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Tesis sobre el tema "Kinésines"
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Cao, Luyan. "bases structurales de la motilité des kinésines". Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2016. http://www.theses.fr/2016SACLS267/document.
Texto completoResumen
Les kinésines sont des protéines moteur liées au cytosquelette de microtubules. Elles convertissent l’énergie provenant de l’hydrolyse de l’ATP en un travail mécanique. Leur fonction typique est de se déplacer le long du microtubule pour véhiculer des charges. La plupart des kinésines sont des dimères. Elles comprennent un domaine moteur, qui porte à la fois les sites de liaison du nucléotide et du microtubule, un domaine intermédiaire de dimérisation et une partie dite « queue » qui confère la spécificité des charges à transporter. Mon objectif est d’établir le mécanisme moléculaire à la base de la motilité, avec un intérêt particulier pour la détermination des variations structurales du domaine moteur de la kinésine le long de son cycle mécano-chimique. Au cours de ma thèse, mon objet d’étude principal a été la kinésine-1 humaine, encore appelée kinésine conventionnelle.J’ai étudié plus particulièrement deux aspects du cycle mécano-chimique de la kinésine-1, en combinant des approches de biologie structurale et l’étude de mutants. Les deux aspects concernent l’étude de la fixation de la kinésine-ADP au microtubule, conduisant à l’éjection du nucléotide et à une liaison forte de la kinésine au microtubule. Dans un premier temps, j’ai déterminé la structure du domaine moteur de la kinésine-1, dépourvue de nucléotide, et sous forme d’un complexe avec la tubuline. La tubuline est la protéine constitutive des microtubules. Cette structure était la donnée principale qui nous manquait dans le cycle structural de la kinésine. En comparant cette structure avec celle de la kinésine dans un état ATP, on peut rendre compte des changements de conformation de la kinésine selon le mouvement de trois sous-domaines du domaine moteur. Cette analyse explique notamment le lien entre la fixation de l’ATP et l’ouverture d’une poche hydrophobe distante de 28 Å du site du nucléotide. Cette cavité va accommoder le premier résidu du neck linker, conduisant à la stabilisation de ce peptide situé en partie C-terminale du domaine moteur. En s’ordonnant, le neck linker va faire avancer la charge ainsi que l’autre domaine moteur de la kinésine dimérique. Il lie ainsi la fixation de l’ATP au mouvement. L’étude de l’effet de mutations du neck linker montre aussi comment, réciproquement, le neck linker bloque la kinésine dans la conformation active pour l’hydrolyse de l’ATP. Ceci diminue la probabilité que l’ATP soit hydrolysé avant que l’étape mécanique se soit produite; cet aspect est essentiel pour rendre compte de la processivité de la kinésine-1.Ces données structurales suggèrent également comment la fixation de la kinésine-ADP au microtubule accélère l’éjection de l’ADP. Pour étudier cet aspect plus en détail, j’ai étudié l’effet de mutations sur la vitesse de largage de l’ADP. L’idée était de mimer à l’aide de mutations la fixation au microtubule. J’ai identifié ainsi deux séries de mutants qui présentent une vitesse accélérée de largage spontané de l’ADP, ce qui suggère deux voies pour interférer avec la fixation du nucléotide. J’ai ensuite déterminé la structure de deux de ces mutants dépourvus de nucléotide, ainsi que celle de la kinésine de départ également dans une forme apo, obtenue par digestion de l’ADP. En absence de microtubule, la kinésine dépourvue de nucléotide adopte une conformation soit à l’image de celle de la kinésine-ADP, ou proche de celle de la kinésine-apo liée à la tubuline. Dans un contexte naturel, seule la deuxième conformation est compatible avec la fixation au microtubule. L’ensemble de ces résultats suggère que le microtubule accélère l’éjection du nucléotide par un double mécanisme : en interférant avec la liaison du magnésium et en déstabilisant le motif P-loop de liaison du nucléotideKinesins are a family of microtubule-interacting motor proteins that convert the chemical energy from ATP hydrolysis into mechanical work. Many kinesins are motile, walking along microtubules to fulfill different functions. Most kinesins are dimers, the monomer comprising a motor domain, a dimerizing stalk domain, and a tail domain. The motor domain contains both the nucleotide-binding site and the microtubule-binding site. I am interested in the molecular mechanism of kinesin's motility. In particular I want to establish the structural variations of the kinesin motor domain along with the mechanochemical cycle of this motor protein. During my thesis, I have focused my work on the human kinesin-1, also named conventional kinesin, which is the best characterized kinesin.I have studied two aspects of the kinesin mechanochemical cycle, by combining structural and mutational approaches. Both aspects rely on the binding of ADP-kinesin to a microtubule, which leads to the release of the nucleotide and to a tight kinesin-microtubule association. First I determined the crystal structure of nucleotide-free kinesin-1 motor domain in complex with a tubulin heterodimer, which is the building block of microtubule. This structure represented the main missing piece of the structural cycle of kinesin. Three subdomains in the kinesin motor domain can be identified through the comparison of my structure with ATP-analog kinesin-1-tubulin structure. The relative movements of these subdomains explain how ATP binding to apo-kinesin bound to microtubule triggers the opening of a hydrophobic cavity, 28 Å distant from the nucleotide-binding site. This cavity accommodates the first residue of the “neck linker”, a short peptide that is C-terminal to the motor domain, allowing the neck linker to dock on the motor domain. The docking of the neck linker is proposed to trigger the mechanical step, i.e. the displacement of the cargo and the stepping of the dimeric kinesin. By studying mutants of the neck linker, I have shown that, reciprocally, this peptide locks kinesin in the ATP state, which is also the conformation efficient for ATP hydrolysis. Doing so, it prevents the motor domain from switching back to the apo-state. It prevents also an untimely hydrolysis of ATP, before the mechanical step has occurred. These features are required for movement and processivity.Second, these structural data also suggest how the binding of ADP-kinesin to tubulin enhances nucleotide release from kinesin. To further study this step of the kinesin cycle, I studied the effect of kinesin-1 mutations. These mutations were designed in isolated kinesin to mimic the state when kinesin is bound to a microtubule. I identified two groups of mutations leading to a high spontaneous ADP dissociation rate, suggesting that there are two ways to interfere with ADP binding. Then I determined the crystal structures of the apo form of two mutants as well as that of the nucleotide-depleted wild type kinesin. It showed that apo-kinesin adopts either and ADP-like conformation or a tubulin-bound apo-like one. In the natural context, the second one is stabilized upon microtubule binding. Overall, the mutational and structural data suggest that microtubules accelerate ADP dissociation in kinesin by two main paths, by interfering with magnesium binding and by destabilizing the nucleotide-binding P-loop motif
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Leon, Agnès. "Etude du rôle de la protéine QN1/KIAA1009, une nouvelle molécule motrice de la famille des kinésines, au cours de la prolifération et de la différenciation neuronale". Paris 5, 2005. http://www.theses.fr/2005PA05N31S.
Texto completoResumen
Les molécules motrices telles que les kinésines sont impliquées dans divers processus fondamentaux comme la mitose, le transport vésiculaire, la transcription ou la réparation de l'ADN. Dans ce travail, nous montrons pour la première fois que la protéine QN1 appartient à la famille des kinésines et a pour orthologue la protéine humaine KIAA1009. Nous démontrons, par stratégie siRNA, l'implication de cette protéine au cours de deux processus cellulaires majeurs : la prolifération et la différenciation. En effet, la protéine QM1/KIAA1009 joue un rôle décisif dans le déroulement normal de la mitose et plus particulièrement dans la ségrégation correcte des chromosomes. De plus, nous démontrons que la protéine QN1/KIAA1009 participe à la voie de signalisation du NGF au cours de la différenciation des cellules PC12. L' ensemble de ces résultats montre que la protéine QN1/KIAA1009 est un nouvel acteur clé de la mitoseMolecular motors such as kinesins are involved in diverse fundamental processes including mitosis,veicular transport, transcription or DNA repair processes. In the study, we show for the first time that QN1 protein is a member of the kinesin family, and that the human KIAA1009 protein is orthologous to the QN1 protein. We demonstrate by siRNA strategy the involvement of QN1/KIAA1009 protein in two major cellular processes : proliferation and differenciation. Indeed, QN1/KIAA1009 protein plays a decisive role in ormal mitosis process, particularly in correct chromosome segregation. Moreover, the QN1/QN1/KIAA1009 protein is involved in NGF signalisation pathway during PC12 cells differenciation process. On the whole, these results show that QN1/KIAA1009 prorein is a new key actor of mitosis
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Arnal, Isabelle. "Étude structurale de complexes entre microtubules et kinésines". Université Joseph Fourier (Grenoble ; 1971-2015), 1998. http://www.theses.fr/1998GRE10058.
Texto completoResumen
Les kinesines utilisent l'energie de l'hydrolyse de l'atp pour se deplacer le long des microtubules. Habituellement, ces proteines sont des tetrameres de deux chaines lourdes et deux chaines legeres. Chaque chaine lourde possede un domaine moteur qui se lie a l'atp et au microtubule. La plupart des kinesines se deplacent vers l'extremite + des microtubules mais certaines comme le ncd (non claret disjunctional) de la drosophile peuvent se deplacer vers l'extremite -. Nous avons utilise la cryomicroscopie electronique pour etudier l'interaction microtubules/kinesines. La premiere partie de ce travail a ete l'analyse du mode de stabilisation des microtubules in vitro par une drogue antimitotique, le taxol. Les resultats obtenus par cryomicroscopie montrent que le taxol diminue le nombre de protofilaments des microtubules et favorise egalement l'apparition de microtubules atypiques a 15 protofilaments directement analysables par des methodes de reconstruction helicoidale. La stabilisation des microtubules par le taxol est accompagnee d'un changement conformationnel de la tubuline d'environ 1 a qui n'affecte pas la liaison des proteines motrices. Par la suite, nous avons utilise ces microtubules stabilises pour obtenir les reconstructions en 3d de complexes microtubules/proteines motrices observes en cryomicrosopie. La kinesine et le ncd de drosophile (proteines recombinantes dimeriques) interagissant avec les microtubules en presence d'amp-pnp (analogue non hydrolysable de l'atp) ont chacun une tete attachee au microtubule et une tete libre. Les tetes attachees sont tres similaires ; l'orientation differente des tetes libres explique probablement le sens de deplacement oppose de ces deux proteines. Par ailleurs, la structure de complexes microtubules/dimeres de kinesine en presence de differents types d'analogues de nucleotides montrent que seule la tete libre de la kinesine change de conformation en fonction de son etat nucleotidique, suggerant un role important du domaine moteur non attache dans le mecanisme de mouvement de ce moteur moleculaire.
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Daire, Vanessa. "Implication de la kinésine-1 dans la dynamique microtubulaire et recherche de nouveaux inhibiteurs". Paris 11, 2009. http://www.theses.fr/2009PA114821.
Texto completoResumen
Les microtubules sont deséléments dynamiques essentiels à la physiologie cellulaire. Dans ce travail, nous montrons que la kinésine-1 régule la dynamique des microtubules en faisant intervenir la kinase de stress c-Jun N-terminal Kinase (JNK). Nous identifions également deux molécules dérivées de la fluorescéine qui présentent des propriétés inhibitrices de kinésine-1 in vitro et dans des cellules en culture. Par ailleurs, nous explorons un nouvel aspect de la régulation de l'activité de la kinésine-1 par la protéine SifA and Kinesin-Interacting Protein (SKIP)Microtubules are dynamic components that are essential for cell physiology. In this work, we show that kinesin-1 regulates microtubule dynamics via the stress kinase c-Jun N-terminal Kinase (JNK). We also identify two fluorescein-derived compounds that exhibit kinesin-1 inhibitive properties in vitro and in living cells. Furthermore, we explore a new aspect of kinesin-Interacting Protein (SKIP)
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Calmettes, Charles. "Etude du "centralspindlin complex" : un élément régulateur essentiel de la cytokinèse". Université Joseph Fourier (Grenoble), 2008. http://www.theses.fr/2008GRE10255.
Texto completoResumen
Les kinésines constituent une famille protéique convertissant l'énergie d'hydrolyse de l'ATP en un travail mécanique permettant un déplacement de l'enzyme le long des microtubules. Chez l'homme, une quarantaine de kinésines sont actuellement recensées et 13 d'entre elles sont nommées kinésines mitotiques en raison de leurs implications essentielles au bon déroulement de la Mitose. La protéine MKLP-1, kinésine de la sous-famille 6, est l'une de ces kinésines mitotiques. In vivo, elle s'associe à la protéine MgcRacGAP (protéine activatrice de petites protéines G) pour former un complexe hétérotétramérique : le « centralspindlin complex ». Ce complexe est un élément important de la régulation de la cytokinèse et participe notamment à la formation du « corps intermédiaire » durant la division cellulaire. MKLP-1 possède à la différence des autres kinésines, une large insertion de 80 acides aminés dans la boucle L6 de son domaine moteur ; cette insertion est une caractéristique unique des kinésines de la sous-famille 6 (MKLP-2, MPP1. . . ). Afin de sonder le rôle de la boucle L6 au cours des processus catalytiques, j'ai effectué la caractérisation enzymatique du domaine moteur sauvage de MKLP1 et d'un mutant où la boucle native L6 est remplacée par la boucle L6 de la kinésine conventionnelle KHC (5 acides aminés). J'ai aussi réalisé un criblage de chimiothéques sur l'activité ATPasique du domaine moteur. J'ai ainsi pu mettre en évidence un nouvel inhibiteur de la reconnaissance kinésine/tubuline. De plus, pour éclaircir les mécanismes mis en jeu par le « centralspindlin complex » dans l'agrégation des microtubules, j'ai entrepris pour différentes constructions de MKLP-1 et de MgcRacGAP, l'étude de leurs profils d'interactions avec la tubuline. J'ai ainsi pu établir un modèle de fixation du « centralspindlin complex » avec les microtubulesKinesins form a family of proteins that convert the energy from ATP hydrolysis to mechanical force for displacement of their cargoes along microtubules tracts. In Humans there are 40 kinesins, 13 of which are essentials for mitosis. MKLP-1 is a mitotic kinesin belonging to kinesin sub-family 6, which is essential for cytokinesis. In cells, MKLP-1 together with MgcRacGAP (a GTPase activating protein) contributes to the formation of the centralspindlin heterotetrameric complex. This MKLP-1/MgcRacGAP complex is an important regulatory component which participates to the formation of the midbody matrix during cell cleavage. MKLP1 has in its motor domain a large insert of 80 amino acid in the loop 6 compared to the other kinesins ; this longer loop 6 is an caracteristic of the kinesin sub-family 6 (MPP1, MKLP-2…). To probe the role of the MKLP1 loop 6 in the mechanochemical cycle, I compared the MKLP1 ATPase activity of wild type with that a mutant in which the native Loop 6 (80 residues) was replaced by the conventionnal loop 6 of Kinesin heavy Chain (5 residues). In addition, I screen four librairies of small molecules in order to identify ATPase inhibitors of the MKLP-1 motor domain. This screen contributed to the identification of a non-specific MKLP-1 inhibitor that prevent the kinesin/tubulin association. Furthermore, in order to understand the microtubules-bundling activity of the centralspindlin complex, I studied the microtubule interaction pattern for differents MKLP-1 and MgcRacGAP constructs. The results allowed me to purpose an putative interaction model
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Mithieux, Gilles. "Reconstitution in vitro et étude de l'interaction entre microtubules et organites intracellulaires : les lysosomes". Lyon 1, 1988. http://www.theses.fr/1988LYO1T117.
Texto completo
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Barnat, Monia. "Régulation de la dynamique des microtubules lors de la régénération axonale adulte : étude des voies de signalisation contrôlant la phosphorylation et la fonction de MAP1B (Microtubule-Associated Protein 1B)". Paris 6, 2010. http://www.theses.fr/2010PA066604.
Texto completoResumen
Après une lésion, les neurones du système nerveux périphérique (SNP) sont capables de régénérer leurs axones. Ces axones, en intégrant les signaux environnementaux, subissent des modifications morphologiques et fonctionnelles hautement dépendantes du cytosquelette et notamment des microtubules (MT). MAP1B (MT-Associated protein1B), dont la fonction est régulée par phosphorylation (MAP1B-P), est impliquée dans le guidage et le branchement axonal. Cependant, les voies de signalisation aboutissant à sa phosphorylation restent méconnues. Mes travaux de recherche ont porté sur l’étude des JNK (cJun N-terminal Kinase), famille de protéines comprenant trois isoformes (JNK1, 2 et 3). Après une lésion du SNP, nous montrons que les JNKs sont activées in vivo et in vitro dans les axones en régénération. Nos analyses morpho-fonctionnelles, sur des cultures de neurones sensoriels adultes, révèlent que les JNK sont indispensables à l’initiation et l’élongation axonales. Nous montrons que les isoformes des JNKs interviennent de façon différentielle dans la régénération: alors que JNK2 et JNK3 participent à la formation de l’axone, JNK1 et JNK2 sont indispensables à son élongation, et ce, en régulant la phosphorylation de MAP1B. Mes recherches ont ensuite porté sur l’étude du rôle de la GSK3β (Glycogen synthase kinase 3) dans la phosphorylation de MAP1B et dans la régénération axonale. Nous montrons que la GSK3β, en régulant MAP1B-P et la dynamique des MTs, réprime le branchement des axones régénératifs. L’ensemble de ces résultats montrent que MAP1B est une protéine clé dans l’intégration des signaux extracellulaires et, par conséquent, dans le devenir de l’axone en régénération
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Boucrot, Emmanuel. "Analyse moléculaire de SifA, une protéine de virulence de Salmonella typhimurium". Aix-Marseille 2, 2004. http://www.theses.fr/2004AIX22067.
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Herin, d' Pierre. "Etude de HsEg5 moteur microtubulaire apparenté à la famille des kinésines". Paris, EPHE, 2000. http://www.theses.fr/2000EPHE3036.
Texto completoResumen
Les mouvements et les changements de forme des cellules ainsi que les transports intracellulaires sont des aspects fondamentaux de la vie. Ces déplacements sont produits par l'interaction de protéines moteurs comme les myosines, les kinésines, et les dynéines avec l'actine ou les microtubules. L'hydrolyse de l'ATP par ces moteurs fournit l'énergie nécessaire à ce mouvement. Notre travail est basé sur l'étude des moteurs de type kinésine. Ces protéines possèdent un domaine moteur responsable de la migration, capable de se fixer sur les microtubules et d'hydrolyser l'ATP. Le domaine moteur est le plus conservé entre les différentes kinésines, les domaines tige et queue qui lui font suite sont très peu conservés. Les mécanismes qui déterminent la spécificité entre une kinésine et son cargo sont encore inconnus. HsEg5, kinésine appartenant à la sous-famille bimC joue un rôle essentiel dans la mise en place du fuseau mitotique. Nous avons localisé le gène Eg5 murin sur le chromosome 19. Les gènes humain et murin semblent être épissés alternativement. Eg5 existe chez de nombreux organismes; nous l'avons isolé chez Cryptosporidium Parvum et Physarum Polycephalum. HsEg5, dans les cellules mitotiques est associée aux pôles et avec les microtubules du fuseau de la prophase jusqu'à la télophase. HsEg5 est également présente dans les cellules interphasiques au niveau des centrioles. Dans les cellules HeLa mitotiques HsEg5 est phosphorylée spécifiquement. Elle est également phosphorylée in vitro par p34cdc2. La substitution de la thréonine 927 en alanine abolit la fixation d'HsEg5 sur le fuseau mitotique. La phosphorylation contrôle donc I'association de ce moteur sur le fuseau mitotique. HsEg5 est aussi phosphorylée in vitro par la kinase HsAurora2. Cette phosphorylation a lieu sur un autre site dans la tige de cette kinésine. D'autres sites secondaires de phosphorylation existent sur HsEg5 au niveau du domaine moteur qui restent à caractériser.
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Gaussen, Amaury. "Régulation de la phosphorylation de Cenp-E au cours du cycle cellulaire". Montpellier 2, 2007. http://www.theses.fr/2007MON20099.
Texto completoResumen
Au cours du cycle cellulaire, la mitose assure la distribution équitable des chromosomes dupliqués dans une paire de cellules filles. Cette phase est hautement régulée par de nombreuses protéines dont la localisation et l'activité spécifique permettent le bon déroulement de cette étape. Les protéines mitotiques sont elles-mêmes l'objet de régulations, notamment par phosphorylation. Parmi elles, Cenp-E est une kinésine impliquée dans la congression des chromosomes et dans l'activation du point de contrôle dépendant de l'attachement des fuseaux aux kinétochores. Dans la première partie de ce travail de thèse, nous décrivons dans les extraits d'œufs de xénopes quels domaines de Cenp-E lient les kinétochores et la protéine BubR1, dont elle est l'activateur nécessaire à l'activation du point de contrôle mitotique. Par la suite nous décrivons une régulation par phosphorylation sur la sérine 2893 de Cenp-E. Cette phosphorylation, conservée chez l'Homme, est spécifique en mitose et pourrait être attribuée au complexe Cdk1-Cycline B. La phosphorylation sur la sérine 2893 participerait à la levée de l'inhibition exercée par le domaine « tail » de Cenp-E sur son domaine moteur en restaurant une motilité partielle. La dernière partie de ce travail documente pour la première fois un motif consensus de phosphorylation pour la kinase MPS1, impliquée notamment dans l'activation du point de contrôle de mitose. Ce motif est très proche de celui connu pour PLK1. Nous mettons alors en évidence que certains sites de Cenp-E sont phosphorylés in vitro aussi bien par MPS1 que par PLX1. De plus, l'analyse par spectrométrie de masse a identifié que MPS1 phosphoryle notamment le domaine « tail » de Cenp-E sur une tyrosine, ce qui n'avait jamais été décrit jusqu'à présent pour les substrats connus de MPS1. Ce travail décrit de nouvelles régulations par phosphorylations sur Cenp-E et attire l'attention sur la similitude des spécificités de substrats pour MPS1 et PLK1During cell cycle, the correct and equal distribution of duplicated chromosomes in each daughter cells occurs in mitosis. Mitosis is performed through high regulations by numerous proteins specified by their localisation and activity. Those proteins are themselves regulated, notably by phosphorylation. Among them, Cenp-E is a kinesin implicated in congression and spindle checkpoint. The first part of this work describe which Cenp-E domains binds to kinetochores and BubR1 kinase, in Xenopus egg extracts. Cenp-E is supposed to be BubR1's activator, nesessary for spindle checkpoint activation. We describe later how Cenp-E is regulated by phosphorylation on serine 2893. This residue is also conserved and phosphorylated specifically during mitosis onto the human protein version. The Cyclin B-Cdk1 complex is likely to be responsible for this phosphorylation wich also takes part in the inhibition release of the Cenp-E motor domain and restores a part of the Cenp-E motility. The last part of this work gives for the first time a phosphorylation consensus sequence of MPS1, a kinase also implicated in spindle checkpoint activation. This consensus motif is very close to the PLK1 one's. In fact Cenp-E can be phosphorylated in vitro onto the same sites by both MPS1 and PLX1. For the first time mass spectrometry analysis identified a tyrosine phosphorylated by MPS1 in vitro, which suggests that MPS1 could be the first identified tyrosine kinase present at the kinetochore. This work describe new regulations on Cenp-E by phosphorylation and warn on the similar substrate specificity shared by MPS1 and PLK1
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Marrari, Yannick. "Etude du mécanisme et de la régulation de la rotation corticale dans l'oeuf de xénope". Nice, 2003. http://www.theses.fr/2003NICE4037.
Texto completoResumen
La rotation corticale dans l'œuf de xénope établit le centre organisateur de l'embryon. La translocation du cortex par rapport au cytoplasme commence lorsqu'un réseau sous cortical végétatif de microtubules dont l'extrémité + est dirigée dans la direction de la translocation se met en place. Le cortex est déplacé par l'action de moteurs moléculaires dépendants des microtubules, les protéines de la famille de la kinésine (Kinesin Related Proteins) et de la dynéine cytoplasmique. La participation des KRP au mécanisme de la rotation corticale a été démontrée par l'injection dans l'œuf d'un anticorps inhibiteur des KRP qui a provoqué l'inhibition de la rotation corticale, la désorganisation du réseau sous cortical de microtubules et une perturbation du comportement des microtubules du réseau. La participation de la dynéine a d'abord été suggérée par l'observation que l'inhibition des KRP in vivo n'arrêtait pas le mouvement des microtubules. L'inhibition du mouvement des microtubules, réactivé sur cortex isolés par la perfusion d'ATP et extraits interphasiques d'œuf de xénope, provoquée par l'ajout d'anticorps anti-dynéine conbiné avec l'anti-KRP a conforté cette hypothèse. L'injection précoce de la dynamitine, un inhibiteur des transports dynéine dépendants, a perturbé l'organisation du réseau de microtubules tandis que l'injection tardive de dynamitine ne pertubait pas la translocation du cortex. Ces résultats indiquent que la dynéine transporte les microtubules jusqu'au cortex puis maintient le réseau de microtubules au début de la rotation corticale. Ensuite la dynéine n'est plus nécessaire indiquant que les KRP transportent le cortex sur les microtubules du réseauThe cortical rotation in Xenopus eggs establishes the dorso-anterior organising center of the embryo. This translocation of the cortex relative to the cytoplasm starts when an array of aligned microtubules forms under the vegetal cortex, the plus ends of microtubules pointing in the direction of cortical displacement. The cortical rotation mechanism involves the two families of microtubule-dependant molecular motors, Kinesin Related Proteins and cytoplasmic dynein. The involvement of KRPs in cortical rotation mechanism was shown by the injection of a KRP inhibitory antibody which locally blocked cortical rotation, desorganised the subcortical array of microtubules and perturbed microtubule movement. The persistance of microtubule movement in the presence of the anti-KRP antibody in vivo, and the arrest of microtubule movement, reactivated by perfusion of ATP and interphase Xenopus egg extracts, provoked by simultaneous perfusion of anti-KRP and anti-dynein antibodies on isolated cortices led us to propose that dynein was also involved in the cortical rotation mechanism. Early injection of dynamitin, an inhibitor of dynein dependant transport, perturbed the organisation of sub-cortical microtubules while late injection did not arrest cortical translocation. These results indicate that dynein transports microtubules towards the cortex and maintains the microtubule array during an early period of the cortical rotation. Later, dynein activity becomes uneccessary, indicating that KRPs probably drive the cortical rotation. These findings led us to propose an integrated model for the mechanism of cortical rotation, in which dynein and KRPs have complementary actions
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Espeut, Julien. "Régulation de la motilité de Cenp-E, une kinésine associée au kinétochore". Montpellier 2, 2007. http://www.theses.fr/2007MON20133.
Texto completoResumen
Le point de contrôle de l'assemblage du fuseau mitotique va permettre d'empêcher la division cellulaire en cas de mauvais positionnement des chromosomes sur la plaque métaphasique. Parmi les nombreuses protéines impliquées dans cette régulation se trouve la protéine du kinétochore Cenp-E (Centromere associated protein E). Un des enjeux majeur dans l'étude de la mitose est de déterminer quelles sont les protéines du kinétochore qui sont responsables du mouvement des chromosomes. L'objectif de ma thèse a alors été de déterminer quels étaient les mécanismes de régulation de l'activité motrice de la kinésine Cenp-E impliqués dans la dynamique de liaison des microtubules aux kinétochores. Nous avons pu déterminer que la protéine Cenp-E se déplace vers l'extrémité "+" des microtubules. De plus, la partie C-terminale de Cenp-E inhibe directement son activité motrice et cette inhibition est reversée par une phosphorylation par les kinases Mps1 et Cdk1-cycline B. Ces résultats suggèrent un contrôle dynamique de la motilité de Cenp-E et de la congression des chromosomes, dépendant d'une phosphorylation au kinétochoreThe mitotic spindle assembly checkpoint stops cell division in case of incorrect positioning of the chromosomes onto the metaphase plate. This checkpoint avoids inaccurate chromosome division, which could result in a loss or gain of genetic material. Amongst the many proteins involved in this regulation is the kinetochore protein Cenp-E (Centromere associated protein E). One of the biggest goal in the field of mitosis is to establish which kinetochore proteins are responsible of chromosome movement. Therefore the aim of my thesis has been to determine the mechanisms of regulation of the Cenp-E kinesin motor activity involved in the dynamics of binding to the microtubules. We have been able to show that Cenp-E moves towards the "+" end of microtubules. Furthermore, the C-terminal portion of Cenp-E directly inhibits its motor activity and such inhibition is reversed by phosphorylation of the Cterminus by the kinases Mps1 and Cdk1-cyclin B. These results suggest a dynamic control of Cenp-E motility and of chromosome congression, dependent on kinetochore phosphorylation
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Grossier, Jean-Philippe. "Etude de la topologie des voies d'endocytose et de signalisation dans les cellules animales cultivées sur micro-patrons". Paris 6, 2013. http://www.theses.fr/2013PA066658.
Texto completoResumen
L'utilisation des micro-patrons combinée à la quantification par carte de densité a montré que l'architecture du cytosquelette et l'organisation spatiale des compartiments intracellulaires dépendent de la géométrie des adhésions cellulaires. La cellule est donc capable de se polariser en réponse à son microenvironnement. Les objectifs de cette thèse étaient de comprendre quelles sont les conséquences fonctionnelles de cette polarité en étudiant l'endocytose de la transferrine et l'EGF et d'identifier les facteurs intracellulaires responsables de cette organisation spatiale. Les résultats montrent que la transferrine est internalisée au niveau des zones d'adhésion où se concentrent AP2 et la clathrine. L'EGF se concentre au niveau de la membrane dorsale, ce qui induit une régionalisation de l'initiation de la signalisation. Cette asymétrie n'est pas due à la ségrégation des récepteurs mais elle est fortement dépendante du cytosquelette d'actine. Dans un second projet, afin d'identifier les kinésines responsables de la localisation des lysosomes, de l'appareil de Golgi et du noyau, j'ai adapté la méthode des cartes de densité de cellules micro-patronnées à l'échelle d'un crible par siARN. Le crible a révélé un certain nombre de kinésines candidates altérant l'organisation spatiale des différents organites étudiésCell normalization using adhesive micropatterns combined with density map quantification represent a useful model system to analyze intracellular organisation and cell polarity. To understand how the extracellular microenvironment directs the topology of endocytic and signaling pathways, I studied the uptake of transferrin (Tfn) and epidermal growth factor (EGF)in micropatterned RPE-1 cells. 3D probabilistic density maps revealed that Tfn was enriched in adhesive sites during uptake, whereas EGF endocytosis was restricted to the dorsal cellular surface. This spatial separation was not due to distributions of corresponding receptors but was regulated by actin, and for Tfn, depended on recruitment of clathrin and AP2 (adaptor protein 2) to adhesive areas. In addition, asymmetry in EGF uptake led to asymmetry in EGF induced signal initiation. My second project aimed at identifying kinesins that sustain the spatial localization of lysosomes, Golgi apparatus and nucleus in micropatterned cells. I scaled up the density map method to a high-throughput framework in order to screen a siRNA library against microtubule-based motors of the kinesin family. I found interesting candidates contributing to organelle positioning
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Quesnoit, Mélanie. "Régulation de la dynamique microtubulaire : implication de la tubuline GTP et de protéines associées aux microtubules". Paris 11, 2007. http://www.theses.fr/2007PA114811.
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Les microtubules (MTs) sont un des composants clés du cytosquelette, dont la dynamique est indispensable à la fonction. Dans ce projet, nous cherchons à aborder sous plusieurs angles la régulation de la dynamique microtubulaire, liée au comportement de la tubuline elle-même ou par l'intermédiaire de protéines associées aux MTs. Nous avons construit un outil dans le but d'avancer dans la caractérisation de l'importance de l'hydrolyse du GTP par la tubuline pour la stabilisation du polymère. Cet outil est un anticorps recombinant qui permet de détecter la tubuline liée au GTP et nous a conduit à émettre des hypothèses quant aux mécanismes intrinsèques de régulation de la dynamique des MTs. Nous avons de plus étudié le rôle de protéines liées aux microtubules et avons montré que l'une (CLIP170) en association avec un moteur moléculaire, est indispensable à la mise en place du réseau microtubulaire alors que l'autre (CLIPR59) ralentit in vivo la croissance des MTsMicrotubules (MTs) are highly dynamic protein polymers essential for intracellular organization. In the work presented here we have studied different aspects of the mechanisms regulating dynamic instability of MTs. We have selected and characterised an antibody recognizing GTP-bound tubulin and the use of this tool has led us to propose a new model for the intrinsic mechanisms regulating dynamic instability of MTs. We also studied the influence of MT associated proteins and found that the molecular motor Kinesin-1 and the +end tracking protein CLIP-170 cooperate to build the interphase network whereas another protein of the CLIP family, CLIPR-59, preferentially binds unpolymerised tubulin and slows down MT growth in vivo
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Marceiller, Jérôme. "Organisation dynamique du réseau de microtubules : rôle du Golgi et de la kinésine". Paris 11, 2004. http://www.theses.fr/2004PA114808.
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Nous avons montré que l'appareil de Golgi est capable de nucléer des microtubules, in vivo et in vitro, et se comporte donc comme un centre organisateur potentiel des microtubules dans les cellules en interphase. Par des expériences de lavage de nocodazole dans des cellules hépatiques, nous avons découvert que l'apparition de microtubules précocement stabilisés est corrélé avec la présence d'éléments golgiens dans les cellules. L'utilisation de système de reconstitution de la nucléation et de la polymérisation des microtubules, avec ou sans cytosol, a permis de découvrir que les microtubules en contact avec les membranes golgiennes ont leur extrémité distale stabilisée en contraste avec les microtubules émanant du centrosome. De plus, cette stabilisation fait intervenir un ou des composants d'origine cytosolique. Enfin nous avons pu démontrer que les membranes golgiennes peuvent directement nucléer des microtubules et que cette capacité est du à la présence de gamma-tubuline à la surface de l'appareil de Golgi. Nos résultats identifient donc le Golgi comme un organite central qui organise sa propre sous-population de microtubules stables. Ces résultats montrent que les organites membranaires ne sont pas seulement organisés passivement par le cytosquelette mais qu'ils peuvent participer activement à l'organisation des différentes structures du cytosquelette. Nous avons vu que les microtubules qui croissent après lavage du nocodazole dans les cellules éphitéliales, sont stabilisés précocement, simultanément à leur croissance et ce, indépendamment de leur origine apparente. Nous avons donc exploré les mécanismes moléculaires qui conduisent la stabilisation précoce des microtubules après retrait du nocodazole. Ces microtubules ont été trouvés incapables de croître, indépendamment de leur origine, par l'addition de tubuline purifiée, ce qui indique la présence d'une coiffe fonctionnelle. Cette coiffe peut être retirée par un traitement par l'ATP permettant le rallongement du microtubule en présence de cytosol. La kinésine conventionnelle connue pour être présente sur les membranes golgiennes est retrouvée sur l'extrémité en croissance des microtubules en phase précoce. La microinjection d'un anticorps dirigé contre la chaîne lourde de la kinésine conventionnelle provoque la perte de la résistance precoce au nocodazole des microtubules, par contre quand les microtubules ont pu croître normalement dans un premier temps, la microinjection n'a plus d'effet apparent. La présence de la coiffe fonctionnelle peut être liée avec la présence de la kinésine sur l'extrémité du microtubule car l'anticorps anti-kinésine permet, ex vivo, le rallongement de microtubule par addition de tubuline. Ces résultats indiquent que les microtubules présentent au moins deux phases de croissance. Une première phase, restreinte aux microtubules néo-formés, impliquerait d'une part la présence d'une coiffe protégeant le microtubule contre toute dépolymérisation et d'autre part une croissance fortement régulée. Cette phase prendrait place jusqu'à l'arrivée du microtubule à la périphérie de la cellule. La deuxième phase de la vie du microtubule comprendrait une transition vers un état dynamique ou le microtubule perdrait sa coiffe et serait alors capable de se raccourcir et de se rallonger en incorporant librement de la tubuline. Cette transition, dépendante de la kinésine, entre les modes de croissance du microtubule serait l'événement qui conditionnerait l'état futur du microtubule soit dynamique soit stableWe have shown that the Golgi apparatus is a microtubule organising center in interphasic cells and is therefore able to nucleate microtubule in vivo and in vitro. This Golgi-based nucleation capacity is direct and involves a subset of gamma-tubulin bound to the cytoplasmic face of the organelle. Nascent microtubules in the cell exhibits regulated growth mode and have a functional cap which protect them against depolymerization. Conventional kinesin is implied in the presence of the functional cap
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Henry, Thomas. "Physiologie de S. Typhimurium dans l'environnement intracellulaire : la division bactérienne et la modulation des moteurs moléculaires eucaryotes sur la vacuole contenant Salmonella". Aix-Marseille 2, 2005. http://theses.univ-amu.fr.lama.univ-amu.fr/2005AIX22030.pdf.
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Exertier, Prisca. "Rôle des kinésines mitotiques Eg5 et MKLP-2 dans l’angiogenèse physiologique et pathologique". Thesis, Bordeaux 1, 2012. http://www.theses.fr/2012BOR14621/document.
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Rôle des kinésines mitotiques Eg5 et MKLP-2 dans l’angiogenèse physiologique etpathologique.L’angiogenèse est un phénomène biologique complexe qui correspond à la formation de nouveauxvaisseaux à partir de vaisseaux préexistants. Ce processus essentiel est régulé par des nombreuxfacteurs, dont le plus puissant est le facteur de croissance de l’endothélium vasculaire (VEGF).Des inhibiteurs du VEGF sont actuellement utilisés dans le traitement de nombreux cancerssolides. Leur efficacité est constatée dans plusieurs études mais des résistances contre cesmolécules sont fréquemment observées. Afin d’identifier de nouvelles cibles thérapeutiques dansla voie de signalisation de VEGF, nous avons utilisé le modèle de la membrane chorioallantoïdienne(CAM) de l’embryon de poulet. Les CAM traitées au VEGF pendant 24hdéveloppent de nombreux vaisseaux. Ces tissus ont été isolés pour effectuer une analysetranscriptomique. En dehors des gènes endothéliaux déjà connus pour être régulés par le VEGF,de nouveaux gènes ont été identifiés. Nous avons focalisé notre recherche sur des gènes codantpour les kinésines mitotiques KIF11/Eg5 et KIF20A/MKLP-2 qui ont été fortement induites.Nous avons démontré qu’Eg5 et MKLP-2 sont fortement exprimées au niveau de l’endothéliumdans des tissus sains et dans des cancers solides. Des inhibiteurs chimiques spécifiques d’Eg5(dimethylenastron et ispinesib mesylate) et MKLP-2 (paprotrain) bloquent les étapes clés de laformation des vaisseaux sanguins (prolifération, adhérence et migration des cellules endothéliales),la prolifération des cellules tumorales ainsi que la formation de néo-vaisseaux dans des culturesd’anneaux aortiques. De plus, sur la CAM et chez la souris, l’inhibition de cette même kinésinediminue significativement la croissance et la vascularisation des modèles tumoraux utilisés lors dece projet (le glioblastome et le carcinome rénal). En conclusion, Eg5 et MKLP-2 pourraient descibles potentielles dans les thérapies anti-angiogéniques.Mots clés : Eg5, MKLP-2, angiogenèse, kinésine, ispinesib, dimethylenastron, glioblastome,cancer rénalRole of the mitotic kinesins Eg5 and MKLP-2 in physiologic and pathologic angiogenesis.Angiogenesis is a complex biological phenomenon which corresponds to the formation of newblood vessels from pre-existing vessels. This process is regulated by a plethora of differentmolecules with vascular endothelial growth factor (VEGF) being one of the most important ones.VEGF inhibitors are currently used in the treatment of numerous solid cancers. Even though theefficacy of such treatment is prouven by numerous studies, resistance to anti-angiogenic therapy isa common feature. To identify new therapeutic targets downstream of VEGF, we modelized itsaction on the chick chorioallantoic membrane (CAM). VEGF-treated CAMs develop a densevascular network 24h after application. We used chick microarrays to monitor global geneexpression changes in VEGF-induced CAMs. Beside a consistent number of genes alreadydescribed to be regulated by VEGF, numerous unknown genes have been identified. We havefocused our work on the characterization of Eg5/KIF11 and MKLP-2/KIF20A, members of thekinesin family, both strongly upregulated by VEGF.We demonstrated that Eg5 and MKLP-2 are strongly expressed by blood vessels in normal andcancer tissue sections. KIF20A is involved in the proliferation and migration of endothelial cellsin vitro. We showed that chemical inhibitors specific for KIF11/Eg5 (dimethylenastron andispinesib mesylate) affect key steps in the formation of blood vessels (proliferation, adhesion andmigration of endothelial cells) and proliferation of tumor cells (glioma and renal cancer).Furthermore, in experimental glioblastoma and renal cell carcinoma models (CAM and orthotopicimplantation in mice), anti-Eg5 treatment strongly reduces tumor angiogenesis and growth. Inconclusion, Eg5 and MKLP-2 could be potential targets in anti-angiogenic therapies.Keywords: Eg5, MKLP-2, angiogenesis, kinesin, ispinesib, dimethylenastron, glioblastoma, renalcell cancer
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Nguyen, The Quyen. "Caractérisation structurale du recrutement de la protéine JIP1 par la chaîne légère (KLC) de la kinésine1". Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2017. http://www.theses.fr/2017SACLS250/document.
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RésuméLes kinésines sont des moteurs moléculaires impliqués dans le transport intracellulaire de nombreux cargos au sein de la cellule. Bien que la motilité des kinésines soit bien comprise, les mécanismes moléculaires à la base du recrutement des cargos le sont beaucoup moins.La kinésine1 joue divers rôles dans les cellules neuronales, où elle contribue à l’organisation spatiale et temporelle de nombreux composants cellulaires. Elle jouerait un rôle dans différentes pathologies neurologiques, comme la maladie d’Alzheimer. Comprendre comment la kinésine1 reconnaît et interagit avec ses cargos est important pour déterminer son rôle, ainsi que celui de ses cargos, au niveau du fonctionnement des cellules normales et pathologiques. La kinésine1 est un hétérotétramère constitué de deux chaînes lourdes (KHC) et de deux chaînes légères (KLC) toutes deux étant capables de recruter des protéines cargos. L’une des premières protéines cargos à avoir été identifiée est JIP1 (JNK-interacting protein 1) qui est, entre autres: (i) une protéine d’échafaudage pour la voie de signalisation des MAP kinases et (ii) une protéine adaptatrice pour le transport de la protéine précurseur de l’amyloïde (APP) responsable de la maladie d’Alzheimer. Dans les deux cas, JIP1 régule des processus critiques au niveau de la cellule, ce qui en fait une protéine intéressante à étudier. Des premières études ont permis de mieux comprendre comment JIP1 est recrutée et transportée par la kinésine1. Cependant, le détail de l’interaction entre KLC et JIP1 n’est pas encore complètement décrit et donc compris.Objectifs : Mon travail de doctorat vise à caractériser au niveau moléculaire l’interaction entre KLC et JIP1. Pour ce faire, j’avais pour objectifs : 1) de caractériser les domaines d’interaction des deux protéines seules, 2) d’étudier la formation du complexe en solution par des approches biophysiques et 3) de déterminer la structure 3D du complexe par cristallographie.Résultats : Dans un premier temps, j’ai caractérisé le domaine TPR de KLC seul en contribuant entre autres au développement d’une boite à outils moléculaires. J’ai aussi participé à la détermination de deux structures cristallographiques du domaine TPR de KLC1/2 permettant de mettre en évidence la plasticité structurale de la 1ère hélice de ce domaine (Nguyen et al, soumis). Dans un second temps, j’ai mis en place les conditions d’expression et de purification du domaine PTB de JIP1 et mener la caractérisation structurale de ce domaine en solution. Bien que ce domaine de JIP1 ne soit pas nécessaire pour l’interaction avec KLC, j’ai pu étudier l’impact de sa présence au niveau du recrutement par KLC. Finalement, j’ai caractérisé le recrutement de JIP1 par KLC en confirmant tout d’abord un certain nombre d’information sur l’interaction entre le domaine TPR de KLC et la région C-terminale (Cter) de JIP1 au niveau moléculaire. Les nombreux essais de cristallisation que j’ai menés n’ont pas permis d’obtenir des cristaux du complexe KLC:JIP1. J’ai cependant pu cartographier de façon précise la zone d’interaction de JIP1-Cter avec le domaine TPR de KLC en employant les différents outils de KLC disponibles pour déterminer par calorimétrie leur affinité avec JIP1-Cter (Nguyen et al., en préparation).Conclusion : Ainsi, mon travail de doctorat a permis de mieux comprendre 1) la versatilité structurale du domaine TPR de KLC, 2) l’impact du domaine PTB de JIP1 pour son recrutement par KLC et 3) le mode d’interaction de JIP1 par KLC. Sur la base de ces données, je discuterai les bases structurales du mode d’interaction de KLC avec JIP1 et le comparerai à celui de KLC avec les cargos à motif WD, comme SKIP et Alcadéine-αAbstractKinesins are molecular motors involved in the intracellular transport of many cargos within the cell. Although the motility of kinesins is well understood, the molecular mechanisms underlying cargo recruitment are much less so.Kinesin1 plays various roles in neuronal cells, where it contributes to the spatial and temporal organization of many cellular components. It would play a role in various neurological pathologies, such as Alzheimer's disease. Understanding how kinesin1 recognizes and interacts with its cargos is important to decorticate its role, as well as that of its cargos, in normal and pathological cells. Kinesin1 is a heterotetramer consisting of two heavy chains (KHC) and two light chains (KLC), both of which are capable of recruiting cargo proteins. One of the first cargo proteins to have been identified is JIP1 (JNK-interacting protein 1) which is: (i) a scaffold protein for the signaling pathway of MAP kinases and (ii) an adaptor protein for transporting amyloid precursor protein (APP) responsible for Alzheimer's disease. In both cases, JIP1 regulates critical processes at the cell level, making it an interesting protein to study. Early studies have led to a better understanding of how JIP1 is recruited and transported by kinesin1. However, the detail of the interaction between KLC and JIP1 is not yet fully described and therefore understood.Objectives: My doctoral work aims at characterizing at the molecular level the interaction between KLC and JIP1. To do this, I had the following objectives: 1) to characterize the interaction domains of the two proteins alone, 2) to study the formation of the complex in solution by biophysical approaches, and 3) to determine the 3D structure of the complex by crystallography.Results: Initially, I characterized the TPR domain of KLC alone, contributing among others to the development of a molecular toolbox. I also participated in the determination of two crystallographic structures of the TPR domain of KLC1/2 that highlights the structural plasticity of the first helix of this domain (Nguyen et al, submitted). In a second step, I set up the conditions for the expression and purification of the PTB domain of JIP1 and carry out the structural characterization of this domain in solution. Although this domain of JIP1 is not necessary for interaction with KLC, I studied the impact of its presence on recruitment by KLC. Finally, I characterized the recruitment of JIP1 by KLC by confirming a number of information on the interaction between the KLC-TPR and the C-terminal region (Cter) of JIP1 at the molecular level. The numerous crystallization tests that I carried out did not make it possible to obtain crystals of the KLC: JIP1 complex. However, I was able to precisely map the interaction zone of JIP1-Cter with the KLC-TPR domain using the various KLC tools available by determining by ITC their affinity with JIP1-Cter (Nguyen et al., In preparation ).Conclusion: Thus, my PhD work allowed to better understand 1) the structural versatility of the KLC-TPR domain, 2) the impact of the JIP1-PTB domain for its KLC recruitment, and 3) the interaction mode of JIP1 by KLC . On the basis of these data, I will discuss the structural basis of the mode of binding of KLC with JIP1 and compare it with that of KLC with WD-motif cargo, such as SKIP and Alcadein-α
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Abaza, Aouatef. "Caractérisation structurale et fonctionnelle de MPP1, une nouvelle protéine de la famille des kinésines". Université Joseph Fourier (Grenoble), 2002. http://www.theses.fr/2002GRE10096.
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Saraiva, Garcia Carlos Henrique. "Etude des événements moléculaires de la gamétogenèse de Plasmodium berghei par des approches protéomiques". Electronic Thesis or Diss., Paris 6, 2016. https://accesdistant.sorbonne-universite.fr/login?url=https://theses-intra.sorbonne-universite.fr/2016PA066582.pdf.
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Le paludisme est causé par des parasites du genre Plasmodium et la gamétogenèse est une étape essentielle à sa transmission. Afin d'améliorer les connaissances sur la genèse des gamètes, nous avons mené des études protéomiques sur des gamétocytes de P. berghei sauvages ou mutants avec le gène moteur de la kinésine 8 interrompu. Le mutant est morphologiquement semblable au type sauvage mais incapable de compléter la gamétogenèse et les gamètes mâles d'exflageller. A partir d'échantillons enrichis en gamétocytes, la gamétogenèse a été suivie sur 15 min après induction par l'acide xanthurénique. Les peptides marqués par iTRAQ à partir de triplicatas biologiques ont été analysés par nanoLC/MS-MS et interprétés par les logiciels Patternlab et Blast2GO. Les phosphopeptides ont été enrichis au TiO2. Chez le parasite sauvage, 443 protéines et 206 phosphoprotéines ont été identifiées à partir de 2617 peptides et chez le mutant, 530 protéines et 218 phosphoprotéines à partir de 3198 peptides. L'induction de la gamétogenèse est marquée par une transcription, une biosynthèse de protéines et de l'ADN importantes. Chez le mutant, la formation des fuseaux mitotiques et des axonèmes des flagelles des gamètes mâles est fortement affectée. Des protéines du complexe du protéasome dépendant de l'ubiquitine, de la réponse au stress, du métabolisme énergétique sont également affectées. Cette étude apporte de nouveaux éléments de compréhension sur le rôle joué par la kinésine 8 dans la gamétogenèse de PlasmodiumMalaria is caused by parasites from Plasmodium genus and its gametogenesis is an essential step to ensure the malaria transmission. In efforts to improve the knowledge on gamete biology we did quantitative proteomic and phosphoproteomic comparative experiments with P. berghei WT and gametocytes disrupted for the motor gene kinesin 8. The mutant is morphologically similar to wild-type parasite but impaired gametogenesis and unable to exflagellate. The Gametocytes-enriched sample from mice at time T0 were xanthurenic acid-induced to exflagellate and harvested at time T7 and T15. The iTRAQ labelled peptides from independent biological triplicate sample were analyzed overtime through nanoLC/MS-MS Orbitrap after TiO2 enrichment, and interpreted by Patternlab and Blast2GO softwares. The wild type had 443 proteins and 206 phosphoproteins identified from 2,617 peptides. The mutant had 530 proteins and 218 phosphoproteins identified from 3,198 peptides. GO biological processes related to RNA translation, DNA and protein biosynthesis were most prominent and phosphorylated proteins are mainly RNA, ATP or protein binding proteins. Within the mutant, the axoneme and mitotic spindle microtubules disorganization were strongly affected. The nucleosome components are key to nuclear division disorganization. The ubiquitin-dependent proteasome complex and stress/folding response, energy metabolism and egress proteins were affected. The Plasmodium proteomic approach brings that insight into kinesin 8 critical importance for male gametogenesis in Plasmodium with effect on protein expression, phosphorylation modulation, flagellar organization and biology
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Labrière, Christophe. "Conception, synthèse et évaluation biologique d’inhibiteurs de kinésine et kinases". Paris 11, 2009. http://www.theses.fr/2009PA112368.
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Nos investigations scientifiques ont eu pour objectifs la conception et l’évaluation biologique de nouvelles molécules dont l’utilisation à des fins thérapeutiques recouvre deux domaines d’application médico-pharmaceutique distincts. Dans un contexte de recherche de nouvelles cibles biologiques pour les thérapies anti cancéreuses, les kinésines se sont avérées des cibles pertinentes et leur inhibition a conduit au développement clinique de plusieurs molécules (des inhibiteurs d’Eg5 principalement). En collaboration avec F. Kozielski et son équipe, nous avons identifié, à l’institut, le premier inhibiteur de la kinésine cytokinétique RabK6. Le manque d’informations sur la structure cristalline de la protéine RabK6 nous a conduit à développer différentes approches synthétiques et plusieurs générations d’analogues en considérant un à un les différents pôles de la molécule et en établissant progressivement des relations structure-activité de plus en plus abouties. Dans le cadre de la lutte contre la maladie d’Alzheimer, l’inhibition des kinases responsables de l’hyperphosphorylation de la protéine Tau au niveau du SNC apparaît être un axe thérapeutique majeur. Par analogie avec une molécule naturelle, nous avons caractérisé les propriétés inhibitrices vis à vis de plusieurs kinases de diverses molécules issues de la cyclisation photochimique des composés synthétisés auparavant, potentiels inhibiteurs de la kinésine RabK6 (travaux de recherche entrepris en collaboration avec L. Meijer et son équipe)Our investigations aimed at the chemical preparation and biological evaluation of new molecules that can be used in two distinct pharmaceutical fields. In the context of new biological targets discovery for anticancer therapy, kinesins have been identified and have led to the clinical development of several molecules (Eg5 inhibitors predominantly). At the Institute, we have identified, in collaboration with F. Kozielski and his team, the first inhibitor of the cytokinetic kinesin RabK6. As no three-dimensional resolution of the protein RabK6 was available, we have developed several generations of analogues by considering each fragment of the original molecule one by one, and by enhancing the chemistry variety in order to draw an increasingly specialized structure-activity relationship. Within the framework of the Alzheimer’s disease battle, a lot of efforts is made to find inhibitors of CNS-expressed kinases responsible of the Tau protein hyperphosphorylation. By analogy with a natural molecule, we have found that several photochemically-synthesized kinesin-targeted molecules furnished very active and selective kinase inhibition (work carried out in collaboration with L. Meijer and his team)
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Roux, Aurélien. "Tubes de membrane dans le trafic intracellulaire : aspects physiques et biologiques". Paris 7, 2004. http://www.theses.fr/2004PA077157.
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Vieillard, Jennifer. "Étude des protéines de la zone de transition des cils chez Drosophila melanogaster". Thesis, Lyon, 2016. http://www.theses.fr/2016LYSE1103.
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Les cils et les flagelles sont des organites présents à la surface cellulaire. Ils sont conservés chez les eucaryotes chez lesquels ils jouent un rôle essentiel dans la régulation de nombreux processus physiologiques. La zone de transition (ZT) est une structure complexe, localisée à la base des cils, qui assure une fonction importante dans l'assemblage et la régulation du trafic des constituants ciliaires. Trois complexes protéiques ont été identifiés à la ZT : MKS-JBTS, NPHP1-4-8 et NPHP5-CEP290. D'autres protéines sont également situées à la ZT telles que CBY et AZI1 mais leur interaction avec ces trois modules reste encore peu connue. Chez l'Homme, des mutations de gènes codant des protéines de la ZT sont associées à des maladies génétiques rares, les ciliopathies. Deux modes d'assemblage des cils ont été décrits : la ciliogenèse compartimentée et la ciliogenèse cytosolique. Alors que la fonction de la ZT au cours de la ciliogenèse compartimentée a été bien étudiée, son rôle dans la ciliogenèse cytosolique reste peu connu. La Drosophile possède deux sortes de cellules ciliées, les neurones sensoriels et les flagelles de spermatozoides dont les cils s'assemblent selon ces deux modes d'assemblage. Au cours de ma thèse, j'ai utilisé ce modèle pour analyser la fonction des protéines de la ZT dans ces deux types cellulaires. Mes résultats montrent que les protéines MKS ne jouent pas un rôle essentiel dans l'assemblage de la ZT dans ces deux types cellulaires. J'ai aussi révélé que CBY et AZI1, coopèrent pour assembler la ZT et qu'elle est nécessaire à l'ancrage du corps basal à la membrane plasmique. De plus, mes travaux ont démontré que KLP59D, une kinésine dépolymérisante des microtubules, est indispensable à la régulation de l'élongation de l'axonème au cours de la ciliogenèse cytosolique. En conclusion, ce travail apporte de nouvelles connaissances sur la dynamique d'assemblage de la ZT des cils et sur les mécanismes qui contrôlent l'élongation de l'axonèmeCilia and flagella are cellular organelles that protrude at the cell surface. They are composed of a microtubular cytoskeleton and they are highly conserved across eukaryotic species from plantae to Human. In mammals, they play essential functions during development and regulate numerous physiological processes in adults. At the ciliary base a complex structure called transition zone (TZ) is necessary for cilia assembly and regulation of ciliary components trafficking inside the cilia. Three protein complexes have been identified at the TZ : MKS-JBTS, NPHP1-4-8 and NPHP5-CEP290. Other TZ proteins such as CBY and AZI1 have been studied but their interaction with these 3 modules is not yet elucidated. In Human, mutations of genes encoding TZ proteins are associated with several genetic diseases called ciliopathies. Two different modes of cilia assembly have been identified: compartimentalized and cytosolic ciliogenesis. While TZ function in compartimentalized ciliogenesis is well studied, its role in cytosolic ciliogenesis remains poorly understood. In Drosophila, there are only two types of ciliated cells, sensory neurons and sperm flagella, representative of these two ciliogenesis pathways. During my PhD, I used Drosophila to study the function of TZ proteins during cilia assembly in these two ciliated cell types. My data show that proteins of the MKS complex do not play an essential role in TZ assembly in the cilia of sensory neurons and in spermatozoon flagella. I also demonstrated that CBY and AZI1 cooperate to assemble the TZ components and that the TZ is necessary to dock the basal bodies to the plasma membrane, one of the first important step in cilia assembly. Finally, I showed that KLP59D, a microtubule-depolymerising kinesin, is required to control axoneme elongation during the cytosolic ciliogenesis. In conclusion, this work brings new insights into the understanding of the dynamic assembly of TZ proteins and the mechanisms that regulate flagella elongation
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Crozet, Vincent. "Etudes structurales et fonctionnelles de deux kinésines, Kif20A et Klp98A, et inhibition de ces moteurs à des fins thérapeutiques". Electronic Thesis or Diss., Université Paris sciences et lettres, 2023. http://www.theses.fr/2023UPSLS062.
Texto completoResumen
La famille des kinésines compte 45 membres chez l’homme et se subdivise en 14 classes, et plusieurs de ces nanomoteurs sont impliqués dans le processus de division cellulaire. Parmi ces 45 membres, Kif20A, une kinésine-6, présente des particularités structurales uniques au sein des kinésines mais surtout une forte implication dans la prolifération cellulaire, la migration et l’angiogenèse. Il a été démontré qu’elle était indispensable à la transition métaphase-anaphase par la relocalisation du complexe passager des chromosomes ainsi que lors de la cytocinèse. Durant l’interphase, Kif20A est aussi impliquée dans la scission des vésicules RAB6-positives au niveau de l’appareil de Golgi.Par sa forte implication dans les processus de prolifération cellulaire, Kif20A est rapidement apparue comme une cible thérapeutique de premier plan contre de nombreux cancers dont certains résistants aux thérapies actuelles. Ainsi, des études in cellulo et in vitro ont mis en avant que Kif20A était impliquée dans le cancer de la prostate, dans la résistance au docetaxel ainsi que dans la chimiorésistance au paclitaxel dans le cas du cancer du sein et de nombreux autres (cancer ovarien, du poumon, colorectal …).Par l’importance de cette cible dans le cancer, nous avons collaboré avec l’équipe de chimistes dirigée par Catherine Guillou (ICSN) qui a découvert et développé les inhibiteurs ciblant Kif20A. Ceux-ci sont spécifiques de Kif20A et permettent l’échec de la cytocinèse (apparition de cellules bi-nucléées). Cependant, leur problème majeur reste leur faible solubilité ce qui engendre une élimination rapide par le corps et limite la possibilité d’administration du produit uniquement à une forme de nano-suspension.Ainsi le projet de thèse fut centré sur la compréhension de la fonction des kinésines suivant plusieurs aspects. (I) Comprendre la mécanochimie et l’implication des extensions atypiques du domaine moteur de Kif20a. (II) Identifier le site d’inhibition des composés spécifiques inhibant Kif20a, décrire leur mécanisme d’action et améliorer leur formulation. (III) Etude fonctionnelle et structurale d’une autre kinésine, Klp98A, impliquée dans le développement des organes sensoriels de la drosophile.Nos travaux ont permis une meilleure compréhension de la mécanochimie de Kif20A par la résolution de la structure dans l’état avant génération de force et dans l’état ADP ainsi qu’une caractérisation biochimique de plusieurs des extensions caractéristiques de cette kinésine. En collaborant avec le laboratoire de Catherine Guillou, l’amélioration des composés inhibiteurs a été réalisée et le mécanisme d’action a été élucidé.L’étude fonctionnelle et structurale du mutant Δ6 de la kinésine Klp98a a permis de découvrir le mécanisme par lequel cette mutation rendait les moteurs moins performant dans leur mécanisme de génération de force et permet une meilleure compréhension de la mécanochimie de cette classe de kinésines.Ces travaux apportent de nouvelles perspectives pour la mise au point de molécules inhibitrices ciblant les kinésines et ainsi le développement de nouvelles stratégies thérapeutiques. Ils contribuent aussi à une meilleure compréhension de la mécanochimie de certaines classes de cette famille de moteur moléculaireThe kinesin family has 45 members in humans and is subdivided into 14 classes, and several of these nanomotors are involved in the cell division process. Among these 45 members, Kif20A, a kinesin-6, has unique structural features among kinesins, but above all a strong involvement in cell proliferation, migration and angiogenesis. It has been shown to be essential for the metaphase-anaphase transition by relocating the chromosome passenger complex, as well as during cytokinesis. During interphase, Kif20A is also involved in the cleavage of RAB6-positive vesicles in the Golgi apparatus.Kif20A's strong involvement in cell proliferation processes has rapidly made it a key therapeutic target for many cancers, some of which are resistant to current therapies. In cellulo and in vitro studies have shown that Kif20A is involved in prostate cancer, docetaxel resistance and paclitaxel chemoresistance in breast cancer, as well as in many other cancers (ovarian, lung, colorectal, etc.).Given the importance of this target in cancer, we collaborated with the team of chemists led by Catherine Guillou (ICSN) who discovered and developed inhibitors targeting Kif20A. These are specific to Kif20A and allow cytokinesis to fail (bi-nucleated cells appear). However, their major problem remains their low solubility, which leads to rapid elimination by the body and limits the possibility of administering the product only in nano-suspension form.Thus, the thesis project focused on understanding the function of kinesins from several aspect. (I) Understanding the mechanochemistry and involvement of atypical extensions of the Kif20a motor domain. (II) Identifying the site of inhibition of specific compounds inhibiting Kif20a, describing their mechanism of action and improving their formulation. (III) Functional and structural study of another kinesin, Klp98A, involved in the development of sensory organs in Drosophila.Our work has enabled us to gain a better understanding of the mechanochemistry of Kif20A by resolving the structure in the pre-force generation state and in the ADP state, as well as the biochemical characterization of several of this kinesin's characteristic extensions. In collaboration with Catherine Guillou's laboratory, the inhibitory compounds were improved and their mechanism of action elucidated.The functional and structural study of the Δ6 mutant of the Klp98a kinesin has uncovered the mechanism by which this mutation renders motors less efficient in their force-generating mechanism, and provides a better understanding of the mechanochemistry of this class of kinesins.This work opens up new perspectives for the development of inhibitor molecules targeting kinesins, and thus for the development of new therapeutic strategies. It also contributes to a better understanding of the mechanochemistry of certain classes of this family of molecular motors
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Saraiva, Garcia Carlos Henrique. "Etude des événements moléculaires de la gamétogenèse de Plasmodium berghei par des approches protéomiques". Thesis, reponame:Repositório Institucional da UnB, 2016. http://www.theses.fr/2016PA066582/document.
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Le paludisme est causé par des parasites du genre Plasmodium et la gamétogenèse est une étape essentielle à sa transmission. Afin d'améliorer les connaissances sur la genèse des gamètes, nous avons mené des études protéomiques sur des gamétocytes de P. berghei sauvages ou mutants avec le gène moteur de la kinésine 8 interrompu. Le mutant est morphologiquement semblable au type sauvage mais incapable de compléter la gamétogenèse et les gamètes mâles d'exflageller. A partir d'échantillons enrichis en gamétocytes, la gamétogenèse a été suivie sur 15 min après induction par l'acide xanthurénique. Les peptides marqués par iTRAQ à partir de triplicatas biologiques ont été analysés par nanoLC/MS-MS et interprétés par les logiciels Patternlab et Blast2GO. Les phosphopeptides ont été enrichis au TiO2. Chez le parasite sauvage, 443 protéines et 206 phosphoprotéines ont été identifiées à partir de 2617 peptides et chez le mutant, 530 protéines et 218 phosphoprotéines à partir de 3198 peptides. L'induction de la gamétogenèse est marquée par une transcription, une biosynthèse de protéines et de l'ADN importantes. Chez le mutant, la formation des fuseaux mitotiques et des axonèmes des flagelles des gamètes mâles est fortement affectée. Des protéines du complexe du protéasome dépendant de l'ubiquitine, de la réponse au stress, du métabolisme énergétique sont également affectées. Cette étude apporte de nouveaux éléments de compréhension sur le rôle joué par la kinésine 8 dans la gamétogenèse de PlasmodiumMalaria is caused by parasites from Plasmodium genus and its gametogenesis is an essential step to ensure the malaria transmission. In efforts to improve the knowledge on gamete biology we did quantitative proteomic and phosphoproteomic comparative experiments with P. berghei WT and gametocytes disrupted for the motor gene kinesin 8. The mutant is morphologically similar to wild-type parasite but impaired gametogenesis and unable to exflagellate. The Gametocytes-enriched sample from mice at time T0 were xanthurenic acid-induced to exflagellate and harvested at time T7 and T15. The iTRAQ labelled peptides from independent biological triplicate sample were analyzed overtime through nanoLC/MS-MS Orbitrap after TiO2 enrichment, and interpreted by Patternlab and Blast2GO softwares. The wild type had 443 proteins and 206 phosphoproteins identified from 2,617 peptides. The mutant had 530 proteins and 218 phosphoproteins identified from 3,198 peptides. GO biological processes related to RNA translation, DNA and protein biosynthesis were most prominent and phosphorylated proteins are mainly RNA, ATP or protein binding proteins. Within the mutant, the axoneme and mitotic spindle microtubules disorganization were strongly affected. The nucleosome components are key to nuclear division disorganization. The ubiquitin-dependent proteasome complex and stress/folding response, energy metabolism and egress proteins were affected. The Plasmodium proteomic approach brings that insight into kinesin 8 critical importance for male gametogenesis in Plasmodium with effect on protein expression, phosphorylation modulation, flagellar organization and biology
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Porquet, Nicolas. "Caractérisation du rôle non ciliaire de la Kinésine-2 dans l'établissement de l'axe droite/gauche chez Drosophila melanogaster". Electronic Thesis or Diss., Nice, 2013. http://www.theses.fr/2013NICE4112.
Texto completoResumen
Chez Drosophila melanogaster, l’orientation horaire (dextrale) des organes est déterminée par un gène unique codant la Myosine non conventionnelle de type ID (MyoID). Un crible génétique modificateur en contexte sensibilisé pour myoID nous a permis d’identifier klp64D comme un gène interagissant génétiquement avec myoID. Celui-ci code l’une des sous-unités motrices du complexe moteur hétérotrimérique Kinésine-2 (Kin-2) constitué d’une autre sous-unité motrice Klp68D et d’une sous-unité adaptatrice Kap3. Nous montrons que klp68D interagit génétiquement avec myoID lors de la mise en place de l’axe D/G. Ceci suggère donc un rôle de l’ensemble du complexe Kin-2 dans l’asymétrie D/G. Chez les vertébrés, Kin-2 participe à l’assemblage des cils impliqués dans la détermination D/G lors de la gastrulation. Or, chez la drosophile, les cils ne sont pas requis dans la détermination D/G. MyoID et Kin-2 sont requis de manière synchrone dans la voie dextrale lors de la détermination D/G. En outre, Kin-2 joue un rôle important dans la rotation horaire du génitalia et l’enroulement dextral de l’intestin postérieur adulte (hindgut). Kin-2 est requise dans l’organisateur D/G de l’hindgut adulte pour l’orientation biaisée des cellules qui n’expriment pas MyoID. Par ailleurs, nos résultats suggèrent que l’activité de Kin-2 n’est pas requise dans le sous-ensemble de cellules qui exprime MyoID. Enfin, le rôle joué par Kin-2 dans l’asymétrie D/G semble indépendant de la polarité apico-basale et des jonctions adhérentes. Kin-2 pourrait donc jouer un rôle non ciliaire dans la phase de propagation de l’information directionnelle induite par MyoIDIn nature most of the bilateralia are left/right (L/R) asymmetric. In Drosophila, asymmetry is apparent in the directional looping of gut and terminalia. Dextral orientation of organs is controlled by the activity of a single gene myosin ID (myoID) whose mutation induces a fully inverted L/R axis. To date little is known of how the initial L/R cue induced by MyoID is propagated and maintained through the rest of the architecture of the L/R organizer. Here we present the identification of klp64D and klp68D as new myoID interacting genes. These genes encodes the two motor sub-units of the Drosophila Kinesin-2 motor complex. Interestingly, this microtubule-based motor plays a ciliary function in vertebrate L/R morphogenesis. However, we show that in Drosophila cilia are not involved in L/R asymmetry. We demonstrate that Kinesin-2 acts during L/R determination in the dextral pathway. Furthermore Kinesin-2 is required for proper L/R patterning both of male genitalia and of adult hindgut. L/R activity of Kinesin-2 is restricted to cells that do not express MyoID suggesting a role for this motor in propagation of the L/R cue. Our findings show for the first time a non ciliary role for Kinesin-2 in L/R axis determination. Thus, these results shed light on an evolutionary conservation between Drosophila and vertebrate L/R determination
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Gallaud, Emmanuel. "Caractérisation du rôle d'Ensconsine / MAP7 dans la dynamique des microtubules et des centrosomes". Thesis, Rennes 1, 2014. http://www.theses.fr/2014REN1S004/document.
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La mitose est une étape essentielle du cycle cellulaire à l’issue de laquelle le génome répliqué de la cellule mère est ségrégé de façon équitable entre les deux cellules filles. Pour cela, la cellule assemble une structure hautement dynamique et composée de microtubules, appelée le fuseau mitotique. En plus d’assurer la bonne ségrégation des chromosomes, le fuseau mitotique détermine l’axe de division, un phénomène particulièrement important pour la division asymétrique où des déterminants d’identité cellulaire doivent être distribués de façon inéquitable entre les deux cellules filles. L’assemblage et la dynamique de ce fuseau sont finement régulés par de nombreuses protéines qui sont associées aux microtubules. Au cour de ma thèse, nous avons identifié 855 protéines constituant l’interactome des microtubules de l’embryon de Drosophile par spectrométrie de masse puis criblé par ARNi 96 gènes peu caractérisés pour un rôle en mitose dans le système nerveux central larvaire. Par cette approche, nous avons identifié 18 candidats sur la base de leur interaction aux microtubules et de leur phénotype mitotique, dont Ensconsine/MAP7. Nous avons montré qu’Ensconsine est capable de s’associer aux microtubules du fuseau et favorise leur polymérisation. De plus, les neuroblastes des larves mutantes présentent des fuseaux raccourcis et une durée de mitose prolongée. Ce délai en mitose est dû à une activation prolongée du point de contrôle du fuseau mitotique qui est essentiel pour une ségrégation correcte des chromosomes en l’absence d’Ensconsine. D’autres part, en association avec la Kinésine-1, son partenaire fonctionnel en interphase, nous avons montré qu’Ensconsine est également impliquée dans la séparation des centrosomes au cours de l’interphase. Ceci entraine une distribution aléatoire des centrosomes pères et fils dans cellules filles. Grâce à cette étude, nous avons révélé deux nouvelles fonctions pour Ensconsine : elle favorise la polymérisation des microtubules et participe donc à l’assemblage du fuseau mitotique et est impliquée, avec la Kinésine-1 dans la dynamique des centrosomesMitosis is a key step of the cell cycle that allows the mother cell to segregate its replicated genome equally into the two daughter cells. To do so, the cell assembles a highly dynamic structure composed of microtubules called the mitotic spindle. Additionally to its role in the faithful segregation of chromosomes, the mitotic spindle defines the axis of cell division. This phenomenon is particularly important for the asymmetric cell division in which cell fate determinants have to be unequally distributed between the two daughter cells. Spindle assembly and dynamics are subtly regulated by numerous microtubules-associated proteins. During my PhD, we identified using mass spectrometry, 855 proteins establishing the Drosophila embryo microtubule interactome. An RNAi screen was performed in the larval central nervous system for 96 poorly described genes, in order to identify new mitotic regulators. Based on microtubule interaction and mitotic phenotype, among 18 candidates we focused on Ensconsin/MAP7. We have shown that Ensconsin is associated with spindle microtubules and promotes their polymerization. Neuroblasts from mutant larvae display shorter spindles and a longer mitosis duration. This mitotic delay is a consequence of an extended activation of the spindle assembly checkpoint, which is essential for the proper chromosome segregation in the absence of Ensconsin. This study also showed that, in association with its interphase partner Kinesin-1, Ensconsin is involved in centrosome separation during interphase. As a result, mother and daughter centrosomes are randomly distributed between the daughter cells. In conclusion, we highlighted two news functions of Ensconsin : first, this protein promotes microtubule polymerization and is involved in spindle assembly ; second, Ensconsin and its partner Kinesin-1 regulate centrosome dynamics
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Schroëder, Nina. "Etude des effecteurs de Salmonella typhimurium PipB2 et SopD2 : caractérisation fonctionnelle et cibles cellulaires". Aix-Marseille 2, 2009. http://theses.univ-amu.fr.lama.univ-amu.fr/2009AIX22069.pdf.
Texto completoResumen
Salmonella enterica provoque des gastroentérites et des fièvres typhoïdes. Sa réplication et sa virulence requièrent la translocation d'effecteurs dans la cellule hôte. SifA est indispensable pour garantir l'intégrité de la Salmonella-containing vacuole et la formation des Salmonella-Induced filaments (Sifs). Un mutant sifA perd sa vacuole et est attenué en virulence. Cette étude montre que l'effecteur SopD2 contribue à l'instabilité membranaire du mutant sifA. La deletion de sopD2 restaure la réplication et la virulence du mutant sifA, ainsi que la formation de tubules Sif-négatifs. Un mutant sifA est caractérisé par une forte accumulation de kinésine autour de sa vacuole. Ce travail a permis de confirmer l'interaction entre PipB2 et la kinésine et d'identifier le domaine fonctionnel de PipB2. L'étude de PipB2 et SopD2 permet une meilleure compréhension du mutant sifA et l'identification d'un nouveau type de transport induit par Salmonella : la formation de tubules d'effecteursSalmonella enterica cuses gastroenteritis and typhoid fever. Its replication and virulence require the translocation of effectors by a type 3 secrection system (T3SS-2). SifA is important to maintain the intergrity of the Salmonella-containing vacuole and necessary for the formation of Salmonella-Induced filaments (Sifs). A sifA mutant looses its vacuole and has a strong virulence defect. This study demonstrates that SopD2 contributes to the membrane instability of a sifA mutant. Loss of sopD2 restores replication and virulence of sifA mutant, as well as the formation Sif-negative tubules. A sifA mutant accumulates high levels of kinesin around vacuole, recruited by PipB2. This work confirmed the PipB2-kinesin interaction and allowed the identification of the functional domain of PipB2. The study of PipB2 and SopD2 allows a better understanding of the sifA mutant phenotypes and the identification of a novel type of transport induced by Salmonella : the formation of effector tubules
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Alberdi, Maria Lucrecia. "Regulation of Kinesin-1 activity by Salmonella effectors PipB2 and SifA". Thesis, Aix-Marseille, 2018. http://www.theses.fr/2018AIXM0382.
Texto completoResumen
Salmonella est un pathogène intracellulaire qui établit une niche de réplication (SCV) grâce à l’activité des toxines que la bactérie injecte dans le cytosol des cellules infectées. La Kinésine-1, une protéine moteur des microtubules, est la cible de certaines de ces toxines. Ce travail démontre le rôle critique de la kinésine-1 pour la formation de tubules membranaires induits par Salmonella et qui émanent des SCVs. Des travaux antérieurs avaient montré que la toxine PipB2 lie la kinésine-1 à la SCV. Nos résultats écartent une interaction potentielle de PipB2 avec d’autres protéines moteur et renforcent l’idée d’une activité spécifique du couple PipB2/kinésine-1. Grâce à l’utilisation de systèmes in vitro, nous avons montré que: 1) l’activité du complexe PipB2/Kinésine-1 est suffisante pour permettre la formation de tubules membranaires à partir de vésicules artificielles; 2) PipB2 lie et active le moteur moléculaire qui s’engage alors sur les microtubules. Il a été suggéré que la protéine de l’hôte SKIP activait la kinésine-1 en se liant à la toxine SifA. Ce travail met en lumière un mécanisme plus précis grâce à un partenariat entre PipB2 et SifASalmonella is an intracellular pathogen that establishes a replication niche (SCV) through the activity of toxins that the bacterium injects into the cytosol of infected cells. Kinesin-1, a microtubule motor protein, is the target of some of these toxins. This work demonstrates the critical role of kinesin-1 in the formation of Salmonella-induced membrane tubules emanating from the SCVs. Previous work has shown that PipB2 toxin binds kinesin-1 to the SCVs. Our results rule out a potential interaction of PipB2 with other motor proteins and reinforce the idea of a specific activity of the PipB2/kinesin-1 pair. Through the use of in vitro systems, we have shown that: 1) the activity of the PipB2/Kinesin-1 complex is sufficient to pull membrane tubules from artificial vesicles; 2) PipB2 binds and activates the molecular motor which then engages on the microtubules. It has been suggested that the host protein SKIP activates kinesin-1 by binding to the SifA toxin. This work highlights a more precise mechanism thanks to a partnership between PipB2 and SifA
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Leclercq, Julien. "Conception, synthèse et évaluation pharmacologique de nouveaux inhibiteurs de la kinésine Eg5". Thesis, Lille 2, 2014. http://www.theses.fr/2014LIL2S026/document.
Texto completoResumen
Le cancer est un problème très présent dans nos sociétés modernes. En effet en 2010 il touchait plus de 10 millions de personnes dans le monde. Aujourd'hui cette maladie est la première cause de mortalité dans les pays industrialisés.Malheureusement, les thérapies envisagées restent fréquemment insuffisantes et possèdent de nombreux effets secondaires qui ternissent les bienfaits du traitement. Pour éviter justement cette toxicité auprès des cellules saines, la recherche développe depuis quelques années des traitements ciblés. La plupart des médicaments antimitotiques actuellement sur le marché présentent de forts effets secondaires notamment cardiologiques, hématologiques et neurotoxiques.Nous nous sommes donc intéressés à une autre cible thérapeutique intervenant toujours au niveau de la mitose mais provoquant moins d'effets néfastes et pouvant être surexprimée dans les cellules cancéreuses: la kinésine humaine Eg5.La kinésine humaine Eg5 est indispensable au bon fonctionnement de la mitose. Elle possède un rôle essentiel dans les premières étapes du cycle cellulaire et est requise pour la séparation des centrosomes à chaque pôle de la cellule.La suppression ou l'inhibition d'Eg5 bloque la cellule en pré-métaphase avec un fuseaumonoastral caractéristique formé de deux centrioles non séparés entourés des chromosomes et des microtubules. Le maintien de ce type de fuseau provoque l'activation des checkpoints du cycle cellulaire et provoque l'apoptose.Notre travail consiste en la synthèse de composés susceptibles d'inhiber la kinésine humaine Eg5 et de bloquer ainsi le développement des cellules cancéreuses.Le recherche de nouveaux ligands potentiels de la kinésine Eg5 est effectué selon un mode de conception rationnel fondé sur l'analyse de la structure tridimensionelle des complexes protéines/ligands ou "structure-based drug design". Ces travaux sont réalisés en utilisant les outils de modélisation moléculaire par la mise en oeuvre de méthode "de novo".L'ensemble des informations recueilli au travers de logiciels très performants permet l'obtention d'un modèle statistiquement significatif destiné à la conception et à la prédiction des activités biologiques.Ces travaux associés à l'expertise chimique du laboratoire, ont permis la conception de trois nouvelles familles, potentielles ligand d'Eg5, de structure: triazoloquinazolinone, triazolométhylquinazolinone, dihydroimidazoquinazolinoneCancer is a real problem in our civilization. Indeed, in 2010, it affected more than 10 million people in the world. Today, this disease is the first cause of death in industrialized countries.Unfortunately, the proposed therapies remain frequently insufficient and lead to side effects which remove the benefits of the medical treatment. In order to avoid the toxicity to safe cells, since a few years, researches have been done to develop targeted therapies. Most of the anti-mitotic drugs actually available on the market lead to important side effects such as cardiological, hematological and neurotoxic problems.Thus, we interested to another therapeutic target which still acts at the level of the mitosis but causing fewer side effects and can be overexpressed into the cancer cells: the mitotic kinesin Eg5.The mitotic kinesin Eg5 plays an important role in the early stages of mitosis and is one of the most attractive target enzymes in antimitotic drug development. The modulation of the Eg5 activity has been shown to cause aberrant mitotic spindle formation, cell cycle arrest during mitosis and the inhibition of proliferation of tumor cells in culture. With regard to the potential of Eg5 modulators in the treatment of human cancers, we report the design, synthesis and biological studies of quinazolinone derivatives as mitotic kinesin Eg5 inhibitors. We developed three series of molecules derived from quinazolin-4-one scaffold following a “de novo drug design” strategy
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Dumont, Audrey. "SKIP, la cible cellulaire de l'effecteur de Salmonella typhimurium SifA est un régulateur de l'activité de la kinésine-1". Aix-Marseille 2, 2008. http://www.theses.fr/2008AIX20684.
Texto completoResumen
Le compartiment de réplication intracellulaire de Salmonella (SCV) présente plusieurscaractéristiques indispensables à la virulence de ce pathogène régulées par les effecteurs duTTSS-2 ; c’est le cas de la dynamique membranaire de la SCV, un processus clef de son cycle infectieux régulé par plusieurs effecteurs bactériens. Parmi eux, SifA joue un rôle majeur dans le maintien de l’intégrité membranaire de la vacuole ainsi que dans la régulation du recrutement de la kinésine-1. Cette capacité de régulation semble directement liée à son partenaire eucaryote, laprotéine SKIP, qui lie ce moteur moléculaire des microtubules. Un autre effecteur, PipB2 régule également le recrutement de la kinésine-1 sur la SCV en interagissant directement avec la chaînelégère de la kinésine-1. La régulation des moteurs moléculaires et le maintien de l’intégrité membranaire sont des phénomènes étroitement liés (Guignot, 2004). Bien qu’étant impliqués dans ces deux processus, le rôle précis de SKIP et de SifA dans la régulation de la kinésine-1 et dans le maintien de la membrane vacuolaire est très mal connus à ce jour. L’objectif de ma thèse était de mieux comprendre le rôle de SKIP et de SifA dans l’infection à Salmonella et plus particulièrement leur rôle dans la dynamique de la membrane dela SCV. Dans ce but, nous avons réalisé une étude moléculaire détaillée des mécanismes d’interaction entre les partenaires du complexe SifA/SKIP/kinésine-1. Dans un premier temps,j’ai étudié la fonction de SKIP, puis j’ai disséqué son mécanisme d’interaction avec la kinésine-1. Par la suite, je me suis intéressée à l’interaction entre SKIP et l’effecteur bactérien SifA et à son rôle dans la dynamique de la membrane. Pour finir, je me suis intéressée au lien existant entre les effecteurs SifA et PipB2 qui régulent tous deux le recrutement de la kinésine-1 sur la vacuole de la bactérie. Ce travail m’a permis de proposer un modèle de régulation de la kinésine-1 par les effecteurs de Salmonella et ainsi de réaliser un modèle de régulation de la dynamiquede la membrane de la SCV. Je présenterai les résultats obtenus au cours de ma thèse, d’une part sous la forme d’un article qui sera soumis pour publication, et d’autre part, sous la forme de résultats complémentaires.
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Raio, vilela Fernando Augusto. "Structural characterization of JIP3 recruitment by Kinesin-1". Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2019. http://www.theses.fr/2019SACLS123.
Texto completoResumen
Le transport intracellulaire de cargos est un processus critique au sein des cellules eucaryotes, et notamment au niveau des neurones, pour contrôler différentes fonctions dont la maturation et la transmission synaptique. La kinésine-1 est un moteur moléculaire capable de transporter différents types de cargos, comme des organelles, des vésicules ou des assemblages macromoléculaires le long des microtubules. La kinésine-1 est un hétérotétramère constitué d’un homodimère de chaînes lourdes (KHC) associé à deux chaînes légères (KLC) ; les deux chaînes, KHC et KLC étant capables de recruter des cargos. L’un des premiers cargos de la kinésine-1 à avoir été identifiés sont les protéines JIP3/4 (JNK-Interacting Protein 3/4) ; elles jouent aussi un rôle de protéines adaptatrices pour le transport d’autres cargos de la kinésine-1. La kinésine-1 recrute les protéines JIP3/4 de deux façons distinctes et indépendantes (i) via KHC et (ii) via KLC. Le recrutement de JIP3/4 par KHC et KLC est capable, via des mécanismes moléculaires distincts, d’activer la motilité de la kinésine-1 et donc de contrôler le transport intracellulaire dans lequel elle est impliquée et les fonctions associées au sein des neurones.Au cours de mon travail de thèse, j’ai contribué à caractérisé par des approches bio-informatiques, biochimiques/biophysiques et structurales, les deux modes de recrutement des protéines JIP3/4 par la kinésine-1 : (i) via KHC et (ii) via KLC. Ce travail a permis d’apporter des nouveaux éléments pour comprendre le mode de recrutement de ces protéines cargos/adaptatrices par la kinésine-1, mais aussi de mieux comprendre les mécanismes moléculaires de son activation par les protéines JIP3/4The intracellular transport of cargos is a crucial process on eukaryotic cells, and notably in neurons, in order to regulate different functions as cell’s maturation and synaptic transmission. The Kinesin-1 is a molecular motor capable of transporting different types of cargos as organelles, vesicles and macromolecular assemblies along the microtubules. It is a heterotetramer composed by a homodimer of heavy chains (KHC) bound to two light chains (KLC), where both KHC and KLC are capable of cargos recruitment. One of the first identified cargos of Kinesin-1 is JIP3/4 (JNK-Interacting Protein 3/4), which are also adaptor proteins, intermediating the transport of other cargos. Kinesin-1 recruits JIP3/4 by two different and independent modes, (i) via KHC and (ii) via KLC. Therefore, JIP3/4 recruitment by KHC and KLC activates the motility of Kinesin-1, by distinct mechanisms, allowing the intracellular transport of cargos and the associated functions in neurons. During my PhD, I contributed to the characterization of the dual binding mode of Kinesin-1 and JIP3/4 by bioinformatical, biochemical/biophysical and structural approaches. This work allowed a better understanding of the cargos’ recruitment by Kinesin-1, as well as the molecular mechanisms of Kinesin-1 activation by JIP3/4
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Porquet, Nicolas. "Caractérisation du rôle non ciliaire de la Kinésine-2 dans l'établissement de l'axe droite/gauche chez Drosophila melanogaster". Thesis, Nice, 2013. http://www.theses.fr/2013NICE4112/document.
Texto completoResumen
Chez Drosophila melanogaster, l’orientation horaire (dextrale) des organes est déterminée par un gène unique codant la Myosine non conventionnelle de type ID (MyoID). Un crible génétique modificateur en contexte sensibilisé pour myoID nous a permis d’identifier klp64D comme un gène interagissant génétiquement avec myoID. Celui-ci code l’une des sous-unités motrices du complexe moteur hétérotrimérique Kinésine-2 (Kin-2) constitué d’une autre sous-unité motrice Klp68D et d’une sous-unité adaptatrice Kap3. Nous montrons que klp68D interagit génétiquement avec myoID lors de la mise en place de l’axe D/G. Ceci suggère donc un rôle de l’ensemble du complexe Kin-2 dans l’asymétrie D/G. Chez les vertébrés, Kin-2 participe à l’assemblage des cils impliqués dans la détermination D/G lors de la gastrulation. Or, chez la drosophile, les cils ne sont pas requis dans la détermination D/G. MyoID et Kin-2 sont requis de manière synchrone dans la voie dextrale lors de la détermination D/G. En outre, Kin-2 joue un rôle important dans la rotation horaire du génitalia et l’enroulement dextral de l’intestin postérieur adulte (hindgut). Kin-2 est requise dans l’organisateur D/G de l’hindgut adulte pour l’orientation biaisée des cellules qui n’expriment pas MyoID. Par ailleurs, nos résultats suggèrent que l’activité de Kin-2 n’est pas requise dans le sous-ensemble de cellules qui exprime MyoID. Enfin, le rôle joué par Kin-2 dans l’asymétrie D/G semble indépendant de la polarité apico-basale et des jonctions adhérentes. Kin-2 pourrait donc jouer un rôle non ciliaire dans la phase de propagation de l’information directionnelle induite par MyoIDIn nature most of the bilateralia are left/right (L/R) asymmetric. In Drosophila, asymmetry is apparent in the directional looping of gut and terminalia. Dextral orientation of organs is controlled by the activity of a single gene myosin ID (myoID) whose mutation induces a fully inverted L/R axis. To date little is known of how the initial L/R cue induced by MyoID is propagated and maintained through the rest of the architecture of the L/R organizer. Here we present the identification of klp64D and klp68D as new myoID interacting genes. These genes encodes the two motor sub-units of the Drosophila Kinesin-2 motor complex. Interestingly, this microtubule-based motor plays a ciliary function in vertebrate L/R morphogenesis. However, we show that in Drosophila cilia are not involved in L/R asymmetry. We demonstrate that Kinesin-2 acts during L/R determination in the dextral pathway. Furthermore Kinesin-2 is required for proper L/R patterning both of male genitalia and of adult hindgut. L/R activity of Kinesin-2 is restricted to cells that do not express MyoID suggesting a role for this motor in propagation of the L/R cue. Our findings show for the first time a non ciliary role for Kinesin-2 in L/R axis determination. Thus, these results shed light on an evolutionary conservation between Drosophila and vertebrate L/R determination
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Asselin, Laure. "Etude du rôle de la kinésine KIF21B au cours du développement cortical". Thesis, Strasbourg, 2019. http://www.theses.fr/2019STRAJ032/document.
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Le développement du cortex cérébral se déroule selon des étapes bien définies qui sont essentielles à la formation d’un cerveau fonctionnel. La perturbation de l’une ou plusieurs de ces étapes peut conduire à des malformations neuro-développementales, responsables de différents troubles cognitifs, d’épilepsies ou encore de déficience intellectuelle. De nombreuses mutations dans des gènes codant pour les tubulines ou bien les kinésines, sont retrouvées chez des individus présentant diverses anomalies neuro-développementales. Bien que les kinésines soient impliquées dans le développement cortical, les mécanismes fonctionnels par lesquels elles conduisent aux malformations demeurent encore méconnus. Mon travail de thèse identifie la kinésine Kif21b, jusqu’alors peu connue, comme étant essentielle au développement cortical. Nous montrons que Kif21b régule la migration neuronale dans le cortex et identifions quatre variants chez des individus présentant des malformations neuro-développementales. Nous montrons que l’expression ectopique des variants chez la souris et le poisson zèbre récapitulent les phénotypes observés chez ces patientsThe development of the cerebral cortex is a highly regulated process that is crucial for the establishment of functional cortical networks. Disruption of one or several of these steps can lead severe neurodevelopmental disorders that are associated with intellectual disabilities, epilepsies and cognitive impairment. Over the past few years, several genetic mutations in genes encoding either tubulin or microtubule-associated motors such as kinesins, have been found in individuals with neurodevelopmental disorders. Although kinesins have been found to be essential for a proper cortical development, the exact functions of kinesins in these processes are still poorly understood. My work clearly identified Kif21b, a poorly-known kinesin, as a novel key regulator of cortical development both in mouse and human. We show that Kif21b regulates both radial and tangential migration of cortical neurons, and identify four KIF21B variants in individuals presenting neurodevelopmental disorders. We show that ectopic expression of variants recapitulate phenotypes both in mice and zebrafish
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Latge, Bruno. "Rôle des moteurs moléculaires dans l'établissement de la polarité cellulaire". Electronic Thesis or Diss., Paris Sciences et Lettres (ComUE), 2017. http://www.theses.fr/2017PSLET023.
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La polarité cellulaire est une caractéristique fondamentale du fonctionnement des cellules et de l’homéostasie tissulaire. Elle se définit par une distribution asymétrique des constituants cellulaires le long d’un axe de polarité et est le résultat d’une interaction complexe entre des mécanismes intrinsèques et extrinsèques. Les voies de signalisation œuvrant pour l’établissement de la polarité cellulaire et l’organisation anisotrope du cortex cellulaire ont été intensément étudiés depuis des décennies. Cependant, l’implication du positionnement des organites dans la mise en place de la polarité cellulaire et les mécanismes sous-jacents restent encore méconnus. Les moteurs moléculaires sont responsables de l’attachement des organites au cytosquelette et de leurs mouvements. Ils jouent aussi des rôles prépondérants dans l’établissement et le maintien de la polarité cellulaire. Cette thèse a pour but d’étudier les mécanismes moléculaires par lesquels les protéines motrices de la famille des kinésines régulent le positionnement des organites et leur rôle dans la mise en place de la polarité cellulaire. Nous avons combiné l’utilisation de micro-patrons contrôlant l’adhésion des cellules et l’analyse quantitative de l’organisation intracellulaire pour identifier les kinésines impliquées dans le positionnement des organites. Les résultats de notre crible de petits ARN interférents ciblant 43 kinésines humaines suggérèrent un rôle important des kinésines dans la distribution des organites intracellulaires le long de l’axe de polarité antéro-postérieur. Le phénotype le plus marquant a été observé après inhibition de l’expression de la kinésine-1 Kif5B. En permutant les organites autour du centrosome, l’organisation des cellules micro-patronnées en forme d’arbalète était inversée. De plus, lors de la migration cellulaire, l’absence de Kif5B ralentissait le réalignement des organites le long de l’axe de polarité antéro-postérieur, survenant suite à un changement de direction. Ces cellules se sont aussi révélées être moins persistantes. Nous avons alors émis l’hypothèse que les mouvements d’organites induits par Kif5B s’intégraient dans une réponse cellulaire globale, liée à l’alignement des organites le long de l’axe de polarité antéro-postérieur. Disséquant le mécanisme, nous avons montré que les défauts de positionnement des organites observés en l’absence de Kif5B étaient indépendants de l’organisation anisotrope du cortex cellulaire. Il était en revanche corrélé à une augmentation significative de la distance entre le noyau et le centrosome. Etonnamment, l’inhibition de l’expression de RanBP2, un partenaire de Kif5B localisé à l’enveloppe nucléaire, entrainait aussi la permutation des organites. Nous proposons un modèle selon lequel Kif5B, en lien avec RanBP2, coordonnerait le positionnement du noyau, en organisant une cage de microtubules autour. De plus, nous avons mis en évidence le rôle indirect de KifC3 dans le positionnement des organites intracellulaires. Révélé dans notre crible des kinésines, KifC3 contrôle le mouvement centripète des lysosomes, mais localise au centrosome. Le recrutement de KifC3 au centrosome a été caractérisé. Nous avons observé une accumulation préférentielle de KifC3 au centriole père qui était dépendant de Cep170. Nous avons alors proposé que KifC3 soit localisé aux appendices subdistaux du centrosome, grâce à Cep170, et régule l’ancrage des microtubules. KifC3 agirait alors sur l’organisation globale du cytosquelette de microtubules. Ensemble les résultats de cette thèse ont permis d’attirer l’attention sur les fonctions cellulaires générales de deux kinésines, Kif5B et KifC3, dans le control de l’organisation intracellulaire sur laquelle s’appuie la polarité cellulaireCellular polarity is instrumental for normal cell function and tissue homeostasis. It is defined by an asymmetrical distribution of cellular constituents along a polarity axis and results from a complex interplay of intrinsic and extrinsic mechanisms. Cell polarity signaling and cortex anisotropy have been extensively studied in the last decades. However, the role of organelle positioning in cell polarity establishment and the mechanisms by which polarized positioning is achieved are still not well understood. Molecular motor proteins link organelles to cellular cytoskeleton and play an essential role in cell polarity establishment and maintenance. This PhD thesis aimed at the study of the molecular mechanisms by which motors of the kinesin family regulate polarized organelle positioning and their role in cell polarity establishment. We took advantage of our approach that combines cell micropatterning and quantitative analysis of the intracellular organization to identify kinesins that contribute to organelle positioning. Results from our siRNA-based screening targeting 43 members of the kinesin family in human suggested a central role of kinesins in front-rear polarized alignment of intracellular organelles. The strongest phenotype was observed upon kinesin-1 Kif5B depletion that inverted the organization of crossbow-shaped micropatterned cells by flipping organelles around the centrosome. Additionally, Kif5B-depleted cells were constrained in their abilities to re-align organelles along the front-rear polarity axis after directional changes during migration and were less persistent. We therefore hypothesized that Kif5B-dependent organelle movement integrates into a global cellular response, relying on the polarized organelle alignment along the front-rear axis. Dissecting the mechanism, we showed that organelle positioning defects upon Kif5B depletion were independent of the cell cortex anisotropy and correlated with substantial increase in the distance between the nucleus and the centrosome. Unexpectedly, depletion of the Kif5B-interacting partner RanBP2, which is localized at the nuclear envelope, copied the organelle inversion phenotype. We propose a model in which Kif5B, together with RanBP2, controls nucleus positioning by organizing a microtubule scaffold around it. We have additionally evidenced the indirect role of KifC3 in organelle positioning. Identified as a hit in our screen analysis, KifC3 controled the centripetal movement of lysosomes, but localizes to the centrosome. Characterizing the recruitment of KifC3 to the centrosome, we showed its preferential accumulation at the mother centriole that was dependent on Cep170. We propose that KifC3 is localized at the subdistal appendages of centrosomes through Cep170 and regulates microtubule anchorage, and thus,the global microtubule organization. Together the results of this PhD shed light on the global cellular functions of two kinesins, Kif5B and KifC3, in controlling the intracellular organization that supports cell polarity
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Malekzadeh-Hemmat, Boland Kattayoun. "Caracterisation d'un moteur moléculaire, la kinésine, dans les cellules acineuses pancréatiques". Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 1996. http://www.theses.fr/1996STR1A004.
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Robin, Gautier. "Ceklp-15, une kinésine essentielle du nématode C. Elegans : caractérisation in vitro". Université Joseph Fourier (Grenoble), 2003. http://www.theses.fr/2003GRE10219.
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Brier, Sébastien. "Etude des interactions entre la kinésine mitotique humaine Eg5 et ses inhibiteurs". Université Joseph Fourier (Grenoble), 2005. http://www.theses.fr/2005GRE10183.
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La kinésine mitotique humaine HsEg5 est essentielle à la division cellulaire. Ce moteur moléculaire permet la séparation des centrosomes et la mise en place du fuseau mitotique, structure nécessaire au partage équitable de l'information génétique. La suppression de la fonction d'HsEg5 bloque les cellules en pré-métaphase avec un fuseau mitotique monoastral caractéristique constitué des deux centrosomes non séparés entourés d'un anneau de chromosomes et de microtubules. Le maintien de ce phénotype peut conduire à la mort cellulaire programmée via l'activation du point de contrôle du fuseau mitotique (transition métaphase-anaphase). HsEg5 est ainsi considérée comme une cible anticancéreuse particulièrement intéressante. Au cours de ces travaux, nous nous sommes intéressés aux interactions entre le domaine moteur d'HsEg5 et plusieurs inhibiteurs. Les zones d'interaction et de modifications conformationnelles ont été étudiées par échanges hydrogène/deutérium–spectrométrie de masse et mutagenèse dirigée. Cette approche expérimentale nous a permis d'identifier un " point chaud " d'inhibition sur le domaine moteur et de caractériser les mécanismes de deux inhibiteurs : le monastrol et le S-trityl-l-cystéineThe human mitotic kinesin HsEg5 plays an essential role in cell division. This protein is required for the separation of the duplicated centrosomes and the formation of the mitotic spindle. Failure of HsEg5 function blocks centrosome migration and causes cells to arrest midway through mitosis with a characteristic monoastral spindle consisting of a radial array of microtubules surrounded by a ring of chromosomes. This particular phenotype can lead to cell death by the apoptotic pathway. HsEg5 is thus considered as a very promising target for cancer chemotherapy. In this study, we investigate the binding regions of several inhibitors targeting the motor domain of HsEg5. These studies were carried out by using hydrogen/deuterium exchange – mass spectrometry and mutagenesis. Our experimental approach has been successfully applied to localize a “hot spot” binding region on the motor domain and to characterize the mechanism of HsEg5 inhibition by monastrol and S-trityl-l-cysteine
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Munoz, Isabelle. "Rôle de la kinésine-1 dans le sécrétions régulées des celulles immunitaires". Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2017. http://www.theses.fr/2017USPCB014/document.
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La plupart des cellules du système immunitaire sont des cellules sécrétrices capables de libérer des molécules immuno-modulatrices en réponse à des stimuli variés. Cette sécrétion régulée qui permet l’orchestration de la réponse immunitaire et inflammatoire est assurée grâce aux organites apparentés aux lysosomes (LRO) qui vont contenir les molécules nécessaires à la fonctionnalité des cellules immunes. On retrouve par exemple les granules lytiques des lymphocytes T cytotoxiques qui permettent à ces cellules d’effectuer leurs fonctions lytiques ou encore les granules de sécrétion des mastocytes qui contiennent les médiateurs de l’inflammation. Le transport et l’exocytose des LRO impliquent une machinerie commune et conservée. C’est notamment le cas de la petite GTPase Rab27 qui joue un rôle central dans le transport et la sécrétion de ces LRO. De précédentes études réalisées au sein de notre laboratoire ont pu mettre en évidence l’implication du complexe moléculaire Rab27a/Slp3/kinésine-1 dans le transport terminal des granules lytiques des lymphocytes T cytotoxiques chez l’homme. De plus, un modèle murin dont la chaîne lourde de la kinésine-1 est spécifiquement invalidée dans les cellules immunitaires a pu être généré. L’objectif de ma thèse a été dans un premier temps de caractériser le phénotype de ce modèle murin déficient pour la kinésine-1 puis d’analyser plus précisément l’impact de l’absence de la kinésine-1 sur la fonctionnalité des lymphocytes T cytotoxiques et mastocytes murins. Dans un premier temps nous avons pu montrer que les souris déficientes pour la kinésine-1 ont un phénotype comparable à celui des souris contrôles à l’état basal. Nous avons ensuite montré que l’absence de la kinésine-1 au sein des lymphocytes T cytotoxiques murins n’induit pas de défauts d’activation et de sécrétion des granules lytiques in vitro. Cependant les comportements des granules lytiques à la synapse immunologique semblent anormaux. Néanmoins après un test d’infection au LCMV, qui ne révèle aucunes différences entre les souris contrôles et déficientes en kinésine-1, nous en venons à la conclusion que des mécanismes compensateurs pourraient compenser l’absence de la kinésine-1 dans les lymphocytes T cytotoxiques chez la souris. Pour finir des études fonctionnelles réalisées au niveau des mastocytes murins nous ont permis de mettre en évidence l’implication de la kinésine-1 dans le mécanisme de transport des granules de sécrétion. En effet, l’absence de kinésine-1 conduit à des défauts de dégranulation des mastocytes in vitro mais aussi in vivo (souris moins sensibles aux chocs anaphylactiques). En revanche l’absence de kinésine-1 n’affecte pas les capacités d’activation et de sécrétion des cytokines des mastocytes. Enfin, nous avons pu caractériser le complexe moléculaire Rab27b/Slp3/kinésine-1 impliqué dans le transport des granules mastocytaires et avons pu constater que la formation de ce complexe était dépendante de la voie d’activation liée à la PI3K (Phospatidylinositol 3-kinase). Ce travail permet d’apporter de nouveaux éléments quant aux mécanismes gouvernant la sécrétion des granules mastocytaires et ouvre ainsi de nouvelles perspectives thérapeutiques pour le traitement des hypersensibilités de type 1 (dépendantes des IgE)Most of immune cells are secretory cells capable of releasing immunomodulatory molecules in response to various stimuli. This regulated secretion, which allows the orchestration of the immune and inflammatory responses, is ensured by the lysosome-related organelles (LRO) which will contain the molecules necessary for the functionality of the immune cells. For example we found the lytic granules of cytotoxic T lymphocytes, which allow their lytic functions or the secretory granules of mast cells which contain the inflammatory mediators. The transport and exocytosis of LRO involves a common and conserved machinery. This is particularly the case of the small GTPase Rab27 which plays a central role in the transport and secretion of these LRO. Previous studies carried out in our laboratory have highlighted the involvement of the molecular complex Rab27a / Slp3 / kinesin-1 in the terminal transport of lytic granules of cytotoxic T lymphocytes in humans. In addition, a murine model in which the heavy chain of kinesin-1 is specifically invalidated in immune cells has been generated. The objective of my thesis was first to characterize the phenotype of this murine model deficient for kinesin-1, then to analyze more precisely the impact of kinesin-1 absence on the cytotoxic T lymphocyte and mast cell functionality. In a first step, we have been able to demonstrate that mice deficient for kinesin-1 have a phenotype comparable to the control mice in a basal state. We have then shown that the absence of kinesin-1 in murine cytotoxic T lymphocytes does not induce defects in activation and in lytic granules’ secretion in vitro. However, the behavior of the lytic granules at the immunological synapse seems abnormal. Nevertheless, after an infection essay with LCMV, which revealed no differences between control and kinesine-1-deficient mice, we conclude that compensatory mechanisms may complement the absence of kinesin-1 in mice. Finally, functional studies carried out on murine mast cells have enabled us to demonstrate the involvement of kinesin-1 in the mechanism of granules’ transport. Indeed, the absence of kinesin-1 leads to degranulation defects in vitro and also in vivo (mice were less sensitive to anaphylactic shocks). On the other hand, the absence of kinesin-1 does not affect the activation and cytokines secretion capacities of mast cells. Finally, we were able to characterize the molecular complex Rab27b / Slp3 / kinesin-1 involved in mastocytic granules’ transport and found that this complex formation was dependent on the PI3K-related activation pathway (Phospatidylinositol 3-kinase). This work allows us to introduce new elements for the mechanisms governing the secretion of mast cell granules and thus opens new therapeutic perspectives for the treatment of type I hypersensitivity (IgE dependent)
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Geeraert, Camille. "Rôle des microtubules et de la kinésine-1 dans l'autophagie de survie". Paris 11, 2010. http://www.theses.fr/2010PA114814.
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Dans cette étude, nous montrons que les autophagosomes matures peuvent se déplacer le long des microtubules stables et que la formation des autophagosomes requiert les microtubules dynamiques. Dans des conditions de carence nutritionnelle, les microtubules dynamiques recrutent spécifiquement les marqueurs de la formation des autophagosomes. De plus dans ces conditions, la tubuline est hyperacétylée, ce qui permet le recrutement sur le microtubule de la kinésine-1 et de JIP-1. Ce recrutement permet l'activation de JNK qui provoque la libération de Bécline 1 et de l'initiation de la formation de l'autophagosome. Finalement, la kinésine-1 participe à la formation des autophagosomes en carence nutritionnelle tandis qu'en conditions basales, elle participe uniquement à leur mobilité. Nos résultats montrent que la dynamique microtubulaire et les modifications post-traductionnelles de la tubuline jouent un rôle majeur dans la régulation de l'autophagieIn the present study, we show that while mature autophagosomes can move on stable microtubules, starvation-induced autophagosome formation requires the most dynamic microtubule subset. Upon nutrient deprivation, dynamic microtubules specifically recruit markers of autophagosome formation. We further found that upon nutrient deprivation, tubulin acetylation increases and enhances kinesin-1 and JIP-1 recruitment on microtubules. This recruitment allows JNK activation which in turn triggers the release of Beclin 1 and initiation of autophagosome formation. Finally, after nutrient starvation kinesin-1 is involved in autophagosome formation and in basal condition, in motoring autophagosomes. Our results show that the dynamics of microtubules and tubulin post-translational modifications play a major role in the regulation of starvation-induced autophagy
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Rocha, de Souza Cecilia. "Role of glycylating enzyme TTLL3 in colon cancer". Thesis, Montpellier 1, 2013. http://www.theses.fr/2013MON1T019.
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Les modifications post-traductionnelles des microtubules sont accumulées sur la queue carboxy-terminale des tubulines α et β, situées à l'extérieur des microtubules. Ces modifications peuvent réguler sélectivement les interactions avec les moteurs moléculaires et les protéines associées aux microtubules (MAPs). Ces interactions sont essentiels pour les fonctions cellulaires et demandent une régulation stricte. La glycylation est une modification que génère des chaînes latérales glycine sur les protéines. Jusqu'à présent, la glycylation a été à peine étudiée, et la plupart des travaux se sont concentrés sur son rôle potentiel dans les cils et les flagelles. Peu est connu sur le rôle de la glycylation des microtubules dans les cils primaires. Les cils primaires sont des organelles sensorielles, impliquées dans la transduction des signaux et dans la progression du cycle cellulaire. Récemment, une étude approfondie de 13 023 gènes dans le cancer colorectal a révélé que les tumeurs individuelles accumulent une moyenne d'environ 90 gènes mutés. Un de ces gènes potentiels de cancer est la glycylase TTLL3. Notre équipe a testé les deux mutations décrites pour TTLL3 et a pu constaté que chacun d'entre eux conduit à une perte complète de l'activité de cette glycylase in vivo et in vitro. Mon travail vise donc à élucider le rôle de glycylation de protéines dans la signalisation cellulaire et ses conséquences pour la formation du cancer du côlon. J'ai analysé des échantillons provenant de patients par RT-PCR quantitative et j'ai trouvé une diminution des niveaux d'expression de TTLL3 dans les cancers. Les souris TTLL3-knockout ont été soumises à un modèle murin de carcinome du côlon, induit chimiquement à la base de l'azoxyméthane (AOM) et du sulfate de dextran de sodium (DSS). Mes données montrent une formation tumorale élevée dans le groupe TTLL3-KO, ce qui suggère que la perte de la glycylation est liée au développement du cancer du côlon. La glycylation se trouve dans les cils primaires, et les défauts ciliaires ont été décrits dans différents types de tumeurs solides. La présence de cils primaires et l'importance de la glycylation dans le côlon n'étaient pas encore connues au début de mes travaux. Collectivement, mes résultats indiquent que la glycylation est nécessaire, mais pas indispensable pour les cils primaires. Remarquablement, j'ai pu démontrer la présence de cils primaires sur les cellules épithéliales du côlon pour la première fois, et j'ai mis en évidence un défet de ces cils dans les souris TTLL3-KO in vitro et in vivo. Par ailleurs, j'ai démontré que le dysfonctionnement des cils coliques dans les souris KO TTLL3 est associé à une augmentation de l'activité proliférative des cellules épithéliales. Par conséquent, la glycylation pourrait être importante pour la genèse et le fonctionnement des cils primaires. Dans le côlon, l'absence de la glycylase TTLL3 peut entraîner un manque de la glycylation qui favorise la formation de tumeursTubulin posttranslational modifications are involved in the regulation of many microtubule functions. Glycylation has been related to the stability and maintenance of motile cilia in different organisms including mammals. We had previously shown that some colon-cancer related mutations in the glycylating enzyme TTLL3 lead to a complete loss of enzymatic activity, which brought up a surprising link between this rather cilia-specific tubulin modification and cancer. To evaluate potential role of glycylation in colon carcinoma formation we first confirmed the link between TTLL3 and colon cancer in a greater cohort of patients. We next studied TTLL3-knockout mice, which strikingly did not show any obvious phenotypic alterations or spontaneous cancer development. However, when submitted to a murine model of chemically induced colon carcinoma, TTLL3-knockout mice show a higher level of tumor formation, pointing towards an acceleration of colon cancer development. Because glycylation of microtubules has been specifically detected on ciliary tubulin, we next analysed the presence of primary cilia in colon epithelium. While in most organs and tissues a second glycylating enzyme, TTLL8, is expressed, TTLL3 is the unique enzyme in colon. We found a significantly reduced number of primary cilia in TTLL3-KO colon epithelium, suggesting that similar to motile cilia, primary cilia are maintained by glycylation of the axonemal tubulin. Moreover, we measured a strongly increased mitotic index in colon epithelial cells isolated from TTLL3-KO mice, indicating that his loss of cilia is accompanied by decreased level of cell cycle control. Thus we have demonstrated for the first time a tight link between the posttranslational glycylation of the microtubule cytoskeleton, the control of cell cycle and the acceleration of cancer development
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D'Amico, Eva. "Etude des effets de l'inactivation de Kif3a dans les cellules thyroïdiennes". Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2012. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/209643.
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Afin d’assurer les échanges entre ses différents organites, la cellule eucaryote dispose d’un système ingénieux de trafic vésiculaire intracellulaire. Le transport directionnel de divers cargos tels que des organites membranaires et des complexes protéiques est assuré par des moteurs moléculaires auxquels appartiennent les protéines de la superfamille des kinésines (également appelées KIF pour KInesin Family). Celles-ci se servent des microtubules comme rails et se déplacent vers leur extrémité positive. Parmi elles, la kinésine II est composée de KIF3A et KIF3B, deux protéines motrices et de KAP3, une protéine de liaison au cargo à véhiculer. Ce moteur moléculaire est connu pour participer à l’assemblage du cil primaire à la surface des cellules ainsi qu’au trafic plus conventionnel tel que l’acheminement de protéines à la membrane. Afin d’étudier le rôle précis de la kinésine II dans la glande thyroïde, nous avons invalidé spécifiquement le gène Kif3a dans cet organe chez la souris. Bien que cette inactivation ait conduit à un développement complet du tissu thyroïdien, les souris invalidées présentent une hypothyroïdie congénitale caractérisée par des concentrations sériques élevées de TSH et basses de T4. Par la suite, nous avons mis en évidence une expression fortement diminuée du transporteur d’iodure NIS chez ces souris, causant une déficience en iodure intracellulaire, une iodation insuffisante de la thyroglobuline et une sécrétion anormale de l’hormone T4 dans la circulation sanguine. De plus, ex vivo, nous avons montré que la réponse à la TSH en terme d’AMPc est altérée dans la thyroïde de ces souris. Ces observations nous ont permis d’émettre l’hypothèse que l’invalidation du gène Kif3a spécifiquement dans la glande thyroïde mène à une anomalie dans la voie de signalisation du récepteur de la TSH, en amont de la production d’AMPc. Finalement, in vitro, par l’utilisation de cellules Kif3a-/-, nous avons analysé l’expression à la membrane plasmique et la réponse à un agoniste du récepteur β2 adrénergique, un membre de la même sous-famille de récepteurs couplés aux protéines G que le récepteur de la TSH. De cette façon, nous avons obtenu des données indiquant que le transport de ce récepteur à la surface cellulaire était altéré en l’absence de Kif3a.
Au vu de ces éléments et de ceux de la littérature, nous suggérons que la kinésine II, et plus particulièrement sa sous-unité KIF3A, joue un rôle important dans le transport du récepteur de la TSH nouvellement synthétisé vers la membrane basale de la cellule de la thyroïde.
Doctorat en Sciences
info:eu-repo/semantics/nonPublished
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Surel, Clément. "Les mécanismes de la neuropathie auditive AUNA1". Thesis, Montpellier, 2016. http://www.theses.fr/2016MONTT093/document.
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La neuropathie auditive est une forme de surdité caractérisée par une atteinte des cellules ciliées internes (qui détectent les ondes sonores et les transforment en message nerveux) et/ou des neurones afférents primaires (qui véhiculent les messages nerveux jusqu'au noyau cochléaire), associée à une activité normale des cellules ciliées externes (qui amplifient les ondes sonores). AUNA1 est la première neuropathie auditive héréditaire à avoir été décrite. Elle est causée par une mutation ponctuelle située dans le promoteur du gène DIAPH3, résultant en une surexpression de DIAPH3. La protéine DIAPH3, un membre de la famille des formines, est connue pour promouvoir la nucléation et l’élongation des filaments d’actine ainsi que la stabilisation des microtubules. Nous avons étudié les mécanismes d’AUNA1 à partir d’un modèle murin transgénique surexprimant le gène diap3, l’orthologue murin de DIAPH3. Les souris transgéniques développent une surdité dont les caractéristiques sont semblables à celles d’AUNA1. Cette surdité est due à une perte d’activité des cellules ciliées internes. L’activité synaptique et les courants potassiques de ces cellules ne sont pas altérés. En revanche, la microscopie électronique révèle une fusion des stéréocils (expansions cytoplasmiques qui permettent la détection des ondes sonores) et une déformation de la plaque cuticulaire (plateforme qui assure l’ancrage des stéréocils). Par la technique d’immunomarquage, nous avons mis en évidence une invasion de la plaque cuticulaire par des microtubules. Enfin, nous avons démontré que la protéine Diap3 est localisée dans la plaque cuticulaire des cellules ciliées internes, suggérant ainsi que la surexpression de diap3 provoque un remodelage du réseau de microtubule des cellules ciliées internes, à l’origine de la surdité AUNA1Auditory neuropathy is a type of deafness characterized by an alteration of the inner hair cells (which detect the acoustic waves and transform them into neural messages) and/or of the primary afferent neurons (which conduct the neural messages to the cochlear nucleus), associated with a normal activity of the outer hair cells (which amplify the acoustic waves).AUNA1 is the first hereditary auditory neuropathy which has been described. It is caused by a point mutation in the promoter of the DIAPH3 gene, resulting in an overexpression of DIAPH3. The DIAPH3 protein, a formin family member, is known to promote the actin filament nucleation and elongation and to stabilize the microtubules.We studied the AUNA1 mechanisms using a transgenic mouse model which overexpresses the diap3 gene, the mouse homologue of DIAPH3. Transgenic mice develop a deafness whose characteristics are similar to the ones of AUNA1. The hearing loss is due to a defect in the inner hair cell activity. The synaptic activity and the potassium currents of these cells are not altered. However, electron microscopy reveals a fusion of the stereocilia (cytoplasmic expansions which detect the acoustic waves) and a disruption of the cuticular plate (plateform which maintains stereocilia). By immunolabeling, we showed an invasion of the cuticular plate by microtubules. Eventually, we demonstrated that Diap3 is located in the inner hair cell cuticular plate, suggesting that the overexpression of diap3 provokes a remodeling of the inner hair cell microtubule network, underlying the AUNA1 deafness
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De, Muylder Géraldine. "Caractérisation d'une chaîne lourde de kinésine et de son rôle immunomodulateur chez Trypanosoma brucei". Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2008. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/210431.
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Le Trypanosome africain, dont Trypanosoma brucei est le prototype, est un parasite sévissant en Afrique sub-tropicale. Il est responsable de la maladie du sommeil chez l’Homme et de diverses affections chez les animaux tant sauvages que domestiques.T. brucei est un parasite extracellulaire qui se développe dans le sang de son hôte mammifère. Il est donc confronté en permanence au système immunitaire de l’hôte et a en conséquence, afin de générer un environnement plus favorable à sa croissance, établit différents mécanismes d’échappement tels que la variation antigénique ou l’immunomodulation.
Dans ce contexte, il a été montré que T.brucei libère des facteurs capables d’induire la voie arginase des macrophages. Cette induction peut favoriser la croissance des trypanosomes dans le sang de leur hôte de diverses manières. Premièrement, l’arginase participe à la synthèse de composés tels que les polyamines ou la trypanothione, facteurs de croissance des cellules. Deuxièmement, l’arginase partage le même substrat que la NO synthase inductible (iNOS), ces deux enzymes sont donc en compétition et l’activation de l’arginase pourrait contribuer à diminuer la quantité de NO, composé cytostatique et cytotoxique, produit par les macrophages en limitant le substrat disponible pour l’iNOS. Troisièmement, la déplétion du milieu en arginine suite à l’activation de l’arginase inhibe la prolifération de cellules du système immunitaire dont les lymphocytes T.
Nous avons identifié une chaîne lourde de kinésine chez T.brucei, TbKHC1 (Trypanosoma brucei Kinesin Heavy Chain 1), appartenant à la superfamille des kinésines, comme un candidat potentiellement capable d’induire la voie arginase des macrophages. TbKHC1 est principalement exprimée au stade sanguicole du parasite et est localisée au niveau de la région endo-exocytaire. Dans un modèle d’infection murin, une invalidation de l’expression de TbKHC1 (par ARN interférence ou par knock-out) conduit à une diminution du premier pic de parasitémie et à une prolongation de la survie des souris infectées. Nous avons montré que TbKHC1 joue un rôle dans l’interaction hôte/parasite à deux niveaux indépendants :premièrement, l’induction de la voie arginase des macrophages par TbKHC1 en début d’infection favorise la croissance du parasite et son établissement au sein de son hôte. Deuxièmement, elle joue un rôle dans l’induction de la pathologie liée à l’infection.
Doctorat en Sciences
info:eu-repo/semantics/nonPublished
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Smyczynski, Cybelle. "Transduction mécanochimique par les moteurs moléculaires : exemple des complexes actine-myosine et microtubule-kinésine". Montpellier 2, 1999. http://www.theses.fr/1999MON20121.
Texto completoResumen
Les moteurs moleculaires, myosines, kinesines sont responsables de la plupart des mouvements cellulaires generalement conduits par l'hydrolyse de l'atp. Pour remplir leur fonction, ces moteurs interagissent aux filaments d'actine dans le cas des myosines et aux microtubules dans le cas des kinesines. Malgre leur diversite fonctionnelle, ces moteurs moleculaires possedent des analogies structurales qui suggerent des mecanismes moleculaires tres proches. Le but de mon travail de these a ete de mieux connaitre leur mode d'action a travers l'etude des complexes actine-myosine et microtubule-kinesine. Dans le systeme actine-myosine, la generation de force est expliquee par le modele dit du bras de levier qui implique une rotation d'un domaine regulateur de la myosine. Nous avons etudie, par transfert d'energie de fluorescence, les variations de distances entre differents locci du complexe actine-myosine durant son cycle atpasique. Les changements de distance observes ne confirment pas totalement ce mouvement de rotation mais suggerent plutot une nouvelle hypothese dans laquelle les myosines generent la force motrice en evoluant d'un etat structuralement desordonne vers un etat ordonne. Dans le systeme microtubule-kinesine, les structures cristallines de la kinesine ne suggerent pas la presence d'un bras de levier mais proposent plutot des changements de structure importants au niveau du complexe microtubule-kinesine. Nous avons isole et etudie un complexe entre ncd, une proteine de la famille des kinesines, et la tubuline. La caracterisation des proprietes d'interaction et d'activite atpasique du complexe tubuline-ncd, comparees a celles du complexe polymerise microtubule-ncd, a mis en evidence des differences remarquables entre ces deux complexes. Ces resultats nous permettent de mieux comprendre l'activation de la fonction atpase specifique des microtubules mais aussi le role probable des kinesines dans la dynamique des microtubules.
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Dornier, Aurélie. "Etude du mouvement de kinésine par suivi de particule unique par onde évanescente progressive". Paris 6, 2005. http://www.theses.fr/2005PA066085.
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Saade, Murielle. "Dynamique des protéines Spatial au cours de la morphogenèse cellulaire et interactions avec la kinésine KIF17". Aix-Marseille 2, 2008. http://www.theses.fr/2008AIX22006.
Texto completoResumen
Le microenvironnement stromal thymique est crucial pour la génération des lymphocytes T. Mon projet a porté sur l'étude d'un gène stromal nommé Spatial, exprimé par des cellules hautement polarisées, épithéliales, neuronales et germinales. La différentiation de ces cellules est accompagnée d'une polarisation de la distribution de Spatial, dans des structures microtubulaires hautement organisées telles que la manchette, le flagelle et la dendrite. Sachant que la différentiation cellulaire nécessite un système de transport capable de positionner des protéines loin du corps cellulaire, nous avons étudié l’interaction de Spatial avec la protéine motrice KIF17. J’ai également participé au développement d'un système d’électrotransfert in vivo de gènes dans le thymus. Cette approche a été validée par reconstitution de lymphocytes T fonctionnels dans un modèle murin immunodéficient. Ce système serait ainsi une cible thérapeutique pour traiter des immunodéficiences liées aux lymphocytes TThe thymic stromal microenvironment is critical for T lymphocyte generation. During my Phd, I studied a stromal gene named spatial, expressed in highly polarized cell types, such as epithelial cells, neurons and germ cells. The differentiation of these cells is accompanied by a rapid polarization of Spatial distribution in highly organized microtubular arrays such as the manchette, the flagellum and the dendrite. Since cellular morphogenesis needs means of intracellular transport to deliver molecules far from the main body of the cell, we reported the association of Spatial with the kinesin KIF17 that participates in this selective transport. My Phd work was also focused on the development of a new system of in vivo electro-gene transfer into the thymus. We assessed the usefulness of this approach by generating long-term functional T lymphocytes in immunodeficient mice. This method could represent a simplified and effective alternative for gene therapy of T cell immunodeficiencies
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Leduc, Cécile. "Système biomimétique d'intermédiaires de transport tubulaires : étude quantitative". Paris 7, 2005. https://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00426247.
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Bertrand, Roxane. "De l'Hétérogénéité de la Parole : analyse énonciative de phénomènes prosodiques et kinésiques dans l'interaction interindividuelle". Aix-Marseille 1, 1999. http://www.theses.fr/1999AIX10032.
Texto completoResumen
Les theories relativement recentes issues de la linguistique des interactions et du courant de l'enonciation permettent de proposer certaines hypotheses sur le fonctionnement langagier des individus en interaction. Par ailleurs, le developpement des etudes en prosodie illustre l'importance accrue que revet la dimension vocale dans la communication. Par sa nature, ses aspects polysemiques, on concoit aisement le role fondamental qu'elle occupe dans les echanges interindividuels. En nous situant dans une double approche, qui integre ces divers domaines de recherche, nous nous inscrivons dans une perspective a la fois nouvelle et prometteuse. En effet, certaines notions-cles (notamment celle de polyphonie), par la maniere meme dont elles sont formulees, se pretent a une validation de type prosodique. Cependant, cette mise en relation necessite aussi une clarification des concepts impliques a laquelle nous avons du consacrer une large part de ce travail. L'analyse experimentale de phenomenes langagiers tels que les activites de modulations ou les discours rapportes directs (niveau dialogique des enonces) ou l'etude des phenomenes de regulation (niveau dialogal), constitue ainsi une premiere tentative pour concilier et faire dialoguer ces divers domaines d'analyse et d'interpretation des faits de parole. La prise en compte de la dimension vocale au sein du modele interactif/enonciatif retenu, nous a conduit a reflechir en outre au role de la dimension gestuelle dans les interactions interindividuelles. Une etude preliminaire des aspects gestuo-vocaux des phenomenes de regulation du discours illustre une voie de recherche recente dont l'objectif consiste a mettre en evidence le lien tres etroit qui existe entre les modalites vocales et gestuelles.
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Demonchy, Raphaël. "Etude de protéines flagellaires chez Trypanosoma brucei". Paris 6, 2008. http://www.theses.fr/2008PA066294.
Texto completoResumen
Les flagelles sont des organites conservés dans le monde eucaryote. Chez l’Homme ils sont présents dans un grand nombre de types cellulaires et leur disfonctionnement est la cause de maladies graves. La conservation des protéines est telle qu’il est possible, par comparaison de génomes, d’établir des ensembles de gènes flagellaires putatifs. Trypanosoma brucei est un protiste parasite qui possède un flagelle mobile tout au long de son cycle biologique. Avec ce modèle d’étude, nous avons confirmé le rôle dans la mobilité flagellaire de quatre protéines conservées dans les espèces possédant des flagelles mobiles, dont l’hydine, protéine impliquée dans l’hydrocéphalie. D’autre part nous avons travaillé sur deux protéines de la famille 9 des kinésines : TbKLP1 et TbKIF9. Les deux kinésines sont flagellaires et impliquées dans la mobilité. TbKIF9, elle, est nécessaire pour l’assemblage de la fibre paraflagellaire (PFR), la structure associée à l’axonème du trypanosome. Des structures extra-axonémales sont aussi présentes dans les spermatozoïdes, et il s’agit de la première démonstration du rôle d’une kinésine dans l’assemblage de telles structures