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Thèses sur le sujet « Cortex surrénal »
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1
Jánossy, Andrea. « Régulation cholinergique du cortex surrénal ». Lyon 1, 2001. http://www.theses.fr/2001LYO1T014.
Texte intégral
2
Liakos, Panagiotis. « Expression des récepteurs mélanocortines MC5 et MC2 dans le cortex surrénal ». Université Joseph Fourier (Grenoble), 1999. http://www.theses.fr/1999GRE10100.
Texte intégralRésumé :
Recemment le clonage de la famille des recepteurs melanocortine (mc-r) a mis en evidence cinq recepteurs melanocortines distincts couples aux proteines g et a l'adenylate cyclase. Le recepteur mc2 correspond au recepteur acth du cortex surrenal et lie uniquement l'acth. Le recepteur mc5 (mc5-r) presente une expression large, il est detecte egalement dans le cortex surrenal, et lie l'acth et l'a-msh. Au cours de ce travail, l'expression du mc5-r et du mc2-r dans les differentes zones du cortex surrenal bovin a ete etudiee. Le mc5-r est detecte uniquement dans la zone glomerulee bovine. Le mc2-r est observe dans les deux zones et ses arnm sont plus abondants dans la zone glomerulee. L'analyse de l'expression du mc5-r montre que l'acth, l'a-msh et l'all stimulent les arnm du mc5-r dans les cellules glomerulees et les arnm du mc5-r sont alors detectes dans les cellules fasciculees. Tgfb1 bloque l'expression des arnm du mc5-r induite par l'acth dans les cellules glomerulees. Le role du mc5-r dans le cortex surrenal n'est pas connu. Une premiere approche suggere que le mc5-r pourrait participer a la production d'aldosterone des cellules glomerulees. Chez le rat nouveau-ne, son expression suggere un role potentiel dans les temps precoces du developpement postnatal de la glande. Nous observons egalement une surexpression des arnm du mc5-r dans les cas d'aldosteronomes de la surrenale laissant envisager sa participation dans ces tumeurs de la surrenale comme le mc2-r.
3
Aguilar, Frédérick. « Cortex surrénalien et hypertension artérielle chez le rat lyonnais génétiquement hypertendu ». Lyon 1, 2004. http://www.theses.fr/2004LYO10107.
Texte intégralRésumé :
L'expression des récepteurs à l'angiotensine II (ANG II) surrénaliens, la morphologie des surrénales, la pression artérielle systolique (PAS) et les niveaux plasmatiques des stéroi͏̈des ont été étudiés chez les rats LH comparés aux rats normotendus LN et LL. Les rats lyonnais ont été traités par (i) l'irbesartan, (ii) le périndopril, ou (iii) l'association de périndopril à une perfusion d'ANG II. Chez les rats LH, la perfusion d'ANG II a induit une importante augmentation du poids des surrénales. Le volume de la zone glomérulée et l'aldostéronémie ont augmenté dans les trois souches après la perfusion d'ANG II. Enfin, chez les seuls rats LH, la perfusion d'ANG II a conduit à une augmentation significative du volume de la zone fasciculo-réticulée et de la corticostéronémie. La surrénalectomie bilatérale réalisée chez de jeunes rats LH a réduit significativement la PAS. Nos résultats suggèrent que le cortex surrénalien participe au développement de l'hypertension des rats LH
4
Grambin, Philippe. « Les cortico-surrénalomes malins de l'enfant : à propos d'une observation ». Bordeaux 2, 1995. http://www.theses.fr/1995BOR2M021.
Texte intégral
5
Erragh, Saadia. « Contribution a l'etude des proteines d'assemblage (pa) du cortex surrenal et du cerveau bovins ». Paris 5, 1996. http://www.theses.fr/1996PA05S011.
Texte intégralRésumé :
Dans cette etude, nous avons caracterise les proteines d'assemblage (pa) des vesicules mantelees (vm) du cortex surrenal tissu non neuronal et nous les avons comparees a celles du cerveau de bovins. Dans les vm du cortex surrenal, nous avons identifie pour la premiere fois, seulement deux pa, ap-1 et ap-2 appeles aussi adapteurs ha-i et ha-ii. Les proteines du manteau des vm (clathrine, ha-i et ha-ii) du cortex surrenal apparaissent plus fortement liees a la membrane vesiculaire que celles du cerveau et la presence de l'acide ethylene-diamine-tetra-acetique (edta) dans le milieu de deshabillage est absolument indispensable pour leur extraction. Apres la separation de la clathrine et des pa par chromatographie sur gel de filtration, la purification de ha-i et ha-ii est effectuee par chromatographie d'adsorption sur colonne d'hydroxyapatite. Contrairement au cerveau, ou la purification de ha-ii par chromatographie d'affinite de cla-sepharose est tres efficace, pour le cortex surrenal, cette methode ne l'est pas, car nous avons obtenu qu'un melange de ha-i et ha-ii enrichi en ce dernier. Pour la premiere fois, nous avons pu montrer que les ha-i et ha-ii du cortex surrenal sont des proteines d'assemblage pa comme celles du cerveau. En effet, elles possedent les deux fonctions qui les definissent a savoir : liaison a la clathrine cla et polymerisation de celle-ci en coats, semblables aux structures des vm, observees in vivo en microscopie electronique. Comme les adapteurs du cerveau, ceux du cortex surrenal sont des complexes heterotetrameriques semblables mais non identiques. Certaines de leurs sous-unites ont en electrophorese en gel de polyacrylamide en presence de dodecyl-sulfate de sodium (sds-page) des mobilites electrophoretiques legerement differentes. En sds-page, ha-i du cortex surrenal apparait forme de deux polypeptides, appele et '-adaptines, comigrant a 100-kda. Les adaptines correspondantes du cerveau et ' ont des mobilites differentes qui sont respectivement de 100 et 114-kda. Les deux autres bandes de 47 et 19-kda, faisant partie des sous-unites formant le tetramere sont identiques pour les deux tissus. Les complexes ha-ii du cortex surrenal et du cerveau apparaissent formes de deux adaptines #c et comigrant a 100-kda. Pour le cortex surrenal et contrairement au cerveau, la proteine d'assemblage ap-180 et l'adaptine #a de ha-ii n'ont pas ete immunologiquement identifiees. Contrairement au cerveau dont la proteine d'assemblage auxiline apparait en sds-page-uree comme une bande de 126-kda, dans le cortex surrenal cette pa n'a pas ete observee. La cinetique de proteolyse menagee par la trypsine des pa de cerveau et de cortex surrenal, montre en sds-page, comme deja observe pour le cerveau, deux groupes de fragments localises dans les regions de 63-58 et 40-30-kda. Ils peuvent correspondre respectivement au trunk et oreilles des adaptines de ha-i et ha-ii de deux tissus. Leur apparition est concomitante a la disparition des adaptines de deux tissus, par contre les pp47, pp50, pp19 et pp17 sont refractaires a l'enzyme. Par analogie au cerveau, les complexes ha-i et ha-ii du cortex surrenal pourraient aussi avoir une structure en deux domaines : le trunk pourrait correspondre au domaine n-terminal et les oreilles au domaine c-terminal de chacune des adaptines. Tous ces resultats suggerent une grande similitude structurale et fonctionnelle entre les deux adapteurs ha-i et ha-ii du cerveau et du cortex surrenal avec cependant quelques differences, qui pourraient refleter une specificite tissulaire.
6
Plas, Martine. « A propos d'un cas de corticosurrénalome malin découvert à partir d'une hypersomnie : observation-revue de la littérature-discussion ». Montpellier 1, 1991. http://www.theses.fr/1991MON11140.
Texte intégral
7
Ding, Guoqing. « Effets des béticolines, toxines fongiques, sur la prolifération et la stéroidogénèse de cellules corticosurrénales transformées par l'oncogène ras ». Dijon, 1997. http://www.theses.fr/1997DIJOS029.
Texte intégralRésumé :
Nous avons montré pour la première fois que des toxines fongiques, les béticolines, extraites du champignon Cercospora Beticola, inhibaient la prolifération de cellules tumorigènes corticosurrénales transformées par l'oncogène C-HA-RAS#E#J ou cellules RTAC (ras-transformed adrénocortical). Les béticolines-1, -2 et -13 (Cl#5#0 250 NM) et les béticolines-0,-6 et -11 (Cl#5#0 500 NM) les plus hydrophobes ont été les plus actives. Les béticolines plus hydrophiles -3 et -4 ou -5, -7, -9 et -12 ont été peu actives ou inactives. Les cellules traitées par la béticoline-1 ont montré une forte fluorescence intracellulaire au microscope confocal laser après 1 augmentant avec le temps ; celles traitées par les béticolines-3 et -12, même après 24 h, n'étaient pas différentes des témoins. Ceci suggère que la béticoline-1 mais non la béticoline-3 ou -12 pénètre dans les cellules RTAC et que l'activité inhibitrice de la béticoline-1 est liée a son internalisation dans ces cellules. Les béticolines ont agi sur les ions Ca#2#+ intracellulaires puisque l'ionophore calcique A23187 a aboli partiellement l'inhibition de la prolifération cellulaire. De plus les béticolines-1 et -2 mais pas -3 ont bloqué la translocation de P21 ras vers la membrane plasmique et provoque son accumulation dans le cytosol. Ceci empêche la transduction du signal biogénique. Enfin les béticolines-1 et -2 ont induit dans les cellules RTAC après 2 ou 3 jours de traitement, une inhibition de la stéroïde 11beta-hydroxylase. Par contre, elles se sont montrées inactives vis à vis des autres enzymes de la stéroidogénèse. Les béticolines actives apparaissent donc comme des agents thérapeutiques potentiels contre les cancers dépendant de ras ou des outils pharmacologiques pour leur étude. Enfin elles peuvent se révéler des outils intéressants en endocrinologie ou pathologie endocrinienne des stéroïdes.
8
Perrin, Anne. « Hydroxylases stéroïdogéniques : purification et régulation de la 17[alpha]-hydroxylase-C17,20-lyase microsomiale : étude par RMN du phosphore 31 des mitochondries corticosurrénaliennes ». Grenoble 1, 1991. http://www.theses.fr/1991GRE10071.
Texte intégralRésumé :
La 17 alpha-hydroxylase-c17,20-lyase (17 oh-l) bovine est un systeme enzymatique microsomial qui presente une dualite de fonction: 17-hydroxylation de la pregnenolone et de la progesterone, puis coupure c17-20 de la 17-oh-pregnenolone. Elle occupe donc un role cle pour l'orientation de la steroidogenese vers la synthese de mineralo, gluco- ou sexocorticoides. L'activite lyase est tres faible dans le cortex surrenal tandis qu'elle est elevee dans les testicules. La 17 oh-l a ete purifiee a partir de testicules et de cortex surrenal bovins et des anticorps ont ete obtenus. Au cours de la purification, la difference entre les rapports des activites hydroxylase/lyase des deux organes disparait, ce qui suggere une modulation par l'environnement membranaire. Plusieurs aspects de la regulation de la 17 oh-l ont ete abordes; dans les cellules corticosurrenales, le transforming growth factor beta inhibe sa synthese au niveau transcriptionnel. In vitro, la regulation des deux activites par l'environnement membranaire a ete examinee: la difference d'activite lyase entre les deux tissus resulte de son inhibition dans le cortex surrenal, par un element appartenant a la fraction des lipides neutres ou une conformation des proteines induite par leur presence. Une seconde partie de ce travail concerne l'etude, par rmn du #3#1p, des mitochondries corticosurrenales bovines. L'identification des principaux metabolites phosphores, l'evaluation de leurs concentrations et l'acces a la valeur du ph matriciel ont permis de suivre la synthese d'atp. Elle s'accompagne d'une entree de phosphate inorganique et d'une basification du milieu extramitochondrial. Ces deux phenomenes n'ont pas lieu en presence d'un substrat steroide, la synthese d'atp est momentanement stoppee durant l'hydroxylation
9
Sicard, Flavie. « Contribution à l'étude du contrôle de la stéroi͏̈dogénèse surrénalienne par la neurotensine chez la grenouille et chez l'homme ». Rouen, 2004. http://www.theses.fr/2004ROUES020.
Texte intégralRésumé :
La neurotensine (NT) est un peptide de 13 acides aminés présent tant au niveau central que périphérique. La NT agit à la fois comme un neurotransmetteur, une neurohormone ou un facteur trophique. A ce jour, trois récepteurs de la NT ont été identifiés chez les mammifères et nommés NTR1, NTR2 et NTR3. Chez les vertébrés, la stéroi͏̈dogenèse surrénalienne est soumise à un contrôle multifactoriel qui met en jeu des facteurs humoraux, nerveux et paracrines. La présence de NT a été rapportée dans les cellules chromaffines et des fibres nerveuses de la glande surrénale chez diverses espèces de vertébrés, suggérant que la NT pourrait être un facteur neuroendocrinien de régulation de la stéroi͏̈dogenèse surrénalienne. Les objectifs de notre travail étaient donc i) de rechercher la présence de la NT dans la surrénale chez la grenouille verte Rana esculenta et l'homme, ii) de déterminer les effets potentiels de la NT sur la stéroi͏̈dogenèse surrénalienne et iii) de caractériser le récepteur impliqué dans les effets corticotropes du peptide. Nos résultats démontrent que la NT, localisée dans des fibres nerveuses parcourant la glande surrénale de la grenouille, stimule la sécrétion de corticostérone et d'aldostérone par l'intermédiaire de deux récepteurs qui s'apparentent aux NTR1 et NTR2 décrits chez les mammifères. Nous avons également démontré que la [DTyr11]NT stimule l'activité sécrétrice des cellules corticosurrénaliennes via l'activation d'un récepteur différent de ceux de la NT. Enfin, certains fragments issus de la NT comme la NT1-11 augmentent la production de corticostérone et d'aldostérone par le biais d'un quatrième type de récepteur. Chez l'homme, la NT1-11 inhibe la sécrétion basale de cortisol par des cellules corticosurrénaliennes via l'activation d'un récepteur capable de lier également la NT. Ces données suggèrent pour la première fois l'existence de deux sous-types de récepteurs de la NT, différents des NTR1 et NTR2 de mammifères, exprimés au niveau surrénalienNeurotensin (NT) is a tridecapeptide which acts as a neurotransmitter and/or a neuromodulator in the central nervous system and displays a wide spectrum of biological effects. NT is also abundant in the periphery where it is thought to function as a neurohormone. In mammals, the effects of NT are mediated by three types of receptors i. E. NTR1, NTR2 and NTR3. In vertebrates, the secretory activity of adrenocortical cells is under multifactorial control. Beside the humoral regulation there is clear evidence that various factors released by nerve endings, chromaffin cells or endothelial cells can also participate in the regulation of the activity of adrenocortical cells. The presence of NT has been reported in chromaffin cells and nerve fibers located in the adrenal gland of various vertebrate species, suggesting that NT could act as a neuroendocrine factor involved in the regulation of steroidogenesis. The aim of the present study was therefore three-fold i) to examine the presence of NT in the frog (Rana esculenta) and human adrenal gland, ii) to determine the potential effects of NT on adrenal steroidogenesis in both species, and iii) to characterize the receptor(s) involved in the corticotropic effect of the peptide. Our results demonstrate that NT, located in nerve fibers innervating the adrenal gland of amphibians, may stimulate corticosteroid secretion through two receptors which exhibit similarities with mammalian NTR1 and NTR2. We have also shown that [DTyr11]NT increases corticosteroid secretion through interaction with a third type of receptor which is not activated by NT. Finally, the N-terminal NT fragments are able to stimulate corticosterone and aldosterone secretion though activation of a fourth type of receptor. In human, NT1-11 inhibits cortisol secretion via a receptor which also binds NT. These data suggest for the first time the occurrence of two additionnal NT receptor subtypes, besides mammalian NTR1 and NTR2, in the adrenal cortex
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Guyot, Annick. « Effets de l'angiotensine II sur les courants ioniques membranaires des cellules isolées de la zone fasciculée de la glande surrénale de veau ». Lyon 1, 1998. http://www.theses.fr/1998LYO10285.
Texte intégralRésumé :
Les effets de l'angiotensine ii (ang ii) sur les courants ioniques membranaires des cellules isolees de la zone fasciculee de la glande surrenale de veau ont ete etudies en utilisant la technique de potentiel impose par une seule micropipette sur cellule entiere maintenue a un potentiel de 10 mv. L'ang ii (100 nm) active un courant sortant transitoire caracterise par un pic initial suivi d'un plateau a decours variable. Cette phase, associee a une augmentation de la conductance membranaire se termine par un courant tardif moins sortant que le courant controle. Deux composantes de courant ont ete detectees pendant la phase transitoire : l'une portee par le k + est inhibee par l'apamine, l'autre portee par le cl est bloquee par le dpc. Nous montrons que ces deux composantes du courant sortant sont activees par une augmentation de la ca 2 + i qui, d'apres les resultats obtenus a l'aide des techniques d'imagerie par fluorescence (fluo3), presente elle aussi un decours transitoire. Les sources de ca 2 + ont ete identifiees comme etant intra- et extracellulaires. Les resultats revelent que, dans nos conditions experimentales, l'influx de ca 2 + s'effectue par une autre voie que les canaux ca 2 + sensibles au potentiel caracterises dans ce type cellulaire. Ces canaux sont de type transitoire et maintenu et nous montrons que l'ang ii a une action inhibitrice sur le courant de type maintenu. Le courant tardif est associe, selon les cellules, a une diminution ou a une augmentation de la conductance membranaire. Bien que l'inhibition d'une conductance potassique ou l'activation d'un courant cationique ne puisse etre ecartee, nous avons caracterise, a l'aide de techniques biochimiques sur vesicules plasmiques, la presence d'un echangeur na +/ca 2 + qui pourrait rendre compte en partie du courant tardif. Les relations precises entre la reponse membranaire complexe induite par l'ang ii et l'activite secretoire des cellules fasciculees restent a preciser.
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Guidicelli, Claudette. « Étude du cytochrome P-450 mitochondrial de coupure de la chaîne latérale du cholestérol (cortex surrénal bovin) : I, Étude par marquage de spin et résonance paramagnétique électronique : II, Activité enzymatique et mouvements du cholestérol dans la mitochondrie ». Université Joseph Fourier (Grenoble), 1986. http://www.theses.fr/1986GRE18002.
Texte intégral
12
Val, Pierre. « Mécanismes moléculaires du contrôle hormonal et de la spécificité tissulaire de l'expression de l'aldose réductase MVDP/AKR1-B7 dans le canal déférent et le cortex surrénalien : analyse comparée chez le rat et la souris ». Clermont-Ferrand 2, 2003. http://www.theses.fr/2003CLF21420.
Texte intégralRésumé :
Le gène MVDP/Akr1-b7 (mouse vas deferens protein/aldo-keto-reductase 1-b7) code une protéine androgéno-dépendante du canal déférent de la souris, aussi exprimée dans la zone fasciculée du cortex surrénalien, sous contrôle majoritaire de l'ACTH où elle prend en charge la détoxication de l'isocaproaldéhyde, produit lors de la première étape de la stéroïdogenèse. AKR1-B7 est aussi exprimée dans l'ovaire et le testicule sous contrôle des gonadotropines. Par une étude comparée de l'expression de AKR1-B7 et de l'activité de son promoteur dans le canal déférent de rat et de souris nous avons mis en évidence une région promotrice de 77 pb, spécifique de la souris, dérivée d'un élément LINE. Le promoteur akr1-b7 de rat, insensible aux androgènes, devient fortement sensible après insertion de ces 77 pb qui comportent un ARE et un site NF-1, démontrant que celles-ci sont requises pour la forte expression andogéno-régulée dans le canal déférent de souris. L'analyse comparée dans la surrénale, a permis de mettre en évidence deux SFREs potentiels conservés (-458 et -503), siués dans le fragment de promoteur -510/+41 qui permet l'expression hormono-régulée de transgènes dans la zone fasciculée du cortex surrénalien. Nous avons démontré que le site -458 est activé par SF-1 et qu'il joue un rôle essentiel dans l'activité basale et induite par l'AMPc du promoteur -510/+41 dans les cellules corticosurrénaliennes Y1, bien qu'il n'intégre pas la réponse à l'AMPc par lui-même. Le site -503 est activé par la liaison d'un complexe protéique spécifique de la surrénale, dans les cellules Y1. Il participe à l'activité basale et induite du promoteur et présente une sensibilité intrinsèque à l'AMPc dans les cellules Y1. Nous avons aussi montré que DAX-1 est capable de réprimer l'activité du promoteur akr-1-b7 via les différents SFREs. Cette acrivité répressive requiert l'intégrité de l'ensemble des SFREs du promoteur
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Brami, Brigitte. « Modulation de l'activité adénylate cyclase du cortex surrénal bovin par l'angiotensine II et les activateurs potentiels de la protéine kinase C ». Grenoble 1, 1988. http://www.theses.fr/1988GRE10015.
Texte intégral
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Oikonomakos, Ioannis. « Vers la génération de cellules corticosurrénales à partir de cellules souches pluripotentes ». Electronic Thesis or Diss., Université Côte d'Azur, 2021. http://www.theses.fr/2021COAZ6038.
Texte intégralRésumé :
A corticosurrénale(CS)est un organe central stéroïdogénique qui joue un rôle clé dans le maintien de l'homéostasie de l'organisme. Plusieurs maladies des surrénales(par exemple l'hyperplasie congénitale des surrénales(HCS))pourraient en principe être réparées en corrigeant la mutation (par exemple par recombinaison) ou en introduisant un transgène portant une forme sauvage du gène muté pour restaurer de façon permanente l'activité enzymatique. Les données de notre groupe et d'autres groupes démontrent un renouvellement rapide du cortex surrénalien. Ainsi, les cellules stéroïdogéniques(CSG) qui ont été génétiquement modifiées sont susceptibles d'être rapidement remplacées par amplification des progéniteurs pouvant encore porter la mutation. La correction génétique devra donc cibler les populations de cellules souches surrénaliennes(CSS)plutôt que les CSGs entièrement différenciées, et l'approche in vitro semble être la meilleure. En principe, deux voies alternatives pourraient être envisagées :1) Génération de IPSC à partir d'un patient, correction de la mutation et différenciation ultérieure vers la lignée surrénalienne avec transplantation dans la surrénalienne du patient.2) Isolement et culture de CSS, correction in vitro suivie d'une transplantation chez le patient. Le but de ce projet est d'établir un protocole pour la différenciation in vitro de cellules ES de souris(mESCs)en cellules progénitrices surrénaliennes.Pour atteindre cet objectif, j'ai décidé de développer une procédure de différenciation par étapes qui suit autant que possible le développement normal. Le primordium adréno-gonadique(AGP)se développe à l'interface du mésoderme intermédiaire antérieur et du mésoderme latéral. J'ai développé un protocole robuste qui permet la différenciation in vitro de mESC via l'état EpiSC et l'état de ligne primitive, en mésoderme intermédiaire antérieur et latéral. Une différenciation correcte a été démontrée par l'expression de marqueurs spécifiques du type cellulaire, notamment T pour la ligne primitive, Osr1, LIM1, PAX2, Foxf1, Prrx1 et WT1 pour la lignée du mésoderme. Les voies de signalisation qui sous-tendent la spécification des organes stéroïdogéniques ne sont pas encore bien établies. Pour mieux comprendre ce processus, nous avons établi une collaboration avec le professeur Serge Nef(Université de Genève),dont le laboratoire a réalisé des expériences RNA-Seq sur cellules uniques à des moments clé de la différenciation adréno-gonadique et de la séparation du AGP en AP et GP. En utilisant les informations extraites de cet atlas cellulaire, et en testant divers activateurs et inhibiteurs de voies, j'ai pu orienter davantage la différenciation vers le destin stéroïdogénique précoce, comme le démontre la régulation à la hausse de Nr5a1, un régulateur principal de la stéroïdogénèse. En testant une série de protéines de la matrice extracellulaire, j'ai pu montrer que la FN1 augmentait la production de cellules positives NR5A1. L'induction de la voie PKA a d’avantage augmenté les niveaux d'expression de NR5A1 dans ces conditions, tant au niveau de l'ARN que de la protéine ; mais toujours en nombre limité pour revendiquer une grande efficacité de protocole. En outre, la culture des cellules en 3D a induit Nr5a1 et d'autres marqueurs précoces de progéniteurs surrénaliens par rapport aux marqueurs gonadiques dans des conditions spécifiques. Des recherches supplémentaires sur les aspects clés de la différenciation in vitro sont nécessaires pour établir un protocole robuste d'organoïdes surrénaliens. Enfin, j'ai pu partiellement transposer le protocole aux hIPSC, dans lesquelles les cellules étaient correctement destinées à la lignée des progéniteurs stéroïdogéniques précoces. L'ensemble de ces résultats fournit une feuille de route pour la différenciation des cellules souches pluripotentes en progéniteurs surrénaliens et constituera la base de futurs travaux sur les thérapies de transplantation des maladies surrénaliennesThe adrenal cortex (AC) is a central steroidogenic organ with key functions in maintaining body homeostasis. Several adrenal diseases (eg Congenital adrenal hyperplasia (CAH)) could in principle be repaired by correcting the mutation (e.g. via recombination) or introduction of a transgene carrying a wildtype form of the mutated gene to permanently restore enzyme activity. However, data from our and other groups demonstrate a rapid turnover of the adrenal cortex. Thus, steroidogenic cells that have been genetically modified are likely to be rapidly replaced by amplifying progenitors that may still carry the mutation. Genetic correction will therefore need to target adrenal stem cell (ASC) populations rather than fully differentiated steroidogenic cells, and in vitro seems to be the better approach. In principle two alternative routes could be envisaged: 1) Generation of induced pluripotent cells (IPSC) from a patient, correction of the mutation using a CRISPR/Cas9 approach and subsequent differentiation towards the adrenal lineage with transplantation in/under the patient's adrenal capsule. 2) Isolation and culture of ASCs, correction in vitro followed by transplantation back into the patient. Aim of this project is to establish a protocol for the in vitro differentiation of mouse ES cells (mESCs) into adrenal progenitor cells and to evaluate their suitability for transplantations under the adrenal capsule. To achieve this goal, I decided to develop a stepwise differentiation procedure that follows as much as possible normal development. The adreno-gonadal primordium (AGP) develops at the interface of the anterior intermediate and lateral plate mesoderm. I developed a robust protocol that allows in vitro differentiation of mESCs via the EpiSC and primitive streak state, into the anterior intermediate and lateral plate mesoderm. Proper differentiation was demonstrated by the expression of cell type specific markers including Brachyury (T) for the primitive streak, Osr1, Gata4 and WT1 for mesodermal lineage, LIM1 and PAX2 for the anterior intermediate, and Foxf1 with Prrx1 for lateral plate mesoderm. The pathways underlying the specification of steroidogenic organs are not yet well established. To obtain further insight into this process, we established a collaboration with Prof. Serge Nef (University of Geneva), whose laboratory has performed single cell RNA-Seq experiments at critical time points of adreno-gonadal differentiation and separation of the adreno-gonadal primordium (AGP) into adrenal primordium (AP) and gonadal primordium (GP). Using information extracted from this cell atlas, and by testing various pathway activators and inhibitors, I was able to further orient differentiation towards the early steroidogenic fate as demonstrated by the upregulation of Nr5a1, a master regulator of steroidogenesis. By testing a range of extracellular matrix proteins, I could show that fibronectin 1 (FN1) enhanced the production of NR5A1 positive cells. Moreover, induction of the PKA pathway using a cAMP derivative (8-Br-cAMP) further increased NR5A1 expression levels in these conditions, both at the RNA and protein level; but still in limiting numbers to claim high efficiency of the protocol. In addition, culturing cells in 3D induced Nr5a1 and other early adrenal progenitor markers over gonadal ones in specific conditions. Further investigation for key aspects of the in vitro differentiation is needed to establish a robust adrenal organoid protocol. Finally, I could partially translate the protocol to hIPSCs, in which the cells were fated correctly for the early steroidogenic progenitor lineage. Taken together these results provide a road map for differentiation of pluripotent stem cells into adrenal progenitors and will form the basis for future work towards transplantation therapies of adrenal diseases
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Ciais, Delphine. « Angiogenèse hormono-régulée dans le cortex surrénal : régulation par l'ACTH de l'expression de facteurs angiogènes et de la protéine à doigt de zinc Tis11b ». Université Joseph Fourier (Grenoble), 2003. http://www.theses.fr/2003GRE10190.
Texte intégral
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Daniel, Sylvie. « Cisp : une protéine adhésive de la famille des thrombospondines sécrétée par les cellules de cortex surrénal en réponse à l'ACTH : étude moléculaire et fonctionnelle ». Grenoble 1, 1993. http://www.theses.fr/1993GRE10106.
Texte intégralRésumé :
Le traitement des cultures primaires de cellules corticosurrenaliennes bovines par des concentrations nanomolaires d'acth induit une augmentation de 10 fois de la synthese d'une proteine secretee de masse moleculaire apparente 195 kda en gel de polyacrylamide en presence de sds en conditions reductrices. Cette proteine a ete appelee cisp (corticotropin-induced secreted protein). L'induction de la secretion de cisp par l'acth est reproduite par les analogues de l'ampc et les activateurs de l'adenylcyclase. Cisp a ete purifiee a homogeneite apparente avec un rendement total de 43% par chromatographie d'affinite sur heparine-agarose et d'echange d'ions sur mono q. La sequence en acides amines nh#2-terminale et celle de plusieurs peptides tryptiques ont revele que cisp est apparentee par sa structure aux membres de la famille des thrombospondines (tsp). Cisp bovine semble etre plus homologue a tsp#2 de souris (85% d'identite dans la partie nh#2-terminale comportant 29 acides amines) qu'a tsp#1 de souris (18%) d'identite dans la meme region). Sous sa forme native, cisp est composee de trois monomeres relies par des ponts disulfures. Nous avons observe par ailleurs que cisp lie le calcium et que c'est une proteine adhesive pour les cellules steroidogenes du cortex surrenal et les cellules endotheliales de capillaires du cortex surrenal. Ainsi, cisp possede les proprietes a la fois structurales et fonctionnelles des thrombospodines mais en differe de par la regulation de son expression. Elle pourrait etre impliquee dans les interactions cellulaires dans le cortex surrenal et jouer un role dans le maintien de la vascularisation tres developpee de ce tissu
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Chorvatova, Alzbeta. « Propriétés électrophysiologiques des cellules isolées, en culture, de la zone fasciculée de la glande surrénale bovine : action de l'angiotensine II ». Lyon 1, 1995. http://www.theses.fr/1995LYO10243.
Texte intégralRésumé :
L'angiotensine ii (ang ii) est l'hormone principale du systeme renine-angiotensine, provoquant entre autre la secretion d'hormones steroides. Les etudes biochimiques ont montre que l'ang ii induit la secretion de glucocorticoides (cortisol, corticosterone) synthetises dans la zone fasciculee du cortex surrenal bovin. Ce travail concerne les effets de l'ang ii sur les proprietes electrophysiologiques des cellules fasciculees, isolees du cortex surrenal de buf, en culture primaire. La technique du patch clamp en configuration de cellule entiere a ete utilisee soit en membrane rompue, soit en membrane perforee a l'aide d'un antibiotique: l'amphothericine b. Notre etude met en evidence la presence d'un courant transitoire sortant potassique de type i#a et de courants entrants de nature calcique. Une reponse biphasique est induite par l'ang ii (100 nm) sur le pic de courant transitoire sortant, qui augmente puis diminue. Un effet biphasique de l'ang ii est egalement decrit sur le potentiel de membrane (qui varie autour de -40 mv), ou une hyperpolarisation rapide est suivie d'une depolarisation plus lente. Alors que la phase de depolarisation pourrait impliquer plusieurs conductances, nous montrons que l'hyperpolarisation est due a une augmentation transitoire d'une conductance potassique, dependant du calcium libre intracellulaire. Tous ces effets sont lies a l'activation des recepteurs a l'ang ii de type at#1
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Wils, Julien. « Contribution à l'étude de l'effet de la substance P sur la sécrétion d'aldostérone dans la glande surrénale humaine normale ». Thesis, Normandie, 2018. http://www.theses.fr/2018NORMR011.
Texte intégralRésumé :
La sécrétion d'aldostérone par la glande surrénale est principalement contrôlée par le système rénine-angiotensine circulant (SRA) et la kaliémie. La synthèse de l'aldostérone est également influencée par les facteurs paracrines intra-surrénaliens, y compris les neuropeptides. En particulier, les tachykinines, comme la substance P (SP), peuvent être libérées par les terminaisons nerveuses dans le cortex surrénalien. Le rôle de la SP dans la régulation de la fonction surrénalienne a été évalué chez l'animal mais rarement étudié chez l'homme. Le but de la présente étude est d'explorer le rôle de la SP dans le contrôle de la synthèse des minéralocorticoïdes dans la glande surrénale humaine. Des expériences in vitro conduites dans des échantillons surrénaliens normaux révèlent l'expression de SP codée par TAC1 qui est détecté par immunohistochimie dans des fibres nerveuses non-adrénergiques non-cholinergiques dans la zone glomérulée. Les fibres SP-positives établissent des contacts étroits avec des cellules productrices d'aldostérone qui expriment le récepteur NK1 (NK1R), récepteur de la SP. La SP stimule la production d'aldostérone à partir de cellules corticosurrénales cultivées, un effet qui est inhibé par l'aprépitant, antagoniste NK1R. L'action de la SP est relayée par la voie ERK et implique une régulation à la hausse de plusieurs gènes codant pour des enzymes de la stéroïdogénèse. Le rôle physiologique de la SP dans la régulation de la sécrétion d'aldostérone a été évalué à l'aide d'un essai clinique prospectif, contrôlé par placebo, de l'impact de l'aprépitant sur les concentrations plasmatiques et urinaires d'aldostérone chez des volontaires sains. L'aprépitant a réduit la production quotidienne d'aldostérone et la concentration plasmatique d'aldostérone (CPA) dans le décubitus, mais n'a pas modifié les CPA en position debout. Ces données montrent que la SP exerce un tonus stimulant sur la production d'aldostérone chez l'hommeAldosterone secretion by the adrenal gland is principally under control of the circulating renin-angiotensin system (RAS) and kalemia. Aldosterone synthesis is also influenced by intra-adrenal paracrine factors including neuropeptides. Especially, tachykinins, like substance P (SP), can be released by nerve endings in the adrenal cortex. The role of SP in the regulation of the adrenal function has been evaluated in animals but only scarcely investigated in humans. The aim of the present study is to explore the role of SP in the control of mineralocorticoid synthesis in the human adrenal gland. In vitro experiments conducted in normal adrenal samples reveal expression of the TAC1 encoding SP which is detected by immunohistochemistry in non adrenergic non cholinergic nerve fibres in the zona glomerulosa. SP-positive fibres establish close contacts with aldosterone-producing cells which express the SP receptor, i.e. the NK1 receptor (NK1R). SP stimulates aldosterone production from cultured adrenocortical cells, an effect which is inhibited by the NK1R antagonist aprepitant. The action of SP is mediated by the ERK pathway and involves upregulation of several genes encoding steroidogenic enzymes. The physiological role of SP in the regulation of aldosterone secretion was further assessed through a prospective clinical placebo-controlled trial investigating the impact of aprepitant on plasma and urine aldosterone levels in healthy volunteers. Aprepitant reduced daily aldosterone production and plasma aldosterone concentration (PAC) in recumbency but did not modify PAC in upright position. These data show that SP exerts a stimulatory tone on aldosterone production in man
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Durroux, Thierry. « Les canaux calciques des cellules glomérulées de la glande surrénale de rat : mise en évidence et caractérisation par la technique du "patch-clamp" ». Montpellier 2, 1991. http://www.theses.fr/1991MON20047.
Texte intégralRésumé :
La secretion d'aldosterone et de corticosterone par les cellules glomerulees de la surrenale de rat est dependante de la concentration de calcium extracellulaire. Nous avons donc realise une etude des canaux calciques. Grace a la technique du patch-clamp, nous avons pu mettre en evidence trois composantes calciques resultant de l'activation de trois types de canaux calciques sensibles au voltage. Les proprietes de ces canaux etant tres similaires a celles des canaux calciques presents dans les neurones de poulet, nous avons appele ces courants t, n et l. La composante t est une composante transitoire bas-seuil tandis que les composantes n et l sont des composantes haut-seuil tandis que les composantes n et l sont des composantes haut-seuil qui sont respectivement transitoire et soutenue. Par ailleurs, nous avons identifie trois types de canaux de fond permeables au calcium que nous avons appeles b#1, b#2 et b#3. La probabilite d'ouverture du canal b#1 est maximale a 70 mv et diminue lorsque le potentiel augmente ou diminue. Les canaux b#2 et b#3 ne semblent pas tres sensbles au potentiel. Aucun de ces canaux de fond permeables au calcium n'est sensible aux dihydropyridines. Par la suite, nous avons etudie le controle exerce par le principale secretagogue des cellules glomerulees de rat, l'adrenocorticotropine, sur l'activite des canaux t et l. Nous avons pu montre que cette hormone inhibe la composante t selon un processus biphasique et augmente l'amplitude de la composante l. L'analyse des effets de l'edrenocorticotropine sur les potentiels d'action confirme les resultats obtenus lors de l'etude realisees sur les courants calciques
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Etchegorry, Nicole. « Evaluation de l'activité de l'axe corticotrope en fonction de la répartition abdominale (androi͏̈de) ou périphérique (gynoi͏̈de) du tissu adipeux chez la femme obèse. Intérêt du dosage du cortisol salivaire ». Bordeaux 2, 1998. http://www.theses.fr/1998BOR23095.
Texte intégral
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Osman, Hanan. « Géranylgeranylation et farnésylation des protéines Ras dans les cellules corticosurrénales transformées par l'oncogène Ras#e#j ; l'effet antiprolifératif de la déhydroépiandrostérone (DHEA) est-il lié à l'inhibition de l'isoprénylation ? » Dijon, 1997. http://www.theses.fr/1997DIJOS028.
Texte intégralRésumé :
Ce travail a concerné l'étude des modifications post-traductionnelles des protéines Ras, et des effets de la déhydroépiandroséerone (DHEA) sur l'isoprénylation des protéines Ras. Le travail a été réalisé sur les cellules RTAC (RAS transformed adrenocortical) issues de la corticosurrénale de rat nouveau-né et transformées par l'oncogène HA-RAS#E#J. La protéine Ras doit impérativement se loger a la face interne de la membrane plasmique pour remplir sa fonction biologique. Cette translocation n'est possible qu'après isoprénylation du résidu cystéinyle situé près de l'extrémité carboxyle terminale de la protéine. Jusqu'à présent, il avait été admis que toutes les protéines Ras étaient farnesylées. Apres avoir démontré que les cellules RTAC surproduisent les protéines KI-RAS, nous avons montré que dans ces mêmes cellules les protéines KI-RAS sont géranylgéranylées en plus d'être farnésylees (Osman et coll. , biochem. Biophys. Res. Commun. , 231, 789-792, 1997). Ce résultat original est d'une importance fondamentale pour le développement de nouveaux inhibiteurs dirigés contre la géranylgéranyl transférase I qui pourraient être des anticancéreux potentiels et constitueraient une nouvelle voie thérapeutique pour le traitement des tumeurs dépendantes de l'oncogene KI-RAS. Dans la seconde partie de ce travail, nous avons montré que la DHEA, un stéroïde corticosurrénalien décrit pour avoir une action préventive contre la carcinogenèse chez le rat et la souris mais aussi chez l'homme, inhibe de manière réversible et dépendante de la dose la prolifération des cellules RTAC avec une CI#5#0 DE 50 M. Nous avons démontré que la DHEA n'induit pas l'apoptose dans les cellules RTAC, mais inhibe l'isoprénylation des protéines cellulaires et en particulier des protéines RAS. Le site d'inhibition se situe en aval de l'HMG-COA réductase, et vraisemblablement au niveau de la géranylgéranyl transférase I. Les résultats de ce travail ont été soumis à Journal of Biological Chemistry.
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Grazzini, Eric. « Rôle endrocrine et paracrine de la vasopressine dans la physiologie de la glande surrénale ». Montpellier 2, 1996. http://www.theses.fr/1996MON20058.
Texte intégralRésumé :
La vasopressine (avp) est une neurohormone qui transmet des informations a travers l'organisme par l'intermediaire de recepteurs couples a des proteines g. L'avp regule la secretion de steroides de la glande surrenale des mammiferes. Au cours de cette etude, nous nous sommes interesses a la voie privilegiee (paracrine ou endocrine) par laquelle l'avp peut exercer ses effets sur la glande surrenale. Nous montrons que l'avp est secretee par la zone medullaire de la glande et que ces secretions ont la possibilite d'activer des recepteurs de sous-type v1a presents dans le cortex, ou des recepteurs de sous-type v1b presents dans la medulla. L'activation de ces deux sous-types de recepteurs induit une augmentation de la concentration en calcium intracellulaire a l'origine d'une secretion de catecholamines par la zone medullaire et d'une secretion de steroides par la zone corticale. L'existence au niveau des cellules du cortex de recepteurs a diverses hormones steroidogeniques nous a permis de montrer qu'il existe des regulations reciproques: ainsi, une stimulation par l'acth inhibe completement la reponse calcique induite par l'avp ou l'angiotensine ii
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Drelon, Coralie. « Tumorigenèse, progression tumorale et zonation fonctionnelle du cortex surrénalien ». Thesis, Clermont-Ferrand 2, 2014. http://www.theses.fr/2014CLF22536/document.
Texte intégralRésumé :
Les carcinomes cortico-surrénaliens (CCS) sont des tumeurs malignes rares de mauvais pronostic et pour lesquelles les options thérapeutiques efficaces sont inexistantes. Il est donc indispensable de comprendre les mécanismes moléculaires impliqués dans le développement des CCS, afin d’améliorer leur prise en charge. Les deux altérations les plus fréquentes dans les CCS sont une surexpression du facteur de croissance IGF2 et l'activation constitutive de la voie Wnt/β-caténine. Le laboratoire a mis en évidence le rôle oncogénique de la β-caténine à l'aide d'un modèle murin (souris ΔCat) présentant une activation constitutive de la β-caténine dans la cortico-surrénale. Toutefois, la faible pénétrance du phénotype malin suggère la nécessité d'autres altérations pour la progression tumorale. L’objectif initial de ma thèse était de tester le pouvoir oncogénique de IGF2, seul ou en association avec l’activation constitutive de la β-caténine. Les modèles de surexpression de Igf2 dans la cortico-surrénale nous ont permis de montrer que Igf2 n'initie pas le développement de tumeurs cortico-surrénaliennes. Dans un contexte d'activation de la β-caténine, la surexpression de Igf2 favorise le développement tumoral à des stades tardifs. Toutefois la formation de tumeurs malignes reste un évènement rare. Ces résultats suggèrent donc que la surexpression de Igf2 et l'activation de la β-caténine ne sont pas suffisantes dans notre modèle pour induire le développement de CCS. Une analyse rétrospective des données de transcriptome nous a permis de mettre en évidence une surexpression de l’oncogène putatif et histone méthyl-transférase EZH2, qui est associée à un mauvais pronostic. Mes travaux in vitro suggèrent que EZH2 est surexprimé en réponse à une surexpression des facteurs E2F et qu’il pourrait être impliqué dans le contrôle de la prolifération, de l'apoptose et de certaines caractéristiques tumorales des cellules cortico-surrénaliennes humaines H295R. Des inhibiteurs pharmacologiques étant disponibles, EZH2 pourrait constituer une cible thérapeutique intéressante pour le traitement des CCS. En parallèle de ces travaux, nous avons cherché à identifier les mécanismes impliqués dans la zonation du cortex surrénalien. Au cours du renouvellement tissulaire, les cellules acquièrent d’abord une identité glomérulée puis fasciculée. L'identité de la zone glomérulée repose en partie sur l'activité de la voie Wnt/β-caténine. Cette voie de signalisation induit l'expression de gènes essentiels à l'identité de cette zone et inhibe l'identité fasciculée. La différenciation fasciculée des cellules doit donc reposer en partie, sur l'inhibition de cette voie de signalisation. Nous avons donc émis l'hypothèse que la signalisation PKA, activée dans la zone fasciculée par la liaison de l'ACTH à son récepteur MC2R, s'oppose à l'activité de la β-caténine pour permettre la différenciation fasciculée. A l'aide d'approches pharmacologiques et génétiques, nous avons pu mettre en évidence que l'activation de la PKA inhibe la voie Wnt/β-caténine dans le cortex surrénalien et que ceci est à l'origine d'une perte de la zone glomérulée au profit d'une expansion de la fasciculée. L'effet de la PKA sur la voie Wnt résulte au moins en partie de l'inhibition de l'expression de Wnt4 en réponse à l'activation de la PKA. En effet une diminution d'expression de Wnt4 est observée en réponse à l'activation de la PKA dans la cortico-surrénale et l'invalidation de Wnt4 spécifiquement dans le cortex induit un phénotype proche de celui observé lors de l'activation de la PKA. Au delà des mécanismes moléculaires de la zonation, nous avons également montré que l’effet inhibiteur de la PKA sur la signalisation Wnt était capable de s’opposer aux effets oncogéniques de la β- caténine dans la cortico-surrénale. Ces observations pourraient s’avérer pertinentes, la voie de signalisation ACTH/PKA étant inhibée dans les CCSAdrenocortical carcinoma (ACC) is a rare tumour associated with poor prognosis and for which, efficient therapeutic approaches are not available. It is therefore essential to understand the molecular mechanisms involved in CCS development in order to improve their clinical management. The two most frequent alterations in ACC are overexpression of IGF2 and constitutive activation of β-catenin. Our lab has previously demonstrated the oncogenic activity of β-catenin in the adrenal cortex by developing a mouse model of constitutive β-catenin activation (ΔCat mice). However, the low malignant progression in ΔCat mice suggests that other alterations are necessary for acquisition of malignancy. The initial aim of my thesis was to test the oncogenic potential of IGF2 alone or associated with constitutive β-catenin activation. We showed that overexpression of Igf2 in the adrenal cortex does not trigger adrenal cortex tumourigenesis. In a context of constitutive β-catenin activation, overexpression of Igf2 promotes tumour development at later stages. However the formation of malignant tumours remains a rare event. These data suggest that the overexpression of Igf2 and constitutive activation of β-catenin are not sufficient to trigger malignant tumour progression. Retrospective analysis of available ACC transcriptome data highlighted overexpression of the putative oncogene and histone methyltransferase EZH2 in ACC, which was associated with poor prognosis. My in vitro studies suggest that EZH2 is overexpressed in response to overexpression of E2F transcription factors and that it could be involved in control of proliferation, apoptosis and oncogenic capacities of adrenocortical carcinoma cells H295R. Interestingly, the availability of pharmacologic inhibitors suggests that EZH2 could be a novel therapeutic target for the treatment of ACC. In parallel, we sought to identify the mechanisms involved in zonation of the adrenal cortex. During adrenal cortex renewal, cells first differentiate as glomerulosa before switching to fasciculata as they move within the cortex. Establishment of glomerulosa identity relies on the Wnt/β-catenin pathway, which induces expression of genes involved in glomerulosa differentiation and inhibits fasciculata identity. These data suggest that β-catenin has to be inhibited in order to allow the lineage conversion from glomerulosa to fasciculata. We thus postulated that PKA signalling pathway, which is triggered by ACTH binding to its receptor MC2R in zona fasciculata, played a role in repressing Wnt/β-catenin signalling to allow fasciculata differentiation. Using pharmacologic and genetic models, we have shown that PKA inhibits β-catenin signalling, which leads to loss of zona glomerulosa and expansion of zona fasciculata. The inhibitor effect of PKA on β-catenin pathway could be the result of decreased expression of Wnt4. Indee, a decrease of Wnt4 expression is observed in response to PKA activation and inactivation of Wnt4 in the adrenal cortex phenocopies PKA activation. We have also shown that PKA inhibits oncogenic effects of β-catenin in the adrenal cortex. The observation of decreased ACTH/PKA signalling in ACC suggests that this inhibition could be relevant to human adrenal tumour development
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Navarranne, Anne. « Syndrome de Cushing par sécrétion ectopique d'ACTH : à propos d'un cas ». Bordeaux 2, 1989. http://www.theses.fr/1989BOR23025.
Texte intégral
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Dellu-Hagedorn, Françoise. « Vieillissement des capacités cognitives et conatives chez le rat : relations avec l'activité de l'axe corticotrope ». Bordeaux 2, 1994. http://www.theses.fr/1994BOR28319.
Texte intégral
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Assié, Guillaume. « Tumeurs de la corticosurrénale : du transcriptome aux phénotypes de sécrétion et de malignité ». Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05T054.
Texte intégralRésumé :
La corticosurrénale, portion externe des glandes surrénales, est spécialisée dans la production d’hormones stéroïdes. Elle associe trois zones concentriques, distinctes histologiquement, chacune dédiée à la production d’un type d’hormone : la glomérulée produit des minéralocorticoïdes, la fasciculée des glucocorticoïdes, et la réticulée des androgènes. La production de ces hormones est régulée par des médiateurs extracellulaires : l’ACTH active la sécrétion du cortisol en augmentant l’AMP cyclique, et l’angiotensine II active la sécrétion d’aldostérone en augmentant le calcium intracellulaire. Les tumeurs de la corticosurrénale posent le double problème de l’hypersécrétion hormonale et de la prolifération cellulaire. Les mécanismes moléculaires de ces anomalies sont mal connus. L’initiation de certaines tumeurs bénignes semble liée à l’activation de la voie de l’AMPc. Concernant les tumeurs malignes, plusieurs mécanismes de progression ont été décrits : surexpression d’IGF2, en rapport avec une isodisomie paternelle, perte de l’expression de p53, et activation de la voie Wnt. Les tumeurs malignes posent également des problèmes diagnostiques dans leurs formes limites, et leur pronostic est difficile à prédire. Les transcriptomes des tumeurs peuvent être analysés et comparés par les puces à ADN et la technique SAGE (Serial Analysis of Gene Expression). L’objectif de cette thèse est de caractériser le transcriptome de différentes tumeurs de la corticosurrénale, afin d’identifier des marqueurs diagnostiques et pronostiques, et les mécanismes moléculaires de la sécrétion hormonale pathologique, de l’initiation et de la progression tumorale. Le premier travail décrit les anomalies moléculaires de l’hyperaldostéronisme primaire. Pour cela les transcriptomes de l’adénome de Conn et de sa zone glomérulée adjacente à la tumeur (éteinte par rétrocontrôle négatif) ont été comparés par SAGE, et validés par hybridation in situ. Seules les deux enzymes terminales de la stéroïdogenèse CYP21 et CYP11B2 sont surexprimées dans le Conn. Le régulateur aigu de la stéroïdogenèse StAR, n’est pas surexprimé. Le cholestérol, substrat de la stéroïdogenèse, semble provenir des lipoprotéines HDL. Enfin la signalisation calcique, régulateur aigu de la sécrétion d’aldostérone, semble également activée dans l’hyperaldostéronisme primaire. Le deuxième travail identifie, à partir des transcriptomes, des signatures moléculaires diagnostiques et pronostiques pour les tumeurs de la corticosurrénale. Le regroupement hiérarchique non supervisé des transcriptomes de 96 tumeurs unilatérales distingue nettement tumeurs bénignes et tumeurs malignes, et identifie au sein des tumeurs malignes, deux groupes de tumeurs de pronostic très différent. Des marqueurs de récidive et de décès, basés sur la soustraction de l’expression de deux gènes, DGL7-PINK1 et BUB1B-PINK1 respectivement, donnent des prédictions très performantes comparé0s aux prédicteurs actuels. Ces travaux ouvrent des perspectives physiopathologiques originales, qui seront approfondies au laboratoire. En parallèle, la translation directe des résultats au service du patient ouvre une nouvelle voie dans la médecine moléculaire personnalisée des pathologies corticosurrénaliennes, que nous souhaitons développer d’avantageThe adrenal cortex, outer portion of the adrenal glands, is specialized in the production of steroid hormones. It contains three concentric zones, histologically distinct, each dedicated to the production of a type of hormone : the glomerulosa produces mineralocorticoids, the fasciculata glucocorticoids, androgens and reticulated. The production of this hormones is regulated by extracellular mediators : ACTH activates the cortisol secretion by increasing cyclic AMP and angiotensin II activates the aldosterone secretion by increasing intracellular calcium. Tumors of the adrenal cortex raise a dual problem of hormonal hypersecretion and cell proliferation. The molecular mechanisms of these abnormalities are poorly understood. The initiation of some benign tumors appears to be related to the activation of the cAMP pathway. On malignant tumors, several mechanisms of progression have been described : overexpression of IGF2 in connection with a paternal isodisomia, loss of heterozygosity of p53 and activation of the Wnt pathway. Malignant tumors can also be difficult to diagnose in their borderline forms, and their prognosis is difficult to predict. The transcriptomes of tumors can be analysed and compared by microarray technology and SAGE (Serial Analysis of Gene Expression). The objective of this thesis is to characterize the transcriptome of different tumors of the adrenal cortex, to identify diagnostic and prognostic makers, and molecular mechanisms of pathological hormone secretion, initiation and tumor progression. The first paper dedscribes the molecular abnormalities of primary aldosteronism. For this, the transcriptomes of Conn's adenoma and its adjacent zona glomerulosa to the tumor (switched off by negative feedback) were compared with SAGE, and validated by in situ hybridization. Only the two terminal enzymes of steroidogenesis CYP21 and CYP11B2 are overexpressed in the Conn. Acute regulator of steroidogenesis StAR is not overexpressed. Cholesterol substrate for steroidogenesis, seems to come from HDL cholesterol. Finally calcium signaling, that controls the acute aldosterone secretion seems also activated in primary aldosteronism. The second work identifies, from the transcriptome, the diagnostic and prognostic molecular signatures for tumors of the adrenal cortex. Unsupervised hierarchical clustering of transcriptomes of 96 unilateral tumors clearly distinguished benign and malignant tumors, and identified in malignant tumors, two groups of tumors of very different prognosis. Makers of recurrence and death based on the subtraction of the expression of two genes, DGL7-PINK1 and PINK1-BUB1B respectively, yield predictions for high-performance compared with current predictors. This work opens original pathophysiological perspectives, which will be further explored in the laboratory. In parallel, the direct translation of the results available to patients with adrenal diseases opens a new avenue in molecular personalized medicine, that we want to further develop
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Mathieu, Mickael. « Rôle de EZH2 et du complexe PRC2 dans l’homéostasie du cortex surrénalien ». Thesis, Université Clermont Auvergne (2017-2020), 2018. http://www.theses.fr/2018CLFAC007/document.
Texte intégralRésumé :
Les surrénales sont des glandes endocrines permettant la réponse au stress de l’organisme. Alors que la medulla produit des catécholamines, la corticosurrénale sécrète des minéralocorticoïdes au niveau de la zone glomérulée, et des glucocorticoïdes grâce aux cellules de la zone fasciculée. Ces hormones sont notamment impliquées dans l’homéostasie hydrominérale, la réponse immunitaire et la maturation pulmonaire au cours de la vie fœtale. Les insuffisances surrénaliennes peuvent donc être très délétère en absence de traitement. Pour maintenir l’intégrité tissulaire au cours de la vie et pour mieux répondre aux variations des besoins de l’organisme, le cortex surrénalien est en renouvellement cellulaire constant. Des expériences de lignage ont mis en évidence que ce renouvellement repose sur le recrutement de cellules progénitrices capsulaires et situées dans la partie externe du cortex. Lorsqu’ils sont mobilisés, ces progéniteurs se différencient en cellules de la zone glomérulée, qui vont alors migrer de façon centripète le long du cortex et se différencier en cellules de la zone fasciculée après une conversion de lignage, au cours de leur migration. Cette conversion de lignage est orchestrée via un équilibre entre l’activation des voies Wnt/β-caténine, imposant une identité glomérulée, et PKA, permettant une différenciation fasciculée. Les facteurs épigénétiques jouent de nombreux rôles essentiels, du développement embryonnaire jusqu’à la tumorigenèse, en passant par l’homéostasie des tissus. Nous avons montré que la méthyltransférase EZH2 était le facteur épigénétique le plus surexprimé dans les carcinomes corticosurrénaliens et que cette surexpression était associée à l’agressivité de ces cancers. EZH2 est la sous-unité catalytique du complexe multi-protéique PRC2 qui permet, entre autres, la répression de la transcription de ses gènes cibles en posant la marque H3K27me3. L’objectif de ma thèse a été d’identifier les potentiels rôles physiologiques de EZH2 dans la surrénale, qui n’avaient jusque là, jamais été recherchés.En développant un modèle murin d’invalidation génétique de Ezh2 dans le cortex surrénalien, dès l’émergence de l’ébauche surrénalienne au cours du développement embryonnaire, nous avons pu mettre en évidence une hypoplasie corticosurrénalienne, résultant d’une forte atrophie de la zone fasciculée, et associé à une insuffisance primaire en glucocorticoïdes. Nos analyses nous ont permis de démontrer le rôle original et inattendu de Ezh2 dans le contrôle de la voie de signalisation PKA, en réprimant l’expression d’inhibiteurs de cette voie comme les phosphodiestérases (PDE) et la sous-unité régulatrice Prkar1b. EZH2 régule ainsi la zonation fonctionnelle du cortex surrénalien via son activité histone méthyltransférase. A l’inverse, on n’observe pas d’altération marquée de la voie Wnt/β-caténine, suggérant que Ezh2 n’est pas essentiel au contrôle de cette voie dans la surrénale. Nous avons également pu mettre en évidence une dédifférenciation de cellules corticales qui retrouvent, suite à la perte de Ezh2, une identité progénitrice en exprimant des marqueurs adréno-gonadique tels que Gata4 et Wt1. Cette dédifférenciation est un phénomène naturel que l’on retrouve avec le vieillissement et qui pourrait être associée avec la diminution progressive de l’expression de Ezh2 dans les cellules stéroïdogènes. L’ensemble de ces résultats, met en évidence une nouvelle fonction de Ezh2 dans le contrôle de la voie de signalisation PKA et de l’homéostasie de la glande surrénaleAdrenals are endocrine glands allowing the stress response of the organism. While the medulla produces catecholamines, the adrenal cortex secretes mineralocorticoids in the glomerular zone, and glucocorticoids through cells in the fasciculated zone. These hormones are notably involved in hydromineral homeostasis, the immune response and pulmonary maturation during fetal life. Adrenal insufficiency can therefore be very deleterious in the absence of treatment. To maintain tissue integrity over the course of life and to better respond to the changing needs of the body, the adrenal cortex is in constant cell renewal. Lineage experiments have shown that this renewal is based on the recruitment of capsular progenitor cells and progenitors located in the outer part of the cortex. When mobilized, these progenitors differentiate into cells of the glomerular zone, which then migrate centripetally along the cortex and differentiate into cells of the fasciculated zone after lineage conversion, during their migration. This lineage conversion is orchestrated via a balance between the activation of the Wnt/β-catenin pathway, imposing a glomerular identity, and PKA pathway, allowing fasciculated differentiation. Epigenetic factors play many important roles, from embryonic development to tumorigenesis, passing by tissue homeostasis. We have shown that methyltransferase EZH2 is the most overexpressed epigenetic factor in adrenocortical carcinomas and this overexpression is associated with cancer agressivity. EZH2 is the catalytic subunit of the multiprotein complex PRC2 that allow, among others things, the repression of the transcription of its target genes by posing the mark H3K27me3. The aim of my thesis was to indentify the putative physiological roles of EZH2 in the adrenal, never investigated yet.By developing a murine model of genetic invalidation of Ezh2 in the adrenal cortex, from the emergence of the adrenal anlagen during embryonic development, we have been able to demonstrate adrenocortical hypoplasia, resulting from a strong atrophy of the zona fasciculata, and associated with primary glucocorticoid insufficiency. Our analyses allowed us to demonstate the original and unexpected role of EZH2 in the controle of the PKA pathway, by repressing expression of this pathway inhibitors such as phosphodiesterases (PDE) and regulatory subunit Prkar1b. EZH2 thus regulate functionel zonation of adrenal cortex via its histone methyltransferase activity. On the contrary, we don’t observe marked alteration of the Wnt/β-catenin pathway, suggesting EZH2 is not essential for the control of this pathway in the adrenal. We could also show a dedifferenciation of cortical cells which, after the loss of Ezh2, exhibit progenitors identity by expressing adreno-gonadal marks as Gata4 and Wt1. This dedifferenciation is a natural phenomenon that appear with ageing and could be associated with processive decrease of Ezh2 expression in steroidogenic cells. All of these results, highlights a new function of Ezh2 in the control of the PKA signaling pathway and in the homeostasis of the adrenal gland
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Folligan, Koué. « Profil d’expression de protéines spécifiques au cours du développement de la surrénale humaine et applications a la pathologie (hypoplasie surrénale congénitale) ». Thesis, Lyon 1, 2010. http://www.theses.fr/2010LYO10185/document.
Texte intégralRésumé :
L’embryologie de la surrénale humaine et la pathogénie de l’hypoplasie congénitale des surrénales sont mal connues et complexes. L’une pouvant expliquer l’autre, nous présentons, à partir de 119 fœtus humains normaux de12 à 36 semaines de développement (SD), une étude cinétique histologique et moléculaire de la surrénale fœtale et nous décrivons 3 cas d’hypoplasie surrénalienne. Après un rappel des mécanismes moléculaires connus, régulant ensemble l’embryologie surrénalienne, gonadique et hypophysaire et ceux de l’hypoplasie surrénale congénitale, nous présentons nos résultats. Dans la corticosurrénale humaine fœtale normale, les cellules du cortex permanent prolifèrent et, dès la 12ème SD, expriment la NCAM, la 3β-HSD et la P450 c21. Elles ont la capacité de synthétiser des minéralocorticoïdes et/ou du cortisol. Les cellules du cortex fœtal ne prolifèrent pas et expriment ni la 3β-HSD, ni la NCAM. La médullosurrénale est formée par des neuroblastes immatures (CgA-, NCAM+) qui migrent et prolifèrent de la périphérie vers le centre de la glande, où ils se différencient en neuroblastes matures (CgA+). Dans les deux cas d’hypoplasie surrénale de type anencéphalique, avec absence de mutation de DAX-1 et de SF-1, la dysembryoplasie surrénalienne est probablement d’origine hypophysaire, par absence de cellules gonadotropes. Dans le 3ème cas, jamais décrit, associant un RCIU, une hypoplasie surrénalienne congénitale, une ambiguïté sexuelle, une absence de différenciation des cellules antéhypophysaires, l’absence de mutation de gènes connus (DAX-1, SF-1, SRY, FGF9, SOX2, SOX3, SOX5 et SOX9) suggère l’existence de nouveaux gènes régulant la différenciation précoce de ces trois glandes endocrinesThe embryology of the human adrenal and the pathogenesis of the hypoplasia adrenal congenital are complex and not well known. We studied the histological and functional characteristics of the fetal human adrenal in normal fetuses aged 12 to 36 weeks development (WD) and presented three cases of congenital adrenal hypoplasia with pituitary abnormalities. In the human fetal adrenal cortex, only the cells of the definitive zone proliferate from the 12th WD. We observe the expression of an adherence protein (NCAM) and of two steroidogenesis enzymes (3β-HSD and P450 c21) in the definitive zone cells, attesting to the capacity of these cells to synthesize mineralocorticoids and/or cortisol. In the fetal zone, only P450 c21 immunoreactivity is detected. The adrenal medulla is formed by immature neuroblasts (CgA -, NCAM+) which migrate and proliferate from the periphery toward the center of the gland, where they differentiate in mature neuroblasts (CgA+). In the two cases of congenital adrenal hypoplasia of anencephalic type without DAX 1 and SF-1 mutation, the cause is probably from pituitary origin and related to absence of gonadotrope cells. In the third case of congenital adrenal hypoplasia, never described, combining a retard intrauterine development, a congenital adrenal hypoplasia, sexual ambiguity, pituitary abnormalities. The absence of mutation of known genes (DAX -1, SF -1, SRY, FGF9, SOX2, SOX3, SOX5 and SOX9) suggests the existence of new genes regulating early differentiation of the adrenal, the gonad and the pituitary
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Le, Mestre Julie. « Rôle des voies de signalisation AMPc/PKA et Wnt/bêta-caténine dans la formation des systèmes de régulation aberrants au sein de la corticosurrénale ». Thesis, Normandie, 2018. http://www.theses.fr/2018NORMR055/document.
Texte intégralRésumé :
Dans la majorité des cas, l’hypersécrétion de cortisol résulte d’un adénome hypophysaire sécrétant de l’ACTH (maladie de Cushing). Plus rarement, le syndrome de Cushing est la conséquence d’un adénome corticosurrénalien unilatéral ou d’une hyperplasie bilatérale des surrénales (HMBS) sécrétant du cortisol. Ces deux pathologies appartiennent à la catégorie des hypercortisolismes dits ACTH-indépendants en raison des taux plasmatiques effondrés d’adrénocorticotrophine (ACTH). Les mécanismes moléculaires à l’origine de la sécrétion accrue de cortisol par ces lésions sont longtemps restés méconnus. Au cours des dernières années, des avancées considérables ont été réalisées dans la compréhension des mécanismes moléculaires impliqués dans la physiopathologie du syndrome de Cushing. Deux grands types d’anomalies paraissent impliqués dans la pathogénie de l’hypercortisolisme : des mutations germinales et somatiques activant des voies de signalisation intracellulaires et l’expression illégitime de récepteurs membranaires. Dans la surrénale humaine normale, la sérotonine (5-HT), synthétisée et libérée par les mastocytes sous-capsulaires, stimule la sécrétion des corticostéroïdes via son récepteur 5-HT4. Ce dernier est principalement localisé à la surface des cellules de la zone glomérulée mais faiblement exprimé au niveau des cellules de la zone fasciculée, expliquant l’action stimulante prédominante de la 5-HT sur la sécrétion d’aldostérone. Dans la dysplasie micronodulaire pigmentée des surrénales, l’activation de la voie AMPc/PKA par une mutation du gène PRKAR1A est responsable d’une surexpression de la tryptophane hydroxylase (TPH) de type 2, enzyme limitante de la synthèse de 5-HT, et des récepteurs sérotoninergiques 5-HT4, 5-HT6 et 5-HT7 couplés positivement à la voie AMPc/PKA dans les cellules cortisolosécrétrices. Chez l’Homme, la sécrétion de cortisol est physiologiquement stimulée par l’ACTH également via la voie AMPc/PKA. Les patients souffrant de maladie de Cushing, d’un syndrome de Cushing paranéoplasique (paraCS), d’un déficit en 21-hydroxylase ou d’HMBS présentent des taux d’ACTH plasmatique ou intrasurrénalienne élevés. Chez ces patients, nous montrons que la stimulation chronique de la voie AMPc/PKA par l’ACTH provoque une surexpression de la TPH de type 1, du récepteur eutopique 5-HT4 et des récepteurs ectopiques 5-HT6 et 5-HT7 dans les cellules stéroïdogènes. Pour l’un des patients avec paraCS, nous avons pu montrer que les cellules corticosurrénaliennes en culture sécrètent du cortisol en réponse à la 5-HT ou à des agonistes des récepteurs 5-HT4 ou 5-HT7. Par ailleurs, le rôle de la voie Wnt/-caténine dans l’apparition des récepteurs illégitimes reste controversé. Nous avons donc évalué l’expression des récepteurs 5-HT4, 5-HT6, 5-HT7, du LH-R et du GIP-R dans une tumeur corticosurrénalienne avec mutation germinale du gène APC et deux modèles d’activation constitutive de la voie Wnt/-caténine dans le cortex surrénalien, incluant des souris génétiquement modifiées et des cellules corticosurrénaliennes humaines en culture primaire. Nos résultats indiquent que l’activation de la voie Wnt/-caténine favorise une surexpression significative du LH-R dans les 3 modèles étudiés. Globalement, les données issues de notre travail montrent que l’activation de voies de signalisation intracellulaire, comme la voie AMPc/PKA par l’ACTH ou la voie Wnt/-caténine par des mutations génétiques, favorise l’émergence de systèmes de régulation surrénaliens aberrants. Ils indiquent en outre que la 5-HT intrasurrénalienne est impliquée dans l’hypersécrétion de corticostéroïdes associée à différentes pathologies incluant la maladie de Cushing et le syndrome de Cushing paranéoplasique, le bloc en 21-hydroxylase et l’HMBS. Le recours à des inhibiteurs sélectifs de la tryptophane hydroxylase pourrait donc permettre de réduire l’excès de stéroïdes chez les patients atteints de ces affectionsIn most cases, cortisol hypersecretion (Cushing’s syndrome; CS) results from ACTH-producing pituitary adenoma (Cushing’s disease). Occasionally, CS is the consequence of a unilateral adrenal adenoma or a bilateral macronodular adrenal hyperplasia (BMAH) producing cortisol. In these conditions, hypercortisolism is referred to as “ACTH-independent” owing to suppressed plasma ACTH levels. The molecular mechanisms underlying the maintenance of cortisol hypersecretion by adrenocortical adenomas and BMAHs in the absence of circulating ACTH has long remained unknown. However, major advances have been made during the past recent years in the comprehension of the pathophysiology of primary adrenal CS. Two main types of molecular defects have been shown to favor cortisol hypersecretion by adrenocortical neoplasms: somatic mutations responsible for activation of intracellular signaling pathways and abnormally expressed (or illegitimate) membrane receptors by tumor cells. In the human adrenal gland, serotonin (5-HT), released by subcapsular mast cells stimulates corticosteroid secretion through activation of its type 4 receptor (5-HT4R). The 5-HT4R is principally expressed in zona glomerulosa cells but weakly expressed in zona fasciculata cells explaining why 5-HT strongly stimulates aldosterone production. Interestingly, in primary pigmented nodular adrenocortical disease (PPNAD) cells, activation of the cAMP/PKA pathway by PRKAR1A mutations triggers upregulation of the 5-HT synthesizing enzyme tryptophan hydroxylase (TPH) type 2 together with the 5-HT4, 5-HT6 and 5-HT7 receptors, positively coupled to cAMP/PKA signaling pathway. 5-HT strongly stimulates cortisol production and inhibition of TPH reduced corticosteroidogenesis in cultured PPNAD cells. In human, cortisol secretion is normally stimulated by ACTH also through activation of the cAMP/PKA signaling pathway. Patients suffering from Cushing’s disease, paraneoplastic Cushing’s syndrome (paraCS), 21-hydroxylase deficiency or BMAH display high plasma or intraadrenal ACTH levels. In these patients, we show that chronic stimulation of cAMP/PKA pathway by ACTH induces TPH type 1 and 5-HT4/6/7 receptors overexpression in steroidogenic cells. In primary cultured adrenocortical cells originating from a patient with paraCS, 5-HT and 5-HT4/7 receptors agonists were able to activate cortisol secretion. On the other hand, the role of Wnt/-catenin signaling pathway in the emergence of illegitimate receptors is still debated. We therefore evaluated 5-HT4, 5-HT6, 5-HT7, LH/hCG and GIP receptors expression in an adrenocortical tumor with APC germline mutation and two experimental models of constitutive activation of β-catenin in adrenocortical cells, namely genetically modified mice and human transfected adrenocortical cells. Our results indicate that Wnt/-catenin pathway activation promotes significant overexpression of LH/hCG receptor in the 3 models investigated. Globally, our data show that activation of intracellular signaling pathways such as the cAMP/PKA pathway by ACTH or Wnt/-catenin by genetic mutations favors the emergence of abnormal regulatory systems in the adrenal cortex. Our results also demonstrate that intraadrenal 5-HT is involved in corticosteroids hypersecretion related to different diseases including Cushing’s disease, paraneoplastic Cushing’s syndrome, 21-hydroxylase deficiency and BMAH. TPH inhibitors may thus represent a new therapeutic approach of corticosteroid excess in patients suffering from these disorders
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Lihrmann, Isabelle. « Rôle du calcium dans les processus de couplage stimulus-sécrétion dans la cellule corticosurrénalienne chez les amphibiens ». Rouen, 1986. http://www.theses.fr/1986ROUES040.
Texte intégralRésumé :
Au moyen de deux techniques complémentaires, la périfusion de fragments de surrénales et le dosage radioimmunologique des corticostéroïdes et des prostaglandines, l'auteur montre que les concentrations croissantes de calcium stimulent la corticostéroïdogénèse. L'importance du calcium extracellulaire et intracellulaire a été évaluée par le biais d'agents pharmacologiques bloquant l'entrée de calcium dans la cellule ou inhibant les mouvements de calcium intracellulaire. Le calcium extracellulaire est nécessaire au maintien de la stéroïdogénèse spontanée ainsi qu'à l'action de l'ACTH. Au contraire, il n'intervient presque pas dans le mécanisme d'action de l'angiotensine; celui-ci dépend essentiellement d'une libération de calcium à partir d'un compartiment intracellulaire, vraisemblablement, le réticulum endoplasmique. Dans le mécanisme d'action de l'ACTH, le calcium extracellulaire est essentiel soit pour la liaison de l'hormone à son récepteur, soit pour la transduction du message hormonal entre le complexe hormone-récepteur et la sous-unité catalytique de l'adénylate cyclase. Dans le mécanisme d'action de l'angiotensine qui implique non pas une formation d'AMPC, mais une synthèse de prostaglandines, le calcium intracellulaire semble être mobilisé au cours des étapes qui suivent la formation de prostaglandines. Le calcium extracellulaire est également nécessaire à l'action corticotrope de l'acétylcholine. Par ailleurs, l'absence de calcium dans le milieu de périfusion inhibe la synthèse de prostaglandines stimulée par l'acétylcholine. En conclusion, le rôle du calcium est crucial dans la réponse des cellules corticosurrénaliennes à l'ACTH, à l'angiotensine et à l'acétylcholine chez les amphibiens, bien que l'étape sur laquelle le calcium agit soit différente dans chacun des trois cas. Par ailleurs cette étude souligne l'étroite relation existant entre le système messager "calcium" et certains métabolites de l'acide arachidonique
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Leboulenger, François. « Contribution à l'étude de l'activité de la corticosurrénale des amphibiens anoures, une glande endocrine sous contrôle multifactoriel ». Rouen, 1986. http://www.theses.fr/1986ROUES027.
Texte intégralRésumé :
Mise en évidence des fluctuations saisonnières et journalières des taux circulants de corticostéroïdes. Analyse des paramètres de la réponse corticosurrénalienne à l'ACTH et à différents peptides issus de la maturation de la proopiomélanocortine. Mise en évidence de la co-localisation du VIP et de peptides opiacés dans les granules de sécrétion des cellules chromaffines, rôle de ces peptides dans la stimulation de la stéroïdogenèse. Structure de la proenképhaline A d'amphibien. Rôle de l'acétylcholine via des récepteurs muscariniques utilisant les prostaglandines comme second messager
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Berthon, Annabel. « Rôle de la voie Wnt/ßcaténine dans la physiopathologie de la cortico-surrénale ». Phd thesis, Université Blaise Pascal - Clermont-Ferrand II, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00822820.
Texte intégralRésumé :
Les tumeurs cortico-surrénaliennes bénignes et malignes sont associées à une morbidité élevée résultant de l'hypersécrétion des hormones cortico-surrénaliennes, retrouvée chez près de 60% des patients. Au delà des perturbations endocrines, les carcinomes cortico-surrénaliens (CCS) sont des tumeurs de mauvais pronostic avec 16 à 38% de survie à 5 ans. Cette agressivité résulte à la fois de la présence de métastases chez de nombreux patients, au moment du diagnostic (30 à 40% des cas) et de l'absence d'approches thérapeutiques, au delà de la résection chirurgicale de la tumeur primaire. Au début de ma thèse, les mécanismes moléculaires impliqués dans le développement des tumeurs bénignes et malignes de la cortico-surrénale, étaient largement méconnus. L'activation anormale de la voie de signalisation Wnt/ßcaténine dans 48% des tumeurs bénignes et 37% des tumeurs malignes, suggérait que cette voie pouvait, comme dans d'autres tissus, participer au développement tumoral dans la cortico-surrénale. Afin de confirmer cette hypothèse, nous avons développé et caractérisé un modèle de souris transgéniques dans lesquelles la ßcaténine est constitutivement activée, spécifiquement dans le cortex surrénalien (souris ∆Cat). Grâce à ces souris, nous avons démontré pour la première fois que la ßcaténine agit comme un oncogène dans la cortico-surrénale, mais que son activation constitutive ne suffit pas à déclencher systématiquement le développement de tumeurs malignes. Chez plus de 90% des patients, la formation des CCS est associée à la surexpression du facteur de croissance IGF2. Grâce à des modèles de souris transgéniques qui surexpriment Igf2, nous avons pu montrer que cette surexpression n'a que peu d'effet sur l'initiation ou la progression tumorale, suggérant que d'autres altérations sont requises pour favoriser la transition maligne. Des résultats préliminaires encourageants suggèrent que la surexpression de l'histone méthyl-transférase EZH2 et les altérations épigénétiques résultantes, pourraient être la clé du développement des CCS. Parallèlement, nous avons montré que l'activation constitutive de la ßcaténine conduit au développement d'un hyperaldostéronisme primaire chez les souris ∆Cat, suggérant que l'activation de la voie Wnt/ßcaténine pourrait participer à la formation d'adénomes surrénaliens producteurs d'aldostérone (APA) chez les patients. Effectivement, nous avons mis en évidence que l'activation constitutive de la ßcaténine est l'altération moléculaire la plus fréquente dans les APA, avec une prévalence de 68%. Des analyses in vitro m'ont permis de montrer que la ßcaténine stimule la production d'aldostérone en contrôlant directement et indirectement l'expression de deux enzymes clés de la synthèse d'aldostérone - CYP21 et CYP11B2 - et du récepteur à l'angiotensine II (le sécrétagogue naturel de l'aldostérone), AT1R. Nous avons par ailleurs montré que la production excessive d'aldostérone chez les souris ∆Cat, pouvait être maîtrisée par un régime enrichi en quercétine, un inhibiteur naturel de l'activité transcriptionnelle de la ßcaténine. L'ensemble de ces résultats démontre l'importance de la voie Wnt/ßcaténine dans la tumorigenèse surrénalienne et dans l'hypersécrétion d'aldostérone ce qui fait d'elle une nouvelle cible thérapeutique potentielle.
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Grabek, Anaëlle. « Dimorphisme sexuel du cortex surrénalien dans le renouvellement cellulaire et les pathologies ». Electronic Thesis or Diss., Université Côte d'Azur (ComUE), 2019. http://www.theses.fr/2019AZUR4018.
Texte intégralRésumé :
Des différences importantes sont observées dans la prévalence des maladies du cortex surrénalien entre hommes et femmes. En particulier les femmes ont jusqu'à 6 fois plus de probabilités de développer un cancer de la corticosurrénale que les hommes. Malgré cela, les différences et similitudes du renouvellement cellulaire dans le cortex surrénalien ont jusqu’à présent été peu étudiées. La glande surrénale est un organe essentiel au maintien de l’homéostasie corporelle qu’elle régule grâce à la sécrétion d’hormones stéroidiennes. Elle est composée d’une médulla et d’un cortex qui est sous-divisé en plusieurs couches concentriques, de la plus externe à la plus interne : la zone glomérulée, la zone fasciculée et enfin la zone X chez la souris. Le cortex surrénalien est de plus enrobé d’une capsule et d’un mésenchyme. Tout au long du stade adulte, il subit un renouvellement cellulaire important avec des cellules progénitrices localisées au sein de la zone glomérulée qui sont capables de se renouveler et de générer de nouvelles cellules stéroidogéniques qui vont ensuite migrer de façon centripète puis entrer en apoptose lorsqu’elles atteignent la médulla. Au cours de mes travaux de thèse, j’ai pu mettre en évidence la présence d’un renouvellement cellulaire important du cortex surrénalien et sexuellement dimorphe avec un cortex renouvelé en 3 mois chez la femelle et environ 9 mois chez le mâle. De plus, alors que le renouvellement cellulaire du male repose sur les cellules progénitrices présentes dans la zone glomérulée, chez les femelles, le cortex recrute également des cellules de la capsule. Enfin, des expériences avec des modèles d’inversion de sexe, des gonadectomies et des traitements à la dihydrotestostérone ont pu identifier un effet inhibiteur des androgènes sur le recrutement et la prolifération des cellules progénitrices de la capsule. En parallèle, j’ai étudié un modèle murin exprimant Rspo1 de façon ectopique dans les cellules stéroidogéniques. L’analyse de ce modèle a permis de mettre en évidence le développement, chez ces souris, d’hyperplasie précoce du cortex surrénalien et le développement de tumeurs corticosurrénaliennes avec l’âge, phénotype qui s’est avéré être nettement plus prononcé chez les femelles à partir de la puberté. De plus, les males présentent des signes de dégénération cellulaire dès 6 semaines d’âge avec l’apparition de cellules vacuolisées. Ensemble, ces résultats mettent en avant de profondes différences entre mâles et femelles dans l’homéostasie cellulaire du cortex surrénalien et le développement de phénotypes, différences qui pourraient être à l’origine des prévalences plus importantes chez les femmes du développement des maladies de la corticosurrénaleSignificant differences between men and women are observed in terms of prevalence to adrenal cortical diseases. In particular, women are up to 6 times more likely than men to develop tumors of the adrenal cortex. Despite those striking disparity, differences and similarities in adrenal cortex renewal between sexes have yet to be investigated. The adrenal gland is a vital organ maintaining body homeostasis through the secretion of steroid hormones. It is composed of two endocrine glands, the medulla and the cortex, that is further divided into concentric zones, from the outer to the inner: the zona glomerulosa, the zona fasciculata and a zona reticularis in human or an X-zone in mice. The cortex is surrounded by a capsule that is further enveloped by a layer of mesothelial cells. In the adult stage, the adrenal cortex undergoes constant cellular renewal. Progenitor cells, located in the outer cortex, proliferate and give rise to new steroidogenic cells that centripetally migrate within the cortex, transdifferentiating along the way until they reach the border with the medulla and enter into apoptosis. During my thesis, I have shown that cell renewal in the adrenal cortex is highly sexually dimorphic with the female cortex being fully replaced in less than 3 months, while in males tissue renewal takes about 9 months. In addition, while male cortical renewal relies on progenitors located in the zona glomerulosa, the female cortex also recruits cells from the capsule to replenish the steroidogenic cell population. Finally, using sex reversal mouse models, gonadectomy and dihytrotestosterone treatments, I have identified an inhibitory role of male androgens on the proliferation and recruitment of capsular cells. In parallel, I have also studied a mouse model ectopically expressing Rspo1 in steroidogenic cells. Careful analysis of this model has evidenced the development of cortical hyperplasia and tumors in aging mice, a phenotype that was found to be significantly more pronounced in female than male. In addition, while male adrenals show signs of cellular degeneration in the adrenal cortex as early as 6 weeks of age, this histology is only observed in females of 12 months of age. Together, these results highlight profound differences between male and female in tissue homeostasis and phenotype development. These differences could offer an explanation to the unequal prevalence to adrenal diseases in men and women
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Dumontet, Typhanie. « Rôle de la signalisation PKA dans la zonation de la glande surrénale : modèles génétiques murins et mécanismes post-traductionnels ». Thesis, Université Clermont Auvergne (2017-2020), 2017. http://www.theses.fr/2017CLFAC030.
Texte intégralRésumé :
Les hyperplasies micronodulaires pigmentées de la surrénale (PPNAD) sont les tumeurs endocrines les plus fréquentes d’un syndrome multinéoplasique d’origine génétique, le Complexe de Carney. Ces hyperplasies bilatérales sont associées à des mutations inactivatrices de PRKAR1A, le gène codant la sous-unité régulatrice R1 de la protéine kinase dépendante de l’AMPc (PKA). Ces tumeurs bénignes conduisent à une activation constitutive de la PKA responsable d’un hypercortisolisme indépendant de l’ACTH (syndrome de Cushing), associant diverses comorbidités telles que l’obésité centrale, le diabète, l’ostéoporose, des troubles de l’humeur ou encore des complications cardiovasculaires. Cependant, les mécanismes de cette tumorigenèse restent mal compris. Afin d’évaluer les conséquences de l’activation de la signalisation PKA sur l’induction tumorale et l’activité endocrine, l’équipe a précédemment généré un modèle de souris transgéniques reproduisant l’inactivation de Prkar1a dans la corticosurrénale. Ces souris développent une hyperplasie bilatérale composée de cellules présentant des caractéristiques fœtales naturellement absente d’une surrénale adulte. L’objectif général de ce travail de thèse était d’identifier l’origine des cellules constituant cette hyperplasie retrouvée dans le cortex interne des souris mutantes. Nous avons utilisé pour cela une approche génétique de lignage cellulaire afin de tracer chez la souris, l’origine de ces tumeurs après invalidation de Prkar1a dans les précurseurs du cortex définitif ou dans ceux du cortex fœtal. Les résultats montrent que l’activation de la signalisation PKA dans le cortex surrénalien adulte est suffisante pour promouvoir le développement d’hyperplasies surrénaliennes associées à la mise en place d’un syndrome de Cushing. L’invalidation de Prkar1a dans les précurseurs du cortex fœtal ne conduit à aucune anomalie endocrine ni tumorale. En revanche, l’activation de la signalisation PKA dans le cortex adulte favorise le renouvellement cellulaire centripète, l’identité fasciculée et sa conversion en identité réticulée dans la partie interne. L’activation de la signalisation PKA, conjointement à la croissance corticale, apparait donc comme un moteur possible de l’adrénarche, normalement restreinte aux grands primates.L’analyse transcriptomique des surrénales et les expériences de lignages cellulaires montrent que la prédisposition des femelles au syndrome de Cushing et au développement d’hyperplasies « pseudo-réticulée » pourraient reposer sur un dimorphisme sexuel des capacités de recrutement des cellules progénitrices et sur le métabolisme du cholestérol.En parallèle de ces travaux, l’exploration des mécanismes conduisant à la présence inappropriée de cellules « pseudo-réticulée » nous a amené à tester l’implication de la SUMOylation dans les défauts de zonation observés. Nos résultats montrent que l’activation de la signalisation PKA in vitro et in vivo exerce une hypoSUMOylation globale, d’origine transcriptionnelle. En accord avec cet effet, les nodules présents chez les patients atteints de PPNAD sont hypoSUMOylés. Enfin nous montrons chez les deux espèces, un gradient de SUMOylation régionalisé dans le cortex qui suggère l’implication de cette modification dans la zonation de la glande surrénalePrimary Pigmented Nodular Adrenal Disease (PPNAD) is the most frequent endocrine manifestation of a rare, dominantly inherited multiple endocrine neoplasia syndrome, the Carney Complex. These bilateral hyperplasia are associated with inactivating mutations of PRKAR1A, the gene encoding the R1 regulatory subunit of cAMP-dependent protein kinase (PKA). These benign tumors lead to constitutive activation of PKA, responsible for an ACTH-independent hypertcortisolism (Cushing's syndrome), associating various comorbidities such as central obesity, diabetes, osteoporosis, mood disorders or cardiovascular complications. However, the mechanisms of tumorigenesis remain poorly understood. In order to evaluate the consequences of activation of PKA signaling on tumor induction and endocrine activity, the team previously generated a model of transgenic mice reproducing the inactivation of Prkar1a in the adrenal cortex. These mice develop bilateral hyperplasia composed of cells with fetal characteristics naturally absent from an adult adrenal gland.The general objective of this thesis was to identify the origin of the cells constituting this hyperplasia found in the internal cortex of the mutant mice. We used a genetic approach of cell lineage to trace the origin of these tumors after deletion of Prkar1a in the precursors of the adult or fetal cortex.The results show that activation of PKA signaling in the adult cortex is sufficient to promote the development of adrenal hyperplasia associated with Cushing's syndrome. The ablation of Prkar1a in the precursors of the fetal cortex does not lead to any endocrine or tumor abnormalities. On the contrary, activation of PKA signaling in the adult cortex promotes centripetal cell renewal, fasciculata identity and its conversion into reticularis identity in the internal part of the gland. The activation of PKA signaling, together with cortical growth, therefore appears to be a possible motor of adrenarche, normally restricted to human and some primates.Transcriptomic analysis of the adrenals and cell lineage experiments show that female predisposition to Cushing's syndrome and development of "pseudo-reticularis" hyperplasia may be based on sexual dimorphism of progenitor cell recruitment capacities and on metabolism of cholesterol.In parallel, the exploration of the mechanisms leading to the inappropriate presence of "pseudo-reticularis" cells led us to test the involvement of SUMOylation in the observed zonation defects. Our results show that the activation of PKA signaling in vitro and in vivo exerts a global hypoSUMOylation, of transcriptional origin. In agreement with this effect, the nodules present in patients with PPNAD are hypoSUMOylated. Finally, we show in both species a regionalized SUMOylation gradient in the cortex that suggests the implication of this modification in the zonation of the adrenal gland
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Batisse, Lignier Marie. « Progression tumorale dans un modèle murin de carcinogénèse surrénalienne ciblée induite par antigène T de SV 40 : Recherche de cibles thérapeutiques pour le corticosurrénalome ». Thesis, Clermont-Ferrand 1, 2016. http://www.theses.fr/2016CLF1MM07.
Texte intégralRésumé :
Les corticosurrénalomes (CS), bien que rares, sont des tumeurs malignes du cortex surrénalien très agressives. Environ 30% des patients atteints de cancer surrénalien présentent des métastases au diagnostic et leur survie à 5 ans est inférieure à 20%. Les mécanismes à l’origine de la progression cancéreuse ne sont pas complètement élucidés. Leur compréhension est pourtant un préalable à la mise au point de traitements adaptés. Les mutations du gène P53 font parties des altérations génétiques les plus fréquentes dans les CS. Dans ce contexte, il est légitime d'étudier l'effet de l'inactivation de P53 spécifiquement dans les surrénales de souris. L'antigène T du virus SV40 est un oncogène qui se lie et inhibe P53 et RB. Le laboratoire dispose de souris transgéniques (modèle AdTAg) exprimant l’antigène T de SV40 dans le cortex surrénal qui développent des tumeursévolutives. L’objectif de ce travail était de caractériser l’ontogenèse de ces tumeurs et d’explorer les modifications cellulaires et moléculaires qui accompagnent leur progression maligne notamment en lien avec les signalisations β-caténine et IGF2/mTOR. Les souris AdTAg développent des tumeurs surrénaliennes récapitulant l’ensemble des caractéristiques décrites pour les CS humains. En effet, elles présentent une surmortalité à partir de 22 semaines associée à la survenue de métastases pulmonaires et hépatiques. Les tumeurs sont à l'origine d'une hypercorticostéronémie témoignant de leur différenciation stéroïdogénique. L'analyse du score de Weiss à différents stades montre une évolution de la bénignité vers la malignité. Cette progression tumorale s’accompagne d’une activation précoce de la voie mTOR et tardive de la voie Wnt/β-caténine. Ces deux voies de signalisation pourraient donc constituer des cibles thérapeutiques intéressantes. La deuxième partie du projet visait à utiliser ce modèle murin pour tester une thérapie anticancéreuse applicable au carcinome surrénalien. La rapamycine, un inhibiteur de mTOR, inhibe la prolifération cellulaire et induit une apoptose des cellules tumorales. Après 3 mois de traitement, une réduction significative du volume tumoral est constatée ainsi que la normalisation des taux de corticostérone. Nous avons également évalué l'effet antitumoral d'inhibiteurs de la voie Wnt/β-caténine: la quercetine et le PRI-724. La quercetine stoppe la progression tumorale en inhibant la prolifération cellulaire. Elle prolonge significativement la survie des souris AdTAg. Cependant, nous n'avons pas de preuve moléculaire d'inhibition de la voie Wnt/β-caténine dans les surrénales AdTAg et les mécanismes d'action de la molécule restent à élucider. A l'inverse, le PRI-724 semble être un inhibiteur spécifique de la voieWnt/β-caténine capable de bloquer l'interaction CBP/β-caténine. Un traitement de 2 mois permet une réduction significative du volume tumoral chez les souris AdTAg. La baisse d'expression de certains gènes cibles de l'interaction CBP/β-caténine témoigne d'une inhibition de la voie. Les résultats obtenus avec les inhibiteurs des voies mTOR et Wnt/β-caténine dans le modèle murin de CS sont prometteurs. L'utilisation de ces molécules pourrait donc être envisagée dans le traitement du CSAdrenocortical carcinoma (ACC) is a rare aggressive malignant tumor of adrenal cortex. 30% of patients have metastatic disease at diagnosis and the 5 year-survival rate is obtained inonly 20%. Unfortunately, the mechanisms of tumorigenesis are not well identified. Understanding these mechanisms could offer perspectives for new targeted therapies improving the survival in these patients. P53 inactivation in the adrenal cortex seems a good target to study its role in the tumorigenesis. Large T antigen of SV40 virus is an oncogene that fixes and inhibits P53 and RB. Our laboratory has mouse models expressing this antigen (AdTAg mouse model) in the adrenal cortex and developping progressive adrenal tumors. The initial objective was to characterize the ontogeny of these tumors, studying their molecular characteristics, especially β-catenin and IGF2/mTOR signaling, during the malignant progression. AdTAg mouse models develop adrenocortical tumors with characteristics that are identical to human ACC. They present pulmonary and liver metastases that lead to increased mortality rate from 22 weeks old. These tumors lead to hypercorticism that suggest their steroidogenic differentiation. Weiss score analyses indifferent ages show that these tumors progress from benign to malignant ones, associated with a precocious activation of mTOR pathway and tardive activation of Wnt/β-catenin pathway. These pathways are thus interesting therapeutic targets. The second part of this thesis was concentrated on the anti-cancer treatment trials. Rapamycin, an mTOR inhibitor inhibits cell proliferation and increases cell apoptosis in these tumors. After 3 months of treatment, the tumor burden was significantly reduced and corticosterone levels were normalized. We have also evaluated effects of Wnt/ β-catenininhibitors, Quercetin and PRI-742, in our mouse models. Quercetin inhibits tumor proliferation and progression and it extends the survival rate of AdTAg mice. Surprisingly, this effect was independent of Wnt/β-catenin activity and the molecular mechanisms remain to be elucidated. Inversely, PRI-724 seems to be a specific inhibitor of this pathway, blocking the interaction between CBP and β-catenin. A treatment of 2 months reduced significantly the tumor volume in AdTAg mice. This effect was through the inhibition of CBP and β-catenininteraction and signaling. These results encourage using the inhibitors of mTOR and Wnt/β-catenin pathway offering promising targets to improve the survival in patients with ACC
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Longo, Mazzuco Tânia. « CONTRIBUTION DE L'EXPRESSION ANORMALE DE RECEPTEURS COUPLES AUX PROTEINES G À LA TUMORIGENESE CORTICO-SURRENALIENNE ». Phd thesis, 2005. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00009050.
Texte intégralRésumé :
L'expression anormale de récepteurs hormonaux couplés aux protéines Gs (RCPG) a été mise en évidence dans des tumeurs cortico-surrénaliennes. Ces récepteurs contrôlent la sécrétion du cortisol, mais leur rôle dans la formation tumorale n'a pas été démontré. Nous avons utilisé un modèle de tumorigenèse cortico-surrénalienne permettant l'expression des gènes de deux récepteurs, le GIPR et le LHR, dont l'implication dans les manifestations cliniques d'hypercortisolisme a été bien établie. La formation de tissus hyperprolifératifs et hyperfonctionnels, d'aspect tumoral bénin, démontre pour la première fois que l'expression ectopique d'un seul gène de RCPGs (le GIPR ou le LHR) a un rôle initiateur de la tumorigenèse cortico-surrénalienne. Nous avons également caractérisé in vivo et in vitro un cas clinique de syndrome de Cushing sensible aux catécholamines, secondaire à une hyperplasie surrénalienne où nous avons démontré la surexpression du récepteur β2-adrénergique. La sécrétion de cortisol était aussi dépendante d'autres médiateurs tels que la 5-HT, l'AVP et l'ACTH sécrété localement de façon ectopique. En conclusion, l'expression d'un RCPG suffit pour induire la formation d'une tumeur bénigne cortico-surrénalienne. Des anormalités mixtes peuvent être présentes dans ce type de tumeur. Ce modèle permettra d'étudier les étapes de progression tumorale cortico-surrénalienne ainsi que l'effet d'autres types de GPCR et les alternatives thérapeutiques dans ce type de pathologie.
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Lampron, Antoine. « Élucidation des mécanismes moléculaires impliqués dans l’expression aberrante du récepteur au peptide insulinotropique glucose-dépendant (GIP) dans les tumeurs du cortex de la glande surrénale ». Thèse, 2009. http://hdl.handle.net/1866/4103.
Texte intégralRésumé :
Les tumeurs du cortex surrénalien sont variées et fréquentes dans la population. Bien que des mutations aient été identifiées dans certains syndromes familiaux, les causes génétiques menant à la formation de tumeur du cortex surrénalien ne sont encore que peu connues. Un sous-type de ces tumeurs incluent les hyperplasies macronodulaires et sont pressenties comme la voie d’entrée de la tumorigenèse du cortex surrénalien. L’événement génétique le plus fréquemment observé dans ces tumeurs est l’expression aberrante d’un ou plusieurs récepteurs couplés aux protéines G qui contrôle la production de stéroïdes ainsi que la prolifération cellulaire. L’événement génétique menant à l’expression aberrante de ces récepteurs est encore inconnu.
En utilisant le récepteur au peptide insulinotropique dépendant du glucose (GIP) comme modèle, cette étude se propose d’identifier les mécanismes moléculaires impliqués dans l’expression aberrante du récepteur au GIP (GIPR) dans les tumeurs du cortex surrénalien.
Une partie clinique de cette étude se penchera sur l’identification de nouveaux cas de tumeurs surrénaliennes exprimant le GIPR de façon aberrante. Les patients étudiés seront soumis à un protocole d’investigation in vivo complet et les tumeurs prélevées seront étudiées extensivement in vitro par RT-PCR en temps réel, culture primaire des tumeurs, immunohistochimie et biopuces. Le lien entre le GIP et la physiologie normal sera également étudiée de cette façon. Une autre partie de l’étude utilisera les nouvelles techniques d’investigation à grande échelle en identifiant le transcriptome de différents cas de tumeurs exprimant le GIPR de façon aberrante. L’importance fonctionnelle des gènes identifiée par ces techniques sera confirmée dans des modèles cellulaires.
Cette étude présente pour la première des cas de tumeurs productrices d’aldostérone présentant des réponses aberrantes, auparavant confinées aux tumeurs productrice de cortisol ou d’androgènes surrénaliens. Le cas probant présenté avait une production d’aldostérone sensible au GIP, le GIPR était surexprimé au niveau de l’ARNm et un fort marquage a été identifié dans la tumeur spécifiquement. Dans les surrénales normales, cette étude démontre que le GIP est impliqué dans le contrôle de la production d’aldostérone. Ces résultats ont été confirmés in vitro. Finalement, le profilage à grande échelle des niveaux d’expression de tous les gènes du génome a permis d’isoler une liste de gènes spécifiquement liés à la présence du GIPR dans des hyperplasies du cortex surrénalien. Cette liste inclus la périlipine, une protéine de stockage des lipides dans les adipocytes et la glande surrénale, dont l’expression est fortement réprimée dans les cas GIP-dépendant. Des études dans un modèle cellulaire démontrent que la répression de ce gène par siRNA est suffisante pour induire l’expression du récepteur au GIP et que cette protéine est impliquée dans la stimulation de la stéroïdogénèse par le GIP.
En alliant des méthodes d’investigation in vivo de pointe à des techniques in vitro avancée, cette étude offre de nouveaux regards sur les liens entre le GIP et la physiologie de la glande surrénale, que ce soit dans des conditions normales ou pathologiques.Tumors of the adrenal cortex are varied and frequently found in the population. Aside from rare family cases in which mutations have been identified, the genetic events leading to the formation of adrenocortical tumors remain obscure. A subtype of these tumors includes macronodular hyperplasias, now percieved as the entry point of adrenocortical tumorigenesis. The most commonly observed molecular event in these cases is the presence of aberrantly expressed G-protein coupled receptor that drive steroid production and cellular proliferation. The genetic events leading to these aberrant levels of expression are unknown. This study will use the Glucose-dependent Insulinotropic Polypeptide (GIP) receptor as a model to identify the molecular mecanisms leading to the aberrant expression of the GIP receptor (GIPR) in adrenocortical tumors. The first part of the study will be a clinical investigation of new cases of adrenocortical tumors to screen for aberrant responses to GIP in various types of these tumors. The patients will be evaluated by a thorough clinical investigation protocol and the resected tumors will be extensively analysed in vitro, using real-time RT-PCR, immunohistochemistry, microarray and primary cultures of the tumors. The link between GIP and the normal physiology of the adrenal cortex will also be assessed in normal subjects. The second part of the study will use novel large-scale investigation techniques to determine the transcriptome of different cases of adrenocortical tumors expressing aberrant levels of the GIPR. The functional importance of identified genes will be assessed in cellular models. This study presents the first cases of aldosterone-producing tumors with aberrant responses to hormones, previously confined to cortisol- or androgen producing tumors. The case presented showed an aldosterone production sensitive, among others, to GIP. The GIPR’s mRNA was strongly over expressed and a specific staining was observed in immunohistochemistry. The responses were confirmed in primary cultures of the tumor. In normal adrenals, a role for the control of aldosterone by GIP was also demonstrated. Finally, large-scale profiling of the transcriptome led to the identification of a list of genes with expression levels strictly related to the presence of the GIPR in adrenocortical hyperplasias. One of these genes, perilipin, was strongly repressed specifically in GIP-dependent cases. siRNA techniques were used in a cellular model and confirmed that the repression of perilipin is sufficient to induce the expression of GIPR and that this protein is implicated in the GIP induced steroidogenesis. Allying state-of-the-art in vivo investigation methods to advanced in vitro techniques, the present study identifies novel insights on the link between GIP and the normal adrenal physiology, in normal and pathological conditions.
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Magne, Fabien. « Identification des gènes responsables des hyperplasies surrénaliennes macronodulaires bilatérales familiales avec récepteurs aberrants ». Thèse, 2011. http://hdl.handle.net/1866/7023.
Texte intégralRésumé :
La majorité des hyperplasies macronodulaires bilatérales des surrénales avec syndrome de Cushing ACTH-indépendant (AIMAH) est due à l’expression aberrante de divers récepteurs hormonaux au niveau du cortex surrénalien. Les gènes responsables des AIMAH familiales avec récepteurs aberrants n’ont pas été identifiés. Le but de ce projet est de les identifier.
Une étude de liaison, visant à identifier la ou les régions du génome comprenant le ou les gènes pouvant être en cause dans les AIMAH familiales, a été réalisée en utilisant l’ADN des membres d’une famille (10 malades et 7 sains) originaire du Québec, atteinte d’AIMAH et syndrome de Cushing et caractérisée par l’expression des récepteurs β-adrénergique et V1-vasopressine. Diverses régions chromosomiques entre les personnes atteintes et non-atteintes de la famille ont été soulignées. Un total de 707453 SNPs a été obtenu, et après analyse statistique, 159 SNPs significatifs, pouvant être associés au phénotype, ont été mis en évidence entre les deux groupes. Il a été constaté que la majorité de ces SNPs se situaient sur les régions chromosomiques 1q32.1 et 16q12.2. Une étude du transcriptome a aussi été réalisée en utilisant l’ADN des tumeurs de deux patients de la famille, ainsi que l’ADN d'autres tumeurs surrénaliennes. Les analyses statistiques ont permis d’identifier 15 gènes susceptibles d’être reliés à la maladie (11 surexprimés et 4 sous-exprimés). En utilisant les données de ces deux études, nous avons ciblé six gènes du chromosome 1 (ATP2B4, PPP1R12B, SOX13, CACNA1S, ADORA1et PHLDA3), un du chromosome 16 (CHD9) et un du chromosome 13 (SPRY2), afin de rechercher la présence de mutations. Le séquençage n’a révélé aucun changement de nucléotide dans les gènes PPP1R12B et SOX13. Dans les gènes ATP2B4, CACNA1S, ADORA1et PHLDA3, le séquençage a révélé des changements de nucléotides n’entrainant soit pas de changement d’acide aminé soit un changement d’acide aminé jugé « non pertinent », du fait qu’il ne permettait pas de différencier les sujets sains des sujets atteints. Pour ce qui est de CHD9 et SPRY2, le séquençage a permis d’identifier des changements de nucléotides entrainant des changements d’acides aminés de façon plus fréquente chez les sujets atteints par rapport aux sujets sains.
En conclusion, nos travaux nous ont donc permis d’identifier, par étude de liaison et par analyse du transcriptome, des gènes candidats qui pourraient être responsables de cette pathologie. Le séquençage de ces gènes candidats a révélé des mutations de CHD9 et SPRY2. Ces résultats s’avèrent prometteurs puisque ces deux gènes produisent des protéines impliquées dans le remodelage de la chromatine et dans la régulation de la signalisation des protéines kinases. Le phénotypage et le génotypage des patients atteints doivent être poursuivis pour vérification.The majority of ACTH-independent macronodular adrenal hyperplasia with Cushing's syndrome (AIMAH) is due to the aberrant expression of various receptors in the adrenal cortex. The genes responsible for familial AIMAH with aberrant receptors have not been identified. The aim of this project is to characterize them. A linkage study to identify the region or regions of the genome comprising the gene or genes that may be involved in familial AIMAH was performed using DNA of family members (10 affected and 7 non affected) born in Quebec and harboring AIMAH and Cushing's syndrome, under the aberrant regulation of B-adrenergic and V1-vasopressin receptors. Various chromosomal regions between patients and non-affected family were highlighted. A total of 707,453 SNPs were obtained, and after statistical analysis, 159 significant SNPs, possibly associated with phenotype, were found between the two groups. It was found that the majority of these SNPs were located on chromosomal regions 1q32.1 and 16q12.2. A transcriptome analysis was conducted using DNA from tumours of two patients of the family, as well as DNA from other adrenal tumours; Statistical analysis identified 15 genes that may be linked to disease (11 up-regulated and 4 under-expressed). Using data from these two studies, we identified six genes on chromosome 1 (ATP2B4, PPP1R12B, SOX13, ADORA1, CACNA1S and PHLDA3), one on chromosome 16 (CHD9) and one on chromosome 13 (SPRY2), to investigate the presence of mutations. The sequencing revealed no nucleotide changes in gene PPP1R12B and SOX13. In ATP2B4, CACNA1S, ADORA1 and PHLDA3, the sequencing not revealed nucleotides changes leading to either amino acid changes or an amino acid changes considered “not-relevant”, because they do not differentiate healthy individuals from affected. The sequencing of CHD9 and SPRY2 identified nucleotide changes causing amino acid changes more frequently in patients compared to healthy subjects. In conclusion, our work has therefore identified by linkage analysis and DNA microarray candidate genes that can be responsible to this disease, and mutations in two of these genes, CHD9 and SPRY2. These results are promising because these genes produce proteins involved in chromatin remodeling and regulation of signaling protein kinases. Phenotyping and genotyping of patients should be pursued further.