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Teses / dissertações sobre o tema "Récepteur de la sérotonine 2A"
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Ayme-Dietrich, Estelle. "Implication de la sérotonine et des récepteurs 5-HT 2A/2B dans le remodelage des valves cardiaques et des bioprothèses valvulaires". Thesis, Strasbourg, 2016. http://www.theses.fr/2016STRAJ099.
Texto completo da fonteResumo:
L’hypothèse d’un lien entre valvulopathies et surexpression du système sérotoninergique fait suite aux lésions valvulaires observées lors de tumeurs carcinoïdes (taux sanguins de 5-HT élevés) et lors de l’utilisation chronique d’agonistes sérotoninergiques 5-HT2 (comme les dérivés de l’ergot de seigle, les fenfluramines). Le dogme actuel repose sur un effet prolifératif de la sérotonine, activant des cellules résidentes valvulaires, mais ne suffit pas à expliquer la dégénérescence de bioprothèses acellulaires. Nos travaux ont permis d’identifier des cellules progénitrices endothéliales (CD34+/CD309+), exprimant les récepteurs 5-HT2A et 5-HT2B, au sein de lésions valvulaires humaines aortiques et mitrales, quelle que soit l’étiologie de leur dégénérescence. Ils ont permis de mettre en évidence un rôle double de la sérotonine dans la dégénérescence valvulaire : 1) la stimulation des récepteurs 5-HT2B contribue à la mobilisation sanguine des progéniteurs CD34+ (recrutés à partir de la moelle osseuse, et migrant dans le tissu valvulaire), 2) le rôle des récepteurs 5-HT2 dans la transdifférenciation des progéniteurs endothéliaux en cellules activées, au sein de la matrice valvulaire. La suite de ce travail permettra de développer 1) un biomarqueur prédictif d’atteinte valvulaire, dans des populations à haut risque, 2) de développer un modèle cellulaire de valvulopathie pour étudier les mécanismes impliqués dans le remodelage valvulaire et leurs voies de signalisation, et 3) de déterminer des cibles thérapeutiques autour du système sérotoninergique, permettant de ralentir la progression des lésions et retarder l’exérèse chirurgicale, seule alternative actuelle.AbstractSeveral studies have established an association between some cardiac valve injuries and overexpression of the serotonergic system. Valve lesions are observed following carcinoid tumours (with high blood levels of 5-HT) and during the chronic use of 5-HT2 serotonergic agonists (ergot derivatives or fenfluramines). The current dogma is based on a mitogenic effect of serotonin, by activating 5-HT2B receptors, leading to resident valvular cells proliferation, but does not explain the degeneration of acellular cardiac bioprosthesis. Our work identified endothelial progenitor cells (CD34 + / CD309 +), expressing 5-HT2A and 5-HT2B receptors, in human aortic and mitral valve lesions, regardless of the etiology of their degeneration. Our work highlights the dual role of serotonin in valvular degeneration: 1) stimulation of the 5-HT2B receptor contributes to blood mobilization of CD34+ progenitors (recruited from the bone marrow, and migrating in the valve tissue), 2) the role of 5-HT2 receptors in the transdifferentiation of endothelial progenitor cells in activated valvular cells. The results of this work could drive to the development of 1) a predictive biomarker of cardiac valve injuries in high-risk populations, 2) a model to study heart valve disease cellular and molecular mechanisms, and 3) identify therapeutic targets around the serotonergic system, to slower the progression of the lesions and delay surgical replacement, the only current alternative
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Butler, Jasmine J. "Action of 5-HT2A receptors on neurotransmitter systems in the mouse brain : application to psychedelics". Electronic Thesis or Diss., Bordeaux, 2025. http://www.theses.fr/2025BORD0026.
Texto completo da fonteResumo:
Le sous-type de récepteur de la sérotonine 2A (5-HT2AR) suscite un grand intérêt suite aux recherches clinique et préclinique sur les psychédéliques sérotoninergiques. Ces composés ont une action agoniste convergente sur le 5-HT2AR et ont des propriétés antidépressives et anxiolytiques. Cet intérêt s’ajoute à des données antérieures montrant que l'antagonisme du récepteur 5-HT2AR, qui fait partie du profil pharmacologique des antipsychotiques atypiques, pourrait avoir des effets bénéfiques dans plusieurs pathologies dont la schizophrénie. Néanmoins, l’impact des 5-HT2AR sur le fonctionnement cérébral, en particulier sur la neurotransmission, est peu connu. Les réseaux cérébraux fonctionnels ont été conceptualisés en corrélant des signaux électriques ou métaboliques entre les régions du cerveau grâce à l'imagerie par résonance magnétique fonctionnelle ou l'encéphalographie. Ces études de neuroimagerie ont montré que les psychédéliques modifient la connectivité de réseaux cérébraux mais elles ne peuvent pas évaluer la neurochimie des systèmes de neurotransmetteurs et leur interaction. Cette thèse aborde l'hypothèse selon laquelle les agonistes 5-HT2AR psychédéliques perturbent l'organisation fonctionnelle des systèmes de neurotransmetteurs à l'échelle du cerveau. Le contenu tissulaire des neurotransmetteurs classiques (glutamate et GABA) et monoaminergiques (sérotonine, dopamine et noradrénaline) et de leurs métabolites a été mesuré dans 28 régions du cerveau de souris après l'administration d'un agoniste et d'un antagoniste 5-HT2AR de haute affinité, le TCB-2 et le MDL100,907, respectivement. Pour promouvoir une organisation cohérente des systèmes de neurotransmetteurs, les souris ont été placées dans un paradigme d'exploration forcée et leur comportement a été filmé avant la quantification neurochimique post-mortem. Un défi important de cette thèse fut la manipulation d'un large nombre de données neurochimiques qui, au-delà de l’aspect quantitatif, permet une approche corrélative incorporant la théorie des graphes pour construire des réseaux de connectivité neurochimique. Cette nouvelle analyse a entraîné le développement d'un code accompagnant le lancement d'une base de données neurochimiques pour rendre accessible ces donnéesThe serotonin 2A receptor subtype (5-HT2AR) has gained interest following a resurgenceof clinical and pre-clinical research on serotonergic psychedelics, compounds withconverging agonist action on the 5-HT2AR. Psychedelics have antidepressant andanxiolytic properties, particularly when paired with therapy. Antagonism at the 5-HT2AR,as part of the pharmacological profile of atypical antipsychotics, may have benefits forschizophrenia and bipolar disorder. Despite their clinical relevance, the known impact of5-HT2ARs on brain function, particularly neurotransmission, is limited. Functional brainnetworks have been conceptualised by correlating electrical or metabolic neuroimagingsignals between brain regions using functional magnetic resonance imaging orencephalography. These studies have shown that psychedelic 5-HT2AR agonists alterthe connectivity of these brain-wide networks. However, neuroimaging is currently unableto assess the neurochemistry of neurotransmitter systems and their interplay. This thesisaddresses the hypothesis that psychedelic 5-HT2AR agonists disrupt the functionalorganization of brain-wide neurotransmitter systems. Tissue content of both classical(glutamate and GABA) and monoaminergic (serotonin, dopamine and noradrenaline)neurotransmitters and their metabolites were measured in 28 regions of the mouse brainfollowing high-affinity 5-HT2AR agonist and antagonist, TCB-2 and MDL100,907respectively. To promote a coherent organisation of neurotransmitter systems mice wereplaced in a forced exploration paradigm and their behaviour was filmed before postmortemneurochemical quantification. A significant challenge of this thesis lies inmanipulating such a large neurochemical dataset that, beyond quantitative modulation,allows for a correlative approach incorporating graph theory to build networks ofneurochemical connectivity. This novel analysis prompted the development of code toaccompany the launch of a neurochemical database, including this dataset, makinganalysis using this new approach accessible.The obtained results demonstrate that a variety of compounds across the 28 brain regionsform distinct neurobiological networks that can be monitored with high-pressure liquidchromatography coupled to electrochemical detection. A striking density ofneurochemical correlations between brain regions in vehicle-treated animals wasobserved, with a distinct regional organisation for dopamine and noradrenaline. The 5-HT2AR agonist TCB-2 (0.3, 3, and 10 mg/kg) as well as the 5-HT2AR antagonist MDL-100,907 (0.2 mg/kg) reduced the number of correlations and disrupted the organisationof correlations for all neurotransmitters across the brain. Some effects of TCB-2, notablyon serotonergic parameters were independent of 5-HT2ARs in several brain regions.Other effects including behavioural parameters such as head twitches or components ofthe exploratory behaviour, as well as the levels of serotonin, dopamine, and noradrenalinein the anterior cingulate cortex were reduced by MDL-100,907 pretreatment. MDL-100,907 alone had very few effects on the quantity of neurochemicals across brainregions. Overall, this thesis highlights that 5-HT2ARs likely play an important role iniiiorganising the coherence of neurotransmitter systems in response to a forced exploratorybehaviour whether or not it is associated with quantitative changes. The thesis offers anew paradigm to address the function of neurotransmitter systems. It enlarges theunderstanding of the mechanism of psychedelic action in the brain including vast brainterritories (sensory, motor, cognitive) with some lateralized effects, and alteredconnectivity of neurotransmission systems
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Lucas, Guillaume. "Etude in vivo des modalités d'intervention de la sérotonine et des récepteurs sérotoninergiques de type 5-HT/2A/2C, 5-HT3 et 5-HT4 dans le contrôle de la transmission dopaminergique nigro-striée et mésoaccumbale chez le rat". Bordeaux 2, 1999. http://www.theses.fr/1999BOR28692.
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Di, Scala Emmanuella. "Implication du récepteur 5-HT₄cardiaque humain dans la fibrillation auriculaire : rôle d'auto-anticorps dirigés contre ce récepteur ?" Tours, 2004. http://www.theses.fr/2004TOUR4042.
Texto completo da fonteResumo:
Nos travaux ont permis de mettre en évidence pour la première fois la présence d'anticorps auto-immuns dirigés contre le récepteur 5-HT4 dans le sérum de patients atteints de fibrillation auriculaire paroxystique idiopathique. Appliqués sur des myocytes atriaux humains, ces auto-anticorps ne modulent pas la production d'AMPc intracellulaire. Ces effets sont similaires à ceux observés avec un anticorps polyclonal de lapin dirigé contre un peptide mimant la seconde boucle extracellulaire du récepteur h5-HT4. Néanmoins, il a été montré au laboratoire que l'anticorps anti-G21V pouvait inhiber le courant calcique ICa2+,L. Ces différents effets suggèrent que l'anti-G21V, soit déclenche une autre cascade de transduction que la voie AMPc, soit agit localement en microdomaines de régulation fonctionnelle autour de ICa2+,LOur studies show for the first time the presence of auto-immune antibodies targeted against the 5-HT4 receptor in the sera of patients suffering from idiopathic paroxystic atrial fibrillation. Neither these human antibodies nor the polyclonal antibody (anti-G21V) raised in rabbit against the second extracellular loop of the 5-HT receptor, had any detectible effect upon the production of intracellular cAMP in enzymatically isolated human atrial myocytes. While previous studies from this laboratory have shown that antiG21V could inhibit activation by 5-HT of the L-type Ca2+ current in human myocytes. The difference between these results might suggest that the polyclonal antibody either activates a signalling pathway that does not involve cAMP, or operates in functional microdomains localised with the Ca2+ channels
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Tournois-Hirzel, Claire. "Récepteur 5-HT 2B murin : voies de transduction et isoformes". Paris 5, 2000. http://www.theses.fr/2000PA05P626.
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Alexandre, Chloé. "Sérotonine et états de vigilance : implications du transporteur et des récepteurs 5-HT1A et 5-HT1B de la sérotonine dans la régulation du sommeil chez la souris". Paris 6, 2007. http://www.theses.fr/2007PA066553.
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Jaffré, Fabrice. "Rôle du récepteur 5-HT2B de la sérotonine dans l'hypertrophie cardiaque pathologique". Paris 6, 2007. http://www.theses.fr/2007PA066617.
Texto completo da fonteResumo:
L’hypertrophie cardiaque pathologique se développe au cours d’un mécanisme plus général dit remodelage myocardique. Ce remodelage est un phénomène complexe qui se met en place au décours de pathologies comme l’infarctus du myocarde, une insuffisance valvulaire, une myocardite due à un agent infectieux ou l’hypertension artérielle. Le rôle potentiel de la sérotonine et de ces récepteurs dans cette pathologie a été jusqu’à présent très peu étudié. Cependant, plusieurs travaux ont démontré la capacité anti-hypertrophique en pathologie humaine d’un antagoniste non-sélectif des récepteurs 5-HT2, la kétansérine, mais son utilisation fut arrêtée au début des années 90 car plusieurs cas d’allongement du QT et de torsades de pointe furent rapportés. Plus tard, différents travaux ont attribué ces effets délétères à une action de la kétansérine sur des canaux ioniques voltage dépendants indépendamment de son effet antagoniste des récepteurs 5-HT2. Un rôle éventuel des récepteurs 5-HT2 dans l’hypertrophie cardiaque a été à nouveau soupçonné par la génération dans notre laboratoire de souris transgéniques pour le récepteur 5-HT2B. En effet, nous avons montré que des souris invalidées pour le 5-HT2B (KO) présentent une cardiomyopathie dilatée sans hypertrophie compensatrice mais aussi que des souris surexprimants le récepteur 5-HT2B dans les cardiomyocytes développent une hypertrophie ventriculaire gauche. Nous nous sommes alors intéressés au rôle éventuel de ce récepteur 5-HT2B dans des modèles d’hypertrophie cardiaque pathologique chez la souris. Dans un premier temps, nous avons montré que le blocage génétique (souris KO) ou pharmacologique du récepteur du 5-HT2B permet de prévenir la survenue d’une hypertrophie induite par la perfusion d’isoprénaline ou d’angiotensine II chez la souris. Les fibroblastes cardiaques jouant un rôle important dans les réponses hypertrophiques, nous avons ensuite montré que le blocage du récepteur 5-HT2B permet de prévenir la libération de cytokines à capacité hypertrophique par le fibroblaste cardiaque adulte, inhibition qui pourrait expliquer l’absence d’hypertrophie cardiaque observée in vivo chez les souris KO ou en présence de l’antagoniste 5-HT2B (SB206553). Par la suite, nous avons mis en évidence que l’absence d’hypertrophie cardiaque beta-adrénergique dépendante chez les souris KO globale est en réalité due à l’absence du récepteur 5-HT2B, non pas sur les cardiomyocytes, mais sur les cellules non-cardiomyocytes puisque des souris exprimant le récepteur 5-HT2B uniquement dans les cardiomyocytes ne développent pas d’hypertrophie suite à une perfusion d’isoprénaline. Par ailleurs, nous avons défini qu’il existe un mécanisme de transinhibition entre les récepteurs 5-HT2B et AT-1 de l’angiotensine II dans les fibroblastes cardiaques. En effet, un antagoniste d’un récepteur est capable de bloquer l’activation de l’autre et inversement. Enfin, nous avons montré que la libération de cytokines induite par la stimulation de ces deux récepteurs est dépendante de la transactivation du récepteur à l’EGF, elle-même sous la dépendance du clivage du HB-EGF par des enzymes de type métalloprotéinases. Nous avons donc montré que le récepteur 5-HT2B joue un rôle majeur dans l’hypertrophie cardiaque pathologique. Ce travail permet de suggérer l’utilisation d’antagoniste sélectif du récepteur 5-HT2B en thérapie humaine pour prévenir ou réduire l’hypertrophie cardiaque pathologique. L’hypertrophie cardiaque pathologique se développe au cours d’un mécanisme plus général dit remodelage myocardique. Ce remodelage est un phénomène complexe qui se met en place au décours de pathologies comme l’infarctus du myocarde, une insuffisance valvulaire, une myocardite due à un agent infectieux ou l’hypertension artérielle. Le rôle potentiel de la sérotonine et de ces récepteurs dans cette pathologie a été jusqu’à présent très peu étudié. Cependant, plusieurs travaux ont démontré la capacité anti-hypertrophique en pathologie humaine d’un antagoniste non-sélectif des récepteurs 5-HT2, la kétansérine, mais son utilisation fut arrêtée au début des années 90 car plusieurs cas d’allongement du QT et de torsades de pointe furent rapportés. Plus tard, différents travaux ont attribué ces effets délétères à une action de la kétansérine sur des canaux ioniques voltage dépendants indépendamment de son effet antagoniste des récepteurs 5-HT2. Un rôle éventuel des récepteurs 5-HT2 dans l’hypertrophie cardiaque a été à nouveau soupçonné par la génération dans notre laboratoire de souris transgéniques pour le récepteur 5-HT2B. En effet, nous avons montré que des souris invalidées pour le 5-HT2B (KO) présentent une cardiomyopathie dilatée sans hypertrophie compensatrice mais aussi que des souris surexprimants le récepteur 5-HT2B dans les cardiomyocytes développent une hypertrophie ventriculaire gauche. Nous nous sommes alors intéressés au rôle éventuel de ce récepteur 5-HT2B dans des modèles d’hypertrophie cardiaque pathologique chez la souris. Dans un premier temps, nous avons montré que le blocage génétique (souris KO) ou pharmacologique du récepteur du 5-HT2B permet de prévenir la survenue d’une hypertrophie induite par la perfusion d’isoprénaline ou d’angiotensine II chez la souris. Les fibroblastes cardiaques jouant un rôle important dans les réponses hypertrophiques, nous avons ensuite montré que le blocage du récepteur 5-HT2B permet de prévenir la libération de cytokines à capacité hypertrophique par le fibroblaste cardiaque adulte, inhibition qui pourrait expliquer l’absence d’hypertrophie cardiaque observée in vivo chez les souris KO ou en présence de l’antagoniste 5-HT2B (SB206553). Par la suite, nous avons mis en évidence que l’absence d’hypertrophie cardiaque beta-adrénergique dépendante chez les souris KO globale est en réalité due à l’absence du récepteur 5-HT2B, non pas sur les cardiomyocytes, mais sur les cellules non-cardiomyocytes puisque des souris exprimant le récepteur 5-HT2B uniquement dans les cardiomyocytes ne développent pas d’hypertrophie suite à une perfusion d’isoprénaline. Par ailleurs, nous avons défini qu’il existe un mécanisme de transinhibition entre les récepteurs 5-HT2B et AT-1 de l’angiotensine II dans les fibroblastes cardiaques. En effet, un antagoniste d’un récepteur est capable de bloquer l’activation de l’autre et inversement. Enfin, nous avons montré que la libération de cytokines induite par la stimulation de ces deux récepteurs est dépendante de la transactivation du récepteur à l’EGF, elle-même sous la dépendance du clivage du HB-EGF par des enzymes de type métalloprotéinases. Nous avons donc montré que le récepteur 5-HT2B joue un rôle majeur dans l’hypertrophie cardiaque pathologique. Ce travail permet de suggérer l’utilisation d’antagoniste sélectif du récepteur 5-HT2B en thérapie humaine pour prévenir ou réduire l’hypertrophie cardiaque pathologique.
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Murat, Samy. "La phosphorylation du récepteur mGlu₂ du glutamate : mécanisme clé de son cross talk fonctionnel avec le récepteur 5-HT2A de la sérotonine". Thesis, Montpellier, 2018. http://www.theses.fr/2018MONTT002/document.
Texto completo da fonteResumo:
Les récepteurs 5-HT2A de la sérotonine et mGlu2 du glutamate suscitent un grand intérêt vu la dérégulation des deux récepteurs observée dans la schizophrénie et leur statut de cibles des antipsychotiques dits atypiques et de nouvelle génération, respectivement. Même si les antipsychotiques atypiques ciblant le récepteur 5-HT2A ont montré une efficacité contre les symptômes positifs, leur effet reste très limité contre les symptômes négatifs et cognitifs, et leurs effets secondaires nombreux. Depuis les années 1990, une nouvelle classe d’antipsychotiques ciblant le système glutamatergique, en particulier le récepteur mGlu2, est en développement. Les tests cliniques n’ont montré leur efficacité que pour les patients n’ayant pas été traités auparavant par des antipsychotiques atypiques. Ceci suggère une interaction fonctionnelle forte entre les récepteurs 5-HT2A et mGlu2 dans le mode d’action de ces deux classes d’antipsychotiques. De plus, plusieurs études ont démontré l’existence d’un hétéromère des deux récepteurs dans le cortex préfrontal qui semble important pour la réponse aux hallucinogènes et aux antipsychotiques ciblant l’un ou l’autre récepteur. Ainsi, étant donné l’impact du profil de phosphorylation adopté par les récepteurs couplés aux protéines G (RCPG) sur leur fonction, j’ai caractérisé au cours de ma thèse l’impact de la co-expression du récepteur 5-HT2A sur le profil de phosphorylation du récepteur mGlu2 en réponse à différentes stimulations. Parmi les 5 sites de phosphorylation identifiés, la phosphorylation de la Ser843 est potentialisée en réponse à la stimulation par un agoniste du récepteur mGlu2 uniquement lorsque le récepteur 5-HT2A est co-exprimé. Ces résultats ont été validés grâce à la génération d’un nouvel anticorps dirigé spécifiquement contre la forme phosphorylée de la Ser843 sur culture cellulaire HEK-293 et in vivo dans le cortex préfrontal de souris, région où les deux récepteurs sont co-exprimés. Des études fonctionnelles ont démontré que la phosphorylation de la Ser843 est nécessaire à la potentialisation de l’activité Gi/o du récepteur mGlu2 en réponse à ses agonistes et constitue un cross-talk fonctionnel entre les deux récepteurs puisque les agonistes du récepteur 5-HT2A stimulent également la phosphorylation de la Ser843 du récepteur mGlu2. Ainsi, mes résultats de thèse ont permis d’identifier la phosphorylation du récepteur mGlu2 sur la Ser843 comme un événement moléculaire clé du cross-talk fonctionnel avec le récepteur 5-HT2A et apporte un élément important dans la compréhension du mode d’action des antipsychotiques atypiques et de nouvelle générationThe serotonin 5-HT2A and glutamate mGlu2 receptors keep on attracting particular attention given their implication in psychosis associated with schizophrenia and in the mechanism of action of atypical antipsychotics and of a new class of antipsychotics, respectively. Though atypical antipsychotics, targeting 5-HT2A receptor, are efficient against positive symptoms, these drugs do not act against negative, cognitive symptoms and display many side effects. Since the 90’s, new classes of antipsychotics triggering glutamatergic system, in particular mGlu2 receptor, have been developed. Their clinical trials have shown efficacy only in patients who have not been previously treated with atypical antipsychotics. This suggests a strong interaction between 5-HT2A and mGlu2 receptors in the mechanism of action of both classes of antipsychotics. Moreover, a large body of evidence indicates the presence, in prefontal cortex, of 5-HT2A/mGlu2 heteromer that is important for the response to hallucinogens and antipsychotics targeting one receptor or the other. Thus, in view of the importance of the phosphorylation profile adopted by G-protein coupled receptor (GPCR) on their activity, I characterized the impact of 5-HT2A receptor co-expression on the phosphorylation profile of mGlu2 receptor in response to various stimulations. Among the five identified phosphorylated residues, the phosphorylation of Ser843 increases upon mGlu2 receptor stimulation only when the 5-HT2A receptor is co-expressed. A new antibody against the phosphorylated form of Ser843 confirmed these results in HEK-293 cells and in mouse prefrontal cortex, area where both receptors are co-expressed. Functional studies demonstrated that Ser843 phosphorylation is necessary to enhance Gi/o signaling of mGlu2 receptor and constitutes a functional crosstalk between 5-HT2A and mGlu2 receptor since 5-HT2A receptor agonists also stimulate Ser843 phosphorylation. Collectively, my thesis findings identify mGlu2 receptor phosphorylation at Ser843 as a key molecular event of the functional crosstalk with 5-HT2A receptor that might be critical to understand the mechanism of action of atypical and potential future antipsychotics treatments
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Quentin, Emily. "Contribution du récepteur 5-HT2B dans la transmission sérotoninergique". Thesis, Paris 6, 2017. http://www.theses.fr/2017PA066628/document.
Texto completo da fonteResumo:
Les neurones sérotoninergiques forment des réseaux complexes avec les autres systèmes de neurotransmission dans le système nerveux central. Le rôle du récepteur 5-HT2B dans ces réseaux est peu connu. L’ablation génétique ou la surexpression virale du récepteur 5-HT2B dans les neurones sérotoninergiques, nous ont permis de mettre en évidence sa participation à l’excitabilité de ces neurones. De fait, le récepteur 5-HT2B est nécessaire à l’action des antidépresseurs et de l'ecstasy qui provoquent une accumulation extracellulaire de sérotonine. Aussi, le récepteur 5-HT2B est capable d’agir tel un modulateur positif, à l’opposé des autorécepteurs 5-HT1A, sur l’activité des neurones sérotoninergiques. Ensuite, l’étude de la distribution du récepteur 5-HT2B et de son interaction avec la protéine de pontage CIPP nous a permis de décrire la distribution subcellulaire du récepteur 5-HT2B dans des cultures primaires de neurones d’hippocampe. La co-expression du récepteur 5-HT2B avec CIPP augmente significativement son adressage somatodendritique dans les synapses excitatrices. Au niveau fonctionnel, CIPP augmente la libération dendritique de calcium dépendante de la stimulation du récepteur 5-HT2B. En synergie avec CIPP, cette stimulation augmente le regroupement des récepteurs glutamatergiques NMDA suggérant un rôle dans la plasticité synaptique pouvant expliquer certains résultats précédentsSerotonergic neurons are organized in complex networks interacting with other neurotransmitter systems in the brain. The 5-HT2B receptor contribution in these networks remains unclear. Using 5-HT2B receptor genetic ablation or a viral overexpression in the serotoninergic neurons, we have demonstrated its participation to the excitability of these neurons. In fact, 5-HT2B receptors are necessary for serotonin accumulation induced by ecstasy and antidepressants effects. Moreover, 5-HT2B receptors activation counteracts the 5-HT1A dependant inhibition on serotonergic neurons activity. Here we propose 5-HT2B receptor as positive modulator of serotonergic neurons. Then, studying 5-HT2B receptors and CIPP scaffold protein interaction allow us to identify the subcellular distribution of the receptor and a functional role of CIPP. Indeed, overexpression of both proteins in primary hippocampal cultures of neurons increases 5-HT2B receptors somatodendritic targeting at excitatory synapses. Thus CIPP increases dendritic calcium release dependent on 5-HT2B receptor stimulation. In synergy with CIPP, this stimulation increases NMDA receptors clustering suggesting a role in synaptic plasticity that could explain some of the previous findings
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Duhr, Fanny. "Voies de signalisation associées au récepteur 5-HT6 et développement neuronal". Thesis, Montpellier, 2015. http://www.theses.fr/2015MONTT042/document.
Texto completo da fonteResumo:
La mise en place des circuits neuronaux est un processus complexe et précisément régulé. Une atteinte de ce processus est à l'origine de diverses pathologies neurodéveloppementales telles que la schizophrénie ou les troubles du spectre autistique, désordres psychiatriques partageant une altération des fonctions cognitives. Le récepteur 6 de la sérotonine (récepteur 5-HT6), notamment connu pour son implication dans la migration neuronale, s'est révélé être une cible thérapeutique de choix dans le traitement des symptômes cognitifs associés à la schizophrénie mais aussi à des pathologies neurodégénératives comme la maladie d'Alzheimer. Cependant la signalisation déclenchée par le récepteur 5-HT6 n'explique pas entièrement son implication dans les processus neurodéveloppementaux. Mon travail de thèse a donc visé à comprendre les mécanismes de signalisation engagés par le récepteur 5-HT6 au cours du développement neuronal. La réalisation d'un crible protéomique a permis de montrer que le récepteur 5-HT6 interagissait avec plusieurs protéines cruciales dans le développement neuronal comme la protéine Cdk5 et sa cible WAVE-1. J'ai ensuite pu démontrer qu'en plus de son rôle dans la migration, le récepteur 5-HT6 contrôlait de façon agoniste-indépendante l'élongation des neurites par un mécanisme impliquant la phosphorylation de son domaine C-terminal par la kinase Cdk5 et l'activation de la RhoGTPase Cdc42. La seconde partie de mon travail a visé à mettre en évidence le rôle du récepteur 5-HT6 dans la formation des épines dendritiques et à comprendre l'implication de la protéine WAVE-1, cible de Cdk5, dans ce processus. Les résultats obtenus au cours de ma thèse apportent de nouveaux éléments quant au contrôle des processus neurodéveloppementaux par le récepteur 5-HT6. Ce récepteur apparaît donc comme une cible thérapeutique de choix dans les atteintes neurodéveloppementales en contribuant au développement des circuits cognitifs en relation avec la physiopathologie des troubles du spectre autistique ou de la schizophrénieBrain circuitry patterning is a complex, highly regulated process. Alteration of this process is affected gives rise to various neurodevelopmental disorders such as schizophrenia or Autism Spectrum Disorders (ASD), which are both characterized by a wide spectrum of deficits. Serotonin 6 receptor (5-HT6 receptor), which is known for its implication in neuronal migration process, has been identified as a key therapeutic target for the treatment of cognitive deficits observed in schizophrenia, but also in neurodegenerative pathologies such as Alzheimer's disease. However, the signalling mechanisms knowned to be activated by the 5-HT6 receptor do not explain its involvement in neurodevelopmental processes. My thesis project therefore aimed at characterizing the signalling pathways engaged by 5-HT6 receptor during neural development. A proteomic approach allowed me to show that the 5-HT6 receptor was interacting with several proteins playing crucial roles in neurodevelopmental processes such as Cdk5 or WAVE-1. I then demonstrated that, besides its role in neuronal migration, the 5-HT6 receptor was also involved in neurite growth through constitutive phosphorylation of 5-HT6 receptor at Ser350 by associated Cdk5, a process leading to an increase in Cdc42 activity. The second part of my work aimed at understanding the role of 5-HT6 receptor in dendritic spines morphogenesis, and the involvement of WAVE-1 and Cdk5 in this process. These results provide new insights into the control of neurodevelopemental processes by 5-HT6 receptor. Thus, 5-HT6 receptor appears to be a key therapeutic target for neurodevelopmental disorders by contributing to the development of cognitive circuitry related to the pathophysiology of ASD or schizophrenia
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Carrel, Damien. "Mécanismes d'adressage des recepteurs 5-HT1A et 5-HT1B de la sérotonine : caractérisation de motifs dans la séquence des récepteurs et identification de protéines partenaires". Paris 6, 2006. http://www.theses.fr/2006PA066346.
Texto completo da fonteResumo:
Les récepteurs 5-HT1A et 5-HT1B de la sérotonine ont une localisation subcellulaire différente dans les neurones. Le récepteur 5-HT1A est situé à la membrane somatodendritique alors que le récepteur 5-HT1B est axonal et présente une localisation intracellulaire dans le soma. Des études antérieures ont montré que les régions impliquées dans leur adressage sont la troisième boucle intracellulaire et l’extrémité C-terminale. J’ai analysé les messages d’adressage contenus dans ces régions par mutagenèse dirigée, et démontré qu'un motif di-leucine de la région C-terminale joue un rôle crucial dans le repliement et l'export des deux récepteurs du RE vers la membrane plasmique. De plus, par criblage double-hybride, j’ai identifié une protéine partenaire du récepteur 5-HT1A, appelée Yif1B, et homologue d'une protéine de levure située dans le RE et l'appareil de Golgi. J'ai montré que Yif1B interagit avec le motif di-leucine C-terminal du récepteur 5 HT1A et qu'elle régule son export du RE.
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Le, Maître Erwann. "Le système nociceptine/récepteur NOP : Implication dans le mode d'action des antidépresseurs, dans la dépression et l'anxiété, et relations avec le système sérotoninergique". Rouen, 2006. http://www.theses.fr/2006ROUES028.
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Le récepteur NOP et son ligand endogène, la nociceptine, sont très abondants dans les régions limbiques du cerveau, régulant l'activité émotionnelle. Nous avons montré que la densité et/ou la fonctionnalité du récepteur NOP sont modifiées à la suite de traitements antidépresseurs, notamment dans le noyau du raphé dorsal, région d'origine des corps cellulaires sérotoninergiques. De plus, nous avons montré que, dans cette région cérébrale, les récepteurs NOP sont localisés sur les neurones à sérotonine. Sur une lignée animale de dépression développée au sein de notre laboratoire (lignée H/Rouen), la densité et/ou la fonctionnalité des récepteurs NOP sont plus élevées chez les animaux "résignés" que chez les animaux "non résignés". En revanche, ces récepteurs présentent une fonctionnalité plus faible dans le noyau accumbens des animaux anxieux. L'ensemble de ces résultats montre l'implication du système nociceptine/récepteur NOP à la fois dans l'anxiété et la dépressionThe NOP receptor and its endogenous agonist nociceptin, were particularly abundant in limbic areas containing monoamines, which are implicated in emotional regulation. We demonstrated that NOP receptors density and functionality were modified after antidepressant treatments, particularly in the dorsal raphe nucleus, region involved in antidepressant action as specific inhibitors of serotonin uptake. Furthermore, we have shown that NOP receptors were located in serotoninergic neurons in this cerebral region. Studies in an animal model of depression developped in our laboratory (H/Rouen mice) , showed that NOP receptors density and functionality were higher in helpness mice, compared to non helpness mice. On the opposite, NOP receptors functionality were weak in anxious compared to non anxious mice. To conclude, these results demonstrate that nociceptin/NOP receptor system is involved in the pathophysiology of depression and anxiety
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Russo, Olivier. "Récepteurs 5-HT4 de la sérotonine : étude de la dimérisation du récepteur ; conception de nouveaux agonistes". Paris 11, 2006. http://www.theses.fr/2006PA114838.
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Les récepteurs 5-HT4 de la sérotonine font partie de la famille des récepteurs couplés aux protéines G. Il a été montré que leur activation facilite les processus de mémorisation et d’apprentissage, et stimule la sécrétion de sAPPa, une protéine possédant des activités neuroprotectrices et neurotrophiques. Les agonistes des récepteurs 5-HT4 représentent donc un traitement potentiel de la maladie d’Alzheimer. Ce travail décrit la synthèse de ligands bivalents, et de deux chimiothèques préparées par chimie sur phase solide. Une évaluation pharmacologique a montré que certains composés étaient des agonistes du récepteur, et un test BRET a montré sans ambiguïté que certains ligands bivalents se fixaient sur un dimère de récepteurs 5-HT4. Certaines molécules ont été évaluées par administration à des souris saines, et sont capables d’induire la sécrétion de sAPPa dans l’hippocampe et le cortex. Ceci conforte l’intérêt des agonistes 5-HT4 dans le traitement de la maladie d’AlzheimerSerotonin receptors are members of the G-protein coupled receptors family, and it has been showed recently that 5-HT4 receptors (5-HT4Rs) activation potentates learning and memory processes and results in the secretion of sAPPa, a soluble protein that has putative neurotrophic and neuroprotective properties. Thus, 5-HT4 agonists represent a potential treatment for Alzheimer’s disease (AD). In this study, we describe the synthesis of specific bivalent ligands, and two chemical libraries generated by solid-phase chemistry. A pharmacological evaluation has shown that several compounds behave as agonists, and a BRET-based test showed that bivalent ligands bind to a 5-HT4R dimer. Some compounds have been evaluated by administration to healthy mice. The results show that the selected compounds can induce sAPPa production in the cortex and the hippocampus after a single injection, comforting the potential of our compounds for the treatment of AD
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Claeysen, Sylvie. "Le récepteur sérotoninergique 5-HT4 et ses variants : du gène à la transduction du signal". Montpellier 2, 1999. http://www.theses.fr/1999MON20123.
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Cette these revele le grand nombre de variants d'epissage du recepteur serotoninergique 5-ht 4 chez la souris, le rat et l'homme, qui tous different au niveau de la longueur et la composition de leur extremite c-terminale, apres un site d'epissage commun. Cette multiplicite d'isoformes est generee par le gene le plus morcele parmi les genes codant pour les recepteurs serotoninergiques couples aux proteines g. Il est localise en 5q31-33 chez l'homme. Une distribution heterogene de l'expression du messager des differentes isoformes a ete observee, certains variants etant specifiquement exprimes au niveau du systeme nerveux central. La queue c-terminale et la boucle i 3 jouent un role important dans le maintien du recepteur 5-ht 4 sous une forme contrainte inactive r. Ce recepteur possede une capacite particuliere a adopter une conformation active r*, en absence de ligand, lorsqu'il est exprime a des densites physiologiques, en systeme heterologue. Cette activite constitutive est remarquablement elevee si on la compare a celle des autres rcpg. Elle est d'autant plus importante que la queue c-terminale est courte et peut etre analysee grace au modele a 2 etats. La constante l qui determine la distribution du recepteur entre la forme r ou la forme r*, est specifique de chaque variant. Cette constante est modifiee pour des recepteurs mutes presentant une augmentation de l'activite constitutive. Des composes decrits comme antagonistes se comportent sur le recepteur 5-ht 4 constitutivement actif, soit comme des agonistes partiels, comme des antagonistes neutres ou comme des agonistes inverses. De telles modifications des proprietes d'un compose, en fonction de l'activite constitutive, sont a prendre en compte lors de leur developpement a des fins therapeutiques. Nous avons observe une dimerisation particulierement importante du recepteur 5-ht 4, qui n'implique pas le domaine c-terminal. Le role fonctionnel de cette dimerisation dans l'activation du recepteur reste a demontrer.
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Joubert, Lara. "Le récepteur 5-HT4 : états conformationnels et protéines d'intéraction". Montpellier 2, 2004. http://www.theses.fr/2004MON20021.
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Graveleau, Christophe. "Caractérisation pharmacologique et moléculaire du récepteur de la sérotonine des cellules de la granulosa humaine". Paris 11, 2000. http://www.theses.fr/2000PA11T060.
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La sérotonine (5-HT) est présente au niveau du fluide folliculaire humain (Bodis J 1992), et stimule la production de progestérone des cellules lutéales de la granulosa humaine ou CLGH (Bodis J 1993) par un mécanisme inconnu. Ce projet m'a été attribué afin decaractériser l'action de 5-HT sur les CLGH. Les résultats du séquençage attestent de la présence au niveau des CLGH de l'intégralité messager spécifique du récepteur h5-HT7. L'analyse par la technique de Northem blo révèle une transcription du récepteur h5-HT7 avec un taux inversement proportionnelle à la durée de culture des CLGH. La présence homogène des trois variants d'épissage, h5-HT7a, h5-HT7b et h5-HT7d a pu être démontrée au niveau des CLGH, en utilisant les techniques de RT PCR et de Southem blot. Le test de l'adénylate cyclase sur préparation membranaire des CLGH indique une stimulation enzymatique obtenue avec les agonistes classés ci-dessous par ordre d'affinité décroissante : 5-CT (pEC5o = 9,49 ± 0,20) > 5-MT (pEC5o = 8,09 ± 0,50 ≥ 5-HT (pEC5o = 7,97 ± 0,18) et une inhibition de la stimulation enzymatique par 5-HT avec la miansérine, la clozapine, l'amoxapine, le butaclamol et la loxapine. Ces résultats, confirmés par le test de l'AMPc directement sur les cellules, démontrent la présence fonctionnelle de récepteurs h5-HT7 au niveau des CLGH. Une régulation négative de 5-HT sur la stimulation par hCG de la production d'AMPc a été démontré au niveau des CLGH. De plus, j'ai démontré une forte concentration (Bmax = 3,41 pmol mg- 1) de sites de liaisons de 5-HT sur la membrane des CLGH, avec un pK1 = 9,49 et un pK0 = 9,48 similaires aux constantes du récepteur hS-HT7. Un synergisme avec l'ANP sur la stimulation par 5-HT de la production de progestérone des CLGH a aussi été observé. En conclusion, cette étude démontre la présence, au niveau des CLGH, des récepteurs h5- HT7a, h5-HT7b eth5-HT7d, qui, une fois activés, déclenchent la stimulation de l'adenylate cyclase, la production d'AMPc et la sécrétion de progestérone par les CLGH en culture. Ce résultat assigne pour la première fois un rôle du récepteur 5-HT7 dans la stéroïdogénèse ovarienneThe serotonin (5-HT) is present in the human follicular fluid (Bodis J 1992) and stimulates the production of progesterone from the human granulosa lutein cells or HGLC (Bodis J 1993) by an unknown mechanism. The project attributed to me consisted of characterizing the action of 5-HT on HGLC. Sequence data revealed the presence by HGLC of the entire mRNA specifie of the h5-HT7 receptor. Northem analysis confirmed a transcription ofh5-HT7 receptor from HGLC, with a rate inversely proportional to the duration of culture. I could also demonstrated the presence of the three splice variants h5-HT7a, h5-HT7b and h5-HT7ct using RT-PCR and Southem blotting. The adenylate cyclase assay on HGLC membrane preparation revealed an enzymatic stimulation obtained with agonists classified below in a rank order of affinity : 5-CT (pECso = 9,49 ± 0,20) > 5-MT (pEC5o = 8,09 ± 0,50);::: 5-HT (pEC50 = 7,97 ± 0,18) and an inhibition of 5-HT-stimulation with mianserin, clozapine, amoxapine, butaclamol and loxapine. This data, confirmed by cAMP assay directly on cells, demonstrates the functional presence of h5-HT7 receptor on hGLC. A negative regulation of 5-HT on hCG stimulated cAMP production could be demonstrated on the HGLC. Further, I demonstrated a high concentration of 5-HT-binding sites (Bmax = 3,41 pmol mg-1) on membrane from hGLC with pK0 = 9,48 and pK1 = 9,49 similar to the constant of the h5-HT7 receptor. A synergism with the ANP on 5-HT-stimulated progesterone production from HGLC was also observed. In conclusion, I have demonstrated within the HGLC, the presence of the h5-HT7 a, h5-HT7b and h5-HT7d , receptors that, once activated, trigger off the adenylate cyclase stimulation, cAMP production and progesterone production by cultured hGLC. This results assign for the first time an ovarian steroidogenic role to the 5- HT7 receptor
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Berthouze, Magali. "Étude structurale et fonctionnelle de la dimérisation du récepteur 5-HT 4 de la sérotonine". Paris 11, 2005. http://www.theses.fr/2005PA114835.
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Serotonin 5-HT4 receptors (5-HT4R) are members of G protein-coupled receptors (GPCRs). Given the recent recognition that many GPCRs can dimerize, the present study was undertaken to determine whether 5-HT4R can form dimers and what are the molecular determinants involved in the dimerization process. Using co-immunoprecipitation and bioluminescence resonance energy transfer, we showed that the human 5-HT4R isoforms can form constitutive homodimers and heterodimers. In addition, we showed heterodimer formation between the 5-HT4(d)R and the beta2-adrenergic receptor. The 5-HT4(d)R dimer is sensible to dithiothreitol (reducing agent). Mutation of two cysteines in the 3 and 4 transmembrane domains, inhibits 5-HT4 receptor dimerization and brings about reticulum endoplasmic retention. Specific 5-HT4 receptor bivalent ligand do not have special affinity or efficacy for the 5-HT4 receptor but are able to stabilize receptor dimerizationLes récepteurs 5-HT4 de la sérotonine sont des récepteurs couplés aux protéines G (RCPG). Les RCPGs peuvent se dimériser, ce qui influence leurs propriétés pharmacologiques. Les récepteurs 5-HT4 étant impliqués dans d'importants processus physiologiques, nous avons étudié leur processus de dimérisation. Nous avons montré par co-immunoprécipitation et Bioluminescence Resonnance Energy Transfert, que les isoformes 5-HT4 s'homodimérisent et s'hétérodimérisent constitutivement, entre elles et avec le récepteur β2-adrénergique. Le dimère de récepteur 5-HT4 est sensible au dithiothréitol (agent réducteur de ponts disulfures). La mutation de deux cystéines localisées dans les domaines transmembranaires 3 et 4, inhibe la dimérisation du récepteur 5-HT4 et entraîne sa rétention dans le réticulum endoplasmique. Des ligands bivalents spécifiques du récepteur 5-HT4 ne présentent pas d'affinité ou d'efficacité particulière pour le récepteur 5-HT4 mais peuvent stabiliser les dimères de récepteurs
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Labasque, Marilyne. "La calmoduline, un partenaire du récepteur 2C de la sérotonine essentiel à la signalisation indépendante des protéines G et dépendante des arrestines du récepteur". Montpellier 1, 2008. http://www.theses.fr/2008MON1T016.
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Le récepteur 2C de la sérotonine (récepteur 5-HT2C) est un récepteur couplé aux protéines G (RCPG) principalement exprimé dans le système nerveux central qui joue un rôle majeur dans les états anxio-dépressifs. Il est également la cible de nombreux composés thérapeutiques incluant la plupart des classes d'antidépresseurs. Le récepteur 5-HT2C interagit avec de nombreuses protéines intracellulaires différentes des protéines G. Celles-ci incluent les arrestines et la calmoduline (CaM). J'ai démontré que l'activation de la cascade des MAP kinases ERK1,2 par le récepteur 5-HT2C était indépendante des protéines G auxquelles il est couplé mais requérait les β-arrestines1,2 et la CaM. L'association physique de la CaM, au domaine C-terminal (motif 1-10 localisé à la région juxtamembranaire) du récepteur 5-HT2C est essentielle à cette signalisation dépendante de la β-arrestine. Mes travaux démontrent également que la CaM favorise le recrutement de la β-arrestine au récepteur 5-HT2C pour former un complexe protéique incluant probablement le récepteur 5-HT2C, un dimère de CaM et la β-arrestine. Le rôle de la CaM dans la signalisation indépendante des protéines G a été établi non seulement dans un système d'expression hétérologue (cellules HEK-293) mais également dans des contextes cellulaires authentiques (neurones corticaux, cellules épithéliales choroïdiennes). La régulation de cette cascade par l'activité constitutive du récepteur et différentes classes d'antidépresseurs (tricycliques, tétracycliques, ISRS, dérivés du mCPP) a enfin été étudiée.
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Lairez, Olivier. "Influence de la sérotonine et de son récepteur 5-HT2A sur le remodelage ventriculaire au cours de l'insuffisance cardiaque". Toulouse 3, 2010. http://thesesups.ups-tlse.fr/1030/.
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L'insuffisance cardiaque est une maladie circulatoire qui implique la mise en jeu de systèmes d'adaptation neuro-hormonaux participant au remodelage ventriculaire et à l'entretien de la dysfonction cardiaque. La sérotonine plasmatique et plaquettaire est augmentée chez des patients en insuffisance cardiaque, ce qui suggère une participation de cette neuro-hormone dans le remodelage ventriculaire. L'objectif de ce travail a été de préciser par une approche in vivo le rôle de la sérotonine et de son récepteur 5-HT2A sur le remodelage ventriculaire, étape déterminante de l'insuffisance cardiaque. Dans une première partie, nous nous sommes intéressés au phénotype cardiaque de souris génétiquement déficientes pour la monoamine oxydase - A (MAO-A, enzyme de dégradation de la sérotonine) qui présentent des taux élevés de sérotonine circulante. Dans cette étude nous démontrons que les souris KO MAO-A soumises à une sténose aortique présentent une augmentation des taux myocardiques de sérotonine et une exacerbation de la réponse hypertrophique sans dysfonction ventriculaire. Cette réponse hypertrophique exacerbée, ainsi que les stigmates histologiques et biologiques moléculaires qui accompagnent le remodelage ventriculaire, sont prévenus par l'administration d'un antagoniste sélectif du récepteur 5-HT2A de la sérotonine. Dans une deuxième partie, nous nous sommes intéressés au rôle du récepteur 5- HT2A dans la phase de transition entre hypertrophie concentrique compensatrice et hypertrophie excentrique avec dysfonction ventriculaire, après sténose aortique, chez des souris sauvages C57/Bl6. Dans cette étude, nous montrons que l'inhibition sélective du récepteur 5-HT2A par le M100907 prévient l'apparition d'une hypertrophie concentrique après sténose aortique mais précipite l'évolution vers l'insuffisance cardiaque. Ces données suggèrent que le récepteur 5-HT2A pourrait exercer un effet protecteur au cours de la surcharge barométrique en favorisant l'hypertrophie compensatrice et en prévenant la dysfonction ventriculaire. En se basant sur les résultats précédents, nous avons développé un essai clinique visant à mesurer la corrélation entre les niveaux circulants de sérotonine et la réponse hypertrophique du myocarde au cours du rétrécissement aortique serré chez l'homme. Cette étude est financée par la région Midi-Pyrénées. Nos travaux démontrent que la sérotonine, via son récepteur 5-HT2A, participe au remodelage ventriculaire au cours de la surcharge barométrique en favorisant l'hypertrophie myocardique compensatriceHeart failure is a systemic disease involving neuro-hormonal adaptive systems that participate to ventricular remodeling and maintain cardiac dysfunction. Plasmatic and platelets serotonin are increased in patients with heart failure suggesting a role during ventricular remodeling. The aim of this work was to specify in vivo the role of serotonin and its receptor 5-HT2A during ventricular remodeling that is a determinant step of heart failure. In a first part, we studied the cardiac phenotype of mice knock-out for monoamine oxidase – A (MAO – A, serotonin degradation enzyme) which display elevated circulating levels of serotonin. With this study, we showed that mice knock-out for MAO – A display elevated intramyocardial serotonins levels with exacerbated hypertrophic response without myocardial dysfunction. This increased hypertrophic response and the histological and molecular signs of ventricular remodeling are prevented by selective 5-HT2A receptor antagonist administration. In a second part, we explored the role of the 5-HT2A receptor during the transition phase between adapted concentric hypertrophic response and non-adapted eccentric hypertrophic response with ventricular dysfunction after aortic banding in C57/Bl6 wild type mice. In this study, we showed that selective 5-HT2A receptor antagonist M100907 administration prevents concentric hypertrophic response after aortic banding but precipitates evolution to heart failure. These results suggest that 5-HT2A receptor could have a protecting effect during pressure overload by favoring adapted hypertrophy and preventing from ventricular dysfunction. From these results, we designed a clinical trial, funded by Conseil Régional Midi-Pyrénées, aim to assess correlation between serotonin circulating levels and myocardial hypertrophic response during aortic stenosis in human. Findings show that the serotonin and its 5-HT2A receptor participate to ventricular remodeling during pressure overload by favoring adapted myocardial hypertrophic response
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Al, Awabdh Sana. "Mécanisme d'adressage dendritique du récepteur 5-HT1A de la sérotonine : identification de Yif1B, protéine d'échafaudage essentielle au recrutement de Rab6, Yip1A et de la tubuline". Paris 6, 2011. http://www.theses.fr/2011PA066198.
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Les autorécepteurs 5-HT1A présents à la membrane somatodendritique des neurones du raphé jouent un rôle clé dans le délai d’action des antidépresseurs inhibiteurs sélectifs de la recapture de la sérotonine (ISRS) administrés en chronique. Ils constituent donc une cible en vue d’accélérer l’efficacité thérapeutique de ces psychotropes. A cette fin, je me suis appliquée à identifier et caractériser les protéines partenaires impliquées dans l’adressage membranaire dendritique du récepteur 5-HT1A et sur lesquelles il devrait être possible d’agir pour moduler son activité. Des études antérieures menées au laboratoire ont montré le rôle de l’extrémité C-terminale cytosolique du récepteur 5-HT1A dans son adressage polarisé et ont permis, par la technique de double hybride chez la levure, l’identification de Yif1B, première protéine interagissant avec cette extrémité. Mon travail de thèse a comporté deux volets : le premier a abouti à la caractérisation de l’interaction entre le récepteur 5-HT1A et sa protéine partenaire Yif1B. En combinant des approches de mutagénèse dirigée et de biochimie : GST-Pull Down et technologie de résonance plasmonique de surface (ou Biacore), j’ai pu mettre en évidence, dans l’extrémité C-terminale du récepteur 5-HT1A, un motif tribasique en interaction directe avec trois résidus aspartate de l’extrémité N-terminale cytosolique de Yif1B. En parallèle, des résultats de l’équipe ont démontré le rôle déterminant de cette protéine Yif1B dans l’adressage dendritique du récepteur 5-HT1A. Pour le deuxième volet de mon travail, je me suis appliquée à tenter d’élucider les mécanismes de ce routage spécifique. Ainsi, par une approche multidisciplinaire mêlant protéomique et biochimie, analyses topologiques sur des cultures primaires de neurones d’hippocampe et vidéomicroscopie sur des neurones vivants, j’ai pu identifier une nouvelle voie d’adressage dendritique dans laquelle Yif1B est la protéine d’échafaudage qui assemble le récepteur 5-HT1A avec Yip1A et Rab6, les autres partenaires du complexe cargo vésiculaire qui transporte le récepteur le long des microtubules dendritiques. L’identification des moteurs moléculaires impliqués dans le transport bidirectionnel du récepteur 5-HT1A dans les dendrites distales constitue le dernier objectif de mon travail de thèse. Les perspectives ouvertes par ce travail concernent d’une part la généralisation éventuelle du rôle de Yif1B dans le trafic intracellulaire d’autres récepteurs, et d’autre part la conception d’un peptide mimétique inhibant spécifiquement l’interaction « récepteur 5-HT1A/Yif1B ». Un tel peptide pourrait, en réalité, être un premier outil pharmacologique pour affecter l’activité du récepteur 5-HT1A via une perturbation de son adressageThe serotoninergic 5-HT1A receptors localized at the plasma membrane of the soma and dendrites of the raphe neurons play a key role in the onset of antidepressant action. The aim of my work was to identify partner proteins involved in the polarized 5-HT1A receptor targeting in neurons. Thus, these proteins could be news targets for innovative therapeutic strategies. Following the discovery in the Lab of Yif1B, the first 5-HT1A receptor partner protein implicated in its dendritic targeting, the first part of my thesis work has resulted in the characterization of the interaction between the 5-HT1A receptor and Yif1B. By combining directed mutagenesis, GST-Pull Down and Surface Plasmon Resonance (or Biacore), I have highlighted the role of a tribasic motif in the C-tail of the 5-HT1A receptor, that is in direct interaction with three aspartic acid residues in the N-tail of Yif1B. In the second part of my work, I have characterized the mechanism of this specific trafficking by a multidisciplinary approach combining proteomic, biochemistry, topological analysis on primary culture of hippocampal neurons and videomicroscopy on live neurons. Thus, I have identified a new dendritic targeting pathway involving Yif1B as a scaffold protein assembling the 5-HT1A receptor with Yip1A and Rab6, two other partners of the vesicular cargo complex transporting the receptor along the dendritic microtubules. Finally, the identification of the molecular motors involved in this addressing process complete the description of this new pathway
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Martin, Pierre-Yves. "Le récepteur 5-HT6, une nouvelle cible pour le traitement des douleurs neuropathiques". Thesis, Université Clermont Auvergne (2017-2020), 2018. http://theses.bu.uca.fr/nondiff/2018CLFAS023_MARTIN.pdf.
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En France, la prévalence des douleurs neuropathiques est estimée à 6,9% de la population adulte. Ces douleurs ont un impact important sur la qualité de vie du patient et sont souvent associées à des comorbidités dépressives, anxieuses, cognitives et des troubles du sommeil. La prise en charge thérapeutique des douleurs neuropathiques demeure un défi médical majeur, l'efficacité des traitements de référence (antidépresseurs (tricycliques et inhibiteurs de la recapture de la sérotonine-noradrénaline) et anti-épileptiques (gabapentine / prégabaline)) étant peu satisfaisante. Malgré le rôle majeur de la sérotonine dans la modulation de la douleur, les inhibiteurs sélectifs de la recapture de la sérotonine (ISRS) sont peu efficaces alors qu’ils exposent à moins d’effets indésirables que les antidépresseurs tricycliques. Le récepteur 5-HT 6 , connu pour ses effets dans les fonctions cognitives, a récemment émergé comme un nouvel acteur de la modulation sérotoninergique de la douleur. Outre son couplage à la protéine Gs, le récepteur 5-HT 6 est physiquement associé à des partenaires protéiques intracellulaires dont mTOR (mammalian Target Of Rapamycin), également impliquée dans la douleur neuropathique et la régulation des fonctions cognitives. Les travaux présentés ont permis de caractériser la localisation sub-cellulaire du récepteur 5-HT 6 au niveau du cil primaire de neurones présents dans les couches superficielles de la corne dorsale de la moelle épinière suggérant l’implication de cette structure dans la modulation de la douleur. L’administration d’agonistes inverses du récepteur 5-HT 6 exerce un effet antiallodynique et prévient les déficits cognitifs associés chez le rat SNL, alors que des antagonistes neutres sont dépourvus d’effets, suggérant une activité constitutive du récepteur et son implication dans l’hypersensibilité douloureuse dans ce modèle de neuropathie. De même, l’administration de rapamycine, un inhibiteur de mTOR, réduit l’allodynie tactile et les déficits cognitifs associés chez les rats SNL. Ils ont également permis de démontrer le couplage entre le récepteur 5-HT 6 et mTOR in vitro et in vivo chez le rat douloureux. Ainsi, à l’aide d’un peptide interférant s’opposant à l’interaction physique du récepteur avec mTOR, injecté par voie intrathécale, une diminution des signes douloureux et des troubles cognitifs a été observée confirmant le rôle délétère de l’interaction entre le récepteur 5-HT 6 spinal et mTOR en condition de douleur neuropathique. L’ensemble de ces résultats expérimentaux permet une meilleure compréhension du rôle du récepteur 5-HT 6 et de son partenaire mTOR dans la douleur chronique et ouvre de nouvelles perspectives dans sa prise en charge avec, notamment, le développement de nouveaux agonistes inverses du récepteur 5-HT 6Neuropathic pains affects 6.9% of the French adult population. They have a significant impact on the quality of life of the patient, and often coexist with depression, anxiety, sleep disturbances and cognitive dysfunction. Chronic neuropathic pain and these co-morbidities are poorly controlled and represent a public health problem. First-line treatments (antidepressants (tricyclic and serotonin-norepinephrine reuptake inhibitors) and anti-epileptic drugs (gabapentin / pregabalin)) are unsatisfactory due to a lack of efficiency. Despite the major role of serotonin in pain modulation, selective serotonin reuptake inhibitors (SSRIs) are poorly effective while they exhibit fewer adverse effects than tricyclic antidepressants. The 5-HT 6 receptor, known for its effects on cognitive functions, has recently emerged as a new target for serotoninergic modulation of pain. In addition to its coupling to the Gs protein, the 5-HT 6 receptor is physically associated with intracellular protein partners including mTOR (mammalian Target Of Rapamycin), also involved in neuropathic pain and in regulation of cognitive functions. In the present work, we characterize the sub-cellular localization of the 5-HT 6 receptor in primary cilium of neurons in dorsal horn spinal cord, suggesting the involvement of primary cilia in pain modulation. The administration of 5-HT 6 receptor inverse agonists exerts an anti- allodynic effect and abolishes co-morbid cognitive deficits in SNL rats, whereas neutral antagonists are devoid of effects, suggesting a constitutive activity of the receptor involved in pain hypersensitivity. Similarly, administration of rapamycin, an mTOR inhibitor, reduces tactile allodynia and co-morbid cognitive deficits in SNL rats. We also demonstrate the interaction between the 5-HT 6 receptor and mTOR in vitro and in vivo in painful rats. Thus, thanks to an interfering peptide inhibiting the physical interaction between 5-HT 6 receptor and mTOR (intrathecally injected), we improve mechanical and thermal allodynia confirming the deleterious role of the spinal 5-HT 6 receptor-mTOR interaction under neuropathic pain condition. Taken together, these results contribute to a better understanding of the role of the 5-HT 6 receptor and its mTOR partner in chronic pain and opens new ways in its management with, in particular, the development of new 5-HT 6 receptor inverse agonists
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Benhassine, Manel. "Caractérisation du mode de régulation du récepteur 2B de la sérotonine (HTR2B) dans le mélanome uvéal". Master's thesis, Université Laval, 2017. http://hdl.handle.net/20.500.11794/30257.
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Tableau d'honneur de la Faculté des études supérieures et postdoctorales, 2017-2018Le mélanome uvéal (MU) est la principale forme de cancer intraoculaire possédant la capacité d’engendrer des métastases au foie et aux poumons des patients atteints, cette maladie est incurable et fatale dans les 8 mois suivant le dépistage des métastases. Grâce à des analyses en profilage génique sur biopuces à ADN, une signature moléculaire de 12 gènes dérégulés permettant de subdiviser les MU en deux classes: à faible (classe 1) ou haut (classe 2) risque d’évoluer vers le stade métastatique a pu être identifiée. Parmi les 4 gènes de la classe 2, la surexpression du gène codant le récepteur 2B de la sérotonine (HTR2B) est l’indice le plus fiable menant à l’identification des patients à risque d’évoluer vers la maladie métastatique. Cette étude a pour but de caractériser le promoteur de ce gène et les mécanismes moléculaires menant à sa surexpression aberrabte dans les lignées métastatiques de MU. Différents segments du promoteur du gène HTR2B ont été clonés dans le plasmide pCATbasic, puis introduits par transfection dans les lignées cellulaires MU. Des analyses d’interférence de méthylation au diméthylsulfate (DMS) et de retard sur gel de polyacrylamide (EMSA) ont été réalisées afin de démontrer la liaison de facteurs de transcription (FTs) au promoteur HTR2B. La transfection des délétants HTR2B/CAT a permis d’identifier des régions régulatrices positives et négatives en amont du promoteur HTR2B. Les analyses EMSA et d’interférence de méthylation au DMS nous ont permis de démontrer la liaison des FTs NFI et RUNX1 au promoteur du gène HTR2B. Ce projet permettra de mieux comprendre les mécanismes moléculaires responsables de la surexpression du gène HTR2B et de définir de nouvelles cibles thérapeutiques qui pourraient permettre le dépistage des patients à risque d’évoluer vers la maladie métastatique.
Uveal melanoma (UM) is the most common type of primary intraocular tumor in the adult population. UM will propagate to the liver as the first metastatic site. Once this organ is invaded, survival becomes a matter of months for the patient as no treatment has proven to be effective. Among the candidates from the class II gene signature, the serotonin receptor-encoding gene (HTR2B) appears to be the most discriminating as its expression strongly increases in the tumors that will progress toward liver metastases. Our study aims at characterizing the molecular mechanisms that lead to this aberrant expression of HTR2B in metastatic UM cell lines. Expression of HTR2B was monitered by microarrays in a variety of UM cell lines. Various segments from the promoter and 5’-flanking sequence of the HTR2B gene were cloned upstream the CAT gene in the plasmid pCATbasic. The genomic areas of interest were 5’end-labeled and used as probes in electrophoretic mobility shift assays (EMSAs). DMS methylation interference footprinting was also used to precisely position the DNA target sites for transcription factors (TFs) that bind the HTR2B regulatory regions. Transfection analyses revealed that the upstream regulatory regions of HTR2B promoter is made up of a combination of alternative positive and negative regulatory elements. Repressive regions also bear a high number of target sites for the TF NFI. EMSA analyses provided evidence that multiple NFI isoforms can interact with the promoter of the HTR2B gene. In addition, the TF RUNX1 was shown by DMS methylation interference footprinting to bind a target site from the HTR2B distal silencer element. This project will help understand better the molecular mechanisms accounting for the abnormal expression of HTR2B in uveal melanoma. In the long term, this study will allow us to identify new potential targets that could help screening patients at high risk of evolving toward the liver metastatic disease.
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Chanrion, Benjamin. "Modulation fonctionnelle de deux cibles des antidépresseurs, le transporteur de la sérotonine et le récepteur 5-HT2c : rôles respectifs de la NO-synthase neuronale et des agonistes inverses". Montpellier 1, 2007. http://www.theses.fr/2007MON1T012.
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Cette thèse, focalisée sur deux cibles sérotinergiques majeures des antidépresseurs, le récepteur 5-HT2c et le transporteur de la sérotonine (SERT), a eu un double objectif : 1) mieux comprendre les mécanismes d'action de différentes classes d'antidépresseurs sur le récepteur 5-HT2c ; 2) identifier de nouveaux partenaires protéiques du SERT grâce à une approche protéomique et caractériser leur rôle sur l'activité du transporteur. J'ai démontré que si de nombreux antidépresseurs, incluant des tricycliques, les dérivés du mCPP et les inhibiteurs spécifiques de la recapture de la sérotonine sont des antagonistes neutres du récepteur 5-HT2c, les tétracycliques, comme la miansérine et la mirtazapine, ont une activité agoniste inverse vis-à-vis des récepteurs 5-HT2c constitutivement actifs. De plus, un traitement chronique aux agonistes inverses, mais pas aux antagonistes neutres, induit une redistribution des récepteurs 5-HT2c vers la membrane plasmique, qui s'accompagne d'une augmentation de leur activité fonctionnelle. Grâce à une approche protéomique, j'ai identifié de nouveaux partenaires du domaine C-terminal du SERT. Ceux-ci incluent la NO-synthase neuronale (nNOS). J'ai démontré que l'interaction physique entre le SERT et la nNOS était à l'origine d'une régulation réciproque de leur activité fonctionnelle : elle inhibe le trafic du SERT vers la membrane plasmique et la recapture de sérotonine ; elle permet l'activation de la nNOS associée au SERT lors de la recapture de sérotonine, révélant un des premiers mécanismes de signalisation impliquant non pas un récepteur, mais un transporteur.
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Collet, Corinne. "Récepteur sérotoninergique 5-HT2B (5-HT2BR) et tissu osseux : études de la lignée mésoblastique murine C1,du modèle murin 5-HT2BR-/- et de la maladie osseuse de Paget". Paris 5, 2007. http://www.theses.fr/2007PA05D040.
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La sérotonine est un neurotransmetteur qui semble jouer un rôle dans le métabolisme osseux. En partant de cette observation, nous avons étudié les récepteurs sérotoninergiques afin de déterminer leurs rôles éventuels dans l'ostéogénèse. En premier, l'importance du récepteur sérotoninergique 5-HT2B (5-HT2BR) au cours de la différenciation ostéogénique a été démontré par l'étude de la lignée mésoblastique C1. L'analyse des souris 5-HT2BR-/- ont permis de confirmer son activité in vivo. Seules les souris femelles âgées 5-HT2BR-/- présentent une ostéopénie qui s'intensifie avec l'âge. Ce phénotype traduit en fait un défaut de recrutement et de prolifération des ostéoblastes 5-HT2BR-/-. Ensuite, en cas de remodelage osseux excessif, des lignées lymphoblastoïdes de patients atteints de la maladie osseuse de Paget présentent une surexpression du 5-HT2BR et des taux élevés d'IL-6 et de son récepteur soluble. En conclusion, le 5-HT2BR apparaît comme un facteur physiologique de régulation de l'homéostasie osseuseThe serotonine is a neurotransmitter which seems to play a role in the osseous metabolism. So, we studied the serotoninergic receptors to determine their possible roles in the osteogenesis. First, the importance of the serotoninergic receptor 5-HT2B (5-HT2BR) during the osteogenic differentiation was demonstrated by the lineage mesoblastic C1 studies. The 5-HT2BR-/- mice analysis allowed to confirm in vivo its activity. Only old female mice 5-HT2BR-/- present an osteopenia which worsen with the age. This phenotype express recruitment and proliferation defects of 5-HT2BR-/- osteoblasts. Then, in case of excessive osseous remodeling, B cell lineages of paget's disease patients present a surexpression of the 5-HT2BR and the high rates of IL-6 and its soluble receptor. In conclusion, the 5-HT2BR appears as a physiological factor of regulation of the osseous homeostasis
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Schaerlinger, Bérénice. "Rôle de la sérotonine dans le développement embryonnaire précoce de Drosophila melanogaster : Etude d'un mutant ponctuel du récepteur 5-HT2Dro". Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2004. https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2004/SCHAERLINGER_Berenice_2004.pdf.
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Outre son rôle de neurotransmetteur au niveau du système nerveux central, la sérotonine est importante pour la régulation de la migration cellulaire chez l'oursin ou la souris. De précédents travaux ont montré le rôle de la sérotonine et du récepteur 5-HT2Dro au cours de la gastrulation chez la drosophile. Le récepteur 5-HT2Dro est exprimé transitoirement au cours du développement de la drosophile. L'étude d'une souche déficiente dans le locus du gène du récepteur 5-HT2Dro a indiqué que la présence de ce récepteur est nécessaire à l'intercalation cellulaire au cours de la gastrulation. Ce travail a permis la mise en évidence et l'étude d'un mutant ponctuel dans le gène du récepteur 5-HT2Dro. Cette mutation gain de fonction est létale et la plupart des embryons homozygotes pour une souche isogénique (M51) meurent pendant le développement précoce. De plus ces embryons présentent un phénotype cuticulaire " fantôme " traduisant un défaut de gastrulation. Nous avons montré que la vitesse de migration des cellules est 4 fois plus élevée dans les embryons mutants par rapport aux embryons sauvages. La présence d'une seconde mutation dans la région 67A2-67D13 sur le chromosome contenant la mutation gain de fonction (l(3R)4830b) semble compenser le phénotype de la souche M51. En effet, les embryons l(3R)4830b présentent un défaut de gastrulation moins important que les embryons M51 et meurent plus tard lors du développement. Cette létalité tardive a permis de mettre en évidence le rôle du récepteur 5-HT2Dro dans la régulation de l'expression tardive de Wingless. En effet, les embryons porteurs de la double mutation présentent un phénotype " A4 sans denticule " associé à une expression ectopique de Wingless dans le 4ème segment abdominal des embryons. Ce travail de thèse démontre le rôle majeur du récepteur 5-HTDro au cours de la gastrulation de drosophile. De plus, il a permis de mettre en évidence un rôle du récepteur 5-HT2Dro sur la régulation tardive de WinglessSerotonin, known as a neurotransmitter in the central nervous system, plays an important role during cell migration in sea urchin, mice as well. Previous studies have shown that serotonin and its 5-HT2Dro receptor are important during germband extension in drosophila. Indeed, 5-HT2Dro receptor is transiently expressed during early embryogenesis. Removal of the 5-HT2Dro locus in a deleted drosophila strain allows us to prove the essential role of serotonin and its receptor for correct cell intercalation during germband extension. This work underlined a new point mutant in the 5-HT2Dro receptor gene. The point mutation is located in the N-terminal domain and confers to the receptor a gain of function. Most of homozygote embryos for the isogenic strain containing point mutant in 5-HT2Dro gene (M51) die during germband extension. M51 embryos display a “ghost” cuticular phenotype accompanied by a gastrulation defect. Indeed, time lapse video experiment demonstrated that cell migration speed is 4 times higher in M51 embryos compared to wild type embryos. However, the presence of a second mutation at 67A2-67D13 locus, on the same chromosome than 5-HT2Dro gain of function mutation in the l(3R)4830b, seems to compensate M51 phenotype. L(3R)4830b embryos present a less severe gastrulation defect and die later during germband retraction. The late lethality of l(3R)4830b embryos allowed us to show a new role for serotonin in the late regulation of Wingless expression. Indeed, an “denticle missing in A4” phenotype observed in homozygote l(3R)4830b embryos is due to an ectopic expression of Wingless specifically in fourth abdominal segment. Thus, this work demonstrates the major role of serotonin and 5-HT2Dro receptor during germband extension. It also showed that serotonin is able to regulate Wingless expression during late stages of drosophila embryogenesis. The signalling pathway involved in that process remains to be elucidated
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Mahé, Cécile. "Récepteur sérotonergique 5-HT7 et induction d'interleukine-6 : étude in vitro sur cellules gliales et in vivo chez le rat". Strasbourg 1, 2005. https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2005/MAHE_Cecile_2005.pdf.
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Le récepteur 5-HT7 est présent dans les astrocytes mais son rôle est inconnu (Shimizu et al. , 1996 ; Hirst et al. , 1997). Dans les astrocytes, la sérotonine entraîne une augmentation de l'expression de l'ARNm de l'IL-6, mais le récepteur médiant cet effet n'est pas encore identifié (Pousset et al. , 1996). Le récepteur 5-HT7 serait-il impliqué dans cet effet ?Nous avons tout d'abord identifié plusieurs lignées de cellules gliales humaines, des glioblastomes (U-373 MG, U-138 MG, U-87 MG, DBTRG-05MG, T98G, H4, CCF-STTG1 et Hs 683) et une lignée de microglies nommée MC-3 exprimant de façon fonctionnelle le récepteur 5-HT7, par des études pharmacologiques de mesure de l'AMPc confirmées par des expériences de Western-blot et de RT-PCR. Ces cellules constituent les premiers modèles humains d'étude de ce récepteur dans les cellules gliales. Dans les glioblastomes humains (U-373MG, DBTRG-05MG, T98G et H4), l'activation du récepteur 5-HT7 entraîne une stimulation de l'expression de l'ARNm, visualisée par des analyses de PCR en temps réel, et de la libération de l'IL-6, mesurée à l'aide d'un ELISA spécifique. Par contre, dans les glioblastomes U-138MG et U-87MG ainsi que la lignée de microglies MC-3, ce récepteur activé induit seulement une augmentation de l'expression de l'ARNm de l'IL-6. Cet effet est dépendant du niveau d'expression et de fonctionnalité du récepteur 5-HT7. Les lignées cellulaires tumorales ou immortalisées peuvent constituer de bons modèles dans un premier temps, mais leur phénotype peut être modifié par diverses mutations. Il est donc nécessaire de revenir à des modèles plus proches de la situation physiologique pour valider les résultats obtenus sur lignées cellulaires. Dans un premier temps, nous avons montré que les astrocytes en culture primaires issus du cortex frontal et de l'hippocampe de rat expriment de façon fonctionnelle le récepteur 5-HT7, mais son expression est très faible et son activation n'a pas d'effet sur la synthèse de l'IL-6. Néanmoins, in vivo, chez le rat, des études préliminaires ont suggéré que l'activation du récepteur 5-HT7 entraîne une augmentation du taux plasmatique de l'IL-6. Ainsi, la découverte d'un lien de cause à effet entre stimulation du récepteur 5-HT7 et induction d'IL-6 suggère que ce récepteur pourrait devenir une cible thérapeutique dans des domaines aussi variés que l'inflammation, l'immunologie, la cancérologie où l'IL-6 joue un rôle majeur, et peut-être dans d'autres comme la psychiatrie où des dérèglements de l'IL-6 ont été signalésThe 5-HT7 receptor is known to be present in astrocytes but its role remains unknown (Shimizu et al. , 1996 ; Hirst et al. , 1997). The action of serotonin leads to an increase of IL-6 mRNA expression in astrocytes, but the receptor responsible for this effect is unknown (Pousset et al. , 1996). Is the 5-HT7 receptor implicated in this effect?We first identified several glial cell lines, human glioblastoma (U-373 MG, U-138 MG, U-87 MG, DBTRG-05MG, T98G, H4, CCF-STTG1 et Hs 683) and a human microglial cell lines, named MC-3, which expressed functionally the 5-HT7 receptor, by pharmacological studies of cAMP accumulation assays confirmed by Western-blot and RT-PCR analysis. These cells are the first human models to study the 5-HT7 receptor in glial cells. Concerning the glioblastoma cells (U-373MG, DBTRG-05MG, T98G et H4), the 5-HT7 receptor activation leads to an increase IL-6 mRNA expression, visualized by Real-Time PCR, and IL-6 release, measured by a specific ELISA. In U-138MG et U-87MG glioblastoma cells as well as in the microglial cell line MC-3, 5-HT7 receptor activation leads only to an increase in IL-6 mRNA expression. This effect depends on the level of functional expression of the 5-HT7 receptor. These cell lines can be considered as good models but because of their tumoral or immortalized nature, they could contain a number of mutations. Thus it would be nice to confirm the results obtained with cell lines on more physiological models. We first showed that primary rat astrocytes (frontocortex and hippocampus) expressed the 5-HT7 receptor but its expression is relatively low. As a consequence, 5-HT7 receptor activation failed to increase IL-6 mRNA expression in these cells. Nevertheless, preliminary in vivo studies in rats suggested that 5-HT7 receptor activation leads to an increase in plasmatic levels of IL-6. To conclude, the discovery of a link between 5-HT7 activation and induction of IL-6 suggests that this receptor could have therapeutical potential in inflammation, immunology, and oncology, where IL-6 plays a prominent role and maybe in others areas like psychiatric disorders where IL-6 dysregulations have been described
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Gomez, Castro Ferran. "La signalisation du récepteur d’adénosine 2A comme mécanisme clé de la stabilisation des synapses GABAergiques nouvellement formées". Thesis, Paris 6, 2017. http://www.theses.fr/2017PA066431.
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Dans le cerveau adulte, la signalisation liée à l’adénosine facilite ou inhibe la libération vésiculaire de neurotransmetteurs suite à l’activation des récepteurs de l’adénosine de type 2A ou 1 (A2AR ou A1R), respectivement. Cependant, son rôle dans le développement est mal connu. Au cours de ma thèse, j’ai étudié le rôle de la signalisation adénosine dans la synaptogenèse GABAergiques de l’hippocampe. Nous avons mis en évidence (i) une sécrétion activité-dépendante accrue d’adénosine et d’ATP pendant la période de synaptogenèse, (ii) un pic d’expression de l’enzyme limitant la formation de l’adénosine à partir de l’ATP extracellulaire, l’ecto-5’-nucleotidase, aux synapses pendant cette période critique, et (iii) un pic d’expression péri/post- synaptique du A2AR concomitant de la période de synaptogenèse. Cette expression développementale des molécules clés de la signalisation adénosine dépendante du A2AR corrélait avec un rôle de ce récepteur dans la stabilisation des synapses GABAergiques naissantes, une régulation restreinte à la période de synaptogenèse. De plus, la suppression de A2AR par une approche shRNA dans des neurones isolés conduisait à une perte de synapses GABAergiques équivalente à celle observée après un blocage pharmacologique de l’activité du A2AR, signifiant que la stabilisation synaptique médiée par le A2AR est un processus « cellule autonome » indépendant de l’activité du réseau neuronal et qu’elle requiert l’activation du A2AR dans la cellule post-synaptique.L’ATP et l’adénosine sont secrétés par la glie et les neurones ; cependant, nous avons montré in vitro que la libération neuronale activité-dépendante suffit à stabiliser les synapses GABAergiques naissantes. En utilisant la vidéomicroscopie sur cellules vivantes, nous avons montré que la signalisation adénosine stabilise les synapses actives. Puis, nous avons caractérisé le mécanisme moléculaire sous-jacent. Nous rapportons la contribution de la cascade adénylate cyclase/adénosine monophosphate cyclique/protéine kinase A et nous avons identifié une ciblé clé, la géphrine, la molécule d’ancrage postsynaptique des récepteurs GABAA. Enfin, nous avons mis en évidence que la stabilisation de l’élément présynaptique requiert probablement le complexe trans-synaptique Slitrk3-PTPd.Puisque le GABA exerce une fonction similaire au cours du développement et que le GABA et l’adénosine sont co-libérés à certaines synapses, j’ai étudié l’interaction entre ces deux voies de signalisation. Mes résultats favorisent l’hypothèse que la signalisation GABA, en activant la calcium-calmoduline, converge vers la signalisation adénosine en potentiant les adenylates cyclases sensibles au calcium. Mon travail m’a permis de proposer que, au cours d’une période clé du développement, les A2ARs postsynaptiques agissent comme des senseurs de l’activité des terminaisons présynaptiques GABAergiques pour stabiliser les synapses actives. En absence d’activité et donc de libération d’adénosine/ATP, les synapses seraient éliminéesIn the adult brain, adenosine signaling facilitates or inhibits neurotransmitter vesicular release mainly through activation of type 2A or 1 adenosine receptors (A2AR or A1R), respectively. However, its role in development remains to be elucidated. During my PhD, I addressed the role of A2AR-mediated signalling in GABAergic synaptogenesis in the hippocampus. We found (i) a larger activity-dependent release of ATP and adenosine during the period of synaptogenesis in the hippocampus, (ii) a peak of expression of the ecto-5’-nucleotidase, the rate-limiting enzyme for the formation of adenosine from extracellular ATP in synapses during this critical period, and (iii) a peak of peri/post-synaptic expression of A2AR concomitant with the period of synaptogenesis. This developmental expression of the key molecules of the adenosine A2AR signalling pathway correlated with a role of A2AR in the stabilization of nascent GABA synapses, a regulation restricted to the period of synaptogenesis. Furthermore, suppressing A2AR with a shRNA approach in isolated neurons led to a loss of synapses equivalent to that seen upon A2AR activity blockade, reporting that the A2AR-mediated synapse stabilization is a cell autonomous process that requires A2AR activation in the postsynaptic cell. ATP/adenosine can be secreted by both glia and neurons; however, we found that activity-dependent release of neuronal adenosine is sufficient to stabilize newly formed GABA synapses in vitro. Using live cell imaging, we showed adenosine signalling stabilizes active synapses. We then characterized the molecular mechanism downstream postsynaptic A2AR. We report the contribution of adenylyl cyclase/cyclic adenosine monophosphate/protein kinase A signalling cascade and we identified a key target, the postsynaptic scaffolding molecule gephyrin. We further showed the A2AR-mediated stabilization of the presynaptic compartment most probably requires the trans-synaptic Slitrk3-PTPd complex. Since GABA exerts a similar function during development and GABA and adenosine are co-released at some synapses, I further investigated the interplay between these two pathways. My results support the hypothesis that GABA signalling converge onto the adenosine signalling pathway by potentiating calcium-sensitive adenylyl cyclases through the activation of calmodulin.Altogether these results let us propose that, during a key developmental period, postsynaptic A2ARs act as sensors of the activity of GABAergic presynaptic terminals to stabilize active nascent GABAergic synapses. In absence of activity and therefore secretion of adenosine/ATP, synapses will be eliminated
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Amar, Elodie. "L’internalisation du récepteur 5-HT1A dans les neurones centraux : Développement de modèles cellulaires pour l’étude des mécanismes sous-jacents et des corrélats fonctionnels". Thesis, Paris 5, 2012. http://www.theses.fr/2012PA05P625/document.
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La sérotonine (5-HT) joue un rôle majeur dans la modulation de nombreuses fonctions physiologiques et des déficits de la neurotransmission sérotoninergique sont associés à la dépression. Les récepteurs de type 5-HT1A sont impliqués dans la régulation de l’humeur, et le délai d’action thérapeutique d’un traitement par antidépresseur inhibiteur sélectif de la recapture de la 5-HT (ISRS) serait en relation avec leur désensibilisation qui se développe progressivement dans les neurones du raphé au cours du traitement. De fait, il a été rapporté que l’accélération de la désensibilisation des (auto)récepteurs 5-HT1A dans le raphé induit une réduction du délai d’action des antidépresseurs ISRS. Des données indirectes suggèrent que l’internalisation des récepteurs 5-HT1A pourrait être impliquée dans leur désensibilisation. L’objectif de ma thèse a été d’étudier le lien entre l’internalisation des récepteurs 5-HT1A et leur désensibilisation. A cette fin, j’ai développé des outils permettant d’étudier les mécanismes d’internalisation des récepteurs 5-HT1A dans des lignées cellulaires puis dans des neurones de raphé ou d’hippocampe en culture primaire. Nous avons produit un vecteur pour l’expression du récepteur 5-HT1A étiqueté avec un site de liaison de la bungarotoxine (BBS-5-HT1A), et le suivi de son trafic en microscopie confocale et vidéomicroscopie dans les lignées cellulaires et les neurones. Notre construction a permis de montrer que le récepteur BBS-5-HT1A est internalisé constitutivement dans la lignée LLC-PK1 et dans les neurones de raphé et d’hippocampe. Cette internalisation implique la voie clathrine-dépendante, et est suivie du recyclage de la plus grande partie du récepteur internalisé à la membrane plasmique. Enfin, nous avons également montré que, suite à un traitement chronique avec le 8-OH-DPAT, le récepteur 5-HT1A présente aussi une internalisation agoniste-dépendante spécifiquement dans les neurones sérotoninergiques du raphé. De fait, ce phénomène n’intervient ni dans les neurones non-sérotoninergiques du raphé ni dans les neurones de l’hippocampe. Ces résultats suggèrent que l’internalisation du récepteur 5-HT1A, qui est induite par sa stimulation prolongée, dépend du phénotype du neurone qui l’exprime et met en jeu des mécanismes intracellulaires spécifiques. Le parallèle entre les différences régionales (raphé versus hippocampe) de l’internalisation agoniste-dépendante du récepteur 5-HT1A et celles qui concernent sa désensibilisation fonctionnelle sous traitement ISRS au long cours laisse à penser que l’endocytose du récepteur 5-HT1A pourrait jouer un rôle majeur dans sa propre régulation et dans celle de la neurotransmission sérotoninergique centralePas de résumé en anglais
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Gavarini, Sophie. "Protéines à domaines PDZ et récepteurs 5-HT2 de la sérotonine : spécificité d'interaction et rôle dans la signalisation". Montpellier 1, 2006. http://www.theses.fr/2006MON1T008.
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Les récepteurs 5-HT2 de la sérotonine sont des récepteurs couplés aux protéines G (RCPG) de séquences proches, activant des voies de signalisation communes, mais aussi des voies plus spécifiques. Les récepteurs 5-HT2 expriment au niveau de leur extrémité C-terminale un motif de liaison des domaines d'interaction protéine-protéine PDZ (PSD-95 / Dlg / ZO-1). Grâce à une approche protéomique combinant des expériences de chromatographies d'affinité et la spectrométrie de masse, nous avons démontré que les récepteurs 5-HT2A et 5-HT2C recrutaient des ensemble de protéines à domaines PDZ spécifiques. La spécificité de ces interactions implique des résidus du motif ligand PDZ canonique, mais aussi des résidus localisés en amont. Dans des systèmes hétérologues, nous avons montré que les protéines à domaines PDZ exerçaient des effets différentiels sur la désensibilisation de la réponse calcique induite par le récepteur 5-HT2C et que ceux-ci étaient corrélés à leur effet sur l'internalisation du récepteur. Enfin, les protéines à domaines PDZ exercent un effet global inhibiteur sur la désensibilisation du récepteur 5-HT2C dans les neurones.
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Shen, Shuren. "La mélatonine : étude du récepteur et de l' enzyme de biosynthèse sérotonine-N-acétyltransférase por la recherche de nouvelles molécules à potentialité thérapeutique". Paris 5, 1995. http://www.theses.fr/1995PA05P631.
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Gallais-Barré, Catherine. "Conception d' outils moléculaires pour la caractérisation du récepteur 5-HT3 : synthèses de sondes fluorescentes et/ou irréversibles". Paris 5, 1995. http://www.theses.fr/1995PA05P629.
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Malleret, Gaël. "Facilitation de la mémoire spatiale chez des souris génétiquement modifiées : rôle de récepteur sérotonine 1B et de la phosphatase calcineurine". Bordeaux 1, 2000. http://www.theses.fr/2000BOR10610.
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Berhault, Yohann. "Conception, synthèse et évaluation de ligands pour l’imagerie par tomographie d’émission monophotonique (TEMP) du récepteur 5-HT7". Caen, 2016. http://www.theses.fr/2016CAEN2042.
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Le récepteur 5-HT7 est le dernier sous-type identifié des récepteurs sérotoninergiques. Il a été établi qu’il possède un rôle fonctionnel important dans les processus d’apprentissage et de mémorisation. Il est également mis en cause dans des troubles psychiatriques et neurologiques comme la schizophrénie et l’épilepsie. Dans le but d’accroitre les connaissances sur les différents rôles du 5-HT7R, le développement de radioligands pour ce récepteur présente un potentiel intérêt. Prenant en compte les travaux publiés dans la littérature ainsi que ceux réalisés ces dernières années au laboratoire, nous avons voulu synthétiser des radioligands pour l’imagerie par tomographie d’émission monophotonique (TEMP) du 5-HT7R en série indazole. Pour atteindre cet objectif, deux méthodologies de fonctionnalisation sélective du noyau indazole ont été développées. La 1ère méthode est une métallation sélective de iodoindazoles qui utilise le TMPMgCl. LiCl comme base et permet l’insertion efficace de chaines latérales soufrés sur la position C-3 des iodoindazoles. La seconde méthodologie développée est une iodation sélective de la position ortho des 1-phényl-1H-indazoles via activation de la liaison CH. Avec ces deux méthodologies, une voie de synthèse a été établie pour obtenir les structures désirées. Un total de 17 composés a été obtenu. Parmi eux, deux ligands possèdent une affinité vis-à-vis du récepteur de l’ordre de 10 nM. Ces deux molécules sont à l’étude comme radiotraceurs TEMP du 5HT7RThe human 5-HT7 receptor is the latest 5-HT receptor subtype identified. Its implication in important functional roles such as learning and memory processes has been established. It is also involved in psychiatric and neurological disorders, such as epilepsy and schizophrenia. In order to increase the knowledge about the different roles of 5-HT7R, the radioligand development for this receptor has a potential interest. Taking into account the scientific literature and preliminary works performed in our laboratory, we have synthetized radioligands for Single Photon Emission Computed Tomography (SPECT) studies of 5-HT7R in the indazole series. To reach this goal, two methodologies of selective functionalisation of the indazole ring have been developed. The first method is a selective metallation of iodoindazoles at C-3 position using TMPMgCl. LiCl as base allowing an efficient insertion of thioalkyl chains. The second method is a selective iodination of 1-phenyl-1H-indazoles at ortho position via a C-H activation reaction. With these two new methods, a synthetic route has been established to obtain the desired compounds. A total of 17 compounds have been obtained. Two of them have an affinity for the 5-HT7R around 10. 0 nM. These two molecules are currently under investigation as 5HT7R SPECT radiotracers
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Pichon, Xavier. "Etude de l'implication des protéines à domaines PDZ partenaires du récepteur 5-HT2A dans la résistance à la sérotonine et l'efficacité limitée des ISRS dans le traitement des douleurs neuropathiques : approches comportementales et cellulaires chez le rat diabétique". Clermont-Ferrand 1, 2007. http://www.theses.fr/2007CLF1PP06.
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L'absence de solutions thérapeutiques satisfaisantes pour traiter les douleurs neuropathiques et notamment, la quasi-innefficacité des antidépresseurs inhibiteurs sélectifs de la recapture de la sérotonine (ISRS), a motivé ce travail. La physiopathologie des douleurs neuropathiques, le rôle joué par la sérotonine (5-HT) dans le contrôle de l'information douloureuse et l'implication des protéines à domaines PDZ dans ce contexte douloureux ont été rappelés dans la revue bibliographique. L'importance de la mise en jeu du récepteur 5-HT2A dans le mécanisme d'action analgésique des antidépresseurs a été soulignée, et l'hypothèse selon laquelle une altération fonctionnelle de ce récepteur contribuerait à l'étiologie de la douleur neuropathique diabétique et à l'efficacité limitée des ISRS dans ce contexte, proposée. Dans ce travail il a été mis en évidence une diminution de la sensibilité à la sérotonine et à l'α-méthyl-5-HT (agoniste du récepteur 5-HT2A) dans un modèle de neuropathie diabétique induite par la streptozocine chez le rat. La mesure de l'expression des récepteurs 5-HT2A spinaux, (western-blot, RT-PCR, immunohistochimie) a montré une diminution importante de la quantité de ces récepteurs, chez le rat diabétique hyperalgique. Cette diminution de récepteurs peut contribuer, en partie au moins, à l'hyperalgie mécanique observée dans ce contexte douloureux mais ne suffit pas à expliquer l'absence d'effet de l'agoniste 5-HT2A. 5 protéines PDZ partenaires du récepteur 5-HT2A ont été identifiées dans la mœlle épinière de rat. Une augmentation des protéines PSD-95 et SAP97 a été mise en évidence chez le rat diabétique hyperalgique. L'interruption de l'interaction récepteur 5-HT2A / protéines PDZ par un peptide mimant l'extrémité C-terminale du récepteur 5-HT2A (2A-SCV-Ct) fusionné domaine de transduction de la protéine Tat du VIH, a révélé l'effet anti-hyperalgique de la 5-HT chez le rat diabétique. Ainsi, il a été montré que la baisse quantitative en récepteurs 5-HT2A et l'augmentation de 2 protéines PDZ, sont 2 mécanismes impliqués dans les anomalies de la nociception chez le rat diabétique. Les effets stimulants du peptide mimétique sur la signalisation calcique induite par la 5-HT via l'activation des récepteurs 5-HT2A ont été démontrés in vitro. Enfin, le peptide TAT-5-HT2ASCV-Ct potentialise anti-hyperalgique de la fluoxétine (administration répétée) et révèle l'activité antinociceptive de l'association fluoxétine + antagoniste 5-HT1A sur la douleur neuropathique. Alors que le peptide TAT-5-HT2ASCV est dépourvu d'effet sur la nociception chez le rat sain, la triple association fluoxétine (administration unique ou répétée) + antagoniste 5-HT1A + peptide TAT-5-HT2A-SCV-Ct produit une analgésie de très grande amplitude. Il a été conclu que la neuropathie diabétique entraîne une augmentation de la quantité de protéines PSD-95 et SAP97 associées au récepteurs 5-HT2A dans la mœlle épinière pouvant conduire à une désorganisation du réseau de protéines PDZ interagissant avec le récepteur 5-HT2A apportant un substratum moléculaire à l'hyposensibilité des récepteurs 5-HT2A résiduels, et à l'efficacité limitée des ISRS dans la neuropathie diabétique douloureuse. La comparaison des résultats obtenus dans les modèles de douleur neuropathique et de douleur inflammatoire montre un avantage des effets du peptide mimétique en termes d'efficacité et de puissance analgésique sur la douleur neuropathique. L'ensemble de ces travaux devraient contribuer à une meilleure compréhension de la physiopathologie des douleurs neuropathiques et inflammatoires et des mécanismes sous-tendant la moindre sensibilité aux ISRS dans différents contextes douloureux, afin d'améliorer les thérapeutiques existantes et de proposer des stratégies innovantes.
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Colas, Alexandre. "Implication des signaux FGF et de Mix. 1/2 dans la spécification du pronéphros chez le Xénope". Paris 6, 2007. http://www.theses.fr/2007PA066409.
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Chez le Xénope, l’engagement des cellules mésodermiques vers un destin musculaire, sanguin ou rénal, à lieu pendant la gastrulation. Ce processus repose essentiellement sur l’exposition de ces cellules à des combinatoires de signaux (Wnt, BMP, Nodal/Activine, FGF, Acide rétinoïque) dont la nature et l’intensité, vont sceller leur destin. La première partie de mon travail de thèse a porté sur la localisation des précurseurs du rein embryonnaire (pronéphros) au sein du feuillet mésodermique au stade jeune gastrula. La deuxième partie de ce travail, s’est focalisée sur l’étude de l’influence des signaux FGF dans l’engagement des cellules mésodermiques vers un destin rénal. J’ai montré que les précurseurs du pronéphros sont exposés aux signaux FGF pendant la gastrulation, mais que ceux-ci doivent être soustraits à leur influence pendant la deuxième moitié de la gastrulation afin de s’engager vers un destin rénal. J’ai également montré que Mix. 1/2, sont impliqués dans ce processus en régulant négativement l’expression des ligands FGF4 et FGF8In Xenopus, mesodermal cell commitment toward a muscle, blood, or kidney fate takes place during gastrulation. This process relies mostly on these cells to be exposed to a combinatorial of signals (Wnt, BMP, Nodal/Activin, FGF, Retinoic acid). The nature and the intensity of this combinatorial of signals will seal their destiny. The first part of my PhD work aimed at localizing precisely embryonic kidney (pronephros) cells precursors inside the mesodermal germ layer at early gastrula stage. The second part of this work, focused on studying the role of FGF signals on pronephric cells specification during gastrulation. My results show that, pronephric precursors cells are exposed to FGF signals during gastrulation, but have to be removed from FGF influence during the second part of gastrulation. I also show that Mix. 1/2 are involved in this process by regulating negatively FGF4 and FGF8 expression
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Louis, Caroline. "Rôle dynamique de la sérotonine et de la dopamine cérébrales chez le rat soumis à des situations d'anxiété : étude par microdialyse in vivo". Paris 11, 2001. http://www.theses.fr/2001PA11T007.
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La sérotonine (5-HT) cérébrale semble être impliquée dans les comportements anxieux et la dopamine (DA) dans les réponses au stress. La technique de microdialyse intracérébrale a été utilisée afin de suivre les variations des taux extracellulaires de 5-HT (5-HText) ou de DA (DAext), chez le rat soumis à des situations sensibles à l'action des benzodiazépines (BZDs). Deux procédures de conflit en conditionnement opérant ainsi qu'un test de néophobie ont été validés. Les taux de DAext et de 5-HText corticales, ainsi que ceux de 5-HText hippocampique restent stables pendant la période punie d'un conflit aigu et ne sont pas modifiés par le diazépam, qui lève le blocage comportemental. La buspirone n'a pas d'effet anticonflit et ne modifie pas les taux de 5-HText hippocampique. Les taux de DAext corticale augmentent pendant le test de l'open field et plus modestement pendant la consommation alimentaire. Les systèmes dopaminergiques mésocorticaux et sérotoninergique mésocorticolimbique ne constituent donc pas une étape essentielle de l'action anxiolytique des BZDs telle qu'elle est appréciée dans les modèles de conflit. Les taux de 5-HText striatale augmentent au cours du test de l'open field ainsi que pendant la période punie de la procédure de conflit chez un sous-groupe de rats répondeurs lents. Effets comportementaux et neurochimiques sont antagonisés par le diazépam. Les taux de 5-HText ne sont pas modifiés chez les rats répondeurs rapides ou qui reçoivent des chocs non contingents. Des expériences de lésion suggèrent que les afférences 5-HT au striatum ne sont pas les seules responsables du blocage comportemental induit par la punition et qu'elles sont impliquées dans l'adaptation du rat au rythme lent de récompense. L'activité anticonflit des BZDs pourrait être en partie sous-tendue pa une réduction de la transmission 5-HT dans les structures motrices, en accord avec les données cliniques soulignant le rôle de la 5-HT dans le contrôle de l'impulsivitéSerotonin (5-HT) is thought to be involved in anxiety-related disorders, and dopamine (DA) in response to stress. Using an intracerebral microdialysis technique, variations of extracellular 5-HT (5-HText) or DA (DAext) levels were studied in rats subjected to benzodiazepine-sensitive paradigms. Two operant conflict procedures and a test of neophobia have been validated. Cortical DAext and 5-HText levels, and hippocampal 5-HText levels were modified neither during the punished period of conflict procedures, nor in rats given diazepam, at a dose which induced an anxiolytic-like release of punished responding. Buspirone had no effect on behavioral blockade and did not modify hippocampal 5-HText levels. A modest increase in cortical DAext was observed during food eating and in the open field test of neophobia. Thus, mesocortical DA and mesocorticolimbic 5-HT systems seem not to play a pivotal role in the anxiolytic effect of benzodiazepines, at least as it is approached in conflict procedures. In the striatum, 5-HText levels increased during the open field test and during the punished period of the operant conflict procedure in a subgroup of rats classified as ‘low responders’. Both biochemical and behavioral modifications were counteracted by diazepam. Striatal 5-HText levels did not change in 'high responder' rats or in rats given non contingent footshocks. 5,7-DHT lesion studies suggested that the 5-HT fibers afferent to the striatum are not solely responsible for the punishment-induced behavioral blockade. However these fibers are clearly involved in the adaptation of the animals to low rhythm of reward. The anticonflict activity of benzodiazepines might therefore be attributed to a reduction in 5-HT transmission in motor structures, in keeping with clinical data suggesting an important role of 5-HT in the control of impulsive-related behaviour
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Bétry, Cécile. "Potentialisation de la réponse antidépressive grâce au blocage combiné du récepteur 5-HT3 et du SERT". Thesis, Lyon 1, 2012. http://www.theses.fr/2012LYO10200.
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Les traitements actuels de la dépression présentent une efficacité partielle et nécessitent une administration pendant plusieurs semaines avant d’obtenir un effet thérapeutique. Il est donc urgent de trouver de nouvelles stratégies antidépressives. La vortioxetine (Lu AA21004) est un nouvel antidépresseur en cours de développement. À la différence des inhibiteurs sélectifs de recapture de la sérotonine (ISRS), il est multi-cibles. Il bloque non seulement le transporteur de la sérotonine (SERT) mais aussi les récepteurs 5-HT3. Afin de caractériser les effets de ce composé et d’évaluer l'implication du blocage des récepteurs 5-HT3 dans son mécanisme d’action, plusieurs marqueurs précliniques de la réponse antidépressive ont été évalués. Nous avons utilisé des approches électrophysiologiques, immunohistochimiques, comportementales et de microdialyse chez le rat. La vortioxetine augmente la prolifération cellulaire hippocampique et induit une désensibilisation des autorécepteurs 5-HT1A dès 3 jours contre 2 à 3 semaines pour les antidépresseurs classiques. Elle induit également une importante libération de sérotonine malgré une occupation partielle du SERT. Ces effets sont liés, au moins en partie, au blocage des récepteurs 5-HT3. Nous avons ensuite montré qu’un antagoniste des récepteurs 5-HT3, l’ondansetron, à très faible dose, potentialisait l’effet d’un ISRS, la paroxetine. L’ensemble de nos données in vivo et ex vivo prouvent que le blocage des récepteurs 5-HT3 participe à l’efficacité pseudo-antidépressive de la vortioxetine. Les récepteurs 5-HT3 sont donc une cible intéressante pour améliorer l’efficacité des antidépresseurs et raccourcir leur délai d’actionTherapeutic effects of current antidepressant drugs only appear after several weeks of treatment and a significant number of patients do not respond to any treatment. Thus, more effective treatments for major depression are still needed. Vortioxetine (Lu AA21004), a novel antidepressant in development, displays effective properties in human. To the difference of selective serotonin reuptake inhibitors (SSRIs), it is a multimodal serotoninergic agent. Not only does it block the 5-HT transporter but it is also a potent 5-HT3 receptor antagonist. This current study was undertaken to characterize the effects of this compound and the role of 5-HT3 blockade. Using electrophysiological, immunohistochemical, autoradiography and behavioral approaches in rats, several pre-clinical markers of antidepressant-like response were assessed. Vortioxetine increased hippocampal cell proliferation and desensitized 5-HT1A autoreceptors from 1-3 days versus 2-3 weeks for classical antidepressants. In contrast to SSRIs, it also increased 5-HT hippocampal release with an incomplete SERT occupancy. Later effects are at least partly due to 5-HT3 receptors blockade. In parallel, we also showed that the 5-HT3 receptor antagonist ondansetron potentiated the effect of the SSRI paroxetine. Taken together, our in and ex vivo findings highlight the crucial role of 5-HT3 receptor blockade in the antidepressant-like efficacy of vortioxetine. Thus, we propose that the 5-HT3 receptors are an interesting target to improve antidepressant efficacy and reduce the therapeutic delay
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Barthet, Gaël. "Régulation des voies de signalisation dépendante et indépendante des protéines G activées par le récepteur 5-HT4". Montpellier 1, 2007. http://www.theses.fr/2007MON1T014.
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Les récepteurs à 7 domaines transmembranaires (R-7TM) ont longtemps été caractérisés par leur aptitude à activer les protéines G et à générer la production de seconds messagers. Ce type de signalisation est régulé au cours du processus de désensibilisation qui implique les GRK (G protein-coupled receptors kinases) et les β-arrestines. Récemment, ces dernières ont été mises en évidence dans l'activation indépendante des protéines G des ERK1/2 (extracellular-related kinases 1/2) par certains R-7TM. En utilisant le récepteur 5-HT4 (R-5-HT4) comme modèle de R-7TM, nous avons pu observer une régulation de sa signalisation Gs/AMPc par la GRK2 qui ne fait pas intervenir son activité kinase. Cette désensibilisation est également distincte de l'endocytose consécutive au recrutement des β-arrestines par le récepteur. Nous avons également mis en évidence une activation des ERK1/2 par le R-5-HT4 via la tyrosine kinase Src, à la fois indépendante des protéines G et des β-arrestines. Cette signalisation est régulée de façon autonome par une autre GRK, la GRK5, et la β-arrestine1 sous sa forme phosphorylée. Cette régulation est également indépendante de l'endocytose du R-5-HT4 puisqu'au contraire, l'internalisation du R-5-HT4 est bloquée au cours de ce processus. Des protéines communément impliquées dans la régulation de la signalisation dépendante des protéines G sont donc également capables de réguler des signalisations indépendantes des protéines G, bien que les événements moléculaires soient distincts.
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Devroye, Celine. "Role of the central serotonin subscript 2B receptor in the regulation of ascending dopaminergic pathways : relevance for the treatment of schizophrenia and drug addiction". Thesis, Bordeaux, 2016. http://www.theses.fr/2016BORD0462/document.
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Il y a quatre ans, lorsque j’ai commencé ma thèse en Neuropharmacologie, le rôle fonctionnel du récepteur serotoninergique2B (5-HT2B) central n’était guère connu. En effet, compte tenu de la mise en évidence de son expression dans le cerveau relativement récente par rapport aux autres récepteurs à la 5-HT, peu d’études avaient porté sur son impact au sein du système nerveux central. En particulier, il était établi que les récepteurs 5-HT2B, sans effet au niveau de la voie dopaminergique (DA) nigrostriée, sont capables d’exercer un contrôle tonique excitateur sur l’activité de la voie DA méso accumbale. Sur la base de cette régulation différentielle des voies DA sous-corticales, il avait été proposé que les antagonistes du récepteur 5-HT2B pourraient constituer des outils pharmacologiques pertinents pour le traitement des pathologies liées à unedysfonction du système DA et requérant une modulation indépendante des voies DA ascendantes, telles que la schizophrénie. Cependant, l’effet du blocage des récepteurs 5-HT2B au niveau de la voie DA mésocorticale, laquelle joue un rôle pivot dans le bénéfice thérapeutique des antipsychotiques (APs) atypiques,n’avait jamais été exploré. De plus, l’analyse de la littérature avait révélé que le blocage du récepteur 5-HT2B réduit les réponses neurochimiques et comportementales induites par l’amphétamine et la 3,4-méthylènedioxyméthamphétamine, suggérant que ce récepteur pourrait également représenter une cible pharmacologique intéressante pour le traitement de l’addiction. Néanmoins, la possible implication de ce récepteur dans les effets de la cocaïne, l’une des drogues les plus consommées au monde, restait alors inconnue.Ainsi, l’objectif de cette thèse était d’étudier l’influence exercée par le récepteur5-HT2B sur l’activité DA basale et activée par la cocaïne, afin de mieux évaluer le potentiel thérapeutique de ce récepteur dans le traitement de la schizophrénie et de l’addiction. A cette fin, nous avons étudié les effets de deux antagonistes puissants et sélectifs du récepteur 5-HT2B (RS 127445 et LY 266097) sur l’activité DA, en utilisant des approches biochimiques, électrophysiologiques et comportementales chez le rat.Un premier groupe d’expériences a mis en évidence l’existence d’un contrôle tonique inhibiteur exercé par le récepteur 5-HT2B sur la libération de DA dans le cortex préfrontal médian (CPFm). Ce résultat, démontrant que les récepteurs 5-HT2B régulent de manière différentielle les trois voies DA ascendantes, indique que les antagonistes du récepteur 5-HT2B présentent un profil d’action idéale pour restaurer une fonction DA normale chez les patients schizophrènes. En accord avec cette proposition, les antagonistes 5-HT2B se révèlent efficaces dans plusieurs modèles classiquement utilisés pour prédire l’efficacité des APs, alors qu’ils n’ont pas d’effet dans une tâche comportementale prédisant la tendance des APs à induire des effets secondaires moteurs. Un second groupe d’expériences visant à étudier les mécanismes sous-tendant le contrôle différentiel exercé par le récepteur 5-HT2B sur l’activité DA montre que les effets opposés induits par les antagonistes 5-HT2B sur la libération de DA dans le CPFm et le noyau accumbens (NAc) résultent d’une interaction fonctionnelle avec les récepteurs 5-HT1A exprimés dans le CPFm. Enfin, nous avons également démontré que le blocage du récepteur 5-HT2B supprime l’hyperlocomotion provoquée par la cocaïne. Cet effet, qui se produit indépendamment de la libération de DA dans le NAc et le striatum, où l’activité DA est étroitement liée aux effets comportementaux induits par la cocaïne,implique une interaction post-synaptique dans les régions DA sous-corticales. En conclusion, le travail accompli au cours des quatre années passées apporte des informations substantielles quant au rôle fonctionnel du récepteur 5-HT2Bdans la régulation des voies DA ascendantesFour years ago, at the beginning of my thesis in Neuropharmacology, the functional role of the central serotonin2B receptor (5-HT2BR) remained poorly investigated. Indeed, in light of the relatively recent discovery of its presence in the mammalian brain, as compared to other 5-HT receptors, only few studies had explored its impact within the central nervous system. Interestingly, it had been shown that 5-HT2BRs, while having no effect at the level of the nigrostriatal dopaminergic (DA) pathway, afford a tonic excitatory control on the activity of the mesoaccumbal DA tract. This differential influence on subcortical DA brain regions had led to the proposal that 5-HT2BR antagonists may be a useful tool for improved treatment of DA-related disorders requiring an independent modulation of the activity of ascending DA pathways, such ass chizophrenia. However, the effect of 5-HT2BR blockade at the level of themesocortical DA pathway, which plays a pivotal role in the the rapeutic benefit of atypical antipsychotic drugs (APDs), had never been studied. In addition,analysis of the literature revealed that 5-HT2BR blockade suppresses amphetamine and 3,4-methylenedioxymethamphetamine-induced neurochemical and behavioral responses, suggesting that this receptor may also be a relevant pharmacological target for treating drug addiction. Nevertheless,its possible implication in the effects induced by cocaine, one of the most worldwide abused drugs, remained unknown.Thus, the aim of the present thesis was to study the regulatory control exerted by the 5-HT2BR on both basal and cocaine-induced stimulation of DA activity,in order to evaluate its therapeutic relevance for improved treatment of schizophrenia and drug abuse and dependence. To this purpose, we assessed the effects of potent and selective 5-HT2BR antagonists (RS 127445 and LY266097) on DA activity, by using biochemical, electrophysiological and behavioral approaches in rats.In a first group of experiments, we found that 5-HT2BRs exert a tonic inhibitory control on DA outflow in the medial prefrontal cortex (mPFC). This finding, by showing that 5-HT2BRs afford differential controls over the three ascending DA pathways, indicates that 5-HT2BR antagonists display an ideal pattern of effects to restore normal DA function in schizophrenia. Accordingly, 5-HT2BRantagonists were efficient in several behavioral models aimed at predicting APD efficacy, and had no effect in a behavioral task reflecting APD propensity to induce motor side effects. In a second group of experiments performed to determine the mechanisms under lying the differential control exerted by 5-HT2BRs on DA activity, we demonstrated that 5-HT2BR antagonist-induced opposite effects on DA ouflow in the mPFC and the nucleus accumbens (NAc)involve a functional interplay with 5-HT1ARs expressed in the mPFC. Finally,we found that 5-HT2BR blockade suppresses cocaine-induced hyperlocomotion.This effect, which occurs independently from changes of DA outflow in theNAc and the striatum, where DA activity is tightly related to cocaine-induced behavioral responses, likely involves a post-synaptic interaction in subcorticalDA brain regions.To conclude, the work accomplished over the past four years provides substantial information with regards to the functional role of 5-HT2BRs in the regulation of the activity of ascending DA pathways. In addition, while improving the understanding of the interaction between DA and 5-HT systems,the present findings altogether highlight the therapeutic potential of 5-HT2BRantagonists for treating schizophrenia and cocaine addiction
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Faton, Sina. "Le récepteur 5-HT2c : lien entre activité locomotrice et prise alimentaire". Thesis, Montpellier, 2016. http://www.theses.fr/2016MONT3508/document.
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Le système sérotoninergique central a longtemps été associé au contrôle du comportement alimentaire et à la modulation des effets des drogues psychostimulantes sur le comportement.Le récepteur 5-HT2C est présent dans les centres hypothalamiques et particulièrement dans le noyau arqué dans l’hypothalamus (ARC) qui contrôle la régulation homéostatique de la prise alimentaire. On le retrouve aussi dans l’aire tegmentaire ventrale (VTA), une région importante dans la motivation de plusieurs comportements notamment la consommation alimentaire.Dans cette étude, l’hypothèse testée est, d’une part, que le récepteur 5-HT2C exprimé dans le VTA jouerait un rôle dans le contrôle de l’activité locomotrice induite par l’amphétamine et d’autre part qu’il exercerait son effet hypophagique a travers l’ARC.Des micro-injections localisées dans le VTA et dans l’ARC ont été réalisées afin d’évaluer les effets d’un agoniste sélectif du récepteur 5-HT2C, AR231630, sur l’hyperlocomotion stimulée par l’amphétamine ainsi que sur la prise alimentaire chez le rat.Dans les tests sur l’activité locomotrice, AR231630, lorsque qu’injecté dans la VTA, et non pas dans l’ARC, réduit de façon dose-dépendante l’ambulation provoquée par l’amphétamine.Dans les tests sur le comportement alimentaire, l’injection du composé AR231630 dans l’ARC n’induit pas de réduction de la prise alimentaire, contrairement au VTA.Une expérience suivante montre que les effets inhibants de l’administration périphérique d’AR231630 (5mg/kg) sur l’alimentation sont spécifiquement inversés par un prétraitement dans le VTA avec un antagoniste sélectif du récepteur 5-HT2C, SB242084.Ces résultats suggèrent que les récepteurs 5-HT2C dans le VTA participent à la fois au comportement alimentaire et à la fonction de la récompense, et ce, potentiellement par le même mécanismeCentral serotonin systems have long been associated with the control of ingestive behavior, and the modulation of behavioral effects of psychostimulants.The 5-HT2C receptor is present in hypothalamic centers particularly the arcuate nucleus (ARC) controlling homeostatic regulation of food intake as well as in the ventral tegmental area (VTA), a region important for motivational aspects of multiple behaviors, including feeding.In the present study, the hypothesis was tested that the 5-HT2CR in the VTA may control amphetamine-evoked locomotor activity and 5-HT2CR in the ARC may regulate food consumption. Localized microinjections into the VTA or into the ARC were used to assess the effects of a highly selective 5-HT2C agonist, AR231630, on the locomotor stimulant effect of amphetamine as well as food intake. In the tests for locomotor activity, AR231630 into the VTA, but not into the ARC, dose-dependently reduced locomotor activity elicited by amphetamine. Unexpectedly, in tests for food intake, intra-ARC injection of AR231630 did not reduce food intake even at doses of 10ug, whereas intra-VTA injection of 10ug AR231630 did. A subsequent experiment determined that the suppressant effect of peripheral administration of AR231630 (5 mg/kg) on feeding was partially reversed by pretreatment with the selective 5-HT2CR antagonist SB242084 into the VTA (5ug). These findings suggest that 5-HT2CR in the VTA participates in both food intake and brain reward function, and possibly through the same pathway
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Contesse, Vincent. "Contribution à l'étude du contrôle sérotoninergique de la stéroïdogénèse surrénalienne : localisation de la sérotonine, identification du récepteur, et caractérisation des mécanismes de transduction". Rouen, 1995. http://www.theses.fr/1995ROUES023.
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Le contrôle de la stéroïdogénèse surrénalienne met en jeu des facteurs humoraux et locaux. Une régulation de type paracrine de la sécrétion des corticosteroïdes par la sérotonine (5-HT) médullosurrénalienne a été démontrée chez l'amphibien. Le but de notre travail était d'étudier le mécanisme d'action de la 5-HT sur la cellule corticosurrénalienne en utilisant deux modèles: l'interrénale de grenouille et la surrénale humaine. Nous avons observé que la 5-HT, localisée dans les mastocytes du parenchyme surrénalien humain, stimule la sécrétion de cortisol. Une étude pharmacologique détaillée a mis en évidence l'intervention d'un authentique récepteur 5-HT4 chez la grenouille et chez l'homme. Une étude in vitro a montré que la glomérulée humaine est 100 fois plus sensible a l'action du zacopride, un agoniste des récepteurs 5-HT4, que la fasciculée/réticulée. Chez des volontaires sains, l'absorption orale de zacopride ou de cisapride, deux agonistes 5-HT4, entraîne une augmentation de l'aldostéronémie. L'activation des récepteurs 5-HT4 surrénaliens provoque une stimulation de l'adénylyl cyclase et un influx de calcium dépendant de la protéine kinase A. Le canal calcique mis en jeu n'appartient pas aux canaux de type l ou n. En conclusion, chez l'homme et la grenouille, la 5-HT libérée au sein de la surrénale, stimule la sécrétion des corticostéroïdes par l'intermédiaire de récepteurs 5-HT4. Les deux voies de transduction (activation de l'adénylyl cyclase et influx calcique) sont impliquées dans l'effet final de la 5-HT sur la sécrétion des stéroïdes
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Rivail, Lucie. "Étude structurale et dynamique des interactions entre le récepteur 5-HT 4 humain et ses ligands par modélisation moléculaire". Paris 11, 2004. http://www.theses.fr/2004PA114842.
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Le récepteur sérotoninergique 5-HT4 appartient à la famille des RCPG et est exprimé dans de nombreux tissus, dans lesquels il contrôle diverses fonctions physiologiques. Un dysfonctionnement du récepteur 5-HT4 pourrait intervenir dans plusieurs pathologies pour lesquelles aucune thérapie n'est efficace. Afin de mieux comprendre le mode de fixation des ligands sur le récepteur 5-HT4, nous avons entrepris une étude structurale du récepteur. Par homologie avec la structure de la rhodopsine bovine, nous avons modélisé le récepteur 5-HT4 dans le vide. Par mutagénèse dirigée, nous avons analysé les interactions entre le récepteur et ses ligands, en particulier dans une poche hydrophobe du site de liaison. Nous avons ensuite placé le récepteur dans un modèle de bicouche lipidique et fait une dynamique moléculaire de plusieurs ns. Enfin, nous avons appliqué les méthodes de perturbations d'énergie libre sur notre modèle, afin de relier les constantes d'affinité à la différence d'énergie libre.
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Hercend, Claude. "Contribution de la modélisation moléculaire à l’étude de pathologies humaines : Application au transporteur ATP7B et au récepteur 5HT2B". Thesis, Paris 5, 2012. http://www.theses.fr/2012PA05T005/document.
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Bouali, Saoussen. "Adaptation fonctionnelle de la neurotransmission 5-HT dans des modèles de souris en relation avec la dépression et son traitement". Paris 6, 2004. http://www.theses.fr/2004PA066439.
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Andriamoratsiresy, Dina. "Le récepteur de l’acide rétinoïque alpha (RAR-α) : nouveau rôle dans l’adhésion des fibroblastes". Thesis, Strasbourg, 2016. http://www.theses.fr/2016STRAJ092/document.
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Les récepteurs de l’acide rétinoïque, RARα, β et γ sont des facteurs de transcription dépendants du ligand qui contrôlent l’expression de gènes spécifiques. Cependant, il s’avère depuis peu que les RAR ont aussi des effets non-transcriptionnels extranucléaires. Durant ma thèse, j’ai observé que (1) les fibroblastes invalidés pour tous les RAR ont un cytosquelette d’actine perturbé et ont perdu leurs propriétés d’adhésion (2) RARα interagit via son motif riche en proline N-terminal avec la profiline 2a (PFN2a) qui est un régulateur critique de l’élongation des filaments d’actine du cytosquelette. J’ai montré que : (1) Les RAR contrôlent la morphologie, l’adhésion et la migration des MEF via la régulation transcriptionnelle de l’expression de gènes codant pour des protéines d’adhésion (2) Dans le cytoplasme, RARα forme avec PFN2a des complexes dont le nombre contrôle le réseau d’actine et l’adhésion des MEF via un mécanisme non transcriptionnel. Ces observations mettent en exergue l’importance de la combinaison des effets génomiques et non-génomiques des RAR dans l’adhésion des cellules et ouvrent de nouvelles possibilités de dérégulation du fonctionnement des RAR dans certaines pathologiesRetinoic acid receptors, RARα, β and γ are ligand-dependent transcription factors that control the expression of specific genes. However, growing evidence indicates that RARs also have extranuclear and non transcriptional effects. During my thesis, I observed that (1) fibroblasts invalidated for all RARs depict a disrupted actin cytoskeleton and have lost their adhesion properties (2) RARα interacts through its N-terminal proline rich motif with profilin2a (PFN2a) a critical regulator of actin filaments elongation. I have shown that: (1) RARs control the morphology, adhesion and migration of MEFs via controlling at the transcriptional level the expression of adhesion genes (2) In the cytosol, RARα forms complexes with PFN2a. The number of these complexes controls the actin network and the adhesion of MEFs via a non-transcriptional mechanism. These observations highlight the importance of the combined genomic and non-genomic effects of RARs in cell adhesion, and open new avenues for RARs deregulations in certain pathology
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Hebras, Jade. "Caractérisation moléculaire du petit ARN nucléolaire SNORD115 : un rôle dans la régulation de l'expression et de la fonction du récepteur à la sérotonine 5-HT2C ?" Thesis, Toulouse 3, 2020. http://www.theses.fr/2020TOU30209.
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Le nucléole des mammifères contient des centaines de petits ARN nucléolaires à boîte C/D (SNORD) dont la grande majorité guide une 2'-O-ribose méthylation sur les précurseurs des ARN ribosomiques (pré-ARNr). Certains SNORD facilitent aussi les clivages que subissent le pré-ARNr ou modifient le petit ARN nucléaire U6. Des travaux récents laissent également entrevoir que certains SNORD interagissent avec des ARNm. C'est le cas par exemple pour SNORD115 qui est au cœur de mon travail de thèse. SNORD115 est exprimé uniquement dans le cerveau à partir de nombreux gènes répétés en tandem situés au locus SNURF-SNRPN dont l'expression est contrôlée par l'empreinte génomique parentale. Des défauts génétiques associés à ce locus chromosomique sont associés à une maladie rare: le syndrome de Prader-Willi (SPW). SNORD115 est remarquable car il possède une longue complémentarité conservée avec l'ARNm codant un récepteur à la sérotonine, le variant 5-HT2C. Certains travaux proposent que SNORD115 régule la voie 5-HT2C en modulant l'épissage alternatif ou l'édition A vers I du pré-ARNm 5-HT2C. Un défaut dans l'activité du 5-HT2C pourrait être à l'origine de l'hyperphagie et/ou des anomalies comportementales qui caractérisent le SPW. Mon projet de thèse principal consistait à éprouver cette hypothèse grâce à un nouveau modèle murin CRISPR/Cas9 invalidé pour SNORD115. Mes résultats montrent que la perte d'expression de SNORD115 ne perturbe pas la régulation post-transcriptionnelle du pré-ARNm 5-HT2C in vivo. D'autre part, des études réalisées dans l'équipe n'ont pas permis de révéler des anomalies marquées dans les phénotypes anxio-dépressifs, ni dans le comportement alimentaire. Ma thèse soulève donc des questions importantes quant au rôle régulateur de SNORD115 dans le cerveau et de sa contribution potentielle dans l'étiologie du SPW. En parallèle, j'ai aussi abordé le répertoire des 2'-O-méthylations de l'ARNr dans des tissus murins, notamment le cerveau. Ce travail s'inscrivait dans la thématique émergente de la théorie du "ribosome spécialisé" qui propose qu'une hétérogénéité structurale des composants du ribosome puisse se traduire par des changements dans les capacités fonctionnelles du ribosome. Mes résultats montrent des variations dans la méthylation pour un nombre très limité de sites, et ce principalement au cours du développement. Aussi, les ribosomes des tissus développementaux sont globalement moins méthylés que ceux des tissus adultes. Nous avons concentré nos efforts sur LSU-G4593 dont la méthylation guidée par SNORD78 est retrouvée uniquement au cours du développement. Nous proposons que des évènements d'épissage alternatif du gène-hôte de SNORD78 modulent la production de SNORD78, et de fait le niveau de méthylation LSU-Gm4593. Grâce à l'étude d'une lignée cellulaire humaine (HEK293) invalidée pour SNORD78, j'ai recherché les implications fonctionnelles de LSU-Gm4593. A ce jour, mes travaux ne montrent pas un rôle marqué dans la prolifération cellulaire, ni dans la fidélité de la traduction. La fonction précise de LSU-Gm4593 demeure donc incompriseThe nucleolus of mammalian cells contains hundreds of box C/D small nucleolar RNAs (SNORDs). Majority of them, guide sequence-specific 2'-O ribose methylations into ribosomal RNA (rRNA). Some of them facilitate RNA folding and cleavages of ribosomal RNA precursors or guide ribose methylations into spliceosomal small nuclear RNA U6. Recent studies propose that some SNORD could target other transcripts, possibly messenger RNA as suggested by the brain-specific SNORD115. SNORD115 is processed from tandemly repeated genes embedded in the imprinted SNURF-SNRPN domain. Defects in gene expression at this domain are causally linked to rare disease: the Prader-Willi Syndrome (PWS). Excitingly, SNORD115 displays an extensive region of complementary to a brain-specific mRNA encoding the serotonin receptor 5-HT2C. SNORD115 could influence 5-HT2C signaling by fine-tuning alternative splicing or A to I RNA editing of 5-HT2C pre-mRNA. Reduced 5-HT2C receptor activity could contribute to impaired emotional response and/or compulsive overeating that characterized the syndrome. My work was to test this hypothesis using a CRISPR/Cas9-mediated SNORD115 knockout mouse model. My results show that loss of SNORD115 expression, in vivo, does not alter the post-transcriptional regulation of 5-HT2C pre-mRNA processing. Others results from the team do not reveal any defects in anxio-depressive phenotypes and eating behaviour. Our study questions the regulatory roles of SNORD115 in brain functions and behavioural disturbance associated with PWS. On other hand, I have studied ribose methylation sites in rRNA from mouse tissues. This work was included in emerging field of the specialized ribosome hypothesis which suggests heterogeneity in ribosomes may impact activity of ribosomes. Our results show significant changes at few discrete set of sites, especially in rRNA from developing tissues. Also, rRNA from developing tissues is globally less methylated than rRNA from adult tissues. We focus on LSU-Gm4593 site because this position is specifically methylated only during development and hardly ever detected in adult tissues. Methylation at LSU-G4593 is guided by SNORD78. We propose that the expression levels of SNORD78 during development appeared to be regulated by alternative splicing of the host-gene and to correlate with the methylation level of its target site at LSU-G4593. We've used a human cell line (HEK293T) inactivated for the SNORD78 gene in order to understand the functionally role of the corresponding ribose methylation. Our work did not demonstrate any overt cellular phenotypes, even though translation fidelity and the precise function of LSU-Gm4593 remains unknown
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Payan, Hugo. "Réseaux de protéines associés aux récepteurs de la sérotonine : rôle et options thérapeutiques pour la Maladie d'Alzheimer". Thesis, Montpellier, 2020. http://www.theses.fr/2020MONTT012.
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La maladie d’Alzheimer, principale forme de démence dans le monde, est devenue un problème de santé publique majeur. Cette pathologie est caractérisée par la présence de deux lésions principales dans le cerveau : la dégénérescence neurofibrillaire composée de protéine Tau hyperphosphorylée et des plaques amyloïdes, agrégats denses de peptides β amyloïdes (Aβ). Le peptide Aβ provient du clivage de la protéine précurseur de l’amyloïde (APP) par des β- et ɣ-sécrétases. Un clivage dit non-amyloïdogène de l’APP existe également, au cours duquel la protéine est clivée par une α-sécrétase (principalement ADAM10) ce qui conduit à la production d'un fragment extracellulaire connu pour être neuroprotecteur et neurotrophique, le sAPPα. Le récepteur sérotoninergique 5-HT4 est un récepteur couplé aux protéines G (RCPG) qui interagit avec l’APP et ADAM10, module leur trafic et leur maturation, et dont l’activation pharmacologique favorise le clivage non-amyloïdogène de l’APP. Le récepteur 5-HT6 est un autre récepteur sérotoninergique dont la modulation pharmacologique induit des effets pro-cognitifs. Les récepteurs 5-HT4 et 5-HT6 apparaissent donc comme des cibles thérapeutiques d'intérêt dans le contexte de la maladie d’Alzheimer. Néanmoins, les mécanismes moléculaires et cellulaires sous-jacents responsables des effets liés à l’expression et l’activation du récepteur 5 HT4 ne sont pas encore élucidés. Les objectifs de cette thèse ont été d’une part de développer une technique de criblage des nanocorps (fragments d’anticorps à domaine unique provenant des camélidés) contre les récepteurs 5-HT4 et 5-HT6 en utilisant notamment des approches de TR-FRET et de cytométrie de flux. Dans un second temps, l’utilisation d’une approche de protéomique combinant la purification des partenaires du récepteur 5-HT4 par affinité suivie de leur identification systématique par spectrométrie de masse a permis l’identification de partenaires protéiques potentiels associés au récepteur 5-HT4 dans les cellules HEK-293N. Parmi les protéines recrutées par le récepteur 5-HT4, nous avons notamment identifié la protéine IRS4 (Insulin Receptor Substrate 4). La protéine IRS4 est un transducteur de la voie de la signalisation de l’insuline. Étant donné qu’une dérégulation de la voie de signalisation de l’insuline est l’un des évènements majeurs impliqués dans le développement et la progression de la maladie d’Alzheimer, nous nous sommes focalisés sur ce partenaire. Après avoir validé cette interaction par Western Blot, nous avons montré une co-localisation de IRS4 avec le récepteur 5-HT4 dans les cellules HEK-293. Par ailleurs, des études fonctionnelles ont montré qu’une inhibition de l’expression de IRS4 induit une surexpression du récepteur 5-HT4 dans les cellules HEK-293, associée à une augmentation de la signalisation canonique du récepteur via la voie de la protéine Gs.Ces résultats suggèrent une modulation du trafic du récepteur 5-HT4 et donc du complexe associé incluant l’APP et l’ADAM10 par la protéine IRS4. Ce travail de thèse dévoile pour la première fois un lien fonctionnel entre la signalisation du récepteur sérotoninergique 5-HT4 et la signalisation de la voie de l’insuline via IRS4 qui pourrait être d’intérêt dans le contexte de la maladie d’Alzheimer. Il pose également les bases à une identification rapide de nanocorps dirigés contre les récepteurs 5-HT4 et 5-HT6 dont les outils immunohistologiques manquent pour approfondir la compréhension mécanistiqueAlzheimer’s Disease is the most common form of dementia worldwide and has become a major public health problem. This pathology is characterized by the presence of two main features in the brain: neurofibrillary tangles (NFTs) composed of hyperphosphorylated Tau and amyloid plaques, dense aggregates of hydrophobic β-amyloid peptide (Aβ). Aβ peptide results from the amyloidogenic degradation of the Amyloid Precursor Protein (APP) by β- and ɣ-secretases. On the other hand, the non-amyloidogenic proteolysis of APP, within the Aβ sequence by an α-secretase (mainly ADAM10), releases the extracellular fragment of APP (sAPPα), which is neurotrophic and neuroprotective. The 5-HT4 receptor (5-HT4R) is a G protein coupled receptor (GPCR) which interacts with APP and ADAM10, modulates their trafficking and maturation, and which pharmacological activation promotes the non-amyloidogenic cleavage of APP. The 5-HT6 receptor (5-HT6R) is another serotoninergic receptor which pharmacological modulation induces pro-cognitive effects. Thus, 5-HT4R and 5 HT6R constitute interesting therapeutic targets in the context of Alzheimer’s Disease. Nevertheless, the molecular and cellular mechanisms underlying these effects linked to 5-HT4R expression and activation remain elusive. This thesis aimed, in a first part, to develop a screening technique to isolate nanobodies (single domain antibody fragment from camelids) directed against 5-HT4R and 5 HT6R, by using TR FRET and flow cytometry approaches. In a second part, the use of a proteomic approach combining affinity purification of 5-HT4R partner proteins followed by their systematic identification by mass spectrometry (AP-MS) lead to the identification of potential partner proteins associated with 5-HT4R in HEK-293N cells. Amongst proteins recruited by 5 HT4Rs, we identified IRS4 (Insulin Receptor Substrate 4) protein. IRS4 protein is a transducer of the insulin signaling pathway. Given that a dysregulation of the insulin signaling pathway is one of the major events involved in Alzheimer’s Disease development, we decided to focus on this partner. We validated the interaction by Western blotting and showed a colocalization of endogenous IRS4 with 5 HT4R in HEK 293 cells. Then, functional studies showed that IRS4 downregulation induced 5 HT4R overexpression in HEK-293 cells, associated with an increase in the canonical signaling of the receptor through its Gs protein pathway.These results suggest a modulation of 5-HT4R trafficking and of its associated complex including APP and ADAM10 by IRS4 protein. This thesis work reveals for the first time a functional link between 5-HT4R signaling and insulin signaling pathway via IRS4 protein which could be of interest in the context of Alzheimer’s disease. It also establishes the preliminary basis for a fast identification of nanobodies targeting 5-HT4 and 5-HT6 receptors for which immunohistological tools are lacking to explore their underlying mechanisms
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Etienne, Nelly. "Etude des fonctions cardiovasculaires du récepteur de la sérotonine 5-HT2B et de ses interactions avec les hormones ovariennes et la synthèse de monoxyde d'azote (NO)". Strasbourg 1, 2004. https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2004/ETIENNE_Nelly_2004.pdf.
Texto completo da fonteResumo:
Les anomalies congénitales induites par la délétion du gène du récepteur de la sérotonine 5-HT2B conduisent au développement d’une cardiomyopathie dilatée chez les souris mâles adultes. Les souris femelles knock-out (KO) pour le récepteur 5-HT2B étant moins affectées que les mâles KO, concernant le phénotype cardiaque, nous avons évalué le pouvoir cardioprotecteur des hormones ovariennes. Nous avons montré que l’ovariectomie à la puberté, entraîne une accélération de l'hypertrophie développementale mais indépendamment du récepteur 5-HT2B. Par conséquent les hormones ovariennes ne protègent pas les femelles KO pour le récepteur 5-HT2B de la cardiomyopathie dilatée. En absence d'altération fonctionnelle cardiaque apparente, les femelles KO ont été utilisées pour l'étude des fonctions vasculaires du récepteur 5-HT2B. L'induction d'une hypertension artérielle, par inhibition chronique des Nitric Oxide Synthases (NOSs), a permis la mise en évidence du caractère multi-phasique de ce modèle d'hypertension. Alors que les femelles sauvages développent deux phases d'hypertension, les femelles KO ne développent qu'une seule phase, suggérant que le récepteur 5-HT2B est impliqué dans le développement de l'une de ces phases. Les femelles KO sont plus sensibles à court terme, mais, paradoxalement, moins sensibles à long terme que les femelles sauvages vis-à-vis de l’hypertension par inhibition des NOSs. La protection à long terme confirme le rôle majeur du récepteur 5-HT2B dans l’étiologie de l’hypertension artérielle chronique. L'hypersensibilité à court terme des femelles KO est reliée à un défaut de compliance artérielle spécifique de l'inhibition des NOSs et à la réduction de 30% de l’activité basale des NOSs endothéliales au niveau de l’aorte. En conclusion, le récepteur 5-HT2B participe au contrôle de la pression artérielle notamment en modulant le tonus vasculaire de base et en participant, indépendamment, à l’étiologie de l’hypertension artérielle chronique5-HT2B receptor knockout (KO) mice display congenital cardiac defects leading to dilated cardiomyopathy in adult KO males. Because 5-HT2B-KO females exhibit a less severe cardiac phenotype than KO males, we investigated the potential cardioprotective role of ovarian hormones in 5-HT2B-KO females. Bilateral ovariectomy, at puberty, induced an accelerated developmental cardiac hypertrophy but independently of the 5-HT2B receptor. Consequently, ovarian hormones are not the cause of gender difference in KO mice. Taking advantage of apparent normal cardiac function in KO females, we investigated the vascular function of the 5-HT2B receptor in vivo. Using, the chronic NOS (Nitric Oxide Synthase) inhibition induced-hypertension model, we describe for the first time, two independent phases of hypertension in wild type mice. Surprisingly, KO females display only one phase, indicating that the 5-HT2B receptor is necessary for one of the two phases of NOS-inhibition-induced hypertension. Moreover, KO females exhibit an hypersensitivity to NOS inhibition in the first phase of hypertension compare to wild type females but, paradoxically, they are protected from the second phase of hypertension. This protection confirms the major role of the 5-HT2B receptor in etiology of hypertension. Finally, we have shown that hypersensitivity to short term NOS inhibition is specifically associated to a decrease of vascular compliance and to a 30% reduction of basal endothelial NOS activity in aorta of KO females compare to wild type. We conclude that the 5-HT2B receptor is involved in blood pressure regulation by controlling basal vascular tonus, trough NOS activation, and independently participates to the development of long-term hypertension
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Vitali, Patrice. "Identification de nouveaux ARN guides de modification et étude fonctionnelle de l'ARN C/D, spécifique du cerveau, MBII-52". Toulouse 3, 2005. http://www.theses.fr/2005TOU30032.
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La grande majorité des petits ARN non-codants C/D et H/ACA guident, grâce à des segments de complémentarité, deux types de modifications de nucléotides (respectivement, méthylations en 2'-O-ribose et pseudouridylations) sur d'autres types d'ARN. Par le séquençage de banques d'ADNc et des recherches in silico, nous avons identifié chez les mammifères, 13 nouveaux ARN appartenant à ces deux familles. Nous avons aussi mis en évidence l'existence d'un ARN C/D particulier puisque uniquement exprimé dans le cerveau de rat. En parallèle, nous nous sommes intéressés à l'ARN C/D MBII-52, précédemment découvert dans le laboratoire et dont les gènes sont situés, chez l'homme, au niveau du locus de Prader-Willi. Ce petit ARN, spécifique du cerveau, présente une complémentarité de 18 paires de base avec l'ARN messager d'un récepteur à la sérotonine (le variant 5-HT2c), lui aussi uniquement exprimé dans le cerveau. La séquence reconnue par MBII-52 sur l'ARNm est un important site de régulations post-transcriptionnelles, puisque cette région subit, entre autres, cinq événements d'édition (conversion Adénosine vers Inosine) catalysée par les enzymes ADAR1 et ADAR2. Le nucléotide potentiellement modifié par MBII-52 étant précisément l'un de ces sites, cet ARN C/D pourrait alors réguler l'édition de l'ARNm 5-HT2c. Au cours de mes travaux de thèse, nous avons montré que l'ARN C/D MBII-52, ainsi que des ARN C/D artificiels, sont en fait capable d'inhiber, de manière spécifique, l'édition A-to-I catalysée par ADAR2.
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Ravary, Anne. "Rôle de la sérotonine et de l'adénylate cyclase 1 dans le développement du système visuel de la souris". Paris 6, 2002. http://www.theses.fr/2002PA066311.
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