Academic literature on the topic '3(or 17)-hydroxysteroid déhydrogénase'

Multiple forms of the soluble 17 beta-hydroxysteroid dehydrogenase of female rabbit liver were identified. NAD-dependent and NADP-dependent enzyme activities were separated by affinity chromatography on agarose-immobilized Procion Red HE3B, and three forms of the NADP-dependent enzyme activity were purified by chromatofocusing. These three enzyme forms are charge isomers and have no quaternary structure. The enzymes catalysed the C-17 oxidoreduction of oestrogens and androgens; with all enzyme forms the activity towards androgens was higher than that toward oestrogens. The enzymes also exhibited 3 alpha-hydroxysteroid dehydrogenase activity towards androgens of the 5 beta-androstane series. Comparison of the relative activities of the enzymes towards a number of oestrogen and androgen substrates revealed differences among the enzyme forms for both the oxidative and the reductive reactions. In particular, one enzyme form had a significantly lower Km for the 3 alpha-hydroxysteroid substrate and a higher 3 alpha-/17 beta-hydroxysteroid dehydrogenase activity ratio than the other two enzyme forms.

Purified preparations of rat liver 17-hydroxysteroid, 3-hydroxyandrogen and p-nitrophenol (3-methylcholanthrene-inducible) UDP-glucuronosyltransferases were further characterized as to their substrate specificities, phospholipid-dependency and physical properties. The two steroid UDP-glucuronosyltransferases were shown to exhibit strict stereospecificity with respect to the conjugation of steroids and bile acids. These enzymes have been renamed 17 beta-hydroxysteroid and 3 alpha-hydroxysteroid UDP-glucuronosyltransferase to reflect this specificity for important endogenous substrates. An endogenous substrate has not yet been identified for the p-nitrophenol (3-methylcholanthrene-inducible) UDP-glucuronosyltransferase. The steroid UDP-glucuronosyltransferase activities were dependent on phospholipid for maximal catalytic activity. Complete delipidation rendered the UDP-glucuronosyltransferases inactive, and enzymic activity was not restored when phospholipid was added to the reaction mixture. After partial delipidation, phosphatidylcholine was the most efficient phospholipid for restoration of enzymic activity. Partial delipidation also altered the kinetic parameters of the 3 alpha-hydroxysteroid UDP-glucuronosyltransferase. The three purified UDP-glucuronosyltransferases are separate and distinct proteins, with different amino acid compositions and peptide maps generated by limited proteolysis with Staphylococcus aureus V8 proteinase. Some similarity was observed between the amino acid composition and limited proteolytic maps of the steroid UDP-glucuronosyltransferases, suggesting they are more closely related to each other than to the p-nitrophenol UDP-glucuronosyltransferase.

En utilisant des anticorps dirigés respectivement contre la la 3β-hydroxystéroïde déshydrogénase (3β-HSD) et la 17β-hydroxystéroïde déshydrogénase (17β-HSD) placentaires humaines nous avons montré la présence de ces enzymes dans le système nerveux central (SNC) de la grenouille. Les neurones à 3β-HSD sont localisés dans le diencéphale et la 17β-HSD est exprimée par des épendymocytes du télencéphale. Des quantités importantes de progestérone (P), 17-hydroxyprogestérone (17OH-P), testostérone (T) et dihydrotestostérone (5α-DHT) ont été mesurées dans le télencéphale et le diencéphale de grenouilles mâles et femelles en combinant l'analyse HPLC d'extraits tissulaires au dosage radioimmunologique. La castration des animaux mâles ne modifie pas les concentrations cérébrales de T et de 5α-DHT. La T a été formellement caractérisée dans le télencephale par HPLC et chromatographie en phase gazeuse couplée à une identification par spectrométrie de masse. Les explants d'hypothalamus convertissent la prégnènolone tritiée ([3h]Delta(5)P) en [3h]P et [3H]17OH-P, et la formation de ces deux métabolites est réduite significativement par le trilostane, un inhibiteur spécifique de la 3β-HSD L'incubation des explants de télencephale avec la [3h]Delta(5)P a révélé la synthèse de 15 métabolites tritiés dont 7 coéluent avec la P, la 17OH-P, l'androsténédione, la T, la 5α-DHT et l'oestrone ou l'oestradiol. Par ailleurs, nous avons démontré que de nombreux neurones hypothalamiques à 3β-HSD expriment également des récepteurs périphériques aux benzodiazépines (PBR) localisés à la fois dans le cytoplasme et au niveau de la membrane plasmique. L'incubation des explants d'hypothalamus avec la [3h]Delta(5)P en présence du triakontatétraneuropeptide (TTN) induit une stimulation dose-dépendante de la biosynthèse des neurostéroïdes. L'effet du TTN est mimé par le Ro5-4864 et inhibé par le PK11195 mais n'est pas modifié par le flumazénil. En conclusion, ce travail démontre pour la première fois la biosynthèse des neurostéroïdes dans le SNC des amphibiens. Nos résultats indiquent également que la production des stéroïdes dans les neurones hypothalamiques est activée par le TTN lequel agit probablement via des PBR situés au niveau de la membrane plasmique.

Nous avons récemment démontré qu'une enzyme clé de la stéroïdogénèse, la 3-hydroxystéroïde deshydrogénase (3-HSD) est exprimée dans le diencéphale de la grenouille et nous avons montré que les explants hypothalamiques synthétisent plusieurs neurostéroïdes. Dans la présente étude, nous avons recherché les effets de deux endozépines, le TTN et l'ODN ainsi que les effets du GABA sur l'activité de la 3-HSD dans le cerveau. Des expériences de double marquage révèlent que les neurones hypothalamiques 3-HSD-positifs contiennent également les récepteurs des benzodiazépines de type périphérique (PBR) ainsi que les sous-unités α3, β2 et/ou β3 des récepteurs GABA A. Nous avons aussi observé que les cellules gliales ODN-immunoréactives jouxtent les neurones 3-HSD-positifs. L'incubation d'explants hypothalamique en présence du TTN induit une stimulation de la production de 17OH-delta5P, 17OH-P et d'un nouveau stéroïde. L'effet du TTN est mimé par le Ro5-4864, un agoniste des PBR, et réduit par le PK11195, un antagoniste des PBR. Nous avons ensuite observé que l'ODN, un ligand endogène des récepteurs des benzodiazépines de type central (CBR), stimule également la biosynthèse des neurostéroïdes. Les β-carbolines β-CCM et DMCM, deux agonistes inverses des CBR, miment l'effet de l'ODN, alors que le flumazénil, un antagoniste des CBR réduit significativement l'effet de l'ODN, du β-CCM et du DMCM. Enfin, le GABA induit une inhibition dose-dépendante de la formation des stéroïdes dans le cerveau. L'effet du GABA est mimé par le muscimol, un agoniste des récepteurs GABA A, et bloqué par la bicuculline et le SR95531, deux antagonistes des récepteurs GABA A. En revanche, le baclofène, un agoniste des récepteurs GABA B, n'a aucun effet sur la synthèse des neurostéroïdes. L'ensemble de ces données démontre pour la première fois que l'activité biologique de la 3β-HSD et du cytochrome P450 C17 dans le système nerveux central des vertébrés est régulée par les endozépines et le GABA via les PBR et les récepteurs GABA A.

Dans le monde entier, les infections virales causent des problèmes de santé majeurs et récurrents, engendrant de sérieux problèmes socio-économiques. Notamment, les virus de la famille Flaviviridae qui représentent un fardeau considérable sur la santé mondiale et font partie des domaines prioritaires de la virologie médicale selon le rapport 2016 du ‘Global Virus Network’. Bien que le traitement actuel contre le virus de l’hépatite C (VHC) ait un taux de guérison dépassant 98%, d’autres comme le virus de la dengue (DENV) et le virus zika (ZIKV) n’ont pas encore de traitement spécifique autorisé. En prenant avantage de la grande expertise de notre laboratoire dans l’étude du VHC, nous avons utilisé des données d’une étude de biologie des systèmes visant à identifier l’interactome des différentes protéines virales. Les techniques utilisées ont combiné l’immunoprécipitation des protéines virales suivie de l’identification des protéines interacteurs humaines par spectrométrie de masse. Des études de génomique fonctionnelle par ARN interférent (ARNi) ont permis d’étudier l’effet de la diminution de l’expression des protéines identifiées sur la réplication du VHC. Cette étude a conduit à la découverte de l’interactant spécifique 17-bêta-hydroxystéroïde déshydrogénase de type 12 (HSD17B12 ou DHB12) de la protéine virale Core comme facteur cellulaire requis à la réplication du VHC. HSD17B12 est une enzyme cellulaire dont l’activité catalytique est requise pour l’élongation des acides gras à très longue chaîne (VLCFA) lors de la deuxième des quatre réactions du cycle d’élongation. Dans cette étude, nous avons déterminé que les cycles de réplication du VHC, ZIKV et DENV dépendent de l’expression et de l’activité métabolique du facteur cellulaire HSD17B12. Ainsi, nous avons étudié les effets de l’inhibition de l’expression génique par ARNi et de façon pharmacologique sur la réplication de plusieurs flavivirus dans une approche antivirale à large spectre. Nous avons démontré que le silençage de HSD17B12 diminue significativement la réplication virale, l’expression des protéines virales et la production de particules infectieuses de cellules Huh7.5 infectées par la souche JFH1 du VHC. L'analyse de la localisation cellulaire de HSD17B12 dans des ii cellules infectées suggère une colocalisation avec l'ARN double brin (ARNdb) aux sites de réplication virale, ainsi qu’avec la protéine Core (et les gouttelettes lipidiques) aux des sites d’assemblage du virus. Nous avons également observé que le silençage de HSD17B12 réduit considérablement le nombre et la taille des gouttelettes lipidiques. En accord avec ces données, la diminution de l’expression de HSD17B12 par ARNi réduit significativement l’acide oléique et les espèces lipidiques telles que triglycérides et phosphatidyl-éthanolamine dans l'extrait cellulaire total. Ces travaux suggèrent une contribution de la capacité métabolique de HSD17B12 lors de la réplication du VHC. De même, nous avons démontré que le silençage de HSD17B12 réduit significativement les particules infectieuses de cellules infectées par DENV et ZIKV. Ces études supportent le rôle de HSD17B12 dans l’efficacité des processus de la réplication de l'ARN viral et de l’assemblage de particules virales. De plus, l'inhibiteur spécifique de HSD17B12, INH-12, réduit la réplication du VHC à des concentrations pour lesquelles aucune cytotoxicité notable n'est observée. Le traitement avec 20 μM d'INH-12 réduit jusqu'à 1,000 fois les particules infectieuses produite par des cellules Huh-7.5 infectées par DENV et ZIKV lors de plusieurs cycles de réplication, et bloque complètement l'expression des protéines virales. En conclusion, ces travaux ont conduit à une meilleure compréhension du rôle de HSD17B12 lors de la synthèse de VLCFA et de lipides requise à la réplication du VHC, permettant d’explorer l’inhibition de HSD17B12 et de l’élongation d’acides gras à très longue chaîne comme nouvelle approche thérapeutique pour le traitement à large spectre des infections par les virus de la famille Flaviviridae.
Infections with viruses are major recurrent socio-economical and health problems worldwide. These include infections by viruses of the Flaviviridae family, which present a substantial global health burden and are among the priority areas of medical virology according to the Global Virus Network 2016 report. While the current treatment regimens for hepatitis C virus (HCV) infection have cure rates of more than 98%, other important members of Flaviviridae like dengue virus (DENV) and zika virus (ZIKV) have no specific licensed treatments. By taking advantage of the most-studied HCV, which our lab has developed a vast expertise in the last 20 years, we used proteomics data of an HCV interactome study, combining viral protein immunoprecipitation (IP) coupled to tandem mass spectrometry identification (IP-MS/MS) and functional genomics RNAi screening. The study uncovered the 17-beta-hydroxysteroid dehydrogenase type 12 (HSD17B12, also named DHB12), as a specific host interactor of core that promotes HCV replication. HSD17B12 catalytic activity is involved in the synthesis of very-long-chain fatty acids (VLCFA) upon the second step of the elongation cycle. In this study, taking HCV as a virus model, we elucidated the dependency of HCV, dengue virus (DENV) and zika virus (ZIKV) replication on expression and metabolic capacity of the host factor HSD17B12. We investigated the effects of the inhibition of gene expression by RNAi and of its pharmacological enzymatic inhibition on flavivirus replication in a broad-spectrum antiviral approach. We showed that silencing expression of HSD17B12 decreases viral replication, viral proteins and iv infectious particle production of the JFH1 strain of HCV in Huh7.5 cells. The cellular localization analysis of HSD17B12 showed a co-staining with double-stranded RNA (dsRNA) at viral replication sites and with core protein (and lipid droplets) at virus assembly sites. Furthermore, HSD17B12 gene silencing drastically reduced the number and size of lipid droplets. In association, the reduced expression of HSD17B12 by RNAi decreases oleic acid levels and lipids such as triglycerides (TG) and phosphatidylethanolamine (PE) in whole-cell extract. The data suggested the requirement of the metabolic capacity of HSD17B12 for HCV replication. Similarly, we provide evidence that HSD17B12 silencing significantly reduces DENV and ZIKV infectious particles. The studies support a role of HSD17B12 for effective viral RNA replication and particle assembly processes. Moreover, the specific HSD17B12 inhibitor, INH-12, reduces HCV replication at concentrations for which no appreciable cytotoxicity is observed. The treatment of DENV- and ZIKV-infected Huh- 7.5 cells with 20 μM of INH-12 dramatically reduces production of infectious particles by up to 3-log10 in infection assays, and completely block viral protein expression. In conclusion, these studies extends our understanding of the role of HSD17B12 in VLCFA synthesis required for the replication of HCV, allowing to explore the inhibition of HSD17B12 and elongation of VLCFA as a novel therapeutic approach for the treatment of a broad-spectrum of viruses of the Flaviviridae family.