Thèses : « Inhibiteur de la tyrosine kinase »

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Chevot, Franciane. « Conception et synthèse d'inhibiteurs de la tyrosine kinase Tyro3 ». Thesis, Paris 11, 2012. http://www.theses.fr/2012PA112024.

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Résumé :

Le cancer est la plus grande cause de mortalité après les maladies cardiaques. Les cellules cancéreuses sont issues des cellules saines dont les systèmes de multiplications et de régulations ont été annihilés. Elles se multiplient anarchiquement et forment des tumeurs. Nous nous sommes donc intéressés au cancer de la vessie qui en termes d’incidences dans les pays industrialisés est le quatrième cancer chez l’homme et le neuvième chez la femme. Parmi les nombreux récepteurs surexprimés dans les cellules tumorales de vessie, la kinase Tyro3 s’est révélée indispensable à la survie de ces cellules tumorales. Le premier objectif de cette thèse est de synthétiser un inhibiteur sélectif de Tyro3 possédant un noyau purine. Une première stratégie est orienté vers la synthèse d’un inhibiteur de type I alors que la seconde stratégie est menée vers la synthèse d’un inhibiteur de type II. Deux composés montrent une activité intéressante à 1 µM sur Tyro3 et semblent adopter un profil d’inhibition de type II. Le second objectif de la thèse présente une approche méthodologique pour la substitution de la position 2 et 8 du noyau purine. Une première partie présente la double lithiation des positions 2 et 8 de la 6-chloro-9-(tétrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purine suivie d’une substitution avec différents électrophiles. Le dérivé 2,8-diodé obtenu est engagé dans une réaction de Sonogashira conduisant à des dérivés 2-alcynyl-8-iodo ou 2,8-dialcynyle. Une seconde partie traite de l’amidation et amination pallado-catalysées de la 8-iodo-6-(phénylsulfanyl)-9-(tétrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purine
After heart diseases, cancer is the most important cause of death. Cancerous cells are normal cells which multiplication and regulation system have been affected. They anarchically grow and give tumors. We have investigated in bladder cancer which is fourth cancer among men and ninth cancer among women in industrial countries. Amongst overexpressed receptors in bladder cancerous cells, Tyro3 seems to be essential for the survival of bladder cancerous cells. First goal of this thesis is to synthesize a potent and selective inhibitor of Tyro3 with a purine scaffold. Two approaches have done. The first approach is the synthesis of a type I inhibitor whereas the second approach is the synthesis of a type II inhibitor. Two compounds have shown an interesting activity against Tyro3 at 1 µM and they seem to be type II inhibitors. The second part of the thesis was the functionalization of position 2 and 8 of purine scaffold. We show first the double deprotonation by lithium species of 6-chloro-9-(tétrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purine following by substitution with different electrophiles. Obtained 2,8-di-iodine compound is engaged in Sonogashira reaction which gives 2-alkyne or 2,8-di-alkyne compunds. And, we investigate in palladium catalyzed amidation and amination of 8-iodo-6-(phénylsulfanyl)-9-(tétrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purine

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Komla-Ebri, Davide Selom Komi. « Nouvelles approches thérapeutiques pour l’achondroplasie ». Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2016. http://www.theses.fr/2016USPCB040/document.

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Résumé :

Des mutations faux-sens au niveau du récepteur à activité tyrosine kinase FGFR3 (Fibroblast Growth Factor Receptor 3) entrainent sa suractivation qui apporte des dysfonctions biologiques dans plusieurs maladies. L’achondroplasie, la forme la plus commune de chondrodysplasie liée à Fgfr3, est une maladie génétique rare, touchant 1 nouveau-né sur 20 000, caractérisée par des signes cliniques spécifiques : nanisme rhizomélique, membres courts, macrocéphalie, hypoplasie de l’étage moyen de la face, compression cervico-médullaire. L’activité anormale du récepteur induit des défauts de l’ossification endochondrale responsables du phénotype pathologique. Pendant longtemps le seul traitement pour cette maladie a été l’allongement chirurgical des membres, cependant au cours des dernières années de nombreux chercheurs ont développé des potentielles stratégies thérapeutiques basées sur des études moléculaires. L’objectif de ma thèse était d’évaluer une nouvelle approche thérapeutique pour l’achondroplasie. Une stratégie thérapeutique prometteuse prévoit l’utilisation de petits inhibiteurs chimiques, connus sous le nom d’inhibiteurs de tyrosine kinases, qui sont capables d’arrêter l’activité de FGFR3. J’ai estimé les effets d’un de ces composés, NVP-BGJ398, dans un modèle murin mimant le nanisme achondroplase (Fgfr3Y367C/+). Des expérimentations effectuées ont montré une amélioration des caractéristiques pathologiques dans les souris traitées avec NVP-BGJ398. Nous avons également examiné l’impact de la mutation activatrice de FGFR3 sur le développement mandibulaire. L’étude a reconnu un défaut dans la croissance mandibulaire chez l’homme et la souris atteints. En outre nous avons pu investiguer la croissance osseuse de la mandibule et corriger le défaut pathologique avec NVP-BGJ398. Enfin j’ai participé à des analyses moléculaires pour décrire comment trois mutations de FGFR3 localisées à la même position (Lys650) peuvent induire trois différents nanismes avec sévérité croissante. Les résultats ont fourni une meilleure compréhension des mécanismes moléculaires pathologiques et pourront mener à des nouvelles cibles pour des approches thérapeutiques
Missense mutations in the tyrosine kinase receptor FGFR3 (Fibroblast Growth Factor Receptor 3) lead to its overactivation causing biological dysfunctions in several diseases. Achondroplasia, the most common Fgfr3-related chondrodysplasia, is a rare genetic disorder, affecting 1 in 20000 live births, characterized by particular clinical features: rhizomelic dwarfism, short limbs, macrocephaly, midface hypoplasia, cervicomedullary compression. The abnormal activity of the receptor induces endochondral ossification defects that are responsible for the pathological phenotype. For a long time the only treatment for this disease was the limb lengthening surgery, however in recent years several researchers have developed potential therapeutic strategies based on molecular studies. The objective of my thesis was to evaluate a novel therapeutic approach for achondroplasia. A promising therapeutic strategy involved the use of small chemical inhibitors, known as tyrosine kinase inhibitors, that are able to arrest the FGFR3 activity. I have assessed the effects of one of these compounds, NVP-BGJ398, in a mouse model mimicking the acondroplastic dwarfism (Fgfr3Y367C/+). The experiments performed showed an improvement of all pathological hallmarks in NVP-BGJ398 treated mice. We have also inspected the impact of the activating FGFR3 mutation on the mandibular development. The study established a defect in mandibular growth in both affected patients and mice. Furthermore we could investigate the mandibular bone growth and correct the pathological defect with NVP-BGJ398. Finally I have participated in molecular analyses to describe how three FGFR3 mutations at the same position could lead to three different dwarfisms with increasing severity. The results provided a better understanding of FGFR3 pathological molecular mechanisms and could lead to new targets for therapeutic approaches

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Dang-Trung, Khoi͏̈-Nguyên. « Intérêt potentiel en chimiothérapie anticancéreuse des inhibiteurs de protéines à activité tyrosine kinase : exemple de la génistéine ». Paris 5, 1995. http://www.theses.fr/1995PA05P119.

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Hammam, Kahina. « Nouveau concept de resensibilisation à la chimiothérapie en activant la nucléoside kinase dCK par le masitinib, un inhibiteur de protéines tyrosine kinases ». Thesis, Aix-Marseille, 2014. http://www.theses.fr/2014AIXM5047.

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Résumé :

La résistance à la chimiothérapie constitue un frein majeur à son efficacité. Notre équipe a récemment pu montrer que le masitinib, un nouvel inhibiteur de protéines tyrosine kinases, possède une activité de resensibilisation des cellules tumorales résistantes à la chimiothérapie lorsqu'il est combiné à certaines chimio-drogues. L'objectif des travaux de cette thèse est de déterminer les voies de signalisation, modulées par l'action du masitinib, qui sont impliquées dans la resensibilisation aux chimiothérapies et amélioration de l'activité anti-tumorale.Dans la première partie de la thèse, nous avons pu identifier la nucléoside kinase dCK (désoxycytidine kinase), protéine activatrice d'un grand nombre de chimiothérapies, comme nouvelle cible du masitinib. Cette première étude nous a permis de mettre en évidence un nouveau concept thérapeutique: le masitinib, un composé chimique de type inhibiteur de protéines tyrosine kinases, peut jouer en même temps le rôle d'activateur de nucléoside kinase.Nous avons pu mettre en évidence dans la deuxième partie de la thèse que le traitement combiné entre l'épi-drogue décitabine et le masitinib peut être plus efficace pour la réexpression de certains gènes non ou peu induits par la décitabine seule.En conclusion, ces travaux nous ont permis de mettre en évidence l'interaction entre un inhibiteur de protéine tyrosine kinases et une nucléoside kinase, dans un concept d'activation enzymatique qui pourra certainement servir de base pour l'élaboration de nouvelles petites molécules chimiques spécifiques de l'activation de dCK ou d'autres nucléosides kinases nécessaires à l'activation des drogues de chimiothérapie
Resistance to chemotherapy is considered as one of the major blockers of its efficacy. Recently, our team demonstrated that masitinib, a new tyrosine kinases inhibitor, possesse a resensitization activity of cell lines resistant to chemotherapy when associated with chemodrugs.The aim of this work is to determine signaling pathways, modulated by masitinib action, that could explain the resensitization to chemotherapy and improvement of anti-tumoral activity.In the first part of this work, we identified the nucleoside kinase dCK (deoxycytidine kinase), a chemotherapy activating protein, as a new target of masitinib. In summary, this first part of the work allowed us to describe a new and never described concept: masitinib, a small molecule belonging to tyrosine kinases group, can also play a role as nucleoside kinase activator.We were able to demonstrate through the second part of the work that the combined treatment of the epidrug decitabine and masitinib can be more effective than decitabine treatment for the re-expression of some genes non or weakly induced by decitabine when used alone.In conclusion, These data allowed us to introduce an interaction between a tyrosine kinases inhibitor and a nucleoside kinase, as an enzymatic activation new concept. This could be used as a base for the design of new small chemical molecules specific for dCK or other nucleoside kinases essential for the activation of chemodrugs. This concept will obviously help to imagine and evaluate more potential therapeutic combinations of chemodrugs and small chemical molecules to overcome the resistance to chemotherapy dependent on nucleoside kinases

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Bencteux, Edith. « Conception et synthese d'inhibiteurs d'activite proteine tyrosine kinase potentiellement actifs dans le traitement du cancer ». Lille 2, 1997. http://www.theses.fr/1997LIL2P264.

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Leroux, Florence. « Etude in vitro d'inhibiteurs de tyrosine kinases et de phosphodiesterases et d'un analogue du vasoactive intestinal peptide potentiellement actifs dans l'asthme ». Lille 2, 1996. http://www.theses.fr/1996LIL2P253.

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Nguyen, Van tai. « Physiopathologie des toxicités hématologiques et vasculaires des inhibiteurs de récepteurs à activité tyrosine kinase anti-angiogénique dans le traitement du cancer ». Electronic Thesis or Diss., Paris 13, 2025. http://www.theses.fr/2025PA131002.

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Résumé :

Les inhibiteurs de tyrosine kinase anti-angiogéniques (ITK) sont devenus des médicaments majeurs pour le traitement de divers types de cancer, mais leur utilisation est associée à une incidence élevée de toxicités sévères, notamment des toxicités hématologiques, telles que l'anémie sévère. Des différences considérables ont été observées entre les différents ITKs.Dans cette thèse, nous avons réalisé une méta-analyse afin d'évaluer plus efficacement la prévalence des toxicités des différents ITK anti-angiogéniques chez les patients atteints de cancer, ainsi que dans des sous-populations spécifiques, y compris les patients atteints de carcinome rénal. En utilisant des modèles murins précliniques, nous avons démontré que les ITK anti-angiogéniques induisaient une large gamme d'effets toxiques sur les tissus normaux par un effet cytotoxique sur les cellules endothéliales normales. Les toxicités hématologiques étaient particulièrement marquées avec le sunitinib. Nous avons montré que l'hypoxie induite par le sunitinib, à travers la destruction des vaisseaux normaux dans la moelle osseuse, affectait principalement les lignées érythrocytaires et myéloïdes, et cela était associé à un blocage dans la maturation des érythrocytes. Bien que l'anémie induite par le sunitinib soit associée à une réponse adaptative à l'hypoxie systémique, nous avons démontré que les concentrations d'érythropoïétine (EPO) dans la moelle osseuse totale des souris traitées par sunitinib étaient significativement plus faibles que chez les souris non traitées. Cela est cohérent avec la destruction des microvaisseaux dans la moelle osseuse sous traitement par sunitinib, empêchant l'EPO circulante d'atteindre la moelle osseuse à des concentrations adéquates. Nous avons également démontré un effet supplémentaire spécifique au sunitinib, qui inhibe le flux d'autophagie dans les progéniteurs érythroïdes, bloquant ainsi la maturation des érythrocytes et conduisant à une anémie plus sévère.Dans notre étude, nous avons décrypté la physiopathologie de l'anémie induite par les ITK anti-angiogéniques, que nous avons principalement liée à un effet direct sur les vaisseaux normaux de la moelle osseuse, ainsi qu'à l'inhibition du flux d'autophagie dans les progéniteurs érythroïdes sous sunitinib. Notre étude présente des applications translationnelles potentielles pour le choix des ITK anti-angiogéniques et la gestion de l'anémie induite par le traitement
Anti-angiogenic tyrosine kinase inhibitors (TKIs) have become major drugs for the treatment of various cancer types, but with an overall high incidence of severe toxicities, particularly haematological toxicities including severe anemia. Considerable differences have been observed across TKIs.In this thesis, we performed a meta-analysis to more efficiently assess the toxicity prevalence of the different anti-angiogenic TKIs among cancer patients, and in sub-populations of interest including patients with renal cell carcinoma. Using preclinical murine models, we demonstrated that anti-angiogenic TKIs induced a broad range of toxic effects on normal tissues through a cytotoxic effect on normal endothelial cells. Haematological toxicities were particulary marked with sunitinib. We showed that sunitinib-induced hypoxia through the destruction of normal vessels in the bone marrow mainly affected erythrocyte and myeloid lineages, and this was associated with a blockage in erythrocyte maturation. Althought sunitinib-induced anemia was associated with an adaptative response to systemic hypoxia, we demonstrated that erythropoietin (EPO) concentrations in the total bone marrow of sunitinib-treated mice were significantly lower than in untreated mice. This is coherent with the destruction of microvessels in the bone marrow under sunitinib treatment, preventing circulating EPO from reaching the bone marrow at relevant concentrations. We demonstrated an additional effect specific to sunitinib that induced autophagy flux inhibition in erythroid progenitors, with a blockage of erythrocyte maturation, leading to more severe anemia.In our study, we deciphered the pathophysiology of anti-angiogenic TKI-induced anemia, which we found to be mainly linked to a direct effect on bone-marrow normal vessels and also to autophagy flux inhibition in erythroid progenitors under sunitinib. Our study has potential translational applications for the choice of anti-angiogenic TKIs and the management of treatment-induced anemia

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Mésange, Paul. « Influence d’inhibiteurs tyrosine kinase sur la biologie et la survie de cellules de cancer colorectal ». Thesis, Paris 5, 2014. http://www.theses.fr/2014PA05P635/document.

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Résumé :

Le but des travaux est de caractériser l’influence de la signalisation VEGF, en particulier la signalisation autocrine VEGF, sur la biologie et la sensibilité/résistance aux médicaments anticancéreux de cellules de cancer colorectal. Nous avons souhaité caractériser l’impact de la signalisation autocrine VEGF dans des modèles de CRC avec une résistance naturelle au bevacizumab, un anticorps anti-VEGF. Bien que ce composé soit actif dans le CRC, une sous population de patients ne répondent pas au traitement. Nos résultats montrent une sur régulation de la voie autocrine HIF-VEGF-VEGFR en réponse à une exposition prolongée au bevacizumab dans les cellules bevacizumab résistantes. Si la résistance à cet anticorps est bien établie, d’autres inhibiteur de la voie VEGF restent actifs (comme la petite molécule ciblée nintedanib) et peuvent inhiber la voie mTOR. La signalisation VEGF autocrine joue un rôle dans la survie de cellules de CRC. Chez les sujets résistants au bevacizumab, il serait intéressant d’introduire le nintedanib seul ou en combinaison pour accentuer l’inhibition angiogénique. Une autre combinaison d’agents (anti VEGF(R) et anti EGFR) a montré une efficacité dans des modèles de CRC en préclinique. La combinaison du bevacizumab et d’une petite molécule ciblant EGFR (erlotinib) a montré une plus grande efficacité que le bevacizumab seul dans des modèles de CRC indépendamment du statut KRAS. Le bevacizumab induit une activation de la voie de survie EGFR dans les cellules tumorales et dans les cellules endothéliales associées à la tumeur. Cette activation se trouve diminuée avec l’introduction de l’erlotinib. Les résultats indiquent que la combinaison du bevacizumab et de l’erlotinib sont plus actif en thérapie de maintenance que le bevacizumab seul, même pour les patients mutés KRAS. Ces résultats ont mené à l’étude clinique positive GERCOR phase III DREAM dans le cancer du côlon métastatique
The aim of the work is to characterize the influence of VEGF signaling , especially autocrine VEGF signaling , the biology and susceptibility / resistance to anticancer drugs of colorectal cancer cells. We wished to characterize the impact of the autocrine VEGF signaling in CRC models with natural resistance to bevacizumab , an anti -VEGF antibody. Although this compound is active in the CRC, a subpopulation of patients do not respond to treatment. Our results show an autocrine regulatory pathway HIF- VEGF- VEGFR in response to prolonged exposure to bevacizumab in bevacizumab resistant cells. If the resistance to the antibody is established, other inhibitos of VEGF pathway remain active (such as small molecule nintedanib ) and can inhibit the mTOR pathway. Autocrine VEGF signaling plays a role in CRC cell survival. In subjects resistant to bevacizumab, it would be interesting to introduce the nintedanib alone or in combination to enhance the angiogenic inhibition. Another combination of targeted agents ( anti-VEGF (R) and anti EGFR) has shown efficacy in preclinical models of CRC. The combination of bevacizumab and a small molecule targeting EGFR (erlotinib) showed greater efficacy than bevacizumab alone in CRC models regardless of KRAS status. Bevacizumab induces activation of the EGFR survival pathway in tumor cells and in endothelial cells associated with the tumor. This activation is decreased with the introduction of erlotinib. The results indicate that the combination of bevacizumab and erlotinib are more active in maintenance therapy than bevacizumab alone, even for patients mutated KRAS . These findings led to the positive Phase III clinical study GERCOR DREAM in metastatic colon cancer

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Losson, Hélène. « Combinaisons de nouveaux inhibiteurs de désacétylase d’histones 6 avec des inhibiteurs de tyrosine kinase pour le traitement de la leucémie myéloïde chronique ». Thesis, Université de Lorraine, 2020. http://www.theses.fr/2020LORR0003.

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Résumé :

Les patients atteints de leucémie myéloïde chronique (LMC) breakpoint cluster region-Abelson (BCR-ABL)+ sont traités avec des inhibiteurs de tyrosine kinase (ITK), comme l’imatinib, cependant certains développent des résistances et des effets secondaires sévères. Des traitements combinés à base d’inhibiteurs d’histone désacétylase (HDAC)6 (HDAC6i), pouvant potentiellement réduire l’expression de BCR-ABL, apparaît être une approche intéressante pour prévenir l’apparition de résistances aux ITK. De plus, l’implication d’HDAC6 dans les voies de dégradation des protéines rend son inhibition couplée à celle du protéasome susceptible de sensibiliser les cellules aux ITK. Notre hypothèse est que la combinaison ITK-HDAC6i pourrait être efficace pour le traitement de la LMC. Dans un premier temps, les effets anti-cancéreux d’un HDAC6i identifié dans notre laboratoire, le composé 7b, à celui de référence, la tubacine, en combinaison avec l’imatinib ont été comparés. La combinaison imatinib-7b a généré des effets anti- cancéreux plus importants que la combinaison imatinib-tubacine et a provoqué une mort synergique apoptotique dépendante des caspases dans les cellules K-562 et réduit la proportion de cellules souches leucémiques alors qu’elle n’a eu qu’un effet modéré sur des cellules saines. Enfin, la combinaison a diminué plus fortement la capacité de formation de colonies et la masse tumorale des cellules de LMC respectivement en milieu semi-solide et dans des poissons zèbres xénogreffés, par rapport aux composés seuls. D’un point de vue mécanistique, la combinaison induit l’ubiquitination et la dégradation de BCR-ABL, et la dérégulation de protéines de ses voies de signalisation impliquées dans la prolifération et la survie cellulaire. La protéine HDAC6 possédant deux sites catalytiques, nos résultats tendent à montrer que le composé 7b cible le deuxième. Dans un second temps, une étude a été initiée sur un nouvel HDAC6i de type hydroxamate, le MAKV-15, qui diminue l’expression de BCR-ABL, et qui en pré-traitement avec le bortezomib, sensibilise les cellules à l’imatinib, entrainant une augmentation de la mort apoptotique dépendante des caspases dans les cellules sensibles et résistantes à l’imatinib. Enfin, nos résultats suggèrent que l’inhibition d’HDAC6 potentialise l’effet de l’imatinib, pourrait prévenir l’apparition de résistances et que de telles combinaisons pourraient représenter une approche thérapeutique prometteuse pour les patients atteints de LMC
Breakpoint cluster region-Abelson (BCR-ABL)+ chronic myeloid leukemia (CML) patients receive tyrosine kinase inhibitors (TKIs) such as imatinib as the first-line treatment; however, some patients develop resistances and severe adverse effects. Combination treatments, especially with histone deacetylase (HDAC)6 inhibitors (HDAC6i), appear as an attractive option to prevent TKI resistances considering the capacity of HDAC6i to downregulate BCR-ABL. Moreover, HDAC6 is implicated in protein degradation pathways, so that its inhibition combined with that of the proteasome could sensitize cells to TKIs. Thus, we hypothesized that HDAC6i combined to TKIs could be effective for CML treatment. In the first part, we compared the anti-CML effects of a HDAC6i identified in our laboratory, compound 7b, to the reference HDAC6i tubacin, in combination with imatinib. Results showed that the imatinib-7b combination generated stronger anti- CML effects than imatinib-tubacin. Especially, the imatinib-7b combination elicited a potent synergistic caspase- dependent apoptotic cell death and drastically reduced the proportion of cancer stem cells in K562 CML cells, whereas it only moderately impacted various healthy cell models. Ultimately, the imatinib-7b combination decreased more potently the colony forming capacities and tumor mass formation of CML cells in a semisolid methylcellulose medium and in xenografted zebrafishes, respectively, compared to each compound alone. Mechanistically, the combination induced BCR-ABL ubiquitination and downregulation leading to a dysregulation of multiple key proteins of its downstream pathways involved in CML proliferation and survival. Results tend to demonstrate that 7b could target the second site. In the second part, we initiated a study of a novel hydroxamate-based HDAC6i, MAKV-15, and preliminary results demonstrated it triggered BCR-ABL downregulation. Accordingly, in pre-treatment with bortezomib it sensitizes CML cells to imatinib leading to enhanced caspase-dependent apoptotic death in imatinib-sensitive and imatinib-resistant CML cells. Considering that HDAC6 is reported to possess two functional catalytic sites, we finally attempted to determine which catalytic site is targeted by these HDAC6i. Taken together, our results suggest that HDAC6i potentiate the effect of imatinib and could overcome TKI resistance in CML cells and therefore such combination may represent a promising therapeutic approach for CML patients

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Peyressatre, Marion. « Développement de biosenseurs fluorescents et d’inhibiteurs pour suivre et cibler CDK5/p25 dans le glioblastome ». Thesis, Montpellier, 2016. http://www.theses.fr/2016MONT3513/document.

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Résumé :

CDK5 est une protéine kinase exprimée de façon ubiquitaire et activée principalement dans le système nerveux central, ou elle joue un rôle important dans la transmission synaptique, la guidance axonale et la migration cellulaire, la plasticité synaptique et le développement neuronal. CDK5 est associée à la protéine p35 au niveau de la membrane cellulaire, et activée par clivage calpaine-dépendant de cette dernière en p25, ce qui conduit à la relocalisation de CDK5/p25 dans le cytoplasme cellulaire. CDK5/p25 phosphoryle de nombreux substrats dont la protéine Tau, contribuant ainsi à l’apparition de plaques neurofibrillaires responsable des pathologies neurodégénératives comme Alzheimer et Parkinson, lorsqu’elle est hyperactivée. Plus récemment, l’expression et l’hyperactivation de CDK5 a été décrite comme impliquée dans le développement de cancers et en particulier de tumeurs cérébrales. Toutefois aucune approche ne permet actuellement de détecter et de mesurer l’activité de CDK5/p25 directement dans des cellules vivantes, au sein des tissus et des tumeurs concernées, dû à un manque d’outils fiables et sensibles pour quantifier les changements dynamiques de son activité kinase. Par ailleurs, peu d’inhibiteurs sont actuellement disponibles pour inhiber CDK5/p25, de manière spécifique, la plupart ciblant la poche de fixation de l’ATP.Le premier objectif de ma thèse a consisté à développer un biosenseur d’activité fluorescent de nature peptidique appelé CDKACT5 qui rapporte l’activité kinase de CDK5/p25 recombinante et dans des extraits cellulaires de manière dynamique et réversible suivant stimulation ou inhibition de cette kinase. Une fois caractérisé et validé in vitro, le biosenseur a été appliqué à la détection d’altérations de CDK5/p25 dans différentes lignées cellulaires de glioblastome dans des essais fluorescents d’activité kinase. Enfin CDKACT5 a été introduit dans des cellules neuronales vivantes afin de suivre les changements dynamiques d’activité de CDK5/p25 par microscopie de fluorescence et vidéo microscopie.Le deuxième objectif de ma thèse a consisté à développer un biosenseur fluorescent conformationnel dans le but d’identifier des inhibiteurs non compétitifs de l’ATP ciblant la boucle d’activation de CDK5. Le biosenseur CDKCONF5 a été exploité pour réaliser un criblage haut débit de trois chimiothèques de petites molécules. Les touches identifiées ont été validées et caractérisées in vitro, pour déterminer leur potentiel inhibiteur dans des tests d’activité kinase et de prolifération cellulaire, ainsi que leur mécanisme d’action. Ces molécules constituent des candidats prometteurs pour une chimiothérapie sélective du glioblastome
CDK5 is a protein kinase ubiquitously expressed but mainly activated in the central nervous system, where it plays an important role in neuronal functions such as synaptic transmission, axonal guidance and migration, synaptic plasticity and neuronal development. CDK5 is associated with p35 protein at the cell membrane, then activated by calpain-mediated cleavage of p35 into p25, which promotes relocalization of CDK5/p25 into the cytoplasm. CDK5/p25 phosphorylates a wide variety of substrates including Tau, thereby contributing to appearance of neurofibrillary plaques responsable for neurodegenerative pathologies such as comme Alzheimer’s et Parkinson’s, when hyperactivated. More recent studies suggest that CDK5 expression and hyperactivation are involved in glioblastoma during cell invasion and CDK5 expression has been reported to be correlated with the pathological grade of gliomas. However there are currently no tools available to monitor CDK5/p25 activity in its native cellular environment, in tissues or in tumours, due to an overall lack of reliable tools to quantify dynamic changes in its kinase activity in a sensitive and continuous fashion. Furthermore, few inhibitors are currently available to target CDK5/p25 in a specific fashion and most of them are ATP competitive inhibitors.The first goal of my thesis was to develop a fluorescent peptide biosensor named CDKACT5, that specifically reports on recombinant CDK5/p25 and on endogenous CDK5 activity in cell extracts in a dynamic and reversible fashion following stimulation or inhibition of this kinase. Once validated in vitro, this biosensor was applied to detect alterations in CDK5/p25 activity in different glioblastoma cell lines in fluorescent kinase activity assays. Finally CDKACT5 was introduced into cultured neuronal cells to monitor dynamic changes in CDK5/p25 activity by fluorescence imaging and time-lapse microscopy.The second goal of my thesis project consisted in developing a conformational fluorescent biosensor to identify non-ATP competitive inhibitors targeting the activation loop of CDK5. CDKCONF5 was implemented to perform a high throughput screen of three small molecule libraries. The hits identified were validated and characterized to determine their inhibitory potential in kinase activity and proliferation assays, as well as their mechanism of action. These compounds constitute promising for selective chemotherapy in glioblastoma

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Lermet, Anne. « Synthèse d'inhibiteurs de la protéine à activité tyrosine kinase c-kit de type sauvage et muté ». Lyon 1, 2006. http://www.theses.fr/2006LYO10026.

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Dulucq, Stéphanie. « Pharmacogénétique et pharmacogénomique des inhibiteurs de tyrosine kinases : exemple de la leucémie myéloide chronique ». Thesis, Bordeaux 2, 2012. http://www.theses.fr/2012BOR21972/document.

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Résumé :

Les inhibiteurs de tyrosine kinases (ITKs) sont une nouvelle classe thérapeutique ayant connu un grand essor ces dix dernières années. Inhibiteurs compétitifs de l’adénosine triphosphate (ATP), ils sont utilisés dans le traitement de nombreux cancers dans lesquels une dérégulation de tyrosine kinases a été mise en évidence. Malgré une efficacité prouvée, des cas de résistance sont rapportés, en particulier avec l’exemple de la leucémie myéloïde chronique (LMC) et le traitement par ITK. Cette variabilité inter-individuelle peut être due à des mécanismes de résistance propre de la cellule tumorale ou à des variations dans les paramètres pharmacocinétiques de la molécule. De nombreuses études ont analysé l’impact de polymorphismes (SNPs) dans des gènes codants pour les déterminants pharmacocinétiques et pharmacodynamiques des ITKs. Nous avons analysé l’impact de SNPs sur l’obtention de la réponse moléculaire majeure à 1 an dans 2 cohortes de patients atteints de LMC et traités par imatinib. C1236T, G2677T/A et C3435T, 3 SNPs du gène MDR-1 codant pour la glycoprotéine P et les SNPs de la région codante du gène SLC22A1 à l’origine du transporteur d’influx hOCT1. L’impact bénéfique de l’allèle 1236T ou haplotype *4 et l’impact péjoratif de l’allèle 2677G ou haplotype *1, retrouvés dans la 1ère cohorte n’ont pas été retrouvés dans la 2ième cohorte suggérant un impact mineur voire nul de ces derniers sur la réponse à l’imatinib. L’impact des SNPs de SLC22A1 observés dans la 2ième cohorte nécessite d’être confirmé. Des travaux supplémentaires à plus grande échelle, selon des critères nécessitant d’être harmonisés, sont nécessaires avant d’espérer pouvoir aboutir à une «médecine personnalisée» pour l’imatinib mais également de façon générale pour l’ensemble des ITKs
Tyrosine kinases inhibitors (TKIs) are a new class of drugs having bloomed over the past decade. As competitive inhibitors of the adenosine triphosphate, they are used in the treatment of many cancers in which deregulation of tyrosine kinases has been demonstrated. In spite of dramatic efficacy, cases of resistance have been reported particularly with chronic myeloid leukemia (CML) and TKI treatment. This inter-individual variability may be due to mechanisms of intrinsic resistance of tumor cells or changes in the pharmacokinetic parameters of the molecule. Numerous studies have analyzed the impact of polymorphisms (SNPs) in genes coding for pharmacokinetic and pharmacodynamic determinants. We analyzed the impact of SNPs on major molecular response at 1 year in 2 cohorts of patients with CML treated with imatinib. C1236T, G2677T/A, C3435T, three SNPs in the MDR-1 gene encoding P-glycoprotein and SNPs in the coding region of the SLC22A1 gene encoding hOCT1. The protective impact of the 1236T allele or haplotype*4 and the pejorative impact of the 2677G allele or haplotype*1, found in the 1st cohort, were not replicated in the 2nd cohort, suggesting minor or no impact on the response to imatinib. The impact of SLC22A1 SNPs observed in the 2nd cohort needs to be confirmed. Further works on a larger cohort, according to criteria that need to be harmonized, are necessary before we reach a “personalized medicine” for imatinib but also for all TKIs

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Grignon, Sylvain. « La culture de neurones granulaires du cervelet comme modele d'etude de la pharmacologie cellulaire du lithium (doctorat : neurosciences) ». Aix-Marseille 2, 1996. http://www.theses.fr/1996AIX20657.

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Ravez, Séverine. « Conception, synthèse et évaluation pharmacologique d’hétérocycles azotés à visée anticancéreuse ». Thesis, Lille 2, 2014. http://www.theses.fr/2014LIL2S018/document.

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Résumé :

Avec près de 150 000 décès estimés en 2012 d’après l’Agence internationale pour la Recherche sur le Cancer, le cancer représente la première cause de mortalité en France. Cette maladie est caractérisée par la prolifération anarchique et incontrôlée de certaines cellules de l’organisme qui échappent aux mécanismes de contrôle. A l’heure actuelle, les thérapies anticancéreuses visent principalement ces cellules tumorales en agissant sur des protéines qu’elles surexpriment, telles que les récepteurs aux facteurs de croissance à activité tyrosine kinase.Nos travaux se sont essentiellement portés sur quatre de ces récepteurs : l’EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor), le VEGFR (Vascular Endothelial Growth Factor Receptor), le PDGFR (Platelet-Derived Growth Factor Receptor) et le récepteur c-Kit. Plusieurs hétérocycles azotés (quinazoline, benzotriazine, thiénopyrimidine) se différenciant par leur motif anilino ou aryloxy en position 4 ont été conçus, synthétisés et évalués pharmacologiquement. Parmi ces produits, les 4-aryloxyquinazolines substituées en position 7 par des chaînes aminoalkoxy se sont révélées être de puissants inhibiteurs des récepteurs VEGFR, PDGFR et c-Kit présentant un fort pouvoir anti-angiogénique. En parallèle de ces travaux, des dérivés de type 2-aminoquinazoliniques ont été conçus. Ces composés substitués par différentes anilines en position 4 ont montré un pouvoir antiprolifératif intéressant grâce à leur intercalation entre les paires de bases de l’ADN
According to the International Agency for Research on Cancer, cancer is the first cause of death in France with about 150 000 deaths estimated in 2012. This disease is characterized by anarchistic and uncontrolled proliferation of cells that escape control mechanisms. Currently, the anticancer drugs target mainly the cancerous cells that overexpress proteins, such as growth factor receptors with tyrosine kinase activity.Our work is mainly carried on four of these receptors: EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor), VEGFR (Vascular Endothelial Growth Factor Receptor), PDGFR (Platelet-Derived Growth Factor Receptor) and c-Kit receptor. Several heterocycles (quinazoline, benzotriazine, thienopyrimidine) differing by their aniline or aryloxy moiety in C-4 position were designed, synthesized and evaluated. Among these products, the 4-aryloxyquinazolines substituted by aminoalkoxy chains in C-7 position have the characteristic to be potent inhibitors of VEGFR, PDGFR and c-kit receptor with high anti-angiogenic potency. Simultaneously, 2-aminoquinazoline derivatives were designed. These compounds substituted by various anilines in C-4 position showed interesting antiproliferative activity through their intercalation between the pairs of DNA bases

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Naud, Josy Baldaheania. « Inhibition du transport des analogues nucléosidiques par l'inhibiteur de tyrosine kinase nilotinib ». Master's thesis, Université Laval, 2013. http://hdl.handle.net/20.500.11794/24025.

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Liu, Peng. « Mort cellulaire immunogène induite par le crizotinib dans le cancer poumon non à petites cellules ». Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2018. http://www.theses.fr/2018SACLS148.

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Résumé :

De nombreuses données suggèrent que le succès thérapeutique de certaines chimiothérapies conventionnelles, radiothérapies, ainsi que des thérapies ciblées est dû à leur capacité a induire la mort cellulaire immunogène (ICD), ce qui stimule la libération ou l'exposition des motifs moléculaires associés à un dommage (DAMPs) conduisant à leur reconnaissance par le système immunitaire, rétablissant ainsi l'immunosurveillance. En utilisant un criblage non polarisé, le crizotinib a été identifié en tant qu'inhibiteur de tyrosine-kinase ayant la capacité de stimuler la libération de caractéristiques distinctives de l’ICD. Des expériences faites par la suite ont montréque le crizotinib induit l'exposition de la calreticulin, la sécrétion d'ATP et la libération d’HMGB1, ainsi que le stress du réticulum endoplasmique dans les lignées cellulaires cancéreuses murines et humaines, notamment en combinaison avec les agents non immunogènes tel que le cisplatine. L’ICD causée par la combinaison du crizotinib avec la chimiothérapie a aussi été observée dans les cellules du cancer bronchique non à petites cellules (NSCLC), cellules ne possédant pas de mutations activatrices d’ALK ou ROS1 ; cela suggère un mode d'action hors-cible. Des études comparatives ont montré que seule la conformation utilisée en clinique, l’isoforme (R)-crizotinib, a la capacité de stimuler l’ICD ; le (S)-énantiomère ne possède pas ces caractéristiques. Combinées au cisplatine, les cellules fibrosarcome MCA205 et les cellules cancéreuses du poumon TC-1 traitées avec le crizotinib ont vacciné efficacement les souris immunocompétentes syngéniques contre la croissance des cellules vivantes de même type. Le crizotinib a amélioré l'efficacité de la chimiothérapie dans trois modèles de cancer du poumon orthotopiques : transplantable, induit par des carcinogènes et induites par les oncogènes. De façon remarquable, l’effet du crizotinib est aboli si un des signaux de l’ICD est bloqué. L'efficacité anticancéreuse dans chaque modèle s’est révélé être lié à l'infiltration de lymphocytes T, montrant l’implication d’une réaction immunitaire. Cela a été confirmé par des expériences chez des souris immunodéficientes (nu/nu, déficientes en thymodépendantes lymphocytes T) et dans des souris immunocompétentes dans lesquelles l’interféron gamma a été neutralisé à l’aide d’un anticorps ; l’effet du crizotinib était aboli dans les deux modèles. La combinaison du crizotinib avec le cisplatine a entraîné un accroissement de l'expression de PD-1, PDL-1 et CTLA-4 dans la tumeur, s’accompagnant par conséquent d'une sensibilisation importante des NSCLC à l'immunothérapie avec des anticorps anti-PD-1 et CTLA-4. Ainsi, la combinaison du crizotinib avec la chimiothérapie conventionnelle et les inhibiteurs des points de contrôle immunitaire peuvent être actifs contre le NSCLC. Les données présentées dans cette thèse pourraient faciliter la conception d’essais cliniques afin d’établir de nouvelles stratégies combinatoires pour le traitement des NSCLC
Accumulating evidence suggests that certain conventional chemotherapies, radiotherapies, as well as targeted therapies mediate their long-term therapeutic success by inducing immunogenic cell death (ICD), which stimulate the release or exposure of danger-associated molecular patterns from or on cancer cells, causing their recognition by the immune system, thus reinstating immunosurveillance. An unbiased screen identified crizotinib as a tyrosine kinase inhibitor that is potent in provoking hallmarks of ICD. In subsequent low-throughput validation experiments, crizotinib promoted Calreticulin exposure, ATP secretion, HMGB1 release, as well as ER stress in both human and murine cancer cells, especially if it is combined with normally non-ICD inducing chemotherapeutics such as cisplatin. ICD induced by the combination of chemotherapy and crizotinib was also observed in non-small cell lung carcinoma (NSCLC) cells lacking activating mutations of the crizotinib targets ALK and ROS1, suggesting an off-target-mediated mode of action. Comparative studies indicated that exclusively the clinically used (R) isoform of crizotinib was efficient in inducing cell death and stimulating ICD hallmarks whereas the (S) enantiomer lacked those characteristics. When combined with cisplatin, crizotinib-killed fibrosarcoma MCA205 cells as well as lung cancer TC-1 cells efficiently vaccinated syngeneic immunocompetent mice against a re-challenge with live cancer cells of the same types. Crizotinib improved the efficacy of chemotherapy with non-ICD inducers (such as cisplatin and mitomycin C) on three distinct (transplantable, carcinogen- or oncogene induced) orthotopic NSCLC models, none of which relied on the activation of ALK or ROS1. Of note these anticancer effects were completely lost if any of the ICD signals was blocked. These anticancer efficacies in different models were linked to an increased T lymphocyte infiltration as a sign of an immune response and were lost if such tumors grew on immunodeficient (nu/nu) mice that are athymic and hence lack thymus-dependent T lymphocytes, or on immunocompetent mice with a neutralization of interferon-. The combination of cisplatin and crizotinib led to an increase in the expression of CTLA-4, PD-1 and PD-L1 in tumors, coupled to a strong sensitization of NSCLC to immunotherapy with antibodies blocking CTLA-4 and PD-1. Hence, a combination of crizotinib, conventional chemotherapy and immune checkpoint blockade may be active against NSCLC, and these data might facilitate the design of clinical trials to evaluated novel combination regiments for the treatment of NSCLC

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Lucas, Romain. « Synthèse totale et évaluation biologique d’un inhibiteur d’origine naturelle de la kinase DYRK1A ». Thesis, Paris 5, 2014. http://www.theses.fr/2014PA05P613.

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Résumé :

Les travaux de la thèse se sont articulés autour de la synthèse totale d’un composé naturel isolé à partir de la plante Scorzoneraradiata, la RCZ. Lors d’un criblage sur un panel de kinases, dont la kinase DYRK1A, les résultats ont montré la très grande sélectivité de ce composé avec une action d’inhibition sur DYRK1A (IC50 = 220 nM). De nombreuses études disponibles dans la littérature ont établi le lien entre la dérégulation de la protéine DYRK1A avec le syndrome de Down (trisomie 21) et certaines maladies neurodégénératives tel que la maladie d’Alzheimer. En vue de l’obtention de ce composé prometteur présentant un squelette dihydrostilbène porteur d’une fonction cétone et d’un groupement osidique. Trois voies d’approche ont été successivement mises en œuvre. Le groupement cétone est construit par le biais d’une réaction de Sonogashira suivit par une hydratation en présence d’un sel mercurique. La réaction de Wittig permet l’assemblage du squelette stilbène. Lors de la première approche, un isomère de position du composé final avec un pouvoir inhibiteur divisé par dix par rapport à RCZ a été obtenu. L’utilisation de différents groupements protecteurs a permis l’obtention du composé final RCZ en seulement 15 étapes. Ce travail ouvre de nouvelles perspectives dans le développement d’analogues par des pharmacomodulations en se basant sur les informations fournies par le co-cristal de RCZ avec la protéine DYRK2
This thesis focuses on the synthesis of RCZ, a natural compound isolated from the plant Scorzonera radiata. During a high-throughput screening, this compound has demonstrated, on a large panel of kinases, a high and unusual degree of selectivity against the kinase DYRK1A. On a structural point of view, the compound is a glycosylated dihydrostlibene, which also bears two phenols and an acetyl group. Recently, a link between the deregulation of the kinase DYRK1A with Down syndrom and some neurodegenerative diseases such as Alzheimer disease has been established. In order to perform the synthesis of this compound, three approaches were undertaken. In these approaches, the acetyl group was built through a Sonogashira coupling followed by a mercury salt catalyzed hydration of the acetylenic group. Also, the stilbene scaffold was always obtained by Wittig condensdation. In the first approach, an isomer was obtained with approximately a ten times less potent inhibitory activity against DYRK1A than RCZ. By the use of different protective groups the final compound RCZ was successfully obtained. In conclusion, a total and efficient synthesis of RCZ has been constructed in 15 steps. This work opens future perspective in the design of new inhibitors based on the determination of the crystal structure of the RCZ-DYRK2 complex

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Cortot, Alexis. « Etude des mécanismes de résistances primaire et acquise aux inhibiteurs du récepteur de l’Epidermal Growth Factor dans le cancer bronchique non à petites cellules ». Thesis, Lyon 1, 2010. http://www.theses.fr/2010LYO10296.

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Résumé :

Les inhibiteurs de tyrosine kinase (ITK) du récepteur à l’Epidermal Growth Factor (EGFR) constituent un nouveau traitement du cancer bronchique non à petites cellules (CBNPC), particulièrement efficace chez les patients porteurs d’une mutation d’EGFR (EGFR M+). Néanmoins, certains de ces patients peuvent avoir une résistance primaire à ces traitements, et les autres développent inéluctablement une rechute correspondant au phénomène de résistance acquise. L’objectif de ce travail était d’étudier les mécanismes de résistances primaire et acquise chez les patients avec CBNPC EGFR M+.Nous avons montré que le statut mutationnel de KRAS était le même dans la tumeur primitive et les métastases dans la majorité des cas de CBNPC. Dans quelques cas cependant, le statut différait entre tumeur primitive et métastase, ce qui soulève la question d’une dissociation de la réponse aux ITK, les mutations de KRAS étant associées à une résistance primaire au traitement.Nous avons par ailleurs mis en évidence la fréquente inactivation de la voie p53, soit par mutation de TP53 soit par diminution d’expression de p14arf, dans les tumeurs EGFR M+, qui pourrait être une des causes des variations de réponse aux ITK chez les patients EGFR M+. Enfin, nous avons montré que la résistance à deux ITK de nouvelle génération, PF299804 et WZ4002, passait par un phénomène en deux étapes impliquant d’une part l’activation de la voie IGF1R, via la diminution de l’expression d’IGFBP3, et d’autre part celle de la voie des MAP kinases. Ces travaux pourraient déboucher sur des stratégies thérapeutiques innovantes chez les patients présentant une résistance acquise aux ITK de nouvelle génération
Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) Tyrosine Kinase Inhibitors (TKI) provide clinical efficacy in Non Small Cell Lung Cancer (NSCLC) patients, especially in the presence of an EGFR mutation. However, some EGFR mutated patients display primary resistance to EGFR TKI, and the others will ultimately develop acquired resistance. We focused our work on mechanisms of primary and acquired resistance in EGFR mutated NSCLC.We first showed that KRAS mutational status is the same in primary NSCLC and matched metastases in most of the cases. However, in some patients, we found a discordant KRAS status between primary tumors and metastases, which could translate into a discordant response to EGFR TKI, since KRAS mutations are associated with resistance to EGFR TKI.We also showed that EGFR mutated tumors are associated in most of the cases with an inactivation of the p53 pathway, either through a TP53 mutation or through loss of expression of p14arf, which could account for some of the variations observed in the response to TKI in EGFR mutated patients.Last, we showed that acquired resistance to two new generation EGFR TKI, PF299804 and WZ4002, occurred through a multistep process involving activation of the IGF1R pathway through downregulation of IGFBP3 and activation of the MAP kinase pathway. These results provide new insights into the treatment of NSCLC in EGFR mutated patients with acquired resistance to new generation TKI

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Mustafa, Wesam Waleed. « Delivery of tyrosine kinase inhibitor to colorectal cancer cells using particulate systems ». Thesis, Kingston University, 2016. http://eprints.kingston.ac.uk/35596/.

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Résumé :

Solid dispersions have been employed as a method for improving the dissolution, and hence the bioavailability, and targeting the colon by Class II poorly-water soluble drugs. This project aims to enhance the solubility of the poorly water-soluble drug gefitinib (ZD), which is the first selective epidermal growth factor (EGFR) tyrosine kinase inhibitor that blocks signal pathways implicated in solid tumour growth and metastasis. Furthermore, to target the colon to improve the efficacy and to reduce the adverse effects of ZD by formulation as solid dispersions using spray drying. Methylmethacrylate polymers such as Eudragit S 100 was used for colon targeting, and Polyvinylpyrrolidone (PVP), Hydroxypropyl methyl cellulose (HPMC) were used to enhance the solubility of the drug. A rapid, cost-effective and precise reverse phase HPLC method has been developed to quantify ZD in the formulated solid dispersions. This method was validated using the recommended procedure, and it met the pharmaceutical industry guidelines that are recommended by the ICH and FDA. The developed method of analysis was reproducible, specific, and has demonstrated a isocratic separation mode of ZD. Differential scanning calorimetry (DSC), X-ray powder diffraction (XRPD_, scanning electron microscope (SEM), and attenuated total reflectance (ATR) were used to investigate the crystalline structure changes of ZD in the dispersion as well as the molecular interaction between the drug and polymer, Dissolution studies (DS) were performed across a range of pH values. Formulations were evaluated by cytotoxicity studies (MTT & Neural red tests) using Caco-2 cell line. A rotating modified cylinder method was used to evaluate the duration of adhesion of HPMC and PVP formulated solid dispersions to excised goat intestine. DSC and XRPD studies confirmed that the spray dried dispersions were amorphous. Infrared spectroscopic experiments revealed the formation of hydrogen bonds between the drug and the two polymers used in the study. Dissolution studies showed a carrier controlled drug release that was achieved with solid dispersion containing a 10% drug loading with 80:20 PVP- Eudragit S 100, and HPMC- Eudragit S 100. The morphological differences between the pure drug, physical mixtures and solid dispersions were evident from the SEM images. The images revealed that the pure drug particles were needle shaped; the particle size was reduced in the solid dispersions that subsequently enhanced the drug dissolution profile. The formulated solid dispersions were subjected to accelerated storage conditions (40 [degrees]C [plus or minus] 2 [degrees] C/75%RH [plus or minus] 5%RH) over the period of 6 months. The presence of strong molecular interactions between drug and polymers and the high glass transition temperature of the resultant solid dispersions ensured they remained amorphous for at least six months under accelerated storage conditions. The mucoadhesion study showed that the HPMC solid dispersion formulations had a higher duration of adhesion than PVP solid dispersion formulation. The placebo formulation containing only the polymers showed no toxic effect on Caco-2 cell line in the cell viability assay. Therefore, it can be safely concluded that the formulated solid dispersions have no initial inhibitory effect compared to the pure drug.

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Joudinaud, Romane. « Étude de l'hétérogénéité des clones mutés FLT3 dans la leucémie aiguë myéloïde et implication dans la réponse au traitement ». Electronic Thesis or Diss., Université de Lille (2022-....), 2025. http://www.theses.fr/2025ULILS001.

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Résumé :

Les mutations de NPM1 et les mutations FLT3-ITD sont les plus fréquemment mises en évidence au diagnostic de leucémie aiguë myéloïde (LAM). Les LAM mutées NPM1 ont un pronostic globalement favorable. Toutefois, elles présentent des co-mutations et des phénotypes très hétérogènes, susceptibles d’influencer le pronostic ainsi que la réponse au traitement. Afin d’explorer le lien entre les mutations somatiques et la différenciation phénotypique, nous avons utilisé une plateforme de séquençage unicellulaire multi-omique chez 11 échantillons diagnostiques de LAM mutées NPM1. Notre analyse a mis en évidence des associations spécifiques entre les co-mutations et l’expression de protéines de surface. Même si ces associations étaient propres à chaque patient, elles ont permis l'enrichissement en sous-clones génétiques spécifiques par tri cellulaire et ouvrent ainsi la voie à la caractérisation fonctionnelle des clones génétiques minoritaires.Depuis 2017, les patients mutés FLT3 sont traités en première ligne par une association de chimiothérapie intensive (CTI) et de midostaurine (MIDO), un inhibiteur de FLT3. Bien que l’ajout de la MIDO ait permis d’améliorer la survie des patients, lestaux de rémission complète obtenus demeurent proches de 60-70% et les rechutes surviennent encore dans plus de 40% des cas. Afin d’identifier les mécanismes de résistance à l’oeuvre, nous avons réalisé une étude rétrospective et multicentrique incluant 150 patients en rechute ou réfractaires (R/R) présentant une mutation FLT3-ITD (n = 130) et/ou FLT3-TKD (n = 26) au diagnostic en analyse de fragments. Les patients ont été traités en première ligne soit par l’association CTI et MIDO (n = 54)soit uniquement par CTI (n = 96). Pour la première fois, nous avons étudié l’évolution des clones FLT3-ITD entre le diagnostic et le stade R/R à l’aide d’une approche de séquençage à haut débit permettant d’identifier les microclones FLT3-ITD (ratioallélique < 0,05). Nous avons démontré que l’ajout de MIDO à la CTI diminue le taux de persistance de la mutation FLT3-ITD au stade R/R. Chez les patients traités par CTI et MIDO, la présence de plusieurs clones FLT3-ITD au diagnostic était associée à une probabilité plus importante de conserver un statut FLT3-ITD positif au stade R/R.Au sein des deux groupes de traitement combinés, bien que seulement 24% des microclones FLT3-ITD aient été conservés à la rechute, 43% d’entre eux sont devenus des macroclones. Au total, ces résultats identifient des paramètres influençant l’évolution des clones FLT3-ITD et soulignent l’importance d’utiliser des techniques sensibles pour rechercher les mutations FLT3-ITD en pratique clinique
NPM1 and FLT3-ITD mutations are the most commonly detected at acute myeloid leukemia (AML) diagnosis.NPM1-mutated AMLs have a favorable outcome. However, they display highly heterogeneous co-mutations and phenotypes, which can influence both prognosis and response to treatment. To explore the link between somatic mutations and phenotypic differentiation, we used a multi-omics single-cell sequencing platform on 11 NPM1-mutated AML diagnostic samples. Our analysis revealed unique associations between co-mutations and surface protein expression. Although these associations were patient-specific, they allowed the enrichment of genetic subclones by cell sorting,paving the way for the functional characterization of minority genetic clones.Since 2017, FLT3-mutated patients have been treated in the first-line setting with a combination of intensive chemotherapy (ICT) and the FLT3-inhibitor midostaurin (MIDO). Although the addition of MIDO has improved overall survival, complete remission rates remain close to 60-70%, and relapses still occur in over 40% of cases.To identify the underlying mechanisms of resistance, we conducted a retrospective,multicenter study including 150 relapsed or refractory (R/R) patients harboring FLT3-ITD (n = 130) and/or FLT3-TKD (n = 26) at diagnosis as assessed by fragment analysis. Patients were treated in front-line with either ICT and MIDO (n = 54) or ICT alone (n = 96). For the first time, we examined the evolution of FLT3-ITD clones between diagnosis and R/R disease with a high-throughput sequencing approach allowing the detection of FLT3-ITD microclones (allelic ratio < 0.05). We demonstrated that the addition of MIDO to ICT reduced the FLT3-ITD persistence rate at R/R disease.In patients receiving ICT and MIDO, the presence of several FLT3-ITD clones at diagnosis was associated with a higher probability of retaining a positive FLT3-ITDstatus at R/R disease. Considering both treatment groups, if only 24% of FLT3-ITDmicroclones were retained at relapse, 43% of these became macroclones. Together,these results identify some parameters influencing the fitness of FLT3-ITD clones and highlight the importance of using sensitive techniques for FLT3-ITD screening inclinical practice

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Eimer, Sandrine. « Etude des réponses induites par l’erlotinib dans des cellules de lignées de glioblastome ». Thesis, Bordeaux 2, 2011. http://www.theses.fr/2011BOR21822/document.

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Le glioblastome (GBM), tumeur de plus haut grade du système nerveux central (OMS grade 4) a un pronostic très sombre, quelque soit le traitement, lié à une résistance à l’apoptose. L’erlotinib (Tarceva®, OSI 774) est un inhibiteur de la tyrosine kinase du récepteur au facteur de croissance épithélial (EGFR). L’hyper-expression et l’amplification du gène de l’EGFR dans 40 à 60% des GBM, fourni un rationnel pour utiliser l’erlotinib. Nous avons montré sur U87-MG et DBTRG-05MG, deux lignées de GBM, l’absence d’apoptose avec l’erlotinib, liée soit à un déficit en pro-caspase 3, soit à une accumulation d’αB-crystalline bloquant l’activation de la caspase-3. L’absence d’apoptose dévie alors la cellule vers l’autophagie. L’inhibition de l’autophagie par ARN interférents ou par la chloroquine permet d’obtenir une synergie avec l’erlotinib en induisant la mort des cellules tumorales à des doses acceptables.Les GBM ont composition cellulaire hétérogène, avec un petit nombre d’éléments appelés cellules souches cancéreuses (CSC). Douées d’auto-renouvellement, elles participent à la propagation tumorale et à la résistance aux traitements. Nous avons testé l’erlotinib sur trois lignées issues de GBM humains, ayant deux modes de croissance distincts selon les conditions de milieu: en neurosphères (NS) et de type adhérent. Erlotinib a un effet inhibiteur minime sur les trois lignées adhérentes, alors que l’effet est significatif sur les lignées NS, traduisant l’importance de la voie d’EGFR pour les NS. Dans les lignées en NS, l’erlotinib est efficace sur les cellules progénitrices, mais n’a pas d’action ni sur les cellules initiatrices de NS, ni sur les cellules différenciées. L’auto-renouvellement des NS n’est pas non plus altéré. L’association cyclopamine, inhibiteur pharmacologique de la voie de Hedgehog, -erlotinib est synergique en bloquant la croissance et l’initiation des NS, laissant présager une efficacité sur les CSC. Les résultats obtenus sur ces différents modèles permettent d’une part de préciser certains mécanismes de résistance des cellules de GBM, et aussi d’orienter les indications et le choix des traitements susceptibles d’être les plus efficaces
Glioblastoma (GBM) is the most common primary central nervous system tumor in adults and the prognosis remains dismal, any treatment used. Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) is amplified, overexpressed, and/or mutated in GBM, making it a rational for therapy. Erlotinib, an EGFR kinase inhibitor is strongly associated with clinical response in several cancers. We showed for U87-MG and DBTRG-05MG, two human GBM cell lines, that erlotinib can’t trigger apoptosis, related either to accumulation of αB-crystallin capable to impair caspase 3 cleavage, or to constitutive deficit for procaspase 3 in DBTRG-05MG. Apoptosis deficit switches the cell to autophagic process. Inhibition of autophagy with RNA interference or chloroquine resulted in sensitization of U87 and allowed a synergistic effect with erlotinib at therapeutic doses.Moreover, GBM showed a heterogeneous cell composition with cancer stem cells, progenitors and more differentiated cells. In this study, we test erlotinib in vitro on other GBM models: three cell lines established from surgically resected GBM specimens, grown along two features adherent and neurospheres. On the three differentiated adhering cell lines, erlotinib had only a moderate activity. Conversely, on neurosphere forming cell lines, erlotinib induced a strong inhibition of cell growth related to the EGFR amplification and EGFR expression. A short erlotinib exposure induced cell death primarily in nestin-positive cells; however it was found without effect on neurosphere initiating activity and self renewal. These results suggest that EGFR pathway activation is essential for the proliferation of GBM progenitor cells but dispensable for stem-like cancer cells self–renewal. As Hedgehog pathway is known to be activated in neural stem cells, we assayed the Hedgehog pathway inhibitor cyclopamine in association with erlotinib. While each drug separately was without effect on sphere initiation, their combination led to a 25 fold decrease in the sphere number (p=0.0004).These in vitro models are convenient to investigate resistance mechanisms in GBM. Furthermore, they focus on the necessity to exploit drug combinations for greatest efficiency

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Jacomet, Florence. « Étude d'une nouvelle population de lymphocytes T « innate-memory » : implication dans l'immunité anti-leucémique au cours de la leucémie myéloïde chronique ». Thesis, Poitiers, 2015. http://www.theses.fr/2015POIT1406/document.

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Résumé :

La leucémie myéloïde chronique (LMC) est une hémopathie maligne caractérisée par un syndrome myéloprolifératif. Elle est secondaire à la formation d’un gène chimérique BCR-ABL dont le produit de ce gène de fusion est une protéine possédant une activité tyrosine kinase dérégulée, nécessaire et suffisante à la leucémogénèse. Plusieurs arguments suggèrent l’implication des cellules du système immunitaire dans le contrôle de la LMC.Nous avons montré que les lymphocytes Natural Killer T invariant (iNKT), une population minoritaire de lymphocytes T non conventionnels impliqués dans l’immunosurveillance, sont anergiques chez les patients en phase chronique (LMC-PC). Ce défaut est corrigé chez les patients en rémission cytogénétique complète après traitement par Imatinib Mesylate (LMC-IM) ou IFN-α.Les lymphocytes iNKT sont impliqués chez la Souris dans la génération de cellules T CD8+ « innate-memory », une autre population de lymphocytes T innés découverte récemment chez la Souris. Nous avons mis en évidence chez l’Homme, l’existence d’une population de cellules T ayant un phénotype inné et mémoire, exprimant fortement le facteur de transcription Eomesodermine et capable de produire rapidement de l’IFN-γ en réponse à une stimulation innée par les interleukines (IL)-12 et IL-18.Cette population de cellules est déficiente sur le plan numérique et fonctionnel chez les patients LMC-PC. Ces défauts sont partiellement corrigés chez les patients LMC-IM.L’ensemble de ces résultats souligne le rôle des lymphocytes T innés dans l’immunité anti-leucémique et pourrait permettre le développement de stratégies d’immunothérapies ciblées contre la LMC
Chronic myeloid leukemia (CML) is a myeloproliferative disorder that results from dysregulated tyrosine kinase activity of the fusion oncoprotein BCR-ABL, which is sufficient to induce malignant transformation. A critical role of the immune system in the control of CML is supported by several reports. Invariant Natural Killer T (iNKT) lymphocytes are a population of non-conventional T cells that are believed to play a key role in cancer immunosurveillance. Here, we showed that CML in chronic phase is associated with anergy of iNKT cells that is restored upon complete cytogenetic remission (CCyR) following Imatinib Mesylate (IM) or IFN-α therapy. In mouse, iNKT cells are involved in the generation of a recently characterized subset of innate CD8 T cells. Importantly, we provided definitive evidence of the existence of an equivalent of these innate CD8 T cells in humans, harboring innate and memory phenotype with high Eomesodermin expression. These cells also exhibited innate functions such as prompt IFN-γ expression in response to innate stimulation by interleukin (IL)-12 and IL-18 and cytolytic activity in a TCR independent manner.Size and functions of this innate-like CD8 T cell subset were severely impaired in CML patients at chronic phase. These defects were partially reversed in patients who achieved CCyR following IM treatment.Altogether, these results reveal a possible contribution of innate CD8 T lymphocytes in anti-leukemic immunity and should contribute to development of immunotherapeutic strategies against CML

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Telliez, Aurélie. « Etude du mécanisme d'action d'inhibiteurs de l'activité tyrosine kinase de l'EGFR sur des lignées cancéreuses prostatiques humaines ». Lille 2, 2006. http://www.theses.fr/2006LIL2S037.

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Résumé :

A l'heure actuelle, le cancer de la prostate de pathologies non encore solutionnées par les traitements anticancéreux existants. Pour progresser dans la résolution de ce problème, en plus des thérapies hormonales et des agents cytotoxiques classiques, la recherche évolue vers de nouvelles stratégies thérapeutiques ciblant des facteurs indispensables à la prolifération et à la survie des cellules cancéreuses. Le récepteur de l'epidermal growth factor (EGF-R) est une protéine tyrosine kinase (PTK) jouant un rôle clé dans le développement des cellules et tissus normaux et présentant une activité augmentée dans un grand nombre de cancers, dont le cancer de la prostate. Différentes stratégies tendant à cibler les domaines extra- (anticorps, immunotoxines, ligands cytotoxiques) et intra- (inhibiteurs tyrosine kinase) cellulaires de ce récepteur ont été développées. Bien qu'il existe une grande homologie structurale entre les protéines tyrosine kinase au niveau du domaine intracellulaire assurant la liaison à l'ATP, plusieurs inhibiteurs TK sélectifs de l'EGF-R sont actuellement en essais cliniques. Parmi eux, l'Iressa* (ZD1839) a déjà montré son efficacité en monothérapie dans de nombreuses tumeurs solides (poumons, sein, prostate. . . ) et son utilisation en association avec une radiothérapie ou des agents cytotoxiques ciblant l'ADN est favorable. Cette 4-anilinoquinazoline présente cependant une toxicité pulmonaire non négligeable et semble être la cause de plusieurs décès par pneumonie interstitielle au Japon. Afin de limiter cette toxicité, le laboratoire a envisagé et synthétisé des analogues de l'Iressa* : éthers dissymétriques à noyau quinazoline (chaînes diéthylaminoéthoxy et n-butoxy en position 6 ou 7). L'objectif de mon travail a été de déterminer le mécanisme d'action de ces 4-anilinoquinazolines in vitro, sur des lignées cancéreuses prostatiques humaines hormonodépendantes (LNCaP) et hormonoindépendantes (PC3 et DU145). Après la mise au point d'une technique de dosage de l'activité TK de l'EGFR par marquage radioactif, l'activité des différents composés a été recherchée. Les propriétés de l'Iressaù et des analogues structuraux ont ensuite été déterminées sur différents paramètres cellulaires (prolifération, cycle cellulaire, survie et invasion). En plus des relations structure-activité qui ont été dégagées, les composés synthétisés ont montré un pouvoir proapoptotique et anti-invasif intéressant et supérieur au composé de référence. Afin de progresser dans la compréhension de leur mécanisme d'action, une analyse de puces à ADN, QPCR et western blot ont été menées et ont permis de déterminer l'impact des composés sur l'expression de certains gènes.

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Bennasroune, Amar. « Récepteurs à tyrosine kinase en tant que cibles thérapeutiques : vers de nouvelles classes d'inhibiteurs ? » Strasbourg 1, 2003. http://www.theses.fr/2003STR13214.

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Airiau, Kelly. « Association in vitro de molécules ciblant les inhibiteurs de l’apoptose pour induire spécifiquement la mort des cellules tumorales ». Thesis, Bordeaux 2, 2012. http://www.theses.fr/2012BOR21953/document.

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Résumé :

L’étude des mécanismes aboutissant à la tumorigénèse a permis de révéler, dans beaucoup de cancers, une amplification ou une mutation de divers oncogènes, avec pour conséquence des capacités de prolifération et de survie accrues pour la cellule tumorale. L’identification des protéines kinases comme étant des éléments centraux de ces processus en ont fait des cibles thérapeutiques prometteuses. Plusieurs inhibiteurs ciblant de façon plus ou moins spécifique les tyrosines kinases oncogéniques ont ainsi été développés. Parmi eux, l’imatinib mesylate (Gleevec®, Novartis) a constitué la première chimiothérapie ciblée. Il correspond aujourd’hui au traitement de première intention contre la LMC. Cependant, malgré sa très grande efficacité, il est apparu que certains mécanismes de résistances pouvaient être mis en place pour diminuer son effet pro-apoptotique. Le travail de cette thèse a consisté à mieux comprendre les mécanismes d’apoptose induits par les inhibiteurs de tyrosine kinases (ITK), et à rechercher quelles voies alternatives de survie devront être bloquées pour leur assurer une meilleure efficacité. Trois modèles ont été utilisés : la leucémie myéloïde chronique (LMC), les leucémies aiguës myéloïdes (LAM) et les glioblastomes (GBM). La LMC a été utilisé comme modèle et la démarche utilisé pour essayer d’augmenter l’efficacité des ITK, a été transposée aux modèles des LAM et des GBM. L’ensemble des résultats obtenus a démontré qu’une meilleure compréhension de la réponse apoptotique et des mécanismes de résistance permettait l’identification de nouvelles cibles thérapeutiques. Nous avons pu observer que, tout en favorisant la diminution des doses de molécules administrées, l’inhibition simultanée de plusieurs cibles apportait plusieurs bénéfices. Elle permet d’augmenter l’action pro-apoptotique des ITK, de contrer certains mécanismes de résistances, d’atteindre la cellule souche cancéreuse résistance et par conséquent de cibler simultanément des populations a plusieurs de stades de différenciation
Protein kinases have been identified as playing fundamental roles in cancer development, suggesting that they could represent a promising therapeutic target. Several kinase inhibitors have been developed and the most successful of them, by far, is Gleevec® (imatinib, STI57; Novartis), a BCR-ABL inhibitor. It is currently used as the treatment of reference for chronic myeloid leukemia. However, despite a huge efficiency, some resistance mechanisms could be used to decrease its pro-apopototic effect. The global aim of my PhD was to understand the apoptotic mechanisms induced by tyrosine kinase inhibitors (TKI) to identify new potential therapeutic targets. I work on three different tumors: Chronic Myeloid Leukemia (CML), Acute Myeloid Leukemia (AML) and Glioblastomas (GBM). CML has been used as a model and the approach followed to increase TKI efficiency has been transposed to AML and GBM models. Altogether, our results showed that a better understanding of apoptotic response and resistance mechanisms could lead to the identification of new therapeutic targets. We observed that combination therapy brings several benefits. It allows to increase the TKI-induced apoptotic response, to counter some resistance mechanism, to reach the resistant cancer stem cells, and thus, to target simultaneously several populations in the tumour

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Mazed, Fetta. « Etude des mécanismes de résistance aux inhibiteurs de FLT3 dans les leucémies aigues myéloïdes ». Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2019. http://www.theses.fr/2019USPCC089.

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Résumé :

Les leucémies aiguës myéloïdes (LAM) constituent un groupe hétérogène d’hémopathies malignes résultant de la prolifération clonale d’un progéniteur myéloïde bloqué dans sa différenciation. De pronostic globalement défavorable, dépend de l’âge et de facteurs cytogénétiques et moléculaires. La mutation du gène FLT3 de type duplication en tandem du domaine juxta-membranaire (ITD : internal tandem duplication) est détectée dans 30% des échantillons de LAM, corrèle à une fréquence accrue de rechutes et à un pronostic défavorable. La mutation ITD conduit à une activation dérégulée et constitutive de récepteur FLT3, induisant une addiction oncogénique des cellules leucémiques aux voies de signalisation en aval, désignant FLT3 comme cible thérapeutique pertinente dans les LAM. Ainsi, de nombreux inhibiteurs de tyrosine kinase (ITK) ciblant FLT3 ont été développés, certains ayant une efficacité significative en monothérapie et améliorant la survie des patients ayant une mutation FLT3-ITD en association aux traitements conventionnels. Néanmoins, la plupart des patients traités en monothérapie, et une proportion importante de ceux traités en association rechutent en raison de mécanismes de résistance développés par la cellule pour échapper à l’action des ITK. L’étude de ces mécanismes est un enjeu essentiel afin d’améliorer l’efficacité des traitements dans les LAM FLT3-ITD. C’est cette thématique que j’ai souhaité aborder au cours de ma thèse. Nous avons tout d’abord, mis en évidence par des approches transcriptomiques et protéomiques une nouvelle cible de PIM2, la sérine thréonine kinase RSK2, ayant un rôle dans le contrôle de l’apoptose des cellules de LAM. Mes collègues et moi-même avons montré que RSK2 était fortement diminuée suite à l’invalidation de PIM2 par interférence ARN dans une lignée de LAM FLT3-ITD (MOLM-14), tant au niveau ARNm que protéique. Par une technique de sensibilisation à l’apoptose à l’aide de peptides BH3 ainsi que par un inhibiteur de Bcl-2, le composé ABT-199, nous avons montré le rôle de RSK2 dans le contrôle de l’apoptose mitochondriale en contexte FLT3-ITD. Nous avons ensuite observé que la surexpression de RSK2 compensait la mort cellulaire induite par l’invalidation de PIM2, renforçant ainsi le rôle de cette nouvelle voie dans le contrôle de la survie cellulaire. Finalement, nous avons suggéré dans des modèles murins de la maladie que RSK2 pourrait participer à la résistance aux ITK ciblant FLT3. Afin de poser la question de ces mécanismes de résistance sans à priori, j’ai adapté à notre modèle de LAM une banque CRISPR pan-génomique dans le but de la cribler avec différents ITK et mettre à jour de nouveaux mécanismes de résistance aux ITK. J’ai utilisé l’enzyme dCas9 permettant non pas des cassures de l’ADN mais une modulation de la transcription de gènes cibles, soit une répression lors de la fusion au corépresseur KRAB (CRISPRi), soit une activation lors de la fusion à VP64 (CRISPRa). La dCas9 et les banques ont été transduites par des lentivirus dans 2 lignées FLT3-ITD (MOLM-14 et MV4-11). Ces cellules ont été amplifiées en culture liquide ou sur des cellules stromales mésenchymateuses (MSC) et traitées soit par du DMSO soit par l’un des 3 ITK ciblant FLT3 suivants : quizartinib, midostaurine ou ponatinib. L’identification et la quantification des ARN guides par séquençage haut débit et l’analyse bioinformatique nous renseigne enfin sur les gènes dont la répression favorise l’effet des ITK, pouvant ainsi représenter de nouveaux mécanismes de résistance intrinsèques (culture liquide) et/ou extrinsèques (co-culture MSCs) à la cellule. Le troisième axe de mon travail a porté sur la caractérisation des modifications du profil de signalisation global induites par les mutations du domaine tyrosine kinase (TKD) de FLT3-ITD impliquées dans la résistance aux ITK
Acute myeloid leukemia (AML) is a heterogeneous group of hematological malignancies resulting from the clonal proliferation of a myeloid progenitor blocked in its differentiation. The prognosis of AML is generally unfavorable, depending on age, cytogenetic and molecular factors. The FLT3-ITD mutation, (internal tandem duplication) is detected in 30% of AML patients and correlates with an increased frequency of relapses and an unfavorable prognosis. FLT3-ITD mutations leads to a deregulated and constitutive activation of FLT3 receptors, inducing an oncogenic addiction of leukemic blasts to FLT3-dependent signaling pathways, pinpointing FLT3 as a relevant therapeutic target in AML. Thus, many tyrosine kinase inhibitors (TKI) targeting FLT3 have been developed, some of which harboring significant efficacy in monotherapy and even improving patients’ survival when combined with conventional treatments. However, most patients treated by TKI monotherapy, and a significant proportion of those treated with combined approaches will relapse, due to various escape mechanisms. To study these mechanisms is therefore a major goal to improve the efficacy of treatments in FLT3-ITD LAM which I undertook during my thesis. First, I built on my team’s previous work to discover a new target of PIM2, the RSK2 serine threonine kinase, using transcriptomic and proteomic approaches. We showed that RSK2 expression was greatly decreased following the invalidation of PIM2 by RNA interference in a FLT3-ITD AML line (MOLM-14), both at the mRNA and protein levels. By BH3 profiling, we connected RSK2 to the control of mitochondrial apoptosis in the context of FLT3-ITD cells. We then observed that RSK2 overexpression compensated apoptosis induced by PIM2 knockdown, thus reinforcing the role of this new PIM2/RSK2 pathway in the control of cell survival. Finally, we suggested that RSK2 may be involved in TKI resistance in mouse models of AML. To address the question of FLT3-ITD resistance mechanisms more broadly, I adapted a CRISPR/dCas genome wide library on our AML model, with the purpose of screening it with different TKI to unravel new mechanisms of resistance to these compounds. I used the dCas9 enzyme, devoid of endonuclease activity but modulating target genes expression; inhibition in case of dCas9/KRAB fusion (CRISPRi), or activation in dCas9/VP64 fusion (CRISPRa). Both dCas9 and libraries were transduced by lentiviruses in two FLT3-ITD cell lines (MOLM-14 and MV4-11), grown in liquid culture or on a mesenchymal stromal cells (MSC) layer, and treated either with DMSO or with one of the 3 following ITKs: quizartinib, midostaurine or ponatinib. The identification and quantification of RNAs guides by high-throughput sequencing and bioinformatic identify potential new mechanisms of intrinsic resistance (liquid culture) and / or extrinsic (co-culture MSCs) to TKI. The third area of my work focused on the characterization of global signaling changes induced by FLT3-ITD tyrosine kinase domain (TKD) mutations associated with TKI resistance

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Šramel, Peter. « A synthesis and biological screening of predicted inhibitors of Tyrosine Kinases, e.g. KDR, designed in silico ». Thesis, Strasbourg, 2017. http://www.theses.fr/2017STRAF064.

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Les protéines kinases représentent le groupe d'enzymes qui servent d'intermédiaire pour la phosphorylation de protéines - le transfert d'un groupe phosphate de l'adénosine triphosphate(ATP) sur des chaînes latérales correspondantes de tyrosine, de serine ou de thréonine des acides aminées. La phosphorylation de protéines est un des outils les plus importants pour la régulation de l'activité cellulaire. La « signalisation » cellulaire par le récepteur de tyrosine kinase VEGFR2 (KDR) appartient aux réactions biochimiques clés influençant la croissance de tumeurs. L'inhibition thérapeutique de cette réaction à l'aide des composés de faible poids moléculaire spécifiques est devenue une stratégie utile dans le cadre des thérapies anticancéreuses. Ce travail a amené à la découverte de 16 substances biologiquement actives sur la base N,5-diaryloxazol-2-amine (IC50, VEGFR2 TK). D'excellents résultats ont été atteints notamment dans le cas des substances 189, 191, 211, 214, 220, 221, 223 et 4 qui montrent une activité inhibitrice inférieure à 500 nM
Protein kinases represent a group of enzymes responsible for phosphorylation - transfer of aphosphate group from adenosine triphosphate (ATP) to tyrosine or serine/threonine residues. Protein phosphorylation is one of the most important tools regulating a cell activity. A cell "signalization" through an endothelial receptor tyrosine kinase VEGFR2 TK (KDR) is the important pathway influencing growth of a tumor. Small-molecule inhibitors of VEGFR2 TK (VEGFR2 TKls) have become an important tool for the treatment of various types of cancer. This dissertation thesis resulted in a discovery of 16 biologically active N,5-diaryloxazol-2-amines (IC50, VEGFR2 TK). Very good results were achieved especially with compounds 189, 191, 211, 214, 220, 221, 223 and 4 exhibiting the activity under 500 nM

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Zhao, Tong Tong. « Mechanism and Therapeutic Potential of Statin-Mediated Inhibition of Tyrosine Kinase Receptors ». Thesis, Université d'Ottawa / University of Ottawa, 2011. http://hdl.handle.net/10393/20334.

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Receptor tyrosine kinases (RTK) are key regulators of growth, differentiation and survival of epithelial cells and play a significant role in the development and progression of cancers derived from these tissues. In malignant cells, these receptors and their downstream signalling pathways are often deregulated, leading to cell hyper-proliferation, enhanced cell survival and increased metastatic potential. Furthermore, endothelial expressed RTKs regulate tumor angiogenesis allowing for tumor growth and maintenance by promoting their vascularization. Epithelial malignancies such as squamous cell carcinomas (SCC), non-small cell lung (NSCLC) and malignant mesotheliomas have very limited treatment options when presenting as metastatic disease. RTKs, particularly the epidermal growth factor (EGFR) and the vascular endothelial growth factor (VEGFR) receptors, have been shown to play significant roles in the pathogenesis of these tumor types. Statins are potent inhibitors of HMG-CoA reductase, the rate limiting enzyme of the mevalonate pathway, that are widely used as hypercholesterolemia treatments. The mevalonate pathway produces a variety of end products that are critical for many different cellular pathways, thus, targeting this pathway can affect multiple signalling pathways. Our laboratory has previously shown that lovastatin can induce tumor specific apoptosis especially in SCC and that 23% of recurrent SCC patients treated with lovastatin as a single agent showed disease stabilization in our Phase I clinical trial. Subsequently, our lab was able to demonstrate that lovastatin in combination with gefitinib, a potent inhibitor of the EGFR showed co-operative cytotoxicity when combined (Chapter 2). Furthermore, the pro-apoptotic and cytotoxic effects of these agents were found to be synergistic and to be manifested in several types of tumor cell lines including SCC, NSCLC and glioblastoma. I was able to expand upon these important findings and demonstrated that lovastatin, through its ability to disrupt the actin cytoskeleton, inhibited EGFR dimerization and activation (Chapter 3). This novel mechanism targeting this receptor has clinical implications as lovastatin treatment combined with gefitinib showed co-operative inhibitory effects on EGFR activation and downstream signalling. The RTK family of proteins share similar features with respect to activation, internalization and downstream signalling effectors. I further demonstrated that lovastatin can inhibit the VEGFR-2 in endothelial cells and mesotheliomas, where VEGF and its receptor are co-expressed driving their proliferation, and induces synergistic cytotoxicity in mesothelioma cells in combination with VEGFR-2 tyrosine kinase inhibitors (Chapter 4). These findings suggest that statins may augment the effects of a variety of RTK inhibitors in a similar fashion representing a novel combinational therapeutic approach in a wide repertoire of human cancers. More importantly, based on this work, we initiated a Phase I/II study evaluating high dose rosuvastatin and the EGFR inhibitor tarceva in SCC and NSCLC patients at our institute. This clinical evaluation will provide invaluable data that will play a role in developing this novel therapeutic strategy. Together, the work embodied in this thesis provides a model for the regulation of EGFR/VEGFR-2 activation and signalling by targeting the rho family of proteins that demonstrates a novel mechanism that can be exploited to refine current therapeutic paradigms.

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Clapper, Erin M. « Investigating Intrinsic and Extrinsic Mechanisms of Tyrosine Kinase Inhibitor Resistance in Chronic Myeloid Leukaemia ». Thesis, Griffith University, 2021. http://hdl.handle.net/10072/409643.

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myeloid leukaemia (CML) is a myeloproliferative disorder that is responsible for 15% of all adult leukaemia cases. While the initial stages of CML are relatively mild, the terminal stage of disease, known as blast crisis, has an average survival time of approximately 12 months. CML is caused by a reciprocal chromosomal translocation that results in the production of a constitutively active non-receptor tyrosine kinase, known as bcr-abl. Bcr-abl activates a wide variety of cell proliferation and survival pathways, and this leads to abnormal cell growth and therefore cancer. Due to the involvement of bcr-abl in the progression of CML, most of the treatments for this cancer are bcr-abl specific tyrosine kinase inhibitors (TKIs). Whilst initially effective, various studies have found that resistance to TKIs occurs in 20-50% of CML cases. This is primarily linked to the highly mutagenic nature of bcr-abl. The current strategy to overcome acquired TKI resistance is to prescribe a newer generation of TKI, which is often either partly or completely ineffective. Therefore, to more effectively overcome acquired drug resistance in CML, bcr-abl independent targets need to be identified and investigated. This thesis outlines three distinct cellular systems and assesses their effect on drug resistance in CML, and their potential as targets for future CML treatments. The first system that was investigated in this thesis was the thioredoxin (Trx) system, which is involved in maintaining redox homeostasis within the cell. Upregulation of the Trx system has been associated with increased progression and poor prognosis in other cancers. In this thesis it was observed that Trx1 expression was increased in both CML cell lines and CML patient samples, compared to non-cancerous controls. Furthermore, it was found that Trx1 expression was increased in CML cells that were resistant to imatinib treatment, compared to imatinib sensitive cells. Additionally, an enzymatic inhibitor of Trx1, known as thioredoxin interacting protein (TXNIP) was downregulated in CML cells compared to non-cancerous cells, and was also downregulated in imatinib resistant CML cells. It was found that inhibiting a key element of the Trx system, thioredoxin reductase (TrxR), using chemical and specific siRNA inhibitors resulted in a decrease in the activity and expression of bcr-abl. TrxR inhibition also resulted in decreased protein expression of MYC, which is reported to regulate the transcription of bcr-abl, suggesting that downregulation of MYC could be the mechanism by which TrxR inhibitors decreased bcr-abl expression. Moreover, this thesis found that TrxR inhibition by chemical inhibitors effectively overcame imatinib induced drug resistance, further demonstrating the promising anti-cancer ability of these compounds. Inversely, the inhibition of bcr-abl by four distinct TKIs as well as bcr-abl specific siRNA resulted in decreased expression of both Trx1 and TrxR1, and decreased TrxR activity in CML cells. The inhibition of bcr-abl by TKIs is not the direct cause of apoptosis in CML, it is instead the downregulation of the downstream targets of bcr-abl; this led to the hypothesis that the inhibition of the Trx system is partly responsible for TKI induced apoptosis. Another mechanism of TKI resistance in CML that was investigated in this thesis was hypoxia, which is defined physiologically to be oxygen levels below 3%. An example of a hypoxic environment within the body is the bone marrow, where CML cells spend a large portion of their lifespan. When cells enter hypoxia, their biology changes in a multitude of ways and this has been linked to drug resistance in many cancers, including CML. The hypoxia inducible factor 1 (HIF-1) pathway is almost always linked to hypoxia-induced drug resistance. The HIF-1 pathway is only active in hypoxia and upregulates the expression of many downstream targets. In this study it was observed that CML cell growth in hypoxia was significantly decreased compared to normoxia, while cell viability and apoptosis levels remained unchanged. Furthermore, the expression of several cyclins was decreased in hypoxia, and this is likely why cell proliferation was slowed. MTT proliferation assays used to assess cell proliferation demonstrated that TKIs were far less effective in hypoxia compared to normoxia. The Trx system was also observed to be downregulated in hypoxia. However, when cells underwent reoxygenation (incubated in hypoxia and then returned to normoxia for a short period), it was found that expression of the Trx system was significantly increased, which was due to the increase in reactive oxygen species (ROS) levels. Finally, TrxR inhibitors were shown to retain most of their efficacy under low oxygen conditions, in contrast to TKIs which were ineffective in hypoxia. The final aspect of hypoxia investigated was the decreased bcr-abl protein expression observed in hypoxia, which was shown to occur via the activity of the HIF-1 pathway. Using RNA immunoprecipitation, it was found this was specifically through the downregulation of the ribosomal protein RPS6 in hypoxia, as RPS6 mediates the translation of bcr-abl. The impact of ATP binding cassette (ABC) transporters on TKI resistance in CML was also assessed. ABC transporters induce drug resistance by exporting compounds out of the cell before they can have their full effect. The upregulation of ABC transporters has been associated with increased drug resistance in various cancers. An aim of this thesis was to identify an ABC transporter that had not previously been associated with drug resistance in CML. Using publicly available RNAseq data, it was found that multidrug resistance protein 4 (MRP4) was upregulated in CML patients that were unresponsive to imatinib, compared to imatinib responsive patients. Further studies showed that MRP4 was upregulated in CML cell lines compared to non-cancerous controls, as well as in CML patients in the blast crisis phase of the disease compared to healthy donors. The effect of MRP4 activity on TKI efficacy was then assessed by specifically inhibiting MRP4 and examining differences in cell growth induced by TKIs. Using MTT proliferation and apoptosis assays, it was found that MRP4 inhibition increased the efficacy of both ponatinib and dasatinib, suggesting that MRP4 may be involved in the export of these TKIs out of the cell. Since MRP4 is reportedly under transcriptional control of Nrf2 (which also regulates expression of the Trx system), this thesis also aimed to examine any link between the Nrf2/Trx system and MRP4. Activation of Nrf2 resulted in increased MRP4 expression and activity, however, TrxR inhibitors also induced a similar response. This is because inhibiting the Trx system results in an increase in ROS, which therefore induces the activation of Nrf2. Inhibition of MRP4 also increased the efficacy of TrxR inhibitors. Inhibition of MRP4 may therefore be a promising co-treatment for current or future CML chemotherapeutics. It was shown in this thesis that MRP4 expression was upregulated in hypoxia in a HIF-1 dependant manner. Upon further investigation, it was found that this upregulation was potentially mediated by the increased expression of adenylyl cyclase 6 in hypoxia, as cAMP accumulation is a major regulator of MRP4 expression. Reoxygenation of CML cells resulted in an increase of MRP4 expression, and this was thought to be due to the increase in Nrf2 expression observed in these conditions. These two results show that changes in the oxygenation state of the cell influence the expression of MRP4 and could potentially lead to increased drug resistance. This was further investigated by inhibiting MRP4 in hypoxia and examining the effect of this on TKI efficacy. MRP4 inhibition sensitised CML cells in hypoxia to both ponatinib and dasatinib. This result reiterates the potential of using MRP4 inhibitors as a co-treatment with other CML chemotherapeutics. Overall, this thesis outlined the effect of the Trx system, hypoxia and MRP4 on TKI resistance in CML, as well as the interactions between these systems and with bcr-abl. Due to the prevalence of bcr-abl dependant forms of drug resistance in CML, alternative treatments need to be investigated and utilised. It was found that the inhibition of the Trx system using TrxR specific chemical inhibitors was able to overcome both acquired TKI resistance and hypoxia induced drug resistance. Furthermore, specifically inhibiting MRP4 activity increased the efficacy of clinically used TKIs, as well as TrxR inhibitors. MRP4 inhibition was also able to sensitise CML cells to TKIs in hypoxia. These results demonstrate that MRP4 inhibitors may also make promising co-treatments for the management of CML.
Thesis (PhD Doctorate)
Doctor of Philosophy (PhD)
School of Environment and Sc
Science, Environment, Engineering and Technology
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GALIMBERTI, CHIARA. « Preliminary characterization of CR13626, a novel tyrosine kinase inhibitor for the treatment of glioblastoma ». Doctoral thesis, Università degli Studi di Milano-Bicocca, 2022. http://hdl.handle.net/10281/365481.

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Résumé :

Presso l’azienda Rottapharm Biotech è emersa una nuova piccola molecola chiamata CR13626 che è stata identificata come un inibitore tirosin chinasico innovativo caratterizzato da un buon tropismo cerebrale e in grado di inibire alcune chinasi rilevanti nello sviluppo del glioblastoma (GBM), la più comune e maligna forma di tumore primario cerebrale nell’uomo, quali le chinasi EGFR, VEGR2, Fyn, Yes, Lck, HGK e RET. Inoltre, CR13626 non è risultato essere un substrato dei trasportatori di membrana implicati nel processo di resistenza multifarmaco e che in un contesto tumorale contribuiscono alla resistenza del tumore ad uno specifico trattamento farmacologico. Così, lo scopo del mio progetto di tesi è stato quello di caratterizzare l’attività di CR13626, sia in vitro che in vivo, in modo da sondare il suo potenziale per la terapia del glioblastoma. Con questo scopo per prima cosa ho valutato l’abilità di CR13626 di inibire l’attivazione indotta da ligando dei recettori EGFR e VEGFR2 in cellule di glioblastoma U87MG e in cellule endoteliali HUVEC-C, rispettivamente, attraverso esperimenti di immunoblotting. Inoltre, per definire meglio la potenza di CR13626 nell’inibire la chinasi Fyn in un modello cellulare, ho valutato la capacità del composto nel ridurre i livelli di fosforilazione di Tau mediati da Fyn utilizzando cellule HEK-239 co-transfettate per esprimere sia Fyn e Tau e un saggio ELISA messo a punto ad hoc. Inoltre, dal momento che VEGFR2 è ampiamente coinvolto nel promuovere il processo di angiogenesi, il quale a sua volta contribuisce a fornire un appropriato sostentamento al tumore, ho valutato la capacità di CR13626 di ridurre la formazione di strutture rappresentative di nuovi vasi come indicazione di eventuali proprietà antiangiogenetiche del composto in un saggio volto a investigare la formazione di queste strutture mediante l’utilizzo di cellule HUVEC-C. Successivamente ho verificato l’effetto di CR13626 sulla proliferazione cellulare in diverse linee cellulari di glioblastoma coltivate in 2D, ed in particolare nelle seguenti linee: U87MG, U373, U87MG vIII e T98G. Ciascuna di esse possiede infatti alterazioni e mutazioni genetiche presenti anche nelle cellule tumorali di GBM. Con lo scopo di verificare un’eventuale tossicità di CR13626 nei confronti di cellule non tumorali, ho verificato l’effetto di CR13626 sulla linea non tumorale di cellule HEK-293. Inoltre, dal momento che gli sferoidi 3D sono considerati più rappresentativi della complessità del microambiente tumorale rispetto alle colture 2D, costituendo quindi un modello più attendibile per verificare la risposta cellulare ad un trattamento farmacologico, ho valutato l’efficacia di CR13626 nel ridurre la proliferazione di cellule U87MG coltivate in 3D. Infine, l’attività antitumorale in vivo di CR13626 è stata valutata in un modello murino ortotopico eterologo di glioblastoma basato sull’impianto di cellule U87MG-Luciferate nel cervello di topi nudi (esperimento condotto presso i laboratori della società Accelera Srl, Nerviano, Italia). Gli animali sono stati trattati oralmente con CR13626 alla dose di 50 mg/kg/giorno o con il rispettivo veicolo per 10 giorni, partendo al giorno 9 dall’impianto delle cellule tumorali. La progressione del tumore è stata valutata tramite la misura di bioluminescenza (BLI) alla fine del trattamento (giorno 19) e durante i successivi giorni di osservazione (giorni 26 e 33) e la sopravvivenza degli animali è stata successivamente monitorata. In parallelo, in un gruppo satellite di animali con analogo impianto tumorale e trattati oralmente con CR13626 per 5 giorni alla dose di 50 mg/kg/giorno, sono state determinate le concentrazioni cerebrali e plasmatiche del composto.
At Rottapharm Biotech, a novel small molecule compound called CR13626 has emerged as a novel tyrosine kinase inhibitor with a good tropism for the brain and the ability to inhibit EGFR, VEGR2, Fyn, Yes, Lck, HGK and RET kinases relevant for the development of glioblastoma (GBM), the most common and malignant type of primary brain tumor. In addition, CR13626 resulted to be not a substrate of multidrug transporters involved in tumour resistance. Thus, the aim of my project is to characterize the activity of the compound, both in vitro and in vivo, to investigate the potential of CR13626 for glioblastoma therapy. To this purpose, I firstly investigated the ability of CR13626 to inhibit the ligand-induced activation of EGFR and VEGFR2 receptors in U87MG GBM and HUVEC-C cells, respectively, through western blot experiments. To better define the potency of CR13626 on Fyn kinase in a cellular model, I exploited the Fyn-mediated phosphorylation levels of Tau in Fyn/Tau co-transfected HEK-293 cells through a customized indirect-ELISA. Because of VEGFR2 is largely involved in promoting angiogenesis process, which contributes to tumor sustenance, I evaluated the ability of CR13626 to reduce the formation of new vessel-like structures in a HUVEC-C tube formation assay, as an indication of its antiangiogenic properties. Then I verified the effect of CR13626 on cellular proliferation in different 2D human GBM cell lines such as U87MG, U373, U87MG vIII and T98G, each harboring some of the genetic alterations/mutations present in GBM tumor cells. I also evaluated the activity of CR13626 on HEK-293 cells to assess the effect of the compound on a non-tumoral human cell line and to exclude a potential toxicity on healthy cells. Since 3D cell spheroids are more representative of the complexity of tumor environment with respect to 2D cultures and represents a more reliable model to assess cellular response to a drug treatment, I also investigated the efficacy of CR13626 in reducing cellular proliferation in U87MG cells cultured as 3D spheroids. Finally, the antitumor activity of CR13626 was investigated in vivo in an orthotopic xenograft mouse model of GBM based on the injection of U87MG-Luciferase cells in nude mice (experiment performed at Accelera Srl, Nerviano, Italy). Animals were orally treated with CR13626 (50 mg/kg/daily) or vehicle for 10 days, starting on day 9 post-implantation. Tumour progression was evaluated through the measurement of bioluminescence (BLI) at the end of dosing (day 19) and during follow-up (days 26 and 33). The survival of animals was also evaluated. In addition, the plasma and brain concentrations of CR13626 in tumour-bearing mice were determined in a satellite group of animals orally treated for 5 days with CR13626 (50 mg/kg/daily).

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Bendjeddou, Lyamin. « Synthèse et évaluation biologique de nouveaux inhibiteurs de kinases : identification d‘inhibiteurs de kinases parasitaires ». Thesis, Paris 5, 2014. http://www.theses.fr/2014PA05P615.

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Résumé :

La phosphorylation des protéines par les kinases est l’une plus importantes modification post-traductionnelle dans les processus cellulaires tels que la division, la différenciation, la prolifération et l’apoptose. Due à leur rôle clef, un dérèglement des protéines kinases peut entrainer de nombreuses pathologies proliférative telles que le cancer et non prolifératives telles que les maladies neurodégénératives. Le travail de thèse s’est construit autour de 2 séries d’inhibiteurs de protéine kinases comportant les noyaux imidazo[1,2-b]pyridazine et imidazo[4,5-b]pyridine. L’objectif est d’inhiber sélectivement les protéines kinases choisies, pour leurs implications dans les pathologies visées au laboratoire. Les imidazo[1,2-b]pyridazines ont été préparées pour identifier des inhibiteurs de CLK1 et DYRK1A, cibles potentielles dans la maladie d’Alzheimer. Parmi les imidazo[1,2-b]pyridazines synthétisées, plusieurs molécules se sont révélées particulièrement sélectives de DYRKs et CLKs, avec des IC50 < 100 nM. Une relation structure-activité basée sur la synthèse de 70 molécules, a permis de dégager des éléments structuraux de la sélectivité des molécules. L’évaluation des produits a également été portée sur les kinases de parasites. Il a ainsi été possible d’identifier quelques inhibiteurs actifs sur PfCLK1. La seconde partie de cette thèse avait pour objectif l’optimisation du protocole de synthèse imidazo[4,5-b]pyridines, analogue de la roscovitine. Des dérivés s’étaient révélés capables d’inhiber la formation de kystes, dans un modèle cellulaire de polykystose rénale. Une synthèse en sept étapes a conduit à plusieurs grammes d’imidazo[4,5-b]pyridine 3,5,7 trisubstitués, qui sont ainsi disponibles pour l’évaluation in vivo
Phosphorylation by protein kinases is one of the most important post-translational modification in cellular processes such as division, differentiation, proliferation and apoptosis. Kinase deregulation is associated with numerous diseases such as cancer or neurodegenerative diseases. Imidazo[1,2-b]pyridazine and imidazo[4,5-b]pyridine were prepared to inhibit protein kinases involved in diseases targeted in the laboratory. The imidazo[1,2-b]pyridazines were synthesized to identify inhibitors of CLK1 and DYRK1A, potential targets in Alzheimer's disease. Among the imidazo[1,2-b]pyridazines synthesized, several molecules were found selective of DYRKs and CLKs, with IC50 < 100 nM. A structure-activity relationship based on the synthesis of 70 molecules, led to the identification of the structural bases of the selectivity. Products were also evaluated against parasite kinases. It was possible to identify some highly potent inhibitors on PfCLK1. The aim of second part of this thesis was to optimize the synthetic process to obtain imidazo[4,5-b]pyridines, which are close analogues of roscovitine. Derivatives had proved capable of inhibiting the formation of cysts in a cellular model of polycystic kidney disease. A seven-step synthesis has led to several grams of 3,5,7-trisubstituted imidazo[4,5-b]pyridine which is now available for evaluation in vivo

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Padi, Sathish K. R., Libia A. Luevano, Ningfei An, Ritu Pandey, Neha Singh, Jin H. Song, Jon C. Aster, Xue-Zhong Yu, Shikhar Mehrotra et Andrew S. Kraft. « Targeting the PIM protein kinases for the treatment of a T-cell acute lymphoblastic leukemia subset ». IMPACT JOURNALS LLC, 2017. http://hdl.handle.net/10150/624055.

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Résumé :

New approaches are needed for the treatment of patients with T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) who fail to achieve remission with chemotherapy. Analysis of the effects of pan-PIM protein kinase inhibitors on human T-ALL cell lines demonstrated that the sensitive cell lines expressed higher PIM1 protein kinase levels, whereas T-ALL cell lines with NOTCH mutations tended to have lower levels of PIM1 kinase and were insensitive to these inhibitors. NOTCH-mutant cells selected for resistance to gamma secretase inhibitors developed elevated PIM1 kinase levels and increased sensitivity to PIM inhibitors. Gene profiling using a publically available T-ALL dataset demonstrated overexpression of PIM1 in the majority of early T-cell precursor (ETP)-ALLs and a small subset of non-ETP ALL. While the PIM inhibitors blocked growth, they also stimulated ERK and STAT5 phosphorylation, demonstrating that activation of additional signaling pathways occurs with PIM inhibitor treatment. To block these pathways, Ponatinib, a broadly active tyrosine kinase inhibitor (TKI) used to treat chronic myelogenous leukemia, was added to this PIM-inhibitor regimen. The combination of Ponatinib with a PIM inhibitor resulted in synergistic T-ALL growth inhibition and marked apoptotic cell death. Treatment of mice engrafted with human T-ALL with these two agents significantly decreased the tumor burden and improved the survival of treated mice. This dual therapy has the potential to be developed as a novel approach to treat T-ALL with high PIM expression.

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Leconet, Wilhem. « Signalisation et ciblage thérapeutique du récepteur tyrosine kinase AXL dans les cancers ». Thesis, Montpellier 1, 2014. http://www.theses.fr/2014MON13506.

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Résumé :

AXL est un récepteur tyrosine kinase (RTK) impliqué dans de nombreux mécanismes cellulaires tels que la migration, l'invasion, l'angiogenèse et la prolifération des cellules. Sa surexpression a été observée dans de nombreux cancers et est souvent liée à un mauvais pronostic vital pour le patient. De plus, ce récepteur semble agir dans un mécanisme important dans la formation de métastases et la résistance aux thérapies anticancéreuses : la transition épithélio-mésenchymateuse (EMT). Nous avons dans un premier temps généré des anticorps monoclonaux murins spécifiques du récepteur AXL. Deux de ces anticorps ont ensuite été sélectionnés pour leurs propriétés inhibitrices de l'expression d'AXL à la surface et de l'activation de ce récepteur par son ligand GAS6. En effet ces deux anticorps, le 20G7D9 et le 3E3E8, entraine l'internalisation et la dégradation lysosomale d'AXL.Nous avons dans un deuxième temps étudié l'expression et le rôle de ce récepteur dans le cancer du pancréas qui possède un manque cruel de solutions thérapeutiques aujourd'hui et dont le taux de survie reste très faible (moins 5% des patients survivent 5 ans après son diagnostic). Nous avons ainsi observé une expression d'AXL dans une majorité des tumeurs de patients (76%), notamment au niveau du front invasif de ces tumeurs. Le ciblage d'AXL par nos deux anticorps inhibe sa signalisation et permet une réduction in vitro et in vivo de la croissance tumorale.Enfin, l'importante expression d'AXL dans le front invasif des tumeurs nous a incité à étudier le rôle d'AXL au cours de la transition épithélio-mésenchymateuse. Nous avons ainsi démontré que le couple AXL/GAS6 induit l'EMT dans des modèles invasifs de cancer du sein triple négatifs. De plus, l'expression du récepteur dans des tumeurs de cancer du sein de type basal-like est corrélée à celle de différents marqueurs importants dans l'EMT. L'application de nos anticorps anti-AXL dans ce type de cancer permet d'inhiber l'induction de l'EMT par le récepteur ainsi que l'invasion cellulaire in vitro et in vivo.Cette thèse a ainsi permis de démontrer l'importance du récepteur tyrosine kinase AXL dans des mécanismes oncogéniques clés et l'efficacité de son ciblage par des anticorps monoclonaux dans des modèles précliniques de cancer
The Tyrosine Kinase Receptor (TKR) AXL is implicated in various cellular mechanisms (migration, invasion, angiogenesis and cell proliferation). Its overexpression has been observed in many cancers and is often correlated with poor prognosis. Moreover, this receptor seems to be important in Epithelial to Mesenchymal Transition (EMT), a mechanism related to metastasis formation and resistance to anticancer therapies.We have generated several AXL specific murine monoclonal antibodies. Two of them, 20G7D9 and 3E3E8, have been selected for their inhibition properties in AXL expression and activation by its ligand GAS6. In fact, both antibodies induce internalization and lysosomal degradation of AXL.Then we decided to study AXL expression and role in pancreatic cancer, which is characterized by a dramatic overall survival (<5%, 5 years after diagnosis) and a lack of efficient therapeutic solutions. We observed an ectopic expression of AXL in a majority of patient' pancreatic tumors (76%), notably in the invasive front of the tumor. Targeting AXL with both 20G7D9 and 3E3E8 inhibits its signaling and decreases tumor growth in vitro and in vivo.As AXL is mainly expressed in the invasive front of tumors, we analyzed its role during EMT. We observed that AXL/GAS6 signaling induces EMT in triple negative breast cancer cell lines. Furthermore, its expression is correlated with well-defined EMT markers in basal-like breast cancer tumors. In vitro and in vivo application of our antibodies inhibits AXL-dependant EMT signaling and cellular migration and invasion.In conclusion, this thesis demonstrates the importance of AXL Tyrosine Kinase Receptor in oncogenic processes and the efficacy of targeting this receptor with monoclonal antibodies in cancer preclinical models

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Joha, Sami. « Mécanismes de résistance aux inhibiteurs de tyrosine kinase sur le modèle de leucémie myéloïde chronique ». Phd thesis, Université du Droit et de la Santé - Lille II, 2009. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00451045.

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Résumé :

La leucémie myéloïde chronique (LMC) est une transformation maligne d'une cellule souche hématopoïétique, caractérisée par une anomalie génétique acquise : le chromosome Philadelphie (Ph), résultant de la translocation réciproque t(9 ;22)(q34 ;q11), et son équivalent moléculaire, l'oncogène BCR-ABL. La protéine BCR-ABL présente une activité tyrosine kinase constitutive qui agit sur les voies de survie et de prolifération. La progression de la maladie vers la phase accélérée puis blastique s'accompagne d'anomalies génétiques additionnelles marqueurs d'une instabilité génomique croissante. La responsabilité de BCR-ABL dans la genèse de cette instabilité génomique est fortement suspectée. Dérivé de 2-phénylamino-pyrimidines, l'Imatinib inhibe l'activité tyrosine kinase de BCR-ABL ainsi que la prolifération de lignées cellulaires BCR-ABL positives et induit leur apoptose. Les échecs du traitement par l'Imatinib sont dus à des mécanismes de résistance qui ne sont pas tous entièrement caractérisés. Des nouveaux inhibiteurs de tyrosine kinases (ITKs) ou des associations avec l'Imatinib ont été développés afin de la surmonter. Cependant, une résistance croisée et multiple demeure difficile à traiter et nécessite une meilleure compréhension des mécanismes de résistance afin d'éradiquer la maladie dans un avenir proche. Les travaux réalisés au cours de cette thèse ont montré que la présence de microremaniements génétiques (traduisant une instabilité) au sein de progéniteurs leucémiques CD34+ de patients traités par l'Imatinib corrélait avec la perte de réponse à l'Imatinib chez les patients diagnostiqués en phase chronique, suggérant que la résistance à l'Imatinib pourrait être corrélée aux altérations génétiques survenant précocement dans la physiopathologie de la maladie. 113 gènes affectés ont été détectés dont certains sont localisés dans des régions connues pour être hypervariables (CNV) suggérant un rôle de ces régions dans le développement de la LMC ou la résistance à l'Imatinib. Nous avons mis en évidence la présence d'une anomalie acquise récurrente dans telle région localisée en 8p23.1 qui groupe les gènes de la famille de la Défensine B. Ce microremaniement n'est pas lié à la résistance à l'Imatinib car il est retrouvé dans les populations cellulaires CD34+ Ph+ et Ph-, il peut donc être considéré comme un marqueur de l'instabilité d'une sous-population cellulaire clonale de CD34+ présentant une grande prédisposition à acquérir des altérations génétiques additionnelles, comme la fusion BCR-ABL. Nos études montrent que des altérations secondaires pourraient être le support d'une résistance à l'Imatinib. La résistance à l'Imatinib peut alors être liée à la dérégulation des voies de signalisation en amont ou en aval de BCR-ABL, affectant ainsi la prolifération, la survie, la différenciation et l'intégrité du génome. Il semble donc que le traitement par l'Imatinib seul ne soit pas suffisant pour éradiquer la maladie. Pour cette raison, de nouvelles molécules à associer avec l'Imatinib sont actuellement en cours d'évaluation. Parmi ces associations, les inhibiteurs de la voie Ras ont montré une certaine efficacité dans la restauration de l'activité proapoptotique de l'Imatinib. Il était donc intéressant de chercher une cible thérapeutique régulant négativement cette voie afin de surmonter cette résistance. GILZ (Glucocorticoid-Induced Leucine Zipper) inhibe la voie Ras/Raf par une interaction directe. Il inhibe également la voie NFκB dont certains antagonistes sont capables de surmonter la résistance à l'Imatinib. Nos résultats montrent, pour la première fois, que l'expression de GILZ est diminuée dans des lignées humaines ou murines exprimant BCR-ABL sensibles ou résistantes aux ITKs ainsi que dans les cellules dormantes résiduelles isolées d'un modèle cellulaire murin développé au laboratoire. L'expression forcée de GILZ dans ces lignées résistantes restaure la sensibilité à l'Imatinib. Nos résultats montrent que le mécanisme passe par une inhibition de la voie mTORC2/Akt Ser473. Elle est due à une interaction directe de GILZ avec mTORC2 permettant l'activation de FoxO3a et l'induction de l'expression de la protéine proapoptotique Bim. Dans ce système, GILZ augmente l'expression de Bim tandis qu'Imatinib, par ses effets "Off-target", diminue celle de Mcl-1 inversant ainsi le rapport des membres antiapoptotiques/proapoptotiques de la famille Bcl-2 et entrainant l'apoptose. Le traitement séquentiel par les glucocorticoïdes puis l'Imatinib induit l'apoptose de cellules souches de patients résistants par le même mécanisme, suggérant que la modulation de l'expression de GILZ pourrait représenter une nouvelle stratégie thérapeutique pour cibler les cellules leucémiques résistantes ou résiduelles. La régulation de la voie mTORC2/Akt Ser473 semble être d'une importance cruciale dans la survie des cellules BCR-ABL+, ainsi que dans la résistance aux ITKs. Parmi les gènes méthylés dans notre étude, on retrouve un gène impliqué dans la régulation de cette voie et qui code pour la phosphatase PHLPP (PH domain and Leucine rich repeat Protein Phosphatase) dont l'activité est de déphosphoryler la sérine 473 d'Akt favorisant son inactivation. Nos résultats montrent que la réexpression du variant 1 de cette phosphatase (PHLPP1) dans notre modèle murin de résistance restaure la sensibilité à l'Imatinib et que la répression de celui-ci n'est pas exclusivement due à l'activité tyrosine kinase de BCR-ABL, mais aussi à des modifications épigénétiques. Nos études ont permis d'identifier des gènes impliqués dans la résistance des LMC aux ITKs et de proposer de nouveaux traitements pour surmonter cette résistance en inhibant la voie Akt Ser473

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Joha, Mohamad Sami. « Mécanismes de résistance aux inhibiteurs de tyrosine kinase sur le modèle de leucémie myéloïde chronique ». Lille 2, 2009. http://www.theses.fr/2009LIL2S042.

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Résumé :

La leucémie myéloïde chronique (LMC) est une transformation maligne d’une cellule souche hématopoïétique, caractérisée par une anomalie génétique acquise : le chromosome Philadelphie (Ph), résultant de la translocation réciproque t(9 ;22)(q34 ;q11), et son équivalent moléculaire, l’oncogène BCR-ABL. La protéine BCR-ABL présente une activité tyrosine kinase constitutive qui agit sur les voies de survie et de prolifération. La progression de la maladie vers la phase accélérée puis blastique s’accompagne d’anomalies génétiques additionnelles marqueurs d’une instabilité génomique croissante. La responsabilité de BCR-ABL dans la genèse de cette instabilité génomique est fortement suspectée. Dérivé de 2-phénylaminopyrimidines, l’Imatinib inhibe l’activité tyrosine kinase de BCR-ABL ainsi que la prolifération de lignées cellulaires BCR-ABL positives et induit leur apoptose. Les échecs du traitement par l’Imatinib sont dus à des mécanismes de résistance qui ne sont pas tous entièrement caractérisés. Des nouveaux inhibiteurs de tyrosine kinases (ITKs) ou des associations avec l’Imatinib ont été développés afin de la surmonter. Cependant, une résistance croisée et multiple demeure difficile à traiter et nécessite une meilleure compréhension des mécanismes de résistance afin d’éradiquer la maladie dans un avenir proche. Les travaux réalisés au cours de cette thèse ont montré que la présence de microremaniements génétiques (traduisant une instabilité) au sein de progéniteurs leucémiques CD34+ de patients traités par l’Imatinib corrélait avec la perte de réponse à l’Imatinib chez les patients diagnostiqués en phase chronique, suggérant que la résistance à l’Imatinib pourrait être corrélée aux altérations génétiques survenant précocement dans la physiopathologie de la maladie. 113 gènes affectés ont été détectés dont certains sont localisés dans des régions connues pour être hypervariables (CNV) suggérant un rôle de ces régions dans le développement de la LMC ou la résistance à l’Imatinib. Nous avons mis en évidence la présence d’une anomalie acquise récurrente dans telle région localisée en 8p23. 1 qui groupe les gènes de la famille de la Défensine B. Ce microremaniement n’est pas lié à la résistance à ii l’Imatinib car il est retrouvé dans les populations cellulaires CD34+ Ph+ et Ph-, il peut donc être considéré comme un marqueur de l'instabilité d’une sous-population cellulaire clonale de CD34+ présentant une grande prédisposition à acquérir des altérations génétiques additionnelles, comme la fusion BCR-ABL. Nos études montrent que des altérations secondaires pourraient être le support d’une résistance à l’Imatinib. La résistance à l’Imatinib peut alors être liée à la dérégulation des voies de signalisation en amont ou en aval de BCR-ABL, affectant ainsi la prolifération, la survie, la différenciation et l’intégrité du génome. Il semble donc que le traitement par l’Imatinib seul ne soit pas suffisant pour éradiquer la maladie. Pour cette raison, de nouvelles molécules à associer avec l’Imatinib sont actuellement en cours d’évaluation. Parmi ces associations, les inhibiteurs de la voie Ras ont montré une certaine efficacité dans la restauration de l’activité proapoptotique de l’Imatinib. Il était donc intéressant de chercher une cible thérapeutique régulant négativement cette voie afin de surmonter cette résistance. GILZ (Glucocorticoid-Induced Leucine Zipper) inhibe la voie Ras/Raf par une interaction directe. Il inhibe également la voie NFκB dont certains antagonistes sont capables de surmonter la résistance à l’Imatinib. Nos résultats montrent, pour la première fois, que l’expression de GILZ est diminuée dans des lignées humaines ou murines exprimant BCR-ABL sensibles ou résistantes aux ITKs ainsi que dans les cellules dormantes résiduelles isolées d’un modèle cellulaire murin développé au laboratoire. L’expression forcée de GILZ dans ces lignées résistantes restaure la sensibilité à l’Imatinib. Nos résultats montrent que le mécanisme passe par une inhibition de la voie mTORC2/AktSer473. Elle est due à une interaction directe de GILZ avec mTORC2 permettant l’activation de FoxO3a et l’induction de l’expression de la protéine proapoptotique Bim. Dans ce système, GILZ augmente l’expression de Bim tandis qu’Imatinib, par ses effets "Off-target", diminue celle de Mcl-1 inversant ainsi le rapport des membres antiapoptotiques/proapoptotiques de la famille Bcl-2 et entrainant l’apoptose. Le traitement séquentiel par les glucocorticoïdes puis l’Imatinib induit l’apoptose de cellules souches de patients résistants par le même mécanisme, suggérant que la modulation de l’expression de GILZ pourrait iii représenter une nouvelle stratégie thérapeutique pour cibler les cellules leucémiques résistantes ou résiduelles. La régulation de la voie mTORC2/AktSer473 semble être d’une importance cruciale dans la survie des cellules BCR-ABL+, ainsi que dans la résistance aux ITKs. Parmi les gènes méthylés dans notre étude, on retrouve un gène impliqué dans la régulation de cette voie et qui code pour la phosphatase PHLPP (PH domain and Leucine rich repeat Protein Phosphatase) dont l’activité est de déphosphoryler la sérine 473 d’Akt favorisant son inactivation. Nos résultats montrent que la réexpression du variant 1 de cette phosphatase (PHLPP1) dans notre modèle murin de résistance restaure la sensibilité à l’Imatinib et que la répression de celui-ci n'est pas exclusivement due à l'activité tyrosine kinase de BCR-ABL, mais aussi à des modifications épigénétiques. Nos études ont permis d’identifier des gènes impliqués dans la résistance des LMC aux ITKs et de proposer de nouveaux traitements pour surmonter cette résistance en inhibant la voie AktSer473.

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Wu, Zherui. « La surexpression et l'activation des récepteurs aux facteurs de croissance par des régulations autocrines ou paracrines à la neurotensine, conférant aux cellules une sensibilité aux inhibiteurs de tyrosine kinase ». Thesis, Paris 6, 2015. http://www.theses.fr/2015PA066141.

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Résumé :

Les cancers hépatiques, bronchiques et mammaires sont responsables de 35 % de décès par le cancer en 2012. Les études sur des facteurs contribuant à la progression tumorale devraient approfondir nos connaissances sur la biologie de ces cancers et ouvrir de nouvelles voies pour le développement de stratégies thérapeutiques. Dans ce contexte, nous avons étudié l'impact de la neurotensine (NTS) et de son récepteur NTSR1 sur la progression tumorale et son rôle potentiel pour de futures applications cliniques. J’ai initié ce projet dans le carcinome hépatocellulaire (CHC) et participé aux projets dans le cancer du poumon et du sein qui avaient été initiés par les anciens doctorants de l’équipe. Dans le CHC, sur une série de 73 patients, la NTS et le NTSR1 ont été détectés dans respectivement 56 % et 64 % des cas. En utilisant deux modèles cellulaires nous avons montré que l’expression du NTSR1 est une cible de la voie wnt/β-caténine. Le couple NTS/NTSR1 augmente l’expression et l’activation de l’EGFR et favorise la croissance des tumeurs expérimentales et la capacité de migration et d’invasion des cellules. La régulation entre le complexe NTS/NTSR1 et les récepteurs des HERs a également été observée dans les cancers bronchiques et mammaires, la NTS induit l'expression et l'activation constitutive des récepteurs EGFR, HER2 et HER3, par l'intermédiaire de l'activation des métalloprotéinases qui libèrent les ligands “EGF-like” spécifiques d'EGFR et d’HER3. L’activation constitutive des HER par le couple NTS/NTSR1 mime les mutations activatrices des HERs, ainsi la réponse des tumeurs aux inhibiteurs de tyrosine kinase est potentialisée dans le cancer du poumon, du sein et du foie
In 2012, Liver, lung and breast cancers represented 30% of new cancer cases, and 35% of cancer related deaths. Identification of factors contributing to tumor progression can strengthen our understanding of the cancer biology and suggest new therapeutic strategies. In this context, we studied the impact of neurotensin (NTS) and its receptor NTSR1 on tumor progression and its potential clinical application. I have initiated the project in hepatocellular carcinoma (HCC) and participated in the projects on lung and breast cancers initiated by former PhD students. In HCC, on a series of 73 patients, NTS and NTSR1 were detected in 56% and 64% of the cases, respectively. Meanwhile, I showed that NTSR1 expression is the target of the Wnt/¦Â-catenin pathway. The NTS / NTSR1 complex increases the expression and activation of EGFR and promotes the growth of experimental tumors and the ability of the cell for migration and invasion. The regulation between the NTS/NTSR1 complex and EGF receptors were also thoroughly studied in lung and mammary cancers. Indeed, NTS induced the expression and the constitutive activation of EGFR, HER2, and HER3, through the activation of metalloproteinases which released specific "EGF-like" ligands for EGFR and HER3. Constitutive activation of HERs by the NTS/NTSR1 complex mimics the activating mutations of HERs and therefore potentiates the tumor response to tyrosine kinase inhibitors treatment in liver, lung and breast cancers

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Yunus, Madiha. « Investigating the Effect of Regorafenib on the Expression and Activity of the Angiogenesis-Modulating Receptor Tyrosine Kinases ». Thesis, The University of Sydney, 2022. https://hdl.handle.net/2123/29860.

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The past two decades have been vital for developing cancer treatments. Even though traditional chemotherapy remains the primary choice for most oral treatment regimens, the cancer treatment paradigm is shifting towards more personalised, mechanism-based and selective therapeutic strategies. Tremendous advances have been made in understanding the aberrant signal transduction pathways in cancer, and a myriad of oncogenic drivers have been identified as promising candidates for molecule-targeted therapies. By using small low-molecular-weight compounds, specific alterations in oncogenic molecules driving cancer progression can be targeted precisely. Neoangiogenesis is a complex process and one of the founding hallmarks of cancer. Therefore, targeting tumour angiogenesis is a key strategy in cancer treatment. The antiangiogenic agents currently available for gastric cancers are specific and predominantly target the vascular endothelial growth factor (VEGF) pathway. However, specific VEGF targeting has not proven 100% effective due to the emergence of several interconnected and compensatory pathways in response to VEGF targeting. This thesis explores the efficacy of Regorafenib, a small molecule multikinase inhibitor with a broad antiangiogenic activity that targets multiple signalling pathways to maximise its potential therapeutic anti-cancer strategy. This thesis aims to build a profile of the kinases targeted by Regorafenib in gastric cancer and identify novel molecular pathways that may arise in response to Regorafenib’s multi-targeted mechanism of action.

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Baldacci, Simon. « Conséquences de la dérégulation de MET sur le phénotype des cancers bronchiques non à petites cellules EGFR mutés devenus résistant aux inhibiteurs de tyrosine kinase d’EGFR ». Thesis, Lille 2, 2017. http://www.theses.fr/2017LIL2S043/document.

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Résumé :

Introduction : Le traitement des cancers bronchiques non à petites cellules (CBNPC) EGFR mutés repose sur les inhibiteurs de tyrosine kinase (ITK) du récepteur de l’Epidermal Growth Factor (EGFR). Cependant tous les patients traités par ITK EGFR finissent par présenter une progression tumorale, du fait de mécanismes de résistance comme l’amplification du gène codant pour le récepteur tyrosine kinase MET. Il n’existe actuellement aucune donnée sur les modifications phénotypiques induites par l’activation de MET dans ce contexte. L’objectif de cette thèse est de déterminer si l’amplification de MET, lors de la résistance aux ITK EGFR dans les CBNPC EGFR mutés, confère aux cellules tumorales un phénotype plus agressif et modifie l’histoire naturelle de la maladie.Méthodes : Les capacités de prolifération, de croissance sans ancrage, de formation de sphéroïdes, de résistance à l’anoïkis et de migration ont été étudiées in vitro dans la lignée HCC827, dérivée d’un CBNPC EGFR muté, et dans sa lignée fille HCC827-GR6 (GR6) devenue résistante aux ITK EGFR via une amplification du gène MET. L’expression de la vimentine, de ZEB1, et de la E-cadherine a également été étudiée dans les deux lignées cellulaires afin d’évaluer l’impact de l’amplification de MET sur la transition épithélio-mésenchymateuse (TEM). In vivo la croissance tumorale et le potentiel métastatique ont respectivement été analysés dans des modèles murins de xénogreffe ectopique et d’injection intracardiaque. Enfin les données cliniques de patients issus de 15 centres avec un CBNPC EGFR muté métastatique, présentant une forte surexpression de MET en immunohistochimie (score 3+) ou une amplification de MET en FISH sur une re-biopsie réalisée après la progression sous ITK EGFR ont été analysées rétrospectivement. Résultats : In vitro, l’amplification de MET induisait une augmentation significative de la prolifération, de la croissance sans ancrage, de la formation de sphéroïdes, de la résistance à l’anoïkis et de la migration. En présence d’un inhibiteur de MET, le PHA-665752, ces différentes propriétés biologiques étaient réduites de façon significative dans les cellules GR6 porteuses de l’amplification de MET. Il était également mis en évidence dans les cellules GR6 une augmentation de l’expression de la vimentine et de ZEB1. In vivo, l’amplification de MET augmentait significativement la croissance tumorale et le potentiel métastatique. Un traitement par crizotinib, ITK ciblant MET, diminuait de façon significative le potentiel métastatique des cellules porteuses de l’amplification de MET. Enfin les patients atteints d’un CBNPC EGFR muté, porteur d’une amplification de MET à la résistance à l’ITK EGFR, présentaient une durée jusqu’à apparition de nouvelles métastases plus courte après progression sous ITK EGFR que les patients avec une forte surexpression de MET sans amplification génique. Conclusion L’amplification de MET dans un contexte de résistance aux ITK EGFR est associée à un phénotype tumoral plus agressif. Ces résultats plaident en faveur d’une utilisation précoce d’inhibiteurs de MET en association avec les ITK EGFR afin d’éviter l’émergence d’un clone tumoral résistant plus agressif
Introduction: Treatment of Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) mutated non-small cell lung cancers (NSCLC) relies on EGFR tyrosine kinase inhibitors (TKI). However, all patients treated with EGFR TKI eventually present tumor progression, due to mechanisms of resistance such as the MET amplification. There is currently no data on phenotypic changes induced by MET activation in this context. The objective of this thesis is to determine whether the MET amplification during EGFR TKI resistance in the EGFR mutated NSCLC induces a more aggressive phenotype in tumor cells and alters the natural history of the disease.Methods: Proliferation, anchorage independent growth, spheroid formation, anoïkis resistance and migration were studied in vitro in the HCC827 cell line, derived from an EGFR mutated NSCLC, and in its daughter cell line HCC827-GR6 (GR6) which became resistant to EGFR TKI through MET amplification. The expression of vimentin, ZEB1, and E-cadherin was evaluated in these cellular models in order to investigate an epithelial to mesenchymal transition (EMT) process induced by the MET amplification. In vivo, the tumor growth and the metastatic potential were analyzed by subcutaneous xenograft and intracardiac injection in mouse models. Finally, the clinical data of patients from 15 centers with a metastatic EGFR mutated NSCLC, exhibiting high MET overexpression in immunohistochemistry (score 3+) or MET amplification assessed by FISH on a re-biopsy performed after TKI EGFR progression were analyzed retrospectively.Results: In vitro, the MET amplification induced a significant increase in proliferation, anchorage independent growth, spheroid formation, anoïkis resistance and migration. Treatment with PHA-665752, a MET TKI, significantly reduced these biological properties in the GR6 cells harboring the MET amplification. An increase in the expression of vimentin and ZEB1 was also observed in the GR6 cells. In vivo, the MET amplification significantly increased the tumor growth and the metastatic potential. Treatment with crizotinib, another MET TKI, significantly decreased the metastatic potential of cells carrying MET amplification. Finally, patients with an EGFR mutated NSCLC, displayed a time to new metastases after TKI EGFR progression shorter than patients with high MET overexpression without MET amplification.Conclusion: The MET amplification during EGFR TKI resistance is associated in EGFR muted NSCLC with a more aggressive tumor phenotype. These results argue for the early use of MET inhibitors in combination with EGFR TKIs to avoid the emergence of a more aggressive resistant tumor clone

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Yamamoto, Noriyuki. « Development of a selective inhibitor for Syk tyrosine kinase and investigation of its pharmacological activities ». 京都大学 (Kyoto University), 2003. http://hdl.handle.net/2433/148369.

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Murdoch, Gordon Kenneth. « The modulation of cyclic nucleotides in rat pinealocytes by a tyrosine kinase inhibitor, tyrphostin B42 ». Thesis, National Library of Canada = Bibliothèque nationale du Canada, 1997. http://www.collectionscanada.ca/obj/s4/f2/dsk3/ftp05/mq22644.pdf.

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SARONNI, DAVIDE. « TYROSINE KINASE INHIBITORS IN NEUROENDOCRINE TUMORS : FROM IN VITRO TO ZEBRAFISH MODEL ». Doctoral thesis, Università degli Studi di Milano, 2022. http://hdl.handle.net/2434/917967.

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Résumé :

(1) Background: Neuroendocrine neoplasms (NENs) are a group of tumors that arise from neuroendocrine cells throughout the body, with the lungs and gastrointestinal tract being the most common sites of origin. In patients with NENs and distant metastases, surgery is generally not curative. Although well-differentiated and low-grade NENs, classified as neuroendocrine tumors (NETs), are usually less aggressive than poorly-differentiated NENs, they can develop distant metastases in about 15% of cases. These patients require chronic medical management. However, the clinical efficacy of these treatments is limited by the low objective response rate, due to the occurrence of tumor resistance and the high biological heterogeneity of these neoplasms. (2) Research problem: We addressed this study on two rare NETs: lung neuroendocrine tumors (LNETs) and medullary thyroid carcinoma (MTC). LNETs represent about 2% of lung tumors, while MTCs are rare thyroid tumors caused by mutations in the RET proto-oncogene. Both NETs are well-differentiated neoplasms and are known to be highly vascularized. Therefore, they represent a potential target for tyrosine kinase inhibitors (TKIs) selective for receptors involved in angiogenesis. The aim of this project was to evaluate the antitumor activity of several new TKIs both in vitro, using LNETs (NCI-H727, UMC-11 and NCI-H835) and MTC (TT and MZ-CRC-1) cell lines, and in vivo, adopting a novel zebrafish xenograft model to study angiogenesis. In LNETs we tested: sulfatinib, a small molecule that inhibits the Vascular Endothelial Growth Factor Receptor (VEGFR) 1, 2, and 3, and the Fibroblast Growth Factor Receptor type 1 (FGFR1); cabozantinib, a multi-target inhibitor selective for VEGFR2, c-Met, Kit, Axl and Flt3; and axitinib, a multi-target TKI of VEGFR1, 2, 3 and Platelet-Derived Growth Factor Receptor-beta (PDGFRβ). In MTC we tested: sulfatinib; SPP86, a RET-specific inhibitor; and SU5402, an inhibitor of the FGFR1 and VEGFR2. (3) Methodology: In LNETs and MTC cells the effects of selected TKIs have been evaluated in vitro through: MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) and MTS (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium) assays, for assessing cell viability; flow-cytometer analysis, for the evaluation of cell cycle and apoptosis; and wound-healing assay, to study cell migration. In vivo we took advantage of the transgenic zebrafish line of Tg(fli1a:EGFP)y1. Through the xenotransplantation of NET cells in the subperidermal space near the subintestinal vein, we assessed the effects of TKIs on tumor-induced angiogenesis and cancer dissemination. (4) Key Results: In LNET cell lines we observed a dose-dependent decrease in cell viability after incubation with all TKIs. This effect seems to be related to the perturbation of the cell cycle and induction in apoptosis. In NCI-H727 wound healing assay showed a significant reduction in cell migration only after incubation with cabozantinib. In the zebrafish model, we found a significant reduction of the tumor-induced angiogenesis in implanted LNET cell lines after treatment with all TKIs. Cabozantinib and axitinib were more potent than sulfatinib in inhibition of angiogenesis, while cabozantinib was the most efficient in reducing cell migration from the transplantation site to the tail. In MTC cell lines, sulfatinib, SU5402 and SPP86 showed a decrease in cell viability, confirmed by the significant reduction in S phase cell population. Moreover, sulfatinib and SPP86 showed for both cell lines a significant induction of apoptosis. Sulfatinib and SPP86 inhibited the migration of TT and MZCRC-1 cells, evaluated through the wound healing assay, while SU5402 was able to inhibit migration only in TT cells. In vivo we observed a significant reduction of TT cells-induced angiogenesis in zebrafish embryos after treatment with sulfatinib and SPP86. (5) Conclusions: Despite sulfatinib resulted the most potent compound in terms of inhibition of LNET cell proliferation, cabozantinib showed in vivo the most effective impact in reducing tumor-induced angiogenesis. Cabozantinib was the only TKI able to inhibit in vivo the dissemination of implanted LNET cells. According to these data, cabozantinib could represent a potential candidate in the therapy of patients with highly vascularized LNET. In MTC cell lines, SPP86 and sulfatinib displayed a similar antitumor activity both in vitro and in vivo, suggesting a good efficacy of specific RET inhibitors (SPP86) with potentially less adverse effects than multitarget TKIs (sulfatinib). In addition, this study showed that the zebrafish model for NETs represents an innovative tool for drug screening with several advantages compared with rodent models: rapidity of procedure, animal immune suppression is not required, lower number of tumor cells for implant and the optical transparency provides a real-time monitoring of cell-stromal interactions and cancer progression in living animals.

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Lewis, Matthieu. « Identification de voies de résistance aux inhibiteurs de tyrosine kinase dans la leucémie myéloïde chronique par criblage CRISPR-Cas9 ». Thesis, Bordeaux, 2019. http://www.theses.fr/2019BORD0054/document.

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Résumé :

La caractérisation des tumeurs malignes et la compréhension des mécanismes de résistance aux traitements anticancéreux sont essentielles pour la découverte de nouvelles cibles thérapeutiques. Les criblages génétiques, devenus encore plus puissants avec la technologie d’édition du génome CRISPR-Cas9, le séquençage nouvelle génération et la bioinformatique, sont des outils formidables pour décrypter de nouveaux mécanismes cellulaires, dont la résistance au traitement. La leucémie myéloïde chronique (LMC) est un syndrome myéloprolifératif qui est caractérisé par l’anomalie génétique t(9;22). Cette aberration chromosomique est à l’origine du gène de fusion BCR-ABL1 qui code l’oncogène du même nom responsable de la prolifération anarchique des cellules. L’imatinib mesylate, un inhibiteur de tyrosine kinase, élimine de manière spécifique les cellules leucémiques en ciblant et en bloquant l’activité kinase de cette protéine. Malheureusement, comme pour tout type de thérapie ciblée, une résistance au traitement survient chez certains patients. Afin de repérer des nouvelles voies de résistance à cet inhibiteur de tyrosine kinase, nous avons effectué un criblage génétique avec la librairie « genome-scale CRISPR knock-out » (GeCKO v2) in vitro dans la lignée cellulaire K562. Nous avons découvert plusieurs gènes qui semblent être essentiels pour la réponse au traitement par imatinib, tels que les facteurs pro-apoptotiques BIM et BAX, ou le répresseur de la voie des MAPK, SPRED2. Le rétablissement spécifique de l’apoptose dans les cellules BIM knock-out (KO) par des BH3-mimétiques, ou l’inhibition ciblée de la voie MAPK dans la lignée SPRED2 KO sensibilise de nouveau les lignées résistantes. Dans ce travail, nous avons découvert des mécanismes de résistance déjà connus (l’apoptose, la voie MAPK…) mais nous avons également démontré l’implication de voies peu connues telles que le complexe Mediator, la maturation de ARNm et l’ubiquitinylation de protéines. Spécifiquement cibler ces lésions génétiques avec des thérapies ciblées combinées peut permettre de surmonter les phénotypes de résistance et ouvre la porte à l’utilisation de l’oncologie de précision
The characterization of malignant tumour growth and the understanding of resistance mechanisms to treatment in cancer is of utmost importance for the discovery of novel “druggable” targets. Efficient genetic screening, now even more possible with the convergence of CRISPR-Cas9 gene editing technology, next-generation sequencing and bioinformatics, is an important tool for deciphering novel cellular processes, such as resistance to treatment in cancer. Chronic myeloid leukemia (CML) is a myeloproliferative disorder characterised by the t(9;22) genetic abnormality, which encodes the driver of CML, the BCR-ABL1 fusion protein. Imatinib mesylate, a tyrosine kinase inhibitor, specifically eliminates CML cells by targeting and blocking the kinase activity of this protein, yet, as for all targeted therapies in cancer, resistance to treatment exists. In order to discover alternative BCR-ABL1 independent mechanisms of imatinib resistance, we utilized the genome-scale CRISPR knock-out library GeCKO v2 to screen for imatinib sensitising genes in vitro on K562 cells. We revealed genes that seem essential for imatinib induced cell death, such as pro-apoptotic genes (BIM, BAX) or MAPK inhibitor SPRED2. Specifically re-establishing apoptotic capabilities in BIM knock-out (KO) cells with BH3-mimetics, or inhibiting MAP-kinase signalling in SPRED2 KO cells with MEK inhibitors restores sensitivity to imatinib, overcoming resistance phenotypes. In this work, we discovered previously identified pathways (apoptosis, MAP-kinase signalling) and novel pathways that modulate response to imatinib in CML cell lines, such as the implication of the Mediator complex, mRNA processing and protein ubiquitinylation. Targeting these specific genetic lesions with combinational therapy can overcome resistance phenotypes and paves the road for the use of precision oncology

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Huguet, Florence. « Étude de l'altération de la réponse aux radiations ionisantes par deux inhibiteurs de tyrosine kinase : le STI571 (Glivec®) et le BIBW 2992 ». Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2010. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00574782.

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Les associations chimioradiothérapies occupent une place importante dans le traitement des cancers. De nouveaux médicaments ciblent spécifiquement la cellule tumorale. Ces thérapies ciblées peuvent agir sur les mécanismes de radiorésistance tumorale et sont prometteuses en association avec la radiothérapie. Le STI571 (imatinib ou Glivec) inhibe spécifiquement l'activité tyrosine kinase de Bcr-Abl. Il entraîne une radiosensibilisation dans la lignée de leucémie myéloïde chronique K562 en agissant sur le cycle cellulaire. Le BIBW2992 est un inhibiteur sélectif d'EGFR et HER2, responsable d'une cytotoxicité et d'une radiosensibilisation des cellules d'adénocarcinome pancréatique BxPC3 et Capan-2, indépendamment de leur statut KRAS. Le mécanisme sous-jacent cette radiosensibilisation n'est pas univoque, faisant intervenir à la fois des modifications du cycle cellulaire et une induction de la mort mitotique. Nos résultats montrent que l'association d'un inhibiteur de tyrosine kinase aux radiations ionisantes peut entraîner une radiosensibilisation in vitro dont les mécanismes sont variables en fonction du type de lignée cellulaire.

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Bourgne, Céline. « Approche des mécanismes de résistance des cellules souches leucémiques de leucémie myéloïde chronique aux inhibiteurs de tyrosine kinase ». Thesis, Clermont-Ferrand 1, 2012. http://www.theses.fr/2012CLF1MM10.

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Les Inhibiteurs de l'activité Tyrosine Kinase (ITK) de BCR-ABL (Imatinib (IMA), Nilotinib (NIL) et Dasatinib (DAS)) ont révolutionné le traitement de la Leucémie Myéloïde Chronique (LMC), mais la cinétique et l'intensité des réponses thérapeutiques restent variables. Par ailleurs, plusieurs travaux démontrent qu'il persiste chez la majorité des patients des cellules souches leucémiques (CSL) CD34+ résistantes aux ITK et capables de reconstituer la maladie. Partant du principe que la thérapie ciblée (les ITK) devait atteindre le compartiment cellulaire et du constat qu'aucune méthode ne permettait d'évaluer la quantité d'ITK dans les cellules malignes vivantes, nous avons développé un procédé en cytométrie en flux pour quantifier ces molécules dans les cellules de la LMC. Nous avons ainsi démontré que la mort cellulaire des lignées K562 et KCL22 à 24h est étroitement corrélée à la quantité d'IMA accumulée dès la 1ère heure. L'application du procédé aux cellules primaires a montré un taux intracellulaire d'ITK dépendant des caractéristiques des cellules et variable d'un sujet à l'autre (Article 1). Pour l'instant, en raison de l'hétérogénéité de notre cohorte, nous n'avons pas pu mettre en évidence de corrélation entre l'accumulation des ITK et la réponse thérapeutique de la LMC. Notre procédé nous a permis de suivre l'accumulation in vivo du DAS dans les blastes circulants d'un patient LMC en phase d'acutisation, en parallèle de la réactivation de pSyk348 - que nous avons identifié comme marqueur de progression - au moment de l'échappement au DAS (Article 2). Un avantage majeur du procédé est la possibilité d'analyser les différentes sous-populations, dont les cellules CD34+ de LMC. Ces dernières ont un taux d'ITK intracellulaire plus faible que les cellules matures, voire absent chez certains patients. Pour l'instant une corrélation significative avec les tests clonogéniques effectués en parallèle est retrouvée seulement avec le DAS. Enfin, nos résultats préliminaires suggèrent des différences entre les cellules CD34+ du sang et de la moelle. En conclusion, ce procédé permet d'évaluer la quantité d'ITK dans des sous-populations cellulaires précises et viables. Nous envisageons de poursuivre ce projet par l'évaluation de l'intérêt d'un dosage précoce du taux d'ITC intracellulaire in vivo (après la 4ème prise) d'une part et d'autre part par l'étude de l'influence du microenvironnement sur la résistance des CSL de LMC aux ITK et sur certaines dérégulations propres à ce compartiment cellulaire
The Tyrosine Kinase Inhibitors (TKI) of BCR-ABL (Imatinib (IMA), Nilotinib (NIL) and dasatinib (DAS)) have revolutionized the treatment of Chronic Myeloid Leukemia (CML). However therapeutic responses remain variable. Moreover, several studies showed that most patients have persistent CD34+ leukemic stem cells (LSCs) resistant to TKI and the origin of disease relapse. Given that the targeted therapy (TKI) should reach malignant cells and that no method was able to assess the amount of TKI in viable target cells, we have developed a process by flow cytometry for TKI quantification in target cells. By using K562 and KCL22 cell lines we showed that cell death at 24hrs was closely related to IMA uptake after one hour of incubation. We then applied our method to primary cells and showed an intracellular level of IMA, NIL and DAS dependent on cell characteristics and heterogeneous from one subject to another (Article 1). Probably because of the heterogeneity of our series, we did not find any correlation between the accumulation of TKI and therapeutic response of CML. Moreover, we used our process to observe a decrease in DAS accumulation in vivo in circulating blasts of a CML patient with acute transformation, in spite of significant DAS uptake, we observed a recurrence of Syk phosphorylation in Y348 that we identified as a potential marker of acutisation, at the same time of disease resistance (Article 2). A major advantage of our process is the possibility to analyze the different cell subsets, including CD34+ CML cells. These cells had a lower (even absent in cells from some patients) level of intracellular TKI compared to mature cells. The clonogenic assays performed in parallel showed a significant correlation with DAS only. Finally, our preliminary results suggest differences between CD34+ cells from blood and those from bone marrow. In conclusion, our process allows evaluating the amount of TKI in viable cell subpopulations. This project will be continued with i) the study of the potential interest of the early evaluation of in vivo intracellular level of TKI (after the fourth dose) and ii) the influence of the microenvironment on CSL resistance to TKI and epigenetics deregulations

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Nowak, Frédérique. « Inhibiteurs de protéines tyrosine kinases et transduction : effet d'une tyrphostine sur les récepteurs de classe I et sur la signalisation conduisant à l'activation de la MAP kinase dans des cellules éphithéliales du colon ». Châtenay-Malabry, Ecole centrale de Paris, 1996. http://www.theses.fr/1996ECAP0449.

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Nous avons étudié le mécanisme d'action d'un inhibiteur de protéines tyrosine kinases, la tyrphostine AG 213, sur les évènements induits par l'activation du R-EGF et de p185erbB2. Pour cela, nous avons utilisé la lignée d'origine tumorale humaine SW613-S. Nous avons transfecté les cellules SW 613-S avec soit le gène c-erbB2, soit le gène c-erbB2 muté dans la région transmembranaire, erbB2 (V-E). Cette mutation rend ce gène beaucoup plus transformant dans des fibroblastes. Dans les clones issus de la transfection, p185erbB2 et p185erbB2 (V-E) présentent une autophosphorylation constitutive, mais la phosphorylation de la protéine mutée est plus importante. L'expression de p185erbB2 (V-E) dans les cellules SW 613-S conduit à la phosphorylation constitutive des protéines Shc et a l'activation constitutive de la MAP kinase. Pourtant, ces cellules ne sont pas devenues tumorigènes. Au contraire, les cellules SW 613-S exprimant p185erbB2 (V-E) semblent présenter une régression de leur phénotype transformé. Nous avons ensuite analysé les effets de l'AG 213, sur le signal déclenché par l'activation du R-EGF et de p185erbB2. Lors de brefs traitements, l'AG 213 ne modifie pas la phosphorylation sur résidu tyrosine des deux récepteurs. Par contre, elle agit sur au moins deux cibles différentes. L'une se trouve en amont de MEK1 et l'autre semble être MEK1 elle même. De même, lors de traitements prolongés, l'inhibition par l'AG 213 de la synthèse d'ADN n'est pas reliée à l'inhibition de l'activité tyrosine kinase du R-EGF et de p185erbB2 (V-E).

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Charaf, Lucie. « Utilisation de la stratégie iPSC pour la modélisation et l'étude des mécaniques de résistance des cellules souches cancéreuses : exemple de la leucémie myéloïde chronique ». Thesis, Bordeaux, 2016. http://www.theses.fr/2016BORD0230.

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La technologie iPSC (induced pluripotent stem cells) permet l’obtention d’une source cellulaire illimitée pour la modélisation et la thérapie de maladies génétiques, la médecine régénérative, l’étude pharmacologique et récemment la modélisation et l’étude du cancer. La leucémie myéloïde chronique (LMC) est la pathologie modèle du concept de « cellule souche cancéreuse » : des cellules souches LMC (CS-LMC) s’avèrent résistantes aux inhibiteurs de tyrosine kinases (ITK), traitement conventionnel de ce syndrome myéloprolifératif. Elles sont responsables de la persistance d’une maladie résiduelle et de rechutes lors de l’interruption du traitement. Malheureusement, leur isolement est difficile. Nous proposons dans ce travail de modéliser les CS-LMC par les iPSC LMC. Nous montrons pour la première fois dans les iPSC LMC que BCR-ABL1 réprime l’expression des facteurs clés de la pluripotence (OCT4,NANOG, le cluster miR302-367) via les kinases ERK1/2. Les ITK, en bloquant l’activité deBCR-ABL1, entraîne une hausse des niveaux d’expression de ces marqueurs. L’effet « prosouche» des ITK, découvert dans les iPSC LMC, est également observé lors du traitement de CS-LMC primaires. L’agent thérapeutique pourrait ainsi, en maintenant ou renforçant le compartiment LMC immature, participer paradoxalement à la persistance de la maladie résiduelle. Étonnamment, les ITK augmentent également l’expression des marqueurs« souches » dans les iPSC et CS hématopoïétiques normales. Ce résultat suggère un effet« pro-souche » généralisé à plusieurs types cellulaires
IPSC (induced pluripotent stem cells) offer renewable source of biologically relevant human cells for genetic diseases modelling and therapy, regenerative medicine, pharmacological study and, recently, cancer research. The proof of « cancer stem cell concept » was established in chronic myeloid leukemia (CML) : CML stem cells (CML-SC) are resistant to treatment (tyrosine kinase inhibitors (TKI)). They are involved in residual disease persistence and relapse when treatment is discontinued in the majority of patients. We modelled CML-SC with CML iPSC. We showed, for the first time, that BCR-ABL1 acts as a repressor of key stemness markers (OCT4, NANOG, miR302-367 cluster) via ERK1/2 in human CML iPSC. By blocking BCR–ABL1 activity, TKI increase pluripotency gene expression. Interestingly, a similar pro-stemness effect was observed during CML-SC treatment. By inducing a more primitive stemness phenotype, TKI could promote residual disease and relapse. Interestingly, an increase of stemness gene expression was also observed during TKI treatment of healthy cells (iPSC and hematopoietic stem cells). These data suggest a global TKI pro-stemness effect in other stem cell types

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Lebeau, Alexandre. « Conception d’inhibiteurs de l’activité tyrosine kinase basée sur la plasticité conformationnelle : applications aux domaines kinase des protéines Axl, Abl et Src ». Thesis, Montpellier 2, 2013. http://www.theses.fr/2013MON20250/document.

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Le récepteur tyrosine kinase Axl a été découvert en 1988. Depuis, son implication dans les phénomènes de cancérisation a été mis en lumière. Ce récepteur est surexprimé, entre autres, dans les lignées cellulaires du cancer du pancréas et du cancer du sein triple négatif. Le succès des inhibiteurs de kinase contre les cancers (imatinib, erlotinib …) nous a poussés à nous focaliser sur la conception d'inhibiteurs du domaine kinase de la protéine Axl afin d'élaborer de nouveaux anticancéreux. Pour ce faire, nous avons décidé de modéliser le domaine kinase de la protéine Axl en conformations dites ‘active' et ‘inactive'. Les modèles ont ensuite été validés par différentes méthodes : des méthodes de bioinformatique structurale mais aussi par amarrage comparatif et par criblage virtuel focalisé. Sur la base de ces modèles, une chimiothèque virtuelle focalisée a été construite et amarrée dans les modèles d'Axl. J'ai ensuite effectué la synthèse chimique de 15 des ligands conçus à l'étape précédente et ciblant la conformation ‘inactive' du domaine kinase d'Axl. Aucun de ces ligands n'est apparu actif dans les tests in vitro. Dans un second temps, nous nous sommes intéressés à la chimie des noyaux 4- et 7-azaindoles. Ces travaux ont permis la synthèse de 12 ligands dirigés contre les conformations ‘inactives' des domaines kinases d'Abl et de Src dont certains ont montré une activité prometteuse. Parallèlement, un criblage a très large échelle a été publié et nous avons utilisé ces nouveaux résultats pour réévaluer l'existence d'une conformation -inactive' – de type « DFG-out » - du domaine kinase d'Axl. Ces travaux permettront la conception de nouveaux ligands ciblant efficacement Axl
The receptor tyrosine kinase Axl was discovered in 1988. Latter on, its involvement in the cancer development was highlighted. Axl is overexpressed in pancreatic cancer and triple-negative breast cancer cell lines. The success of kinase inhibitors (imatinib, erlotinib ...) led us to focus on the design of inhibitors targetting the kinase domain of Axl. As a guide, we modeled the protein-kinase domain in its active and inactive conformations to perform structure-based drug design. The models were then validated by different methods: structural bioinformatics, comparative docking and focused virtual screening. A virtual chemical library was built and docked into Axl models.Then, I synthetized 15 chemical compounds targetting the ‘inactive' conformation of the kinase domain of Axl. However, none were active in an in vitro assay. Then we were interested in the chemistry of 4 and 7-azaindole cores. This work led to the synthesis of 12 ligands among which several showed promising activity against the ‘inactive' conformation of the kinase domains of Abl and Src.Meanwhile, a large-scale screening was published and we used that new data to re-evaluate the modeling of a "DFG-out" inactive conformation of Axl

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Leary, Alexandra. « Laboratory and clinical studies of the dual EGFR/HER2 tyrosine kinase inhibitor lapatinib in breast cancer ». Thesis, Institute of Cancer Research (University Of London), 2011. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.538329.

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Dahle-Smith, Åsa. « Qualification of predictive biomarkers for epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor therapy in oesophagogastric carcinoma ». Thesis, University of Aberdeen, 2016. http://digitool.abdn.ac.uk:80/webclient/DeliveryManager?pid=231421.

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Introduction: The incidence of oesophageal cancer (OC) is increasing. Targeted therapies are being investigated, as chemotherapy in advanced OC achieves only 50% response rates and confers significant toxicity. TRANS-COG is a sub-study of COG, the only randomised trial of the Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) tyrosine kinase inhibitor (TKI) gefitinib versus placebo in patients with advanced OC. Aim and Methods: The aim of TRANS-COG is to identify biomarkers for predicting response to gefitinib by investigating the frequency of mutations of EGFR pathway members and EGFR gene copy number gain (CNG) by Fluorescence In Situ Hybridisation (FISH). Results: No EGFR mutations were identified, frequency of other pathway member mutations are as follows: KRAS 3.6%, PI3KCA 3.2%, BRAF 0.6%. The frequency of EGFR CNG was 13.5%. There were two cases of combined EGFR CNG and KRAS mutation 0.3%.Patients with EGFR CNG tumours had improved OS with gefitinib compared to placebo, log rank p=0.033, HR 0.523 (95%CI 0.285-0.962). Those with EGFR high CNG (amplification) also had improved OS with gefitinib, median OS 4.40 months vs median OS 1.71 months for placebo log rank p=0.004, HR 0.184 (95% CI 0.052-0.653). Mutation of KRAS conferred poor prognosis, independent of treatment received; median OS 3.614 months in KRAS wild type vs 1.741 months in KRAS mutated tumours, log rank p=0.023, HR 1.8153 (95% CI 1.078 3.187). A novel KRAS codon 61 mutation, Q61L, was also identified. Conclusion: 21.18% of patients have dysregulation of the EGFR pathway, these abnormalities represent realistic therapeutic targets. This analysis demonstrates clinical utility of EGFR CNG as a predictive biomarker of gefitinib response.

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Basbous, Sara. « La voie Rho/ROCK, un nouveau mécanisme d'échappement des cellules leucémiques au contrôle de l'immunité T innée ». Thesis, Poitiers, 2016. http://www.theses.fr/2016POIT1402/document.

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Résumé :

Les cellules iNKT et T CDS innées sont présumées contribuer à l'irnmunosurveillance (IS) des cancers et sont fonctionnellement déficientes dans la leucémie myéloïde chronique (LMC). Notre hypothèse était que ces défauts résultent de l'incapacité des cellules dendritiques myéloïdes (mDC) à les activer. Des analyses par cytométrie en flux et microscopie confocale ont révélé une baisse de l'expression membranaire de CD 1 d, qui présente les antigènes aux cellules iNKT, à la surface des mDC des patients LMC, par comparaison aux sujets sains. Ce défaut n'est associé ni à un défaut de maturation des mDC, comme le montre l'expression normale de HLA-DR et de CDS6, ni à une baisse d'expression intracellulaire de CDld ou de son transcrit. Ces résultats sont conciliables avec une rétention intracellulaire. Le traitement in vitro des mDC des patients LMC avec un inhibiteur de la protéine ROCK restaure partiellement l'expression de surface de CD 1 d et la présentation antigénique par CD Id, alors qu'il n'a eu aucun effet sur les mDC des sujets sains. Nous proposons que la protéine ROCK, qui est activée par le domaine DH-PH de BCR-ABL, interfere avec la réponse immunitaire dépendant des lymphocytes iNKT au cours de la LMC par régulation négative de l'expression membranaire de CDld des mDC. Le fait que les cellules iNKT et T CDS innées retrouvent des fonctions normales après rémission complète de la LMC est en faveur d'une génération de cellules T CD8 innées dépendante des cellules iNKT, comme décrit chez la souris. Notre travail suggère une implication des cellules iNKT et T CD8 innées dans l'IS de la LMC et révèle l'axe ROCK/mDC comme une nouvelle cible thérapeutique dans la maladie
CDld-restricted iNKT cells and innate CD8 T cells are believed to play a key role in cancer immune surveillance and are functionally deficient in chronic myeloid leukemia (CML). Herein, we have hypothesized that this defect might originate from BCR-ABL-dependent dysfunctions in myeloid dendritic cells (mDC). Indeed, flow cytometry and confocal microscopy revealed that cell-surface expression of CDld was downregulated in CML mDC, relative to healthy donor (HD) controls. The decreased cell-surface display of CDld could not be ascribed to defective mDC differentiation, as attested by normal expression of HLA-DR and the CD86 maturation marker. On the other hand, reduced membrane expression was not associated with decreased intracytoplasmic levels of CDld or its mRNA transcripts, consistent with intracellular retention. ln vitro treatrnent of CML mDC with the Rho-associated protein Kinase (ROCK) inhibitor Y-27632 partially restored both cell-surface CDld expression and CDld-mediated antigen presentation, while it had no effect on HD mDC. We propose that ROCK, which is most likely activated by the DH-PH domain of BCR-ABL, mediates iNKT-cell immune subversion in CML patients by downregulating CDld expression on CML mDC. Remarkably, both iNKT cells and innate CD8 T cells retumed to nonnal after complete CML remission, a finding consistent with a iN KT cell-dependent generation of innate CD8 T cells, similarly to the observations in mice. Ali in ali, our study supports the possible contribution of iNKT/innate CD8 T cells to tumor surveillance in CML, and reveals the ROCK/mDC axis as a new potential target to restore immune surveillance in CML

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Thèses sur le sujet « Inhibiteur de la tyrosine kinase »

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