Дисертації з теми "Cycle cellulaire – Dissertations universitaires"
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Cariou, Sandrine. "Mecanismes controlant la progression en g1 et la transition g1/s du cycle cellulaire des hepatocytes normaux et transformes." Paris 5, 1996. http://www.theses.fr/1996PA05S010.
Анотація:
La progression des cellules de mammiferes dans le cycle cellulaire est soumise a differents points de controle ou points de restriction qui pour certains d'entre eux definissent des regulations specifiques de la proliferation en fonction des types cellulaires. Au niveau des points de restriction, les parametres nutritionnels, la presence des facteurs de croissance, l'integrite du genome et sa replication, la segregation correcte des composants nucleaires et cytoplasmiques sont controles. Par ailleurs, au cours des dernieres annees, la comprehension des mecanismes moleculaires qui gouvernent la progression dans le cycle cellulaire au travers des points de restriction, a beaucoup progresse. De nouvelles molecules directement impliquees dans le controle de la proliferation ont ete decouvertes. Il s'agit des proteines kinases cdks et de leurs sous-unites regulatrices, les cyclines et inhibiteurs de cdks. La description de ces mecanismes moleculaires assurant le controle des points de restriction, a permis de comprendre la fonction des complexes cdks/cyclines ainsi que des genes suppresseurs de tumeurs tels que rb et p53. L'alteration ou le dereglement de l'expression de ces genes jouent un role important dans la carcinogenese. L'hepatocyte represente un modele cellulaire particulierement interessant du fait de ces singularites quant a sa capacite proliferative. Dans le foie adulte normal, l'hepatocyte est une cellule hautement differenciee et quiescente mais qui garde une capacite proliferative qui s'observe in vivo au cours de la regeneration hepatique apres reduction de la masse hepatique ou qui peut etre induite in vitro en culture primaire, en stimulant les hepatocytes par des facteurs de croissance tels que l'egf, l'hgf ou le tgfa. Il y a quelques annees, peu de travaux faisaient etat de des mecanismes de regulation de la proliferation des hepatocytes, c'est pourquoi nous avons initie un travail sur ce theme. Nous avons dans un premier temps etudie quelques sous-un ites de cdks et cyclines au cours du cycle cellulaire des hepatocytes in vivo apres hepatectomie partielle. Nous avons montre que p34#c#d#c#2 n'etait pas exprime en phase g1 et a la transition g1/s mais present et actif au cours des phases s et g2/m, contrairement a la situation dans de nombreux autres modeles cellulaires dans lesquelles son expression est constante et son activation survient seulement a la transition g2/m. Nous avons egalement observe une activation de p33#c#d#k#2 pendant la phase s et une expression constante des cyclines d1 et e tout au long du cycle cellulaire. Puis dans un second temps, nous avons utilise le modele de culture primaire d'hepatocytes de rats afin d'etudier les mecanismes controlant l'entree et la progression en phase g1 et de correler cette progression avec l'expression et l'activation des cdks et cyclines. Il apparait que les hepatocytes transitent spontanement de g0 en g1 independamment de facteurs mitogeniques au cours de leurs isolement, comme en atteste la surexpression des proto-oncogenes de g1 precoce et tardif. Nous avons pu egalement definir un point de restriction (point r) en milieu de g1 qui est dependant des facteurs de croissance et qui controle la progression en g1 tardif et la transition g1/s. La progression en phase g1 est associee a des modifications d'expression des cdks et cyclines et nous avons note que : 1) p34#c#d#c#2, p33#c#d#k#2, cyclines a et e presentent une regulation en fonction du cycle cellulaire identique a celle observee au cours de la regeneration hepatique in vivo ; 2) la cycline d3 ainsi que cdk4 sont induits precocement en g1, independamment des facteurs de croissance et les arnm de ces genes s'accumulent lorsque les cellules sont bloquees au point r ; 3) par contre, l'expression de la cycline d1 est correlee avec le franchissement du point r apres stimulation par l'egf. Au total, le cycle des hepatocytes normaux est caracterise par deux points de controle en phase g1, la transition g0/g1 et un point de restriction dependant des facteurs mitogeniques situe en milieu de g1, et par une sequence d'expression des cdks et cyclines qui differe de celle observee dans les autres cellules de mammiferes. Nous nous sommes alors interesses a ces deux points de controle en g1 et a l'expression des cdks et cyclines dans des cellules d'hepatome fao qui bien qu'exprimant certaines fonctions specifiques des hepatocytes normaux, presentent un phenotype transforme. Il etait connu que ces cellules ont acquis une sensibilite au serum de veau foetal (svf) et nous avons montre qu'elles ne repondent plus a une stimulation par l'egf. Par contre, nos resultats indiquent que leur progression en phase g1 precoce peut survenir sans replication d'adn et que la transition g1/s necessite une stimulation par le svf, suggerant comme pour les hepatocytes normaux, l'existence d'un point de restriction en g1 dependant des mitogenes. Les alterations de la sensibilite des fao vis a vis des facteurs de croissanc
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Gautier, Thierry. "Analyses biochimique et moleculaire de la peripherie des chromosomes dans les cellules de mammiferes : une etude au moyen d'autoanticorps humains pendant le cycle cellulaire." Paris 5, 1993. http://www.theses.fr/1993PA05S009.
Анотація:
La division cellulaire entraine la dispersion des proteines nucleolaires dont une partie se redistribue a la peripherie des chromosomes. Une collection de serums autoimmuns a ete criblee pour selectionner les serums contenant des autoanticorps specifiques de proteines nucleolaires tapissant la peripherie des chromosomes pendant la mitose. L'analyse des antigenes a permis de les classer en 3 familles, non decrites a ce jour, selon leur masse moleculaire (52, 66 et 103 kd). L'immunoprecipitation des antigenes indique qu'ils sont associes a un arn identifie comme etant l'arn nucleolaire u3. Les resultats suggerent que les antigenes participent aux etapes tardives de la maturation des arns ribosomiques ou au transport des particules pre-ribosomiques. Leur association avec la peripherie des chromosomes peut correspondre a un mecanisme de partage des antigenes ou a une formation protegeant la surface des chromosomes en evitant les interactions aleatoires avec les constituants cytoplasmiques.
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Obiang, Linda. "Rôles des partenaires cellulaires de la protéine de matrice du virus de la stomatite vésiculaire dans le cycle viral." Paris 7, 2011. http://www.theses.fr/2011PA077044.
Анотація:
La protéine de matrice (M) du virus de la stomatite vésiculaire (VSV) est une petite protéine multifonctionnelle de 26,6 kDa. La protéine M joue un rôle majeur dans les processus d'assemblage et de bourgeonnement du VSV. Elle est aussi responsable de l'extinction des synthèses cellulaires, elle déstabilise le réseau de microtubule et induit l'apoptose par voie mitochondriale. Pour remplir l'ensemble de ses fonctions, la protéine M recrute des partenaires cellulaires. Certains de ces partenaires étaient déjà connus. Parmi ceux-ci, nous nous sommes intéressés aux protéines Nedd4, une ubiquitine ligase, et TSG101, un composant du complexe ESCRT I. Lors d'un crible double hybride effectué au laboratoire, nous avons identifié trois nouveaux partenaires de la protéine M : la dynamine, une GTPase impliquée dans le processus d'endocytose, LMP2, une sous-unité catalytique de l'immunoprotéasome et l'a-caténine, une protéine appartenant aux complexes formant les jonctions intercellulaires. Dans un premier temps, nous avons étudié les rôles des protéines Nedd4, TSG101 et dynamine dans les étapes tardives du cycle viral : l'assemblage et le bourgeonnement. Nous avons caractérisé des virus recombinants mutants dont la protéine de matrice n'interagit plus avec un ou deux de ces partenaires. Pour ce faire, nous avons mis au point une nouvelle technique, plus précise, de titration du virus par fluorescence. Cette technique a été utilisée pour établir les cinétiques de production des différents virus recombinants dans divers types cellulaires. L'ensemble de nos résultats suggère que TSG101 a un rôle dans le bourgeonnement que l'on ne met en évidence que dans un contexte de double mutation. Nos observations de microscopie électronique nous ont indiqué que la dynamine intervient en amont de la protéine Nedd4. Enfin, les virions dont la protéine de matrice n'interagit plus avec Nedd4 ont une morphologie aberrante et leur protéine de matrice n'est plus ubiquitinylée. Nous nous sommes ensuite intéressés aux nouveaux partenaires de la protéine de matrice : les protéines LMP2 et l'a-caténine. Nous avions exprimé ces protéines en fusion avec la GST et nous avons montré que ces constructions étaient bien capables d'interagir avec la protéine de matrice, confirmant ainsi les interactions mise en évidence par double hybride. Enfin, nous avons précisé les résidus et les domaines impliqués dans les associations M-LMP2 et M-a-caténine. Des expériences préliminaires nous ont aussi permis de voir que la protéine de matrice et l'a-caténine colocalisent au niveau de la membrane des cellules. L'ensemble de ces résultats contribue à une meilleure compréhension de l'interactome complexe de la protéine de matrice et au rôle des diverses protéines le constituantThe matrix protein (M) of vesicular stomatitis virus (VSV) is a multifunctional 26,6 kDa small protein. M protein plays a key role in assembly and budding processes and is responsible for cellular synthesis shut down, microtubules destabilization and apoptosis. For these reasons, M protein recruits several cellular partners. Among cellular proteins identified so far, we are interested in Nedd4, E3 unbiquitin ligase and TSG101, a component of ESCRT I complex. 2-Yeast Hybrid technique allowed us to identify three news partners for M protein: Dynamin, protein involved in endocytic pathway, LMP2, catalytic subunit of immunoproteasome and Catenin a, that belongs to intercellular junctions. First, we studied the implication of Nedd4, TSG101 and dynamin during late stages of the viral cycle: assembly and budding. We characterized recombinants mutant virus containing matrix protein that does not interact anymore with one or two partners. For that, we developed a new technique to titrate with higher accuracy viral supernatants. We applied this technique for growth curves in different cell type. Our results" suggest that TSG101 plays a role during budding that highlighted with double mutant virus. EM observations indicate that dynamin acts upstream Nedd4. We also showed that some viral particles produced from an infection using virus containing M protein that does not interact with Nedd4 display an aberrant morphology and their M protein is no longer ubiquitinated. After, we started the study of new partners of M protein: LMP2 and Catenin a, previously identified. We expressed these proteins in fusion with GST and we have shown that these buildings were well able to interact with the M, confirming both interactions. Finally we could define residues and domains involved in M-LMP2 and M-Catenin a interactions. Preliminary experiments show that M protein and Catenin a colocalize at level of epithelial cells membrane. An results contribute to a better understanding of the interactome complex matrix protein
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Labit, Hélène. "Régulation de l'initiation de la réplication chez les vertèbrés : analyse du programme temporel d'activation des origines de réplication dans les extraits d'oeufs de xénope." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077176.
Анотація:
Chez les vertébrés, l'activation des origines de réplication est soumise à une régulation spatiale et temporelle. Dans les embryons précoces de xénope, les origines sont positionnées sans aucune spécificité de séquence et sont activées en clusters à différents moments de la phase S. L'objectif principal de ce travail a consisté à caractériser cette régulation temporelle en analysant d'une part, l'activation des origines au sein de fibres individuelles d'ADN, et d'autre part, la distribution des foyers de réplication au sein de noyaux de spermatozoïde incubés dans des extraits d'œufs de xénope. Grâce à la technique de peignage moléculaire, nous avons comparé la distribution des origines de réplication au début de deux phases S consécutives. L'absence de coïncidence « temporelle » entre les origines démontre que le moment d'activation des origines ne dépend pas de la position génomique et qu'il n'existe pas de régulation épigénétique du moment de réplication à l'échelle des origines. Cependant l'observation d'une coïncidence entre les foyers utilisés au début de deux cycles consécutifs suggère qu'une organisation chromosomique pourrait influencer le moment de réplication. L'analyse de la réplication de l'ADN ribosomique par FISH a fourni un exemple de domaine chromosomique répliqué plus tardivement que l'ADN génomique global. Une structure chromatinienne particulière pourrait expliquer ce retard. Par ailleurs, la fréquence d'initiation à ce locus est deux fois plus faible dans l'espaceur intergénique très riche en G+C que dans la région codante. Au sein de ce locus, il pourrait donc exister des facteurs locaux influençant le positionnement des origines de réplicationIn Vertebrates, replication origins are activated according to a spatial and temporal program. In early Xenopus embryos, origins are located at apparently random sequences and are activated in clusters that fire at different times throughout S phase. The main object of the present work is to characterize the temporal regulation of replication in Xenopus egg extracts through analysis of origin activation on single DNA fibers and replication foci distribution in sperm nuclei. Using molecular combing of DNA, we compared the distributions of replication origins fired at the beginning of two following S phases. Absence of significative coincidence between origins shows that the temporal order of replication does not depend on genomic position. Furthermore, no epigenetic central regulates the moment of origin firing. However the detection of coincidence between replication foci labeled at the beginning of two following S phases suggests that the chromosomal organization may influence the replication timing. Using FISH, we showed that the replication of the ribosomic DNA is delayed compared to the replication of whole genomic DNA. An altered chromatin structure may be responsible for this delay. Mapping of origins revealed that initiation frequency is two fold lower in the G+C rich intergenic spacer than in the coding rDNA sequence. At the rDNA, local parameters such as nucleotide composition may influence the localization of replication origins
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Deleye, Yann. "Rôle du gène suppresseur de tumeur p16INK4a dans le métabolisme hépatique des lipides au cours du jeûne." Thesis, Lille 2, 2018. http://www.theses.fr/2018LIL2S002.
Анотація:
Plusieurs études génétiques d’association de gènes ont mis en évidence le locus CDKN2A, codant notamment la protéine p16INK4a (p16), un gène suppresseur de tumeur, comme étant associé au risque de développement du diabète de type 2 (T2D) et des maladies cardiovasculaires. Le T2D, caractérisé par une hyperglycémie et/ou une insulinorésistance, s’accompagne fréquemment d’une stéatose hépatique prédisposant au développement de la NASH (Non Alcoholic Steatohepatitis), et contribuant à un risque accru de complications cardiovasculaires. Nous avons montré que la déficience de p16 augmente la néoglucogenèse hépatique lors d'un jeûne suggérant un rôle de p16 dans le T2D. Cependant, le rôle de p16 dans l’homéostasie hépatique des lipides n’est à ce jour pas connu. Afin de déterminer le rôle de p16 dans le métabolisme hépatique des lipides, nous avons utilisé des hépatocytes primaires isolés de souris p16+/+ et p16-/- ainsi que les lignées d’hépatocytes murins AML12 et humains IHH transfectées respectivement avec un siRNA-CDKN2A ou siRNA-p16.Nous avons montré par l’étude transcriptomique des hépatocytes primaires de souris par puces à ADN, que l’absence de p16 module les voies métaboliques associées à PPARα et contrôle préférentiellement l’expression de certains gènes cibles de PPARα, associés au catabolisme des acides gras. _x000D_Dans les lignées cellulaires hépatocytaires, certains de ces gènes sont également modulés après diminution de l’expression de p16 par siRNA. Ces effets sont associés à une meilleure réponse à l’agoniste de PPARα, le GW647, et abolis par un siRNA ciblant PPARα. Afin d’étudier par quel(s) mécanisme(s) l’absence de p16 module l’expression des gènes cibles de PPARα, le rôle de certains de ses coactivateurs transcriptionnels a été étudié par l’utilisation d’inhibiteurs pharmacologiques ou de siRNA. De manière intéressante, nous avons pu montrer que l’absence de p16 active la voie AMPK-SIRT1 afin d’augmenter l’expression des gènes cibles de la β-oxydation et de la cétogenèse. De plus, ces effets sont indépendants du rôle de p16 dans le cycle cellulaire. In vitro, les hépatocytes primaires p16-/-, incubés avec de l’oléate radiomarqué, présentent une β-oxydation augmentée comparés aux hépatocytes primaires p16+/+. Au cours du jeûne, l’acétyl-CoA provenant de la β-oxydation est redirigé vers la production de corps cétoniques. De manière intéressante, les souris p16-/- injectées avec du sodium octanoate, un acide gras à chaîne courte préférentiellement utilisé via la cétogenèse, ont une tendance à avoir une production plus importante de corps cétoniques.Nous avons ainsi pu mettre en évidence que la déficience de p16 dans les hépatocytes favorise l’utilisation des acides gras, via l’activation de la voie SIRT1-AMPK-PPARαP16INK4a is a tumor suppressor protein that is a well described cell cycle regulator. Recently, genome-wide association studies (GWAS) associated the CDKN2A locus, from which p16INK4A is encoded, with increased risk for development of type 2 diabetes. A pathophysiological link between p16INK4a and hepatic glucose homeostasis has been unraveled recently, through the control of gluconeogenesis. Patients with T2D also present with disturbances in fat metabolism, associated with an increased prevalence to Non Alcoholic Fatty liver diseases (NAFLD). In this context, we investigated the role of p16INK4a in hepatic lipid metabolism in vitro using primary hepatocytes, the murin AML12 and human IHH hepatocyte cell line transfected respectively with siRNA-CDKN2A and siRNA-p16 and in vivo using p16+/+ and p16-/- mice.Transcriptomic analyses of p16+/+ and p16-/- primary hepatocytes using microarrays revealed that metabolic and PPARα signaling pathways were among the most modulated in p16 absence. Moreover, in primary hepatocytes and in hepatocyte cell lines, p16 deficiency modulates a subset of PPARα target genes associated to fatty acids oxidation (FAO). These effects were associated with an increased response to GW647, a PPAR945; agonist, and reversed by siRNA targeting PPAR45;. Investigating known PPAR945; activators and transcriptional co-activators in vitro, we found that upregulation of FAO genes expression was linked to SIRT1. AMPK is a known activator of FAO and has been shown to induce SIRT1 activation through increase of NAD/NADH ratio. Interestingly, downregulation of p16 expression in vitro led to increased AMPK phosphorylation and activation.In vitro, p16-/- primary hepatocytes demonstrated enhanced fatty acid oxidation of oleate compared to p16+/+. During fasting, enhanced FAO leads to a shift of acetyl-coA utilization from the TCA cycle to ketogenesis. Interestingly, p16-/- mice showed a tendency to produce more ketone bodies than their control littermate after sodium octanoate injection. These findings describe a new function for p16INK4a in hepatic lipid metabolism through activation of AMPK-SIRT1-PPARα pathway
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Baccini, Véronique. "Polyploïdisation des mégacaryocytes : Rôle de P21cip1 et P27kip1 et de la voie de signalisation mammalian Target of Rapamycin (mTOR)." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077180.
Анотація:
La différenciation mégacaryocytaire se caractérise par la ploïdisation des précurseurs et un accroissement de la taille cellulaire, aboutissant à une cellule géante dont la fragmentation du cytoplasme produit les plaquettes. Ce processus est contrôlé par la thrombopoïétine (TPO) qui stimule plusieurs voies de signalisation. Le but de ma thèse était de mieux comprendre les mécanismes responsables de la ploïdisation et de la maturation des mégacaryocytes (MKs). Les protéines Cip/Kip (p21Cip1, p27Kip1 et p57Kip2) contrôlent l'arrêt du cycle cellulaire et l'initiation de la différenciation de nombreux types cellulaires. Or, l'expression de p21Cip1 et de p27Kip1 augmente au cours de la ploïdisation des MKs. Notre hypothèse était que ces deux protéines, de façon redondante, contrôlaient l'arrêt des cycles endomitotiques et permettaient la maturation des MKs. La surexpression de ces protéines entraîne un arrêt des endomitoses. Cependant, l'invalidation des deux gènes individuellement et simultanément chez la souris n'a pas permis de leur assigner un rôle physiologique dans le couplage arrêt des endomitoses/induction de la différenciation. Secondairement, nous avons montré l'activation de la voie mammalian Target Of Rapamycin (mTOR) par la TPO. MTOR contrôle la taille et la croissance cellulaire par ses effets sur le cycle via le complexe TORC1. Nous avons montré que mTOR contrôle la croissance des MKs primaires en culture, leur ploïdisation et leur taille en activant la transcription de la cycline D3 et de la p21Cip1. Nous avons aussi mis en évidence que mTOR contrôlait la formation des proplaquettes indépendamment de ses effets sur la ploïdisation et la taille cellulaireMegakaryocyte differentiation is characterized by polyploidization of progenitors and cell size increasing. The term of differentiation is controlled by thrombopoietin (TPO) which stimulates various types of intracellular signaling pathways. The aim of my thesis was to understand mechanisms responsible for polyploidization and megakaryocyte (MK) maturation. The Cip/Kip family of cyclin-dependent kinase (CDK) inhibitors which include p21Cip1 , p27Kip1 and p57Kip2 plays a crucial role in coupling cell-cycle arrest with differentiation in many cell types. MKs express high levels of p21Cip1 and p27Kip1 during differentiation. We hypothesized that these proteins act redundantly to arrest endomitosis and to induce terminal differentiation. We showed that only p21Cip1 was probably responsible for the arrest of endomitotic cell cycles by studying megakaryocytopoiesis of mice lacking one or the two proteins and the effects of overexpression of these proteins on megakaryocytopoiesis. Nevertheless, this murine model is insufficient to affirm thé absence of functional redundance between p21Cip1 and p27Kip1 during MK differentiation. We next showed the mammalian Target Of Rapamycin (mTOR) stimulation by TPO in MKs. This cell signaling pathway regulates cell growth (cell mass and cell size) of many cell types by increasing G1 phase progression through the TORC1 complex. We studied the rapamycin effects on culture of primary MKs and showed that mTOR pathway regulates MK proliferation, ploidization and size by increasing cyclin D3 and p21Cip1 transcription. In addition, mTOR régulates proplatelet formation independently from its effects on ploidization and cell growth
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Hannou, Sarah Anissa. "Rôle du régulateur du cycle cellulaire p16INK4a dans le développement du diabète de type 2 et dans les maladies métaboliques du foie gras ou NAFLD (Non-Alcoholic Fatty Liver Disease) : rôle de p16INK4a dans le contrôle de la néoglucogenèse hépatique et dans le développement de la stéatose hépatique non alcoolique." Thesis, Lille 2, 2014. http://www.theses.fr/2014LIL2S012/document.
Анотація:
Le diabète de type 2 (T2D) est un trouble métabolique de l’homéostasie du glucose. Il est caractérisé par une hyperglycémie chronique qui résulte en partie d’une production excessive de glucose par le foie conséquence au développement d’une résistance à l’insuline. Le T2D est une pathologie multifactorielle à la fois génétique et environnementale. Récemment des études d’associations de gènes (GWAS) dans différentes cohortes ont mis en évidence une forte corrélation entre le locus CDKN2A et le risque de développement du T2D en se basant sur certains paramètres métaboliques tel que la glycémie à jeun. Le locus CDKN2A code pour des protéines régulatrices du cycle cellulaire dont la protéine p16INK4a. p16INK4a est largement décrite dans la littérature pour son rôle suppresseur de tumeurs et comme marqueur de sénescence, cependant son rôle dans le contrôle de l’homéostasie hépatique du glucose n’a jamais été rapporté. Afin de déterminer le rôle de p16INK4a dans le métabolisme hépatique du glucose, nous avons utilisé in vivo des souris sauvages (p16+/+) et déficientes pour p16INK4a (p16-/-) et in vitro des hépatocytes primaires ainsi que la lignée AML12. Nous avons montrés qu’après un jeune, les souris p16-/- présentent une hypoglycémie moins prononcée qui se traduit par une expression hépatique plus élevée de gènes de la néoglucogenèse tels que PEPCK, G6Pase et PGC1a. De plus, les hépatocytes primaires de souris p16-/- présentent une meilleur réponse au glucagon que ceux des p16+/+. Enfin, nous avons montrés que la diminution d’expression de p16INK4a par siRNA dans les AML12 suffit à induire l’expression des gènes de la néoglucogenèse et potentialise la réponse de ces cellules à différents stimuli gluconéogenique. L’effet observé dépend de l’activation de la voie PKA-CREB-PGC1A. L’ensemble de ces données montrent pour la première fois que p16INK4a pourrait jouer un rôle un cours du développement du T2DP16INK4a is a tumor suppressor protein well described as a cell cycle regulator. p16INK4a blocks cyclin D/ cyclin dependent kinase (CDK) 4 activity by binding to the catalytic subunit of CDK4, preventing retinoblastoma protein phosphorylation and subsequently the release of the E2F1 transcription factor. As a consequence; the transcription of genes required for progression to the S phase is restrained. Recently, genome-wide association studies (GWAS) associated the CDKN2A locus, encoding, amongst other genes, p16INK4A, with an increased risk of type 2 diabetes (T2D) development. However, the pathophysiological link between p16INK4a and hepatic glucose homeostasis remains unknown. In this context, we investigated the role of p16INK4a in hepatic glucose metabolism in vivo using p16+/+ and p16-/- mice and in vitro using primary hepatocytes and the AML12 hepatocyte cell line.p16-/- mice exhibited a higher response to fasting as shown by an increased hepatic gluconeogenic gene expression including phosphoenolpyruvate carboxykinase (PEPCK), fructose-1,6-biphosphatase (F1,6P) and glucose-6-phosphatase (G6Pase). p16-/- mice displayed an enhanced hepatic gluconeogenic activity in vivo upon administration of pyruvate, a gluconeogenic substrate. Consistent with this, in vitro data show that p16-/- primary hepatocytes display an enhanced gluconeogenic response to glucagon. In addition, knock down of p16INK4a by siRNA in AML12 cells increased gluconeogenic gene expression. These effects were associated with an increased activity of the PKA-CREB signaling pathway which leads to increased PPARg coactivator 1 (PGC1)α expression, a key transcriptional co-activator that regulates genes involved in energy metabolism. These findings describe a new function for p16INK4a as an actor in the hepatic adaptation to metabolic stress and suggest that p16INK4a could play a role during T2D development
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Bramsiepe, Jonathan. "A function of cell-cycle regulation in pattern formation : endoreplication controls cell-fate maintenance in Arabidopsis." Thesis, Strasbourg, 2013. http://www.theses.fr/2013STRAJ119.
Анотація:
Dans ce travail, j'ai utilisé les trichomes (poils foliaires) d'Arabidopsis comme modèle pour étudier la différenciation cellulaire et l'endoréplication. Mon travail a révélé que les cycles d’endoréplication chez Arabidopsis étaient contrôlés par les protéines inhibitrices CYCLIN DEPENDENT KINASE (CDK), elles-mêmes contrôlées par dégradation via l'action de complexes SKP-CULLIN-F-BOX (SCF). Ceci crée vraisemblablement des niveaux variables d'activité de CDK, qui sont nécessaires pour la progression répétée au travers des phases de synthèse d'ADN dans les cellules entrées en endoréplication. Cependant, la sur-expression des inhibiteurs des CDK ne bloque pas seulement l'endoréplication mais résulte aussi dans la dédifférenciation des cellules précurseurs des trichomes. Des résultats similaires ont été obtenus en utilisant des allèles faibles de perte de fonction pour CDKA;1, la principale CDK chez Arabidopsis, laissant émerger la notion que l'endoréplication est nécessaire à la maintenance du devenir des cellules. De manière surprenante, la dédifférenciation peut être au moins partiellement réprimée quand RBR1, l'homologue chez Arabidopsis de la protéine animale suppresseur de tumeur RETINOBLASTOMA (Rb), est mutée de manière concomitante. De même, une mutation de la methyltransferase CURLY LEAF, composante du complexe PRC2, rétablit le défaut de maintenance des trichomes chez les mutants faibles pour CDKA;1. Pris dans leur ensemble, ces résultats suggèrent que le complexe PRC2 et la protéine RBR1 établissent, au niveau tissulaire, un seuil pour la différenciation cellulaire au cours du développement de l'épiderme chez ArabidopsisCell differentiation is often linked with a switch from a mitotic to an endoreplication cycle, in which cells re-replicate their DNA without cell division. The molecular regulation of endoreplication and its biological fonction are only poorly understood. Here, I have used trichomes (leaf hairs) of Arabidopsis as a model to study cell differentiation and endoreplication. My work revealed that endoreplication cycles in Arabidopsis are controlled by cyclin dependent kinase (CDK) inhibitor proteins, which in turn are subject to protein degradation mediated by the action of SKP-CULLIN-F-BOX (SCF) complexes. This presumably creates oscillating levels of CDK activity, which are needed for repeated progression through DNA synthesis phases in endoreplicating cells. However, overexpression of CDK inhibitors did not only block endoreplication but also resulted in the dedifferentiation of trichome precursor cells. Similar observations were made with weak- loss-of-function alleles for the major CDK in Arabidopsis, CDKA;1, giving rise to the notion that endoreplication is required for cell fate maintenance. Trichome dedifferentiation was enhanced when trichome fate regulators were mutated. Surprisingly, the dedifferentiation could be at least partially repressed when RBR1, the Arabidopsis homolog of the animal tumor suppressor protein Retinoblastoma (Rb), was concomitantly mutated. Similarly, a mutation in PRCZ-methyltransfcrase CURLY LEAF (CLF) rescued the trichome maintenance defect of weak CDKA;1 mutants. Taken together, this suggests that PRC2 and RBR1 set a dynamic tissue threshold for cell differentiation during epidermis development in Arabidopsis
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Kanjo, Ghaidaa. "Influence de Toxoplasma Gondii dans la régulation d'UHRF1 via la voie NF-KB." Thesis, Strasbourg, 2014. http://www.theses.fr/2014STRAJ068/document.
Анотація:
T. gondii interfère avec l'activation des voies de signalisation de NF-kB des cellules hôtes. Ainsi, lors de l’infection par T. gondii, 85% des gènes dépendant de NF-kB sont up-régulés. Un autre facteur de transcription dont l’expression est modulée par le parasite est UHRF1 (Ubiquitin-like,containing PHD and RING finger domains, 1). UHRF1, en se fixant sur le promoteur du gène de la cycline b, induit une répression épigénétique de ce dernier conduisant à un arrêt du cycle cellulaire des cellules infectées en phase G2 et à un arrêt de la prolifération parasitaire. L’analyse in silico du promoteur du gène uhrf1 a montré qu’il possédait 9 sites de fixation de NF-kB. Effectivement nous avons démontré que NF-kB interagit avec le promoteur du gène uhrf1 lors d’une infection par T. gondii. L’expression d’UHRF1 serait donc modulée par NF-kB dans les cellules infectées par T. gondii. Or NF-kB a une régulation différentielle en fonction de la nature de la souche infectante. Là encore, nous avons pu observer une régulation différentielle d’UHRF1 selon la nature de la souche infectante, pouvant être dues à la régulation souche dépendante de NF-kB. La détermination du rôle précis de l’activation d’UHRF1 dans les cellules infectées et l’identification du ou des facteurs parasitaires responsables pourraient permettre de mieux comprendre les mécanismes de persistance intracellulaire du parasite et de découvrir de nouveaux points d’impact thérapeutiquesT.gondii interferes with the activation of NF-kB signaling pathways. Thus, upon infection by T.gondii, 85% of genes NF-kB-dependent are up-regulated. Another transcription factor whose expression is modulated by the parasite is UHRF1 (Ubiquitin-like, Containing PHD and RINGfinger domains, 1). UHRF1, bind to the gene promoter of cyclin b and induces epigenetic repression of this gene leading to cell cycle arrest in G2 phase of infected cells and stop the proliferation in both infected cells and parasite. In silico analysis of the uhrf1 gene promoter has been shown to possess 9 binding sites of NF-kB. Our study showed that NF-kB actually interacts with the promoter of gene uhrf1 during infection with T. gondii. This suggests that the expression of UHRF1 is modulated by NF-kB in T. gondii-infected cells. In addition we observed differential regulation of UHRF1 depending on the nature of the infecting strain. These variations may also be due to already well-known differential regulation of NF-kB by different strains of T.gondii. Determining the precise role of UHRF1 activation in infected cells and the identification of the parasitic factor responsible of this activation would allow to a better understanding of the mechanisms of intracellular persistence of the parasite and allow to unravel new therapeutic trails
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Achour, Lamia. "Contrôle de l'expression à la surface cellulaire du récepteur de chimiokine CCR5." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T011.
Анотація:
CCR5 est un récepteur de chimiokine appartenant à la famille des récepteurs couplés aux protéines G (RCPG), jouant un rôle important dans l'entrée du VIH, en association avec la glycoprotéine CD4. Nous avons pu démontrer que la grande majorité de CCR5 (90%) était maintenue à l'état fonctionnel dans les compartiments intracellulaires des cellules immunitaires humaines et des fibroblastes transfectés. CCR5 est particulièrement localisé dans le réticulum endoplasmique (RE) et le Golgi. Les mécanismes moléculaires qui régulent l'export de CCR5 en provenance des compartiments intracellulaires s'avèrent différents dans le RE et le Golgi. La progression de CCR5 hors du RE est lente, et favorisée par son association avec CD4, qui fonctionne comme une protéine d'escorte et régule l'adressage de CCR5 vers la membrane plasmique. D'un point de vue mécanistique, CD4 induirait un changement conformationnel de CCR5, permettant de lever sa rétention dans le RE par PRAF2, une protéine résidente de ce compartiment. Dans le Golgi, la libération de CCR5 est beaucoup plus rapide (5-10min) et contrôlée par des signaux extracellulaires initiés par l'adhésion cellulaire. La rétention dans les compartiments intracellulaires de CCR5 et, plus généralement, des RCPG, pourrait constituer un système d'adaptation permettant de maintenir une réponse physiologique prolongée, dans des contextes cellulaires qui requièrent une réactivité de réponse soutenue, comme au cours du chimiotactisme des leucocytes, via le remplacement progressif des récepteurs de surface désensibilisés et internalisésCCR5 a chemokine receptor belonging to the G protein-coupled receptor (GPCR) family, plays a major role in HIV entry, by forming the viral receptor in association with the glycoprotein CD4. We report that the vast majority of fully functional CCR5 (=90%) is maintained within the intracellular compartments of human immune cells and of transfected fibroblasts. Intracellular CCR5 is mostly localized in the endoplasmic reticulum (ER) and the Golgi apparatus. The molecular mechanisms which control the export of CCR5 from the intracellular compartments are different in the ER and the Golgi. In the ER, the progression of CCR5 is slow and depends on its association with CD4 which functions as an escort protein and controls the CCR5 exit. Association with CD4 would induce a conformational change of CCR5, which would release the receptor from its retention in the ER by a resident protein, PRAF2. In the Golgi, the release of CCR5 is faster (5-10min) and is controlled by extracellular signals promoted by cell adhesion. The intracellular retention of CCR5 and, more generally, of GPCRs could represent an adaptive mechanism to maintain a prolonged physiological response. In particular contexts, which require sustained receptor response such as leukocyte chemotaxis, intracellular receptors would allow the permanent replacement of cell surface desensitized and internalized receptors
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Castillon, Nicolas. "Culture tridimensionnelle de cellules épithéliales respiratoires humaines : applications à la thérapie génique et cellulaire." Reims, 2003. http://www.theses.fr/2003REIMM207.
Анотація:
@Nous avons pu mettre en évidence que des cellules épithéliales respiratoires humaines cultivées sous forme de sphéroi͏̈des pouvaient mimer, à long terme, la structure et la fonctionnalité d'un épithélium respiratoire de surface. Nous avons étudié la capacité de ces structures 3-D à recoloniser un épithélium respiratoire dénudé. Par utilisation d'un vecteur lentiviral, codant la protéine GFP, nous avons également étudier la capacité de ces sphéroi͏̈des polarisés et différenciés à être transduits. Notre étude a pu montrer que ces structures 3-D pouvaient régénérer un épithélium respiratoire pseudostratifié et pouvaient être transduites par un vecteur lentiviral avec une expression à long terme de la protéine GFP et un maintien de la fonctionnalité épithéliale (fréquence ciliaire, sécrétion de chlore). Ces sphéroi͏̈des pourraient ainsi être un outil potentiel de thérapie génique et cellulaire dans la régénération d'un épithélium respiratoire mucoviscidosique@We have shown that human airway epithelial cells cultured as 3-D spheroid could mimic for a long term an airway surface epithelium structure and functionality. We analyzed the potential capacity of these 3-D structures to regenerate an airway epithelium and to be transduced using a pseudotyped lentiviral vector encoding GFP. Our results demonstrate that the spheroids can regenerate a well-differentiated human airway epithelium and can be efficiently transduced by a pseudotyped lentiviral vector with a sustained and long-term expression of the GFP, without any alteration of the spheroid structure and functionality (ciliary beating frequency and CFTR Cl- channel activity). The spheroids could be proposed as a potential tool for gene and cell therapy in order to repopulate a denuded airway epithelium in cystic fibrosis
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Doenaga, Diana. "Mécanismes moléculaires de l'action de Grb14 sur la différenciation, le métabolisme adipocytaire et la prolifération cellulaire." Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05T027.
Анотація:
Actuellement, l'obésité et le diabète de type 2 sont des pathologies en pleine expansion dans les pays développés. Ces deux maladies sont liées à l'insulinorésistance, phénomène qui se caractérise par la perte d'efficacité de l'action de l'insuline. Le sujet de mon étude, Grb14, est un adaptateur moléculaire de la famille Grb7 qui s'exprime spécifiquement dans les tissus cibles de l'insuline. C'est un inhibiteur de la signalisation insulinique qui se fixe sur l'IR et bloque son activité tyrosine kinase. Mon travail de thèse a consisté à déterminer l'influence de Grb14 sur le fonctionnement des cellules adipocytaires, ainsi qu'à étudier les déterminants moléculaires des interactions protéiques de Grb14 au sein de la signalisation insulinique. J'ai mis en évidence un nouveau rôle de Grb14 : son influence inhibitrice sur la sécrétion de la leptine. De nouvelles hypothèses ont été soulevées afin de comprendre quel est le lien entre Grb14 et la sensibilité à l'insuline, mais aussi afin de déterminer si Grb14 pourrait être impliqué dans le cancer. Ainsi, mes résultats ont montré que Grb14 est une protéine qui est impliquée dans de multiples événements cellulairesCurrently, obesity and type 2 diabetes are pathologies in full expansion in the developed countries. These two diseases are linked to insulinoresistance, phenomenon which is characterized by the loss of effectiveness of insulin action. The subject of my study, Grb14, is a molecular adapter of the Grb7 family which is expressed specifically in insulin sensitive tissues. It is an inhibitor of insulin signaling which interacts with the IR and blocks its tyrosin kinase activity. My work consisted in determining the influence of Grb14 on adipocytes function, and studying the molecular determinants of Grb14 molecular interactions in insulin signaling. I highlighted a new role of Grb14: its inhibiting influence on the secretion of leptin. New assumptions were raised in order to understand the link between Grb14 and insulin sensitivity, but also in order to determine if Grb14 could be implicated in cancer. Thus, my results showed that Grb14 is a protein which is involved in multiple cellular events
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Touche, Nadège. "Localisation sub-cellulaire des facteurs de transcription STAT5a et b et implication au cours de l'hématopoïèse maligne." Nancy 1, 2004. http://www.theses.fr/2004NAN11301.
Анотація:
Les facteurs de transcription STAT5a et STAT5b (Signal Transducer and Activator of Transcription) sont impliqués dans la régulation de la prolifération, de la différenciation et/ou de la résistance à l'apoptose, dans les cellules hématopoïétiques, via leur activation par un large panel de cytokines. En outre les protéines ST A T5 sont la cible de nombreuses tyrosines kinases oncogéniques associées à des désordres myéloprolifératifs. En particulier l'activation constitutive de la protéine ST AT5b a été mise en évidence dans la lignée érythroleucémique K562 et des études ont montré le rôle central joué par ST A T5 dans la leucémogenèse induite par la protéine de fusion BCR-ABL responsable de la genèse de la LMC. D'autre part on il existe une activation constitutive des facteurs ST A T5 dans une proportion de LAM allant jusqu'à 80%. Durant ce travail de thèse, nous avons entrepris une étude de la distribution sub-cellulaire des facteurs de transcription ST A T5a et b dans les cellules blastiques de 70 patients (majoritairement des LAM) par une méthode immunocytochimique. Nous avons mis en évidence l'existence d'une localisation nucléolaire des formes r3 tronquées en C-terminal des protéines ST A T5 restreinte aux LAM5 et aux LMC et retrouvée dans les cellules de la lignée K562. D'autre part nous avons montré que cette localisation n'était pas le fait d'une activation par l'oncoprotéine de fusion BCR-ABL, et qu'elle n'était pas affectée par une inhibition de la dégradation protéique dépendante du protéosome. Il s'agit, à notre connaissance, de la première description d'une localisation nucléolaire d'une protéine de la famille ST AT. Celle-ci étant restreinte aux LAM5 et aux LMC, on peut supposé qu'elle puisse prendre part au phénotype leucémique.
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Chauvier, David. "Camptothécine versus homocamptothécine : approche moleculaire et cellulaire. Induction de l'apoptose et modulation de la résistance multiple." Reims, 2001. http://www.theses.fr/2001REIMP206.
Анотація:
La spectrofluorimètrie a permis de suivre l'hydrolyse de l'homocamptothécine (hCPT), en absence et présence de topoisomérase I (top1) et/ou ADN. La stabilisation du complexe de clivage par hCPT impliquerait un système de complémentarité stérique de son cycle E avec un site du complexe ADN-top1, plutôt qu'une réaction d'ouverture du cycle E comme pour les camptothécines (CPTs). HCPT/CPT ont été détectées dans le cytoplasme des cellules MCF7 et HT29 par microspectrofluorimètrie confocale laser en excitation bi-photonique. L'induction de l'apoptose par hCPT dans les cellules HT29 implique la dissipation du Djm, acidification du cytosol, production d'espèces réactives de l'oxygène, libération du cytochrome C, activation de la caspase-3, régulation transcriptionelle, une production de novo de céramide. Enfin, hCPT/CPT sont des substrats de MRP1 mais pas de Pgp. Utilisées à des concentrations sub-toxiques en association avec la daunorubicine (DNR), hCPT/CPT potentialisent la cytotoxicité de la DNR en inhibant l'activité d'efflux de MRP1, restaurant l'accumulation nucléaire de DNR dans des lignées K562 et MCF7 résistantes aux anthracyclinesHomocamptothecin (hCPT), a topoisomerase I (top1) inhibitor, combines higher cytotoxicity and lactone stability in aqueous buffer than camptothecin (hCPT). Spectrofluorometry has allowed the real-time investigation of its hydrolysis kinetic in absence and presence of top1 and/or ADN. The stabilisation of the cleavable complex by hCPT implies steric contacts of the b-hydroxylactone ring with the DNA-top1 complex, rather than opening of the lactone ring, as observed for CPTs. HCPT/CPT have been detected in the cytoplasm of MCF7 and HT29 cancer cells by 2-photon laser confocal microspectrofluorometry,. The induction of apoptosis by hCPT is mediated in HT29 cells by DYm disruption, cytosolic acidification, reactive oxygen species, cytochrome C release, caspase-3 activation, gene expression, de novo synthesis of ceramide. HCPT/CPT have been identified to be substrates of MRP1 but not Pgp proteins. Sub-toxic doses of hCPT/CPT potentiated daunorubicin (DNR) cytotoxicity by inhibition of MRP1 activity, in correlation with increase of the nuclear accumulation of DNR in anthracyclins-resistant K562 and MCF7 cells
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Essayagh, Sanah. "Interactions entre endothélium vasculaire et microparticules d'apoptose ou d'activation cellulaire : étude des conséquences fonctionnelles et des mécanismes impliqués." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077173.
Анотація:
Les microparticules (MPs) sont des fragments membranaires émis par les cellules activées ou apoptotiques, dont le rôle dans les communications inter-cellulaires est reconnu. Au cours des pathologies vasculaires, et spécialement dans les situations de thrombose ou les états pro-thrombotiques, le nombre de MPs augmente dans le sang. Leur origine cellulaire varie selon le contexte pathologique et les MPs ne sont pas seulement des marqueurs de l'activation ou de la souffrance cellulaire, mais sont également des acteurs physiopathologiques. Nous nous sommes intéressés à leurs effets sur les fonctions endothéliales et, parmi celles-ci : activité pro-coagulante membranaire, libération de facteur Willebrand et expression de molécule d'adhésion, adhésion plaquettaire et leucocytaire, formation d'un thrombus en système en flux. Nous avons mis en évidence le rôle des radicaux oxygénés (ROS) comme médiateurs de certains effets des MPs de monocytes. L'étude de l'effet des MPs sur la production de ROS et les signaux cellulaires en aval ont permis de montrer que l'inhibition de cette voie métabolique réduit signifïcativement le développement d'un phénotype endothélial prothrombotique en partie sous le contrôle de la voie p38/MAPK. Un résultat original de ce travail est le recrutement ROS-dépendant des plaquettes à Pendothélium activé par les MPs de monocytes. Nous avons aussi montré que les MPs issues de cellules musculaires lisses induisaient une dysfonction endothéliale en modifiant la biodisponibilité du NO. Enfin, nous avons comparé l'effet de MPs de monocytes, plaquettes et cellules musculaires lisses sur l'expression de protéines membranaires et la génération de RQSMicroparticles (MPs) are small membrane vesicles shed by ectocytosis from activated or apoptotic cells. Their involevement in trans-cellular communication is now established. During vasculopathies, especially thrombotic events, their number increases in the systemic circulation and their cellular origin depends on pathology. MPs are physiopathological mediators and may change the endothelial phenotype. We investigated the effects of MPs interaction on prothrombotic activity, Weibel-Palade bodies secretion, cell adhesion molecules expression and blood cell recruitment. We show that reactive oxygen species (ROS) are second messengers for monocyte derived MP (M-MPs) effects. M-MPs induced ROS induce transient platelet recruitement at the endothelial surface and TF-dependant activity via the p38/MAPK pathway. MPs derived from apoptotic smooth muscle cells induce endothelial dysfunction by reducing NO bioavailibility. This effect also involve ROS generation and is dependant on the adhesion of microparticles to the endothelial cells mediated by beta-3 integrin. Besides, we compared endothelial effects of MPs derived from monocytes, platelets and smooth muscle cells on cell adhesion molecule expression and ROS generation
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Scorsin, Marcio. "La Transplantation cellulaire dans le traitement de l'insuffisance cardiaque." Paris 5, 1999. http://www.theses.fr/1999PA05CD12.
Анотація:
Les limites de la transplantation cardiaque et de la cardiomyoplastie ont conduit depuis quelques années à considérer la transplantation cellulaire comme une option thérapeutique potentielle. L'objectif de ce travail a été d'évaluer l'efficacité fonctionnelle des transplantations cellulaires à l'aide de plusieurs modèles animaux et de plusieurs méthodes d'investigation. Dans notre première étude, le modèle utilisé a été celui d'une cardiopathie ischémique segmentaire induite chez le rat et qui nous a permis d'établir la présence de cardiomyocytes fœtaux injectés dans la zone bordante de l'infarctus du myocarde 48h après la greffe. Ensuite, sur un modèle murin d'infarctus reperfusé, nous avons analysé la fonction ventriculaire un mois après la greffe par échocardiographie bi-dimensionnelle. Les résultats obtenus ont été encourageants, avec une fonction significativement supérieure dans le groupe traité. Dés lors nous avons étudié les conséquences de la greffe cellulaire sur un modèle de cardiomyopathie globale induite par les anthracyclines. Les résultats obtenus ont confirmé le bénéfice fonctionnel de la greffe en montrant une amélioration de la fonction ventriculaire dans le groupe traité par rapport à une stabilisation de cette fonction dans le groupe contrôle. Dans notre quatrième étude, nous avons comparé l'efficacité de transplantation des myoblastes squelettiques et des cardiomyocytes fœtaux. Une semaine après l'infarctus chez le rat, la fonction ventriculaire a été analysée et ensuite les animaux ont été transplantés. Un mois après la greffe la fonction ventriculaire gauche s'améliore de façon significative et équivalente dans les deux groupes. La démonstration d'un effet positif de la transplantation de myoblastes squelettiques constitue une avancée majeure vers l'exploitation clinique du concept de transplantation cellulaire dans la mesure où elle pourrait déboucher sur des autogreffes.
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Koutsouris, Dionissios. "Etude de la deformabilite erythrocytaire par la methode du debit initial de filtration et l'analyse du temps de transit cellulaire." Paris 5, 1987. http://www.theses.fr/1987PA05S015.
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Mesgouez, Menez Catherine. "Approches physiopathologiques des odontoblastes." Paris 7, 2005. http://www.theses.fr/2005PA07A001.
Анотація:
Les odontoblastes sont des cellules post-mitotiques secrétant une matrice extracellulaire qui sera ensuite minéralisée pour former la dentine. Toutes les investigations portant sur le rôle direct des odontoblastes au cours de la dentinogenèse, réalisées in vivo, in vitro en cultures organotypiques, ou cultures primaires sont parfois difficiles à interpréter. Les clones cellulaires, modèles plus réducteurs, sont une ouverture dans divers domaines de recherche. L'objectif de ce travail est d'étudier des lignées immortalisées d'odontoblastes de souris comme une alternative possible pour les recherches expérimentales sur la différenciation des odontoblastes et la dentinogenèse. Après des études morphologiques en microscopie électronique à balayage et à transmission, la localisation immunohistochimique du collagène de type I, de la sialoprotéine dentinaire, marqueur de la différenciation odontoblastique, et de l'actine, une localisation histochimique, histo-enzymologique et un dosage biochimique de la phosphatase alcaline ont été également réalisés. Les clones étudiés présentent les critères du phénotype odontoblastique et aussi les caractéristiques de morphodifférenciation d'odontoblastes polarisés à un niveau cellulaire, mais avec une apparente distribution aléatoire. Ils s'avèrent donc être des modèles adaptés à l'étude biochimique de la régulation de la physiologie des odontoblastes par des facteurs biologiques et / ou thérapeutiques. Des travaux récents remettent a l'ordre du jour la théorie selon laquelle l'odontoblaste serait une cellule sensorielle. Ces données récentes pourraient nous permettre de mieux appréhender un problème clinique majeur qui est l'hypersensibilité dentinaire. Les traitements proposés sont très variés, la méthode la plus simple étant l'utilisation quotidienne de pâtes dentifrices. L'efficacité d'une nouvelle formulation de pâte dentifrice à visée thérapeutique a été démontrée par une oblitération des canalicules dentinaires lors d'une étude in vitro.
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Cammilleri, Serge. "Biodistribution des oligonucléotides de synthèse pour le ciblage des facteurs de croissance cellulaire." Paris 5, 1998. http://www.theses.fr/1998PA05CD09.
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Vassord, Camille. "Pharmacogénomique fonctionnelle du Busulfan : implication dans le fonctionnement et l'endommagement de l'endothélium dans un modèle cellulaire in vitro." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077183.
Анотація:
Le busulfan (Bu) est largement utilisé lors des régimes de conditionnement précédent une greffe de cellules souches hématopoïétiques. La complication majeure et la plus grave des conditionnements est la vaso- occlusion hépatique (HVOD). Le degré de bioexposition du Bu semble être le déterminant majeur de la pathogenèse des HVOD car il induirait l'endommagement des cellules sinusoïdales et des hépatocytes adjacents, événement déclencheur des HVOD. Nous avons ainsi étudié l'expression de différents gènes impliqués dans : le métabolisme du Bu (GSTs), la vasomotricité (ET-1), la coagulation (TF) et l'inflammation (ICAM-1 et PECAM-1). Nous avons montré que les cellules endothéliales (CE) n'exprimaient pas GSTA1, accentuant ainsi leur sensibilité aux toxicités du Bu. De plus, le Bu n'altère pas l'expression de GSTM1 mais diminue celle de GSTT1 dans ces cellules. Ainsi, GSTM1 serait le seul rempart de protection des CE. Les résultats obtenus concernant les facteurs hémostatiques et inflammatoires sont en contradiction avec leur implication dans la pathogenèse des HVOD. Ainsi, l'ensemble de ces résultats suggère que la toxicité du Bu ne se traduirait pas par l'endommagement primaire de l'endothélium mais plutôt par une desquamation endothéliale mettant ainsi à nu l'espace subendothélial, site favorisant l'inflammation et la coagulation. Ceci permettrait d'expliquer les bénéfices cliniques observés lors de l'administration prophylactique de défibrotide, molécule antithrombotique, antiinflammatoire et anticoagulante se liant fortement à l'endothélium. La meilleure compréhension des mécanismes physiopathologiques des HVOD permettra l'élaboration de nouvelles stratégies thérapeutiquesBusulfan (Bu) is commonly included in conditioning regimen prior to hematopoietic stem cell transplantation. Hepatic veno-occlusive disease (HVOD) is regarded as the major and lethal complication of conditioning. High Bu bioexposition is considered to be the major determinant of sinusoides endothelial cell and hepatocytes damage, the precipating event of HVOD. We analysed different gene expression status implicated in : Bu metabolism (GSTs), vasomotricity (ET-1), coagulation (TF) and inflammation (ICAM-1 and PECAM-1). We showed that endothelial cells (EC) do not express GSTA1 which may render ECs vulnerable to Bu-mediated toxicities. Furthermore, Bu do not modulate GSTM1 and down-regulate GSTT1 in these cells. Hence, GSTM1 seem to be the only protector of EC to Bu-mediated toxicities. Results concerning hemostatic and inflammatory factors are not in agreement with their involvment in HVOD pathogenesis. These results suggest that Bu is not directly implicated in primary EC damage but rather in endothelial desquamation leading to exposition of the subendothelial matrix, a coagulation and inflammatory-generating site. This is in line with the beneficial effect of defibrotide prophylaxis, an antithrombotic, antiinflammatory and anticoagulant molecule which adhere firmly to endothelium. A better understanding of HVOD mechanisms should lead to the emergence of appropriate and personnalized therapies
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Gérard, Catherine. "Intérêt des hydrogels polysaccharidiques en ingénierie du cartilage." Nancy 1, 2005. http://www.theses.fr/2005NAN11313.
Анотація:
Notre travail de thèse a pour objectif de promouvoir un cartilage cicatriciel de bonne qualité dans une lésion focale expérimentale du cartilage. La thématique de recherche repose sur trois axes principaux complémentaires : la cellule (le chondrocyte), le biomatériau (matrice extracellulaire) et la contrainte biomécanique (méchanotranduction). Chacun de ces axes joue un rôle dans le processus de réparation, individuellement, mais surtout en synergie. Pour cela, différentes techniques ont été mises au point pour optimiser le biomatériau, stimuler les cellules et caractériser le tissu de réparation. Ainsi un système de culture chondrocytaire 3D en bille d'alginate avec acide hyaluronique a été développé, en soulignant l'influence favorable des contraintes mécaniques. La synthèse des composants matriciels a été appréhendée par électrophorèse capillaire de zone. Dans une seconde partie, une caractérisation moléculaire (qPCR) des chondrocytes en bille a été réalisée en soulignant les différences d'expression de rnRNA entre un cartilage hyalin et un fibrocartilage, tout comme l'influence des contraintes mécaniques et d'une transfection par le TGFIβ et la BMP. Enfin, l'implantation de chondrocytes dans une bille d'alginate dans une lésion focale du cartillage rotulien chez le rat, suggère bien le rôle important de la synergie chondrocyte / matrice extra-cellulaire pour obtenir une réparation de qualité du cartilage et une bonne bio-intégration en zone de contrainteOur thesis work aims to promote a good repair process for a focal chondral lesion. This workpackage associates three main axis : the cell component (the chondrocyte), the biomaterial (extracellular matrix) and the biomechanical constraint (mechanotransduction). Each actor plays a main role in the repair process, at least individually, but mostly in synergy. To this end, various techniques have been developed in order to optimize the biomaterial, to stimulate cells, and fmally to characterize the repair tissue. Three-dimensional chondrocyte culture in alginate plus hyaluronate have thus been developed, to underline the favorable influence of cyclic mechanical constraints. Extracellular matrix component synthesis has been assessed with Capillary Zone Electrophoresis. Secondly, a molecular characterization of encapsulated chondrocytes has been performed by using qPCR in hyaline cartilage versus fibrocartilage. Both lineages did not express the same level of cartilage-dedicated genes, either in basal conditions or after mechanical stimulation or transfection (TGF, BMP). Finally, in vivo implantation in the rat knee during a dedicated calibrated lesion in the patella suggest the favorable influence of a good collaboration between encapsulated chondrocytes and extracellular matrix to promote a good cartilage repair and a good biointegration in a biomechanical-constraint zone
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Filomenko, Rodolphe. "Régulation de la mort cellulaire induite par des agents cytotoxiques : rôles de la PKC zeta et de la caspase-10." Dijon, 2004. http://www.theses.fr/2004DIJOMU11.
Анотація:
Le travail réalisé au cours de cette thèse souligne que présente la protéine Kinase Czêta et la caspase-10 dans l'élaboration de nouvelles stratégies de chimiosensibilisation. Il est possible d'induire la mort par apoptose (processus physiologique nécessaire au bon fonctionnement de l'organisme) par des agents cytotoxiques dans le but d'éliminer les cellules tumorales, qui sont capables de mettre en place des mécanismes de résistance très complexes. J'ai montré que des cellules exprimant une PKC zêta non fonctionnelle sont plus sensibles à la mort cellulaire induite par l'étoposide et par le TNF alpha. L'expression de cette protéine mutée inhibe l'activation du facteur de transcription NF-kB contrôlant la traduction de protéines impliquées dans la prolifération et la survie cellulaire. Des tumeurs induites chez la souris nude, par des cellules exprimant la protéine non fonctionnelle, ont une croissance tumorale ralentie et sont plus sensibles à l'apoptose que les tumeurs établies par les cellules contrôles suite à un traitement par l'étoposide ou par le TNF alpha. J'ai également établi que la caspase-10 est essentielle à l'apoptose induite par l'étoposide d'une manière indépendante au récepteur de mort Fas. Des cellules exprimant une forme déficiente de cette caspase, sont plus résistantes à l'apoptose chimio-induite. C'est la première fois que cette caspase est impliquée de façon post-mitochondriale, puisqu'elle n'influe pas sur le niveau de la dépolarisation mitochondriale et sur la libération du cytochrome c, et qu'elle module l'activation d'autres caspases dans ces voies de mort.
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Tinevez, Jean-Yves. "Mouvements actifs, régulés par le calcium, de la touffe ciliaire des cellules ciliées mécano-sensorielles de l'oreille interne." Paris 7, 2006. https://hal.archives-ouvertes.fr/tel-01239897.
Анотація:
Le comportement dynamique d'une touffe ciliaire (l'organelle mécano-sensible des cellules ciliées de l'oreille interne) est très varié. Une touffe ciliaire peut osciller spontanément, avoir une réponse de type « excitable » ou simplement relaxer en réponse à un échelon de force. En utilisant la iontophorèse pour modifier la concentration en calcium à proximité d'une touffe ciliaire du saccule de la grenouille taureau, et en mesurant les relations force/déplacements de cette organelle, nous sommes parvenus à réconcilier ces manifestations contrastées de sa motilité active. Nous utilisons le calcium et/ou des biais statiques appliqués à la position de la touffe ciliaire pour contrôler la probabilité d'ouverture au repos et par là, son point de fonctionnement. Dans le cas de touffes ciliaires non oscillantes, nous montrons que la polarité et la cinétique des mouvements ciliaires actifs observés en réponse à un échelon de stimulation dépendent du point de fonctionnement de la cellule. Lorsque la relation force/déplacement de la touffe ciliaire possède une région de raideur négative, des oscillations spontanées peuvent être déclenchées lorsque le point de fonctionnement est placé au sein de cette région instable. Seuls deux ingrédients sont nécessaires pour interpréter ces manifestations de la motilité ciliaire active l'existence d'une relation force/déplacement non linéaire conséquence de l'activation mécanique directe dei canaux de transduction, et l'activité du moteur d'adaptation, fondé sur les myosines et dépendant du calcium Des simulations numériques reproduisent avec succès un grand nombre d'observations expérimentales, dan des conditions différentes et sur des animaux variés, suggérant qu'un seul mécanisme actif est nécessaire pour décrire toute la gamme des mouvements actifs observés sur les touffes ciliaires des cellules ciliéesThe dynamical behaviour of a hair bundle - the mechanosensitive organelle of the hair cells found in the inner ear- is rich. A hair bundle can oscillate spontaneously, "twitch" or simply relax in response to a force step. Using iontophoresis to affect the Ca²+ concentration near a hair bundle from the bullfrog's sacculus and displacement-clamp measurements of the bundle's force-displacement relations, we were able to reconcile these contrasting manifestations of active hair-bundle motility. We used Ca²+ and offsets of the bundle's mean position to control the fraction of open transduction channels at steady state and thus the bundle's operating point. In the case of non oscillatory hair bundles, we found that the polarity and kinetics of active hair-bundle movement evoked by a step stimulus depended on the bundle's operating point in the nonlinear force-displacement relation. When the force-displacement relation displayed a region of negative stiffness, spontaneous hair-bundle oscillations arose when the hair bundle was required to operate within this unstable region. Only two ingredients are necessary to account for the various incarnations of active hair-bundle motility: non linear gating compliance of the transduction apparatus and the Ca²+-regulated activity of the myosin-based adaptation motor. Numerical simulations successfully reproduced a wide range of observations from different experimental situations and animal species, thereby suggesting thatonly one force-generating mechanism is needed to describe the seemingly opposite movements that the hair-bundle can produce
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Blancher, Christine. "Etude d'un nouvel adnc codant pour une proteine de la matrice extra cellulaire appartenant a la famille des pexines : la nectinepsine." Paris 5, 1996. http://www.theses.fr/1996PA05S008.
Анотація:
Au cours de ce travail, nous avons isole un nouvel adnc d'une banque de neuroretine de caille de 2 jours. Chez la caille, les arnm detectes a l'aide de ce clone ont une taille de 2. 2, 4. 2 et 6. 5 kb. Ces transcrits sont egalement exprimes dans le foie, le cerveau et l'intestin. Chez les mammiferes, deux arnm nectinepsine de 2 et 5 kb sont mis en evidence, ainsi que dans le retinoblastome humain. De plus, les arnm nectinepsine presentent un profil d'expression suggerant un epissage differentiel, dans deux lignees de cellules de neuroretine de caille immortalisees par le virus du sarcome de rous. Nous avons nomme, nectinepsine, la sequence polypeptidique deduite de l'adnc. Cette proteine presente un domaine rgd de reconnaissance cellulaire, un motif consensus du site actif des aspartyl proteases, ainsi que d'importantes homologies avec une molecule adhesive de la matrice extracellulaire (mec), la vitronectine. De plus, la nectinepsine presente les domaines communs a l'hemopexine, la vitronectine et la plupart des metalloproteases dans la famille des pexines. Des etudes en western blot a l'aide d'un antiserum dirige contre la vitronectine humaine, nous ont permis de mettre en evidence chez la caille et les mammiferes, deux proteines de 45 et 54 kda, distinctes de celles de la vitronectine. La construction d'un vecteur retroviral contenant la sequence specifique de la rectinepsine en antisens, transfectee dans les cultures de fibroblastes de poule conduit a la disparition de la bande de 54 kda. La nectinepsine correspond a la nouvelle forme de 54 kda de la vitronectine decrite dans le jaune d'oeuf de poule par nagano et coll. La nectinepsine est une nouvelle proteine de la mec. Elle pourrait jouer un role dans l'equilibre modulant les mecanismes d'adherence cellulaire et de degradation des composants de la mec au cours du developpement. L'expression des arnm nectinepsine semblent soumis a une regulation, qui pourrait etre modifiee lors de l'immortalisation cellulaire dans des processus pathologiques comme la proliferation tumorale et les phenomenes metastasiques.
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Lopez, Sandra. "Rôle du cofacteur cellulaire TIP47 dans l'incorporation de la glycoprotéine d'enveloppe dans les particules virales du VIH-1." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077170.
Анотація:
La formation de nouveaux virus VIH-1 infectieux requiert la rencontre de trois composants majeurs viraux : la glycoprotéine d'enveloppe (Env), le précurseur Gag et l'ARN génomique. L'incorporation de Env dans la particule virale Gag est une étape cruciale puisqu'elle confère aux virions néoformés la capacité d'infecter de nouvelles cellules cibles. Pourtant les mécanismes qui la président sont largement méconnus. La première partie de mon travail de thèse a permis d'identifier le premier cofacteur cellulaire, TIP47, requis pour l'incorporation de Env. TIP47 permet l'association entre Gag et Env en interagissant simultanément avec le domaine matrice de Gag et avec le domaine cytoplasmique de la sous-unité transmembranaire TMgp41 de Env. L'incorporation de Env VIH-1 est régulée par un mécanisme actif, dans lequel l'interaction entre Gag, TIP47 et Env joue un rôle central. TIP47 est essentiel pour l'incorporation de Env dans des virions produits par divers types cellulaires cibles du VIH-1 comme les lymphocytaires T CD4+ ou les macrophages primaires. La seconde partie de ma thèse a permis la caractérisation d'un nouveau groupe de partenaires du domaine cytoplasmique de la TMgp41 de Env VIH-1 : des facteurs de transcription ancrés dans le réticulum endoplasmique. Env peut ainsi participer à la régulation de diverses voies cellulaires. L'interaction de Env avec l'un de ces facteurs, Luman, inhibe son activation. Luman inhibe l'activité de transactivation des gènes du VIH-1 et Env semble contrecarrer cette inhibition. A l'inverse, ATF6 et SREBP, les deux autres facteurs, qui sont nécessaires pour la replication du virus, seraient quan à eux activés lors de l'infection du VIH-1The formation of new infectious HIV-1 viruses requires the encounter between three major viral components: the envelope glycoprotein (Env), the Gag precursor and the genomic RNA. Env incorporation into the viral Gag particles is a crucial step since it confers to the newly formed virions the capacity to infect new target cells. Yet the mechanisms of Env incorporation are not well known. The first part of my thesis allowed us to identify the first cellular cofactor, TIP47, required for Env incorporation. TIP47 permits the association between Gag and Env by interacting simultaneously with the matrix domain of Gag and with the cytoplasmic domain of the transmembrane subunit TMgp41 of Env. HIV-1 Env incorporation is an active mechanism, in which the interaction between Gag, TIP47 and Env plays a central role. TIP47 is essential for Env incorporation into virions produced by différent target cells of HIV-1, as T CD4+ lymphocytes and primary macrophages. The second part of my thesis allowed the characterization of a new group of partners of the cytoplasmic domain of TMgp41 of HIV-1 Env: transcription factors anchored in the endoplasmic reticulum. Thus, Env can participate in the regulation of different cellular pathways. The interaction between Env and one of these factors, Luman, inhibits its activation. Luman inhibits the transcriptional activity of HIV-1 genes, and Env seems to counteract this inhibition. On the other hand, ATF6 and SREBP, the other factors we identified, are necessary for viral replication and might be activated during HIV-1 infection
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Dika, Nguea Hermine. "La culture de macrophages comme modèle prédictif de la toxicité et de la biopersistance des fibres minérales artificielles." Nancy 1, 2005. http://www.theses.fr/2005NAN11310.
Анотація:
La toxicité des fibres minérales artificielles (FMA) est couramment évaluée par des tests de biopersistance sur des animaux. Les toxicologues et les industriels sont à la recherche de nouveaux tests prédictifs in vitro pour limiter les tests in vivo. Pour aborder l'étude in vitro de la toxicité des FMA, notre tâche a été d'élaborer un test pour étudier leur persistance au contact d'une lignée de macrophages humains (U-937). Avec des extraits bactériens et des cytokines synthétiques, nous avons modélisé in vitro l'interaction fibres/macrophage permettant l'étude de leur dégradation physique et chimique. L'analyse du transcriptome du macrophage, dans les conditions de ce test, à l'aide de puces à ADN nous a permis d'avancer l'hypothèse que les espèces réactives générées par le stress oxydant seraient responsables de cette dégradation. Cette dégradation obtenue in vitro seulement après 7 jours, est identique à celle observée après expérimentation in vivo et prédit la clearance pulmonaire des FMA obtenue chez le rat. Nous avons établi les bases d'un test in vitro discriminatif permettant un criblage préliminaire de nouvelles compositions de fibres minérales.
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Félin, Murielle. "Interactions glycoproteine-lectine dans le noyau des cellules de la lignee myeloblastique leucemique humaine hl60." Paris 5, 1996. http://www.theses.fr/1996PA05S012.
Анотація:
La regulation de certaines activites nucleaires par des interactions glycoproteine-lectine est supposee depuis la decouverte de ces proteines dans le noyau cellulaire. Toutefois, l'existence de telles interactions restait hypothetique. En effet, les lectines nucleaires isolees jusqu'alors se fixaient, soit au glucose, soit aux galactosides, tandis que les glycoproteines nucleaires les mieux caracterisees comportaient des residus n-acetylglucosamine. Notre travail, realise sur la lignee myeloblastique leucemique humaine hl60, a donc consiste a rechercher des lectines nucleaires et leurs ligands glycosyles, afin d'etudier le role de ces complexes. Les resultats essentiels obtenus sont : i) la description de la lectines nucleaires potentiellement capables de reconnaitre des glycoproteines contenant des residus n-acetylglucosamine : la cbp70 (cbp carbohydrate-binding protein), qui reconnait le glucose mais avec une meilleure affinite la n-acetylglucosamine et la cbp22, qui est specifique de la n-acetylglucosamine, ii) la mise en evidence d'une interaction proteine-proteine entre la cbp35 (specifique des galactosides) et la cbp70, rompue par la fixation soit de lactose sur la cbp35, soit de n-acetylglucosamine sur la cbp70. Ainsi, des interactions glycoproteine-lectine pourraient moduler des interactions proteine-proteine au sein du noyau. Un tel systeme pourrait etre implique dans la regulation de l'epissage des pre-arnm, iii) l'isolement d'un ligand glycosyle de la cbp70 et la demonstration que l'interaction des deux partenaires est de type glycoproteine-lectine. Ce ligand est uniquement nucleaire mais d'autres ligands potentiels de la cbp70 existent dans le cytoplasme, ou cette derniere a egalement ete detectee. En conclusion, l'isolement, pour la premiere fois, d'une lectine nucleaire et de son ligand glycosyle, ouvre des perspectives nouvelles dans la comprehension des mecanismes de regulation de l'expression genetique.
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Fournier, Benjamin. "Thérapie cellulaire de l'anévrisme aortique par le fibroblaste gingival : études ex vivo et in vivo." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T019.
Анотація:
L'anévrisme aortique abdominal s'accompagne d'une dégradation du réseau élastique et d'une augmentation des métalloprotéases. Nous avons essayé de transposer les qualités de réparations du fibroblaste gingival sur ces artères dans des modèles ex-vivo et in vivo. Un modèle de culture d'artère de lapin en gel de collagène est évalué puis utilisé en coculture avec des fibroblastes gingivaux pour évaluer l'effet de ces fibroblastes sur le remodelage artériel. Les fibroblastes gingivaux sont également cultivés avec des artères issues d'anévrismes aortiques humains. Enfin notre hypothèse est testée sur un modèle d'anévrisme chez le lapin où les cellules sont transférées par voie endoluminale. En coculture, les fibroblastes gingivaux inhibent la MMP-9 par une augmentation de son inhibiteur le TIMP-1. La même inhibition est présente dans des cocultures avec des artères anévrismales humaines. La MMP-7 est également inhibée par augmentation du TIMP-1 mais aussi au niveau transcriptionnel par une augmentation du TGF-pl. Ces cocultures permettent la préservation du réseau élastique artériel. Le transfert des fibroblastes dans des anévrismes créés chez le lapin entraîne la diminution de leurs diamètres et de la MMP-9. Ces résultats obtenus sur des modèles ex vivo et in vivo montrent la capacité des fibroblastes gingivaux à préserver le réseau élastique et à moduler l'activité de protéases impliquées dans la pathologie. La transplantation de fibroblastes gingivaux semble être une approche intéressante dans le traitement des anévrismes aortiques. Néanmoins des expériences complémentaires sont nécessaires pour confirmer nos résultats et comprendre comment le fibroblaste gingival influe positivement le remodelageAortic abdominal aneurysm is accompanied by a degradation of the elastic network and an increase of the metalloproteinases. We tried to transpose repair qualities of the gingival fibroblast on these arteries in ex-vivo and in vivo models. A culture model of rabbit artery in collagen gel is evaluated then used in coculture with gingival fibroblasts to evaluate the effect of these fibroblasts on arterial remodeling. The gingival fibroblasts are also cultivated with human aneurismal aortas. Finally our hypothesis is tested on an in vivo model of rabbit aneurism where the cells are transplanted into the lumen. In coculture, the gingival fibroblasts inhibit MMP-9 by an increase of its inhibitor: TIMP-1. Same inhibition is present in cocultures with human aneurismal aortas. The MMP-7 is also inhibited by increase in the TIMP-1 but also at a transcriptional level by an increase of TGF-pl. These cocultures allow the preservation of the arterial elastic network. The transfer of the fibroblasts in aneurisms created in rabbit reduced their diameters and the MMP-9. These results obtained on ex vivo and in vivo models show the capacity of the gingival fibroblasts to preserve the elastic network and to modulate the activity of proteases implied in pathology. The transplantation of gingival fibroblasts seems to be an interesting approach in the treatment of aortic aneurisms. Nevertheless complementary experiments are necessary to confirm our results and to understand how the gingival fibroblast influences remodeling
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Solet, Jean-Michel. "Mécanismes de biotransformation de la thiocolchicine par une suspension cellulaire de "Centelia asiatica" L : démethylation et glucosylation : étude de la glucosyltransférase." Paris 11, 1993. http://www.theses.fr/1993PA114827.
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Barral, Jérémie. "L' amplificateur ciliaire des cellules ciliées de l'oreille interne." Paris 7, 2011. http://www.theses.fr/2011PA077015.
Анотація:
L'audition bénéficie d'un dispositif d'amplification non-linéaire afin de détecter une large gamme d'intensités sonores. Le mécanisme sous-jacent pourrait provenir de la production active de force par la touffe ciliaire mécano-sensorielle des cellules ciliées. Cette organelle peut en effet osciller spontanément et agir comme un amplificateur non-linéaire sélectif en fréquence. En analysant la dynamique d'une touffe ciliaire issue du saccule de la grenouille taureau et immergée dans différents milieux visqueux, nous évaluons l'effet de la friction hydrodynamique. Nous montrons que les fluctuations intrinsèques, dues au faible nombre de molécules composants la touffe ciliaire, créent la source dominante de friction. En combinant application de force et simulation stochastique en temps réel de la mécanique ciliaire, nous avons mimé un environnement virtuel dans lequel une touffe ciliaire réelle est élastiquement couplée à deux voisines, simulant ainsi les conditions in vivo. Nous mettons en lumière l'effet du couplage sur l'augmentation de la cohérence de phase et la réduction du bruit. L'amplificateur auditif dépendrait donc de la coopération entre touffes ciliaires voisines afin d'accroître sa sensibilité et sa sélectivité fréquentielle. L'amplification non-linéaire est le prix à payer pour la sensibilité. Nous montrons que la réponse d'une touffe ciliaire à un stimulus complexe présente l'émergence de produits de distorsion et de phénomènes de masquagt qui rappellent ceux observés au niveau psychoacoustique. Nous soutenons que l'audition dépend du comportement générique d'oscillateurs actifs non-linéaires qui façonnent la sensation sonore à la périphérie di système auditifThe vertebrate ear benefits from nonlinear mechanical amplification to operate over a vast range of sound intensities. The amplificatory process is thought to emerge from active force production by sensory hair cells. The mechano-sensory hair bundle that protrudes from the apical surface of each hair cell can oscillate spontaneously and function as a frequency-selective, nonlinear amplifier. By analyzing the dynamics of a bullfrog's saccule hair bundle immersed in various viscous milieus, we evaluated the effect of hydrodynamic friction. We observed that intrinsic fluctuations, owing to the small number of molécules inside the hair bundle, create the dominant source of friction. By combining dynamic force clamp of a hair bundle with real-time stochastic simulations of hair-bundle mechanics, we could mimic a virtual environment in which a real hair-bundle is elastically coupled to two neighbours. This strategy is supposed to emulate the mechanical coupling that is observed in vivo. We found that coupling increased the phase coherence of spontaneous hair-bundle oscillations by effectively reducing noise. We argue that the auditory amplifier relies on hair-bundle cooperation to overcome intrinsic noise limitations and achieve high sensitivity and sharp frequency selectivity. Nonlinear amplification is the price to pay for high sensitivity. Two-tone stimulation of a single hair bundle generates distortion products and manifests masking phenomena, reminiscent of psychoacoustics studies. We thus argue that hearing relies on the generic behavior of active nonlinear oscillators that shapes the sensation of sounds at the periphery of the auditory System
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Klimchenko, Oléna. "Différenciation hématopoïétique des cellules souches embryonnaires humaines." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077056.
Анотація:
L'hématopoïèse chez les vertébrés comporte deux vagues : l'une extra embryonnaire, transitoire dite primitive et la seconde d'origine intra embryonnaire dite définitive. Cette séquence chez les mammifères a bien été étudiée chez la souris La disponibilité limitée d'échantillons humains au stade des premières semaines du développement fait des cellules souches embryonnaires humaines (hES) un outil unique pour étudier les différents événements qui surviennent au cours de l'ontogenèse. L'objectif de ma thèse était d'étudier l'hématopoïèse embryonnaire en se basant sur le modèle des cellules ES pour caractériser des changements ontogéniques et mieux comprendre la physiopathologie de certaines hémopathies qui surviennent sur des progéniteurs foetaux. La première partie a été consacrée à l'étude du développement de la lignée érythroide et mégacaryocytaire. Ce travail a permis d'identifier un progéniteur bipotent érythro-mégacaryocytaire (MEP) au cours de l'hématopoïèse embryonnaire primitive humaine. Nous avons également montré que le MEP se situe en amont des progéniteurs monopotents commis exclusivement vers la lignée érythroïde et mégacaryocytaire et produisent respectivement les érythrocytes matures nucléés et les plaquettes. L'étude de la régulation spécifique du développement des MEPs embryonnaires a permis d'établir les mécanismes moléculaires de l'engagement vers une lignée spécifique pendant les différenciations érythroblastiques et mégacaryocytaires primitives. Ces résultats suggèrent que l'hématopoïèse primitive du sac vitellin chez l'homme est associée à l'émergence simultanée des lignées érythroblastiques et mégacaryocytaires. La deuxième partie de ma thèse a été consacrée à l'étude de l'ontogénie de la lignée monocytaire humaine. Ce travail nous a permis de montrer que le processus de différenciation des monocytes et des macrophages à partir des cellules ES humaines reproduit les grandes étapes de la monocytopoïèse observée chez l'adulte dans la moelle osseuse. Nous avons observé que les macrophages générés à la fois dans des cultures de cellules embryonnaires et foetales étaient fonctionnels, capables de phagocytose ainsi que de sécrétion d'interleukines et de facteurs de croissance. L'étude des interleukines produites a mis en évidence aussi bien au niveau moléculaire que protéique une balance vers un phénotype anti-inflammatoire ainsi qu'une réponse déficiente à la stimulation par le LPS et l'IFNy. Ces données complétées par le fait que les macrophages expriment fortement une grande variété de cytokines pro-angiogéniques et des quantités très importantes de métalloprotéases permettent de les classer dans le groupe des macrophages polarisés M2 doués principalement d'une fonction trophique et de remodellage tissulaire. La comparaison des systèmes de différenciation vers la lignée monocytaire à partir des cellules hES et des cellules CD34+ adultes et foetales dans les mêmes conditions cytokiniques suggère que les différences ontogéniques pourraient reposer sur des voies de différendation distinctes. L'ensemble de ces résultats suggère que les monocytes/macrophages issus de cellules embryonnaires et foetales humaines ont en commun des propriétés antiinflammatoires et trophiques qui pourraient avoir un rôle majeur dans l'implantation et le développement du foetus dans les premières semaines de la vieHematopoiesis in vertebrates includes two waves: one transitional extraembryonic called primitive and the second intra-embryonic origin called definitive. This sequence in mammals has been well studied in mice and much more difficult in humans for ethical reasons. The development of cell lines of human embryonic stem) offers a unique cellular model to study the different events mat occur during ontogeny. The goal of my thesis was to study embryonic hematopoiesis in the ES cell model to characterize the ontogenetic changes and better understand the pathophysiology of certain malignancies that occur on fetal progenitors. The first part of my thesis was devoted to studying the development of erythroid and megakaryocytic lineage. This work has identified the bipotent erythro-megakaryocytic progenitor (MEP) during thé embryonic primitive human hematopoiesis. We also showed that the MEP is upstream of monopotent progenitors committed exclusively to erythroid and megakaryocytic and produce mature nucleated erythrocytes and ,respectively. Platelets. The study of the specific regulation of embryonic development of MEPs help to establish the molecular mechanisms of commitment to a specific lineage differentiation during erythroblastic and megakaryocytic primitive. These results suggest that the primitive yolk sac hematopoiesis in humans is associated with the simultaneous emergence of erythroblastic and megakaryocytic fines. The second part of my thesis was devoted to the study of the ontogeny of human embyonic monopoesis. This work has enabled us to show that the process of macrophage differentiation from human ES cells reproduces the main stages of monopoiesis observed in adult bone marrow. Monocytic cells derived from human ES cells (huESC) express a combination of cell-surface markers that overlap with adult blood resident monocytes and showed an anti- inflammatory state that was confirmed at the level of secreted proteins. This polarization appeared to be related to ontogeny as fetal liver CD34+ cells- derived monocytic cells demonstrated a very similar phenotype. Both embryonic and fetal monocytic cells showed an enhanced expression of genes encoding tissue degrading enzymes, anti-inflammatory chemokines and scavenger receptors. They secreted high amounts of proteins acting on tissue remodeling and angiogenesis in comparison to blood adult monocytes and they promoted the development of large blood vessels in xeno-transplanted human tumors. These ontogenic functional properties correlated with a specific pathway of differentiation. These findings suggest that the differentiation of monocytic cells during human development may produce a majority of cells endowed mainly with antiinflammatory and trophic fonctions, supporting human fetus development
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Fougeron, Delphine. "Caractérisation moléculaire et cellulaire de l'activité adjuvante de la flagelline dans la vaccination muqueuse." Thesis, Lille 2, 2013. http://www.theses.fr/2013LIL2S024/document.
Анотація:
La vaccination est un moyen de prévention très efficace contre les infections. La majorité des vaccins sont administrés par voie sous-cutanée ou intra-musculaire avec des adjuvants et stimulent ainsi des réponses immunitaires adaptatives systémiques. Les muqueuses représentent une porte d’entrée majeure pour de nombreux pathogènes ayant un impact en Santé Publique. Cependant, peu de vaccins sont délivrés par les muqueuses en raison du manque d’adjuvants adaptés à ces voies. Ainsi le développement d'adjuvants muqueux permettrait la stimulation de réponses immunitaires locales et une protection efficace avant la dissémination des pathogènes. Les agonistes des Toll-Like-Receptors (TLR) sont développés comme adjuvants vaccinaux car ils stimulent l’immunité innée et adaptative. Au laboratoire, la flagelline de Salmonella enterica qui est un puissant agoniste de TLR5 est utilisée comme modèle afin de disséquer les mécanismes d’action des adjuvants muqueux. En effet, l'administration intranasale de vaccins adjuvantés par la flagelline se caractérise par une réponse T CD4+ de type Th1/Th2, une réponse en anticorps sécrétoires dans le compartiment respiratoire et une réponse systémique contre les antigènes vaccinaux. Seule l’activation de TLR5 dans le compartiment épithélial est nécessaire à l’activité adjuvante.Dans un premier temps, l'analyse transcriptionnelle du tissu pulmonaire a permis d'identifier une signature épithéliale spécifique du recrutement de cellules immunitaires, en particulier de monocytes et de neutrophiles ainsi que de l'activation fonctionnelle des cellules dendritiques. L'analyse de la dynamique cellulaire au niveau du tractus respiratoire et des ganglions drainants a ensuite été réalisée en réponse à l’administration intranasale de vaccin adjuvanté. Bien que les monocytes inflammatoires et les neutrophiles infiltrent massivement les poumons et capturent les antigènes, ils ne jouent pas de rôle majeur dans l’activation de la réponse immunitaire. Au contraire les cellules dendritiques conventionnelles CD11b+ capturent, migrent et présentent efficacement l’antigène aux lymphocytes T CD4+. A l'instar de l’effet adjuvant, l’activation de ces cellules dendritiques par la flagelline n'est pas directe mais requiert une expression de TLR5 dans les cellules structurales incluant les cellules épithéliales de la muqueuse. De plus, nos travaux suggèrent que les interleukines de la famille IL-1 ne sont pas à l'origine de la transactivation des cellules dendritiques.En conclusion, ce travail de thèse ouvre des perspectives intéressantes quant au développement d’adjuvants muqueuxMany pathogens of public health concern (including the influenza and respiratory syncytial viruses, and bacteria such as Streptococcus pneumoniae and Pseudomonas aeruginosa) enter the body via the respiratory tract in general and the lung mucosa in particular. Mucosal vaccines induce a local adaptive immune response (i.e. secretory antibodies and specific T cells) and constitute a unique means of directly preventing these infections. Most vaccines are delivered systemically and use systemic adjuvants. Although the few commercially available mucosal vaccines are generally effective, mucosal adjuvant candidates have not demonstrated sufficient levels of potency and safety. TLR signaling is instrumental for the induction of innate immunity and the concomitant ignition of adaptive immune responses. Thus TLR agonists are largely used as vaccine adjuvants. In the lab we use flagellin from Salmonella enterica (a potent TLR5 agonist) as a model to better understand the mode of action of mucosal adjuvants. The intranasal adjuvant effect of flagellin is characterized by an antigen-specific Th1/Th2 cell response, and a strong mucosal and systemic antibody response. However this adaptive immune response mainly depends on TLR5-mediated epithelial signaling.We used molecular profiling to show that cytokine/chemokine and dendritic cell maturation pathways are surrogate signatures for flagellin activation in the lung. Neutrophils and inflammatory monocytes were massively recruited to the lungs but were not essential for the adjuvant activity. In contrast, flagellin signaling did not induce a significant recruitment of conventional dendritic cells but enhanced their maturation and migration to the lymph nodes. In particular, CD11b+ migratory dendritic cells were essential for induction of a CD4+ T-cell response. Importantly, the functional activation of dendritic cells was independent of direct signaling via TLR5, suggesting the role of inflammatory cytokines produced by the activated epithelium. However or data suggest that IL-1 and IL-36 interleukins are not responsible for transactivation of dendritic cell. In conclusion, this thesis project opens up new perspectives for the development of mucosal adjuvants
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Pârvu-Ferecatu, Iona Costina. "Etude de nouvelles activités de p53 et Rb à la mitochondrie et dans le contrôle de l'apoptose." Versailles-St Quentin en Yvelines, 2008. http://www.theses.fr/2008VERS0043.
Анотація:
Les protéines p53 et Rb sont des régulateurs du cycle cellulaire et de l’apoptose et leur activité est altérée dans la plupart des cancers humains. Les travaux réalisés dans le cadre de ma thèse visaient à mieux comprendre le rôle de p53 et de Rb, tant dans l'apoptose que dans le contrôle de la survie cellulaire. Ainsi, nous avons mis en évidence, en condition de stress, que la protéine p53 est capable d’induire une nouvelle voie d’apoptose indépendante de la mitochondrie et qui est contrôlée par la caspase-9. L’action de celle-ci repose sur sa capacité à cliver la protéine Rb pour générer une forme tronquée p76Rb qui est capable de protéger les cellules de la mort induite par p53. Par ailleurs, nous avons décrit pour la première fois une localisation mitochondriale de protéines p53 et Rb dans de nombreux modèles de cellules en prolifération. A la mitochondrie, la protéine p53 est située au niveau des membranes tandis que la protéine Rb est retrouvée dans des compartiments internes de l’organite. Les régions de p53 qui sont impliquées dans la localisation mitochondriale sont distinctes de celles mise en jeu dans la fixation de p53 à l’ADN nucléaire ou à la mitochondrie en condition de stress. La protéine VDAC, une protéine canal de la membrane externe, apparaît comme un partenaire mitochondrial avec lequel p53 interagit en l'absence de stress. Le domaine à poche de la protéine Rb est nécessaire pour permettre à la protéine de se lier à la mitochondrie. Ces résultats suggèrent soit que la mitochondrie constitue un site de séquestration de p53 et de Rb, soit que ces protéines possèdent une activité spécifique au niveau de cet organiteSince their discovery, p53 and Rb proteins have been considerably studied mainly due to their regulatory function of cell cycle and apoptosis; their activities are found to be inactivated in most human cancers. During my PhD, I focused my interest in better understanding the role of p53 and Rb proteins in both apoptotic and living cells. First, we demonstrated that in stress conditions p53 is able to activate a mitochondria-independent alternative apoptotic pathway, which is under control of caspase-9. Moreover, we show that this caspase is able to cleave Rb protein, to generate a truncated p76Rb form which protects cells from p53-dependent apoptosis. Afterwards, we brought evidences of a mitochondrial localization of these proteins in proliferative cells, in many cell models, localization that has never been described before in such conditions. At mitochondria, p53 is mainly located at membranes level (inner or outer) while Rb displays more of an internal placement (inner-membrane or matrix). The domains of p53 involved in mitochondria localization of living cells seem to differ from those involved in nuclear or mitochondrial localization in stress conditions. The VDAC protein, one of most abundant proteins of mitochondrial outer-membrane, is the mitochondrial partner of p53 solely in living conditions. As for Rb, the pocket domain appears to be the one required for mitochondrial binding of the protein. These results suggest either that mitochondria may represent a sequestration site for both p53 and Rb, or that these proteins may be directly involved in mitochondria activity
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Morre, Jacqueline. "La calmoduline au cours de la spermatogenese et de la maturation epidymaire." Paris 5, 1986. http://www.theses.fr/1986PA05S002.
Анотація:
Mise en evidence de calmoduline dans le spermatozoide ejacule. Taux intracellulaire et localisation au cours des differentes etapes de differenciation morphologique. Dosage specifique et techniques immunocytochimiques utilisables en microscopie electronique
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Thomas, Emmanuel. "Nouveaux analogues de la vitamine D, agents de la différenciation cellulaire : conception, synthèse et évaluation biologique." Paris 11, 2005. http://www.theses.fr/2005PA114819.
Анотація:
Le métabolite actif de la vitamine D : le calcitriol joue, par l'intermédiaire de son récepteur le VDR, un rôle majeur dans l'organisme. Outre son action sur la régulation du taux plasmatique de calcium, il possède un effet sur la différenciation et la prolifération cellulaires dans de nombreux tissus cibles, lui conférant ainsi un potentiel thérapeutique intéressant. La synthèse d'analogues non hypercalcémiants de la vitamine D, agents de la différenciation cellulaire fait l'objet de ce travail. La stratégie de synthèse de ces composés repose sur une étape clé de couplage organométallique de type Negishi dont la mise au point sera détaillée ici. La préparation des différents intermédiaires bromures vinyliques et halogénures aromatiques polyhydroxylés nécessaires à l'obtention des analogues est aussi présentée. Enfin les analogues ont fait l'objet d'une évaluation biologique, afin de déterminer leur affinité pour le récepteur VDR et leur effet sur la différenciation cellulaireThe hormonally active metabolite of vitamin D : calcitriol, is now recognized as an important cell-cycle regulator, which influences cell proliferation, differentiation and apoptosis, in addition to its classical role in calcium homeostasis. The synthesis of new non hypercalcemic vitamin D analogs showing cellular differentiation effects, is the purpose of this work. The conception of these new compounds lies in a key-step Negishi-type coupling reaction which is fully described. The preparation of various vinylbromides and polyhydroxylated phenylhalides compounds, as analogs precursors, is also reported. Last but not least, the new vitamin D analogs have been tested for their affinity to VDR receptor and for their capacity to initiate cellular differentiation
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Freyburger, Ludovic. "Etude de la réponse immunitaire cellulaire systémique et humorale muqueuse suite à la vaccination par la sous-unité B de la toxine de Shigella Dysenteriae comme vecteur d'antigène." Paris 5, 2007. http://www.theses.fr/2007PA05T028.
Анотація:
La sous unité B de la toxine de Shiga (STxB) est un vecteur vaccinal ciblant les cellules dendritiques. Des réponses lymphocytaires T-CD4 et CD8 ainsi que la production d'anticorps ont été observées après vaccination de souris avec des protéines chimériques associant STxB couplée à différents antigènes. STxB ne favorisant pas la maturation des cellules dendritiques, nous avons évalué l'efficacité vaccinale de STxB mélangée à différents adjuvants. Ainsi, STxB couplée à différents antigènes et associée à l'aGalCer, glycolipide activant les cellules NKT, permet d'augmenter la fréquence de LT-CD8 et de réduire de façon drastique les doses d'antigènes. Cette combinaison vaccinale a également permis de rompre une tolérance à des antigènes du soi et de protéger contre le développement d'une infection virale. Par ailleurs, nous avons montré que la voie d'immunisation influait sur le type de réponses immunitaires (humorale muqueuse, cellulaire systémique) observées après l'utilisation de STxBThe Shiga toxin subunit B (STxB) is a vaccinal vector targeting dendritic cells. CD4+ and CD8+ T cells responses as well as antibody production were observed after vaccination of mice with chimeric proteins composed of STxB coupled with different antigens. STxB doesn't favour maturation of dendritic cells, thus we assessed the STxB efficiency as vector in combination with different adjuvants. STxB coupled with different antigens and mixed with aGalCer, a glycolipide activating NKT cells, resulted in an increase CD8+ T cells frequency and it also allowed the dramaticaly reduction of antigen doses. This vaccine also permitted to break tolerance to self-antigens and to protect against the development of viral infection. In addition, we have showed that the route of immunization had an influence on the type of immune response (mucosal humoral response jind cellular^ systemic response) observed after the use of STxB
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Geffroy, Marie-Christine. "Morphometrie, histo et cytodifferenciation au cours de l'organogenese de la prostate humaine." Paris 5, 1992. http://www.theses.fr/1992PA05S005.
Анотація:
Trois cent foetus et enfants ages de 8 semaines post-conceptionnelles jusqu'a 1 an ont ete etudies. Les methodes d'etudes appliquees ont ete la morphometrie informatisee et par comptage de points, la reconstruction selon la methode de born, les techniques histologiques standards, et des techniques histochimiques et immunohistochimiques. La morphometrie a montre une courbe bimodale, illustrant l'action des differents facteurs de croissance, des androgenes testiculaires et des oestrogenes maternels et placentaires. L'etude de la disposition des bourgeons en histologie standard et sur les reconstructions conforte la description en trois zones (centrale, peripherique et zone de transition) de l'anatomie prostatique. La cytodifferenciation specifique et non specifique a ete analysee aussi bien pour le mesenchyme prostatique que pour le contingent epithelial. Cette analyse a permis de montrer l'existence de gradients de differenciation entre les differents antigenes (actine et desmine, keratines, pap et psa), comme pour un antigene donne au cours de l'organogenese. Les memes gradients de differenciation ont ete retrouves pour l'expression des mucines. Les malformations de la prostate ont ete etudiees sur 63 foetus et enfants. Diverses alterations de l'architecture et de la cytodifferenciation epitheliale specifique ont pu etre retrouvees au cours de plusieurs syndromes malformatifs, chromosomiques et non chromosomiques. Une seule malformation primitive de la prostate a ete retenue, le syndrome de prune belly. Enfin, certains aspects retrouves au cours de la periode foetale ont ete rapproches d'aspects particuliers histologiques et histopathologiques de l'adulte, et notamment l'expression constante de l'antigene specifique de prostate par les canaux excreteurs des glandes de cowper et de littre, aussi bien de par l'epithelium des glandes prostatiques.
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Vitour, Damien. "Interaction de la protéine non structurale NSP3 de Rotavirus avec la protéine cellulaire RoXaN." Paris 11, 2005. http://www.theses.fr/2004PA114845.
Анотація:
Avec environ 500 000 décès annuels, les rotaviroses représentent l'une des causes majeures de gastroentérites infectieuses dans le monde. L'agent étiologique virale de ces infections, le rotavirus, code pour six protéines structurales (VP) et six protéines non structurales (NSP). Parmi celles-ci, la protéine NSP3 interagit avec l'ARN viral et le facteur de traduction eIF4G, et joue un rôle central dans la traduction des ARNm viraux. Un nouveau partenaire pour NSP3, la protéine cellulaire RoXaN (Rotavirus X protein associated with NSP3), a été identifiée. Ce travail avait pour objet l'étude de l'interaction NSP3-RoXan et la caractérisation des propriétés de la protéine RoXan. Les domaines d'interaction ont été identifiés sur les deux protéines. Ils impliquent la région centrale de NSP3 (aa 170-234), prédite en coiled-coil, et un domaine putatif Ld présent dans la région amino-terminale de RoXan (aa 255-279). RoXan a une distribution nucléo-cytoplasmique dans la cellule. Par ailleurs, nous avons pu montrer qu'elle était phosphorylable et que l'extrémité amino-terminale (aa 1-174), qui contient un domaine tétratricopeptidique (TPR), co-localisait partiellemnt avec le réseau de vimentine. L'existence, enfin, d'un complexe ternaire RoXan-NSP3-eIF4G, et la co-immunoprécipitation ARN-dépendante de la poly(A)-binding protein (PABP) avec la région carboxy-terminale de RoXan suggèrent un rôle traductionnel pour cette dernière. Cette hypothèse requirt cependant des investigations supplémentaires et ne permet pas d'écarter une ou plusieurs autres fonctions pour la protéine.
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Maduna, Tando Lerato. "Vasoactive intestinal peptide (VIP) controls the development of the nervous system and its functions through VPAC1 receptor signalling : lessons from microcephaly and hyperalgesia in VIP-deficient mice." Thesis, Strasbourg, 2017. http://www.theses.fr/2017STRAJ009/document.
Анотація:
Mes études doctorales ont permis de démontrer que les souris déficientes en VIP présentent une microcéphalie ayant principalement une origine maternelle qui affecte secondairement le développement de la substance blanche. Cette production placentaire par les lymphocytes T pourrait être affectée dans des pathologies du système immunitaire. De plus, nos données indiquent qu’une déficience en VIP prédispose à l'apparition de troubles sensoriels, en particulier de la nociception. Il est donc possible que les déficits précoces de développement du cerveau murin et l'apparition de l'hypersensibilité cutanée mécanique et thermique froide soient deux facettes d'une même pathologie. Des mesures d'activité de décharge spontanée des neurones dans le thalamus sensoriel chez des mâles adultes anesthésiés ont montré que les neurones des animaux KO sont hyper-excités, ce qui suggère un traitement aberrant des informations, notamment nociceptives, ou que l'activité inhibitrice des interneurones des réseaux locaux est réduiteThe studies carried out during my PhD demonstrate that VIP-deficient mice suffer from microcephaly and as well as white matter deficits mainly due to the absence of maternal VIP during embryogenesis, Placental secretion of VIP is dependent on T lymphocytes and could be altered in pathologies of the immune system. Moreover, our data links VIP deficiency to sensory alterations, specifically, the nociceptive system. Thus, it is possible that early developmental defects and hypersensitivity to mechanical and cold stimuli are two manifestations of the same pathology. This hypothesis was reinforced following analysis of spontaneous firing patterns of neurons in the sensory thalamus of anesthetized adult males. Neurons from VIP-KO mice are hyperactive, which suggests aberrant local processing of nociceptive input or that the inhibitory inputs from local interneuron networks is reduced
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Essabbani, Abdellatif. "La clusterine : un nouveau régulateur de la voie NF-қB et de la mort cellulaire". Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T025.
Анотація:
La clusterine: un nouveau régulateur de la voie NF-қB et de la mort cellulaire Plusieurs fonctions physiologiques ont été attribuées à la clusterine (CLU), dont le rôle important au cours de l'inflammation et de la tumorogenèse. Nous avons montré que CLU interagit avec Iқb-α phosphorylé et diminue la translocation de p50/p65. Nous avons aussi généré un ensemble de constructions " flaggées " pour les différentes isoformes de CLU. Les résultats de cette étude montrent que la régulation de la voie NF-қB pourrait être restreinte à des séquences particulières de CLU. Nous avons développé une nouvelle approche de ciblage de CLU par la technique d' « exon skipping » qui permet d'induire préférentiellement la forme nucléaire épissée du gène très mal caractérisée. Nous avons montré que la surexpression de cette forme par cette stratégie induit la mort cellulaireClusterin: a new regulator of NF-kappaB pathway and cell death Clusterin is a multifunctional protein that plays numerous roles in mammalian cells. By mean of transcriptomic analysis, we previously demonstrated that lower expression of clu both in tissues and cultured fibroblast-like synoviocytes of rheumatoid arthritis patients compared to osteoarthritic patients. We showed that CLU interacts with phospho-IkB-a and decreases the translocation of p50/p65 to the nucleus. To specify the interaction sites of CLU with its partners and to study the CLU isoforms roles, we generated several molecular constructs coding for various CLU regions of interest and test their role on NF-қB pathway and CLU subcellular localization. We have also developed a new approach of "exon skipping" in order to induce preferential expression of the nuclear spliced form of the gene. This strategy will allow a good understanding of nuclear forme poorly characterized
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Mehul, Bruno. "Mise en evidence et role d'une interaction laminine-ecto-5'-nucleotidase au cours du developpement du muscle srtie chez le poulet." Paris 5, 1992. http://www.theses.fr/1992PA05S013.
Анотація:
La 5'-nucleotidase ecto-membranaire (5'-n) dephosphoryle le 5'-amp. Par differentes approches methodologiques in vivo et in vitro, il nous a ete possible de mettre en evidence d'une part, une heterogeneite de la 5'-n entre le muscle strie, cardiaque et lisse de gesier de poulet (notamment en ce qui concerne son activite enzymatique au cours du developpement) ainsi que la presence de formes ancrees par un phosphatidyl inositol glycanne qui pourrait coexister avec des formes transmembranaires interagissant avec le cytosquelette ; hypothese renforcee par la presence de 5'-n dans les jonctions tendon-muscle et dans le plasmalemme superpose aux bandes i des sarcomeres des fibres musculaires (structures enrichies en integrines et proteines interagissant avec le cytosquelette). D'autre part, une co-distribution in vivo et une interaction in vitro entre la 5'-n et la laminine (glycoproteine de la matrice extracellulaire). Cette interaction est impliquee au cours de l'etalement des myoblastes en culture independamment du site catalytique de la 5'-n. L'activite ecto-5'-nucleotidase n'intervient ni dans l'attachement des myoblastes, ni de facon significative dans la migration, la proliferation et la fusion des myoblastes en myotubes. La laminine augmente la quantite de 5'-n a la surface des myoblastes et stimule par son bras long (fragment proteolytique e8) l'activite ampase de la 5'-n par contre, le fragment proteolytique e'1 de la laminine inhibe l'activite ampase. Cette observation suggere que le taux d'adenosine extracellulaire, regule par la 5'-n, pourrait etre module selon la nature de la matrice extracellulaire.
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Aliche-Djoudi, Fatiha. "Implication du remodelage membranaire induit par les acides gras polyinsaturés de la série oméga 3 dans la toxicité hépatique de l'éthanol : rôle de la fluidité membranaire et des radeaux lipidiques." Rennes 1, 2011. http://www.theses.fr/2011REN1B084.
Анотація:
L’implication du remodelage membranaire dans la toxicité hépatique de l’éthanol a été mise en évidence par les travaux antérieurs de notre équipe. Ainsi, l’augmentation de la fluidité et l’agrégation des radeaux lipidiques participent à la toxicité de l’éthanol via l’activation d’une voie de signalisation radeaux dépendante mettant en jeu la phospholipase C (PLC). Or, les AGPI n-3 ont été décrits comme capables d’altérer la fluidité membranaire et l’organisation des radeaux lipidiques influençant ainsi la signalisation en dépendant. Cependant, l’effet des acides gras polyinsaturés de la série oméga 3 (AGPI n-3), via un remodelage membranaire, sur la toxicité de l’éthanol n’a jamais été étudié. C’est pourquoi l’effet de deux AGPI n-3, l’acide eicosapentaénoïque (EPA, C20 : 5 n-3) et l’acide docosahexaénoïque (DHA, C22 : 6 n-3) a été étudié sur la toxicité (stress oxydant et mort cellulaire) de l’éthanol induite dans les hépatocytes de rat en culture primaire, en s’intéressant particulièrement à l’implication des radeaux lipidiques. Nous avons montré que l’EPA amplifie la toxicité de l’éthanol alors que le DHA protège de celle-ci. Cette différence d’effet entre l’EPA et le DHA est due essentiellement à leur comportement au sein de la membrane. L’EPA, en s’incorporant préférentiellement dans les régions non radeaux favorise l’agrégation des radeaux lipidiques entraînant ainsi l’activation de la voie PLC, impliquée dans la toxicité de l’éthanol. En revanche, le DHA inhibe la signalisation PLC en empêchant l’agrégation des radeaux grâce à son incorporation préférentielle dans ces microdomaines membranairesThe involvement of membrane remodeling in ethanol-induced liver toxicity was previously described by our team. Thus, an increase in membrane fluidity and lipid raft clustering were responsible for ethanol toxicity via the activation of a raft-dependent signaling pathway, implicating phospholipase C (PLC). Omega 3 polyunsaturated fatty acids (n-3 PUFAs) have been described as capable of altering membrane fluidity and lipid rafts organization leading to modification of cell signaling. However, the impact of n-3 PUFA induced membrane remodeling on ethanol liver toxicity had never been described. For these reasons, the effect of some n-3 PUFAs, namely eicosapentaenoic acid (EPA, C20: 5 n-3) and docosahexaenoic acid (DHA, C22:6 n-3), on ethanol-induced toxicity (oxidative stress and cell death) has been studied in rat primary hepatocytes, with particular attention to the involvement of lipid rafts. We have shown that EPA enhanced ethanol toxicity while DHA protected from it. This differential effect between EPA and DHA was mainly due to their membrane behavior. EPA, by incorporating preferentially in non-raft domains, promoted lipid raft clustering and consequently, activation of the PLC pathway. In contrast, DHA inhibited PLC signaling by preventing lipid raft aggregation, due to its preferential incorporation in these membrane micro-domains
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Cloppet, Florence. "Analyse d'images de cultures cellulaires obtenues par microscopie optique : application a des images de neuroblastomes de souris." Paris 5, 1996. http://www.theses.fr/1996PA05S003.
Анотація:
Notre etude concerne l'analyse d'images de cellules de type neuronal en cultures. Elle consiste a extraire les differentes entites cellulaires presentes dans l'image de maniere a permettre, dans une etape ulterieure, la saisie de parametres morphologiques precis. En effet, l'obtention de donnees quantitatives morphologiques precises est particulierement interessante dans le domaine des neurosciences, car il semble qu'un certain nombre de neuropathologies soient liees a des alterations morphologiques des cellules de certaines structures du cerveau. D'autre part, nous disposons avec les cultures cellulaires d'un outil permettant de tester a grande echelle des produits, qui peuvent entrainer des variations morphologiques comme le developpement de prolongements ou la retraction de ceux-ci. Ainsi, nous avons chosi un modele de cellules en culture permettant d'obtenir des variations morphologiques, notamment au niveau des prolongements des cellules. L'objectif de ce travail est donc de traiter les images saisies sur ces cultures de cellules vivantes et non colorees, afin d'extraire les caracteristiques morphologiques observees lors d'experiences de quantification de l'effet de substances toxiques ou non. Pour cela, nous avons apporte un soin particulier a la methode de segmentation, traitement de bas niveau dont l'importance est cruciale dans un systeme d'analyse d'images. La methode developpee permet d'extraire des formes de topologie et de morphologie complexes, et de structurer en partie l'information fournie en resultat. Elle est fondee sur une methode de croissance de regions par deformation geometrique de contours polygonaux, qui coopere avec des informations de type contours afin d'obtenir une bonne detection des corps cellulaires et des prolongements. Ce traitement n'etant generalement pas suffisant pour obtenir les differentes entites cellulaires avec leurs prolongements respectifs, nous decrivons finalement une methode de decoupage des formes obtenues lors de l'etape de segmentation. Celle-ci s'appuie sur l'information obtenue par le calcul du squelette (des formes a decouper) a l'aide d'un diagramme de voronoi simplifie : le reseau bissecteur.
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Mikaty, Guillain. "Rôle des Pili de type IV dans le réarrangement de la surface cellulaire eucaryote induite par Neisseria meningitidis et conséquences sur la colonisation des barrières cellulaires." Paris 5, 2009. https://hal.archives-ouvertes.fr/tel-01262387.
Анотація:
Neisseria meningitîdis est une bactérie à Gram négatif, à la fois commensale et pathogène de l'espèce humaine. Au cours de ces travaux, nous nous sommes intéressés à l'interaction entre cette bactérie et son hôte. La colonisation des cellules par N, meningitîdis est un processus complexe qui intègre : l'adhésion aux cellules de l'hôte dépendante de la présence de Pili de type IV (Pt4), la multiplication et la survie des bactéries, la formation de microcolonies et leur maintien sur les cellules puis l'envahissement progressif de la surface cellulaire. Cette étape de colonisation est centrale dans le cycle commensal et dans la pathogenèse de cette bactérie. Elle a donc été largement étudiée par le passé. Cependant deux aspects avaient été négligés dans la plupart de ces études. (1) La colonisation des cellules humaines se fait dans un contexte de flux de liquides, mucus ou sang, qui génère des forces hydrodynamiques qui s'opposent à la colonisation. (2) L'interaction entre une bactérie et une cellule eucaryote implique une participation de chacune des deux cellules. Laicolonisation des cellules humaines par N. Meningitîdis induit plusieurs changements physiologiques dont une réorganisation complexe du cytosquelette d'actine aboutissant à la formation de projections membranaires à la surface des cellules hôte. C'est donc en intégrant ces deux aspects que nous avons abordé la question de la colonisation de l'hôte par N. Meningitidis. Ces travaux de thèse ont permis de montrer que la réorganisation du cytosquelette d'actine induite par la bactérie participait activement à la colonisation. La formation des projections membranaires permet à la plupart des bactéries au sein de la microcolonie, d'établir des liaisons robustes avec la membrane plasmique. Ces liaisons sont les seules qui permettent à N. Meningitidis de résister aux forces hydrodynamiques présentes dans son environnement naturel. De plus, nous avons montré que les Pt4 de la bactérie sont le vecteur moléculaire de l'induction de la réorganisation du cytosquelette. Nous avons identifié deux protéines dans ces pili qui assurent la fonction inductrice. Ces protéines, les pilines mineures PilV et PiLX, sont nécessaires à l'induction de la réorganisation'du cytosquelette d'actine, et par conséquent, à la colonisation des cellules humaines par N. Meningitidis. Dans ces deux piline^ mineures, une région particulière caractérisée par un pont disulfure est essentielle à cette fonction. Cette région est exposée à l'extérieur de la bactérie et pourrait agir comme ligand d'un récepteur cellulaire. Ces travaux ont associés une nouvelle fonction aux Pt4 de la bactérie. De plus, nous avons découvert une fonction inédite' à cette réponse cellulaire dans la colonisation de N. Meningitidis. Le détournement des voies de signalisation de la cellule hôte permet à la bactérie de résister aux conditions hydrodynamiques de son environnement naturel. Mots clefs : Colonisation, N. Meningitidis, Pili de type IV, pilines mineures, Cytosquelette d'actine, réarrangement de la surface cellulaire, Forces hydrodynamiques
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Berger, Cédric. "Relation entre les Escherichia coli exprimant les adhésines Afa/Dr et les cellules de l'hôte : rôle des rafts lipidiques et des molécules d'adhésion cellulaire reliées à l'antigène carcino-embryonnaire (CEACAM) dans la pathogenèse de l'infection." Paris 11, 2005. http://www.theses.fr/2005PA114818.
Анотація:
Les E. Coli d'adhésion diffuse (DAEC) sont impliqués dans les infections urinaires et dans les diarrhées. Le seul facteur de virulence identifié est une famille d'adhésines, Afa/Dr, liant le Decay Accelerating Factor (DAF) et le Carcinoembryonic Antigen (CEA) qui appartient à la famille des CEACAM. Notre objectif a été d'étudier les interactions entre les CEACAMs et les DAEC Afa/Dr. Nous avons montré que le le CEACAM1 et le CEACAM6 sont des récepteurs pour les DAEC Afa/Dr et sont recrutés autour des bactéries comme le GM1 et la cavéoline, marqueurs de rafts lipidiques. L'adhésion aux DAF, CEA et CEACAM6 induit la formation de prolongements cellulaires autour des bactéries et nécessite un remaniement du réseau d'actine et des rafts lipidiques, l'intervention des Rho GTPases et la phophorylation des protéines ERM. Nous avons aussi démontré que l'internalisation des bactéries s'effectuait par un mécanisme de type «zipper», indépendant de l'actine et faisant intervenir le CEA et le CEACAM6Diffusely adhering E. Coli (DAEC) are involved in urinary tarct infections and diarrhoeas. The only virulence factor identified is a family of adhesines, Afa/Dr, binding Decay Accelerating Factor (DAF) and Carcicoembryonic Antigen (CEA) which belongs to the CEACAM family. Our objective was to study the interactions between CEACAMs and the Afa/Dr DAEC. We observed that CEACAM1 and CEACAM6 are receptors for the Afa/Dr DAEC and are recruited around adhering bacteria as well as the GM1 and the caveoline, two lipid rafts markers. Adhesion to the DAF, CEA and CEACAM6 induces the formation of cellular prolongations around the bacteria and requires a reorganization of the actin network and the lipids rafts, as well as Rho GTPases and ERM proteins phophorylation. We also showed that the internalization of the bacteria was carried out by azipper like mechanism, indenpendently of actin. Moreover, CEA and the CEACAM6 seem to support entered of the bacteria into the cells
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Petroeanu-Reinald, Nicoleta. "Mise au point d'un modèle d'anévrisme fusiforme carotidien chez le lapin. Etude du remodelage artériel (élastine, MMPs, cytokines) après thérapie cellulaire par fibrosblastes gingivaux." Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05T046.
Анотація:
L'anévrisme abdominal aortique (AAA) se caractérise par une protéolyse des macromolécules de la média (élastine, collagène), une inflammation transmurale et une apoptose des cellules musculaires lisses. Nous avons voulu développer un modèle d'anévrisme fusiforme chez le lapin afin de tester la faisabilité et l'effet d'une thérapie cellulaire endovasculaire percutanée par des fibroblastes gingivaux (FG). Ce modèle a été induit par incubation d'élastase dans la lumière de l'artère carotide, et la thérapie a été réalisée 28 jours plus tard par injection de fibroblastes gingivaux dans la paroi anévrismale. L'évaluation de l'efficacité thérapeutique (étude morphomètrique, densité d'élastine, analyse biomoléculaire des metalloprotéases, de leur inhibiteur tissulaires et des cytokines) a montré la diminution de la taille de l'anévrisme, la préservation du réseau élastique, l'inhibition des MMP-1 et -9, due à l'augmentation du TIMP-1 et l'inhibition des cytokines inflammatoires. Les FG sont donc des candidats pour la thérapie de l'AAAAbdominal aortic aneurysm (AAA) is characterized by an increased proteolysis of the essential macromolecules of the media (elastin, collagen), transmural inflammation and apoptosis of smooth muscular cells. We aimed to develop an fusiform aneurysm model in rabbit in order to evaluate the feasibility and the efficiency of percutaneous endovascular cell therapy with gingival fibroblasts (GF). We induced this model by incubation of elastase in the lumen of rabbit carotid arteries. Endovascular cell therapy was performed 28 days later by transplantation of GF in the arterial aneurysmal wall. Analysis of the results (arterial morphometry, elastin density, biomolecular study of metalloprotei-nases, their tissue inhibitor and cytokines) shows the decrease of the aneurysmal size, the preservation of the elastic network, the inhibition of MMP-1 and -9, consequently to TIMP-1 increase and the inhibition of inflammatory cytokines. Therefore GF are potential candidates for the endovascular therapy of AAA
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Ettahar, Asma. "Rôle de la nouvelle ubiquitine ligase PHRF1 dans la transduction des effets du TGF-β". Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05T043.
Анотація:
Le TGF-β est une cytokine multifonctionnelle dont l'un des effet principaux est l'inhibition de la prolifération cellulaire qui joue un rôle important dans la suppression de la tumorigénicité. La signalisation induite par le TGF-β est soumise à une régulation négative par le corépresseur transcriptionnel TGIF. Ce dernier a son tour a besoin d'être régulé. Pour cela, la cellule met en place des mécanismes de régulation négative parmi lesquels figure le système ubiquitine-protéasome. L'ubiquitination joue un rôle crucial dans la transduction de la signalisation du TGF-β. Nous avons identifié par le système du double-hybride de nouveaux partenaires du TGIF dont la nouvelle ubiquitine ligase E3 à domaine RING fïnger PHRF1 (PHD and RING Finger 1). L'ubiquitine ligase PHRF1 amplifie les effets du TGF-β sur la transcription et sur l'inhibition de la croissance cellulaire en agissant à deux niveaux. Dans un premier temps, PHRF1 ubiquitine TGIF et entraîne sa dégradation par le protéasome. Suite à cette dégradation, PHRF1 induit la redistribution de cPML dans le cytoplasme ou il participe à la formation du complexe Smad2/TβRI/SARA. Le gène PHRF1 est localisé dans le locus 11p15. 5, qui est souvent altéré dans les cancers du sein. En effet, nous avons démontré que la surexpression du PHRF1 peut supprimer la transformation tumorale dans des lignées du cancer du sein. Ces résultats nous permettent de proposer PHRF1 comme suppresseur de tumeurs des cancers du sein dont la dérégulation contribue à la perte des effets cytostatiques du TGF-β et par conséquent a la progression tumoraleThe TGF-β is an antiproliferative agent that plays an important role in suppressing tumorigenicity. The homeodomain protein TGIF is well known as a negative regulator of the TGF-β signaling. TGIF is regulated by the ubiquitin-proteasom system. Ubiquitination plays an important role in the transduction of TGF-β signaling. Using a two-hybrid screen, we identified the RING finger protein PHRF1 (PHD and RING Finger 1) as a novel ubiquitin ligase that targets TGIF for degradation through the proteasome pathway, and thereby promoting the initiation of TGF-β signaling by enabling cPML relocalization in the cytoplasm, where it associates with SARA and coordinates the access of Smad2 for phosphorylation by the activated TGF-β receptor. We show that over-expression of PHRF1 may disable the tumoral development in the breast cancer cell lines. Indeed, the PHRF1 gene, which maps to a tumor suppressor locus at 11p15. 5, is somatically deleted or silenced in a significant proportion of human breast cancer. Therefore, our findings on the mode of action of PHRF1 provide new and important insights into the role of the TGF-β tumor suppressor network in malignant transformation
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Salles-Mourlan, Josette-Anne-Marie. "Expression des isoformes de la myosine dans les differents types de fibres du muscle strie squelettique au cours de l'ontogenese des amphibiens urodeles." Paris 5, 1993. http://www.theses.fr/1993PA05S014.
Анотація:
L'expression des differentes isoformes de la myosine a ete etudiee en parallele avec l'evolution du profil myofibrillaire du muscle strie squelettique des amphibiens urodeles. L'analyse porte dur le determinisme hormonal des modifications qui marquent les etapes de la differenciation musculaire au cours de l'ontogenese. Trois especes ont ete retenues pour ce travail : pleurodeles waltlii espece a metamorphose spontanee, ambystoma mexicanum, espece hypothyroidienne neotenique et proteus anguinus, espece perennibranche. Une etude comparative de 10 individus de l'espece p. Waltlii qui ont fait l'objet d'hypophysectomies partielles ou totales a permis de completer l'analyse portant sur le controle hormonal de la differenciation du muscle. Au total, les resultats obtenus permettent de conclure que l'inhibition de l'expression des myosines larvaires est controlee par une augmentation rapide du taux des hormones thyroidiennes circulantes, alors que l'apparition des isoformes de la myosine adulte ne parait pas dependre directement de l'environnement hormonal.
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Martinez, Anna. "Le cycle biologique de Pneumocystis carinii : approches cellulaires et moléculaires." Thesis, Lille 2, 2010. http://www.theses.fr/2010LIL2S046.
Анотація:
Les microchampignons unicellulaires du genre Pneumocystis sont transmis par voie aérienne et pénètrent dans l’alvéole pulmonaire de l’homme et de nombreux mammifères. Si le système immunitaire est déficient, leur prolifération provoque une insuffisance respiratoire grave, souvent fatale. Les personnes concernées par cette pathologie sont principalement les individus séropositifs pour le VIH au stade SIDA mais également les patients recevant un traitement immunosuppresseur en cas de cancers, de greffe d’organes ou de maladies auto-immunes. Du fait de la très forte spécificité d’hôte qui caractérise ces microchampignons, l’étude directe de Pneumocystis jirovecii, l’espèce spécifique de l’homme, reste bien entendu limitée mais la présence d’autres espèces du parasite chez de nombreux mammifères a permis de développer des modèles expérimentaux performants. Néanmoins, la transition dynamique d’un stade parasitaire à l’autre n’a jamais était suivie en temps réel et la forme infectieuse demeure inconnue. Pour examiner ces aspects fondamentaux du cycle biologique de Pneumocystis, la séparation physique des stades parasitaires (formes trophiques ou formes kystiques) constitue l’un des pré-requis indispensable. Dans un premier temps, nous avons mis au point une nouvelle méthode pour obtenir des populations parasitaires totalement pures. L’utilisation d’un cytomètre trieur à haut débit (FACSAria®), suite à un coimmunomarquage spécifique, nous a permis de séparer les formes trophiques des formes kystiques avec une pureté proche de 100 %. Les parasites obtenus demeurant infectieux après inoculation intra-trachéale chez le rat Nude, nous avons pu les utiliser afin de clarifier les mécanismes qui sous-tendent la multiplication et la différenciation de Pneumocystis carinii. Notre but était de mieux comprendre le cycle biologique des organismes du genre Pneumocystis en tentant de répondre aux interrogations suivantes : quel est le ou les modes de multiplication des formes kystiques et trophiques de Pneumocystis ? Quelles sont les voies métaboliques activées chez les formes kystiques et trophiques ? Quels acteurs moléculaires sont impliqués dans le processus de différenciation des formes trophiques en formes kystiques ? Dans un premier temps, nous avons suivi le devenir de chaque stade parasitaire trié d’une part (i) dans le micro-environnement naturel des Pneumocystis, l’alvéole pulmonaire, après inoculation endotrachéale, chez le rat nude, et, d’autre part, (ii) in vitro dans des systèmes de cultures axéniques ou de co-cultures sur cellules épithéliales alvéolaires de rat (lignée cellulaire L2). Nos résultats suggèrent d’une part, que les formes trophiques peuvent, in vitro, se multiplier indépendamment des formes kystiques (sans toutefois permettre une croissance continue de P.carinii) et, d’autre part, que ces formes trophiques pures sont incapables de redonner, in vitro, des formes kystiques contrairement à nos observations chez l’animal. Ainsi, l’échec de la culture pourrait, en partie, être du à l’incapacité des formes trophiques à se différencier en formes kystiques in vitro. Ensuite, nous avons analysé la ploïdie des formes trophiques et kystiques afin de mieux appréhender les modes de multiplication de ces microchampignons, en utilisant un agent intercalant de l’ADN et en comparant le contenu en ADN de Pneumocystis à celui des souches référence haploïdes et diploïdes de Saccharomyces cerevisiae. Deux stratégies complémentaires ont été employées afin de comparer les transcrits exprimés par ces deux populations : (i) l’hybridation sur puces à ADN (en collaboration avec le Pr. Melanie Cushion, Université de Cincinnati, USA) et (ii) les banques soustractives d’ADN complémentaire. Globalement, ces résultats devraient permettre de clarifier les modes de multiplication et le cycle biologique de ces microchampignons opportunistesPneumocystis organisms are atypical and ubiquitous microfungi that proliferate in the lungs of immuno-suppressed mammals, including human beings, thus provoking serious, and often life-threatening pneumonia. Patients suffering from this disease are mainly HIV-positive individuals and patients with primary immunodeficiency, patients receiving immunosuppressive therapies for malignancies, organ transplantations or autoimmune diseases. It is also considered as a worsening factor in respiratory diseases such as infant bronchiolitis and chronic obstructive pulmonary diseases (COPD). Even though Pneumocystis clinical spectrum is widening in the human population, fundamental aspects of its biology remain uncovered. To date, no continuous culture model is available, thus significantly preventing Pneumocystis research progress. Consequently, most Pneumocystis cell biology studies have to rely on competitive animal models while epidemiological studies on P. jirovecii stem from molecular biology data. What is more, dynamic Pneumocystis stage-to-stage transitions has never been followed nor do we know the infectious form. To examine these fundamental aspects of the Pneumocystis life cycle, separation of trophic and cystic forms is required. A reliable high speed sorting system (FACSAria cytometer, Becton Dickinson) was used to set up a new and efficient method of separation of P. carinii life cycle stages. Following specific coimmuostaining of both trophic and cystic forms of Pneumocystis, host cell debris were successfully eliminated and highly pure trophic and cystic form populations were reproducibly separated and collected for further analyses with a purity of 99,6 to 100%. These sorted populations remaining infectious in endotracheally-inoculated Pneumocystis-free Nude rats, they were used to clarify the mechanisms of multiplication and differenciation of P. carinii. Our aim was to better understand the life cycle of Pneumocystis organisms by addressing the following questions: How do the Pneumocystis trophic and cystic forms proliferate? Which are the active metabolic pathways in the trophic or cystic form populations? Which molecular actors are involved in the trophic-to-cystic form differenciation process? First of all, growth kinetics of either pure trophic or cystic forms of P. carinii were followed (i) in the natural Pneumocystis microenvironment (pulmonary alveolus), after endotracheal inoculation of either pure trophic or cystic populations in Pneumocystis-free Nude rats ; (ii) in vitro in an axenic short-term culture model or in co-culture with rat epithelial alveolar cells (L2 cell line). These experiments indicated that trophic forms could multiply in vitro but that they cannot develop into cystic forms, in contrast to what happened in the rat model. The lack of cyst production in vitro may explain the absence of continuous growth of Pneumocystis in this system. Second, ploidy of trophic and cystic forms was analysed to better understand the multiplication process of these micromycetes. A DNA intercalating agent allowed us to measure DNA contents of sorted trophic and cystic forms in comparison with DNA contents of haploid and diploid Saccharomyces cerevisiae reference strains. Trophic forms contain 1, 2, 3 and 4 DNA contents whereas cystic forms contain 8C of DNA. Finally, expression profiles of sorted Pneumocystis cystic or trophic populations were compared using microarray approaches (University of Cincinnati, USA) and subtraction cDNA libraries. All together, these results should shed new light on the intricate modes of multiplication and life cycle of these opportunistic micromycetes
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Ezzoukhry, Zakaria. "Bases moléculaires de l'efficacité du traitement cible du carcinome hépatocellulaire par le sorafenib." Amiens, 2012. http://www.theses.fr/2012AMIED010.
Анотація:
Le sorafenib est un inhibiteur multi-kinases dont l’efficacité a été mise en évidence pour la première fois dans le Carcinome Hépatocellulaire (CHC) en 2008. Ce composé est capable de freiner la prolifération des cellules de CHC et d’induire leur mort, suivant des mécanismes encore mal connus. Au cours de notre étude, nous avons d’abord abordé l’étude des résistances primaires des cellules de CHC à ce traitement. Nous avons pu mettre en évidence des mécanismes actifs impliquant l’EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor) dans la résistance des cellules de CHC au sorafénib. Ces mécanismes ont été également observés sur des tumeurs primaires maintenues en culture à court terme. Nous avons aussi abordé les effets cytotoxiques du sorafenib, en étudiant les protéines de la famille BCL2 dans ce contexte. Nos travaux nous ont conduit à montrer le rôle régulateur de BAD, une protéine pro-apoptotique de la famille BCL2, dans la mort des cellules de CHC exposées au sorafénib. Nous montrons qu’un composé chimique dont la réactivité mime BAD, le composé ABT-737, possède un effet synergique avec le sorafénib pour induire l’apoptose des cellules de CHC. Grâce à nos observations, nous proposons plusieurs pistes pour améliorer l’efficacité anti-oncogénique du sorafénib, notamment en renforcant le contrôle du sorafénib sur le kinome de la cellule cancéreuse ou en le rendant plus cytotoxique envers les cellules de CHC