Literatura científica selecionada sobre o tema "ADN complémentaire – Dissertations universitaires comme sujet"

Au cours de ce travail, nous avons isole un nouvel adnc d'une banque de neuroretine de caille de 2 jours. Chez la caille, les arnm detectes a l'aide de ce clone ont une taille de 2. 2, 4. 2 et 6. 5 kb. Ces transcrits sont egalement exprimes dans le foie, le cerveau et l'intestin. Chez les mammiferes, deux arnm nectinepsine de 2 et 5 kb sont mis en evidence, ainsi que dans le retinoblastome humain. De plus, les arnm nectinepsine presentent un profil d'expression suggerant un epissage differentiel, dans deux lignees de cellules de neuroretine de caille immortalisees par le virus du sarcome de rous. Nous avons nomme, nectinepsine, la sequence polypeptidique deduite de l'adnc. Cette proteine presente un domaine rgd de reconnaissance cellulaire, un motif consensus du site actif des aspartyl proteases, ainsi que d'importantes homologies avec une molecule adhesive de la matrice extracellulaire (mec), la vitronectine. De plus, la nectinepsine presente les domaines communs a l'hemopexine, la vitronectine et la plupart des metalloproteases dans la famille des pexines. Des etudes en western blot a l'aide d'un antiserum dirige contre la vitronectine humaine, nous ont permis de mettre en evidence chez la caille et les mammiferes, deux proteines de 45 et 54 kda, distinctes de celles de la vitronectine. La construction d'un vecteur retroviral contenant la sequence specifique de la rectinepsine en antisens, transfectee dans les cultures de fibroblastes de poule conduit a la disparition de la bande de 54 kda. La nectinepsine correspond a la nouvelle forme de 54 kda de la vitronectine decrite dans le jaune d'oeuf de poule par nagano et coll. La nectinepsine est une nouvelle proteine de la mec. Elle pourrait jouer un role dans l'equilibre modulant les mecanismes d'adherence cellulaire et de degradation des composants de la mec au cours du developpement. L'expression des arnm nectinepsine semblent soumis a une regulation, qui pourrait etre modifiee lors de l'immortalisation cellulaire dans des processus pathologiques comme la proliferation tumorale et les phenomenes metastasiques.

Dans le muscle squelettique le responsable de l'activité mécanique est la molécule de myosine qui transforme l'énergie provenant de l'hydrolyse de l'ATP en mouvement. Cette protéine hexamérique (2 chaînes lourdes et 4 chaînes légères) existe sous plusieurs formes en fonction du type des monomères qui la constituent. Au cours du développement, dans le muscle squelettique humain, deux isoformes ont été décrites, une forme embryonnaire et une forme périnatale. Les ADN complémentaires des chaînes lourdes de ces isoformes développementales ont été isolés et leurs séquences ont été déterminées. Un troisième ADN complémentaire a été isolé. Sa séquence nucléotidique (6010 bases) a été déterminée. Des expériences de protection à la RNase montrent une expression du messager durant la deuxième moitié de gestation et les premiers jours post-partum. Cette isoforme fœtale présente des différences de séquences avec l'isoforme périnatale précedemment décrite, 24 mutations nucléotidiques (0. 45%) conduisant à 9 substitutions d'acides animés (1,5%). Ces différences mettent en évidence un polymorphisme de restriction, mais celui-ci n'a pas été retrouvé. Tous les éléments recueillis sur l'isoforme fœtale font considérer cette dernière comme la foemr prépondérante exprimée entre la treizième semaine de développement et 2 jours après la naissance.

Chez les mammifères, les acides sialiques se trouvent aux extrémités terminales des glycoconjugués (glycoprotéines et glycolipides) ou des oligosaccharides libres. De part cette position terminale sur les glycannes des glycoconjugués et de leur charge négative, les acides sialiques conditionnent les propriétés physico-chimiques des sialoglycoconjugués et sont souvent impliqués dans des mécanismes d'interaction cellulaire. L'association de résidus d'acides sialiques par des liaisons en α2,8 forme des chaînes linéaires de longueur variable classées selon le degré de polymérisation en structures disialylées (diSia), oligosialylées (oligoSia) ou polysialylées (polySia, ou PSA pour Poly Sialic Acid). Les PSA portés par la N-CAM (Neural Cell Adhesion Molecule) ont été les premiers mis en évidence chez les mammifères. Ils sont impliqués dans de nombreux processus physiologiques tels que la migration des cellules neuronales, la croissance axonale ou la synaptogenèse. Depuis, d'autres structures di-, oligo- et polysialylées ont été décrites chez les mammifères et chez l'homme en particulier, mais très peu d'études concernant leurs implications biologiques et leur biosynthèse ont été menées. Grâce à une analyse in silico, nous avons reconstitué un gène putatif d'α2,8-sialyltransférase sur le chromosome 10 humain, que nous avons nommé hST8Sia VI. Les analyses de l' expression de ce gène dans différents tissus et cellules humains ont mis en évidence une expression faible et ubiquiste de ce gène. Nous avons cloné la totalité du cadre ouvert de lecture de ce gène à partir des cellules cancéreuses mammaires MCF-7 et avons produit une forme recombinante soluble de hST8Sia VI dans des cellules COS-7 et Sf-9 pour caractériser son activité enzymatique. Nos tests d'activité in vitro ont démontré que hST8Sia VI catalyse le transfert d'un seul résidu d'acide sialique sur les motifs glucidiques sialylés en α2-3 trouvés sur les O-glycannes des glycoprotéines pour former des motifs disialylés du type Neu5Acα2-8Neu5Acα23Galβ 1-3GalNAc-. Afin de déterminer son activité enzymatique in vivo, nous avons créé un modèle de cellules cancéreuses mammaires (MDA) sur-exprimant stablement hST8Sia VI. Nos premiers résultats indiquent que hST8Sia VI utilise préférentiellement les motifs α2,3-sialylés, ce qui confirme les analyses réalisées in vitro.

Les modifications épigénétiques de l'ADN constituent un moyen de contrôle de la transcription, principalement par la méthylation des cytosines qui joue un rôle prépondérant dans l'empreinte parentale de l'organisation du génome en domaines d'expression. L'empreinte permet le contrôle de l'expression d'un gène en fonction de son origine parentale. Un des aspects non résolus de ce phénomène est de comprendre comment s'opère sa mise en place pendant la gamétogénèse. L'étude de l'évolution de la méthylation de deux gènes soumis à empreinte (H19 et PEG1/MEST) pendant la spermatogénèse montre que l'empreinte est dans un premier temps effacée chez l'embryon, puis qu'elle est secondairement réinstallée, uniquement sur le gène d'expression maternelle, avant l'entrée en méiose des spermatogonies. L'analyse du profil de méthylation de séquences satellites dans deux situations ou elles sont hypométhylées, le syndrome ICF et le trophoblaste, permet de mieux comprendre l'influence de la méthylation sur l'hétérochromatine. Le syndrome ICF associe des anomalies chromosomiques et une hypométhylation des satellites 2, suggérant une relation entre les deux. Cependant, l'étude des satellites 3 dans ce syndrome montre qu'ils sont également déméthylés sans altérations morphologiques des régions chromosomiques correspondantes. Ces anomalies chromosomiques pourraient donc être la conséquence d'une modification des interactions entre l'hétérochromatine et certaines protéi͏̈nes de liaison spécifiques du satellite 2. Cette hypothèse est renforcée par l'observation que le profil de méthylation d 'une séquence de satellite 2 dans le trophoblaste montre une organisation en groupes des CpG déméthylés le long de la séquence. Ceci suggère que la déméthylation de l'hétérochromatine dans le placenta est contôlée de manière à modifier certaines interactions ADN-protéi͏̈nes, ce qui pourrait retentir sur l'organisation du génome au sein du noyau et participer à la régulation transcriptionnelle de cet organe.

La rétine est un tissu fortement exposé au stress oxydatif de part son activité physiologique (exposition aux rayons lumineux, consommation d'oxygène, activité métabolique, phagocytose. . . ). Toutes ces particularités sont à l'origine de la production de ROS qui provoquent des nombreux dommages comme l'oxydation des bases et les cassures double brin. Ce travail présente différentes protéines de la réparation de l'ADN (ATM et OGG1) intervenant dans différentes voies de reconnaissance suivant le type de dommages rencontrés. La protéine ATM qui détecte des cassures double brin présente une localisation différente dans les photorécepteurs et les cellules granulaires du cervelet. La protéine OGG1 permettant la reconnaissance et l'excision de la 8-oxoG est présente et active dans les cellules rétiniennes. Chez les souris déficientes pour chacune de ces protéines, aucune dégénérescence rétinienne n'est observée. Cependant, des dysplasies de la neurorétine et de l'EPR sont mises en évidence<br>The retina is particularly susceptible to oxidative stress due to high oxygen consumption and metabolic rates. The specific characteristics of the retina (high levels of oxygen consumption, light, polyunsatured fatty acids. . . ) lead to free radical, cell damages, ageing and diseases. Therefore, all these processes can contribute to the formation of oxidative DNA damage in the retinal cells. A difference between the localization patterns of the active and inactive forms of ATM in photoreceptor and granular cells was observed. This suggests that ATMp (activated form) may be involved in both the protection of cells from oxidative damage and the maintenance of ocular cell structure and function. OGG1, responsible for the recognition and excision of the 8-oxoG, is highly expressed in neuroretina and non-neuronal cells of the eye and a 8-oxoG DNA-glycosylase activity is detected in this tissue. Moreover, there is no retinal degeneration in Atm-/- and Ogg1-/- mice

Ce travail de thèse a comporté la localisation de gènes candidats à différentes pathologies humaines en utilisant des fragments de petite taille pour définir une localisation trés précise. Nous avons localisé cinq gènes. L'utilisation de sondes recouvrant la région du gène SMN, hybridées sur l'ADN peigné des malades dans le but d'établir une cartographie physique plus fine de cette région du génome. L'étude de la méthylation ADN avec le syndrome ICF. Nous avons montré que l'hétérochromatine facultative (chromosome X inactif) était une des cibles de ce défaut et que les principales caractéristiques épigénétiques associées à ce chromosome n'étaient pas atteintes par cette hypométhylation. Nous avons étudié les profils de méthylation pendant la période préimplantatoire chez les embyons de souris mettant en évidence des profils<br>This thesis work was organized around the localization of candidate genes for a variety of human pathologies, with a particular focus on the use of small size DNA probes to alow a very precise mapping. Five localizations were successfully performed. The characterization of the genomic region of the SMN gene through the development of in situ hybridazion on combed DNA from patients to provide a precise cartography. . DNA methylation studiesin the context of the ICF syndrome. We showed that despite its hypomethylated status, the facultative heterochromatin (inactive X chromosome) of ICF female patients maintained its global epigenetic characteristics. We also performed an analysis of methylation variations in murine preimplantation embryos and revealed specific methylation patterns associated with this critical period

L'activite de la drogue antitumorale pazelliptine (pze) ne semble pas etre due seulement a son intercalation dans l'adn, mais necessiterait une activation metabolique conduisant a la formation d'especes radicalaires. Une partie de ce travail porte sur l'etude de la dynamique reactionnelle de telles especes en solution et vis-a-vis de l'adn. Experimentalement, les radicaux de la pze sont generes par les methodes de radiolyse pulsee ou de photolyse-laser en utilisant la possibilite d'une photoionisation a deux photons de la drogue. Ces deux etudes complementaires ont permis de caracteriser par des mesures de spectroscopie d'absorption transitoire, la reactivite des radicaux de la pze dans ces differents etats de protonation et de proposer un mecanisme d'action de la drogue vis-a-vis de l'adn impliquant ses especes radicalaires et les especes activees de l'oxygene. Par ailleurs, nous avons montre que la pze est un photosensibilisateur de la degradation de l'adn en mesurant les coupures simple et double brin. L'investigation des mecanismes moleculaires responsables de ce processus nous a conduit a caracteriser les proprietes photophysiques et photochimiques de l'etat triplet de la pze en solution et complexee aux acides nucleiques. Les resultats nous ont permis de proposer un mode d'action de la drogue par l'intermediaire d'une oxydation de l'adn obtenue par un transfert de charge a partir de l'etat triplet de pze.

L'importance medicale des thalassemies fait que ces maladies hereditaires ont ete etudiees tant sur le plan phenotypique que genotypique. Elles ont fourni un ensemble exceptionnel de modeles permettant d'etudier la regulation de la synthese de l'hemoglobine. Elles permettent encore d'eclairer certaines questions non resolues concernant la specificite tissulaire ou les etapes du developpement. Les divers genes thalassemiques sont etroitement lies a des haplotypes des restriction varies de la totalite du locus beta. C'est celle liaison que nous avons utilisee comme premiere etape pour cribler une population arabo-berbere algerienne. Nous avons ainsi retrouve certains des haplotypes decrits par orkin en 1982 chez des thalassemiques mediterraneens, mais sutout, cette etude a permis de mettre en evidence 4 haplotypes nouveaux que nous avons designes arbitrairement a, b, c et d. Nos resultats ont largement contribue a la demonstration de la valeur des haplotypes comme marqueurs de la variabilite genetique d'expression clinique des hemoglobinopathies. Un de ces haplotypes nouveaux, l'haplotype c, decouvert sous une forme homozygote a plus particulierement retenu notre attention. Nous avons clone le gene beta thalassemique correspondant afin de pouvoir en etudier la sequence nucleotidique. De fait, celui-ci s'est avere etre porteur d'une mutation nouvelle: une transition g-a au nt 5 de l'ivs1. L'expression transitoire en vecteur heterologue de ce gene a montre que cette substitution situee dans le site donneur d'epissage affectait celui-ci et activait l'un des trois sites cryptiques localises a proximite de la jonction exon 1/intron 1. Au cours de ce travail, nous avons donc etudie largement les polymorphismes de restriction d'une population thalassemique donnee et demontre que ceux-ci pouvaient etre des marqueurs de terrain genetique. De plus, la caracterisation fonctionnelle d'une mutation thalassemique nouvelle a permis d'apporter des elements supplementaires intervenant dans les mecanismes d'epissage des transcrits primaires.

Les maladies mitochondriales forment le groupe le plus courant d'anomalies congénitales du métabolisme. Ces maladies représentent actuellement plus de 17% des consultations régulières de notre service de génétique médicale. Les déficits multiples de la chaîne respiratoire mitochondriale sont à l'origine d'un grand nombre de maladies mitochondriales. Ils se caractérisent par des atteintes multi-viscérales responsables la plupart du temps d'un décès précoce dans les premières années de vie des patients atteints par ce type de pathologie. Depuis une quinzaine d'années, notre laboratoire a recruté un très grand nombre de patients présentant un déficit multiple de la chaîne respiratoire (CR). En 2001, il a été mis en évidence qu'un tout nouveau type d'anomalie touchant l'ADN mitochondrial (ADNmt) pouvait être à l'origine de ces déficits multiples. Ces anomalies sont des modifications quantitatives de l'ADNmt connues sous le nom de déplétions de l'ADNmt. Le recrutement important de cas de déficits multiples et le faible rendement de diagnostic moléculaire établi nous a incité à considérer les déplétions de l'ADNmt comme origine potentielle de déficits multiples de la chaîne respiratoire. Le travail de recherche présenté dans ce manuscrit a eu pour objectif tout d'abord d'estimer l'incidence des déplétions de l'ADNmt dans notre cohorte de patients atteints de déficit multiple de la CR. Nous nous sommes ensuite attachés à définir les atteintes cliniques associées à ces déplétions de l'ADNmt. Enfin, l'étude des gènes connus de déplétion de l'ADNmt DGUOK, POLG1 et TK2 nous a permis de mieux caractériser ces patients. Par la suite, l'étude par cartographie génétique de nos familles consanguines avec déplétions de l'ADNmt et de mutation actuellement inconnue, nous a conduit à la première identification de mutations récessives dans le gène PEO1 responsables d'un syndrome hépatocérébral de déplétion de l'ADNmt. La dernière partie de ce manuscrit rapporte l'étude en cours de cartographie génétique et de séquençage de gènes candidats pour une famille consanguine présentant un autre type de syndrome hépatocérébral associé à un déficit multiple de la chaîne respiratoire. L'ensemble de ce travail a permis à notre laboratoire d'acquérir de meilleures connaissances de l'origine génétique des déficits multiples de la chaîne respiratoire associés à une déplétion de l'ADNmt et d'améliorer ainsi le conseil génétique d'une partie des maladies mitochondriales<br>Mitochondrial diseases are a common group of metabolism pathologies. Nowadays, they represent more than 17% of our clinical consultations. Multiple respiratory chain deficiency account for an important number of mitochondrial disease and are characterised by a multi-systemic organ involvement leading to early death. Since these last 15 years, we have recruited a large number of patients with multiple respiratory chain deficiency. In 2001, it has been shown that a mtDNA quantitative anomaly was at the origin of this defect also named mtDNA depletions. The large number of patients with multiple respiratory chain deficiency and the weak yield of molecular diagnosis prompt us to consider mtDNA depletion as a cause of multiple respiratory chain deficiency. The aim of this work was firstly to estimate the incidence of mtDNA depletion in our series of multiple respiratory chain cases. Then, we characterised the genetic and phenotypic features of mtDNA depletions. Finaly, the study of one family among our consanguineous and/or multiplex patients allowed us to identify a new gene responsible for mtDNA depletions associated with a hepatocerebral failure. This gene also named PEO1 encodes for the mitochondrial Twinkle helicase which has been ever known to cause adult onset PEO in a dominant transmission. Finally, we have studied another consanguineous family with multiple respiratory chain deficiency and hepatic failure. This work allowed us to improve the genetic counselling in our laboratory especially for all patients with multiple respiratory chain deficiency associated with a mtDNA depletion

Les déplétions de l'ADN mitochondrial (ADNmt) sont caractérisées par une diminution de la quantité de molécules d'ADNmt et sont une cause importante des déficits de la chaîne respiratoire. Les travaux présentés dans cette thèse ont permis d'identifier un nouveau gène nucléaire de déplétion de l'ADNmt associée à une encéphalomyopathie sévère conduisant au décès dans les premiers mois de vie. Ce gène code pour une petite sous-unité de la ribonucléotide réductase p53R2 induite par le facteur suppresseur de tumeurs p53. La ribonucléotide réductase catalyse la réduction des nucléotides en leurs désoxynucléotides correspondants, ce qui constitue l'étape limitante dans la synthèse de l'ADN. La deuxième partie de ce travail a porté plus précisément sur le rôle de p53R2 dans la réplication de l'ADNmt en abordant les questions de sa localisation subcellulaire ainsi que de la régulation des sous-unités de la ribonucléotide réductase au cours du développement, chez la souris, dans différents tissus<br>Mitochondrial DNA (mtDNA) depletions are characterized by a decreased number of mtDNA molecules and constitute a major cause of respiratory chain deficiency. This work allowed us to identify a new nuclear gene of mtDNA depletion associated with a severe encephalomyopathy leading to death in the first months of age. This gene encodes a small ribonucleotide reductase (RNR) subunit p53R2 which is a target of the transcription factor p53. RNR catalyses the reduction of the nucleotides into their corresponding desoxyribonucleotides, which is the rate limiting step for DNA synthesis. The second part of this work focuses on the role of p53R2 in mtDNA replication studying its subcellular localization and the expression of the subunits of RNR in several mouse tissues during development