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Dissertations / Theses on the topic 'ADN complémentaire – Dissertations universitaires comme sujet'
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Blancher, Christine. "Etude d'un nouvel adnc codant pour une proteine de la matrice extra cellulaire appartenant a la famille des pexines : la nectinepsine." Paris 5, 1996. http://www.theses.fr/1996PA05S008.
Full textAbstract:
Au cours de ce travail, nous avons isole un nouvel adnc d'une banque de neuroretine de caille de 2 jours. Chez la caille, les arnm detectes a l'aide de ce clone ont une taille de 2. 2, 4. 2 et 6. 5 kb. Ces transcrits sont egalement exprimes dans le foie, le cerveau et l'intestin. Chez les mammiferes, deux arnm nectinepsine de 2 et 5 kb sont mis en evidence, ainsi que dans le retinoblastome humain. De plus, les arnm nectinepsine presentent un profil d'expression suggerant un epissage differentiel, dans deux lignees de cellules de neuroretine de caille immortalisees par le virus du sarcome de rous. Nous avons nomme, nectinepsine, la sequence polypeptidique deduite de l'adnc. Cette proteine presente un domaine rgd de reconnaissance cellulaire, un motif consensus du site actif des aspartyl proteases, ainsi que d'importantes homologies avec une molecule adhesive de la matrice extracellulaire (mec), la vitronectine. De plus, la nectinepsine presente les domaines communs a l'hemopexine, la vitronectine et la plupart des metalloproteases dans la famille des pexines. Des etudes en western blot a l'aide d'un antiserum dirige contre la vitronectine humaine, nous ont permis de mettre en evidence chez la caille et les mammiferes, deux proteines de 45 et 54 kda, distinctes de celles de la vitronectine. La construction d'un vecteur retroviral contenant la sequence specifique de la rectinepsine en antisens, transfectee dans les cultures de fibroblastes de poule conduit a la disparition de la bande de 54 kda. La nectinepsine correspond a la nouvelle forme de 54 kda de la vitronectine decrite dans le jaune d'oeuf de poule par nagano et coll. La nectinepsine est une nouvelle proteine de la mec. Elle pourrait jouer un role dans l'equilibre modulant les mecanismes d'adherence cellulaire et de degradation des composants de la mec au cours du developpement. L'expression des arnm nectinepsine semblent soumis a une regulation, qui pourrait etre modifiee lors de l'immortalisation cellulaire dans des processus pathologiques comme la proliferation tumorale et les phenomenes metastasiques.
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Jullian, Eric. "Isoforme foetale des chaînes lourdes de la myosine squelettique humaine : isolement, structure primaire et expression du messager." Paris 5, 1996. http://www.theses.fr/1996PA05CD04.
Full textAbstract:
Dans le muscle squelettique le responsable de l'activité mécanique est la molécule de myosine qui transforme l'énergie provenant de l'hydrolyse de l'ATP en mouvement. Cette protéine hexamérique (2 chaînes lourdes et 4 chaînes légères) existe sous plusieurs formes en fonction du type des monomères qui la constituent. Au cours du développement, dans le muscle squelettique humain, deux isoformes ont été décrites, une forme embryonnaire et une forme périnatale. Les ADN complémentaires des chaînes lourdes de ces isoformes développementales ont été isolés et leurs séquences ont été déterminées. Un troisième ADN complémentaire a été isolé. Sa séquence nucléotidique (6010 bases) a été déterminée. Des expériences de protection à la RNase montrent une expression du messager durant la deuxième moitié de gestation et les premiers jours post-partum. Cette isoforme fœtale présente des différences de séquences avec l'isoforme périnatale précedemment décrite, 24 mutations nucléotidiques (0. 45%) conduisant à 9 substitutions d'acides animés (1,5%). Ces différences mettent en évidence un polymorphisme de restriction, mais celui-ci n'a pas été retrouvé. Tous les éléments recueillis sur l'isoforme fœtale font considérer cette dernière comme la foemr prépondérante exprimée entre la treizième semaine de développement et 2 jours après la naissance.
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Lelièvre, Mélanie. "Étude de la biosynthèse des motifs di-, oligo- et polysialylés chez les mammifères : identification et caractérisation d'une nouvelle sialyltransférase humaine (hST8Sia VI)responsable de la biosynthèse de motifs diSia sur des O-glycosylprotéines." Lille 1, 2006. http://www.theses.fr/2006LIL10068.
Full textAbstract:
Chez les mammifères, les acides sialiques se trouvent aux extrémités terminales des glycoconjugués (glycoprotéines et glycolipides) ou des oligosaccharides libres. De part cette position terminale sur les glycannes des glycoconjugués et de leur charge négative, les acides sialiques conditionnent les propriétés physico-chimiques des sialoglycoconjugués et sont souvent impliqués dans des mécanismes d'interaction cellulaire. L'association de résidus d'acides sialiques par des liaisons en α2,8 forme des chaînes linéaires de longueur variable classées selon le degré de polymérisation en structures disialylées (diSia), oligosialylées (oligoSia) ou polysialylées (polySia, ou PSA pour Poly Sialic Acid). Les PSA portés par la N-CAM (Neural Cell Adhesion Molecule) ont été les premiers mis en évidence chez les mammifères. Ils sont impliqués dans de nombreux processus physiologiques tels que la migration des cellules neuronales, la croissance axonale ou la synaptogenèse. Depuis, d'autres structures di-, oligo- et polysialylées ont été décrites chez les mammifères et chez l'homme en particulier, mais très peu d'études concernant leurs implications biologiques et leur biosynthèse ont été menées. Grâce à une analyse in silico, nous avons reconstitué un gène putatif d'α2,8-sialyltransférase sur le chromosome 10 humain, que nous avons nommé hST8Sia VI. Les analyses de l' expression de ce gène dans différents tissus et cellules humains ont mis en évidence une expression faible et ubiquiste de ce gène. Nous avons cloné la totalité du cadre ouvert de lecture de ce gène à partir des cellules cancéreuses mammaires MCF-7 et avons produit une forme recombinante soluble de hST8Sia VI dans des cellules COS-7 et Sf-9 pour caractériser son activité enzymatique. Nos tests d'activité in vitro ont démontré que hST8Sia VI catalyse le transfert d'un seul résidu d'acide sialique sur les motifs glucidiques sialylés en α2-3 trouvés sur les O-glycannes des glycoprotéines pour former des motifs disialylés du type Neu5Acα2-8Neu5Acα23Galβ 1-3GalNAc-. Afin de déterminer son activité enzymatique in vivo, nous avons créé un modèle de cellules cancéreuses mammaires (MDA) sur-exprimant stablement hST8Sia VI. Nos premiers résultats indiquent que hST8Sia VI utilise préférentiellement les motifs α2,3-sialylés, ce qui confirme les analyses réalisées in vitro.
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Dupont, Jean-Michel. "Méthylation de l'ADN et régulation transcriptionnelle : ontogène de l'empreinte au cours de la spermatogénèse et conséquences sur l'architecture de l'hétérochromatine constitutive." Paris 5, 2001. http://www.theses.fr/2001PA05CD06.
Full textAbstract:
Les modifications épigénétiques de l'ADN constituent un moyen de contrôle de la transcription, principalement par la méthylation des cytosines qui joue un rôle prépondérant dans l'empreinte parentale de l'organisation du génome en domaines d'expression. L'empreinte permet le contrôle de l'expression d'un gène en fonction de son origine parentale. Un des aspects non résolus de ce phénomène est de comprendre comment s'opère sa mise en place pendant la gamétogénèse. L'étude de l'évolution de la méthylation de deux gènes soumis à empreinte (H19 et PEG1/MEST) pendant la spermatogénèse montre que l'empreinte est dans un premier temps effacée chez l'embryon, puis qu'elle est secondairement réinstallée, uniquement sur le gène d'expression maternelle, avant l'entrée en méiose des spermatogonies. L'analyse du profil de méthylation de séquences satellites dans deux situations ou elles sont hypométhylées, le syndrome ICF et le trophoblaste, permet de mieux comprendre l'influence de la méthylation sur l'hétérochromatine. Le syndrome ICF associe des anomalies chromosomiques et une hypométhylation des satellites 2, suggérant une relation entre les deux. Cependant, l'étude des satellites 3 dans ce syndrome montre qu'ils sont également déméthylés sans altérations morphologiques des régions chromosomiques correspondantes. Ces anomalies chromosomiques pourraient donc être la conséquence d'une modification des interactions entre l'hétérochromatine et certaines protéi͏̈nes de liaison spécifiques du satellite 2. Cette hypothèse est renforcée par l'observation que le profil de méthylation d 'une séquence de satellite 2 dans le trophoblaste montre une organisation en groupes des CpG déméthylés le long de la séquence. Ceci suggère que la déméthylation de l'hétérochromatine dans le placenta est contôlée de manière à modifier certaines interactions ADN-protéi͏̈nes, ce qui pourrait retentir sur l'organisation du génome au sein du noyau et participer à la régulation transcriptionnelle de cet organe.
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Leemput, Julia. "ATM et OGG1 (ataxia telangiectasia mutated et 8-oxoguanine ADN glycosylase) : Etude de deux enzymes majeures impliquées dans la reconnaissance des lésions de l'ADN dans l'oeil de souris." Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05T047.
Full textAbstract:
La rétine est un tissu fortement exposé au stress oxydatif de part son activité physiologique (exposition aux rayons lumineux, consommation d'oxygène, activité métabolique, phagocytose. . . ). Toutes ces particularités sont à l'origine de la production de ROS qui provoquent des nombreux dommages comme l'oxydation des bases et les cassures double brin. Ce travail présente différentes protéines de la réparation de l'ADN (ATM et OGG1) intervenant dans différentes voies de reconnaissance suivant le type de dommages rencontrés. La protéine ATM qui détecte des cassures double brin présente une localisation différente dans les photorécepteurs et les cellules granulaires du cervelet. La protéine OGG1 permettant la reconnaissance et l'excision de la 8-oxoG est présente et active dans les cellules rétiniennes. Chez les souris déficientes pour chacune de ces protéines, aucune dégénérescence rétinienne n'est observée. Cependant, des dysplasies de la neurorétine et de l'EPR sont mises en évidence<br>The retina is particularly susceptible to oxidative stress due to high oxygen consumption and metabolic rates. The specific characteristics of the retina (high levels of oxygen consumption, light, polyunsatured fatty acids. . . ) lead to free radical, cell damages, ageing and diseases. Therefore, all these processes can contribute to the formation of oxidative DNA damage in the retinal cells. A difference between the localization patterns of the active and inactive forms of ATM in photoreceptor and granular cells was observed. This suggests that ATMp (activated form) may be involved in both the protection of cells from oxidative damage and the maintenance of ocular cell structure and function. OGG1, responsible for the recognition and excision of the 8-oxoG, is highly expressed in neuroretina and non-neuronal cells of the eye and a 8-oxoG DNA-glycosylase activity is detected in this tissue. Moreover, there is no retinal degeneration in Atm-/- and Ogg1-/- mice
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Molina, Gomes Denise. "Caractérisation des modifications épigénétiques et des remaniements cryptiques complexes par l'analyse des chromosomes et fibres d'ADN peignées par hybridation in situ." Paris 5, 2004. http://www.theses.fr/2004PA05N09S.
Full textAbstract:
Ce travail de thèse a comporté la localisation de gènes candidats à différentes pathologies humaines en utilisant des fragments de petite taille pour définir une localisation trés précise. Nous avons localisé cinq gènes. L'utilisation de sondes recouvrant la région du gène SMN, hybridées sur l'ADN peigné des malades dans le but d'établir une cartographie physique plus fine de cette région du génome. L'étude de la méthylation ADN avec le syndrome ICF. Nous avons montré que l'hétérochromatine facultative (chromosome X inactif) était une des cibles de ce défaut et que les principales caractéristiques épigénétiques associées à ce chromosome n'étaient pas atteintes par cette hypométhylation. Nous avons étudié les profils de méthylation pendant la période préimplantatoire chez les embyons de souris mettant en évidence des profils<br>This thesis work was organized around the localization of candidate genes for a variety of human pathologies, with a particular focus on the use of small size DNA probes to alow a very precise mapping. Five localizations were successfully performed. The characterization of the genomic region of the SMN gene through the development of in situ hybridazion on combed DNA from patients to provide a precise cartography. . DNA methylation studiesin the context of the ICF syndrome. We showed that despite its hypomethylated status, the facultative heterochromatin (inactive X chromosome) of ICF female patients maintained its global epigenetic characteristics. We also performed an analysis of methylation variations in murine preimplantation embryos and revealed specific methylation patterns associated with this critical period
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Renault, Éric. "Dynamique reactionnelle de l'etat excite triplet et des especes radicalaires de l'antitumoral pazelliptine en milieu aqueux et vis a vis des acides nucleiques : une etude par photolyse laser et radiolyse pulsee." Paris 5, 1996. http://www.theses.fr/1996PA05S001.
Full textAbstract:
L'activite de la drogue antitumorale pazelliptine (pze) ne semble pas etre due seulement a son intercalation dans l'adn, mais necessiterait une activation metabolique conduisant a la formation d'especes radicalaires. Une partie de ce travail porte sur l'etude de la dynamique reactionnelle de telles especes en solution et vis-a-vis de l'adn. Experimentalement, les radicaux de la pze sont generes par les methodes de radiolyse pulsee ou de photolyse-laser en utilisant la possibilite d'une photoionisation a deux photons de la drogue. Ces deux etudes complementaires ont permis de caracteriser par des mesures de spectroscopie d'absorption transitoire, la reactivite des radicaux de la pze dans ces differents etats de protonation et de proposer un mecanisme d'action de la drogue vis-a-vis de l'adn impliquant ses especes radicalaires et les especes activees de l'oxygene. Par ailleurs, nous avons montre que la pze est un photosensibilisateur de la degradation de l'adn en mesurant les coupures simple et double brin. L'investigation des mecanismes moleculaires responsables de ce processus nous a conduit a caracteriser les proprietes photophysiques et photochimiques de l'etat triplet de la pze en solution et complexee aux acides nucleiques. Les resultats nous ont permis de proposer un mode d'action de la drogue par l'intermediaire d'une oxydation de l'adn obtenue par un transfert de charge a partir de l'etat triplet de pze.
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Lapoumeroulie, Claudine. "Polymorphisme des beta thalassemies en algerie : caracterisation structurale et fonctionnelle d'une mutation nouvelle." Paris 5, 1988. http://www.theses.fr/1988PA05S005.
Full textAbstract:
L'importance medicale des thalassemies fait que ces maladies hereditaires ont ete etudiees tant sur le plan phenotypique que genotypique. Elles ont fourni un ensemble exceptionnel de modeles permettant d'etudier la regulation de la synthese de l'hemoglobine. Elles permettent encore d'eclairer certaines questions non resolues concernant la specificite tissulaire ou les etapes du developpement. Les divers genes thalassemiques sont etroitement lies a des haplotypes des restriction varies de la totalite du locus beta. C'est celle liaison que nous avons utilisee comme premiere etape pour cribler une population arabo-berbere algerienne. Nous avons ainsi retrouve certains des haplotypes decrits par orkin en 1982 chez des thalassemiques mediterraneens, mais sutout, cette etude a permis de mettre en evidence 4 haplotypes nouveaux que nous avons designes arbitrairement a, b, c et d. Nos resultats ont largement contribue a la demonstration de la valeur des haplotypes comme marqueurs de la variabilite genetique d'expression clinique des hemoglobinopathies. Un de ces haplotypes nouveaux, l'haplotype c, decouvert sous une forme homozygote a plus particulierement retenu notre attention. Nous avons clone le gene beta thalassemique correspondant afin de pouvoir en etudier la sequence nucleotidique. De fait, celui-ci s'est avere etre porteur d'une mutation nouvelle: une transition g-a au nt 5 de l'ivs1. L'expression transitoire en vecteur heterologue de ce gene a montre que cette substitution situee dans le site donneur d'epissage affectait celui-ci et activait l'un des trois sites cryptiques localises a proximite de la jonction exon 1/intron 1. Au cours de ce travail, nous avons donc etudie largement les polymorphismes de restriction d'une population thalassemique donnee et demontre que ceux-ci pouvaient etre des marqueurs de terrain genetique. De plus, la caracterisation fonctionnelle d'une mutation thalassemique nouvelle a permis d'apporter des elements supplementaires intervenant dans les mecanismes d'epissage des transcrits primaires.
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Sarzi, Emmanuelle. "Caractérisation génétique et phénotypique des déplétions de l'ADN mitochondrial." Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05T048.
Full textAbstract:
Les maladies mitochondriales forment le groupe le plus courant d'anomalies congénitales du métabolisme. Ces maladies représentent actuellement plus de 17% des consultations régulières de notre service de génétique médicale. Les déficits multiples de la chaîne respiratoire mitochondriale sont à l'origine d'un grand nombre de maladies mitochondriales. Ils se caractérisent par des atteintes multi-viscérales responsables la plupart du temps d'un décès précoce dans les premières années de vie des patients atteints par ce type de pathologie. Depuis une quinzaine d'années, notre laboratoire a recruté un très grand nombre de patients présentant un déficit multiple de la chaîne respiratoire (CR). En 2001, il a été mis en évidence qu'un tout nouveau type d'anomalie touchant l'ADN mitochondrial (ADNmt) pouvait être à l'origine de ces déficits multiples. Ces anomalies sont des modifications quantitatives de l'ADNmt connues sous le nom de déplétions de l'ADNmt. Le recrutement important de cas de déficits multiples et le faible rendement de diagnostic moléculaire établi nous a incité à considérer les déplétions de l'ADNmt comme origine potentielle de déficits multiples de la chaîne respiratoire. Le travail de recherche présenté dans ce manuscrit a eu pour objectif tout d'abord d'estimer l'incidence des déplétions de l'ADNmt dans notre cohorte de patients atteints de déficit multiple de la CR. Nous nous sommes ensuite attachés à définir les atteintes cliniques associées à ces déplétions de l'ADNmt. Enfin, l'étude des gènes connus de déplétion de l'ADNmt DGUOK, POLG1 et TK2 nous a permis de mieux caractériser ces patients. Par la suite, l'étude par cartographie génétique de nos familles consanguines avec déplétions de l'ADNmt et de mutation actuellement inconnue, nous a conduit à la première identification de mutations récessives dans le gène PEO1 responsables d'un syndrome hépatocérébral de déplétion de l'ADNmt. La dernière partie de ce manuscrit rapporte l'étude en cours de cartographie génétique et de séquençage de gènes candidats pour une famille consanguine présentant un autre type de syndrome hépatocérébral associé à un déficit multiple de la chaîne respiratoire. L'ensemble de ce travail a permis à notre laboratoire d'acquérir de meilleures connaissances de l'origine génétique des déficits multiples de la chaîne respiratoire associés à une déplétion de l'ADNmt et d'améliorer ainsi le conseil génétique d'une partie des maladies mitochondriales<br>Mitochondrial diseases are a common group of metabolism pathologies. Nowadays, they represent more than 17% of our clinical consultations. Multiple respiratory chain deficiency account for an important number of mitochondrial disease and are characterised by a multi-systemic organ involvement leading to early death. Since these last 15 years, we have recruited a large number of patients with multiple respiratory chain deficiency. In 2001, it has been shown that a mtDNA quantitative anomaly was at the origin of this defect also named mtDNA depletions. The large number of patients with multiple respiratory chain deficiency and the weak yield of molecular diagnosis prompt us to consider mtDNA depletion as a cause of multiple respiratory chain deficiency. The aim of this work was firstly to estimate the incidence of mtDNA depletion in our series of multiple respiratory chain cases. Then, we characterised the genetic and phenotypic features of mtDNA depletions. Finaly, the study of one family among our consanguineous and/or multiplex patients allowed us to identify a new gene responsible for mtDNA depletions associated with a hepatocerebral failure. This gene also named PEO1 encodes for the mitochondrial Twinkle helicase which has been ever known to cause adult onset PEO in a dominant transmission. Finally, we have studied another consanguineous family with multiple respiratory chain deficiency and hepatic failure. This work allowed us to improve the genetic counselling in our laboratory especially for all patients with multiple respiratory chain deficiency associated with a mtDNA depletion
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Bourdon, Alice. "Ribonucléotide réductase et synthèse de l'ADN mitochondrial." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T006.
Full textAbstract:
Les déplétions de l'ADN mitochondrial (ADNmt) sont caractérisées par une diminution de la quantité de molécules d'ADNmt et sont une cause importante des déficits de la chaîne respiratoire. Les travaux présentés dans cette thèse ont permis d'identifier un nouveau gène nucléaire de déplétion de l'ADNmt associée à une encéphalomyopathie sévère conduisant au décès dans les premiers mois de vie. Ce gène code pour une petite sous-unité de la ribonucléotide réductase p53R2 induite par le facteur suppresseur de tumeurs p53. La ribonucléotide réductase catalyse la réduction des nucléotides en leurs désoxynucléotides correspondants, ce qui constitue l'étape limitante dans la synthèse de l'ADN. La deuxième partie de ce travail a porté plus précisément sur le rôle de p53R2 dans la réplication de l'ADNmt en abordant les questions de sa localisation subcellulaire ainsi que de la régulation des sous-unités de la ribonucléotide réductase au cours du développement, chez la souris, dans différents tissus<br>Mitochondrial DNA (mtDNA) depletions are characterized by a decreased number of mtDNA molecules and constitute a major cause of respiratory chain deficiency. This work allowed us to identify a new nuclear gene of mtDNA depletion associated with a severe encephalomyopathy leading to death in the first months of age. This gene encodes a small ribonucleotide reductase (RNR) subunit p53R2 which is a target of the transcription factor p53. RNR catalyses the reduction of the nucleotides into their corresponding desoxyribonucleotides, which is the rate limiting step for DNA synthesis. The second part of this work focuses on the role of p53R2 in mtDNA replication studying its subcellular localization and the expression of the subunits of RNR in several mouse tissues during development
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Ermishov, Mikhail. "Etude des complexes de médicaments antiviraux et antitumoraux par spectroscopies Raman et SERS." Reims, 2003. http://www.theses.fr/2003REIMP203.
Full textAbstract:
L'@étude des mécanismes d'interaction des molécules montrant une activité antivirale et/ou antitumorale représente une étape essentielle dans l'élaboration de nouvelles générations de médicaments. Dans ce travail, les spectroscopies Raman et Surface-Enhanced Raman Scattering (SERS) ainsi que d'autres méthodes spectroscopiques ont été employées pour l'investigation des composés sialylés et de leurs assemblages supramoléculaires mais aussi pour l'étude de complexes de drogues antitumorales telles que bis-nétropsines et topotécan, des inhibiteurs de l'ADN topoisomérase I humaine (topo I), avec l'ADN. Les résultats obtenus élucident les mécanismes moléculaires responsables de l'activité antivirale et/ou antitumorale des composés étudiés et peuvent servir de base au développement de nouvelles molécules possédant une activité plus élevée<br>@The study of mechanisms of interactions of the molecules showing antiviral and/or antitumoral activity represents an essential stage in design of new generations of these agents. In this work, Raman and Raman Surface-Enhanced Scattering (SERS) spectroscopy and other spectroscopic methods were employed for investigation of sialic acid compounds and their supramolecular assemblies as well as for study of complexes of antitumoral drugs bis-netropsins and topotecan, the inhibitors of human DNA topoisomérase I (topo I), with DNA. The results obtained elucidate the molecular mechanisms responsible for the antiviral and/or antitumoral activity of the compounds studied and can be used as a basis for the development of new molecules possessing higher activity
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Sbai, Hakima. "Contribution à l'étude de la réponse immunitaire induite par l'immunisation par l'ADN : anticorps et récepteurs cellulaires pour immunisation par l'ADN." Paris 5, 1998. http://www.theses.fr/1998PA05CD06.
Full textAbstract:
L'immunisation par l'ADN est une nouvelle approche vaccinale. Elle consiste en l'introduction de l'ADN exprimant une protéine antigénique d'un pathogène dans les cellules d'un hôte. Si cette approche a déjà montré son efficacité dans plusieurs modèles animaux de maladies infectieuses, le mécanisme de son fonctionnement est encore mal connu. Nous avons donc entrepris l'étude du mécanisme d'activation des cellules T cytotoxiques (CTLs) chez la souris à la suite de l'immunisation par cette méthode. Nous avons pour cela choisi le modèle du virus de l'hépatite B (VHB) dont l'une des caractéristiques intéressantes est la forte réponse CTL obtenue après injection intramusculaire d'ADN exprimant l'antigène de surface du VHB (AgHBs). Dans la première partie de cette thèse, nous avons cherché à savoir si la sécrétion de l'antigène par les cellules transfectées était obligatoire pour le développement de la réponse CTL comme l'avaient suggéré d'autres résultats. Les souris ont été immunisées par des plasmides exprimant soit une forme non sécrétée de l'AgHBs, soit la forme sauvage sécrétée. Les résultats obtenus montrent que l'activité CTL est identique que l'AgHBs soit sécrété ou non. Ainsi, la sécrétion ou la libération de la protéine après immunisation par l'ADN, n'est pas nécessaire pour activer les CTLs. On peut donc conclure que le transfert de la protéine vers les cellules professionnelles présentatrices de l'antigène (ACPs) n'est pas un mécanisme indispensable pour l'activation des cellules T. Ces résultats suggèrent donc que la capture directe de l'ADN par les APCs (cellules dendritiques ou macrophages) est une conséquence majeure de l'immunisation par l'ADN. Dans la seconde partie de ce travail, nous avons essayé de mieux comprendre les caractéristiques structuraux de l'épitope CTL de l'AgHBS reconnu chez les souris BALB/c. Ces connaissances pourraient nous renseigner sur les possibilités de moduler la réponse cytotoxique. L'ADN plasmidique exprimant l'AgHBs a été modifié de façon à ce que chacun des douze acides aminés de l'épitope CTL (Ld) soient individuellement substitué par le résidu alanine. La réponse cytotoxique induite chez la souris a été analysée un mois après immunisation par chaque plasmide. Cette étude a permis d'identifier les résidus essentiels pour l'induction de la réponse CTL. Nous avons également remarqué que certaines mutations conduisaient à une activité CTL plus forte que celle obtenue avec l'épitope Ld non muté. La réactivité de ces " hyperagonistes " indique clairement des réactions croisées avec la séquence sauvage de l'épitope CTL. Ces résultats soulèvent donc la possibilité d'utiliser des séquences agonistes comme un moyen de recrutement de CTLs de différents répertoires T qui réagissent néanmoins avec l'épitope naturel. Cette stratégie d'immunisation, encore très peu explorée, peut stimuler la réponse CTL chez des individus qui, pour une raison ou une autre, ne réussissent pas à initier une telle réponse lors d'un contact avec le pathogène. Nos résultats permettent ainsi de mieux comprendre le mécanisme d'induction de la réponse immunitaire après immunisation par l'ADN. Ils suggèrent quelques applications thérapeutiques possibles avec une telle approche vaccinale. Ce travail montre également que l'immunisation par l'ADN plasmidique permet de manipuler les séquences antigéniques avec un degré de facilité qui peut accélérer la recherche en vaccinologie.
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Steffann, Julie. "Etude de la ségrégation de l'ADN mitochondrial au cours du développement embryofoetal humain." Paris 5, 2006. http://www.theses.fr/2006PA05N17S.
Full textAbstract:
Les maladies héréditaires résultant de mutations de l’ADN mitochondrial (ADNmt) sont des affections graves à taux de récidive élevé en raison de leur mode d’hérédité maternel. La gravité variable et le caractère pluritissulaire des atteintes cliniques tient en partie à la coexistence de molécules d’ADNmt sain et mutant en proportion variable dans les différents tissus (hétéroplasmie). La crainte d’une possible variation des taux d’hétéroplasmie au cours du développement embryofoetal humain a freiné le développement des procédures de diagnostic prénatal et préimplantatoire de ces affections. De plus, le passage éventuel des molécules d’ADNmt au travers d’un goulot d’étranglement lors de l’ovocytogenèse (théorie du bottleneck)<br>Inherited disorders resulting from mutations of mitochondrial DNA (mtDNA) are serious diseases with a high recurrence risk due to their maternal mode of inheritance. Variability in clinical severity and various multi-tissual involvement result in a large extent from the coexistence of wild-type and mutant mtDNA molecules in various proportions in different tissues (heteroplasmy). Uncertainties regarding the potential variation of heteroplasmy load during human embryofetal development had hampered the development of prenatal (PND) and preimplantation (PGD) diagnostic procedures. Moreover, the restriction of the mtDNA molecule number, through a putative bottleneck at the time of
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Casefont-Ducancelle, Alexandra. "ADN polymérase du cytomégalovirus humain : activité enzymatique et sensibilité aux entiviraux." Paris 5, 2005. http://www.theses.fr/2005PA05N15S.
Full textAbstract:
Le foscarnet, utilisé pour traiter les infections sévères à cytomégalovirus, est un inhibiteur de l'ADN polymérase, codé par le gène UL54. Le but du travail était d'étudier le retentissement de mutations introduites dans UL54 sur l'activité de l'enzyme et la résistance au foscarnet. Une méthode originale, reposant sur la mesure de l'incorporation de nucléotides trisphosphates marqués à la digoxigénénine dans le brin d'ADN en formation, a été mise au point pour mesurer l'activité d'ADN polymérases sauvages et mutées, et leur comportement en présence de foscarnet. L 'implication de l'extrémité N-terminale du domaine conservé delta-C dans le mode d'action du foscarnet a été démontrée pour la première fois. Le rôle d'association de mutations a été confirmé. L'étude des phénotypes de polymérases portant des mutations dans le domaine IV a permis de préciser leur rôle dans la fonction exonucléasique de l'enzyme virale<br>Anti-cytomegalovirus drug foscarnet, is an inhibitor of viral DNA polymerase pUL54. We aimed to analyse the impact of UL54 mutations on polymerase activity and foscarnet resistance. Mutations were introduced by mutagenesis into gene UL54 and wild-type and mutated DNA polymerases were expressed in vitro. We developed a colorimetric assay to measure DNA polymerase activity in the absence and presence of foscarnet. We demonstrated the usefulness of this DNA polymerase phenotypic assay for the characterization of mutation suspected to confer foscarnet resistance. Change N495K and combination of S291P and combination and K415R were shown to induce foscarnet resistance for the first time, confirming the wide distribution of foscarnet-resistance mutations through gene UL54. The role of N495K was confirmed by rescue marker. We assessed the major role of serine 771 on polymerase catalytic function and of amino-acids 412 and 413 on 3'5' exonuclease activity
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Saidj, Rachid. "Les gènes BRCA et FANC : implication dans la réparation des cassures double brin de l'ADN chez l'homme." Paris 5, 2006. http://www.theses.fr/2006PA05P609.
Full textAbstract:
Les gènes BRCA et FANC, impliqués respectivement dans la prédisposition familiale au cancer du sein et dans l'anémie de Fanconi, font partie des gènes suppresseurs de tumeurs de type " caretakers " et jouent un rôle important dans le maintien de la stabilité du génome. Ces gènes sont étroitement associés et pourraient participer dans une voie métabolique commune. L'objectif de mon travail de thèse à été de mieux comprendre leur rôle dans la réparation des cassures double brin de l'ADN (CDB) chez l'Homme. En utilisant des approches moléculaires basées sur l'utilisation de substrats extrachromosomiques ou intégrés dans le génome, porteurs de CDB-modèles, nous avons examiné l'impact de l'inactivation de ces gènes, par ARN interférant, sur le fonctionnement des deux voies majeures de réparation des CDB : la voie End-Joining (EJ) et la Recombinaison Homologue (RH). Nous avons montré que : (i) la déplétion de BRCA1 affecte sévèrement le processus EJ ; (ii) le lien moléculaire entre BRCA1 et cette voie de réparation est l'association de BRCA1 avec XRCC4, l'un des acteurs principaux de ce mécanisme : (iii) les produits des gènes FANCF et FANCG, appartenant au core complexe FANC, contrôlent la voie EJ, mais ne sont pas impliqués dans la RH ; (iv) FANCJ et FANCD1/BRCA2, dont l'action se situe en aval du complexe FANC (comme BRCA1), contrôlent la RH. En conclusion, l'ensemble des résultats montre que la voie BRCA/FANC intervient dans la réparation des CDB et suggère une spécialisation fine des gènes qui y participent<br>The BRCA and FANC genes (respectively implicated in breast cancer predisposition and in Fanconi anemia) are classified as “caretakers” tumor suppressor genes and are involved in the maintenance of genomic stability. These genes are tightly associated and could participate in a common pathway. The aim of my thesis work was to improve our understanding of there function in the DNA double strand break (DSB) repair in Human cells. By using molecular approaches based on intra- or extra- chromosomal substrates, carrying model-DSB, we studied the impact of siRNA mediated depletion of these factors on the two major DSB repair pathways in mammalian cells: End-joining (EJ) and Homologous Recombination (HR). We have shown that: (i) BRCA1 depletion severely impairs the EJ pathway, (ii) the novel interaction between BRCA1 and XRCC4 (a key actor of EJ), constitutes a molecular and functional link between BRCA1 and this repair pathway; (iii) depletion of the Fanconi genes products FANCF and FANCG, which belong to the core complex, leads to an impairment of EJ but does not affect HR; (iv) FANCJ and FANCD1/BRCA2 which act downstream of the complex, control HR. On conclusion, our work shows that the BRCA/FANC pathway is implicated in DSB repair, and suggests a tight specialisation of each gene
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Cherif, Chabane. "Substitution de l'ADN mitochondrial entre la lignée de souris CBA/H et NZB : effets sur des traits comportementaux sensori-moteurs et mnésiques à l'âge de 6 et 12 mois." Paris 5, 1997. http://www.theses.fr/1997PA05A001.
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Buck, Dietke. "Analyse moléculaire de patients présentant un déficit immunitaire combiné avec microcéphalie associé à un défaut général de la réparation de l'ADN." Paris 5, 2005. http://www.theses.fr/2005PA05N34S.
Full textAbstract:
Analyse moléculaire de patients présentant un déficit immunitaire combiné avec microcéphalie associé à un défaut général de la réparation de l'ADN. Les cassures double-brin d'ADN (dsb) formées au cours de la recombinaison V(D)J sont modifiées et ligaturées par des facteurs généraux de la réparation de l'ADN du „non homologous end joining“ (NHEJ), avec six protéines connues impliquées:Ku70/Ku86/DNAPKcs, Artemis et Xrcc4/Lig4. Dans un premier temps, nous avons montré que des mutations hypomorphes de Lig4 peuvent entraîner un déficit immunitaire sévère avec radiosensibilité (RS-SCID) chez l'homme, caractérisé par un défaut de la recombinaison V(D)J in vitro, qui est complémenté par la forme sauvage de Lig4. Deuxièmement, nous avons identifié un nouveau facteur V(D)J/NHEJ grâce à l'analyse fonctionnelle et génétique d'un groupe de patients présentant un phénotype similaire à celui des patients déficients e Lig4. Nous avons nommé ce facteur Cernunnos, dont le gène codant est muté chez tous les patients analysés. Le défaut du NHEJ observé dans les cellules de ces patients est complémenté par la forme sauvage de Cernunnos<br>Molecular analysis of patients presenting combined immunodeficiency and microcephaly associated with a general DNA repair defect DNA double strand breaks (DNA dsb) formed during V(D)J recombination are modified and ligated by general DNA repair factors of the non homologous end joining pathway (NHEJ), which comprises six known proteins : Ku70/Ku86/DNAPKcs, Artemis and Xrcc4/Lig4. First, we have shown that hypomorphic mutations of Lig4 are able to cause severe combined immunodeficiency associated to radiosensitivity (RS-SCID) in humans, characterized by a V(D)J recombination defect in vitro, which is complemented by the wild-type form of Lig4. Second, we have identified a new V(D)J/NHEJ factor by functional and genetic analysis of a group of patients presenting a phenotype similar to Lig4 deficient patients. The gene encoding this new factor, which we have called Cernunnos, is mutated in all analysed patients. The NHEJ deficiency observed in the patients' cells is complemented by the wild-type form of Cernunnos
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Benel, Laurent. "Influence du transfert in vitro et des conditions de culture sur l'activité et la biogenèse mitochondriales du chondrocyte articulaire de lapin." Paris 11, 1989. http://www.theses.fr/1989PA114809.
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Bertin, Aurélie. "Compréhension des mécanismes électrostatiques impliqués dans la plasticité structurale de la chromatine eucaryote." Paris 11, 2006. http://www.theses.fr/2006PA114813.
Full textAbstract:
Nous avons montré que les queues d'histones H3 et H4 sont nécessaires pour que des interactions attractives s'établissent entre NCPs, en présence d'ions monovalents. Pour cela, nous avons comparé des NCPs recombinantes intactes et gH3gH4 (sans queues H3 et H4) par SAXS. Les données expérimentales ont été comparées à des simulations établies à partir d'un modèle simple de potentiel d'interaction de paires. Les interactions entre NCPs gH3gH4 sont décrites par un potentiel de type répulsif uniquement. Par contre, l'introduction d'une composante attractive dans le potentiel est indispensable pour mieux décrire les données expérimentales obtenues avec des NCPs intactes aux concentrations salines les plus élevées. Par ailleurs nous avons montré que les NCPs gH3gH4 présentent une conformation légèrement moins compacte que celle de NCPs intactes. Nous avons mis au point des conditions d'imagerie optimales par cryomicroscopie électronique dans le but d'analyser finement ces différences conformationnelles par reconstruction d'image à trois dimensions. Afin de mimer les conditions d'encombrement et de compaction de la chromatine dans la cellule, nous avons concentré artificiellement des solutions de NCPs par ajout de cations multivalents ou par stress osmotique. L'effet des ions multivalents dans les interactions entre NCPs a été examiné. Plus particulièrement, nous avons étudié le rôle des ions magnésium2+ et spermidine3+ dans la précipitation des NCPs. Des diagrammes de phase on été établi afin de déterminer précisément les conditions de précipitation des NCPs en présence de Mg2+ et Spd3+. Ces diagrammes ont été comparés entre eux et confrontés aux diagrammes théoriques. L'organisation des NCPs au sein des domaines biphasique a été examiné par diffraction des rayons X, microscopies optique et électronique. Nous avons montré que la structure des phases denses obtenues dépend des conditions de précipitation.
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Gruzza, Maryse. "Étude de la dissémination dans l'écosystème, tube digestif, de gènes étrangers hébergés par "Lactococcus lactis"." Paris 11, 1993. http://www.theses.fr/1993PA114801.
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Savouret, Cédric. "La dystrophie myotonique de Steinert. Trinucléotides CTG et réparation de l'ADN : les liaisons dangereuses." Paris 5, 2003. http://www.theses.fr/2003PA05P621.
Full textAbstract:
La Dystrophie Myotonique de Steinert est due à l'amplification d'une répétition de triplets CTG. On observe chez les patients une instabilité intergénérationnelle et somatique. Le laboratoire a créé des modèles de souris transgéniques contenant 20, 55 ou 300 CTG, qui reproduisent les caractéristiques de l'instabilité observée chez les patients. Cette thèse vise à comprendre au travers de quel mécanisme moléculaire sont générées les expansions. Afin de tester le rôle de la réparation de l'ADN, j'ai croisé les souris à 300 CTG avec des souris invalidées pour des gènes appartenant aux différents systèmes. Les résultats les plus frappants ont été obtenus pour Msh2 : en son absence, les expansions de triplets disparaissent et une majorité de contractions est observée. Msh2 est donc nécessaire à la production des expansions intergénérationnelles et somatiques. J'ai également pu montrer que les expansions germinales sont produites au début de la spermatogenèse, dans les spermatogonies<br>Myotonic Dystrophy is due to the amplification of a CTG repeat tract, and patients show both intergenerational and somatic CTG instability. The laboratory has created transgenic mice models with 20, 55 or 300 CTG, that reproduce the instability features observed in patients. This thesis was to understand through which mechanism are the expansions generated. To assay the role of DNA repair, I have bred the 300 CTG mice with mice deficient for genes from different repair pathways. The most striking results were obtained with Msh2: in its absence, trinucleotide expansion disappear, and a majority of contractions is observed. Msh2 is thus necessary for intergenerational and somatic expansions to occur. I could also demonstrate that germinal expansions are produced at the very beginning of spermatogenesis, in spermatogonia
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Foiry, Laurent. "La dystrophie myotonique de Steinert : instabilité des triplets répétés CTG et métabolisme de l'ADN." Paris 5, 2006. http://www.theses.fr/2006PA05P620.
Full textAbstract:
La dystrophie myotonique de Steinert (DM1) est une pathologie multisystémique due à l’amplification d’une répétition CTG dans la région 3’-UTR du gène DMPK. Chez les patients, le nombre de CTG augmente lors des transmissions parentales, ce qui permet d’expliquer l’apparition et l’aggravation des symptômes de plus en plus tôt au cours des générations. La taille de cette répétition augmente également dans les tissus des patients ce qui pourrait expliquer la progression de la sévérité des symptômes au cours de la vie. Afin d’identifier quels sont les mécanismes d’instabilité impliqués, j’ai croisé le modèle murin de la DM1 du laboratoire avec des souris invalidées pour plusieurs gènes codant des protéines intervenant lors de la réparation et de la réplication de l’ADN, telles que Msh3, Msh6, p53, Rad52 ou la ligase I. Dans cette thèse, est également décrit pour la première fois chez la souris la reproduction des très grandes expansions intergénérationnelles observées chez les patients<br>Myotonic Dystrophy type 1 (DM1) a multisystemic disorder caused by a CTG repeat expansion in the 3’-UTR part of the DMPK gene. The CTG repeat number increases in parental transmissions, which provides a molecular explanation of the anticipation phenomenon commonly observed in DM1 families. The CTG repeat size also increases in tissues which could explain the increasing severity of symptoms in patients during their life. In order to identify the molecular mechanism involved in CTG repeat instability, I crossed the DM1 mouse model of the lab with DNA repair and DNA replication deficient mice (knocked-out for Msh2, Msh3, Msh6, p53, Rad52 and Ligase I). In this thesis, large intergenerational expansions (+300 CTG in one single generation) are described for the first time in a mouse model. Hypothesis about CTG repeat instability mechanisms and various therapeutic approaches are presented in this manuscript
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El, Alaoui Abdessamad. "Synthèses et évaluations biologiques de prodrogues du SN-38, du paclitaxel et du RO5-4864 utilisables dans le cadre de stratégies de vectorisation par enzyme immunociblée ou par la toxine de Shiga." Paris 5, 2006. http://www.theses.fr/2006PA05P638.
Full textAbstract:
La plupart des antitumoraux utilisés en clinique se caractérisent par leur grande toxicité due principalement à leur manque de sélectivité vis-à-vis des cellules cancéreuses. Ce manque de sélectivité se traduit par de nombreux effets secondaires qui peuvent mettre en danger la vie du patient. Dans ce contexte, le concept de prodrogue semble être une alternative pour améliorer la solubilité et vectoriser les agents cytotoxiques à proximité des tumeurs. Durant ce travail, deux stratégies de ciblage ont été employées pour améliorer l'efficacité thérapeutique du SN-38, du paclitaxel et du RO5-4864, trois agents cytotoxiques : la stratégie ADEPT (Antibody Directed Enzyme Prodrug Therapy) et l'utilisation de la sous-unité B de la toxine de Shiga comme outil de vectorisation. Nous avons ainsi préparé plusieurs types de prodrogues différant chacune par son espaceur et son mode d'activation. Les synthèses et les évaluations biologiques des prodrogues sont présentées dans ce manuscrit<br>Traditional cancer chemotherapy relies on the premise that rapidly proliferating cancer cells are more likely to be killed by a cytotoxic agent. In reality, however, cytotoxic agents have very little or no specificity, which leads to systemic toxicity, causing severe undesirable side effects. Therefore, the concept of prodrug seems to be an alternative to improve the solubility and target the drugs close to the tumors. During this work, two strategies of targeting have been used to improve the therapeutic efficiency of the SN-38, the paclitaxel and the RO5-4864, three cytotoxic agents : the ADEPT strategy (Antibody Directed Enzyme Prodrug Therapy) and the use of the B subunit of the Shiga toxin as tool of vectorisation. We prepared several prodrugs deferring each by his linker and his manner to be activated. The synthesis and the biological evaluation of the prodrugs are presented in this manuscript
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Denamur, Erick. "Étude de la diversité génétique de Pseudomonas aeruginosa par le polymorphisme des estérases et de l'ADN ribosomal." Paris 11, 1991. http://www.theses.fr/1991PA114842.
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