Academic literature on the topic 'Activadores de enzimas'

El dengue se considera una enfermedad sistémica y dinámica, transmitida por el aedes aegypti y aedes albopictus, la cual puede cursar asintomática o desarrollar el estado grave, el cual puede causar el deceso del paciente. Al ser una patología endémica y de gran riesgo para la salud pública, la comunidad científica se ha encargado de enfocarse en el estudio de la fase crítica y su evolución, donde se desarrolla la extravasación del plasma, mecanismo impulsado por el factor activador de plaquetas así como la enzima que lo acompaña, elemento de gran importancia en la permeabilidad vascular y su riesgo, que al ser tratado con bloqueador de su receptor, permitiría una mejor terapéutica en el futuro.

El artículo determina los parámetros cinéticos de las plasminas de ocho especies de mamíferos y sus terminales-N. Los ocho plasminógenos fueron purificados por los mismos métodos (cromatografías de afinidad e intercambio iónico), y activados con urocinasa, partiendo de una concentración común y su cinética valorada según las coordenadas de Lineweaver- Burk. Para esto se utilizó la cinética enzimática de Michaelis Menten, ampliamente usada en el estudio de enzimas. Todos los plasminógenos mostraron una pureza superior al 95 % y una banda de 92 kDa en la electroforesis, al comparar con el estándar de peso molecular utilizado. Las plasminas del equino y canino mostraron la misma KM por el sustrato cromogénico (0,438 mM), siendo esta la de mayor afinidad en este estudio y la humana la de menor afinidad (5,3 mM). También fueron determinadas la constante catalítica y la velocidad de conversión del sustrato cromogénico a producto. Los terminales-N de los plasminógenos de las ocho especies fueron determinados, y se encontraron diferencias entre el humano y los animales; así mismo entre algunos animales. Solo el porcino y el ovino no mostraron diferencia alguna en su terminal-N (DPPDDY). Se demostró la unificación del método de purificación de los plasminógenos para cualquier especie, las diferencias cinéticas de las ocho plasminas estudiadas, y las similitudes y diferencias en la secuencia de los terminales-N de las ocho especies.

<p>La obesidad es un factor de riesgo de enfermedades coronarias, de cáncer, de accidentes cerebrovasculares y de diabetes tipo II. El propósito de este trabajo es evaluar la capacidad del ácido valproico, tricostatin A y resveratrol como agentes que reduzcan la diferenciación de preadipocitos. Los dos primeros, inhiben la actividad de las histonas deacetilasas tipo I y II, mientras que el resveratrol es un activador de la enzima sirtuina 1 perteneciente a la familia de las histonas deacetilasas dependientes de dinucleótidos de nicotinamida adenina. Esta reprime la actividad trascripcional mediada por el receptor de proliferación del peroxisoma mediante su asociación con represores, evidenciado en la movilización de ácidos grasos en células adiposas.</p><p>Para el estudio se utilizó la línea celular de preadipocitos de ratón 3T3-L1 en presencia de un cóctel de diferenciación con rosiglitazona, isobutilmetilxantina y dexametasona. Al día 8 de la diferenciación, se aplicaron las dosis de los tres agentes objeto de estudio y se llevaron a cabo observaciones cada dos días hasta el día 12. Se evaluó la acumulación de depósitos de grasa mediante tinción rojo-aceite y se cuantificaron la cantidad de triglicéridos en cada tratamiento. El ácido valproico, tricostatin A y resveratrol presentaron una disminución en la diferenciación del adipocito maduro, debido a que la cantidad de triglicéridos dentro del mismo fue menor con respecto a las células tratadas con ROSI. Sin embargo, el resveratrol presenta una mayor diferencia significativa. Nuestros resultados destacan el papel de los inhibidores de las histonas deacetilasas y la actividad de sirtuina 1 en la adipogénesis que es bloqueada por los tratamientos con los tres agentes, siendo el resveratrol el agente que presenta mayor reducción de la diferenciación del adipocito.</p>

Huntington's disease (MH) is a progressive neurodegenerative disorder characterized by a motor dysfunction, cognitive impairment, and psychiatric symptoms. At neuropathological level, it has been described that cognitive disorders are associated with cortical and hippocampal function and motor symptoms with cortical and striatal function. It has been proposed that restoring the hippocampal and striatal function would be key to recover cognitive and motor function respectively. For this reason, throughout this thesis we propose a dual study that allows us to define different therapeutic compounds with the capacity to restore synaptic plasticity and to protect against neuronal death. We have described two new compounds with therapeutic potential, PACAP and EGCG; and we have proposed two new therapeutic targets, PAC1 receptor and the FASN enzyme. Thus, the results obtained in this thesis open two new doors for the treatment of cognitive and motor symptoms in HD.
La malaltia de Huntington (MH) és un trastorn neurodegeneratiu progressiu caractritzat per una alteració del control motor, per dèficits cognitius i símptomes psiquiàtrics. A nivell neuropatològic, s’ha descrit que els trastorns cognitius estan associats a la funció cortical i hipocampal i els símptomes motors amb la funció cortical i estriatal. S’ha proposat que restablir la funció hipocampal i estriatal seria clau per recuperar la funció cognitiva i motora respectivament. Per això, al llarg d’aquesta tesi proposem un estudi dual que ens permeti definir compostos terapèutics amb capacitat de restablir la plasticitat sinàptica i de protegir enfront de la mort neuronal. Hem descrit dos nous compostos amb capacitat terapèutica, el PACAP i el EGCG; i hem proposat dues noves dianes terapèutiques pels seus efectes, el receptor PAC1 i l’enzim FASN. Amb tot, els resultats obtinguts amb aquesta tesi obren noves portes pel tractament dels símptomes cognitius i motors de la MH.

Tesis (Doctor en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2021
Resumen: La ubiquitinación es un tipo de modificación postraduccional característico de organismos eucariotas, que requiere de la acción conjunta de las enzimas E1 activadora, E2 conjugadora y E3 ligasa para mediar la transferencia de ubiquitina a una proteína sustrato. TRIM7 es una E3 ligasa que recientemente ha adquirido interés por su rol en diversas patologías, y pertenece a la familia de proteínas TRIM, caracterizadas por un motivo conservado tripartito (TRIM) N-terminal y una región C-terminal variable que puede mediar el reconocimiento de sustratos. Inicialmente, fue identificada como una proteína que interacciona a través de su dominio C-terminal B30.2 (TRIM7B30.2) con glucogenina-1 (GN1). Dicha proteína es responsable de la iniciación de la biosíntesis del glucógeno, por lo que las mutaciones que afectan al gen que la codifica se traducen en un trastorno extremadamente raro denominado glucogenosis tipo XV. El presente trabajo se centró en caracterizar a TRIM7B30.2 por cristalografía de rayos X, y describir detalles sobre las regiones relevantes para la interacción con GN1. La estructura de TRIM7B30.2 reveló un plegamiento de tipo sándwich-β formado por dos láminas β antiparalelas característico de este tipo de dominios, además de presentar una cavidad con carga positiva en la cara cóncava de dicho plegamiento. Adicionalmente, se logró identificar a residuos clave que delimitan la zona involucrada en la interacción con GN1, además de obtener indicios de que el extremo C-terminal de esta última es necesario para su reconocimiento por TRIM7B30.2 y la proteína TRIM7 entera. Otra parte de este estudio se dedicó a conocer el impacto de la mutación patológica Ala16Pro sobre GN1 de conejo, que presenta una alta homología con la proteína humana, mediante el uso de un amplio conjunto de técnicas bioquímicas y biofísicas. El análisis reveló un cambio estructural significativo que ocasionó una disminución de la afinidad por su sustrato y, en consecuencia, de la actividad de la proteína; además de una marcada pérdida de estabilidad. Por último, se buscó conocer si GN1 y sus mutantes patológicas Ala16Pro y Thr83Met, son sustrato de su actividad E3 ligasa; y si esto podría tener un rol relevante en la glucogenosis tipo XV. Los resultados de la reacción in vitro mostraron que la transferencia de ubiquitina no ocurre bajo las condiciones empleadas, sin embargo, se encontró que TRIM7 interacciona con la mutante patológica GN1 Ala16Pro pese al cambio estructural de la proteína, lo que podría implicar a TRIM7 en la vía de degradación de esta mutante, y por ello el estudio será continuado en cultivos celulares.
Abstract : Ubiquitination is a common post translational modification in eukaryotes, which involves an E1 activating enzyme, an E2 conjugating enzyme, and an E3 ligase enzyme; in a process that mediates the transfer of ubiquitin to a substrate protein. TRIM7 is an E3 ligase member of the TRIM protein family, characterized by an N-terminal tripartite motif (TRIM) and a variable C-terminal region that can mediate substrate recognition, that has been recently linked to diverse pathological processes. TRIM7 was initially identified as a glycogenin-1 (GN1) interacting protein, and this interaction involves the C-terminal B30.2 domain of TRIM7 (TRIM7B30.2). GN1 is the protein that initiates glycogen biosynthesis, and mutations in the gene that encodes for this enzyme are involved in the onset of an extremely rare disease known as type XV glycogen storage disease. This work was mainly focused on the characterization of TRIM7B30.2, through the use of X-ray crystallography, and the details of the region involved in the interaction with GN1. The structure of TRIM7B30.2 revealed the characteristic B30.2 domain fold consisting of two β-sheets arranged as a distorted β-sandwich, and a positively charged cavity in the hypervariable region of this domain. Besides, key residues that define the zone of interaction with GN1 were identified, and evidence for the requirement of the latter’s C-terminal region in the binding was found. This study was also focused on the effect of the pathogenic Ala16Pro mutation on rabbit GN1, which displays a high sequence homology with the human protein; and to this end, a wide range of biophysical and biochemical techniques were applied. The analysis revealed a significant structural change which resulted in a decrease in substrate affinity and protein activity, besides a considerable loss of stability. Finally, the thesis was oriented towards analyzing the potential E3 ligase activity of TRIM7 on GN1 and the pathological mutants Ala16Pro and Thr83Met, and its possible functional role on type XV glycogen storage disease. The results have shown that in vitro, TRIM7 does not transfer ubiquitin to GN1 or the mutants in this experimental setup. However, it was found that despite the structural change caused by the mutation, TRIM7 still interacts with the Ala16Pro mutant of human GN1, which might implicate the intervention of TRIM7 in the degradation pathway of this mutant, and for this reason, this study will be continued in cell cultures.
2023-08-30
Fil: Muñoz Sosa, Christian Javier. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina.
Fil: Carrizo Garcia, María Elena. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica; Argentina.
Fil: Carrizo Garcia, María Elena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina.
Fil: Genti de Raimondi, Susana Del Valle. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina.
Fil: Genti de Raimondi, Susana del Valle. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina.
Fil: Carbonio, Raul Ernesto. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Fisicoquímica; Argentina.
Fil: Carbonio, Raul Ernesto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Fisicoquímica de Córdoba; Argentina.
Fil: Romero, Jorge Miguel. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina.
Fil: Ermácora, Mario Roberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular; Argentina.

Tesis (Doctora en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2014. Modalidad cooperativo.
Los plaguicidas organofosforados (OFs) utilizados ampliamente en la producción agrícola, constituyen una clase importante de químicos contaminantes del medio ambiente. La mayoría de las personas están o han sido expuestas a plaguicidas OFs por su uso domiciliario como insecticidas, por la contaminación de alimentos, de cursos acuíferos, por exposición laboral y/o por residir en áreas rurales cercanas a la aplicación de los mismos. Es creciente la preocupación por las consecuencias de la exposición a contaminantes medioambientales en grupos vulnerables como son los representados por mujeres gestantes y niños en desarrollo. La exposición intrauterina puede tener consecuencias adversas para la salud del feto tanto a corto como a largo plazo, de hecho, la toxicología del desarrollo se ocupa de su estudio. Considerando que la estructura y función normal de la placenta es un pre-requisito para el crecimiento y desarrollo del feto y que la placenta es una matriz de utilidad para biomonitorear el efecto de la exposición a xenobióticos, en este trabajo de tesis se realizaron estudios a los fines de establecer algunos aspectos relevantes relacionados al balance redox en dos modelos de trofoblasto humano: homogenato de placentas provenientes de mujeres ambientalmente expuestas a plaguicidas y la línea celular derivada de coriocarcinoma JEG-3. Se estudiaron placentas de mujeres gestantes de una población residente en áreas agrícolas recolectadas en períodos de pulverizaciones de plaguicidas (PP) principalmente OFs, durante el período de receso (PR), y de gestantes residentes urbanas consideradas grupo control (GC). La actividad enzimática de carboxilesterasa (CaE), biomarcador sensible a la exposición ambiental a OFs, en placentas recogidas durante el PP disminuyó significativamente un 16,5% comparado con el GC y un 19% respecto a los valores obtenidos en placentas recogidas en el PR. Sin embargo, no se hallaron diferencias significativas en los marcadores de estrés oxidativo (lipoperóxidos y carbonilación de proteínas) así como en los de defensa antioxidante enzimática (actividad de catalasa -CAT- y de glutatión peroxidasa -GPx-) y no enzimática (nivel de glutatión reducido -GSH-), ni en los niveles del factor nuclear 2 relacionado al factor eritroideo 2 (Nrf2), quien ejerce efectos protectivos contra el daño oxidativo. asociación negativa entre la actividad de CAT, observada en las muestras de placentas de gestantes provenientes del grupo PP, y el índice placentario (peso de la placenta/ peso del neonato) sugieren que CAT podría representar un biomarcador de suceptibilidad a tóxicos a ser explorado en futuros estudios, ya que una menor capacidad para detoxificar las especies reactivas del oxígeno (ROS) podría constituir una amenaza potencial para la función placentaria. En conjunto, los resultados del estudio poblacional indican que los tejidos placentarios expuestos ambientalmente a plaguicidas no mostraron cambios en la respuesta antioxidante ni en los marcadores de estrés oxidativo, sugiriendo que se mantuvo el balance redox aún en las condiciones prooxidantes que se podrían haber generado por la exposición. En relación a los estudios realizados en la línea celular JEG-3, en condiciones en que la viabilidad por exposición a clorpirifos (CPF) no se vio afectada, se demostró que estas células expresan acetilcolinesterasa (Anzenbacher and Anzenbacherova, 2001), blanco primario de los OFs y que metabolizan los OFs a la forma oxón, ya que su actividad fue inhibida por 5 y 50 μM de CPF. Dicha inhibición fue revertida parcialmente por la presencia del antioxidante N-acetilcisteína sugiriendo que la disminución en la actividad de la enzima AChE se debe en parte a condiciones prooxidantes del medio. Además, se observó que la exposición a 50 ó 100 μM de CPF, concentraciones 5-10 veces mayores a las consideradas representativas de la exposición medioambiental en humanos , indujo un incremento en la generación de las ROS, producto de la metabolización del tóxico y una disminución en el contenido de GSH, sugiriendo que CPF altera el equilibrio redox en estas células. En respuesta a este desbalance redox la actividad de CAT aumentó comparado con el control. Se sabe que el sistema Nrf2/INrf2 detecta principalmente el estrés oxidativo de baja intensidad (Lushchak, 2011). En respuesta a esto, Nrf2 se trasloca al núcleo, donde se une a los sitios ARE (antioxidant-response element) de los genes blanco para inducir la expresión de múltiples genes de la defensa celular. En coincidencia, el análisis del contenido proteico de Nrf2 mostró un aumento significativo. Adicionalmente se comprobó un aumento en la expresión transcripcional y localización en la fracción nuclear enriquecida en respuesta a la exposición a CPF. Además, se demostró inducción transcripcional en dos de los tres genes detoxificantes de fase II estudiados, hemo-oxigenasa 1 (HO-1) y glutatión reductasa (GR), mientras que no se hallaron cambios en el ARNm de la superóxido dismutasa-1 (SOD1). Estos resultados indican que la tolerancia de las células JEG-3 a la exposición a CPF se explica, al menos en parte, por la capacidad de éstas para activar mecanismos de defensa antioxidante. En resumen, se demuestra por primera vez en células del trofoblasto in vitro que CPF altera el equilibrio redox e induce un aumento de los genes de fase II de detoxificación HO-1 y GR, mediado en parte por la activación de la vía adaptativa del sistema Nrf2/ARE.
Chiapella, Graciela. Universidad Nacional del Comahue; Argentina.
Genti de Raimondi, Susana Del Valle. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina.
Panzetta de Dutari, Graciela María Del Valle. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina.
Magnarelli, Gladis. Universidad Nacional del Comahue; Argentina.
Virgolini, Miriam Beatriz. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Farmacología. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Farmacología Experimental de Córdoba; Argentina.
Venturino, Andrés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Toxicología Ambiental y Agrobiotecnología del Comahue; Argentina.