Дисертації з теми "Mitochondries du foie – Dissertations universitaires"
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Deleye, Yann. "Rôle du gène suppresseur de tumeur p16INK4a dans le métabolisme hépatique des lipides au cours du jeûne." Thesis, Lille 2, 2018. http://www.theses.fr/2018LIL2S002.
Анотація:
Plusieurs études génétiques d’association de gènes ont mis en évidence le locus CDKN2A, codant notamment la protéine p16INK4a (p16), un gène suppresseur de tumeur, comme étant associé au risque de développement du diabète de type 2 (T2D) et des maladies cardiovasculaires. Le T2D, caractérisé par une hyperglycémie et/ou une insulinorésistance, s’accompagne fréquemment d’une stéatose hépatique prédisposant au développement de la NASH (Non Alcoholic Steatohepatitis), et contribuant à un risque accru de complications cardiovasculaires. Nous avons montré que la déficience de p16 augmente la néoglucogenèse hépatique lors d'un jeûne suggérant un rôle de p16 dans le T2D. Cependant, le rôle de p16 dans l’homéostasie hépatique des lipides n’est à ce jour pas connu. Afin de déterminer le rôle de p16 dans le métabolisme hépatique des lipides, nous avons utilisé des hépatocytes primaires isolés de souris p16+/+ et p16-/- ainsi que les lignées d’hépatocytes murins AML12 et humains IHH transfectées respectivement avec un siRNA-CDKN2A ou siRNA-p16.Nous avons montré par l’étude transcriptomique des hépatocytes primaires de souris par puces à ADN, que l’absence de p16 module les voies métaboliques associées à PPARα et contrôle préférentiellement l’expression de certains gènes cibles de PPARα, associés au catabolisme des acides gras. _x000D_Dans les lignées cellulaires hépatocytaires, certains de ces gènes sont également modulés après diminution de l’expression de p16 par siRNA. Ces effets sont associés à une meilleure réponse à l’agoniste de PPARα, le GW647, et abolis par un siRNA ciblant PPARα. Afin d’étudier par quel(s) mécanisme(s) l’absence de p16 module l’expression des gènes cibles de PPARα, le rôle de certains de ses coactivateurs transcriptionnels a été étudié par l’utilisation d’inhibiteurs pharmacologiques ou de siRNA. De manière intéressante, nous avons pu montrer que l’absence de p16 active la voie AMPK-SIRT1 afin d’augmenter l’expression des gènes cibles de la β-oxydation et de la cétogenèse. De plus, ces effets sont indépendants du rôle de p16 dans le cycle cellulaire. In vitro, les hépatocytes primaires p16-/-, incubés avec de l’oléate radiomarqué, présentent une β-oxydation augmentée comparés aux hépatocytes primaires p16+/+. Au cours du jeûne, l’acétyl-CoA provenant de la β-oxydation est redirigé vers la production de corps cétoniques. De manière intéressante, les souris p16-/- injectées avec du sodium octanoate, un acide gras à chaîne courte préférentiellement utilisé via la cétogenèse, ont une tendance à avoir une production plus importante de corps cétoniques.Nous avons ainsi pu mettre en évidence que la déficience de p16 dans les hépatocytes favorise l’utilisation des acides gras, via l’activation de la voie SIRT1-AMPK-PPARαP16INK4a is a tumor suppressor protein that is a well described cell cycle regulator. Recently, genome-wide association studies (GWAS) associated the CDKN2A locus, from which p16INK4A is encoded, with increased risk for development of type 2 diabetes. A pathophysiological link between p16INK4a and hepatic glucose homeostasis has been unraveled recently, through the control of gluconeogenesis. Patients with T2D also present with disturbances in fat metabolism, associated with an increased prevalence to Non Alcoholic Fatty liver diseases (NAFLD). In this context, we investigated the role of p16INK4a in hepatic lipid metabolism in vitro using primary hepatocytes, the murin AML12 and human IHH hepatocyte cell line transfected respectively with siRNA-CDKN2A and siRNA-p16 and in vivo using p16+/+ and p16-/- mice.Transcriptomic analyses of p16+/+ and p16-/- primary hepatocytes using microarrays revealed that metabolic and PPARα signaling pathways were among the most modulated in p16 absence. Moreover, in primary hepatocytes and in hepatocyte cell lines, p16 deficiency modulates a subset of PPARα target genes associated to fatty acids oxidation (FAO). These effects were associated with an increased response to GW647, a PPAR945; agonist, and reversed by siRNA targeting PPAR45;. Investigating known PPAR945; activators and transcriptional co-activators in vitro, we found that upregulation of FAO genes expression was linked to SIRT1. AMPK is a known activator of FAO and has been shown to induce SIRT1 activation through increase of NAD/NADH ratio. Interestingly, downregulation of p16 expression in vitro led to increased AMPK phosphorylation and activation.In vitro, p16-/- primary hepatocytes demonstrated enhanced fatty acid oxidation of oleate compared to p16+/+. During fasting, enhanced FAO leads to a shift of acetyl-coA utilization from the TCA cycle to ketogenesis. Interestingly, p16-/- mice showed a tendency to produce more ketone bodies than their control littermate after sodium octanoate injection. These findings describe a new function for p16INK4a in hepatic lipid metabolism through activation of AMPK-SIRT1-PPARα pathway
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Guillot, Max. "Cinétique du stress oxydant et des dysfonctions mitochondriales locales et à distance (poumon, rein, foie, cerveau, coeur) et effets du perconditionnement ischémique ou du postconditionnement pharmacologique au cours du clampage aortique expérimental." Thesis, Strasbourg, 2013. http://www.theses.fr/2013STRAJ102.
Анотація:
L’ischémie-reperfusion (IR) du muscle squelettique est à l’origine de lésions au niveau local et au niveau systémique. Au niveau musculaire, l’IR est caractérisée par une atteinte de la chaîne respiratoire mitochondriale, une production de ROS et une activation de l’inflammation. Au niveau systémique, ces lésions peuvent aboutir à un tableau de défaillance multiviscérale. La physiopathologie et la chronologie précise de ces évènements demeurent néanmoins imprécises. Enfin, différentes stratégies ont été développées pour limiter ces lésions. Récemment, le dérivé Bβ (15-42) de la fibrine (nommé FX06) et le perconditionnement ont permis de protéger le myocarde des lésions d’IR. Les objectifs de notre travail sont de préciser, au niveau du muscle squelettique, les mécanismes à l’origine de ces lésions et d’évaluer ces deux nouvelles stratégies. Sur un modèle animal d’IR du muscle squelettique, nous avons observé une production de ROS pendant l’ischémie, préalable à l’atteinte mitochondriale et peut-être à l’origine de l’inflammation, et enfin une absence d’atteinte systémique au niveau mitochondrial après 2 heures et 24 heures de reperfusion. En ce qui concerne les traitements étudiés dans ce travail, nous n’avons pas pu démontrer l’efficacité du perconditionnement ischémique. Nous avons pu constater par contre que le peptide FX06 dérivé de la fibrine permet de prévenir l’apparition de ces lésions. Ces nouvelles connaissances vont nous permettre d’élaborer de nouvelles stratégies pour prévenir le développement des lésions d’IRLower limb ischemia-reperfusion (IR) results in skeletal muscle mitochondrial alterations, production of reactive oxygen species (ROS), inflammation and remote organ impairments which are largely involved in patients prognosis. However, whether ischemia without reperfusion increases ROS production and preceedes mitochondrial alteration and whether mitochondrial dysfunction occurs early in remote organ is unknown. Remote ischemic perconditioning (PerC) and Fibrin-derived peptide Bβ(15-42) (FX06) prevent during cardiac IR but whether and how PerC and FX06 might protect skeletal muscle is unknown. This study tested whether PerC and FX06 would decrease skeletal muscle inflammation and reduce reactive oxygen species (ROS) production and mitochondrial dysfunction during IR. In an animal lower limb ischemia-reperfusion model, the objectives of our study were therefore to determine simultaneously the kinetic of ROS production, mitochondrial respiration and inflammation changes in skeletal muscle and remote organs during ischemia reperfusion and to challenge the effect of PerC and FX06 on mitochondrial respiratory chain complexes activities, ROS production and inflammation. We observed that oxidative stress preceedes skeletal muscle mitochondrial dysfunction and probably may be seen before inflammation activation. FX06 decreased inflammation, normalized ROS production and restored mitochondrial oxidative capacity during experimental skeletal muscle IR. PerC not only failed to protect ischemic skeletal muscle but impaired contralateral non ischemic suggesting that such therapy should be used with caution. This better knowledge will allow us to develop new strategies to prevent the development of IR lesions
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Borie, Dominique. "Xénotransplantation : vers une assistance hépatique par foie de porc." Paris 5, 2000. http://www.theses.fr/2000PA05CD06.
Анотація:
Au plan strictement médical, le développement de la transplantation n'est limité que par la disponibilité d'organes humains cadavériques. Nous avons souhaité étudier la possibilité d'utiliser des organes d'origine animale en vue d'une transplantation chez l'homme (xénotransplantation). La xénotransplantation s'accompagne d'un rejet, qui peut être suraigu, de l'organe transplanté. Chez le rongeur nous avons, par des techniques de biologie moléculaire, étudié certains des mécanismes à l'origine de la production de xénoanticorps par le receveur. Nous avons montré que ces xénoanticorps, dont la déposition sur l'endothélium de l'organe transplanté abouti au rejet suraigu, étaient formés suite au réarrangement de gènes dans une forme " nai͏̈ve " non mutée. Ces résultats permettaient de confirmer le caractère " préformé " des xénoanticorps et laissaient supposer leur production préférentielle par un sous-type de lymphocytes B (B1a). Nous avons ensuite conduit une analyse exhaustive de la littérature en xénotransplantation laissant apparaître le porc comme l'animal susceptible de fournir des organes pour l'homme. Nous avons poursuivi, cherchant s'il existait des pathogènes porcins dont la transmission à l'homme pourrait être délétère. Forts de ces résultats et du fait des besoins pour un système d'assistance des insuffisances hépatiques aigue͏̈s, nous avons développé un modèle d'assistance extra-corporelle par foie de porc isolé, perfusé par du sang de porc autologue afin d'éviter le rejet suraigu. Nous disposons ainsi d'un système permettant de maintenir un foie de porc parfaitement viable et fonctionnel (élimination de doses de charge en ammoniaque et en bilirubine, clairance du vert d'indocyanine,) pendant des durées de perfusion s'étendant jusqu'à 8 heures. Les capacités d'assistance de ce système vont être évaluées dans un modèle d'hépatite fulminante chez le primate. Parallèlement, des tests virologiques valideront la sécurité " microbiologique " du système.
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Corazao-Rozas, Paola. "Exploitation du métabolisme mitochondrial oxydatif dans l'éradication du mélanome métastatique." Thesis, Lille 2, 2014. http://www.theses.fr/2014LIL2S036/document.
Анотація:
La plupart des cellules cancéreuses présentent une reprogrammation métabolique qui favorise la glycolyse et diminue la phosphorylation oxydative. Cette reprogrammation a reçu le nom d’effet Warburg et permet aux cellules tumorales de proliférer même en conditions adverses. Bien que l’effet Warburg ait été, pendant longtemps, associé à un dysfonctionnement mitochondrial, plusieurs études ont montré que dans les cellules cancéreuses les mitochondries ne sont pas dysfonctionnelles et jouent même un rôle important dans la tumorigénèse. Cependant, les mécanismes qui régulent cette reprogrammation métabolique dans le mélanome restent encore à être bien évalués. Dans ce contexte, nous avons montré que les mélanomes présentent une faible activité mitochondriale caractérisée par une diminution de la consommation d’oxygène. Ce profil métabolique est contrôlé au moins en partie par le facteur de transcription HIF-1, via l’expression de la pyruvate déshydrogénase kinase 3 (PDK3). L’inhibition pharmacologique de la PDK3, utilisant le Dichloroacetate (DCA) est suffisante pour réactiver la phosphorylation oxydative et induire la production des espèces réactives de l’oxygène (ROS). Ainsi, la combinaison du DCA avec la molécule pro-oxydant elesclomol permet de potentialiser l’effet antitumural de cette dernière, de manière synergique. Fait intéressant, cette combinaison est également efficace dans les cellules ayant développé une résistance au vemurafenib, un inhibiteur de la protéine BRAFV600E. Dans ce contexte, dans la deuxième partie de cette étude, nous avons évalué si les cellules résistantes au vemurafenib présentent une modification métabolique qui pourrait expliquer leur sensibilité à la combiniasion DCA+eleslclomol. Nous avons montré que le vemurafenib induit une diminution de la glycolyse rendant les cellules dépendantes à la phosphorylation oxydative et augmente la biogénèse mitochondriale de manière dépendante ou indépendante de la réactivation de la voie MITF/PGC1α. En accord avec ces résultats, les cellules résistantes au vemurafenib présentent une augmentation de la consommation d’oxygène et de la production de ROS par rapport aux cellules sensibles. Le nouveau profil métabolique des cellules résistantes les rende plus sensibles aux agents pro-oxydants tels que l’elesclomol Nos résultats ont permis de montré la possibilité de cibler les modifications métaboliques par une approche pro-oxydant dans le but d’éradiquer de manière efficace les cellules de mélanomeMost cancer cells undergo a metabolic rewiring from oxidative phosphorylation to glycolysis that allows them to proliferate even under stressful conditions. This phenomenon is known as the Warburg Effect and has been often associated to mitochondrial dysfunction. Although, many studies have shown that mitochondria is still active in cancer cells and seems to play a key role in tumorigenesis little is know about the mechanisms that regulate this metabolic swift. In this context, we first focused in the study of melanoma metabolism in different cell lines as in samples coming from patients. We first found that melanoma cells present low mitochondrial activity characterized by low oxidative phosphorylation. This metabolic behavior is at least partially controlled by the hypoxia-inducible factor-1α HIF-1α witch is constitutively express in melanoma cells even under nomoxic conditions. Inhibition of this factor induces a strong decrease in the expression and activity of PDK3. Pharmacological inhibition of PDK3 activity by dichloroacetate (DCA) is enough to reactivate mitochondrial oxidative phosphorylation and reactive oxygen species (ROS) production. Furthermore DCA increases in a synergistic manner elesclomol’s induced ROS production and cell death. Interestingly, BRAF V600E melanoma cells that were resistant to the BRAF inhibitor vemurafenib show were also sensible to this combination. Consequently, as a second part of this work we looked for to understand, why resistant cells were so sensible to these agents and if there were some metabolic modifications that could explain this behavior. We found that vemurafenib BRAFV600E induced inhibition causes an important decrease in glycolysis and renders melanoma cells addicted to oxidative phosphorylation by increasing mitochondria biogenesis dependently or not of MTIF/PCG1 axis. Conversely, vemurafenib resistant melanoma cell lines show higher mitochondrial activity associated with higher ROS production. Thus these cells are more sensible to elesclomol induced cell death than vemurafenib sensible cell lines. Our findings provide new insights into the metabolic pathways that allow cells to adapt to difficult microenvironment, showing that these metabolic modifications, especially in terms of ROS production, can be used to target and eradicate melanoma cells
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Cardoso, Cuneo Jorge E. "Le pompage portal dans la cirrhose." Paris 5, 1993. http://www.theses.fr/1993PA05CD04.
Анотація:
Dans la cirrhose, l'hypertension portale et l'atteinte de la fonction hépatique déterminent l'évolution et la survie des malades. La pression portale dépend de la résistance intrahépatique et du flux portal : la fonction hépatique dépend de la perfusion et de la viabilité de la masse hépatocytaire. Deux notions nouvelles touchant l'hémodynamique et la fonction hépatiques ont été à l'origine de cette thèse : la démonstration de la diminution de la résistance vasculaire hépatique par action pharmacologique de vasodilatateurs : l'amélioration de la fonction hépatique qui en résulte. Fondée sur la notion de distensibilité résiduelle du foie cirrhotique, l'idée directrice de cette thèse a été de vérifier la possibilité de produire une augmentation du flux portal transhépatique par divers types d'action mécanique, et d'en étudier les conséquences sur l'histologie et la viabilité hépatique, la pression portale, et la fonction hépatique. Les modèles expérimentaux utilisés ont été le foie cirrhotique isolé perfusé murin ou humain, et l'hypertension portale induite chez le porc non cirrhotique ; une étude de l'augmentation du flux portal transhépatique a été faite chez l'homme cirrhotique en cours de transplantation. Alors que la viabilité du foie n'apparaissait jamais altérée, les études histologiques ont montré, chez le rat et l'homme, que le doublement du flux portal pendant 1 ou 2 heures est possible, et s'accompagne dans deux tiers des cas, d'une dilatation sinusoïdale. Chez le rat, il induit une augmentation moyenne de l'espace intravasculaire de 44,4 % et des espaces extravasculaires de l'albumine et du sucrose de 74, 2 % et 49,6 %, sans accroissement des shunts intrahépatiques ; il induit enfin une diminution moyenne de 13 à 31 % de la résistance hépatique, et une augmentation moyenne de la clairance intrinsèque de 64,8 % pour le H-propranolol, et de 91,3 % pour le C-taurocholate. Chez l'homme, il augmente en moyenne la résistance artérielle de 31,9 % et la clairance hépatique du vert d'indocyanine de 28,2 %. Un dispositif extravasculaire pneumatique périportal, capable d'augmenter le débit et de réduire la pression portale chez le porc avec hypertension portale sans cirrhose, s'est révélé inefficace pour diminuer la pression portale chez l'homme cirrhotique. En revanche, un pompage centrifuge extracorporel a réduit en moyenne la pression portale de 17,9 à 39,2 % chez l'homme cirrhotique en cours de transplantation hépatique. Ces études montrent qu'au moins sur une brève durée, le foie cirrhotique accepte et supporte un accroissement important du débit portal. Sa réserve de distensibilité est variable, mais ouvre la perspective d'une réduction de la pression portale par l'action d'un pompage portal. L'amélioration fonctionnelle qui peut en résulter invite à concevoir une méthode thérapeutique " d'assistance vasculaire hépatique transitoire " , pour des malades frappés à la fois par une hémorragie digestive de contrôle difficile et une insuffisance hépatique grave, et qui sont dans l'attente d'un greffon hépatique.
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Wen, Lanling. "Transplantation xénogénique du foie : roles de la vasomotricité et de la réponse humorale aux protéines d'origine hépatique dans le déroulement du rejet." Paris 5, 2000. http://www.theses.fr/2000PA05CD01.
Анотація:
La pénurie de greffons hépatiques allogéniques a conduit à intensifier la recherche sur la xénogreffe. Le porc représente le candidat le plus sérieux. Cependant, plusieurs obstacles immunologiques doivent être surmontés en cas de transplantation de foie à partir d'un animal éloigné de l'homme : rejet suraigu, rejet aigu accéléré, rejet aigu , immunisation de l'hôte contre les protéines provenant d'un foie xénogénique. Le but de travail était : 1) d'étudier le rôle de l'endothéline, vasoconstricteur puissant, dans le rejet suraigu ; 2) d'étudier la réponse immunitaire, chez le receveur, vis-à-vis des protéines produites par des hépatocytes xénogéniques ; 3) d'induire une tolérance vis-à-vis de ces protéines xénogéniques. Dans la première partie du travail, nous avons observé que la perfusion de foies isolés de rats par du sérum humain frais induisait une vasoconstriction rapide et puissante. Cet effet était inhibé par l'administration des antagonistes des récepteurs de l'endothéline-1. Ces données suggèrent que l'endothéline-1 participe au processus de rejet suraigu et que l'utilisation des antagonistes des récepteurs de l'endothéline pourrait avoir un effet bénéfique dans la prévention du rejet suraigu. Dans la deuxième partie du travail, nous avons transplanté des hépatocytes humains encapsulés chez le rat. Nous avons détecté la production d'anticorps anti-hépatocytes et anti-albumine humains. Ces résultats suggèrent que les protéines d'un foie xénogénique discordant ne peuvent pas être tolérées spontanément par le receveur. Dans le troisième travail, nous avons tenté d'induire une tolérance vis-à-vis des protéines xénogéniques par injection de ciclosporine pendant une période courte (14 jours). Ce traitement inhibait la production d'anticorps dirigés contre les protéines produites par des cellules HepG2 encapsulées pendant une période prolongée (60j) et prolongeait la fonction de ces cellules.
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Pârvu-Ferecatu, Iona Costina. "Etude de nouvelles activités de p53 et Rb à la mitochondrie et dans le contrôle de l'apoptose." Versailles-St Quentin en Yvelines, 2008. http://www.theses.fr/2008VERS0043.
Анотація:
Les protéines p53 et Rb sont des régulateurs du cycle cellulaire et de l’apoptose et leur activité est altérée dans la plupart des cancers humains. Les travaux réalisés dans le cadre de ma thèse visaient à mieux comprendre le rôle de p53 et de Rb, tant dans l'apoptose que dans le contrôle de la survie cellulaire. Ainsi, nous avons mis en évidence, en condition de stress, que la protéine p53 est capable d’induire une nouvelle voie d’apoptose indépendante de la mitochondrie et qui est contrôlée par la caspase-9. L’action de celle-ci repose sur sa capacité à cliver la protéine Rb pour générer une forme tronquée p76Rb qui est capable de protéger les cellules de la mort induite par p53. Par ailleurs, nous avons décrit pour la première fois une localisation mitochondriale de protéines p53 et Rb dans de nombreux modèles de cellules en prolifération. A la mitochondrie, la protéine p53 est située au niveau des membranes tandis que la protéine Rb est retrouvée dans des compartiments internes de l’organite. Les régions de p53 qui sont impliquées dans la localisation mitochondriale sont distinctes de celles mise en jeu dans la fixation de p53 à l’ADN nucléaire ou à la mitochondrie en condition de stress. La protéine VDAC, une protéine canal de la membrane externe, apparaît comme un partenaire mitochondrial avec lequel p53 interagit en l'absence de stress. Le domaine à poche de la protéine Rb est nécessaire pour permettre à la protéine de se lier à la mitochondrie. Ces résultats suggèrent soit que la mitochondrie constitue un site de séquestration de p53 et de Rb, soit que ces protéines possèdent une activité spécifique au niveau de cet organiteSince their discovery, p53 and Rb proteins have been considerably studied mainly due to their regulatory function of cell cycle and apoptosis; their activities are found to be inactivated in most human cancers. During my PhD, I focused my interest in better understanding the role of p53 and Rb proteins in both apoptotic and living cells. First, we demonstrated that in stress conditions p53 is able to activate a mitochondria-independent alternative apoptotic pathway, which is under control of caspase-9. Moreover, we show that this caspase is able to cleave Rb protein, to generate a truncated p76Rb form which protects cells from p53-dependent apoptosis. Afterwards, we brought evidences of a mitochondrial localization of these proteins in proliferative cells, in many cell models, localization that has never been described before in such conditions. At mitochondria, p53 is mainly located at membranes level (inner or outer) while Rb displays more of an internal placement (inner-membrane or matrix). The domains of p53 involved in mitochondria localization of living cells seem to differ from those involved in nuclear or mitochondrial localization in stress conditions. The VDAC protein, one of most abundant proteins of mitochondrial outer-membrane, is the mitochondrial partner of p53 solely in living conditions. As for Rb, the pocket domain appears to be the one required for mitochondrial binding of the protein. These results suggest either that mitochondria may represent a sequestration site for both p53 and Rb, or that these proteins may be directly involved in mitochondria activity
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Sarzi, Emmanuelle. "Caractérisation génétique et phénotypique des déplétions de l'ADN mitochondrial." Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05T048.
Анотація:
Les maladies mitochondriales forment le groupe le plus courant d'anomalies congénitales du métabolisme. Ces maladies représentent actuellement plus de 17% des consultations régulières de notre service de génétique médicale. Les déficits multiples de la chaîne respiratoire mitochondriale sont à l'origine d'un grand nombre de maladies mitochondriales. Ils se caractérisent par des atteintes multi-viscérales responsables la plupart du temps d'un décès précoce dans les premières années de vie des patients atteints par ce type de pathologie. Depuis une quinzaine d'années, notre laboratoire a recruté un très grand nombre de patients présentant un déficit multiple de la chaîne respiratoire (CR). En 2001, il a été mis en évidence qu'un tout nouveau type d'anomalie touchant l'ADN mitochondrial (ADNmt) pouvait être à l'origine de ces déficits multiples. Ces anomalies sont des modifications quantitatives de l'ADNmt connues sous le nom de déplétions de l'ADNmt. Le recrutement important de cas de déficits multiples et le faible rendement de diagnostic moléculaire établi nous a incité à considérer les déplétions de l'ADNmt comme origine potentielle de déficits multiples de la chaîne respiratoire. Le travail de recherche présenté dans ce manuscrit a eu pour objectif tout d'abord d'estimer l'incidence des déplétions de l'ADNmt dans notre cohorte de patients atteints de déficit multiple de la CR. Nous nous sommes ensuite attachés à définir les atteintes cliniques associées à ces déplétions de l'ADNmt. Enfin, l'étude des gènes connus de déplétion de l'ADNmt DGUOK, POLG1 et TK2 nous a permis de mieux caractériser ces patients. Par la suite, l'étude par cartographie génétique de nos familles consanguines avec déplétions de l'ADNmt et de mutation actuellement inconnue, nous a conduit à la première identification de mutations récessives dans le gène PEO1 responsables d'un syndrome hépatocérébral de déplétion de l'ADNmt. La dernière partie de ce manuscrit rapporte l'étude en cours de cartographie génétique et de séquençage de gènes candidats pour une famille consanguine présentant un autre type de syndrome hépatocérébral associé à un déficit multiple de la chaîne respiratoire. L'ensemble de ce travail a permis à notre laboratoire d'acquérir de meilleures connaissances de l'origine génétique des déficits multiples de la chaîne respiratoire associés à une déplétion de l'ADNmt et d'améliorer ainsi le conseil génétique d'une partie des maladies mitochondrialesMitochondrial diseases are a common group of metabolism pathologies. Nowadays, they represent more than 17% of our clinical consultations. Multiple respiratory chain deficiency account for an important number of mitochondrial disease and are characterised by a multi-systemic organ involvement leading to early death. Since these last 15 years, we have recruited a large number of patients with multiple respiratory chain deficiency. In 2001, it has been shown that a mtDNA quantitative anomaly was at the origin of this defect also named mtDNA depletions. The large number of patients with multiple respiratory chain deficiency and the weak yield of molecular diagnosis prompt us to consider mtDNA depletion as a cause of multiple respiratory chain deficiency. The aim of this work was firstly to estimate the incidence of mtDNA depletion in our series of multiple respiratory chain cases. Then, we characterised the genetic and phenotypic features of mtDNA depletions. Finaly, the study of one family among our consanguineous and/or multiplex patients allowed us to identify a new gene responsible for mtDNA depletions associated with a hepatocerebral failure. This gene also named PEO1 encodes for the mitochondrial Twinkle helicase which has been ever known to cause adult onset PEO in a dominant transmission. Finally, we have studied another consanguineous family with multiple respiratory chain deficiency and hepatic failure. This work allowed us to improve the genetic counselling in our laboratory especially for all patients with multiple respiratory chain deficiency associated with a mtDNA depletion
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Herpe, Yves-Edouard. "Apport à la production d'hépatocytes à usage pharmacotoxicologique et thérapeutique : étude de la différenciation des cellules souches embyonnaires humaines en endoderme hépatique induit par une lignée stromale." Paris 11, 2010. http://www.theses.fr/2010PA11T090.
Анотація:
Nous présentons principalement ici une stratégie de différenciation des cellules souches embryonnaires humaines (hESC) en endoderme hépatique basée sur l'utilisation d'une lignée stromale. Quand les hES sont cultivées en présence de la lignée stromale ou de son milieu conditionné, les hESC donnent naissance à des structures tridimensionnelles typiques. L'étude par microscopie électronique montre que les cellules forment, en cours de différenciation, un épithélium présentant des caractéristiques hépatiques (granules de glycogène, structures canaliculaires). L'étude par RT-PCR et immunocytochimie démontre que, au cours du processus de différenciation, la modification du profil phénotypique des cellules mime de façon frappante les différentes phases du développement de l'endoderme hépatique in vivo, avec l'apparition en fin de processus d'une population cellulaire arborant un profil phénotypique d'hépatoblasteHere we mainly describe a strategy based on the use of a stroma!cell line (SCL) to obtain hepatic endodermal cells from human embryonic stem cells (hESC). When co-cultured with the SCL or its conditioned medium, hESC cells give rise to typical three dimensional structures. Electron microscopy analysis of the cells undergoing differentiation shows the formation of a typical hepatic epithelium (glycogen granules, canaliculi-like structures). Lmmunofluorescence and RT-PCR transcriptional studies demonstrated that during the course of the differentiation process, hESC cells progressively modify their gene expression profile strickingly mimicking hepatic endodermal development in vivo. Finally, a population of cells displaying membrane markers of hepatoblasts appears at the end of the differentiation process
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Perilhou, Anaïs. "Le facteur de transcription COUP-TFII, un nouvel acteur dans le contrôle de l'homéostasie glucidique dans le foie et le pancréas." Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05T028.
Анотація:
La régulation de l'homéostasie glucidique est notamment contrôlée au niveau génique. Nous avions montré que la délétion de COUP-TFII (Chicken ovalbumin upstream promoter transcription factor II) dans les cellules insuliniques chez la souris entraîne un défaut de sécrétion d'insuline. Ce travail montre que 1) l'expression de COUP-TFII est contrôlée négativement par le glucose et l'insuline dans les cellules bêta du pancréas et les hépatocytes in vivo et in vitro via la signalisation des facteurs ChREBP et Foxo-1; 2) COUP-TFII inhibe la transcription, le contenu et la sécrétion d'insuline et Festérifïcation des acides gras dans la lignée de cellules bêta INS-1 832/13; 3) il existe une activation réciproque entre l'expression des gènes COUP-TFII et HNF-4α (MODY-1) dans les cellules bêta. Ces résultats permettent de proposer COUP-TFII comme une acteur majeur dans le contrôle de l'homéostasie glucidique à jeun, et donc potentiellement dans des pathologies comme le diabète de type 2Metabolic pathways concerned in the regulation of glucose homeostasis in liver and pancreas are precisely controlled at gene level. We showed that COUP-TFII (Chicken ovalbumin upstream promoter transcription factor II) deletion from pancreatic beta cells in heterozygous mice led to abnormal insulin secretion. This work reveals that 1) COUP-TFII expression is negatively controlled by glucose and insulin in pancreatic beta cells and hepatocytes, in vivo and in vitro, via ChREBP and Foxo-1 signaling; 2) COUP-TFII inhibates insulin genes transcription, as well as insulin content and insulin secretion in beta 832/13 ENS-1 cell line, and decreases the fatty acid esterification capacity in these cells; 3) COUP-TFII and HNF-4alpha (MODY-1) activate one another their expression in pancreatic beta cells. These results conduct and argue to propose an important contribution of COUP-TFII hi the control of glucose homeostasis in the fasted state, and potentially in pathologies as type 2 diabetes
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M'Baya-Moutoula, Eléonore. "Impact de la signalisation calcique dans les maladies de la chaine respiratoire mitochondriale : étude du déficit du complexe II associé au syndrôme de Leigh." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T053.
Анотація:
Nonobstant les avancées des connaissances sur les bases génétiques de la phosphorylation oxydative (OXPHOS) liées aux maladies les facteurs déterminants à la moléculaire et / ou cellulaire, pour dysfonctionnement de tissus spécifiques ne sont pas complètement compris. Nous avons étudié les événements cellulaires associés, déficit du complexe II de respiratoire mitochondriale dans deux modèles: fïbroblastes humains issus d'un patient avec mutation SDHA (succinate dehydrogenase subunit A) et les fïbroblastes et les cellules neuronales dérivées des cellules chroniquement traitées avec des inhibiteurs du complexe II. La mutation ou l'inhibition du complexe II ont été présentés afin de déterminer une augmentation importante signaux Ca2+ basal et provoqué par des agonistes dans le cytosol et les mitochondries, en parallèle avec le dysfonctionnement mitochondrial (la perte du potentiel de membrane mitochondrial (Δψmit), réduction de la production de l'ATP mitochondrial ([ATP]mt) et des espèces réactives d'oxygène (ROS)). Le surcharge Ca2+ Cytosolique et mitochondrial a été associé à: i / une baisse l'expression de SERCA2b et PMCA; ii / augmentation de la fuite du Ca2+ RE; iii / diminution de la motilité mitochondriale; iv / augmentation des sites contacts RE-mitochondrie et v / augmentation de la capacité d'absorption du calcium mitochondrial. Fait intéressant, nous avons montré que les cellules déficientes en complexe II ont développé une production d'ATP glycolytique Ca2+ dépendant. En outre, l'augmentation de la charge Ça2 *mitochondriale a lieu avant la perte Aymit et a été montré pour être impliquée dans le développement de la pathologie mitochondriale. Ces résultats ont révélés l'importance de la signalisation Ca2+ dans le contrôle des bioénergétiques cellulaires liés au déficit complexe II de la chaîne respiratoire. Nos résultats peuvent contribuer à la compréhension de la pathologie liée à la carence en complexe II et des maladies de la chaîne respiratoire mitochondriale en généralDespite advanced knowledge on the genetic basis of oxidative phosphorylation (OXPHOS)-related diseases, the molecular and/or cellular detenninants for tissue specific dysfunction are not completely understood. We studied the cellular events associated with initochondrial respiratory complex II deficiency in two models: human fibroblasts derived from a patient harbouring SDHA (succinate dehydrogenase subunit A) mutation and fibroblasts and neuronal derived cells treated chronically with complex II inhibitors. Mutation or inhibition of complex II were shown to determine a large increase of basal and agonist-evoked Ca2+ signals in the cytosol and the mitochondria, in parallel with initochondrial dysfunction (membrane potential (Δψmit) loss, [ATP] reduction and Reactive Oxygen Species (ROS) production). Cytosolic and initochondrial Ca2+ overload was shown to be associated with: i/ down- expression of SERCA2b and PMCA; ii/ increased ER Ca2+ leakage; iii/ decreased initochondrial motility; iv/ increased ER-mitochondria contact sites; and v/ increased initochondrial calcium uptake capacity. Interestingly, we showed that complex II deficient cells developed a Ca2+ dependent glycolytic ATP production. Moreover, increased mitochondria! Ca2+ load occurred prior to Av|/nl), loss and was shown to be implicated in the development of initochondrial pathology. These results revealed the importance of Ca2+ signalling in the control of the cellular bioenergetics outcomes linked to respiratory chain complex II deficiency. Our findings may help in the understanding of the pathology linked to complex II deficiency and to mitochondrial respiratory chain diseases in general
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Ovejero-Vicente, Christine. "Etude in vivo de l'activation du signal Wnt/β-caténine et identification de gènes cibles régulés par β-caténine dans le tissu hépatique". Paris 5, 2004. http://www.theses.fr/2004PA05CD02.
Анотація:
Une réactivation constitutive de la voie Wnt/b-caténine est observée dans 40% des carcinomes hépatocellulaires (CHC) impliquant principalement des mutations du gène de b-caténine. Mon travail a consisté à étudier le rôle oncogénique de b-caténine et identifier des gènes régulés par b-caténine dans le foie. Nous avons montré en souris transgéniques que la surexpression d'un mutant activé de b-caténine est responsable d'une hépatomégalie associée à une hyperprolifération. A partir de ce foie hyperplasique, nous avons identifié plusieurs gènes cibles de b-caténine impliqués dans le métabolisme de la glutamine dont la glutamine synthétase. L'induction de ce gène est significativement corrélée à l'activation de la voie dans les CHC. Afin d'isoler des cibles précoces de b-caténine, nous avons recherché les gènes induits après l'injection d'un adénovirus codant pour une b-caténine activée dans le foie et avons identifié LECT2, gène de l'inflammation, comme une cible directe de b-caténineA constitutive reactivation of the Wnt/b-catenin pathway was observed in 40% of the hepatocellular carcinoma (HCC) mainly due to mutations in the b-catenin gene. The aim of my work was to study the oncogenic role of b-catenin and to identify the target genes regulated by b-catenin in the liver. We have shown in transgenic mice that the overexpression of an activated mutant of b-catenin in the liver was responsible of a hepatomegaly associated with hyperproliferation. With this hyperplasic liver, we have identified many target genes of b-catenin implicated in the glutamine metabolism, particularly the glutamine synthetase. The induction of this gene is significantly correlated to the activation of the Wnt/b-catenin pathway in the HCC. To identify the early target genes of b-catenin, we have searched the genes induced after the injection of an adenovirus coding an activated b-catenin in the liver. We have identified LECT2, gene of inflammation, like a direct target of b-catenin
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Köysüren-Demirkapi, Nursel. "Étude de l'élongation des acides gras NADH-dépendante dans le réticulum endoplasmique de foie : mécanisme de régulation au niveau de la B-cétoréduction." Paris 11, 1989. http://www.theses.fr/1989PA11A002.
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Rouquet, Nicolas. "Apoptose hépatocytaire induite par las systèmes FAS et TNF : applications thérapeutiques." Paris 5, 1996. http://www.theses.fr/1996PA05CD21.
Анотація:
Un nombre croissant de pathologies sont associées soit à une apoptose excessive (maladies neurodégénératives, infections virales) ou au contraire à une apoptose déficiente (cancers, syndromes auto-immuns). Grâce aux connaissances acquises ces dernières années sur les régulateurs et les effecteurs de l'apoptose, identifier des agents restaurant l'apoptose dans les cellules tumorales, ou des composés inhibant des processus de destructions cellulaires massives semble désormais envisageable. Parmi la liste des agents inducteurs d'apoptose, le ligand Fas (FasL) et la cytokine TNF, exprimés par le système immunitaire, participent à la défense de l'organisme contre les cellules autoréactives, infectées ou transformées. Diverses situations pathologiques suggèrent que le foie est un organe particulièrement sensible à l'action cytotoxique de FasL et du TNF. Nos travaux se placent dans une perspective i) d'utilisation d'anticorps cytotoxiques anti-Fas dans une thérapie anti-tumorale ii) de recherche d'inhibiteurs de l'action cytotoxique de FasL et du TNF dans des maladies infectieuses associées à une destruction massive hépatocytaire par ces inducteurs d'apoptose. Dans un premier temps, nous avons voulu déterminer la sensibilité d'hépatocytes transformés à l'apoptose induite par FasL et le TNF. A l'aide d'un modèle transgénique d'hépatocarcinome, obtenu par ciblage hépatique de l'expression des séquences codant pour la protéine virale grand T de SV40 (Tag), nous avons montré que les hépatocytes issus de ces souris transgéniques exprimant Tag présentent une résistance spécifique à Fas mais pas au TNF. In vivo, les nodules néoplasiques exprimant fortement Tag sont complètement protégés de la cytotoxicité induite par l'injection d'anticorps agonistes anti-Fas. De plus la résistance à Fas est une propriété intrinsèque de Tag et non un effet secondaire dû à l'acquisition d'un phénotype transformé, puisque des résultats similaires ont été obtenus dans un second modèle de souris transgénique exprimant un mutant non transformant de Tag. La propriété de certaines protéines virales d'inhiber l'apoptose des cellules infectées apparaît maintenant comme un mécanisme fréquent de protection contre le système immunitaire, permettant la dissémination et la production des particules virales, et pourrait favoriser l'émergence de tumeurs dans le cas de protéines virales transformantes comme Tag. Certaines maladies hépatiques sont, au contraire caractérisées par une apoptose massive, telles que les hépatites virales fulminantes ou certaines complications des chocs septiques. Ces maladies peuvent être mimées chez la souris, respectivement par l'injection d'anticorps agonistes anti-Fas, ou de lipopolysaccharides (LPS) qui provoquent une cytotoxicité induite par le TNF. Nous avons montré qu'un peptide synthétique inhibiteur de cystéine protéases, enzymes impliquées dans la voie de signalisation de Fas et du TNF, bloque efficacement l'apoptose induite par ces agents. L'injection intrapéritonéale de ce peptide protège les souris de l'effet létal de l'injection d'anticorps anti-Fas ou de LPS, et exerce même un effet curatif, démontrant le fort pouvoir de ce peptide à stopper une cascade d'événements apoptotiques déjà engagée. Enfin nous avons montré qu'in vitro le système Fas nécessite l'intervention de différents co-stimuli, qui entraînent une apoptose par des voies de transduction distinctes. Préciser la participation de ces co-stimuli et de ces voies de transduction à l'extrême sensibilité des hépatocytes à l'action de Fas et du TNF dans certaines pathologies, devrait permettre de concevoir des agents thérapeutiques anti-apoptotiques plus spécifiques. A l'instar du peptide inhibiteur de la voie commune de transduction de Fas et du TNF, ces agents ouvrent la voie au traitement symptomatique de pathologies caractérisées par une apoptose hépatique massive qui mettent souvent en jeu le pronostic vital des patients.
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Bourdon, Alice. "Ribonucléotide réductase et synthèse de l'ADN mitochondrial." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T006.
Анотація:
Les déplétions de l'ADN mitochondrial (ADNmt) sont caractérisées par une diminution de la quantité de molécules d'ADNmt et sont une cause importante des déficits de la chaîne respiratoire. Les travaux présentés dans cette thèse ont permis d'identifier un nouveau gène nucléaire de déplétion de l'ADNmt associée à une encéphalomyopathie sévère conduisant au décès dans les premiers mois de vie. Ce gène code pour une petite sous-unité de la ribonucléotide réductase p53R2 induite par le facteur suppresseur de tumeurs p53. La ribonucléotide réductase catalyse la réduction des nucléotides en leurs désoxynucléotides correspondants, ce qui constitue l'étape limitante dans la synthèse de l'ADN. La deuxième partie de ce travail a porté plus précisément sur le rôle de p53R2 dans la réplication de l'ADNmt en abordant les questions de sa localisation subcellulaire ainsi que de la régulation des sous-unités de la ribonucléotide réductase au cours du développement, chez la souris, dans différents tissusMitochondrial DNA (mtDNA) depletions are characterized by a decreased number of mtDNA molecules and constitute a major cause of respiratory chain deficiency. This work allowed us to identify a new nuclear gene of mtDNA depletion associated with a severe encephalomyopathy leading to death in the first months of age. This gene encodes a small ribonucleotide reductase (RNR) subunit p53R2 which is a target of the transcription factor p53. RNR catalyses the reduction of the nucleotides into their corresponding desoxyribonucleotides, which is the rate limiting step for DNA synthesis. The second part of this work focuses on the role of p53R2 in mtDNA replication studying its subcellular localization and the expression of the subunits of RNR in several mouse tissues during development
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Begriche, Karima. "Désordres métaboliques induits par un déficit partiel en leptine : influence du régime alimentaire et prévention." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077197.
Анотація:
La leptine, une adipokine sécrétée par le tissu adipeux blanc, joue un rôle majeur dans la régulation de la prise alimentaire et des dépenses énergétiques. Les individus, ou les animaux totalement dépourvus de leptine souffrent d'une obésité morbide, d'un diabète de type 2 et d'une stéatose hépatique massive. Chez l'homme, le déficit total en leptine est très rare. En revanche le déficit partiel en leptine (DPL) est plus répandu et pourrait prédisposer au développement d'un surpoids et d'une obésité. Les souris ob/+, partiellement déficientes en leptine, constituent un bon modèle de prédisposition génétique au développement d'un surpoids et de troubles métaboliques. Dans une première partie de ma thèse, nous avons recherché si les altérations métaboliques induites par le DPL sont aggravées par une alimentation hypercalorique (HC). Nos résultats montrent que dans un contexte nutritionnel d'excès calorique, le DPL aggrave l'augmentation de l'adiposité corporelle, l'intolérance au glucose (associée à une légère résistance à l'insuline), et favorise une hypertriglycéridémie à l'état nourri et le développement d'une stéatohépatite modérée. Dans une deuxième partie de ma thèse, nous avons recherché à déterminer si un traitement supplétif en leptine, ou une administration d'acide β-aminoisobutyrique (BAIBA, un catabolite de la thymine), pouvaient ou non prévenir l'apparition des anomalies métaboliques chez les souris ob/+ nourries par le régime HC. Nos résultats indiquent que le traitement supplétif en leptine, ou l'administration de BAIBA sont susceptibles de prévenir totalement ou partiellement les troubles métaboliques chez les souris ob/+ nourries par le régime HCLeptin , an adipokine mainly expressed in adipose tissue, plays a central role in the control of food intake and energy expenditure. Total leptin deficiency due to missense leptin (ob) gene mutation leads to morbid obesity, type 2 diabetes and massive steatosis in ob/ob mice or in men. Although total leptin deficiency is extremely rare in humans, a larger number of individuels could have low levels of leptin as the consequence of a heterozygous mutation within the ob gene (partial leptin deficiency, PLD). PLD mice (ob/+ mice) could be an experimental model to study genetic predisposition to overweight and metabolic abnormalities. In the first part of my thesis, by feeding ob/+ mice with an hypercaloric diet (HC diet), we try to show how a calorie excess can dramatically increase body fat mass and promote associated metabolic disorders. Our results clearly demonstrated that a PLD under HC feeding promotes obesity, glucose intolerance (associated with a mild insulin résistance), post-absorptive hypertriglyceridemia and steatohepatitis. In the second part of my thesis, we try to determine if a leptin supplementation or whether a β- aminoisobutyric acid (BAIBA, a catabolite of thymine) administration could prevent or not most of the disorders in ob/+ mice fed the HC diet. Our results showed that leptin supplementation and BAIBA administration were susceptible to prevent totally or partially most of the metabolic disorders in ob/+ mice fed the HC diet
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Simon-Kayser, Barbara. "Identification d'un gène humain localisé en 17q12, codant pour un membre de la famille F-box (Fbxo47) : étude des caractéristiques de la protéine." Nantes, 2006. http://archive.bu.univ-nantes.fr/pollux/show.action?id=9ed39bb9-3443-422a-a221-ce1ddba667f4.
Анотація:
Les altérations chromosomiques dans la région 17q surviennent dans de nombreux cancers, incluant les tumeurs papillaires rénales (pRCC), suggérant la présence d'un gène impliqué dans l'oncogenèse. Une analyse de perte d'hétérozygotie sur 15 cas de pRCC nous a permis de définir une zone minimale de délétion autour du marqueur D17S250 (17q12), dans laquelle nous avons isolé un nouveau gène, FBXO47. Ce transcrit apparaît fortement exprimé dans le testicule. La recherche de domaines protéiques caractéristiques a permis de montrer la présence: d'un domaine F-box, dont nous avons démontré la fonctionnalité; d'un motif Leucine-zipper ; d'une séquence d'adressage mitochondrial. Le motif F-box définit une famille de protéines dont la majorité des membres appartient à la voie de dégradation ubiquitine-protéasome dépendante. Afin de déterminer le rôle de Fbxo47 au sein de la cellule, nous avons cherché à identifier ses protéines partenaires. La technique de double-hybride nous a permis d'identifier Gfm1, facteur d'élongation principal de la traduction mitochondriale. Ce travail de thèse représente donc la première description de la présence du système F-box dans la matrice mitochondriale chez l'hommeGenetic alterations of chromosome arm 17q occur in numerous tumor types, including papillary renal cell carcinoma (pRCC). It suggests the presence of a tumor suppressor gene on the long arm of chromosome 17, which is critical for carcinogenesis. In this study, we analyzed 15 cases of pRCC for LOH. We identified a minimal deleted region in which the D17S250 marker (17q12). We isolated the cDNA of a novel gene named FBXO47. FBXO47 cDNA is preferentially expressed in normal tissue, particularly in the testis. The search of characteristic protein domains showed the presence of: a F-box domain, that we showed the functionality in vitro and in vivo; a Leucine-zipper; and a sequence of addressing mitochondrial. Most proteins of the family defined by the F-box motif belong to the ubiquitine-proteasome pathway. In order to determine the cellular function of Fbxo47, we sought to identify its protein partners. A screening in two- hybrid system enabled us to identify the protein Gfm1, the principal elongation factor of the mitochondrial translation. This thesis work represents indeed the first description of the presence of F-box system in mitochondrial matrix in human
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Goulut-Chassaing, Chantal. "Structure glycannique de type poly-n-acetyllactosamine dans une glycoproteine membranaire d'un hepatome ascitique : relation avec la differenciation et la transformation maligne." Paris 5, 1993. http://www.theses.fr/1993PA05S010.
Анотація:
La presence quasi constante des glycoproteines a la surface des membranes plasmiques des cellules animales, la situation externe privilegiee de leurs chaines glycanniques, les modifications morphologiques et fonctionnelles des cellules par alteration de la glycosylation ont conduit a l'hypothese que les structures glycanniques des proteines membranaires pourraient conditionner leur morphologie et certaines fonctions cellulaires. Une glycoproteine particuliere tiii a ete revelee a la surface cellulaire d'un hepatome ascitique de rat (hepatome de zajdela), et qui n'est pas exprimeesur les cellules hepatiques homologues. Cette glycoproteine a ete purifiee et caracterisee par une mr evaluee a 110 kda et une glycosylation importante (30%) de type n-lie. L'utilisation d'un antiserum anti-tiii confirme que cette glycoproteine n'est pas retrouvee a l'etat normal. L'hydrolyse exhaustive par la pronase conduit a un glycopeptide lourd et majoritaire. L'originalite de sa structure glycannique est constituee par, i) une tetra-antennarisation de la chaine oligosaccharidique ii) une structure de type poly-n-acetyllactosamine avec 3 unites repetantes, iii) une ramification par la presence de glcnac beta 1,6 sur un gal, iv) des residus neuac essentiellement lies en alpha2, 3 et des residus alpha gal terminaux preferentiellement lies sur l'antenne man alpha 1,6.
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Oulès, Bénédicte. "Impact physiologique du transfert de calcium entre le réticulum endoplasmique (RE) et la mitochondrie : rôle de l'isoforme SERCAI tronquée (S1T) dans le stress du RE et la maladie d'Alzheimer." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2009PA05T063.
Анотація:
Le transfret de calcium (Ca2+) entre le réticulum endoplasmique (RE) et la mitochondrie est médié par des sites de contact dynamiques. Nous avons montré que l'isoforme tronquée de la SERCA1 (S1T) ignitie et amplifie la voie pro-apoptotique du stress du RE. De plus, elle détermine une fuite localisée du Ca2+ au niveau des sites de contacts RE-mitochondrie induisant l'apoptose. Nous avons également montré que S1T est surexprimée dans la maladie d'Alzheimer. Parallèlement, l'Aβ s'accumule au niveau des sites de contact RE-mitochondrie. Par ailleurs, l'analyse de la signalisation calcique subcellulaire nous a permis de démontrer une dérégulation majeure de celle-ci. Enfin, nous avons révélé que le Ca2+ contrôle les processus bioénergétiques altérés dans la maladie de Leigh due au déficit du complexe II de la chaîne respiratoire mitochondriale. Nos résultats ont mis en évidence l'impact du transfert du Ca2+ entre le RE et la mitochondrie dans les pathologies du RE et de la mitochondrieCalcium (Ca2+) transfer between endoplasmic reticulum (ER) and mitochondria is mediated through dynamic contacts sites. We showed that the truncated isoform of SERCA1 (S1T) initiates and simplifies the proapoptotic pathway of the ER stress signaling. In addition, owing to its localization at the ER-mitochondria contacts sites, it determines a localized ER Ca2+ leak towards the mitochondria leading to mitochondrial apoptosis. We also demonstrated that S1T is overexpressed in Alzheimer's disease. In parallel, Aβ accumulates in ER-mitochondria contact sites. In addition, an extensive analysis of subcellular Ca2+ signaling allowed us to demonstrate its drastic deregulation. Lastly, we have revealed that Ca2+ control bioenergetics pathways in Leigh's disease related to mitochondrial respiratory chain complex II deficiency. Our results showed the impact of Ca2+ transfer from ER to mitochondria-related pathologies
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Woller, Aurore. "Entrainment of the mammalian circadian clock by metabolism in the liver : a quantitative mathematical model." Thesis, Lille 2, 2016. http://www.theses.fr/2016LIL2S036/document.
Анотація:
Les horloges circadiennes permettent aux organismes de synchroniser leurs processus physiologiques avec les variations périodiques de leur environnement telles que le cycle jour-nuit ou les cycles de prise alimentaire . Il n'est donc pas étonnant que les horloges périphériques des mammifères soient sensibles aux signaux de nourriture et soient capables d'ajuster les processus métaboliques (stockage et utilisation des ressources énergétiques) en fonction du status nutritionnel de la cellule. Or, notre style de vie moderne est caractérisé par une grande flexibilité au niveau des comportements alimentaire (heure des repas variable, grignotage, alimentation grasse,...) et cela est corrélé avec une forte augmentation de l'incidence des maladies métaboliques accompagnée de dérèglements de l'horloge. En particulier, les régimes high-fat entrainant de l'obésité sont associés à une importante perte d'amplitude des gènes d'horloge mais les mécanismes sous-jascents restent peu compris. Afin d'étudier ces questions, nous avons construit un modèle mathématique décrivant le couplage entre l'horloge du foie et les senseurs métaboliques SIRT1 et AMPK. Notre modèle reproduit précisément les données d'expression des principaux gènes d'horloge ainsi que l'effet d'une dérégulation de SIRT1 ou de l'AMPK. Dans ce modèle, l'activité de l'AMPK est considérée comme une mesure directe de l'alternance entre prise alimentaire et jeûne. Pour cette raison, nous nous sommes intéressés à l'effet de perturbations du rythme d'AMPK sur l'expression des gènes d'horloge. Le modèle montre qu'un amortissement du rythme d'AMPK donne lieu à une forte baisse d'amplitude dans l'expression des principaux gènes d'horloge et des niveaux de NAD+ similaire à ce qui est observé en régime high fat (ad libitum). Cela suggère fortement que les dérèglements de l'horloge observés dans ces conditions peuvent en bonne partie être expliqués par l'amortissement de l'activité de l'AMPK.Par ailleurs, des résultats expérimentaux récents (Hatori 2012) suggèrent une corrélation entre restauration de l'amplitude des gènes d'horloge et protection contre l'obésité en régime high fat. Le modèle permet de simuler l'administration pharmacologique d'un agoniste de l'horloge et montre que , suite un amortissement du rythme d'AMPK, l''amplitude des gènes d'horloge peut être restaurée mais uniquement si l'agoniste est administré à un moment bien précis de la journéeTo anticipate daily changes in their environment, most living organisms have evolved a circadian clock, which is synchronized to the diurnal cycle and orchestrates numerous biological functions. At organismal level, daylight is the main signal driving the clock. In multicellular organisms, however, clocks in peripheral organs respond to other cues. For example, the liver clock is primarily synchronized by fasting/feeding cycles and variations in the cellular metabolic state, as reflected by the NAD+/NADH and ATP/AMP ratios. To better understand the entrainment of peripheral circadian clocks by metabolic cycles, we have constructed a mathematical model of the mammalian circadian clock incorporating the metabolic sensors SIRT1 and AMPK. This model reproduces accurately experimental clock gene expression data from mouse liver in vivo and predicts correctly the effect of SIRT1 or AMPK loss-of-function. We used our mathematical model to investigate the response of the liver clock to various temporal patterns of AMPK activation, mimicking the effect of a normal diet, of fasting and of a high-fat diet feeding. Our results predict significant changes in clock gene expression and NAD+ time profiles between these situations. They suggest that the night peak in NAD+ level is due to circadian rhythms in NAMPT expression, while the day peak results from transient AMPK activation. Finally, we find that the loss of amplitude in expression rhythms observed when AMPK is depressed may be pharmacologically rescued using a timed REV-ERB agonist administration, suggesting strategies to fight against high fat diet-induced obesity
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Mazuy, Claire. "Etude de l’interaction entre le récepteur nucléaire FXR et le facteur de transcription FOXA2 dans le foie." Thesis, Lille 2, 2015. http://www.theses.fr/2015LIL2S055/document.
Анотація:
Le foie est un organe clef dans la régulation du métabolisme énergétique de l’organisme. La superfamille des récepteurs nucléaires y joue un rôle primordial de senseur de l’environnement métabolique. Parmi ces récepteurs nucléaires, le récepteur des acides biliaires FXR participe aux mécanismes de régulation de l’activité du foie à travers son action sur les métabolismes des acides biliaires, des glucides et des lipides. FXR est devenu ainsi une cible thérapeutique potentielle dans le traitement de nombreuses maladies impliquant un désordre métabolique comme les cholestases, le diabète de type 2 ou la stéatohépatite non-alcoolique. Malgré des résultats prometteurs dans le traitement de la stéatohépatite non-alcoolique, le traitement de patients avec un agoniste de FXR, le INT747, semble augmenter la concentration plasmatique du LDL-Cholestérol et diminue la concentration du HDL-Cholestérol suggérant un risque accru de développement d’athérosclérose. Ces effets sur le profil lipidique sont le frein majeur du développement clinique de ses agonistes. Les mécanismes moléculaires impliqués dans la régulation par FXR de nombreuses voies comme le métabolisme des lipides et du cholestérol sont peu explorés et peu compris. Compte-tenu de ces informations, il est d’autant plus intéressant d’approfondir les connaissances de ces mécanismes et d’identifier des facteurs ou de nouveaux partenaires capables de moduler l’activité transcriptionnelle de FXR plus spécifiquement dans le cadre du contrôle du métabolisme des lipides et du cholestérol. L’un des facteurs de transcription connu comme régulateur majeur de ces voies métaboliques dans le foie est le facteur de transcription de la famille forkhead FOXA2. Ce facteur de transcription, dont l’activité est dépendante des conditions physiologiques, est activé par le glucagon et inhibé par l’insuline. De plus, c’est également un régulateur du métabolisme des acides biliaires, du cholestérol et des lipides.L’objectif de cette thèse a été d’étudier l’interaction entre les voies de signalisation de FXR et de FOXA2 dans différentes lignées cellulaires d’hépatocytes humains ou murins et dans le foie. Nous avons établi que FOXA2 et FXR sont colocalisés sur la chromatine des cellules HepG2 et dans le foie de souris à proximité de gènes impliqués dans la régulation du métabolisme des lipides et du cholestérol. Ces zones de cofixation de FXR et de FOXA2 présentent très peu de motifs de fixation de FOXA2 suggérant l’implication d’autres motifs de fixation non connus ou un mécanisme de type « tethering ». Nous avons montré que la fixation de FOXA2 à ces zones de cofixation avec FXR est augmentée par l’activation de FXR par son agoniste, le GW4064, évoquant une potentielle interaction entre ces deux facteurs. Nous avons démontré que ces deux facteurs interagissaient physiquement et que FOXA2 est un répresseur de l’activité transcriptionnelle de FXR à travers l’utilisation de différentes approches et modèles cellulaires. Finalement, dans les hépatocytes primaires de souris, FOXA2 est impliqué dans la répression de l’activité transcriptionnelle de FXR par le glucagon sur le gène Shp.L’ensemble de ce travail met en évidence pour la première fois la répression de l’activité de FXR par le facteur de transcription caractéristique du jeûne FOXA2 à travers un mécanisme moléculaire suggérant une transrépression de type «tethering». Ces résultats présentent un mécanisme inédit par lequel l’activité de FXR peut être modulée par le statut nutritionnel de façon gène-spécifiqueThe liver is a key regulator of whole-body energy metabolism. The nuclear receptor super-family plays a leading role in the metabolic sensing of the liver. Among the nuclear receptors, the bile acid nuclear receptor FXR contribute to the modulation of liver activity in particular through the regulation of bile acid, lipids and glucose homeostasis. Consequently, FXR became a potential therapeutic target for many diseases implicated metabolic disorder such as cholestasis, type 2 diabete or Non-Alcoholic Steatohepatitis (NASH). Despite promising results especially on NASH, patient treatment with FXR agonist the INT747 seems to increase LDL-Cholesterol plasma concentrations together with a decreased concentration of HDL-Cholesterol suggesting a higher risk to develop atherosclerosis. These effects on plasma lipid profile are the major break against the development of agonists in clinics. Giving the poor understanding and knowledge of the molecular mechanisms which govern FXR regulation of activity on various signaling pathways, it is of major interest to find new partners and regulators of FXR and especially on lipid and cholesterol homeostasis. One of the transcription factor known to be active in the control of these signaling pathways in the liver is the forkhead box transcription factor FOXA2. This transcription factor whose activity is dependent of physiological conditions is activated by glucagon and inhibited by insulin. In addition, this factor is known to regulate bile acid, cholesterol and lipid metabolism, functions very close from FXR activities in the liver.The objective of this PhD was to study the interaction between FXR and FOXA2 signaling pathways in different hepatic cells lines from human or mouse origin and in the liver. We established that FOXA2 and FXR are colocalised in HepG2 cells and liver chromatin near genes implicated in the lipid and cholesterol metabolism. These FXR/FOXA2 cobinding zones present few consensus FOXA2 response elements suggesting the implication of non consensus binding motifs or a “tethering” mechanism. We show that FOXA2 binding to FXR/FOXA2 cobinding zones is increased when FXR is activated and/or more present in the chromatin evoking a potential interaction between these two factors. We demonstrate that FXR and FOXA2 interact physically and that FOXA2 is a repressor of FXR transcriptional activity using different approaches and cellular models. Finally, we show that FOXA2 is implicated in glucagon-induced repression of FXR transcriptional activity on Shp gene.To conclude, our results show for the first time that the fasting key regulator of lipid and cholesterol homeostasis FOXA2 is a repressor of FXR transcriptional activity through a plausible mechanism involving “tethering” process. This work gives a novel mechanism by which FXR activity can be modified by nutritional status in a gene-specific manner
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Nagy, Héléna Juliana. "Traitement des tumeurs hépatiques et ovariennes expérimentales par transfert de gène codant pour la thymidine kinase du virus herpès simplex de type 1." Paris 5, 1999. http://www.theses.fr/1999PA05CD03.
Анотація:
Les progrès réalisés au cours de la dernière décennie en biologie moléculaire permettant aujourd'hui, grâce à la thérapie génique, d'envisager une nouvelle approche dans le traitement des cancers. Dans cette étude nous nous proposons d'etudier l'effet de la thérapie génique par le transfert rétroviral du gène suicide codant pour la thymidine kinase du virus herpès simplex de type 1 (TK-HSV1) dans deux modèles expérimentaux de cancer, l'hépatocarcinome (HC) et l'adénocarcinome de l'ovaire. Le principe général de la thérapie génique est d'introduire un gène étranger dans une cellule cible à l'aide de vecteurs, notamment rétroviraux. Nous avons utilisé dans notre étude le transfert rétroviral du gène de la TK-HSV1. Il agit indirectement en transformant un analogue nucléosidique comme le ganciclovir (GCV) en forme monophosphate, qui est transformée ensuite en forme triphosphate toxique pour la cellule tumorale. La destruction de tumeurs contenant le gène de la TK-HSV1, après traitement par le GCV, peut déclencher un effet amplificateur (" effet bystander ") par transfert de métabolites toxiques et par une stimulation de l'immunité antitumorale. Dans cette étude, nous avons développé deux modèles expérimentaux syngéniques et orthotopiques, un d'HC (MCA-RH8994) et un autre d'adénocarcinome de l'ovaire chez le rat (DMBA-OC-1). Avec ces deux modèles, nous avons étudié le potentiel de l'utilisation du gène de la TK-HSV1 dans le traitement de ces tumeurs, ainsi que l'effet immunitaire à distance observé lors du traitement. Nous avons aussi développé des protocoles plus proches de la clinique comme la transduction in vivo des tumeurs ovariennes et le traitement adjuvant post-opératoires du cancer de l'ovaire pour la prévention de récidives et des métastases. L'étude in vitro de différentes lignées cancéreuses (cancers coliques, hépatocarcinomes de rat et adénocarcinomes de l'ovaire de rat et humainses) a montré que toutes étaient efficacement transduites par le vecteur rétroviral, avec des variations selon la lignée et le surnageant utilisé. Les lignées tumorales TK+ produites ont été de 300 à 7000 fois plus sensibles au GCV que leur lignée mère respective. Avec les deux modèles de tumeurs exprimant le gène de la TK, l'étude a permis d'observer une réduction significative du volume tumoral dans le groupe traité par le GCV (à la dose de 75mg/kg ;2x par jour) par rapport au groupe témoin (HC : p<0. 02 ; cancer de l'ovaire : p<0. 001), avec une toxicité minimale. L'étude de la survie prolongée des rats, avec le modèle d'HC, a montré une augmentation significative de la survie des rats traités par GCV (p<0. 001). Néanmoins, une repousse tumorale après arrêt du GCV, à partir de tumeurs résiduelles, a été observée dans 60% des cas, soulignant l'importance probable d'un traitement répété. Une regression quasi complète des tumeurs TK+ a été aussi observée dans le modèle bifocal ovarien (TK- dans un ovaire/TK+ dans l'autre) traité par GCV (p<0. 0001). Simultanément, nous avons aussi observé une réduction tumorale significative des tumeurs TK- localisées sur l'ovaire controlatéral (p<0. 014), avec augmentation de la nécrose (p<0. 01), des polynucléaires (p<0. 004) et des lymphocytes (p<0. 03) infiltrant la tumeur. L'étude immunohistochimiques de ces tumeurs a montré une augmentation des lymphocytes T (LT) CD4+ (p<0. 01), LT CD8+ (p<0. 006), " natural killer " (NK) (p<0. 006) et macrophages (NS). Nous avons aussi observé, dans les tumeurs de l'ovaire, une transduction in vivo du gène marqueur LacZ faible après injection de cellules productrices décongelées, indiquant l'importance de la récupération post-décongélation sur l'efficacité de la transduction in vivo. Finalement, nous avons développé un modèle de survie post-opératoire des tumeurs ovariennes plus proche de la clinique. L'étude préliminaire des traitements post-chirurgicaux, basés sur l'injection des cellules productrices de rétrovirus TK-HSV1 (M11) ou de lignées tumorales TK+ décongelées, n'a pas montré cependant un effet significatif sur la survie. Dans cette étude nous avons montré la faisabilité du traitement des hépatocarcinomes et des cancers de l'ovaire expérimentaux par l'approche TK-HSV1/GCV. Nous avons aussi montré que l'effet bystander, amplifiant l'effet antitumoral du système TK/GCV, peut exister à distance dans la cavité péritonéale, avec la participation de l'immunité T dépendante et de l'immunité naturelle. Dans une perspective clinique, cette observation d'un effet antitumoral significatif locale et à distance est très encourageant
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Bazin-Redureau, Martine. "Pharmacocinétique et catabolisme hépatique des anticorps et fragments." Paris 5, 1995. http://www.theses.fr/1995PA05CD11.
Анотація:
Ce travail concerne l'étude de la pharmacocinétique plasmique et du catabolisme hépatique des anticorps et des fragments d'anticorps. Dans une première partie, nous avons étudié l'influence de l'origine des anticorps (homme, cheval, rat et souris), de la sous-classe (1 et T), de la taille (IgG, 150 kDa ; F(ab')2, 100 kDa ; Fab, 50 kDa), et de la dose d'anticorps administrée sur les paramètres pharmacocinétiques. Cette étude a été réalisée à partir d'un modèle standardisé à savoir un receveur unique (le rat) et une technique de dosage unique (marquage des anticorps à l'iode 125). Les anticorps ont été administrés par voie intra-veineuse rapide et à dose unique. Les immunoglobulines de sous-classe 1 (IgG1) montrent une faible distribution (4 fois le volume plasmatique du rat) et une faible clairance (15,6 ml/kg/jour). La principale différence est observée avec l'IgGt avec un volume de distribution et une clairance 2 fois plu élevés que les IgG1 suggérant que la glycosylation plus importante au niveau du fragment Fc des IgGT est linéaire entre 0. 07 et 0. 7 mg/kg. La pharmacocinétique des anticorps est dépendante du poids moléculaire puisque la distribution et la clairance systémique augmentent quand le poids moléculaire décroît. La pharmacocinétique des fragments F(ab')2, de cheval anti-vipera aspis et des fragments Fab de mouton anti-digoxine évaluée chez la souris, le rat et le lapin montre qu'une approche allométrique permet de prédire les paramètres pharmacocinétiques des anticorps chez l'homme (clairance, volume de distribution et demi-vie d'élimination). Dans une deuxième partie, la catabolisme hépatique des anticorps et fragments d'anticorps marqués à l'iode 125 a été étudié sur deux modèles : le foie isolé perfusé de rat (FIP) et les cellules hépatiques (cellules parenchymateuses (PC) et cellules non-parenchymateuses (NPC) isolées en suspension. L'albumine bovine sérique lactosylée (BSA-Lac) ou traitée au formadéhyde (BSA-F) ont été utilisées respectivement comme marqueurs de la liaison spécifique aux PC et NPC. Les cinétiques de captation réalisées sur FIP montrent un faible coefficient d'extraction hépatique (<0. 003) quelque soit l'origine de l'anticorps et des fragments alors que ce coefficient est égal à 0. 392 pour la BSA-Lac après trois heures d'expérimentation. L'analyse par SDS-PAGE suivie d'une détection autoradiographique ne relève aucuns catabolites ou composés de plus hauts poids moléculaires. L'excrétion biliaire concerne principalement l'iode libre pour les IgG et fragments avec les deux types cellulaires hépatiques principaux. Les interactions des anticorps avec le foie sont de type non-spécifiques. De plus, cette étude montre que la glycosylation du fragment des IgG monomériques n'intervient pas dans leur clairance hépatique contrairement à la plupart des glycoprotéines plasmiques.
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Conti, Filoména. "Etude des facteurs de risque du rejet chronique d'allogreffe hépatique chez l'homme." Paris 5, 1999. http://www.theses.fr/1999PA05CD01.
Анотація:
Après transplantation hépatique, 50% environ des patients présentent un rejet aigu, dont le traitement repose sur la corticothérapie à fortes doses. Dans 30% des cas, le rejet est corticorésistant et dans 10% des cas, il évolue vers le rejet chronique, dont le mécanisme reste mal connu. Cette thèse regroupe des travaux de recherche clinique, qui ont permis d'identifier les facteurs de risque de corticorésistance et de rejet chronique, et des travaux in vitro, visant à apprécier les paramètres biologiques associés à ces facteurs de risque. Nos résultats montrent l'absence de lésions hépatiques résiduelles après un épisode unique de rejet aigu. En revanche, les rejets récidivants induisent une altération de la fonction hépatique. Nous avons également montré que le rejet aigu récidivant, la corticothérapie pré-transplantation et la transplantation pour hépatopathie auto-immune sont des facteurs de risque de corticorésistance du rejet aigu. De plus, le rejet aigu corticorésistant favorise l'évolution vers le rejet chronique. Ces données ont changé notre attitude thérapeutique : un traitement immunosuppresseur faible, limitant les effets secondaires, est conservé chez les patients sans rejet aigu, le traitement est renforcé après un premier épisode de rejet aigu afin d'éviter l'altération ultérieure du greffon. Nous évitons la corticothérapie avant transplantation et nous mettons en place une immunosuppression renforcée en cas d'hépatopathie auto-immune. Les travaux in-vitro avaient pour but de mieux comprendre le rôle des cytokines, de l'apoptose et du complément au cours du rejet. Nous avons montré que l'IL-10, qui possède des propriétés immunosuppressives, n'est pas surexprimée au cours du rejet aigu ou chronique. In vitro, l'IL-10 diminue la prolifération lymphocitaire de façon synergique avec la ciclosporine ou le tacrolimus. L'association de l'IL-10 à la ciclosporine ou au tacrolimus pourrait donc améliorer la prophylaxie du rejet. Nous avons constaté la présence d'une diminution de sécrétion d'IL-1Ra en cas de corticorésistance. La persistance de cette anomalie au long cours est en faveur d'un défaut constitutionnel. Les patients porteurs d'un défaut de production de l'IL-1ra pourraient donc bénéficier d'un traitement anti-rejet comportant l'IL-1ra. L'IL-4 est fortement exprimée au cours du rejet aigu, et surtout du rejet chronique, et les données in vitro suggèrent qu'elle pourrait jouer un rôle effecteur au cours du rejet. Par ailleurs, nous avons mis en évidence une apoptose des hépatocytes et des cellules biliaires, favorisée par l'IL-4 et les acides biliaires, qui pourrait être impliquée dans l'évolution vers le rejet chronique. Des immunosuppresseurs ayant des activités anti-IL-4 pourraient donc être utilisés dans la prévention du rejet chronique. Nos résultats suggèrent enfin une possible implication du complément dans les lésions vasculaires et biliaires observées au cours du rejet chronique et de certaines complications biliaires. De nouveaux travaux vont compléter cette thèse, notamment : (1) l'évaluation de la production d'IL-1Ra avant la transplantation, dans le but d'en apprécier le retentissement sur le rejet ultérieur et d'en tirer une prophylaxie du rejet incluant l'IL-1Ra ; (2) l'évaluation des mécanismes d'apoptose au cours du rejet.
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Godoy, José Luiz de. "Régénération hépatique et transfert de gènes." Paris 5, 1999. http://www.theses.fr/1999PA05CD04.
Анотація:
Le transfert de gène dans le foie pourrait représenter une alternative à la transplantation hépatique pour traiter certaines maladies métaboliques. Plusieurs vecteurs ont été décrits pour réaliser un transfert de gène, notamment des vecteurs rétroviraux dont l'intégration à l'ADN chromosomique permettrait une expression stable à long terme du transgène. L'intégration du vecteur rétroviral dans le génome des cellules n'est possible qu'au cours de la mitose. Par conséquent, ces vecteurs doivent être administrés au cours de la régénération hépatique induite, par exemple, par une hépatectomie partielle. Un autre obstacle qui doit être surmonté correspond au risque de dissémination extra-hépatique de ces vecteurs en particulier au niveau de cellules germinales, ce qui risquerait de modifier le patrimoine génétique constitutionnel de la descendance. Nous avons développé dans ce travail 3 axes de recherche concernant la régénération hépatique et le transfert de gène par vecteurs rétroviraux. Dans le premier, nous avons montré que la régénération hépatique ex vivo dans le système de foie isolé-perfusé en normothermie se développe de façon similaire à la régénération in vivo chez le rat, et que les foies perfusés ex vivo peuvent être transplantés avec succès. Dans le deuxième, nous avons montré que la perfusion de vecteurs rétroviraux par le tractus biliaire d'un foie de rat en régénération permettait une transduction très efficace des hépatocytes jusqu'à 59 ± 24%. Dans le troisième travail, nous avons cherché à éviter l'étape de perfusion ex vivo et à éviter le risque de dissémination systémique des vecteurs rétroviraux ; nous avons donc développé un système de perfusion in vivo-in situ du foie du rat en régénération, le foie étant exclu temporairement de la circulation splanchnique pendant la perfusion des vecteurs. Le taux moyen de transduction des hépatocytes était de 34 ± 19%. Ce modèle pourrait être compatible en terme d'efficacité et de sécurité avec la perspective d'une application clinique du transfert de gène.
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Miech, Gilles. "Prolidase, prolinase : études biochimiques sur le foie de rat et sur les fibroblastes de peau humaine en culture." Paris 11, 1990. http://www.theses.fr/1990PA114802.
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Sarnacki, Sabine. "Etude des modalités d'induction de tolérance en transplantation d'organe chez l'animal." Paris 5, 1996. http://www.theses.fr/1996PA05CD20.
Анотація:
La connaissance de plus en plus précise des différentes étapes impliquées dans l'activation lymphocytaire T et de façon corollaire des mécanismes possibles d'induction de la tolérance périphérique a permis d'envisager de nouvelles approches thérapeutiques plus spécifiques dans la prévention du rejet d'allogreffe d'organes. La transplantation intestinale (TI) appartient avec la transplantation pulmonaire et la greffe de moelle osseuse aux transplantations qui attendent le plus des bénéfices de ces nouveaux traitements. Nous nous sommes intéressés au cas particulier de la TI et avons étudié deux modalités d'induction de tolérance à travers des modèles expérimentaux de transplantation d'organes développés chez le rat et la souris : le premier s'appuie sur le phénomène de tolérance donneur-spécifique induit par la transplantation hépatique (TH) décrit dans le modèle murin. Ce modèle a permis de mieux caractériser le phénotype des cellules qui infiltrent la greffe intestinale tolérée et qui sont bloquées dans leur fonction de destruction. Il montre que le phénomène de tolérance induite par la TH s'accompagne d'une infiltration massive des greffons intestinaux tolérés par des lymphocytes T du receveur majoritairement CD8αβ+, présentant les caractères de cellules inactivées dans leur réponse immunitaire vis-à-vis de l'alloantigène. En effet, elles ont perdu la capacité de recruter les effecteurs non spécifiques (macrophages et cellules NK) qui conduisent au rejet et présentent une diminution significative de l'expression du récepteur de l'IL-2. La nature précise de cet état d'inactivation et les mécanismes qui y conduisent restent à définir. Le second s'appuie sur l'utilisation d'anticorps monoclonaux dirigés contre des molécules d'adhésion impliquées dans l'activation et la migration lymphocytaire : LFA-1 et la chaîne α4 des intégrines. Un premier travail a montré que l'administration transitoire d'un anticorps anti-LFA-1 prévenait le rejet de greffe cardiaque chez la souris en situation haplo-incompatible pour le CMH. L'administration de cet anticorps s'est également révélée efficace dans la prévention du rejet d'allogreffe intestinale chez la souris. Par contre, l'anticorps anti-α4 n'a pas permis de prévenir de façon significative la survenue du rejet de greffe intestinale dans ce modèle murin. Ces résultats joints aux autres travaux expérimentaux et clinique de la littérature concernant l'utilisation in vivo de l'anticorps anti-LFA-1 conduisent à envisager, après confirmation de ces résultats, son utilisation chez l'homme.
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Ploton, Maheul. "Impact de la phosphorylation de FXR par la PKA sur son activité transcriptionnelle et sur la régulation de la néoglucogenèse hépatique." Thesis, Lille 2, 2018. http://www.theses.fr/2018LIL2S032/document.
Анотація:
L’homéostasie glucidique est, durant un jeûne normal, maintenue grâce à un réseau de régulation complexe contrôlé principalement par le glucagon, produit par le pancréas. S’opposant aux effets de l’insuline, celui-ci orchestre notamment l'utilisation, le stockage et la synthèse du glucose par le foie, principal organe de production du glucose au cours du jeûne. Cette dernière s’effectue d’abord suite à la dégradation du glycogène ou glycogénolyse puis par la synthèse de novo de glucose ou néoglucogenèse. La néoglucogenèse hépatique est contrôlée par la modulation de l’activité et/ou de l’expression de différentes enzymes-clefs selon des mécanismes allostériques ou transcriptionnels.De multiples facteurs de transcription sont impliqués dans la régulation, au niveau transcriptionnel, de la néoglucogenèse hépatique. Le récepteur nucléaire des acides biliaires FXR est exprimé dans le foie et dans plusieurs organes impliqués dans le maintien de l’homéostasie glucidique. FXR participe à la régulation de nombreuses fonctions hépatiques essentielles, en contrôlant notamment les métabolismes des acides biliaires et lipidique. Le rôle exact de FXR sur la néoglucogenèse reste toujours débattu. L’objectif de cette thèse a donc été d’étudier le rôle de FXR dans le contrôle de la néoglucogenèse hépatique dans des conditions expérimentales reflétant certains aspects du jeûne. Nous avons démontré que FXR, en présence de glucagon, régulait positivement la néoglucogenèse selon deux mécanismes.Le premier mécanisme implique la phosphorylation de FXR par la PKA, une kinase activée par le glucagon. Cette modification post-traductionnelle de FXR permet une induction synergique de l’expression des enzymes-clefs de la néoglucogenèse par FXR et le facteur de transcription CREB. L’identification de ce mécanisme constitue la majeure partie des travaux présentés dans cette thèse. Ceux-ci ont été intégrés à des travaux menés précédemment dans le laboratoire qui nous ont permis d’identifier un mécanisme additionnel de régulation de la gluconéogenèse. L’interaction directe de FXR avec le facteur de transcription FOXA2, lui-même activé par le glucagon, inhibe la capacité de FXR à induire l’expression de SHP, un récepteur nucléaire inhibiteur de la néoglucogenèse.Ce travail a donc permis d’identifier pour la première fois que la néoglucogenèse hépatique est régulée positivement par FXR dans le cadre de la voie de signalisation du glucagon. Pour cela, FXR intègre le signal « glucagon » par deux mécanismes distincts: via une modification post-traductionnelle, sa phosphorylation par la PKA sur les sérines S325 et S357 et via une interaction protéine-protéine avec FOXA2Glucose homeostasis is maintained during normal fasting through a complex regulatory network controlled mainly by glucagon, a pancreatic hormone. Opposing the effects of insulin, it orchestrates the glucose use, storage and synthesis by the liver, the main organ that produces glucose during fasting. The latter is carried out first by the degradation of glycogen or glycogenolysis and then by de novo glucose synthesis or gluconeogenesis. Hepatic gluconeogenesis is controlled by modulation of various key enzymes activity and/or expression according to allosteric or transcriptional mechanisms.Multiple transcription factors are involved in the transcriptional regulation of hepatic gluconeogenesis. The nuclear bile acid receptor FXR is expressed in the liver and in several organs involved in glucose homeostasis. FXR regulates many essential liver functions, including controlling bile acid and lipid metabolism. The exact role of FXR on gluconeogenesis is still debated. The objective of this work was therefore to study the role of FXR in the control of hepatic gluconeogenesis under experimental conditions reflecting certain aspects of fasting. We demonstrated that FXR, in the presence of glucagon, positively regulated gluconeogenesis according to two mechanisms.The first mechanism involves phosphorylation of FXR by PKA, a glucagon-activated kinase. This FXR post-translational modification allows synergistic induction of key gluconeogenic enzymes expression by FXR and the CREB transcription factor. This mechanism identification constitutes the major part of the work presented in this thesis. These were integrated with work previously conducted in the laboratory that allowed us to identify an additional mechanism for regulating gluconeogenesis. The FXR direct interaction with the transcription factor FOXA2, itself activated by glucagon, inhibits the ability of FXR to induce the expression of SHP, a gluconeogenesis inhibitory nuclear receptor.This work has therefore identified for the first time that hepatic gluconeogenesis is positively regulated by FXR in the glucagon signalling pathway. For this, FXR integrates the "glucagon" signal by two distinct mechanisms: via post-translational modification, its phosphorylation by PKA on S325 and S357 serines and via protein-protein interaction with FOXA2
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Frisan, Emilie. "Etude de la différenciation érythroïde des syndromes myélodysplasiques de faible risque : rôle des protéines GATA-1 et Hsp70." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05T007.
Анотація:
L'engagement des progéniteurs hématopoïétiques normaux vers la lignée érythroïde est contrôlé par le stem cell factor (SCF) et) l'érythropoïétine (Epo) alors que la différenciation érythroïde terminale dépend de l'Epo. La dysérythropoïèse des syndromes! myélodysplasiques (SMP), maladies clonales de la cellule souche hématopoïétique, associe un défaut de différenciation des| progéniteurs et un excès d'apoptose des précurseurs. Ce travail montre : (1) l'implication du réticulum endoplasmique dans l'apoptose en aval du récepteur à domaine de mort Pas, (2) le défaut d'activation des MAPK par le récepteur de l'Epo chez les patients résistants au traitement par l'Epo, et (3) le clivage du facteur de transcription érythroïde GATA-1 par la caspase-3 par défaut de localisation nucléaire de la protéine chaperon Hsp70. L'export nucléaire d'Hsp70 dépend de sa phosphorylation en réponse au| SCF et serait augmenté par une expression ectopique du récepteur au SCF dans les érythroblastes matures de SMDNormal hematopoietic progenitors commitment into erythroid lineage is controlled by stem cell factor (SCF) and erythropoietin (Epo) while erythroid terminal differentiation is only Epo-dependent. DyserythropoYesis of myelodysplastic syndromes (MDS) which clonal disorders of the hematopoietic stem cell, combines a defective differentiation of the progenitors and an increased apoptosis of the precursors. This work shows (1) the implication of endoplasmic reticulum in MDS apoptosis downstream of death domain) receptor Fas, (2) defective Epo-dependent activation of the MAPK in patients resistant to Epo treatment, and (3) a caspase-3-mediated Cleavage of the erythroid transcription factor GATA-1 due to a defective nuclear localization of the chaperone protein Hsp70 in MDS. Nuclear export of HspVO is regulated by AKT phosphorylation in response to SCF and would be increased by an ectopic expression) of SCF receptor in MDS mature erythroblasts
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Seyer, Pascal. "Etude de l'implication directe de l'activité mitochondriale dans la régulation de la différenciation des myoblastes." École nationale supérieure agronomique (Montpellier), 2005. http://www.theses.fr/2005ENSA0027.
Анотація:
De nombreuses données indiquent que, parallèlement à son rôle dans le métabolisme énergétique, l'activité mitochondriale intervient également dans l'induction de l'apoptose, ainsi que dans la régulation de la prolifération et de la différenciation cellulaires. Il existe en particulier une véritable régulation de la différenciation myogénique par l'activité mitochondriale. En effet, une inhibition de l'activité mitochondriale par le chloramphénicol abroge la différenciation des myoblastes. Réciproquement, cette dernière est potentialisée par une stimulation de l'activité de l'organite induite par surexpression du récepteur mitochondrial de la T3. Cette régulation est indépendante de la production d'ATP par l'organite, et implique le contrôle de l'expression de myogénine et de l'activité des facteurs myogéniques. Dans ce travail, nous avons étudié les mécanismes impliqués dans l'influence myogénique de l'activité mitochondriale. Dans une première partie, nous avons démontré que l'expression du proto-oncogène cMyc, est respectivement stimulée ou diminuée par une inhibition ou une stimulation de l'activité mitochondriale. Cette régulation s'effectue au niveau de la transcription et de la stabilité du messager, ainsi qu'au niveau de la localisation nucléaire de la protéine c-Myc. De plus, la surexpression de cMyc reproduit très exactement les effets d'une inhibition de l'activité mitochondriale: i) abrogation de la différenciation terminale; ii) inhibition de l'expression du facteur de différenciation myogénique myogénine, sans altération de l'expression de myoD; iii) blocage de l'aptitude des facteurs myogéniques à induire la différenciation; iv) inhibition de la sortie des myoblastes du cycle cellulaire. Ces résultats démontrent que cMyc est une cible importante de l'activité mitochondriale qui est impliquée dans l'influence de l'organite sur la différenciation des myoblastes. Dans une seconde partie, nous avons mis en évidence l'existence d'un autre gène-cible de l'organite: la phosphatase calcium-dépendante calcineurine. Son expression est respectivement inhibée ou stimulée par l'inhibition ou la stimulation de l'activité mitochondriale. De plus, l'expression d'une forme constitutivement active de calcineurine stimule la différenciation des myoblastes et l'expression de Myogénine, alors que ces deux événements sont bloqués par l'expression d'un ARN antisens calcineurine. Enfin, la stimulation de l'activité mitochondriale, comme l'expression d'une forme constitutivement active de calcineurine, stimule spécifiquement l'expression de l'isoforme lente des chaînes lourdes de myosine. Ces données démontrent que, en partie via l'expression de calcineurine, l'activité mitochondriale régule non seulement la différenciation des myoblastes mais détermine également le type contractile des fibres musculaires.
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André, Fanny. "Influence du métabolisme mitochondrial dans la survie et la mort des cellules tumorales : intérêt du ciblage mitochondrial pour le traitement des cancers." Thesis, Lille 2, 2017. http://www.theses.fr/2017LIL2S001/document.
Анотація:
La mitochondrie occupe un rôle essentiel au sein des cellules cancéreuses. Etant la source principale de synthèse d’ATP mais est également le lieu de réactions anaboliques et cataboliques, la mitochondrie supporte le développement tumoral. De plus, la mitochondrie est également impliquée dans la réponse aux stress cellulaire en régulant notamment l’autophagie ou la mort des cellules cancéreuses.Dans ce contexte, nous avons démontré que la fonction mitochondriale peut altérer la réponse au stress réticulaire permettant la survie des cellules tumorales. En effet, la surexpression de la protéine GILZ (Glucocorticoid-Induced Leucine Zipper) atténue la mort cellulaire induite par le stress réticulaire. Ceci est permis grâce au maintien du réseau mitochondrial et à l’augmentation de la fonction mitochondriale. Dans cette étude, nous avons démontré que le maintien de la fonction mitochondriale est important pour l’effet protecteur de GILZ puisque l’utilisation de lignées cellulaires de mélanome dépourvues d’activité mitochondriale (lignées ρ0) et surexprimant GILZ sont sensibles à la mort induite par les inducteurs de stress réticulaire. Nos études ont également démontré que l’augmentation de la fonction mitochondriale induite par GILZ peut être utilisée pour resensibiliser les cellules cancéreuses à la mort notamment en utilisant des molécules prooxydantes comme l’elesclomol.Dans un autre contexte tumoral, nous avons également démontré qu’une sous population de cellules de mélanome BRAFV600E peuvent augmenter leur métabolisme mitochondrial dans le but de survivre à la mort cellulaire induite par les inhibiteurs de MAPK. La résistance aux MAPKi implique une augmentation significative de l’OxPHOS mitochondriale associée un remodelage du réseau mitochondrial autour du réticulum endoplasmique facilitant la recapture du calcium mitochondrial. Nos résultats ont permis de démontrer que la fonction mitochondriale est cruciale pour la survie des cellules cancéreuses. De part son rôle cellulaire multiple, il apparaît clairement que la mitochondrie constitue une cible thérapeutique de choix dans le traitement des cancersMitochondria occupies a key role in cancer cells. As the main source of ATP synthesis and the site of anabolic and catabolic reactions, mitochondria support tumor development. Besides, mitochondria are also involved in the response to cellular stress regulating autophagy or cancer cell death.In this context, we have demonstrated that mitochondrial function may alter the ER stress response thus promoting tumor cell survival. Indeed, overexpression of the Glucocorticoid-Induced Leucine Zipper protein (GILZ) protein attenuates endoplasmic reticulum stress mediated cell death. This is achieved by maintaining the mitochondrial network and the increase of mitochondrial function. In this study, we demonstrated that maintaining mitochondrial function is important for the protective effect of GILZ since using melanoma cell lines lacking mitochondrial activity (ρ0 cell lines) and overexpressing GILZ are susceptible to death induced by reticular stress inducers. Our studies have also shown that the increase of mitochondrial function induced by GILZ can be used to re-sensitize the cancer cells to death induced by prooxidant molecules as elesclomol.In another tumoral context, we have also demonstrated that a sub-population of BRAF mutated melanoma cells can increase mitochondrial metabolism to survive to ER stress-mediated cell death induced by several MAPK inhibitors. Resistance to MPAki involves a significant increase in mitochondrial OXPHOS associated with mitochondrial network remodeling around the ER, which facilitates mitochondrial calcium uptake. Our results have shown that mitochondrial function is crucial for the survival of cancer cells. Altogether our data indicate that given their multiple cellular roles, cancer cell mitochondria constitute attractive therapeutic targets
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Benel, Laurent. "Influence du transfert in vitro et des conditions de culture sur l'activité et la biogenèse mitochondriales du chondrocyte articulaire de lapin." Paris 11, 1989. http://www.theses.fr/1989PA114809.
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Schmitt, Françoise. "Thérapie génique in vivo des hépatopathies héréditaires cirrhogènes par des lentivirus recombinants à immunogénicité atténuée et dans une approche chirurgicale : application à la maladie de Wilson." Nantes, 2014. http://archive.bu.univ-nantes.fr/pollux/show.action?id=77773582-ec24-46c0-8d49-bf6003ab59a4.
Анотація:
La maladie de Wilson (MW) est une hépatopathie héréditaire régénérative causée par des mutations du gène ATP7B, qui code pour un transporteur hépatocytaire du cuivre. Elle induit une accumulation toxique de cuivre dans le foie et le cerveau, responsable d’une cirrhose précoce et de troubles neuropsychiatriques. Les traitements actuels sont lourds et une transplantation hépatique peut être nécessaire, laissant la place à des alternatives thérapeutiques innovantes, dont la thérapie génique (TG). Nous avons tout d'abord validé plusieurs marqueurs sériques diagnostiques de la MW et de suivi de l'hépatite aiguë, et adapté l'analyse morphométrique numérisée de la fibrose hépatique au rat LEC, modèle animal de la MW. Nous avons ensuite développé une technique d'injection chirurgicale du vecteur lentiviral (VL) en foie isolé en hyperpression, en avons prouvé l'efficacité sur la restauration de la transduction chez des rats pré-immunisés contre la protéine d'enveloppe du VL et l'avons appliquée à la TG du foie fibrotique. Enfin, nous avons créé un VL codant pour le cDNA du gène ATP7B, sous contrôle d'un promoteur foie-spécifique et contenant des séquences-cibles du miR142-3p, contrant la survenue d’une immunité spécifique. Injecté à des rats LEC, il a permis de restaurer à long terme une activité enzymatique de l'ATP7B en quantité suffisante pour induire une expression phénotypique, mais n'a pas empêché l'évolution vers la fibrose hépatique. Ces travaux ont démontré l'applicabilité de la TG in vivo par VL dans la MW, tout en confirmant la nécessité d'un taux de transduction initial très élevé pour obtenir une efficacité thérapeutique suffisante et prévenir toute fibrose hépatiqueWilson's disease (WD) is a hereditary liver disease due to mutations in the ATP7B gene, which encodes for a copper transporter in the liver. It leads to a toxic accumulation of copper in the liver and the brain, responsible for early cirrhosis and neuropsychiatric disorders. Current medications are burdensome and may imply liver transplantation, which is in favor of alternative therapeutic strategies, such as gene therapy (GT). In this work we have first validated different biological markers for WD diagnosis and acute liver disease progression, as well as the use of computerized morphometric analysis of liver fibrosis in the LEC rat, an animal model for WD. We have then developed a surgical approach for the injection of the lentiviral vector (LV) into an isolated liver in hyperpressure. Its use allowed a restoration of the transduction efficacy after LV injection in rats pre-immunized against the LV envelop protein, and we have addressed its potential for GT in a fibrotic liver. We have then injected in young LEC rats a LV encoding for the cDNA of the ATP7B gene, under control of a liver-specific promoter and containing target sequences of the miR142-3p, to prevent the development of a specific immune response. It allowed a long-term restoration of the ATP7B enzymatic activity, but did not prevent the occurrence of liver fibrosis. Thus, we have demonstrated that in vivo lentiviral GT could be applied to WD, but that a very high initial hepatocytes transduction level was mandatory to achieve a therapeutic efficiency and to prevent the development of liver failure
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Espeillac, Catherine. "Croissance hépatique et cancer : rôle des substrats de mTOR, Akt et S6K." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05T012.
Анотація:
Nous étudions la fonction de mTOR dans la prolifération physiologique, régénératrice et tumorale en utilisant plusieurs approches qui vont de la mutagenèse dirigée chez la souris aux traitements pharmacologiques. Nous avons pu mettre en évidence une surprenante spécificité fonctionnelle des substrats de mTOR, Akt et S6K, qui interviennent dans des processus distincts lors de la régénération hépatique et la progression tumorale. Nous avons montré que le complexe mTORCl et plus précisément la S6K1 ont un rôle prépodérant dans la régénération hépatique. Nos résultats indiquent un rôle de la cycline Dl. Nous avons également montré que le complexe mTORCZ et plus précisément Akt2 ont un rôle dans la carcinogenèse. Ces avancées dans la connaissance des cibles de mTOR qui régulent le cycle cellulaire et la progression tumorale ont des implications importantes dans la compréhension de la croissance et du métabolisme cellulaireWe are studying the function of mTOR in physiological, regenerative tumoral proliferation using several approaches ranging from site-directed mutagenesis in mice to pharmacological treatments. We were able to demonstrate a surprising functional specificity of substrates of mTOR, S6K and Akt, which are involved in distinct processes during liver regeneration and tumoral progression. We have shown that the mTORCl complex and more precisely the S6K1 have a role in liver regeneration. Our results indicate a role of cyclin Dl. We also showed that mTORC2 complex and more precisely Akt2 have a role in carcinogenesis. These advances in knowledge of targets of mTOR that regulate the cell cycle and tumoral progression have important implications in understanding the growth and cellular metabolism
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Enfissi, Antoine. "Implication des canaux calciques TRP dans les phénomènes de prolifération hépatocytaire." Paris 11, 2005. http://www.theses.fr/2005PA114802.
Анотація:
Les cellules des vertébrés ont développé un système intracellulaire de régulation qui utilise les ions calciques (Ca2+) pour contrôler de nombreux phénomènes physiologiques tels la prolifération cellulaire. Le fait que la croissance cellulaire dépende du Ca2+ extracellulaire suggère que l'entrée de Ca2+ joue un rôle important lors des événements mitogéniques. L'exacte nature moléculaire des canaux impliqués dans cette entrée reste encore matière à débats. Les gènes des canaux TRP (Transient Receptor Potential) encodent pour une vingtaine de canaux plus ou moins sélectifs au calcium. La sous-famille des TRPC comprend 6 membres chez l'homme dont certains, comme TRPC1 et TRPC6, ont déjà été impliqués dans les phénomènes de prolifération (Golovina, Platoshyn et al. 2001; Sweeney, Yu et al. 2002). Le criblage des ADNc codant pour les TRP dans des foies sains et tumoraux, chez l'homme et chez la souris, nous a permis de déterminer que TRPC6 est plus particulièrement impliqué dans les phénomènes de prolifération dans ce tissu. Nous avons développé un anticorps spécifique afin de suivre l'expression et la localisation de la protéine TRPC6. Chez la souris XVIInc/Z, l'induction chimique de tumeurs hépatiques, s'accompagne de l'expression du canal membranaire TRPC6 au niveau de la zone tumorale. L'étude des courbes de croissance de différentes lignées surexprimant stablement le canal TRPC6, l'utilisation de petits ARN interférents dirigés contre TRPC6 et la mesure de l'entrée de calcium dans ces conditions, nous ont permis de définir la relation entre influx calcique et prolifération cellulaire. Ces travaux montrent que le canal TRPC6 humain est un acteur de l'entrée capacitative, elle-même impliquée dans les phénomènes de prolifération hépatocytaire.
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Préau, Sébastien. "Implication du cytosquelette dans les dysfonctions myocardiques : exemple de la cardiomyopathie septique." Phd thesis, Université du Droit et de la Santé - Lille II, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01018473.
Анотація:
Le cytosquelette se compose de microfilaments (polymères d'actine), de microtubules (polymères de tubuline) et de filaments intermédiaires (polymères de desmine, de lamines ...). Le sepsis défini par une infection associée à une réaction inflammatoire systémique est responsable de dysfonctions myocardiques de mauvais pronostique. Cette cardiomyopathie apparait dans les premières heures du sepsis et guérit en moins de deux semaines chez les survivants. Même si certaines études démontrent l'implication d'éléments du cytosquelette dans la cardiomyopathie septique, les rôles des microfilaments et des microtubules ne sont pas clairement établis.Macrophage migration inhibitory factor (MIF) est une cytokine pro-inflammatoire sécrétée en excès dans le sepsis qui serait responsable d'un ralentissement de la récupération myocardique. Dans un premier temps, notre travail a consisté à caractériser l'implication des microtubules dans la dysfonction musculaire cardiaque induite par MIF. Dans un modèle de trabécules auriculaires droites humaines nous avons démontré que MIF induit une hyperpolymérisation des microtubules responsable d'une hyperviscosité intracellulaire, d'une dysfonction mitochondriale et d'une dysfonction contractile. Nos résultats suggèrent qu'une hyperpolymérisation des microtubules induite par MIF pourrait être responsable d'un ralentissement de la récupération myocardique à la phase tardive de la myocardiopathie septique. Dans un second temps, nous avons évalué l'implication des microfilaments dans un modèle murin de dysfonction myocardique inflammatoire induite par l'injection d'une endotoxine bactérienne, le lipopolysaccharide. Nos résultats suggèrent qu'à la phase précoce de la cardiomyopathie inflammatoire il existe une hyperpolymérisation des microfilaments responsable de dysfonctions contractile et mitochondriale.Les connaissances fondamentales acquises au cours de ce travail de thèse suggèrent une implication directe des microtubules et des microfilaments dans la physiopathologie des cardiomyopathies inflammatoires.
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Leman, Géraldine. "Régulation de la fonction mitochondriale par le rapport NADH/NAD+ : le rôle clef du complexe I." Thesis, Angers, 2014. http://www.theses.fr/2014ANGE0016/document.
Анотація:
Le NAD+ apparaît comme un régulateur majeur du fonctionnement mitochondrial. En effet, ce cofacteur régule non seulement l’activité de nombreuses enzymes impliqués dans le métabolisme énergétique (enzymes de la β-oxydation des acides gras, du cycle de Krebs) mais joue également un rôle dans la production d’espèces réactives de l’oxygène (ROS). Le NAD+ est aussi le cofacteur des sirtuines, des enzymes déacétylases régulatrices notamment du métabolisme mitochondrial. De plus, la mitochondrie est l’organite au sein duquel la concentration en NAD+ est la plus élevée (jusqu’à 70% du NAD cellulaire). Le complexe I, qui possède une activité NADH déshydrogénase, pourrait être l’un des régulateurs majeurs du rapport NADH/NAD+ mitochondrial. L’objectif de ce travail de thèse a été d’étudier le rôle du rapport NADH/NAD+ mitochondrial dans le métabolisme énergétique et l’implication du complexe I dans les pathologies mitochondriales. Nous avons mis en évidence qu’une modulation du rapport NADH/NAD+ mitochondrial (augmentation par un activateur pharmacologique ou diminution consécutive à une mutation touchant une sous-unité du complexe I, modifie de manière drastique le métabolisme énergétique notamment en activant ou inhibant la protéine SIRT3, isoforme mitochondriale des sirtuines. Le complexe I semble jouer un rôle majeur dans cette modulation. Le resveratrol, ciblant le complexe I, ainsi que le NMN, un précurseur du NAD+, permettent de restaurer ce rapport et d’améliorer ainsi le métabolisme mitochondrial. Nos résultats suggèrent donc que le rapport NADH/NAD+ pourrait être une cible thérapeutique particulièrement intéressante dans les déficits du complexe INAD+ appears as a main regulator of the mitochondrial function. Indeed, this compound not only regulates the enzymatic activity of enzymes involved in energetic metabolism (fatty acid oxidation, tricarboxylic acid cycle) but is also involved in ROS production. NAD+ is also the cofactor of sirtuins, deacetylase enzymes, in particular regulating the mitochondrial function. Moreover, mitochondria sequester most of the cellular NAD+ (up to 70 %). The complex I, which possesses an NADH dehydrogenase activity, is thought to be the most important regualtor of the mitochondrial NADH/NAD+ ratio. The work presented here aimed at studying the role of the mitochondrial NADH/NAD+ ratio in mitochondrial metabolism and to test the involvement of the complex I in mitochondrial disorders. We show that a modulation of the mitochondrial NADH/NAD+ ratio (increase by a pharmacological agent or decrease in complex-I mutated fibroplasts) severely affects the mitochondrial energetic function especially by interacting with SIRT3 a mitochondrial sirtuin isoform. The NADH/NAD+ ratio is highly regulated by complex I activity. Resveratrol, which targets the complex I, as well as NMN, a NAD+ precursor, improves the mitochondrial NADH/NAD+ ratio and consequently increases the mitochondrial metabolism. Our results strongly suggest that the mitochondrial NADH/NAD+ ratio could be an interesting therapeutic target especially in complex I- deficient patients
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Schiff, Manuel. "Effets de modifications diététiques sur le phénotype de la souris Harlequin, un modèle de maladie mitochondriale." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T026.
Анотація:
Les maladies mitochondriales (définies au sens strict comme les anomalies héréditaires de la chaîne respiratoire) sont les plus fréquentes des maladies héréditaires du métabolisme avec une incidence estimée à au moins 1/5000 naissances. Au sein des maladies mitochondriales, le déficit en complexe I de la chaîne respiratoire est, chez l’Homme, l’anomalie la plus fréquente. Sur le plan génétique, les maladies mitochondriales peuvent être dues soit à une anomalie de l’ADN mitochondrial soit à une anomalie de l’ADN nucléaire. Ce double contrôle génétique, associé aux près de 2500 gènes potentiellement impliqués dans le maintien des fonctions mitochondriales, est en partie responsable de l’extrême variabilité phénotypique de ces affections. En dépit d’immenses progrès réalisés dans l’identification des bases moléculaires à l’origine de ces maladies, ces affections demeurent non traitables. Afin d’identifier d’éventuels nouveaux traitements, il est indispensable de disposer d’un organisme modèle fiable reproduisant fidèlement les symptômes et signes des affections humaines ; et ce d’autant plus que les essais thérapeutiques dans les maladies mitochondriales humaines, sont de réalisation difficile voire impossible en raison de la rareté de ces maladies et donc du très petit nombre de patients. Ainsi, la souris Harlequin, mutant naturel du gène AIF (Apoptosis Inducing Factor) présentant un déficit en complexe I dans différents tissus, remplit-elle ces conditions : Elle présente un phénotype (récemment caractérisé par l’équipe) neurodégénératif progressif dominé par une ataxie cérébelleuse associé à un retard pondéral et une alopécie en écho avec les anomalies décrites chez les patients déficitaires en complexe I. Ces anomalies sont à la fois variables d’un individu à l’autre mais également dans leur chronologie d’apparition. L’objectif de ce travail a été d’utiliser le modèle Harlequin pour évaluer notre capacité à réaliser un essai thérapeutique dans les maladies mitochondriales chez la souris. Pour ce faire, nous avons fait le choix d’évaluer l’impact de modifications nutritionnelles (et notamment l’enrichissement en graisses de l’alimentation) sur le cours de la maladie. Avant d’entreprendre une longue étude chez la souris, nous avons validé in vitro dans des fibroblastes de patients déficitaires en complexe I, que les acides gras avaient un effet préventif sur la mort cellulaire. Ces résultats ont été une incitation forte à poursuivre l’étude de l’effet des lipides in vivo. Ainsi, avons-nous pu montrer qu’en utilisant une vingtaine d’animaux par groupe, il était possible de tirer une conclusion solide de l’effet d’un régime enrichi en graisses qui ralentit indiscutablement la progressivité de la maladie. En outre, nous avons mis en évidence qu’il existait un sous-groupe d’individus répondeurs (29% de la population des Harlequin traités par le régime enrichi en graisses) dont la prise en compte est un aspect central des essais dans ces maladies. Le régime cétogène (enrichissement massif en graisses) a également été testé avec un effet moins spectaculaire mais l’existence d’individus répondeurs a également été mise en évidence. Ces résultats relatifs à l’utilisation du modèle Harlequin pour tester des thérapies seront nous l’espérons, la première pierre d’un essai du régime enrichi en graisses chez les patients déficitaires en complexe IBackground: Therapeutic options in human mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) diseases have been poorly evaluated mostly because of the scarcity of cohorts and the inter-individual variability of disease progression. Thus, while a high fat diet (HFD) is often recommended, data regarding efficacy are limited. Our objectives were 1) to determine our ability to evaluate therapeutic options in the Harlequin OXPHOS complex I (CI)-deficient mice, in the context of a mitochondrial disease with human hallmarks and 2) to assess the effects of a HFD. Methods and Findings: Before launching long and expensive animal studies, we showed that palmitate afforded long-term death-protection in 3 CI-mutant human fibroblasts cell lines. We next demonstrated that using the Harlequin mouse, it was possible to draw solid conclusions on the efficacy of a 5-month-HFD on neurodegenerative symptoms. Moreover, we could identify a group of highly responsive animals, echoing the high variability of the disease progression in Harlequin mice. Conclusions: These results suggest that a reduced number of patients with identical genetic disease should be sufficient to reach firm conclusions as far as the potential existence of responders and non responders is recognized. They also positively prefigure HFD-trials in OXPHOS-deficient patients
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Froger-Gaillard, Béatrice. "Les facteurs environnementaux du chondrocyte articulaire en culture : implications au cours du vieillissement "in vitro"." Paris 11, 1989. http://www.theses.fr/1989PA114834.
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Hannou, Sarah Anissa. "Rôle du régulateur du cycle cellulaire p16INK4a dans le développement du diabète de type 2 et dans les maladies métaboliques du foie gras ou NAFLD (Non-Alcoholic Fatty Liver Disease) : rôle de p16INK4a dans le contrôle de la néoglucogenèse hépatique et dans le développement de la stéatose hépatique non alcoolique." Thesis, Lille 2, 2014. http://www.theses.fr/2014LIL2S012/document.
Анотація:
Le diabète de type 2 (T2D) est un trouble métabolique de l’homéostasie du glucose. Il est caractérisé par une hyperglycémie chronique qui résulte en partie d’une production excessive de glucose par le foie conséquence au développement d’une résistance à l’insuline. Le T2D est une pathologie multifactorielle à la fois génétique et environnementale. Récemment des études d’associations de gènes (GWAS) dans différentes cohortes ont mis en évidence une forte corrélation entre le locus CDKN2A et le risque de développement du T2D en se basant sur certains paramètres métaboliques tel que la glycémie à jeun. Le locus CDKN2A code pour des protéines régulatrices du cycle cellulaire dont la protéine p16INK4a. p16INK4a est largement décrite dans la littérature pour son rôle suppresseur de tumeurs et comme marqueur de sénescence, cependant son rôle dans le contrôle de l’homéostasie hépatique du glucose n’a jamais été rapporté. Afin de déterminer le rôle de p16INK4a dans le métabolisme hépatique du glucose, nous avons utilisé in vivo des souris sauvages (p16+/+) et déficientes pour p16INK4a (p16-/-) et in vitro des hépatocytes primaires ainsi que la lignée AML12. Nous avons montrés qu’après un jeune, les souris p16-/- présentent une hypoglycémie moins prononcée qui se traduit par une expression hépatique plus élevée de gènes de la néoglucogenèse tels que PEPCK, G6Pase et PGC1a. De plus, les hépatocytes primaires de souris p16-/- présentent une meilleur réponse au glucagon que ceux des p16+/+. Enfin, nous avons montrés que la diminution d’expression de p16INK4a par siRNA dans les AML12 suffit à induire l’expression des gènes de la néoglucogenèse et potentialise la réponse de ces cellules à différents stimuli gluconéogenique. L’effet observé dépend de l’activation de la voie PKA-CREB-PGC1A. L’ensemble de ces données montrent pour la première fois que p16INK4a pourrait jouer un rôle un cours du développement du T2DP16INK4a is a tumor suppressor protein well described as a cell cycle regulator. p16INK4a blocks cyclin D/ cyclin dependent kinase (CDK) 4 activity by binding to the catalytic subunit of CDK4, preventing retinoblastoma protein phosphorylation and subsequently the release of the E2F1 transcription factor. As a consequence; the transcription of genes required for progression to the S phase is restrained. Recently, genome-wide association studies (GWAS) associated the CDKN2A locus, encoding, amongst other genes, p16INK4A, with an increased risk of type 2 diabetes (T2D) development. However, the pathophysiological link between p16INK4a and hepatic glucose homeostasis remains unknown. In this context, we investigated the role of p16INK4a in hepatic glucose metabolism in vivo using p16+/+ and p16-/- mice and in vitro using primary hepatocytes and the AML12 hepatocyte cell line.p16-/- mice exhibited a higher response to fasting as shown by an increased hepatic gluconeogenic gene expression including phosphoenolpyruvate carboxykinase (PEPCK), fructose-1,6-biphosphatase (F1,6P) and glucose-6-phosphatase (G6Pase). p16-/- mice displayed an enhanced hepatic gluconeogenic activity in vivo upon administration of pyruvate, a gluconeogenic substrate. Consistent with this, in vitro data show that p16-/- primary hepatocytes display an enhanced gluconeogenic response to glucagon. In addition, knock down of p16INK4a by siRNA in AML12 cells increased gluconeogenic gene expression. These effects were associated with an increased activity of the PKA-CREB signaling pathway which leads to increased PPARg coactivator 1 (PGC1)α expression, a key transcriptional co-activator that regulates genes involved in energy metabolism. These findings describe a new function for p16INK4a as an actor in the hepatic adaptation to metabolic stress and suggest that p16INK4a could play a role during T2D development
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Chicherin, Ivan. "Adressage de l'ARN ribosomique 5S dans les mitochondries humaines et la traduction mitochondriale." Thesis, Strasbourg, 2016. http://www.theses.fr/2016STRAJ074/document.
Анотація:
L’ARNr 5S est une petite molécule d'ARN codée par le noyau, qui est partiellement adressée dans les mitochondries dans les cellules humaines. Bien que le mécanisme d'importation a été étudié, la fonction de ce phénomène est mal comprise. Les données publiées suggèrent que l’ARNr 5S importé pourrait participer à la synthèse des protéines mitochondriales, éventuellement être associé aux mitoribosomes. Cependant, les études structurelles ne supportent pas ces observations. Pour comprendre le rôle de l’ARNr 5S dans les mitochondries humaines, nous avons exploité plusieurs approches. Nous avons montré que seule une petite fraction de l’ARNr 5S pourrait être associé à mitoribosomes humaines, insuffisante pour former un complexe stoechiométrique 1:1. Nous avons appliqué l’approche de chromatographie d'affinité à l’ARN MS2 pour identifier les partenaires protéiques de l’ARNr 5S importé. Les résultats suggèrent que l’ARNr 5S pourrait être associé à des protéines ribosomales et des facteurs mitochondriaux d'assemblage du ribosome mitochondrial. Cela nous a permis de formuler une hypothèse sur la participation de l'ARNr 5S dans la biogenèse mitoribosomale. Ces données ont été partiellement validées par des expériences de co-immunoprécipitation, bien que plusieurs expériences sont encore nécessaires pour valider la participation ARNr 5S dans cette voie5S rRNA is a small nuclear-encoded RNA molecule, which is partially imported into mitochondria from cytoplasm in human cells. Although the import mechanism was studied in details, the functional significance of this phenomenon is poorly understood. Published data suggest that imported 5S rRNA might participate in mitochondrial protein synthesis, possibly associating with mitoribosomes. However, structural studies do not support these observations. We have exploited several approaches to figure out the function of 5S rRNA in human mitochondria. Our studies showed that only a minor part of 5S rRNA pool could be associated with human mitoribosomes, insufficient to form stoichiometric 1:1 complex. We applied MS2 affinity chromatography approach to identify protein partners of 5S rRNA in human mitochondria. The results suggested that 5S rRNA could associate with mitochondrial ribosomal proteins and mitochondrial ribosome assembly factors. This allowed us to formulate a hypothesis about possible participation of 5S rRNA in mitoribosome biogenesis. The data were partially validated by co-immunoprecipitation experiments, although subsequent studies are required to validate 5S rRNA involvement in this pathway
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Desurmont, Thibault. "Etude de l'implication des chimiokines et de leurs récepteurs dans la survenue d'une rechute métastatique chez des patients atteints d'un cancer du côlon métastatique et traités par chirurgie hépatique avec ou sans chimiothérapie néoadjuvante." Thesis, Lille 2, 2015. http://www.theses.fr/2015LIL2S042/document.
Анотація:
Notre objectif était d’analyser l’implication potentielle des voies associées aux récepteurs de chimiokines CXCR2 et CXCR4 dans le cancer colorectal métastatique au foie. Les niveaux d’expression de CXCR2, CXCR4 et de leurs chimiokines étaient évalués dans les métastases hépatiques de cancers colorectaux dans le but d’étudier leurs corrélations avec la survie globale et la survie sans récidive de patients ayant reçu, ou non, une chimiothérapie néoadjuvante. Des analyses d’expression pour RT-PCR quantitative et immunohistochimie étaient réalisées en utilisant des prélèvements humains de métastases hépatiques de cancers colorectaux. Les niveaux d’expression de CXCR2, CXCR4 et de leurs ligands étaient statistiquement analysés en fonction des traitements par chimiothérapie néoadjuvante administrés ou non, et en fonction du suivi des patients. Des modèles murins de xénogreffes sous-cutanées et orthotopiques intracaecales ont été mis au point et utilisés pour étudier l’expression de CXCR2, CXCR4 et CXCL7 en relation avec le traitement des souris par chimiothérapie.Nous avons montré que la surexpression de CXCR2 et CXCL7 était corrélée à de plus courtes survies globales et sans récidive de nos patients. En analyse multivariée, l’expression de CXCR2 et de CXCL7 étaient des facteurs indépendants de survie globale et sans récidive. La chimiothérapie néoadjuvante augmentait significativement l’expression de CXCR2, et de CXCL7 de façon proche de la significativité. Les résultats de nos modèles murins ont montré une tendance à la surexpression de nos gènes d’intérêts dans les tissus tumoraux des souris traités. En conclusion, ces résultats suggèrent l’implication de la voie de signalisation CXCL7/CXCR2 comme facteur prédictif de mauvais pronostic dans le cancer colorectal métastatique. Les chimiothérapies à base de 5 Fluoro-uracile augmentent l’expression de ces gènes dans les métastases hépatiques, fournissant une explication sur l’agressivité des tumeurs métastatiques en échappement thérapeutique. Un blocage sélectif de l’axe CXCR2/CXL7 pourrait fournir de nouvelles opportunités thérapeutiquesOur aim was to analyze the potential role of chemokine receptors CXCR2 and CXCR4 signalling pathways in liver metastatic colorectal cancer (CRC) relapse. Expression levels of CXCR2, CXCR4, and their chemokine ligands were evaluated in liver metastases of colorectal cancer in order to study their correlation with overall and disease-free survival of patients having received, or not received, a neoadjuvant chemotherapy regimen.Quantitative RT-PCR and CXCR2 immunohistochemical staining were carried out using human CRC liver metastasis samples. Expression levels of CXCR2, CXCR4, and their ligands were statistically analyzed according to treatment with neoadjuvant chemotherapy and patients ' outcome. Murine models of subcutaneous and orthotopic intracaecal xenografts have been developed and used to study the expression of CXCR2, CXCR4 and CXCL7 in connection with the treatment of mice with chemotherapy.We showed that CXCR2 and CXCL7 overexpression are correlated to patient’s shorter overall and disease-free survival. By multivariate analysis, CXCR2 and CXCL7 expressions are independent factors of overall and disease-free survival. Neoadjuvant chemotherapy increases significantly the expression of CXCR2 and CXCL7 was overexpressed close to significance. Results of our mouse models have shown a trend over-expression of our interest genes in tumor tissues of the treated mice.In conclusion, we show the involvement of CXCL7/CXCR2 signalling pathways as a predictive factor of poor outcome in metastatic CRC. 5-Fluorouracil-based chemotherapy regimens increase the expression of these genes in liver metastasis, providing one explanation for aggressiveness of relapsed drug-resistant tumors. Selective blockage of CXCR2/CXCL7 signalling pathways could provide new potential therapeutic opportunities
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Combes, Adrien. "Influence des perturbations métaboliques sur des voies de signalisation impliquées dans la biogenèse mitochondriale." Thesis, Lille 2, 2015. http://www.theses.fr/2015LIL2S045/document.
Анотація:
L’évolution des populations occidentales s’accompagne d’une augmentation de la sédentarité et des maladies métaboliques qui accroissent les problèmes de santé. Ces évolutions ont des répercussions sur le muscle squelettique qui voit sa capacité à produire de l’énergie aérobie diminuer. Néanmoins, le muscle squelettique est très plastique et les capacités oxydatives musculaires s’améliorent rapidement par l'activité physique. Les mitochondries sont des éléments majeurs des capacités oxydatives musculaires et la compréhension des mécanismes moléculaires qui régissent la biogenèse et la fonction mitochondriale est nécessaire pour prescrire au mieux l’activité physique.L’exercice intermittent semble être de plus en plus utilisé dans la pratique. Plusieurs arguments sont mis en avant pour préconiser cette modalité : 1) le temps passé à haute consommation d’oxygène, 2) la haute intensité et 3) les perturbations métaboliques induites par les variations d’intensité au cours de l’exercice. Cependant, l’influence des perturbations métaboliques sur les capacités oxydatives musculaires n’a pas encore été clairement démontrée. L’objet des mes travaux de thèse s’est donc focalisé sur ces perturbations métaboliques et leurs effets sur les voies de signalisation impliquées dans la biogenèse mitochondriale. Afin de caractériser l’implication des perturbations métaboliques dans la stimulation des voies de signalisation de la biogenèse mitochondriale, nous avons comparé l’influence d’exercices aigus sur ces voies de signalisation. Deux protocoles nous ont permis d’investiguer l’influence des variations métaboliques. Le premier a consisté, lors d’un exercice de intermittent, à identifier la durée du cycle induisant les plus grandes perturbations métaboliques et à caractériser les effets de la modalité d’exercice sur un exercice de 30 minutes de pédalage à 70%WRpic. Le second protocole visait à déterminer l’influence de la répétition des perturbations métaboliques sur les voies de signalisation régulant la biogenèse mitochondriale.Afin d’identifier la durée de cycle produisant le plus de variations métaboliques, nous avons analysé l’évolution de la consommation d’oxygène et quantifié les variations métaboliques. Pour cela nous avons utilisé trois paramètres : 1) un paramètre quantitatif, 2) un paramètre qualitatif et 3) un index associant les paramètres quantitatif et qualitatif. La comparaison de trois durées de cycle différentes (30s d’effort:30s de récupération passive ; 60s:60s et 120s:120s) nous a permis de mettre en évidence que la modalité 60s:60s est celle qui induit le plus de variations métaboliques et cela pour une dépense énergétique identique pour les trois modalités.Notre seconde étude a consisté à comparer 30 minutes de pédalage à 70%WRpic sous deux modalités différentes : continue (1 bloc de 30min) et intermittente (30 bloc de 1min entrecoupés de 1min). La répétition de phase d’exercice et de repos lors de l’exercice intermittent créée plus de perturbation du métabolisme et entraîne une phosphorylation supérieure de l'AMPK, CaMKII et p38 MAPK. Ces kinases sont situées en amont de PGC-1α, un important régulateur de la biogenèse mitochondriale dans le muscle squelettique. Ces résultats mettent donc en évidence un effet spécifique des perturbations métaboliques sur les voies de signalisation contrôlant la biogenèse mitochondriale.Ces travaux ouvrent de nouvelles perspectives sur les méthodes de réentraînement de personnes sédentaires ou atteintes de pathologie chronique. Les futurs travaux viseront à confirmer nos résultats lors d’interventions chroniques et d’explorer ces effets chez différentes populationsWestern life evolution is associated with an increase in sedentary behaviours and metabolic diseases leading to health alteration. This evolution affects the skeletal muscle, which is characterized by a decrease in its ability to produce aerobic energy. However, skeletal muscle is a highly malleable tissue, capable of considerable metabolic adaptations in response to physical activity. Mitochondria produce the aerobic energy within the skeletal muscle. Understanding the molecular mechanisms that regulate mitochondrial biogenesis and its function is necessary to improve physical activity prescription.The intermittent exercise is currently used in rehabilitation programs. Several arguments are put forward to utilizing this method: 1) the time spent at high oxygen consumption, 2) the high intensity of exercise and 3) the metabolic disturbances induced by variations of intensity during exercise. However, the influence of metabolic disturbances on muscle oxidative capacity has not been clearly demonstrated. The purpose of my thesis work has therefore focused on these metabolic perturbations and their effects on signalling pathways involved in mitochondrial biogenesis. In order to characterize the influence of metabolic disturbances on the signalling pathways involved in mitochondrial biogenesis, we compared the influence of acute exercises. We realized two protocols to investigate the influence of metabolic disturbances. The first study compared three intermittent exercises in order to identify the optimal duty-cycle duration to induce the biggest metabolic disturbances and to compare metabolic responses of intermittent and continuous exercise performed at 70%WRpic. The second protocol evaluated the influence of the repetition of metabolic disturbances on signalling pathways involved in mitochondrial biogenesis.In order to identify the duty-cycle duration producing more metabolic fluctuations, we analysed the changes of oxygen consumption and quantified metabolic variations. We used three parameters: 1) a quantitative parameter, 2) a qualitative parameter, and 3) an index combining quantitative and qualitative parameters. Comparison of three different duty-cycle durations (30s work:30s passive recovery; 60s:60s, and 120s:120s) revealed that the 60s:60s modality induces more metabolic fluctuations for a same energy expenditure.Our second study compared 30 minutes of pedalling at 70%WRpic realized by two different modalities: continuous (30min 1 block) and intermittent (30 1min block interspersed by 1min of passive recovery). Repetition of transitions from rest to exercise during the intermittent exercise creates higher metabolic disturbances and leads to a higher phosphorylation of AMPK, p38 MAPK and CaMKII. These kinases are upstream of PGC-1α, an important regulator of mitochondrial biogenesis in skeletal muscle. All together, these results demonstrate that metabolic disturbances are involved in mitochondrial signalling pathways activation.This work opens up new perspectives on exercise training prescription for sedentary or chronic pathology people. Future work will aim to confirm our results in chronic interventions and explore these effects in different populations
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Beilschmidt, Lena Kristina. "Evidences for the non-redundant function of A-type proteins ISCA1 and ISCA2 in iron-sulfur cluster biogenesis." Thesis, Strasbourg, 2014. http://www.theses.fr/2014STRAJ031/document.
Анотація:
Les centres fer-soufre (Fe-S) sont des cofacteurs protéiques essentiels qui participent à un nombre important de fonctions cellulaires allant du métabolisme de l’ADN à la respiration mitochondriale. L’assemblage des centres Fe-S et leur insertion dans des protéines acceptrices requièrent l’activité d’une machinerie protéique dédiée. Bien que les protéines de la biogenèse des centres Fe-S soient conservées, plusieurs aspects fonctionnels et mécanistiques restent inconnus. Notre travail de thèse a consisté à caractériser les protéines mammifères de type A, ISCA1 et ISCA2, qui sont impliquées dans la biogenèse mitochondriales des centres Fe-S. En utilisant une approche couplant l’immunoprécipitation avec une analyse protéomique par spectrométrie de masse, plusieurs interactions protéiques d’ISCA1 et ISCA2 ont pu être identifiées. En plus d’une interaction entre ISCA1 et ISCA2, nous avons ainsi montré l’existence d’interactions spécifiques à chacune de ces protéines. Une approche de knockdown dans la souris via l’injection de virus adéno-associés, a permis de montrer l’absence de redondance fonctionnelle entre ISCA1 et ISCA2 puisque seul ISCA1 se trouve être nécessaire dans la maturation d’une catégorie de protéines à centre Fe-SIron-sulfur clusters (Fe-S) are essential cofactors involved in different cellular processes ranging from DNA metabolism to respiration. Assembly of Fe-S clusters and their insertion into acceptor proteins is performed by dedicated protein machineries. Despite the high conservation from bacteria to man, different functional and mechanistic aspects of the Fe-S biogenesis remain elusive. In the present work, the function of the two mammalian A-type proteins ISCA1 and ISCA2 that are implicated in Fe-S biogenesis was investigated in vivo. First, an extensive analysis coupling immunoprecipitations and mass spectrometry led to the identification of a direct binding between ISCA1 and ISCA2 as well as specific protein partners of each protein. Furthermore, knockdown experiments in the mouse using adeno-associated virus provided clear evidence of the non-redundant function of ISCA1 and ISCA2, since only ISCA1 was shown to be required for a specific subset of mitochondrial Fe-S proteins
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Porez, Geoffrey. "Nouvelles propriétés hépatiques des récepteurs nucléaires FXR et Rev-Erb Alpha." Thesis, Lille 2, 2014. http://www.theses.fr/2014LIL2S015/document.
Анотація:
Les orosomucoïdes, membres de la superfamille des lipocalines, sont parmi les protéinesplasmatiques les plus abondantes. Ce sont des protéines de la phase aiguë de l’inflammationsecrétées par les hépatocytes en réponse à un stress (inflammation, cancer, cirrhose…), etutilisées couramment en clinique comme marqueur d’un état pathologique. Elles vont lorsd’un état inflammatoire inhiber la prolifération des neutrophiles et des lymphocytes. J’ai pumontrer que le récepteur nucléaire FXR, impliqué dans de nombreuses voies métaboliques etplus récemment comme ayant un rôle anti-inflammatoire dans le foie, régule l’expression desorosomucoïdes exclusivement au niveau hépatique chez la souris. Cela suggère que larégulation de certains processus inflammatoire par FXR pourrait être expliqué par larégulation transcriptionelle des orosomucoïdes.Le second sujet met en évidence une relation entre le récepteur nucléaire Rev-Erba et la OGlcNAcylationau niveau hépatique. La O-GlcNAcylation est une modification posttraductionnelledes protéines qui permet l’ajout d’un groupement O-GlcNAc. De nombreusesprotéines impliquées dans de multiples processus biologiques comme la régulation du cyclecellulaire, du rythme circadien, ou encore dans de nombreuses voies métaboliques, vont êtreO-GlcNAcylées. La dérégulation de la O-GlcNAcylation est également impliquée dans denombreuses pathologies telles que le diabète, le cancer ou encore la maladie d’Alzheimer. Lerythme circadien est un important régulateur du métabolisme. De plus en plus d’indicesindiquent que la O-GlcNAcylation est un intermédiaire essentiel dans la régulationcircadienne du métabolisme. Des modulations circadiennes de la O-GlcNAcylation deBMAL1, CLOCK et PER ont été mises en évidence. Ce lien entre la O-GlcNAcylation et lerythme circadien nous a poussé à essayer d’identifier le rôle potentiel de Rev-Erba, récepteurnucléaire impliqué dans le contrôle de la ryhtmicité circadienne, dans la régulation de la OGlcNAcylation.Nous avons pu montrer par ces travaux que Rev-Erba est un régulateurimportant de la O-GlcNAcylation. La déficience en Rev-Erba induisant une baisse importantede la O-GlcNAcylation. Rev-Erba ne régule pas le niveau de transcription des enzymesimpliquées dans la O-GlcNAcylation mais est capable d’intéragir avec l’OGT (enzymeresponsable de la O-GlcNAcylation) et d’inhiber sa dégradation par le protéasome. Par cemécanisme de stabilisation de l’enzyme OGT, Rev-Erba se révèle être un régulateurimportant de la O-GlcNAcylationOrosomucoïdes, members of the superfamily of lipocalines, are among proteins plasmatiques the most plentiful. They are proteins of the acute(sharp) phase of the inflammation secreted by hépatocytes in answer to a stress (inflammation, cancer, cirrhosis), and usually used in private hospital as marker(scorer) of a pathological state. They go during an inflammatory state to inhibit the proliferation of neutrophiles and lymphocytes. I was able to show that the nuclear receiver FXR, implied(involved) in numerous metabolic ways and more recently as having an anti-inflammatory role in the liver, regulates the expression of orosomucoïdes exclusively at the hepatic level to the mouse. (...]
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Berrabah, Wahiba. "Régulation du récepteur nucléaire Farnesoid X Receptor par la voie de biosynthèse des hexosamines." Phd thesis, Université du Droit et de la Santé - Lille II, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01001901.
Анотація:
Chez les patients diabétiques, le flux hépatique du glucose est perturbé affectant les voies qui lui sont associées telle que la voie de biosynthèse des hexosamines (HBP). Cette voie permet la production d'UDP-GlcNAc à partir du glucose. Ce substrat est engagé dans une modification post-traductionnelle (PTM) réversible des protéines appelée O-GlcNAcylation. Elle consiste à transférer du GlcNAc à partir d'UDP-GlcNAc sur un résidu serine ou thréonine. Une O-GlcNAcylation anormale des protéines contribue à la glucotoxicité hépatique et au diabète de type 2. FXR (Farnesoid X Receptor), un récepteur nucléaire fortement exprimé dans le foie, contrôle le métabolisme des acides biliaires ainsi que l'homéostasie glucidique et lipidique. Après son activation par un ligand et son hétérodimérisaton avec RXR (Retinoid X Receptor), FXR régule la transcription de gènes cibles en se fixant sur ses éléments de réponse. L'expression génique de FXR est augmentée dans des modèles animaux de diabète et ses activités transcriptionnelles en font une cible thérapeutique potentielle dans le contrôle des troubles métaboliques. Considérant ces informations, nous avons émis l'hypothèse que FXR est un substrat de la HBP et que les variations des flux hépatiques de glucose affectent son activité transcriptionnelle. Nous avons démontré, par différentes techniques, que FXR est O-GlcNAcylé in vitro et in vivo et que le glucose augmente sa fixation sur ces éléments de réponse et son activité transcriptionnelle. En outre, nous avons montré que l'inhibition de la voie HBP diminue l'expression génique et protéique de FXR mais également que la sérine 62 joue un rôle important dans la MPT de ce récepteur nucléaire. En conclusion, nos résultats montrent que le récepteur nucléaire FXR est sensible aux variations hépatiques des flux de glucose et que la O-GlcNAcylation de FXR augmente son activité transcriptionnelle ainsi que son expression génique et protéique dans différents modèles hépatiques humains et murins.
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Przybyla-Toscano, Jonathan. "Étude des protéines NFU, ISCA et FDX, impliquées dans la maturation des centres fer-soufre dans les mitochondries d’Arabidopsis thaliana." Thesis, Université de Lorraine, 2017. http://www.theses.fr/2017LORR0127.
Анотація:
Chez les plantes, les protéines à centre fer-soufre (Fe-S) sont impliquées dans de nombreux processus cellulaires (e.g. photosynthèse, respiration). La maturation de ces protéines nécessite la synthèse de novo des centres Fe-S à l’aide de machineries d’assemblage spécifiques. Les plantes possèdent trois machineries d’assemblage nommées SUF, ISC et CIA, dédiées à la maturation des protéines plastidiales, mitochondriales et nucléaires ou cytosoliques, respectivement. Lors de la maturation des protéines mitochondriales, un centre [2Fe-2S] est initialement assemblé sur la protéine d’échafaudage ISU puis transféré vers les apoprotéines cibles à l’aide de chaperons et de diverses protéines de transfert. Si ces étapes semblent suffisantes pour la maturation de protéines incorporant des centres [2Fe-2S], un couplage réductif de deux centres [2Fe-2S] est nécessaire pour la maturation des protéines de type [4Fe-4S]. Cette conversion nécessite des protéines de transfert et un donneur d’électrons, potentiellement la même ferrédoxine que celle qui agit déjà lors des étapes précoces pour la réduction du soufre. En combinant des approches moléculaires, biochimiques et génétiques, l’implication des protéines de transfert NFU et ISCA et des ferrédoxines mitochondriales (mFDX) dans les étapes tardives de transfert et de conversion a été explorée au cours de cette thèse chez la plante modèle Arabidopsis thaliana. Des expériences de complémentation en levure ont démontré que les protéines NFU et ISCA de plantes peuvent assurer les mêmes fonctions que leurs orthologues respectifs, suggérant que ces étapes tardives ont été conservées. Cependant, contrairement à la levure, l’analyse de lignées n’exprimant pas les deux protéines NFU indiquent qu’elles sont essentielles pour le développement de l’embryon. Au niveau moléculaire, les analyses effectuées à l’aide d’approches in vivo et/ou in vitro ont permis d’identifier une interaction entre ISCA1a ou ISCA1b et ISCA2, NFU4 et NFU5 mais aucune interaction avec les deux mFDX dont le rôle dans les dernières étapes d’assemblage des centres Fe-S reste donc incertain. La formation d’holo-hétérocomplexes entre ISCA1 et ISCA2 a été confirmée par co-expression chez E. coli et purification des protéines recombinantes. Globalement, en associant la littérature à propos de la machinerie ISC et les résultats obtenus, le modèle qui ressort est que des hétérocomplexes ISCA1/2 agiraient immédiatement en amont des protéines NFU qui permettraient a minima la maturation des centres [4Fe-4S] de la lipoate synthase. Ce seul partenaire pourrait expliquer en grande partie la létalité d’un mutant nfu4 x nfu5 car l’activité de plusieurs protéines centrales pour le métabolisme mitochondrial dépend de l’acide lipoïqueIn plants, iron-sulfur (Fe-S) proteins are involved in crucial processes such as photosynthesis and respiration. The maturation of these proteins requires the de novo synthesis of their Fe-S clusters through dedicated assembly machineries. Plants have three Fe-S cluster assembly machineries, namely SUF, ISC and CIA, devoted to the maturation of plastidial, mitochondrial and nuclear or cytosolic proteins, respectively. During the mitochondrial Fe-S protein maturation, a [2Fe-2S] cluster is first assembled on the ISU scaffold protein then transferred to target proteins with the help of chaperones and various transfer proteins. If these steps are sufficient for the maturation of [2Fe-2S] proteins, a reductive coupling process of two [2Fe-2S] clusters is required for the maturation of [4Fe-4S] proteins. This conversion needs transfer proteins and an electrons donor, potentially the same ferredoxin which acts during the first step of the Fe-S cluster biogenesis for sulfur reduction. By combining molecular, biochemical and genetic approaches, the involvement of NFU and ISCA transfer protein and mitochondrial ferredoxin (mFDX) in the late transfer and conversion steps has been explored during this PhD project by using the Arabidopsis thaliana plant model. Yeast complementation experiments have demonstrated that plant NFU and ISCA proteins have functions similar to their respective orthologs, suggesting that these late steps are conserved. However, unlike yeast, the characterization of nfu mutant lines indicates that both proteins are essential for early embryonic development. At the molecular level, in vivo and in vitro approaches have shown an interaction between ISCA1a or ISCA1b and ISCA2, NFU4 and NFU5 but no interaction with the two mFDX whose participation in the late steps remains uncertain. The formation of ISCA1-ISCA2 holo-heterocomplexes has been confirmed by co-expression in E. coli and purification of recombinant proteins. Overall, the literature and results obtained here highlight a model where ISCA1/2 heterocomplexes would act immediately downstream of NFU proteins which would a minima allow [4Fe-4S] cluster maturation of the lipoate synthase. This sole partner could primarily explain the lethality of a nfu4 x nfu5 double mutant because the activity of several proteins central for the mitochondrial metabolism depends on lipoic acid
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Enache, Irina. "Retentissement musculaire cardiaque et périphérique de l'hypertension artérielle pulmonaire induite par la monocrotaline chez le rat : dysfonction mitochondriale et effet de l'exercice excentrique." Phd thesis, Université de Strasbourg, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00923151.
Анотація:
Dans un premier temps, nous avons observé la chronologie des altérations de la biogenèse et de la fonction mitochondriale dans les ventricules droit (VD) et gauche (VG) et le muscle gastrocnémien (GAS) dans un modèle animal d'hypertension artérielle pulmonaire (HTAP). Nous avons constaté une diminution précoce des facteurs impliqués dans la biogénèse mitochondriale du GAS. Plus tard, les mêmes anomalies apparaissaient dans le VD. Au stade décompensé de l'insuffisance cardiaque droite s'ajoutaient une diminution de la protéine PGC-1 , de l'activité de la citrate-synthase et de la respiration mitochondriale. L'expression des ARNm et la respiration mitochondriale du VG n'étaient pas modifiées de façon significative.Dans un deuxième temps, nous avons étudié l'effet de l'entraînement en mode excentrique sur le même modèle d'HTAP. La survie des rats entraînés n'était pas différente de celle des rats sédentaires et la tolérance hémodynamique évaluée par échocardiographie et cathétérisme cardiaque a été bonne. Le bénéfice de l'entraînement s'est traduit par une augmentation de la vitesse maximale de course dans les deux groupes entraînés, malades et témoins.
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Gerelli, Sébastien. "Optimisation de la prise en charge des coeurs univentriculaires : approche chirurgicale et énergétique." Thesis, Strasbourg, 2016. http://www.theses.fr/2016STRAJ106.
Анотація:
Les cœurs univentriculaires sont des cardiopathies congénitales, non compatibles avec la vie. Fontan a transformé le pronostic de ces patients en restaurant une circulation pulmonaire passive. Malheureusement, le pronostic à long terme reste péjoratif. Pour diminuer la morbi-mortalité de ces patients, nous avons développé un protocole chirurgical de pré-conditionnement, permettant une totalisation de Fontan percutanée adaptative aux résistances pulmonaires et aux capacités de travail du ventricule. Nous avons pu observer que les chaînes respiratoires mitochondriales n’ont pas la possibilité d’adapter leur production énergétique face au travail. Le déséquilibre de la balance Nitroso-Redox engendrera le mitohormésis et l’hormésis, puis inéluctablement surviendra un remodelage myocardique mal adaptatif. La seule possibilité pour améliorer le pronostic à long terme de ces patients sera d’augmenter les capacités oxydatives myocardiques du ventricule unique ou de créer une pompe pulmonaireUniventricular hearts are congenital heart diseases, not compatible with life. Fontan transformed the prognosis of these patients by restoring a passive pulmonary circulation. Unfortunately, the long-term prognosis remains pejorative. To reduce the morbidity and mortality of these patients, we developed a surgical preconditioning protocol, allowing a percutaneous Fontan totalization, adaptive to pulmonary resistance and to the working capacity of the ventricle. We observed that the mitochondrial respiratory chains do not have the ability to adapt their energy production toward work. The desequilibrium of the Nitroso-redox balance will generate mitohormesis and hormesis, then will inevitably occur a poorly adaptive myocardial remodeling. The only way to improve the long-term prognosis of these patients is to increase the myocardial oxidative capacities of the single ventricle or to create a pulmonary pump
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Haut, Sandrine. "Déficit en complexe III de la chaîne respiratoire mitochondriale : étude de cinq cas." Paris 5, 2003. http://www.theses.fr/2003PA05P630.
Анотація:
Les déficits en ubiquinol-cytochrome c réductase (complexe III de la chaîne respiratoire mitochondriale) peuvent être d'origine moléculaire mitochondriale ou nucléaire. Nous avons identifié 5 patients atteints d'un déficit isolé en complexe III (CIII). Nous avons retrouvé une anomalie moléculaire pour 2 d'entre eux. Dans un cas il s'agit d'une mutation homoplasmique localisée dans le gène mitochondrial du cytochrome b (cytb) (G15498A) découverte chez un patient atteint d'un retard staturo-pondéral et présente également chez deux membres sains de sa famille. Des études in vitro ont confirmé le rôle pathogène de cette mutation, déjà décrite chez un patient atteint de cardiomyopathie histiocytoide. Dans un autre cas nous avons trouvé pour la première fois une mutation localisée dans un gène nucléaire de structure du CIII : le gène HUMQPC codant pour une protéine de liaison à l'ubiquinone. Cette mutation induit une baisse en cytb et par conséquent déstabilise le CIIIThe ubiquinol-cytochrome c réductase (complex III of mitochondrial respiratory chain) deficiencies could be attibuated to mitochondrial or nuclear genetic origin. We identified 5 patients with an isolated complex III (CIII) deficiency. A molecular abnormality was found in two cases. In the first, an homoplasmic mutation was found in the mitochondrial cytochrome b (cytb) gene, the patient have a staturo-ponderal delay. The mutation was also present in two healthy individuals of family members. Studies carried out in vitro confirmed the pathogenic role of the mutation, already considered as a cardiomyopathy generating mutation in a previously reported case. In the second patient, we describe, for the first time, a mutation located in a nuclear gene encoding a structural subunit of CIII : the HUMQPC gene encoding the human ubiquinone-binding protein. This mutation induces a full reduction in cytb content and consequently destabilizes the CIII