Thèses sur le sujet « Aminopeptidase N »
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Al-Lakkis, Mira. « Application des dérivés d'amino-benzosubérone : inhibition sélective des aminopeptidases mono ou bimétalliques ». Phd thesis, Université de Haute Alsace - Mulhouse, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01060176.
Résumé :
Les aminopeptidases sont des cibles thérapeutiques importantes pour plusieurs maladies, car elles sont impliquées dans divers processus physiologiques et pathologiques comme la progression tumorale, l'angiogenèse, et certaines infections (virales, bactériennes, et parasitaires). Il en existe deux classes : les aminopeptidases avec un ion métallique (Aminopeptidase N [APN ou CD13] et leukotrien A4 hydrolase [LTA4H]) et les aminopeptidases avec deux ions métalliques (Aminopeptidase de l'Aeromonas proteolytica [APaero], Leucine Aminopeptidase cytosolique [LAPc] et Méthionine aminopeptidase 1 ou 2 [MetAP]). Deux types de composés dérivés des amino-benzosubérones ont été envisagés pour inhiber sélectivement chacune de ces classes d'aminopeptidases. L'étude des relations structures-activités (RSA) nous a permis de découvrir une molécule très puissante et sélective de l'APN (Ki 60 pM). L'APN est une enzyme monométallique considérée aujourd'hui comme une nouvelle cible pour la lutte contre le cancer car son inhibition bloque le processus de l'angiogenèse et donc la progression tumorale. L'étude d'une nouvelle classe de molécules trisubstituées dérivées des aminobenzosubérones a abouti à la découverte d'une seconde molécule active et sélective des enzymes bimétalliques notamment l'APaero (Ki 10 nM).
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Lai, Amy M. « Role of aminopeptidase N in wound healing ». Thesis, University of British Columbia, 2011. http://hdl.handle.net/2429/39957.
Résumé :
The dynamics and complexity of tissue repair are dominated by specific and
intricately coordinated cellular events. Disruptions at the level of cellular
communication are associated with imbalanced extracellular matrix (ECM)
synthesis/degradation leading to fibrosis and chronic wounds. Our group has
demonstrated that 14-3-3 sigma (also known as stratifin) functions as a
stimulator of matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) through interactions with
aminopeptidase N (APN) on the surface of dermal fibroblasts. In this doctoral
research project, it is hypothesized that APN functions as a receptor for
keratinocyte-derived paracrine signals that control the expression of key ECM
components in dermal fibroblasts.
Three specific objectives were accomplished in this project. Under Objective
1, the nature of APN expression in an environment of active epithelial-stromal
communication was examined using an in vitro keratinocyte-fibroblast crosstalk
model. The fibroblast expression of APN was significantly upregulated in the
presence of keratinocyte-releasable soluble factors, of which stratifin was shown
to be a potent stimulator. In light of the recent identification of APN as a receptor
responsible for stratifin-mediated p38 MAPK activation leading to upregulation of
MMP-1, the role of APN as a transmembrane mediator of signals that regulate
ECM remodeling was investigated in Objective 2. Comparative analysis of the
expression profiles of 118 ECM genes under conditions of keratinocyte
stimulation and APN gene silencing revealed a group of key matrix proteases
and adhesion molecules influenced by keratinocyte-derived signaling mediated through APN. The aim of Objective 3 was to explore the therapeutic potential of targeting APN in cutaneous tissue repair. Topical application of an APN-neutralizing antibody on full-thickness skin wounds in a murine model had a positive outcome in healing. Acceleration of wound closure was accompanied by increased collagen deposition and fibroblast contractility.
Collectively, the findings presented herein confirmed our hypothesis that APN can be induced by keratinocytes and acts as a regulator of keratinocyte-derived stimuli in epidermal-dermal communication. Specifically, these findings support the receptor role of APN in mediating transmembrane signals derived from keratinocytes, and provide encouraging evidence for further investigations on the therapeutic use of APN agonist/antagonists in the field of tissue repair.
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Sansot, Jean-Luc. « Alanine aminopeptidase approches biochimique et toxicologique / ». Grenoble 2 : ANRT, 1986. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb376010389.
4
Golich, Frank Carl. « Structural and Functional Characterization of Aminopeptidase N (PEPN) from Escherichia coli ». Miami University / OhioLINK, 2006. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc_num=miami1143229893.
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Fiddler, Christine Alison. « Role of aminopeptidase N/CD13 in neutrophil migration and aggregation ». Thesis, University of Cambridge, 2015. https://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.708480.
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Gillingham, Helen. « Role and regulation of aminopeptidase N (CD13) in HT1080 fibrosarcoma cells ». Thesis, University of Cambridge, 2012. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.610322.
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Roux, Lionel. « Conception et synthèse d'inhibiteurs de l'Aminopeptidase membranaire N ([EC. 3.4.11.2], APN ou CD13) ». Thesis, Mulhouse, 2010. http://www.theses.fr/2010MULH4691/document.
Résumé :
La lutte contre le cancer est l'un des défis majeurs du XXème siècle. Pour que les tumeurs puissent se développer dans l'organisme, elles ont besoin d'un apport en nutriment par le biais de vaisseaux sanguins pour se faire, elles vont avoir recours au processus angiogénique. Lors de ce processus, les cellules endothéliales qui tapissent la paroi des vaisseaux sanguins vont se multiplier et créer de nouveaux vaisseaux sanguins qui vont permettre la vascularisation des tumeurs. L'angiogenèse constitue donc aujourd'hui un axe de recherche pour la lutte contre la progression tumorale et donc contre le cancer. Lors de ce développement tumoral, une enzyme, l'aminopeptidase neutre APN est surexprimée sur les parois des cellules endothéliales. Différentes études ont été menées et montrent que l'inhibition de cette enzyme bloque la progression tumorale. Mon travail au sein de l'équipe du Pr Céline Tarnus consistait en la conception et la synthèse d'inhibiteurs de l'APN. Une relation structure activité de nos composés vis-à-vis de l'APN a tout d'abord été effectuée. Le développement de synthèse du composé le plus actif ont été faite, puis la synthèse d'inhibiteurs d'APN ayant pour objectif l'utilisation de la BNCT a été abordéeThe fight against the cancer is one of the most important struggles of this century. For the development of the tumors inside the body, they need to receive nutriments by the blood vessels and they use the angiogenic process. During this process, the endothelial cells being shown on the wall of the blood vessel will multiply and design new blood vessel, which will allow the tumor's vascularisation. Today, the angiogenesis is an axis of research for the fight against the cancer. During the tumoral development, the aminopeptidase N (APN) is overexpressed on the wall of endothelial cells. Various studies have shown that the inhibition of this enzyme stops the tumoral progression. My work in the Pr. Céline Tarnus Team consists in the conception and the synthesis of APN's inhibitors. In a first time, a structure activity relationship has been realized. Syntheses of a subnamolar compound have been developed, and then the synthesis of APN's inhibitors with the use of BNCT has been got onto
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Al-Masri, Mounir. « Conception, synthèse et évaluation des dérivés d'aminobenzosubérone comme inhibiteurs potentiels des aminopeptidases de la famille M1 ». Thesis, Mulhouse, 2017. http://www.theses.fr/2017MULH2862.
Résumé :
Les aminopeptidases de la famille M1 sont des protéases qui catalysent l’hydrolyse d’une liaison peptidique en position N-terminale. Ce sont des métalloprotéases avec un ion zinc dans leur site actif conservé dans tous les membres de cette famille de protéine. Ces enzymes sont impliqués dans de nombreux processus physiologiques normaux, mais également dans des désordres métaboliques, tels que la progression tumorale, des maladies auto-immunes, ainsi que dans des infections virales, bactériennes et parasitaires. Pour ces raisons, ces aminopeptidases sont considérées comme des cibles thérapeutiques potentielles pour traiter ou diagnostiquer diverses maladies. En 2006, le laboratoire a découvert le châssis moléculaire de type 3-amino-2-benzosubérone inhibant puissamment et sélectivement et un des membres de cette famille d’aminopeptidases, à savoir l’APN. La conception et la synthèse des dérivés de ce châssis moléculaire comme inhibiteurs potentiels et sélectifs pour cinq autres membres de la famille M1 (APN, ERAP1/2, IRAP et PfA-M1) est au cœur de ce travail. Des études pharmacologiques, pharmacocinétiques jusqu’aux essais précliniques ont été menées et leurs résultats seront présentés dans le cas de l’inhibition de PfA-M1Aminopeptidases of the M1 family are proteases that catalyze the hydrolysis of a peptide bond in the N-terminal position. These are metalloproteases with a zinc ion in their active site conserved in all members of this protein family. These enzymes are involved in many normal physiological processes, but also in metabolic disorders, such as tumor progression, autoimmune diseases, as well as in viral, bacterial and parasitic infections. For these reasons, these aminopeptidases are considered potential therapeutic targets for treating or diagnosing various diseases. In 2006, the laboratory discovered the powerful and selectively inhibiting 3-amino-2-benzosuberone molecular chassis and one of the members of this family of aminopeptidases, namely the APN. The design and synthesis of derivatives of this molecular chassis as potential and selective inhibitors for five other members of the M1 family (APN, ERAP1 / 2, IRAP and PfA-M1) is at the heart of this work. Pharmacological, pharmacokinetic and preclinical studies have been conducted and their results will be presented in the case of PfA-M1 inhibition
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Geisler, Michael. « Untersuchung der Regulation der Promotoraktivität von Aminopeptidase N (APN) in hämatopoietischen Zellen ». [S.l.] : [s.n.], 2005. http://deposit.ddb.de/cgi-bin/dokserv?idn=975657801.
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Frottin, Frédéric. « Analyse intégrative du rôle de l’excision de la méthionine N-terminale dans le cytoplasme des eucaryotes supérieurs ». Thesis, Paris 11, 2011. http://www.theses.fr/2011PA112045/document.
Résumé :
Le premier acide aminé incorporé dans une chaîne polypeptidique naissante est toujours la méthionine. On identifie donc toujours ce premier résidu à la méthionine N-terminale. Cependant, les deux tiers des protéines accumulées à l’état stationnaire ne présentent plus leur méthionine initiatrice. Cet enlèvement résulte essentiellement d’une maturation protéolytique affectant chaque protéine. Ainsi, l’Excision de la Méthionine N-terminale (NME) concerne la majorité des protéines et ce dès que les premiers résidus émergent du ribosome. Ce mécanisme est retrouvé dans tous les compartiments cellulaires où une synthèse protéique a lieu : le cytoplasme, les plastes et les mitochondries. Les enzymes responsables du clivage de la méthionine initiatrice sont les METhionine AminoPeptidases (METAPs) ; les METAPs sont conservées dans le Règne vivant. Des études fonctionnelles de délétions géniques ont montré le caractère létal du maintien de la première méthionine dans tous les organismes. Il y a plus de dix ans, les METAPs ont été identifiées comme étant la cible de composés naturels ayant des effets anticellulaires. Aujourd’hui un nombre croissant d’études rapportent que la NME est une cible prometteuse pour le traitement de nombreuses pathologies. Néanmoins, les bases moléculaires qui expliquent le caractère essentiel de la NME restent très peu comprises, en particulier dans le cytoplasme des eucaryotes supérieurs. Grâce à un système inductible permettant de moduler finement la NME cytoplasmique dans la plante modèle Arabidopsis thaliana et différentes approches incluant des analyses protéomiques et métabolomiques, j’ai pu étudier les événements moléculaires précoces associés à l’inhibition de la NME cytoplasmique. J’ai également caractérisé la contribution relative des deux types de METAP cytoplasmiques au processus. Dans ce contexte, j’ai pu démontrer chez A. thaliana que la NME cytoplasmique agit sur deux voies de signalisation fréquemment dérégulées lors de conditions pathologiques : le statut des composés thiolés et la protéolyse. La diminution de la NME cytoplasmique induit une protéolyse accrue principalement via une augmentation du nombre de protéines destinées à une dégradation rapide. Ainsi, l’activité de la NME, en modulant la sensibilité de nombreuses protéines à subir la protéolyse, est un élément fondamental de la régulation de la demi-vie protéique. Finalement, mes résultats simialires obtenus également chez les Archées, levures et les lignées de cellules humaines suggèrent l’existence d’un mécanisme ubiquitaire associé à la NMEThe first amino acid incorporated in nascent polypeptide chain is always methionine so called N-terminale methionine. However, in a given proteome, more than fifty percent of proteins have not this first methionine. Indeed, the early proteolytic event affecting a majority of proteins is N-terminal Methionine Excision (NME) as soon as few residues exit from the ribosome. Enzymes ensuring NME process are conserved along species. This mechanism takes place in all compartments where protein synthesis occurs including cytoplasm, plastids and mitochondria and the enzymes responsible of N-methionine excision are METhionine AminoPeptidases (METAP). Early functional studies of gene deletion has quickly showed that NME is an essential process. Ten years ago, METAPs have been identified as the molecular target of natural compounds with anticancer activities. Now, a growing number of studies suggest that NME is a promising target for treatment of various deseases. Nevertheless, molecular mechanisms making NME an essential process is poorly understood in particular in higher eukaryote cytoplasms.Using a dedicated inducible system in the model organism Arabidopsis thaliana and multiple approaches, including proteomics and metabolomics, I examined the earliest molecular events associated with the inhibition of this process and the contribution of both METAP to NME process. In this context, I demonstrated that cytoplasmic NME in A. thaliana orchestrates a cross-talk between two fundamental signaling pathways frequently deregulated in pathological conditions: thiol status and proteolysis. In these studies, we demonstrated that developmental defects induced by cytoplasmic NME inhibition are associated with an increase of the proteolytic activity due to an increase of the proteins available for rapid degradation. Thus, NME activity that modifies the availability of several proteins for degradation is an integral and fundamental element protein turnover regulation. Finally my preliminary results obtained in Archea, Fungi and human cells seem to suggest the existence of a ubiquitous mechanism associated with NME process
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Belair, Jeffery P. « The Photophysical Characterization of N-Confused Tetraphenylporphyrin and the Characterization of Zinc N-Confused Tetraphenylporphyrin ». University of Akron / OhioLINK, 2005. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc_num=akron1133950418.
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Valverde, Audrey. « Influences biochimiques, anatomiques et cognitives de la troncation exopeptidasique N-terminale du peptide Aβ ». Thesis, Université Côte d'Azur, 2020. http://theses.univ-cotedazur.fr/2020COAZ6034.
Résumé :
Les diverses formes provenant du peptide amyloïde (Aβ) procurent une complexité non négligeable à la Maladie Alzheimer (MA) et demandent une meilleure compréhension de leurs rôles. Depuis peu, leur implication dans l’initiation et l’aggravation de la pathologie semble irrévocable, du fait de leur forte présence dans les cerveaux de patients. Des travaux stipulent que la perte de ces fragments, en particulier les Aβs tronqués en N-terminal, améliorent considérablement les fonctions cognitives de plusieurs modèles murins de MA. L’hypothèse de mon projet de recherche a donc été d’analyser l’implication de deux enzymes, pour l’instant peu étudiées dans ce contexte, sur la troncation du peptide Aβ dans la région N-terminale. Durant ma thèse, j’ai étudié le rôle des 2 enzymes candidates à ce clivage : l’Aminopeptidase A (APA) et la Dipeptidyl-peptidase 4 (DPP4). J’ai démontré l’influence des deux exopeptidases dans la troncation du peptide Aβ en N-terminal, dans des modèles in vitro, ex-vivo et in vivo. Les résultats obtenus confortent l’idée que ces enzymes modifient le fragment Aβ en des formes plus toxiques jouant sur les déclins cognitifs, connue dans la pathologie. En effet, après avoir caractérisé les constructions shRNA et les lentivirus dirigés contre APA ou après le traitement chronique avec le RB150 (un inhibiteur pharmacologique d’APA), les résultats mettent en évidence qu’une diminution des formes tronquées d’Aβ en région N-terminale améliore considérablement la maturation des épines dendritiques et les déclins de mémoire spatiale. Biochimiquement, les souris présentent une dégradation d’Aβ par une diminution drastique des plaques amyloïdes au niveau hippocampique ainsi qu’une baisse du niveau d’AβpE3-42 (approche pharmacologique) et Aβ1-42 (lentivirus) dans la fraction insoluble. En parallèle, DPP4 présente un rôle apriori plus complexe. En effet, les résultats par spectrométrie de masse et immunoprécipitation dénotent que DPP4 clive Aβ40 en Aβ3-40. L’approche lentivirale atteste d’une baisse significative du niveau de plaques amyloïdes et d’Aβ40 et Aβ42 dans la fraction insoluble en Elisa et d’une amélioration de l’apprentissage. Cependant, le traitement à la sitagliptine montre peu d’effets bénéfiques en tests comportementaux ou après analyses biochimiques. Par ailleurs, l’activité enzymatique d’APA et de DPP4 mesurée dans des cerveaux de patients montre une augmentation au stade précoce de la pathologie. L’ensemble de ces résultats renforce indéniablement l’implication de ces enzymes dans l’initiation et/ou le développement de la pathologie. APA et DPP4 se révèlent d’être des candidats intéressants pour des approches thérapeutiques visant à bloquer la formation des formes d’Aβs tronquées en région N-terminaleThe diversity of amyloid peptides (Aβs) forms significantly contributes to the complexity of the pathology requiring a better understanding of their roles. Recently, their involvement in the initiation and worsening of Alzheimer’s Disease (AD) seemed irrevocable, due to their strong presence in patients’ brains. Studies have shown that the loss of these fragments, in particular the Aβ forms truncated at N-terminal end, considerably improve cognitive functions in several mouse models of the disease. The hypothesis of my project was to analyze the implication of two enzymes, so far little studied in this context, on the truncation of the Aβ peptide at the N-terminal region. Over these years, I have studied the role of 2 candidate enzymes: Aminopeptidase A (APA) and Dipeptidyl-peptidase 4 (DPP4).During my thesis, I proved the influence of two exopeptidases in the truncation of the Aβ peptide in the N-terminal region with in vitro, ex-vivo and in vivo models. The results support the idea that these enzymes modify the Aβ fragment into more toxic forms by participating on cognitive declines, known in the pathology. In fact, after the characterization of shRNA constructs and lentiviruses against APA or after chronic treatment with RB150, the results show that a decrease in truncated forms of Aβ significantly improves maturation of dendritic spines and spatial memory declines. Biochemically, mice show a degradation of Aβ by a drastic decrease in amyloid plaques at the hippocampal level as well as a decrease in the level of AβpE3-42 (pharmacological approach) and Aβ1-42 (lentivirus) in the insoluble fraction by Elisa. In parallel, DPP4 presents a more complex role. Indeed, the results obtained by mass spectrometry and immunoprecipitation show that DPP4 cleaves Aβ40 into Aβ3-40. The lentiviral approach shows a significant decrease in the level of amyloid plaques and an improvement in learning (Water Maze). Moreover, the enzymatic activity of DPP4 and APA in patient’s brains shows an increase at the early stage of the pathology. APA and DPP4 are proving to be interesting candidates for therapeutic approaches aiming at blocking the formation of truncated Aβ forms at the N-terminal region
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Віхрова, Ірина Олександрівна, Ирина Александровна Вихрова, Iryna Oleksandrivna Vikhrova, Андрій Миколайович Лобода, Андрей Николаевич Лобода et Andrii Mykolaiovych Loboda. « Significance of urinary Aminopeptidase N in early diagnosis of kidney damage in children with type 1 diabetes mellitus ». Thesis, Lithuanian University of Health Sciences, 2021. https://essuir.sumdu.edu.ua/handle/123456789/83663.
Résumé :
Мета. Метою цього дослідження було вивчити особливості рівнів амінопептидази N (ANPEP) в сечі у дітей залежно від тривалості діабету.
Методи. Ми проаналізували 3 групи дітей з цукровим діабетом 1 типу та групу порівняння дітей без діабету з Обласної дитячої клінічної лікарні м Суми. ANPEP вимірювали за допомогою імуноферментного аналізу з використанням набору антитіл до біомаркерів нирок людини (R&D Systems, Міннеаполіс, Міннесота, США). Результати були отримані за допомогою BioRad ChemiDoc Touch. Масиви аналізували напівкількісно з використанням програмного забезпечення BioRad Image Lab.
Результати. У дослідження були включені 47 дітей з діабетом і 8 дітей без діабету. Рівень ANPEP в сечі збільшився в 2,6 рази у дітей з тривалістю діабету менше одного року порівняно з контрольною групою. Рівні ANPEP були підвищені в 3,2 рази у дітей з тривалістю діабету від одного до п'яти років. У дітей з тривалістю діабету понад 5 років маркер збільшився в 2,7 рази.
Висновок. Підвищення рівня ANPEP в сечі спостерігалося в перший рік діабету у дітей. Вимірювання рівня ANPEP в сечі може бути корисним для діагностики діабетичної нефропатії.Цель. Целью настоящего исследования было изучить особенности уровней Аминопептидазы N (ANPEP) в моче у детей в зависимости от продолжительности диабета. Методы. Мы проанализировали 3 группы детей с сахарным диабетом 1 типа и группу сравнения детей без диабета из Областной детской клинической больницы г. Сумы. ANPEP измеряли с помощью иммуноферментного анализа с использованием набора антител к биомаркерам почек человека (R&D Systems, Миннеаполис, Миннесота, США). Результаты были получены с помощью BioRad ChemiDoc Touch. Массивы анализировали полуколичественно с использованием программного обеспечения BioRad Image Lab. Результаты. В исследование были включены 47 детей с диабетом и 8 детей без диабета. Уровень ANPEP в моче увеличился в 2,6 раза у детей с длительностью диабета менее одного года по сравнению с контрольной группой. Уровни ANPEP были повышены в 3,2 раза у детей с длительностью диабета от одного до пяти лет. У детей с длительностью диабета более 5 лет маркер увеличился в 2,7 раза. Заключение. Повышение уровня ANPEP в моче наблюдалось в первый год диабета у детей. Измерение уровня ANPEP в моче может быть полезно для диагностики диабетической нефропатии.
Aim. The aim of the current study was to investigate the features ANPEP levels in urine of children depending on the duration of diabetes. Methods. We analysed 3 groups of children with type 1 diabetes mellitus and comparison group of children without diabetes from Regional Children’s Clinical Hospital in Sumy. ANPEP was measured by ELISA using a Proteome Profiler Human Kidney Biomarker Antibody Array (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA). Results were detected with BioRad ChemiDoc Touch. The arrays were analysed semiquantitatively, using BioRad Image Lab Software. Results. The study included 47 children with diabetes and 8 children without diabetes. The level of ANPEP in urine increased 2.6-fold in children with the duration of diabetes below one year compared to the control group. ANPEP levels were elevated 3.2-fold in children with duration of diabetes from one to five years. In children with duration of diabetes duration, the marker increased 2.7 times. Conclusion. Increase urinary ANPEP was observed in the first year of diabetes in children. Measuring the level of ANPEP in urine may be useful for the diagnosis of diabetic nephropathy.
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Gill, M. B. « Investigating the role of aminopeptidase N in Cry1Ac toxicity using transgenic expression and molecular genetic analysis ». Thesis, University of Cambridge, 2000. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.599414.
Résumé :
Although fourteen putative receptors for δ-endotoxins have been identified to data from midgut tissue of several lepidopteran subspecies, no evidence exists for their functioning as actual receptors in vivo. Of particular interest to work undertaken in this dissertation was the identification of several putative receptors from the midgut of M. sexta, a lepidopteran subspecies which demonstrates sensitivity to Cry1 toxins. One of these putative receptors, an aminopeptidase N (APN), has been extensively studied in this dissertation in an attempt to evaluate its contribution to the insect toxicity mechanism in vivo. To demonstrate that this protein is the only component required to trigger the Cry1Ac induced cytotoxicity observed in M. sexta, the APN has been expressed within a non-susceptibility host, Drosophila melanogaster. In order to achieve this expression, the Gal4 enhancer trap technique has been employed enabling the directed expression of this lepidopteran APN within the larval stages of the Drosophila in both the midgut and mesodermal tissue. The appearance of toxin susceptibility and tissue specific damage in the otherwise non-susceptible dipteran insect provides strong evidence that this APN is a functional receptor for the Bt specific Cry1Ac toxin in vivo. Additional work covered in this dissertation includes the analysis of the distribution of several putative toxin receptors along the midgut of M. sexta and the identification and cloning of six novel, APN putative receptors from several lepidopteran subspecies.
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Soeryapranata, Elly. « Characterization of aminopeptidase N and endopeptidases E, O, O2, O3 from Lactobacillus helveticus WSU19, a Lactobacilli with industrial significance ». Online access for everyone, 2005. http://www.dissertations.wsu.edu/Dissertations/Summer2005/e%5Fsoeryapranata%5F071205.pdf.
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Riemann, Dagmar Ute. « Arbeiten zum Vorkommen und zur Regulation von Aminopeptidase N/CD13 mit besonderer Berücksichtigung ihres Vorkommens auf Lymphozyten ». [S.l.] : [s.n.], 2002. http://deposit.ddb.de/cgi-bin/dokserv?idn=965575055.
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Ramsauer, Markus. « Cerebral pericytes and pericytic aminopeptidase N (pAPN) their relevance to the blood brain barrier (BBB) and cerebral angiogenesis / ». [S.l.] : [s.n.], 2000. http://deposit.ddb.de/cgi-bin/dokserv?idn=959506225.
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Voegelin, Manon. « Rôle des facteurs de transcription E2F2 et ID3 dans la progression tumorale et intérêt du ciblage de l'aminopeptidase N/CD13 dans le traitement du cancer colique humain ». Phd thesis, Université de Strasbourg, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00871983.
Résumé :
Une analyse génomique (Comparative Genomic Hybridization) a été réalisée sur une cohorte d'adénomes et de tumeurs coliques et a mis en évidence, parmi d'autres altérations, la délétion de la région 1p36.12 dans 23% des adénomes et 47% des carcinomes. Parmi les 15 gènes ayant une fonction connue retrouvés dans cette zone, le gène codant pour le facteur de transcription E2F2 a été retenu en raison de son implication dans des processus cellulaires clés. Une analyse de Kaplan- Meier a montré que la délétion de E2F2 est un facteur de bon pronostic de survie sans progression. Afin de mieux cerner l'implication des gènes ciblés par la micro-délétion en 1p36.12, une étude fonctionnelle in vitro et in vivo de la perte de fonction de E2F2 a été réalisée, et étendue à celle de ID3 dont le gène est le voisin direct de E2F2. Nos observations indiquent qu'in vivo, la perte d'E2F2 favorise la croissance tumorale et bloque le développement de métastases. Dans le cadre d'une collaboration avec l'équipe de biochimiste du Pr Céline TARNUS (U.H.A.), une étude pilote a été réalisée pour prouver l'efficacité anti-tumorale de nouveaux inhibiteurs hautement sélectifs pour l'aminopeptidase N.
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Remédios, Joana Fortuna dos. « Aspects of molecular ecology of carnivore viruses : sapovirus and coronavirus ». Master's thesis, Universidade de Lisboa, Faculdade de Medicina Veterinária, 2018. http://hdl.handle.net/10400.5/15510.
Résumé :
Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina VeterináriaCurrent knowledge on the epidemiology of many pathogens of wild animals is limited and little is known about their genetic diversity, geographic and host species range, and their potential to spread between wild, domestic and human species. This thesis, developed at the Leibniz Institute for Zoo and Wildlife Research, includes two studies that seek to contribute to increase the knowledge in this field. The first study aimed to test the hypothesis that consecutive outbreaks of Sapovirus (SaV) infection in spotted hyenas (Crocuta crocuta), detected by a previous study on this species in the Serengeti National Park, resulted from the emergence of antigenically different strains of the virus. Virus RNA was extracted from faecal samples obtained from three infected hyenas and amplified using conventional RT-PCR methods, with the aim of sequencing a fragment of the virus genome known to be important in determining the antigenic type of SaV strains. Although a diverse set of primer pairs were tried, only a partial sequence of the targeted gene was obtained from one sample, thus it was not possible to determine if the outbreaks of SaV infection among spotted hyenas in the Serengeti were caused by distinct antigenic strains. The second study targeted aminopeptidase N (APN), a protein known to work as the host cell receptor for a great number of alphacoronaviruses (α-CoVs). In vitro studies have demonstrated that canine and feline APNs can facilitate the entry of α-CoVs from different species into these carnivore’s cells. This work aimed to investigate the phylogenetic relation between APN from different carnivore species. A particular focus was given to the region known to interact with α-CoVs during cell entry, with the purpose to better understand the possibility of α-CoVs from particular host species successful extending their range of hosts. The detection of isoforms of APN was also sought. The amplification and sequencing of nine tissue samples of wild carnivores was performed using conventional RT-PCR and molecular cloning methods, followed by the phylogenetic analysis of the results. Seven partial sequences of APN were obtained and their phylogenetic relation corresponded to that of their animals of origin. However, the analysis of the specific region where the virus attaches revealed that the species from the families Hyaenidae and Herpestidae (suborder Feliformia) were phylogenetically more similar to the species from Caniformia suborder rather than those from Feliformia suborder. This suggests that α-CoVs that infect the species in these two families might extend their host range to species in Caniformia rather than Feliformia suborder. The results obtained complement the already existing information on both Sapovirus and APN.
RESUMO - Aspetos da ecologia molecular de vírus de carnívoros: Sapovirus e Coronavirus - O conhecimento atual sobre a epidemiologia de muitos agentes patogénicos em animais selvagens é limitado e pouco se sabe sobre a sua diversidade genética, a sua extensão geográfica e de espécies hospedeiras, e o seu potencial de propagação entre espécies selvagens, domésticas e humana. Esta tese, desenvolvida no Leibniz Institute for Zoo and Wildlife Research, inclui dois estudos que procuram contribuir para o aumento do conhecimento nesta área. O primeiro estudo procurou testar a hipótese de que surtos consecutivos de infeção por Sapovirus (SaV) em hienas-malhadas (Crocuta crocuta), detetados por um estudo prévio nesta espécie no Parque Nacional do Serengeti, resultaram da emergência de estirpes antigenicamente diferentes do vírus. O RNA do vírus foi extraído de amostras fecais obtidas de três hienas infetadas e amplificado usando métodos convencionais de RT-PCR, com o objetivo de sequenciar um fragmento do genoma viral que se sabe ser importante para a determinação do tipo antigénico das estirpes de SaV. Apesar de terem sido experimentados vários conjuntos de primers, apenas foi obtida uma sequência parcial do gene-alvo de uma amostra, pelo que não foi possível determinar se os surtos de infeção por SaV entre as hienas-malhadas no Serengeti foram causados por estirpes antigenicamente distintas. O segundo estudo visou a aminopeptidase N (APN), uma proteína conhecida como recetor celular para um grande número de alfa-coronavirus (α-CoVs). Estudos in vitro demonstraram que as APNs canina e felina conseguem facilitar a entrada de α-CoVs de diferentes espécies nas células destes carnívoros. Este trabalho teve por objetivo investigar a relação filogenética entre a APN de diferentes espécies de carnívoros. Uma atenção particular foi dada à região que se sabe interagir com os α-CoVs durante a sua entrada na célula, com o propósito de melhor compreender a possibilidade de α-CoVs de uma espécie hospedeira particular alargarem com sucesso o seu leque de hospedeiros. Procurou-se também a presença de isoformas da APN. A amplificação e sequenciação de nove amostras de tecidos de carnívoros selvagens foram realizadas usando métodos convencionais de RT-PCR e métodos de clonagem molecular, seguidos da análise filogenética dos resultados. Sete sequências parciais da APN foram obtidas e a sua relação filogenética correspondeu à dos seus animais de origem. No entanto, a análise da região específica onde o vírus adere revelou que as espécies das famílias Hyaenidae e Herpestidae (subordem Feliformia) eram filogeneticamente mais semelhantes a espécies da subordem Caniformia do que da subordem Feliformia. Isto sugere que α-CoVs que infetem espécies desta duas famílias possam estender a sua variedade de hospedeiros a espécies da subordem Caniformia em vez da subordem Feliformia. Os resultados obtidos complementam a informação já existente acerca do SaV e do APN.
N/A
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HELENE, ARMELLE, et Philippe Ascher. « Analyse structurale du site actif de trois metallopeptidases a zinc : endopeptidase neutre-24. ii, aminopeptidase n et enzyme de conversion de l'angiotensine ». Paris 6, 1993. http://www.theses.fr/1993PA066569.
Résumé :
L'endopeptidase neutre, l'aminopeptidase n et l'enzyme de conversion de l'angiotensine sont trois metallopeptidases a zinc mammaliennes dont le sequencage a mis en evidence une homologie de sequence avec la thermolysine, endopeptidase a zinc bacterienne dont la structure tridimensionnelle et le mecanisme d'action sont connus grace aux donnees de la cristallographie. Nous nous sommes interesses a l'analogie d'organisation moleculaire du site actif de ces trois enzymes eucaryotes et de l'enzyme procaryote. Les modifications chimiques nous ont permis de montrer que le site actif de l'aminopeptidase n comporte des residus fonctionnels caracteristiques des endopeptidases comme l'endopeptidase neutre et la thermolylysine mais egalement un carboxylate specifique des aminopeptidases classiques. La mise en evidence d'une arginine analogue a celle de l'endopeptidase neutre dans le sous-site s'2 de l'enzyme de conversion de l'angiotensine permet d'expliquer la specificite dipeptidylcarboxypeptidasique de ces deux enzymes, alors que la thermolysine qui ne possede pas un tel residu est limitee a une action endopeptidasique sur ses substrats. Enfin, le marquage par photoaffinite du site actif de l'endopeptidase neutre a permis de montrer que le sous-site s'1 responsable de sa specificite pour les residus hydrophobes est similaire a celui de la thermolysine et localise de facon analogue dans la sequence primaire des deux enzymes
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Frottin, Frédéric. « Analyse intégrative du rôle de l'excision de la méthionine N-terminale dans le cytoplasme des eucaryotes supérieurs ». Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2011. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00923136.
Résumé :
Le premier acide aminé incorporé dans une chaîne polypeptidique naissante est toujours la méthionine. On identifie donc toujours ce premier résidu à la méthionine N-terminale. Cependant, les deux tiers des protéines accumulées à l'état stationnaire ne présentent plus leur méthionine initiatrice. Cet enlèvement résulte essentiellement d'une maturation protéolytique affectant chaque protéine. Ainsi, l'Excision de la Méthionine N-terminale (NME) concerne la majorité des protéines et ce dès que les premiers résidus émergent du ribosome. Ce mécanisme est retrouvé dans tous les compartiments cellulaires où une synthèse protéique a lieu : le cytoplasme, les plastes et les mitochondries. Les enzymes responsables du clivage de la méthionine initiatrice sont les METhionine AminoPeptidases (METAPs) ; les METAPs sont conservées dans le Règne vivant. Des études fonctionnelles de délétions géniques ont montré le caractère létal du maintien de la première méthionine dans tous les organismes. Il y a plus de dix ans, les METAPs ont été identifiées comme étant la cible de composés naturels ayant des effets anticellulaires. Aujourd'hui un nombre croissant d'études rapportent que la NME est une cible prometteuse pour le traitement de nombreuses pathologies. Néanmoins, les bases moléculaires qui expliquent le caractère essentiel de la NME restent très peu comprises, en particulier dans le cytoplasme des eucaryotes supérieurs. Grâce à un système inductible permettant de moduler finement la NME cytoplasmique dans la plante modèle Arabidopsis thaliana et différentes approches incluant des analyses protéomiques et métabolomiques, j'ai pu étudier les événements moléculaires précoces associés à l'inhibition de la NME cytoplasmique. J'ai également caractérisé la contribution relative des deux types de METAP cytoplasmiques au processus. Dans ce contexte, j'ai pu démontrer chez A. thaliana que la NME cytoplasmique agit sur deux voies de signalisation fréquemment dérégulées lors de conditions pathologiques : le statut des composés thiolés et la protéolyse. La diminution de la NME cytoplasmique induit une protéolyse accrue principalement via une augmentation du nombre de protéines destinées à une dégradation rapide. Ainsi, l'activité de la NME, en modulant la sensibilité de nombreuses protéines à subir la protéolyse, est un élément fondamental de la régulation de la demi-vie protéique. Finalement, mes résultats simialires obtenus également chez les Archées, levures et les lignées de cellules humaines suggèrent l'existence d'un mécanisme ubiquitaire associé à la NME.
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Simon, Gregory. « Synthèse chimioenzymatique d'analogues de monosaccharides utilisés comme sondes pour le développement d'un test de sélection de la transcétolase de Saccharomyces cerevisiae basé sur l'auxotrophie ». Clermont-Ferrand 2, 2009. https://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00724437.
Résumé :
La transcétolase (TK) permet de synthétiser des cétoses D-thréo par formation stéréospécifique d'une liaison C-C. L'objectif de ces travaux vise à modifier la spécificité de substrat de la TK de Saccharomyces cerevisiae par mutagenèse afin d'élargir le potentiel synthétique aux aldoses D-thréo et cétoses L-érythro. Notre stratégie a consisté à créer des banques de TK mutées à partir de courtes séquences du gène TKL1 (identifiées d'après la structure 3D) qui ont été dégénérées grâce à une approche de type "cassette mutagenesis". Pour identifier les TK recherchées, nous avons développé un test de sélection in vivo basé sur l'auxotrophie vis-à-vis d'un acide aminé. Dans ce but, nous avons synthétisé des sondes appropriées comportant un motif reconnu par la TK naturelle (cétose D-thréo) ou par les TK mutées recherchées (cétose L-érythro ou aldose D-thréo) et la chaîne latérale d'un acide aminé (alanine, valine leucine, méthionine, thréonine). La faisabilité de ce test a été étudiée en présence des composés cétose D-thréo et de la TK sauvage. In vitro, nous avons montré que ces différents composés sont des sustrats de la TK. Pour le développement du test de sélection in vivo dans E. Coli, les substrats précurseurs de la leucine et la méthionine ont été retenus en raison de la stabilité de l'auxotrophie pour ces acides aminés. Les meilleurs taux de croissance ont été obtenus avec la sonde cétose D-thréo précurseur de la méthionine
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Schmitt, Céline. « Expression, purification et cristallisation de l'aminopeptidase-N humaine (APN ou CD13) : évaluation in vitro et in vivo d'inhibiteurs sélectifs ». Phd thesis, Université de Haute Alsace - Mulhouse, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00812493.
Résumé :
L'Aminopeptidase-N (APN ou CD13) [EC.3.4.11.2] est une ectoenzyme homodimérique de nature glycoprotéique appartenant à la famille M1 des zinc-aminopeptidases. Elle est surexprimée à la surface des cellules endothéliales angiogéniques, ainsi que sur un certain nombre de cellules tumorales. Et il existe une corrélation étroite entre l'élévation de l'expression de l'APN, une activité enzymatique accrue et le pouvoir invasif de nombreux types de cellules tumorales. Des inhibiteurs puissants et sélectifs de l'APN, appartenant à la famille des composés de type amino-benzosubérone, ont été synthétisés au laboratoire. Ces composés ont été testés in vitro et in vivo, et il est apparu qu'ils présentaient une affinité variant du nano au picomolaire. En parallèle à ces essais, un nouveau projet a débuté il y a quelques années au laboratoire, visant à déterminer la structure tridimensionnelle de l'APN humaine. La connaissance de cette structure constitue un enjeu majeur car des co-cristallisations avec ces inhibiteurs permettraient de résoudre le mode de liaison de cette nouvelle famille de composés à l'APN. La difficulté de cette étude réside dans le fait que l'APN est une glycoprotéine membranaire particulièrement difficile à purifier à partir de tissus ; de plus, cette protéine étant ancrée dans la membrane de la cellule, sa cristallisation en est d'autant plus complexe. Plusieurs stratégies de clonage et de surexpression de l'APN humaine ont été envisagées, avec pour objectif final, l'obtention d'une protéine cristallisable, glycosylée ou non.
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Compain, Sandy. « Conception, synthèse et évaluation biologique d'une nouvelle série d'inhibiteurs, de type N-hydroxy Pyridine-2-one, visant la méthionine aminopeptidase d'E. coli : amélioration des activités antibactériennes via les métallodrogues ». Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2015. http://www.theses.fr/2015USPCB094.
Résumé :
La Méthionine Aminopeptidase est une métalloenzyme présente chez tous les procaryotes et essentielle à la maturation des protéines chez les bactéries. Malgré sa présence chez les eucaryotes,c’est une cible attractive pour développer de nouveaux antibiotiques. A ce jour, de nombreux inhibiteurs visant cette cible ont été développés mais aucun n’a fait l’objet de recherche avancée car l’effet antibactérien était trop limité. Nous nous sommes intéressés à la MetAPI d’E.coli(EcMetAP) comme modèle de Gram (-). Ainsi, une nouvelle série d’inhibiteurs présentant une fonction 1-Hydroxypyridin-2-one (HOPO) comme motif chélatant, a été conçue, synthétisée et les activités évaluées in vitro et in cellulo. Le design de ces ligands a été effectué par une étude en modélisation moléculaire en partant des structures RX de l’enzyme à Mn (EcMetAP-Mn) co-cristalliséeavec un ligand acide hydroxamique résolues précédemment dans l’équipe. Les études en dynamique moléculaire ont permis de sélectionner trois familles de ligand. Ces molécules ont ensuite été synthétisées. Pour la famille de ligands substitués en 5 du cycle HOPO par un methyl indole, la stratégie de synthèse classique n’a pas permis d’obtenir les ligands souhaités mais, une HOPO fonctionnalisée par un dérivé résultant de l’ouverture du cycle indolique a été isolée et totalement caractérisée. Sur l’ensemble des molécules mises au point, cinq d’entre elles ont une bonne affinité pour la MetAP-Mn, avec des CI50 inférieures à 5 μM. Les molécules présentent dans l’ensemble une activité antibactérienne modérée. L’activité est améliorée en présence de polymyxine nonapeptide, un perméabilisant membranaire. Afin de pallier le problème du manque de perméabilité des bactéries Gram (-), la stratégie de métal-chaperone associant autour d’un cation métallique l’inhibiteur et un ligand auxiliaire fonctionnalisé par un perméabilisant, a permis d’améliorer les activités antibactériennesMethionine aminopeptidase (MetAP) is an ubiquitous metalloprotein present in allprokaryotes and essential to the maturation of proteins in bacteria. Despite to be also present in eukaryotes, it is an attractive target to design new antibacterial agents. Numerous inhibitors targeting MetAP have been developed these last years, but none of then have been further studied because of too low antibacterial activities. We chose to work on MetAP1 from E. coli strain (EcMetAP), as an example of Gram negative bacteria, for which several X-ray structures of the enzyme in complex with inhibitors are available in the literature. A new series of inhibitors functionalized by a 1-hydroxypyrdin-2-one (HOPO) as chelating group has been designed and synthesized. The backbone of these HOPOs has been designed by molecular modeling, starting from the X-ray structure of EcMetAP loaded with Mn(II) incomplex with simple hydroxamic acids and previously solved in the lab. Three types of ligands have been selected and further synthesized. However HOPO substituted in position 5 by a methyl indole could not be obtained, instead a polyfunctionalized molecule with a HOPO substituted by a ring-opening derivative of the indole was isolated and completely characterized. The biological activities of all the molecules were determined. Five of them displayed inhibitory effect against EcMetAP-Mn with IC50 lower than 5 μM. The antibacterial activities are modest againt a wild type E. coli strain and an E. coli strain deleted from the AcrAB efflux pump system, but the sensitivity is increased by adding polymyxin nonapeptide. So, the results can be improved using the metal- chaperone strategy previously developed in the team, which allows, by grafing a permeabilizing agent on an ancillary ligand complexed to a metal cation with the HOPO inhibitor, to favor the uptake of the drug by the bacteria
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Miki, Takao. « The reversion-inducing cysteine-rich protein with Kazal motifs (RECK) interacts with membrane type 1 matrix metalloproteinase (MT1-MMP) and CD13/aminopeptidase N (APN), and modulates their endocytic pathways ». Kyoto University, 2007. http://hdl.handle.net/2433/135757.
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Cello, Sally L. « Exploring the Physiological Role of Vibrio fischeri PepN ». DigitalCommons@CalPoly, 2015. https://digitalcommons.calpoly.edu/theses/1443.
Résumé :
The primary contributor to Vibrio fischeri aminopeptidase activity is aminopeptidase N, PepN. Colonization assays revealed the pepN mutant strain to be deficient at forming dense aggregates and populating the host’s light organ compared to wildtype within the first 12 hours of colonization; however the mutant competed normally at 24 hours. To address the role of PepN in colonization initiation and establish additional phenotypes for the pepN mutant strain, stress response and other physiological assays were employed. Marked differences were found between pepN mutant and wildtype strain in response to salinity, acidity, and antibiotic tolerance. This study has provided a foundation for future work on identifying a putative role for V. fischeri PepN in regulating stress response.
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Wulfänger, Jens [Verfasser], Sven Erik [Akademischer Betreuer] Behrens, Barbara [Akademischer Betreuer] Seliger et Dirk [Akademischer Betreuer] Reinhold. « Neue Aspekte in der Regulation und in der Funktion von Aminopeptidase N (APN)/ CD13 und Ubiquitin-Carboxy-terminale Hydrolase L1 (UCHL1) / Jens Wulfänger. Betreuer : Sven Erik Behrens ; Barbara Seliger ; Dirk Reinhold ». Halle, Saale : Universitäts- und Landesbibliothek Sachsen-Anhalt, 2014. http://d-nb.info/1060367505/34.
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Schneider, Magdalena [Verfasser], Tanja [Gutachter] Schirmeister et Samuel [Gutachter] Samnick. « Synthese, Radiomarkierung und biochemische sowie präklinische Evaluierung neuer Aminopeptidase N- und Fibroblasten-Aktivierungs-Protein alpha- affiner Verbindungen für die molekulare Bildgebung mittels Positronen-Emissions-Tomographie / Magdalena Schneider. Gutachter : Tanja Schirmeister ; Samuel Samnick ». Würzburg : Universität Würzburg, 2014. http://d-nb.info/1102827592/34.
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Silva, Igor Henrique Sena da [UNESP]. « Interação da toxina Cry1ac de Bacillus thuringiensis às microvilosidades apicais das células colunares do intestino médio de Helicoverpa armigera Hübner, 1805 (Lepidoptera : Noctuidae) em diferentes ínstares larvais ». Universidade Estadual Paulista (UNESP), 2017. http://hdl.handle.net/11449/151547.
Résumé :
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Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
Helicoverpa armigera é uma praga altamente polífaga e ataca culturas de grande importância agrícola em diversos países do mundo. O controle desta praga é realizado primariamente por inseticidas químicos. Porém, o uso indiscriminado do controle químico levou a resistência de populações desta praga a maioria dos inseticidas químicos usados para seu controle, dificultando o seu manejo no campo. Além do controle químico, o controle de H. armigera tem sido realizado com uso de plantas transgênicas que expressam a proteína Cry1Ac de Bacillus thuringiensis (Bt) ou por bioinseticidas que contem esta e outras proteínas. No entanto, estudos têm demonstrado uma diminuição significativa na susceptibilidade de H. armigera às proteínas Cry com o aumento de seu desenvolvimento larval. O mecanismo de resistência mais comum dos insetos às proteínas Cry é a redução de ligação da proteína aos receptores presentes na membrana, levando a uma menor afinidade de ligação da proteína aos receptores intestinais. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a susceptibilidade de lagartas de diferentes ínstares de H. armigera à Cry1Ac e correlacionar com a capacidade de ligação da proteína Cry1Ac às microvilosidades apicais das células colunares do intestino médio (BBMVs) isoladas de todos ínstares larvais. Além disso, por meio de ensaios de imunoprecipitação e análise por cromatografia líquida acoplada a espectrofotometria de massa, identificar as proteínas envolvidas na interação com a proteína Cry1Ac no segundo e quinto ínstares de H. armigera. Foi observada uma redução significativa na susceptibilidade dos últimos ínstares larvais de H. armigera à proteína Cry1Ac comparado aos ínstares iniciais. Os valores estimados de CL50 variaram de 31,1 a 2525,7 ng de proteína/cm² de dieta, em lagartas de primeiro e sexto ínstar, respectivamente. Estes resultados evidenciam uma diferença de 80 vezes na susceptibilidade à proteína Cry1Ac do último para o primeiro ínstar. Nos testes de ligação de ELISA da proteína Cry1Ac às BBMVs dos diferentes ínstares, foi constatada uma diminuição total na capacidade de ligação da proteína Cry1Ac as BBMVs dos estádios mais tardios comparados aos iniciais, com afinidade de ligação aparente de 3,88 vezes menor no último ínstar comparado ao primeiro. Assim, uma clara correlação direta entre toxicidade de Cry1Ac e a afinidade de ligação da proteína às BBMVs de H. armigera foi demonstrada. Os resultados dos ensaios de imunoprecipitação demonstraram um padrão diferenciado de interação com a proteína Cry1Ac no segundo e quinto ínstar. A proteína fosfatase alcalina (ALP) foi identificada apenas no segundo ínstar, bem como, outras proteínas de membrana, como proibitina e uma proteína de canal iônico, que podem estar envolvidas para a alta toxicidade de Cry1Ac em ínstares iniciais de H. armigera. A identificação e o papel funcional das proteínas de ligação nos diferentes estádios de desenvolvimento de H. armigera, facilitará a elucidação do mecanismo de ação da proteína Cry1Ac e poderá ajudar a propor estratégias que retardem a evolução da resistência dos insetos às cultivares transgênicas que expressam esta proteína.
Helicoverpa armigera is a highly polyphagous pest and attacks important crops worldwide. The control of this pest is carried out primarily by chemical insecticides. However, the indiscriminate use of chemical control, led to pest populations to develop resistance to most of the chemical insecticides used for their control, making it difficult to management in the field. In addition to chemical control, H. armigera has been done by transgenic crops expressing Cry1Ac toxin from Bacillus thuringiensis (Bt) or by biopesticides that contains Cry1Ac or other toxins. However, studies have demonstrated a susceptibility decrease of H. armigera to Cry toxins with their larval development increase. The most common mechanism of resistance used by insects against Cry toxins is the reduced toxin binding to receptors present on the membrane, leading to a lower binding affinity of the toxin to intestinal receptors. Thus, the objective of this work was to evaluate the susceptibility of different instar larvae of H. armigera to Cry1Ac toxin and to correlate with the Cry1Ac toxin binding capacity to BBMV isolated from all larval instar. Furthermore, by pull-down techniques and liquid chromatography coupled to mass spectrometry analysis, to identify the proteins involved in the Cry1Ac toxin interaction in the second and fifth instars of H. armigera. A significant reduction in the susceptibility of the late instars of H. armigera to Cry1Ac toxin was observed compared to early instars. LC50 estimated values ranged from 31.1 to 2525.7 ng of toxin/cm2 of diet in first and sixth instar larvae, respectively. These results point a difference of 80-fold in the susceptibility to Cry1Ac toxin from late to first larval instar. In the ELISA binding assays results to BBMV of the different instars was found a total decrease in the binding capacity of Cry1Ac toxin to BBMVs from late instars compared to BBMV from early instars, presenting an apparent binding affinity of 3.88 times lower in the last instars than the first. Thus, a clearly correlation between Cry1Ac toxicity and binding toxin affinity to H. armigera BBMV has been demonstrated. The pull-down assays demonstrated a different pattern of the interaction between Cry1Ac toxin with the second and fifth instars. The protein phosphatase alkaline (ALP) was identified only in the second instar, as well as, other membrane proteins, as prohibitin and an ion channel protein, which may be involved for higher toxicity of Cry1Ac in early instars of H. armigera. The identification and functional role of binding proteins in the different stages of development of H. armigera will facilitate the elucidation of the Cry1Ac toxin mechanism of action and will may help to propose strategies that delay the insect resistance evolution to transgenic crops that express this protein.
FAPESP: 2015/24330-5
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Felten, Anne-Sophie. « Synthèse de N-aminopeptides. Application à la synthèse de nouveaux foldamères ». Thesis, Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 2007. http://www.theses.fr/2007INPL095N/document.
Résumé :
Ce travail décrit la synthèse, l’oligomérisation et l’étude structurale de [alpha-N-amino]mères. En extrapolant une stratégie de synthèse originale d’alpha-hydrazinoacides optiquement purs développée au LCPM nous avons pu obtenir de manière satisfaisante les N-aminodipeptides, précurseurs indispensables à la suite du projet. Nous avons pu montrer que l’activation du partenaire acide impliqué dans la réaction clé de Mitsunobu, habituellement obtenue par l’utilisation du groupement phtalimide, pouvait être avantageusement réalisée par l’introduction d’une fonction hydrazone à caractère fortement électroattracteur. Une extension de cette méthode de synthèse sur résine est un résultat qui constitue une mise en œuvre efficace de la réaction de Mitsunobu en SPS. Les N-aminodipeptides obtenus ont ensuite été engagés dans des réactions d’oligomérisation. Une étude préliminaire en phase liquide a permis de démontrer la faisabilité d’un couplage peptidique classique entre deux unités pseudopeptidiques déprotégées. La suite de l’étude a été effectuée sur phase solide et nous a permis d’obtenir les tous premiers oligomères à squelette alpha-N-aminopeptidique jamais synthétisés à ce jour. Enfin, dans le troisième chapitre, ces oligomères ont été étudiés par modélisation moléculaire et par différentes méthodes spectroscopiques (RMN, IR) qui ont permis de mettre en évidence un repliement par l’établissement de liaisons hydrogène intramoléculairesThis work describes the synthesis, the oligomerization and the structural study of N-aminopeptides. By extrapolating an original strategy of hydrazinoacids synthesis developed in the LCPM we were able to obtain N-aminodipeptides in high optical purity in a satisfactory way. These compounds were the indispensable precursors in order to continue the project. We were able to show that the activation of the acidic partner involved in the key reaction of Mitsunobu usually obtained by the use of the phtalimide group, could be advantageously realized by the introduction of a hydrazone moiety with strong electron-withdrawing character. An extension of this method on solid support is a result which constitutes an effective application of a Mitsunobu protocol in Solid Phase Organic Chemistry. The Naminodipeptides thus obtained were studied in reactions of oligomérisation. A preliminary study in liquid phase allowed to demonstrate that a classic peptidic coupling reaction could occur between two pseudopeptidic units. The continuation of the study was made on solid phase and allowed us to obtain the first [alpha-N-amino]peptides never synthesized to this day. Finally, in the third chapter, these oligomers were studied by molecular modelling and various spectroscopic methods (NMR, IR) who allowed to suggest a folding by the establishment of intramolecular hydrogen bonds
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Gras, Simon. « Caractérisation des aminopeptidases N du parasite Eimeria tenella et implication en tant que cibles thérapeutiques de nouvelle génération pour lutter contre les coccidioses aviaires ». Thesis, Tours, 2013. http://www.theses.fr/2013TOUR4042/document.
Résumé :
Eimeria tenella est l’un des parasites apicomplexes à l’origine de la coccidiose aviaire, l’une des plus importantes maladies parasitaires de l’industrie avicole. Dans le but de caractériser les facteurs de pathogénicité d’E. tenella, nous nous sommes intéressés aux protéases et plus particulièrement aux aminopeptidases N. Nous avons caractérisé Et-ApN1 et identifié Et-ApN3, deux aminopeptidases d’E. tenella. Et-ApN1 présente de fortes homologies avec PfA-M1, l’homologue de Plasmodium falciparum, au niveau des séquences, des structures, des propriétés biochimiques, du clivage et de la localisation. L’ensemble des résultats suggèrent qu’Et-ApN1 est impliquée dans le développement parasitaire. Pour évaluer son rôle de cible thérapeutique potentielle, nous avons criblé une bibliothèque de molécules et identifié une nouvelle molécule le C36, qui inhibe directement l’activité d’Et-ApN1 et entraîne un arrêt du développement d’E. tenella in vitro. Cet effet inhibiteur est également observé chez Toxoplasma gondii et P. falciparum. Dans le but d’améliorer la solubilité du C36 pour de futures études in vivo, le C36 a été pharmaco-modulé. Les perspectives de ces travaux viseront à prouver l’implication directe des Et-ApN dans le développement d’E. tenellaEimeria tenella is an apicomplexan parasite causing avian coccidiosis, one of the most important parasitic diseases in world poultry industry. To identify E. tenella pathogenesis factors, we were interested in proteases and more specifically in aminopeptidases N. We characterized Et-ApN1 and identified Et-ApN3, two aminopeptidases of E. tenella. We revealed strong homologies in the sequences, structures, biochemical properties, cleavage patterns and localization between Et-ApN1 and PfA-M1, the homologue from Plasmodium falciparum. Taken together, our results suggest that, as PfA-M1, Et-ApN1 is involved in parasite development and could be considered as a therapeutic target. To confirm this hypothesis, we screened a small molecule library and identified the compound C36. This molecule not only inhibits Et-ApN1 but also the in vitro development of E. tenella. This inhibition of parasite development was also observed for Toxoplasma gondii and P. falciparum. In perspectives, a pharmaco-modulation approach will be performed to improve chemical properties of the compound C36. New molecules derived from C36 will then be tested in vivo. Future studies will aim to prove the direct implication of Et-ApN in E. tenella development
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Entz, Dominik [Verfasser]. « Untersuchungen zur Wirkung von Inhibitoren der enzymatischen Aktivitäten der Dipeptidylpeptidase IV (DP IV) und der Aminopeptidase N (APN) sowie der Wirkung der Tetracyclinderivate Minocyclin und Pentaacetylcyclin auf Immunzellen in vitro und im Tiermodell der Multiplen Sklerose, der Experimentellen Autoimmunen Enzephalomyelitis in vivo / Dominik Entz ». Magdeburg : Universitätsbibliothek, 2018. http://d-nb.info/116059368X/34.
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Pedeutour, Maxime. « Le motif N-aminoamide pour la synthèse d'oligomères linéaires et cycliques ; étude de son impact conformationnel ». Thesis, Université de Lorraine, 2014. http://www.theses.fr/2014LORR0090/document.
Résumé :
Ce travail décrit la synthèse et l’étude structurale d’oligomères mixtes linéaires et cycliques, alternant des liens amides et N-aminoamides, nommés 1 :1-[a/a-N-amino]mères. Le premier chapitre est consacré à l’étude bibliographique des méthodes de cyclisation des peptides et pseudopeptides ainsi qu’à leurs nombreuses applications. Il a été décrit que l’incorporation d’éléments potentiellement structurants, comme l’introduction de modifications du squelette peptidique, pourrait faciliter la cyclisation des oligomères linéaires. Dans cette optique, l’exploitation de travaux antérieurs du laboratoire, exposée dans le deuxième chapitre, a donné accès à de nouveaux 1 :1-[a/a-N-amino]mères phtaloylés, puis aux premiers cyclo-1 :1-[a/a-N-amino]mères protégés. La déprotection du groupement phtalimide d’un de ces composés cycliques ouvre de nouvelles perspectives comme la fonctionnalisation de l’atome d’azote déprotégé. Le troisième chapitre résume les analyses structurales réalisées et met principalement en avant les conformations originales qu’adoptent ces différents oligomères ainsi que l’influence du lien N-aminoamide. Les structures ont été établies grâce à une approche complète associant plusieurs techniques spectroscopiques (RMN, IR, fluorescence et diffraction des rayons X). Par exemple, l’analyse par diffraction des rayons X a permis de mettre en évidence la formation de nanotubes due à un empilement original de cyclotétramères déprotégésThis work describes the synthesis and the structural study of linear and cyclic mixed oligomers alternating N-aminoamide and amide bonds, named 1:1-[a/a-N-amino]mers. The first chapter is a bibliographic study on cyclization methods of peptides and pseudopeptides (backbone modified peptides) and their applications. It has been described that the incorporation of potential structural elements, like introduction of changes to peptide backbone, could be facilitating the cyclization of linear oligomers. With this in mind, the use of previous work in our laboratory, discussed in the second chapter, gives access to new phtaloylated 1:1-[a/a-N-amino]mers and also to the first protected cyclo-1:1-[a/a-N-amino]mers. The deprotection of phthalimid group of one of these cyclic compounds opens up new opportunities like functionalization of the deprotected nitrogen atom. The third chapter sums up the results of the structural analyses and principally highlights the original conformations adopted by these different oligomers and the influence of the N-aminoamide bond. The structures were established through a complete study using several spectroscopic techniques (NMR, IR, fluorescence, X-ray crystallography). For example, the X ray studies highlight the formation of nanotubes through an original self-assembling of deprotected cyclotetramers
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Marking, Devon Nicole. « Exploring the Role of Intracellular Aminopeptidases in Staphylococcus aureus Pathogenesis ». Scholar Commons, 2015. http://scholarcommons.usf.edu/etd/5852.
Résumé :
Staphylococcus aureus is a remarkably pathogenic bacterium that is widely prevalent among the human population. It is the leading agent of skin and soft tissue infections, and is also responsible for causing an array of severe and life threatening diseases. The invasiveness of the pathogen, coupled with increasing antibiotic resistance seen for S. aureus infections, makes this bacterium a prominent public health concern. The extended pathogenicity of S. aureus is largely due to its repertoire of virulence factors, which are typically characterized by being bound to the cell wall, or secreted into the extracellular environment. Previously, our lab identified a leucine aminopeptidase mutant (pepZ) as being strongly attenuated in virulence for both systemic and localized models of infection. Importantly, PepZ marked the first intracellular bacterial aminopeptidase found to be involved in pathogenesis in Gram-positive bacteria. In this study, we set out to explore the role of the remaining eleven, non-essential, uncharacterized aminopeptidase enzymes in S. aureus disease causation, and present two additional aminopeptidase genes, pepT1 and pepT2, which are important for virulence in both human ex vivo models, and murine in vivo models of disease. Interestingly, these enzymes do not appear to be necessary for the utilization of free peptides for cellular nutrition and metabolism, which is a typical characteristic of aminopeptidases. Transcriptional analysis reveals maximal expression of pepT1 and pepT2 during early exponential growth phase, while localization mapping demonstrates that the PepT1 and PepT2 enzymes are found in the bacterial cytoplasm during all stages of growth. To explore these findings on a global level, an in-depth proteomic investigation of cleavage properties and cellular substrates identified several proteins as having significant changes in N-terminal peptide abundance in pepT1 and pepT2 mutant proteomes. We identified a number of putative independent and shared targets for the PepT1 and PepT2 enzymes that are known to impact cellular fitness and pathogenesis, including: DnaK, a heat shock protein conserved throughout all organisms, which functions to help deal with mis-folded and aggregated proteins that have accumulated as a result of cellular stress; ArlR, the response regulator of the ArlRS two-component system, which is an important regulator of agglutination and virulence in S. aureus; and of special interest, ClpC, an ATP-dependent protease chaperone which is a component of the primary machinery by which protein degradation occurs in S. aureus. Collectively, our data proves the importance of the PepT aminopeptidase enzymes in S. aureus pathogenesis, and indicates these enzymes are likely involved in bacterial stress response and virulence by functioning through the bioactivation/inactivation of key cellular proteins.
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Dautrey, Sébastien. « Synthèse et étude conformationnelle de nouveaux oligomères mixtes : les [[alpha]/[alpha]-N-amino]mères ». Thesis, Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 2009. http://www.theses.fr/2009INPL053N/document.
Résumé :
Ce travail décrit la synthèse et l’étude conformationnelle de nouveaux oligomères mixtes. Dans le premier chapitre, en exploitant des travaux antérieurs concernant la synthèse des N-aminodipeptides, nous avons obtenu des oligomères mixtes, alternant des liens amides et N-aminoamides nommés [[allpha]/[alpha]-N-amino]mères. L’oligomérisation des N-aminopeptides en phase liquide est réalisable grâce à un couplage au fluorure d’acide à partir d’une unité de base possédant les protections Boc (extrémité N-terminale), Bn (extrémité C-terminale) et phtaloyle (azote latéral). Le deuxième chapitre présente les résultats obtenus par différentes méthodes spectroscopiques (RMN, IR et DC) et modélisation moléculaire sur les différents oligomères synthétisés dans le chapitre 1. Ces travaux ont permis de mettre en évidence un repliement répétitif original par une liaison hydrogène de type C8 impliquant un groupement carbonyle du phtalimide et un proton amidiqueThis work describes the synthesis and the conformational study of new mixed oligomers. In the first chapter, using previous work on the synthesis of N-aminodipeptids, we were obtained mixed oligomers alternating amid and N-aminoamid bond named [[alpha]/[alpha]-N-amino]mers. The oligomerization of N-aminopeptids in liquid phase was achieved through an acid fluorid coupling from a building block with the protections Boc (N-terminus), Bn (C-terminus) and phtaloyl (N-side). The second chapter presents the results obtained by different conformational spectroscopic methods (NMR, IR and DC) and molecular modeling on the various oligomers synthesized in Chapter 1. This work has allowed to highlight a original repetitive folding by a C8 hydrogen bond involving the carbonyl group of phthalimid and a amid proton
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Anujith, Kumar K. V. « Peptidase N, A Major Aminopeptidase Belonging To The M1 Family : Biochemical And Functional Implications ». Thesis, 2007. http://hdl.handle.net/2005/583.
Résumé :
Intracellular protein degradation is required for maintaining the cellular proteome and regulating cellular processes. This pathway involves proximal ATP-dependent proteases that unfold and translocate proteins targeted for degradation into catalytic chambers. The large peptides produced are further cleaved by ATP independent endopeptidases, aminopeptidases and carboxypeptidases to release free amino acids. Lon and Clp are the key ATP-dependent proteases in prokaryotes and 26S proteasomes in eukayotes. In general, enzymes involved in the distal processing of peptides are ATP-independent, display greater redundancy and their orthologs are present in most organisms. The aim of the present study was to generate biochemical and functional insights on the ATP-independent enzyme, Peptidase N (PepN), which belongs to the M1 family. Previous studies in our laboratory identified Escherichia Coli PepN, to harbor both amino and endopeptidase activitities. In addition, it is responsible for the cleavage of majority of aminopeptidase substrates in E. Coli and is known to be involved in Sodium salicylate(NaSal)-induced stress.
The present study consists of four parts.
First, intracellular proteolysis plays an important role for virulence in pathogens. Therefore, it becomes important to study the biochemical properties and roles of enzymes involved in protein degradation. In this direction, a study was initiated to characterize the biochemical properties of Peptidase N from Salmonella enterica serovar Typhimurium(S. typhimurium). To study the contribution of PepN to the overall cystosolic protein degradation in S.typhimurium, a targeted deletion in pepN was generated. Cystosolic lysates of S. typhimurium wild type(WT) and ΔpepN strains were examined for their ability to cleave a panel of aminopeptidase and endopeptidase substrates. The ΔpepN strain displayed greatly reduced cleavage of nine out of a total of thirteen exopeptidase substrates, demonstrating a significant contribution of PepN to cytosolic aminopeptidase activity. S. typhimurium PepN also cleaved the endopeptidase substrate Suc-LLVY-AMC, similar to E. Coli PepN. To understand the physiological role of PepN, WT and ΔpepN were subjected to different stress conditions. During nutritional downshift in combination with high temperature stress, the growth of ΔpepN was significantly reduced compared to WT. Importantly, the PepN overexpressing strains grew better than WT, demonstrating an enhanced ability to overcome this stress combination. The above study clearly underscores the importance of PepN, to play distinct roles during stress. The significance of this study lies in understanding the biochemical and functional properties of a M1 family member from a pathogenic organism.
Second, peptidases belonging to the M1 family are widely distributed with orthologs found across different kingdoms. The key amino acids in the catalytic domain are conserved in this family. However, amino acids present in the C-termini are variable and the three available crystal structures of M1 family members display distint differences in organization of this domain. To investigate the functional role of C-termini, progressive deletions were generated in PepN from E.Coli and Tricorn interacting factor F2 from Thermoplasma acidophilum(F2). Catalytic activity was partially reduced inPepN lacking four aa from C-terminus (PepNΔC4) whereas it is greatly reduced in F2 lacking ten amino acids from C-terminus(F2ΔC10) or eleven amino acids from PepN (PepNΔC11). To understand the mechanistic reasons involved, biochemical and biophysical studies were performed on purified WT and C-termini deleted proteins. Increased binding to 8-amino- 1- naphthalene sulphonic acid (ANS) was observed for all C-termini deleted proteins revealing greater numbers of surface exposed hydrophobic amino acids. Further, trypsin sensitivity studies demonstrated that mutant proteins were more sensitive compared to WT. Notably, expression of PepNΔC4, but not PepNΔC11, in E ColiΔpepN increased its ability to resist nutritional and high temperature stress, demonstrating a physiological role for the C-terminus. Together, these studies reveal involvement of distal amino acids in the C-termini of two distant M1 family members in repressing the exposure of apolar residues and enhancing enzyme function.
Third, the crystal structure of E. coliPepN displayed the presence of Zn2+. To study the role of metal cofactor, apo-PepN was isolated by chelating the holoenzyme with 1,10-phenanthroline. Among different metals tested, only Zn2+ rescued the greatly reduced catalytic activity of the apo-PepN. Further confirmatory studies were performed using pepN mutants in the conserved GXMEN and HEXXH motifs. No major structural differences were observed in purified mutants(E264A, H297A, and E298A) using circular dichroism (CD) and intrinsic fluorescence studies; however, they lacked catalytic activity. These studies clearly demonstrate that Zn2+ was essential for catalysis but not for the overall structural integrity of PepN. Estimation of the Zn2+ content by atomic absorption spectrometry demonstrated that the WT contained one molecule of zinc per molecule of enzyme. Similar results were obtained in purified proteins of E264A and E298A. residues involved in catalysis. However the Zn2+ amount was greatly reduced in H297A, which is involved in Zn2+ binding. Further, the in vivo role of metal cofactor and catalyis were studied during two established stress conditions. Over expression of the mutants, unlike WT, was unable to rescue the growth of ΔpepN during nutritional down shift and high temperature stress. These results demonstrate that E264, H297 and E298 were required for PepN function during nutritional downshift and high temperature stress.
However during NaSal-induced stress condition, overexpression of WT or mutants reduced growth of ΔpepN, demonstrating that PepN function was independent of catalytic activity or metal cofactor. Further studies identified the YL motif, which is conserved in all members of the M1 family, to play a role during NaSal-induced stress. Over expression of Y185F or L186Q did not modulate catalytic activity although growth reduction of ΔpepN in the presence of NaSal was compromised. To understand the mechanisms by which the YL motif plays a role during this condition, Y185F and L186Q mutant proteins were purified. In vitro, both mutant proteins were found to aggregate at a lower temperature and their catalytic activities were more sensitive to temperature, compared to WT. Steady state analysis of WT, Y185F and L186Q were performed to study the modulation of PepN amount during stress conditions. Steady state amounts of Y185F and L186Q mutant proteins were greatly decreased compared to WT, during NaSal-induced stress. Most likely, the lowered amounts of Y185F and L186Q mutant proteins contribute to growth advantage during NaSal-induced stress. Thus, the YL motif in E. Coli PepN reduces protein aggregation and enhances the structural integrity of PepN during selective stress conditions in vivo. In summary, this study clearly identifies metal cofactor and peptidase-dependent and –independent motifs to play distinct functional roles in PepN.
Fourth, the crystal structures of known M1 family members have shown that the catalytic domain and mechanism of action are similar. To identify novel residues that may modulate the catalytic activity of PepN, multiple sequence alignment of important M1 family members were performed. The alignment identified a subset of M1 family members, including PepN, containing an aspargine residue which is present two amino acids before glycine in the GAMEN motif. A closer investigation of thecrystal structure of PepN revealed an interaction between N259(Catalytic domain) with Q821 (C-terminal domain). To understand the functional role of this interaction, site-specific mutants were generated: N259D, Q821E and a double mutant, N259D & Q821E. Spectroscopic studies did not reveal any significant differences with respect to global structure or protein stability between purified WT and mutant enzymes. Also, binding to substrates by mutant enzymes was not affected as judged by Km values. However, the Kcat of PepN containing N259D or Q821E was enhanced with respect to both aminopeptidase and endopeptidase substrates. On the other hand, there was significant decrease in the catalytic activity of the double mutant. Modeling studies demonstrate that the N259-Q821 interaction is located in the vicinity of residues important for catalysis in PepN and specific alterations in this interaction may affect the compactness of the catalytic domain. In summary, this study provides a functional role for the N259-Q821 interaction in modulating the catalytic activity of PepN.
Mammalian orthologs of M1 family members play important roles in different physiological processes, e.g. angiogenesis, blood pressure, inflammation, MHC class I antigen presentation etc. PepN is a well characterized M1 family member of microbial origin. The present study on E. Coli PepN provides new knowledge on the roles of: a) distal C-terminal amino acids in repressing exposed hydrophobic amino acids; b) the conserved YL motif during NaSal-induced stress condition; c) the N259 and Q821 interaction in modulating enzymatic activity. The implications of these results on other members of the M1 family are discussed.
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Geisler, Michael [Verfasser]. « Untersuchung der Regulation der Promotoraktivität von Aminopeptidase N (APN) in hämatopoietischen Zellen / von Michael Geisler ». 2005. http://d-nb.info/975657801/34.
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Jacke, Britta [Verfasser]. « Die liposomale Targetierung der Aminopeptidase N an angiogenetisch aktiven Endothelzellen als möglicher neuer Therapieansatz / von Britta Jacke ». 2008. http://d-nb.info/994613466/34.
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Schneider, Magdalena. « Synthese, Radiomarkierung und biochemische sowie präklinische Evaluierung neuer Aminopeptidase N- und Fibroblasten-Aktivierungs-Protein alpha- affiner Verbindungen für die molekulare Bildgebung mittels Positronen-Emissions-Tomographie ». Doctoral thesis, 2014. https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:bvb:20-opus-102562.
Résumé :
Nach einem Myokardinfarkt setzen Wundheilungsprozesse ein, um die Durchblutung wieder herzustellen und nekrotisches Muskelgewebe durch Narbengewebe zu ersetzen. Die Einsprossung neuer Kapillaren vom bestehenden Gefäßnetz aus wird als Angiogenese bezeichnet. Das dabei vermehrt exprimierte proteolytische Enzym Aminopeptidase N (APN) spielt eine entscheidende Rolle bei der Einsprossung von Endothelzellen. Beim kardialen Remodeling werden abgestorbene Myozyten mithilfe der Einwanderung von Fibroblasten durch Binde- oder Stützgewebe ersetzt, dabei übernimmt das Fibroblasten-Aktivierungs-Protein alpha (FAP) Aufgaben bei der Proliferation und Fortbewegung von Fibroblasten. Durch ihre erhöhte Expression bei den Wundheilungs- und Remodelingprozessen nach einem Herzinfarkt stellen die Metalloprotease APN und die Serinprotease FAP molekulare Targets für die Diagnostik und Therapie dar. Als Diagnosemethode besonders geeignet ist die Positronen-Emissions-Tomographie (PET), die es ermöglicht, biochemische Prozesse in Echtzeit im zu untersuchenden Organismus zu visualisieren und zu quantifizieren. Eine als Radiopharmakon oder Tracer bezeichnete biochemische Sonde kann im Falle eines Enzyms dessen radioaktiv markiertes Substrat oder ein Inhibitor sein. Ziel dieser Arbeit war es, spezifische APN- und FAP-affine Tracer für die nicht-invasive Untersuchung der APN- und FAP-Expression mittels PET zu entwickeln und dadurch die Rolle von APN und FAP bei Remodelingprozessen nach Myokardinfarkt besser verstehen bzw. klären zu können. Um die Protease APN mittels PET zu untersuchen, wurden die für APN affine Verbindung NOTA-NGR (Komplexbildner + cyclisches Peptid inkl. Asparagin-Glycin-Arginin) mit dem Positronen-emittierenden Nuklid Gallium-68 (68Ga) markiert. Das Potential von 68Ga-NOTA-NGR als PET-Tracer wurde in vivo am Infarktmodell mittels Kleintier-PET untersucht und mit 68Ga-NOTA-RGD, einem zur Visualisierung des neo-angiogenetischen alphavbeta3-Integrins etablierten Tracer, verglichen. Untersuchungen ergaben, dass 68Ga-NOTA-NGR einen vielversprechenden neuen PET-Tracer für die Visualisierung und Quantifizierung der APN-Expression im Rahmen der Angiogenese nach einem Myokardinfarkt darstellt. 68Ga-NOTA-NGR zeigte eine erhöhte Aufnahme im Bereich des Myokardinfarkts im Sinne einer vermehrten Angiogenese. Die Aufnahme des Tracers in infarzierten Arealen war quantitativ höher als in der Untersuchung mit 68Ga-NOTA-RGD. In Autoradiographie-Experimenten wurde 68Ga-NOTA-NGR ex vivo untersucht. Die Akkumulation von 68Ga-NOTA-NGR im ischämischen Bereich war deutlich höher als im gesunden Myokard. Der Nachweis der unterschiedlichen Bereiche des Herzens erfolgte mit HE-Färbung. Die Expression von APN wurde immunohistochemisch mittels spezifischer Antikörper bestätigt. Zum Vergleich wurden ebenso einige andere an der Angiogenese beteiligte Faktoren untersucht. APN stellte sich auch hier als geeignetes Target zum Nachweis der Angiogenese heraus. Um die Protease FAP mittels PET zu untersuchen, wurden eine Reihe peptidomimetischer Inhibitoren, die die Erkennungssequenz Glycin-Prolin mit einer Carbonitril-Gruppe als elektrophiler Einheit zur kovalent-reversiblen Hemmung des Enzyms enthalten, entwickelt. Ausgehend vom N-Acetylglycin-pyrrolidin-(2S)-carbonitril als Leitstruktur wurden Inhibitoren und Vorstufen zur Radiomarkierung inkl. verschieden substituierter Benzoesäuren dargestellt. Zusätzlich wurden noch bereits bekannte Inhibitoren synthetisiert, die zum Vergleich in den Enzymassays dienten. Drei Verbindungen zeigten gute inhibitorische Wirkung an FAP und außerdem Selektivität gegenüber DPP IV. Keine der entwickelten Verbindungen zeigte einen KI-Wert im nanomolaren Bereich, erforderlich für einen potentiellen Tracer zur in-vivo-Visualisierung einer Enzymexpression mittels PET. Um die Inhibitoren mit der besten Hemmung an FAP zum PET-Tracer weiterzuentwickeln, mussten sie mit einem Positronenemitter markiert werden. Die Markierung erfolgte über Isotopenaustausch, bei dem nicht-radioaktives Iod am aromatischen Ring des Precursors durch das radioaktive Iod-124 (124I) substituiert wurde. Es konnten dadurch die radioiodierten Verbindungen 1-(2-[124I]Iodhippursäure)-pyrrolidin-(2S)-carbonitril und 1-(4-[124I]Iod-hippursäure)-pyrrolidin-(2S)-carbonitril synthetisiert werden. Trotz der relativ niedrigen Affinität für FAP wurde das neue 1-(2-[124I]Iodhippursäure)-pyrrolidin-(2S)-carbonitril in Ratten am Infarktmodell mittels Kleintier-PET getestet. Die Lage der ischämischen Zone wurde im Anschluss durch HE-Färbung bestimmt. In vivo zeigte sich eine nur sehr geringe Aufnahme des Radiopharmakons in der ischämischen Zone des Myokards. Damit ist 1-(2-[124I]Iod-hippursäure)-pyrrolidin-(2S)-carbonitril kein für den gewünschten Zweck geeigneter PET-Tracer. Nichtsdestotrotz war der Ansatz vielversprechend und es wurde zum ersten Mal ein PET-Tracer dieser Art zur Untersuchung des FAP im Myokardinfarkt hergestelltAfter myocardial infarction, processes of wound healing are initiated in order to regain perfusion and to replace necrotic muscle tissue with soft tissue. The sprouting of new capillaries from the vasculature is called angiogenesis. During Angiogenesis, Aminopeptidase N (APN) plays an important role in the sprouting of endothelial cells. Cardiac remodeling is the process of replacement of necrotic myocytes with soft tissue through invasion of fibroblasts. For this cause, also a lot of proteases are activated. During the process of cardiac remodeling, fibroblast activation protein alpha (FAP) is involved in proliferation and migration of cardiac fibroblasts. Due to their increased expression during remodeling processes after myocardial infarction, the metalloprotease APN and the serine protease FAP have been identified as potential molecular targets for diagnosis and therapy. Diagnosis of the heart by nuclear imaging techniques is a well established method in clinical cardiology. Most of all positron emission tomopgraphy (PET) provides information on biochemical processes in vivo using specific radiotracers in real time. This imaging probe is labeled with a positron emitting radionuclide and is called radiopharmaceutical or tracer. In case of an enzyme, the tracer might for example be a labeled substrate or inhibitor of the enzyme. To visualize the protease APN with PET, NOTA-NGR (chelating agent + peptide sequence incl. asparagine-glycine-arginine), a compound that shows high affinity for APN, was labeled with the positron emitting nuclide Gallium-68 (68Ga). 68Ga-NOTA-NGR was developed including an improved synthesis, isolation and formulation of the tracer. Its potential as a PET-tracer was assessed in vivo using micro-PET and compared to the established tracer 68Ga-NOTA-RGD, used to visualize the integrin alphavbeta3 in angiogenesis. Studies in rats with ischemia/reperfusion showed high uptake of the new radiopharmaceutical 68Ga-NOTA-NGR in myocardial infarction area being used in diagnostic PET imaging of APN. The new tracer shows even a slightly higher uptake in angiogenetic areas compared with results obtained with 68Ga-NOTA-RGD. 68Ga-NOTA-NGR was also examined ex vivo using autoradiography, confirming the significant higher accumulation of the tracer in the ischemic area compared with the healthy myocardium. The different areas of the tissue were displayed by HE staining. For the purpose of immunohistochemistry, the expression of the enzyme APN was verified using antibody staining. Additionally several other factors that are involved in angiogenesis were stained. Through antibody staining APN was shown to be a suitable target for the evidence of angiogenesis. With 68Ga-NOTA-NGR, the development of a new PET-tracer for diagnosis of the expression of APN during angiogenesis after myocardial infarction was successful. In order to develop an imaging probe suitable for investigation of the protease FAP using PET, several peptidomimetic inhibitors containing the dipeptide motif glycine-proline and the electrophilic moiety carbonitrile were designed. With N-Acetylglycine-pyrrolidine-(2S)-carbonitrile being the basic structure, modifications were introduced through a benzoylic residue at the N-terminus. In addition, some well-known inhibitors were synthesized for comparison to the new ones in enzymatic assay. To evaluate their inhibitory effect, the new inhibitors were tested in enzymatic assays using FAP and dipeptidyl peptidase IV, a prolyl peptidase from the same family in order to compare the results with regard to selectivity. None of the new compounds showed a KI-value in the nanomolar range, required for visualization of an enzyme expression using PET. In order to investigate a PET-Tracer, the best inhibitors against FAP had to be labeled with a positron emitter. The radioactive analogues of the inhibitors were obtained using isotopic exchange of the natural iodine-nuclide by iodine-124 (124I), resulting in 1-(2-[124I]Iodohippuric acid)-pyrrolidine-(2S)-carbonitrile und 1-(4-[124I]Iodohippuric acid)-pyrrolidine-(2S)-carbonitrile. 1-(2-[124I]Iodohippuric acid)-pyrrolidine-(2S)-carbonitrile was tested in vivo using microPET in rats with myocardial infarction. Very low uptake of the radiopharmaceutical was observed in the ischemic area of the rat´s heart. Locations of ischemic and surviving parts of the myocardium were confirmed using HE staining. To our knowledge, 1-(2-[124I]Iodohippuric acid)-pyrrolidine-(2S)-carbonitrile is the first FAP-affine tracer developed for PET investigation. However, its potential as tracer for the FAP-expression within the myocardial infarction in vivo using PET could not be proven in the present study. Therefore, developments based on the structure of 1-(2-[124I]Iodohippuric acid)-pyrrolidine-(2S)-carbonitrile are going on, with view to identify a PET-tracer suitable for in-vivo-investigation of FAP in healing processes and remodeling after myocardial infarction using PET
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Bastos, Luísa Maria Oliveira Pinheiro Leitão Cortes. « Pj-peptidase, uma nova aminopeptidase N do pólen de Parietaria judaica : efeito na integridade e na função do epitélio pulmonar ». Doctoral thesis, 2006. http://hdl.handle.net/10316/1772.
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Kehlen, Astrid [Verfasser]. « Rolle von transmembranen Ektoenzymen wie Aminopeptidase N und Autotaxin beim Schilddrüsenkarzinom bezüglich ihres Einflusses auf Dedifferenzierung, Invasivität und Transformation / von Astrid Kehlen ». 2006. http://d-nb.info/985546581/34.
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Riemann, Dagmar Ute [Verfasser]. « Arbeiten zum Vorkommen und zur Regulation von Aminopeptidase N/CD13 mit besonderer Berücksichtigung ihres Vorkommens auf Lymphozyten / vorgelegt von Dagmar Ute Riemann ». 2002. http://d-nb.info/965575055/34.
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Ramsauer, Markus [Verfasser]. « Cerebral pericytes and pericytic aminopeptidase N (pAPN) : their relevance to the blood brain barrier (BBB) and cerebral angiogenesis / vorgelegt von Markus Ramsauer ». 2000. http://d-nb.info/959506225/34.
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Banks, David Jay. « Identification, characterization, cloning and expression of a Heliothis virescens 110 kDa aminopeptidase N that binds Bacillus thuringiensis Cry1Ac and Cry1Fa [delta]-endotoxins ». 2002. http://purl.galileo.usg.edu/uga%5Fetd/banks%5Fdavid%5Fj%5F200205%5Fphd.
Résumé :
Thesis (Ph. D.)--University of Georgia, 2002.Directed by Michael Adang. Includes an article published in, and an article submitted to, Insect biochemistry and molecular biology. Includes bibliographical references.