Dissertations / Theses on the topic 'Alho - Doenças e pragas'

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Agronomia, 2012.
Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-06-18T14:31:29Z No. of bitstreams: 1 2012_ThiagoGomesdeSousa.pdf: 2192064 bytes, checksum: d4a63c218ac83a552f59c696195d9eab (MD5)
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A podridão por esclerócio (Sclerotium rolfsii) está entre as doenças mais importantes do alho (Allium sativum) e da cebola (A. cepa). Em países de clima frio há relatos de perdas entre 10% a 65%, enquanto em países de clima tropical estas perdas podem atingir 100%. O patógeno tem uma ampla gama de hospedeiros, sendo capaz de infectar mais de 500 espécies vegetais. O fungo se propaga por estruturas de resistência, esclerócios, que podem sobreviver por vários anos no solo, além de serem facilmente levadas pela água e movimentação de pessoas e equipamentos. Alguns métodos de controle têm sido relatados contra a doença, por exemplo: o químico por meio de fungicidas (tebuconazole, thiram, procimidone), o físico com solarização (cobertura do solo com lonas e coletores solares), o cultural por meio da adição de matéria orgânica que promove o aumento da população dos microorganismos benéficos e o biológico com a inoculação de organismos antagônicos aos patógenos. Há necessidade de melhoria do manejo da doença, devido à dificuldade de controle do patógeno e o interesse ambiental de diminuição a cada dia da utilização de produtos químicos. Assim, o objetivo principal neste estudo foi avaliar produtos comerciais à base de Trichoderma no controle da podridão do alho e cebola. Primeiramente, foi avaliada a eficiência de T. harzianum comercial em relação a fungicidas (procimidona e tiofanato metílico) por teste de germinação de esclerócios (solo em caixas plásticas) em laboratório e por teste in vivo com plantas de alho em casa de vegetação. Em uma segunda parte do estudo foi avaliado a eficiência de T. harzianum e T. asperellum em campo experimental de cebola inoculado artificialmente com S. rolfsii. Em todos os trabalhos os produtos à base de Trichoderma foram superiores aos fungicidas. Nos testes in vivo com plantas de alho observou-se (a) um menor número de plantas infectadas, (b) aumento de massa seca de raiz e parte aérea em relação à testemunha com patógeno, e; (c) menor número de esclerócios capturados nos tratamentos com T. harzianum. Nos campos experimentais de cebola o tratamento Sclerotium rolfsii + T. harzianum apresentou a menor incidência, diferindo significativamente da testemunha com patógeno. No tratamento somente com T. harzianum houve o maior ganho de produtividade em relação à testemunha somente com patógeno. O tratamento com T. asperellum também reduziu a incidência da doença e induziu ganho em produtividade da cebola. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT
The Sclerotium rot (Sclerotium rolfsii) is one of the most important diseases of garlic (Allium sativum) and onion (A. cepa). In cold climate countries losses between 10% to 65%, while in tropical countries, these losses can reach 100%. The pathogen has an extensive host range and is capable of infecting more than 500 species of plants. The fungus is spread by resistance structures, sclerotia, which can survive in soil for years, and are easily moved by wind, water and movement of people and equipment. Some methods of control have been reported against the disease, for example: the chemical by fungicides (tebuconazole, thiram, procymidone), the physical with solarization (soil covered with tarpaulins and solar panels), the culture by the addition of organic matter promoted the increase of the population of beneficial microorganisms and inoculation with biological organisms antagonistic to pathogens. There is need for improved management of the disease, due to the difficulty of controlling the pathogen and environmental interest of reduction day by day use of chemicals, thus the main objective of this study was to evaluate commercial products based on Trichoderma. First, we evaluated the efficacy of T. harzianum in relation to commercial fungicides (procymidone and thiophanate methyl) per test germination of sclerotia (soil in plastic boxes) in the laboratory and tested in vivo with garlic plants in the greenhouse. In a second part of the study was evaluated the efficacy of T. harzianum and T.asperellum onion trial field artificially inoculated with S. rolfsii. In all studies based products of Trichoderma were higher than fungicides. In vivo tests with garlic plants was observed (a) a lower number of infected plants, (b) increase in dry weight of roots and shoots compared to control with the pathogen, and (c) captured fewer sclerotia in treatments with T. harzianum. In onion trials field of treatment Sclerotium rolfsii + T. harzianum had the lowest incidence, differing significantly from the control with the pathogen. In the treatment only with T. harzianum was the largest productivity gain compared to control only with the pathogen. Treatment with T. asperellum also reduced the incidence of the disease and led to higher productivity of the onion. Key word: Allium sativum, Allium cepa, Sclerotium rolfsii, Trichoderma, biological control.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2018.
Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-08-15T21:15:23Z No. of bitstreams: 1 2018_DéborahChristinaMoraesMesquita.pdf: 4700403 bytes, checksum: c7ff2b4024d56112a6d1fee167fa6568 (MD5)
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Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) e Fundação de Apoio a Pesquisa do Distrito Federal (FAP-DF).
As culturas do alho (Allium sativum) e da cebola (Allium cepa) destacam-se no Brasil e no mundo entre as hortaliças mais expressivas economicamente. Entretanto, ambas têm sido comprometidas pela podridão branca, doença ocasionada por Sclerotium cepivorum, um patógeno restrito a espécies de Allium. Presentemente não existem medidas eficientes de controle a podridão branca, mas o conhecimento da reação de genótipos de alho e cebola pode auxiliar no manejo da doença. Também pouco se sabe sobre a variabilidade do patógeno no Brasil, e a compatibilidade micelial pode ser utilizada para estimar esta variabilidade indiretamente. Desta forma, este estudo se propõe a: (i) avaliar a variabilidade de uma coleção de isolados de S. cepivorum brasileiros obtidos de cultivos de cebola e alho com o teste de compatibilidade micelial, e (ii) avaliar a reação de genótipos de cebola e alho a S. cepivorum em condições de cultivo comercial em campo. Inicialmente, a identificação de todos os isolados de S. cepivorum foi confirmada pela comparação de sequências do rDNA. Para análise de DNA, o DNA genômico total foi extraído e amplificado com os primers ITS1 e ITS4 para amplificar as regiões ITS1, ITS2 e 5.8S do DNA ribossômico. Posteriormente 52 isolados de diversas áreas produtoras de Allium sp. foram selecionados para a análise de compatibilidade micelial, em que foram confrontados todos os isolados em todas as combinações possíveis. Dois grupos de compatibilidade foram identificados. Segundo a análise do teste de compatibilidade, o grupo de 52 isolados apresenta indícios de baixa variabilidade genotípica, sendo predominantemente clonal. A resposta de genótipos de Allium spp. à prodridão branca foi avaliada em campo em 2016 e 2017. Em 2016 foi avaliada a resposta de 20 genótipos de alho e 30 de cebola, e em 2017, 12 de alho e 30 de cebola. Alguns genótipos testados em 2016 foram repetidos em 2017, como controle. Os experimentos foram conduzidos na estação experimental da Cooperativa Agropecuária do Alto Paranaíba – COOPADAP em Rio Paranaíba/MG no período de maio a setembro de 2016 e 2017. As áreas utilizadas para estes experimentos encontravam-se naturalmente infestadas com microescleródios de S. cepivorum, devido a cultivos anteriores e sucessivos de alho e cebola. Os genótipos de alho e cebola testados variaram quanto à reação à podridão branca. Dentre os genótipos de alho os que apresentaram a menor sucetibilidade e a maior produtividade foram UO 73, DDR 6024 e RAL 127. Entre os genótipos de cebola, Optima F1, Sirius F1, Franciscana IPA10, Shinju F1 e Perfecta F1 destacaram-se como os genótipos com o menor sucetibilidade e com as maiores produtividades. No segundo ano de experimento, onde as temperaturas foram mais baixas que no primeiro ano, os índices de doença foram extremamente altos e não foi possível a separação dos genótipos quanto a susceptibilidade ou resistência a doença. Ressalta-se que devido ao padrão de resposta aferido no primeiro ano de estudo, existem variações na resposta dos genótipos de alho e cebola à podridão branca que devem ser considerados do ponto de vista do manejo da doença, com também em programas de melhoramento.
Garlic (Allium sativum) and onion (Allium cepa) are among the economically most important vegetable crops in Brazil and worlwide. However, both garlic and onion sustain high losses due to white rot, the most destructive disease of these crops, caused by Sclerotium cepivorum, a pathogen restricted to Allium species. Presently, there are no single efficient control measures for white rot, but the evaluation of genetic resistance among Allium genotypes may help in disease management. In addition, little is kown on the variability of the pathogen in Brazil, which can be estimated indirectly by mycelial compatibililty testes. Therefor, this study aims to: (i) estimate the variability of a collection of S. cepivorum isolates from several Brazilian garlic and onion growing regions, and (ii) evaluate the reaction of garlic and onion genotypes to S. cepivorum in commercial growing field conditions. Initially, the identification of all S. cepivorum isolates was confirmed by the comparison of rDNA sequences. For the DNA analysis, genomic DNA was extracted and amplified with primers ITS1 and ITS4 for the ITS1, ITS2 and 5.8S ribossomic DNA regions. Subsequently fifity-two isolates from different geographical origins were selected for mycelial compatibility tests, and all isolates were confronted in all possible combinations. Two mycelial compatibility groups were identified. According to the compatibility test, the group of 52 isolates appeared to display low genotypic variability and was predominantly clonal. The reaction of Allium genoypes to white rot was evaluated in the field, in the 2016 and 2017 cropping seasons. Twenty garlic and 30 onion genotypes were evaluated in 2016, while, in 2017, 12 garlic and 30 onion genotypes were tested. Some genotypes tested in 2016 were repeated in 2017, as controls. Experiments were carried out at the Cooperativa Agropecuária do Alto Paranaíba – COOPADAP experimental fields, in Rio Paranaíba/MG, from May to September of 2016 and 2017. The fields selected for the assays were naturally infested with microesclerotia of S. cepivorum, from previous successive garlic and onion crops. Responses of garlic and onion genotypes to white rot varied. Among garlic genotypes, the ones that showed lowest degree of successibility and higher yields were UO 73, DDR 6024 and RAL 127. Among the onion genotypes, cvs. Optima F1, Sirius F1, Franciscana IPA10, Shinju F1 and Perfecta F1stood out as the genotypes with the lowest degree of successibility and greater yields. In the second experimental year, when disease levels were extremely high, associated to the prevailing lower temperatures, no differences among the genotypes were detected. From the overall field results, there are variations in the response of garlic and onion genotypes to white rot and good yields, that may be useful for disease management as well as in breeding programs.

Made available in DSpace on 2016-03-07T19:21:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-24. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-07T19:25:11Z : No. of bitstreams: 1 000858793.pdf: 4733869 bytes, checksum: 5bf1ccc788ea3ad1378e0db67d912463 (MD5)
O gênero Allium inclui espécies de importância para o consumo humano como o alho, cebola e espécies ornamentais. Algumas destas espécies por serem propagadas vegetativamente, podem ser infectadas por vírus pertencentes aos gêneros Allexivirus, Carlavirus e Potyvirus, frequentemente em infecções mistas. Leek yellow stripe virus (LYSV) pertence ao gênero Potyvirus e é considerada a espécie de maior importância na cultura do alho, de modo que foi sequenciado o genoma completo de um isolado de LYSV brasileiro (LYSV-MG) e avaliada sua diversidade genética. Seu genoma possui 10.341 nucleotídeos e codifica uma poliproteína de 3221 aminoácidos. Baseado na análise da região codificadora para a proteína P1, o isolado LYSV-MG, bem como demais coletados em regiões produtoras de alho, não foram classificados como pertencentes aos grupos S e N. Os isolados brasileiros apesar de não apresentarem a deleção na região da P1 (típica do grupo S), formaram um grupo monofilético muito próximo deste grupo e de um isolado de Okinawa, Japão. Em relação ao gene P1, os isolados brasileiros compartilharam 97-99% de identidade de nucleotídeos entre si e 51-64% com isolados de LYSV de outros países. Os dados sugerem que os isolados brasileiros de LYSV, o isolado de Okinawa e os isolados pertencentes ao grupo S podem ser provenientes de um ancestral comum antes da ocorrência da deleção na P1 e divergência dos isolados no grupo S. Como parte do doutoramento sanduíche, realizado na United States Department of Agriculture, sob orientação do Dr. John Hammond, foram estudados os vírus presentes em quatorze diferentes espécies de Allium ornamental nos Estados Unidos. As plantas foram adquiridas em floriculturas e plantadas a campo no outono de 2013 na região de Beltsville, MD. Folhas sintomáticas foram coletadas após a floração durante a primavera de 2014 e avaliadas por PCR usando primers ...
The genus Allium includes important species used for human consumption, as garlic,onion and many other species grown as ornamentals. Some of these species are propagated vegetatively and can be infected by viruses belonging to the genera Allexivirus, Carlavirus and Potyvirus, often in mixed infections. Leek yellow stripe virus (LYSV) belongs to the genus Potyvirus and is considered the most important virus in Allium species. The complete genomic sequence of Leek yellow stripe virus garlic isolate from Brazil (LYSV-MG) has been determined. The LYSV-MG genome consists of 10,341 nucleotides and encodes a deduced polyprotein of 3,221 amino acids. Based on the analysis of the coding region for P1 protein, isolate LYSV-MG and others collected in garlic producing regions, could not be classified as belonging to the groups S and N. Brazilian isolates do not have the deletion present in the P1 from the S-type group but are more closely related to S-type than to N-type isolates. The Brazilian isolates formed a monophyletic group closer to S-type and one isolate from Okinawa, Japan. Brazilian isolates share 97-99% of P1 region nucleotide identity with each other, and 51-64% with different isolates from around the world. The data suggest that Brazilian LYSV isolates are derived from an ancestral source of the Okinawa and S-type isolates, prior to the P1 deletion and divergence in the S-type isolates. As part of the doctorate sandwich in United States Department of Agriculture, under the supervision of Dr. John Hammond, viruses present in ornamental Allium from Beltsville, MD were detected. Bulbs of fourteen different species of Allium were purchased from retail nurseries and planted in the field during the fall of 2013. Leaf tissue from the flowering symptomatic plants were collected during spring 2014, and tested by PCR using generic primers for the genus Allexivirus, Carlavirus and Potyvirus. PCR-positive ...

Orientador: Renate Krause Sakate
Coorientador: Marcelo Agenor Pavan
Banca: Antonio Carlos Maringoni
Banca: Kelly Cristins Gonçalves Rocha
Banca: Jorge Alberto Marques Rezende
Banca: Tatiana Mituti
Resumo: O gênero Allium inclui espécies de importância para o consumo humano como o alho, cebola e espécies ornamentais. Algumas destas espécies por serem propagadas vegetativamente, podem ser infectadas por vírus pertencentes aos gêneros Allexivirus, Carlavirus e Potyvirus, frequentemente em infecções mistas. Leek yellow stripe virus (LYSV) pertence ao gênero Potyvirus e é considerada a espécie de maior importância na cultura do alho, de modo que foi sequenciado o genoma completo de um isolado de LYSV brasileiro (LYSV-MG) e avaliada sua diversidade genética. Seu genoma possui 10.341 nucleotídeos e codifica uma poliproteína de 3221 aminoácidos. Baseado na análise da região codificadora para a proteína P1, o isolado LYSV-MG, bem como demais coletados em regiões produtoras de alho, não foram classificados como pertencentes aos grupos S e N. Os isolados brasileiros apesar de não apresentarem a deleção na região da P1 (típica do grupo S), formaram um grupo monofilético muito próximo deste grupo e de um isolado de Okinawa, Japão. Em relação ao gene P1, os isolados brasileiros compartilharam 97-99% de identidade de nucleotídeos entre si e 51-64% com isolados de LYSV de outros países. Os dados sugerem que os isolados brasileiros de LYSV, o isolado de Okinawa e os isolados pertencentes ao grupo S podem ser provenientes de um ancestral comum antes da ocorrência da deleção na P1 e divergência dos isolados no grupo S. Como parte do doutoramento sanduíche, realizado na United States Department of Agriculture, sob orientação do Dr. John Hammond, foram estudados os vírus presentes em quatorze diferentes espécies de Allium ornamental nos Estados Unidos. As plantas foram adquiridas em floriculturas e plantadas a campo no outono de 2013 na região de Beltsville, MD. Folhas sintomáticas foram coletadas após a floração durante a primavera de 2014 e avaliadas por PCR usando primers ...
Abstract: The genus Allium includes important species used for human consumption, as garlic,onion and many other species grown as ornamentals. Some of these species are propagated vegetatively and can be infected by viruses belonging to the genera Allexivirus, Carlavirus and Potyvirus, often in mixed infections. Leek yellow stripe virus (LYSV) belongs to the genus Potyvirus and is considered the most important virus in Allium species. The complete genomic sequence of Leek yellow stripe virus garlic isolate from Brazil (LYSV-MG) has been determined. The LYSV-MG genome consists of 10,341 nucleotides and encodes a deduced polyprotein of 3,221 amino acids. Based on the analysis of the coding region for P1 protein, isolate LYSV-MG and others collected in garlic producing regions, could not be classified as belonging to the groups S and N. Brazilian isolates do not have the deletion present in the P1 from the S-type group but are more closely related to S-type than to N-type isolates. The Brazilian isolates formed a monophyletic group closer to S-type and one isolate from Okinawa, Japan. Brazilian isolates share 97-99% of P1 region nucleotide identity with each other, and 51-64% with different isolates from around the world. The data suggest that Brazilian LYSV isolates are derived from an ancestral source of the Okinawa and S-type isolates, prior to the P1 deletion and divergence in the S-type isolates. As part of the doctorate sandwich in United States Department of Agriculture, under the supervision of Dr. John Hammond, viruses present in ornamental Allium from Beltsville, MD were detected. Bulbs of fourteen different species of Allium were purchased from retail nurseries and planted in the field during the fall of 2013. Leaf tissue from the flowering symptomatic plants were collected during spring 2014, and tested by PCR using generic primers for the genus Allexivirus, Carlavirus and Potyvirus. PCR-positive ...
Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-11-18Bitstream added on 2014-06-13T19:24:10Z : No. of bitstreams: 1 000754099.pdf: 1729116 bytes, checksum: 2b7d02470d50c8efac136fc81e002d7e (MD5)
Espécies de vírus dos gêneros Potyvirus, Carlavirus e Allexivirus são comumente encontradas na cultura do alho (Allium sativum L.) e em decorrência da sua propagação vegetativa, há o acúmulo de vírus de um ciclo para outro, formando um complexo entre espécies dos gêneros citados. Uma das principais causas da redução da produtividade ocorre devido à infecção por vírus, e a termoterapia associada à cultura de tecido pode ser um método eficiente para limpeza clonal e obtenção de alho semente livre de vírus. O estudo da degenerescência do alho livre de vírus é, portanto, importante para se conhecer o número de ciclos em que o alho semente, inicialmente sadio, pode ser multiplicado no campo, sem que ocorra a redução da produtividade. Neste estudo foi verificado que após três anos a produtividade foi 13,75% superior ao alho 100% infectado por vírus. Os bulbilhos aéreos também podem ser utilizados para a multiplicação de sementes e tem como vantagem o baixo custo quando comparado à utilização de bulbos provenientes da cultura de tecido. Entretanto, essa técnica só se torna viável com a utilização de matrizes isentas de vírus, pois a transmissão de vírus para os bulbilhos aéreos, provenientes de matrizes infectadas, podem chegar a 83,33% no caso dos potyvirus, 20% para carlavirus e 70% para allexivirus, segundo dados obtidos neste trabalho. Realizar uma diagnose precisa dos vírus que infectam o alho torna-se essencial para que não ocorram falhas durante a indexação. Pôde-se observar que para a detecção dos potyvirus, utilizando o teste de ELISA indireto, deve-se utilizar folhas novas, entre 21 e 63 dias após o plantio, pois a concentração viral nesse período é a mais elevada. Diferentes técnicas como o DIBA colorimétrico, DIBA quimioluminescente, ELISA e PCR em tempo real foram avaliadas para detecção do LYSV, aos 21 dias após a inoculação...
Virus species of genera Potyvirus, Carlavirus and Allexivirus are commonly infecting garlic plants (Allium sativum L.). Due to the vegetative propagation, the accumulation of viruses might occur from one cycle to another. The infection of viruses might induce yield losses, and the technique of thermotherapy associated with meristem tip culture is an efficient method to obtain virus-free seeds. The study of degeneration of seeds free of virus is important to know the number of cycles in which garlic may be multiplied in the field without reduction of productivity. In this study it was observed that after three years, the productivity increased 13,75% compared to 100% infected seeds. Currently, aerial bulbils may be used for multiplication of seeds with low cost, compared to meristem tip culture. However, this is a viable technique only if the matrix is free of viruses, because the transmission to aerial bulbils, from infected plants can reach 83.33 % for potyviruses, 20% for carlavirus and 65% for allexivirus, data obtained in this work. An accurate diagnosis in viruses that infect garlic is important to avoid mistakes during indexing material. It was 4 observed that the best time to detect potyvirus, through ELISA test is between 21 and 63 days after planting on young leaves, as the virus concentration is higher in this period. Whem using different techniques, such as the colorimetric DIBA, chemiluminescent DIBA, ELISA, and real-time PCR, it was possible to perform the detection of LYSV 21 days after inoculation. ELISA test detected LYSV only at 21 days after inoculation, whereas using real time PCR, in 5 days after inoculation it was possible to detect the virus due to its high sensitivity. The other tests also detected the virus 21 days after infection

Orientador: Marcelo Agenor Pavan
Coorientador: Renate Krause Sakate
Banca: Marcio Martinello Sanches
Banca: Valdir Atsushi Yuki
Banca: Julio Massaharu Marubayashi
Banca: Antonio Carlos Maringoni
Resumo: Espécies de vírus dos gêneros Potyvirus, Carlavirus e Allexivirus são comumente encontradas na cultura do alho (Allium sativum L.) e em decorrência da sua propagação vegetativa, há o acúmulo de vírus de um ciclo para outro, formando um complexo entre espécies dos gêneros citados. Uma das principais causas da redução da produtividade ocorre devido à infecção por vírus, e a termoterapia associada à cultura de tecido pode ser um método eficiente para limpeza clonal e obtenção de alho semente livre de vírus. O estudo da degenerescência do alho livre de vírus é, portanto, importante para se conhecer o número de ciclos em que o alho semente, inicialmente sadio, pode ser multiplicado no campo, sem que ocorra a redução da produtividade. Neste estudo foi verificado que após três anos a produtividade foi 13,75% superior ao alho 100% infectado por vírus. Os bulbilhos aéreos também podem ser utilizados para a multiplicação de sementes e tem como vantagem o baixo custo quando comparado à utilização de bulbos provenientes da cultura de tecido. Entretanto, essa técnica só se torna viável com a utilização de matrizes isentas de vírus, pois a transmissão de vírus para os bulbilhos aéreos, provenientes de matrizes infectadas, podem chegar a 83,33% no caso dos potyvirus, 20% para carlavirus e 70% para allexivirus, segundo dados obtidos neste trabalho. Realizar uma diagnose precisa dos vírus que infectam o alho torna-se essencial para que não ocorram falhas durante a indexação. Pôde-se observar que para a detecção dos potyvirus, utilizando o teste de ELISA indireto, deve-se utilizar folhas novas, entre 21 e 63 dias após o plantio, pois a concentração viral nesse período é a mais elevada. Diferentes técnicas como o DIBA colorimétrico, DIBA quimioluminescente, ELISA e PCR em tempo real foram avaliadas para detecção do LYSV, aos 21 dias após a inoculação ...
Abstract: Virus species of genera Potyvirus, Carlavirus and Allexivirus are commonly infecting garlic plants (Allium sativum L.). Due to the vegetative propagation, the accumulation of viruses might occur from one cycle to another. The infection of viruses might induce yield losses, and the technique of thermotherapy associated with meristem tip culture is an efficient method to obtain virus-free seeds. The study of degeneration of seeds free of virus is important to know the number of cycles in which garlic may be multiplied in the field without reduction of productivity. In this study it was observed that after three years, the productivity increased 13,75% compared to 100% infected seeds. Currently, aerial bulbils may be used for multiplication of seeds with low cost, compared to meristem tip culture. However, this is a viable technique only if the matrix is free of viruses, because the transmission to aerial bulbils, from infected plants can reach 83.33 % for potyviruses, 20% for carlavirus and 65% for allexivirus, data obtained in this work. An accurate diagnosis in viruses that infect garlic is important to avoid mistakes during indexing material. It was 4 observed that the best time to detect potyvirus, through ELISA test is between 21 and 63 days after planting on young leaves, as the virus concentration is higher in this period. Whem using different techniques, such as the colorimetric DIBA, chemiluminescent DIBA, ELISA, and real-time PCR, it was possible to perform the detection of LYSV 21 days after inoculation. ELISA test detected LYSV only at 21 days after inoculation, whereas using real time PCR, in 5 days after inoculation it was possible to detect the virus due to its high sensitivity. The other tests also detected the virus 21 days after infection
Doutor

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2008.
Submitted by Fernanda Weschenfelder (nandaweschenfelder@gmail.com) on 2009-09-14T19:34:47Z No. of bitstreams: 1 2008_FelipeRosaRamos.pdf: 1585640 bytes, checksum: aecde393bbb7d3231ca26116e21a661a (MD5)
Approved for entry into archive by Luis Felipe Souza Silva(luis@bce.unb.br) on 2009-09-15T18:27:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_FelipeRosaRamos.pdf: 1585640 bytes, checksum: aecde393bbb7d3231ca26116e21a661a (MD5)
Made available in DSpace on 2009-09-15T18:27:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_FelipeRosaRamos.pdf: 1585640 bytes, checksum: aecde393bbb7d3231ca26116e21a661a (MD5) Previous issue date: 2008-04-28
A utilização do Bacillus thuringiensis na cultura do repolho para o controle da traça-das-crucíferas tem sido uma alternativa comumente utilizada pelos produtores na substituição dos tradicionais inseticidas químicos que ocasionam prejuízos ao meio ambiente e a saúde humana ao contrário dos produtos biológicos que são inócuos tanto para o homem quanto para espécies não-alvo. Ainda assim, a utilização de Bioinseticidas necessita de aprovação e registro por órgãos regulamentadores e um dos pré-requisitos para esse registro são os testes ecotoxicológicos. Visto isso, o objetivo desse trabalho foi verificar e comparar a eficiência da estirpe S1905, um produto comercial à base de B. thuringiensis e um inseticida químico à base de deltametrina no controle da traça-das-crucíferas bem como avaliar os efeitos adversos da cepa S 1905 de Bacillus thuringiensis sobre peixes da espécie Danio rerio, de caramujos da espécie Biomphalaria glabrata e de camundongos da raça C57BL6. Os resultados mostraram que os produtos biológicos apresentaram ampla vantagem em relação ao químico no controle da traça-das-crucíferas e a estirpe S1905 nas concentrações/doses testadas não apresentou toxicidade ou patogenicidade sobre nenhuma das espécies de organismos testadas, demostrando que essa estirpe além de ser eficiente no controle da traça das-crucíferas parece ter baixa periculosidade ambiental. ________________________________________________________________________________________ ABSTRACT
The using of the Bacillus thuringiensis on the cabbage culture for the control of the diamondback moth has been an alternative commonly used by the producers to substitute the traditional chemical insecticides that cause damages to the environment and to the human health, as opposed to the biological products that are harmless to the humans so as to the non-target species. Still, the using of bio-insecticides needs the approval and registration by regulation means and one of the pre-requisites to this registration are the eco-toxicological tests. Based on this, the objective of this work was to verify and compare the efficiency of strain S1905, from a commercial product made of B. thuringiensis and from one chemical insecticide made of deltametrin to control the diamondback moth as well as to evaluate the adverse effects of strain S1905 of Bacillus thuringiensis on fishes of the species Danio rerio, on snails of the species Biomphalaria glabrata and of mice of the race C57BL6. The results showed that the biological products presented a large advantage on the chemical product on the control of the diamondback moth and the strain S1905 on the tested concentrations/doses did not present toxicity nor patogenicity on none of the tested species of organisms, showing that this strain not only is efficient on the control of diamondback moth but seems to have low environmental danger.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2015.
Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-05-12T16:45:26Z No. of bitstreams: 1 2015_FrederickMendesAguiar.pdf: 1843726 bytes, checksum: 4fb24b86358626af48318bf95c8540c0 (MD5)
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A macha-alvo, causada pelo fungo Corynespora cassiicola, tornou-se uma das mais importantes doenças da parte aérea do tomateiro e pepineiro em diversas regiões produtoras do Brasil e do mundo nos últimos anos. Além do tomate e pepino, este fungo apresenta uma grande diversidade de hospedeiras sendo relatado em mais de 350 espécies de plantas, distribuídas por mais de 80 países. Os isolados deste fungo também apresentam uma grande diversidade morfológica, principalmente em relação à coloração da colônia, tamanho e formato dos conídios, dificultando ainda mais sua identificação e caracterização. Outra dificuldade relacionada à mancha-alvo é a ausência de cultivares comerciais resistentes e de fungicidas recomendados para o tomate e o pepino no Brasil, sendo um grande desafio para seu controle. Em função dos problemas apresentados, esta tese teve como objetivo investigar a variabilidade genética, morfométrica e patogênica entre isolados de Corynespora de diferentes plantas hospedeiras e regiões geográficas e verificar in vitro a sensibilidade micelial de isolados de Corynespora a diferentes fungicidas. Na caracterização molecular todos os isolados avaliados foram identificados como pertencentes à espécie C. cassiicola. Quanto à distribuição e a resolução intraespecífica dos isolados avaliados, as sequências obtidas das regiões genômicas ITS e fator de elongação 1-α apresentaram limitada resolução intraespecífica dos isolados quanto à hospedeira de origem e região geográfica de coleta nas respectivas árvores filogenéticas. Já a árvore filogenética com as sequências do gene β-tubulina apresentou melhor distribuição dos isolados quanto à hospedeira de origem, com formação de dois clados distintos, cada um representado em sua maioria por isolados provenientes da cultura do tomate e do pepino. Os treze isolados de C. cassiicola utilizados na caracterização morfométrica apresentaram grande variabilidade quanto à cor da colônia, com a ocorrência de seis diferentes cores; quanto à textura micelial, os isolados dividiram em sete com textura fina e seis com textura cotonosa; e quanto ao formato da colônia, com predominância da forma poligonal. A taxa de crescimento micelial foi de 6,05 mm/d. As dimensões dos conídios variaram de 7,39 a 386,05 μm de comprimento, 5,8 a 14,08 μm de largura e 0 a 24 para o número de pseudoseptos. Os três isolados de C. cassiicola avaliados confirmaram patogenicidade às suas hospedeiras de origem. Somente oito espécies de plantas avaliadas não apresentaram suscetibilidade aos isolados. Após caracterização molecular, morfométrica e patogênica dos isolados de C. cassiicola avaliados, concluiu-se que, exceto para a região β-tubulina, nenhuma relação entre a hospedeira de origem e a região geográfica de coleta dos isolados foi estabelecida neste estudo. No teste de sensibilidade a fungicidas, em ensaios preliminares foi obtida a dose efetiva capaz de inibir o crescimento micelial de C. cassiicola em 50% (DE50). Nos resultados, os fungicidas clorotalonil e carbendazim apresentaram altos valores da DE50 para a maioria dos isolados avaliados, com média superior a 50 mg.L-1. Para o fungicida tebuconazole, os valores da DE50 variaram de 0,50 a 18,79 mg.L-1. Já para os fungicidas pyrimethanil, fludioxonil e cyprodinil, verificou-se menores valores da DE50 quando comparados aos fungicidas anteriores. Após estes ensaios, as concentrações obtidas foram de 1 mg.L-1 para o fungicida fludioxonil, 3 mg.L-1 para cyprodinil, 5 mg.L-1 para boscalid e fluopyram, 10 mg.L-1 para tebuconazole, azoxystrobin e pyrimethanil e 50 mg.L-1 para clorotalonil e carbendazim. Os resultados obtidos no teste de inibição do crescimento micelial (ICM) de 55 isolados de C. cassiicola, mostraram uma variação entre os fungicidas e os isolados avaliados. O fungicida fludioxonil na concentração de 1 mg.L-1 apresentou maior valor de ICM quando comparado aos demais fungicidas avaliados, com valor médio de 85,69%. Já o fungicida clorotalonil apresentou menor valor de ICM, com média de 31,56%. O isolado EH-1710 apresentou maior valor de ICM de 74,14%, já o isolado EH-2125 apresentou o menor valor entre os isolados avaliados, com média de 34,57%. Os resultados obtidos evidenciam uma grande expectativa de efeitos satisfatórios do fungicida fludioxonil no controle da mancha-alvo. Já os fungicidas carbendazim, pyrimethanil, azoxystrobin e, principalmente, clorotalonil apresentam grande possibilidade de desenvolvimento de resistência dos isolados de C. cassiicola.
Target spot, caused by the fungus Corynespora cassiicola, has been one of the most important disease of the aerial parts of the tomato and cucumber plants in different regions of Brazil and world in the last years. Besides the tomato and cucumber, this fungus has a big host diversity, detected in more than 350 plants, distributed by more than 80 countries. The isolates of this fungus also have a big morfological diversity, mainly in relation to colony colour, conidia size and shape. These characters difficult its identification and characterization to species level. Another difficult concerning to target spot is the absence of resistant cultivars and fungicides recommended for tomato and cucumber in Brazil, representing a big challenge for its control. In function on the presented problems, this thesis aimed to investigate the genetic variability, morphometric and pathogenic among Corynespora isolates from different geographic regions and test the in vitro mycelial sensitivity of Corynespora isolates to different fungicides. In the molecular characterization all isolates were identified as C. cassiicola. As to distribution and intraspecific resolution of isolates, the sequences obtained from genomic regions ITS and elongation factor 1-α showed limited intraspecific resolution of the isolates as to host of origin and geographical region of collection in its phylogenetic trees. The phylogenetic tree with the sequences of β-tubulin gene showed better distribution of isolates as to its host of origin. In this tree it was formed two distinct clades, each one represented mostly by isolates from tomato and cucumber crop. Thirteen isolates of C. cassiicola used in morphometric characterization showed big variability as to color, with occurrence of six different colors; as to texture, with isolates divided into seven presenting fine texture and six with cottony texture; and as to colony shape, with predominance of polygonal shape. The mycelial growth rate was 6.05 mm/d. The dimensions of the conidia ranged from 7.39 to 386.05 mm in length, 5.8 to 14.08 mm in width and 0 to 24 for the number of pseudosepts. The three isolates of C. cassiicola tested confirmed pathogenicity to its host of origin. Only eight species of plants tested didn't show susceptibility to isolates. After molecular, morphometric and pathogenic characterization of isolates of C. cassiicola tested, was concluded that, except for β-tubulin region, no relationship between host of origin and geographical region of isolates was established in this study. In the fungicidal sensitivity test was performed in preliminary tests to determine the actual dose able of inhibiting the mycelial growth of C. cassiicola by 50% (ED50). In the results, the fungicide chlorothalonil and carbendazim showed great ED50 values to majority of isolates, with average higher to 50 mg.L-1. For the tebuconazole fungicide the values of ED50 varied from 0.50 to 18.79 mg L-1. The pyrimethanil, cyprodinil and fludioxonil fungicides presented lower values of DE50 when compared to the former fungicides. After these tests, the ED50 concentrations found were 1 mg.L-1 to fludioxonil, 3 mg.L-1 to cyprodinil, 5 mg l-1 to boscalid and Fluopyram, 10 mg.L-1 to tebuconazole, azoxystrobin and pyrimethanil and 50 mg L-1 to chlorothalonil and carbendazim. The results obtained in the inhibition test of mycelial growth (ICM) of 55 isolates of C. cassiicola, showed a variation among fungicides and isolates tested. The fludioxonil fungicide at a concentration of 1 mg L-1 showed higher ICM when compared to fungicides tested, with average of 85.69%. Already chlorothalonil fungicide showed the lowest ICM values with average of 31.56%. EH-1710 showed higher ICM of 74.14% and the isolate EH-2125 showed the lowest value of ICM among the isolates tested, with average of 34.57%. The results show a great expectation of good effects of fludioxonil fungicide on target spot control. Already carbendazim fungicides, pyrimethanil, azoxystrobin and chlorothalonil showed great possibility of development of resistance of isolates of C. cassiicola.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2016.
Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2017-02-03T14:00:48Z No. of bitstreams: 1 2016_ThaisPereiraMartins.pdf: 1887975 bytes, checksum: 70c34a740639c7a34264c3c76f0c3839 (MD5)
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O tomateiro é uma solanácea cultivada em várias partes do mundo, com fruto rico em compostos com propriedades antioxidantes e anticancerígenas. A tomaticultura está sujeita a várias doenças que podem limitar sua produção, diversos vírus têm sido descritos e estão amplamente disseminados nos campos de produção. As viroses estão dentre as doenças de maior importância, pois são de difícil controle e não existem produtos anti-virais disponíveis no mercado. A diagnose das espécies virais é realizada comumente por técnicas tradicionais e modernas, testes sorológicos como o ELISA e testes moleculares como a RT-PCR e a PCR são utilizados para detecção de patógenos previamente caracterizados. As limitações dessas técnicas aparecem quando se trata da detecção e identificação de um novo vírus. Identificar o agente causador de uma nova doença, onde não se tem informações sobre a morfologia, composição ou características químicas e físicas do patógeno, utilizando tais técnicas juntamente com microscopia eletrônica constitui uma tarefa difícil que pode demorar meses ou anos. Devido a essas dificuldades, novas abordagens para melhorar a identificação dos agentes causadores de novas doenças foram desenvolvidas. A abordagem metagenômica utilizando o método de Sanger gerou uma série de realizações importantes, porém, ao final do século XX, o sequencimento de alto desempenho (Next generation sequencing – NGS) foi lançado para suprir as limitações desse método. O sequenciamento de alto desempenho sequencia massalmente a população de ácidos nucleícos presentes em uma amostra, gerando sequências curtas de uma ou de ambas as extremidades, conhecidas como reads. O advento dessa forma de sequenciar transformou os estudos metagenômicos de grande escala em procedimentos práticos e de baixo custo. Com o objetivo de conhecer a população viral (viroma) e de obter genomas virais completos ou parciais, o sequenciamento de alto desempenho foi implementado para detectar patógenos virais em tomateiros de Brazlândia (DF), Campinas (SP) e Araguari (MG). Amostras de tomateiros que apresentavam sintomas típicos de infecções virais foram coletadas e agrupadas em cinco amostras compostas: BRAZ, com plantas de Brazlândia e AHOL, TOCA1, TOCA2, com plantas de Campinas e CAM-RNY2, com plantas de Araguari. As amostras compostas foram submetidas ao processo de semi-purificação de partículas virais, à extração de RNA e posteriormente foram enviadas para sequenciamento na plataforma Illumina HiSeq2000, na Macrogen (Coréia do Sul). Diversos vírus de ocorrência habitual nos campos de produção brasileiros foram detectados: os tospovírus Groundnut ringspot virus, o Tomato spotted wilt virus; o tobravírus Pepper ringspot virus; o crinivírus Tomato chlorosis virus; os begomovírus Sida micrantha mosaic virus e o Tomato severe rugose virus; o tymovírus Tomato blistering mosaic virus; e os potyvírus Pepper yellow mosaic virus e Potato virus Y. O Pepper mild mottle virus foi detectado como um resultado inesperado, devido à predominância de tobamoviroses causadas por Tomato mosaic virus em tomateiro. Dois contigs da amostra BRAZ geraram suspeitas de existência de uma nova espécie de ilarvírus, devido a sua baixa identidade com Ageratum latent virus e Parietaria mottle virus. O amalgavírus Southern tomato virus foi detectado em todas as bibliotecas e dois genomas semi-completos foram montados (STV-DF e STV-MG). Esses genomas mostraram alta identidade de nucleotídeos entre si e com os demais isolados de STV depositados no banco de dados. O STV é um vírus de RNA fita-dupla de aproximadamente 3,5 Kbp, pertencente ao gênero Amalgavirus, que foi descrito na América do Norte (Estados Unidos e México). Não há evidências de transmissão mecânica ou por enxertia desse vírus, porém, estudos anteriores confirmaram elevadas taxas de transmissão vertical (70% – 90%). Os relatos desse vírus têm crescido nos últimos anos, foi relatado também na França, na Espanha, na China, na Itália e em Bangladesh. A detecção sempre em co-infecção com outros vírus e a ausência de sintomas em plantas positivas para o vírus gerou dúvidas a respeito de sua patogenicidade, porém sua alta taxa de transmissão vertical e a expansão de sua distribuição gerou preocupações para a indústria do tomate. Maiores estudos são necessários para definir o efeito de sua presença em lotes de sementes comerciais e o seu potencial de patogenicidade. Com o objetivo de caracterizar o isolado de STV encontrado no Brasil, a presença desse vírus foi confirmada e foi realizado um estudo filogenético, além da detecção por RT-PCR em plantas coletadas no campo e em sementes comerciais de tomateiro utilizando dois pares de primers. Todas as amostras compostas originais testadas apresentaram resultados positivos para RT-PCR, com ambos os primers. A clonagem e sequenciamento de fragmento gerado a partir da amostra BRAZ possibilitou a obtenção dos nucleotídeos faltantes na sequência STV-DF. A análise filogenética da RNA polimerase pelo método da máxima verossimilhança, mostrou agrupamento dos isolados de STV-DF e STV-MG com as demais sequências de STV. Os isolados de STV permaneceram próximos a outros vírus pertencentes à família Amalgaviridae, que se mostraram mais próximos dos vírus da família Partitiviridae que do vírus pertencente à família Totiviridae. O vírus foi detectado em amostras coletadas em Brazlândia e Taquara (DF), em São José do Rio Preto (SP), em Corúmba de Goiás, Morrinhos e Goianápolis (GO) e em Reserva (PR) As plântulas testadas das cultivares Predador, Santa Clara, H-9992 e H-9553 também apresentaram resultados positivos para infecção por STV. A alta similaridade entre os isolados de STV encontrados e os existentes e a detecção desse vírus em plântulas de sementes comerciais indicam uma provável introdução do vírus através de materiais vegetais importados. Aproximadamente um sétimo dos vírus de plantas conhecidos são transmitidos por sementes de pelo menos uma espécie vegetal por ele infectada. A detecção desse vírus em plântulas oriundas de sementes comerciais demonstra a fragilidade do controle do material vegetal que entra no país. Quatorze países exportam sementes de tomate para o Brasil sem a análise de risco de pragas por estarem autorizados pelo MAPA. Embora a importação seja importante para a economia do país, a ineficiência das medidas fitossanitárias para autorizar a entrada das sementes pode trazer consequências desastrosas para agricultura brasileira.
The tomato is a solanaceous plant, rich in substances with antioxidant properties, and which is cultivated in several regions of the world. Susceptible to infection by different viruses, the tomato production has serious risks that limit its production. Viruses are among the most important diseases because of the difficulty in their control. The diagnosis of viral species is commonly carried out by traditional and modern techniques, such as serological and molecular tests such as PCR or RT-PCR, which are used to detect previously characterized pathogens. These tools have limitation in cases when there is a need for detection and identification of unknown viruses. The identification of the etiological agent of a new disease, i.e. without information on particle morphology, genome composition and chemical and physical properties, starting from electron microscopy, is a difficult task that can take months or years to accomplish. To circumvent these difficulties, new techniques were developed. The metagenomics approach, using the Sanger method, has generated a number of important achievements, but at the end of the 21st century, high-performance sequence was launched to overcome the limitations of this method. The Next generation sequencing (NGS) strategy enables the determination of sequences of the whole population of nucleic acids present in a sample, by generating sequences of one or both ends (named reads). The advent of this sequencing technique has transformed metagenomic studies of large-scale practical and with a low cost. In order to determine the viral population (virome) and assemble the complete or partial viral genomes present in tomato plants, high-performance sequencing has been implemented in plants collected in the regions Brazlândia (DF), Campinas (SP) and Araguari (MG). Tomato samples with typical symptoms of viral infections were collected and grouped into five composite samples: BRAZ, containing plants collected in Brazlândia; AHOL, TOCA1, TOCA2 from Campinas; and CAM-RNY2 from Araguari. The composite samples were subjected to the process of semi-purification of viral particles, extraction of RNA and sequencing on Illumina platform HiSeq2000 at Macrogen, Inc. (South Korea). Several viruses commonly found in Brazilian production fields were detected, such as tospovírus Groundnut ringspot virus and Tomato spotted wilt virus; the tobravírus Pepper ringspot virus; the crinivírus Tomato chlorosis virus; the begomovírus Sida micrantha mosaic virus and Tomato severe rugose virus; the tymovírus Tomato blistering mosaic virus; and the potyvírus Pepper yellow mosaic virus and Potato virus Y. The tobamovirus Pepper mild mottle virus was also detected, though this result was not expected due to the predominance of Tomato mosaic virus in tomato. Two contigs generated from BRAZ sample showed a proximity to the ilarvirus Ageratum latent virus and Parietaria mottle virus suggesting the presence of a new ilarvirus in the plants. The amalgavirus Southern tomato virus (STV) was detected in all libraries and two semi-complete genomes (STV-DF and STV-MG) were assembled. These genomes showed high nucleotide identity each other and among other STV sequences deposited in nucleotide databases. STV is a double-stranded RNA virus of approximately 3.5 kbp, belonging to the genus Amalgavirus, which was described in North America (United States and Mexico). There is no evidence for mechanical transmission or by grafting of this virus, however, previous studies have confirmed high vertical transmission rates (70% - 90%). The reports of this virus have increased in the last years, being reported in France, Spain, China, Italy and Bangladesh. Questions regarding its pathogenicity properties are unanswered since they are usually detected in co-infection with other viruses and because of the absence of symptoms in positively infected plants. Its high rate of vertical transmission and the expansion of its worldwide spread are of big concerns for the tomato industry. Further studies are needed to define the effect of their presence in batches of commercial seeds and its potential for pathogenicity. In order to characterize the STV isolates found in Brazil, the presence of this virus has been confirmed and we performed a phylogenetic study, in addition to the RT-PCR using two primer sets, detection in plants collected in the field and in commercial tomato seeds. The original composite test samples were all positive for RT-PCR with both primer sets. The gap on the STV NGS-sequence from Brazlândia was filled by cloning and sequencing of an RT-PCR amplified fragment. The phylogenetic analysis of the RNA-dependent RNA polymerase gene by the maximum likelihood method showed grouping of STV-DF and STV-MG sequences with other STV sequences reported throughout the world. The STV sequences were closely related to viruses of other genus within the family Amalgaviridae, and to those of Partitiviridae than to those of Totiviridae. The virus was detected in new samples from Brazlândia and Taquara (DF), in São José do Rio Preto (SP), in Corumba de Goiás, Morrinhos and Goianápolis (GO), and Paraná (PR). Seedlings tested for the detection of STV of the cultivars Predator, Santa Clara, H-9992 and H-9553 were positive. The high identity among the isolates and the high incidence rate of STV in seeds indicate a possible introduction of the virus from the tomato seeds. Approximately one in seven known plant viruses is transmitted by seeds of at least one plant species. The detection of this virus in commercial seed seedling demonstrates the fragility in the control system of importation of plant materials. Fourteen countries export tomato seeds to Brazil without the need of risk analysis of pests because they are authorized by MAPA. Although this importation is important for the tomato production chain, the inefficiency of phytosanitary regulation system by authorizing the entry of contaminated seeds can have disastrous consequences for the Brazilian agriculture.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2015.
Texto parcialmente liberado pelo autor. Conteúdo restrito: capítulos I, II e III.
Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-06-29T16:49:59Z No. of bitstreams: 1 2015_RayssaAlmeidaGarcia_Parcial.pdf: 404317 bytes, checksum: 9c6cd5a3cdd519dad13504c7fdb4b4e4 (MD5)
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O algodão é uma das principais commodities da economia brasileira, alavancando o País ao posto de quinto maior produtor mundial. Entre as diferentes pragas da cotonicultura, o bicudo-do-algodoeiro é o inseto-praga mais destrutivo. Pela biotecnologia, um dos métodos alternativos de controle de insetos-praga é o silenciamento gênico, por meio do RNA interferente. Contudo, em insetos, absorção do RNA fita dupla (dsRNA) produzidos por plantas é dificultada, principalmente em decorrência da clivagem do dsRNA na planta e da ação de nucleases presentes no intestino dos insetos. Assim, os objetivos do presente estudo foram estudar o papel de nucleases intestinais de Anthonomus grandis na degradação do dsRNA e aumentar a estabilidade das moléculas de dsRNA. Primeiramente, a atividade nucleásica ácida foi detectada no homogenato intestinal de A. grandis. Por meio da busca no transcritoma de A. grandis foram encontradas três contigs codificadores de nucleases, denominados AgNuc1, AgNuc2 e AgNuc3, cujas sequências foram caracterizadas e validadas por RNAi. As três sequências apresentaram similaridade acima de 50 % em relação às outras nucleases de insetos. A análise por qPCR demonstrou que AgNuc2 e AgNuc3 foram altamente expressas no intestino de A. grandis. O silenciamento específico de AgNuc2 culminou na redução da degradação do dsRNA; demonstrando ser a principal nuclease associada à degradação de dsRNA no lúmen intestinal de A. grandis. Além disso, visando aumentar a estabilidade do dsRNA, foram desenhados dsRNAs, baseados na arquitetura de viróide, que são resistentes à ação de nucleases. A análise do movimento de dsRNA-viróide marcado com Cy3 no sistema vascular de Arabidopsis thaliana demonstrou uma localização celular específica para a estrutura do dsRNA. O dsRNA baseado na arquitetura da família Pospiviroidae, foi localizado no núcleo das células, enquanto que o dsRNA, baseado na arquitetura da família Avsunviroidae, foi localizado nos cloroplastos das células. Os dsRNAs estabilizados mostraram uma capacidade de silenciamento gênico 8 vezes superior, quando comparado ao dsRNA linear não estruturado Os dados aqui gerados contribuem para o conhecimento do mecanismo de RNAi em insetos e demonstram que as moléculas de dsRNA estabilizados apresentam grande potencial para a aplicabilidade da tecnologia do RNAi visando o controle de insetos-praga.
Cotton is one of the most important Brazilian commodities and Brazil is the fifth largest world producer. Nonetheless, productivity is constantly crippled by a variety of agricultural pests. Among the different cotton insect pests, cotton boll weevil is the most destructive. By using biotechnology strategies, one of the alternative methods for controlling crop pests is gene silencing through RNA interference. However, in insects, the absorption of double stranded RNA produced by plants is hampered due to dsRNA cleavage in plants tissues and due to the presence of insect gut nucleases. In this context, the objects of this study were to investigate the dsRNA degradation by Anthonomus grandis gut nucleases and improve the stability of dsRNA. Nucleasic activity was detected in A. grandis intestinal homogenate. After searching in A. grandis transcriptome, three contigs codifying nucleases were found, called AgNuc1, AgNuc2 and AgNuc3, whose sequences were characterized and validated by RNAi. The three sequences showed similarity above 50% when compared to other insect nucleases. qPCR analysis showed that AgNuc2 and AgNuc3 are highly expressed in A. grandis midgut. AgNuc2 gene silencing resulted on reduction of dsRNA degradation; thereby, we concluded that AgNuc2 is the main nuclease associated with dsRNA degradation in A. grandis gut lumen. Additionally, in order to increase dsRNA stability, dsRNA with viroid architecture were designed, wich are resistant to plant nucleases. Viroid-dsRNA were marked with Cy3 and analysed regarding their movement in A. thaliana vascular system, wich showed that they are adressed to a specif cellular localization. dsRNA based on Pospiviroidae family architecture was located on cell nuclei while dsRNA based on Avsunviroidae family was located in chloroplasts. Moreover, these stabilized dsRNAs showed high gene silencing activity, eight times higher than linear dsRNA. The data here generated contribute to our understandings of RNAi mechanisms in insects and show that stabilized dsRNAs exhibit great pontential in RNAi applicability aiming crop insect pest control.

Dissertação (Mestrado)
A dinâmica de insetos, associados à soja, depende dos fatores como clima, transgenia e pulverização de inseticidas que influenciam na fenologia, distribuição e abundância dos organismos, tamanho das populações de insetos. Populações de lagartas e percevejos podem variar com a região de cultivo, cultivar (transgênica ou convencional), inimigos naturais e características da espécie e manejo da cultura. O novo cenário agrícola com cultivos transgênicos, cultivares precoces, mudança na arquitetura de plantas, aumento da população de plantas/ha e cultivares adaptados a diferentes regiões requerem informações sobre a sazonalidade das pragas. Objetivou-se estudar os fatores que determinam o ataque de lagartas e percevejos em plantios de soja nos municípios de Rio Paranaíba e Lagoa Formosa na região do Alto Paranaíba, Minas Gerais, Brasil. O estudo foi conduzido nas safras de 2013/2014 e 2014/2015 com as cultivares RR (Syn 1059 e P97R01) e RR2 (Monsoy 7110 IPRO). Em dois talhões de 10 ha, com 50 pontos de avaliação/talhão. As avaliações foram realizadas com batida de pano branco de 1 metro. Abundância dos insetos foi relacionada por análise de redundância (RDA) com dados climáticos e variações sazonais. Os elementos climáticos e pulverização de inseticidas são fatores que afetam a dinâmica populacional dos insetos-praga e inimigos naturais. Lagartas da subfamília Plusiinae atingiram maiores populações, seguidas de Helicoverpa armigera e Anticarsia gemmatalis com maiores populações em ambos os anos na fase reprodutiva da soja. Fatores como temperatura do ar, precipitação pluviométrica, pulverização de inseticidas e velocidade do vento afetam a população desses insetos. Euschistus heros foi o percevejo mais abundante, seguido de Piezodorus guildinii e Nezara viridula. Sendo que a temperatura do ar e radiação solar afetam diretamente as ninfas e indiretamente os adultos. Inimigos naturais foram pouco abundantes em ambos os locais, sendo em Lagoa Formosa teve menor quantidade. Coccinelídeos foram afetados negativamente e indiretamente pelas pulverizações de inseticidas. O fator Bt não influenciou a dinâmica e os surtos populacionais de pragas de soja.

Submitted by Matheus Bravo de Souza (matheusbravosouza@gmail.com) on 2018-09-12T01:49:32Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Matheus_Bravo_de_Souza_2018.pdf: 1480906 bytes, checksum: f25d88d208b2e85f665f1aab67b15b6a (MD5)
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Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
A cultura do amendoim representa uma excelente opção econômica e social para pequenos e médios produtores, uma alternativa importante para o aproveitamento de áreas agrícolas e ótima cultura para reforma dos canaviais. A cultura é, no entanto, afetada por vários problemas de ordem fitossanitária, com destaque às doenças, o principal fator para elevação dos custos de produção. As doenças fúngicas mancha-castanha e mancha-preta, causadas respectivamente por Cercospora arachidicola e Cercosporidium personatum, são responsáveis por perdas superiores a 50%, e às vezes a totalidade da produção, quando sob condições ambientais favoráveis aos patógenos e ausência de um bom manejo. Todas as cultivares empregadas são suscetíveis aos patógenos. O controle destas doenças é baseado no uso de fungicidas do grupo das estrobilurinas (IQe) e dos triazóis, combinado com os fungicidas protetores que visam também o manejo da resistência dos patógenos. São feitas até oito aplicações de fungicidas por safra, com intervalos entre as aplicações de no máximo 15 dias. Neste estudo, o controle das cercosporioses foi mediante o emprego do fungicida oxicloreto de cobre SC, aplicado isoladamente, em combinação com silício e fungicidas IQe, triazol e chlorothalonil. Os testes foram realizados com a cultivar IAC OL-3 in vitro e em campo agrícola. No teste in vitro, foi determinada a eficiência do oxicloreto de cobre SC na inibição da germinação de conídios de C. personatum comparando-o com o chlorothalonil. Já no teste a campo foram avaliados os melhores tratamentos para determinar a eficácia do fungicida cúprico no controle da C. arachidicola e C. personatum. O fungicida oxicloreto de cobre SC, foi eficiente na inibição da germinação de conídios de C. personatum in vitro nas doses de registro de 0,82 e 1,2 L ha-1, apresentando inibição entre 99% a 100%, a eficácia é comparável à dosagem empregada por chlorothalonil a 2,0 L ha-1. O emprego do posicionamento em campo agrícola do fungicida oxicloreto de cobre, na formulação SC, associado a chlorothalonil, piraclostrobina e epoxiconazol, mostra-se eficiente como medida complementar ao controle do complexo das cercosporioses na cultura do amendoim. O oxicloreto de cobre SC quando aplicado isoladamente a 1,2 L ha-1 não apresentou controle mínimo satisfatório. Não houve melhorias nos níveis de controle das cercosporioses quando do uso complementar de silício a 0,5 L ha-1.
Peanut crop represents an excellent economic and social option for small and medium producers, being an important alternative for using agricultural areas and a great crop for sugarcane field reform. However, this crop is affected by several phytosanitary problems, standing out the diseases, which are the main factors for increasing the production costs. The fungal diseases early and late leafspots, caused respectively by Cercospora arachidicola and Cercosporidium personatum, are responsible for losses of more than 50%, sometimes reaching the entire production when environmental conditions are favorable to pathogens and there is no adequate management. All the cultivars are susceptible to these pathogens. The control of these diseases is based on the use of strobilurin (QoI) and triazole fungicides combined with protective fungicides that also aim at the management of pathogen resistance. Up to eight applications of fungicides are made per crop season, with intervals between applications of up to 15 days. In this study, the control of cercosporioses was carried out using the fungicide copper oxychloride SC, applied in isolation and in combination with silicon and the fungicides QoI, triazole, and chlorothalonil. The tests were carried out in vitro and under field conditions with the cultivar IAC OL-3. In the in vitro test, the efficiency of copper oxychloride SC in the inhibition of germination of conidia of C. personatum was determined by comparing it with chlorothalonil. In the field test, the best treatments were assessed to determine the effectiveness of the cupric fungicide in the control of C. arachidicola and C. personatum. The fungicide copper oxychloride SC was efficient in inhibiting the conidia germination of C. personatum in vitro at doses of 0.82 and 1.2 L ha−1, with an inhibition between 99 and 100%. Its effectiveness is comparable to the chlorothalonil at a dose of 2.0 L ha−1. The use of copper oxychloride SC associated with chlorothalonil, pyraclostrobin, and epoxiconazole under field conditions is efficient as a complementary measure to control the cercosporioses in the peanut crop. The fungicide copper oxychloride SC, when applied in isolation at a dose of 1.2 L ha−1, did not present a satisfactory minimum control. No improvements were observed in the levels of control of the cercosporioses when using the silicon at a dose of 0.5 L ha−1.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2012.
Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2012-09-15T15:13:17Z No. of bitstreams: 1 2012_SandroCoelhoLinharesMontalvao.PDF: 2194982 bytes, checksum: f5a803522c4c5023f0e41def8b3258f8 (MD5)
Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2012-09-19T14:09:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_SandroCoelhoLinharesMontalvao.PDF: 2194982 bytes, checksum: f5a803522c4c5023f0e41def8b3258f8 (MD5)
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O trabalho foi realizado no Laboratório de Fitopatologia do Prédio de Controle Biológico da Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia (CENARGEN) com os seguintes objetivos: (a) isolar e selecionar isolados de Trichoderma antagônicos aos patógenos Sclerotinia sclerotiorum e Sclerotium rolfsii e como promotores de crescimento de plantas de tomate e (b) verificar a existência de efeitos negativos na germinação de sementes microbiolizadas com os isolados estudados. Foram utilizados 21 isolados de Trichoderma previamente selecionados, além de outros 13 obtidos de rizosfera de tomateiro para a microbiolização das sementes, sem pré-tratamento com fungicidas. Vários isolados apresentaram capacidade de supressão do crescimento das colônias dos patógenos estudados, nos estudos conduzidos in vitro, utilizando os métodos de pareamento de culturas e produção de metabólitos voláteis e não-voláteis. Promoção de crescimento de plantas foi observada com 20 isolados. Nos testes de germinação de sementes de tomate microbiolizadas com Trichoderma spp., em alguns casos, observou-se a presença de lesões cotiledonares das plântulas, porém sem interferência no número e vigor de plantas germinadas. Para o controle do tombamento de plântulas em casa de vegetação, três isolados foram eficientes, sendo eles CEN281, CEN1070 e CEN1080. Marcadores moleculares foram utilizados para identificação em nível específico, de 19 dos 34 isolados e os outros 15 estão em fase de sequenciamento. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT
This work was conducted at the Laboratory of Phytophatology in Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia (CENARGEN) with the following objectives: (a) isolate and select strains of Trichoderma against Sclerotinia sclerotiorum and Sclerotium rolfsii, and; (b) evaluate the potential to induce growth promotion of tomato plants and verify the existence of negative effects on seed germination with the isolates studied. There were used twenty one strains of Trichoderma previously selected, and another thirteen obtained from the tomato rhizosphere to microbiolization seeds without pre-treatment with fungicides. Several isolates were capable of suppressing the growth of colonies of the pathogens in vitro, using the methods of the culture pairing and production of volatile and non-volatile metabolites. A promotion of plant growth was induced by twenty Trichoderma strains. In some cases, was observed the presence of cotyledon lesions in the seedlings, in seeds with Trichoderma, but without interfering with the number and vigor of germinated seeds. For the control of damping off of seedlings in the greenhouse, three strains were efficient, CEN281, CEN1070 and CEN1080. Molecular markers were used for identification nineteen species, and the identification of the other fifteen are in process.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-02-15T10:23:53Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3767880 bytes, checksum: a6c2f4af8f28b7ef277cc58f331ac4b2 (MD5)
Made available in DSpace on 2017-02-15T10:23:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3767880 bytes, checksum: a6c2f4af8f28b7ef277cc58f331ac4b2 (MD5) Previous issue date: 2016-03-30
A introdução de pragas agrícolas em um país representa um risco para a agricultura, podendo causar danos ao meio ambiente, à economia, perdas de mercados e custos elevados em programas de controle. Portanto, é estratégico que um país que tem na agricultura o principal pilar de sua economia, como é o caso do Brasil, disponha de meios para identificar precocemente os eventos de invasão, os quais incluem o conhecimento sobre as espécies e metodologias para priorizar aquelas de maior potencial de risco. A recente declaração de estado de emergência fitossanitária deflagrado pelos prejuízos bilionários causados por Helicoverpa armigera (Hübner) (Lepidoptera: Noctuidae) colocou os produtores de grandes culturas em alerta para a possibilidade de que outras espécies de comportamento semelhante possam ser introduzidas no Brasil. Assim, o objetivo desse estudo foi avaliar de forma qualitativa e com base no roteiro preconizado pelo Comitê de Sanidade Vegetal do Cone Sul (Cosave) para análise de risco de pragas, o risco representado para o Brasil por espécies quarentenárias e não quarentenárias de Noctuidae (Lepidoptera) com relevância para as culturas de soja, milho e algodão em outras partes do mundo. As espécies foram levantadas por meio de revisão bibliográfica e consultas a bases de metadados internacionais. As espécies estudadas foram: Agrotis segetum (Denis & Schiffermüller, 1775), Autographa gamma (Linnaeus, 1758), Busseola fusca (Fuller, 1901), Chrysodeixis chalcites (Esper, 1789); Diparopsis castanea (Hampson, 1902); Diparopsis watersi (Rothschild, 1901), Earias biplaga (Walker, 1866), Earias insulana (Boisduval, 1833), Hadula trifolii (Hufnagel, 1766), Helicoverpa punctigera Wallengren, 1860, Heliothis viriplaca (Hufnagel, 1766), Mamestra brassicae (Linnaeus, 1758), Mythimna loreyi (Duponchel, 1827), Mythimna separata Walker, 1865, Sesamia calamistis (Hampson, 1910), Sesamia cretica (Lederer, 1857), Sesamia inferens (Walker, 1856), Spodoptera littoralis (Boisduval, 1833), Spodoptera exempta (Walker, 1857), Spodoptera litura (Fabricius, 1775), Spodoptera mauritia (Boisduval, 1833), Spodoptera praefica (Grote, 1875), Xestia c-nigrum (Linnaeus, 1758). As espécies de maior potencial de risco para o Brasil são: A. gamma, H. punctigera, A. segetum, S. exemptae S. littoralis.
The introduction of plant agricultural pests in a country represents a threat to agriculture as it may lead to environmental impact, economic losses, reduction in access to foreign markets and increased management costs. Thus, a country that largely relies on agriculture, should count on the strategic support of tools to identify early invasion events. These tools may include, for instance, a detailed knowledge of pests and the development of pest categorization so as to identify those that are more likely to become established and cause damage. The recent declaration of phytosanitary emergence due to the bilionary losses due to Helicoverpa armigera (Hübner) (Lepidoptera: Noctuidae) introduction increased grower awareness to the possibility of introduction of similar species. This work aims to evaluate qualitatively and based on the framework provided by the Comitê de Sanidade Vegetal do Cone Sul (Cosave) for pest risk analysis, the risk posed by regulated and non regulated noctuid (Lepidoptera) species that attack soybean, corn and cotton in other parts of the world. Species were surveyed in the scientific literature and online international databases. The following species were analysed: Agrotis segetum (Denis & Schiffermüller, 1775), Autographa gamma (Linnaeus, 1758), Busseola fusca (Fuller, 1901), Chrysodeixis chalcites (Esper, 1789), Diparopsis castanea (Hampson, 1902), Diparopsis watersi (Rothschild, 1901), Earias biplaga (Walker, 1866), Earias insulana (Boisduval, 1833), Hadula trifolii (Hufnagel, 1766), Helicoverpa punctigera Wallengren, 1860, Heliothis viriplaca (Hufnagel, 1766), Mamestra brassicae (Linnaeus, 1758), Mythimna loreyi (Duponchel, 1827), Mythimna separata Walker, 1865, Sesamia calamistis (Hampson, 1910), Sesamia cretica (Lederer, 1857), Sesamia inferens (Walker, 1856), Spodoptera littoralis (Boisduval, 1833), Spodoptera exempta (Walker, 1857), Spodoptera litura (Fabricius, 1775), Spodoptera mauritia (Boisduval, 1833), Spodoptera praefica (Grote, 1875), Xestia c-nigrum (Linnaeus, 1758). A. gamma, H. punctigera, A. segetum, S. exemptae S. littoralis were categorized as the ones that represent the highest risk for Brazil.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2007.
Submitted by Natália Cristina Ramos dos Santos (nataliaguilera3@hotmail.com) on 2009-09-30T17:28:01Z No. of bitstreams: 1 2007_CarolinaAlmeidaRamiroSilva.pdf: 1585655 bytes, checksum: 993d3ec86b5146dbd1b95c50d4d58daa (MD5)
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A lagarta Spodoptera frugiperda (J. E. Smith) é uma praga de grande importância econômica em vários países do mundo. Por ser uma espécie polífaga que ataca severamente diferentes cultivos, ter uma grande capacidade de dispersão do adulto e apresentar uma ação voraz, esse lepidóptero ocasiona perdas na produção agrícola que variam de 15 a 34%. Uma importante ferramenta para melhorar as práticas de gerenciamento da praga e seu controle é a caracterização de diferenças genéticas entre populações. O objetivo desse trabalho foi analisar a variabilidade genética entre populações de S. frugiperda de ocorrência em diferentes regiões do Brasil nas culturas de milho e algodão utilizando-se marcadores RAPD e diferenciar essas populações por meio de um marcador do DNA mitocondrial. As amplificações do DNA das amostras de S. frugiperda utilizando 20 oligonucleotídeos para cinco populações produziram um total de 752 loci de RAPD. A análise por AMOVA revelou que a maior variabilidade genética (76,34 %) foi originária de variações dentro das populações e que entre as populações foi de 23,66 %. Através do dendrograma UPGMA observou-se dois agrupamentos distintos, os das populações de S. frugiperda do milho e os das populações desta praga na cultura de algodão. As análises de RAPD diferenciaram as populações de S. frugiperda por meio de fragmentos monomórficos presentes para todos indivíduos de determinadas populações. A análise da amplificação da região NADH-DH do DNAmt mostrou a presença de um fragmento de 600 pb para as populações de S. frugiperda na cultura do milho do Brasil e do México. No entanto, nas populações oriundas das culturas do algodão do Sul e do Mato Grosso do Brasil não houve amplificação desse fragmento. Os resultados obtidos mostraram que há variabilidade genética entre as populações de S. frugiperda coletadas nas culturas do milho e do algodão de diferentes regiões do Brasil e que foi possível diferenciar as populações desta praga nessas duas culturas por meio dos marcadores de RAPD e DNAmt. Com o auxílio desses marcadores, poderão ser desenvolvidas estratégias moleculares para o monitoramento da deriva genética, dinâmica da população e o controle da dispersão desse inseto. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT
The caterpillar S. frugiperda (J.E. Smith) is a pest of great economic importance in several countries around the world. Since it is a polyphagous species that severely attacks different cultures, has a great dispersion capacity by the adult and presents a voracious action, this lepidopteran causes losses in agricultural production that varies from 15% to 34%. An important tool to improve the practices of managing of the pest and its control is the characterization of genetic differences among populations. The objective of this work was to analyze the genetic variability among populations of S. frugiperda occurring in different regions of Brazil in the crops of corn and cotton, using RAPD markers and to differentiate these populations by the marker of DNAmt. The amplifications of the DNA from the samples of S. frugiperda using 20 primers to five populations produced a total of 752 RAPD loci . Analysis by AMOVA revealed that the greatest genetic variability (76.34%) was derived from variations inside the populations and that among the populations it was 23.66%. Through the dendrogram UPGMA there are two distinct groupings, one from the populations of S. frugiperda from corn and the second from the populations of this pest in the cotton crops. The RAPD analyses differenciated the populations of S. frugiperda by the monomorphic fragments present to in? all the individuals of some populations. The analysis of the profile of the mitochondrial DNA shows in the NADH-DH the presence of a fragment of 600 bp to the populations of S. frugiperda in the corn culture in Brazil and Mexico. However in the populations derived from cotton crops in the South and in Mato Grosso in Brazil there was no amplification of this fragment. The results showed that there is a genetic variability among the populations of S. frugiperda collected on from corn and cotton from different regions of Brazil from the marker RAPD and that it was possible to differentiate the populations of this pest in these two cultures through the markers of RAPD and DNAmt. This way, molecular strategies can be developed for the monitoring of genetic deriving, population dynamics and the dispersion control of this insect.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Agronomia, 2012.
Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-10-22T13:48:39Z No. of bitstreams: 1 2012_LilianBotelhoPraça.pdf: 2439199 bytes, checksum: e72b1662fae9c4bccfa49841b222fa61 (MD5)
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Plutella xylostella (L.) (Lepidoptera: Plutellidae) é uma praga de grande importância econômica, devido aos danos provocados em cultivos de brássicas em todo o mundo. O controle desta praga é dificultado pela seleção de populações de insetos resistentes a vários inseticidas e pelo seu hábito críptico entre as folhas na cabeça do repolho. A colonização das plantas de forma endofítica por microrganismos apresenta-se como uma forma inovadora de controle sistêmico de pragas como P. xylostella. Este tipo de controle depende da seleção de estirpes de Bacillus thuringiensis (Bt) com elevada eficiência contra o inseto-alvo associado à capacidade de penetração e colonização deste na planta. Neste trabalho foram selecionadas as estirpes S1905, S2122 e S2124 altamente tóxicas a P. xylostella. As estirpes S1905 e S2124 apresentaram perfil protéico de 130 e 65 kDa e a estirpe S2122 apenas a proteína de 130 kDa, fragmentos de DNA de tamanho esperado para a detecção de genes cry1 e cry2 e cristais bipiramidais, cubóides e redondos. A habilidade destas estirpes de Bt em colonizar endofiticamente diferentes híbridos de repolho foi observada através da detecção de células vegetativas, esporos e cristais nas diferentes partes das plantas de repolho. A predominância de colonização de Bt foi verificada nas raízes. As estirpes foram avaliadas quanto à promoção de crescimento em plantas de repolho. No tratamento das sementes por 15 minutos, o sedimento da estirpe S1905 com 48 horas de crescimento apresentou um incremento de 200% no tamanho inicial das plântulas, quando comparada com a testemunha. Este trabalho demonstrou pela primeira vez a habilidade de estirpes brasileiras de Bt em colonizar e promover o crescimento de plantas de repolho, além de protegê-las contra P. xylostella . _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT
Plutella xylostella (L.) (Lepidoptera: Plutellidae) is a pest of great economic importance due to damage to brassica crops worldwide. The control of this pest is hindered by the selection of resistant populations to various insecticides and by its cryptic habit between the leaves of the cabbage head. The colonization of plants by endophytic microorganisms is an innovative way to control pests such as P. xylostella. The use of Bacillus thuringiensis (Bt) for endophytical control of the pest depends on the selection of strains with high efficiency against target insects associated with the ability to colonize and penetrate cabbage plants. This work aimed to select and characterize three Brazilian strains of B. thuringiensis toxic to P. xylostella. The S1905, S2122 and S2124 strains were highly toxic to P. xylostella. S1905 and S2124 showed two major proteins of 130 and 65 kDa, and S2122 showed only the protein of 130 kDa. The strains presented DNA fragments of the expected size for the detection of various specific cry1 and cry2 genes and bipyramidal, cuboidal and round crystals. The endophytic ability of . The colonization of plants by endophytic microngiensis to colonize plants was verified by the presence of vegetative cells, spores and crystals of the three B. thuringiensis strains in different parts of cabbage plants. The colonization of Bt occurs predominantly on roots. The strains were also evaluated in terms of promotion growth in cabbage plants. In seeds treatment for 15 minutes, the sediment of S1905 grown for 48 hours showed a growth promoting 200 times greater than the control. This study demonstrated for the first time the ability of Brazilian strains to colonize and promote the growth of cabbage plants and protect them against P. xylostella.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-graduação em Fitopatologia, 2011.
Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2012-09-14T20:54:47Z No. of bitstreams: 1 2011_LeonardoMinareBrauna.pdf: 2346526 bytes, checksum: 9843339909a8bb2b743cdb1c02f58697 (MD5)
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O mofo branco, doença causada pelo fungo Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary possui em seu ciclo de hospedeiros 408 espécies dentro de 278 gêneros, distribuídas em 75 famílias botânicas e é responsável por perdas de rendimento que podem chegar a 100% em culturas agronômicas. As medidas de controle na maioria das vezes são ineficazes. O uso de defensivos químicos é muito oneroso, tornando-se inviável. Quanto ao controle biológico, vários estudos têm sido realizados com fungos antagonistas e, dentre eles, espécies do gênero Trichoderma tem demonstrado atividade antagônica contra S. sclerotiorum, em testes conduzidos tanto em laboratório, quanto em condições de campo. Neste trabalho, 20 isolados de Trichoderma foram testados em laboratório e em casa de vegetação. Em campo, três desses isolados foram avaliados em termos de redução do impacto do patógeno sobre o desenvolvimento das culturas de feijão comum e soja. Nestes ensaios, utilizou-se além da microbiolização de sementes, aplicação no sulco de plantio com jato direto e aplicação na parte aérea por barra traçada, cuja concentração de propágulos na suspensão de inóculo para aplicação dos isolados foi de 1x109 conídios – mL-1. Nos testes de laboratório, quatro isolados apresentaram grau máximo de antagonismo (classe 1), 10 isolados alocaram-se na classe 2 e quatro na classe 3, estas duas consideradas com potencial médio e moderado de biocontrole, respectivamente. Dois isolados exerceram baixa atividade antagônica contra S. sclerotiorum (classe 4). Quanto à germinação de escleródios, 10 isolados de Trichoderma inibiram pelo menos em 90%; quatro apresentaram índices de inibição entre 80% e 65%; dois apresentaram índices de 35% e 25% e os quatro restantes não apresentaram atividade inibitória sobre os escleródios. Já nos testes com metabólitos não voláteis, verificou-se diferença significativa na inibição do crescimento de S. sclerotiorum, com os valores médios da porcentagem de inibição micelial variando desde zero (ausência de inibição) até 100%. Dentre os 20 isolados, seis apresentaram os melhores níveis de controle de doença. Os ensaios conduzidos em campo indicaram maior eficiência dos isolados quando o inoculo foi aplicado via barra, juntamente com as sementes microbiolizadas, seguindo-se a aplicação por meio de aspersão da suspensão de esporos e, por fim, onde só houve aplicação pela microbiolização das sementes, quanto ao desenvolvimento das plantas. Os resultados obtidos indicam que esses isolados são promissores para o desenvolvimento de um programa de controle biológico. Assim, foi avaliada a produção de esporos em laboratório, utilizando dois substratos preparados com diferentes teores de água e tempo de embebição. As maiores taxas de esporulação foram observadas com os CEN162 e CEN238, em arroz parboilizado. Adição de água na proporção de 80%, e períodos de embebição superiores a 15 horas favoreceram a esporulação, independentemente do substrato. Nestas condições, os isolados apresentaram diferentes picos de esporulação no decorrer de 30 dias. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT
White mold disease caused by the fungus Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary has its cycle of hosts 408 species in 278 genera, distributed in 75 botanic families and is responsible for loss of income that can reach 100 % in agronomic crops. Control measures are most often ineffective. The use of pesticides is very expensive, making it unfeasible. As for biological control, several studies have been conducted on fungi and antagonists, among them species of the genus Trichoderma have demonstrated antagonistic activity against S. sclerotiorum in trials conducted both in laboratory and in field conditions. In this study, 20 isolates of Trichoderma were tested in laboratory and greenhouse. In the field, three of these isolates were evaluated in terms of reducing the impact of the pathogen on the development of crops of beans and soybeans. In these tests, we used beyond microbiolization seed, application in furrow application with jet direct and shoot with a slash drawn, where the concentration of propagules in the inoculum suspension for application of the isolates was 1x109 conidia - mL-1. In laboratory tests, four isolates showed maximum degree of antagonism (class 1), 10 isolates allocated to the Class 2 and four in Class 3, these two considered potential biocontrol medium and moderate, respectively. Two isolates have had low antagonistic activity against S. sclerotiorum (class 4). As for the germination of sclerotia, 10 strains of Trichoderma inhibited at least 90%, four showed inhibition rates between 80% and 65% had two rates of 35% and 25% and the remaining four showed no inhibitory activity on the sclerotia. Already in the tests with non-volatile metabolites, there was significant difference in growth inhibition of S. sclerotiorum, with the mean percentage inhibition of mycelial ranging from zero (no inhibition) to 100%. Among the 20 isolates, six showed the highest levels of disease control. Tests conducted in the field suggest greater efficiency of the isolates when the inoculum was applied by bar, along with microbiolization seeds, followed by the application by spraying the spore suspension and, finally, where there was only applied by microbiolization seeds, for the development of plants. The results indicate that these isolates are promising for developing a biological control program. Thus, we evaluated the production of spores in the laboratory using two substrates prepared with different amounts of water and soaking time. The highest rates of spore production were observed with CEN162 and CEN238 in parboiled rice. Addition of water at a ratio of 80%, and soaking periods exceeding 15 hours favored sporulation, regardless of the substrate. Under these conditions, the isolates showed different peaks for spore collecting in the course of 30 days.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2017.
Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2017-04-13T14:02:07Z No. of bitstreams: 1 2017_MoanaLimaTavares.pdf: 3476137 bytes, checksum: 86b634a5033a3276f2eeb85ebea21d18 (MD5)
Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-04-18T23:03:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_MoanaLimaTavares.pdf: 3476137 bytes, checksum: 86b634a5033a3276f2eeb85ebea21d18 (MD5)
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O tomateiro (Solanum lycopersicum L.) é uma das principais hortaliças cultivadas no mundo. O cultivo de tomateiro representa uma importante atividade econômica e social no Brasil. As viroses representam um grande desafio fitossanitário para as principais regiões produtoras desta hortaliça, sendo que os begomovírus, tospovírus e crinivírus destacam-se pela importância e alta incidência. Recentemente, houve relatos de ocorrência de um tobravírus em tomateiro no Brasil e a carência de informações sobre essa virose justifica uma alta demanda para a realização de estudos sobre esse importante grupo de vírus de plantas. Representantes do gênero Tobravirus apresentam o genoma constituído por RNA senso positivo e bipartido (RNA1 e RNA2). Os tobravírus são transmitidos planta a planta por nematoides de solo e raízes dos gêneros Paratrichodorus e Trichodorus (Família Trichodoridae), considerados seus vetores naturais. Este gênero é representado por apenas três espécies, Tobacco rattle virus (TRV), Pea early-browning virus (PEBV) e Pepper ringspot virus (PepRSV). Conhecido como vírus da mancha anelar do pimentão ou vírus da faixa amarela do tomateiro, o PepRSV foi descrito somente no Brasil, causando doenças nas culturas de pimenta, alcachofra, patchuli e tomate. O primeiro isolado a ser caracterizado foi proveniente de pimenta e é conhecido como isolado CAM (Campinas-SP). Em 2012, a ocorrência de dois isolados de PepRSV foi relatada em tomateiro rasteiro em Luziânia, GO, denominados LAV e Pivo4. O objetivo geral deste trabalho foi estudar a interação de PepRSV com plantas hospedeiras e construir clones infecciosos de PepRSV (isolado CAM e LAV). Dois isolados foram utilizados, CAM de pimentão e LAV, isolado de tomateiro. Inicialmente, estes isolados foram caracterizados biologicamente e um antissoro foi produzido (cap. 2). Adicionalmente, clones infecciosos foram construídos (cap. 3). No capítulo 2, o círculo de hospedeiro foi analisado a partir inoculação mecânica em plantas indicadoras e cultivares de tomateiro. Partículas virais foram purificadas visando a produção de anticorpos em coelhos. A presença das partículas purificadas foi confirmada em microscópio eletrônico de transmissão e o antissoro anti-CP foi produzido. No capítulo 3, descreve-se a construção de clones infeciosos de PepRSV isolado CAM e LAV através da extração de RNA total, seguido por uma RT-PCR do RNA1 e RNA2 que foram inseridos no vetor de clonagem pJL-89 por Gibson Assembly. Os clones de PepRSV (isolado CAM e LAV) gerados foram agroinfiltrados em plantas de N. benthamiana. Conclui-se com esse trabalho que foi possível a produção do antissoro policlonal anti-CP que foi utilizado como técnica de detecção sorológica para determinar o círculo de hospedeiros do isolado CAM de PepRSV (infectou sistemicamente 16 plantas distintas); PepRSV isolado CAM se transloca para o sistema radícular quando inoculado na parte aérea das hospedeiras Nicotiana tabacum ‘Samsun’, N. tabacum ‘TNN’, N. rustica, Capsicum chinense PI159236, C. annuum ‘Ikeda’, S. lycopersicum cv. Santa Clara, Chenopodium quinoa e Gomphrena globosa; as cultivares de tomateiro Santa Clara, AP533, N901, U2006, Money Maker e Gaucho são suceptíveis à infecção por PepRSV isolado CAM; foi detectado um novo isolado de PepRSV denominado Ag1. Finalmente, os clones infeciosos de dois isolados construídos se mostraram infectivos em plantas de N. benthamiana, viabilizando a realização de estudos aprofundados de replicação, transmissão e translocação.
The tomato (Solanum lycopersicum L.) is one of the main vegetables grown in the world. The cultivation of tomato represents an important economic and social activity in Brazil. Viruses represent a major phytosanitary problem for the major growing regions of this vegetable, being the begomovirus, tospovirus and crinivirus the ones with great importance and high incidence. Recently, there were reports of the occurrence of a tobravirus in Brazil and the lack of information about this virus disease justifies a high demand on starting a research on this important virus group. Members of the genus Tobravirus have the genome constituted by positive sense RNA in a bipartite genome (RNA1 and RNA2). Tobraviruses are transmitted plant-by-plant by soil nematodes of the genus Paratrichodorus and Trichodorus (family Trichodoridae), considered as their natural vectors. This genus is represented by only three species, Tobacco rattle virus (TRV), Pea early-browning virus (PEBV) and Pepper ringspot virus (PepRSV). Known as ‘vírus da mancha anelar do pimentão’ or ‘vírus da faixa amarela’, PepRSV is only described in Brazil, causing diseases in pepper, artichoke, patchuli and tomato plants. The first isolate characterized was from pepper and is known as isolate CAM (Campinas-SP). In 2012, the occurrence two isolates of PepRSV was reported in processing tomatoes in Luziânia, GO, denominated LAV and Pivo4 . The general objective of this work was to study the interaction of PepRSV with the host. Two isolates were used, CAM from pepper and LAV, collected in tomato in 2012. Initially, these isolates were characterized biologically and an antibody was produced (Chapter 2). Furthermore, infectious clones were constructed (Chapter 3). In the chapter 2, the host range was analyzed afer mechanical inoculation in indicator plants, and tomato cultivars. Viral particles were purified for the production of antibodies in rabbits. The presence of the purified particles was confirmed by transmission electron microscopy, and an atibody with good specificity was produced. In the chapter 3, PepRSV infectious clones were constructed by extracting total RNA, followed by an RNA-1 and RNA2 RT-PCR that were inserted into the pJL-89 cloning vector by Gibson Assembly and later were agro-infiltrated into susceptible plants. It was concluded that it was possible to produce anti-CP polyclonal antibody; the PepRSV CAM isolate infects 16 different plants systemically; PepRSV isolate CAM translocates to the root system when inoculated on the aerial part of the hosts Nicotiana tabacum 'Samsun', N. tabacum 'TNN', N. rustica, Capsicum chinense PI159236, C. annuum 'Ikeda', S. lycopersicum cv. Santa Clara, Chenopodium quinoa and Gomphrena globosa; the tomato cultivars AP533, N901, U2006, Money Maker and Gaucho were susceptible to infection by PepRSV isolated CAM; a new PepRSV isolate named Ag1 was detected; and finally the clones of PepRSV were infectious to N. benthamiana plants.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2018.
Texto parcialmente liberado pelo autor. Conteúdo restrito: páginas 51, 52, 53, 55, 57 e anexos.
Submitted by Fabiana Santos (fabianacamargo@bce.unb.br) on 2018-08-30T18:16:15Z No. of bitstreams: 1 2018_EricaCristinaSilvaRego_PARCIAL.pdf: 2019467 bytes, checksum: 947f4fafb34f1929db0e14ebbcfd84ad (MD5)
Rejected by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br), reason: Boa tarde, Rejeitado a pedido do submetedor. on 2018-08-30T18:17:42Z (GMT)
Submitted by Fabiana Santos (fabianacamargo@bce.unb.br) on 2018-08-30T18:23:27Z No. of bitstreams: 1 2018_EricaCristinaSilvaRego_PARCIAL.pdf: 2019467 bytes, checksum: 947f4fafb34f1929db0e14ebbcfd84ad (MD5)
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Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES); Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) e Fundação de Apoio a Pesquisa do Distrito Federal (FAPDF).
A bananeira (Musa spp.) é uma das principais fontes de alimento do mundo. A banana é uma das frutas mais consumidas na maioria dos países tropicais e subtropicais, sendo componente básico da alimentação de mais de 400 milhões de pessoas. Um grande número de patógenos causam doenças na cultura da bananeira, dentre os principais agentes estão os vírus, bactérias, nematoides e fungos. Os fungos se destacam como um dos principais causadores de perdas na produção por causarem doenças como a Sigatoka-amarela, Sigatoka-negra, e Mal do Panamá. Pseudocercospora musae (Zimm.) Deighton é o agente causal da Sigatoka-amarela, e se destaca como a principal doença fúngica da bananeira. P. musae é um patógeno hemibiotrófico, e sua a infecção ocorre por meio dos estômatos. O objetivo geral desse trabalho é caracterizar os componentes moleculares presentes na interação M. acuminata – P. musae que exerçam possíveis papéis na defesa da planta frente à infecção. Desta forma foram validados nove pares de primers para oito genes de referência com o objetivo de normalizar a expressão gênica de genes alvos em RT-qPCR em Musa. Os genes utilizados foram Actina 1 (ACT1), Adenina Fosforibosil Transferase (APT), Fator de elongação 1 alfa (EF), Gliceraldeído-3-Fosfato Desidrogenase (GAPDH), Tubulina alfa (TUBA), GTP-Binding Nuclear Protein (RAN), Ubiquitina 1 (UBIQ1) e Ubiquitina 2 (UBIQ2). As análises demostraram que os genes mais estáveis foram Ubiquitina 2 e RAN. As análises de expressão diferencial de seis genes alvos por RT-qPCR demostraram que a maioria dos genes potencialmente envolvidos em processo de defesa não foram modulados. Foi realizado também sequenciamento Illumina de isolado de P. musae in vitro a fim de identificar os microRNAs (miRNAs) do fungo. Um total de 101 pré-miRNAs candidatos foram identificados, e os alvos potenciais desses miRNAs foram preditos usando a ferramenta psRNATarget, onde foram identificados um total de 381 genes alvos no genoma de Musa acuminata. Foi observado que alguns desses genes alvos tem papel potencial em resistência a estresse biótico, tais como, NBS-LRR, fatores de transcrição da superfamília WRKY, genes análogos em resistência (RGAs) tais como, RGA1 e RGA3, citocromo P450 e quinases. A identificação contínua de genes envolvidos em resposta ao estresse biótico em M. acuminata, junto com a caracterização de miRNAs no patógeno e seu papel na modulação de expressão gênica, contribuirão para o desenvolvimento de métodos de controle da doença Sigatoka-amarela.
Banana (Musa spp.) is one of the world's most important crops, and the most popular fruit in many tropical and subtropical countries. It is a staple food for millions of people throughout the developing world. Musa spp. are hosts to many infectious diseases caused bv a vast array of phytopathogenic fungi, bacteria, viruses, and nematodes. Fungal diseases may cause considerable yield losses in banana. They are responsible for diseases such as Yellow Sigatoka, Black Sigatoka, and Panama Disease. Pseudocercospora musae (Zimm.) Deighton is the causal agent of Yellow Sigatoka, and stands out as one of the main fungal diseases of banana. P. musae is a hemibiotrophic pathogen, and its´ infection occurs through the stomata. The aim of this study is to characterize molecular compounds of the interaction Musa acuminata - P. musae that may exert possible roles in defense of the plant against infection. Nine pairs of primers were validated for eight potential reference genes with the objective of enabling accurate normalization of gene expression of target genes in RT-qPCR for Musa. The genes used were Actin 1 (ACT1), Adenine phosphoribosyltransferase (APT), Elongation factor 1-alpha (EF), Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), Alpha-tubulin (TUBA), GTP-Binding Nuclear Protein (RAN), Ubiquitin 1 (UBIQ1) e Ubiquitin 2 (UBIQ2). The results showed that the most stable genes were Ubiquitin 2 and GTP-binding nuclear protein RAN. Differential expression analysis of six target genes demonstrated that most of the genes potentially involved in the defense process were not modulated. Illumina sequencing of P. musae in vitro was also carried out to identify microRNAs (miRNAs). A total of 101 candidate pre-miRNAs were identified, and potential gene targets of these miRNAs were predicted using psRNATarget. A total of 381 target genes in M. acuminata genome were identified. Some of these target genes are likely involved in resistance, such as NBS-LRRs, WRKY transcription factors, resistance gene analogs (RGAs) such as RGA1 and RGA3, cytochrome P450 and kinases. The continued characterization of resistance gene candidates in M. acuminata, together with the characterization of miRNAs in the pathogen and their role in gene expression modulation, will contribute towards the development of efficient methods for control of Yellow Sigatoka disease.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-graduação em Fitopatologia, 2015.
Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2015-10-28T14:48:53Z No. of bitstreams: 1 2015_AmandadeMeloGonçalves.pdf: 3250475 bytes, checksum: b74e9154c26b83ec3861fe69fcd4370b (MD5)
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O tomateiro (Solanum lycopersicum L.) é uma das principais hortaliças cultivadas no Brasil. A cultura pode ser afetada por diversas doenças, dentre elas destaca-se a murcha de fusário, que já foi relatada na maioria dos países onde o tomateiro é cultivado. O fungo Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (Fol) infecta tanto espécies cultivadas como espécies selvagens de tomateiro, onde coloniza as raízes e invade o sistema vascular, causando amarelecimento, murcha e posterior morte da planta. Três fatores de resistência têm sido identificados e caracterizados em espécies de Solanum (Lycopersicon) e incorporados em cultivares e híbridos comerciais. Os isolados de Fol têm sido agrupados em três raças, de acordo com a habilidade de infectar e causar doença em um conjunto de acessos diferenciadores contendo os loci de resistência I, I-2 e I-3. A identificação e caracterização genética de novas fontes e de novos alelos de resistência, bem como o estabelecimento de uma plataforma de seleção assistida por marcadores desses fatores já caracterizados, seriam importantes contribuições no sentido de aumentar a eficiência dos programas de melhoramento, permitindo, inclusive, que os melhoristas antecipem potenciais problemas relacionados ao surgimento de novas raças de Fol. Um dos principais objetivos dos modernos programas de melhoramento para resistência a doenças é o estabelecimento de sistemas de marcadores moleculares para caracterizar tanto a diversidade dos patógenos como para identificar regiões genômicas contendo alelos de resistência na planta hospedeira. Essas ferramentas moleculares fornecem uma visão mais completa do patossistema de interesse para o melhorista uma vez que possibilitam: (1) a caracterização em larga escala de um grande número de genótipos do patógeno e de genitores contrastantes da planta hospedeira; (2) a seleção de isolados representativos do patógeno para uso em sistemas efetivos de seleção e (3) a identificaçãode genes ou regiões genômicas da planta hospedeira contendo fatores de resistência. Neste contexto, os objetivos do presente trabalho foram: estudar a diversidade genética-molecular de isolados das três raças de Fol e buscar marcadores moleculares do tipo raça-específicos (Capítulo 2). Nesse trabalho, uma coleção de isolados de Fol foi caracterizada utilizando uma combinação de primers do tipo raça-específicos descritos na literatura com sendo capazes de discriminar isolados das três raças de Fol e também isolados F. oxysporum f. sp. radicis-lycopersici. A diversidade entre as raças foi avaliada utilizando primers universais buscando polimorfismos que serviram de base para o desenho de novos primers raça-específicos. Estes estudos são de grande valor no diagnóstico e na identificação de diferentes isolados de forma rápida e eficaz. Outro objetivo foi a caracterização genética de populações segregantes obtidas a partir de cruzamentos entre genótipos suscetíveis e resistentes às diferentes raças, visando identificar e validar novos marcadores associados a resistência a murcha de fusário em tomateiro (Capítulos 3 e 4). Para isso, as populações F2 foram inoculadas, com uma suspensão de esporos do patógeno, por meio de corte e imersão de raízes, e avaliadas quanto à resistência por meio de uma escala de notas. O DNA genômico de plantas resistentes e suscetíveis em populações segregantes para as raças 1 e 3 de Fol foi extraído e usado como molde em diferentes sistemas de marcadores, visando identificar polimorfismos ligados as essas duas características em estudo. Além disso, primers já descritos foram avaliados nas populações segregantes, para validar sua ligação aos loci de resistência. Esse aporte de informações de genômica e bioinformática tem aumentado a eficiência e oferecido uma maior segurança no processo de seleção de plantas superiores dentro dos programas de melhoramento.
The tomato (Solanum lycopersicum L.) is one of the main vegetable crops grown in Brazil, being affected by a variety of diseases under open field and protected crop conditions. Fusarium wilt has been reported in most countries where tomatoes are cultivated. The causal agent is the fungus Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (Fol), which is able to infect both cultivated and wild tomato species. This fungus colonizes the roots and invades the vascular system, causing yellowing, wilting, and plant death. Three resistance loci (I, I-2 and I-3) have been characterized in wild species of Solanum (section Lycopersicon) and incorporated into commercial cultivars. The Fol strains have been grouped into three races, according to their ability to infect and cause disease in a set of differential accessions carrying one of these three resistance loci. Identification and genetic characterization of new resistance alleles and the establishment of a marker-assisted selection platform of the already known alleles can increase the efficiency of breeding programs, allowing the breeders to anticipate potential problems related to the emergence of new races of Fol. A major objective of breeding programs is the identification of molecular markers linked to resistance alleles that allow the characterization of a large number of genotypes, selection of parental inbred lines and detection of genes of agronomic interest. Thus, the objectives of the present study were to survey the diversity of a collection of Fol races and the search for Fol race-specific molecular markers (Chapter 2). The collection of Fol isolates was characterized using race-specific primers previously reported in the literature. These primers can separate the three races of Fol as well as isolates belonging to F. oxysporum sp. radicis-lycopersici. However, this distinction has only been possible by the combination of marker systems. In this context, the diversity among races was evaluated using universal primers looking for polymorphisms that were the basis for the design of new race-specific primers. These studies are of great value in the diagnosis and identification of different strains quickly and effectively. Another objective was the genetic characterization of segregating populations obtained from crosses between genotypes susceptible and resistant to different races, aiming to validate and identify new markers associated with resistance to fusarium wilt in tomato, (Chapters 3 and 4). For this reason, distinct F2 populations were inoculated with a suspension of spores of the pathogenvia root dipping method and evaluated using a disease severity scale. The resistant and susceptible plants were evaluated in the search for polymorphisms to be used in the design of markers linked to resistance factors to Fol race 1 (gene I) and Fol race 3 (gene I-7). In addition, primers previously described were evaluated in the segregating populations to validate their linkage with these resistance loci. This genomic information and bioinformatics will be important contribution aiming to increase the selection efficiency multi-race resistance plants within the breeding programs.

Orientador: Carlos Gilberto Raetano
Coorientador: João Carlos Cury Saad
Banca: Edson Luiz Furtado
Banca: João Paulo Arantes Rodrigues da Cunha
Banca: Silvania Helena Furlan
Banca: José Otavio Machado Menten
Resumo: O feijoeiro e a soja são culturas importantes como fontes protéicas para o Brasil, e suas produtividades são seriamente afetadas pelo mofo-branco (causado por Sclerotinia sclerotiorum). Para o seu controle, é recomendado o manejo integrado da doença, no entanto, prevalece o controle químico. O controle químico desse fungo pode ser realizado por pulverização convencional com trator-pulverizador ou por fungigação. O trabalho objetivou avaliar indiretamente a atividade residual dos fungicidas fluazinam, procimidona e tiofanato metílico sobre o controle do mofo-branco pelo Detached leaf assay (DLA), aplicados por pulverização e por quimigação na soja e no feijão, avaliar o desenvolvimento de escleródios e a produtividade do feijoeiro submetido a aplicações por fungigação. Dois pré-testes foram conduzidos em casa de vegetação com os fungicidas aplicados em pulverização convencional no feijoeiro. Constatou-se que o DLA pode ser utilizado para avaliar indiretamente a atividade residual de fungicidas. Na cultura da soja, três experimentos foram conduzidos para avaliar o efeito da quimigação, da pulverização de fungicidas associados a óleo mineral e do método de Quenchers para avaliar a concentração de fungicidas no controle do mofo-branco. Pelo DLA, verificou-se que os fungicidas têm períodos residuais distintos entre eles e que lâminas d'água maiores diminuem mais rapidamente o residual do ingrediente ativo. O uso do óleo mineral não influenciou no período residual dos fungicidas ap... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
Abstract: Dry bean and soybean are very important crops as protein source in Brazil, and their yields are seriously affected by white mold (Sclerotinia sclerotiorum). To control this pathogen, integrated disease management is recommended, however, chemical control is commonly used. Fungicides can be applied by sprayer application with tractor or chemigation. The present study aimed to evaluate indirectly the residual activity of fluazinam, procymidone and thiophanate methyl on white mold control by Detached Leaf Assay (DLA), applied by conventional application (sprayer) and chemigation in soybeans and dry beans, and investigate sclerotia formation of S. sclerotiorum and yields in dry bean by chemigation application. Two pre-tests were performed under greenhouse conditions, where fungicides were applied in conventional manner (sprayer). DLA can be used to assess, indirectly, the residual activity of fungicides applied for white mold control. In soybean, three field experiments were conducted to evaluate the effect of chemigation, effectiveness of fungicides applied with adjuvant, and Quenchers method for assessing the concentration of three fungicides for white mold control. It was observed with DLA that fungicides have different effects on the residual period, where higher water levels decreased more quickly the residual activity of the active ingredient. The use of adjuvant did not influence the residual period after the first application. For Quencher method, the rates of decrease in... (Complete abstract click electronic access below)
Doutor

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2012.
Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2012-09-17T23:31:29Z No. of bitstreams: 1 2012_CarolinePedroso.pdf: 6332188 bytes, checksum: 7c213002e6f6f4f2c80bf71fc5c4ae35 (MD5)
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A cultura do feijão-vagem é constituída principalmente por variedades da espécie botânica Phaseolus vulgaris, mas também inclui cultivos de P. lunatus e de Vigna unguiculata. Diferencia-se do feijão comum pelas características das vagens, que são consumidas verdes, normalmente maiores e apresentam reduzidos teores de fibras. No Brasil, o feijão-vagem é cultivado principalmente por pequenos produtores, em cultura tutorada, com alta demanda de mão-de-obra e baseado em métodos tradicionais de plantio e uso intensivo de insumos químicos. Apesar do amplo consumo, são poucas as cultivares de feijão-vagem disponíveis no mercado brasileiro, assim como estudos de incidência de doenças e avaliação de resistência de variedades. Estudos de métodos alternativos de controle de doenças nesta cultura são raros. Entretanto, alguns trabalhos revelaram que o nim (Azadiractha indica) tem ação fungicida, inclusive sobre o oídio (Erysiphe polygoni) em feijoeiro, mas em casa-de-vegetação. Dada a relativa carência de informações sobre as doenças incidentes no feijão vagem e seu controle, este trabalho objetivou: avaliar, durante os plantios de inverno e das águas, a incidência de doenças em acessos das espécies P. vulgaris, P. lunatus e V. unguiculata (Capítulo 1); analisar os efeitos de aplicações do óleo de nim sobre o progresso de oídio em feijãovagem (P. vulgaris e V. unguiculata), em duas estações de plantio (Capítulo 2); e esclarecer se determinados componentes anatômicos e histoquímicos foliares de P. vulgaris e V. unguiculata estão relacionados com resistência à oídio (Capítulo 3). Os ensaios de campo foram conduzidos na Estação Experimental de Biologia da UnB, em duas épocas de plantio (de março a junho e de setembro a dezembro) no ano de 2009 e no de 2010. O delineamento experimental foi de blocos ao acaso, com 28 tratamentos (Capítulo 1). No Capítulo 2, o delineamento experimental foi de parcelas subdivididas, fatorial 8 X 2, objetivando o controle de oídio com óleo puro de nim em 5 genótipos de P. vulgaris, (G01, G12, G19, HT e TSMB) e 3 de V. unguiculata (G14, G17, e G20), selecionados dentre os 28 disponíveis por apresentarem reações contrastantes à oídio. Em ambos os casos, foram avaliadas as incidências de todas as doenças. O Capítulo 3, desenvolvido no laboratório de Botânica da UnB, consistiu de coleta de amostras foliares de materiais suscetíveis (G14 e G17) e resistente (TSMB) a oídio, que foram submetidas a cortes com micrótomo de mesa para posteriores análises anatômicas e histoquímicas. Verificou-se, nos quatro plantios, as seguintes doenças foliares: mosaico dourado do feijoeiro (Bean golden mosaic virus - BGMV), mosaico comum (Bean common mosaic vírus - BCMV), mosaico rugoso (Bean rugose mosaic vírus - BRMV), ferrugem (Uromyces appendiculatus), mancha angular (Pseudocercospora griseola) e oídio (Erysiphe polygoni). Além dessas, nos plantios das águas, registrou-se incidência de crestamento bacteriano (Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli). Os genótipos exibiram comportamento diferenciado quanto à resistência às doenças, demonstrando diversidade genética entre os materiais. Oídio foi a doença mais prevalente, atingindo principalmente acessos de V. unguiculata, alcançando até 100% em alguns casos. O pulgão-preto do feijoeiro (Aphis craccivora) teve preferência pelas variedades de V. unguiculata (Capítulo 1). O óleo de nim reduziu significativamente a incidência de oídio e de pulgões-pretos, além de apresentar um pequeno efeito sobre a mancha angular, mas não foi detectado nenhum efeito nas demais doenças (Capítulo 2). Os estudos de anatomia e histoquímica revelaram correlação entre a estrutura e a bioquímica foliar e a incidência de E. polygoni, de Aphis craccivora e de Bemisia tabaci (Capítulo 3). _________________________________________________________________________________ ABSTRACT
The green bean crop is mainly planted with varieties of Phaseolus vulgaris, but also includes crops of P. lunatus and Vigna unguiculata. The crop is distinguished from common bean by the characteristics of the pod, which are larger, consumed in the green stage, and present reduced fiber levels. Green beans in Brazil are usually grown by small farmers in conventional agriculture, intensive manpower and heavy use of chemicals. Despite the high demand, there are few cultivars available in the domestic market, and studies on the occurrence of diseases and evaluation of disease resistance are scarce. Alternative methods for disease control in the green bean crop are rare. Nevertheless, preliminary studies with greenhouse-grown beans have demonstrated that the neem plant (Azadiractha indica) showed a fungistatic effect against powdery mildew (Erysiphe polygoni). Considering the lack of information on the diseases of green bean and their control, this work aimed: to evaluate the incidence of diseases in the winter and rain seasons of 2009, in genotypes of P. vulgaris, P. lunatus and V. unguiculata (Chapter 1); to analyse the effects of neem oil sprays on the development of powdery mildew of P. vulgaris and V. unguiculata) (Chapter 2); and to examine if leaf anatomy and histochemical foliar components of P. vulgaris and V. unguiculata are related to resistance to powdery mildew (Chapter 3). Field assays were conducted in two planting seasons, at the University of Brasilia Experimental Biology Station, (March-June and September-December) in the years of 2009 and 2010, always with three replicates. Experimental design was a randomized complete block with 28 treatments (plant genotypes) for Chapter 1. For Chapter 2, experimental design was a 8 X 2 split factorial with main plots as genotypes (P. vulgaris genotypes G01, G12, G19, HT and TSMB and V. unguiculata genotypes G14, G17, e G2) and subplots as application of purified neem oil sprays or water. Genotypes were selected because they have presented contrasting reactions to powdery mildew in Chapter 1. Incidence of all diseases were recorded in both studies. Studies for Chapter 3 were conducted in the Botany Lab of University of Brasilia. Foliar samples of powdery mildew susceptible (G14 e G17) and resistant (TSMB) genotypes were sectioned in a table microtome for anatomic and histochemical studies. The following foliar diseases were found: Bean golden mosaic (BGMV), two initially unknown virus, later identified as Bean common mosaic (BCMV) and Bean rugose mosaic (BRMV), rust (Uromyces appendiculatus), angular leaf spot (Pseudocercospora griseola) and powdery mildew (Erysiphe polygoni). In addition, bacterial canker (Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli) was detected in the rain season. Genotypes differed as to their individual response to each disease, evidencing genetic diversity for disease reaction. Powdery mildew was the most prevalent disease, and was more severe in V. unguiculata genotypes, where it reached up to 100%. The cowpea aphid (Aphis craccivora) was most frequently detected on V. unguiculata (Chapter 1). Applications of purified neem oil significantly reduced powdery mildew and cowpea aphid incidences, and also revealed a small effect on angular spot, but not on the other diseases (Chapter 2). The anatomic and histochemical studies revealed correlation between the leaf structure and biochemistry and the incidence of powdery mildew, A. craccivora and Bemisia tabaci (Chapter 3).

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2014.
Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-03-05T18:27:07Z No. of bitstreams: 1 2014_MoabDianyDias_Parcial.pdf: 2058247 bytes, checksum: d818701cc16b594b8e15b992af281c8d (MD5)
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A soja (Glycine max) é considerada a mais importante cultura do agronegócio brasileiro. Se consideradas as lavouras contíguas da Argentina, atualmente mais de 50% da produção mundial de soja é procedente da América do Sul. Dentre diversas doenças, tem aumentado a prevalência e a intensidade da antracnose, causada principalmente por Colletotrichum truncatum. Relatos de epidemias severas, com expressiva redução de produtividade, são frequentes, especialmente nos plantios da região Centro-Norte. Pouco se sabe sobre a variabilidade morfológica, cultural e molecular de C. truncatum e de outras espécies associadas à antracnose da soja no cone sul da América do Sul. Desta forma, as características morfo-moleculares de 54 isolados de C. truncatum provenientes de regiões produtoras de soja do Brasil e da Argentina foram investigadas. Estudos morfométricos e culturais de C. truncatum, assim como o uso de RAPD, confirmam a existência desta diversidade nos isolados de C. truncatum. Alguns isolados apresentaram três tipos de conidiogênese, incluindo a formação de conídios através de células conidiogênicas nas extremidades das hifas, em conidiomas no interior de esporodóquis setosos, através de setas férteis ,e forma inédita para a espécie C. truncatum. O sistema RAPD foi eficaz para detectar a diversidade genética dos isolados de C. truncatum provenientes da América do Sul e para estabelecer o grau de similaridade entre eles. Este foi maior dentro do grupo de isolados provenientes da Argentina e menor dentro do grupo de isolados do Brasil. Além disso, os resultados correlacionaram diferentes grupos com a respectiva origem geográfica, com agrupamentos exclusivos ou quase exclusivos de isolados das províncias argentinas e brasileiras em grupos distintos. Além disso, foi reportada e caracterizada a patogenicidade de Colletotrichum cliviae, espécie de conídios cilíndricos, à soja, em comparação com C. truncatum e outras espécies de Colletotrichum. Um isolado de C. clivae originário do Estado do Tocantins foi caracterizado morfologicamente e sua relação filogenética com C. truncatum e outras espécies foi estabelecida pelo sequenciamento parcial das regiões genômicas: quitina sintetase (CHS-1), B-tubulina2 (TUB-2), gliceraldeído-3 fosfato desidrogenase (GPDH), calmodulina (CAL), Actina (ACT) e rDNA ITS (ITS) e as sequências obtidas foram comparadas com sequências de outras espécies de Colletotrichum depositadas no GeneBank. Foram evidenciados clados de Colletotrichum associados à soja através da análise filogenética gerada a partir da análise de parcimônia. A análise filogenética agrupou o isolado de Tocantins com isolados de C. cliviae, com formação de subgrupos, indicando a existência de linhagens. A patogenicidade deste isolado, juntamente com cinco outros isolados de C. truncatum foi comparada em 16 genótipos de soja e diferenças de agressividade foram detectadas. Este é o primeiro relato de C. clivae como agente etiológico da antracnose em soja e o primeiro relato da espécie no Brasil. Foi obtida a formação in vitro da fse ascógena de C. clivae, pertencente a uma espécie do gênero Glomerella. Esta descoberta reforça o conceito que a antracnose em soja é causada por um complexo de espécies de Colletotrichum, tanto de conídios falcados quanto cilíndricos. As perdas devidas à doença no Brasil permanecem inderteminadas. Ainda, são frequentes os relatos de campo sobre a baixa eficiência de fungicidas para o controle da antracnose. Desta forma, testou-se a eficácia de fungicidas atualmente registrados para a cultura, bem como foram estimadas as perdas nas condições avaliadas. Foram conduzidos ensaios em lavouras comerciais em Alvorada, TO em duas safras consecutivas, com a cv. M-Soy 9144 RR. O delineamento utilizado foi o de blocos casualizados com quatro repetições e parcelas de 18 m2 (seis linhas de seis m). Foram realizadas duas aplicações de fungicidas, nos estádios R1/R2 e R5.2, e avaliados 10 produtos comerciais registrados para a cultura. A incidência de vagens sintomáticas foi determinada em R6. Na safra 2010/2011, apenas Azoxistrobin + Ciproconazol apresentou índices de incidência da doença significativamente menores do que a testemunha, a qual não diferiu dos demais tratamentos. Na safra 2011/2012 não houve diferenças significativas entre os tratamentos e a testemunha. As incidências em vagens nas duas safras variaram entre 10.7-15.6% e 9.5-16.3% respectivamente. As produtividades variaram entre 3.288 e 3.708 Kg ha-1 nas testemunhas e máximos de 3.966 e 4.110 Kg ha-1 nas parcelas tratadas, respectivamente em 2010/2011 e 2011/2012. Foram detectadas fortes e significativas correlações negativas entre a produtividade e a incidência da antracnose (r entre 0,81 e 0,85 nas duas safras). Análise de regressão indicou que a cada 1% de incremento da doença, cerca de 90 Kg/ha de grãos foram perdidos. Conclui-se que é alta a diversidade de C. truncatum, principal agente causal da antracnose da soja na América do Sul e que populações desta espécie estão possivelmente estruturadas geograficamente; que a espécie C. clivae é patogênica à soja e ocorre em condições naturais no norte Brasil; que a doença é responsável por perdas significativas de produção e que o controle químico com fungicidas sintéticos é insuficiente como único método de manejo da doença.
Soybean (Glycine max) can be arguably considered the most important Brazilian field crop. If the contiguous Argentinian crops are included, more than 50% of the world´s production comes from South America. Among several diseases, the prevalence and intensity of anthracnose, caused mainly by Colletotrichum truncatum, is increasing. Reports of severe epidemics, with expressive yield loss are frequent, especially from North-Central Brazil, but the reasons for these are not known. Knowledge about the morphological, cultural and molecular variability of C. truncatum and other anthracnose-related species associated to soybean in South America is scarce. Therefore, the morpho-molecular characteristics of 54 South American isolates of C. truncatum were studied in Chapter I. RAPD was used for estimating the genetic variability of the isolates. Results demonstrated morphological, cultural and genetic diversity of C. truncatum. Some isolates presented three types of conidiogenesis, including conidial formation from conidiogenous cells on hyphal extremities, in conidiomas in acervuli and in a yet-unreported manner for C. truncatum, directly from fertile setae. RAPD was efficient in detecting the genetic diversity present in the collection of C. truncatum isolates from South America, and was capable of establishing the degree of intra-group similarity, which is greater in the group of Argentinian isolates as compared to the group of Brazilian isolates. Furthermore, the results evidenced the correlation of geographical origin with molecular grouping, with the exclusive or semi-exclusive assembling of Brazilian and Argentinian isolates in distinct clades. Chapter 2 aimed at the description and pathogenic characterization of Colletotrichum cliviae (a cylindrical conidia species), as a yet unreported soybean pathogen, in contrast with C. truncatum. One isolate of C. clivae, from the state of Tocantins was characterized morphologically and its phylogenetic relation to C. truncatum and other Colletotrichum species was established, by means of comparison of fragments of the genomic region of the following genes: chitin synthetase (CHS-1), B-tubulin 2 (TUB-2), glyceraldehyde-3 phosphate dehydrogenase (GPDH), calmodulin (CAL), Actin (ACT) and rDNA ITS (ITS), which were compared to the deposited sequences of several species of Colletotrichum at the GeneBank. Several clades of Colletotrichum associated to soybean were detected through parsimony analysis. The phylogenetic analysis clustered the TO isolate with other C. cliviae isolates, albeit with the formation of subgroups, indicating the presence of fungal lines. Pathogenicity and aggressiveness of the C. clivae isolate was compared with other five C. truncatum isolates, on 10 soybean genotypes, and differences in aggressiveness were detected. This is the first report of C. clivae as an etiological agent of soybean anthracnose, and the first report of the species in Brazil. The teleomorph of C. clivae was obtained in vitro and corresponds to the genus Glomerella. This finding reinforces the concept that the etiology of soybean anthracnose is complex, involves several Colletotrichum species, including species with falcate and cylindrical conidia. A systematic study of soybean losses due to anthracnose has not been attempted in Brazil. However, field reports of low fungicide efficiency against the disease are frequent. Therefore, the objective of Chapter 3 was to elucidate the level of efficiency of present-day fungicides to control the disease and estimate grain yield lost due to anthracnose. Field studies were carried out for two consecutive years in commercial crops in Alvorada County, TO, on cv. M-Soy 9144 RR. A complete randomized experimental design was used, with four replicates and 18 sq-m plots (six 6-m lines). Fungicides were applied twice, at phenological stages R1/R2 and R5.2. Ten commercial formulas, approved for use in soybean were evaluated. The incidence of symptomatic pods was determined at R6. In the 2010/2011 season, only Azoxistrobin + Cyproconazole resulted in disease levels significantly lower than in the non-sprayed control plots, but it did not differed significantly from the other treatments. In the 2011/2012 season, there were no differences among synthetic fungicide treatments and the non-sprayed control plots. The incidences of symptomatic pods varied between 10.7-15.6% and 9.5-16.3% in each respective planting season. Grain yields varied between 3,288 and 3,708 Kg ha-1 in the non-sprayed plots and maxima between 3,966 and 4,110 Kg ha-1 in treated plots, in 2010/2011 and 2011/2012, respectively. There were strong and statistically significant negative relations between grain yield and anthracnose incidence (r between 0.81 and 0.85 in the two seasons). Regression analysis indicated that for each 1% increment in disease incidence, c. 90 Kg of grain is lost per hectare. The following conclusions are offered: Populations of C. truncatum, the main etiological agent of soybean anthracnose in South America, are diverse and possibly geographically structured; C. clivae is pathogenic to soybean, and occurs naturally in field crops of Northern Brazil; Anthracnose is responsible to significant yield losses and chemical control by synthetic fungicides is insufficient for disease manage as the sole method of control.

Submitted by ANGELICA IRASEMA SIBAJA LUIS null (angie.sibaja.luis@hotmail.com) on 2017-07-21T20:54:54Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO-fin-1.pdf: 2680975 bytes, checksum: 9ec95a108587ba3f1adb98a53eaeb21f (MD5)
Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-07-26T13:04:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 sibajaluis_ai_me_soro.pdf: 2680975 bytes, checksum: 9ec95a108587ba3f1adb98a53eaeb21f (MD5)
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Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACYT)
A ocorrência de doenças tem ocasionado perdas severas na indústria aquícola. Em virtude do mau uso de produtos químicos no controle e prevenção de doenças em peixes, fica cada vez mais evidente que podem acarretar problemas de contaminação ambiental e riscos à saúde humana. Tem-se buscado novas técnicas de controle alternativo de doenças, como é o caso do emprego de óleos essenciais e extratos vegetais. O eugenol e o óleo de alho são antimicrobianos e antifúngicos naturais, ricos em compostos fenólicos. Entretanto, a eficácia depende da sua disponibilidade e preservação, portanto tem-se buscado alternativas capazes de aumentar sua eficácia, reduzir a volatilização e retardar a taxa de degradação no meio ambiente. Nesse sentido, novos procedimentos estão sendo conduzidos a fim de obter formulações mais eficazes. Polímeros e proteínas estão sendo estudados uma vez que possuem a capacidade de encapsular ativos. A zeína, principal proteína do milho, apresenta características de solubilidade e biocompatibilidade aos seres vivos, tornando a proteína adequada para a desenvolvimento de sistemas carreadores para encapsular ativos, tais como os óleos essenciais. Assim, objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento e caracterização de sistemas carreadores a partir de nanopartículas de zeína para encapsulamento de eugenol e óleo essencial de alho. As formulações apresentaram eficiência de encapsulação superior a 85% para ambos os óleos. As nanopartículas de zeína preparadas neste estudo apresentaram um tamanho médio compreendido entre 200 e 300 nm, um índice de polidispersão de 0,2 a 0,3 e potencial zeta de -31 a -27 Mv, para as nanopartículas contendo eugenol e oleo de alho, respectivamente. Sendo que as formulações se mantiveram estáveis por um período de 30 dias, e análises de infravermelho e calorimetria exploratória diferencial demostraram a interação dos ativos com a matriz proteica de zeína. Através do ensaio de cinética de liberação do eugenol observou-se que a liberação deste das nanopartículas ocorre através do transporte anômalo. Os ensaios de disco de difusão realizados para as bactérias Aeromonas hydrophila, Edwardsiella tarda e Streptococcus inae, mostraram que a formulações foram tão eficazes quanto o antibiótico comercial. Os resultados abrem novas perspectivas para a utilização de formulações baseadas em compostos naturais para o controle de doenças em peixes.
The occurrence of diseases has caused severe losses in the aquaculture industry at any stage. Due to the misuse of chemicals in the control and prevention of fish diseases, it is increasingly evident that they can lead to problems of environmental contamination and risks to human health. It has been tried to obtain new techniques of alternative control of diseases, as it is the case of the use of essential oils and vegetal extracts. Eugenol and garlic oil are antimicrobial and natural antifungals, rich in phenolic compounds. However, the efficacy of these compounds depends on their availability and preservation, therefore we have looked for alternatives capable of increasing their effectiveness, reduce the volatilization and delay the rate of degradation in the environment. In this sense, new procedures are being conducted in order to obtain more effective formulations. Polymers and proteins are being studied due to encapsulation capacity, zein, the main maize protein, has characteristics of solubility and biocompatibility. These characteristics make zein a suitable protein for the development of carrier systems to encapsulate active (essential oils). The objective of this work was the development and characterization of carrier systems from zein nanoparticles for encapsulation of eugenol and essential oil of garlic. The formulations showed encapsulation efficiency higher than 85% for both oils. The zein nanoparticles prepared in this study had an average size of 200-300 nm, a polydispersity index of 0.2 to 0.3 and a zeta potential of -31 to -27 mV. The formulations remained stable for a period of 30 days. Infrared (FTIR) and differential calorimetry (DSC) analyzes demonstrated the interaction of the active compounds with the zein protein matrix. Through the release assays it was observed that the release of eugenol by nanoparticles occurs through anomalous transport. The diffusion disc assays performed for the bactéria Aeromonas hydrophila, Edwardsiella tarda and Streptococcus inae showed that the formulations were as effective as the standard antibiotic. The results open new perspectives for their use of formulations based on natural compounds for the control of fish diseases.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Agronomia, 2017.
Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-12-08T19:34:17Z No. of bitstreams: 1 2017_ÉderEduardoMantovani.pdf: 3430138 bytes, checksum: ba55a335238ddd1f5c485fb9c3458b5b (MD5)
Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-01-04T20:18:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_ÉderEduardoMantovani.pdf: 3430138 bytes, checksum: ba55a335238ddd1f5c485fb9c3458b5b (MD5)
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As sulfoniluréias estão classificadas no grupo de herbicidas que atuam bloqueando a síntese de aminoácidos essenciais através da inibição da enzima acetolactato sintase (ALS). A inibição dessa enzima interrompe a produção de proteínas, interferindo no crescimento celular e, consequentemente, ocasionando a morte da planta. Com o desenvolvimento de cultivares de soja contendo os alelos Als1 e Als2 que conferem tolerância a diferentes princípios ativos do grupo das sulfoniluréias, esse estudo teve como objetivos testar progênies de soja quanto à presença/ausência dos alelos Als1 e Als2 e avaliar o impacto agronômico da adição desses alelos em campo sem a aplicação de herbicida do grupo das sulfoniluréias, e em um segundo experimento avaliar os efeitos da aplicação em pré-emergência do herbicida do grupo das sulfoniluréias em progênies de soja contendo os alelos Als1 e Als1+Als2 e comparar sua seletividade a progênies sem os alelos. Esses experimentos foram conduzidos nas estações experimentais da DuPont Pioneer de Planaltina, DF, safras 2014/2015 e 2015/2016, e de Sorriso, MT, safra 2014/2015. Foram avaliadas populações de soja com diferentes classes genotípicas quanto a presença/ausência dos alelos Als1 e Als2. A comparação entre as classes foi feita através do uso de diversas características agronômicas em campo com e sem a aplicação do herbicida das sulfoniluréias. Nos ensaios sem o uso do herbicida, as médias de produtividade em Planaltina e Sorriso safra 2014/2015 e em Planaltina 2015/2016 foram 2896, 2537 e 3264 kg ha-1, respectivamente. A produtividade de grãos para as classes genotípicas nula, Als1, Als2 e Als1+Als2 foram 2826, 2837, 2685 e 2835 kg ha-1, respectivamente e não diferiram estatisticamente entre si. As demais características também apresentaram comportamento semelhante entre as classes. Nas progênies avaliadas, a adição dos alelos Als1 e/ou Als2 não ocasionou alterações significativas nas características agronômicas avaliadas. No experimento com o uso do herbicida, a média de produtividade das classes Als1 e Als1+Als2, 3692 e 3745 kg ha-1, respectivamente, foram significativamente superiores à classe nula, 3554 kg ha-1, com diferença significativa entre as classes para todas as características, exceto avaliação da parcela. Isso indica a importância e a necessidade da presença dos alelos que conferem resistência, pois sob uso do herbicida as progênies que continham os alelos de resistência a sulfoniluréia foram estatisticamente superiores as progênies sem os alelos. Portanto, concluiu-se nesses experimentos que sem o uso do herbicida, o desempenho entre as classes do gene é semelhante e a adição dos alelos mutantes não altera o fenótipo das progênies de soja enquanto que sob uso do herbicida a presença dos alelos se torna crucial para o melhor desempenho da soja.
Sulfonylureas are classified in the herbicide group that acts by blocking the synthesis of essential amino acids by inhibiting acetolactate synthase enzyme (ALS). The inhibition of this enzyme disrupts the production of proteins, interfering with cell growth and consequently resulting in the death of the plant. With the development of soybean cultivars containing Als1 and Als2 alleles that confer tolerance to different active ingredients of sulfonylurea group, this study aimed to test different soybean progenies for the presence/absence of Als1 and Als2 alleles and evaluate the agronomic impact of these alleles addition in the field without sulfonylurea herbicide application, also in a second experiment, to evaluate the effects of pre-emergence sulfonylurea herbicide application in soybean progenies containing Als1 and Als1+Als2 alleles and compare their selectivity to progenies without the alleles. These experiments were conducted in experimental stations of DuPont Pioneer at Planaltina, DF, 2014/2015 and 2015/2016 seasons and at Sorriso, MT, 2014/2015 season. Soybean populations with different genotypic classes were evaluated for presence/absence of the Als1 and Als2 alleles. The comparison among classes were made using several agronomic traits in the field with and without sulfonylurea herbicide application. In the experiments without herbicide, the grain yield average at Planaltina and Sorriso 2014/2015 season and at Planaltina 2015/2016 were 2896, 2537 and 3264 kg ha-1, respectively. Yield for the genotypic classes null, Als1, Als2 and Als1+Als2 were 2826, 2837, 2685 and 2835 kg ha-1, respectively, and they were not statistically different from each other. Also, the other traits indicated similar behavior among classes. In the studied progenies, the addition of Als1 and/or Als2 alleles did not cause significant differences in the evaluated traits. While, in the experiment with herbicide application, the yield average of Als1 and Als1+Als2 classes, 3692 and 3745 kg ha-1, respectively, were significantly higher than the null class, 3554 kg ha-1, with significant difference among classes for all traits, except plot evaluation. This fact indicates the importance and necessity of alleles presence that confer resistance, since under herbicide application the progenies with the sulfonylurea resistant alleles were statistically superior than the progenies without the alleles. Therefore, it was concluded in these experiments that without the use of the herbicide, the performance among the gene classes is similar and the addition of the mutant alleles do not alter the phenotype in the soybean progenies, whereas under the herbicide application, the presence of the alleles becomes crucial for the soybean best performance.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2015.
Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-01-14T16:24:56Z No. of bitstreams: 1 2015_ NancyEuniceNiñoCastañeda.pdf: 7740594 bytes, checksum: 31b928be0bd73c18fdd2d5a4ceb2eac9 (MD5)
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Na cultura da bananeira (Musa spp.) o nematoide das galhas Meloidogyne incognita é uma das espécies predominantes principalmente no subgrupo Cavendish, causando perdas consideráveis em algumas regiões do Brasil. Meloidogyne ncognita é também considerado um dos fitoparasitas de ampla importância na agricultura mundial por sua adaptabilidade ao ambiente e ampla gama de hospedeiras. Com as limitações do melhoramento convencional no desenvolvimento de variedades resistentes de bananeiras a nematoides, o uso da genômica é uma alternativa importante para entender os mecanismos moleculares envolvidos na resposta de defesa da planta ao parasitismo. O genótipo de Musa acuminata 4279-06 foi classificado em estudos anteriores como resistente ao nematoide das galhas, e foi selecionado para este estudo com o genótipo Cavendish Grande Naine (GN), utilizado como padrão de suscetibilidade. Assim o objetivo deste trabalho foi estudar a interação M. acuminata - M. incognita a fim de identificar genes associadas ao parasitismo do nematoide e genes de defesa da planta. Inicialmente verificou-se que o ciclo de vida de M. incognita em banana GN, desde a inoculação dos J2 até a formação de fêmeas com ovos, foi de 24 dias a 25º C. Na análise histológica dos genótipos GN e 4279-06, entre 2-7 dias após de inoculação (DAI) observaram se os J2 de M. incognita penetrando pelo ápice das raízes e migrando pelo córtex até o cilindro central e aos 9 DAI já haviam estabelecido sítios de alimentação. Utilizando microscopia de fluorescência não foi observada resposta hipersensível (RH) no genótipo 4279-06, sendo que o nematoide concluiu o ciclo de vida entre 27- 30 dias, com 3-6 dias de atraso em comparação ao genótipo GN (24 dias). Foi realizada análise de transcritoma aos 3, 7 e 10 DAI nos dois genótipos, com base nos dados histológicos, utilizando a tecnologia de sequenciamento massal de RNA por Illumina e análise de bioinformática para identificar genes diferencialmente expressos relacionados ao parasitismo do nematoide e a resposta de defesa. O sequenciamento gerou um total de 510.937.976 sequências paired-end. Na análise de gene ontology (GO), um total de 320.113 termos de GO foram encontrados e relacionados às 27.604 sequências anotadas distribuídos em três categorias principais: processos biológicos (27.551 sequências), função molecular (25.362 sequências) e componente celular (25.487 sequências). Na análise de expressão diferencial, 680 genes apresentaram expressão diferencial significante. Dentre estes, 474 genes foram modulados no genótipo 4279-06 e 235 genes no genótipo GN, evidenciando uma maior regulação da expressão gênica na interação em 4279-06. Os genótipos apresentaram 29 genes comumente regulados, 445 genes exclusivamente modulados em 4279-06 e 206 em GN. Na resposta de Musa acuminata à infecção por M. incognita, foi evidente o grande envolvimento de genes ligados a fatores de transcrição das famílias MYB e WRKY, e de hormônios. Pouca resposta de defesa relacionadas ao Ácido Salicílico (de resposta a parasitas biotróficos) foi encontrada, mas sim uma ampla resposta pela via do etileno. Também foram encontrados genes que aumentam os níveis de auxinas e citocininas e que estão associados à formação de células gigantes, assim como expansinas e proteínas de domínio NAC. Proteínas da família bHLH, calose e endotransglucosilase xiloglucano foram expressas exclusivamente no genótipo 4279-06. Os resultados deste trabalho contribuem para uma maior compreensão dessa complexa interação molecular.
In banana crop (Musa spp.), the root-knot nematode Meloidogyne incognita is one of the predominant species, mainly in Cavendish (GN), causing considerable losses in some regions of Brazil. Meloidogyne incognita, also considered one of the plant parasites of wide importance in world agriculture for their adaptability to the environment and wide host range. With the difficulties of the traditional breeding programs in search for resistant varieties of bananas to nematodes, the use of genomics is an important alternative to understand the molecular mechanisms involved in plant defense response to parasitism. The banana genotype 4279-06 was classified in previous studies as resistant to the root-knot nematode, and was selected for this study, with the Cavendish Grande Naine genotype (GN) used as susceptibility standard. So the aim of this work was to study the interaction Musa acuminata - Meloidogyne incognita in order to identify genes associated with parasitism of nematode and plant defense genes. Initially, the life cycle of M. incognita in banana (NG), from the inoculation of J2 to the formation of females with eggs was 24 days at 25oC. On histological analysis of both genotypes GN and 4279-06, between 2-7 days after inoculation (DAI) it was observed that J2 of M. incognita penetrated at the roots tips and moved through the cortex to the central cylinder, and that at 9 DAI had already feeding sites established. Using fluorescence microscopy, no hypersensitive response (HR) was observed in 4279-06 genotype, and its life cycle has completed between 27- 30 days after inoculation, with 3-6 days delay in comparison with the GN genotype (24 days). Transcriptome analysis was performed at 3, 7 and 10 DAI, based on histological data, using RNA mass sequencing technology by Ilumina and bioinformatics analysis to identify differentially expressed genes related to the banana defense response in nematode interaction with the two genotypes. Sequencing generated a total of 510,937,976 sequences paired-end. In ontology gene analysis (GO), a total of 320,113 terms of GO were found and related to 27,604 annotated sequences divided into three main categories: biological processes (27,551 sequences), molecular function (25,362 sequences) and cellular component (25,487 sequences). In the analysis of differential expression, 680 genes showed significant differential expression. Of these, 474 genes were modulated in genotype 4279-06 and 235 genes in GN genotype, showing greater regulation of gene expression in the interaction with 4279-06. The genotypes showed 29 commonly regulated genes, 445 genes uniquely modulated in 4279-06 and 206 in GN. In Musa acuminata response to infection with M. incognita, was evident the great involvement of genes linked to the MYB transcription factors and WRKY families, and hormones. Little defense response related to salicylic acid (response to biotróficos parasites) was observed, but a broad response for the ethylene pathway. They have also found genes that increase the levels of cytokinins and auxins and that are associated with the formation of giant cells, like expansins and NAC domain proteins. Proteins bHLH family, callose and xyloglucan endotransglucosilase were exclusively expressed in the genotype 4279-06. These results contribute to a better understanding of this complex molecular interaction.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2016.
Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2017-01-05T14:35:38Z No. of bitstreams: 1 2016_MaurícioRossato.pdf: 3410176 bytes, checksum: deb7c72c5b63bb15ba465dfeee816c69 (MD5)
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A murcha bacteriana, atualmente reconhecida como sendo causada por um complexo de espécies do gênero Ralstonia (Ralstonia solanacearum, R. pseudosolanacearum e R. syzygii) apresenta uma ampla diversidade, podendo ser dividida em raças, biovares, filotipos e sequevares. O objetivo deste trabalho foi: (i) ampliar os conhecimentos sobre o importante complexo de espécies de Ralstonia por meio da caracterização biológica, bioquímica e molecular do isolado CNPH-RS 488, que se mostrou capaz de suplantar a resistência da linhagem ‘Hawaii 7996’; (ii) gerar um novo protocolo de identificação de biovares por meio de técnicas moleculares, visando aumentar a eficiência do processo e reduzir os custos associados com o teste de biovar; (iii) identificar novas fontes de resistência em tomateiro à murcha bacteriana em germoplasma selvagem de Solanum, considerando o melhoramento antecipatório contra possíveis novos variantes do patógeno, como o isolado CNPH-RS 488; (iv) gerar informações sobre o patossistema Coffea – Ralstonia. No presente estudo, o isolado CNPH-RS 488 foi classificado quanto ao biovar e filotipo, e foram caracterizados o seu perfil de virulência, a capacidade de suplantar de resistência da linhagem ‘Hawaii 7996’, a produção de EPS e de biofilme, bem como a sensibilidade a antibióticos e sua gama de hospedeiras. Os sistemas de marcadores RAPD/SCAR em associação com a estratégia de bulk segregant analysis foram inicialmente empregados visando o desenvolvimento de primers específicos para identificação de biovares. Para a busca por novas fontes de resistência avaliou-se uma coleção de 75 genótipos de Solanum peruvianum em comparação com as linhagens controle ‘Hawaii 7996’ (resistente) e ‘L390’ (suscetível). Os genótipos foram inoculados com os isolados CNPH-RS 488 (biovar 2A) e CNPH-RS 489 (biovar 1). O status do cafeeiro como hospedeira do complexo de espécies de Ralstonia foi demonstrado em bioensaios com nove isolados em três cultivares de Coffea arabica, comparando com a resposta do tomateiro suscetível ‘San Vito’. A confirmação da capacidade de suplantação da resistência do ‘Hawaii 7996’ pelo CNPH-RS 488 não pôde ser explicada pelos testes de produção de exopolissacarídeo e biofilme. Foi também constatado que o isolado apresenta uma maior virulência sobre espécies mais resistentes como jiló e berinjela. Onze primers RAPD foram selecionados com potencial valor diagnóstico para identificação de biovares. Amplicons obtidos com quatro primers que geraram marcadores estáveis foram clonados e a informação de sequência foi utilizada para o desenho dos primers do tipo SCAR. Os primers J1-B1-B e SCAR-i18-B2A apresentaram especificidade parcial para isolados de biovar 1 e 2A, respectivamente. Para a biovar 3, foi empregada uma estratégia de subtração in silico que permitiu o desenho de um par de primers específico para a região do gene polS (codificador da enzima sorbitol desidrogenase). Sete genótipos dos 75 de S. peruvianum foram considerados como promissoras fontes para o melhoramento do tomateiro visando à resistência à murcha bacteriana. O cafeeiro se mostrou suscetível exclusivamente a isolados de R. pseudosolanacearum, indicando os potenciais riscos que a murcha bacteriana pode apresentar para a cafeicultura brasileira. O presente trabalho destaca que a existência de isolados capazes de suplantar a resistência do tomateiro, como o CNPH-RS 488, e isso implica em potenciais riscos da disseminação dos mesmos pelo país, podendo inviabilizar as cultivares de tomateiro atualmente disponíveis no mercado e que usam a linhagem ‘Hawaii 7996’ como parental. Estudos adicionais sobre esse variante do patógeno serão necessários bem como o desenvolvimento de programas de melhoramento com novas fontes de resistência efetivas contra isolados com um perfil de virulência similar ao apresentado pelo CNPH-RS 488.
The bacterial wilt is currently recognized as being caused by a complex of three species: Ralstonia solanacearum, R. pseudosolanacearum, and R. syzygii. The causal agents of the bacterial wilt display a wide diversity, being classified in races, biovars, phylotypes, and sequevars. The objective of the present thesis was: (i) add new information about this important bacterial complex via biological, biochemical and molecular characterization of the isolate R. solanacearum CNPH-RS 488, which was found to be able to break down the resistance of the tomato (Solanum lycopersicum) inbred line ‘Hawaii 7996’; (ii) develop a new protocol for molecular characterization of biovars, focusing on making a faster and cheaper biovar identification test; (iii) search for new sources of resistance to bacterial wilt disease within a germplasm collection of wild Solanum (section Lycopersicon) species, using the preemptive breeding and developing new resistant cultivar to new and atypical strains like the CNPH-RS 488; (iv) study and characterize a new pathosystem: Coffea – Ralstonia. Studies with the isolate R. solanacearum CNPH-RS 488 involved different approaches: (1) determination of its biovar and phylotype; (2) determination of its virulence profile, including the capability of breaking down the resistance of ‘Hawaii 7996’; (3) production of exopolysaccharides (EPS) and biofilm; (4) antibiotic sensitivity, and (5) host range. The RAPD/SCAR marker systems in association with bulk segregant analysis was the strategy initially employed aiming to develop biovar-specific PCR-based markers. The search for new sources of resistance to bacterial wilt was carried using 75 Solanum peruvianum accessions and two standard lines ‘Hawaii 7996’ (resistant) and ‘L390’ (susceptible). Bioassays were carried out with two isolates, CNPH-RS 488 (biovar 2A) and CNPH-RS 489 (biovar 1). For the study of coffee as a host of the Ralstonia species complex, plants of three C. arabica cultivars were inoculated with a collection of nine isolates and their reactions were compared with that of the susceptible standard (tomato ‘San Vito’). The ‘Hawaii 7996’-resistant breaking ability of the isolate CNPH-RS 488 could not be explained by EPS and biofilm production. In addition, it was found that this isolate displayed a wider virulence profile being also able to infect accessions of scarlet eggplant and eggplant (which are naturally more tolerant to bacterial wilt). Eleven RAPD primers with potential diagnostic value for biovar were selected. Four stable amplicons (generated by four RAPD primers) were gel-purified and cloned. The sequence information was used for the design of SCAR-like primers. The primers J1-B1-B and SCAR-i18-B2A displayed partial specificity to isolates biovar 1 and 2A, respectively. For the biovar 3, it was employed the in silico subtraction technique, which allowed the design of a polS (sorbitol dehydrogenase) gene-specific primer. Seven out of the 75 S. peruvianum accessions were considered as promising sources for future use in tomato breeding programs to bacterial wilt resistance. Coffee accessions were susceptible exclusively to R. pseudosolanacearum isolates, indicating the potential risk of the bacterial wilt for the Brazilian coffee production. The present work emphasizes the existence of isolates (such as the CNPH-RS 488), which are able to break down the major sources of resistance available in tomato breeding programs. The present work also points out the potential risks of the spread of isolates with similar virulence profile across the country, which may preclude the employment of ‘Hawaii 7996’ as parental material. More studies on these variants will be necessary aiming to help the tomato breeding programs in the search for new sources of resistance to isolates with virulence profiles similar to CNPH-RS 488.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2017.
Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2018-02-27T19:26:39Z No. of bitstreams: 1 2017_BrunoFerreiradeOliveira.pdf: 2786370 bytes, checksum: 3fa18978b4cfb5fb94da7811b2a7dc70 (MD5)
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Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES); Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq).
A antracnose, uma das principais doenças de pós-colheita em jiló (Solanum aethiopicum L.), tem sido pouco investigada em vários aspectos, principalmente no que se refere a etiologia e controle que foram os objetivos desse trabalho. Para que estes estudos fossem conduzidos nas referidas áreas foi necessário que se dispusesse, inicialmente, de uma metodologia adequada que permitisse a reprodução dos sintomas da doença em condições de laboratório. Estabeleceu-se, portanto, um método de inoculação utilizando o isolado Coll-265 dentre os quatro procedimentos: 1) ferimento no fruto com um furo utilizando uma agulha de metal de 1,25 mm de diâmetro + deposição de 15 μL do inóculo (M1); 2) apenas deposição de 15 μL do inóculo sobre o epicarpo do fruto sem ferimento (M2); 3) ferimento no fruto com um furo utilizando uma agulha de metal de 1,25 mm de diâmetro + deposição de um disco de 0,5 cm de diâmetro de BDA com cultivo do fungo (M3) e 4) apenas deposição de um disco de 0,5 cm de diâmetro de BDA com cultivo do fungo sobre o epicarpo do fruto (M4). A concentração estimada do inóculo foi de 2 x 105 conídios/mL. Nas testemunhas foram depositadas água destilada esterilizada e disco de BDA sem cultivo do fungo. Avaliou-se a incidência e o diâmetro médio da lesão por tratamento. Os dados de diâmetro da lesão foram submetidos à ANOVA e teste de Tukey a 0,05 de probabilidade. Após, quinze isolados de Colletotrichum obtidos de antracnose em jiló foram testados quanto à virulência em frutos da cultivar Tinguá. Avaliou-se incidência de antracnose, diâmetro médio da lesão, períodos de incubação e latência. Os dados de diâmetro médio da lesão foram submetidos à ANOVA e testes de média Tukey e Dunnet ao nível de 5 % de significância. Em seguida, um isolado, dentre os mais virulentos, foi identificado com base em sequências de regiões genômicas gliceraldeído-3-fosfato-desidrogenase (GAPDH), actina (ACT) e beta-tubulina (TUB2), enquanto que os demais isolados virulentos foram identificados com base apenas na região genômica GAPDH. Duas árvores filogenéticas foram geradas por ‘Máxima Verossimilhança’, uma para análise multigene utilizando as sequências concatenadas e outra para GAPDH. In vitro foi observado o crescimento micelial do isolado Coll-265 em meio com quitosana nas seguintes condições: 1) batata-dextrose-ágar com quitosana a 0,1 %; 2) batata-dextrose-ágar com quitosana a 0,2 %; 3) batata-dextrose-ágar com quitosana a 0,3 % e 4) batata-dextrose-ágar com quitosana a 0,4 %. Como testemunha, apenas batata-dextrose-ágar. Todas as placas foram armazenadas em BOD a 25°C e fotoperíodo de 12 h. Iniciou-se a avaliação 48 h após a implantação do experimento pela medição do crescimento radial do fungo em dois sentidos opostos, repetindo-se a medição a cada 48 h até completar 10 dias. A taxa de crescimento micelial e a porcentagem de inibição do crescimento micelial foram calculadas. Repetiu-se uma vez o experimento adotando as mesmas condições. Para análise estatística, fez-se ANOVA, teste F e regressão. Para controle in vivo, jilós foram submetidos aos tratamentos: T1 – não revestidos e não inoculados; T2 – não revestidos e inoculados; T3 – revestidos com quitosana a 0,1 % e inoculados; T4 – revestidos com quitosana a 0,2 % e inoculados e T5 – revestidos com quitosana a 0,3 % e inoculados. Os tratamentos T1 e T2 serviram como testemunhas. Analisou-se perda de massa fresca; incidência média da doença e severidade da doença. Repetiu-se uma vez o experimento adotando as mesmas condições. Os valores de severidade da doença de cada tratamento foram utilizados para o cálculo da AACPD. Para análise estatística, fez-se ANOVA, teste F e regressão. Utilizou-se DIC para todos os experimentos. Concluiu-se que M1 foi o mais efetivo para reprodução de sintomas de antracnose em laboratório sendo utilizado nos experimentos posteriores, quando necessário. Os isolados Coll-182, Coll-265, Coll-266, Coll-297, Coll-586 e Coll-588 foram os mais virulentos, com destaque para Coll-265 e Coll-266 que apresentaram as maiores médias de diâmetro da lesõe e 100 % de incidência de antracnose. Todos os isolados virulentos foram identificados molecularmente como Colletotrichum tamarilloi. In vitro, a quitosana em todas as concentrações testadas inibiu o crescimento micelial do fungo. In vivo, o revestimento de quitosana a 0,2 % (T4) reduziu a severidade da antracnose em jiló pós-colheita, mas não impediu a sua incidência.
Anthracnose, a major post-harvest disease in scarlet eggplant fruit (Solanum aethiopicum L.), has been little investigated in several aspects, mainly regarding etiology and control, which were the objectives of this work. For these studies to be conducted it was necessary initially to have an adequate methodology that would allow the reproduction of the symptoms of the disease under laboratory conditions. A method of inoculation using the Coll-265 isolate was therefore established among the four procedures: 1) injury in the fruit with a metal needle bore of 1.25 mm diameter + deposition of 15 μL of the inoculum (M1); 2) only deposition of 15 μL of the inoculum on the epicarp of the uninjured fruit (M2); 3) injury in the fruit with a metal needle hole of 1.25 mm diameter + deposition of a 0.5 cm diameter BDA disc with fungus culture (M3) and 4) only deposition of a 0.5 cm diameter BDA disc with fungus culture on the epicarp of the fruit (M4). The estimated concentration of the inoculum was 2 x 105 conidia/ mL. Sterilized distilled water and BDA disc without culture of the fungus were deposited in the controls. The incidence and mean diameter of the lesion in each treatment were evaluated. The data of mean diameter of the lesion were submitted to ANOVA and Tukey's test at 0.05 probability. Fifteen isolates of Colletotrichum obtained from anthracnose in scarlet eggplant fruit were tested for virulence in Tinguá fruits. The incidence of anthracnose, mean lesion diameter, incubation and latency period were evaluated. The data of mean diameter of the lesion were submitted to ANOVA and Tukey’s and Dunnet’s mean tests at the 5% level of significance. The most virulent isolates were identified based on genomic sequences of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), actin (ACT) and beta-tubulin (TUB2), whereas the other virulent isolates were identified based only on the GAPDH genomic region. Two phylogenetic trees were generated by ‘Maximum Likelihood’, one for multigene analysis using the concatenated sequences and another for GAPDH. In vitro, the mycelial growth of the Coll-265 isolate in chitosan medium was observed under the following conditions: 1) potato-dextrose-agar with 0.1% chitosan; 2) potato-dextrose-agar with 0.2% chitosan; 3) potato-dextrose-agar with 0.3% chitosan and 4) potato-dextrose-agar with 0.4% chitosan. As a control, only potato-dextrose-agar. All plates were stored in BOD at 25°C and photoperiod of 12 h. The evaluation was iniciated 48 h after the implantation of the experiment by measuring radial growth of the fungus in two opposite directions, repeating the measurement every 48 h until completing 10 days. The mycelial growth rate and percent inhibition of mycelial growth were calculated. The experiment was repeated once under the same conditions. For statistical analysis, we performed ANOVA, F test and regression. For the in vivo control test, scarlet eggplant fruits were submitted to treatments: T1 - uncoated and uninoculated; T2 - uncoated and inoculated; T3 - coated with 0.1% chitosan and inoculated; T4 - coated with 0.2% chitosan and inoculated and T5 - coated with 0.3% chitosan and inoculated. The T1 and T2 treatments served as controls. Loss of fruit fresh mass was analyzed; mean incidence of disease and severity of the disease. The experiment was repeated once under the same conditions. The disease severity values of each treatment were used to calculate AACPD. For statistical analysis, we performed ANOVA, F test and regression. DIC was used for all experiments. It was concluded that M1 was the most effective for reproduction of anthracnose symptoms in the laboratory and, therefore, it was used in later experiments when necessary. Coll-265, Coll-266, Coll-266, Coll-297, Coll-586 and Coll-588 isolates were the most virulent, with Coll-265 and Coll-266 showing the highest lesion diameter means and 100% incidence of anthracnose. All virulent isolates were molecularly identified as Colletotrichum tamarilloi. In vitro, chitosan at all concentrations tested inhibited fungal mycelial growth. In vivo, the 0.2% chitosan coating (T4) reduced the severity of anthracnose in post-harvest jelly but did not prevent its incidence.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2015.
Submitted by Patrícia Nunes da Silva (patricia@bce.unb.br) on 2016-02-05T13:05:53Z No. of bitstreams: 1 2015_AlaersonMaiaGeraldine_Parcial.pdf: 11895274 bytes, checksum: 0a59c54f104d2e95f8af0824dd15d853 (MD5)
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Apesar do grande número de estudos sobre doenças causadas por Sclerotiniasclerotiorum, os processos componentes do ciclo das doenças nos diferentes hospedeiros são quase sempre estudados independentemente. O ciclo das doenças causadas por Sclerotiniaé bastante complexo, e pode ser dividido em quatro fases, correspondendo a estruturas típicas do ciclo de vida do patógeno. Essas fases correspondem à formação e função biológica de quatro tipos de propágulos: (1) escleródios, (2) apotécios e ascósporos, (3) pétalas infectadas, e (4) hifas infecciosas. Um etográfico serve para sintetizar o conhecimento relevante sobre a epidemiologia de uma doença. No primeiro capítulo, versões sucessivas de um etográfico são usadas para discutir a fenomenologia do mofo-branco do feijoeiro, enfatizando as relações entre propágulos de S. sclerotiorum, os sucessivos estágios da doença e os estágios de desenvolvimento do hospedeiro. O etográfico descreve a fenomenologia do mofo-branco do feijoeiro através do exame dos vários estágios do ciclo da doença em maior detalhamento do que geralmente é apresentado, e leva em consideração a concatenação de eventos pertinente ao ciclo. O método é útil em identificar os estágios-chave do ciclo e em explicitar as relações entre os estágios da doença, os quatro tipos de propágulos e os fatores que afetam seus respectivos processos de infecção. A abordagem também é útil como primeiro passo para modelagem quantitativa do mofo-branco do feijoeiro. No capítulo 2, foram analisados os estágios sucessivos (fases das epidemias), bem como seus processos de regulação e fatores envolvidos. Foram estudadas epidemias em lavouras de feijão, em condições ambientais naturais prevalecentes no período de inverno no Brasil Central. Os conjuntos de epidemias experimentais objetivaram promover uma série de epidemias de mofo branco. Cinquenta e sete epidemias, representando uma grande variação em níveis de severidade e formas de progresso da doença foram monitorados com atenção específica para os quatro tipos de propágulos considerados. As epidemias foram analisadas por diferentes técnicas estatísticas e três grupos (A, B e C) de epidemias foram identificados. O Grupo A inclui epidemias de lento estabelecimento, desenvolvidas em uma baixa taxa de infecção e levaram a incidências e severidades finais muito baixas. As epidemias no Grupo C tiveram um início precoce, progrediram muito rapidamente com uma taxa de infecção inicialmente elevada, seguida de estabilização. As epidemias no Grupo B apresentaram um comportamento intermediário, inicialmente com baixa taxa de progresso da doença, seguido por um forte aumento da taxa de infecção da folhagem em fases posteriores. Supõe-se que a infeção planta-a-planta (infecção secundária) ocorre raramente em epidemias do grupo A devido menor frequência de contatos efetivos, resultando em um pequeno número de lesões na folhagem e baixa incidência de plantas doentes (média de 12% de incidência). Por outro lado, presume-se que, em epidemias do Grupo C, infecções planta-a-planta ocorrem com frequência, devido maior frequência de contatos efetivos, que conduz a um número muito maior de lesões e maior incidência de plantas doentes (média de 81% de plantas doentes). Portanto, mesmo considerando a relevância do inóculo primário na forma de escleródios e a subsequente formação de apotécios, o papel das infecções subsequentes por outros propágulos em epidemias de mofo-branco deve ser levado em conta. No capítulo 3 é descrita a estrutura de um modelo de epidemias de mofo-branco em feijão que enfatiza os sucessivos tipos de propágulos do patógeno e sua interação com plantas hospedeiras. Um etográfico descrevendo o ciclo de infecção em feijão mofo-branco foi desenvolvido utilizando símbolos e conceitos desenvolvidos para análise de sistemas. Em seguida um modelo simplificado foi construído utilizando o programa STELLA® 10,6 (Isee system, EUA). Em seguida, oito parâmetros do modelo foram ajustados para variar em quatro níveis. Análises de sensibilidade e métodos estatísticos foram então conduzidos a fim de identificar lacunas, quais parâmetros mais contribuem para variabilidade dos resultados e quais parâmetros são altamente correlacionados com as saídas do modelo. A análise de sensibilidade do sub-modelo de germinação de escleródios mostrou que mudanças na taxa relativa de escleródios germinados (RRGSC) causou variação na área abaixo da curva de progresso da doença (AUDPC), que foram menores do que os causados pela variação no número de inicial de escleródios (SC). A análise de sensibilidade do sub-modelo de infecção de flor mostrou que alterações nos valores da taxa relativa de senescência floral (RRFS) causou menor variação na AUDPC do que mudanças na taxa relativa de infecção floral (RRFI). No terceiro sub-modelo de simulação de infecção da folhagem de feijão, a taxa relativa de infecção primária na folhagem (RRP) teve o mais forte efeito sobre os valores AUDPC. Diferentes análises (análise de variância e análise de componentes principais) indicam que SC, RRGS, RRFI, RRP e RRS foram os parâmetros mais importantes do modelo de simulação de epidemias de mofo-branco. Três grupos de epidemias foram estabelecidas utilizando os resultados do modelo (valores de AUDPC) como um critério para a formação de grupos. Como resultados, os três grupos de epidemias foram confirmados pela análise de discriminante envolvendo uma combinação de parâmetros do modelo de simulação mofo branco. Claramente, o patossistemaPhaseolusvulgaris - Sclerotiniasclerotiorum é muito mais complexo do que o modelo teórico geral para doenças "de juros simples", mesmo que a quantidade de inóculo inicial (na forma de propágulo 1, escleródios) permaneça como um dos mais importantes parâmetros, como mostrado por análise de sensibilidade.
Despite the large number of studies on Sclerotiniadiseases on several hosts, the processes composing disease cycles are almost always studied separately.The cycle of Sclerotiniadiseases is complex, and can be divided in four broad phases, corresponding to typical structures of the pathogen life cycle. These phases correspond to the formation and the biological functions of four different types of propagules: (1) sclerotia, (2) apothecia and ascospores, (3) infected petals, and (4) infectious hyphae. An ethograph graphically synthesizes knowledge relevant to epidemiology of a disease. In the first chapter, successive versions of an ethograph are used to discuss the phenomenology of the bean white mould cycle and to highlight relationships among S. sclerotiorum propagules, successive stages of the disease and bean developmental stages. The ethograph describe the phenomenology of bean white mould through the examination of the several stages of the disease cycle in more detail than it is usually attempted and taking into account the concatenation of events. The method is useful to identify key stages and to explicit the relationships among disease stages of the disease cycle, the four types of propagules, and the factors that affect their respective processes of infection. It constitutes an initial step to for the development of a quantitative, simulation model. In Chapter 2 we analysed these successive stage (phases), as well as their regulating processes and factors. Sets of experimental epidemics were created in bean fields under natural environmental conditions prevailing in the winter season in Central Brazil. The sets of experimental epidemics aimed to promote a range of white mould epidemics. Fifty-seven epidemics, representing a wide variation in severity levels and in disease progress shapes, were monitored, with specific attention paid to the four considered propagule types. Epidemics were analysed by different statistical techniques and three groups (A, B, or C) of epidemics were distinguished. Group A includes epidemics which were slow to establish, developed at a low rate, and led to very low terminal incidence and severity. Epidemics in Group C had an earlier onset, progressed very rapidly with an initially high rate of increase, followed by stabilization. Epidemics in Group B displayed an intermediate behaviour, with an initially low rate of disease increase, followed by a strong increase of the rate of foliage infection at later stages. It is assumed that plant-to-plant spread (secondary infection) occurs rarely in Group A epidemics because of the lower frequency of effective contacts, resulting into a small number of lesions on the foliage and low incidence of diseased plants (average 0.12% of incidence). By contrast, it is assumed that, in epidemics of Group C, plant-to-plant spread occurs frequently, because of the higher frequency of effective contacts, leading to a much higher number of lesions and higher incidence of diseased plants (average 0.81% of incidence). Therefore, even if the primary inoculum in the form of sclerotia and the subsequent formation of apothecia are, in part, relevant, the role of subsequent infections by other propagules on white mould epidemics must be taken into account. In chapter 3 we described the structure of a model for bean white mould epidemics that emphasizes on the successive types of pathogen propagules and their interaction with host plants. An ethograph describing the infection cycle in bean white mould was developed using symbols and concepts developed for system analysis and a simplified model was built using the STELLA® 10.6 programme (Isee systems, USA). Next, eight model parameters were set to vary in four levels for model evaluation. Sensitivity analyses and statistical methods were then conducted in order to identify gaps, which inputs contribute most to output variability and which parameters are most highly correlated with the outputs. Sensitivity analysis of the sclerotia germination sub-model showed that changes in the relative rate of germinated sclerotia (RRGSC) caused variation in the area under disease progress curve (AUDPC) that were smaller than those caused by variation in the parameter initial number of sclerotia (SC). Sensitivity analysis of the flower infection sub-model showed that changes in values of the relative rate of flower senescence (RRFS) caused narrower AUDPC variation than changes in the relative rate of flower infection, RRFI. In the third sub-model simulating infection of bean foliage, the relative rate of primary infection on foliage, RRP, had the strongest effect on AUDPC values. Different analyses (analyses of variance and principal component analysis) indicate that SC, RRGS, RRFI, RRP and RRS were the most important parameters of the white mould epidemic simulation model. Three epidemics groups were established using the outputs of the model (AUDPC values) as a criterion for group formation. As a result three epidemic groups were defined by discriminant analysis involving a combination of parameters of the white mould simulation model. Clearly, the bean (Phaseolus vulgaris) - Sclerotiniasclerotiorumpathosystem is much more complex than the theoretical general “simple interest” diseases model, even if the amount of initial inoculum (in the form of propagule 1, sclerotia) remains as one of the most important parameters, as shown by sensitivity analysis.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2006.
Submitted by Érika Rayanne Carvalho (carvalho.erika@ymail.com) on 2009-12-01T01:14:58Z No. of bitstreams: 1 Janaina%20do%20Nascimento%20Lima%20Matias%20de%20Paula%20Dissertacao.pdf: 938650 bytes, checksum: ceb07c334e0caf8cec361835356eb0c4 (MD5)
Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2009-12-04T21:19:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Janaina%20do%20Nascimento%20Lima%20Matias%20de%20Paula%20Dissertacao.pdf: 938650 bytes, checksum: ceb07c334e0caf8cec361835356eb0c4 (MD5)
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Inibidores de α-amilase de plantas apresentam um grande potencial para uso biotecnológico, através de tranformação de plantas visando resistência a insetos- praga. Neste contexto, estudou-se o potencial inseticida do inibidor de α-amilase 0.53 sobre os insetos-praga de grãos armazenados de feijão, visando sua utilização em programas de melhoramento genético. Plantas de trigo foram escolhidas como fonte vegetal devido a presença de inúmeras isoformas de inibidores de α-amilases em suas sementes. Os inibidores de α-amilases, presentes em sementes de trigo (Triticum aestivum), foram purificados e caracterizados e o gene para o inibidor 0.53 foi isolado utilizando técnicas de RT-PCR, utilizando cDNAs como molde. A sequência para o inibidor 0.53 foi então subclonada no vetor de expressão pPICZαA (pFSP-pPICZαA-0.53) e a expressão da proteína recombinante foi realizada em células de levedura metilotrófica Pichia pastoris. Após estabelecimento das condições de expressão, a proteína recombinante, expressa e secretada no meio de cultura, foi purificada por HPLC (Cromatografia Líquida de Alta Performance). Ensaios in vitro utilizando as α-amilases dos insetos-praga: Acanthocelides obtectus, Zabrotes subfasciatus, Callosobruchus maculatus e a α-amilase pancreática de Porco (PPA), mostraram que a atividade desse inibidor é altamente dependente das condições de pH. Em pH 4,5, o inibidor 0.53 foi capaz de inibir unicamente as α-amilases dos diferentes insetos, não apresentando nenhuma atividade para a amilase de mamífero PPA. Porém, em pH 7,2, o inibidor recombinante 0.53 atuou unicamente sobre a PPA, inibindo cerca de 90% de sua atividade, não sendo ativo para α-amilases dos diferentes insetos alvo testados. Desta forma, o inibidor recombinante 0,53 poderá ser utilizado em diversos estudos de toxicidade em mamíferos, estudos complementares de interação molecular, a fim de verificar sua segurança alimentar e potencial uso biotecnológico. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT
α-Amylase plant inhibitors exhibit a great potential for biotechnological use, using plants of transformation aiming resistance against insects-pest. This work studies the potential insecticidal effects of α-amylases inhibitor 0.53 against insects-pest in stored bean grains, and also the possibility of its use for the plant genetic improvement. Seeds from wheat plants were chosen as a vegetable source due to their presence of several α-amylases inhibitors isoforms. Firstly, the α-amylases inhibitors synthesized in wheat seeds (Triticum aestivum), were isolated, characterized and the gene encoding the 0.53 inhibitor isolated by RT-PCR techniques, using cDNAS as template. The 0.53 inhibitor coding sequence was then subcloned into the expression vector pPICZαA (pFSP-pPICZαA-0.53) and the recombinant protein expression was carried by metilotrofic yeast Pichia pastorisI cell. After the establishment expression conditions, the recombinant protein, secreted in the culture, medium was purified by HPLC (High Performance Liquid Chromatography). In vitro assays using α-amylases from the insect-pest: Acanthocelides obtectus, Zabrotes subfasciatus, Callosobruchus maculatus and α-amylase from pancreatic porcine (PPA), had shown that the activity of this inhibitor is highly dependent of the pH conditions. In pH 4,5, the 0.53 inhibitor was able capable to inhibit solely insects α-amylases, but showed no activity for PPA. Otherwise, in pH 7,2, 0.53 recombinant inhibitor act only against PPA, inhibiting about 90%, not being active for insects α-amylases tested. Due to the characteristics described above the 0.53 recombinant inhibitor could be used in several studies in mammals toxicity tests, complementary studies of molecular interaction, in order to verify its alimentary security and potential biotechnological use.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2011.
Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2012-09-14T01:38:29Z No. of bitstreams: 1 2011_AndressadaCunhaQuintanaMartins.pdf: 17574958 bytes, checksum: b75e56f89a03136d882d1a99cdf2aa6c (MD5)
Approved for entry into archive by Leandro Silva Borges(leandroborges@bce.unb.br) on 2012-09-14T19:41:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_AndressadaCunhaQuintanaMartins.pdf: 17574958 bytes, checksum: b75e56f89a03136d882d1a99cdf2aa6c (MD5)
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O amendoim cultivado (Arachis hypogaea) é umas das oleaginosas mais importantes no mundo, pelo seu grande valor energético e nutricional. Contudo, o amendoim possui baixa variabilidade genética quando consideradas características de interesse agronômico, o que difere de suas espécies silvestres, as quais são fontes de resistência a doenças e de adaptação a diversos ambientes. Arachis stenosperma é uma espécie silvestre resistente a algumas pragas e doenças, dentre elas, a mancha preta do amendoim, causada pelo fungo Passalora personata. Visando a identificação de genescandidatos associados à resposta de defesa da planta, o transcritoma de plantas de A. stenosperma acesso V10309, desafiadas com o fungo P. personata, e seu controle, foram analisados através de pirossequencimento massal (Roche), resultando em 362.631 genes transcritos, o que gerou 17.912 unigenes, dos quais 7.723 eram constituídos por contigs. Dentre as anotações obtidas por BLASTx, 50 fatores de transcrição, 48 RGAs e vários genes-candidatos envolvidos em processos de defesa da planta foram identificados. Dentre eles, 16 genes-candidatos, cinco deles RGAs, foram avaliados através de RT-qPCR, quanto ao nível de expressão mediante a presença do patógeno, sendo cinco dos 11 primeiros, negativamente regulados, enquanto que todos os RGAs foram positivamente regulados. Esta é a primeira análise massal do transcritoma de espécie silvestre de Arachis inoculado com P. personata. Os dados gerados neste trabalho promoverão o enriquecimento do banco de dados de genes transcritos de A. stenosperma, os quais poderão ser utilizados para descoberta de genes-candidatos à resistência, a outras características de interesse agronômico e novos marcadores moleculares (SNPs e SSRs), que uma vez mapeados, poderão auxiliar na identificação de QTLs no melhoramento da cultura do amendoim, constituindo um importante recurso para a comunidade científica interessada na descoberta de genes relacionados à resposta de defesa ou ao estresse biótico em amendoim e em outras espécies. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT
Peanut (Arachis hypogaea) is one of the most important oilseeds in the world due to its high energy value and nutrition. However, peanut has a low genetic variability, especially for agronomical traits, which differs from its wild species, which are sources of disease resistance and adaptation to various environments. Arachis stenosperma is a wild species resistant to some pests and diseases, among them, the Late Leaf Spot, caused by the fungus Passalora personata. Aiming to identify candidate genes associated with the plant defense response, the transcriptome of A. stenosperma V10309, challenged with the fungus P. personata and from a non-infected control, was analyzed by large scale pyrosequencing (Roche), resulting in 362,631 expressed genes, which generated 17,912 unigenes, which consisted of 7,723 contigs. Among the annotations obtained by BLASTx, 50 transcription factors, 48 RGAs and several candidate genes involved in plant defense processes were identified. Among them, 16 candidate genes were analyzed through RTqPCR for expression in the presence of the pathogen. Five RGAs were up-regulated, whilst the other 11 were down-regulated. This is the first large scale report on the transcriptome analysis of wild peanut inoculated with P. personata. The data generated in this study promote the enrichment of the database of expressed genes from A. stenosperma, which can be used for discovery of candidate genes resistance, other agronomic traits of interest and new molecular markers (SNPs and SSRs). Once mapped, these can assist in the identification of QTLs in peanut crop improvement. This data is an important resource to the scientific community in the discovery of genes related to defense response or biotic stress in peanuts and other species.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Pós-Graduação em Fitopatologia, 2011.
Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2011-11-21T12:16:16Z No. of bitstreams: 1 2011_ClaudeniaFerreiraSilva.pdf: 1164226 bytes, checksum: b696c656980ba30ad870d5eac1dfde5b (MD5)
Approved for entry into archive by Leila Fernandes (leilabiblio@yahoo.com.br) on 2011-12-14T14:27:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_ClaudeniaFerreiraSilva.pdf: 1164226 bytes, checksum: b696c656980ba30ad870d5eac1dfde5b (MD5)
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Erwinia psidii é o agente causal da seca dos ponteiros da goiabeira (Psidium guajava) no Brasil, sendo uma das doenças mais importantes para a cultura no país. Essa bactéria afeta ramos e brotações das plantas, o que reduz significativamente a produtividade da cultura. As medidas de controle existentes são ineficientes e a disseminação do patógeno ocorre com freqüência através de material propagativo assintomático. Considerando a necessidade de um método sensível para detecção do patógeno em mudas de goiabeira, os objetivos deste trabalho foram: desenvolver iniciadores específicos para a detecção de E. psidii por PCR, comparar três métodos (IC-PCR, BIO-PCR e PCR convencional) com os iniciadores selecionados quanto ao seu potencial para detecção da bactéria em folhas de goiabeira e, finalmente, avaliar a BIO-PCR e PCR convencional para detecção em plantas inoculadas em casa de vegetação e em plantas sintomáticas e assintomáticas de pomares do Distrito Federal. A sequencia de 355 pb de um fragmento amplificado do gene da recombinase A (recA) do isolado tipo IBSBF 435 foi usada para desenhar os iniciadores que foram testados quanto à sua especificidade com DNA de 59 isolados de E. psidii, 20 isolados de outras bactérias fitopatogênicas, 17 isolados endofíticos/epifíticos de goiabeira, bem como com o DNA de folhas de goiabeira e de Colletotrichum gloeosporioides, fungo patogênico à goiabeira. A sensibilidade foi testada com DNA purificado e suspensões bacterianas. O par de iniciadores Ep 2L/2R detectou 0, 000001 pg de DNA de E. psidii e até o limite de 10 ufc/mL. BIO-PCR e PCR convencional foram mais sensíveis e mais rápidos do que a IC-PCR. Os limites de detecção em extratos de folhas misturados com suspensão bacteriana em diferentes concentrações foram de 10 e 102 ufc/mL, para BIO-PCR e PCR convencional, respectivamente. Em seguida, ambos os métodos foram testados em casa de vegetação com mudas de goiabeiras inoculadas com o isolado IBSBF 1576 (a 107 ufc/mL). Os tecidos inoculados foram coletados e analisados por PCR aos 0, 5, 10 e 15 dias após a inoculação. Os sintomas começaram a ser visualizados aos 5 dias e todas as amostras foram positivas para BIO-PCR e PCR convencional em todos os tempos amostrados. Em um segundo ensaio, 40 amostras foram coletadas de cada um dos três pomares de goiabeiras visitados em Brazlândia, DF, sendo 20 amostras com sintomas e 20 assintomáticas. Amostras de brotações jovens foram testadas por BIO-PCR com os iniciadores específicos. Das 60 amostras sintomáticas, 58 foram positivas (96,7 %), enquanto apenas quatro foram positivas entre as assintomáticas (6,7%), domonstrando que o método pode ser aplicado para detecção da bactéria nos estágios iniciais da infecção. Este método representa uma valiosa ferramenta para o monitoramento da sobrevivência e disseminação de E.psidii e de novos registros da doença em pomares. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT
Erwinia psidii causes bacterial disease of guava (Psidium guajava) in Brazil, which is one of the most important phytosanitary problems of this crop in the country. The bacterium affects branches and twigs of guava trees, causing dieback, thus reducing yield significantly. Control measures are not effective and pathogen dissemination often occurs through contaminated but asymptomatic propagating plant material. Considering the need for a reliable and sensitive method for detecting the pathogen in plant material, the objectives of this study were to design E. psdii-specific PCR primers, to compare three methods, IC-PCR, BIO-PCR and conventional PCR with the selected primers, to evaluate the use of these primers in BIO-PCR and conventional PCR assays to detect E. psidii in inoculated guava plants grown in a greenhouse and to detect the pathogen by PCR in symptomatic and asymptomatic trees from guava orchards in Brasília, DF. A 355 bp fragment of the recombinase A gene (rec A) amplified from the type E. psidii strain IBSBF435 was used for designing primers that were further tested for specificity with DNA from 59 E. psidii isolates, 20 isolates of other plant pathogenic bacteria, 17 isolates of epiphytic/endophytic bacteria from guava, as well as with DNA form guava leaves and DNA from Colletotrichum gloeosporioides pathogenic to guava. Sensitivity was tested with purified DNA and bacterial suspensions. Primer pair Ep2L/2R detected 0,000001 pg DNA and 10 cfu/mL and only amplified DNA from E. psidii. BIO-PCR and conventional PCR were more sensitive and less time-consuming than IC-PCR. The detection limit on extracts of macerated guava leaves mixed with bacterial suspensions at different concentrations were 10 and 102 cfu/ml for BIO-PCR and conventional PCR, respectively. In the greenhouse young guava shoots were inoculated with E. psidii strain IBSBF 1576 (107 cfu/mL) and plant tissue was analyzed by PCR at 0, 5, 10, and 15 days after inoculation. Symptoms were recorded after 5 days and all inoculated shoots were PCR positive at all times, by both BIO-PCR and conventional PCR. In a second assay, forty samples were collected from each of three guava orchards, 20 showing symptoms and 20 asymptomatic. Samples were tested by BIO-PCR with specific primers. PCR was positive for 58 out of 60 symptomatic samples (96.7%) and for 6.7% of asymptomatic samples, showing that the method can be used to detect the pathogen at early stages of infection. This specific PCR method represents also a valuable tool which can be used to monitor bacterial survival, dissemination and new disease outbreak.

Orientador: Herculano Penna Medina Filho
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Made available in DSpace on 2018-07-15T10:11:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GuerreiroFilho_Oliveiro_M.pdf: 4517251 bytes, checksum: 030aed9774b78c8536dbbf97638e1f30 (MD5) Previous issue date: 1989
Resumo: Desenvolveu-se um método de avaliação da resistência apresentada por diversos genótipos de Coffea spp à Perileucoptera coffeella através da exposição de discos de folhas a insetos. 2 Discos de 3,14 cm são mantidos em caixas plásticas sobre espuma plástica umedecida encobertas com vidro por onde incide luz artificial. As caixas no laboratório são mantidas a temperatura de 22+- 2 º C e fotoperíodo de 12 horas. Em caixas de 144 discos uma distribuição uniforme da infestação é obtida com uma população de insetos oriunda de 150 crisálidas. Observou-se em laboratório que não houve preferência do inseto pelo par de folhas amostrado. Ao contrário, a nível de campo o primeiro e segundo pares foram menos atacados. A nervura central não exerceu influência no desenvolvimento das lesões. Parcelas formadas por discos com ou sem nervura central foram igualmente destruídas. Verificou-se que as espécies C. stenophylla, C. salvatrix, C. liberica e C. brevipes são extremamente resistentes ao inseto. Essa reação foi observada tanto em testes de livre escolha como em testes onde os insetos foram confinados sobre cada genótipo, portanto, sem chance de escolha. Nessas espécies as lesões pouco ou nada se desenvolvem. Segundo os parâmetros nota visual, discos lesionados por parcela, área foliar danificada e consumo de uma lagarta, as espécies C. stenophylla, C. salvatrix, C. brevipes e C. liberica foram classificadas como muito resistentes; c kapakata, C.eugenioides, C. racemosa e C. dewevrei, foram classificadas como resistentes C. canephora e C. congensis como suscetíveis e os cultivares Catuai e Mundo Novo de C. arabica como suscetíveis ou muito suscetíveis. Derivado da hibridação interespecifica entre C. arabica e C. racemosa o cafeeiro Cl195-5-6-2 mostrou-se altamente resistente tanto em laboratório como a nível de campo. Essa resistência do cafeeiro C1195-5-6-2 pode ser observada em alguns representantes oriundos de cruzamentos dessa planta com indivíduos suscetíveis, indicando a transferência dessa característica a gerações segregantes. Nas gerações F1, F2 e RC1 observou-se haver segregação para resistência nos descendentes do C1195-5-6-2, em proporções compatíveis com a hipótese de herança simples dominante para resistência. A confiabilidade do método de laboratório desenvolvido, evidenciada pela correlação com dados de campo, associada às grandes vantagens da sua utilização, sugerem o seu emprego rotineiro em programas de melhoramento para resistência ao bicho mineiro. E sugerida uma estratégia prática para a seleção em populações segregantes
Abstract: A leaf disk method was developed to evaluate resistance of Coffea germplasm to coffee leaf miner (Perileucoptera coffeella) described as follows: leaf discs 3,14 cm diameter are kept on moist sponge inside plastic boxes closed with a glass lid. The boxes are maintained under artificial light at 22 +- 2ºC with photoperiod of 12 hours. Each box fits 144 leaf discs. Uniform disk infestation is obtained by the introduction of 150 pupes. Contrarily to the field conditions, where the first and second leaf pairs are the least infested, it was not observed insect preference for any leaf pair, in the laboratory. Presence of mid rib in the discs not influence lesion development. According to subjective visual ratings, number of discs with lesions, damaged foliar area and caterpillar consumption, c. stenophylla, c. salvatrix, C. liberica and C. brevipes can be considered as extremely resistant to the insect, with small or no lesions at alI. C. Kapakata, C. eugenioides, C. racemosa and C. devewrei can be classified as resistant, C. canephora and C.congenesis as susceptible and C arabica cv's Catuai and Mundo Novo as susceptible or very susceptible. Both in field or lab conditions, the C. racemosa x C. arabica derivate C1195-5-6-2 showed high resistance. The genetic resistance of this plant was expressed in F1, F2 and BC1 generations of crosses with susceptible cultivars. In these generations, segregation occurred in ratios compatible with the hypotesis of resistance being inherited as single dominant trait. The reliability of the devised lab method evidenced by high correlations with field tests in addition to its advantages, claim for- its routine use as a screening method in breeding programs. A practical strategy for evaluation of large segregant populations is also suggested.
Mestrado
Mestre em Biologia

Orientadora : Profª. Drª. Chirlei Glienke
Coorientador : Prof. Dr. Fabricio Packer Gonçalves
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética. Defesa: Curitiba, 28/03/2014
Inclui referências : f. 42-44;61-63;67-71
Resumo: A Mancha Preta dos Citros (MPC) é uma doença que ameaça a Citricultura brasileira, causando lesões em frutos e sua queda prematura em estágios mais severos, levando a prejuízos de produção e rejeição no mercado consumidor. É causada pelo fungo Phyllosticta citricarpa, presente em folhas caídas em decomposição na forma sexuada (ascósporos) e nas lesões dos frutos, em folhas aderidas à planta e ramos secos na forma assexuada (picnidiósporos). O uso de fungicidas sistêmicos ainda é a principal alternativa de controle, mas se depara com os principais problemas do seu uso excessivo como toxicidade ambiental, acúmulo de resíduos nos frutos e seleção de patógenos resistentes. A busca por um controle alternativo pode envolver microrganismos endofíticos de plantas medicinais, uma vez que é conhecido seu potencial biotecnológico e poder protetor da planta hospedeira, mas depende do conhecimento do ciclo infeccioso do patógeno sob vários aspectos. Sabe-se da importância do manejo de ramos secos no controle da doença mas pouco se conhece sobre a participação dos ramos na epidemiologia da MPC. Técnicas tradicionais de isolamento em meio de cultura juntamente com ensaios moleculares têm agilizado o diagnóstico de doenças, oferecendo dados importantes sobre vários patosistemas. Adicionalmente, o uso de microrganismos transformados geneticamente para expressão de uma proteína repórter, como a green fluorescente protein (gfp), trazem uma nova ferramenta para o monitoramento desses microrganismos e entendimento do seu ciclo infeccioso. No presente estudo foram avaliados 128 ramos de área de alta incidência da MPC, pertencentes a quatro estados fenológicos: novo, jovem, velho e seco. O isolamento destes tecidos revelou 1,6% de amostras positivas para P. citricarpa, apenas em tecidos de estado fenológico velho, enquanto a extração de DNA direto dos tecidos seguido de PCR espécie específico não revelou a presença do patógeno. Foi avaliada a sobrevivência do fungo patogênico em ramos de citros destacados, pela inoculação de suspensão conidial da linhagem transformante LGMF06-T2 (gfp) de P. citricarpa. Foi possível recuperar o fungo inoculado dos tecidos após 45 dias da sua inoculação, não sendo recuperado após 90 e 135 dias. A espécie inoculada foi confirmada por microscopia de fluorescência, e este resultado sugere a sobrevivência do patógeno nos ramos por pelo menos 45 dias. Adicionalmente, foi avaliado o efeito do extrato metabólico do fungo endofítico Diaporthe terebinthifolii sobre a formação de picnídios de P. citricarpa em ramos autoclavados. Fragmentos de 1 cm de ramos autoclavados foram depositados sobre meio ágar-agua e em suas laterais foram inoculados fragmentos miceliais do patógeno. Comparou-se o crescimento micelial e formação de picnídios nos ramos tratados com o extrato do fungo endofítico com relação aos ramos não tratados e ramos tratados com fungicida comercial. Observou-se que o extrato reduz a formação de picnídios comparativamente ao controle negativo, apresentando efeito similar ao promovido pelo fungicida. Tais resultados confirmam o potencial do extrato do fungo D. terebinthifolii no controle do patógeno P. citricarpa. Palavras-chave: Mancha Preta dos Citros, Phyllosticta citricarpa, endófitos, controle alternativo
Abstract: The Citrus Black Spot (CBS) is a threat to the Brazilian Citrus, causing fruit lesions and premature fruit drop in more severe cases, leading to yield losses and fruit rejection in the consumer market. CBS is caused by the fungus Phyllosticta citricarpa, which ascospores are the sexual stage, found in decomposing fallen leaves, and picnidiospores are the asexual stage, present in fruit lesions, attached leaves and dried branches. Systemic fungicides are the main control alternative, but its overuse causes problems like the environmental toxicity, residues accumulation in fruits and also the selection of resistant pathogens. The search of an alternative disease control method may involve endophytic microorganisms of medicinal plants, due to their biotechnological potential and protective power of the host plant, but it is important to know about the infectious cycle of the pathogen. We know the importance of handling dry branches for CBS control but there is a lack of information about this pathosystem, mainly about the influence of branches in the disease epidemiology. The use of traditional isolation techniques coupled with molecular techniques have enhanced the diagnosis of diseases, providing important data on the interaction between the plant and the pathogen. Additionally, the use of genetically transformed microorganisms for the expression of a reporter protein, such as green fluorescent protein (GFP) brings a new tool to understand the pathogen infectious cycle. In the present study, we evaluated 128 branches in area of high incidence of CBS, belonging to four growth stages: new, young, old and dried. The isolation of these tissues showed 1.6% of samples with the presence of P. citricarpa, only in branches in old growth stages, while the method used for DNA extraction and PCR directly from the branches tissue did not reveal the pathogen. We also evaluated the fungus survival in detached citrus branches by inoculating a conidial solution of the LGMF06-T2 transformed strain expressing the green fluorescent protein (GFP). The pathogen was reisolated from the branches after 45 days of inoculation, with the gfp strain confirmed by fluorescence microscopy. These findings suggests that the pathogen can survive in branches for at least 45 days. Additionally, we evaluated the control effect of metabolic extract of the endophytic fungus Diaporthe terebinthifolii over micelial growth and pycnidia formation of P. citricarpa in autoclaved branches. Branches fragments (1 cm) were placed on water agar media and mycelium fragments of the pathogen were inoculated on its sides. It was evaluated the micelial growth and pycnidia formation on the branches treated with the the endophytic fungus extract, compared with non-treated branches and branches treated with commercial fungicide. The extract treatment reduced the formation of pycnidia compared to the non-treated branches, and its inhibition was similar to the fungicide treatment. These findings confirm the potential of D. terebinthifolii extract in the control of P. citricarpa. Keywords: Citrus Black Spot, Phyllosticta citricarpa, epidemiology, disease control, endophytes, alternative control

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2008.
Submitted by Ângela Christina (angelchris@bce.unb.br) on 2009-05-11T18:35:42Z No. of bitstreams: 1 2008_LeonardoFerreiraLopes.pdf: 793670 bytes, checksum: a6c71ecd3e126726b164e3af881fef34 (MD5)
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Made available in DSpace on 2009-05-12T13:18:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_LeonardoFerreiraLopes.pdf: 793670 bytes, checksum: a6c71ecd3e126726b164e3af881fef34 (MD5) Previous issue date: 2008-12
Este trabalho teve como principal objetivo avaliar o efeito do uso de fosfitos, ácido acetilsalisílico e 1-metilciclopropeno (1-MCP) no controle da antracnose. O patógeno (isolado MM) foi obtido a partir de frutos com sintomas típicos da doença oriundos do CEASA-DF, de onde também foram obtidos os frutos para a realização dos experimentos. O isolamento e multiplicação do patógeno foram feitas em BDA 50%. Em todos os experimentos, os frutos (selecionados no estágio de 0 a 2 de maturação) foram descontaminados em álcool 10% por 1 minuto, hipoclorito de sódio 0,1% por 1 minuto, seguindo-se a lavagem em água destilada e esterilizada por 1 minuto. Os frutos foram submetidos a perfurações de 2mm em cinco pontos diferentes de sua superfície e, em seguida, inoculados aplicando-se 50l da suspensão de esporos (106 conídios/ml) e mantidos em câmara úmida por um período de 24h. Após a aplicação dos tratamentos os frutos foram mantidos em incubadores (iluminação diária 12h a 13°C) durante 10 dias, avaliando-se diariamente o diâmetro das lesões. Ao final deste período, realizou-se análise físico-química dos frutos. Foram realizados cinco diferentes ensaios em frutos com fosfitos. No primeiro experimento, in vitro, os fosfitos de Mg - 40% P2O5 + 6% Mg (‘Fitofós-Mg’), Zn - 40% P2O5 + 10% Zn (‘Phytogard Zn’) – 2,50 mL/L, Ca - 30% P2O5 + 7% Ca (‘Phytogard Ca’) e K - 30% P2O5 + 20% K2O (‘Phytogard K’) – 2,50 mL/L, foram testados em três doses (50, 100 e 200% da dose recomendada pelo fabricante) e o fungicida carbendazim (‘Derosal’) na dose de 1 mL/L. Os outros quatro ensaios foram realizados em frutos, sendo os dois primeiros realizados com frutos do grupo ‘Solo’ (cv. Sunrise Solo) e os dois últimos com frutos do grupo ‘Solo’ (cv. Golden): (1) utilizou-se nove fosfitos diferentes nas doses recomendadas pelos fabricantes para aplicação destes produtos como fertilizante foliar em fruteiras tropicais: fosfito de Mg - 40% P2O5 + 6% Mg (‘Fitofós-Mg’) – 1,50mL/L,30% P2O5 + 4% Mg (‘Phytogard Magnésio’) – 3,00 mL/L, K - 30% P2O5 + 20% K2O (‘Fitofós-K Plus’) – 1,50 mL/L, 30% P2O5 + 20% K2O (‘Nutrex Premium’ 0-30-20) – 1,75 mL/L, 20% P2O5 + 20% K2O (‘Nutrex Premium’ 0-20-20) – 2,00 mL/L, 20% P2O5 + 20% K2O (‘Hortifós PK’) – 3,00 mL/L, Ca - 10% P2O5 + 6% Ca (‘Fitofós-Ca’) – 1,50 mL/L, 30% P2O5 + 7% Ca (‘Phytogard Cálcio’) – 3,00 mL/L e Zn - 40% P2O5 + 10% Zn (‘Phytogard Zinco’) – 2,50 mL/L, imergindo-se os frutos em soluções com esses produtos por 20 minutos. Frutos utilizados como testemunha receberam água destilada esterilizada por igual período; (2) os fosfitos de K - 30% P2O5 + 20% K2O (‘Fitofós-K Plus’) e Ca - 30% P2O5 + 7% Ca (‘Phytogard Cálcio’), em quatro diferentes doses (25, 50, 100 e 200% da dose recomendada pelo fabricante); (3) utilizou-se estes mesmos fosfitos nas doses recomendadas pelo fabricante e em combinação com o Cloreto de cálcio a 2% na mesma dose; (4) utilizouse dez fosfitos diferentes nas doses recomendadas pelos fabricantes para aplicação destes produtos como fertilizante foliar em frutíferas tropicais: fosfito de Cu - 20% P2O5 + 4% Cu (‘Fitofós Cu’) – 2,50mL/L, Mg - 40% P2O5 + 6% Mg (‘Fitofós-Mg’) – 1,50mL/L, 30% P2O5 + 4% Mg (‘Phytogard Magnésio’) – 3,00 mL/L, K - 30% P2O5 + 20% K2O (‘Fitofós-K Plus’) – 1,50 mL/L, 30% P2O5 + 20% K2O (‘Nutrex Premium’ 0-30-20) – 1,75 mL/L, 20% P2O5 + 20% K2O (‘Nutrex Premium’ 0-20-20) – 2,00 mL/L, 30% P2O5 + 20% K2O (‘Phytogard K’) – 2,50 mL/L, Ca - 10% P2O5 + 6% Ca (‘Fitofós-Ca’) – 1,50 mL/L, 30% P2O5 + 7% Ca (‘Phytogard Cálcio’) – 3,00 mL/L e Zn - 40% P2O5 + 10% Zn (‘Phytogard Zinco’) – 2,50 mL/L. Nos tratamentos com ácido acetilsalicílico os frutos foram submetidos a diferentes doses do produto (10, 20 e 30mM) por três períodos de tempo (10, 20 e 30 min) em aplicações anteriores e posteriores a inoculação. Com o 1-MCP foram utilizadas diferentes doses (0, 50, 100, 200 e 300 ppb) do gás por dois períodos de exposição (12 e 24h). Ao fim obteve-se os seguintes resultados: in vitro, todos os fosfitos mostraram-se eficientes na redução do crescimento micelial e na produção de conídios de C. gloeosporiodes nas doses testadas. O uso associado de fosfitos e do fungicida Derosal (p.a. Carbendazim) não se mostrou eficiente na redução da severidade da doença. Nos experimentos realizados com diferentes doses dos fosfitos ‘Fitofós-K Plus’ e ‘Phytogard Cálcio’ a aplicação do último na dose de 200% da dose recomendada pelo fabricante reduziu significativamente o diâmetro da lesão em relação à testemunha. A imersão de frutos em soluções de CaCl2 (2%) reduziu significativamente a severidade da doença, o fosfito ‘Phytogard Cálcio’ associado ao CaCl2 apresentarou redução no diâmetro médio da lesão em relação a testemunha. O uso isolado de fosfitos incitou uma resposta variada sobre a doença. O ácido acetilsalicílico nas doses de 10, 20 e 30 mM / 10 min e de 20 mM / 20 min reduziram significativamente a doença quando aplicado 24h antes da inoculação. Quando aplicado 24h após a inoculação reduziu significativamente o diâmetro das lesões na concentração de 20 mM por um período de 10 minutos. Frutos expostos ao 1-MCP por um período de 12h apresentaram lesões menores em relação às testemunhas em qualquer das doses avaliadas. Ao final destes experimentos, foram realizadas combinações onde aplicou-se inicialmente o tratamento hidrotérmico (49°C/ 20 min) e em seguida imergindo-se os frutos em soluções com ácido acetilsalicílico em concentração de 20 e 30mM por 10 minutos, Phytogard Magnésio,Fitofós K Plus e cloreto de cálcio (2%) por 20 minutos. Em todos os experimentos os tratamentos apresentaram redução significativa da doença em relação à testemunha. Tratamentos envolvendo a combinação do tratamento hidrotérmico com o cloreto de cálcio e com o AAS apresentaram lesões de diâmetro médio inferior aos frutos que foram submetidos apenas ao tratamento hidrotérmico. Quanto às análises físico-químicas, frutos submetidos ao tratamento com 1-MCP apresentaram firmeza significativamente maior em relação à testemunha, além de um atraso no processo de maturação. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT
This work had as its main objective to assess the effect of phosphites, acetylsalicylic acid and 1-methylcyclopropene (1-MCP) in the control of the anthracnose. The pathogen (isolate MM) was obtained from fruit with typical symptoms of the disease from CEASA-DF, where the fruits were also obtained for the conduct of experiments. The isolation and multiplication of the pathogen were done in BDA 50%. In all experiments, the fruits (selected in the stage of maturation of 0 to 2) were decontaminated in 10% alcohol by 1 minute, sodium hypochlorite by 1 minute, followed by washing with distilled water and sterilized by 1 minute. The fruits were submitted to perforations of 2mm in five different points of its surface and inoculated applying 50l of the suspension of spores (106 conidia/ml) and kept in a wet chamber for a period of 24 hours. After application of the treatments they were kept in incubators (lighting daily 12h at 13 °C) for 10 days evaluating daily the diameter of injuries. At the end of this period. It was carried out physical-chemical analysis of fruits. It was conducted five different tests on fruits with phosphites. In the first experiment, in vitro, the phosphites Mg - 40% P2O5 + 6% Mg (‘Fitofós-Mg’), Zn - 40% P2O5 + 10% Zn (‘Phytogard Zn’) – 2,50 mL/L, Ca - 30% P2O5 + 7% Ca (‘Phytogard Ca’) and K - 30% P2O5 + 20% K2O (‘Phytogard K’) – 2,50 mL/L were tested at three doses (50, 100 and 200% of the dose recommended by the manufacturer) and fungicide carbendazim ('Derosal') at a dose of 1mL/L. The other four essays have been conducted on fruit, being the two firsts conducted with fruits from group 'Solo' (cv. Sunrise Solo) and the two lasts with fruits from group 'Solo' (cv. Golden): (1) it was used nine different phosphates in doses recommended by manufacturers in applying for such products as a foliar fertilizer in tropical fruit: fosfito de Mg - 40% P2O5 + 6% Mg (‘Fitofós-Mg’) – 1,50mL/L,30% P2O5 + 4% Mg (‘Phytogard Magnésio’) – 3,00 mL/L, K - 30% P2O5 + 20% K2O (‘Fitofós-K Plus’) – 1,50 mL/L, 30% P2O5 + 20% K2O (‘Nutrex Premium’ 0-30-20) – 1,75 mL/L, 20% P2O5 + 20% K2O (‘Nutrex Premium’ 0-20-20) – 2,00 mL/L, 20% P2O5 + 20% K2O (‘Hortifós PK’) – 3,00 mL/L, Ca - 10% P2O5 + 6% Ca (‘Fitofós-Ca’) – 1,50 mL/L, 30% P2O5 + 7% Ca (‘Phytogard Cálcio’) – 3,00 mL/L e Zn - 40% P2O5 + 10% Zn (‘Phytogard Zinco’) – 2,50 mL/L, immersing the fruits in solutions with these products for 20 minutes. Fruit used as control received sterile distilled water for an equal period; (2) the phosphites K - 30% P2O5 + 20% K2O (‘Fitofós-K Plus’) e Ca - 30% P2O5 + 7% Ca (‘Phytogard Cálcio’), in four different doses (25, 50, 100 and 200% of the dose recommended by the manufacturer), (3) it was used these same phosphites in doses recommended by the manufacturer and in combination with calcium chloride to 2% in the same dose, (4) it was used ten different phosphites at the recommended doses by manufacturers to apply these products as foliar fertilizer in tropical fruits :phosphate of Cu - 20% P2O5 + 4% Cu (‘Fitofós Cu’) – 2,50mL/L, Mg - 40% P2O5 + 6% Mg (‘Fitofós-Mg’) – 1,50mL/L, 30% P2O5 + 4% Mg (‘Phytogard Magnésio’) – 3,00 mL/L, K - 30% P2O5 + 20% K2O (‘Fitofós-K Plus’) – 1,50 mL/L, 30% P2O5 + 20% K2O (‘Nutrex Premium’ 0-30-20) – 1,75 mL/L, 20% P2O5 + 20% K2O (‘Nutrex Premium’ 0-20-20) – 2,00 mL/L, 30% P2O5 + 20% K2O (‘Phytogard K’) – 2,50 mL/L, Ca - 10% P2O5 + 6% Ca (‘Fitofós-Ca’) – 1,50 mL/L, 30% P2O5 + 7% Ca (‘Phytogard Cálcio’) – 3,00 mL/L e Zn - 40% P2O5 + 10% Zn (‘Phytogard Zinco’) – 2,50 mL/L. In the treatments with acetylsalicylic acid, fruits were submitted to different doses (10, 20 and 30mm) for three time periods (10, 20 and 30 min) in applications before and after the inoculation. With 1-MCP was used different doses (0, 50, 100, 200 and 300 ppb) of gas through two periods of exposure (12 and 24). To the end it was obtained the following results: In vitro, all phosphites showed effective in reducing the mycelial growth and the production of conidia of C. gloeosporiodes at all doses tested. The combined use of phosphites and the fungicide Derosal (pa. carbendazim) was not effective in reducing the severity of the disease. In experiments performed with different doses of phosphate ‘Fitofós-K Plus’ and 'Phytogard Cálcio', the application of the last at 200% of the dose recommended by the manufacturer reduced significantly the diameter of the lesion in relation to the control. The immersion of fruits in solutions of CaCl2 (2%) reduced significantly the severity of the disease. The phosphite ‘Phytogard Cálcio’ associated with CaCl2 provided a decrease in the average diameter of the lesion in relation to the control. The use isolated of phosphates instigated a varied response on the disease. The acetylsalicylic acid in doses of 10, 20 and 30 mM/10 min and 20 mM/20 min reduced significantly the disease when applied 24 hours before the inoculation. When applied 24 hours after inoculation reduced significantly the diameter of injuries at a concentration of 20 mM for a period of 10 minutes. Fruits exposed to 1-MCP for a period of 12h showed smaller injuries in relation to the control in any of the evaluated doses. At the end of these experiments, it was carry out combinations where initially was applied the hydrothermal treatment (49 °C/20 min) and then the fruits were immersed in solutions with acetyl salicylic acid in the concentrations of 20 to 30mm by 10 minutes, Phytogard Magnesium, Fitofos K Plus and calcium chloride (2%) for 20 minutes. In all experiments the treatments provided significant reduction of the disease in relation to the control. Treatments involving the combination of hydrothermal treatment with calcium chloride and the ASA showed injuries with an average diameter less than the fruits that were just submitted to the hydrothermal treatment. About the physical and chemical analysis, fruit submitted to treatment with 1-MCP showed firmness significantly greater in relation to the control, besides a delay in the process of maturation.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, 2011.
Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2012-02-23T18:56:44Z No. of bitstreams: 1 2011_MarcioWandreMoraisOliveira_Parcial.pdf: 1704678 bytes, checksum: dfc8dd3d9698044d135ac57d226a2a24 (MD5)
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Este trabalho descreve a identificação do feromônio sexual do percevejo Oebalus poecilus (Dallas, 1851), (Hemiptera: Pentatomidae), bem como os procedimentos para sua síntese. O percevejo Oebalus poecilus está entre as principais pragas de arroz no Brasil, tanto em ecossistemas de terras altas como nos de várzeas, causando grandes prejuízos nessas lavouras. A principal forma de controle dessa praga tem sido a utilização de inseticidas, que são conhecidamente prejudiciais à saúde humana e a todas as espécies de animais e insetos. A busca por alternativas ecologicamente corretas, nos guiou na tentativa de identificação do feromônio sexual. A análise de extratos obtidos das aerações de machos e fêmeas mostrou que os machos produziam um composto específico, que poderia ser o feromônio sexual desta espécie. Este composto foi identificado como zingiberenol. A síntese dos oito isômeros possíveis do zingiberenol a partir de (S) e (R)- citronelal foi conduzida. Foram realizadas três etapas: Adição de Michael seguida de condensação aldólica intramolecular e posterior metilação com metil lítio. Bioensaios com os compostos sintetizados indicam que a mistura dos dois isômeros menos polares vindo do (S) -citronelal é atrativa para as fêmeas dessa espécie. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT
This work describes the identification of sex pheromone of the stinkbug Oebalus poecilus (Dallas, 1851), (Hemiptera: Pentatomidae), as well as the procedures for pheromone synthesis. Oebalus poecilus is one of the major pests of rice throughout Brasil, in both upland and lowland environment, causing great grain losses. The most common method to control this pest has been the use of insecticides, which are notoriously harmful to human health and for all species of animals and insects. The search for environmentally friendly alternatives, guided us in trying to identify sex pheromone of O. poecilus. Analysis of extracts obtained from aerations of males and females showed that males produce a specific compound, which could be the sex pheromone of this species; this compound was identified as zingiberenol. The synthesis of the eight possible isomers of the starting zingiberenol from (S) and (R) - citronellal was conducted. Were performed three steps: Michael’s addition, followed by intramolecular aldol condensation and subsequent methylation with methyl lithium. Bioassays with these compounds indicated that the mixture of the two less polar isomers that come from the (S) -citronellal is attractive to the females.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Agronomia, 2013.
Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-06-25T15:10:30Z No. of bitstreams: 1 2013_ClaudioAugustoRodriguesdaSilva.pdf: 3272053 bytes, checksum: bd83f8fcc718efe3ab10907a31c4e9ed (MD5)
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Este trabalho teve como objetivo avaliar o desempenho das culturas do repolho, cebolinha e rabanete em monocultivo e em consórcios de arranjos duplos e triplo. Foram observadas a produtividade e os aspectos agroeconômicos dos produtos, bem como a infestação de pragas e viabilidade económica dos arranjos propostos. O experimento foi realizado na Fazenda Água Limpa-UnB, entre agosto e dezembro de 2012. O delineamento foi de blocos ao acaso, com sete tratamentos em quatro repetições. Os tratamentos foram: monoculturas de repolho (Rp); cebolinha (Cb) e rabanete (Rb); consórcio duplo de repolho e cebolinha (RpCb); repolho e rabanete (RpRb) e cebolinha e rabanete (CbRb); consórcio triplo de repolho, cebolinha e rabanete (RpCbRb). Para a cultura do repolho, a maior produtividade foi observada no arranjo RpRb (5,0 kg.m'2), que não diferiu significativamente da monocultura. Para a cultura da cebolinha, a maior produtividade foi obtida no monocultivo (2,4 kg.m"2), que não diferiu significativamente dos arranjos duplos. Para a cultura do rabanete, a maior produtividade foi obtida no monocultivo (3,3 kg.m'2). O índice de Equivalência de Área (IEA). parâmetro utilizado para se avaliar a eficiência do cultivo consorciado quando comparado à monocultura, foi superior a 1, indicando ganho de produtividade dos arranjos consorciais, com exceçào do consórcio duplo CbRb. Entretando, ainda nesse caso. a análise dos dados indicou um ganho de produtividade da cebolinha quando consorciada com o rabanete. Todos os arranjos estudados possibilitaram índice de lucratividade superior a 45%. Em todos os casos, os produtos obtidos apresentaram padrões de qualidade superiores ao mínimo demandado pelo mercado. Foi realizada apenas duas capinas ao longo dos 90 dias do ciclo do repolho em todos os tratamentos. Houve redução significativa do número de indivíduos e da massa fresca de plantas espontâneas ao longo do tempo nas parcelas em consórcio. Para a traça-das-crucíferas. verificou-se que no RpRb, em apenas cinco das 11 semanas avaliadas, foi atingido o nível de dano enconômico onde haveria a necessidade de controle da praga, inferior ao observado na monocultura do repolho, bem como nos demais arranjos de consórcio onde o repolho está presente. Vale ressaltar que não houve efeito negativo da praga na aparência do repolho em nenhum dos tratamentos. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT
The aim of this research was to evaluate the impact of vegetable intercropping on agrieconomic variables of cabbage, green onion and radish, in single, double and triple intercropping. Yield and appearance, as well as pest infestation and economic viability of the treatments proposed were recorded. The experiment was carried out at Fazenda Agua Limpa- UnB. from August to December 2012. The experimental design was randomized blocks with seven treatments and four replicates. Treatments were single crops of cabbage (Rp); green onion (C'b) e radish (Rb); double intercropping of cabbage and green onion (RpCb); cabbage and radish (RpRb) and green onion and radish (C'bRb); triple intercropping of cabagge. green onion and radish (RpC'bRb). For cabbage, the highest yield was observed in RpRb (5,0 kg.m* 2), not significantly different from single crop cultivation. For green onion, the highest yield was observed at the single crop cultivation (2,4 kg.m*2), not significantly different from double intercropping. For radish, the highest yield was observed at Rb (3,3 kg.m'2). Area equivalent index, intercropping efficiency when compared to single crop cultivation, were higher than 1.0 for all intercropping treatments with the exception of C'bRb. Nevertheless all intercropping treatments resulted on positive economic index. All intercropping treatments showed net revenue higher than 45%. The products were above commercial pattern on all intercropping treatments. Only two manual weed controls were performed during the 90 days of cabbage crop cycle in all treatments. Weeds were reduced significantly, in number and fresh weight, in all intercropping parcels. For cabbage diamond back moth, it was observed that in only five of eleven weekly evaluation the threshold was reached in RpRb, inferior to what was observed for single crop cultivation and others intercropping treatments were cabbage was present. It is worthwhile to point out that there was no negative effect of the pest on cabbage appearance in none of the treatments.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2013.
Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-09-25T14:21:10Z No. of bitstreams: 1 2013_MagnoRodriguesdeCarvalhoFilho.pdf: 3266869 bytes, checksum: af4ff8325e1cec5ab19c33e4b2982369 (MD5)
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Trichoderma constitui um gênero de microfungos mundialmente distribuído na natureza. Nos solos, estão presentes como microorganismos de vida livre ou colonizando raízes de plantas. Podem também colonizar endofiticamente os tecidos vegetais, como simbiontes. Por apresentarem ação antagonista contra fitopatógenos, linhagens de diversas espécies desse gênero vem sendo estudadas como agentes de biocontrole de doenças de plantas, dentre as quais, o mofo branco, causado por Sclerotinia sclerotiorum, em diversas espécies vegetais. A caracterização molecular desse grupo de antagonistas tem grande importância, tanto em estudos de biodiversidade e distribuição das espécies, como na identificação de potenciais agentes de biocontrole, e de possíveis patógenos oportunistas a humanos, a exemplo de Trichoderma longibrachiatum. O objetivo desse trabalho foi identificar 148 isolados em nível de espécie, por sequenciamento das regiões ITS do DNA ribossomal e avaliar a biodiversidade desses isolados com referência à origem geográfica. Foi realizada seleção in vitro de isolados com potencial de biocontrole, os quais foram avaliados, em casa de vegetação, quanto à capacidade de supressão do mofo branco e como promotores de crescimento do feijoeiro. Os 29 isolados selecionados foram também submetidos à técnica de MALDI-TOF MS (Matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry), para confirmação das espécies, correlacionando esta técnica de identificação com a técnica molecular empregada. Filtrados de culturas do isolado CEN201, com potencial de inibição do crescimento micelial do patógeno supracitado, foram submetidos a técnicas de extração e purificação de metabólitos secundários. A capacidade de inibição do crescimento micelial de S. Sclerotiorum, por esses compostos, foi confirmada. No capítulo 1 são relatados resultados desses estudos, mostrando que 17,4% dos isolados apresentaram alto nível de antagonismos em pareamento de culturas e dois grupos apresentaram 83,3 a 88,9% de inibição micelial do patógeno por metabolitos não voláteis. Outro ponto ressaltado nesta pesquisa foi o índice de biodiversidade relativa aos 144 isolados de Trichoderma procedentes de sete estados brasileiros, que alcançou 0,076 com 11 espécies. Já o capítulo 2 relata a supressão do mofo branco com 19 dos 29 isolados selecionados in vitro no capítulo 1. Observou-se, também, promoção de crescimento de plantas de feijão com 7 isolados estudados. Foram ainda mostrados os resultados obtidos na identificação dos isolados por espectrometria de massa (MALDI-TOF MS). Esses resultados, confrontados com os dados obtidos na identificação molecular verificada no capítulo anterior, indicaram a convergência das duas técnicas, confirmando o potencial de MALDI-TOF MS como método rápido para identificação de espécies de Trichoderma. O capítulo 3 está focado nos estudos com metabólitos não voláteis produzidos pelo isolado CEN201 (T.asperellum). As técnicas utilizadas, Cromatografia líquida e MALDI-TOF MS possibilitaram, por homologia de massa/carga, inferir a presença de dois compostos com ação antibiótica, Asperelina B e Trichocompactina, no filtrado de culturas estudado. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT
Trichoderma composes a genus of microfungi distributed worldwide. In soil, these fungi may be present as free life or colonizing plant roots. Can also to colonize plant tissues endophytically like symbionts. Some species have been studied as biocontrol agents of plant diseases, among which, white mold caused by Sclerotinia sclerotiorum in several plant species. Their mechanisms of action include the production of secondary metabolites with antibiotic effect, mycoparasitism and competition for space and nutrients. The molecular characterization of this group of antagonists is very important, both in studies of biodiversity and species distribution and for identification of potential biocontrol agents, and possible opportunistic pathogens to humans like Trichoderma longibrachiatum. The aim of this study was to identify 148 the isolates of Trichoderma on species level by sequencing the ITS region of Ribossomal and to evaluate their biodiversity with reference to geographical originan. Was performed, in vitro, selection of isolates with potencial biocontrol, which were evaluated in greenhouse as the ability of white mold supression and as beans growth promoters. The 29 selected isolates were also subjected to the technique of MALDI-TOF MS (Matrix-assisted laser desorption / ionization-time of flight mass spectrometry) to confirm the species, correlating this technique in identification with molecular technique employed. Culture filtrates of isolate CEN 201, with potential to inhibit the mycelial growth of the pathogen above, were subjected to techniques of extraction and purification of secondary metabolites. The capacity of mycelial growth inhibition of S. Sclerotiorum by these compounds was confirmed. In chapter 1, are reported results of these studies showing that 17,4% of the isolates showed a high level of antagonism in pairing cultures and two groups showed 83,3 to 88,9% of inhibition of the pathogen by volatile metabolites. Another point emphasized in this study was the index of biodiversity on 144 Trichoderma isolates from seven Brazilian states, which reached 0,076 with 11 species. Already Chapter 2 reports the suppression of white mold with 19 of the 29 isolates selected in vitro in Chapter 1. It was observed, also, promote growth of bean plants with 7 isolates tested. Also shown are the results obtained by identification of the isolated mass spectrometry (MALDI-TOF MS). These results, compared with the data obtained in the molecular identification verified in the previous chapter showed the convergence of the two techniques, confirming the potential of MALDI-TOF MS as a rapid method for identification of Trichoderma species. The Chapter 3 is focused on studies of non-volatile metabolites produced by isolated CEN201 (T.asperellum). The techniques used, liquid chromatography and MALDI-TOF MS was enable, by homology mass/charge, to infer the presence of two compounds with antibiotic activity, Trichocompactin and Asperelin B in culture filtrates studied.

O eucalipto participa de modo importante na silvicultura brasileira pela sua adaptabilidade, rápido crescimento e produtividade. Além disso, possui outras características como qualidade, diversidade e adequação de sua madeira para a indústria. A continuidade dos reflorestamentos com eucalipto demanda uma produção contínua de mudas. Entretanto, nos viveiros estas podem ser atacadas por doenças, como o mofo-cinzento e o oídio, causados por Botrytis cinerea e Oidium sp., respectivamente, principais doenças fúngicas que ocorrem na região Sul. O controle destas doenças é feito com fungicidas em outras culturas e em eucalipto o seu uso não é recomendado pela falta de produtos registrados. Além disso, podem surgir efeitos indesejáveis, como a poluição ambiental e a intoxicação do homem e de animais. O objetivo deste trabalho foi o estudo e a seleção de produtos eficientes para o controle alternativo dessas doenças. Para a execução dos experimentos foram utilizadas mudas de Eucalyptus dunnii nos experimentos com B. cinerea e mudas de E. benthamii com Oidium sp. Estas foram pulverizadas com fungicidas (parâmetro de controle), produtos químicos não fungicidas, óleos essenciais, extratos de plantas, leite e derivados e microrganismos. De cada um destes grupos foi selecionado o tratamento com menor valor de severidade, que foram testados entre si. A avaliação consistiu da medição da severidade das doenças, que foi determinada por meio de escalas descritivas de 0 (ausência de sintomas) a 4 (sintomas muito severos), específicas para cada patógeno. Verificou-se, em testes preliminares, os menores valores de severidade das doenças para o tanino e Mentha x villosa no controle do mofo -cinzento e para o leite de vaca e Lecanicillium sp. no controle do oídio. No experimento final, os produtos alternativos que apresentaram os menores valores de severidade foram: tanino controlando o mofo-cinzento e leite de vaca e Lecanicillium sp. controlando o oídio

Orientador: Marcelo Agenor Pavan
Banca: Rumy Goto
Banca: Rômulo Fujito Kobori
Resumo: A melancia (Citrullus lanatus (Thunb.) Mansf.) é uma das hortaliças mais produzidas no mundo. Uma das principais doenças que ocorrem na cultura é o crestamento gomoso do caule, causado pelo fungo Didymella bryoniae. O controle da doença tem sido realizado por meio de pulverizações com fungicidas, no entanto, o uso de cultivares resistentes deve ser pensado como uma alternativa viável e de efetivo controle no manejo da doença. O trabalho teve como objetivo estudar a herança da resistência ao crestamento gomoso do caule no acesso de melancia Ojakkyo. Para o estudo da herança, as gerações F1, F2 e retrocruzamentos de Ojakkyo com um parental resistente(AU - Pruducer) e um suscetível (Crimson Sweet) foram avaliados em ambiente protegido. Foi considerado também nesse estudo a combinação com a população de AU-Producer. Para comparar as razões de segregação obtidas no estudo da herança da resistência, adotou-se o teste do Quiquadrado (X²). Com base nas segregações obtidas no estudo da herança e nas análises de agressividade realizadas, concluiu-se que a resistência de Ojakkyo ao crestamento gomoso do caule é devida a mais de um gene
Abstract: The watermelon (Citrullus lanatus (Thunb.) Mansf.) is the most produced oleraceous in the world. One of the main diseases that occur in the culture is the gummy stem blight, caused for Didymella bryoniae. The control of the disease has been carried through by means of sprayings with fungicides, however, the use to cultivars resistants must be one of the viable alternative and of effective control about the handling of the disease. The work objectified to elucidate the inheritance of the resistance to gummy stem blight in access of watermelon Ojakkyo. For the study of the inheritance, the F1, F2, generations and backcrosses generations of Ojakkyo with two susceptible populations had been evaluated in protected environment and artificial inoculation. To compare the gotten reasons of segregation in the study of the inheritance of the resistance, the test of Quisquare (X²) was adopted. On the basis of the segregations gotten in the study of the inheritance, were concluded that the resistance of Ojakkyo to the gummy stem blight is due to more than one gene
Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-26Bitstream added on 2014-06-13T19:37:24Z : No. of bitstreams: 1 gabia_aa_me_botfca.pdf: 416606 bytes, checksum: 894930ec055a3224888bc51077855bce (MD5)
Tylenchulus semipenetrans é o principal nematoide em citros, causando perdas que variam de 10 a 30%. Está amplamente disseminado nos pomares citrícolas do Brasil. Para determinar o nível populacional desse nematoide, que varia durante o ano, diferentes variáveis são utilizadas. Sendo assim o objetivo deste trabalho foi avaliar a flutuação populacional do nematoide T. semipenetrans em pomar de laranja ‘Pera Rio’ enxertada em limoeiro ‘Cravo’, correlacionar a população do nematoide no final de cada estação com a produção e correlacionar o número de fêmeas na raiz com o número de juvenis encontrados nas amostras de solo e raiz. As amostragens foram realizadas no final de cada estação climática, durante a safra 2011/2012, numa profundidade de 0-30 cm, na projeção da copa de 10 plantas sem sintomas, 10 com sintomas e as adjacentes das sintomáticas, totalizando 60 plantas. Os nematoides presentes no solo foram extraídos pela metodologia de flutuação em centrifuga e das raízes pela técnica do liquidificador e centrifugação. Os frutos de cada planta foram colhidos separadamente e pesados. Para contagem das fêmeas, 1g de raiz de cada amostra foi submetida à coloração para facilitar a contagem. O número de nematoides no solo e na raiz foram plotados em gráficos e correlacionados com dados de temperatura e precipitação pluviométrica pela análise de Pearson; os dados de peso de fruto por planta e número de nematoides em solo...
Tylenchulus semipenetrans is the main nematodes in citrus trees, causing losses ranging from 10 to 30%. It is widespread in the citrus orchards of Brazil. To determine the level of nematode population which varies over the year, different variable are used. Therefore the objective of this study was to evaluate the fluctuation of nematode T. semipenetrans on acreage with orange ‘Pera Rio’ grafted on ‘Rangpur’, correlate the nematode population at the end of each season with the production and correlate the number of females in the root with the number of juveniles found in soil samples and root . Samples were taken at the end of each season climate, during the 2011/2012 season, at a depth of 0-30 cm, the crown projection of 10 plants without symptoms, 10 with symptoms and symptomatic adjacent plant, totaling 60 plants. The nematodes in the soil were extracted by centrifugal flotation method and the technique of the roots of the blender and centrifugation. The fruits of each plant were harvested and weighed separately. To count the number of females in the roots, 1g of each root sample was colored and subsequently dried. The number of nematodes in soil and roots were plotted on graphs and correlated with data on temperature and rainfall by Pearson analysis, the data for fruit weight per plant and the number of nematodes in soil and roots, on each season, were transformed and analyzed by Spearman correlation, considering both the significance level of 5%. The data on soil nematode, root nematode, sum of soil and root nematode and females per gram of root were analyzed by Pearson correlation analysis and subsequent to the correlation matrix. In the region of Botucatu, central western state of São Paulo, the largest population level of the citrus nematode occurred in late winter and lowest in late spring, and the nematodes... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:24:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-08. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:30:42Z : No. of bitstreams: 1 000851953.pdf: 1134297 bytes, checksum: dc953fb80cca0846560ea9cb4defe65b (MD5)
O milho (Zea mays L.) é uma das culturas mais cultivadas em todo o mundo. No entanto, sua produtividade está constantemente ameaçada por diversos fatores como o ataque de insetos-praga. Entre eles, se destacam os insetos da família Noctuidae, como Spodoptera frugiperda(J.E. Smith) (Lepidoptera: Noctuidae), Striacosta albicosta(Smith) (Lepidoptera: Noctuidae) e Helicoverpa armigera(Hubner) (Lepidoptera: Noctuidae). Alterações no sistema de cultivo como plantios safrinha e sucessão de culturas hospedeiras, aliadas à ampla utilização de milho transgênico Bt vêm demandando maior informações relacionadas a diversos aspectos comportamentais desses insetos, os quais podem influenciar diretamente importantes componentes na implementação de um manejo integrado (MIP) e manejo de resistência (MRI) dessas pragas. Alguns desses estudosnão são facilmente estudadosem condições de campo,assim, exigindo a utilização de técnicas de marcação de indivíduos. Nesse sentido, o trabalho teve como objetivo avaliar o movimento larval de espécies de noctuídeos na planta e entre plantas de milho, bem como desenvolver técnicas de marcação de lagartas de ínstares iniciais para sua aplicação em estudos comportamentais desses insetos. Inicialmente, foi investigado o movimento larval de S. frugiperda na planta de milho em condições de campo (EUA e Brasil) e casa de vegetação (Brasil), bem como o comportamento alimentar da lagarta em estágios reprodutivos de milho em laboratório. Em outro estudo, foi caracterizada a dispersão de lagartas de S. albicosta e S. frugiperda em campos de milho (EUA). Por fim, foram investigadas novas técnicas de marcação de lagartas de ínstares iniciais de H. armigera e ...
Corn (Zea mays L.) is one of the most cultivated crops worldwide. However, its productivity is constantly threatened by several factors such as the attack of insect pests. Among them stand out the species from Noctuidae family, including the fall armyworm Spodoptera frugiperda(J.E. Smith) (Lepidoptera: Noctuidae), the western bean cutworm Striacosta albicosta(Smith) (Lepidoptera: Noctuidae), and the old world cotton bollworm Helicoverpa armigera(Hubner) (Lepidoptera: Noctuidae). Alterations in crop systems such as off-season plantations and succession of host crops, combined with the extensive use of transgenic Bt corn, have been demanding more information related to various behavioral aspects of these insects, which can directly influence important components in the implementation of integrated pest management (IPM) and resistance management (IRM) of these pests. Some of these behavioral aspectsare not easy to observe in field conditions, and require the use of marking techniques for individuals. In this sense, this work aimed to evaluate the larval movement of noctuidae species in reproductive corn stages, as well as develop marking techniques for early instars and test their application in behavioral studies of these insects. Initially, the on-plant larval movement of the fall armyworm was investigated in field (US and Brazil), and greenhouse conditions (Brazil), as well as the feeding behavior of the larvae on different corn tissues in laboratory. In another study, the dispersion of the western bean cutworm and fall armyworm larvae was characterized in corn fields (USA). In the last step, new marking techniques of early larval instars were investigated forH. armigera, and their application were tested in a behavioral study at ...

Orientador: Edson Luiz Lopes Baldin
Coorientador: Thomas Elliot Hunt Coorientadora: Dr. Silvana Vieira de Paula-Moraes Tese
Coorientador: Silvana Vieira de Paula-Moraes
Banca: Carlos Frederico Wilcken
Banca: José Djair Vendramim
Banca: Efrain Santana Souza
Banca: Arlindk Leal Boica Junior
Resumo: O milho (Zea mays L.) é uma das culturas mais cultivadas em todo o mundo. No entanto, sua produtividade está constantemente ameaçada por diversos fatores como o ataque de insetos-praga. Entre eles, se destacam os insetos da família Noctuidae, como Spodoptera frugiperda(J.E. Smith) (Lepidoptera: Noctuidae), Striacosta albicosta(Smith) (Lepidoptera: Noctuidae) e Helicoverpa armigera(Hubner) (Lepidoptera: Noctuidae). Alterações no sistema de cultivo como plantios safrinha e sucessão de culturas hospedeiras, aliadas à ampla utilização de milho transgênico Bt vêm demandando maior informações relacionadas a diversos aspectos comportamentais desses insetos, os quais podem influenciar diretamente importantes componentes na implementação de um manejo integrado (MIP) e manejo de resistência (MRI) dessas pragas. Alguns desses estudosnão são facilmente estudadosem condições de campo,assim, exigindo a utilização de técnicas de marcação de indivíduos. Nesse sentido, o trabalho teve como objetivo avaliar o movimento larval de espécies de noctuídeos na planta e entre plantas de milho, bem como desenvolver técnicas de marcação de lagartas de ínstares iniciais para sua aplicação em estudos comportamentais desses insetos. Inicialmente, foi investigado o movimento larval de S. frugiperda na planta de milho em condições de campo (EUA e Brasil) e casa de vegetação (Brasil), bem como o comportamento alimentar da lagarta em estágios reprodutivos de milho em laboratório. Em outro estudo, foi caracterizada a dispersão de lagartas de S. albicosta e S. frugiperda em campos de milho (EUA). Por fim, foram investigadas novas técnicas de marcação de lagartas de ínstares iniciais de H. armigera e ...
Abstract: Corn (Zea mays L.) is one of the most cultivated crops worldwide. However, its productivity is constantly threatened by several factors such as the attack of insect pests. Among them stand out the species from Noctuidae family, including the fall armyworm Spodoptera frugiperda(J.E. Smith) (Lepidoptera: Noctuidae), the western bean cutworm Striacosta albicosta(Smith) (Lepidoptera: Noctuidae), and the old world cotton bollworm Helicoverpa armigera(Hubner) (Lepidoptera: Noctuidae). Alterations in crop systems such as "off-season" plantations and succession of host crops, combined with the extensive use of transgenic Bt corn, have been demanding more information related to various behavioral aspects of these insects, which can directly influence important components in the implementation of integrated pest management (IPM) and resistance management (IRM) of these pests. Some of these behavioral aspectsare not easy to observe in field conditions, and require the use of marking techniques for individuals. In this sense, this work aimed to evaluate the larval movement of noctuidae species in reproductive corn stages, as well as develop marking techniques for early instars and test their application in behavioral studies of these insects. Initially, the on-plant larval movement of the fall armyworm was investigated in field (US and Brazil), and greenhouse conditions (Brazil), as well as the feeding behavior of the larvae on different corn tissues in laboratory. In another study, the dispersion of the western bean cutworm and fall armyworm larvae was characterized in corn fields (USA). In the last step, new marking techniques of early larval instars were investigated forH. armigera, and their application were tested in a behavioral study at ...
Doutor

Orientador: Silvia Renata Siciliano Wilcken
Banca: Sarita Leonel
Banca: Claudio Marcelo Gonçalves de Oliveira
Resumo: Tylenchulus semipenetrans é o principal nematoide em citros, causando perdas que variam de 10 a 30%. Está amplamente disseminado nos pomares citrícolas do Brasil. Para determinar o nível populacional desse nematoide, que varia durante o ano, diferentes variáveis são utilizadas. Sendo assim o objetivo deste trabalho foi avaliar a flutuação populacional do nematoide T. semipenetrans em pomar de laranja 'Pera Rio' enxertada em limoeiro 'Cravo', correlacionar a população do nematoide no final de cada estação com a produção e correlacionar o número de fêmeas na raiz com o número de juvenis encontrados nas amostras de solo e raiz. As amostragens foram realizadas no final de cada estação climática, durante a safra 2011/2012, numa profundidade de 0-30 cm, na projeção da copa de 10 plantas sem sintomas, 10 com sintomas e as adjacentes das sintomáticas, totalizando 60 plantas. Os nematoides presentes no solo foram extraídos pela metodologia de flutuação em centrifuga e das raízes pela técnica do liquidificador e centrifugação. Os frutos de cada planta foram colhidos separadamente e pesados. Para contagem das fêmeas, 1g de raiz de cada amostra foi submetida à coloração para facilitar a contagem. O número de nematoides no solo e na raiz foram plotados em gráficos e correlacionados com dados de temperatura e precipitação pluviométrica pela análise de Pearson; os dados de peso de fruto por planta e número de nematoides em solo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
Abstract: Tylenchulus semipenetrans is the main nematodes in citrus trees, causing losses ranging from 10 to 30%. It is widespread in the citrus orchards of Brazil. To determine the level of nematode population which varies over the year, different variable are used. Therefore the objective of this study was to evaluate the fluctuation of nematode T. semipenetrans on acreage with orange 'Pera Rio' grafted on 'Rangpur', correlate the nematode population at the end of each season with the production and correlate the number of females in the root with the number of juveniles found in soil samples and root . Samples were taken at the end of each season climate, during the 2011/2012 season, at a depth of 0-30 cm, the crown projection of 10 plants without symptoms, 10 with symptoms and symptomatic adjacent plant, totaling 60 plants. The nematodes in the soil were extracted by centrifugal flotation method and the technique of the roots of the blender and centrifugation. The fruits of each plant were harvested and weighed separately. To count the number of females in the roots, 1g of each root sample was colored and subsequently dried. The number of nematodes in soil and roots were plotted on graphs and correlated with data on temperature and rainfall by Pearson analysis, the data for fruit weight per plant and the number of nematodes in soil and roots, on each season, were transformed and analyzed by Spearman correlation, considering both the significance level of 5%. The data on soil nematode, root nematode, sum of soil and root nematode and females per gram of root were analyzed by Pearson correlation analysis and subsequent to the correlation matrix. In the region of Botucatu, central western state of São Paulo, the largest population level of the citrus nematode occurred in late winter and lowest in late spring, and the nematodes... (Complete abstract click electronic access below)
Mestre

Orientador: Leonardo Fernandes Fraceto
Resumo: A ocorrência de doenças tem ocasionado perdas severas na indústria aquícola. Em virtude do mau uso de produtos químicos no controle e prevenção de doenças em peixes, fica cada vez mais evidente que podem acarretar problemas de contaminação ambiental e riscos à saúde humana. Tem-se buscado novas técnicas de controle alternativo de doenças, como é o caso do emprego de óleos essenciais e extratos vegetais. O eugenol e o óleo de alho são antimicrobianos e antifúngicos naturais, ricos em compostos fenólicos. Entretanto, a eficácia depende da sua disponibilidade e preservação, portanto tem-se buscado alternativas capazes de aumentar sua eficácia, reduzir a volatilização e retardar a taxa de degradação no meio ambiente. Nesse sentido, novos procedimentos estão sendo conduzidos a fim de obter formulações mais eficazes. Polímeros e proteínas estão sendo estudados uma vez que possuem a capacidade de encapsular ativos. A zeína, principal proteína do milho, apresenta características de solubilidade e biocompatibilidade aos seres vivos, tornando a proteína adequada para a desenvolvimento de sistemas carreadores para encapsular ativos, tais como os óleos essenciais. Assim, objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento e caracterização de sistemas carreadores a partir de nanopartículas de zeína para encapsulamento de eugenol e óleo essencial de alho. As formulações apresentaram eficiência de encapsulação superior a 85% para ambos os óleos. As nanopartículas de zeína preparadas neste estudo ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
The occurrence of diseases has caused severe losses in the aquaculture industry at any stage. Due to the misuse of chemicals in the control and prevention of fish diseases, it is increasingly evident that they can lead to problems of environmental contamination and risks to human health. It has been tried to obtain new techniques of alternative control of diseases, as it is the case of the use of essential oils and vegetal extracts. Eugenol and garlic oil are antimicrobial and natural antifungals, rich in phenolic compounds. However, the efficacy of these compounds depends on their availability and preservation, therefore we have looked for alternatives capable of increasing their effectiveness, reduce the volatilization and delay the rate of degradation in the environment. In this sense, new procedures are being conducted in order to obtain more effective formulations. Polymers and proteins are being studied due to encapsulation capacity, zein, the main maize protein, has characteristics of solubility and biocompatibility. These characteristics make zein a suitable protein for the development of carrier systems to encapsulate active (essential oils). The objective of this work was the development and characterization of carrier systems from zein nanoparticles for encapsulation of eugenol and essential oil of garlic. The formulations showed encapsulation efficiency higher than 85% for both oils. The zein nanoparticles prepared in this study had an average size of 200-300 nm, a polydispersity index of 0.2 to 0.3 and a zeta potential of -31 to -27 mV. The formulations remained stable for a period of 30 days. Infrared (FTIR) and differential calorimetry (DSC) analyzes demonstrated the interaction of the active compounds with the zein protein matrix. Through the release assays it was observed that the release of eugenol by nanoparticles occurs through anomalous... (Complete abstract electronic access below)
Mestre

Orientador: Carlos Frederico Wilcken
Banca: Nádia Cristina de Oliveira
Banca: Leonardo Rodrigues Barbosa
Resumo: O setor florestal brasileiro é um dos mais desenvolvidos e competitivos do mundo, sendo líder mundial em produtividade de eucalipto. A presença de grandes maciços florestais favorece a ocorrência de pragas. O gorgulho-do-eucalipto, Gonipterus platensis Marelli (Coleoptera: Curculionidae), é a principal espécie de besouro desfolhador do eucalipto no mundo. As injúrias na planta hospedeira são causadas por adultos e larvas, sendo a última responsável pelas desfolhas mais severas. Os danos podem chegar à redução de 42,8% no incremento médio anual da árvore. O controle biológico por meio do parasitoide de ovos Anaphes nitens Girault (Hymenoptera: Mymaridae) é a principal estratégia de controle de Gonipterus spp., responsável pelo controle populacional da praga desde as primeiras detecções no Brasil na década de 1950. Todavia, surtos de G. platensis têm sido observados em regiões onde ácaros do gênero Pyemotes foram detectados se alimentando de ovos de G. platensis e onde o parasitismo e o estabelecimento do parasitoide caíram. Este trabalho teve como objetivo estudar possíveis fatores bióticos associados ao parasitoide A. nitens, avaliando a capacidade de parasitismo em diferentes populações do parasitoide e realizando prospecção de bactérias simbiontes que possam de alguma maneira interferir no fitness do hospedeiro. Para o parasitismo entre 2 populações de A. nitens, provenientes dos Estados de São Paulo, e Espírito Santo, ambas exibiram resultados de parasitismo, porcentagem d... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
Abstract: The Brazilian forestry sector is one of the most developed and competitive in the world, being the world leader in eucalyptus productivity. The presence of large forest masses favors the occurrence of pests. The Eucalyptus-snout-beetle, Gonipterus platensis Marelli (Coleoptera: Curculionidae), is the main species of eucalyptus defoliator beetle in the world. Injuries to the host plant are caused by adults and larvae, the latter being responsible for the most severe defoliation. The damages can reach the reduction of 42.8% in the average annual increment of the tree. Biological control through the parasitoid Anaphes nitens Girault (Hymenoptera: Mymaridae) is the main control strategy of Gonipterus spp., responsible for population control of the pest since the first detections in Brazil in the 1950s. However, outbreaks of G. platensis have been observed in regions where Pyemotes mites were detected feeding on G. platensis's eggs and where parasitism and parasitoid establishment occurred. The objective of this work was to study possible biotic factors associated with the A. nitens parasitoid, evaluating the parasitism capacity in different populations of the parasitoid and conducting prospection of symbiotic bacteria that may interfere in the host 's fitness. For the parasitism between two populations of A. nitens, from the States of São Paulo and Espírito Santo, both showed results of parasitism, emergency percentage and sexual ratio that did not differ significantly. For the p... (Complete abstract click electronic access below)
Mestre

Orientador: Carlos Frederico Wilcken
Banca: Alberto Soares Corrêa
Banca: Pedro José Ferreira Filho
Resumo: O psilídeo-de-concha do eucalipto, Glycaspis brimblecombei (Hemiptera: Aphalaridae) é uma das principais pragas exóticas do eucalipto e foi relatado no estado de São Paulo em 2003, causando danos em plantios de Eucalyptus camaldulensis. O parasitoide Psyllaephagus bliteus (Hymenoptera: Encyrtidae) foi notificado juntamente com a praga e uma nova introdução de parasitoides do México foi realizada para maximizar a eficiência de programas de controle biológico dessa praga. Os objetivos foram avaliar a diversidade genética do psilídeo-de-concha e do seu parasitoide no Brasil utilizando sequenciamento de genes mitocondriais. Insetos das duas espécies, praga e parasitoide, foram coletados em diferentes regiões do Brasil para o sequenciamento de um fragmento de genes mitocondriais. Trinta e quatro indivíduos de G. brimblecombei e 12 de Psyllaephagus spp. foram sequenciados. Um único haplótipo de COI foi encontrado nas populações de G. brimblecombei do Brasil e este é compartilhado com amostras oriundas de Portugal. Isso indica que, provavelmente, houve apenas uma ou poucas introduções do mesmo centro de origem dessa espécie no Brasil e proveniente de uma linhagem invasora presente em diferentes locais do mundo. Este fato sugere que as rotas de invasão de G. brimblecombei no mundo estão interligadas, o que parece ser um padrão para pragas invasoras de eucalipto. Para o parasitoide dois haplótipos distintos foram encontrados, com alta distância genética entre eles, sugerindo a presenç... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
Abstract: Red gum lerp psyllid, Glycaspis brimblecombei (Hemiptera: Aphalaridae) is one of the most important Eucalyptus exotic pests. Its first report in Brazil was in 2003, in the state of São Paulo, damaging Eucalyptus camaldulensis plantations. The parasitoid Psyllaephagus bliteus (Hymenoptera: Encyrtidae) was recorded together with the past and a new introduction of parasitoids from Mexico was carried out to improve the efficiency of biological control programs of this pest. The objectives were to evaluate the genetic diversity of the red gum lerp psyllid and its parasitoid in Brazil using mitochondrial genes sequencing. Insects of both species were collected from different regions in Brazil. Thirty-four individuals of G. brimblecombei and twelve samples of Psyllaephagus spp. were successful sequenced. A single COI gene haplotype was found in G. brimblecombei populations from Brazil and this is the same haplotype that occurs in Portugal samples, indicating one or few introduction events of G. brimblecombei in Brazil is originated from an invasive lineage distributed in other regions from the world. This fact suggests that the invasion routes of G. brimblecombei in the world are interconnected, which seems to be a standard for invasive Eucalyptus pests. Two distinct haplotypes, with a high genetic distance between them, were identified for the parasitoid. It confirms the presence of two parasitoid species in Brazil, one already identified, P. bliteus, and a second species of Psyllaephagus not morphologically identified. However, we can confirm that both parasitoid species collected in Brazil are exotic species originated from Australia
Mestre

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2010.
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O trabalho foi realizado entre julho de 2008 a agosto de 2009 e teve como objetivo avaliar o efeito de doses de nitrogênio, potássio e silício na incidência da traça-das-crucíferas em plantas de repolho e avaliar o efeito do silício em algumas características biológicas da fase larval da praga sob condições de laboratório. Dois experimentos foram realizados, tendo sido o primeiro conduzido a campo, onde se avaliou o efeito de diferentes doses de nitrogênio, potássio e silício na injuria causada pela praga e na produção de repolho. O segundo estudo, composto de três ensaios, foi realizado em laboratório, e objetivou avaliar o efeito de doses de silício na preferência alimentar, mortalidade e desgaste da mandíbula de P. xylostella. Observou-se maiores injúrias causadas pela traça nas plantas que receberam doses maiores de nitrogênio e potássio e, menor dano, nas plantas que receberam silício. A maior massa fresca por cabeça de repolho foi observada no tratamento que recebeu adubação corretiva, seguido pelos tratamentos com doses altas de nitrogênio e potássio. Menor massa fresca foi observada em plantas do tratamento testemunha (sem adubação). Plantas que receberam silício produziram cabeças com tamanho desejado pelo mercado, cerca de 900g. Em relação às características biológicas do inseto, observou-se que o produto contendo silício em todas as doses testadas, interferiu aumentando a mortalidade, exercendo efeito de preferência sobre as lagartas e danificando as mandíbulas. O silício apresenta características que indicam que o nutriente pode vir a ser utilizado em programas de manejo da traça-das-crucíferas na cultura do repolho. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT
The research was carried out from July 2008 to August 2009 to evaluate the effect of nitrogen, potassium, silicon fertilization in the incidence of diamondback moth in cabbage plants and to evaluate silicon effect in some biological characteristics of the insect. Two experiments were established. The first one was developed at UnB-FAL where the effect of different doses of nitrogen, potassium and silicon on insect damages and yield were evaluated. The second one, composed by three trials, was developed at Embrapa Hortaliças to evaluate silicon effect on feeding preference, mortality and jaws mandibles damages. The highest insect damages were observed on plants that received the highest doses of nitrogen and potassium. Fewer damages were observed on plants sprayed with silicon. The highest plant weight was observed on plants that received chemical fertilization according to soil analyses, followed by treatments with highest doses of nitrogen and potassium. The lowest plant weight was observed in plants from the control with no fertilization. Plants with silicon presented a fresh weight desirable by the market, about 900g. For biological characteristics, silicon interfered by increasing mortality, attracting the worms and provoking serious jaws mandible damages. Therefore, fertilization has influenced insect incidence and, consequently, damages. Silicon showed characteristics that indicate a possible use in pest management programs aiming diamondback moth control on cabbage plants.

Dissertação (Mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de ciências biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ecologia, 2012.
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O bicudo-do-algodoeiro, Anthonomus grandis Boheman (Coleoptera: Curculionidae), é considerado uma das pragas-chave da cotonicultura brasileira devido ao prejuízo econômico causado por sua infestação, ausência de inimigos naturais eficientes e difícil controle por inseticidas. Uma das formas de monitoramento dessa praga tem sido feita através de armadilhas contendo feromônio de agregação e tem mostrado relativo sucesso. No entanto, estudos de campo revelaram que durante o período de floração do algodoeiro o número de insetos capturados nestas armadilhas diminui consideravelmente, sugerindo que voláteis produzidos pela planta neste estágio fenológico podem estar envolvidos na atração do bicudo. Os objetivos do trabalho foram avaliar o perfil químico dos compostos orgânicos voláteis do algodoeiro nos diferentes estágios fenológicos e sob diferentes condições de herbivoria, bem como a atratividade destes para os adultos de A. grandis. Além disso, verificou-se a existência de sinergismo entre os voláteis liberados pelo algodoeiro e o feromônio de agregação emitido por machos de A. grandis. Assim, foram conduzidas coletas de voláteis de plantas de algodão, nos estágios vegetativo e reprodutivo, quando danificadas por insetos de diferentes guildas alimentares: o percevejo Euschistus heros Fabricius (Hemiptera: Pentatomidae), a lagarta Spodoptera frugiperda J. E. Smith (Lepidoptera: Noctuidae) e o besouro A. grandis. Os extratos contendo os voláteis do algodoeiro obtidos das aerações foram usados em bioensaios em olfatômetro em “Y” para avaliar a resposta de adultos de A. grandis e para análises químicas, por cromatografia gasosa e cromatografia gasosa acoplada ao espectrômetro de massas. Os dados de olfatometria mostraram que os adultos de A. grandis foram atraídos pelos voláteis emitidos por plantas de algodão no estágio reprodutivo danificadas por co-específicos. Os voláteis induzidos por herbivoria do bicudo-do-algodoeiro em plantas no estágio reprodutivo apresentaram efeito sinérgico com o feromônio de agregação, aumentando o potencial de atração deste. Os voláteis induzidos por herbivoria de heteroespecíficos não foram atrativos para os adultos de A. grandis. As análises químicas mostraram que o algodoeiro produz diferentes perfis de liberação de voláteis de acordo com seu estágio fenológico e inseto que o ataca. Esse perfil foi qualitativamente semelhante, contudo apresentou diferenças quantitativas entre os tratamentos. O algodão no estágio vegetativo liberou voláteis em maior concentração quando comparado com o estágio reprodutivo. Em ambos os estágios, as maiores taxas de liberação de voláteis foram observadas nos tratamentos de herbivoria por A. grandis. Dessa forma, os resultados mostram que A. grandis usa os voláteis emitidos pelo algodoeiro danificado por co-específicos para a localização de hospedeiros e que compostos de origem terpênica estariam envolvidos em sua atratividade. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT
The boll weevil, Anthonomus grandis Boheman (Coleoptera: Curculionidae), is considered the major pest in cotton fields in Brazil, due to the economic losses caused by its infestation, absence of effective natural enemies and difficult to control through the insecticides usage. This pest has been successfully monitored throughout traps baited with aggregation pheromone with relative success. However, field studies showed that the number of insects caught in these traps was significantly reduced during the cotton blooming, suggesting that volatiles produced by plants in this phenological stage may be involved in the boll weevil’s attraction. The objectives of this study were evaluate the chemical profile of volatile organic compounds emitted by cotton plants at different phenological stages and under different infestation conditions, as well as the attractiveness of these volatiles to adults of A. grandis. In addiction, we verified if there is synergism between the volatiles released by cotton plants and the aggregation pheromone emitted by male boll weevils. Thus, headspace volatile were collected from cotton plants, in the vegetative and reproductive stages, and damaged by insects of different feeding guilds: the brown-stink bug Euschistus heros Fabricius (Hemiptera: Pentatomidae), the fall-armyworm Spodoptera frugiperda J. E. Smith (Lepidoptera: Noctuidae) and the boll weevil A. grandis. The cotton plant extracts obtained from headspace collections were used in “Y” tube olfactometer bioassays to evaluate the boll weevil’s response and for chemical analysis using gas chromatography and gas chromatography-mass spectometry. Olfactometry data showed that adults of A. grandis were attracted by volatiles emitted from cotton reproductive plants damaged by conspecific. Boll weevil’s herbivore-induced volatiles in cotton reproductive plants presented a synergistic effect with the aggregation pheromone, increasing its attracting potential. Volatiles induced by heterospecific herbivores were not attractive to adults of A. grandis. Chemical analysis showed that cotton plants produced different volatile profiles, based on their phenological stage and attacking insects. These profiles were qualitatively similar, but showed significant quantitative differences between treatments. Vegetative cotton plants released higher volatile concentrations compared to reproductive cotton plants. In both stages, the highest released volatile rates were observed in A. grandis herbivore treatments. Thus, the results showed that A. grandis uses conspecific herbivore induced volatiles to localize hosts plants and terpenic compounds may be involved in its attractiveness.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Agronomia, 2012.
Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2012-07-04T23:59:50Z No. of bitstreams: 1 2012_CristinaLimadeMacedo.pdf: 1092613 bytes, checksum: d4d04d70cd2cf8f4d1fa3dec41b22ff7 (MD5)
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Diatraea saccharalis (Fabricius, 1794; Lepidoptera: Crambidae) é responsável por perdas econômicas nas lavouras afetando a cultura e o aproveitamento industrial da cana-de-açúcar. Seu hábito alimentar gera dificuldade no seu controle causando impactos à cultura canavieira. O desenvolvimento de novas estratégias para o seu controle de extrema importância. Uma alternativa para o controle desses insetos é a utilização de agentes de controle biológico, como Bacillus thuringiensis (Bt), pois esta bactéria sintetiza diferentes proteínas tóxicas a muitas pragas. Este estudo teve como objetivo, selecionar 106 estirpes da coleção de Bactérias de Invertebrados da Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia tóxicas à broca-da-cana. As estirpes selecionadas foram caracterizadas por métodos bioquímicos, moleculares e a ligação das toxinas aos receptores presentes no intestino médio das larvas de D. saccharalis foi analisada. Foram selecionadas três estirpes de B. thuringiensis, denominadas S602, S1264 e S1301, que apresentaram atividade contra D. saccharalis. A caracterização do perfil protéico revelou a presença de proteínas de 130 e 65 kDa, que correspondem às toxinas Cry1 e Cry2, respectivamente. A caracterização molecular mostrou a existência dos genes cry1 e cry2, corroborando com os resultados mostrados no perfil protéico. As proteínas Cry1Aa, Cry1Ab, Cry1Ac e Cry2Aa expressas individualmente por estirpes de Bt foram purificadas, solubilizadas, ativadas com tripsina e biotiniladas para a realização de ensaios de ligação para a observação da ligação da proteína à microvilosidades do intestino do inseto. A CL50 das proteínas Cry1Aa, Cry1Ab, Cry1Ac, Cry2Aa variou entre 222 e 610 ng/cm2. As mesmas apresentaram resultados de toxicidade significativamente semelhantes. As estirpes tóxicas selecionadas neste trabalho e o padrão apresentaram CL50 entre 8 e 43 ng/cm2 bastante inferior e significativamente diferente do das toxinas puras, indicando haver sinergismo entre as toxinas. Os resultados dos ensaios de ligação aos receptores de membrana intestinais mostraram, pela primeira vez, as interações existentes entre as toxinas e os receptores, confirmando o potencial tóxico destas proteínas à D. saccharalis. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT
Diatraea saccharalis (Fabricius, 1794; Lepidoptera: Crambidae) is responsible for great economic losses in crops affecting the culture and the industrial utilization of sugarcane. There eating habits make harder the control by conventional tools causing impacts to sugarcane crops. The development of new strategies for its control is extremely important. An alternative for the control of this insects is the use of biological control agents such as Bacillus thuringiensis (Bt), based on the action of many different proteins synthesized by the bacteria which are active against insects orders. This study aimed to selective strains from collection of Bt in Embrapa Genetic Resources and Biotechnology toxic to the sugarcane borer, D. saccharalis. The strains selected were characterized by biochemical and molecular methods, and the binding assays of the toxins to midgut cell receptors of D. saccharalis were analysed. We selected three strains of B. thuringiensis, named S602, S1264 and S1301, which showed activity against D. saccharalis. Characterization of protein profiles revealed the presence of proteins of 130 and 65 kDa, corresponding to toxins Cry1 and Cry2, respectively. The molecular characterization showed the presence of cry1 and cry2 genes, confirming the results shown in the protein profile. Cry1Aa, Cry1Ab, Cry1Ac and Cry2Aa proteins were expressed individually by strains of Bt. The proteins were purified, solubilized, biotinylated and activated with trypsin for performing binding assays for the observation of protein binding to the microvilli of the insect gut. The CL50 of the proteins Cry1Aa, Cry1Ab, Cry1Ac and Cry2Aa showed variation between 222 and 610 ng/cm2. They have presented in the dose bioassay (LC50) Cry toxins showed no significant differences toxic results. The toxic strains selected at this work and standard showed LC50 between 8 and 43 ng/cm2 values inferior and significant different to the pure toxins, showed existence of synergism between toxins. The results of binding assays done with BBMV’s (Brush-Border Membrane Vesicle) of D. saccharalis, showed for the first time, the interactions between receptors and toxins, confirming the potential toxic effects of these proteins to D. saccharalis.