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Thèses sur le sujet « Transpeptidases »
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Triboulet, Sébastien. « Mécanisme catalytique d'une nouvelle classe de transpeptidases du peptidoglycane ». Thesis, Paris 6, 2015. http://www.theses.fr/2015PA066282.
Texte intégralRésumé :
A l’instar des D,D-transpeptidases de la famille des protéines de liaison à la pénicilline (PLP), les L,D-transpeptidases catalysent la formation des ponts interpeptidiques du peptidoglycane. Chez un mutant de Enterococcus faecium, la totalité du peptidoglycane est synthétisée par les L,D-transpeptidases entrainant une résistance à toutes les β-lactamines à l’exception des carbapénèmes. Le peptidoglycane de Mycobacterium tuberculosis étant majoritairement synthétisé par des L,D-transpeptidases, ces enzymes sont une cible potentielle pour le développement de nouveaux traitements de la tuberculose. Les objectifs de cette thèse sont de comprendre la spécificité des L,Dtranspeptidases pour les carbapénèmes et d’identifier les sites de fixation des précurseurs du peptidoglycane à ces enzymes. Les résultats montrent que l’oxyanion formé lors de l’attaque du cycle β-lactame des carbapénèmes par la cystéine active est stabilisé dans le site actif des L,Dtranspeptidases. Cette stabilisation combinée à l’absence d’hydrolyse de l’acylenzyme conduisent à l’inactivation rapide, totale et irréversible des L,Dtranspeptidases par les carbapénèmes. La structure de l’acylenzyme indique que ces propriétés sont indépendantes de la nature de la chaine latérale des antibiotiques qui pourrait être optimisée. La localisation de l’accepteur d’acyle dans la Poche II de Ldtfm ainsi que des interactions supplémentaires avec les chaines glycanes du peptidoglycane montrent que d’autres sites que celui ciblé par les βlactamines, mimes du donneur d’acyle, sont des cibles pour le développement de nouveaux antibiotiques qui pourraient agir en synergie avec les βlactaminesL,D-transpeptidases, as D,D-transpeptidases belonging to the penicillin-binding protein (PBP) family, catalyse the last cross-links step of peptidoglycan biosynthesis. The peptidoglycan of an Enterococcus faecium mutant is exclusively cross-linked by L,D-transpeptidases leading to resistance to all β-lactams except the carbapenems. Since peptidoglycan cross-links are predominantly synthesized by L,D-transpeptidases in Mycobacterium tuberculosis these enzymes are potential targets for chemotherapy of tuberculosis. The aims of the thesis are to identify the kinetic features that account for the specificity of L,D-transpeptidases for carbapenems and to characterise the binding sites for the peptidoglycan precursors in these enzymes. Our results show that the oxyanion resulting from nucleophilic attack of carbapebems by the catalytic cysteine is stabilized into the active site of L,D-transpeptidases. This stabilisation, combined to the absence of hydrolysis of the acylenzyme, leads to the rapid, total and irreversible inactivation of L,D-transpeptidases by carbapenems. Resolution of the acylenzyme structure shows that these kinetic features are independent from the carbapenem side chain that could be modified to optimize the antibiotics. The binding of the acyle acceptor has been identified in Pocket II of Ldtfm that is distinct from the binding site for β-lactams (Pocket I), which mimic the acyle donor. This site and additional peptidoglycan binding sites reveal additional targets for development of new antibiotics that might act in synergy with β-lactams
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Triboulet, Sébastien. « Mécanisme catalytique d'une nouvelle classe de transpeptidases du peptidoglycane ». Electronic Thesis or Diss., Paris 6, 2015. http://www.theses.fr/2015PA066282.
Texte intégralRésumé :
A l’instar des D,D-transpeptidases de la famille des protéines de liaison à la pénicilline (PLP), les L,D-transpeptidases catalysent la formation des ponts interpeptidiques du peptidoglycane. Chez un mutant de Enterococcus faecium, la totalité du peptidoglycane est synthétisée par les L,D-transpeptidases entrainant une résistance à toutes les β-lactamines à l’exception des carbapénèmes. Le peptidoglycane de Mycobacterium tuberculosis étant majoritairement synthétisé par des L,D-transpeptidases, ces enzymes sont une cible potentielle pour le développement de nouveaux traitements de la tuberculose. Les objectifs de cette thèse sont de comprendre la spécificité des L,Dtranspeptidases pour les carbapénèmes et d’identifier les sites de fixation des précurseurs du peptidoglycane à ces enzymes. Les résultats montrent que l’oxyanion formé lors de l’attaque du cycle β-lactame des carbapénèmes par la cystéine active est stabilisé dans le site actif des L,Dtranspeptidases. Cette stabilisation combinée à l’absence d’hydrolyse de l’acylenzyme conduisent à l’inactivation rapide, totale et irréversible des L,Dtranspeptidases par les carbapénèmes. La structure de l’acylenzyme indique que ces propriétés sont indépendantes de la nature de la chaine latérale des antibiotiques qui pourrait être optimisée. La localisation de l’accepteur d’acyle dans la Poche II de Ldtfm ainsi que des interactions supplémentaires avec les chaines glycanes du peptidoglycane montrent que d’autres sites que celui ciblé par les βlactamines, mimes du donneur d’acyle, sont des cibles pour le développement de nouveaux antibiotiques qui pourraient agir en synergie avec les βlactaminesL,D-transpeptidases, as D,D-transpeptidases belonging to the penicillin-binding protein (PBP) family, catalyse the last cross-links step of peptidoglycan biosynthesis. The peptidoglycan of an Enterococcus faecium mutant is exclusively cross-linked by L,D-transpeptidases leading to resistance to all β-lactams except the carbapenems. Since peptidoglycan cross-links are predominantly synthesized by L,D-transpeptidases in Mycobacterium tuberculosis these enzymes are potential targets for chemotherapy of tuberculosis. The aims of the thesis are to identify the kinetic features that account for the specificity of L,D-transpeptidases for carbapenems and to characterise the binding sites for the peptidoglycan precursors in these enzymes. Our results show that the oxyanion resulting from nucleophilic attack of carbapebems by the catalytic cysteine is stabilized into the active site of L,D-transpeptidases. This stabilisation, combined to the absence of hydrolysis of the acylenzyme, leads to the rapid, total and irreversible inactivation of L,D-transpeptidases by carbapenems. Resolution of the acylenzyme structure shows that these kinetic features are independent from the carbapenem side chain that could be modified to optimize the antibiotics. The binding of the acyle acceptor has been identified in Pocket II of Ldtfm that is distinct from the binding site for β-lactams (Pocket I), which mimic the acyle donor. This site and additional peptidoglycan binding sites reveal additional targets for development of new antibiotics that might act in synergy with β-lactams
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Cordillot, Mathilde. « Les L,D‐transpeptidases, cibles des carbapénèmes chez Mycobacterium tuberculosis ». Thesis, Paris 5, 2013. http://www.theses.fr/2013PA05T030.
Texte intégralRésumé :
Mycobacterium tuberculosis est responsable de 8,7 millions de nouveaux cas de tuberculose et de 1,4 millions de décès en 2011. L’émergence de souches résistantes aux deux antituberculeux majeurs, isoniazide et rifampicine, (MDR) et aux antibiotiques de seconde ligne (XDR), ainsi que la difficulté d’éradiquer les formes « dormantes » du bacille nécessitent la recherche de nouveaux antibiotiques. Les β-lactamines n’ont jamais été utilisées en thérapeutique car M. tuberculosis produit une β-lactamase à large spectre, BlaC. Cependant, l’association d’une β-lactamine appartenant à la classe des carbapénèmes, le méropénème, et d’un inhibiteur de β-lactamase, l’acide clavulanique, est active sur M. tuberculosis incluant des souches XDR. Notre objectif a été de caractériser les cibles des carbapénèmes qui sont atypiques chez M. tuberculosis, parce que le peptidoglycane de cette bactérie contient majoritairement (80%) des ponts interpeptidiques formés par une classe particulière de transpeptidases, les L,D-transpeptidases. Nous avons comparé les cinq L,D-transpeptidases de M. tuberculosis au niveau de leur activité in vitro dans la formation des ponts interpeptidiques du peptidoglycane et dans la réaction d’inactivation par les carbapénèmes. Nous avons ainsi pu montrer que les cinq L,D-transpeptidases sont fonctionnelles in vitro. LdtMt1, LdtMt2, LdtMt4 et LdtMt5 sont capables de former des ponts interpeptidiques du peptidoglycane reliant l’acide aminé en position 3 d’un substrat tétrapeptidique donneur à l’acide aminé en position 3 d’un substrat tétrapeptidique accepteur. Ces mêmes enzymes peuvent également utiliser la D-méthionine comme accepteur dans une réaction d’échange de la D-Ala4 du substrat tétrapeptidique. LdtMt1, LdtMt2, LdtMt3 et LdtMt4 forment un complexe covalent avec les carbapénèmes. La réaction d’inactivation des L,D-transpeptidases par les carbapénèmes se déroulent en deux étapes. Dans un premier temps, un intermédiaire covalent réversible est formé (constante catalytique k1) puis la deuxième étape aboutit à la formation de l’acylenzyme (constante catalytique k2). La détermination des constantes catalytiques d’inactivation k1 et k2 a révélé d’importantes différences entre les carbapénèmes. Excepté pour LdtMt1, l’imipénème inactive plus rapidement les L,D-transpeptidases que les autres carbapénèmes suggérant que des modifications de la chaine latérale pourraient être envisagées pour optimiser l’activité « anti-mycobactérienne » de cette classe de β-lactamines. Nous avons en parallèle initié l’étude de la régulation des L,D-transpeptidases dans différentes conditions de culture ce qui permettra à terme d’identifier les L,D-transpeptidases essentielles pour la croissance et la persistance de M. tuberculosis. Ce travail pourrait déboucher sur l’identification de cibles essentielles permettant l’éradication des formes dormantes de M. tuberculosis qui sont très difficile à traiterMycobacterium tuberculosis is responsible for 8.7 million of new cases of tuberculosis (TB) and 1.4 million of deaths in 2011. The emergence of strains resistant to the two first-line anti-TB drugs, isoniazid and rifampicin, (MDR), to second line-drugs (XDR) and the difficult to kill dormant forms of the bacilli require the discovery of new anti-TB antibiotics. β-lactams are usually not considered for tuberculosis treatment since M. tuberculosis produces a broad-spectrum β-lactamase, BlaC. However, the combination of β-lactam belonging to the carbapenem class, meropenem, with β-lactamase inhibitor, clavulanate, is notably active on XDR strains. Our aim was to characterize the carbapenem targets, atypical in M. tuberculosis, since peptidoglycan of this bacteria contains a majority (80%) of cross-links formed by a special transpeptidase family, the L,D-transpeptidases. We have compared the five L,D-transpeptidases of M. tuberculosis for their in vitro activities with respect to peptidoglycan dimers formation and for inactivation reaction by carbapenems. Thus, we have showed that the five L,D-transpeptidases were functional in vitro. LdtMt1, LdtMt2, LdtMt4 et LdtMt5 were able to form peptidoglycan cross-links binding the third amino acid of a donor tetrapeptide substrate with the third amino acid of an acceptor tetrapeptide substrate. These enzymes were also able to use D-methionine as an acceptor in exchange reaction of D-Ala4 of the donor tetrapeptide substrate. LdtMt1, LdtMt2, LdtMt3 et LdtMt4 formed a covalent adduct with carbapenems. The inactivation reaction of L,D-transpeptidases by carbapenems proceed through two steps. In first, a reversible covalent adduct is formed (catalytic constant k1), followed by a second step leading to acylenzyme formation (catalytic constant k2). The determination of kinetic constants of inactivation k1 et k2 revealed important differences between carbapenems. Except for LdtMt1, Imipenem inactivates L,D-transpeptidases more rapidly than other carbapenems indicating that modification of the carbapenem side chain could be used to optimize their anti-mycobacterial activity. In parallel, we have started the study of the L,D-transpeptidases regulation in various culture conditions will allow identifying the L,D-transpeptidases essential for growth and persistence of M. tuberculosis. This work might lead to identification of essential targets allowing eradication of M. tuberculosis dormant forms, which are difficult to treat with conventional anti-TB drugs
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Han, Liyou. « Studies on γ-glutamyl transpeptidases by using mechanism-based inhibitors ». Kyoto University, 2006. http://hdl.handle.net/2433/136508.
Texte intégralRésumé :
Kyoto University (京都大学)0048
新制・課程博士
博士(農学)
甲第12670号
農博第1593号
新制||農||934(附属図書館)
学位論文||H18||N4196(農学部図書室)
UT51-2006-U375
京都大学大学院農学研究科応用生命科学専攻
(主査)教授 坂田 完三, 教授 江﨑 信芳, 教授 宮川 恒
学位規則第4条第1項該当
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Lefebvre, Anne-Laure. « Etude de l’activité in vitro des β-lactamines sur Mycobacterium abscessus et recherche de leurs cibles ». Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2015. http://www.theses.fr/2015USPCB107.
Texte intégralRésumé :
Mycobacterium abscessus est une mycobactérie responsable principalement d’infections pulmonaires, en particulier chez les patients atteints de mucoviscidose ou de dilatation des bronches. M. abscessus est naturellement résistante aux antituberculeux, laissant peu d’options thérapeutiques. Le traitement de référence associait classiquement un aminoside, un macrolide (clarithromycine) et une β-lactamine (céfoxitine ou imipénème), avec un taux de succès d’environ 50 %. Cependant, des souches résistantes à la clarithromycine sont fréquemment isolées, remettant en cause l’utilisation de cet antibiotique. M. abscessus produit naturellement une β-lactamase à large spectre (BlaMab) mais les mécanismes d’action des β-lactamines n’ont pas été étudiés chez cette espèce, ce qui constitue une entrave à l’optimisation des traitements par cette classe d’antibiotiques. Le premier objectif était d’identifier et de caractériser les cibles des β-lactamines chez cette espèce. Inhibant la dernière étape de polymérisation du peptidoglycane, les cibles potentielles des β-lactamines sont trois familles d’enzymes : les D,D-transpeptidases et les D,Dcarboxypeptidases appartenant à la famille des protéines de liaison à la pénicilline (PLP), ainsi que les L,D-transpeptidases qui sont majoritairement responsables de cette dernière étape chez cette espèce. Pour identifier les cibles, des mutants résistants aux β-lactamines ont été sélectionnés à partir de la souche de référence M. abscessus CIP104536 et d’un dérivé portant une délétion du gène blaMab (∆blaMab). Pour les deux souches, l’émergence de la résistance aux β-lactamines a requis de multiples étapes, ce qui constitue un atout pour leur utilisation thérapeutique. Pour les mutants obtenus à partir de la souche CIP104536, les analyses phénotypiques ont montré que la résistance aux β-lactamines n'est pas due à une augmentation de l’efficacité catalytique de BlaMab, à une surproduction de cette enzyme, ou à une diminution de la perméabilité. Le séquençage des génomes de mutants résistants n’a pas révélé de mutations dans les gènes codant pour les L,D-transpeptidases, mais des mutations ont été trouvées dans des gènes codant pour deux PLP. D’autres mutations se situent dans des gènes codant en particulier pour des protéines non caractérisées. L’acquisition de la résistance pourrait donc dépendre de mutations affectant des facteurs essentiels à l’activité des cibles des βlactamines. Le deuxième objectif était d’étudier et de comparer l’activité in vitro des β-lactamines sur M. abscessus. Des expériences de bactéricidie et d’activité intracellulaire chez le macrophage infecté ont été effectuées pour les souches CIP104536 et ∆blaMab. Parmi les antibiotiques étudiés (amikacine, céfoxitine, imipénème, ceftaroline, et amoxicilline), l’imipénème est le plus efficace sur les deux souches. Sur la souche ∆blaMab, l’association d’imipénème et d’amikacine est bactéricide. En l’absence de BlaMab, l’amoxicilline est aussi efficace que l’imipénème. L’avibactam augmente l’activité de la ceftaroline mais l’inhibition de BlaMab est seulement partielle en intracellulaire. Les résultats obtenus in vitro montrent que l’imipénème est supérieur à la céfoxitine pour des concentrations atteignables dans le sérum. L’inhibition de BlaMab pourrait augmenter l’efficacité de l’imipénème et d’autres composés utilisés pour traiter les infections pulmonaires à M. abscessusMycobacterium abscessus is an important pathogen responsible for pulmonary infections in cystic fibrosis patients or in patients suffering from bronchiectasis. The treatment of infections due to M. abscessus is complicated since this bacterium is naturally resistant to the antituberculous agents. The recommended treatment includes an aminoglycoside, a macrolide (clarithromycin) and a β-lactam (cefoxitin or imipenem), with a success rate of about 50 %. However, strains resistant to clarithromycin are frequently isolated, questioning the use of this antibiotic. M. abscessus naturally produces a broad spectrum β-lactamase (BlaMab) but the mechanisms of action of the β-lactams have not been studied in this species, impairing the optimization of the treatment by these antibiotics. The first objective was to identify and characterize the targets of β-lactams antibiotics in this species. Inhibiting the final stage of the peptidoglycan polymerization, the potential targets of β-lactams are three families of enzymes: the D,D-transpeptidases and D,Dcarboxypeptidases belonging to the family of penicillin-binding proteins (PBP), and the L,D-transpeptidases which are mainly responsible for this final stage in this species. To identify the targets, mutants resistant to β-lactams have been selected from the reference strain M. abscessus CIP104536 and from its β-lactamase-deficient derivative ΔblaMab. For both strains, the emergence of resistance to βlactams has required multiple steps, which is an advantage for the therapeutic use of these antibiotics. For the mutants derived from the strain CIP104536, phenotypic analyzes showed that the resistance to β-lactams is not due to an increase in the catalytic efficiency of BlaMab, to an overproduction of this enzyme, or to a decrease in permeability. Genomes sequencing of the resistant mutants did not reveal mutations in the genes encoding the L,D-transpeptidases, but mutations have been found in genes encoding two PBPs. Other mutations have been detected in genes encoding uncharacterized proteins. Acquisition of resistance could therefore depend on mutations affecting key factors essential for the activity of β-lactams targets. The second objective was to study and compare the in vitro activities of β-lactams against M. abscessus. Bactericidal experiments and intracellular activity in the infected macrophage were performed for the strains CIP104536 and ΔblaMab. Among the antibiotics tested (amikacin, cefoxitin, imipenem, ceftaroline, and amoxicillin), imipenem is the most effective agent against the two strains. Combination of imipenem and amikacin was bactericidal against the ΔblaMab mutant. In the absence of BlaMab, amoxicillin was as active as imipenem. Avibactam increased the intracellular activity of ceftaroline but inhibition of BlaMab was only partial intracellularly. Evaluation of the killing and intracellular activities of β-lactams indicates that imipenem is superior to cefoxitin at clinically achievable drug concentrations. Inhibition of BlaMab could improve the efficacy of imipenem and extend the spectrum of drug potentially useful to treat pulmonary infections
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Morini, Federico. « Photobacterium damselae’s L-D transpeptidases : overexpression and purification optimised method and in vitro characterisation ». Thesis, Umeå universitet, Kemiska institutionen, 2017. http://urn.kb.se/resolve?urn=urn:nbn:se:umu:diva-134372.
Texte intégral
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Lecoq, Lauriane. « Etudes par RMN des L,D-transpeptidases bactériennes : structure, dynamique et compréhension de leur inhibition par les beta-lactames ». Phd thesis, Université de Grenoble, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00819829.
Texte intégralRésumé :
L'étape finale de biosynthèse du peptidoglycane est catalysée par les D,D-transpeptidases (PBPs), l'une des cibles principales des antibiotiques de type beta-lactame. Récemment, il a été montré qu'une nouvelle classe d'enzymes, les L,D-transpeptidases (LDts), permet de contourner l'inhibition des PBPs. Ces LDts ont été identifiées tant dans des bactéries résistantes aux beta-lactames que dans des formes dormantes de Mycobacterium tuberculosis. Les seuls beta-lactames capables de les inhiber, les carbapénèmes, forment une liaison covalente avec la cystéine catalytique des LDts. Ni le mécanisme de cette inactivation, ni la spécificité de ces enzymes pour les carbapénèmes ne sont toutefois expliqués à ce jour. Le but du présent travail consiste en l'investigation par RMN du mécanisme d'acylation des LDts par ces antibiotiques. Dans ce contexte, la première partie de cette thèse s'intéresse à la compréhension actuelle de l'émergence de ce phénomène de résistance. La seconde partie traite des principes de la RMN et des implémentations développées pour étudier la structure, la thermodynamique et la dynamique des LDts. La troisième et dernière partie démontre le succès de l'approche RMN dans l'étude des diverses étapes de la réaction d'acylation, à travers une étude détaillée de l'apoenzyme, de complexes non covalents avec différents beta-lactames, et de l'enzyme acylée par un carbapénème. Au cours de cette étude, la structure du site actif de l'apoenzyme de Bacillus subtilis a été affinée par rapport à une étude cristallographique antérieure. Pour cette enzyme et son pendant chez Enterococcus faecium, nous avons démontré que la spécificité pour les carbapénèmes n'intervient pas au stade de la formation du complexe non covalent. Pour finir, la formation de la liaison covalente entre LDt et carbapénème induit un réarrangement conformationnel substantiel et une augmentation de la flexibilité de l'enzyme.
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Hugonnet, Jean-Emmanuel. « Nouveaux mécanismes de résistance aux β-lactamines et nouvelles cibles de ces antibiotiques chez les bactéries à Gram positif ». Paris 6, 2009. http://www.theses.fr/2009PA066457.
Texte intégralRésumé :
La tuberculose est une maladie provoquée par Mycobacterium tuberculosis habituellement traitée par l’association de rifampicine, d’isoniazide, de pirazinamide et d’éthambutol pendant 6 mois. Des problèmes d’observances ont favorisé l’émergence de souches ultra résistantes (XDR). Les bêta-lactamines n’ont jamais été utilisées contre M. Tuberculosis à cause de la production par la bactérie d’une bêta-lactamase de classe A, BlaC. Nous avons montré que BlaC est capable d’hydrolyser toutes les classes de bêta-lactamines, analysé l’inhibition de BlaC par l’acide clavulanique, le tazobactam et le sulbactam, et montré que l’acide clavulanique est un inhibiteur irréversible de l’enzyme. Nous avons évalué l’efficacité d’une association d’acide clavulanique et de -lactamines contre des souches sensibles et XDR. Le méropénème, en combinaison avec l’acide clavulanique, est bactéricide sur les bacilles en réplication active ainsi que dans un modèle de dormance. La cible du méropénème pourrait être une L,D-transpeptidase, l’enzyme clé d’une nouvelle voie de synthèse du peptidoglycane que nous avons caractérisé chez Enterococcus faecium. Cette voie implique l’activation d’une métallo enzyme qui fournit le substrat d’une L,D transpeptidase (Ldtfm), responsable de la formation de ponts interpeptidiques de type 3-3 dans le peptidoglycane. Nous avons montré que cette enzyme était inactivée par les carbapénèmes. Comme le peptidoglycane de M. Tuberculosis est majoritairement constitué de ponts 3-3 et que cinq paralogues de la famille des L,D-transpeptidases sont présent dans son génome, ces enzymes pourraient être la cible du méropénème.
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Hugonneau, Beaufet Inès. « Adaptation de l'enveloppe bactérienne à la croissance en biofilm ». Electronic Thesis or Diss., Sorbonne université, 2023. https://accesdistant.sorbonne-universite.fr/login?url=https://theses-intra.sorbonne-universite.fr/2023SORUS056.pdf.
Texte intégralRésumé :
Le peptidoglycane est une macromolécule essentielle et spécifique de la paroi bactérienne, qui maintient la forme des cellules, assure une protection mécanique contre la pression osmotique exercée par le cytoplasme et sert à l’ancrage de polymères de l'enveloppe. Il est réticulé par deux familles d’enzymes, les PLP et les LDT, dont la contribution relative est variable et qui sont les cibles des antibiotiques appartenant à la famille des β-lactamines. Tandis que les PLP sont potentiellement inhibées par tous les antibiotiques de la famille des β-lactamines, les LDT sont efficacement inhibées par une seule classe de β-lactamines, les carbapénèmes. Les travaux de thèse explorent le rôle des LDT dans l’adaptation de Escherichia coli et de Pseudomonas aeruginosa à la croissance en biofilm. Nous avons identifié et caractérisé fonctionnellement trois paralogues des LDT chez P. aeruginosa. En parallèle, le rôle des six paralogues des LDT de E. coli a été évalué grâce à la construction de délétions multiples. Chez les deux espèces bactériennes étudiées, la croissance en biofilm est associée à une augmentation significative de la contribution des LDT à la polymérisation du peptidoglycane. Les LDT jouent également un rôle critique dans la stabilisation de l’enveloppe et dans le contrôle du relargage de protéines pro-inflammatoires dans le milieu de culture des bactéries. Ainsi, les LDT pourraient être des cibles exploitables pour lutter contre la formation de biofilms bactériensPeptidoglycan is an essential and specific macromolecule of the bacterial envelope, which maintains the shape of cells, provides mechanical protection against the osmotic pressure of the cytoplasm, and serves as an anchor for envelope polymers. Peptidoglycan is cross-linked by two families of enzymes, PBPs and LDTs, whose relative contribution is variable, and which are the targets of antibiotics belonging to the β-lactam family. While PBPs are potentially inhibited by all β-lactam antibiotics, LDTs are effectively inhibited by only one class of β-lactam antibiotics, the carbapenems. This thesis explores the role of LDTs in the adaptation of Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa to growth in biofilm. We have identified and functionally characterized three LDT paralogs in P. aeruginosa. In parallel, the role of the six LDT paralogs of E. coli was evaluated by constructing multiple deletions. In both bacterial species studied, growth in biofilm is associated with a significant increase in the contribution of LDTs to peptidoglycan polymerization. LDTs also play a critical role in stabilizing the envelope and in preventing the release of pro-inflammatory proteins into the bacterial culture medium. Thus, LDTs could be actionable targets to combat bacterial biofilms
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Dubée, Vincent. « Stratégies d'optimisation des bêta-lactamines pour le traitement des infections dues aux mycobactéries multirésistantes ». Thesis, Paris 6, 2014. http://www.theses.fr/2014PA066415.
Texte intégralRésumé :
L’émergence de formes multirésistantes de tuberculose et la résistance intrinsèque de Mycobacterium abscessus à de nombreux anti-infectieux imposent l’identification de nouveaux antibiotiques et de nouvelles stratégies thérapeutiques. Les mycobactéries sont naturellement peu sensibles aux β-lactamines par production d’une β-lactamase et de cibles atypiques de faible affinité, les L,D-transpeptidases, qui sont efficacement inactivées par une seule classe de β-lactamines, les carbapénèmes. L’objectif de la thèse est d’étudier le mode d’action des β-lactamines afin de proposer des stratégies permettant d’optimiser ces antibiotiques. Pour comprendre la spécificité des L,D-transpeptidases vis-à-vis des carbapénèmes, nous avons étudié la cinétique et le mécanisme de la réaction d’inactivation de ces enzymes par différentes méthodes de spectroscopie en flux arrêté. Nos résultats indiquent que l’efficacité des carbapénèmes est due à leur capacité à former rapidement un intermédiaire tétrahédrique et à la stabilité de l’acylenzyme. La spécificité des L,D-transpeptidases pour les carbapénèmes ne dépend pas de leurs chaînes latérales, qui pourraient être modifiées pour améliorer les propriétés pharmacologiques de ces antibiotiques. Chez M. abscessus, nous avons identifié un inhibiteur de la β-lactamase, l’avibactam, qui augmente l’activité de certaines β-lactamines in vitro, en intracellulaire et dans un modèle d’infection du poisson zèbre. Nos résultats montrent que les β-lactamines peuvent être optimisées pour le traitement des infections dues aux mycobactéries multirésistantes par l’amélioration de l’inactivation des cibles ou l’inhibition des β-lactamasesThe emergence of multidrug-resistant tuberculosis and the intrinsic resistance of Mycobacterium abscessus to most antibiotics require the identification of new drugs and new therapeutic strategies. Mycobacteria are naturally poorly susceptible to β-lactam antibiotics due to production of a β-lactamase and of atypical low-affinity targets, the L,D-transpeptidases, which are effectively inactivated by a single class of β-lactams, the carbapenems. The aim of the thesis is to study the mode of action of β-lactams to propose strategies for the optimization of these antibiotics. To understand the specificity of L,D-transpeptidase for carbapenems, we have studied the kinetics and mechanism of inactivation of these enzymes using various stopped-flow spectroscopic methods. Our results indicate that the efficacy of carbapenems is due to their ability to rapidly form a tetrahedral intermediate and to the stability of the acylenzyme. The specificity of the L,D-transpeptidases for carbapenems does not depend upon the side chains of the drugs, which may be modified to improve their pharmacological properties. In M. abscessus, we have shown that the β-lactamase inhibitor avibactam increases the activity of various β-lactams in vitro, intracellularly, and in zebrafish model. Our results show that β-lactams can be optimized for the treatment of infections due to multidrug-resistant mycobacteria by improving inactivation of the targets and by inhibiting the β-lactamases
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Dubée, Vincent. « Stratégies d'optimisation des bêta-lactamines pour le traitement des infections dues aux mycobactéries multirésistantes ». Electronic Thesis or Diss., Paris 6, 2014. http://www.theses.fr/2014PA066415.
Texte intégralRésumé :
L’émergence de formes multirésistantes de tuberculose et la résistance intrinsèque de Mycobacterium abscessus à de nombreux anti-infectieux imposent l’identification de nouveaux antibiotiques et de nouvelles stratégies thérapeutiques. Les mycobactéries sont naturellement peu sensibles aux β-lactamines par production d’une β-lactamase et de cibles atypiques de faible affinité, les L,D-transpeptidases, qui sont efficacement inactivées par une seule classe de β-lactamines, les carbapénèmes. L’objectif de la thèse est d’étudier le mode d’action des β-lactamines afin de proposer des stratégies permettant d’optimiser ces antibiotiques. Pour comprendre la spécificité des L,D-transpeptidases vis-à-vis des carbapénèmes, nous avons étudié la cinétique et le mécanisme de la réaction d’inactivation de ces enzymes par différentes méthodes de spectroscopie en flux arrêté. Nos résultats indiquent que l’efficacité des carbapénèmes est due à leur capacité à former rapidement un intermédiaire tétrahédrique et à la stabilité de l’acylenzyme. La spécificité des L,D-transpeptidases pour les carbapénèmes ne dépend pas de leurs chaînes latérales, qui pourraient être modifiées pour améliorer les propriétés pharmacologiques de ces antibiotiques. Chez M. abscessus, nous avons identifié un inhibiteur de la β-lactamase, l’avibactam, qui augmente l’activité de certaines β-lactamines in vitro, en intracellulaire et dans un modèle d’infection du poisson zèbre. Nos résultats montrent que les β-lactamines peuvent être optimisées pour le traitement des infections dues aux mycobactéries multirésistantes par l’amélioration de l’inactivation des cibles ou l’inhibition des β-lactamasesThe emergence of multidrug-resistant tuberculosis and the intrinsic resistance of Mycobacterium abscessus to most antibiotics require the identification of new drugs and new therapeutic strategies. Mycobacteria are naturally poorly susceptible to β-lactam antibiotics due to production of a β-lactamase and of atypical low-affinity targets, the L,D-transpeptidases, which are effectively inactivated by a single class of β-lactams, the carbapenems. The aim of the thesis is to study the mode of action of β-lactams to propose strategies for the optimization of these antibiotics. To understand the specificity of L,D-transpeptidase for carbapenems, we have studied the kinetics and mechanism of inactivation of these enzymes using various stopped-flow spectroscopic methods. Our results indicate that the efficacy of carbapenems is due to their ability to rapidly form a tetrahedral intermediate and to the stability of the acylenzyme. The specificity of the L,D-transpeptidases for carbapenems does not depend upon the side chains of the drugs, which may be modified to improve their pharmacological properties. In M. abscessus, we have shown that the β-lactamase inhibitor avibactam increases the activity of various β-lactams in vitro, intracellularly, and in zebrafish model. Our results show that β-lactams can be optimized for the treatment of infections due to multidrug-resistant mycobacteria by improving inactivation of the targets and by inhibiting the β-lactamases
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Arbeloa, del Moral Ana. « Spécificité de substrat et partenaires des D,D-transpeptidases intervenant dans la polymérisation du peptidoglycane et la résistance aux bêta-lactamines chez Enterococcus faecalis ». Paris 7, 2005. http://www.theses.fr/2005PA077002.
Texte intégral
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Smith, Terence Kenneth. « Gamma-glutamyl transpeptidase ». Thesis, University of Surrey, 1991. http://epubs.surrey.ac.uk/843067/.
Texte intégralRésumé :
The enzyme gamma-glutamyl transpeptidase (GGT) has been investigated in detail, with respect to both its catalytic action and its involvement in amino acid translocation across cell membranes. A novel source of this enzyme was discovered, Caco-2 cell monolayers which show similar characteristics to those of the small intestine. The catalytic action of the enzyme in the cells, was shown to be similar to that of an isolated purified GGT, (bovine kidney) obtained commerical1y. The Caco-2 cell monolayers were used as an in vitro model to study the translocation of amino acids and dipeptides across these biological membranes. The movement of selected substrates was studied using radiochemical techniques. These studies strongly suggest the existence of two distinct transport pathways: an active pathway which is unidirectional, carrier-mediated, saturable, temperature dependent and some way dependent on GGT; a second translocation pathway which is passive, bidirectional, temperature independent and not directly affected by GGT. This evidence is the strongest thus far, to suggest the involvement of GGT, in the translocation of amino acids. However, it cannot be established if GGT is directly involved, ie: via the gamma-glutamyl cycle or whether indirectly via the catalytic formation of a 'messenger' which regulates the passive pathway. A series of gamma-glutamyl donors, acceptors and inhibitors, were synthesised and used to probe the active site of the catalytic action of this enzyme. Studies of the two halves of the ping-pong mechanism via a gamma-glutamyl-enzyme intermediate allowed probing of the gamma-glutamyl donor and the acceptor site respectively. Evidence for three distinct binding sites was shown, which could be fitted to the shape of glutathione, probably the natural donor. The gamma-glutamyl donor was shown to be non-stereospecifc, although its specificity towards chain length was shown to be greater than 104, with respect to ?-aspartyl and gamma-glutamyl. The site was shown for the first time to require both an a-amino and an a-carboxylic acid functional group to undergo binding. The only type of gamma-glutamyl donors were those with a secondary gamma-amide bond. In contrast the acceptor site was shown to be stereospecific, only allowing L-isomers to undergo transpeptidation, while only requiring an a-amino and an a-carbonyl group. The acceptor capability of a particular substrate, is dependent upon two factors. Firstly the pK of its a-amino group, since the pH of the solution will determine the amount of free base present, which is able to attack the gamma-glutamyl-enzyme intermediate. The second factor is governed by its structure, if it binds only to the acceptor or whether it binds to both the acceptor and gamma-glutamyl binding sites, thus inhibiting. It was also demonstrated that substrates which are able to interact with the carboxy terminus binding site, ie: the third site, have a cooperative effect on the gamma-glutamyl binding site, thus stimulating the hydrolysis of donors. Such compounds include maleic acid, N-acetyl-glycine, aminoacyl-glycines and certain donors ie: glutathione and gamma-glutamyl-p-nitroani1ide.
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Good, Valerie Muriel. « Genetic regulation of #gamma#-glutamyl transpeptidase ». Thesis, Institute of Cancer Research (University Of London), 1996. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.244277.
Texte intégral
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Mouz, Nicolas. « Mécanismes de résistance aux [bêta]-lactamines : études des relations structure-fonction de la Penicillin-Binding Protein 2x de Streptococcus pneumoniae ». Université Joseph Fourier (Grenoble), 1999. http://www.theses.fr/1999GRE10102.
Texte intégralRésumé :
Streptococcus pneumoniae est une bacterie pathogene dont la resistance aux antibiotiques de la famille des -lactamines est liee a une diminution de la sensibilite des penicillin-binding proteins (pbps) a ces molecules. Ces pbps sont des d,d-transpeptidases, enzymes essentielles a la viabilite des bacteries et impliquees dans la synthese de la paroi bacterienne. Pbp2x est une des premieres cibles modifiees chez les pneumocoques resistants aux -lactamines. L'objectif de ce travail de these a ete de comprendre, a un niveau moleculaire, quels etaient les mecanismes a la base de la perte de sensibilite aux -lactamines de pbp2x de s. Pneumoniae. Chez les pneumocoques resistants aux -lactamines le domaine transpeptidase de pbp2x presente un nombre important de substitutions d'acides amines, compare a celui provenant de souches sensibles. Un nombre limite de ces changements doivent etre responsables de la baisse d'affinite pour les $$-lactamines. Nous avons identifie quelques positions, proches de la serine 337 du site actif, mutees uniquement au sein de pbp2x isolees de souches resistantes. Ces residus definissent deux groupes dont nous avons analyse le role par mutagenese dirigee. Les mutations ont ete introduites dans la region soluble extracellulaire de pbp2x de s. Pneumoniae sensible aux -lactamines (s-pbp2x*), exprimee dans escherichia coli. Le premier groupe de residus appartient au brin 3. La structure cristallographique a haute resolution d'un complexe s-pbp2x*/cefuroxime montre que le brin 3 est en contact direct avec l'antibiotique. La position 552 est souvent mutee dans pbp2x de s. Pneumoniae isolee en milieu hospitalier, tandis que la position 550 est preferentiellement substituee dans les mutants de laboratoire selectionnes par une seule cephalosporine. Nous avons trouve que la mutation 552 dans s-pbp2x* reduisait l'efficacite d'acylation de la proteine pour la penicilline g et le cefotaxime tandis que la mutation en position 550 diminuait l'efficacite d'acylation seulement pour le cefotaxime. Ainsi, la position et la nature des substitutions des residus se trouvant sur le brin 3 de pbp2x affectent la specificite d'interaction des mutants avec la penicilline g et/ou le cefotaxime. Le second groupe inclut des residus qui ne sont pas en contact direct avec l'antibiotique et qui definissent une cavite enfouie contenant une molecule d'eau structurale. Les chaines laterales des residus 338 et 571 sont liees a cette molecule d'eau dans les formes sensibles de pbp2x. La mutagenese dirigee des positions 338 et 571 produit des mutants similaires, en terme d'affinite aux -lactamines et d'hydrolyse de substrats, aux pbp2x produits par des souches resistantes isolees en milieu clinique. Une mutation inverse dans un variant pbp2x issu d'une souche resistante clinique provoque des effets opposes, c'est a dire une augmentation de l'efficacite d'acylation des -lactamines et de l'hydrolyse des analogues de substrat. Ces resultats suggerent que la perte partielle ou totale de la molecule d'eau decrite ci-dessus pourrait moduler la reactivite de la serine active. La baisse de cette reactivite resterait compatible avec la synthese du peptidoglycane mais reduirait la sensibilite des bacteries aux concentrations therapeutiques d'antibiotiques. La combinaison des substitutions des deux groupes de mutations provoque une reduction de sensibilite aux -lactamines a un niveau comparable a celui mesure pour les pbp2xs issues de souches resistantes isolees en milieu clinique. Nos resultats montrent qu'un faible nombre de mutations suffit pour convertir un pbp2x sensible aux -lactamines en une molecule resistante. Cette etude illustre aussi la diversite des mecanismes moleculaires mis en jeu pour aboutir a la resistance, qui impliquent des residus en contact ou non avec l'antibiotique.
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Gretes, Michael. « Structural analysis of beta-lactamase and resistant transpeptidase inhibition ». Thesis, University of British Columbia, 2009. http://hdl.handle.net/2429/24118.
Texte intégralRésumé :
Beta-lactam antibiotics have achieved phenomenal success in the treatment of
infections by inhibiting the transpeptidase enzymes that cross-link the bacterial cell wall.
Beta-lactamase-producing pathogenic bacteria and multi-drug-resistant “superbugs” such as
methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) have emerged, however. Overcoming
resistance factors is thus a research priority.
BLIP (Beta-Lactamase Inhibitory Protein) from Streptomyces clavuligerus binds a variety
of beta-lactamase enzymes with widely ranging specificity. Its interaction with Escherichia coli
beta-lactamase TEM-1 is a well-established model system for protein-protein interaction
studies. Presented in Chapter 2 are crystal structures of two BLIP relatives: BLIP-I (a highaffinity
inhibitor, alone and in complex with TEM-1) and BLP (which appears not to inhibit
beta-lactamases). Substantial variation appears possible in the sub-nanomolar binding of
TEM-1 by two homologous proteinaceous inhibitors and such favorable interactions can be
negated by a few, strongly unfavorable interactions.
OXA-10 is a Pseudomonas aeruginosa beta-lactamase that is resistant to inhibitors in
clinical use. Cyclobutanone beta-lactam mimics could be used instead. Chapter 3 reports the
crystal structure of OXA-10 covalently modified at its catalytic serine nucleophile with a
cyclobutanone inhibitor to form a hemiketal. Favorable and unfavorable contacts made at
the active site are examined with a view to improved inhibitor design.
PBP2a is the resistant transpeptidase that allows MRSA to maintain the bacterial cell
wall in the presence of beta-lactam antibiotics. Ceftobiprole is the most clinically-advanced
among a new generation of beta-lactams designed to treat MRSA by targeting PBP2a itself.
Chapter 4 uses the crystal structure of a truncated, soluble form of PBP2a solved in complex
iii
with ceftobiprole to explain its inhibitory power and evaluate current anti-MRSA drug design
hypotheses. Its efficacy appears to arise from improved binding affinity that overcomes the
disfavored energetics of acylation.
Ceftobiprole clinical trials reported no bacterial resistance, yet fully ceftobiproleresistant
MRSA (MIC 128 !g/ml) were generated by passage through subinhibitory
concentrations of ceftobiprole, discussed in Chapter 5. Resistance emerges in most cases via
mutations to the gene encoding PBP2a. Computational modeling predicts that ceftobiprole
resistance may be mediated in PBP2a by alteration of binding affinity, acylation efficiency, or
by influencing interactions with other proteins.
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CHOBERT, FUSTEC MARIE-NOELLE. « Biosynthese et regulation de la gamma-glutamyl transpeptidase hepatique ». Paris 6, 1989. http://www.theses.fr/1989PA066574.
Texte intégralRésumé :
La gamma-glutamyl transpeptidase (ggt) est une proteine ectomembranaire impliquee dans le metabolisme du glutathion. Chez l'homme et chez le rat, l'activite de la ggt est regulee dans le foie lors de l'alcoolisme, de la cholestase, ou du cancer du foie. L'augmentation de la ggt serique est un marqueur tres connu de ces situations pathologiques. Dans notre travail, nous avons montre dans les cellules htc que la ggt est synthetisee sous la forme d'un precurseur glycosyle unique (pm 79000) qui est clive en deux sous-unites (pm 58000 et 29000) dans le reticulum endoplasmique; ces deux sous-unites sont ensuite transferees dans l'appareil de golgi ou les chaines oligosaccharides sont modifiees, avant de parvenir a la membrane. Dans les cellules fao, nous avons etabli que la ggt est specifiquement induite par les glucocorticoides (2,5 fois). Cette induction est inhibee par l'antiglucocorticoides ru 38486. Dans les cellules c2, l'activite de la ggt est augmentee 2,5 fois sous l'effet de l'ethanol. Cet effet sur la ggt est specifique, comme l'a montre l'analyse en gel d'electrophorese bidimensionnelle des proteines totales synthetisees. La stimulation de l'activite enzymatique de la ggt par la dexamethasone ou l'alcool est liee a une augmentation de sa synthese et probablement a une activation de la transcription du gene de la ggt. Nous avons egalement observe une augmentation de la ggt hepatique chez des patients atteints de cholestase idiopathique progressive ou maladie de byler, mais sans augmentation de la ggt serique, contrairement a ce qui est observe dans les autres cholestases. Ce travail sera poursuivi par l'etude de ces regulations au niveau des genes de la ggt chez le rat et chez l'homme
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Charlois, Thierry. « Interpretation d'une elevation isolee ou predominante de la gammaglutamyl-transpeptidase, en dehors de l'ethylisme chronique ». Angers, 1989. http://www.theses.fr/1989ANGE1059.
Texte intégral
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Edoo, Zainab. « Mechanism of L,D-transpeptidase inhibition by β-lactams and diazabicyclooctanes ». Electronic Thesis or Diss., Sorbonne université, 2019. https://accesdistant.sorbonne-universite.fr/login?url=https://theses-intra.sorbonne-universite.fr/2019SORUS565.pdf.
Texte intégralRésumé :
La résistance aux antibiotiques est une menace mondiale qui conduit à un besoin urgent de développement de nouveaux antibiotiques. L'étude du mécanisme d'inhibition des cibles des antibiotiques est cruciale pour le développement de nouvelles molécules. Le caractère essentiel du peptidoglycane, le composant majeur de la paroi bactérienne, ainsi que soixante-dix ans d'utilisation des β-lactamines ont fait de la polymérisation du peptidoglycane une cible attractive et validée pour les antibiotiques. Les protéines de liaison à la pénicilline (PLP) ont longtemps été considérées comme les seules enzymes catalysant l’étape essentielle de réticulation du peptidoglycane. La thèse explore l'inhibition d'une famille distincte d'enzymes, les L,D-transpeptidases (LDT), qui jouent un rôle prépondérant dans la réticulation chez Mycobacterium tuberculosis. Nous avons montré que l'efficacité d'inhibition des LDT par les β-lactamines est principalement régie par la réactivité du noyau β-lactame. Nous proposons que l'acylation des LDT par les β-lactamines implique la formation d'un intermédiaire, une amine anionique, suivie d'une étape irréversible qui est essentielle pour l'activité antibactérienne. Une approche par spectroscopie de fluorescence a été développée pour explorer les mécanismes d'inactivation et évaluer l'efficacité de nouvelles molécules. Nous avons également identifié une nouvelle famille de molécules, les diazabicyclooctanes (DBO), qui inactivent les LDT par la formation d'un thio-carbamoyl-enzyme. Nous discutons de plusieurs stratégies basées sur le mécanisme d’inactivation pour l’optimisation rationnelle d’inhibiteurs appartenant aux familles des β-lactamines et des DBOAntibiotic resistance is a growing and global threat to human health that has led to an acute need for the development of new antibiotics. Elucidating the mechanism of inhibition of antibiotic targets is crucial for the development of more potent drugs. The essentiality of peptidoglycan and more than seventy years of successful use of β-lactams have made polymerization of this major cell wall component an attractive and validated target for drug development. Active-site serine Penicillin-Binding Proteins (PBPs) have long been considered as the only enzymes catalyzing the essential cross-linking step of peptidoglycan polymerization. The thesis explores inhibition of a distinct family of enzymes, the active-site cysteine L,D-transpeptidases (LDTs), that have a preponderant role in peptidoglycan synthesis in Mycobacterium tuberculosis. We show that the efficacy of LDT inhibition by β-lactams is primarily governed by the reactivity of the four-membered ring. We propose that acylation of LDTs by β-lactams proceeds through formation of an amine anion intermediate, followed by a subsequent irreversible step that is essential for the antibacterial activity of the drugs. A fluorescence spectroscopy approach enabling kinetic analyses of the acylation steps was developed to explore inactivation mechanisms and to evaluate the efficacy of new synthetic drugs. We also identify diazabicyclooctanes (DBOs) as new pharmacophores that inactivate LDTs by formation of a thio-carbamoyl-enzyme. We discuss several mechanism-based strategies for rational optimization of LDT inhibitors belonging to the β-lactam and DBO families
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Daoud, Patrick. « Interet de la gamma glutamyl transferase urinaire dans la mise en evidence d'une nephrotoxicite : etude experimentale a propos de trente sujets traites par sels d'or ». Aix-Marseille 2, 1988. http://www.theses.fr/1988AIX20365.
Texte intégral
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CHIKHI, NAIMA. « Etude de l'organisation des genes de la gamma-glutamyl transpeptidase chez l'homme ». Paris 6, 1990. http://www.theses.fr/1990PA066450.
Texte intégralRésumé :
La gamma-glutamyl transpeptidase (ggt) est une enzyme membranaire du metabolisme du glutathion. Son activite est augmentee dans certaines situations physiologiques (developpement, hormones) ou pathologiques (carcinogenese hepatique, cholestase, alcoolisme). Afin de determiner les mecanismes moleculaires de ces regulations, nous avons effectue le clonage des genes humains specifiques de la ggt a partir d'une banque genomique en phage et en cosmide. La caracterisation des clones obtenus a montre que la ggt est presente dans le genome humain sous forme d'une famille multigenique (4 genes ou pseudogenes). Parmi ces 4 genes, nous avons identifie un gene codant pour la ggt du foie et un gene codant pour la ggt du rein. Parallelement a cette etude, nous avons etabli que certaines sequences de la ggt sont localisees a proximite du gene ph1 (implique dans les leucemies myeloides chroniques) et du locus c-lambda (implique dans le lymphome de burkitt) sur le chromosome 22. Afin de poursuivre la caracterisation de cette famille multigenique, nous avons clone des cdna de foie adulte et ftal specifiques de la ggt chez l'homme. Ces deux clones presentent une insertion de 22pb dans la sequence codante par rapport aux cdnas de la ggt decrits dans d'autres tissus. Cette insertion provoque un changement de phase de lecture et un arret premature de la synthese de la ggt donnant une proteine tronquee inactive. Nous avons egalement isole un clone cdna de rein humain dont la sequence presente plusieurs mutations ponctuelles par rapport a celle du cdna de foie humain. Ce resultat est en faveur de l'existence d'isoformes de la ggt chez l'homme ayant des structures primaires differentes
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Lévy, Jean-Louis. « Intérêt de la séparation des isoformes enzymatiques de la gamma-glutamyl-transpeptidase ». Paris 5, 1993. http://www.theses.fr/1993PA05P136.
Texte intégral
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Rousseau, Jean-Charles. « Maladie de caroli : a propos d'un cas limite au lobe gauche asymptomatique, revele par une augmentation isolee du taux serique de la gamma-glutamyltranspeptidase ». Bordeaux 2, 1988. http://www.theses.fr/1988BOR25109.
Texte intégral
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LAHUNA, OLIVIER. « Expression et clonage du gene de la gamma-glutamyl transpeptidase chez le rat ». Paris 11, 1990. http://www.theses.fr/1990PA11T018.
Texte intégral
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Moallic, Claire. « Identification de nouvelles peptidases sécrétées par des Bacilli : étude d'une gamma-glutamyl transpeptidase ». Nantes, 2003. http://www.theses.fr/2003NANT2070.
Texte intégralRésumé :
La diversité des peptidases, leur importance physiologique et biotechnologique, en font un sujet très étudié. Les sources bactériennes sont recherchées pour leur exploitation industrielle. Nous avons étudié la production de peptidases de bactéries isolées de sédiments alcalins du lac Bogoria (Kenya). Sur les 59 isolats obtenus, 39 ont été identifiés. Leurs activités peptidasiques extracellulaires ont été criblées sur gélose au lait, puis en milieu liquide, avec différents substrats (caséine, azocaséine, acides aminés p-nitroanilides). Deux souches ont été sélectionnées, Bacillus pseudofirmus H2 et Bacillus pumilus A8. Le surnageant de cette dernière contient une gamma-glutamyl transpeptidase qui hydrolyse les substrats ayant un résidu gamma-Glu N-terminal et peut aussi transférer le résidu Glu à des petits peptides. L'enzyme purifiée et caractérisée est un hétérodimère (PM 38 000 et 21 000). La grande sous-unité isolée est active. Son gène a été cloné et exprimé dans E. ColiPeptidases constitute a developing area of research, because of their wide diversity and their physiological and biotechnological interest. We studied the peptidase production of bacteria isolated from alkaline sediments from Bogoria Lake (Kenya). We obtained 59 isolates, and 39 of them were identified. Their extracellular peptidase activities were screened on milk agar, then in liquid media, with different substrates (casein, azocasein, amino-acid-p-nitroanilides). Two strains were selected, Bacillus pseudofirmus H2 and Bacillus pumilus A8. The supernatant of the latter contains a gamma-glutamyl transpeptidase [EC 2. 3. 2. 2] that hydrolyzes substrates with an N-terminal gamma-glutamyl residue (glutathione, gamma-Glu-p-nitroanilide), and can also transfer glutamyl residue to small peptides. This enzyme has been purified and characterized, it is composed of two subunits of 38 000 and 21 000. The heavy subunit is still active after dissociation. Its gene was cloned and expressed in E. Coli
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Ruoso, Patrizia. « Gamma-glutamyl transpeptidase activity and the maintenance of elevated cysteine levels in cervical carcinoma ». Thesis, National Library of Canada = Bibliothèque nationale du Canada, 2001. http://www.collectionscanada.ca/obj/s4/f2/dsk3/ftp04/MQ63111.pdf.
Texte intégral
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Voedts, Henri. « Résistance aux β-lactamines médiée par la L,D-transpeptidase YcbB chez Escherichia coli ». Electronic Thesis or Diss., Sorbonne université, 2022. https://accesdistant.sorbonne-universite.fr/login?url=https://theses-intra.sorbonne-universite.fr/2022SORUS334.pdf.
Texte intégralRésumé :
Le peptidoglycane est une macromolécule qui entoure complètement les bactéries et les protège de la pression osmotique exercée par le cytoplasme. Les β-lactamines, les antibiotiques les plus couramment utilisés en thérapeutique, inhibent les D,D-transpeptidases appartenant à la famille des protéines de liaison à la pénicilline (PBP) qui catalysent la dernière étape de réticulation du peptidoglycane. Les L,D-transpeptidases (LDT), qui ne sont pas apparentées aux PBP, confèrent une résistance aux β-lactamines en remplaçant fonctionnellement les PBP et en réticulant le peptidoglycane chez des mutants de Escherichia coli. La thèse explore ce mécanisme de résistance aux β-lactamines médiée par la LDT YcbB. Nous avons montré que l’expansion d’un peptidoglycane réticulé par YcbB nécessite l’action d’endopeptidases spécifiques ainsi que l’activité glycosyltransférase de l’élongasome. A l’échelle du génome, nous avons identifié l’ensemble des gènes nécessaires à la résistance aux β-lactamines médiée par la LDT YcbB. Ces gènes sont impliqués non seulement dans le métabolisme du peptidoglycane mais également dans l’homéostasie de l’enveloppe bactérienne et dans la réponse au stress oxydant induit par la fixation des β-lactamines à leurs cibles. De manière inattendue, nous avons montré que la fixation des β-lactamines à leurs cibles perturbe la perméabilité de la membrane externe et engendre une pénétration auto-promue de ces antibiotiques dans le périplasme. En plus de l’action de YcbB dans la synthèse du peptidoglycane, l’activation du mécanisme de résistance nécessite la production de l’alarmone (p)ppGpp. Le rôle essentiel de l’alarmone (p)ppGpp dans ce mécanisme de résistance a été assigné à une réduction de la transcription des ARN ribosomaux, limitant le stress oxydant déclenché par la synthèse et la dégradation de polymères de peptidoglycane aberrantsPeptidoglycan is a macromolecule that completely surrounds bacteria and protects them from osmotic pressure exerted by the cytoplasm. The β-lactams, the most commonly used antibiotics in therapy, inhibit D,D-transpeptidases belonging to the penicillin-binding protein (PBP) family that catalyze the final cross-linking step of peptidoglycan synthesis. L,D-transpeptidases (LDTs) such as YcbB, which are unrelated to PBPs, confer β-lactam resistance by functionally replacing PBPs and cross-linking the peptidoglycan in Escherichia coli mutants. This thesis investigates the YcbB-mediated β-lactam resistance mechanism. We show that the expansion of a YcbB cross-linked peptidoglycan requires the action of specific endopeptidases as well as the glycosyltransferase activity of the elongasome. At the genome scale, we have identified the set of genes required for YcbB-mediated β-lactam resistance. These genes are involved not only in peptidoglycan metabolism but also in bacterial envelope homeostasis and in the response to oxidative stress induced by β-lactam binding to their targets. Unexpectedly, we have shown that the binding of β-lactams to their targets disrupts the permeability of the outer membrane and generates a self-promoting penetration of these antibiotics into the periplasm. In addition to the action of YcbB in peptidoglycan synthesis, activation of the resistance mechanism requires the production of the alarmone (p)ppGpp. The essential role of (p)ppGpp in this resistance mechanism has been assigned to a reduction in ribosomal RNA transcription, limiting the oxidative stress triggered by the synthesis and degradation of aberrant peptidoglycan polymers
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Iglesias, Iglesias Ana Aurelia. « Análisis funcional del promotor I del gen de la gamma-glutamil-transpeptidasa ». Doctoral thesis, Universitat de València, 2002. http://hdl.handle.net/10803/9513.
Texte intégralRésumé :
La transcripción es una de las etapas más importantes de la expresión génica. El gen de la gamma-glutamiltranspeptidasa (GGT) de rata posee una estructura y patrón de expresión que posibilitan el estudio de la regulación de la expresión de los genes a nivel de la transcripción. El objetivo de esta Tesis ha sido el estudio de los mecanismos que están implicados en la regulación del promotor I del gen de la GGT de rata a nivel de la transcripción. Con este fin se han llevado a cabo diversos ensayos: detección, purificación y caracterización de factores proteicos nucleares con actividad de unión al promotor I; estudio in vitro de la actividad, expresión y regulación de diferentes zonas del promotor; y estudio de algunos niveles de regulación de la transcripción (efecto de la metilación del ADN, modificaciones post-traduccionales de factores transcripcionales, estructuras de cromatina y efecto de diversos compuestos sobre la actividad del promotor I).Para este gen se ha observado la unión de un complejo multiproteico, presente en extractos hepáticos de rata, a la secuencia de -586 a -566 en la región 5' no traducida del promotor I, constituido por cuatro proteínas con pesos moleculares de 100, 70, 41 y 38 kDa. En dos líneas celulares derivadas de rata se han detectado proteínas con actividad de unión a esta secuencia y con pesos moleculares similares. Estas proteínas se unen al ADN envolviendo a la doble hélice y no parecen ser capaces de modificar estructuras de cromatina. De las cuatro proteínas sólo una (de 70kDa) parece que se fosforila con PK-A en una pequeña fracción y que presenta restos glucídicos de N-acetil-glucosamina. Estos factores nucleares no parecen ser capaces de modificar estructuras de cromatina.Se ha descartado que el factor Sp1 forme parte de este complejo multiproteico a pesar de existir una caja CG degenerada en la secuencia de unión, a la que se une en ensayos in vitro. Por otro lado, en ensayos de transcripción in vitro se ha observado que la transcripción de un promotor deleccionado (fragmento de -765 a -514 adyacente al fragmento de -143 a +144) se debe específicamente a la acción de los factores presentes en los extractos nucleares de hígado de rata. En este promotor deleccionado el acercamiento de la secuencia de unión de los factores en estudio al lugar de inicio de la transcripción, aumenta la especificidad y la eficacia de la transcripción.La metilación del ADN provoca la represión de la transcripción mediada por estos factores nucleares. No se han detectado secuencias posicionadoras de nucleosomas en este promotor.Mediante ensayos de transfección a líneas celulares derivadas de rata se ha observado que diversas zonas de la secuencia que se extiende desde -765 hasta +144, presentan actividad positiva o negativa sobre la expresión de este promotor I: la secuencia que se extiende desde -508 a -143 posee actividad reguladora negativa; el acercamiento de las secuencias presentes en las regiones de -765 a -508 y de -143 a +144 tiene un efecto regulador positivo en la actividad transcripcional del promotor I. Diversas sustancias como la dexametasona y la SAM son capaces de interferir la expresión del gen de la GGT en estas líneas celulares derivadas de rata.Finalmente, análisis informáticos han mostrado la posible relación entre las proteínas en estudio y factores transcripcionales de la familia Egr/Krox.En resumen, en la regulación de la expresión del promotor I del gen de la GGT de rata están implicados tanto elementos cis, como elementos trans, que actuarían de manera coordinada y no aisladamente, regulando la tasa de expresión final del promotor en la célula.Transcription is one of the most important steps of the gene expression. Rat gamma-glutamyl-transpeptidase (GGT) gene has an structure and expression pattern that facilitates the study of gene expression at transcription level. The aim of this doctoral thesis is the study of the mechanisms that are involved in the regulation of rat GGT promoter I.In our laboratory we have found the binding of trans-factors to a sequence located between -586 and -566 bp, at the 5' untranslated flanking region of the rat GGT promoter I. The molecular weight of these proteins is 100, 70, 41 and 38 kDa and make up a multiprotein complex. In rat derived cell lines we have found proteins that bind the sequence studied and they have with similar molecular weights. We have rule out that Sp1 protein is a part of this protein complex despite of the presence of a degenerate CG box in the binding sequence described. The protein complex binds DNA wrapping the double helix and it cannot introduce changes in chromatin structures. Only one of the four proteins, this 70 kDa one, is phosphorylated for PK-A and it is glycosilated with N-acetyl-glucosamine.On the other hand, we have make a deleted promoter I that is trancribed in vitro by rat liver nuclear extracts, whereas the same sequence but methylated is not. In transfection assays employing rat derived cell lines we have found regions in this promoter I that have positive or negative activity on gene expresion. Substances like dexamethasone and S-Adenosylmethionine are able to disrupt GGT gene expression in these rat derived cell lines.Finally, computer analysis have shown the probable relationship between the proteins analyzed and transcription factors of the Egr/krox subfamily.To sum up, in the transcription regulation of rat GGT promoter I are involved cis- and trans-factors that work coordinatedly, regulating the differential final expression of this promoter in the cell.
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DARBOUY, MOJTABA. « Expression du gene de la gamma-glutamyl transpeptidase a partir de multiples promoteurs chez le rat ». Paris 6, 1992. http://www.theses.fr/1992PA066447.
Texte intégralRésumé :
La gamma-glutamyl transpeptidase (ggt) est une glycoproteine transmembranaire localisee a la face externe de la membrane. Elle joue un role essentiel dans le transport interorgane du glutathion. L'activite hepatique de cette enzyme est modifiee dans plusieurs situations physiologiques et pathologiques. Le but de mon travail a ete l'etude des bases moleculaires de l'expression de la ggt chez le rat. Cette enzyme est codee a partir de cinq arn messagers, qui sont transcrits a partir d'un seul gene avec une tissu specificite cellulaire de l'expression. L'ensemble de ces mrnas ont la meme partie codante et ils ne divergent que dans leurs extremites 5 non codante. Ces cinq mrnas sont transcrits a partir de quatre promoteurs distincts. Les promoteurs un et deux ne sont exprimes que dans le rein. Le troisieme promoteur est exprime dans la plupart des tissus etudies. L'expression de ce promoteur dans le foie et dans certains hepatomes est une caracteristique des cellules hepatiques differencies. Le quatrieme promoteur n'est exprime que dans l'intestin et dans certaines hepatomes peu differenciees. En conclusion, la specificite tissulaire de l'expression du gene de la ggt est basee sur la transcription d'un seul gene a partir de multiples promoteurs
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Vignes, Jean-Pascal. « Transplantation hépatique : analyse rétrospective de l'évolution biologique en période post-opératoire ». Bordeaux 2, 1989. http://www.theses.fr/1989BOR23092.
Texte intégral
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BOUVET, DOMINIQUE. « Contribution au depistage des buveurs excessifs grace a trois tests (g. G. T, v. G. M. , score de le go) chez 544 patients hospitalises dans des services de medecine du c. H. R. U. D'angers ». Angers, 1988. http://www.theses.fr/1988ANGE1002.
Texte intégral
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Bulle, Frédérique. « Les genes de la gamma-glutamyl transpeptidase chez l'homme et chez le rat : clonage, caracterisation et regulations ». Paris 6, 1988. http://www.theses.fr/1988PA066113.
Texte intégral
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Bulle, Frédérique. « Les Gènes de la gamma-glutamyl transpeptidase chez l'homme et chez le rat clonage, caractérisation et régulations / ». Grenoble 2 : ANRT, 1988. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb376122598.
Texte intégral
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Lherbet, Christian. « Synthèse et études cinétiques de substrats analogues et d'inhibiteurs de l'étape d'acylation de la [gamma]-glutamyl transpeptidase / ». [Montréal] : Université de Montréal, 2003. http://wwwlib.umi.com/cr/umontreal/fullcit?pNQ92747.
Texte intégralRésumé :
Thèse (Ph.D.) -- Université de Montréal, 2004."Thèse présentée à la Faculté des études supérieures en vue de l'obtention du grade de Philosophiae Doctor (Ph.D.) en chimie" Version électronique également disponible sur Internet.
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Blel, Mustapha. « Thermosensibilités d'enzymes (lactoperoxydase, gamma-glutamyl transpeptidase) et structures protéiques en spectroscopie IRTF : utilisation comme indicateurs de traitements thermiques du lait ». Nancy 1, 2002. http://www.theses.fr/2002NAN10034.
Texte intégralRésumé :
Deux protocoles de dosage d'activité de la lactoperoxydase (LPO) et de la g-glutamyl transpeptidase (g-GT) dans le lait ont été mis au point. Ils comprennent une étape de transparisation permettant une lecture spectrophotomètriques directe d'où un gain de temps appréciable. Des laits chauffés entre 50 et 80°C ont montré que la LPO et la g-GT ont une thermo-sensibilité permettant leur utilisation pour l'appréciation de l'efficacité ou de la sévérité de la pasteurisation. Les résultats obtenus avec ces protocoles sur différents laits sont bien corrélés (R2 ≥ 0,97) avec ceux obtenus avec des protocoles de référence. Ces nouveaux protocoles sont également applicables sur des fromages. La spectroscopie infrarouge à transformée de Fourier a été choisie pour l'étude des modifications de conformation spatiale des protéines. Lors du chauffage du lait à 80°C, les taux de feuillet b et d'hélice a diminuent légèrement. Les taux de coudes et de structures désordonnées augmentent. Les structures type coudes pourrait servir d'indicateur thermique du lait. Ces mesures réalisées devront être renouvelées sur des laits dont on connaît l'historique thermiqueTwo protocols of quantification of enzymatic activity in milk were finalized. The first was the measurement of lactoperoxydase (LPO) activity. The second was the measurement of g-glutamyl transpeptidase (g-GT) activity. They incorporated a clarification step of the reaction mixture that allowed a direct spectrophotometric measurement from which an appreciable time-saving. Milk heated in the range of 50 to 80 °C showed that the thermo-sensitivity of LPO and g-GT renders these enzymes useful to estimate the efficiency or the severity of pasteurization. Results obtained with these protocols on various milks presented a good correlation (R2 ≥ 0,97) with those obtained with reference protocols. These new protocols could be applied on cheese too. Fourier transform infrared spectroscopy was selected for the study of changes in protein spatial conformation. When heating milk at 80 °C, protein b-sheet and a helix proportions decrease slightly. Proportion of turns and random coils increase. Turn proportion could serve as thermal indicator. These study will have to be confirmed by using a sufficient number of milks for which thermal historic is known
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Biarrotte-Sorin, Sabrina. « Etudes structurales de nouvelles cibles thérapeutiques : la tranférase FemX de Weissella viridescens et la L,D-transpeptidase d' Enterococcus faecium ». Paris 7, 2005. http://www.theses.fr/2005PA077091.
Texte intégral
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Cromie, Karen Dorothy. « A molecular genetic analysis of the active centre of the transpeptidase domain of penicillin-binding protein 3 of Escherichia coli ». Thesis, University of Sussex, 1988. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.257016.
Texte intégral
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Javed, Sundus [Verfasser], Markus [Akademischer Betreuer] Gerhard, Klaus-Peter [Akademischer Betreuer] Janßen et Stefan [Akademischer Betreuer] Engelhardt. « Effect of Helicobacter gamma-Glutamyl transpeptidase on epithelial cells / Sundus Javed. Gutachter : Klaus-Peter Janßen ; Stefan Engelhardt. Betreuer : Markus Gerhard ». München : Universitätsbibliothek der TU München, 2013. http://d-nb.info/1045945447/34.
Texte intégral
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Gonçalves, Renata. « Gama-glutamil transpeptidase como alvo de ação da 1,25(OH)2 vitamina D3 na membrana plasmática das células de Sertoli ». reponame:Repositório Institucional da UFSC, 2015. https://repositorio.ufsc.br/xmlui/handle/123456789/129154.
Texte intégralRésumé :
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2014Made available in DSpace on 2015-02-05T20:45:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 327071.pdf: 10727675 bytes, checksum: 7885ff7ed16785edf9c7164f271b1a5b (MD5)
A 1a,25-diidroxivitamina D3 (1,25-D3) é o metabólito ativo da vitaminaD3. A 1,25-D3 é crítica para a manutenção da reprodução, já que aredução da fertilidade foi observada em ratos machos deficientes devitamina D. Este hormônio exerce ações via receptor nuclear (VDRn) eatravés de vias de respostas rápidas associadas a um receptor presente namembrana plasmática (VDRmem). As células de Sertoli são o principalcomponente estrutural do túbulo seminífero, e são responsáveis pelaregulação do fluxo de nutrientes para as células germinativas emdesenvolvimento. Dois fatores importantes no metabolismo das célulasde Sertoli são a atividade da enzima gama-glutamil transpeptidase(GGT) e a secreção de lactato para a nutrição das células germinativas.O objetivo deste trabalho foi estudar o efeito e o mecanismo de ação da1,25-D3 na atividade da enzima GGT e no metabolismo energéticoatravés da secreção de lactato e captação de glicose em células de Sertolide ratos de 30 dias de idade. Neste trabalho foi demonstrado que a 1,25-D3 aumentou a atividade da GGT em 6 h através da interação com oreceptor VDRmem e possível ativação da proteína cinase A (PKA), eem tempos mais prolongados o bloqueio da síntese proteica inibiu oefeito do hormônio, sugerindo que a regulação da atividade da GGT pela1,25-D3 também esteja relacionada à expressão da enzima. Como a GGTparticipa na regeneração da glutationa (GSH), os níveis de GSH foramestudados nas células de Sertoli, porém não houve alteração destesníveis no tratamento com a 1,25-D3. O lactato é o substrato energéticopreferencial das células germinativas, e foi verificado que o tratamentodas células de Sertoli com a 1,25-D3 estimulou a liberação de lactato,além de aumentar a captação de [14-C]-2-Deoxi-d-glicose (14C-DG) e aatividade intracelular da enzima lactato desidrogenase (LDH). Afosforilação oxidativa foi verificada nas células de Sertoli através derespirometria de alta resolução, e foi observado que a respiraçãomitocondrial não foi alterada nas células tratadas com a 1,25-D3corroborando com o aumento da produção de lactato pelas células deSertoli. Neste ensaio também foi observada uma diminuiçãosignificativa na produção de espécies reativas de oxigênio. Foi medida aatividade da enzima LDH extracelular, onde foi demonstrado que a1,25-D3 não possui capacidade citotóxica. Como conclusão destetrabalho, a 1,25-D3 aumenta a atividade da GGT e secreção de lactato,parâmetros importantes da função das células de Sertoli, o que sugereque este hormônio representa um dos fatores importantes na regulaçãodo metabolismo das células de Sertoli, destinado a aumentar ofornecimento de nutrientes e melhorar os mecanismos de defesaantioxidantes para o desenvolvimento normal e completo da ondaespermatogênica.
Abstract: 1a,25-diidroxivitamin D3 (1,25-D3) is the biologically active metaboliteof vitamin D3. 1,25-D3 is critical for the maintenance of normalreproduction since reduced fertility is observed in vitamin D-deficientmale rats. This hormone acts through a nuclear receptor (VDRn) and viarapid response pathways associated to a putative membrane receptor(VDRmem). Sertoli cells are the most important structural component ofseminiferous tubules, and they are responsible for regulating the nutrientinflux for germ cells development. Two important factors in Sertoli cellmetabolism regulation are the gamma-glutamyl transpeptidase (GGT)enzime activity and lactate secretion for germ cell nutrition. The aim ofthe present work was to study the effect and mechanism of action of1,25-D3 on GGT activity and on metabolic activity through lactatesecretion and glucose uptake in 30-day-old rat Sertoli cells. The resultsshow that 1,25-D3 increased GGT activity in 6 h through interactionwith VDRmem and possibly with protein kinase A (PKA) activation,and in longer incubations the protein synthesis inibition prevented thehormone effect, suggesting that the GGT activity regulation by the 1,25-D3 is also related to enzyme synthesis. As GGT is also related togluthatione (GSH) regeneration, the GSH levels in Sertoli cells wereverified, but no alteration was observed in cells incubated with 1,25-D3.Lactate is the preferred energetic substract of germ cells, and it wasobserved that Sertoli cells treatment with 1,25-D3 increased the lactaterelease, and also [14-C]-2-Deoxy-d-glucose (14C-DG) uptake and lactatedehydrogenase (LDH) intracellular activity. The oxidativephosphorylation in Sertoli cells was verified through high resolutionrespirometry, and it was observed that mitochondrial respiration was notaltered in cells treated with 1,25-D3, although the increased lactaterelease in these cells. In this essay it was also observed a decrease inoxygen reactive species production. The extracellular LDH activity wasmeasured and it was demonstrated that 1,25-D3 doesn?t have citotoxiccapacity. From this work, it is concluded that 1,25-D3 regulates GGTactivity and lactate release, significant parameters of Sertoli cellfunction, suggesting that this hormone represents an important factor inthe regulation of Sertoli cell metabolism. Also, 1,25-D3 improvescellular antioxidant defenses to the ongoing spermatogenesis.
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Alcântara, Luciana Inácia de. « Avaliação dos níveis de gama-glutamil transpeptidase sérica em pacientes hepatopatas e sua utilização como marcador bioquímico para consumo de álcool ». Universidade de São Paulo, 2007. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-25072007-101545/.
Texte intégralRésumé :
A dosagem de gama-glutamil transpeptidase sérica (GGT) tem sido amplamente utilizada como marcador bioquímico do uso de álcool. Sua utilização no rastreamento do consumo de álcool em pacientes com doença hepática diagnosticada necessita ser melhor investigada. Neste estudo foram comparados os níveis séricos de GGT ao padrão de consumo de álcool avaliado por meio do teste de rastreamento AUDIT em 126 indivíduos hepatopatas (94 homens e 32 mulheres), com idade entre 20 a 69 anos. Vinte e dois indivíduos (17,4%) obtiveram pontuação maior ou igual a 8 no AUDIT (casos positivos para suspeição de problemas relacionados ao consumo de álcool nos últimos 12 meses). Este percentual eleva-se a 32,7% nos pacientes com diagnóstico de hepatopatia associada ao uso do álcool. A gravidade da hepatopatia foi avaliada com base na classificação de Child-Pugh: 86 pacientes foram classificados como A (68,2%) e 40 como B ou C (31,8%). Todos os pacientes com pontuação ≥8 no AUDIT foram do sexo masculino e 77,3% deles tiveram diagnóstico de doença hepática associada ao uso de álcool (p<0,0001). Pacientes com pontuação ≥8 no AUDIT apresentaram valores médios de GGT significantemente maiores quando comparados àqueles menores que 8 (526,9 U/L ± 1006,8 versus 138,7 U/L ± 123, p<0,00001). O teste de correlação de Pearson indicou uma forte associação entre a elevação dos valores de GGT em pacientes hepatopatas que fazem uso de álcool e a pontuação total no AUDIT. Pacientes hepatopatas, apesar de manifestarem valores elevados de GGT, as diferenças não estiveram relacionadas à gravidade da hepatopatia. Não houve diferença estatisticamente significante em relação à pontuação ≥8 no AUDIT e idade, estado civil, situação de emprego, escolaridade, renda familiar, cor e religião. Nossos dados sugerem que a utilização combinada do GGT e do AUDIT pode ser útil em discriminar pacientes hepatopatas usuários de álcool, principalmente em países em desenvolvimento como o Brasil, devido ampla disponibilidade e baixo custo.The gamma glutamyltranspeptidase (GGT) has been widely employed as excessive alcohol use biochemical marker. Its utilization in screening of alcohol consumption in patients with diagnosed liver diseases must be better investigated. In this study, serum levels of GGT were compared to the pattern of alcohol consumption using the AUDIT test as alcohol screening instrument in 126 patients with liver disease (94 men and 32 women), with age ranged from 20 to 69 years old. Twenty two patients (17,4%) scored higher or equal 8 in the AUDIT (positive cases for alcohol related problems suspicion in the last 12 months). This proportion increases to 32,7% in patients with alcohol-associated liver disease. The severity of the liver damage was evaluated by the Child-Pugh classification: 86 patients were classified as A (68,2%) and 40 as B or C (31,8%). All patients who scored 8 or higher in the AUDIT were men and had mean values of GGT significantly higher when compared to those who scored less than 8 (526,9 U/L ± 1006,8 versus 138,7 U/L ± 123, p<0,00001). Among them 77,3% had alcohol-associated liver disease diagnosis (p<0,0001). The Pearsons correlation test showed a strong association between increase of the GGT values in patients that use alcohol and total score in the AUDIT. No association between increase of GGT values and severity of liver damage was found. No statistically significance was observed also between AUDIT scores 8 or higher to age, civil status, employment situation, education, familiar earnings, race or religion. Our data suggest that the combined use of GGT and AUDIT can be useful in discriminating liver disease patients that use alcohol, particularly in developing countries like Brazil, due to their widely availability and low costs.
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BAIK, JA-HYUN. « Role de la methylation de l'adn dans la regulation de l'expression du gene de la gamma-glutamyl transpeptidase chez le rat ». Paris 6, 1992. http://www.theses.fr/1992PA066019.
Texte intégralRésumé :
La gamma-glutamyl transpeptidase (ggt) est une enzyme essentielle au metabolisme du glutathion, son activite est modifiee dans differentes situations physiologiques et pathologiques. Chez le rat, la ggt est codee par un seul gene et il existe au moins trois types d'arn messager correspondant a la ggt, transcrits a partir de trois promoteurs differents. Le but de mon travail a ete l'etude du role de la methylation de l'adn dans la regulation de l'expression du gene de la ggt au cours du developpement et de l'hepatocarcinogenese. Premierement, nous avons montre une correlation inverse entre le degre de methylation de l'adn et l'expression du gene de la ggt dans le foie au cours du developpement. Une telle correlation n'a pu etre observee au cours de l'hepatocarcinogenese. Deuxiemement, en utilisant de la 5-azacytidine sur des cellules fao en culture, nous avons montre qu'un seul promoteur de ce gene est sensible a la demethylation. Troisiemement, nous avons pu identifier les sites cpg, localises au niveau des promoteurs 1 et 2 du gene de la ggt chez le rat, importants dans les variations de l'expression de la ggt dans le rein au cours du developpement
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Regan, Nicholas Bauman. « The Design and Synthesis of Small Molecule Protein Inhibitors as Potential Cancer Therapeutics ». The Ohio State University, 2011. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc_num=osu1303823563.
Texte intégral
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Brouillet, Arthur. « Expression du gene de la gamma-glutamyl transpeptidase dans le foie de rat, au cours du developpement et dans les cellules hepatiques transformees ». Paris 6, 1996. http://www.theses.fr/1996PA066501.
Texte intégralRésumé :
La gamma-glutamyl transpeptidase (ggt) est une enzyme membranaire localisee a la face externe des cellules. La ggt est la seule enzyme capable d'initier la degradation du glutathion extracellulaire aboutissant a la liberation de cysteine, qui contrairement au glutathion pourra etre captee par les cellules et participer a la synthese proteique ou du glutathion intracellulaire. Chez le rat comme chez l'homme, l'activite de la ggt hepatique est modifiee dans differentes situations physiologiques et pathologiques telles que le developpement, l'alcoolisme chronique, les cholestases et l'hepatocancerogenese. Chez le rat, la ggt est codee par un seul gene et l'analyse de son expression a revele l'existence de plusieurs arnm differents, transcrits au moins a partir de 2 promoteurs (p1 et p2). Le but de mon travail a ete l'etude des bases moleculaires de l'expression de la ggt chez le rat, et de sa regulation dans le foie au cours du developpement et dans les cellules hepatiques transformees. Nous avons determine l'organisation transcriptionnelle de ce gene et montre que l'expression des arnm differents dans leur region 5' non codante resultait de la transcription a partir de 5 promoteurs distincts (p1 a p5). Nous avons caracterise les promoteurs p3 et p4. Nous avons montre que l'arnm iii (2,4 kb) transcrit a partir de p3, est exprime dans les hepatocytes foetaux et que son expression est regulee negativement au cours du developpement hepatique. L'arnm iv (2,5 kb) transcrit a partir de p4 est detecte dans le foie uniquement dans les cellules biliaires matures. L'induction de la ggt dans les cellules hepatiques transformees resulte de l'expression des promoteurs p3, p4 ou p5, qui depend de l'etat de differenciation de ces cellules
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Zanatta, Leila. « Mechanism of action of 1(alfa),25-dihydroxyvitamin D3 on cytochrome P-450 aromatase, calcium influx and gamma glutamyl transpeptidase in rat testis ». Florianópolis, SC, 2011. http://repositorio.ufsc.br/xmlui/handle/123456789/95390.
Texte intégralRésumé :
Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2011Made available in DSpace on 2012-10-26T00:59:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0
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Holic, Nathalie. « Expression des différents promoteurs du gène de la Gamma glutamyl transpeptidase (GGT) dans le foie de rat au cours du développement et de la régénération ». Paris 11, 1999. http://www.theses.fr/1999PA11T042.
Texte intégralRésumé :
La gamma-glutamyl transpeptidase (GGT) est une enzyme membranaire qui contribue au maintien du taux intracellulaire du glutathion dans de nombreuses cellules épithéliales. Dans le foie adulte, 1'activité de la GGT est associée aux cellules biliaires. L'apparition de cette activité dans les hépatocytes dans des conditions de stress oxydatif, dans les foyers prénéoplasiques et dans les tumeurs induites par les génotoxiques a remis en cause l'utilisation de la GGT comme marqueur biliaire. Chez le rat, le gène de la GGT présente une organisation transcriptionnelle complexe ; sept ARNm qui codent pour la même protéine sont transcrits à partir de cinq promoteurs différents. Le but de mon travail a été l'étude de l'expression des différents promoteurs du gène de la GGT lors de la différenciation des cellules précurseurs hépatiques dans les voies biliaire et hépatocytaire en utilisant des modèles in vivo et in vitro chez le rat. J'ai montré par RT-PCR quantitative et hybridation in situ que la transcription de ce gène se faisait à partir de promoteurs différents selon le stade de différenciation des cellules hépatiques. L'expression du promoteur P5 apparaît comme une caractéristique des cellules précurseurs hépatiques. L'expression se fait à partir du promoteur P4 dans les cellules biliaires et du promoteur P3 dans les hépatocytes immatures. L'analyse de l'expression des promoteurs du gène de la GGT permet donc de suivre la différenciation des cellules précurseurs hépatiques dans les deux lignagesGamma-glutamyl transpeptidase (GGT) is a membrane-bound enzyme, which contributes to maintain intracellular glutathion level in epithelial cells. In adult liver, the GGT activity is associated to biliary cells. However, the induction of GGT activity in preneoplasic foci and in hepatocytes following xenobiotic treatments has questionned the use of GGT activity as a biliary marker. In the rat, the single copy GGT gene is transcribed from five promoters (Pl to P5) into seven mRNAs differing only in their 5'-untranslated regions and coding for a single protein. The aim of the present work was to study the expression pattern of GGT promoters during differentiation of rat hepatic precursor cells into hepatocytes or biliary cells, in vivo and in vitro. I evidenced, using quantitative RT-PCR and in situ hybridization, that GGT gene transcription occurs from multiple promoters in liver cells depending upon their differentiation stage. Expression from the promoter P5 appears to be a characteristic of hepatic precursor cells before their commitment into hepatocytic or biliary lineage. Promoter P4 and P3 expression can be associated to biliary cells and to immature hepatocytes, respectively. In conclusion, GGT gene expression pattern is differentially altered along with differentiation of hepatic precursor cells into both hepatic lineages
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Braunshausen, Andrea [Verfasser], Roger S. [Akademischer Betreuer] Goody et Roland [Akademischer Betreuer] Winter. « Peptidinhibitoren der Transpeptidase Sortase A aus Staphylococcus aureus und Untersuchungen zur Ovothiol A-Biosynthese in Erwinia tasmaniensis / Andrea Braunshausen. Betreuer : Roger S. Goody. Gutachter : Roland Winter ». Dortmund : Universitätsbibliothek Dortmund, 2012. http://d-nb.info/1099294843/34.
Texte intégral
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Thérien, Ariane. « Développement d'une plateforme vaccinale polyvalente basée sur l'utilisation des nanoparticules du virus mosaïque de la papaye (PapMV) et de la transpeptidase Sortase A de Staphylococcus aureus ». Master's thesis, Université Laval, 2016. http://hdl.handle.net/20.500.11794/27635.
Texte intégralRésumé :
La vaccination demeure à ce jour le moyen le plus efficace dans la prévention et le contrôle de maladies infectieuses. Les nanoparticules du PapMV ont été efficacement utilisées comme plateforme vaccinale permettant l’augmentation de l’immunogénicité d’antigènes. Bien que ces nanoparticules aient démontré un grand potentiel, la fusion d’antigène directement dans l’ORF de la protéine de capside (CP) peut nuire à sa capacité d’autoassemblage en nanoparticules. Nous avons développé une nouvelle méthode de modification du PapMV basé sur l’utilisation de la transpeptidase bactérienne sortase A (SrtA) permettant la conjugaison d’antigènes directement sur les nanoparticules post-assemblage. La SrtA a permis la conjugaison de longs antigènes (M2e et T20) sans affecter l’intégrité structurale et immunologique des nanoparticules. Ces nanoparticules ont induit de fortes réponses humorales spécifiques aux antigènes et ont induit une protection complète contre une infection à l’influenza chez les souris vaccinées avec PapMV-SrtA-M2e. La plateforme PapMV-SrtA permet l’ingénierie facile et rapide de nouveaux vaccins.Vaccination remains to date the most effective intervention in the prevention and control of infectious diseases. PapMV nanoparticles have shown to be an efficient vaccine platform to increase antigens immunogenicity. While they have shown great potential, the insertion of antigens in the open reading frame (ORF) of the coat protein (CP) can affect its capacity to assemble into nanoparticles. We developed a new method to modify PapMV nanoparticles based on the use of bacterial transpeptidase sortase A (SrtA) to attach antigens directly onto assembled nanoparticles. SrtA attached long antigenic peptides (M2e and T20) onto PapMV nanoparticles without affecting their structural of immunological integrity. These nanoparticles induced strong antigen specific antibodies and fully protected PapMV-SrtA-M2e vaccinated mice against an influenza challenge. The use of the PapMV-SrtA platform will enable the faster and easier development of new vaccines.
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David, Françoise. « Etude des GGT et transaminases chez une cohorte de peintres en aéronautique exposés aux solvants ». Bordeaux 2, 1994. http://www.theses.fr/1994BOR2M001.
Texte intégral
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GURNANI, SERRANO CARLOS KARAN. « ROLE OF PEPTIDOGLYCAN REMODELING IN OVERCOMING LPS BIOGENESIS DEFECTS IN ESCHERICHIA COLI ». Doctoral thesis, Università degli Studi di Milano, 2021. http://hdl.handle.net/2434/783882.
Texte intégralRésumé :
The three layered Gram-negative bacteria envelope consists of an inner membrane (IM), the periplasm‐containing peptidoglycan (PG), and an asymmetric outer membrane (OM) decorated with lipopolysaccharide (LPS) in the outer leaflet. Growth and assembly of cell envelope is orchestrated by action of dedicated protein machineries which span the entire envelope and whose coordinated activity guarantees proper envelope stiffness. Defects in biogenesis in any of these layers compromise the whole cell integrity and lead to cell death. In this thesis we show that Escherichia coli remodels the PG structure by increasing the level of 3-3 crosslinks produced by LD – Transpeptidases (LDTs), to avoid cell lysis when the LPS transport to the OM is disrupted. E. coli codes for six LDTs (LdtA-F): LdtA, LdtB, and LdtC covalently attach Lpp to PG while LdtD and LdtE introduce 3-3crosslinks. LdtF has no LD-Transpeptidase (LD-Tpase) activity but enhances the enzymatic activity of LdtD and LdtE. Our data outlines a major contribution of LdtD in PG remodelling and suggest that LdtD works in concert with the PG synthase PBP1B, its activator LpoB and the DD-CPase PBP6a to form a dedicated PG repair machine that runs a PG remodeling program to counteract damages to the OM. We also show that the lysis phenotype and morphological defects seen in mutants with an impaired LPS transport and lacking ldtF, are rescued and suppressed, respectively, by the loss of YgeR an uncharacterized lipoprotein predicted to be OM anchored. YgeR belongs to the family of LytM-domain factors which are hydrolases or hydrolase regulators implicated in PG remodeling/turnover. Important PG hydrolases are amidases which promote PG septal splitting and daughter cell separation. Our biochemical data reveal that YgeR is an amidase regulator able to activate AmiA, AmiB and AmiC the three amidases encoded by E. coli. We also show that YgeR binds purified PG and physically interacts with the amidase AmiC. Our biochemical analyses are complemented by in vivo data showing that YgeR preferentially activates AmiC and that it does it through its LytM domain. Altogether, our results point out an unexplored protective role of the 3-3 crosslinks in PG to overcome severe OM biogenesis defects and propose YgeR as a novel amidase activator whose action seems required upon envelope stress.
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Zanatta, Leila. « Mécanisme d'action de la 1α,25-dihydroxyvitamine D3 dans le cytochrome P-450 aromatase, l'influx de calcium et gamme glutamyl transpeptidase dans les testicules de rat : Thèse soutenue sur un ensemble de travaux ». Caen, 2011. http://www.theses.fr/2011CAEN2089.
Texte intégralRésumé :
1α,25-dihydroxyvitamine D3 (1,25D), le métabolite biologiquement actif de la vitamine D3, agit par l’intermédiaire du récepteur nucléaire (nVDR) mais aussi par l'activation des voies de signalisation associées à un récepteur putatif de membrane (mVDR). L’objectif du présent travail était d’étudier les actions genomiques et nongenomiques de la 1,25D dans le testicule de rat par analyse de l’expression du gene de l’aromatase, de l’influx de 45Ca2+ et de l’activité de la gamme glutamyl Tanspeptidase (GGTP). Les résultats ont montré que les niveaux basaux de transcripts du VDR était significativement plus élevé dans les SC de rats de 30 jours que chez les animaux jeunes, mais ils sont également présents dans les GC des rats adultes (spermatocytes pachytènes et spermatides rondes). Dans les SC de rats âgés de 10 jours, l'expression de l'aromatase a été considérablement modifiée par 1,25D (10-7 M) après 24 h, dans les Sertoli de rat de 30 jours l'expression a augmenté après 6 h de traitement par 10-7 M de 1,25D. La stimulation de l'expression de l'aromatase dans les SC par l'agoniste 1β,25(OH)2 lumisterol3 (JN), et la suppression de l'effet de la 1,25D par des antagonistes 1β,25(OH)2 vitamine D3 (HL) et (23S)-25-1α-(OH)-vitamine D3-26, 23 lactone (MK) ont suggéré que au-delà du effet genotropique, la 1,25D pourrait activer des voies de signalisation tels que la PKA via un mVDR. Les résultats des études avec le 45Ca2+ en SC ont montré que la 1,25D de stimule l’influx de Ca2+ après 5 et 15 min d’incubation et que le JN produit un effet similaire suggérant que l'action de la 1,25D se fait par le mVDR. Par ailleurs, la PKA, la PKC et MEK au-delà de la inhibition de la pompe Na+/K+ ATPase semble être concernés. Egalement, la 1,25D a augmenté l'activité de GGTP après 30 et 60 min d'exposition à l’hormone et cet effet est dépendent de l’activité de la PKA1α,25-dihydroxyvitamin D3 (1,25D) is the biologically active metabolite of vitamin D3. This hormone acts through a nuclear receptor (nVDR) and via rapid (nongenomic) response pathways associated to a putative membrane receptor (mVDR). The aim of the present work was to study the genomic and nongenomic actions of 1,25D in rat testis through the investigation of aromatase gene expression and the mechanisms involved on 45Ca2+ influx and gamma-glutamyl transpeptidase (GGTP) in whole testis and Sertoli cells (SC). The results demonstrated that the basal levels of VDR transcripts were significantly higher in 30-day-old rat SC than in younger animals, but it was also present in adult GC (pachytene spermatocytes and round spermatids). In SC from rats aged 10 days, the aromatase expression was significantly modified by 1,25D (10-7 M) after 24 h. In Sertoli cells from 30-day-old rat the aromatase expression increased (4 fold) after 6 h of incubation with 10-7 M of 1,25D and returned to control level after 24 h. The stimulation of aromatase gene expression in 30-day-old SC by the agonist 1β,25(OH)2 lumisterol3 (JN), and the suppression of 1,25D effect by the antagonists 1β,25(OH)2 vitamin D3 (HL) and (23S)-25-1α-(OH) vitamin D3-26,23 lactone (MK) suggested, besides a genotropic effect of 1,25D the existence of a nongenotropic activation of VDR involving at least the PKA pathway. The results of 45Ca2+ influx in SC showed that 1,25D increased 45Ca2+ uptake at 5 and 15 min after hormone exposure, and that JN produced a similar effect suggesting that 1,25D action occurs via putative membrane receptor. Moreover, PKA, PKC and MEK beyond the Na+/K+ pump inhibition seem to be implicated. Also in the testis, the 1,25D increased the activity of GGTP after 30 and 60 min of hormone exposure and this effect was dependent of PKA activity