Literatura científica selecionada sobre o tema "Enzyme cristallin"

The present study was carried out to evaluate the ameliorating effect ofCaesalpinia cristaLinn. (CCME) extract on iron-overload-induced liver injury. Iron overload was induced by intraperitoneal administration of iron dextran into mice. CCME attenuated the percentage increase in liver iron and serum ferritin levels when compared to control group. CCME also showed a dose-dependent inhibition of lipid peroxidation, protein oxidation, and liver fibrosis. The serum enzyme markers were found to be less, whereas enhanced levels of liver antioxidant enzymes were detected in CCME-treated group. In presence of CCME, the reductive release of ferritin iron was increased significantly. Furthermore, CCME exhibited DPPH radical scavenging and protection against Fe2+-mediated oxidative DNA damage. The current study confirmed the hepatoprotective effect of CCME against the model hepatotoxicant iron overload and the activity is likely related to its potent antioxidant and iron-chelating property.

AbstractThe role of the enzyme polyphenoloxidase (PPO) in the response of two soybean varieties, Hartwig (resistant) and Cristalina (susceptible), to Meloidogyne javanica was studied in plants where root systems were exposed to the known PPO inducer, methyljasmonate. Chlorogenic acid was the best substrate for root PPO. Treatment of both varieties with 100 and 400 μM methyljasmonate solutions induced a similar increase in enzyme activity 72 h after treatment. Inoculation of roots with second-stage juveniles (J2) induced PPO increase in cv. Cristalina but not in cv. Hartwig. Moreover, combined treatment of methyljasmonate and J2 inoculation enhanced PPO activity in both varieties. Two PPO cDNAs were isolated from the roots of the resistant variety 48 h after J2 inoculation, and Southern blot experiments in both varieties, using GmPPOJH1 and GmPPOJH2 cDNAs as probes, indicated that PPOs are represented by a multigene family in soybean. RT-PCR assays showed more GmPPOJH1 transcripts in plants treated with methyljasmonate and infected with nematodes, where high PPO activity was also observed. Plants treated with methyljasmonate and infected with J2 showed a marked decrease of nematode population 35 days after inoculation. These findings suggest that methyljasmonate triggers a resistant response in soybean roots to M. javanica but PPO is not involved in the resistance process.

The soybean [Glycine max (L.) Merrill] crop holds a prominent position in the Brazilian economy because of the extension of the planted area and volume of grain production, but the beany flavor has been a limiting factor for soybean derivatives consumption by western population. This flavor is produced mainly by action of lipoxygenase enzymes (Lox1, Lox2 and Lox3), present in some commercial varieties. The genetic elimination of the alleles that codify these enzymes is the most appropriate way to avoid problems associated to this deleterious flavor. To elucidate the effect of seed lipoxygenase elimination on the resistance to plant pathogens, normal varieties of soybean (FT-Cristalina RCH, Doko RC and IAC-12) and their backcross-derived lines, both with the three lipoxygenases present in their seeds (triple-positive, TP) and without the three lipoxygenases (triple-null, TN), were tested for their resistance to stem canker (Diaporthe phaseolorum f.sp. meridionalis), frogeye leaf spot (Cercospora sojina Hara), and powdery mildew (Microsphaera diffusa Cke. & Pk.). All genetic materials studied were resistant to stem canker. FT-Cristalina RCH and Doko-RC and their TP and TN lines were resistant to frogeye leaf spot. IAC-12 and its derived lines not only presented a higher disease index, but also the derived lines, TP and TN, were more susceptible, indicating the loss of genes for disease resistance in the backcrosses. There was no association between the elimination of lipoxygenases from the seeds with the resistance to frogeye leaf spot. In relation to the powdery mildew, TP or TN lines presented similar or higher resistance than their respective recurrent parents whose susceptibility appeared in the following order: IAC-12, less susceptible, Doko-RC, intermediate and FT-Cristalina RCH, more susceptible.

Xantomatose cerebrotendínea é rara condição de natureza genética, na qual se observa redução na atividade da enzima hepática 27-hidroxilase, envolvida no metabolismo e excreção do colesterol. Consequentemente, depósitos de material lipídico (colesterol/colestanol) acumulam-se em diferentes regiões do organismo, principalmente tendões, sistema nervoso central e cristalino. Relatamos dois casos da doença em duas irmãs, mostrando os principais achados de imagem.

Naphthalene cataract is probably due to peroxide production through naphthoquinone (NQ) redox cycling and/or glutathione conjugation. Both mechanisms yield losses of essential SH-groups in cristallins and are thus probably involved in protein modification finally visible as lens opacity. 1,2-N aphthoquinone produces H2O2 in the presence of either ascorbate, glutathione, NADH or - to a lesser extend - by homogenates of lens protein preparations. In the presence of 1,2-naphthoquinone and the above reductive additions, both, oxygen uptake and H2O2 formation can be observed. Reductive oxygen activation in these systems are diminuated by iodide in a concentration-dependent manner. Since maleimide-treated proteins are less capable to activate oxygen by 1,2-naphthoquinone, a direct oxygen activation by the interactions of 1,2-naphthoquinone with protein-SH is indicated. Catalysis of “diaphorase”-type (dia) enzymes via NADH - dia - 1,2-NQ - O2 seems not to operate in hydrogenperoxide production during 1,2-naphthoquinone lens toxicity.

La galactosemia es una ocurrencia rara debido a la falla del metabolismo del azúcar galactosa en la ruta de Leloir, usada por el cuerpo para transformar D-galactosa a D-glucosa 1 fosfato, para lo cual requiere la participación de las enzimas GALK1, GALT y GALE. El gen que codifica la enzima galactosa 1 fosfato uridil transferasa (GaLT) se localiza en el cromosoma 9p13. Es la primera enzima identificada en este trastorno y también es la causa más común de galactosemia tipo I y/o galactosemia clásica (OMIM No. 230400). En este trabajo presentamos el caso de un niño de un año y tres meses de edad que, después de tres meses de vida, fue hospitalizado en varias ocasiones a causa de infecciones del tracto urinario y neumonía.Al año de edad presentó anemia severa, desnutrición marasmática, retraso motor, opacidad del cristalino bilateral y hepatomegalia de 7 cm por debajo del reborde costal derecho.

В рамках программы импортозамещения и развития виноградарско-винодельческой отрасли с глубокой переработкой сырья для восстановления ассортимента конкурентоспособных ликерных вин является актуальной организация производства винных и виноградных спиртов из разного виноградного сырья на базе действующих заводов первичного виноделия, в том числе и из вторичных продуктов виноделия. Целью исследований было провести предварительную оценку возможности получения винного и виноградного спиртов с объемной долей этилового спирта не менее 91 % путём глубокой переработки винограда сорта Кристалл с применением процесса ректификации. Объектами исследований являлись виноград сорта Кристалл урожая 2018 г., приготовленные из него столовый сухой белый виноматериал, виноградные выжимки, винный и виноградный спирты. Брожение виноградного сусла и сладкой виноградной выжимки проводили без применения ферментных препаратов и диоксида серы на чистой культуре винных дрожжей Saccharomyces vini . Предложено проводить прессование сбродившей виноградной выжимки на пневматическом прессе с отделением и последующей перегонкой жидкой фракции для первой дистилляции. На установке ЛУММАРК отработана методика полной перегонки виноматериалов до ректификата. Установлено, что качество получаемого спирта напрямую зависит от объемной доли этилового спирта. С уменьшением объемной доли этилового спирта получаемых спиртов растет количество нежелательных летучих компонентов, снижаются органолептические характеристики готового продукта. Показано, что предложенный процесс перегонки, включающий получение спирта-сырца на дистилляторе DV-3 и спирта - на малой ректификационной установке РУМ-3 позволяет получить винный или виноградный с объемной долей этилового спирта 94,5-94,6 % при выходе 85-86 %. In Russia, within the framework of the import substitution and development of the wine industry with deep processing of raw materials to restore the range of competitive liqueur wines, it is timely to organize the production of wine and grape distillates from various grape raw materials, including those from winemaking secondary products, based on existing primary wineries. The aim of the study was to conduct a preliminary assessment of the possibility of obtaining wine and grape distillates with a strength of at least 91% by deep processing of ‘Cristall’ grapes using a rectification process. The objects of research were ‘Cristall’ grape variety of the 2018 harvest, dry white base wine prepared from it, grape marc, wine and grape distillates. Fermentation of grape must and sweet grape marc was carried out without the use of enzyme preparations and sulfur dioxide on a pure culture of Saccharomyces vini wine yeast. It is proposed to press fermented grape marc on a pneumatic press with separation and subsequent distillation of the liquid fraction for the first distillation. A technique for the complete distillation of base wines into rectified material was developed using LUMМARK processing unit. It has been established that the quality of the distillate obtained directly depends on the volume ratio of ethyl alcohol. With a decrease in the volume ratio of ethyl alcohol of the obtained distillates, the amount of undesirable volatile components increases, and the organoleptic characteristics of the finished product decrease. It is shown that the proposed distillation process, which includes two stages: obtaining crude alcohol using a DV-3 distiller and alcohol using a small distillation unit RUM-3, allows to obtain wine or grape distillate with volume ratio of ethyl alcohol of 94.5-94.6 % at the exit of 85-86%.

Desarrollo de sistemas de diagnóstico para la hormona estimulante de tiroides (TSH) en suero humano: ELISA e Inmuno-PCR cuantitativa (qIPCR)Julián Elías Abud - jabud@fbcb.unl.edu.arDirector: Dr. Horacio Adolfo RodríguezCo-Director: Dr. Enrique Hugo LuqueLugar de realización: Instituto de Salud y Ambiente del Litoral (UNL-CONICET), Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas, Universidad Nacional del LitoralFecha de defensa: 9 de marzo de 2018 Potencial funcional (in vitro e in vivo) y tecnológico de exopolisacáridos (EPS) producidos por bacterias lácticasElisa Carmen Ale - eliale@fiq.unl.edu.arDirectora: Dra. Ana BinettiCo-Director: Dr. Jorge ReinheimerLugar de realización: Instituto de Lactología Industrial (UNL-CONICET)Fecha de defensa: 14 de marzo de 2018 Estudios moleculares y celulares del sistema de endotelinas en cáncer colorrectalMariana Bianchi - mbianchi@ingenieria.uner.edu.arDirector: Dr. Víctor Hugo CascoCo-Director: Dr. Javier Fernando AdurLugar de realización: Laboratorio de Microscopia Aplicada a Estudios Moleculares y Celulares, Facultad de Ingeniería, Universidad Nacional de Entre RíosFecha de defensa: 9 de febrero de 2018 Determinación sexual y diferenciación gonadal en yacaré overo. Genes involucrados en su regulación y efecto de la exposición a perturbadores endocrinosGuillermina Canesini - gcanesini@fbcb.unl.edu.arDirector: Dr. Jorge Guillermo RamosCo-Directora: Dra. Mónica Muñoz-de-ToroLugar de realización: Instituto de Salud y Ambiente del Litoral, Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas, Universidad Nacional del LitoralFecha de defensa: 22 de marzo de 2018 Desarrollo de estrategias biotecnológicas destinadas a la generación de células eritroides in vitro a partir de células madre/progenitoras hematopoyéticas derivadas de sangre de cordón umbilicalLuisina Anabel Cappellino - lcappellino@fbcb.unl.edu.arDirector: Dr. Claudio César PrietoCo-Directora: Dra. Marina EtcheverrigarayLugar de realización: Laboratorio de Cultivos Celulares, Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas, Universidad Nacional del LitoralFecha de defensa: 4 de diciembre de 2018 Efectos de la semilla de Salvia hispánica L. (chia) dietaria -rica en ácido α linolénico- sobre las alteraciones bioquímicas-metabólicas del músculo cardíaco en un modelo de dislipemia y resistencia insulínica experimentalAgustina Creus - acreus@fbcb.unl.edu.arDirectora: Dra. Yolanda B. de LombardoCo-Directora: Dra. Adriana G. ChiccoLugar de realización: Laboratorio de estudio de enfermedades metabólicas relacionadas con la nutrición. Cátedra de Química Biológica. Dpto. de Ciencias Bilógicas. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Universidad Nacional del LitoralFecha de defensa: 23 de agosto de 2018 Comparando el uso de modelos de distribución de especies y de algoritmos de optimización para priorizar áreas de conservación: usando reptiles y aves como indicadores.Maximiliano Ariel Cristaldi - maximilianocristaldi@yahoo.com.arDirector: Dr. Alejandro R.GiraudoCo-Directora: Dra. Vanesa ArzamendiaLugar de realización: Laboratorio de Biodiversidad y Conservación de Vertebrados. Instituto Nacional de LimnologíaFecha de defensa: 04 de mayo de 2018 Ajustes biológicos de crustáceos de la familia Aeglidae (Decapoda, Anomura) en distintos ambientes de la ArgentinaValeria Paola Diawol - valeriadiawol@hotmail.comDirector: Dr. Federico GiriCo-Director: Dr. Pablo Agustín CollinsLugar de realización: Laboratorio de Macrocrustáceos. Instituto Nacional de Limnología (UNL-CONICET)Fecha de defensa: 29 de mayo de 2018 Efecto de la ganadería sobre ensambles de aves en bosques fluviales de la región del Delta del río ParanáAntonio Esteban Frutos - antoniofrutos.af@gmail.comDirector: Dr. Alejandro Raúl GiraudoCo-Director: Dr. Carlos Ignacio PiñaLugar de realización: Laboratorio de Ecología Animal, Centro de Investigaciones Científicas y Transferencia de Tecnología a la Producción (CONICET – Provincia de Entre Ríos – UADER)Fecha de defensa: 26 de marzo de 2018 Exposición a glifosato y salud reproductiva: evaluación de efectos sobre la fertilidad y el desarrollo tumoral en rataMarlise Luciana Guerrero Schimpf - marliseluciana@gmail.comDirectora: Dra. Jorgelina VarayoudCo-Directora: Dra. María Mercedes MilesiLugar de realización: Instituto de Salud y Ambiente del Litoral (UNL-CONICET), Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas, Universidad Nacional del LitoralFecha de defensa: 17 de Octubre de 2018 Estudio de proteínas involucradas en la biogénesis de la Citocromo c Oxidasa y su papel en el metabolismo energético, el desarrollo vegetal y la respuesta a estrésNatanael Mansilla - nmansilla@fbcb.unl.edu.arDirector: Dr. Daniel GonzálezCo-Directora: Dra. Elina WelchenLugar de realización: Laboratorio de Biología Molecular, Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas, Universidad Nacional del LitoralFecha de defensa: 19 de marzo de 2018 Determinación por métodos multiresiduo de plaguicidas y micotoxinas en alimentos vegetales y lácteos mediante técnicas cromatográficas-espectrométricas de masaNicolás Michlig - nicomichlig@gmail.comDirector: Horacio R. BeldoménicoLugar de realización: Programa de Investigación y Análisis de Residuos y Contaminantes Químicos, Facultad de Ingeniería Química,Universidad Nacional del LitoralFecha de defensa: 3 de diciembre de 2018 Evolución, desarrollo y estructura de las inflorescencias en la subtribu Eleusininae (ChloridoideaePoaceae)Sebastián Elías Muchut - sebamuchut@yahoo.com.arDirector: Abelardo C. VegettiCo-Directora: Renata ReinheimerLugar de realización: Cátedra de Morfología Vegetal, Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad Nacional del LitoralFecha de defensa: 08 de marzo de 2018 Rol trófico de los crustáceos decápodos dulciacuícolas: buscando respuestas desde una perspectiva fisiológicaGabriela Eliana Musin - gabriela.musin@gmail.comDirectora: Dra. Verónica WillinerCo-Director: Dr. Pablo A. CollinsLugar de realización: Laboratorio de Macrocrustáceos, Instituto Nacional de Limnología (UNL-CONICET)Fecha de defensa: 23 de marzo de 2018 Síntesis de 5-amino -1H-1-arilpirazoles con potencial actividad fitosanitaria Silvana Cristina Plem - silvanaplem@gmail.comDirector: Dr. Marcelo C. MurguíaLugar de realización: Laboratorio de Química Aplicada , Cátedra de Química Orgánica, Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas, Universidad Nacional del Litoral y Laboratorio de Medio Ambiente, Instituto de Desarrollo Tecnológico para la Industria Química (UNL- CONICET)Fecha de defensa: 16 de marzo de 2018 Influencia de la variabilidad climática sobre la composición de la comunidad íctica en el tramo medio del río Paraná.Ana Pia Rabuffetti - piarabuffetti@gmail.comDirector: Dr. Luis Alberto EspínolaCo-Director: Ing. Mario Luis AmslerLugar de realización: Laboratorio de Hidroecología, Instituto Nacional de Limnología (UNL-CONICET)Fecha de defensa: 15 de marzo de 2018 Desarrollo de una tecnología de producción de la enzima alfa Galactosidasa humana recombinante para uso terapéuticoMaría Celeste Rodríguez - mcrodriguez@fbcb.unl.edu.arDirector: Dr. Claudio César Prieto,Co-Directora: Dra. Natalia Analía Ceaglio,Lugar de realización: Laboratorio de Cultivos Celulares, Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas, Universidad Nacional del LitoralFecha de defensa: 23 de febrero de 2018 Conservación de la avifauna de Entre Ríos (Argentina): uso de métodos biogeográficos y de optimización para evaluar la efectividad de las áreas protegidas.Juan Andrés Sarquis - juandres.sarquis@gmail.comDirector: Dr. Alejandro Raúl GiraudoCo-Director: Dra. Vanesa ArzamendiaLugar de Realización: Laboratorio de Biogeografía y conservación de tetrápodos terrestres. Instituto Nacional de Limnología (UNL- CONICET)Fecha de defensa: 21 de marzo de 2018. Sistemas de liberación controlada basados en complejos de inclusión ciclodextrina-fármacos incluidos en matrices poliméricasNatalia Soledad Velázquez - nataliasvelazquez@gmail.comDirector: Dr. Julio Alberto LunaCo-Director: Dr. Luciano Nicolás MengattoLugar de realización: Química Fina, Instituto de Desarrollo Tecnológico para la Industria Química (UNL-CONICET) Fecha de defensa: 28 de mayo de 2018

Abstract The adsorption of laccases and ferulic acid on a lignin substrate has been studied using a quartz crystal microbalance with dissipation (QCM-D) and an atomic force microscope (AFM). Two different additional strategies were applied: ferulic acid was added after laccase pretreatment, or coadsorbed together with laccase. The effect of two laccases isolated from Trametes hirsuta and Melanocarpus albomyces was compared on lignin activation. The QCM-D results were also compared against bulk experiments on chemithermomechanical pulp. The two laccases affected the adsorption of ferulic acid differently. Adsorption of T. hirsuta laccase was not observed, while the adsorption of M. albomyces laccase was obvious. However, both laccases still activated lignin and the amount of ferulic acid adsorbed was significantly higher on laccase-activated lignin than on the non-activated one. Rinsing after activation removed some slightly bound laccase from the substrate and decreased the adsorbed amount of subsequently added ferulic acid. Interestingly, only T. hirsuta laccase could catalyse the lasting attachment of polymerised ferulic acid onto lignin. The QCM-D and AFM results correlated with the findings of studies concerning bonding of ferulic acid on chemithermomechanical pulp. Thus, this approach is useful in studying the behaviour of enzymes on lignin substrates.

Le flavocytochrome b₂ « intact » de S. Cerevisiae a été cristallisé en présence de 2-methyl-2,4-pentanediol. Dans la première partie de ce travail (Chapitre I) on s’est posé le problème de savoir si la structure et l’activité de l’enzyme étaient influencées et de quelle façon par la présence de ce solvant et par l’organisation des molécules dans le réseau cristallin. On a mis en évidence que : 1/ la présence de solvant inhibe l’activité catalytique de l’enzyme en solution et provoque une déstabilisation réversible du site flavinique. 2/ L’organisation des molécules dans l’état cristallin se démontre compatible avec la réactivité de l’enzyme en présence de substrats, accepteurs et ligands spécifiques. Dans la deuxième partie de ce travail (Chapitre II, III et IV) on a d’abord essayé de caractériser les vitesses d’échange intramoléculaire d’électrons entre flavine et hème au sein du flavocytochrome b₂ de Hanseluna anomala, puis de caractériser l’action du pyruvate sur les propriétés cinétiques et à l’équilibre du flavocytochrome b₂. On a mis en évidence que : 1/ la réaction de transfert d’électrons de la flavine réduite à l’hème oxydé, à ph 6. 0, est caractérisé par une constante de vitesse de l’ordre de 1800 s-1 à 16°C. Le transfert depuis la flavine semiquinone à l’hème oxydé, probablement appartenant à deux sites actifs adjacents, est environ 10 fois plus lent, à la même température. 2/ La présence du pyruvate provoque un fort déplacement du potentiel rédox (environ 80mV) de chaque couple de la flavine, dans le sens de la stabilisation de la forme semiquinone. 3/ Du point de vue cinétique, l’activité catalytique de l’enzyme est inhibée en présence de pyruvate. Des essais d’interprétation du mécanisme d’inhibition ont été faits par simulation.

Nous avons applique des méthodes immunocytochimiques à l'analyse des domaines membranaires dans deux systèmes différents : la membrane plasmique des cellules du cristallin de bovidé et la membrane des thylakoïdes. Dans le premier système, nous montrons que la mp26, protéine majoritaire des jonctions communicantes des fibres, est aussi présente dans les domaines non fonctionnels de la membrane plasmique des fibres, et absente de la membrane plasmique des cellules épithéliales du cristallin. La membrane des thylakoïdes, quant à elle, comporte deux domaines de compositions bien distinctes: les régions accolées renferment l'essentiel du photosystème II et de son antenne, alors que le photosystème I, l'atpase et, à moindre degré, la ferrédoxine NADP-réductase sont ségréges dans les régions non accolées de la membrane. Le cytochrome b6/f est présent dans les deux domaines. Par ailleurs, nous avons étudié l'accessibilité aux anticorps sur les faces interne et externe de la membrane de divers polypeptides de la membrane des thylakoïdes.

La phosphoglucose isomerase (pgi) est une enzyme catalysant l'isomerisation reversible entre le 6-phosphate-d-glucose et le 6-phosphate-d-fructose. Elle est impliquee dans differentes voies metaboliques telles que la glycolyse, la gluconeogenese, la voie des pentose-phosphate la reaction est supposee impliquer un intermediaire de haute energie (ihe) de type 1,2-cis-enediol et/ou 1,2-cis-enediolate. La synthese de nouveaux et puissants inhibiteurs de la pgi a ete realisee grace a une strategie evitant les longues etapes de protection et de deprotection. Un nouveau synthon est egalement decrit, autorisant la synthese d'autres molecules interessantes des points de vue biochimique et biologique. Les proprietes inhibitrices des produits synthetises ont ete evaluees sur les pgi de levure, de muscle de lapin, de bacillus stearothermophilus et de trypanosoma brucei, un agent pathogene de l'homme. L'acide 5-phosphate-d-arabinonhydroxamique apparait comme etant le plus puissant inhibiteur de pgi rapporte a ce jour. L'ensemble des resultats obtenus suggerent fortement que le mecanisme enzymatique procede par un ihe charge negativement, sans passer par un etat de transition neutre. L'effet de ces inhibiteurs sur la croissance de t. Brucei et l. Mexicana en culture in vitro est rapporte. Malheureusement, les resultats obtenus sont decevants car aucune importante activite antiparasitaire n'a pu etre observee. La structure 3d resolue a 1,9a de la pgi complexee avec un de ses inhibiteurs analogue de l'ihe, le 5-phosphate-d-arabinonate, est decrite. Celle-ci permet de tirer des conclusions sur les details du mecanisme catalytique. Pour la premiere fois, la base catalytique impliquee dans l'abstraction et le transfert du proton au cours de la catalyse a pu etre identifiee. Aussi est-il propose un nouveau mecanisme pour la reaction d'isomerisation.

Ces travaux concernent l'étude cristallographique de complexes ternaires de la Glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase phosphorylante de B. Stearothermophilus. Cette enzyme catalyse la phosphorylation oxydative du Glycéraldéhyde-3-phosphate en présence d'un cofacteur, le NAD, et de phosphate inorganique. Pour fixer les groupements phosphates de ces deux substrats, l'enzyme possède deux sites de reconnaissance anionique, dénommés respectivement Pi et Ps. Cependant, la façon dont ces deux sites contribuent à la fixation des deux groupements phosphate reste encore soumise à controverse et différents modèles ont été proposés. Afin de tester la validité des ces modèles, il semblait essentiel de pouvoir disposer d'évidences structurales directes. Deux mutants ont été étudiés : le mutant C149A, inactif et le mutant C149S, très faiblement actif. Des cristaux de ces deux mutants ont été obtenus dans des conditions originales, exemptes de tout anion. Ces nouvelles conditions de cristallisation ont conduit à de nouveaux empilements cristallins. L'analyse des structures des complexes binaires met en évidence des sites Pi libres de tout anion. Par contre, les sites Ps sont occupés par un anion sulfate issu probablement de la purification. Ceci montre que le site Ps a une meilleure affinité que le site Pi vis-à-vis des anions. Ce résultat a été confirmé par l'analyse des acides aminés impliqués dans la formation des sites Pi et Ps et par le fait que le potentiel électrostatique local est plus important au niveau du site Ps qu'au niveau site Pi. Les complexes ternaires que nous avons obtenus constituent la première structure tridimensionnelle d'une GAPDH en complexe avec son substrat physiologique. L'analyse de ces complexes a permis d'apporter des informations quant aux interactions enzyme-substrat. Nous montrons sans ambigüité que dans les deux complexes obtenus, le groupement phosphate du G3P est localisé dans le site Ps. De même, les facteurs moléculaires responsables de la stéréosélectivité vis-à-vis du D-G3P ont pu être élucidés. Cependant, le débat reste ouvert concernant, d'une part, la contribution de la boucle 205-210 à la catalyse et d'autre part, la conséquence de la formation de la liaison covalente entre l'enzyme et le substrat sur le positionnement des intermédiaires réactionnels dans le site actif.

Dans la cellule, l’ARNt est une molécule-clé de la traduction génétique. Pour être fonctionnel, il doit subir différentes étapes de maturation post-transcriptionnelle, au cours desquelles certains de ses nucléotides sont modifiés chimiquement grâce à des enzymes dites de modification. Mon sujet de thèse a porté sur l’étude biochimique et structurale de deux pyrimidine-C5 méthyltransférases (MTases) des ARNt. Une première partie de mon travail a consisté en la caractérisation biochimique de la cytosine-C5 MTase de S. Cerevisiae, Trm4. L’analyse de son mécanisme catalytique et de son organisation modulaire a ainsi été réalisée. Une seconde partie de mon travail a contribué à l’identification de la m5U54 MTase d’ARNt de P. Abyssi, PabTrmU54, et a conduit à la résolution de sa structure tridimensionnelle en complexe avec la S-adénosyl-L-homocystéine, par cristallographie aux rayons X. L’ensemble de ces résultats a permis d’améliorer nos connaissances sur le mode de reconnaissance spécifique du substrat ARN par les enzymes de modification
In the cell, tRNA is a key molecule of genetic translation. To become functional, it undergoes different steps of post-transcriptional maturation. During this process, some of its nucleosides are chemically modified by modification enzymes. My thesis project focused on the biochemical and structural study of two tRNA C5-pyrimidine methyltransferases (MTases). The first part of my work consisted in the biochemical characterization of the S. Cerevisiae C5-cytosine MTase, Trm4. The analysis of its catalytic mechanism and of its modular organization was then realized. The second part of my work contributed to the identification of the P. Abyssi tRNA m5U54 MTase, PabTrmU54, and led to the resolution of its crystal structure in complex with S-adenosyl-L-homocysteine, by X-ray crystallography. Finally, all these results participated in the improvement of our knowledge about the specific mode of RNA recognition by modification enzymes

C1q initie la voie classique du complement grace a sa region globulaire (gr). C3de correspond a la partie de c3b qui se fixe sur les cellules cibles. Nous avons cristallise ces proteines et enregistre un jeu de donnees a 3,2 a pour la gr, a 3,7 a pour c3de. Des problemes de reproductibilite et de taille des cristaux nous ont empeche de poursuivre l'etude. La subtilisine de bacillus lentus (savinase#t#m) est utilisee comme additif dans les detergents des lessives. Des inhibiteurs competitifs et reversibles (acides boroniques) sont ajoutes dans ces solutions pour eviter que la savinase#t#m ne degrade les autres enzymes presentes. Nous avons resolu la structure de 4 complexes a 2 a puis 1,7 a par remplacement moleculaire a partir d'une nouvelle forme cristalline. Les acides boroniques interagissent avec la proteine par une liaison covalente entre leur atome de bore et l'oxygene gamma de la serine active, et par des contacts hydrophobes entre leur groupement r et la poche de specificite s1. L'acide benzo furane 2 boronique (bf2ba) est l'inhibiteur le plus efficace parmi les 4 etudies. La reactivite entre le bore et la serine active depend de la nature du groupement r, du ph, de la concentration en inhibiteur. A partir du modele savinase#t#m/bf2ba, nous proposons des inhibiteurs potentiellement plus efficaces