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Silvie, Olivier. "CD81 et microdomaines enrichis en tétraspanines : rôle dans l'infection des hépatocytes par plasmodium". Phd thesis, Université Pierre et Marie Curie - Paris VI, 2006. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00011596.
Texto completoResumen
L'infection des hépatocytes par les sporozoïtes constitue une première étape obligatoire du cycle de Plasmodium chez l'hôte vertébré. Les mécanismes impliqués dans l'invasion des hépatocytes restent mal caractérisés. Nous avons découvert que CD81, une protéine transmembranaire appartenant à la famille des tétraspanines, est nécessaire à l'infection des hépatocytes par les sporozoïtes de Plasmodium falciparum, de Plasmodium yoelii, et dans certains cas de Plasmodium berghei. L'expression de CD81 suffit à rendre les cellules hépatocytaires HepG2 sensibles à l'infection par les sporozoïtes de P. yoelii mais pas P. falciparum, suggérant l'intervention d'autres molécules pour ce parasite. Une caractéristique majeure des tétraspanines est leur capacité de s'associer entre elles et avec d'autres molécules de surface pour former des microdomaines membranaires distincts des radeaux lipidiques classiques (« rafts »). Nos résultats montrent que le cholestérol membranaire contribue non seulement à la localisation de CD81 dans les microdomaines enrichis en tétraspanines mais aussi à l'infection par les sporozoïtes de Plasmodium lorsqu'elle implique une voie dépendante de CD81. Nous n'avons pas pu mettre en évidence d'interaction directe entre CD81 et les sporozoïtes, ce qui suggère que CD81 pourrait ne pas jouer un rôle de récepteur pour le parasite mais intervenir de manière indirecte. EWI-F et EWI-2, deux protéines transmembranaires associées à CD81 dans les hépatocytes, ne sont pas directement impliquées dans l'infection par les sporozoïtes. Au contraire, EWI-F a un effet inhibiteur sur l'infection, peut-être lié à une réorganisation des microdomaines à tétraspanines ou à une compétition avec un autre partenaire de CD81. Une autre molécule associée à CD81 pourrait donc jouer un rôle essentiel dans l'infection par les sporozoïtes, éventuellement comme récepteur, mais sa nature reste à déterminer.
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Langlois, Anne-Claire. "Caractérisation des déterminants moléculaires impliqués dans l'entrée des sporozoïtes de Plasmodium dans les cellules hépatocytaires". Electronic Thesis or Diss., Sorbonne université, 2019. http://www.theses.fr/2019SORUS235.
Texto completoResumen
Les sporozoïtes de Plasmodium, l’agent du paludisme, sont transmis par les moustiques Anophèles et infectent le foie pour une première phase de réplication. Les mécanismes moléculaires impliqués dans l'invasion des hépatocytes restent méconnus. Deux récepteurs du virus de l'hépatite C (VHC), la tétraspanine CD81 et le récepteur Scavenger Receptor BI (SR-BI), jouent un rôle majeur dans l'entrée des sporozoïtes de Plasmodium dans les hépatocytes. CD81 et SR-BI définissent des voies d’entrée indépendantes et alternatives en fonction des espèces de Plasmodium. Un autre facteur d'entrée du VHC, le récepteur aux éphrines EphA2, a plus récemment été proposé comme facteur clé de l'infection hépatique. Nos travaux ont révélé que EphA2 n’est pas requis au cours de l’infection hépatique par les sporozoïtes, quelle que soit la voie d’entrée. D’autre part, nous avons montré que SR-BI murin est peu fonctionnel lors de l'infection par P. berghei par rapport à son homologue humain. À l’aide de constructions chimériques de SR-BI, nous avons pu démontrer le rôle des hélices apicales de SR-BI humain au cours de l’infection. Ces résultats suggèrent que cette région de la molécule pourrait interagir avec des ligands des sporozoïtes. Nos données ouvrent la voie vers une meilleure caractérisation des interactions moléculaires impliquées dans l'entrée des parasites de Plasmodium dans les hépatocytesSporozoite forms of the malaria parasite Plasmodium are transmitted by mosquitoes and first infect the liver for an initial round of replication. The molecular mechanisms of sporozoite invasion of hepatocytes remain poorly understood. Two receptors of the Hepatitis C virus (HCV), the tetraspanin CD81 and the Scavenger Receptor BI (SR-BI), play an important role during entry of Plasmodium sporozoites into hepatocytic cells. CD81 and SR-BI operate independently during malaria liver infection, and receptor usage differs between different Plasmodium species. More recently, another HCV entry factor, the Ephrin receptor A2 (EphA2), was reported to play a key role during malaria liver infection. Using different inhibition techniques, we show that blocking EphA2 has no significant impact on P. yoelii or P. berghei host cell infection, irrespective of the entry pathway. On the other hand, our work revealed that murine SR-BI is poorly functional during P. berghei infection as compared to its human counterpart. Using a structure-guided strategy, we were able to locate the functional region of human SR-BI to the apical helices, suggesting that this region of the molecule could interact with sporozoite ligands. Altogether, these results pave the way toward a better characterization of the molecular mechanisms involved in Plasmodium sporozoite entry into hepatocytes
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Humphreys, Georgina Sarah. "Factors affecting Plasmodium falciparum sporozoite formation in Anopheles mosquitoes". Thesis, University of Glasgow, 2010. http://theses.gla.ac.uk/1750/.
Texto completoResumen
The relative contribution of different factors, including environmental and genetic variables, on the observed variation in genome numbers per oocyst was investigated. The variation in sporozoite numbers from two genetically different Plasmodium falciparum clones (3D7 and HB3) in Anopheles gambiae mosquitoes, and the pattern of inheritance of the phenotype was investigated. Membrane-feeding of cultured P. falciparum parasites to laboratory-reared Anopheles mosquitoes produced infected midguts for dissection. Microdissection of single oocysts from the infected midguts and the employment of polymerase chain reaction techniques allowed the products of self- and cross-fertilisation to be distinguished, and the number of genomes per oocyst to be counted. Utilising these methods allowed comparison of the relative productivity of oocysts from different genetic and environmental backgrounds. Environmental factors such as the size of the mosquito and the number of oocysts on the midgut appeared to have no effect on the number of genomes per oocyst. However the genomes per oocyst were signifcantly different when oocysts from the same clone were isolated from two different Anopheles mosquito species. The two parasite clones differed significantly in the number of genomes per oocyst they produced, and this trait was inherited in a dominant fashion.
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Mead, Jan Renee. "Cryptosporidium: Isolate variation and humoral responses to sporozoite antigens". Diss., The University of Arizona, 1988. http://hdl.handle.net/10150/184391.
Texto completoResumen
The humoral response of humans, calves and horses to Cryptosporidium sporozoite antigens was evaluated using a western blot technique. Sera from calves, humans and horses were obtained at various times following the detection of infection. Sera were reacted with detergent-solubilized, sporozoite antigens form sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The number of antigens recognized by immune sera from humans and animals increased with time post infection (P.I.). A 20 kDa antigen appeared to be a major sporozoite surface determinant since it was labelled via membrane protein biotinylation and recognized by mouse monoclonal antibodies using indirect immunofluorescence and western blotting. Detectable recognition of the 20 kDa band occurred in 3 week post infection (P.I.) sera from all species tested. Sera reactivity to the 20 kDa band diminished significantly within 5 months P.I. when infected humans had no further recurrence of cryptosporidial diarrhea. In contrast, 12 month P.I. sera from an individual constantly exposed to oocysts under working conditions was as strongly reactive as the 3 week convalescent sera. Therefore, reactivity to the 20 kDa antigen appeared to be a good indicator of exposure to Cryptosporidium. Anti-sporozoite indirect immunofluorescent titers decrease in reactivity from convalescent to post convalescent sera which correlated with western blot results. Chromosomal DNA of five Cryptosporidium parvum isolates and one Cryptosporidium baileyi isolate were compared by field inversion gel electrophoresis (FIGE). FIGE analyses of parasite DNA prepared from purified sporozoites versus intact oocysts showed no observable differences. Chromosomal DNA migration patterns of the five Cryptosporidium parvum isolates were indistinguishable. Distinct differences in chromosomal DNA were evident between the Cryptosporidium baileyi and Cryptosporidium parvum isolates, yet the overall pattern was similar. Five C. parvum isolates were also compared using two dimensional electrophoretic analyses. Silver stained patterns of sporozoite proteins showed a shift in a 106 kDa protein in three of the isolates. One isolate (Mexico) showed a complete absence of this protein (106 kDa) and the presence of an additional 40 kDa protein not found in any other isolate.
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Formaglio, Pauline. "Comment les sporozoïtes Plasmodium franchissent-ils les barrières endothéliales ?" Paris 7, 2013. http://www.theses.fr/2013PA077190.
Texto completoResumen
Le paludisme, l'une des maladies infectieuses les plus meurtrières au monde, est initié quand une Anophèle inocule des sporozoïtes de Plasmodium dans la peau d'un hôte mammifère. Certains de ces parasites accèdent à la circulation en franchissant la paroi d'un vaisseau sanguin. Ils rejoignent le foie, quittent la circulation et infectent les hépatocytes, donnant naissance à de nombreux mérozoïtes qui initient les symptômes de la maladie. Les mécanismes permettant le passage des sporozoïtes au travers de la paroi des vaisseaux, dans la peau et dans le foie, ont ici été étudiés par imagerie en bioluminescence et microscopie intravitale. Ces techniques ont révélé que la plupart des sporozoïtes envahissent les vaisseaux rapidement après leur inoculation et qu'une anesthésie générale profonde peut affecter ce processus. Le long de la vascularisation, des points d'entrée préférentiels ont été identifiés. Ces sites, où de multiples événements d'invasion se produisent indépendamment de la densité locale de parasites, sont associés à la présence de péricytes Flk1-CD31- CD146+. L'imagerie fonctionnelle de l'activité de traversée cellulaire des sporozoïtes a montré que, dans la peau, seuls -30% des invasions sont associées à la traversée d'une cellule endothéliale ou périvasculaire. D'autres observations suggèrent de plus que la majorité des sporozoïtes entrent dans les vaisseaux par une voie paracellulaire. À l'inverse, le passage de la barrière sinusoïdale hépatique, via une cellule endothéliale, une cellule de Küpffer ou les deux, est associé à la traversée cellulaire dans -80% des cas et cette activité permet aux sporozoïtes de résister à l' élimination par les cellules de KüpfferMalaria, one of the deadliest infectious diseases in the world, is initiated when an Anopheles mosquito inoculates Plasmodium sporozoites into the skin of a mammalian host. Some of these parasites then actively cross the wall of dermal blood vessels and gain access to the bloodstream. They next reach the liver, exit the circulation and infect hepatocytes, giving rise to, numerous merozoites, which initiate the symptoms of the disease. Here, the mechanisms underlying the passage of sporozoites across the wall of blood Ivessels, in the skin and in the liver, were investigated using bioluminescence imaging and intravital microscopy in rodent models of malaria. It was first demonstrated that most sporozoites invade blood vessels speedily following heir inoculation in the skin and that deep general anesthesia can inhibit this, process. Preferential sites of sporozoite entry were next identified along the ascular tree. These sites, where multiple events of blood vessel invasion occurred independently of local parasite density, were associated with the presence of Flk1-CD31-CD146+ pericytes. A functional assay enabling the detection of sporozoite cell traversai activity showed that only —30% of the invasion events were associated with traversai of endothelial or perivascular cells. In addition, evidence suggesting that most sporozoites use a paracellular route to enter blood vessels was obtained. Passage across the liver sinusoidal barrier was, on the contrary, associated with cell traversai in —80% of the events and could involve endothelial cells, Kupffer cells or both. Ln addition, cell traversai was found to allow sporozoites to escape clearance by Kupffer cells
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Mauduit, Marjorie. "Le rôle de la protéine Circumsporozoïte dans l'immunité anti-stade pré-érythrocytaire de Plasmodium". Paris 6, 2008. http://www.theses.fr/2008PA066482.
Texto completoResumen
Le paludisme est la première maladie parasitaire au monde. Il est du à l’infection par un parasite protozoaire du genre Plasmodium. Experimentalement, il a été montré que l’immunisation avec des sporozoïtes irradiés induit une immunité stérilisante à long terme. Cependant, pour des raisons pratiques, l’utilisation généralisée de cette méthode a longtemps été considérée comme impossible. Ceci a conduit à rechercher les antigènes parasitaires impliqués dans la protection pour développer des vaccins sous-unitaires. Un antigène, la protéine Circumsporozoite (CSP), composant majoritaire de la surface du sporozoïte, a été longtemps considéré comme l’antigène candidat majeur pour le développement de vaccins ciblant le stade pré-érythrocytaire. Cependant, les difficultés à reproduire le niveau de protection induit par les sporozoïtes irradiés avec les vaccins sous-unitaires basés sur la CSP, pose la question du rôle réel de cette protéine dans l’acquisition de l’immunité stérile. Pour répondre à cette question, nous avons utilisé un parasite transgénique de P. Berghei, exprimant une protéine CS hétérologue, afin de savoir si cet antigène majeur et immunodominant était réellement nécessaire à l’établissement de la protection stérile induite par vaccination avec des sporozoïtes irradiés, ou par vaccination avec des sporozoïtes vivants associés à un traitement à la chloroquine. Nos résultats démontrent qu’une immunité sterile peut être induite en l’absence de réponses spécifiques de la CSP exprimée par le parasite utilisé pour l’infection d’épreuve, démontrant que d’autres antigènes sont impliqués dans cette protection.
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Kreutzfeld, Oriana. "Pre-clinical evaluation and improvement of attenuated malaria sporozoite vaccine candidates". Doctoral thesis, Humboldt-Universität zu Berlin, 2020. http://dx.doi.org/10.18452/20968.
Texto completoResumen
Malaria Impfstoffkandidaten, welche Sicherheit und Wirksamkeit gegen prä-erythrozytische Stadien bieten, sind nach wie vor in der Entwicklung. Experimentelle Immunisierungsstudien mit genetisch attenuierten Parasiten (GAP), welche die Entwicklung über das klinisch asymptomatische Leberstadium hinaus verhindern, erwiesen sich als sicher und effizient. ΔSLARP GAP-Sporozoiten arretieren vollständig in der Leber, bieten jedoch keinen langanhaltenden Schutz. Hingegen zeigen Immunisierungen mit ΔP36p/P36 Sporozoiten einen langanhaltenden Schutz, führen jedoch während der Immunisierung gelegentlich zu Blutstadieninfektionen. Diese Studie liefert eine systematische vorklinische Bewertung eines dreifachen KO GAP-Parasiten, durch die Kombination von ΔSLARP und ΔP36p/P36. KO Parasiten arretierten vollständig in vitro und in vivo, aber der zeitnahe Blutinfektionsbeginn nach einer Sporozoiteninfektion in Mäusen zeigte eine verminderte Wirksamkeit des Impfstoffs. Während ein besserer Schutz durch einen späten Leberstadien Entwicklungsstillstand erreicht werden kann, bleiben die zugrundeliegenden molekularen Mechanismen unklar. Eine Vorrausetzung für die Leberzellen Antigenpräsentation ist die Präsenz von parasitären Antigenen im hepatozyten Zytoplasma. Der Proteinexportkomplex PTEX ist in Leberstadien nicht vollständig funktionstüchtig, da das essentielle Hitzeschockprotein 101 (HSP101) nicht exprimiert wird. Um die Rolle von HSP101 für den Leberproteinexport zu klären, wurden transgene HSP101 exprimierende Parasiten erzeugt. Transgene Parasiten weisen in vitro und in vivo schwere Wachstumsstörungen im Leberstadium auf und bieten keinen Impfschutz. Die Ergebnisse legen nahe, dass die Expression von HSP101 streng kontrolliert wird und der Export im frühen Leberstadien nicht wiederhergestellt werden kann. Insgesamt können prä-klinische Studien und die Weiterentwicklung von GAP-basierten Impfstoffkandidaten die laufenden humanen Impfstoffstudien beeinflussen und vorantreiben.Malaria vaccine candidates providing both safety and efficacy against pre-erythrocytic stages remain largely elusive. Experimental immunizations with live genetically attenuated parasites (GAPs) preventing the development beyond the clinically silent liver stage have proven safe and efficacious. GAP vaccine candidate ΔSLARP, provides the most robust life cycle arrest, however, immunizations do not elicit long-lasting immunity. In contrast, ΔP36p/P36 sporozoites elicit long-lasting immunity, but lead to breakthrough infections during immunizations. This study gives a systematic pre-clinical evaluation of a triple knockout (tKO) GAP by combining ΔSLARP and ΔP36p/P36. Complete arrest of tKO parasites in cultured hepatoma cells and sporozoite-infected mice was confirmed, but time to blood infection after a sporozoite challenge revealed reduced efficacy of the tKO vaccine. While superior immunity can be achieved by a late developmental arrest at liver-to-blood stage conversion, the underlying molecular mechanisms remain elusive. An important question is whether parasite antigens are exposed to the hepatocyte cytoplasm. Protein translocation into the host cell cytoplasm mediated by PTEX, a protein translocon, is absent during liver stage maturation as a core component of PTEX, Heat-shock-protein 101 (HSP101), is not expressed. To clarify the role of HSP101 in liver stage protein export transgenic HSP101 expressing Plasmodium berghei parasites were generated. Parasites expressing elevated levels of HSP101 show severe liver stage growth defects in vitro and in vivo, lack early liver stage export and inferior protection in immunized animals. Our results suggest that HSP101 expression is tightly controlled and PTEX dependent early liver stage export cannot be restored solely by HSP101 overexpression. Overall, pre-clinical analysis and improvement of GAP-based vaccine candidates can inform on-going human vaccine trials and boost malaria vaccine development.
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Combe, Audrey. "Entrée et développement des sporozoïtes de plasmodium dans les cellules hôtes". Paris 7, 2008. http://www.theses.fr/2008PA077196.
Texto completoResumen
Le paludisme demeure une des maladies infectieuses les plus meurtrières au monde. La phase sanguine symptomatique de l'infection est précédée par une phase, dite pré-érythrocytaire, qui se déroule principalement dans le foie de l'hôte. Durant celle-ci, la forme sporozoïte du parasite est injectée dans la peau de l'hôte par un moustique, envahit les hépatocytes, et y génère la forme mérozoïte du parasite qui envahit les globules rouges. Durant ma thèse, je me suis intéressée à différents aspects de l'entrée et du développement des sporozoïtes de Plasmodium dans les cellules hôtes, en utilisant un modèle rongeur d'infection. Nous avons caractérisé une nouvelle protéine nécessaire à la mobilité des sporozoïtes et à leur invasion des glandes salivaires du moustique. Cette protéine, TREP, est un nouveau membre de la famille de protéines qui lient le substrat au moteur du parasite. Nous avons ensuite examiné le rôle de l'actine de la cellule cible pendant l'entrée des zoïtes d'Apicomplexes. Contrairement au modèle communément accepté selon lequel la cellule hôte ne joue pas de rôle actif durant l'entrée des zoïtes, nos résultats ont montré que les zoïtes induisent une polymérisation de l'actine cellulaire spécifiquement à la jonction zoïte-cellule. Enfin, nous avons développé une approche de mutagenèse conditionnelle chez Plasmodium, utilisant le système flp/FRT de la levure, afin d'étudier la fonction, aux stades pré-érythrocytaires, de gènes essentiels du parasite. Grâce à cette technique, nous avons montré que la protéine MSP-1, essentielle à l'invasion du globule rouge par le mérozoïte, est essentielle à la formation des mérozoïtes au stade intra-hépatocytaire du parasiteMalaria remains one of the most deadly infectious diseases in the world. The symptomatic phase is due to the multiplication of the parasite inside red blood cells of the host. This blood phase is preceded by the so-called pre-erythrocytic phase, which occurs mostly in the liver of the host. During the latter phase, the sporozoite stage of the parasite is injected into the host skin by a mosquito, invades hepatocytes and generates the merozoite stage that invades erythrocytes. During my thesis, I focused on various aspects of entry and development of the Plasmodium sporozoite in host cells, using a rodent model of infection. First, we characterized a novel protein that is necessary for the motility of the sporozoite and its capacity to invade the mosquito salivary glands. This protein, called TREP, is a new member of the family of proteins that link the substrate to the parasite motor. Second, we examined the role of actin in the host cell during the entry of Plasmodium sporozoites and Toxoplasma tachyzoites. In contrast to the commonly accepted model of a host cell playing no active role during zoite entry, our results showed that zoites induce actin polymerization in the host cell specifically at the zoite-host cell junction. Finally, we established a new conditional mutagenesis procedure in Plasmodium, based on the Flp/FRT System of yeast, for addressing the function of parasite essential genes in the pre-eryhtrocytic stages (sporozoite and intra-hepatocytic). Using this technique, we showed that the MSP-1 protein, which is essential for merozoite invasion of erythrocytes, is also essential for the formation of merozoites from the intra-hepatocytic stage of the parasite
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Topçu, Selma. "Infection des hépatocytes par Plasmodium : rôle des protéines de micronèmes des sporozoïtes". Thesis, Paris 6, 2016. http://www.theses.fr/2016PA066080/document.
Texto completoResumen
L’infection par Plasmodium, parasite responsable du paludisme, débute par l’injection de sporozoïtes par un moustique du genre Anopheles. La première cible des sporozoïtes est le foie, où le parasite se développe avant l’initiation d'une phase d'infection érythrocytaire symptomatique. Dans le foie, les sporozoïtes pénètrent activement les hépatocytes en formant une vacuole parasitophore, dans laquelle le parasite se multiplie. Cette étape, appelée invasion productive, implique des facteurs parasitaires et des protéines de l’hôte, notamment CD81. Toutefois, les mécanismes mis en jeu restent méconnus. À l’aide d’une nouvelle approche génétique développée au laboratoire, nous avons produit de nouvelles souches de parasites transgéniques fluorescents, notamment chez le parasite de rongeurs P. yoelii. L’utilisation des parasites de P. yoelii GFP et d’un système cellulaire de lignées permissives ou non à l’infection, nous a permis de mieux caractériser les mécanismes cellulaires et moléculaires mis en jeu lors de l’invasion. Nous avons confirmé que l’invasion productive est précédée d’une phase de traversée cellulaire. Nous avons découvert et caractérisé la formation de vacuoles transitoires lors de cette phase de traversée cellulaire, distinctes des vacuoles parasitophores productives. Nos résultats montrent que le parasite se sert d’une perforine parasitaire, PLP1 (Perforin-Like Protein 1), pour sortir de cette vacuole transitoire et échapper à la dégradation par les lysosomes cellulaires. Une fois activés, les sporozoïtes passent d’un mode de traversée à un mode d’invasion productive. Nous avons montré que CD81 joue un rôle dans l’invasion productive. CD81 est nécessaire pour induire la sécrétion des rhoptries parasitaires, impliquées dans la formation de la jonction mobile, une structure à travers laquelle le parasite se glisse pour pénétrer dans la cellule. Nous avons pu aussi montrer qu’une autre protéine des hépatocytes, SRBI (scavenger receptor BI), définit une voie d’entrée indépendante de CD81 pour P. berghei et P. vivax. Par une approche génétique originale, nous avons pu montrer que deux protéines des micronèmes des sporozoïtes, P52 et P36, jouent un rôle majeur dans l’entrée via CD81 et SRBI, et mis à jour un lien fonctionnel entre P36 et l’entrée via SRBI. Enfin, nous avons développé plusieurs approches génétiques pour cibler le gène d’ama1 chez P. yoelii, une protéine des micronèmes impliquées dans la formation de la jonction. Nos résultats nous éclairent un peu plus sur les mécanismes d’invasion des sporozoïtes, et ouvrent des perspectives intéressantes vers le développement de nouvelles stratégies vaccinalesInfection with the Plasmodium parasite begins with the injection of sporozoites by an Anopheles mosquito. The first target is the liver where the parasite replicates as a pre-requisite to the development of pathogenic blood stage infection. In the liver, sporozoites penetrate hepatocytes forming a parasitophorous vacuole in which the parasite multiplies. This step, the productive invasion, involves parasitic factors and host proteins, particularly CD81, but the underlying mechanisms remain largely unknown. To facilitate monitoring of sporozoite invasion, we generated novel transgenic fluorescent parasites, using a new selection strategy named GOMO (gene out marker out) in the rodent parasite P. yoelii. The use of this transgenic parasite and of host cell lines permissive or not to infection, has allowed us to better characterize the cellular and molecular mechanisms involved during invasion. We have confirmed that the productive invasion is preceded by a cell traversal phase. We discovered and characterized the formation of transient vacuoles during this step, before formation of the parasitophorous vacuole. Our results uncovered that the perforin-like protein (PLP1) mediates sporozoite egress from transient vacuoles and escape from degradation by the cell lysosomes. Once activated, the sporozoites switch from the mode of cell traversal to productive invasion. We show that CD81 plays a role in the productive invasion. CD81 is necessary to induce the secretion of rhoptries proteins, involved in the formation of the moving junction, a structure through which the parasite glides to enter the cell. We could also show that another hepatocyte protein, SR-B1 (scavenger receptor B1), defines a CD81-independent pathway for P. berghei and P. vivax infection. Using an original genetic approach, we have shown that two sporozoite micronemal proteins, P52 and P36, play a role in the entry via CD81 and SR-B1, and highlighted a functional link between P36 and entry via SR-B1. Finally, we have developed several genetic approaches to target ama1 gene in P. yoelii, which encodes a protein involved in the formation of the moving junction. Altogether, our results contribute to improve our understanding of the mechanisms of sporozoite invasion, and open interesting perspectives for the development of novel vaccine strategies
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Späth, Stephan-Stanislaw. "Molecular basis of cell invasion by malarial sporozoites". Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077003.
Texto completoResumen
Le phylum des Apicomplexes comporte plusieurs parasites humains, dont Plasmodium et Toxoplasma. Ces parasites intracellulaires obligatoires se transforment en des formes spécialisées, appelées « zoïtes » pour envahir les cellules hôtes. L'invasion cellulaire du zoïte implique la formation d'une jonction entre le zoïte et la cellule. Utilisée comme ancrage pour la pénétration du zoïte, cette dernière est appelée jonction zoïte-cellule (ZCJ). La nature moléculaire de cette jonction reste une question débattue. Ces dernières années, des résultats obtenus chez T. Gondii ont suggéré qu'elle serait constituée d'un complexe de protéines conservées chez Apicomplexa, AMA1 et RON. Une partie de ma thèse a consisté à générer des protéines de fusion de ces protéines candidates. Le but majeur était de tester les rôles d'AMAl et RON4, exprimées aux stades mérozoïte et sporozoïte. J'ai généré des mutants conditionnels de P. Berghei d'AMAl et RON4. L'obtention de parasites mutants par mutagenèse conditionnelle nous a permis de montrer qu'AMAl et RON4 sont importantes lors du processus d'invasion par les mérozoïtes. Cependant, seule RON4 est importante pour l'invasion par le sporozoïte et agirait donc indépendamment de AMA1. De plus, les données suggèrent qu'au cours du processus d'invasion par les zoïtes, AMA1 n'agit pas au niveau de la ZCJ mais semble promouvoir l'adhésion. RON4, et probablement d'autres protéines RON, sont importantes dans les étapes ultérieures de formation et/ou de stabilité de la ZCJ. AMA1 ne semble donc plus être un candidat crédible de liaison entre la jonction et le moteur du parasite. La protéine TRAP semble mieux armée pour assurer cette fonctionApicomplexa are a large phylum of protists containing important human pathogens such as Plasmodium and Toxoplasma. A conserved feature of host cell invasion by Apicomplexa is the formation of an intimate contact between the parasite and host cell, called zoite cell junction (ZJC), which is thought to act as a stationary transmembrane bridge that connects the motor of the parasite and the cytoskeleton of the host cell. The molecular nature of the ZCJ, however, remains unknown. In recent years, many studies on the Toxoplasma tachyzoite have suggested that the ZCJ contains a complex between the AMA1 and RON proteins (conserved in Apicomplexa). Part of my PhD work consisted in making GFP protein fusions for these proteins. The major project was to test the role of AMA1 and RON4 proteins in the Plasmodium merozoite, which invades erythrocytes, and sporozoite, which is injected by the mosquito and invades host hepatocytes. I generated Plasmodium berghei conditional mutants for AMA1 and RON4. These genetically silenced parasites, showed that both AMA1 and RON4 are important for merozoite invasion, while only RON4, but not AMA1, is important for sporozoite invasion, indicating that RON4 functions independently of AMA1. These data suggest that during host cell invasion by apicomplexan zoites, AMA1 does not act at the ZCJ but rather promotes zoite adhesion, while RON4, and presumably other RON proteins, are important in thé subsequent steps of ZCJ formation and/or stability. The non-essential nature of AMA1 as a ZCJ component indicates that another protein may play this role and TRAP is the leading candidate
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Roth, Alison E. "A Multivariate Approach for an Improved Assessment of Pre-erythrocytic Stage Therapies Targeting Plasmodium vivax and Plasmodium falciparum". Scholar Commons, 2018. https://scholarcommons.usf.edu/etd/7641.
Texto completoResumen
The malaria pre-erythrocytic stages have been identified as an ideal therapeutic target, but complex in vitro models for Plasmodium vivax and Plasmodium falciparum lack the efficiency needed for rapid screening and evaluation of new vaccines and drugs, especially targeting the P. vivax hypnozoite. To address this challenge, we employed a multi-parameter approach using “omics’” to identify pre-erythrocytic targets and biomarkers, guide phenotypic therapeutic screening, and study parasite functionality with innovative bioassays using highcontent screening. Herein, we discuss three novel bioassays formatted in 384-well plate systems with utilization of commercially-available materials and application of high-content imaging for rapid bio-image analysis. To refine functional assessment of pre-erythrocytic targets in early infection phases, we developed a real-time, ‘live’ sporozoite motility assay and a live sporozoite hepatocyte cell traversal assay to examine chemotherapeutic and immunoprophylactic interventions in biologically relevant environments. Furthermore, our 384-well primary hepatocyte culture system and methodology maintains stable hepatocyte physiology of cryopreserved primary human hepatocytes in addition to primary non-human primate hepatocytes for greater than 30 days, thus ideal for robust liver parasite development following infection with P. vivax, P. falciparum or P. cynomolgi sporozoites. We report antimalarial drug and vaccine studies performed in all bioassays with identification of novel anti-LS inhibition mechanisms. Additionally, this research discusses the discovery of potential sporozoite and liver stage targets identified through transcriptomic profiling of freshly isolated P. vivax and P. cynomolgi sporozoites using a candid approach of recapitulating the pivotal transition period from mosquito to human through microenvironment reconstruction and exposure to biological stimuli. We further characterize sporozoite invasive phenotypes through the application of the bioassays. Together, these novel functional assays enable us to rapidly evaluate potential preerythrocytic therapeutic candidates and analyze complex Plasmodium sporozoite phenotypes.
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Renaux, Sophie. "Eimeria du lapin : étude de la migration extra-intestinale du sporozoïte et du développement de l'immunité protectrice". Tours, 2001. http://www.theses.fr/2001TOUR3802.
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Williamson, Susanna Margaret. "A Theileria annulata sporozoite surface antigen as a potential vaccine for tropical theileriosis". Thesis, University of Edinburgh, 1989. http://hdl.handle.net/1842/30045.
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Yalaoui, Samir. "Rôle de protéines de l'hépatocyte dans sa permissivité à l'infection par les sporozoïtes de Plasmodium". Paris 6, 2009. http://www.theses.fr/2009PA066121.
Texto completoResumen
L’infection des hépatocytes par les sporozoïtes de Plasmodium est la première étape obligatoire du cycle parasitaire chez l’hôte vertébré. A ce jour, la nature des mécanismes moléculaires impliqués dans l’invasion des hépatocytes par les sporozoïtes et le développement du schizonte hépatique restent peu connus. Dans un premier temps, nous avons montré que seuls 21 résidus du domaine B de CD81, particulièrement le résidu D137, portent la permissivité des cellules hépatocytaires à l’infection plasmodiale. Ces résultats, couplés à l’utilisation de différents anticorps monoclonaux dirigés contre CD81, appuient l’idée d’un rôle indirect de CD81, vraisemblablement par modulation de l’activité d’une protéine partenaire restant à identifier. Par la suite, nous avons démontré que le récepteur aux lipoprotéines SR-BI, exprimé à la surface de la cellule hôte, module l’infection CD81-dépendante par les sporozoïtes de Plasmodium. SR-BI permet la formation de structures membranaires hautement permissives à l’infection, appelées microdomaines enrichis en tétraspanines, selon deux mécanismes bien distincts : d’un côté il régule le cholestérol cellulaire et membranaire, de l’autre il favorise le positionnement de CD81 à la surface des cellules. De plus, SR-BI favorise le développement parasitaire en régulant la protéine L-FABP, nécessaire à la croissance du parasite. Enfin, 6 nouvelles protéines impliquées dans la permissivité de l’hépatocyte à l’infection par les sporozoïtes de Plasmodium ont été identifiées dont HP1, indispensable à l’infection par les sporozoïtes de P. Falciparum et P. Berghei. Ces résultats ouvrent la voie à une meilleure compréhension du stade hépatique de Plasmodium et à la génération de nouveaux outils d’études de l’infection à P. Falciparum
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Dardé, Marie-Laure. "Contribution à la caractérisation de Toxoplasma Gondii : étude isoenzymatique". Limoges, 1990. http://www.theses.fr/1990LIMO101A.
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Lacroix-Gimon, Céline. "Etude des bases moléculaires du pouvoir infectieux de Plasmodium". Paris 7, 2011. http://www.theses.fr/2011PA077141.
Texto completoResumen
L'agent causal du paludisme, le parasite Plasmodium, est transmis à un hôte mammifère lors d'une piqûre par un moustique femelle du genre Anophèle. Le sporozoïte, est inoculée dans la peau par le moustique, rejoint la circulation sanguine, s'arrête dans le foie, et envahit un hépatocyte. A l'intérieur d'un hépatocyte, un sporozoïte se différencie en des milliers de mérozoïtes. Le sporozoite interagit avec les cellules de l'hôte de deux façons possibles : il peut traverser la cellule en glissant dans son cytoplasme (traversée cellulaire), ou envahir la cellule dans une vacuole parasitophore et s'y développer (invasion cellulaire). Pendant mon PhD, j'ai travaillé sur les bases moléculaires de ces deux processus. Nous avons d'abord démontré que la protéine TLP (Trap-like protein), contrairement aux conclusions de travaux précédents, ne jouait pas de rôle dans la traversée cellulaire par les sporozoïtes dans la peau, mais agissait pendant la mobilité et/ou l'invasion cellulaire des sporozoïtes dans le foie. Nous avons aussi caractérisé une nouvelle protéine, appelée GEST (Gamète Egress sporozoite traversai), qui joue un rôle important dans la traversée cellulaire par les sporozoïtes ainsi que pendant la sortie des stades sexués des globules rouges. Pour pouvoir étudier l'invasion cellulaire par les sporozoïtes,,nous avons développé une technique de mutagenèse conditionnelle. Grâce à cette technique, nous avons analysé les fonctions des protéines AMAl et RON4 chez le sporozoïte, qui sont actuellement considérées comme formant la jonction d'entrée zoïte-cellule hôte. Nos résultats montrent que RON4, mais pas AMAl, est essentielle à l'invasion cellulaire par le sporozoïteThe causing agent of malaria, the Plasmodium parasite, is transmitted to a mammalian host during a bite by a fernale Anopheles mosquito. The sporozoite, is inoculated into the skin by the mosquitoes, gets access to the bloodstream, stops in the liver, and invades hepatocytes. Inside a hepatocyte, one sporozoite develops into thousands of merozoites, the parasite form that multiplies inside erythrocytes and causes the symptoms of the disease. The sporozoite interacts with host cells in two possible ways : it can traverse the cell by gliding inside its cytoplasm (cell traversal), or invade the cell inside a parasitophorous vacuole and develop therein into the next parasite stage (cell invasion). During my PhD, I have worked on the molecular bases of these two processes. We first demonstrated that the protein TLP (Trap-like protein), does not play a role in sporozoite cell traversal in the skin, but acts in sporozoite motility and/or cell invasion in the liver. We also characterized a novel protein, called GEST (Gamete Egress sporozoite traversal), which plays an important role during sporozoite cell traversal as well as during the egress of sexual stages from their host erythrocyte. To devise better strategies to study sporozoite cell invasion, which implicates proteins that are not specific to the sporozoite stage, we developed a conditional mutagenesis technique. Using this technique we analyzed the functions of the AMAl and RON4 proteins in the sporozoite, two proteins currently considered to constitute the junction that forms between the invading zoite an the host cell during invasion. Our data show that, while RON4 is indeed essential to the sporozoite, AMAl is not
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Singer, Mirko [Verfasser] y Michael [Akademischer Betreuer] Lanzer. "Timed genome editing and sporozoite formation in Plasmodium berghei / Mirko Singer ; Betreuer: Michael Lanzer". Heidelberg : Universitätsbibliothek Heidelberg, 2017. http://d-nb.info/1177148919/34.
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Wawerzinek, Peter. "Expression of parasite specific receptors on bovine leukocyte target cells for thelleria sporozoite binding". Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 1987. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/213459.
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Boulter, Nicola Rosalind. "Assessment of SPAG-1. a sporozoite surface antigen of Theileria annulata, as a vaccine candidate". Thesis, University of York, 1996. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.319450.
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Gransagne, Marion. "Etude fonctionnelle et structurale de protéines impliquées dans l'invasion des cellules hépatocytaires par les sporozoïtes de Plasmodium". Thesis, Paris 6, 2017. http://www.theses.fr/2017PA066616/document.
Texto completoResumen
Lors de mes travaux de thèse je me suis intéressée à l’invasion des hépatocytes par Plasmodium. Bien que certains récepteurs cellulaires mis en jeu aient déjà été identifiés tels que CD81 et SR-B1, les facteurs parasitaires restaient à identifier. J’ai testé différents facteurs parasitaires grâce à un protocole de test d’invasion de cellules HepG2 et HepG2/CD81 par des parasites complémentés avec différentes protéines. Suite à l’identification de la protéine P36 comme déterminant du choix de la voie d’entrée dans les hépatocytes, j’ai étudié les déterminants structuraux de cette protéine nécessaires à la détermination de la voie d’entrée. Pour cela j’ai complémenté des parasites délétés pour P36 avec des protéines chimériques exprimant les domaines d’un parasite utilisant à la fois les récepteurs CD81 et SR-B1 et des domaines d’un parasites ne pouvant utiliser que la voie CD81. J’ai identifié le second domaine à 6 cystéine de P36 comme déterminant du choix de la voie d’invasion. Afin d’étudier les interactions de P36 avec d’éventuels récepteurs cellulaires, j’ai produit cette protéine en système bactérien. Les protéines ont été utilisées pour réaliser des tests d’interactions (ELISA et SPR) avec des récepteurs d’intérêt : CD81, SR-B1, CD36, LIMPII et EphA2 qui n’ont malheureusement pas permis d’identifier le ligand de P36. Des anticorps sont également en cours de production, dans le but d’une part de tester s’ils sont capables de bloquer l’invasion des hépatocytes par Plasmodium et d’autre part de localiser la protéine chez le parasite. Enfin, j’ai étudié les polymorphismes des protéines P36 de parasites infectant l’hommeDuring my thesis, I was interested in the study of the hepatocyte invasion by Plasmodium. Several cellular receptors are involved, such as CD81 and SRB1, but the parasitic factors required were unknown until now. I tested different parasitic factors thanks to an invasion test of HepG2 or HepG2/CD81 cells with parasites complemented with different proteins. Following the identification of the 6 cystein protein P36 as a determinants of the entry pathway, I studied the structural determinants of this protein which are involved in the hepatocytes’ entry pathway. To this end, I complemented parasites knock-out for P36 with chimeric proteins constituted of domains of a parasite using both CD81 and SRB1, and domains from a parasite using only CD81. I showed that the second 6 cystein domain of P36 is decisive in the entry pathway choice.In order to study the P36 interactions with potential cellular receptors, I developed a production protocol of this protein in bacteria. I used the recombinant protein to test the interactions (ELISA and SPR) with potential receptors: CD81, SRB1, CD36, LIMP2, Epha2. Unfortunately, no interaction has been detected. Antibodies are in production, in order to test whether they are capable to block the hepatocyte invasion by Plasmodium. They will also be used to localize the protein in the parasite. In the end, I studied the polymorphisms of P36 in human parasites
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Muthinja, Julianne Mendi [Verfasser] y Michael [Akademischer Betreuer] Lanzer. "Dissecting the role of Plasmodium sporozoite curvature in gliding motility / Julianne Mendi Muthinja ; Betreuer: Michael Lanzer". Heidelberg : Universitätsbibliothek Heidelberg, 2017. http://d-nb.info/117769073X/34.
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Muthinja, Mendi [Verfasser] y Michael [Akademischer Betreuer] Lanzer. "Dissecting the role of Plasmodium sporozoite curvature in gliding motility / Julianne Mendi Muthinja ; Betreuer: Michael Lanzer". Heidelberg : Universitätsbibliothek Heidelberg, 2017. http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bsz:16-heidok-238616.
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BARRETO, Andreia Cunha. "Evaluation of humoral and cellular immune responses to P.berghei-based whole-sporozoite malaria vaccination in rhesus macaques". Master's thesis, Instituto de Higiene e Medicina Tropical, 2019. http://hdl.handle.net/10362/97490.
Texto completoResumen
A malária é uma doença infecciosa transmitida por mosquitos que continua a ser uma das doenças infecciosas mais impactantes do mundo, matando milhares de pessoas todos os anos. Apesar de todos os esforços para controlar esta doença, como quimioprofilaxia e medidas de controlo de vetores, a falta de conhecimento sobre as respostas imunes desencadeadas pelo parasita Plasmodium dificulta o desenvolvimento de uma vacina eficaz contra a malária, que é necessária com urgência.
A natureza assintomática e altamente imunogénica do estadio hepático da infecção por Plasmodium torna-o num alvo ideal para o desenvolvimento da vacina contra a malária. Prudêncio lab do Instituto de Medicina Molecular (IMM) desenvolveu um novo candidato a vacina contra a malária de esporozoito inteiro que tem como alvo o estágio hepático, a PbVAC. Na qual o parasita roedor P. berghei expressa a proteína circunsporozoítica de superfície do P. falciparum (PfCSP), altamente imunogénica, de modo a promover respostas imunitárias específicas para PfCSP, assim como respostas cruzadas entre espécies, que podem proteger contra uma infecção subsequente por P. falciparum.
Estudos pré-clínicos em modelos de infecção em murganhos e coelhos mostraram que PbVac é capaz de infectar e desenvolver-se em hepatócitos sem estabelecer uma infecção no estadio sanguíneo. Para imitar o que acontece no fígado humano, os macacos rhesus (Macaca mulatta) foram usados para um teste pré-clínico de P. berghei wild-type (WT) e esporozoítos PbVac geneticamente modificados, como estratégia para induzir imunidade contra P. falciparum. Este estudo tem como objetivo investigar e comparar as respostas imunes humorais e celulares entre animais imunizados e não imunizados.
Primeiro, confirmamos que os esporozoítos do PbWT são capazes de infectar hepatócitos do macaco rhesus in vivo. Posteriormente, os macacos rhesus foram imunizados por picada de mosquito com PbVac ou PbWT e seguidos por 21 semanas, em paralelo com animais não imunizados. Células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) e plama foram coletadas periodicamente e células do fígado e esplenócitos foram coletados na eutanásia. Foi realizada uma comparação do plasma pré e pós 3 imunizações para analisar as respostas humorais quantificando IgGs específicas para esporozoítos. As composições dos compartimentos imunes do sangue periférico, fígado e baço foram analisadas por imunofenotipagem e respostas imunes celulares específicas contra esporozoítos PbVAC, PbWT e Pf foram avaliadas em PBMCs e células hepáticas utilizando um ensaio intracelular de citocinas.
As imunizações foram seguras, sem alterações relevantes nos parâmetros de segurança avaliados, e nenhuma infecção relevante foi encontrada. Mostramos que as imunizações contra PbWT e PbVac são capazes de provocar uma resposta humoral contra o antigénio em macacos. É importante ressaltar que a geração de anticorpos anti-esporozoítos Pf observados em animais imunizados com PbVac- mas não com PbWT indica que a PfCS pode desempenhar um papel significativo nas respostas humorais à vacina.
Quanto ao papel da imunidade celular desencadeada por essas imunizações, nem o perfil fenotípico geral, nem a magnitude e especificidade das respostas celulares aos agentes de imunização ou a Pf foram significativamente alteradas após a imunização. Em contraste com o que alguns ensaios em humanos relataram, não encontramos expansão da população de células T γδ após a imunização. No entanto, encontramos alterações fenotípicas nas células linfóides inatas (ILCs), que diminuíram significativamente, e um aumento nas células T CD4+ nos PBMCs.
No geral, os nossos resultados indicam que a imunização com PbVac representa uma plataforma de vacinação segura que gera respostas imunes humorais a Pf. Manipulação adicional da estratégia de imunização com PbVac, como dose ou modo de administração, pode melhorar significativamente as suas respostas imunológicas humorais e celulares, contribuindo assim para o desenvolvimento de uma vacina eficiente contra a malária.Malaria is a mosquito-borne infectious disease that remains one of the most impactful infectious diseases globally, killing thousands of people every year. Despite all efforts to control this disease, such as chemoprophylaxis and vector control measures, the lack of knowledge about the immune responses triggered by the Plasmodium parasite hinders the development of an urgently needed efective malaria vaccine. The asymptomatic and highly immunogenic nature of the liver stage of Plasmodium infection makes it an ideal target for malaria vaccine development. The Instituto de Medicina Molecular (IMM)’s Prudêncio lab has developed a new pre-erythrocytic whole-sporozoite malaria vaccine candidate, PbVac, in which the rodent P. berghei parasite expresses the highly immunogenic P. falciparum surface circumsporozoite protein (PfCS in order to promote PfCS-specific and cross-species immune responses that may protect against a subsequent P. falciparum infection. Pre-clinical studies in mouse and rabbit models of infection have shown that PbVac is able to infect and develop in hepatocytes without establishing a blood stage infection. In order to mimic what happens in the human liver, rhesus macaques (Macaca mulatta) were used for a pre-clinical analysis of P. berghei wild-type (WT) and genetically modified PbVac sporozoites, as a strategy to induce immunity to P. falciparum. This study aims to investigate and compare the humoral and cellular-associated immune responses between immunized and non-immunized animals. First, the ability of PbWT sporozoites to infect rhesus macaque hepatocytes in vivo was confirmed. Subsequently, rhesus macaques were immunized by mosquito bite with PbVAC or PbWT and followed for 21 weeks, in parallel with non-immunized animals. Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) and plasma were collected periodically, and liver cells and splenocytes were collected at euthanasia. A comparison between plasma pre- and post- 3 immunizations was performed to analyze humoral responses through quantification of specific IgGs for sporozoites. The compositions of the peripheral blood, liver and spleen immune compartments were analyzed by immunophenotyping, and specific cellular immune responses against PbVAC, PbWT and Pf sporozoites were assessed in PBMCs and liver cells by an intracellular cytokine assay.Immunizations were safe, with no relevant changes in the safety parameters evaluated, and no breakthrough infections were found. We show that both PbWT and PbVac immunizations are capable of eliciting a humoral response against the immunogen in monkeys. Importantly, the generation of anti-Pf sporozoites antibodies observed in PbVac- but not PbWT-immunized animals indicates that PfCS may play a significant role in humoral responses to the vaccine. As for the role of cellular immunity elicited by these immunizations, neither the overall phenotypic profile nor the magnitude and specificity of cellular responses to the immunization agents or to Pf were significanty altered upon immunization. In contrast to what some human trials have reported, we found no expansion of the γδ T cell population upon immunization. However we found phenotypic changes in innate lymphoid cells ILCs, which decreased significantly, and an increase in CD4+ T cells in PBMCs. Overall, our results indicate that PbVac immunization represents a safe vaccination platform that generates humoral immune responses to Pf. Additional manipulation of the PbVac immunization strategy, such as dose or mode of administration, may significantly enhance its humoral as well as cellular immune responses, thus contributing to the development of an efficient malaria vaccine.
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Depinay, Nadya. "Événements immunologiques et physiologiques au stade pré-érythrocytaire de Plasmodium". Paris 6, 2008. http://www.theses.fr/2008PA066431.
Texto completoResumen
Le cycle biologique de Plasmodium chez son hôte vertébré comprend deux stades : le stade pré-érythrocytaire qui englobe les sporozoïtes, la forme infectieuse injecte par le moustique, et la phase hépatique, et le stade érythrocytaire qui a lieu dans le sang. L’immunité naturelle ou induite après immunisation contre le stade pré-érythrocytaire est très complexe et est mediée par les anticorps, les cellules T, et les cytokines que ces derniers sécrètent après reconnaissance des antigènes parasitaires. Diverses études ont mis en évidence un effet inhibiteur des cytokines, comme l’interféron (IFN)-γ, Interleukine (IL)-1 et IL-6 sur le développement hépatique de différentes espèces de Plasmodium, in vitro et in vivo. Cependant, selon le système cellules hôtes/espèce de parasite étudiées, des effets contradictoires ont été observés, en particulier pour le TNF-alpha. En effet, des études précédentes ont montré que le TNF- alpha humain inhibe le développement intra-hépatique de Plasmodium berghei dans des hépatomes humains. Par opposition, le TNF-alpha murin lui n’a pas d’effet sur le développement du parasite de même parasites dans des hépatocytes de souris. Ceci nous a conduit à postuler que différents paramètres (cellules hôtes, origine de la cytokine, espèces parasitaires) peuvent conduire à des résultats complètement opposés ne permettant pas de définir le rôle exact de ces cytokines contre la phase hépatique de Plasmodium. Nous avons donc, lors de ce travail de thèse, essayé de clarifier le rôle de TNF-alpha sur la phase hépatique de Plasmodium, en fonction des différents paramètres décrits plus haut. Ce travail nous a permis de tester la relevance des différents modèles in vitro et de démontrer que le TNF-alpha est un puissant inhibiteur du développement hépatique de P. Falciparum dans les primo-culture d’hepatocytes humains, contrairement à ce qui est observe pour les parasites de rongeurs cultives dans des cellules de rongeurs. Nous avons de même étudié les effets inhibiteurs d’une cytokine de la famille que le TNF-alpha, le TNF-beta ou lymphotoxine. Nous avons pour la première fois décrit une rôle inhibiteur pour cette cytokine dans le développement intra-hépatique de Plasmodium. Le deuxième sujet développé durant cette thèse, a porté sur la physiologie du sporozoïte. Il est connu que l’infectivité des sporozoites disséqués de moustiques infectés est abolie après 30 mn d’incubation in vitro à 37 C. Cependant in vivo, après piqûre par le moustique un pourcentage non négligeable de sporozoïtes restent dans la peau et peuvent même après 24 heures infectés le foie. Ceci suggèrent qu’il existent in vivo des signaux permettant la survie du sporozoïte. Nous avons donc mis au point de nouvelles techniques d’études utilisant des parasite exprimant la protéine GFP pour pouvoir quantifier la viabilité des sporozoïtes en terme d’intégrité membranaire, de métabolisme, de capacité à infecter des souris après différentes conditions en présence ou en absence de cellules. Ceci nous a permis de mettre en évidence que l’infectivité des sporozoïtes est un processus complexe dépendant de l’interaction du parasite avec son milieu extérieur et les cellules avec lesquelles il interagit.
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Harupa, Anke [Verfasser]. "Identification and functional analysis of novel sporozoite surface proteins in the rodent malaria parasite Plasmodium yoelii / Anke Harupa". Berlin : Freie Universität Berlin, 2015. http://d-nb.info/1069814989/34.
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Grüner, Anne Charlotte. "Diversité antigénique dex stades pré-érythrocytaires : caractérisation de 7 nouveaux antigènes exprimés sur le sporozoïte et dans le stade hépatique de Plasmodium falciparum". Paris 7, 2001. http://www.theses.fr/2001PA077135.
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Spreng, Benjamin Roman [Verfasser] y Friedrich [Akademischer Betreuer] Frischknecht. "The role of microtubules in Plasmodium berghei sporozoite development, morphology, motility and infectivity / Benjamin Roman Spreng ; Betreuer: Friedrich Frischknecht". Heidelberg : Universitätsbibliothek Heidelberg, 2019. http://d-nb.info/1197235671/34.
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Zanghi, Gigliola. "Epigenetic studies of plasmodium falciparum pre-erythrocytic stages". Thesis, Paris 6, 2016. http://www.theses.fr/2016PA066733/document.
Texto completoResumen
L'épigénétique joue un rôle majeur dans le développement érythrocytaire de Plasmodium falciparum, tels que variation antigénique, pathogenèse, différenciation sexuée. Jusqu'à présent, ces éléments n'ont jamais été décrits chez les sporozoïtes. Pour caractériser la régulation épigénétique au niveau des sporozoïtes de P. falciparum, nous avons étudié les principaux régulateurs épigénétiques PfHP1 (P. falciparum hétérochromatine Protein 1) ainsi que PfSET6 et PfSET7 (méthyltransférases histone lysine). J'ai établi une cartographie génomique des marques épigénétiques répressives associées à l'hétérochromatine, et actives associées à l'euchromatine. J'ai identifié un nouveau mécanisme stade-spécifique de contrôle de l'expression génique, qui réprimés plusieurs gènes codant pour des protéines exportées. Ce mécanisme repose sur une expansion d'hétérochromatine. De plus, je démontre qu'un membre de la famille des gènes var, qui code pour le facteur de virulence PfEMP1 des stades sanguins, est exprimé à la surface des sporozoïtes. Cette localisation contraste avec les stades sanguins, où PfEMP1 est transporté à la surface des érythrocytes et participe à cytoadhérence. L'ensemble de ces résultats ouvre de nouvelles questions biologiques: quels sont les facteurs qui régulent la formation d'hétérochromatine chez les sporozoïtes? Quelle est la fonction de PfEMP1 sur la surface d'un sporozoïte? Mes conclusions indiquent un rôle putatif de PfEMP1 lors de la migration des sporozoïtes. En outre, l'expression, à la surface du sporozoïte, d'un antigène polymorphique et spécifique de souche pourrait expliquer la réponse immunitaire souche-spécifique, induite par les sporozoïtes atténuésEpigenetic mechanisms control key processes during Plasmodium falciparum blood stage development such as antigenic variation, malaria pathogenesis and sexual commitment. However, the epigenetic landscape has not been reported for the sporozoites stage. To characterize epigenetic regulation in sporozoites, we tested the major epigenetic regulators P. falciparum Heterochromatin Protein 1 (PfHP1) and the histone lysine methyltransferases (PfSET6 and PfSET7) in P. falciparum sporozoites. I obtained a reliable genome-wide occupancy data for repressive heterochromatin and active euchromatin marks. Notably, I discovered an unprecedented stage specific mechanism of silencing, which represses several hundreds of genes, encoding parasite surface exported proteins. This is based on an expansion of facultative heterochromatin boundaries in sporozoites. Moreover, I demonstrate that a single member of the polymorphic var gene family, encoding the blood stage virulence factor PfEMP1, is expressed at the surface of sporozoites. This is in contrast to blood stages where PfEMP1 is transported to the erythrocyte surface participating in cytoadhesion. Overall, my findings rise new biological questions including what are the factors that regulate heterochromatin boundaries and what is the function of a virulence-associated surface antigen in sporozoites stage. My findings point to a putative function of this adhesion molecule in sporozoites migration. Moreover, the expression of a highly polymporphic and strain-specific antigen on the surface of sporozoites might provide a molecular explanation for the strain-specific protective immune response induced by attenuated sporozoites
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Sá, Mónica da Silva. "Dissecting the molecular basis for the arrest of Plasmodium sporozoites in the liver sinusoids". Master's thesis, Universidade de Aveiro, 2016. http://hdl.handle.net/10773/18525.
Texto completoResumen
Mestrado em MicrobiologiaA malária é uma doença grave causada por parasitas do género Plasmodium e transmitida a mamíferos através da picada de um mosquito fêmea infetado do género Anopheles. A fase pré-eritrocitária do ciclo de vida dos parasitas é assintomática, englobando o percurso dos esporozoítos desde a pele até ao fígado, a sua multiplicação dentro de hepatócitos e libertação de merozoitos, as formas responsáveis pela infeção de eritrócitos. Uma etapa crucial para a infeção do fígado pelos esporozoítos envolve a retenção dos mesmos nos sinusoides. A proteína “thrombospondin-related adhesion protein” (TRAP) é a uma molécula candidata para a mediação deste evento, uma vez que esporozoítos “knockout” da TRAP não ficam retidos no fígado. Contudo, esta proteína possui uma estrutura complexa composta por domínios adesivos na sua porção extracelular, para além de estar ligada ao motor de actina-miosina do esporozoíto através do domínio citoplasmático em C terminal. Assim, de modo a explorar o papel da TRAP como mediador da retenção de esporozoítos no fígado, construímos parasitas bioluminescentes capazes de expressar a TRAP sem a cauda citoplasmática, uma vez que a deleção deste domínio torna os parasitas imóveis mas não altera a apresentação da proteína à superfície do esporozoíto. Como estes parasitas não conseguem invadir as glândulas salivares dos mosquitos e portanto maturarem completamente, criamos “knockouts” da maebl como controlo, uma vez que com base na literatura estes permanecem na hemolinfa de mosquitos mas infetam normalmente o fígado. Surpreendentemente, descobrimos que esporozoítos “knockout” da maebl têm um defeito na retenção hepática e consequentemente na capacidade de infetarem o fígado. Adicionalmente estudos in vitro demonstraram que os esporozoítos knockout da maebl têm um defeito na capacidade de atravessarem e invadirem hepatócitos. Com base nestes resultados, sugerimos que os esporozoítos de Plasmodium possam utilizar um mecanismo conservado que lhes permita reconhecer moléculas expressas à superfície das glândulas salivares do mosquito e das células hepáticas do hospedeiro mamífero.
Malaria is a devastating disease caused by Plasmodium parasites and transmitted to mammals through the bite of an infected anopheline female mosquito. The asymptomatic pre-erythrocytic phase of the parasite life cycle comprises the journey of sporozoites from the skin to the liver, their asexual multiplication in hepatocytes and the release of merozoites, the red blood cells infective forms. A crucial event for successful liver infection comprises the arrest of sporozoites in the sinusoids. The thrombospondin-related adhesion protein (TRAP) is a promising candidate to mediate this event, since trap knockout sporozoites cannot home to the liver. However, TRAP contains several adhesion domains in its extracellular portion and is also connected to the sporozoite actin-myosin motor through its C- terminal cytoplasmic domain. Thus, to further explore the role of TRAP in mediating the homing of sporozoites to the liver, we have successfully engineered bioluminescent parasites to express TRAP without the cytoplasmic tail. Indeed, the deletion of this domain renders sporozoites immotile but do not alter the surface presentation of the protein. As these sporozoites cannot invade the mosquito salivary glands and attain complete maturation, we have generated maebl knockouts as a control, a mutant line that based on previous findings remains in the mosquito hemolymph but do infect the liver as wild type parasites. Unexpectedly, we found that maebl knockout sporozoites have an impaired capacity to target and infect the liver of mice. Indeed, in vitro experiments demonstrate defective hepatocytes traversal and invasion by the maebl knockout sporozoites. These findings suggest that Plasmodium sporozoites may use a conserved mechanism for the recognition of molecules expressed by the mosquito salivary glands and the liver in the mammalian host.
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Kreutzfeld, Oriana [Verfasser], Kai [Gutachter] Matuschewski, Christian [Gutachter] Schmitz-Linneweber y Julius [Gutachter] Hafalla. "Pre-clinical evaluation and improvement of attenuated malaria sporozoite vaccine candidates / Oriana Kreutzfeld ; Gutachter: Kai Matuschewski, Christian Schmitz-Linneweber, Julius Hafalla". Berlin : Humboldt-Universität zu Berlin, 2020. http://d-nb.info/1203126921/34.
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Mac-Daniel, Laura. "Etude immunobiologique de la phase cutanéo-ganglionnaire du paludisme murin". Paris 7, 2013. http://www.theses.fr/2013PA077290.
Texto completoResumen
Le paludisme est une des maladies infectieuses les plus meurtrières au monde, étant responsable de près de 700. 000 morts par an. L'infection par Plasmodium, l'agent causal de la maladie, débute avec la phase pré-érythrocytaire (PE), au cours de laquelle la forme sporozoïte déposée dans la peau de l'hôte par le moustique rejoint le foie via la circulation sanguine avant d'initier une différenciation intra-hépatocytaire dans la forme qui infectera les globules rouges et causera les symptômes de la maladie. Les stades PE de Plasmodium représentent une cible privilégiée en matière de vaccination anti-palustre. A ce jour, les vaccins vivants atténués dirigés contre ces stades ont démontré leur supériorité en terme d'efficacité protectrice à la fois chez le rongeur et chez l'homme. Avec la description récente d'une nouvelle étape cutanéo-ganglionnaire, notre vision de la phase PE a complètement changé, en particulier si l'on se place dans un contexte vaccinal d'immunisation dans la peau. Si la plupart des études se sont essentiellement concentrées sur la caractérisation des effecteurs impliqués dans l'établissement d'une réponse protectrice efficace après immunisation par voie intraveineuse, peu d'éléments sont disponibles sur le devenir parasitaire après immunisation intradermique, notamment en terme d'interactions avec le système immunitaire inné. Par ailleurs, la capacité du parasite à initier un développement intracellulaire dans la peau et à rejoindre le ganglion lymphatique drainant par sa propre mobilité pose la question de l'importance des différentes formes antigéniques parasitaires dans l'initiation de la réponse protectrice au niveau du ganglion. Mon travail de thèse a consisté à disséquer les étapes précoces de la mise en place d'une immunité protectrice efficace en conditions d'immunisation par voie intradermique utilisant le modèle des sporozoïtes irradiés. A l'échelle tissulaire, le parasite irradié cible les mêmes tissus que le parasite sauvage, avec un développement arrêté dans la peau, tout comme au niveau du foie. A l'échelle cellulaire, l'inoculation d'un nombre significatif de sporozoïtes dans la peau induit une réponse inflammatoire importante au niveau de la sphère cutanéo-ganglionnaire, caractérisée par un recrutement de polynucléaires neutrophiles et de monocytes inflammatoires. Cette inflammation est corrélée à une élimination locale préférentielle des parasites et associée à une polarisation Thl de la réponse immune au niveau du ganglion lymphatique drainant. Dans les deux tissus, le parasiteM interagit préférentiellement avec les polynucléaires neutrophiles recrutés et avec les populations de cellules myéloïdes résidentes. In vitro, nous avons confirmé la capacité du parasite à envahir activement des cellules phagocytaires et avons mis en évidence pour la première fois sa capacité à se maintenir dans la peau au sein de cellules myéloïdes. Nous avons par la suite évalué l'importance des formes antigéniques parasitaires cutanées dans l'initiation de la réponse protectrice. Dans ce cadre, nous avons mis au point un protocole d'immunisation par voie intradermique efficace ainsi qu'une méthode d'évaluation de cette réponse via l'imagerie par bioluminescence. Nous avons démontré que les antigènes dérivés des formes sporozoïtes rejoignant le ganglion lymphatique drainant par leur propre mobilité jouent un rôle prédominant dans l'initiation de cette réponse comparativement au réservoir antigénique cutanéMalaria is one of the most deadly infectious diseases in the world, being responsible for nearly 700,000 deaths per year. The infection by Plasmodium, the causal agent of the disease, begins with the pre-erythrocytic (PE) phase, during which the sporozoite deposited in the skin by the mosquito reaches the liver via the bloodstream where it differentiates into the form that will infect red blood cells and cause the symptoms of the disease. The PE stages of Plasmodium represent a privileged target for anti-malaria vaccination. Indeed, the live attenuated vaccines against these stages have demonstrated their superiority in terms of efficiency of protection in both rodents and humans. The recent description of a new cutaneous-lymph node step has completely changed our vision of the PE phase, in particular in the context of immunisation in the skin. Most studies have concentrated on the characterisation of the effectors implicated in establishing a protective immune response after intravenous immunisation, whereas there is much less information concerning the fate of the parasite after intradermal immunisation, especially the interactions with the innate immune system. Furthermore, the capacity of the parasite to initiate intracellular development in the skin and gain the draining lymph node by its motility poses the question of the importance of the different antigenic forms of the parasite in the initiation of a protective response in the draining lymph nodes. My thesis consisted in dissecting the early steps that lead to a protective immune response via intradermal immunisation with irradiated sporozoites. At the tissue level, the irradiated parasite targets the same tissues as the non-irradiated sporozoites but their development is arrested in the skin and in the liver. At the cellular level, the inoculation of a high number of sporozoites in the skin gives rise to an important inflammatory response in the skin and draining lymph nodes, characterised by the recruitment of polynuclear neutrophils and inflammatory monocytes. This inflammation is correlated with a local elimination of the parasites and is associated with a Thl polarisation of the immune response in the draining lymph node. In both tissues, the parasite interacts preferentially with recruited polymorphonuclear neutrophils and the resident myeloid cells. In vitro, we have confirmed that the parasite can actively invade phagocytic cells and have shown for the first time that it can remain in the skin within myeloid cells. We next evaluated the importance of the antigens of these skin parasites in the initiation of a protective immune response. In this context, we established an efficient protocol for intradermal immunisation and its evaluation using bioluminescence imaging. We have shown that the antigens derived from the motile sporozoites that gain access to the draining lymph node play a predominant role in the initiation of this response compared to the cutaneous antigenic reservoir
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Fernandes, Priyanka Noel [Verfasser] y Ann-Kristin [Akademischer Betreuer] Mueller. "Differences in antigen presentation between sporozoite and parasitised-erythrocyte infections uncovers divergent mechanisms in the development of experimental cerebral malaria / Priyanka Noel Fernandes ; Betreuer: Ann-Kristin Mueller". Heidelberg : Universitätsbibliothek Heidelberg, 2016. http://d-nb.info/1180617630/34.
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Fernandes, Priyanka Noel Verfasser] y Ann-Kristin [Akademischer Betreuer] [Müller. "Differences in antigen presentation between sporozoite and parasitised-erythrocyte infections uncovers divergent mechanisms in the development of experimental cerebral malaria / Priyanka Noel Fernandes ; Betreuer: Ann-Kristin Mueller". Heidelberg : Universitätsbibliothek Heidelberg, 2016. http://d-nb.info/1180617630/34.
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Fernandes, Priyanka [Verfasser] y Ann-Kristin [Akademischer Betreuer] Müller. "Differences in antigen presentation between sporozoite and parasitised-erythrocyte infections uncovers divergent mechanisms in the development of experimental cerebral malaria / Priyanka Noel Fernandes ; Betreuer: Ann-Kristin Mueller". Heidelberg : Universitätsbibliothek Heidelberg, 2016. http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bsz:16-heidok-219812.
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Kazanji, Mirdad. "Étude de la protéine majeure de surface des sporozoïtes d'"Eimeria falciformis" : purification à l'aide d'anticorps monoclonaux, caractérisation immunologique et biochimique : induction d'une protection par voie orale après incorporation dans des ISCOMs". Paris 12, 1993. http://www.theses.fr/1993PA120025.
Texto completoResumen
Des anticorps monoclonaux (acmo) ont ete obtenus par immunisation de souris avec des broyats de sporozoites d'e. Falciformis. Comme un nombre important d'entre eux reconnaissaient une proteine de masse molaire 27kda a la surface du sporozoite, cette proteine a ete appelee proteine majeure de surface du sporozoite d'e. Falciformis (p27). Cette proteine a ete purifiee par immunoaffinite a l'aide d'un des anticorps monoclonaux (d14. 5) et d'autres acmo ont ete obtenus contre la molecule purifiee. L'etude de la reconnaissance de la p27 par les differents acmo en elisa competitifs ou dans le systeme biacore a permis la definition sur la molecule de deux epitopes distincts dont l'un est vraisemblablement repetitif. Les deux epitopes retrouves sur la proteine p27 sont des epitopes communs a des proteines de masse molaire 25kda des deux especes de coccidies de poule, e. Tenella et e. Acervulina. Dans les trois types de sporozoites, ces epitopes sont retrouves a la surface des sporozoites, mais aussi dans les globules refringents. Cette proteine qui possede une activite esterase-lipase et qui est ancree dans la membrane par une ancre gpi est capable de stimuler la transformation lymphoblastique de cellules de ganglions mesenteriques provenant d'animaux infectes. Elle est de plus la cible de reactions de lyse de sporozoites par les phagocytes. Par la suite cette proteine a donc ete utilisee pour declencher une immunite intestinale en incorporant l'antigene dans des iscoms et en l'administrant par voie orale. La proteine administree ainsi induit d'une part une immunite locale (humorale et cellulaire). Elle induit d'autre part l'acquisition par les souris d'une protection contre une infection ulterieure contre le parasite
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Bliss, Carly May. "Immune responses to vaccines against malaria". Thesis, University of Oxford, 2017. https://ora.ox.ac.uk/objects/uuid:98c507b1-c812-4857-9ca8-4beaa57e1c35.
Texto completoResumen
The development of a malaria vaccine is necessary for disease eradication. Successful vaccine candidates to date have targeted the asymptomatic, pre-erythrocytic stage of the disease, however even the most efficacious vaccines are only partially protective. Research undertaken in our laboratory has demonstrated that one such regimen, using an 8 week prime-boost viral vector approach of ChAd63 ME-TRAP and MVA ME-TRAP, induces sterile efficacy in 21% of vaccinees, with a key role identified for TRAP-specific CD8+ T cells. The work described in this thesis explores the most immunogenic regimen by which to administer these two pre-erythrocytic malaria vaccines. A shortening of the prime-boost interval from 8 to 4 weeks, and the addition of an extra ChAd63 ME-TRAP priming vaccination, both demonstrated improved T cell immunogenicity over the standard 8 week regimen. Further to this, novel assays were developed to aid the evaluation of vaccine-induced immune responses. Adaptations of the existing methodology for ELISpot analysis and to whole blood flow cytometry techniques, enabled more detailed analyses of paediatric vaccine-induced T cell responses in The Gambia. This work also permitted the comparison of vaccine immunogenicity in this paediatric population, with malaria-naïve and malaria-exposed adult vaccinees. The results suggest that vaccine-induced T cell responses in infants of 8 weeks and older are comparable to that of adults. A second approach involved the development of a novel functional assay. This assay quantitatively measured the in vitro inhibition of intrahepatic Plasmodium parasite development using T cells from ChAd63.MVA ME-TRAP vaccinated volunteers. The assay demonstrated the ability of CD8+ T cells to inhibit parasite development in a TRAP-specific manner, and provides a platform with which to further explore pre-erythrocytic immune responses.
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Hliscs, Marion. "Functional Characterization of Actin Sequestering Proteins in Plasmodium berghei". Doctoral thesis, Humboldt-Universität zu Berlin, Mathematisch-Naturwissenschaftliche Fakultät I, 2012. http://dx.doi.org/10.18452/16452.
Texto completoResumen
Plasmodien spp. sind obligat intrazellulär lebende Parasiten, welche einen evolutionär konservierten aktinabhängigen molekularen Motor für die Fortbewegung und den Wirtszellein- und -austritt nutzen. In dieser Arbeit werden die Aktinregulatoren Adenylyl- Zyklase- assoziierte Protein (C-CAP), Profilin sowie die Aktin depolymerizierenden Faktoren 1 und 2 (ADF1, ADF2) in Plasmodium berghei charakterisiert. Die Geninaktivierung von C-CAP besitzt keinen Einfluss auf die Entwicklung von pathogenen Blutstadien. C-cap(-) Ookineten bewegen sich jedoch deutlich langsamer, sind aber in der Lage den invertebraten Wirt zu infizieren. Defekte treten während der extrazellulären Replikationsphase im Mosquito auf und führen zu Abbruch des Lebenszykluses. Die erfolgreiche Komplementierung der Defekte mit dem orthologen Gen aus Cryptosporidium parvum CpC-CAP bestätigt die funktionale Redundanz zwischen beiden Proteinen. Profilin, als ein weiteres G-Aktin bindendes Protein, ist hingegen nicht in der Lage die Defekte des c-cap(-) Parasiten auszugleichen. Mittels transgener Parasiten welche ein C-CAPmCherry Fusionsprotein exprimieren, wird das C-CAP Protein im Zytoplasma lokalisiert. Erstmals wird mit dieser Arbeit ein G-Aktin bindendes Protein, C-CAP beschrieben, welches eine essentielle Funktion während der Oozystenreifung in Plasmodium berghei besitzt. Die Transkription der Aktinregulatoren Profilin, ADF1 und ADF2 wird in Sporozoiten drastisch herunterreguliert und Profilin kann als Protein nicht mehr nachgewiesen werden. Um die Funktion von C-CAP und Profilin zu überprüfen, wurden beide Proteine spezifisch in Sporozoiten überexprimiert. Diese Parasiten sind nicht in der Lage die Speicheldrüsen des Wirtes zu besiedeln, was zum Abbruch des Lebenszykluses führt. Anhand dieser Ergebnisse entwickele ich ein „minimalistisches“ Model zur Beschreibung der Aktinregulation in Sporozoiten in welchem das ADF1 als regulatorisches Protein im Mittelpunkt steht.Plasmodium spp. are obligate intracellular parasites, which employ an conserved actin-dependent molecular motor machinery that facilitates their motility, host cell invasion and egress. In this work I report implications of the actin-regulators adenylyl cyclase-associated protein (C-CAP), profilin and actin depolymerization factor 1 and 2 (ADF1, ADF2) in distinct and previously unanticipated cellular processes during the life cycle of in the rodent malarial parasite Plasmodium berghei. Fluorescent tagging of the endogenous C-CAP genetic locus with mCherry revealed cytosolic distribution of the protein. Gene deletion demonstrates that the G-actin binding protein C-CAP is entirely dispensable for the pathogenic blood stages. Ookinetes show reduced motility, but are competent infecting the mosquito host. Defects emerging in the extracellular replication phase, leading to attenuation of oocyst maturation. Successful trans-species complementation with the C. parvum C-CAP ortholog, rescues the c-cap(-) phenotype and proves functional redundancy. The actin regulator profilin fails to rescue the defects of c-cap(-) parasites, despite sharing its actin sequestering activity with C-CAP. Taken together, C-CAP is the first G-actin sequestering protein of Plasmodium species that is not required for motility but performs essential functions during oocyst maturation. Characterization of the actin regulators profilin, ADF1 and ADF2 revealed dramatic transcriptional down-regulation and the absence of the profilin protein in sporozoites. To test whether G-actin binding proteins interfere with sporozoite functions, I ectopically overexpressed of profilin and C-CAP stage-specifically in sporozoites. This conducted to abolishment of salivary gland invasion and lifecycle arrest. Based on these unexpected findings and the available literature data, I developed a “minimalistic model” for actin regulation in sporozoites that predicts ADF1 as the main actin-turnover regulating factor.
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Li, Xiaohong. "Epidemiological implications of sporozoite aggregation in malaria vectors /". 1993. http://hdl.handle.net/1957/6813.
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Maia, Teresa Gonçalves Carreira. "Comparative immunological analyses of whole-sporozoite malaria vaccines". Master's thesis, 2019. http://hdl.handle.net/10362/89019.
Texto completoResumen
Malaria, a mosquito-borne infectious disease, affects hundreds of millions of people yearly. Although an effective malaria vaccine has not yet been found, whole-sporozoite vaccines are the most promising approaches available.
In this work, several types of whole-sporozoite vaccines were studied: radiation attenuated sporozoites (RAS), genetically attenuated parasites (GAP) and immunization with sporozoites under chemoprophylaxis (CPS). This thesis aims to broaden the current knowledge about immune responses elicited by whole-sporozoite vaccines via quantitative real time-PCR and flow-cytometry and compare their efficacy against a sporozoite challenge.
The parasites studied have different liver stage developments, inducing distinct immune responses. In the CPS approach, parasites are only eliminated in the blood, inducing a strong two-wave type I IFN response, as occurs upon infection with P. berghei parasites. PbΔmei2Δlisp2, a late-arresting GAP induces a weaker type I IFN response, also in two waves. Early-arresting parasites, the GAP PbΔb9Δslarp and RAS, lead to one wave of induction and to the absence of a type I IFN response, respectively.
The protection conferred by each parasite studied correlates with its liver stage development: the longer the development, the more effective an immunization is, as long as the parasite is not released to the blood - this seems to negatively affect the immunization efficacy. Also, type I IFN response seems to have a dual effect in whole-sporozoite vaccines, being essential for protection conferred by PbΔb9Δslarp and RAS but deleterious for the protection conferred by CPS.
Frequency analysis of mouse liver leucocytes upon immunization revealed, most interestingly, different NKT dynamics depending on the vaccination approach. Further experiments should be performed to elucidate their role in the establishment of protection.
This exploratory work represents a contribution for the understanding of mechanisms by which whole-sporozoite immunizations act, allowing for the rising of questions and providing valuable insight to pursue in future studies.
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BARRETO, Andreia Cunha. "Evaluation of humoral and celular immune response to P. Berghei-based whole sporozoite malaria vaccination in rhesus macaques". Master's thesis, 2019. http://hdl.handle.net/10362/116355.
Texto completoResumen
A malária é uma doença infecciosa transmitida por mosquitos que continua a ser uma das doenças infecciosas mais impactantes do mundo, matando milhares de pessoas todos os anos. Apesar de todos os esforços para controlar esta doença, como quimioprofilaxia e medidas de controlo de vetores, a falta de conhecimento sobre as respostas imunes desencadeadas pelo parasita Plasmodium dificulta o desenvolvimento de uma vacina eficaz contra a malária, que é necessária com urgência.
A natureza assintomática e altamente imunogénica do estadio hepático da infecção por Plasmodium torna-o num alvo ideal para o desenvolvimento da vacina contra a malária. Prudêncio lab do Instituto de Medicina Molecular (IMM) desenvolveu um novo candidato a vacina contra a malária de esporozoito inteiro que tem como alvo o estágio hepático, a PbVAC. Na qual o parasita roedor P. berghei expressa a proteína circunsporozoítica de superfície do P. falciparum (PfCSP), altamente imunogénica, de modo a promover respostas imunitárias específicas para PfCSP, assim como respostas cruzadas entre espécies, que podem proteger contra uma infecção subsequente por P. falciparum.
Estudos pré-clínicos em modelos de infecção em murganhos e coelhos mostraram que PbVac é capaz de infectar e desenvolver-se em hepatócitos sem estabelecer uma infecção no estadio sanguíneo. Para imitar o que acontece no fígado humano, os macacos rhesus (Macaca mulatta) foram usados para um teste pré-clínico de P. berghei wild-type (WT) e esporozoítos PbVac geneticamente modificados, como estratégia para induzir imunidade contra P. falciparum. Este estudo tem como objetivo investigar e comparar as respostas imunes humorais e celulares entre animais imunizados e não imunizados.
Primeiro, confirmamos que os esporozoítos do PbWT são capazes de infectar hepatócitos do macaco rhesus in vivo. Posteriormente, os macacos rhesus foram imunizados por picada de mosquito com PbVac ou PbWT e seguidos por 21 semanas, em paralelo com animais não imunizados. Células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) e plama foram coletadas periodicamente e células do fígado e esplenócitos foram coletados na eutanásia. Foi realizada uma comparação do plasma pré e pós 3 imunizações para analisar as respostas humorais quantificando IgGs específicas para esporozoítos. As composições dos compartimentos imunes do sangue periférico, fígado e baço foram analisadas por imunofenotipagem e respostas imunes celulares específicas contra esporozoítos PbVAC, PbWT e Pf foram avaliadas em PBMCs e células hepáticas utilizando um ensaio intracelular de citocinas.
As imunizações foram seguras, sem alterações relevantes nos parâmetros de segurança avaliados, e nenhuma infecção relevante foi encontrada. Mostramos que as imunizações contra PbWT e PbVac são capazes de provocar uma resposta humoral contra o antigénio em macacos. É importante ressaltar que a geração de anticorpos anti-esporozoítos Pf observados em animais imunizados com PbVac- mas não com PbWT indica que a PfCS pode desempenhar um papel significativo nas respostas humorais à vacina.
Quanto ao papel da imunidade celular desencadeada por essas imunizações, nem o perfil fenotípico geral, nem a magnitude e especificidade das respostas celulares aos agentes de imunização ou a Pf foram significativamente alteradas após a imunização. Em contraste com o que alguns ensaios em humanos relataram, não encontramos expansão da população de células T γδ após a imunização. No entanto, encontramos alterações fenotípicas nas células linfóides inatas (ILCs), que diminuíram significativamente, e um aumento nas células T CD4+ nos PBMCs.
No geral, os nossos resultados indicam que a imunização com PbVac representa uma plataforma de vacinação segura que gera respostas imunes humorais a Pf. Manipulação adicional da estratégia de imunização com PbVac, como dose ou modo de administração, pode melhorar significativamente as suas respostas imunológicas humorais e celulares, contribuindo assim para o desenvolvimento de uma vacina eficiente contra a malária.Malaria is a mosquito-borne infectious disease that remains one of the most impactful infectious diseases globally, killing thousands of people every year. Despite all efforts to control this disease, such as chemoprophylaxis and vector control measures, the lack of knowledge about the immune responses triggered by the Plasmodium parasite hinders the development of an urgently needed efective malaria vaccine. The asymptomatic and highly immunogenic nature of the liver stage of Plasmodium infection makes it an ideal target for malaria vaccine development. The Instituto de Medicina Molecular (IMM)’s Prudêncio lab has developed a new pre-erythrocytic whole-sporozoite malaria vaccine candidate, PbVac, in which the rodent P. berghei parasite expresses the highly immunogenic P. falciparum surface circumsporozoite protein (PfCS in order to promote PfCS-specific and cross-species immune responses that may protect against a subsequent P. falciparum infection. Pre-clinical studies in mouse and rabbit models of infection have shown that PbVac is able to infect and develop in hepatocytes without establishing a blood stage infection. In order to mimic what happens in the human liver, rhesus macaques (Macaca mulatta) were used for a pre-clinical analysis of P. berghei wild-type (WT) and genetically modified PbVac sporozoites, as a strategy to induce immunity to P. falciparum. This study aims to investigate and compare the humoral and cellular-associated immune responses between immunized and non-immunized animals. First, the ability of PbWT sporozoites to infect rhesus macaque hepatocytes in vivo was confirmed. Subsequently, rhesus macaques were immunized by mosquito bite with PbVAC or PbWT and followed for 21 weeks, in parallel with non-immunized animals. Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) and plasma were collected periodically, and liver cells and splenocytes were collected at euthanasia. A comparison between plasma pre- and post- 3 immunizations was performed to analyze humoral responses through quantification of specific IgGs for sporozoites. The compositions of the peripheral blood, liver and spleen immune compartments were analyzed by immunophenotyping, and specific cellular immune responses against PbVAC, PbWT and Pf sporozoites were assessed in PBMCs and liver cells by an intracellular cytokine assay.Immunizations were safe, with no relevant changes in the safety parameters evaluated, and no breakthrough infections were found. We show that both PbWT and PbVac immunizations are capable of eliciting a humoral response against the immunogen in monkeys. Importantly, the generation of anti-Pf sporozoites antibodies observed in PbVac- but not PbWT-immunized animals indicates that PfCS may play a significant role in humoral responses to the vaccine. As for the role of cellular immunity elicited by these immunizations, neither the overall phenotypic profile nor the magnitude and specificity of cellular responses to the immunization agents or to Pf were significanty altered upon immunization. In contrast to what some human trials have reported, we found no expansion of the γδ T cell population upon immunization. However we found phenotypic changes in innate lymphoid cells ILCs, which decreased significantly, and an increase in CD4+ T cells in PBMCs. Overall, our results indicate that PbVac immunization represents a safe vaccination platform that generates humoral immune responses to Pf. Additional manipulation of the PbVac immunization strategy, such as dose or mode of administration, may significantly enhance its humoral as well as cellular immune responses, thus contributing to the development of an efficient malaria vaccine
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Bär, Kerstin [Verfasser]. "The liver phase of a malaria infection : mechanisms of plasmodium sporozoite entry and merozoite release / vorgelegt von Kerstin Bär". 2007. http://d-nb.info/987885499/34.
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Collins, Nicola Elaine. "The relationship between theileria parva parva and t.p. lawrencei as shown by sporozoite antigen and ribosomal RNA gene sequences". Thesis, 1997. http://hdl.handle.net/10539/22930.
Texto completoResumen
A thesis submitted to the Faculty of Science,
University of the Witwatersrand, Johannesburg,
in fulfillment of the requirements for the degree
of Doctor of Philosophy.The aim of this thesis was to develop DNA probes to distinguish between the protozoan parasites Theileria parva parva and T. p. lawrencei which cause East Coast fever (ECF) and Corridor disease respectively. ECF was eradicated from South Arrlca in 1954, and today Corridor disease has become the most important form of theileriosis. Although ECF has been eradicated, the vector ticks are still prevalent in South Africa and the cattle population would be highly susceptible to a recurrence of the disease, At present there is no reliable means of distinguishing between T.p. parva and T. p. lawrencei. Sequence differences between T. parva and other Theileria species have previously been found in the small subunit ribosomal RNA (rRNA) gene; probes designed to detect these sequence differences Can be used to distinguish between Theileria species. We therefore decided to search for differences in the rRNA genes of T. p. parva and T.p. lawrencei. To this end, the entire "RNA transcription unit was amplified from a cloned T. p, lawrence; parasite; the unit comprises the small subunit rRNA (SSUrRNA) gene, the internal transcribed spacer (ITS) and the large subunit rRNA (LSUrRNA) gene. The amplification products were cloned and sequenced, and the T.p, lawrencei rRNA sequence was compared to that of T. p, parva, While there was little variation in their SSUrRNA and LSUrRNA gene sequences, there was major sequence variation in the ITS The ITSs from twelve T. parva isolates were amplified, cloned and sequenced, and eleven characterisation oligonucleotide probes were identified. The T. p, parva isolates screened in this study hybridised with a limited subset of the probes, While the T. p. lawrencei isolates, hybridised with many more of the probes, indicating that the T. parva population in cattle is more homogenous than that in buffalo. There thus appears to have been a selection in cattle of a relatively homogenous subpopuiation of T. parva from a much larger, more diverse gene pool in buffalo. Although most T.p. parva isolates (93.5%) were detected by probe TPPI, and most T.p, lawrencei isolates (81.8%) were detected by
AC2017