Дисертації: "Protéine de pois"

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Lenne-Bessol, Catherine. "Induction par la chaleur d'une protéine mitochondriale de faible masse moléculaire chez le pois." Université Joseph Fourier (Grenoble), 1994. http://www.theses.fr/1994GRE10140.

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Анотація:

Le but de cette these est d'etudier la reponse moleculaire de la mitochondrie de feuille de pois aux fortes temperatures. Apres une synthese bibliographique traitant des proteines dont la synthese et l'accumulation sont induites par la temperature, nous avons mis en evidence dans le premier chapitre des resultats une proteine nouvellement induite par un traitement des plantes entieres de 3 heures a 40c, au sein des mitochondries foliaires. De masse moleculaire 22 kda, c'est une proteine soluble representant 1 a 2% des proteines matricielles totales, et qui apparait des 30 minutes de stress. Dans le deuxieme chapitre, nous avons purifie partiellement l'hsp22 (heat shock protein de 22 kda) par chromatographie sur colonne et avons developpe des anticorps polyclonaux. A l'aide de cet outil, nous avons demontre l'existence de l'hsp22 dans les mitochondries de tissus non chlorophylliens. De plus, elle appartient a une structure de masse moleculaire elevee, 230 kda. Dans le troisieme chapitre, nous avons clone par pcr (polymerase chain reaction) puis sequence le fragment d'adn correspondant a l'hsp22 matricielle. La sequence primaire en acides amines deduite a alors permis la recherche d'homologies entre l'hsp22 et les autres hsps connues. L'hsp22 appartient a une famille de petites hsps reunies par leurs regions consensus communes et nous suggerons, au sein de cette famille l'existence d'une nouvelle classe d'hsps localisee dans les mitochondries, en plus des quatre classes deja repertoriees (deux cytosoliques, une chloroplastique, une endoplasmique). L'obtention de la sequence nucleotidique a alors conduit, dans le quatrieme chapitre, a etudier l'expression de l'hsp22, en suivant l'accumulation et la disparition du messager de 900 bases et de l'hsp22 elle-meme

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Grelet, Johann. "Identification et caractérisation moléculaire d'une protéine LEA (Late Embryogenesis Abundant) mitochondriale exprimée dans les semences de pois." Angers, 2004. http://www.theses.fr/2004ANGE0020.

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Анотація:

Les protéines LEA (Late Embryogenesis Abundant) forment une large famille de protéines hydrophiles et thermorésistantes qui possèdent des motifs répétés. Elles s'accumulent au cours de la maturation de la graine et disparaissent pendant la germination. De nombreuses protéines LEA sont aussi exprimées dans les tissus végétatifs en réponse à l'ABA et à différents stress. Toutes ces caractéristiques suggèrent que les protéines LEA soient impliquées dans la tolérance à la dessiccation. Elles ont été identifiées dans de nombreux compartiments sub-cellulaires: noyau, chloroplaste, cytosol, reticulum endoplasmique, appareil de Golgi. . . Mais aucune n'a encore été décrite dans les mitochondries. Au cours de l'étude du protéome mitochondrial des graines de pois, une protéine avait montré des similarités de séquences avec une protéine LEA-like de soja (Bardel et al. , 2002). L'ADNc codant cette protéine (PsLEAm) a été cloné, révélant la présence d'une pré-séquence d'adressage mitochondrial. Des expériences de fractionnement sub-mitochondrial ainsi que l'expression transitoire d'une protéine de fusion avec la GFP ont permis de démontrer que PsLEAm était localisée dans la matrice mitochondriale. PsLEAm possède toutes les caractéristiques de la famille des LEA: stabilité à la chaleur, forte hydrophilicité, présence de motifs répétés et accumulation en fin de maturation. L'application d'ABA exogène durant l'imbibition de la graine ou un stress hydrique sévère des plantes développées réinduisent l'expression de PsLEAm. Une protéine PsLEAm mature recombinante a été surexprimée chez Escherichia coli puis partiellement purifiée. Dans un test in vitro, cette protéine est apparue capable de protéger deux enzymes de la matrice mitochondriale, la fumarase et la rhodanèse, lors d'une dessiccation totale. L'analyse ultérieure de la structure et de la fonction de PsLEAm permettront d'élucider l'implication de PsLEAm dans la protection des mitochondries au cours de la maturation
LEA (Late Embryogenesis Abundant) proteins belong to a large hydrophilic heat-resistant family, and exhibit repeated motifs in their sequence. The LEA proteins accumulate during seed maturation and disappear upon germination. A number of LEA proteins have been shown to also accumulate in plant tissues in response to ABA and numerous stresses. All the above characteristics support the idea that LEA proteins are involved in desiccation tolerance. They were found in many sub-cellular compartments: nucleus, chloroplasts, cytosol, endoplasmique reticulum, Golgi apparatus. . . But no LEA protein has been described in mitochondria so far. In a survey of pea mitochondrial proteome, a putative seed mitochondrial protein exhibited peptide tag sequence similarities with a soybean LEA-like protein (Bardel et al, 2002). The cDNA encoded this protein (PsLEAm) was cloned and revealed a typical amino-terminal transit peptide in the protein sequence. Biochemical evidence and GFP reporter transient expression in protoplast indicated that PsLEAm was localized in mitochondria matrix space. PsLEAm exhibited most of the LEA family features: heat solubility, high hydrophilicity, repeated motives and accumulation during late maturation. Moreover, exogenous ABA application during seed imbibition and severe water stress in mature plants re-induced PsLEAm expression. To explore the function of PsLEAm in mitochondria, a recombinant mature PsLEAm was overexpressed in Escherichia coli and was then partially purified. The recombinant protein was shown to protect two mitochondrial matrix enzymes, fumarase and rhodanese, during drying in an in vitro assay. Our future efforts will be focused on structural and functional analyses of PsLEAm, which will be a step forward to understanding the protective role that PsLEAm during seed maturation

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Tolleter, Dimitri. "Analyse structurale et fonctionnelle d'une protéine LEA (Late Embryogenesis Abundant) mitochondriale exprimée dans les graines de pois." Phd thesis, Université d'Angers, 2007. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00346312.

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Анотація:

A l'exception des graines de plantes supérieures, peu d'organismes sont capables de résister à la dessiccation. La survie à l'état sec est un phénomène multifactoriel impliquant notamment l'accumulation de protéines LEA (Late Embryogenesis Abundant). Nous avons montré que la LEAM, une protéine LEA mitochondriale exprimée dans les graines, est dépliée à l'état natif, mais peut se structurer réversiblement en hélice a sous l'effet de la dessiccation. La LEAM interagit avec les membranes à l'état sec, et plus précisément avec les groupements phosphate des phospholipides. Ces interactions, qui dépendent de la composition lipidique, permettent de protéger les liposomes des effets destructeurs de la dessiccation et de la congélation. L'ensemble de ces résultats indique que la LEAM protège la membrane interne mitochondriale pendant la dessiccation. Des approches de génétique inverse ont été initiées afin de confirmer cet axiome et de préciser le rôle physiologique de la LEAM

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Guerdam, Embarek. "Isolement d'une protéine possédant une activité lipoxygénase et acides gras lyase à partir d'une variété de pois protéagineux." Limoges, 1993. http://www.theses.fr/1993LIMO301A.

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Lima, Nascimento Luis Gustavo. "Casein hydrogels : Interaction with bioactive compounds and vegetable proteins." Thesis, Université de Lille (2022-....), 2022. https://pepite-depot.univ-lille.fr/ToutIDP/EDSMRE/2022/2022ULILR029.pdf.

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Анотація:

Les hydrogels sont des réseaux tridimensionnels capables de retenir une grande quantité d'eau. Ils peuvent être formés à partir d'une large gamme de polymères, seuls ou en combinaison, et ont différentes applications en fonction de leur composition et de leurs caractéristiques rhéologiques. Dans l'industrie alimentaire, les hydrogels sont principalement conçus pour fonctionner comme un système porteur de composés bioactifs, ou pour adapter la texture et la rétention d'eau des aliments. La facilité de modulation de la structure et des interactions des micelles de caséine (CM) par l'application de traitements physiques, chimiques ou enzymatiques en font une excellente matrice protéique pour la formulation d'hydrogels. En raison de la bonne digestibilité des caséines, l'utilisation de MC peut être particulièrement intéressante dans le transport de bioactifs par ingestion orale. De plus, l'utilisation d'hydrogels de caséine peut également être un moyen d'incorporer davantage de protéines végétales dans l'alimentation humaine. Les mélanges de protéines végétales avec de la caséine ont été considérés comme une alternative plus durable à un régime basé principalement sur des protéines animales. Car, avec le mélange, les inconvénients des produits à base de protéines végétales pures, tels que le goût de haricot et la faible solubilité, peuvent potentiellement être atténués par la présence de caséines. Cependant, les interactions des CM avec des micromolécules telles que des composés bioactifs ou des macromolécules telles que des protéines, peuvent modifier les caractéristiques du gel. Ainsi, cette étude a proposé l'utilisation de l'hydrogel à base de caséine dans deux applications distinctes: i. en association avec des composés bioactifs extraits du Jabuticaba, utilisant la transglutaminase pour moduler la microstructure des gels; ii. en association avec des protéines de petit pois, dans des proportions différentes, soumises à des conditions de procédé habituellement appliquées dans l'industrie alimentaire telles que le traitement thermique et l'acidification. Aussi, des ultrasons de haute intensité ont également été appliqués pour améliorer les propriétés gélifiantes des systèmes mixtes de CMs : petit pois. L'ajout de l'extrait bioactif dans les gels a diminué l'élasticité du gel et augmenté la taille des pores. Cependant, ces effets ont été contrebalancés en utilisant la transglutaminase comme agent de réticulation, qui pourrait moduler la libération des extraits bioactifs du gel. Dans les systèmes CMs : protéines de petit pois, le traitement thermique a augmenté l'élasticité des systèmes avec un impact plus important dans les systèmes avec plus de protéines de petit pois. Le renforcement du réseau est causé principalement par des interactions physiques entre les protéines de petit pois. Les liaisons disulfure n'apparaissant qu'entre les protéines de la même source. Au cours de l'acidification, le remplacement de 20 et 40 % des CMs par des protéines de petit pois a provoqué des perturbations dans les premiers stades de formation du réseau tridimensionnel des CMs. Cependant, les élasticités finales des gels étaient plus élevées que dans le gel pur de MC, en raison de la gélification des protéines de petit pois. En général, les protéines de différentes sources forment des réseaux protéiques indépendants, même à des concentrations élevées. Malgré l'interaction réduite entre les CMs et les protéines de petit pois, leur distribution dans le gel est responsable de la modulation de la rigidité finale. De plus, l'application d'ultrasons de haute intensité dans les suspensions mixtes a augmenté l'élasticité des gels acides jusqu'à 10 fois, selon le rapport protéique. Cette étude montre que l'association des CMs avec des molécules bioactives ou des protéines de petit pois dans des systèmes gélifiés a le potentiel pour le développement d'aliments fonctionnels ou d'aliments aux caractéristiques rhéologiques totalement nouvelles
Hydrogels are three-dimensional networks able to entrap a high amount of water. They can be formed by a wide range of polymers alone or in combination and have different applications depending on their composition and rheological features such as in tissue engineering, drug delivery, or food application. In the food industry, hydrogels are mainly designed to work as a carrier system of bioactive compounds or to tailor the texture, mouthfeel, and water retention of foods. The facility to modulate Casein micelles (CMs) structure and interactions by application of physical, chemical, or enzymatic treatments, makes it an excellent protein matrix for the hydrogel's formulation. Because of the good digestibility of caseins, the use of CMs can be particularly valuable to deliver bioactive by oral ingestion. Moreover, the use of casein hydrogels can be also a way to incorporate more plant proteins into human food. The mixtures of plant proteins with caseins have been viewed as a more sustainable alternative to a diet based mainly on animal proteins. Since, in the mixture, the drawbacks of pure plant protein products, such as beany taste and low solubility, could be potentially diminished by the presence of caseins. Nevertheless, the CMs' interactions with micro molecules such as bioactive compounds or macromolecules such as proteins can alter the features of the gel. Thus, this study proposed the utilization of casein-based hydrogel in two distinct applications, i. in association with bioactive compounds extracted from Jabuticaba fruit with the use of transglutaminase for modulation of gels' microstructure and ii. in association with pea proteins (in different ratios) submitted to process conditions usually applied in the food industry such as thermal treatment and acidification, in addition, high-intensity ultrasounds also were applied to improve the gelling properties of the mixed systems of CMs: pea. The addition of the bioactive extract in the gels decreased the gel elasticity and increase the pore sizes. However, these effects were contra-balanced by using transglutaminase as the crosslinking agent, which could modulate the release of the bioactive extracts from the gel. In the CMs: pea proteins systems, the heat treatment increased the elasticity of the systems with a higher impact in the systems with more pea protein. The network reinforcement is caused mainly by physical interactions between pea proteins, with disulfide bonds occurring only between proteins of the same source. During acidification, the replacement of 20 and 40% of CMs for pea protein disturbed the initial steps of CMs network formation, however, the final gel elasticity was higher than pure CMs gel due to the formation of the pea's network. In general, the proteins of different sources form independent protein networks even in high concentrations. Despite the reduced interaction between CMs and pea proteins, their distribution in the gel is responsible for modulating the final stiffness. In addition, the application of high-intensity ultrasound in the mixed suspensions increased the elasticity of the acid gels up to 10 times, depending on the protein ratio. This study shows that the association of CMs with bioactive molecules or pea proteins in gelled systems has the potential for the development of functional foods or foods with totally new rheological features

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Nguyen-Kim, Huan. "Recherche de la fonction de protéines riches en hydroxyproline dans les parois végétales." Thesis, Toulouse 3, 2015. http://www.theses.fr/2015TOU30067/document.

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Анотація:

La paroi primaire végétale est une enveloppe dynamique impliquée dans le développement ainsi que la réponse aux contraintes environnementales. Elle est composée de réseaux de polysaccharides et de protéines dans lesquels interviennent des protéines multi-domaines de type LRX et des protéines à domaine PAC. Ce travail de thèse a consisté à rechercher la fonction de ces protéines dans les parois. Des analyses protéomiques réalisées sur des extraits de protéines pariétales de racines de plantes sauvages ou mutantes lrx1 d'A. thaliana ont permis d'identifier 424/434 protéines pariétales de plantes sauvages/lrx1 respectivement et 25 protéines candidates pouvant jouer un rôle dans la morphogenèse des poils absorbants. Par ailleurs, des protéines à domaine PAC ont été identifiées dans toutes les plantes terrestres étudiées. L'apparition des protéines à domaine PAC a pu être associée à la terrestrialisation. Une analyse phylogénique a permis de grouper les domaines PAC en 10 clades, chacun comportant un domaine PAC d'Amborella trichopoda. Outre les 6 résidus Cys caractérisant le domaine PAC, des motifs conservés ont été repérés dans les clades, ouvrant la voie pour des études fonctionnelles. Des tests in vitro ont montré que les domaines PAC interagissent avec différents types de polysaccharides pariétaux et permis de définir trois types de spécificité vis-à-vis de polysaccharides tels que les ß(1,4) galactanes/RGI, les mannanes, les xyloglucanes et/ou la cellulose. Un nouveau modèle d'interactions supramoléculaires dans les parois végétales faisant intervenir des protéines à domaine PAC et des polysaccharides pariétaux a été proposé
The plant primary cell wall is a dynamic envelope involved in development and in response to environmental constraints. It is composed of networks of polysaccharides and proteins to which multi-domain proteins like LRX (Leucine-Rich repeat Extensin) and PAC (Proline-rich Arabinogalactan Protein Cys-containing) domain proteins contribute. This work aimed at finding partners of such proteins in cell walls using different experimental approaches. Proteomics analyses have been performed on proteins extracted from cell walls of roots of wild type or lrx1 plants. They have allowed the identification of 424/434 cell wall proteins of wild type/lrx1 roots respectively as well as of 25 candidate proteins which could play a role in root hair morphogenesis. Besides, PAC domain proteins have been identified in all the studied terrestrial plants using a bioinformatic approach. The appearance of PAC domain proteins could be associated to terrestrialisation. A phylogenic analysis has allowed to group PAC domains in 10 clades, each of them containing a PAC domain of Amborella trichopoda, an ancestor of angiosperms. In addition to the 6 Cys residues which define the PAC domain, conserved motifs have been identified in each clade. This finding opens the way to functional studies. In vitro tests have shown that the PAC domains could interact with different kinds of cell wall polysaccharides. Three types of specificity could be defined towards ß(1,4) galactans/RGI, mannans, xyloglucans and/or cellulose. A new model of molecular interactions in plant cell walls including PAC domain proteins and polysaccharides has been proposed

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Bedoussac, Laurent. "Analyse du fonctionnement des performances des associations blé dur-pois d'hiver et blé dur-féverole d'hiver pour la conception d'itinéraires techniques adaptés à différents objectifs de production en systèmes bas-intrants." Phd thesis, Toulouse, INPT, 2009. http://oatao.univ-toulouse.fr/7855/1/bedoussac.pdf.

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Анотація:

Les associations d'espèces sont définies comme la culture simultanée d'au moins deux espèces sur la même parcelle pendant une période significative de leur croissance. Ce système permettrait d'améliorer l'utilisation des ressources du milieu (eau, azote, lumière…) et ainsi d'augmenter le rendement et la qualité des grains par rapport aux cultures monospécifiques. L'objectif de notre travail était d'analyser le fonctionnement et d'évaluer la performance des associations blé dur - pois d'hiver et blé dur - féverole d'hiver pour aider à la conception d'itinéraires techniques adaptés à différents objectifs de production. Pour cela nous avons testé, au cours de trois années d'expérimentations, différentes combinaisons de variétés de blé dur, disponibilités en azote, structures de couverts et densités de plantes. Nos résultats ont confirmé l'intérêt de ces systèmes pour améliorer le rendement et la teneur en protéines du blé dur comparativement aux cultures monospécifiques mais également pour la réduction des ravageurs, maladies et de l'enherbement dans certaines conditions. Ces systèmes sont ainsi particulièrement bien adaptés aux situations à faible disponibilité en azote en raison de la complémentarité entre céréale et légumineuse pour l'utilisation de l'azote (minéral du sol et fixation symbiotique) mais aussi pour la captation de l'énergie lumineuse. In fine, ce travail a permis de proposer des prototypes d'itinéraires techniques d'associations adaptés à différents objectifs de production, grâce notamment à l'analyse dynamique des compétitions et complémentarités entre espèces au sein du couvert et en particulier de l'élaboration du rendement du blé dur en association.

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BANIEL, ALAIN. "Etude de la variabilite genotypique et phenotypique de la composition proteique du pois (pisum sativum l. )." Nantes, 1993. http://www.theses.fr/1993NANT2011.

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Анотація:

L'etude a permis d'evaluer l'influence des facteurs genotypiques et phenotypiques sur la composition proteique des graines de pois (pisum sativum l. ). Apres optimisation des conditions d'analyse, une methode d'etude, associant la chromatographie et un traitement statistique des courbes, a ete developpee. A partir des chromatogrammes d'une collection de varietes cultivees dans trois lieux differents, l'analyse discriminante pas a pas est utilisee pour predire l'origine genotypique ou geographique. La repartition des echantillons sur les cartes discriminantes montre que la variabilite de la composition proteique globale depend principalement du genotype. Cette approche a, en outre, permis d'evaluer la variabilite genetique de la composition proteique de l'espece pisum. Contrairement aux varietes de grande culture, les varietes atypiques et primitives presentent une variabilite genetique importante. Une etude comparative de ces resultats avec ceux obtenus par spectroscopie proche infrarouge, montre que la methode chromatographique developpee est mieux adaptee a l'analyse de la composition proteique des graines. L'analyse des spectres proche infrarouge permet une meilleure discrimination des lieux de culture et des genotypes lisses/rides, sur la base de bandes d'absorption attribuables a l'eau et a l'amidon. Dans une etude de la variabilite phenotypique du rapport viciline/legumine en fonction de la teneur en proteines des graines, une correlation est mise en evidence entre ces variations et l'heterogeneite moleculaire des proteines. L'influence des conditions de culture sur ce rapport varie suivant les genotypes. Le polymorphisme de ces proteines apparait principalement influence par l'origine genetique de l'echantillon. Son incidence sur la qualite nutritionnelle de la graine est differente selon les varietes. La methode d'analyse developpee dans cette etude, associee a l'analyse multidimensionnelle des donnees, montre des potentialites importantes. En particulier, elle permet de definir des perspectives pour l'amelioration varietale du pois

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BEN-HDECH, EL-HASSANE. "Texturation d'une farine de pois par cuisson-extrusion : caracterisation microstructurale, ultrastructurale et physico-chimique." Nantes, 1993. http://www.theses.fr/1993NANT2014.

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Анотація:

Le but du present travail est d'apporter une contribution a l'effort deploye par divers groupes de chercheurs afin de mieux comprendre le mode d'action et les effets de la cuisson-extrusion sur les constituants alimentaires. Le pois (pisum sativum l. ) a ete retenu comme substrat en raison de sa composition et de ses potentialites nutritionnelles. Des techniques tres variees faisant appel a la microscopie photonique et electronique, a la spectroscopie et a de nombreuses autres methodes d'etude des proprietes physico-chimiques (solubilite, electrophorese, hydrolyse enzymatique. . . ), ont ete employees afin de caracteriser au mieux les echantillons avant et apres cuisson-extrusion a l'aide d'un extrudeur pilote bi-vis clextral bc-45. Les observations microscopiques ont permis d'expliquer un certain nombre de proprietes des extrudats telles que la densite, la solubilite et la capacite d'absorption d'eau. Par ailleurs, l'etude des effets des variations d'une large gamme de parametres de cuisson-extrusion a permis d'etablir un bareme d'intensite de traitement en relation avec le degre de transformation des constituants (en particulier les proteines) pouvant etre evalue et predit par analyse multidimensionnelle de spectres proche infra-rouge des extrudats. Sous des conditions moderees, les proteines ont ete peu affectees au niveau macromoleculaire malgre leur faible indice de solubilite du a leur agregation. En revanche, sous des conditions severes, toutes les fractions proteiques etaient impliquees dans des pontages covalents et subissaient des degradations chimiques et macromoleculaires notables

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Gharsallaoui, Adem. "Microencapsulation séquentielle d'un système lipidique par des biopolymères végétaux (protéines de pois et pectine) : influence des interactions à l'interface huile / eau." Dijon, 2009. http://www.theses.fr/2009DIJOS053.

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La protection et la vectorisation de certaines molécules actives, alimentaires et pharmaceutiques, nécessitent de les séparer de leur environnement en les piégeant dans des matrices structurées capables de les libérer à un endroit et à un instant bien précis. Lorsqu'il s’agit de systèmes d'encapsulation à base d'émulsions sèchées par le procédé d'atomisation, la maîtrise de ces matrices requiert à la fois la connaissance des propriétés des membranes interfaciales et de celles de la matrice de séchage. La caractérisation, par tensiométrie, des propriétés interfaciales des protéines de pois, en présence et en absence de pectine, polyélectrolyte anionique, permet l’étude des interactions protéines/pectine aux interfaces H/E et leur effet sur la stabilité de l’émulsion lors du séchage par atomisation. L’étude de l’effet des propriétés de la matrice de séchage, à base de maltodextrines, permet de relier leurs interactions vis-à-vis de l’eau aux performances d’encapsulation des émulsions séchées. Les études à l’échelle moléculaire mettent en évidence le rôle de la pectine dans la stabilisation de la structure secondaire des globulines de pois lors du séchage, ce qui se traduit par une meilleure protection de la molécule active encapsulée. Enfin, l’analyse de la cinétique de libération d’une molécule volatile modèle, l’hexanoate d’éthyle, permet d’évaluer les propriétés barrière des couches interfaciales et d’identifier le mécanisme de libération. L’ensemble de ces travaux menés à différentes échelles permet de contribuer à la compréhension des divers mécanismes impliqués dans (i) la stabilisation des émulsions par des interfaces multicouches à base de protéines/polysaccharides, (ii) leur résistance au séchage par atomisation et enfin (iii) leur capacité à protéger et à libérer des composés sensibles
The protection and the vectorization of active, food and pharmaceutical molecules, require separating them from their environment by entrapping them in structured matrices able to release them at the precise place and the quite time. When these encapsulation systems are based on dry emulsions, the control of the matrices requires the knowledge of both the properties of the interfacial membranes and those of the drying matrix. The characterization, of the interfacial properties of pea proteins, in presence and absence of pectin, an anionic polyelectrolyte, allows the study of the interactions proteins/pectin at O/W interfaces and their effect on the emulsion stability during spray-drying process. The study of the effect of the properties of the dehydration matrix, maltodextrins, makes it possible to link their interactions with water to the encapsulation efficiency of dry emulsions. The molecular investigation highlights the role of pectin in the stabilization of the secondary structure of pea globulins during drying, which results in a better protection of the encapsulated active molecule. Lastly, the analysis of the release kinetics of a volatile molecule makes it possible to evaluate the barrier properties of the interfacial layers and to identify the release mechanism. The whole of this work at various scales makes it possible to contribute to the understanding of the various mechanisms implied in the emulsion stabilization by multi-layered interfaces containing proteins/polysaccharides, their resistance to spray-drying and finally their capacity to protect fragile compounds

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Brisson, Savine. "Caractérisation chimique et propriétés fonctionnelles de la fraction protéique de pois (Pisum sativum) obtenue par turboséparation." Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 1993. http://www.theses.fr/1993INPL074N.

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Les protéines végétales utilisées actuellement an alimentation humaine sont principalement issues du soja. En France, le soja est très peu cultivé alors que le pois, actuellement utilisé en alimentation animale l’est très largement. Le but de ce travail est donc de tenter de valoriser le pois protéagineux en tant que source de protéines afin de concurrencer le soja en alimentation humaine. Une étude très détaillée de la composition chimique du pois est effectuée dans un premier temps puis la mise au point et l’optimisation d’un procédé d’extraction des protéines par turboséparation fait l’objet de la seconde partie de l’étude. Enfin, la fraction enrichie en protéines, obtenue par turboséparation est soumise à l’hydrolyse enzymatique. Les propriétés fonctionnelles de la fraction enrichie en protéines et de cette même fraction hydrolysée sont comparées aux propriétés fonctionnelles de la farine de départ afin d’étudier les effets de la truboséparation et de l’hydrolyse. Des comparaisons avec d’autres légumineuses telles que le soja, le lupin et les féveroles sont effectuées tout au long de l’étude afin d’estimer la qualité du pois et de ses protéines
The major source of fegume protein used in food industry come from soybean. In france, soybeans are almost not grawn but peas, used for animal feeding, are widely grown. The aim of this work was to valorize the field peas as a source of protein in order to compete with soybeans in food industry. The study of the chemical composition of pea constitue the first part of this word; then the fractionation of pea proteins by air-classification technique was the aim of the second part. The protein enriched fraction obtained by air-classification was then enzymatically hydrolysed. The functional properties of the hydrolysed protein-rich fraction and the non hydrolysed one were compared to toose of the pea flour in order to evaluate the result of air-classification and hydrolysis. The difference of properties between homologous proteins, like soybean, lupine and fababean were studied to estimate the quality of pea proteins

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Gauvin, Laurence. "Contribution à l'étude de l'extraction des protéines de pois chiche ("Cicer arietinum") en vue d'une application industrielle." Paris 5, 1994. http://www.theses.fr/1994PA05P057.

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Mession, Jean-Luc. "Influence de l'état protéique sur la dynamique de séparation de phase et de gélification dans un système ternaire aqueux à base de protéines de pois et d'alginate." Phd thesis, Université de Bourgogne, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00825480.

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Deux systèmes aqueux à 20°C constitués de protéines globulaires de pois et d'alginate de sodium ont été considérés au cours de cette étude, dans des conditions de solvant fixées à pH 7,2 et 0,1 M NaCl. Dans un premier temps, le comportement de phase de globulines faiblement dénaturées (i) ou pré-agrégées thermiquement (ii) en mélange avec de l'alginate a été comparé à différentes échelles d'observation, en termes de diagrammes de phase et de microstructure analysée par microscopie confocale. Attribuée à un phénomène général d'incompatibilité thermodynamique, la séparation de phase a été décrite tout particulièrement sous des aspects morphologiques et cinétiques à l'échelle microscopique, selon la composition de départ en biopolymères et le mode de préparation des globulines. Par la suite, une gélification de chacun des deux systèmes a été opérée à froid, par libération de calcium ionique in situ à partir d'un sel de calcium de carbonate peu soluble au-dessus de pH 7, sous l'effet acidifiant d'une hydrolyse lente de la glucono-δ-lactone (GDL). L'intérêt d'un tel procédé reposait sur l'obtention de gels remplis à mixtes lorsque l'alginate seul ou l'alginate et la phase protéique pouvaient gélifier en présence de calcium. Des corrélations entre propriétés rhéologiques mesurées en régime dynamique (modules G' et G'') et données de microstructure ont été effectuées, par l'intermédiaire de l'analyse de texture d'image selon la méthode de cooccurrence. Chaque mélange témoignait d'une séparation de phase bloquée cinétiquement par sa gélification. Par rapport aux gels d'alginate seul ou gels remplis où l'alginate seul pouvait gélifier via le calcium, les gels mixtes témoignaient d'un effet de synergie remarquable d'un point de vue élasticité finale des gels. Dans le même temps, les globulines pré-agrégées ne montraient pas d'aptitude à la gélification selon le procédé appliqué ici. En outre, des effets ségrégatifs induisaient un enrichissement des protéines et du polyoside dans deux phases coexistantes, renforçant de ce fait des interactions entre biopolymères du même type. Les gels mixtes les plus élastiques présentaient une structure enchevêtrée avec un réseau protéique prédominant. Les observations en microscopie électronique à transmission effectuées par un marquage différentiel des deux biopolymères suggèreraient qu'il puisse se former localement des interactions attractives inter-biopolymères, probablement via le calcium, à l'interface des deux phases initialement immiscibles. Ce pontage consoliderait globalement la cohésion entre les deux réseaux protéique et polyosidique

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Duval, Frédéric. "Calmodulines et germination chez le pois (Pisum sativum L. ) : aspects biochimiques et moléculaires." Angers, 2002. http://www.theses.fr/2002ANGE0042.

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La calmoduline (CaM) est une protéine de transduction du signal calcium (Ca2+), ubiquiste et dont la structure est très conservée parmi les eucaryotes. L'expression de mutiples isoformes de CaM est un signe distinctif de cette protéine chez les végétaux supérieurs. Elles n'ont pas d'activité catalytique propre mais interviennent spécifiquement dans de nombreuses voies métaboliques associées au développement ou aux réponses aux stress. Des analyses menées par spectrométrie de masse ont permis d'identifier trois isoformes protéiques de CaM dans les graines de pois. Elles diffèrent par des substitutions uniques d'acides aminés au sein de la première hélice alpha N-terminale. Les gènes de CaM appartiennent à une petite famille multigénique. Les ADNc pleine longueur codant les trois isoformes (PsCaM1, 2 & 3) ont été clonés et ont permis de déduire des amorces spécifiques dessinées dans les régions 5' et 3' non-traduites les plus divergentes. Les études d'expression, menées par RT-PCR semi-quantitative, ont montré une accumulation différentielle de chaque transcrit au cours de la germination. PsCaM1 & 2 sont détectés en quantités différentes dans les axes embryonnaires et les cotylédons secs, puis s'accumulent au cours de l'imbibition jusqu'à la percée de la radicule, alors que PsCaM3 apparaît au moment de la percée de la radicule et son niveau augmente progressivement dans les axes et les cotylédons. Afin de caractériser les propriétés biochimiques de chaque isoforme, les trois protéines ont été surexprimées dans Escherichia coli sous forme de protéines de fusion avec un Strep-tag (CaM1-ST, CaM2-ST & CaM3-ST). Les expériences de réactivation de la NAD kinase CaM dépendante de pois ont donné les mêmes résultats pour les trois protéines. Par contre, les analyses fonctionnelles utilisant la technique de gel-retard ont montré des différences entre les trois isoformes. CaM1-ST se lie de manière stoechiométrique au peptide synthétique dérivé du site de fixation de la CaM sur la CaM Kinase II, alors que CaM2-ST et CaM3-ST présentent une affinité moindre pour ce peptide. En utilisant un autre peptide synthétique idéal, Trp-3, ces affinités sont encore plus réduites. L'étude ultérieure de la distribution cellulaire de la CaM et l'identification des enzymes cibles de la CaM au cours de la germination permettront d'élucider l'implication des diverses isoformes de CaM dans les voies métaboliques associées à la germination.

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Zhang, Xu. "Etude de complexes protéine-protéine impliquant la chaperone de bas poids moléculaire HSP 27 : Implications dans le cancer de la prostate." Thesis, Aix-Marseille, 2014. http://www.theses.fr/2014AIXM4031/document.

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Le cancer de la prostate représente la deuxième cause de décès liée au cancer. Des stratégies thérapeutiques ciblant des mécanismes moléculaires conduisant à la résistance doivent donc être développées. Une stratégie visant à améliorer les traitements du cancer de la prostate consiste à cibler les gènes qui sont activés lors de la disparition des androgènes, soit pour retarder ou empêcher l'émergence du phénotype de résistance à la castration. Le but de cette thèse est d'identifier et de développer des petites molécules inhibitrices ciblant des interactions protéine-protéine impliquées dans le cancer de la prostate. Cette thèse porte sur l'étude de deux protéines cruciales liées au cancer de la prostate, à savoir, la protéine de choc thermique de bas poids moléculaire (Hsp27) et la protéine TCTP. Nous avons validé deux composés ciblant TCTP en utilisant une chimiothèque dédiée à l'inhibition d'interaction protéine-protéine. Des tests fonctionnels sont actuellement mis au point pour évaluer la capacité de ces molécules à être proposées comme composés potentiels contre le cancer de la prostate
Prostate Cancer (PCa) is one of most common malignancies, being the second leading cause among cancer-related death. Additional therapeutic strategies targeting molecular mechanisms mediating resistance must be developed because of the defects of docetaxel-based treatments. One strategy to improve therapies in advanced PCa involves targeting genes that are activated by androgen withdrawal, either to delay or prevent the emergence of the CR phenotype. The purpose of my thesis is to identify & develop small molecules inhibitors targeting PPIs involved in prostate cancer. we focuses on 2 crucial prostate cancer related proteins, namely, the small molecular weight Heat shock protein 27 (Hsp27) and the Translationally Controlled Tumor Protein (TCTP). We have validated 2 compounds targeting TCTP by using a "PPI Inhibitor-like" dedicated chemical library. Functional tests are now being developed to evaluate the capacity of such molecules to be proposed as potential compounds against prostate cancer

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Bourgeois, Michaël. "Dissection de la composition protéique des graines de pois : plasticité phénotypique et déterminisme génétique." Dijon, 2008. http://www.theses.fr/2008DIJOS054.

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Actuellement, l'Europe fait face à des besoins importants en protéines végétales pour l'alimentation animale. Le pois pourrait répondre à ces attentes. Cependant, la teneur et la composition protéiques des graines sont à améliorer pour augmenter leur qualité nutritionnelle. L'objectif de cette thèse était de caractériser la composition protéique, d'analyser sa plasticité phénotypique et d'élucider son déterminisme génétique. Nous avons produit une carte de référence du protéome des graines matures (156 protéines identifiées dont plusieurs protéines de réserve). Le protéome a révélé une grande complexité liée à l'expression de familles multigéniques et au processing des protéines de réserve. Nous avons ensuite analysé le protéome des graines pour trois génotypes et dans trois environnements distincts. La composition a montré une importante plasticité phénotypique, l'effet du génotype étant cependant prépondérant. Après avoir produit une carte génétique (535 marqueurs dont 193 potentiellement impliqués dans la qualité nutritionnelle des graines) nous avons disséqué le déterminisme génétique de la composition. Des pql (protein quantity loci) des protéines majeures de la graine ont été détectés. Le controle génétique de la composition est apparu complexe : 312 pql ont été trouvés pour 191 spots. Des régulations communes ont été trouvées (colocalisations pql), et la majeure partie des pql expliquaient une part modérée de la variance (<20%). Nous avons identifié des locus-clés impliqués dans la modulation de la composition protéique, qui sont des cibles potentielles pour l'amélioration. Nous avons proposé des gènes candidats controlant la composition protéique de la graine
Europe has to face important needs for plant proteins for animal nutrition. The pea crop could fulfil these expectations. Nevertheless, seed protein content and seed digestibility, closely linked to protein composition, needs to be improved to increase seed nutritional quality. The objective of this thesis was to provide a fine dissection of pea seed protein composition, to study its phenotypic plasticity and to elucidate its genetic control. By a quantitative proteomics approach, we have produced a 2-de reference map of the pea seed proteome (156 proteins were identified, a major part were storage proteins). The proteome exhibited a high complexity, probably resulting from the expression of multiple genes, as well as storage protein processing during seed development. Over three genotypes and three years of cultivation, the seed proteome displayed an elevated phenotypic plasticity, but the genotype effect was predominant. After having produced a genetic map focusing on functional markers involved in seed quality traits (535 markers in total), we have dissected the genetic determinism of protein composition. Pql (protein quantity loci) of major seed proteins were detected. This genetic determinism appeared complex: 312 pql were found for 191 spots. Common regulation mechanisms were shown, and most of the pql had moderate effects, explaining less than 20% of the variance. These results have allowed us to identify key-regulatory regions underlying the modulation of protein composition. They may constitute interesting targets for the improvement of the nutritional quality of pea seeds. Furthermore, we have proposed candidate genes controlling seed protein composition

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Djoullah, Attaf. "Réticulation enzymatique des protéines de pois pour la formation de microparticules : application à l'encapsulation de la riboflavine." Thesis, Dijon, 2015. http://www.theses.fr/2015DIJOS072/document.

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Dans ce travail, le comportement des protéines de pois vis-à-vis de la gélification enzymatique par la transglutaminase microbienne (MTGase) a été évalué à l’état natif et après dénaturation (réduction chimique ou thermo-dénaturation). L’application finale concernait la formation de microparticules protéiques permettant d’encapsuler la riboflavine, choisie comme molécule active hydrophile modèle. Le procédé d’extraction des fractions protéiques de pois a été optimisé de manière à affecter le moins possible la structure des protéines et de récupérer des fractions natives riches en albumines (Alb) et en globulines (Glob), ou leur mélange. La mise en place des méthodes de suivi de la réaction enzymatique a permis de mettre en évidence leur complémentarité ainsi que leurs limites. Deux nouvelles méthodes de suivi de la réticulation enzymatique ont été développées. L’une basé sur la RMN permet la détermination simultanée de la quantité du fragment glutamine-lysine, produit de la réaction enzymatique, et le degré de réticulation ; l’autre méthode, basée sur les techniques de mesure de taille (SDS-PAGE et DLS), permet de visualiser les liaisons intramoléculaires. L’étude du traitement enzymatique appliqué aux fractions Alb et Glob de pois à l’état natif et dénaturé, ainsi qu’en mélange natif, a montré que la réaction enzymatique est fortement liée à la structure et à la conformation des protéines. Contrairement à la fraction Alb, la fraction Glob constitue un bon substrat pour la MTGase et la réticulation met en jeu des sous-unités constitutives des globulines différentes pour chaque condition de traitement. Néanmoins, la fraction Alb peut être utilisée en tant que booster de réaction enzymatique ce qui peut faire l’objet d’une voie innovante d’amélioration de la susceptibilité des protéines vis-à-vis de la MTGase. Le mécanisme semble basé sur un phénomène d’affinité sélective. Les bonnes propriétés mécaniques et de capacité de rétention d’eau du gel de la fraction protéique de pois totale ont été exploitées pour produire des microparticules à partir de la dispersion de la solution protéique sous forme d’émulsion suivie d’une gélification enzymatique par la MTGase. Les microparticules ont été pratiquement insolubles dans les milieux gastro-intestinaux en absence d’enzymes et lentement dégradable en présence d’enzymes. La libération de la riboflavine est gouvernée par un phénomène de diffusion en absence d’enzyme et de dégradation de support en présence d’enzymes selon des cinétiques compatibles avec des applications nutraceutiques
In this work, pea proteins behavior toward enzymatic gelation by microbial transglutaminase (MTGase) was studied at native state and after denaturation (chemical reduction or thermal denaturation). The final application was the formation of protein microparticules to encapsulate riboflavin, chosen as hydrophilic active molecule model. The extraction process of the pea protein fractions has been optimized in such a way to minimize as possible protein denaturation and recover native fractions rich in albumin (Alb) and globulin (Glob) or a mixture of both.The setting up of the enzymatic reaction monitoring methods has brought out their complementarity as well as their limits. Two new monitoring methods of enzymatic cross-linking reaction have been developed. The first one, based on the NMR, allows to the simultaneous determination of the glutamine-lysine isopeptide bond, product of the enzymatic reaction, and the degree of crosslinking; the second method, based on size measuring techniques (SDS-PAGE and DLS), permit to view the intramolecular links. The study of enzymatic treatment applied to pea Alb and Glob at the native and denatured states, as well as thier native mixture showed that the enzymatic reaction is strongly related to the structure and conformation of proteins. Unlike Alb, the Glob fraction is a good substrate to transglutaminase and crosslinking reaction involves different subunits constituting globulins for each treatment condition. However, the Alb can be used as a booster of enzyme reaction which can be an innovative way for improving the proteins susceptibility toward transglutaminase treatment. The mechanism seems to be based on a selective affinity phenomenon. The good mechanical properties and water holding capacity of total pea proteins gel have been exploited to produce microparticles from a water-in-oil emulsion followed by enzymatic gelation. The produced microparticles were practically insoluble in gastrointestinal media in the absence of enzymes and slowly degradable in the presence of enzymes. The release mechanisms of riboflavin in digestive environments are governed by a diffusion phenomenon in the absence of enzymes and by support degradation phenomenon in the presence of enzymes according to kinetics compatible with nutraceutical applications

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Smadja, Jimmy. "Conception, synthèse et évaluation de molécules de faible poids moléculaire inhibitrices du système interleukine (IL)-15." Thesis, Nantes Université, 2022. http://www.theses.fr/2022NANU4021.

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L'interleukine (IL)-15 est une cytokine pléiotrope structurellement proche de l'IL-2, partageant toutes deux les sous-unités des récepteurs IL-2Rβ et γc. L'IL-15 joue un rôle important dans l'immunité innée et adaptative, soutenant l'activation et la prolifération des cellules NK, NK-T et CD8+ T. En cas de dérèglement, des niveaux élevés d'IL-15 ont été détectés, entraînant des réponses immunitaires anormales et des maladies auto-immunes ou inflammatoires telles que la polyarthrite rhumatoïde ou le psoriasis. Ainsi, notre objectif est de synthétiser des petites molécules inhibitrices qui se lient spécifiquement à l'IL15 sur l'interface IL-2Rᵝ. Nous décrivons ici deux nouvelles familles d'inhibiteurs de l'IL-15. En s’appuyant sur nos précédents nos travaux, de nouvelles modifications ont été apportées à notre première série labellisée IBI. Dans un deuxième temps, nous avons réalisé un docking à partir du criblage virtuel de bibliothèques de composés sur un pharmacophore affiné basé sur des résidus spécifiques de l'IL-15, identifiés sur le site de liaison de l'IL-15 avec l'IL-2Rᵝ donnant ainsi notre deuxième famille labellisée IBIS. Ces séries de composés ont été évaluées pour leur capacité à inhiber la liaison entre l'IL-15 et son récepteur, ainsi que la cascade de signalisation en aval des cellules dépendantes de l'IL-15 et leur prolifération
Interleukin (IL)-15, is a pleiotropic cytokine structurally close to IL-2, both sharing the IL-2Rβ and γc receptor subunits. IL-15 plays important roles in innate and adaptative immunity, supporting the activation and proliferation of NK, NK-T, and CD8+ T cells. In case of dysregulation, high levels of IL-15 have been detected, leading to abnormal immune responses and autoimmune or inflammatory diseases such as polyarthritis rheumatoid or psoriasis. Hence, our goal is to synthesize small molecule inhibitors that bind specifically to IL15 on the IL-2Rᵝ interface. Herein, we describe two new families of IL-15 inhibitors. Taking advantage of our previous work, extending modifications were done on our first series called IBI. On a second time, we applied a similar docking-based virtual screening of compounds libraries on a refined pharmacophore-based on IL-15 specific residues identified on the binding site of IL-15 with IL- 2R giving so our second family named IBIS. These series of compounds were evaluated for their capacity to inhibit the binding to IL-15 to its cognate receptor, as well as the down-stream signaling of IL-15-dependent cells and their proliferation

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Le, Gall Maud. "Digestion des protéines de pois chez le porcelet et le porc en croissance : carctérisation des peptides résistants à la digestion." Rennes, Agrocampus Ouest, 2004. http://www.theses.fr/2004NSARB161.

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L’incorporation du pois dans les aliments pour porcs est souvent restreinte pour limiter la variabilité des performances zootechniques. En particulier, la digestibilité des protéines de pois apparaît variable et en général inférieure à celles de régimes témoins. Notre travail a montré que la fraction protéique majoritaire de la graine, les globulines, est bien digérée. Les polypeptides α de la légumine sont totalement dégradés au niveau gastrique. Par contre, les polypeptides β et la viciline ne sont dégradés qu’au niveau intestinal. La digestion des albumines est très variable. Ainsi, la lectine et la PA1b sont totalement résistantes. La digestion de l’albumine majoritaire PA2 est influencée par plusieurs paramètres. Cette protéine est totalement dégradée par la pepsine mais que partiellement par les enzymes pancréatiques et intestinales. Par conséquent, pour des temps de séjours gastriques inférieurs à 3 heures, un peptide de PA2 de 15kDa est présent à la fin de l’iléon. Le chauffage et le broyage fin des farines de pois favorisent la digestion complète de cette protéine
The incorporation of pea in animal feed is limited by the low nutritional quality of the raw meal. This has long been ascribed to the presence of a limiting amount of essential sulphur amino acids and the poor digestibility of proteins caused by the presence of antinutritional factors in the seed. Our studies showed that the major pea storage proteins, globulins, are well digested in the pig. The α polypeptide of legumin is totally hydrolysed by pepsin while the β polypeptide and vicilin are digested by pancreatic and intestinal enzymes only. Proteins from the albumin fraction are more resistant to digestion. The lectin and the albumin PA1b are totally resistant in the gastrointestinal tract. By contrast, the susceptibility of the major albumin PA2 to digestion is influenced by different factors. It is totally hydrolysed by pepsin while being partly resistant to pancreatic and intestinal enzymes. Consequently, for a gastric retention time below 3 hours, a cleaved PA2 peptide of 15 kDa escapes gastric and small intestinal digestion. Pea particle size reduction and heating enhance susceptibility to digestion by increasing protein accessibility to enzymes

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Dumont, Estelle. "Tolérance au gel après acclimatation au froid chez le pois : identification de protéines et cartographie de PQL et QTL." Thesis, Lille 1, 2008. http://www.theses.fr/2008LIL10037/document.

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L'acclimatation au froid est un phénomène qui permet aux plantes exposées à de basses températures positives de pouvoir tolérer ensuite le gel. ElIe est, ici, étudiée chez le pois (Pisum sativum L.) en conditions contrôlées grâce à deux lignées, Champagne tolérante au gel après cette phase d'acclimatation et Térèse sensible même après la phase d'acclimatation. L'analyse du protéome des feuilles, des tiges et des racines de ces lignées a permis l'identification de protéines ayant un rôle potentiel dans l'acclimatation au froid. Pour les feuilles et la base des tiges, la majorité des protéines différentielIement exprimées et identifiées, soit 35% des protéines, participent à la photosynthèse et à la glycolyse (métabolisme primaire). Dans les tiges, 25% des protéines sont des chaperonnes et dans les racines, les protéines de défense représentent 47% des protéines identifiées. Les teneurs en raffinose, saccharose, glucose ainsi qu'en citrate augmentent chez Champagne dans les 3 parties étudiées de la plante lors de l'acclimatation au froid. Ces concentrations restent faibles et à peu près stables chez Champagne non acclimaté et Térèse qu'il ait ou non subi la phase d'acclimatation. Le dosage de ces métabolites a aussi été réalisé chez des lignées recombinantes issues du croisement entre Champagne et Térèse. Ceci a permis la détection de QTL pouvant être explicatifs de l'acclimatation au froid avec, notamment, des QTL de teneur en raffinose qui co-localisent avec des QTL de tolérance au gel présents sur les groupes de liaison 5 et 6. Des PQL ont aussi été recherchés avec l'analyse du protéome des feuilles des lignées recombinantes. Certains co-localisent avec les QTL précédemment détectés. L'ensemble des données fournies par les différentes approches nous permet d'émettre des hypothèses pour expliquer les mécanismes mis en place chez Champagne pour tolérer le gel
CoId acclimation is the process whereby plants, previously exposed to low positive temperatures, are sUbsequently able to tolerate frost. This phenomenon was studied under controlled conditions in pea (Pisum sativum L.) in two Iines: Champagne, frost tolerant after cold acclimation and Terese, frost sensitive even if previously submitted to a cold acclimation period. Leaf, stem and root proteomes were analysed. Thirty five per cent of the identified differentially expressed proteins in leaves and stems during the cold acclimation period were involved in photosynthesis and glycolysis. ln stems, 25% were identified as folding proteins and ir roots, 47% were involved in the defense response. The raffinose, sucrose, glucose and citrate contents increased in Champagne leaves, stems and roots during the cold acclimation. ln contrast, the levels of these compounds were low in non-acclimated Champagne as weil as in Terese submitted to the cold acclimation period or not. Metabolite levels were also determined on the recombinant inbred lines (RIL) resulting from the cross between Champagne and Terese. Subsequent analyses permitted the detection of potential cold acclimation explicative OTL. ln particular, raffinose content QTL were colocalized with frost da mage QTL on the linkage groups 5 and 6. POL were also detected with the study of RtL leaf proteome. A number of these PQL colocalized with the previously detected QTL. The data obtained using these different approaches allowed us to propose hypothezises potentially explaining the mechanisms used by Champagne to tolerate frost

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Fortier, Pierre-Louis. "Préparation et étude par spectroscopie RMN homo et hétéronucléaire de protéines de poids moléculaire élevé." Palaiseau, Ecole polytechnique, 1993. http://www.theses.fr/1993EPXX0015.

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La préparation des échantillons est devenue une étape essentielle dans l'étude des protéines par RMN. A travers trois exemples, nous mettons l'accent sur les problèmes rencontrés lors de la purification de protéines, et lors de leur expression dans des systèmes bactériens. L'étude par RMN homonucléaire de la calmoduline montre que celle-ci est fortement structurée en hélices. Le faible transfert par couplage scalaire ainsi que l'extrême densité de pics de corrélation dans les spectres noesy rend l'attribution périlleuse. Afin de clarifier ces spectres, nous développons une méthode qui permet de séparer les pics de corrélation dans les cartes noesy. La protéine l20, exprimée dans une souche bactérienne, est produite sous forme de corps d'inclusion dans le cytoplasme. Sa purification nécessite l'utilisation de conditions dénaturantes. Le spectre noesy de la protéine obtenue après dialyse extensive, montre que celle-ci est partiellement repliée autour d'un noyau hydrophobe. La protéine se dénature lentement dans l'échantillon au cours des expériences, ce qui empêche une étude plus poussée de ce repliement partiel. L'étude par RMN homonucléaire du facteur d'initiation 3 d'e. Coli (if3) montre l'existence de deux domaines dans la protéine, relies par un peptide très charge et vulnérable aux enzymes protéolytiques. Le domaine n-terminal conserve une structure propre au sein d'if3. Les expériences hétéronucléaires 3d réalisées sur un échantillon de la protéine complète marquée à l'isotope 15 de l'azote, permettent l'attribution de quelques résidus. Malheureusement, l'information de couplage contenue dans les spectres tocsy est insuffisante pour mener à bien une attribution complète d'if3.

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El, youssef Cynthia. "Sensory benefits provided by selected microorganisms for the fermentation of plant matrices." Electronic Thesis or Diss., université Paris-Saclay, 2020. http://www.theses.fr/2020UPASB027.

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La nouvelle tendance alimentaire prônant la consommation accrue de protéines végétales est liée aux effets négatifs sur la santé et l’environnement des produits d’origine animale. Pour répondre aux besoins des consommateurs, les industries agro-alimentaires développent ainsi des produits à base de protéines végétales.Parmi les différentes sources de protéines, le pois (Pitsum sativum) présente des avantages environnementaux, technologiques et nutritionnels. Néanmoins, son utilisation dans la formulation de produits reste fortement freinée par la présence de défauts sensoriels qui sont généralement décrits comme étant de type “beany”, “vert” et “végétal”. La fermentation est un des leviers de choix pour modifier la qualité de ces produits.Ce travail de recherche a donc consisté à étudier l’impact de la fermentation sur la perception sensorielle d’un produit type yaourt à base de protéines de pois. Des méthodes microbiologiques, physico-chimiques et sensorielles ont été mises en œuvre.Les molécules responsables des défauts dans la matrice non fermentée ont été identifiées par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse. Les aldéhydes, en particulier l’hexanal, les furanes, les alcools et les cétones sont les molécules majeures présentes dans cette matrice initiale.Divers microorganismes sélectionnés préalablement ont été cultivés sur cette matrice et leurs capacités d’acidification et d’aromatisation ont été évaluées. Des consortia de bactéries lactiques et de levures ont ainsi été sélectionnés apportant chacun les fonctionnalités recherchées.La modification de la perception des produits fermentés a été mise en évidence par des analyses sensorielles. L’origine de cette amélioration peut être liée à la production d'arômes fruités par les levures et/ou à la dégradation des défauts beany.Afin de mieux comprendre ce phénomène, des analyses sensorielles sur des solutions modèles de molécules cibles (méthodes de recombinaisons et d’omissions) ont été menées. En parallèle, des empreintes moléculaires par chromatographie en phase gazeuse couplée à l’olfactométrie ont été réalisées sur les produits fermentés.Ainsi, les esters produits par les levures ont un rôle déterminant dans l’amélioration de la perception sensorielle des produits fermentés à base de protéines de pois. Concernant les molécules responsables des défauts, l’impact dominant de certaines molécules dont l’hexanal et le 2-pentylfuran a été mis en évidence. Néanmoins, l’impact d’autres molécules de défauts, encore présentes dans la matrice fermentée, reste à approfondir. En particulier, il faudrait déterminer les seuils de perception dans ces matrices et étudier les effets d’interactions.Pour conclure, ce travail de thèse CIFRE nous a permis de déposer un brevet en vue du développement d’un ingrédient innovant, issu de la combinaison d’un procédé de fermentation et de stabilisation par séchage
The new food trend in favor of the increasing consumption of plant proteins is mainly linked to the negative effects of products of animal origin on health and environment. To meet consumers’ needs, agro-food industries are working on the development of plant protein-based products.Among the different sources of proteins, pea (Pitsum sativum) offers environmental, technological and nutritional advantages. However, its use in the formulation of products remains strongly hampered by the presence of off-flavors, described mainly as “beany”, “green” and “vegetable”. Fermentation is one of the means that could be chosen to modify the quality of these products.Therefore, this research consisted of studying the impact of fermentation on the sensory perception of a pea protein yoghurt-like product. Microbiological, physico-chemical and sensory methods were implemented.The molecules responsible for off flavors in the unfermented matrix were identified by gas chromatography coupled with mass spectrometry. Aldehydes, particularly hexanal, furans, alcohols and ketones are the major molecules present in this initial matrix.A variety of preselected microorganisms were cultured on this matrix, and their acidification and aromatization capacities were evaluated. Consortia of lactic acid bacteria and yeasts were selected, based on the desired functionalities that each provides.The modification of the sensory perception of fermented products was confirmed by sensory analyses. The origin of this improvement might be related to the production of fruity aromas by the yeasts and / or the degradation of off-flavors.In order to get a better understanding of this phenomenon, sensory analyses on model solutions of the targeted molecules (recombination and omission experiments) were performed.In parallel, molecular fingerprinting by gas chromatography coupled with olfactometry were carried out on the fermented products.Hence, the produced esters by yeasts played a decisive role in improving the sensory perception of pea protein fermented products. Regarding the molecules responsible for defects, the dominant impact of certain molecules including hexanal and 2-pentylfuran has been highlighted. Nevertheless, the effect of other off-flavor molecules, remaining in the fermented matrix, still needs further exploration. In particular, the perception threshold in these matrices needs to be determined and the interaction effects require exploration.To conclude, this industrial thesis allowed to file a patent pertaining to the development of an innovative ingredient, resulting from the combination of a fermentation process and stabilization by drying

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Page, David. "Amélioration génétique de la réserve protéique de la graine de pois : hérédité de sa composition et étude moléculaire du locus tri, "candidat" QTL de l'activité antitrypsique." Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 1999. http://www.theses.fr/1999INPL045N.

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L'amélioration génétique de la valeur nutritionnelle ou technologique de la graine de pois et de sa stabilité est un enjeu pour le développement économique de la culture du pois protéagineux. Elle passe notamment par une maîtrise génétique de la composition protéique de la graine. Notre objectif était de mieux comprendre le déterminisme génétique de cette composition, à deux niveaux d'étude. Dans une première partie, par analyse en composantes principales de chromatogrammes d'échange d'ions, nous avons mesuré l'influence respective de différents facteurs sur les proportions de chacune des trois fractions protéiques : albumines, vicilines et légumines. Nous avons montré que le facteur génétique est un facteur majeur dans la variabilité de la composition protéique et que celle-ci n'est pas liée à la teneur en protéine, ouvrant ainsi des perspectives à la sélection génétique pour ce caractère. Nous avons cependant détecté des effets maternels qui devront être pris en compte dans les schémas de sélection. Dans une deuxième partie, nous avons plus particulièrement étudié le déterminisme de l'activité antitrypsique (AA T), qui constitue l'un des principaux facteurs antinutritionnels de la graine de pois. Dans un premier temps, nous avons mis au point une méthode de mesure rapide et fiable de l'AAT, utilisable dans une étude génétique. Puis, nous avons mis en évidence du polymorphisme, aussi bien dans les séquences codantes que promotrices des gènes d'inhibiteurs trypsiques de 8 génotypes. Ce polymorphisme semble lié aux différences d'AAT de ces génotypes. Ce résultat offre des possibilités de développement d'une stratégie de sélection assistée par marqueur de ce caractère.

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Preville, Xavier. "Fonction protectrice des protéines de stress de faible poids moléculaire : relations avec le glutathion et son métabolisme." Lyon 1, 1998. http://www.theses.fr/1998LYO10033.

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La synthese des proteines de stress (hsp) est fortement stimulee en reponse a des perturbations de l'environnement cellulaire. Les proteines de stress de faible poids moleculaire (shsp) forment une famille de polypeptides dont le poids moleculaire est compris entre 15 et 30 kda. Mon travail de these a consiste a etudier la fonction protectrice des shsp. Ainsi l'expression d'une shsp dans une lignee cellulaire de fibroblastes murins normalement depourvus de toute expression de shsp endogene, a pour consequence de conferer a ces cellules un phenotype de resistance contre le stress oxydant induit par le peroxyde d'hydrogene et la cytokine inflammatoire tnf. Le role de la phosphorylation et de l'oligomerisation des shsp dans cette fonction protectrice, a ete eclairci. Il est maintenant clairement etabli que la capacite des shsp a former des oligomeres de grande taille est essentielle a la fonction protectrice de ces proteines. De plus, la phosphorylation serait un moyen pour inhiber cette fonction protectrice en s'opposant a la formation des oligomeres de grande taille. Enfin, une partie du mecanisme responsable de cette fonction protectrice, a pu etre decouvert. En effet, l'expression des shsp a pour consequence d'augmenter le taux de glutathion intracellulaire. Ce compose est un tripeptide ubiquiste essentiel dans le systeme de defense cellulaire contre le stress oxydant. Cette activite est dependante du recyclage de ce compose de sa forme oxydee vers sa forme reduite, reaction qui necessite l'apport de pouvoir reducteur. L'enzyme chargee de cette fonction est la glucose-6-phosphate deshydrogenase (g6pdh) dont l'activite est stimulee par l'expression des shsp. Les mecanismes responsables de cette augmentation d'activite de la g6pdh et son lien avec l'augmentation du taux intracellulaire de glutathion demeurent toutefois encore a definir.

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Masgrau, Aurélie. "Caractérisation du métabolisme protéique musculaire au cours de l'obésité et lors de la perte de poids." Thesis, Clermont-Ferrand 1, 2012. http://www.theses.fr/2012CLF1MM07.

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L'obésité - caractérisée par l'accumulation de lipides dans le tissu adipeux, puis dans les tissus périphériques tels que le foie et les muscles squelettiques - entraine des dysfonctionnements métaboliques de ces tissus. Sur le long terme, même s'il est fréquemment rapporté une augmentation de la masse maigre, l'obésité s'accompagne d'une perte de masse musculaire. La perte de poids a un impact positif sur les comorbidités associées à l'obésité. Toutefois, lorsqu'elle est induite par une restriction alimentaire, elle peut être associée à une perte demasse musculaire. L'association d'une activité physique à la restriction alimentaire peut limiter la perte de muscles. Sur le plan métabolique, la masse musculaire dépend essentiellement du renouvellement des protéines qui le composent. Aussi, l'objectif du travail de thèse a été de caractériser les modifications du métabolisme protéique musculaire, et particulièrement les modifications de la protéosynthèse, au cours du développement de l'obésité et pendant une perte de poids induite par un régime hypolipidique associé ou non à un exercice d'endurance. La première étude a permis de montrer qu'il existe deux phases distinctes lors du développement de l'obésité chez le rat. La première est associée à un gain de poids et de masse musculaire, associée à une augmentation de la vitesse de synthèse (FSR) des protéines myofibrillaires et mitochondriales spécifiquement dans le muscle glycolytique tibialis anterior, en postabsorptif. La seconde est associée à une stabilisation du poids, une réduction de la masse musculaire et à une diminution du FSR des protéines mitochondriales dans le tibialis anterior, alors même qu'une accumulation lipidique se produit dans ce muscle. Le muscle oxydatif soleus n'est pas affecté. La deuxième étude a montré qu'une restrictionlipidique isocalorique ou que la pratique d'un exercice en endurance régulier ne préviennent pas la perte de masse musculaire induite par l'obésité, contrairement à l'association des deux traitements. L'exercice seul ou associé au régime hyperlipidique stimule le FSR des protéinesmyofibrillaires dans le tibialis anterior, mais l'exercice ne stimule le FSR des protéines myofibrillaires et mitochondriales dans le muscle oxydatif soleus que lorsqu'il est associé à la restriction lipidique. En conclusion, ce travail a mis en évidence, d'une part, que la synthèseprotéique musculaire en postabsorptif et la masse musculaire sont différemment affectées en fonction du stade de développement de l'obésité et que, d'autre part, la synthèse protéique musculaire en postabsorptif est différemment affectée en fonction de la typologie musculaire. D'autre part, l'exercice a un impact bénéfique sur la masse musculaire et sur la protéosynthèse, mais cet effet "anabolisant" est limité par le régime hyperlipidiquehypersucré. Pour transposer ces données chez l'homme, une étude clinique qui porte sur l'effet de la perte de poids induite par chirurgie bariatrique sur le métabolisme protéique musculaire a été mise en place et est actuellement en cours
Obesity - characterized by lipid accumulation in adipose tissue and in peripheral tissues such as liver and skeletal muscles - leads to metabolic dysfunction of these tissues. In the long term, although it is frequently reported an increase in lean mass, obesity is accompanied by a loss of muscle mass. Weight loss has a positive impact on comorbidities associated with obesity. However, when it was induced by dietary restriction, it may be associated with muscle mass loss. The association of physical activity to food restriction may limit muscle mass loss. Metabolically, muscle mass depends essentially on proteins turnover, i.e. protein synthesis and breakdown. Therefore, the aim of the thesis work was to characterize changes in muscle protein metabolism, especially changes in protein synthesis, during obesity development and weight loss induced by a low-fat-diet with or without endurance exercise. The first study has shown that there are two distinct phases in the development of obesity in rats. The first is associated with body weight and muscle mass gains and an increase in myofibrillar and mitochondrial proteins synthesis rate (FSR), specifically in glycolytic muscle tibialis anterior, in postabsorptive state. Oxidative muscle soleus was not affected. The second phase is associated with body weight stabilization, reduced muscle mass and a decrease in the mitochondrial proteins FSR in the tibialis anterior. The second study has shown that isocaloric low-fat-diet or the practice of regular endurance exercise do not prevent muscle mass loss induced by obesity, unlike the combination of both treatments. Exercise alone or associated with high-fat diet stimulates the FSR of myofibrillar proteins actin in tibialis anterior muscle, but exercise stimulates the FSR of myofibrillar and mitochondrial proteins in the oxidative muscle soleus only when it is associated with lipid restriction. In conclusion, this study has shown firstly that muscle protein synthesis in postabsorptive state and muscle mass are differently affected depending on the stage of obesity development, and, secondly that muscle protein synthesis in postabsorptive state is differently affected depending on muscle typology. On the other hand, exercise has a beneficial effect on muscle mass and protein synthesis, but this "anabolic" effect is limited by the high-fat, high-sucrose diet. To transpose these data in humans, a clinical study that examines the effect of weight loss induced by bariatric surgery on muscle protein metabolism has been established and is currently underway

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Samra, Assem. "Recherche de protéines reliées a la symbiose endomycorhizienne chez des pois (Pisum sativum L. ) compatibles (myc#+) et résistant (myc#-) et cinétique d'induction des endomycorhizines." Dijon, 1996. http://www.theses.fr/1996DIJOS064.

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Les recherches présentées dans ce mémoire s'inscrivent dans le cadre des études visant à mettre en évidence les produits des gènes reliés à la symbiose endomycorhizienne de Pisum Sativum l. L'utilisation de deux génotypes de compatibles a l'endomycorhization cv. Frisson (myc#+,nod#+) et P56 (myc#+,nod#-) et d'un génotype résistant (myc#-,nod#-) nous a permis de démontrer que la colonisation des racines des deux génotypes compatibles, par le endomycorhizogène Glomus Mosseae, s'accompagne de profondes modifications des profils polypeptidiques caractérisées par la sur-expression et la répression de certains polypeptides et par l'induction de nouveaux. Ces nouveaux polypeptides représentent par définition les endomycorhizines, c'est-à-dire les polypeptides qui apparaissent en réponse a l'inoculation des génotypes compatibles par le champignon endomycorhizogène. En revanche, l'inoculation des racines du génotype resistant (myc#-,nod#-) par G. Mosseae se traduit principalement par une importante répression de l'expression de nombreux polypeptides. Une étape majeure de notre travail a été d'étudier la cinétique d'évolution des modifications polypeptidiques dès les stades précoces de l'association symbiotique. Les premières modifications des polypeptides sont décelables chez les trois génotypes après 5 jours d'inoculation. Des polypeptides reliés à la symbiose, et dont l'expression augmente au cours de la colonisation, ont été caracterisés, chez les deux génotypes par leur masse moléculaire et leur point isoélectrique. Les polypeptides additionnels identifiés chez le génotype résistant pourraient être reliés à l'expression de certaines protéines de défense. Les études de la synthèse des polypeptides in vivo et in vitro confirment les modifications polypeptidiques (stimulation, répression et induction) consécutives a l'inoculation par G. Mosseae. La synthèse in vivo nous a de plus permis de montrer que les endomycorhizines sont vraisemblablement synthétisées lentement et s'accumulent au cours de la symbiose. Des inducteurs fongiques, susceptibles d'éliciter des modifications des profils polypeptidiques des racines, à partir d'extraits protéiques solubles de spores germées n'ont pas été mis en évidence. D'importantes modifications polypeptidiques sont associées a la germination des spores de G. Mosseae, mais nous n'avons pas détecté de différences dans les profils polypeptidiques de spores germées en présence d'eau ou d'exsudats de racines des génotypes myc#+ et myc#-. En revanche, nos travaux sur l'analyse des profils polypeptidiques de spores de champignons endomycorhizogènes, appartenant à différents genres, ont montré l'existence d'une variabilité interspécifique

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Wakkel, Manel. "Contribution à l'étude de la séparation des protéines par chromatographie d'échange d'ions en milieu complexe. Effet du poids moléculaire sur l'équilibre et la cinétique de rétention." Thesis, Toulouse, INSA, 2015. http://www.theses.fr/2015ISAT0023/document.

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La séparation et la purification de biomolécules à partir de milieux bruts, végétaux ou biologiques, est un sujet vaste etcomplexe. De sa compréhension et de son développement dépendent des enjeux industriels, et notamment le completdéveloppement des procédés biotechnologiques, les procédés de séparation, ou downstream processes, constituant environ 80% des coûts totaux de ces procédés. Ce travail se veut une contribution à ces problématiques. Il a été motivé par des résultatsobtenus au préalable dans le laboratoire qui montraient qu’il est possible de récupérer une protéine de très grande taille àpartir d’un milieu réel végétal par l’application d’une seule opération chromatographique (Kerfai, 2011). Suite à ce résultat,des hypothèses ont été énoncées, auxquelles ce travail essaie de répondre : quel(s) mécanisme(s) peuvent expliquer cerésultat ? Existe-t-il une localisation spécifique pour la fixation de la molécule sur l’échangeur d’ions qui rend plus simple etefficace sa récupération lors de l’étape d’élution ? Ainsi, notre objectif a été de progresser dans la connaissance des aspectsfondamentaux de la chromatographie d’échange d’ions appliquée à la séparation des protéines à partir d’un milieu brut.Notamment, l’influence de la présence d’autres protéines dans le milieu a été analysée, et ce dans le cas particulier deprotéines de poids moléculaire très différents, comme c’était le cas dans le travail précédemment cité. Des approches variées,théoriques et expérimentales à différentes échelles sur des milieux réels ou synthétiques, ont été appliquées et parfoisdéveloppées, pour essayer de répondre à ces questions. A l’échelle du procédé, une méthode statistique d’analyse desdonnées (Analyse en Composantes Principales ou ACP) a été menée, dont l’exploitation reste délicate. A l’échelle dulaboratoire, l’étude de l’équilibre et de la cinétique d’échange d’ions a été menée sur des solutions synthétiques de deuxprotéines : la sérum albumine bovine (BSA) (en tant que protéine de référence, couramment étudiée) et la ferritine (protéinede stockage du fer) de point isoélectrique proche de celui de la BSA mais de masse molaire plus élevée. Les résultatsmontrent que des modèles relativement classiques peuvent être appliqués, y compris pour les protéines de très grandes tailles,pour expliquer les aspects cinétiques de l’échange. Le couplage des flux de matière des protéines à l’intérieur des particulesde l’échangeur est très probable, malgré des diffusivités très différentes. Interpréter les résultats d’équilibre reste bien plusardu. La concentration en sel ou la présence de la BSA n’ont que très peu d’effet sur la rétention de la ferritine à l’équilibre.En revanche, la présence de la ferritine affecte très fortement la rétention de la BSA (pourtant plus favorable). Parmi lesphénomènes suggérés dans la littérature, l’effet Vroman a été recherché, mais il n’a pas été constaté dans le système pour lesconditions de travail utilisées. Les isothermes d’adsorption en conditions compétitives n’ont pas pu être simulées par lesmodèles habituels (comme l’isotherme multi-constituants de Langmuir), alors que celles des protéines seules sont tout à faitclassiques. En outre, un blocage partiel des pores de la résine par la ferritine reste probable, empêchant la diffusion de laBSA. Afin de vérifier ce dernier point, une méthodologie a été développée afin d’observer à l’échelle microscopique lesprofils de concentration des éléments représentatifs du système (P, Fe, Cl…) dans les particules. Cette méthode qui se trouveà un stade très avancé de développement, n’a pas encore permis de conclure faute de sensibilité suffisante des sondes àdisposition
Bioseparations from crude media, vegetable or biological, is a large and complex subject. Future industrial issues depend ontheir understanding and development, namely for biotechnological processes as downstream processes represent up to 80 %of their total cost. This work hopes to contribute to these general questions. It is justified by previous results obtained in thelaboratory showing that it is possible to recover a high molecular weight (HMW) protein from a complex vegetal juice in justone chromatographic operation. Hypotheses have been formulated, to which this work tries to answer: what mechanism couldexplain this behaviour? Is-there a specific location inside particles for the uptake of such protein, facilitating the recoveryduring elution step? Our objective has been to progress on the knowledge of fundamental questions concerning ion-exchangechromatography and their applications for proteins recovery from complex media. The effect of the other proteins in solutionhas been analysed, specifically in the situation where both proteins have a very different molecular weight, as in the previouscited work. Theoretical and experimental approaches, at various scales, have been applied or developed on real or syntheticsystems in order to answer some of these questions. At the process scale, a statistical method for data analysis (PrincipalComponent Analysis or PCA) has been applied. The complete interpretation of its results remains very hard. At thelaboratory scale, equilibrium and kinetics of ion exchange have been studied for synthetic solutions of two proteins: bovineserum albumin (BSA) (as reference protein widely studied), and ferritin (iron storage protein) having similar isoelectric pointas BSA but with higher molecular weight. Classical models for ion-exchange kinetics can explain the experimental results,even for HMW proteins. Mass transfer fluxes seem to be coupled for both proteins, even if they have usually very differentdiffusivities. The interpretation of equilibrium results is much more difficult. Equilibrium uptake of ferritin is not, or lightly,influenced by salt concentration or BSA content. Nevertheless, the presence of ferritin in the medium affects strongly BSAequilibrium uptake (however more favourable). Among the phenomena suggested in the literature, the Vroman effect hasbeen researched but it does not take place under the experimental conditions applied. Simulation of multi-componentisotherms has not been possible by classical models (such as multi-component Langmuir isotherm), while protein isothermsin single solution are standard. Besides, a partial blockage of the resin pores by ferritin is possible, preventing BSA diffusion.Therefore, a methodology has been developed at the microscopic scale, with the aim to observe concentration profiles forrepresentatives elements (P, Fe, Cl …) inside particles. The method, well developed, does not allow to conclude for themoment, because the probes used were not sensible enough

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Alary, Rémi. "Isolement, caractérisation et importance technologique de deux gluténines de faible poids moléculaire chez le blé dur." Montpellier 2, 1988. http://www.theses.fr/1988MON20010.

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La teneur en sh plus s-s (accessibles et totaux) a ete determinee par une methode amperometrique dans les differentes fractions proteiques (albumines-globulines, gliadines et glutenines) du ble dur. Isolement d'une fraction (dsg proteines: durum-wheat de gunrich glutenin fraction) contenant 183 et 130 micromoles de s-h plus s-s/g de proteines pour les varietes mondur et kidur respectivement. Cette fraction riche est composee de deux proteines dsg-1 (masse moleculaire 14,7 kda) et dsg-2 (masse moleculaire de 15,4 kda). Correlation a ete etablie entre la teneur en sh plus s-s des proteines dsg et l'etat de surface des pates cuites (r=0,858), et la fermete du gluten d'autre part (1=0,630). On peut donc supposer que ces deux proteines jouent un role fonctionnel dans la qualite culinaire des pates alimentaires

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Delmas, Françoise. "Caractérisation de la protéine de stress de faible poids moléculaire Lo18, induite au cours de la réponse adaptative chez la bactérie lactique Oenococcus oeni." Dijon, 2000. http://www.theses.fr/2000DIJOS006.

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Oenococcus oeni est la bactérie lactique principalement responsable de la fermentation malolactique des vins. Du fait des difficultés de croissance bactérienne dans l'environnement hostile que constitue le milieu vin, la fermentation malolactique est une étape mal maitrisée. Cette fermentation étant primordiale pour la stabilité et la qualité du vin, il apparait nécessaire d'étudier les mécanismes d'adaptation au stress chez O. Oeni. Suite à un stress, toute cellule vivante induit la synthèse d'un jeu de protéines appelées HSP pour heat shock protein. Apres la mise en évidence de différentes HSP chez o. Oeni, nous nous sommes intéressés à une protéine de faible poids moléculaire, lo18. En effet cette HSP, induite par de multiples stress et par les cellules en phase stationnaire de croissance, est un bon marqueur de l'état de stress de cellules. Son gène de structure HSP18 a été clone, caractérisé, et son expression apparait régulée au niveau transcriptionnel. Des analyses de séquences ont montré une identité entre lo18 et les protéines appartenant à la famille des small HSP (smHSP). Peu de données étant disponibles sur les smHSP de procaryotes, notre étude s'est poursuivie par une approche physiologique et biochimique. La purification de cette smHSP a permis d'étudier sa structure native et son activité in vitro. Lo18 serait organisée en un tétramère de trimères in vitro et des structures équivalentes sont mises en évidence in vivo. Lo18 possède une activité de chaperon atp-indépendante : elle est capable de protéger des substrats modelés de l'agrégation thermique et ce jusqu'à au moins 60\c. Cependant elle n'est pas capable de provoquer à elle seule le repliement des substrats dans une conformation active, même après retour à une température normale. Son activité de chaperon in vitro et son association à la périphérie de la membrane cytoplasmique chez O. Oeni laissent envisager un rôle dans la stabilisation de protéines membranaires lors d'un stress. L'expression combinée du gène HSP18 et de deux autres gènes, situes en amont sur le chromosome de O. Oeni, améliore la survie d'E. Coli suite à un choc acide. Ces deux gènes coderaient respectivement pour un régulateur transrationnel de type LysR et pour une protéine de la famille des MDR (multi drug resistance).

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Romillac, Nicolas. "Effets de l’introduction du pois dans une succession de cultures sur certaines communautés végétales et bactériennes et leurs fonctions écosystémiques associées." Thesis, Université de Lorraine, 2015. http://www.theses.fr/2015LORR0266/document.

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Les plantes cultivées peuvent modifier la disponibilité en ressources et les perturbations perçues par les communautés d’organismes présentes dans les agroécosystèmes et en conséquence, influencer les fonctions écosystémiques utiles à la production agricole telles que la minéralisation de N et de S ou la compétition culture-adventices. Notre objectif était d’évaluer l’effet du pois (Pisum sativum L.), introduit dans une succession de cultures, sur les communautés d’adventices et les communautés microbiennes impliquées dans la minéralisation de N et S. Pour ce faire, nous avons mené des expérimentations en conditions contrôlées et utilisé les données d’une expérimentation au champ conduite pendant 5 ans. En conditions contrôlées, nous avons montré que le pois influence via ses traits racinaires certaines activités enzymatiques liées à la minéralisation de N. En revanche au champ, les variables climatiques influencent principalement le fonctionnement des communautés microbiennes impliquées dans la minéralisation de N et S. Par ailleurs, nous avons observé que le pois sélectionnait des communautés d’adventices fonctionnellement différentes de celles d’autres cultures, comme le colza, mais cet effet du pois ne persistait pas sous la culture suivante. En conclusion, les effets du pois sur les communautés microbiennes impliquées dans la minéralisation de N et S sont faibles comparés à ceux d’autres facteurs comme les conditions climatiques. En revanche l’effet du pois sur les communautés d’adventices est fort mais limité dans le temps. Ces résultats montrent la nécessité de mener les expérimentations au champ sur plusieurs années afin de prendre en compte la variabilité climatique
Crops species modify resources availability and perturbation regimes perceived by the communities of organisms residing in the agroecosystems and, as a consequence, can lead to alteration of ecosystem functions useful to crop production, such as nitrogen and sulfur mineralization or crop-weeds competition, realized by weeds or microorganisms. Our objective was to study the effect of a legume, pea, when introduced in a crop succession, on weed communities and microbial communities involved in protein decomposition and sulfate ester mineralization, which are the main forms of N and S, respectively, in agricultural soils. To do so, we performed experiments in controlled conditions used data from a 5-years field experiment. In controlled conditions, we showed that pea during its development modify through its root functional traits several enzymatic activities involved in N decomposition/mineralization. However, in the field experiment, climatic factors were the main drivers of the microbial communities involved in N and S decomposition/mineralization. Moreover, pea selected weed communities that were functionally different from weed communities growing in other crops such as oilseed rape. However, this effect did not persist under the following crop. As a conclusion, our results suggest that pea modifications of microbial communities are weak compared to other factors such as climatic factors. However, pea effects on weed communities are strong but short lived. Those results highlight the complementarity of microcosm and field experiments, and the necessity of long term field experiments to take into account climate variability

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Ben, Harb Salma. "Formuler des consortia microbiens pour piloter les propriétés sensorielles de gels à base de protéines de pois : Mieux comprendre l’effet de la matrice et des communautés microbiennes sur les propriétés sensorielles." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2017. http://www.theses.fr/2017SACLA045/document.

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Les systèmes alimentaires occidentaux ne sont pas durables en termes d‘impacts environnementaux et d‘effet sur la santé. Une solution est de revisiter les modes de consommation en favorisant les produits à base de protéines végétales. Cependant, un des verrous à l‘introduction des protéines végétales dans notre alimentation est leurs défauts sensoriels qui sont un frein à l‘acceptabilité des produits par les consommateurs. La fermentation est un procédé ancien qui pourrait être un levier à ce verrou sensoriel. Dans ce contexte, l‘objectif de ce projet de thèse est d‘étudier les bénéfices sensoriels apportés par la fermentation de gels enrichis en protéines végétales à l‘aide de consortia microbiens sélectionnés. Pour cela, une stratégie alliant analyses sensorielles, microbiologie et physicochimie a été mise en œuvre. Deux types de matrices contenant 10% de protéines et 10% d‘huile de colza ont été étudiés : la première est constituée de 100% de protéines de pois et la deuxième est constituée d‘un mélange de protéines de lait (50%) et de pois (50%). Sur la base des connaissances de la matrice et des propriétés fonctionnelles des micro-organismes, 56 souches microbiennes ont été sélectionnées. Une stratégie raisonnée d‘assemblage de ces souches a été mise en place, basée sur la répartition équilibrée selon leur groupe phylogénétique, mais aussi sur la connaissance experte des fonctions cibles aromatiques recherchées. En parallèle, plusieurs procédés de gélification ont été étudiés pour structurer les gels. Dans un premier temps, la fermentation a été étudiée sur des émulsions non gélifiées pour permettre la sélection des communautés microbiennes spécifiques pour chaque matrice. Dans un second temps, le potentiel d‘adaptation et de fonctionnement des écosystèmes sélectionnés ont été étudiés sur les émulsions gélifiées. La croissance et l‘abondance des microorganismes dans les gels après trois et sept jours de fermentation ont été évaluées sur milieu spécifique et le potentiel aromatique des consortia a été cartographié par un panel sensoriel.Dans une dernière partie du travail, les défauts/bénéfices sensoriels de la fermentation ont été étudiés de point de vue sensoriel et analytique. Les résultats montrent un fort potentiel d‘implantation des bactéries lactiques (principalement Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rhamnosus, Lactococcus lactis et Lactobacillus casei) et de la majorité des eucaryotes (en particulier Mucor et Geotrichum) pour l‘émulsion mixte comme pour l‘émulsion végétale. Même si les souches appartenant aux groupes Actinobacteria et Proteobacteria ne soient pas compétitives vis-à-vis de la flore endogène (Bacillus), certaines espèces comme Hafnia alvei, Acinetobacter johnsonii et Glutamicibacter arilaitensis, ont montré une forte croissance quand elles sont inoculées en associations. Des notes aromatiques spécifiques pour chaque émulsion ont été générées permettant de masquer la note végétale « verte » caractéristique du pois. Ainsi, deux consortia ont pu être sélectionnés sur la base de notes lactiques et fruitées pour l‘émulsion végétale (VEGAN), et de notes fruitées pour l‘émulsion mixte (MEGAN). Le potentiel d‘adaptation de ces deux consortia dépendait de la composition et de la structure des gels. Ainsi, le consortium VEGAN semble bien adapté pour le gel végétal et génère des notes torréfiées/grillées, alors qu‘il génère des notes laitières (crème fraiche/caillé frais) dans le gel mixte. Le consortium MEGAN s‘implante très bien dans les deux types de gels, générant des notes fromagères et fruitées dans le gel mixte, mais ne permet pas de masquer les notes vertes dans le gel végétal. Les défauts sensoriels attribués aux notes vertes et à l‘amertume sont liés principalement à la présence des aldéhydes et des acides aminés hydrophobes respectivement, mais restent encore à approfondir. (suite et fin du résumé dans la thèse)
Western food systems are not sustainable in terms of environmental impacts and health effects. One solution is to revisit consumption patterns by favoring products based on plant proteins. However, one of the barriers to the introduction plant proteins in our diet is their sensory defects which can be obstacles for the acceptability of products by consumers. Fermentation is an ancient process that could be a solution to this sensory issue. In this context, the aim of this PhD thesis is to study the sensory benefits provided by the fermentation of plant protein-based gels using selected microbial consortia. In order to accomplish this, a strategy combining sensory analyzes, microbiology and physicochemistry was implemented. Two types of matrices containing 10% protein and 10% rapeseed oil were studied: the first consists of 100% pea protein and the second consists of a mixture of milk proteins (50%) and pea proteins (50%).Based on knowledge of the matrix and the functional properties of microorganisms, 56 microbial strains were selected. A reasoned strategy of assembly of these strains was put in place, based on the balanced distribution according to their phylogenetic group, but also on the expert knowledge of the desired aromatic functions. In parallel, several gelling processes were studied to structure the gels. In the first step, the fermentation was studied on non-gelled emulsions to allow the selection of specific microbial communities for each matrix. In the second step, the adaptation and functioning potential of the selected ecosystems were studied on gelled emulsions. The growth and abundance of microorganisms in the gels after three and seven days of fermentation were evaluated on a specific growing medium and the aromatic potential of the consortia was mapped by a sensory panel. In the final section of this study, the sensory defects / benefits of fermentation were studied from a sensorial and analytical point of view. The results show a highpotential for implantation of lactic acid bacteria and the majority of eukaryotes (in particular Mucor and Geotrichum) for the mixed emulsion and for the vegetable emulsion. Although strains belonging to the Actinobacteria and Proteobacteria groups are not competitive with endogenous flora (Bacillus), certain species such as Hafnia alvei, Acinetobacter johnsonii and Glutamicibacter arilaitensis, have shown strong growth when inoculated into associations. Specific aromatic notes for each emulsion were generated to mask the green note characteristic of peas. Thus, two consortia were selected on the basis of lactic and fruity notes for the vegetable emulsion (VEGAN), and fruity notes for the mixed emulsion (MEGAN). The adaptation potential of these two consortia depended on the composition and structure of the gel. Thus, the VEGAN consortium seems well suited for vegetable gels and generates roasted / grilled notes, while it generates dairy notes (fresh cream / fresh curd) in the mixed gels. The MEGAN consortium implements itself very well in both types of gels, generating cheesy and fruity notes in the mixed gel, but does not mask the green notes in the vegetable gels. The sensory defects attributed to green notes and bitterness are mainly related to the presence of aldehydes and hydrophobic amino acids respectively, but still need to be deepened. This study validated a proof of concept of formulation of fermented food products and will create opportunities for innovation

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Caron, Juliette. "Devenir des peptides bioactifs générés au cours de la digestion gastro-intestinale d’une protéine agroalimentaire et leurs rôles dans la régulation de l’homéostasie énergétique." Thesis, Lille 1, 2016. http://www.theses.fr/2016LIL10172/document.

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Les protéines alimentaires sont plus qu’une simple source d’acides aminés pour notre organisme. Elles interviennent dans l’homéostasie énergétique en modulant notamment la sécrétion d’hormones intestinales, telles que les cholécystokinines (CCK) ou le Glucagon-Like Peptide 1 (GLP-1). L’objectif global de cette thèse a été de comprendre comment la digestion gastro-intestinale (GI) d’une protéine alimentaire pouvait générer des peptides bioactifs impliqués dans la régulation de l’homéostasie énergétique. L’hémoglobine bovine a été choisie comme protéine modèle. Les activités biologiques ciblées ont été la régulation de la sécrétion des hormones CCK et GLP-1 ainsi que l’inhibition de la dipeptidyl peptidase IV (DPP-IV) qui module l’activité du GLP-1. Un modèle statique de digestion GI in vitro a d’abord été mis en place. La caractérisation analytique des digestats d’hémoglobine a été réalisée et a abouti à la création de cartographies peptidiques au sein des différents compartiments du tractus GI. Ensuite, les activités biologiques des digestats ont été étudiées et le digestat intestinal a ensuite été sélectionné pour son potentiel bioactif. Des étapes de fractionnement successives ont permis d’isoler les fractions peptidiques bioactives. L’utilisation de modèles cellulaires a permis d’étudier le passage des peptides contenus dans une fraction au travers de la barrière intestinale et de tester leur potentiel bioactif dans des conditions proches des conditions physiologiques. Enfin, le mode d’action des peptides actifs identifiés a été étudié
Dietary proteins already gave evidence to generate a strong satiety feeling when entering the gastrointestinal (GI) tract by stimulating gut hormone secretion such as cholecystokinin (CCK) and Glucagon-Like Peptide 1 (GLP-1). Moreover, GI digestion of various protein sources has proved to release bioactive peptides which may inhibit dipeptidyl peptidase IV (DPP-IV) activity, an ubiquitous enzyme responsible for inactivating GLP-1. Considering the great potential of dietary proteins, there is a need to understand how GI digestion can generate bioactive peptides involved in energy homeostasis. Bovine haemoglobin was here chosen as a model protein. CCK and GLP-1 secretion enhancing properties as well as DPP-IV inhibition potential of the resultant digests were investigated. The first part of this work dealt with setting up a simulated GI digestion protocol and characterising resultant digests by various analytical tools. Peptide mappings and heat maps were designed to represent each digest. Then, bioactive potentials of the digests were investigated and the final intestinal digest stood up by combining the best DPP-IV inhibitory and CCK and GLP-1 enhancing properties. Successive fractionation steps succeed in isolating a couple of bioactive fractions. The use of an intestinal barrier model aimed at predicting peptide transport of one specific bioactive fraction and its consequences on fraction bioactivity. Lastly, peptide sequences from the most bioactive fractions were characterised and their related ways of action were studied

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Alvarez, Sophie. "Modifications du protéome et variations de la composition en métabolites : sucres solubles, amidon, acides organiques et proline, au cours de l'acclimatation au froid associées à la tolérance au gel du pois." Lille 1, 2004. https://pepite-depot.univ-lille.fr/LIBRE/Th_Num/2004/50376-2004-87-88.pdf.

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La relation entre l'acquisition de la tolérance au gel et les teneurs en sucres solubles, l'amidon, les acides organiques et la proline a été étudiée chez deux variétés de pois (Pisum sativum L. ): Champagne, tolérant au gel et Térèse, sensible au gel. Le contenu en saccharose et raffinose dans l'appareil aérien et racinaire de Champagne augmente significativement en réponse à l'acclimatation au froid. Cependant chez les 59 lignées recombinantes, issues du croisement Champagne et Térèse cultivées en champ, il semble que l'accumulation des sucres solubles ne garantit pas l'acquisition de la tolérance au gel. L'analyse du profil d'expression des protéines de bourgeon, feuille, tige et racine de Champagne et Térèse au cours de l'acclimatation au froid, a permis de mettre en évidence l'expression spécifique de protéines de l'antenne collectrice de lumière et de la chaîne de transport d'électrons de l'appareil photosynthétique et impliquées dans l'inhibition du stress oxydatif chez Champagne.

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Sarem, Mahrou. "Identification dans les sérums de mammifères de peptides (MW< 1000 DA) à activité mitogénique : influence de ces peptides sur les activités biologiques des IGF1 et IGF2." Nancy 1, 2000. https://hal.univ-lorraine.fr/tel-01746897.

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Thèse de doctorat en génie biologique et médical. Les facteurs de croissance de petit poids moléculaire qui ont été identifiées dans le sérum humain par leur capacité à stimuler des activités biologiques des IGFs (insulin-like growth factors), et en particulier deux peptides (HWESAS et WGHE), représentent une nouvelle voie d'étude des facteurs de croissance. L'objectif de ce travail a été initialement de rechercher la présence de ces petits peptides (MM<1000 Da) dans le sérum de certains mammifères. Les ultrafiltrats provenant de sérum de cheval, porc, boeuf et souris exercent un effet potentialisateur sur l'activité mitogénique des IGFs. Cet effet peut s'expliquer en partie par la présence de HWESAS dans les sérums à des concentrations variant de 2 à 28 mg/L. Dans la seconde partie, nous nous sommes intéressés aux activités mitogéniques de HWESAS et de peptides dérivées sur différentes lignées cellulaires. Ces peptides ont une activité mitogénique propre et modulent celle des IGFs. Cette activité mitogénique pourrait faire intervenir des isoformes de la PKC (étude sur les fibroblastes d'embryons de poulets). HWESAS agit en synergie avec les acides aminés dans les cellules ou la stimulation de la synthèse protéique. De plus il agit en synergie avec les IGFs pour augmenter la phosphorylation des protéines. L'étude du cycle cellulaire ainsi que la mesure de la fixation de l'annexine V-FITC, montrent que HWESAS seul ne protège pas des fibroblastes d'embryons de poulets contre l'apoptose, mais associé aux IGFs il exerce un certain effet protecteur.

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Therriault, Audrey. "Effets d’une diète hypocalorique contrôlée en protéines lors d’un programme de perte de poids combiné ou non à un entraînement musculaire sur la composition corporelle chez les femmes ménopausées, obèses et sédentaires." Mémoire, Université de Sherbrooke, 2015. http://hdl.handle.net/11143/7576.

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Problématique : La diète hypocalorique est une approche efficace pour traiter les problèmes de surpoids et d’obésité. Toutefois, cette solution est également associée à une diminution de la MM. Des données indiquent qu’une diète avec un apport optimal en protéines aiderait au maintien de la MM. Cependant, l’impact d’une diète riche en protéines en combinaison avec un entraînement en résistance n’a jamais été étudié chez des femmes ménopausées, obèses et sédentaires jusqu’à maintenant. Objectifs : Examiner l’impact d’une diète riche en protéines contenant un minimum de 25 g de protéines d’origine animale, combinée ou non à un entraînement en résistance, sur le poids et la composition corporelle chez des femmes ménopausées, obèses et sédentaires. Méthodes : Quatorze femmes ménopausées et obèses (65,1 ± 2,8 ans; IMC 31,9 ± 2,7 kg/m²) ont été distribuées aléatoirement dans deux groupes (1 : diète riche en protéines contenant un minimum de 25 g de protéines d’origine animale et 2 : diète riche en protéines contenant un minimum de 25 g de protéines d’origine animale + entraînement en résistance) et suivies sur une période de 16 semaines. Variables d’intérêt : masse grasse (MG) et masse maigre (MM) totale (par DXA), et apports alimentaires (journaux alimentaires sur 3 jours). Résultats : Aucune différence significative n’a été observée entre les deux groupes pour les variables d’intérêt au début de l’étude. Pour les deltas de changement du journal alimentaire en valeurs absolues, l’apport énergétique était significativement différent entre les deux groupes. La consommation en grammes de protéines est demeurée similaire au début et à la fin de l’intervention pour les deux groupes. Les analyses ont révélé des diminutions significatives du poids, de l’IMC, de la MG, du % MG et de l’indice de MG (MG/taille m²) pour chacun des groupes (P< 0,05). Le delta de changements de la composition corporelle étaient similaire pour les deux groupes, sauf pour la perte de MG relative [ MG / sur poids initial) x 100] (P< 0,05). Finalement, aucun changement significatif n’a été observé pour la MM et l’indice de MM (MM/taille m²) après l’intervention pour les deux groupes. Conclusion : Les résultats démontrent qu’une diète ayant 1,27 g de protéines par kg de poids par jour (contenant un minimum de 25 g de protéines d’origine animale) permet le maintien de la MM suite à une perte de poids associée à une diète hypocalorique seule chez les femmes ménopausées. L’ajout d’un programme d’entraînement en résistance n’a pas eu d’effet additif sur la composition corporelle dans notre étude.

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Merand, Louvet Véronique. "Développement du couplage de la chromatographie liquide avec la spectrométrie de masse par l'interface FAB à flux continu : caractérisation des protéines H, T et L du complexe de la glycine décarboxylase des mitochondries de feuilles de pois." Université Joseph Fourier (Grenoble), 1994. http://www.theses.fr/1994GRE10078.

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Au cours de ce travail nous avons utilise differentes techniques de spectrometrie de masse destinees a resoudre des problemes analytiques dans le domaine de la structure des proteines. Dans le but de gagner du temps et de la sensibilite dans les analyses, nous avons developpe le couplage de la chromatographie liquide (hplc) avec la spectrometrie de masse (ms) en mode fab fast atom bombardment par l'interface fab a flux continu (cf/fab). Ce couplage a ete realise avec des colonnes capillaires de diametre interne 0,25 mm. Il s'est avere etre bien adapte a l'etude de melanges complexes de peptides de masses inferieures a 5000 da avec une sensibilite de l'ordre de 20 a 200 pmol pour un peptide de masse 1000 da. Cette sensibilite decroit au fur et a mesure que nous elevons dans le domaine de masse. Par la suite, les techniques de couplage de l'hplc avec la spectrometrie de masse, par l'interface cf/fab mais aussi par l'interface electrospray (esi), ont ete utilisees pour l'etude de la structure primaire et des modifications post-traductionnelles des proteines h, t et l du complexe de la glycine decarboxylase des mitochondries des feuilles de pois. Ainsi, les analyses des fragments issus de coupures chimiques ou enzymatiques des proteines h (14,1 kda) et t (40,9 kda) ont permis de verifier les sequences de ces deux proteines etablies a partir de leurs adnc. Nous avons aussi localiser la position exacte du cofacteur lipoate de la proteine h. La mesure de la masse de la proteine l (49,7 kda) confirme la sequence de la proteine. De plus, elle montre qu'il n'y a de liaison covalente ni entre les deux sous unites de la proteine, ni entre la proteine et son cofacteur, et que la proteine l contient une modification post-traductionnelle de 32 da environ

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Diribarne, Mathieu. "Identification du gène et de la mutation causale responsables du caractère rex chez le lapin." Versailles-St Quentin en Yvelines, 2011. http://www.theses.fr/2011VERS0015.

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Le caractère rex chez le lapin « autosomique récessif » se traduit par une fourrure très douce qui contient principalement du duvet et qui confère à la peau un avantage économique (marque déposée dont la fourrure est vendue sous la marque orylag®). Le gène rex a été identifié sur le chromosome 14, il s’agit du gène LIPH. Le séquençage de ce gène nous a permis de mettre en évidence une délétion d’un nucléotide dans l’exon 9 à l’état homozygote chez le lapin rex (1362delA) dont l’association entre la mutation et le phénotype rex s’est révélée totale. La comparaison par qPCR a permis de montrer que chez les lapins rex le niveau d’expression de LIPH est 3 fois inférieur à celui observé chez les lapins communs dès les stades fœtaux correspondant à l’apparition des différents types de follicules pileux sans entraîner de défaut de développement des follicules pileux. Ces résultats ont été confirmés par l’analyse de coupes de peau en hybridation in situ et en immunohistochimie. De plus, nous avons mis en évidence que l’IRS (Internal Root Sheath) des follicules pileux exprime très peu LIPH chez les lapins rex et orylag®. Nous avons également montré in vitro que l’activité enzymatique de la protéine mutée est fortement réduite d’un facteur 1,5 par rapport à la forme sauvage. Ces résultats contribuent d’une part à la caractérisation du métabolisme du follicule pileux dont le lapin représente un excellent modèle, et fournissent d’autre part des pistes de réflexion pour des espèces telles que l’Homme et des critères de sélection pour améliorer la fourrure des animaux orylag®
The rex rabbit trait “autosomal recessive” induces a plush-like fur essentially composed of awn hair with high economic value (the coat is orylag®). The rex gene was identified on the chromosome 14, this gene is LIPH. By sequencing this gene, a deletion of one nucleotide in exon 9 (1362delA) was identified in a homozygous state in the rex rabbits. The mutation was found in total association with the rex phenotype. We shown by qPCR that in rex rabbits skin the expression level of LIPH is 3 times less than that observed in the wild phenotype since the three critical fetal stages of hair genesis with no apparent interference on follicle development. These results were confirmed by in situ hybridization and immunochemistry analysis on skin cross-sections. We also bring evidence that LIPH is not much expressed in the IRS (Internal Root Sheath) of the hair follicles in the rex and orylag® rabbits. We have also shown that the mutant protein has a reduced activity of 1. 5 compared to the wild one. These results contribute to the characterization of the metabolism of the hair follicle for which rabbit is an excellent model. They draw lines of reflexion for developments in humans and for selection criteria to improve the fur quality of orylag® rabbits

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Biteau, Flore. "Production de protéines recombinantes par des plantes carnivores génétiquement transformées : application à Drosera rotundifolia et transfert de la technologie à Nepenthes alata." Thesis, Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 2009. http://www.theses.fr/2009INPL022N/document.

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Le travail présenté porte sur le développement d’une nouvelle technologie innovante, nommée PAT Friday®, visant à produire des protéines recombinantes au sein des sécrétions extracellulaires de plantes carnivores génétiquement modifiées. Deux objectifs ont été fixés : Réaliser la preuve de concept de la technologie sur le modèle expérimental Drosera rotundifolia, en transformant la plante avec des gènes marqueurs et humains afin de mettre en évidence la présence des protéines recombinantes dans la glu ; et développer, après évaluation, la technologie sur un modèle potentiellement industrialisable, Nepenthes alata. Les résultats ont indiqué la présence des deux protéines marqueurs GFP et GUS dans les tissus et dans la glu de Drosera rotundifolia transformées. Les plantes ont également été transformées génétiquement avec les gènes humains de l’interféron gamma et du facteur intrinsèque. Les protéines recombinantes humaines ont été mises en évidence au sein des tissus végétaux. Le potentiel industriel du modèle Nepenthes alata a ensuite été étudié : 10 à 15 kg de protéines totales par hectare et par an peuvent être produits, grâce notamment à des récoltes successives non destructrices, et la possibilité de contrôler l’activité des protéases digestives naturelles. L’élaboration d’un protocole de régénération de la plante a été entreprise par embryogénèse somatique et organogénèse indirecte, en vue de sa transformation génétique. La technologie PAT Friday®, avec des étapes simplifiées d’extraction et de purification des protéines d’intérêt produites dans le liquide digestif, offre de nouvelles perspectives dans le domaine des protéines thérapeutiques produites à partir de plantes
The present work focuses on the development of a new innovating technology, called PAT Friday®, aiming at producing recombinant proteins into the extra-foliar fluid of modified carnivorous plants. Two objectives were assigned to this work : 1- to realize a proof of concept of the technology on the experimental model Drosera rotundifolia, transformed with marker and human genes, to confirm the occurence of the recombinant proteins into glu ; and 2 - to evaluate and develop, the technology on the model Nepenthes alata, more adapted to industrial scaling-up. The results indicate the presence of two marker proteins GUS and GFP inside the tissues and into the glu of modified Drosera rotundifolia plants. The same plant species has also been transformed with human gamma interferon and intrinsic factor genes. The corresponding human recombinant proteins have been detected into the plant tissues. Potential industrial scaling-up has been studied with the species Nepenthes alata. The results show a potential productivity of 10 to 15 kg of total proteins per hectare per year, thanks to non-destructive repeated harvests, and possibility to efficiently control the natural proteinase activity. The elaboration of a regeneration protocol has been undertaken through indirect organogenesis and somatic embryogenesis, with a view to transform genetically this plant. PAT Friday® technology, with simplified extraction and purification methods of the proteins of interest targeted into the liquid secretions, opens new perspectives in the field of therapeutical proteins produced in plants

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Sauvion, Nicolas. "Effets et modes d'action des deux lectines à mannose sur le puceron du pois, Acyrthosiphon pisum (Harris) - Potentiel d'utilisation des lectines végétales pour la création de plantes transgéniques résistantes aux pucerons." Phd thesis, INSA de Lyon, 1995. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00007006.

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Анотація:

Nous avons recherché des protéines toxiques pour les pucerons (Homoptères, insectes piqueurs-suceurs phloémophages) et étudié le mode d'action de certaines d'entre elles. Ce travail constitue une première étape d'un programme de création de plantes résistantes aux pucerons par génie génétique.
Les caractéristiques toxicologiques de nombreuses protéines sont évaluées par des tests d'ingestion sur milieux artificiels définis. Des lectines d'origine végétale se liant au mannose présentent des propriétés toxiques intéressantes. Notre étude porte sur la Concanavaline A (lectine de Canavalia ensiformis [L.] DC, ConA) qui est une lectine modèle très étudiée du point de vue biochimique, et la lectine du perce-neige (Galanthus nivalis L., GNA) dont les caractéristiques en font un bon candidat à l'application envisagée.
Nous mettons en évidence une variabilité de la toxicité des lectines à mannose chez six espèces de pucerons. La ConA est moins active sur les espèces polyphages. Elle n'est pas phagorépulsive pour notre puceron modèle, Acyrthosiphon pisum (Harris) et agit en quelques heures aux doses moyennes, notamment en inhibant l'ingestion. Une adaptation comportementale à moyen terme (24 h-48 h) est également mise en évidence. Des techniques de marquage révèlent que la cible physiologique primaire de la ConA est la portion antérieure du mésentéron. Elle s'y fixe en très grande quantité. Après liaison aux cellules épithéliales, la lectine induit une hypertrophie de ces cellules et un détachement de leur membrane apicale. Des expériences de compétition lectines/mannosides indiquent que la liaison toxine-épithélium ne semble pas dépendre uniquement d'une interaction sucre-lectine. Nous observons également une forte perturbation du métabolisme des acides aminés des pucerons. Le mode d'action de la ConA et de la GNA diffèrent sensiblement sur ce point.
Les premiers tests biologiques effectués sur des pommes de terre transgéniques exprimant de manière constitutive le gène de la GNA sont variables mais prometteurs.

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Rajoelina, Jasmin Armand. "Essai de purification et de caractérisation d'un facteur de croissance de petit poids moléculaire à partir de fractions sanguines humaines (FC-PPM)." Nancy 1, 1987. http://www.theses.fr/1987NAN10354.

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Faucher, Didier. "Inhibiteurs naturels de métalloproteinases : relations structure-activité." Tours, 1988. http://www.theses.fr/1988TOUR3805.

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Stojko, Johann. "Nouvelles méthodologies en spectrométrie de masse native et mobilité ionique pour la caractérisation structurale de macrobiomolécules et de leurs complexes associés." Thesis, Strasbourg, 2016. http://www.theses.fr/2016STRAF003/document.

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Анотація:

Ce travail de thèse porte sur le développement de méthodes en spectrométrie de masse (MS) et mobilité ionique (IM-MS) supramoléculaires pour la caractérisation fine de complexes protéine-ligand et d’assemblages protéiques hétérogènes de hauts poids moléculaires. L’optimisation instrumentale apportée à l’étude de ces systèmes, permet d’étendre le potentiel de ces deux approches en biologie structurale. Le criblage de complexes protéine-ligand permet ici une détermination de leurs propriétés d’interaction et la mise en évidence de subtils changements de conformation induits, pouvant être suivis au cours du temps. L’application de ce couplage à l’analyse de complexes multi-protéiques, réfractaires aux techniques conventionnelles, donne accès à la topologie de ces assemblages, facilitant la proposition de modèles structuraux. Enfin, l’apport récent de la haute résolution en MS native est ici illustré à travers l’étude de protéines complexes et hétérogènes : les anticorps thérapeutiques et leurs conjugués. Ces développements permettent de repousser certaines limites en MS native et IM-MS native, élargissant leurs perspectives d’application dans la recherche et l’industrie pharmaceutique
This PhD thesis aims at developing methods in native mass spectrometry (MS) combined with ion mobility (IM-MS) to characterize protein-ligand complexes and large protein assemblies. Fine-tuning of instrumental settings allowed expanding the scope of these approaches in structural biology. Real-time monitoring of protein-ligand complexes by native MS and IM-MS enabled to screen their binding properties while depicting subtle conformational changes induced upon binding. Applying these methods to refractory multi-protein complexes provided insights about their topology, making structural modeling easier. Finally, benefits from high-resolution native MS were highlighted through the characterization of heterogeneous systems, including monoclonal antibodies and their drug conjugates. Here, these developments enable to push some technical limits one step forward, increasing the potential of native MS and IM-MS both in academic research and pharmaceutical industry

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Persic, Ana. "Modalités de contamination par les polluants organiques persistants des réseaux trophiques lagunaires. Application de la méthode des isotopes stables." Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2004. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00008851.

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Анотація:

Associée à une enquête de surveillance de la qualité de milieux aquatiques, cette étude a comme objectifs la détermination du degré et des modalités de contamination par des POPs d'origine agricole (pesticides organochlorés) et industrielle (polychlorobiphényles) des réseaux trophiques aquatiques d'une aire protégée, la Réserve de Biosphère de Camargue. Les analyses des isotopes stables du carbone et de l'azote, chez 16 espèces dominantes d'animaux aquatiques, ont confirmé le haut niveau de complexité des relations alimentaires, mais aussi leur stabilité, par des contraintes liées aux fluctuations environnementales naturelles et anthropiques. Les contaminants recherchés ont été détectés à tous les niveaux trophiques. A l'aide de la méthode isotopique, une bioamplification a été mise en évidence pour les polluants les plus persistants (dieldrine, HCB) mais aussi pour l'Α endosulfan, dont le transfert trophique dépend de l'intensité de la contamination résultant de la biodisponibilité de la substance, elle-même liée à la saison. Pour les autres composés analysés, la voie d'accumulation directe à partir de l'eau semble être la voie principale et dominante en raison, entre autres, des caractéristiques particulières (faible profondeur) de l'étang de Vaccarès. Parallèlement, des biomarqueurs ont été validés in situ en relation avec l'emplacement trophique et la structure du réseau. Les indicateurs biochimiques évalués ont montré l'incohérence du principe d'un « biomarqueur universel ».

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Badeau, Mylene. "Effets d'un antioxydant, le tempol, sur les actions métaboliques et vasculaires de l'insuline chez le rat insulino-résistant avec un surplus de poids. Effets de l'insuline sur le transport du glucose dans le muscle squelettique, la réactivité vasculaire, l'expression des protéines eNOS, le stress oxydatif et les effets hémodynamiques régionaux." Thesis, Université Laval, 2006. http://www.theses.ulaval.ca/2006/23727/23727.pdf.

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Parmi la population nord-américaine, les cas de diabète de type 2 et d’obésité ont atteint des niveaux alarmants. Leurs conséquences sur la santé publique, la vie économique et l’avenir des populations sont majeures. Mon projet de maîtrise avait pour but de caractériser les dérèglements métaboliques et vasculaires suscités chez le rat soumis à une alimentation riche en gras saturés et en sucre raffinés, et à examiner les effets d’un antioxydant (tempol). Nos résultats indiquent qu’un traitement avec tempol améliore la sensibilité à l’insuline mesurée lors de clamp euglycémique hyperinsulinémique, réduit le gain de poids, augmente l’expression endothéliale de eNOS (estimée par microscopie confocale) et diminue la quantité de protéines nitrotyrosinées dans l’aorte. Il améliore aussi le transport du glucose dans le muscle squelettique et la réactivité vasculaire in vitro. Ces résultats suggèrent non seulement une association étroite entre la diète, les maladies cardiovasculaires, le stress oxydatif et eNOS, mais démontrent aussi l’efficacité du tempol à améliorer la sensibilité à l’insuline et la fonction endothéliale dans ce modèle animal.
In the Western hemisphere, the incidence of type 2 diabetes and obesity have been growing at an alarming rate. Their consequences on public health, economic situation and population’s future are major. My research project at the Master degree was designed to characterize metabolic and vascular dysfunctions elicited in a rat model fed a high fat and high sucrose diet, and to examine in this animal model the effect of a chronic treatment with the antioxidant, tempol. Our results indicate that treatment with tempol significantly improves insulin sensitivity measured during a euglycemic hyperinsulinemic clamp, reduces weight gain, increases endothelium eNOS protein expression (confocal microscopy) and reduces nitrotyrosine formation in aortas. An improvement in insulin-mediated glucose transport activity in skeletal muscles and in vascular reactivity were also noted. These results not only suggest the presence of a close link between diet, cardiovascular diseases, oxidative stress and eNOS, but also indicate the ability of treatment with tempol to significantly improve insulin sensitivity and endothelial functions in this rat model.

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Badeau, Mylène, and Mylène Badeau. "Effets d'un antioxydant, le tempol, sur les actions métaboliques et vasculaires de l'insuline chez le rat insulino-résistant avec un surplus de poids. Effets de l'insuline sur le transport du glucose dans le muscle squelettique, la réactivité vasculaire, l'expression des protéines eNOS, le stress oxydatif et les effets hémodynamiques régionaux." Master's thesis, Université Laval, 2006. http://hdl.handle.net/20.500.11794/18703.

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Анотація:

Parmi la population nord-américaine, les cas de diabète de type 2 et d’obésité ont atteint des niveaux alarmants. Leurs conséquences sur la santé publique, la vie économique et l’avenir des populations sont majeures. Mon projet de maîtrise avait pour but de caractériser les dérèglements métaboliques et vasculaires suscités chez le rat soumis à une alimentation riche en gras saturés et en sucre raffinés, et à examiner les effets d’un antioxydant (tempol). Nos résultats indiquent qu’un traitement avec tempol améliore la sensibilité à l’insuline mesurée lors de clamp euglycémique hyperinsulinémique, réduit le gain de poids, augmente l’expression endothéliale de eNOS (estimée par microscopie confocale) et diminue la quantité de protéines nitrotyrosinées dans l’aorte. Il améliore aussi le transport du glucose dans le muscle squelettique et la réactivité vasculaire in vitro. Ces résultats suggèrent non seulement une association étroite entre la diète, les maladies cardiovasculaires, le stress oxydatif et eNOS, mais démontrent aussi l’efficacité du tempol à améliorer la sensibilité à l’insuline et la fonction endothéliale dans ce modèle animal.
Parmi la population nord-américaine, les cas de diabète de type 2 et d’obésité ont atteint des niveaux alarmants. Leurs conséquences sur la santé publique, la vie économique et l’avenir des populations sont majeures. Mon projet de maîtrise avait pour but de caractériser les dérèglements métaboliques et vasculaires suscités chez le rat soumis à une alimentation riche en gras saturés et en sucre raffinés, et à examiner les effets d’un antioxydant (tempol). Nos résultats indiquent qu’un traitement avec tempol améliore la sensibilité à l’insuline mesurée lors de clamp euglycémique hyperinsulinémique, réduit le gain de poids, augmente l’expression endothéliale de eNOS (estimée par microscopie confocale) et diminue la quantité de protéines nitrotyrosinées dans l’aorte. Il améliore aussi le transport du glucose dans le muscle squelettique et la réactivité vasculaire in vitro. Ces résultats suggèrent non seulement une association étroite entre la diète, les maladies cardiovasculaires, le stress oxydatif et eNOS, mais démontrent aussi l’efficacité du tempol à améliorer la sensibilité à l’insuline et la fonction endothéliale dans ce modèle animal.
In the Western hemisphere, the incidence of type 2 diabetes and obesity have been growing at an alarming rate. Their consequences on public health, economic situation and population’s future are major. My research project at the Master degree was designed to characterize metabolic and vascular dysfunctions elicited in a rat model fed a high fat and high sucrose diet, and to examine in this animal model the effect of a chronic treatment with the antioxidant, tempol. Our results indicate that treatment with tempol significantly improves insulin sensitivity measured during a euglycemic hyperinsulinemic clamp, reduces weight gain, increases endothelium eNOS protein expression (confocal microscopy) and reduces nitrotyrosine formation in aortas. An improvement in insulin-mediated glucose transport activity in skeletal muscles and in vascular reactivity were also noted. These results not only suggest the presence of a close link between diet, cardiovascular diseases, oxidative stress and eNOS, but also indicate the ability of treatment with tempol to significantly improve insulin sensitivity and endothelial functions in this rat model.
In the Western hemisphere, the incidence of type 2 diabetes and obesity have been growing at an alarming rate. Their consequences on public health, economic situation and population’s future are major. My research project at the Master degree was designed to characterize metabolic and vascular dysfunctions elicited in a rat model fed a high fat and high sucrose diet, and to examine in this animal model the effect of a chronic treatment with the antioxidant, tempol. Our results indicate that treatment with tempol significantly improves insulin sensitivity measured during a euglycemic hyperinsulinemic clamp, reduces weight gain, increases endothelium eNOS protein expression (confocal microscopy) and reduces nitrotyrosine formation in aortas. An improvement in insulin-mediated glucose transport activity in skeletal muscles and in vascular reactivity were also noted. These results not only suggest the presence of a close link between diet, cardiovascular diseases, oxidative stress and eNOS, but also indicate the ability of treatment with tempol to significantly improve insulin sensitivity and endothelial functions in this rat model.

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Lebeau, Catherine. "Néphrotoxicité des acides aristolochiques: approches expériementales de l'atteinte tubulaire proximale." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2006. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/210825.

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Анотація:

Les acides aristolochiques (AA) présents dans les aristoloches sont impliqués dans le développement d’une insuffisance rénale progressive chez l’homme, appelée néphropathie aux plantes chinoises (CHN). Elle se caractérise par une atrophie tubulaire sévère et une fibrose interstitielle associée à une fréquence élevée de cancers urothéliaux. L’observation en clinique d’une protéinurie tubulaire a suggéré que le tubule proximal était la cible des AA.

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Doctorat en sciences biomédicales
info:eu-repo/semantics/nonPublished

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Benlashehr, Imad. "Fumonisin toxicity in ducks and turkeys." Thesis, Toulouse, INPT, 2013. http://www.theses.fr/2013INPT0070/document.

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Les fumonisines (FBs) sont les principales mycotoxines produites par Fusarium verticillioides et Fusarium proliferatum, qui se retrouvent partout dans le monde dans le maïs et ses produits dérivés. Les doses toxiques et les signes cliniques de toxicité provoqués par les FBs varient dune espèce à lautre. La toxicité des FBs est généralement liée à leur capacité à bloquer le métabolisme des sphingolipides chez les espèces animales, y compris chez les espèces aviaires. De précédentes études ont démontré que les canards présentent une plus grande sensibilité à la toxicité des FBs que les dindes, alors que laccumulation de sphinganine (Sa) dans les tissues est plus importante chez les dindes que chez les canards. Lobjectif de nos travaux était de comprendre les différences de toxicité entre les dindes et les canards los dune exposition aux FBs. Les trois hypothèses suivantes ont été explorées : i) La toxicocinétique de la fumonisine B2 chez les dindes et les canards. ii) La capacité des cellules aviaires à se protéger de limportante accumulation de sphingolipides libres en augmentant leur catabolisme (phosphorylation). iii) Des mécanismes de toxicité des FBs autre que leur altération via le métabolisme des sphingolipides (stress oxydatif et les réponses inflammatoires). Lanalyse des paramètres de toxicocinétique de la fumonisine B2 na pas mis en évidence de différence significative entre les dindes et les canards. Les mesures de la toxicité simultanée de plusieurs FBs chez les dindes et les canards ont confirmé la forte sensibilité des canards. Laccumulation de shingasine-1-phosphate (Sa1P) dans le foie a également été corrélée avec la quantité de Sa mais pas avec les paramètres hépatiques de toxicité. De plus cette étude a mis en évidence que la quantité de Sa dans le foie était fortement dépendante de la teneur en FBs. Cependant les FBs nont eu aucun effet sur les paramètres de stress oxydatif pour les deux espèces. De manière intéressante, les FBs ont eu une légère réponse inflammatoire chez les canards mais pas chez les dindes. Des investigations plus poussées sur les effets des FBs sur le métabolisme des céramides et sur les processus inflammatoires seraient nécessaires pour comprendre les différences de toxicité entre les dindes et les canards exposés aux FBs
Fumonisins (FBs) are the major mycotoxins produced by Fusarium verticillioides and Fusarium proliferatum, which are found worldwide in maize and maize products. FBs toxic dose and clinical signs of toxicity vary from one species to another. FBs toxicity is commonly linked to their ability on blocking sphingolipids metabolism in all animal species, including avian species. Previous studies have demonstrated that ducks exhibit higher sensitivity to FBs toxicity than turkeys, whereas, the accumulation of sphinganine (Sa) in tissues is more pronounced in turkeys than in ducks. The objectives of our works were to investigate the causes which lead to different toxicity between ducks and turkeys to FBs exposure. The following three hypotheses were investigated: i) Toxicokinetics of fumonisin B2 in ducks and turkeys. ii) Ability of bird cells to protect themselves against high accumulation of free sphingolipids by increasing their catabolism (phosphorylation). iii) Other toxicity mechanisms of FBs rather than their alteration of sphingolipids metabolism (oxidative stress damage and inflammatory responses). The analysis of toxicokinetic parameters of fumonisin B2 did not provide a significant difference between ducks and turkeys. The measurement of simultaneous toxicity of FBs in ducks and turkeys confirmed higher sensibility of ducks. Also the accumulation of Sphingasine-1-Phosphate (Sa1P) in the liver correlated with the amount of Sa but not parameters of hepatic toxicity. Moreover, this study revealed that the amount of Sa in the liver was strongly dependent on the amount of FBs. On the other hand, FBs had no effect on oxidative damages parameters in both species. Interestingly, FBs had mild inflammatory response effect in ducks but not in turkeys. Further investigation on the effects of FBs on ceramide metabolism and inflammatory processes would be necessary to understand the different toxicity between ducks and turkeys to FBs exposure

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Castro, Gutierrez Natalia. "Incorporation and release of organic volatile compounds in a bio-based matrix by twin-screw extrusion." Phd thesis, Toulouse, INPT, 2016. http://oatao.univ-toulouse.fr/16006/1/Castro_Natalia.pdf.

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Nowadays, scientific and political communities are focused on ways to better preserve and manage the natural resources of our planet. In order to reduce consumption of fossil resources, and to develop more environmentally friendly industrial processes, the industry of flavors and fragrances became interested in developing new bio-based encapsulating materials. In the present work, maltodextrins have been chosen as main component of the matrix, and pea protein isolate and a modified starch were selected as compatibilizing additives. The incorporation of volatile odorant compounds and the elaboration of the new bio-based delivery systems were performed, all in one single step, by low temperature twin-screw extrusion. The physicochemical, thermal and morphological properties of these matrices were studied, as well as the encapsulation efficiency and the release profile of the active compounds. These investigations have led to a better understanding of the impact of the formulations and of the incorporation of the active compound on the process parameters. The interactions between the wall and the encapsulated materials were also analyzed. The characteristics of the new bio-based delivery systems and the established extrusion process conditions were found to be very promising to be employed in the field of perfumery.

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De, pascali Francesco. "Allosteric modulation of follicle stimulating hormone receptor and GPR54 : new tools to study signalling." Thesis, Tours, 2019. http://www.theses.fr/2019TOUR4030.

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Анотація:

Le GPR54 et le RFSH régulent la reproduction en agissant sur l’axe hypothalamus-hypophyse-gonades (HPG). En agissant dans l’hypothalamus, GPR54 est un régulateur proximal de l’axe tandis que le RFSH contrôle la gamétogenèse dans les deux sexes. Ils représentent deux cibles thérapeutiques majeures pour le traitement des problèmes liés à la fertilité. GPR54 et RFSH appartiennent à la superfamille des récepteurs couplés aux protéines G (GPCR). GPR54 active préférentiellement la voie Gαq/PLC/Ca2+ alors que le RFSH induit principalement la voie Gαs/PKA/cAMP. Les deux récepteurs recrutent et activent les β-arrestines. Un nombre croissant de profils pharmacologiques ont été décrits pour agir sur des GPCR. En effet, des ligands biaisés, capables d’activer préférentiellement un sous-ensemble du répertoire de signalisation par rapport aux ligands endogènes, sont découverts à un taux élevé. Les ligands orthostériques et allostériques peuvent induire des biais en stabilisant des conformations particulières des récepteurs. Sur le plan thérapeutique, les ligands biaisés ont démontré leur potentiel à induire des effets thérapeutiques tout en évitant les effets indésirables. De plus, les ligands allostériques permettent le modulation positive ou négative d’un récepteur tout en conservant l’information temporelle associée au ligand endogène. Jusqu’il y a peu, des outils pharmacologiques aussi divers et intéressant n’existaient pas pour GPR54 ni pour RFSH. L’objectif de cette thèse a donc été d’identifier des ligands allostériques de GPR54 et du RFSH puis, de caractériser leur signalisation biaisée. Dans la première partie, nous avons caractérisé les propriétés pharmacologique d’un panel de composés de faible poids moléculaire, décrits récemment pour être des modulateurs allostériques du FSHR et appartenant à deux classes chimiques différentes. Nous avons profilé leurs actions sur différentes voies de signalisation dans des cellules HEK293 vivantes exprimant différents biosenseurs. Nous avons démontré que chacun de ces composés induisait des biais par comparaison à la FSH. En comparant différents modèles cellulaires, nous avons confirmé que les biais de système représentent un facteur de confusion crucial pour la détermination des biais. Nous avons également identifié des cas limites pour lesquels le modèle opérationnel n’a pas permis de calculer les facteurs de biais. En parallèle, nous avons caractérisé deux nouveaux composés appartenant à des classes chimiques qui n’avaient jamais été décrites pour activer le RFSH. Nous avons démontré qu’ils étaient allostériques et que leurs profils de biais étaient distincts de ceux des autres composés caractérisés. Dans la seconde partie, nous avons sélectionné and caractérisé des nanobodies ciblant GPR54 et RFSH. Nous avons identifié un nanobody exerçant un effet de modulateur allostérique positif (PAM) sur GPR54. Nous avons aussi identifié un nanobody ciblant le RFSH. Ce dernier présentait des propriétés biaisées originales puisqu’il était modulateur allostérique négatif (NAM) pour la voie AMPc mais PAM pour le recrutement de β-arrestine 2. Dans la dernière partie, nous avons essayé de développer des conjugués nanobody-drogue (NDC) en liant nos nanobodies à des agonistes – soit kisspeptin, soit un des composés agonistes que nous avons caractérisés dans la première partie – à l’aide d’un linker flexible. Bien que nous n’ayons pas eu le temps d’obtenir une preuve de concept pour les NDC, cette stratégie nous semble au minimum prometteuse en tant qu’outil de recherche. Dans sa globalité, cette thèse propose de nouveaux outils pharmacologiques qui vont permettre de comprendre les contributions relatives des différentes voies de couplage de GPR54 et du RFSH, in vivo, sur la fonction de reproduction. Ce travail ouvre également de nouvelles pistes thérapeutiques pour contrôler la reproduction chez les animaux d’élevage et en médecine de la reproduction
GPR54 and FSHR regulate reproduction by acting on the hypothalamus-pituitary-gonads (HPG) axis. Acting in the hypothalamus, GPR54 is an upstream regulator of the axis whereas FSHR controls gametogenesis in both sexes. They represents two major pharmacological targets for the treatment of fertility-related problems. Both GPR54 and FSHR belong to the G protein-coupled receptor (GPCR) superfamilly. GPR54 preferentially activates the Gαq/PLC/Ca2+ pathway whereas FSHR mainly activates the Gαs/PKA/cAMP pathway. Both receptors recruit and activate β-arrestins. Increasing number pharmacological profiles have been reported to act on GPCR. Indeed biased ligands capable of preferentially eliciting a subset of the full signalling repertoire, compared to the endogenous ligand are discovered at a high rate. Orthosteric and allosteric ligands can both induce biased signalling by stabilizing specific receptor conformations. Therapeutically, biased ligand have demonstrated the potential to avoid side effects while still activating the signalling pathways leading to therapeutic effects. Moreover, allosteric ligands allow positive or negative modulation of a receptor while keeping the temporal information provided by the endogenous ligand. Until recently, such diverse and valuable pharmacological tools were not available for FSHR and GPR54. The aim of this thesis was to identify allosteric ligands at the FSHR and GPR54 and to characterize their biased signalling. In the first section, we pharmacological characterized a panel of low molecular weight ligands, recently reported to allosterically activate the FSHR and belonging to two chemical classes. We profiled their actions on different signalling pathways in living HEK293 cells expressing different biosensors. We demonstrated each of these compounds induced biased signalling at the FSHR compared to FSH. Using different cell models, we confirmed that system bias is a crucial confounding factor in bias determination. We also identified limit cases in which the operational model did not allow to calculated bias factors. In parallel, we characterized two novel compounds belonging to chemical classes that were not yet reported to activate FSHR. We demonstrated that they were allosteric and that their biased profiles were distinct from the compounds characterized in the first study. In second section of the thesis, we selected and pharmacological characterized nanobodies targeting GPR54 and FSHR. We identified a nanobody that behaved as a positive allosteric modulator (PAM) at the GPR54. We also identified a nanobody against FSHR. This nanobody displayed striking biased properties as it was negative allosteric modulator (NAM) for cAMP production but PAM for β-arrestin 2 recruitment. In the last section of the thesis, we attempted to develop nanobody-drug conjugates (NDC) by linking our nanobodies to agonists - either kisspeptin or one of the low molecular weight agonist of the FSHR - through a flexible linker. Though we did not have time to achieve a proof of concept for NDC, we believe that such hybrid compound could represent at minimum a promising research tools. As a whole, this thesis provides novel pharmacological tools that should allow deciphering the relative contributions of the different transduction mechanisms operating at the FSHR and GPR54, in vivo, in the reproductive function. This work also opens possible avenues for future therapeutic strategies in the control of reproduction in farm animals and in reproductive medicine

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Jean, Catherine. "Activité antimicrobienne de peptides provenant d’hydrolysats de protéines de babeurre, de lactoferrine et de pois." Thèse, 2015. http://hdl.handle.net/1866/13385.

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Анотація:

Les antibiotiques sont fréquemment utilisés dans l’alimentation de la volaille afin de prévenir certaines maladies, dont l’entérite nécrotique, ce qui occasionne l’émergence de souches bactériennes résistantes aux antibiotiques. Une alternative prometteuse est l’utilisation de peptides antimicrobiens (AMPs) comme suppléments alimentaires, tels les AMPs provenant des produits laitiers. L’objectif du projet était de développer une méthode de production d’extraits peptidiques à partir de coproduits de la transformation alimentaire (babeurre, lactoferrine, isolat de protéines de pois), afin de tester si ces extraits peptidiques possédaient une activité antimicrobienne sur les pathogènes spécifiques aviaires suivants : Salmonella Enteritidis, Salmonella Typhimurium, Escherichia coli et Staphylococcus aureus. Les protéines ont été mises en suspension dans l’eau (5% p/p) et hydrolysées par la pepsine, 6 heures, pH de 2.5. Les peptides furent récupérés par ultrafiltration (< 10 kDa), puis fractionnés selon leur charge nette : totaux, cationiques, anioniques et non liés. L’effet antimicrobien a été évalué surmicroplaques, par la survie bactérienne en présence de concentrations croissantes d’extraits peptidiques. Les extraits cationiques de babeurre ont démontré une efficacité à une concentration inférieure ou égale à 5 mg/mL; perte de 3 log pour Escherichia coli O78 :H80. En comparaison, la lactoferrine cationique a été efficace à une concentration inférieure ou égale à 0.6 mg/mL; perte de 6 log pour E. coli O78 :H80. Les extraits peptidiques du pois ont démontré une efficacité faible. Cette méthode s’avère prometteuse pour le développement d’une alternative ou d’un complément pour la réduction de l’utilisation des antibiotiques dans l’alimentation de la volaille.
Antibiotics are frequently used in poultry feed in order to prevent certain diseases, including necrotic enteritis, which causes the emergence of bacterial strains resistant to antibiotics. A promising alternative is the use of antimicrobial peptides (AMPs) as dietary supplements, such as AMPs from dairy products. The objective of this project was to develop a production method for the extraction peptides, from co-produced food processing (buttermilk, lactoferrin, pea protein isolates). These peptides were tested for the detection of antimicrobial activity on the following specific poultry pathogens; Salmonella Enteritidis, Salmonella Typhimurium, Escherichia coli and Staphylococcus aureus. Proteins were suspended in water (5% w/w) and pepsin hydrolyzed by pepsin for 6 hours at pH 2.5. Peptides were recovered by ultrafiltration (< 10 kDa) and fractionated based on the basis of their ionic charges: total, cationic, anionic and unbound peptides, to specifically target the fractions with antimicrobial activities. Bacterial survival was measured in contact with different peptides concentrations. Cationic buttermilk extracts were effective at a concentration less or equal to 5 mg / mL; loss of 3 log for Escherichia coli O78: H80, compared with lactoferrin which was effective at a concentration less than or equal to 0.6 mg / mL; loss of 6 log for E. coli O78: H80. The peptide extracts from pea showed low efficiency. The use of antimicrobial peptides, from buttermilk, lactoferrin and peas, is promising for the development of an alternative or a complement to reduce antimicrobial use.

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