MICHELLE GALINDO DE OLIVEIRA.pdf: 3250688 bytes, checksum: 733ff03fc983cb5b86b68f40df163b29 (MD5)
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Os produtos cárneos apresentam alto consumo mundial e devido as suas propriedades nutricionais constituem ambiente favorável para o desenvolvimento de micro-organismos patogênicos. A indústria de alimentos vem tentando reduzir os níveis de aditivos químicos e investindo em pesquisa de compostos naturais que tenham ação conservante. A quitosana é um polímero natural que apresenta aplicações em alimentos, pois dentre suas várias propriedades destaca-se sua ação antimicrobiana Este estudo teve como objetivo verificar a ação antimicrobiana da quitosana na inibição de cepas patogênicas (Staphylococcus aureus e Listeria monocytogenes) em hambúrgueres elaborados, bem como acompanhar a vida de prateleira e aceitação sensorial deste produto formulado. Os testes para determinar a Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM) da quitosana, foram realizados através da técnica de microdiluição. Os testes em matriz alimentar foram realizados em hambúrgueres infectados por S. aureus e L. monocytogenes, por meio da contagem de células viáveis nos intervalos de 1, 3, 5,7, 9, 11, 13, 15 e 30 dias. Ademais, no produto cárneo preparado, com e sem quitosana, foram realizadas análises microbiológicas, físico-químicas, sensorial mensalmente durante o período de 4 meses para verificação da vida de prateleira. O teste sensorial dos hambúrgueres elaborados, com e sem quitosana, foi avaliado através de uma escala hedônica. Observou-se que a quitosana apresentou efeito bactericida e bacteriostático para ambas bactérias, sendo CIM 2,5mg.mL-1 e CBM 5,0mg.mL-1. Nos hambúrgueres previamente infectados por cada micro-organismo, as concentrações de 2,5 e 5,0mg.mL-1 de quitosana apresentaram efeito similar nos patógenos testados. Durante o armazenamento não ocorreram alterações prejudiciais às características sensoriais e microbiológicas devido à interação da quitosana com os demais constituintes dos hambúrgueres. A partir dos resultados obtidos foi possível observar que a quitosana foi capaz de inibir o crescimento de cepas patogênicas em hambúrgueres. Hambúrgueres adicionados de quitosana apresentaram estabilidade durante 120 dias à -18oC. Dessa forma a quitosana pode ser considerada uma alternativa viável na preservação de alimentos, podendo ser utilizada como conservante natural em hambúrguer. Este estudo contribui de forma significativa não somente para a comunidade científica, mas também para as indústrias de produtos cárneos, uma vez que o importante achado da utilização de quitosana pode auxiliar no controle destes patógenos de maneira saudável, segura e saborosa, isto é, do ponto de vista nutricional, microbiológico e sensorial, respectivamente.
The meat products have high global consumption and because of its nutritional properties contribute to the development of pathogenic micro-organisms. The food industry has been trying to reduce levels of chemical additives and investing in research of natural compounds that have preservative action. Chitosan is a natural polymer with many applications in food, because among its various property stands out for its antimicrobial action This study aimed to evaluate the antimicrobial activity of chitosan in inhibiting pathogenic strains (Staphylococcus aureus and Listeria monocytogenes) in elaborate burgers, and monitor its shelf life and check the sensory acceptance of the formulated product. Tests to determine the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) of chitosan were performed by broth microdilution technique. The tests were conducted in the food matrix into hamburger infected by S. aureus and L. monocytogenes, through the viable cell count in the ranges of 1, 3, 5,7, 9, 11, 13, 15 and 30 days. Ademas in prepared meat product, with and without chitosan were carried out microbiological, physical-chemical, sensory monthly during the period of four months shelf life for verification. The sensory test of the elaborate hamburgers with and without chitosan was evaluated using a hedonic scale. It was observed that chitosan inhibited the growth of bacteria tested, with static and lished effect similar for both bacteria, MIC being 2,5mg.mL 5,0mg.mL-1 and CBM-1. In burgers previously infected by each microorganism, concentrations of 2.5 and 1 5,0mg.mL-chitosan exhibited a similar effect on the tested pathogens. During storage there were no detrimental changes to the organoleptic and microbiological characteristics due to the interaction of chitosan with the other constituents of the burgers. From the results obtained it was observed that chitosan was able to inhibit the growth of pathogenic strains burgers. Hamburgers added chitosan remained stable for 120 days at -18° C. Thus chitosan can be considered a viable alternative in the preservation of foods and can be used as a natural preservative in hamburger. This study makes a significant contribution not only to the scientific community, but also for industries of meat products, since the important finding of the use of chitosan can help control these pathogens of healthy, safe and tasty way, that is, from the point nutritional, microbiological and sensory view, respectively

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-11-26Bitstream added on 2014-06-13T19:36:15Z : No. of bitstreams: 1 rossi_lrl_me_arafcf.pdf: 682047 bytes, checksum: 215bd6a830c595069af77cb75cbaee6d (MD5)
Universidade Estadual Paulista (UNESP)
Este estudo visou mensurar formas tripomastigotas e epimastigotas de Trypanosoma cruzi das cepas Bolívia, QM2, S.I.9 e Y por meio de microscópio óptico acoplado a um analisador de imagens e programa Leica QWin. Para tanto utilizou-se os parâmetros definidos por DIAS, FREITAS FILHO (1943) e BARRETO (1965): distâncias da extremidade posterior ao meio do núcleo (PN), do meio do núcleo à extremidade anterior do corpo (NA), comprimento do flagelo (FL), comprimento total (T), largura (L), Área do Cinetoplasto (AC), Área do Núcleo (NA) e Índice Nuclear (IN). Mensurou-se 360 formas tripomastigotas sanguíneas, 120 formas epimastigotas de meio de cultura LIT e 120 formas epimastigotas de fezes de triatomíneo de T. cruzi de cada uma das cepas Bolívia, QM2, S.I.9 e Y. Os oito parâmetros definidos para caracterização das formas tripomastigotas sanguíneas foram mensurados anteriormente ao pico de parasitemia, durante o pico e posteriormente ao pico de parasitemia para as formas tripomastigotas sanguíneas. As quatro cepas de T. cruzi mostraram percentual distinto de formas finas, intermediárias e largas das formas tripomastigotas sanguíneas. De acordo com os parâmetros morfométricos as formas foram classificadas em fina, intermediária e larga no que se refere à largura e curta, intermediária e longa com relação ao comprimento. As mensurações das formas tripomastigotas sanguíneas de T. cruzi das cepas Bolívia, QM2, S.I.9 e Y quanto a largura mostraram os seguintes resultados: as formas finas variaram entre 0,6 e 1,3μm; intermediárias entre 1,4 e 2,1μm; largas entre 2,2 e 5,5μm. Quanto ao comprimento total obtevese para a forma curta variação entre 13,5 e 19,5μm; para a forma intermediária entre 19,6 e 24,7μm; para a forma longa entre 24,8 e 43,8μm. As formas epimastigotas de meio de cultura LIT apresentaram...
This study aimed the measurement of trypomastigotes and epimastigote of Trypanosoma cruzi from Bolivia strains, QM2, S.I.9 and Y by means of an optical microscope coupled to an image analyses program called Leica QWin. The following parameters defined for DIAS, FREITAS FILHO (1943) & BARRETO (1965) were used for these measurements: distance from the posterior extremity to the middle of the nucleus (PN), from the middle of the nucleus to the anterior extremity of the body (NA), flagellum length (FL), total length (T), width (L), kinetoplast area (AC), nucleus area (NA) and nuclear index (IN). 360 blood-stream forms were measured, 120 epimastigote forms in the LIT culture mean and 120 epimastigote forms from triatomine feces of T. cruzi for each of the Bolivia strains, QM2, S.I.9 and Y. All eight defined parameters for trypomastigote forms characterization were measured before the parasitemia peak, during the peak and after the parasitemia peak. The four T. cruzi strains showed to be distinct when comparing the percentage in the thin, intermediary and large forms of trypomastigotes. According the morphometric parameters the forms were classified as thin, intermediary and wide regarding width, and short, intermediary and long regarding length. The measurements of trypomastigote blood stream forms of T. cruzi from Bolivia strains QM2, S.I.9 and Y regarding width showed the following results: the thin form varied from 0.6 to 1.3μm; the intermediary from 1.4 to 2.1μm; wide from 2.2 to 5.5μm. Now the total length obtained for the short form varied from 13.5 to 19.5μm; for the intermediary form from 19.6 to 24.7μm; for the long form from 24.8 to 43.8μm. The epimastigote forms in the LIT culture mean presented the following measurements related to width: thin forms between 1.1 and 1.7μm, intermediary forms between 1.8 and 2.8μm.

Resumo: Embora a incidência da doença de Chagas tenha diminuído, os estudos sobre o Trypanosoma cruzi devem continuar, dada a dificuldade para o efetivo controle dos seus vetores. Triatoma infestans o principal vetor da doença de Chagas está praticamente eliminado no Brasil, entretanto outras espécies de Triatominae estão em processo de domiciliação, como o Triatoma rubrovaria no Rio Grande do Sul, constituindo-se em um fator de risco para o recrudescimento da infecção chagásica. Com o intuito de caracterizar cepas de T. cruzi que circulam na área rural, foram feitas buscas ativas de triatomíneos para isolamento desse protozoário em bairros do município de Quaraí, RS. Para tanto as fezes dos triatomíneos coletados foram obtidas por compressão abdominal para pesquisa de tripomastigotas metacíclicos. As fezes que se encontraram positivas foram inoculadas em animais de experimentação e em meio de cultura (LIT). Foram isoladas cinco cepas de T. cruzi, assim denominadas: QB1, QJ1, QJ3, QM1 e QM2, que apresentaram as seguintes características: predominância de formas tripomastigotas intermediárias após mensuração no 15º dia pósinfecção, picos parasitêmicos ao redor do17º dia pós-infecção, miotropismo na fase aguda e miosite na fase crônica da infecção. A análise do DNA que codifica a fração 24Sa do rRNA mostrou fragmentos de 110 pb, agrupando-as em T. cruzi I. Os serviços de vigilância epidemiológica foram informados sobre os resultados obtidos.
Abstract: Although the decrease in the incidence of Chagas' disease, the studies concerning T. cruzi shall continue, due to the difficulty in controlling its vector. Triatoma infestans the main vector of Chagas'disease is nearly eliminated in Brasil, nevertheless other Triatominae species are on domiciliate process, like Triatoma rubrovaria in Rio Grande do Sul State, representing a hazard factor for increasing Chagas infection. In order to characterize T. cruzi strains that naturally occur in the rural area, active searches were performed in order to isolated these strains in the district of Quarai, RS. Triatomine feces were collected by abdominal compression and the presence of metacyclic tripomastigotes was evaluated. The feces positive for metacyclic triatomines were inoculated in experimental animals and in the culture medium (LIT). Five T. cruzi strains were isolated: QB1, QJ1, QJ3, QM1 and QM2. The strains displayed a predominance of intermediate forms on 15th day post-infection. Parasitimia peak occurred on 17th day post-infection. Myotropism during acute phase and myositis in the chronic phase was oberved. The DNA analysis coding the 24 Sa r RNA fraction has displayed fragments of 110 pb, grouping them in T. cruzi I. The Epidemiologic Vigilance Services have been warmed about the achieved results.
Orientador: João Aristeu da Rosa
Coorientador: Márcia Aparecida Sperança
Banca: Mara Cristina Pinto
Banca: Márcia Aparecida Silva Graminha
Banca: José Clóvis do Prado Júnior
Banca: Sérgio Albuquerque
Doutor

Magíster en Ciencias de la Ingeniería, Mención Química. Ingeniero Civil en Biotecnología
En la actualidad, se realizan grandes esfuerzos en aplicar nuevos métodos de producción de compuestos novedosos de alto valor agregado. Un ejemplo de esto es el ácido hialurónico, que tiene importantes y nuevos usos, especialmente en el área de la salud, y su demanda se encuentra en alza. El presente trabajo de tesis tiene como objetivo generar una nueva cepa recombinante de Escherichia coli que sea capaz de producir ácido hialurónico a partir de fuentes de carbono novedosos, como es el caso de los carbohidratos de algas pardas. Esto se debe a que estas algas presentan varias ventajas, como su gran abundancia y relativa facilidad de obtención de los azúcares presentes. Este trabajo se enfoca en el uso de los carbohidratos alginato y manitol, principales azúcares presentes en estas macroalgas. Como punto de partida se utilizó la cepa recombinante BAL 1611. Esta cepa tiene incorporados los genes necesarios para el transporte y degradación del alginato, además de estar optimizado para la producción anaeróbica de etanol. A esta cepa se le realizó modificaciones para disminuir la producción de etanol y se le incorporó los genes necesarios para producir ácido hialurónico. En la primera etapa del trabajo se obtuvo una cepa con resistencia al antibiótico cloranfenicol y con la producción de etanol disminuida. Luego, la cepa se transformó con un plasmidio que contiene los genes necesarios para la síntesis de ácido hialurónico. La síntesis de las proteínas codificadas en el vector recombinante se indujo con L-arabinosa para iniciar la producción. Además, en este proyecto se diseñó un método para cuantificar la concentración de ácido hialurónico utilizando la enzima hialuronidasa. Se logró obtener un microorganismo recombinante que produce ácido hialurónico a partir de alginato y manitol con una concentración de 20 [g/l] de azúcares totales, con una proporción de 2:1 en peso. El rendimiento obtenido fue de 3,67 [mg AH/l/gDW]. Finalmente, se introdujo modificaciones a un modelo matemático del metabolismo de E. coli, para introducir las reacciones correspondientes a la degradación de alginato y de la síntesis de ácido hialurónico. Se realizó un análisis de balance de flujo a partir de los datos generados de un cultivo con un medio definido, aplicando variaciones en las condiciones in silico. A partir de este análisis se concluyó que es necesario controlar la cantidad de oxígeno presente en el cultivo. Por otro lado, la presencia de los genes de Z. mobilis no presenta impacto en la producción de biomasa ni de ácido hialurónico. Además, debido al alto costo energético de producir ácido hialurónico y el desbalance de óxido-reducción que produce la metabolización de alginato hace que los rendimientos de AH sean bajos. Esto da pie a implementar nuevas estrategias para optimizar la producción de AH a partir de este carbohidrato.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Pós-Graduação em Biologia Microbiana, 2015.
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Bordetella pertussis é uma bactéria Gram-negativa, restrita aos humanos, causadora da coqueluche,a doença evitável por vacina mais prevalente em todo o mundo. Bordetella pertussis é relativamente monomórfica em todo o mundo, no entanto, diversos países estão enfrentando diferentes evoluções epidemiológicas da doença. No Brasil, foi observado um aumento súbito de casos de coqueluche desde 2011. No Distrito Federal, 442 foram observados entre 2010 e 2014. O objetivo deste estudo foi caracterizar as cepas de Bordetella pertussis, isoladas no LACEN-DF de 2012 a 2014, por meio das técnicas de sorotipagem e PFGE, além de analisar os seguintes dados: faixa etária e residência dos pacientes com cultura positiva para o agente. Noventa duas cepas foram isoladas de julho de 2012 a agosto 2014: 69 estirpes foram isoladas de 16 regiões do Distrito Federal (DF), e 23, de Goiás (GO) e de Minas Gerais (MG). A maior prevalência observada foi entre os pacientes com 02-04 meses de idade (40/92), seguido com 0-01 mês de idade (28/92). A alta prevalência da infecção entre bebês com até 04 meses confirmou as observações realizadas no Brasil, em que foram registrados 4.921 casos nessa faixa etária. Todos os três sorotipos de Bordetella pertussisforam identificados entre os isolados. O sorotipo Fim2 foi o mais prevalente (53,23%), seguido por Fim3 (31,61%) e Fim2,3 (13,04%). Durante o período analisado, houve uma alteração da prevalência entre os sorotipos: de julho de 2013 a julho de 2014, o Fim3 foi o mais prevalente, no entanto, de agosto 2013 a agosto de 2014, o sorotipo mais prevalente foi Fim2. Os resultados da sorotipagem sugerem que o surto de coqueluche foi causado por dois clones diferentes de Bordetella pertussis em Brasília-DF durante o período analisado.De acordo com o PFGE, nos três anos analisados foram caracterizados 14 pulsotipos, com similaridade de 85% entre eles. Houve predomínio do pulsotipo BP.Xba.0039 (o predominante no Brasil), seguido pelo pulsotipo BP.Xba.0040. Além disto, foi observado o aumento da prevalência dos pulsotiposBP.Xba.0039 e BP Xba.0040 e diminuição da diversidade genética a partir do segundo semestre de 2013. Estes dados sugerem a ocorrência da seleção de cepas circulantes de B. pertussis na área analisada. ___________________________________________________________________________ ABSTRACT
Bordetella pertussis is a Gram-negative human-restricted bacterium that causes whooping-cough or pertussis, which is the most prevalent vaccine-preventable disease worldwide. The introduction of the pertussis vaccination has affected the bacterial population and epidemiology of the disease. Bordetella pertussis is relatively monomorphic worldwide, but nevertheless, different countries are facing different epidemiological evolutions of the disease. In Brazil, a sudden increase of pertussis cases was observed since 2011. In Distrito Federal, 442 were observed from 2010 to 2014. The aim of this study was to characterize the Bordetella pertussis strains isolated at LACEN-DF during 2012 to 2014 through serotyping and PFGE techniques, besides analyzing the following data: group age and residence of the patients with positive culture for Bordetella pertussis. Ninety two strains were isolated from July 2012 to August 2014: 69 strains were isolated from 16 regions from Distrito Federal (DF), and 23 were from Goiás (GO) and Minas Gerais (MG). The most prevalence were observed among patients from patients with 02 to 04 months of age (40/92), followed by 0 to 01 month of age (28/92). The high prevalence of these infection among babies up to 04 months confirmed the observations in Brazil, in which were recorded 4921 cases in this age range. All the three Bordetella pertussis serotypes were identified among the isolates. Fim2 serotype were the most prevalent (53.23%), followed by Fim3 (31.61%) and Fim2,3 (13.04%). During the period analyzed, there was an alteration of the prevalent serotypes: from July 2013 to July 2014, Fim3 was the most prevalent however from August 2013 to August 2014 the most prevalent serotype was Fim2. Serotyping results suggest that the pertussis outbreak was caused by different two clones from Bordetella pertussis in Brasilia –DF.According to the PFGE in the three years analyzed were characterized 14pulsetypes, with 85% similarity between them. BP.Xba.0039 and BP.Xba.0040 were the most prevalent pulsetype identified. Since August 2013, we observed the increase of BP.Xba.0039 andBP.Xba.0040pulsetypes and the decrease of genetic diversity. These data suggests the selection occurrence of current strains of B. pertussis on the analyzed area.

O presente trabalho visou identificar e caracterizar três cepas, BRA1, BRA3 e BRA5, isoladas do resíduo de bauxita da região Sul de Minas Gerais. Foi realizado o seqüenciamento do gene 16S RNA ribossomal utilizando dois pares de primers em que foi possível seqüenciar 1300pb de cada cepa isolada. Testes bioquímicos e metabólicos complementares foram realizados a fim de caracterizar os isolados. Os resultados indicaram que a cepa BRA1 foi identificada com 99,7% de similaridade com Bacillus cohnii e caracterizada como: Gram-positiva; redutora de nitrato, catalase, oxidase e amilase positiva; faixa de crescimento entre pH 7 e 10; tolerante às concentrações de 0 a 10% de NaCl, e; faixa de temperatura de 20 a 40ºC. A cepa BRA3 foi identificada com 99,7% de similaridade com Bacillus pseudofirmus e caracterizada como: Gram-positiva; catalase e amilase positiva; oxidase negativa e não redutora de nitrato; faixa de crescimento entre pH 7 e 10; tolerante às concentrações de 5 a 10% de NaCl, dependente do íon Na+ para crescimento, e; faixa de temperatura de 10 a 40ºC. Com os resultados da técnica de seqüenciamento, a cepa BRA5 foi identificada com 99,7% de similaridade com Bacilus clarkii e Bacillus polygoni. Após testes bioquímicos e fisiológicos, a cepa BRA5 ficou mais próxima às características bioquímicas do Bacillus clarkii, caracterizada como: Gram-positiva; catalase e oxidase positiva, redutora de nitrato e amilase negativa; faixa de crescimento entre pH 8 e 10; tolerante às concentrações de 5 a 10% de NaCl, dependente do íon Na+ para crescimento, e; faixa de temperatura de 20 a 40ºC. A utilização dos açúcares: glicose, frutose, sacarose e manitol pelas cepas foi positiva e os ácidos mais produzidos a partir das fontes de carbono foram os ácidos acético, isobutírico, isovalérico, entre outros. As cepas BRA1, BRA3 e BRA5 utilizando glicose como fonte de carbono foram capazes de diminuir o pH do meio de 10,5 para aproximadamente 9,3, 9,5 e 9, respectivamente. A identificação e caracterização dos isolados foram bem sucedidas e os resultados apresentados estão de acordo com os encontrados na literatura.
This study aimed to identify and characterize three strains BRA1, BRA3 and BRA5 isolated from bauxite residue in the Southern region of Minas Gerais. Sequencing of 16S ribosomal RNA gene was carried out using two pairs of primers, which allowed high quality sequencing of 1300pb from each isolated strain. Additional biochemical tests were conducted to characterize the strains. The results indicated that strain BRA1 was identified with 99.7% similarity with B. cohnii and characterized as: Gram-positive; positive for nitrate reduction, catalase, oxidase and amylase; growth range between pH 7 and 10; tolerant to concentrations of 0 to 10% NaCl, and; growth is observed between 20 and 40 °C. The strain BRA3 was identified with 99.7% similarity with Bacillus pseudofirmus and characterized as: Gram-positive; positive for catalase and amylase; negative for oxidase and nitrate reduction; growth range between pH 7 and 10; tolerant to concentrations of 5 to 10% NaCl, Na+ ion dependent for growth, and; growth is observed between 10 and 40 °C. In the results of the sequencing analysis, strain BRA5 was identified with 99.7% similarity with Bacillus clarkii and Bacillus polygoni. After biochemical and physiological tests, the strain BRA5 was closest to the biochemical characteristics of Bacillus clarkii, characterized as Gram-positive; positive for catalase and oxidase, non-nitrate reduction, and amylase; growth range between pH 8 and 10; tolerant to concentrations of 5 to 10% NaCl, Na + ion dependent for growth, and; growth is observed between 20 and 40 °C. The use of sugars: glucose, fructose, sucrose and mannitol was positive and the higher amount of acids produced from the carbon sources were acetic, isobutyric, isovaleric, among others. Strains BRA1, BRA3 and BRA5 using glucose as a carbon source were able to decrease the medium pH 10.5 to approximately 9.3, 9.5 and 9, respectively. The identification and characterization of isolates were successful and the results presented are consistent with those found in the literature.
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG

Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3314099 bytes, checksum: 6718a7629561d518b36935f1ca31ec59 (MD5) Previous issue date: 2013-10-31
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
The fungi have become, over the last two decades, a major cause of illness in humans. Fungi of the genus Penicillium can be found in various substrates and affect immunocompromised people, hospitalized patients, many animals and plants, as well as compromise the quality of air indoors. The indiscriminate use of antibiotics and the resulting framework of resistance of microorganisms to conventional antimicrobial therapy has been stimulating researchers to seek alternative sources of these compounds, among them products derived by medicinal plants. Tendency to get phytochemicals from extracts, fractions, fixed or essential oils obtained from plant species is currently observed. In this context, the present study evaluated the in vitro antifungal activity of seven phytochemicals: carvacrol, citral, geraniol, linalool, pcymene, terpinolene and thymol, against twelve strains of Penicillium. Firstly, screening was carried out to find the phytochemical with the best activity by determining the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) by the broth microdilution technique. Following, the tests were proceeded with thymol, which were: determination of Minimum Fungicidal Concentration (MFC), effect of the phytochemical on mycelial growth kinetics, interference of thymol on germination of conidia and evaluation of the influence of thymol on the fungal morphology. To this end, we selected two strains, one that was more resistant and another with a more sensitive profile. The value of thymol MIC50 and MIC90 was 128μg/ml, while the CFM value ranged from 128μg/ml to 1024μg/ml. It was observed total radial mycelial growth inhibition at the three thymol concentrations used (128μg/ml, 256μg/ml and 512μg/ml) over 14 days of exposure. In the study of the interference of thymol on the conidia germination was observed inhibitory effect. At the concentration of 512μg/mL was found greater than 80% inhibition, at 256 μg/mL inhibition was higher than 75%, while in 128μg/mL inhibition was higher than 60%, all this for both strains tested, revealing concentration-dependent inhibitory effect. In the presence of thymol, morphological changes were observed in mycelial structure, such as decrease in the amount of conidia, reduction in the formation of reproductive structures with the appearance of rudimentary reproductive structures, besides the abnormal development of hyphae. Given the above, it is concluded that thymol has antifungal activity against strains of Penicillium and therefore represents a new possibility in the arsenal of products for the treatment of infections caused by this fungus.
Os fungos tornaram-se, ao longo das últimas duas décadas, uma das principais causas de doença em humanos. Fungos do gênero Penicillium podem ser encontrados nos mais variados substratos e afetam indivíduos imunocomprometidos, pacientes hospitalizados, animais e plantas diversas, além de comprometerem a qualidade do ar de ambientes internos. O uso indiscriminado de antibióticos e o decorrente quadro de resistência dos microrganismos à terapêutica antimicrobiana convencional vem impulsionando os pesquisadores a buscarem fontes alternativas desses fármacos, dentre elas, produtos de plantas medicinais. Observa-se, atualmente, uma tendência à obtenção de fitoconstituintes a partir de extratos, frações, óleos fixos ou essenciais, obtidos de espécies vegetais. Nesse contexto, o presente estudo avaliou a atividade antifúngica in vitro de sete fitoconstituintes: carvacrol, citral, geraniol, linalol, pcimeno, terpinoleno e timol, sobre doze cepas de Penicillium. Primeiramente, realizou-se uma triagem para encontrar o fitoconstituinte com melhor atividade, através da determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM), pela técnica de microdiluição. A seguir, prosseguiram-se os testes com o timol, quais foram: determinação da Concentração Fungicida Mínima (CFM), efeito do fitoconstituinte sobre a cinética de crescimento micelial do fungo, interferência do timol sobre a germinação dos conídios e avaliação da influência do timol sobre a micromorfologia fúngica. Para tanto, foram selecionadas duas cepas, uma que se mostrou mais resistente e outra com perfil mais sensível. O valor da CIM50 do timol, bem como da CIM90, foi 128μg/ml, já o valor da CFM variou de 128μg/ml a 1024μg/ml. Observou-se total inibição do crescimento micelial radial, nas três concentrações de timol utilizadas (128μg/ml, 256μg/ml e 512μg/ml), ao longo de 14 dias de exposição. No estudo da interferência do timol sobre a germinação dos conídios, observou-se efeito inibitório. Na concentração de 512μg/mL foi encontrada uma inibição superior a 80%, em 256 μg/mL a inibição foi superior a 75%, enquanto que em 128μg/mL a inibição foi superior a 60%, para as duas cepas testadas, revelando um efeito inibitório dependente da concentração. Na presença do timol, foram observadas alterações morfológicas na estrutura micelial, tais como diminuição do número de conídios, redução da formação de estruturas de reprodução com surgimento de estruturas reprodutivas rudimentares, além de desenvolvimento anormal das hifas. Diante do exposto, conclui-se que o timol apresenta atividade antifúngica contra cepas de Penicillium e, conseqüentemente, representa uma nova possibilidade no arsenal de produtos para o tratamento de infecções por este fungo.

Made available in DSpace on 2015-04-17T15:03:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 760407 bytes, checksum: 36ff52186c6a7e31beb2bd5ddc4a7fa0 (MD5) Previous issue date: 2011-03-25
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES
This study aimed to isolate strains of Staphylococcus aureus in ricotta cheeses and to characterize them respecting phenotypic markers of lipolytic activity, and bacteriocin typing and resistance typing. For isolation, were acquired 11 samples of different brands of ricotta cheese sold in supermarkets in João Pessoa - Paraíba. Among the 41 strains, 82.9% proved positive lipase (Lip+) and 17.1%, negative lipase (Lip-). In relation to bacteriocin typing, 9.76% showed bacteriocin producing against a strain of Staphylococcus aureus isolated from surfaces processing food and 55% were susceptible to a strain of Staphylococcus aureus isolated from ricotta cheese. For resistance typing, 87.8% of strains were resistant to streptomycin, 26.59% to penicillin and 19.51% to erythromycin. None of the strains were resistant to tetracycline. Variability was observed between the minimal inhibitory concentrations (MIC), both in resistant strains as sensitive ones, so the variability showed more prevalent with penicillin (ranging from 0.015625 to 16 mg / mL) and the variability between strains of the same cheese. Only erythromycin-resistant strains were subjected to "D-test" to determine the type of resistance, of which all presented inductive resistant. From this results obtained, can conclude that although the phenotypes show an adaptive answer on related to the peculiarities of local environmental pressures, it is clear the importance of these genetic markers to discern new strains of S. aureus for those endemic, as well as to investigate possible epidemiological impacts and on food safety.
Este estudo teve como objetivo isolar cepas de Staphylococcus aureus de queijos ricota e caracterizá-las com relação a marcadores fenotípicos de atividade lipolítica, bacteriocinotipagem e resistotipagem. Para o isolamento, foram adquiridas 11 amostras de queijo ricota de diferentes marcas comercializadas em supermercados da cidade de João Pessoa-PB. Entre as 41 cepas isoladas, 82,9% revelaram-se lipase positiva (Lip+) e 17,1%, lipase negativa (Lip-). Com relação à bacteriocinotipagem, 9,76% mostraram-se produtoras de bacteriocinas frente a uma cepa de Staphylococcus aureus isolada de superfícies de processamento de alimentos e 55% mostraram-se sensíveis a uma cepa de Staphylococcus aureus isolada de queijo ricota. Para resistotipagem, 87,8% das cepas apresentaram-se resistentes a estreptomicina, 26,59% a penicilina e 19,51% a eritromicina. Nenhuma das cepas foi resistente a tetraciclina. Observou-se a variabilidade entre as Concentrações Inibitórias Mínimas, tanto em cepas resistentes como sensíveis, sendo tal variabilidade mais predominante com penicilina (variação de 0,015625 a 16 μg/mL), bem como a variabilidade entre cepas do mesmo queijo. Apenas cepas resistentes a eritromicina foram submetidas ao D-teste a fim de determinar o tipo de resistência, das quais todas as cepas mostraram-se com resistência indutiva. A partir dos resultados obtidos, pode-se concluir que embora os fenótipos revelem uma resposta adaptativa relacionada às peculiaridades das pressões ambientais locais, é evidente a importância destes marcadores genéticos a fim de se distinguir novas linhagens de S. aureus daquelas endêmicas, bem como investigar possíveis impactos epidemiológicos e na segurança alimentar.

CNPQ
A apicultura é uma atividade econômica importante no Sudoeste do Paraná e o desenvolvimento de produtos à base de mel pode ser uma importante alternativa para o escoamento da produção e ao mesmo tempo uma interessante forma de agregar valor ao produto. O hidromel é uma bebida fermentada obtida pela diluição do mel em água com adição de nutrientes e leveduras. Em algumas regiões da Europa é uma bebida muito consumida e apreciada, no Brasil, no entanto, é pouco conhecida e explorada. O presente estudo tem por objetivo investigar o processo de fermentação alcoólica do mel, com diferentes cepas de leveduras Saccharomyces, produzir e avaliar o hidromel fresco e maturado. O mel para o desenvolvimento do estudo foi adquirido na Associação dos Apicultores do Município e submetido à caracterização físico-química e de adulteração, os resultados demonstraram que a matéria prima apresentava padrão de qualidade e identidade característico do mel puro de abelhas (Apis mellífera). Conhecendo a qualidade da matéria prima, três tipos de diferentes leveduras (Red Star champagne, Lalvin EC 1118 e Fleischmann) foram utilizados para produção de hidromel. O produto final foi caracterizado através de análises físico-químicas e os compostos voláteis foram identificados e quantificados por cromatografia. Dentre as cepas utilizadas, a leveduras a Red Star champagne apresentou maior capacidade de converter açúcar em álcool (etanol), produzindo a bebida com maior teor alcoólico. A levedura Lalvin EC 1118 produziu uma bebida mais equilibrada quanto ao teor alcoólico e açúcares redutores residuais, enquanto a levedura Fleischmann apresentou menor capacidade de conversão de açúcar em álcool, fornecendo a bebida com menor teor alcoólico. O perfil de compostos voláteis apresentou-se de maneira similar nas três formulações de hidromel elaborado com as diferentes cepas de leveduras Saccharomyces, entretanto, a bebida produzida a partir da cepa Fleischmann, apresentou de modo geral, maior concentração de ésteres relacionados ao aroma frutado e floral, sendo esta a preferida sensorialmente e submetida à maturação em tonéis de carvalho e bálsamo por um período total de 180 dias. O carvalho apresentou maior capacidade de alterar as características físico-químicas e de cor da bebida, o que não indica que o bálsamo não possa ser considerado uma boa alternativa para maturação de hidromel.
Beekeeping is an important economic activity in the Southwest of Paraná and the development of honey-based products can be an important alternative to the flow of production and at the same time an interesting way to add value to the product. The mead is a fermented beverage obtained by dilution of the honey in water with addition of nutrients and yeast. In some parts of Europe is a drink very consumed and appreciated in Brazil, however, it is little known and exploited. This study aims to investigate the process of alcoholic fermentation of honey with different strains of Saccharomyces yeast, produce and evaluate fresh and matured mead. The honey for the development of the study was acquired in the Beekeepers Association of the City and subjected to physical and chemical characterization and adulteration, the results showed that the raw material had quality standard and characteristic identity of pure honey bees (Apis mellifera). Knowing the quality of raw material, three different types of yeast (Red Star champagne, Lalvin EC and 1118 Fleischmann) were used for production of mead. The final product was characterized by physical-chemical analysis, volatile compounds were identified and quantified by chromatography. Sensory analysis was performed to identify the greater acceptance of sample, which was subsequently submitted to maturation in oak barrels and balsam. Among the strains used, the yeast Red Star Champagne showed higher ability to convert sugar into alcohol (ethanol), producing a beverage with higher alcohol content. The Lalvin EC 1118 yeast produced a more balanced drink on the alcohol content and residual reducing sugars, while Fleischmann yeast showed less sugar conversion capacity in alcohol, providing drinking less alcohol. The profile of volatile compounds presented in a similar fashion in the three mead formulations developed with different strains of Saccharomyces yeasts, however, the beverage produced from Fleischmann strain showed generally higher amounts of esters linked to fruity aroma and floral. Sensory analysis indicated the drink produced by Fleischmann yeast as the preferred, which was aged in oak barrels and balsam, the maturation stage had a total of 180 days. Among the wood used for the maturation, oak showed greater ability to alter the physical and chemical characteristics of the drink, the color parameter has also been changed more intensely by maturation inoak, which does not indicate that the balsam can not be considered a good alternative to mead maturation.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:39:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_9269_Rogério Danieletto - Versão final.pdf: 1180464 bytes, checksum: 8cc877ad50d3cad8b2ad0a558bb171ad (MD5) Previous issue date: 2015-10-09
Lipases são enzimas que catalisam reações de grande interesse industrial, podendo ser usadas na síntese do biodiesel, que é um combustível alternativo e biodegradável produzido a partir de fontes renováveis, tais como óleos vegetais e gordura animal. O objetivo deste trabalho foi estudar a produção de lipases utilizando fungos Penicillium sp. e Rhizomucor sp. por fermentação em estado sólido (FES). Neste trabalho, a fermentação para a produção das lipases utilizou como substrato o bagaço de cana. Inicialmente, foram realizados ensaios preliminares com o intuito de testar a melhor granulometria do bagaço (0,6 a 1,18 mm ou 0,6 a 2,0 mm), a utilização ou não de uma solução nutritiva e o pré-tratamento químico (peróxido ou ácido-básico) que deveria ser empregado a fim de melhorar a disponibilidade de fonte de carbono para os fungos. Após os ensaios preliminares, buscou-se a otimização das condições de cultivo, sendo estudadas as temperaturas de 28ºC, 33ºC e 38ºC, os teores de umidade de 60%, 70% e 80% e as concentrações do indutor óleo de oliva de 5%, 7,5% e 10% de acordo com o planejamento experimental 33, com 2 pontos centrais, totalizando 29 experimentos. A máxima atividade lipásica (0,470 UI/g) para o Penicillium sp foi obtida nas condições de 33ºC, 80% de umidade e 10% do indutor, idênticas condições para atividade lipásica máxima para o Rhizomucor sp (0,583 UI/g). Para o Penicillium sp. apenas a Temperatura (Q) e Umidade (L) foram significativas a 95% de confiança, entretanto, para o Rhizomucor sp, a Umidade (L), a Umidade (Q) e o indutor (L) foram significativos a 95% de confiança. Após a liofilização do extrato enzimático, foi realizada a transesterificação com uma gordura proveniente da caixa de gordura de uma grande empresa da Grande Vitória, previamente tratada, obtendo-se rendimento de 56,72% para o extrato bruto do fermentado de Penicillium sp. e 59,47% para o extrato bruto do fermentado de Rhizomucor sp.