Academic literature on the topic 'Anticorpo policlonal'
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Journal articles on the topic "Anticorpo policlonal"
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Pedroso, Pedro M. O., Caroline A. Pescador, Paulo M. Bandarra, Djeison L. Raymundo, Mauro R. Borba, Flademir Wouters, Pedro S. Bezerra Júnior, and David Driemeier. "Padronização da técnica de imuno-histoquímica para raiva em amostras de tecido do sistema nervoso central de bovinos fixadas em formol e emblocadas em parafina." Pesquisa Veterinária Brasileira 28, no. 12 (December 2008): 627–32. http://dx.doi.org/10.1590/s0100-736x2008001200012.
Full textAbstract:
Para a padronização da técnica de imuno-histoquímica para raiva foram utilizadas cinco amostras de SNC de bovinos infectados naturalmente com o vírus da raiva usando-se um anticorpo policlonal e dois monoclonais. Para a recuperação antigênica foram avaliados os seguintes reagentes: protease XIV, proteinase K e tampão citrato pH 6,0 mantido a 100ºC por 15 minutos. A detecção de antígeno rábico nas amostras foi possível com os três anticorpos utilizados. O anticorpo policlonal foi superior aos anticorpos monoclonais, demonstrando bons resultados com os três protocolos de recuperação antigênica, obtendo uma maior intensidade de marcação quando utilizado o tampão citrato e calor. A técnica de imuno-histoquímica demonstrou a presença do antígeno viral no citoplasma de neurônios na forma de agregados de grânulos ou de forma redonda ou oval, mostrando cor púsculo de inclusão viral único a múltiplos nos neurônios. A imuno-histoquímica é um método rápido, podendo ser usada na rotina em casos onde inicialmente há suspeita de raiva, especialmente em casos onde fragmentos de cérebro submetidos ao laboratório foram fixados em formol, onde as amostras não podem ser enviadas ao laboratório imediatamente e para a realização de estudos retrospectivos.
2
Almeida, M. C., C. E. Bacc'hi, L. S. Queiroz, and N. O. Facure. "Expressão antigênica em carcinomas do plexo coróide humano: relato de dois casos." Arquivos de Neuro-Psiquiatria 48, no. 3 (September 1990): 336–40. http://dx.doi.org/10.1590/s0004-282x1990000300011.
Full textAbstract:
Neoplasias provenientes do epitélio de revestimento do plexo coróide são inco-muns, tendo sido descritos 6 padrões morfológicos. O padrão anaplásico, também denominado carcinoma do plexo coróide, é o de menor freqüência e pode dar metastases fora do SNC. A distinção histológica desses tumores, particularmente da variedade anaplásica, com outras neoplasias primárias e metastáticas no SNC pode ser difícil. O uso de técnicas imunocitoquimicas em parafina tem-se mostrado útil no esclarecimento das linhagens tumorais. Os papilomas do plexo coróide têm, no entanto, sido objeto de controvérsia, por sua complexa expressão antigênica. Usando a técnica de imunoperoxidase (sistema avidina-biotina-peroxidase) pesquisaram-se, em dois casos da variedade anaplásica, os seguintes marcadores: proteína glial fibrilar ácida (GFAP) com anticorpo monoclonal e policlonal; ceratinas de 40-50kDa, ceratinas de 60-70kDa (callus ceratina), enolase neuronal específica (NSE) e proteína S-100, com anticorpos monoclonais. Os dois tumores mostraram positividade para NSE, proteína S-100 e ceratina de 40-50kDa; uma das duas neoplasias mostrou diferenciação glial, revelando positividade para GFAP tanto com anticorpo monoclonal quanto policlonal.
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Silva, Marinete Flores da, and Veronica Massena Reis. "Produção, caracterização e aplicação de anticorpo policlonal contra Azospirillum amazonense estirpe Am15." Bragantia 68, no. 1 (2009): 1–11. http://dx.doi.org/10.1590/s0006-87052009000100001.
Full textAbstract:
O uso de ferramentas moleculares e imunológicas permite a detecção e o monitoramento específico de microrganismos usados como inoculantes agrícolas. O maior exemplo de sucesso com uso de bactérias diazotróficas na agricultura é o caso da inoculação de soja no Brasil. Entretanto, a inoculação de bactérias diferentes de rizóbio não permite a localização de um sítio específico onde ocorra A redução do nitrogênio atmosférico, pois não há a formação de estruturas nodulares. Este trabalho foi realizado na Embrapa-Agrobiologia, e objetivou produzir e caracterizar um anticorpo policlonal a partir da inoculação de células intactas da estirpe Am15 pertencente à espécie Azospirillum amazonense (Anti-Am15) utilizando o método de ELISA indireto. O anticorpo foi usado em sementes peletizadas com turfa contendo a bactéria-alvo e avaliada sua sobrevivência durante 60 dias. Este anticorpo foi capaz de quantificar populações bacterianas em amostras cujo número mínimo celular foi superior a valores de 100.000 células por mL. De acordo com os resultados, o soro policlonal foi especifico contra o antígeno de interesse, sendo possível sua utilização em estudos de quantificação e monitoramento do Azospirillum sp em plantas de milho que receberam inóculo e no controle da qualidade de inoculante turfoso.
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Andrade, G. I., Z. I. P. Lobato, R. C. Leite, and E. F. Barbosa-Stancioli. "Padronização da técnica de imunoperoxidase para detecção do vírus da diarréia bovina a vírus em cultura de células: Standardization of immunoperoxidase test to detection bovine viral diarrhea virus in cell culture." Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia 54, no. 6 (December 2002): 568–74. http://dx.doi.org/10.1590/s0102-09352002000600002.
Full textAbstract:
Este estudo teve como objetivo a padronização do ensaio de imunoperoxidase em monocamada de células (IPM) para o diagnóstico etiológico da diarréia bovina a vírus (DBV). O teste foi padronizado em monocamada de cultivo primário de pulmão fetal bovino (PFB) inoculada com as amostras clássicas, citopatogênica (CP) e não citopatogênica (NCP), do vírus da DBV e testado em amostras biológicas suspeitas processadas no teste clássico de isolamento viral (IV). O método de IPM identificou o vírus da DBV, apresentando melhores resultados com a utilização do calor como agente fixador, a soroalbumina bovina a 4% em PBS como bloqueador e a revelação com o cromógeno 3-amino-9-etil-carbazol (AEC). Como anticorpos primários, tanto o anticorpo policlonal como o monoclonal forneceram bons resultados.
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Carneiro Jr, Josil B., Silvaldo F. da Silveira, Gonçalo A. de Souza Filho, Fabio L. Olivares, and Éder A. Giglioti. "Especificidade de anti-soro policlonal à Leifsonia xyli subsp. xyli." Fitopatologia Brasileira 29, no. 6 (December 2004): 614–19. http://dx.doi.org/10.1590/s0100-41582004000600003.
Full textAbstract:
Detectar a presença da bactéria Leifsonia xyli subsp. xyli em material de propagação da cana-de-açúcar (Saccharum sp.) é importante para direcionar o controle do raquitismo-da-soqueira. Neste trabalho, objetivou-se produzir anticorpo policlonal específico contra Leifsonia xyli subsp. xyli (Lxx), visando utilizá-lo em método sorológico para detecção do patógeno. Para isso, o antígeno foi preparado a partir de células intactas, após lavagem por centrifugação de cultura-pura em tampão fosfato salino 0,01 M (PBS) e diálise em glutaraldeido 2% em PBS. O plano de imunização em coelho consistiu de duas injeções intramusculares da mistura 1:1 do antígeno com adjuvante Freund (completo e incompleto, a intervalos de 21 dias) e duas injeções subcutâneas do antígeno puro, a intervalos de dez dias. O anti-soro foi testado pelo método de Dot Blot com revelação por peroxidase para se determinar: (i) título do anticorpo e (ii) reação contra Lxx, Xanthomonas axonopodis pv. vesicatoria e bactérias endofíticas de cana-de-açúcar (Azospirillum brasilense, A. lipoferum, Herbaspirillum rubrisubalbicans, H. seropedicae e Gluconacetobacter diazotrophicus). A maior diluição analisada do anti-soro 1:20.000 mostrou reação fortemente positiva e específica contra Lxx e ausência de reação contra as demais bactérias. A purificação da fração IgG (Imunoglobulina G) não resultou em melhoria na reatividade e especificidade do anti-soro. Estimou-se o nível de detecção do método a partir de suspensão bacteriana em 2x10(6) células/ml.
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Pavani, Josymara Ming, Maria de Fátima Locateli, and Sofia Rocha Lieber. "Caracterização de anticorpos contra antígenos eritrocitários na doença hemolítica perinatal (DHPN)." Sínteses: Revista Eletrônica do SIMTEC, no. 6 (October 27, 2016): 257. http://dx.doi.org/10.20396/sinteses.v0i6.8625.
Full textAbstract:
O presente estudo teve por objetivos: (1) levantar a incidência e caracterizar os aloanticorpos contra antígenos eritrocitários, no soro de 2126 gestantes, atendidas no CAISM, no período de janeiro de 2014 a junho de 2015 e (2) investigar a aderência dos alonticorpos maternos nas hemácias fetais, em 76 amostras de sangue de cordão umbilical. Anticorpos irregulares no soro materno foram investigados pelo método de aglutinação em microcoluna de gel, empregando-se painel de hemácias previamente tipadas (Diamed, USA). Aloanticorpos maternos nas hemácias fetais foram verificados empregando-se colunas de gel com antiglobulina humana policlonal e, após eluição, por glicina ácida ou congelamento e descongelamento, procedeu-se a identificação dos mesmos. Sensibilização eritrocitária foi observada em 130 (6,1%) gestantes, mas apenas 85 (4,0%) portavam anticorpos clinicamente relevantes para a DHPN. Em 91,8% dos casos relevantes, a incompatibilidade no sistema Rh foi a responsável na geração de anticorpos, com destaque para o anticorpo anti-D (81,2%). Anticorpos maternos aderidos aos eritrócitos fetais foram observados em 18 (23,7%) casos. Em 83,3%, eram dirigidos aos antígenos do sistema Rh, exclusivamente, ou associados aos antígenos A ou B. Em 1 (5,6%) caso, houve a identificação do anticorpo anti-Fya, relacionado ao sistema Duffy. Foi possível concluir que, apesar da imunoprofilaxia, a alosensibilização para o antígeno D ainda é relevante em nosso meio. Adicionalmente faz-se necessário, ao longo da gestação, a investigação de anticorpos anti-A e anti-B, da classe IgG, bem como, para outros sistemas como o Duffy, com o propósito de minimizar a ocorrência da DHPN.
7
Trost, Maria E., Adriane L. Gabriel, Eduardo K. Masuda, Rafael A. Fighera, Luiz F. Irigoyen, and Glaucia D. Kommers. "Aspectos clínicos, morfológicos e imuno-histoquímicos da pitiose gastrintestinal canina." Pesquisa Veterinária Brasileira 29, no. 8 (August 2009): 673–79. http://dx.doi.org/10.1590/s0100-736x2009000800012.
Full textAbstract:
Através de um estudo retrospectivo dos casos de biópsias e necropsias de cães recebidos no Laboratório de Patologia Veterinária da Universidade Federal de Santa Maria, constatou-se a ocorrência de dois casos confirmados e de quatro casos suspeitos de pitiose gastrintestinal canina. Os dois casos diagnosticados e publicados tiveram a etiologia confirmada através da cultura e indução de zoosporogênese ou por nested-PCR. Neste estudo utilizou-se a técnica de imuno-histoquímica com anticorpo policlonal anti-Pythium insidiosum para confirmação da etiologia dos quatro casos suspeitos. A epidemiologia, sinais clínicos, lesões macroscópicas e microscópicas, características histoquímicas e imuno-histoquímicas e diagnósticos diferenciais são relatados e discutidos.
8
FERNANDO, F. S., M. M. BORZI, A. M. GIBERTONI, M. B. BANDARRA, M. F. S. MONTASSIER, and H. J. MONTASSIER. "USO DE ANTICORPO POLICLONAL ESPECÍFICO PARA NUCLEOPROTEÍNA RECOMBINANTE DO VÍRUS A BRONQUITE INFECCIOSA (VBI) NA TÉCNICA DE IMUNO-HISTOQUÍMICA (IHC) PARA DETECÇÃO DE DIFERENTES ESTIRPES DO VBI / USO DE ANTICORPO POLICLONAL ESPECÍFICO PARA NUCLEOPROTEÍNA.." Ars Veterinaria 29, no. 4 (October 9, 2013): 41. http://dx.doi.org/10.15361/2175-0106.2013v29n4p41.
Full text
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Barbosa, Clara Nilce, and Tânia Rosária Pereira Freitas. "Implementação da técnica de imuno-histoquímica (IHQ) para o diagnóstico do circovírus suíno tipo-2 (CVS-2)." Revista de Ciências Médicas e Biológicas 7, no. 3 (February 2, 2008): 211. http://dx.doi.org/10.9771/cmbio.v7i3.4458.
Full textAbstract:
Circovírus Suíno Tipo-2 (CVS-2) é um virus não-envelopado, DNA fita única circular, classificado na família Circoviridae, associado à Síndrome Multissistêmica do Definhamento dos Suínos (SMDS). A SMDS é considerada uma doença emergente, multifatorial e de distribuição cosmopolita. Os sinais clínicos são inespecíficos e o diagnóstico, além dos achados de necropsia e histopatologia compatíveis com SMDS, deve ser corroborado pela demonstração do ácido nucléico e (ou) do antígeno viral nas lesões. A técnica de Imuno-Histoquímica (IHQ) permite a demonstração de antígenos virais pela aplicação de anticorpos específicos e conjugados de anticorpos. A implementação da IHQ foi realizada aplicando-se anticorpo policlonal anti – CVS -2 em 23 blocos de cortes histológicos, fixados com formalina e embebidos em parafina, sabidamente positivos ou negativos para o CVS-2. A análise histológica prévia demonstrou que os tecidos positivos continham lesões características da SMDS. O genoma do CVS-2 foi demonstrado pela Hibridização “in situ” (HIS). A IHQ implementada foi testada em 16 blocos com de três a quatro amostras de tecidos de animais, totalizando, respectivamente, 48 a 64 amostras de tecido de suínos com suspeita clínica da SMDS. Em dez blocos (40 amostras de tecidos) foram confirmadas pela detecção do genoma viral. Os resultados obtidos pela aplicação da IHQ padronizada foram correlacionados com as lesões histopatológicas compatíveis com a SMDS. A IHQ vem sendo aplicada com êxito no rastreamento do vírus em suídeos de diversas granjas brasileiras onde se estabelece a suspeita de ocorrência de SMDS.
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Corrêa, André Mendes Ribeiro, Caroline Argenta Pescador, Milene Schmitz, Priscila Zlotowsk, Daniela Bernadete Rozza, Eduardo Conceição de Oliveira, David Emilio Barcellos, and David Driemeier. "Aspectos clínico-patológicos associados à circovirose suína no Rio Grande do Sul." Pesquisa Veterinária Brasileira 26, no. 1 (March 2006): 9–13. http://dx.doi.org/10.1590/s0100-736x2006000100003.
Full textAbstract:
No período de janeiro a julho de 2004, foram realizadas 97 necropsias de suínos que apresentaram subdesenvolvimento, aumento generalizado de linfonodos, palidez ou icterícia de mucosas e, ocasionalmente, problemas respiratórios. As principais lesões macroscópicas encontradas incluíram aumento generalizado de linfonodos, pulmões não colapsados com bordos arredondados e áreas de consolidação, especialmente crânio-ventrais, além de edema de septos interlobulares. Os rins estavam pálidos, aumentados de volume e com pontos brancos que, difusamente distribuídos na superfície, infiltravam em forma de estrias até a zona cortical. Alguns apresentavam pequenos pontos vermelhos, semelhantes a petéquias, difusamente distribuídos no córtex renal. O achado histológico comum foi a presença, em graus variáveis, de infiltrados linfo-histiocitários em linfonodos, pulmões e rins. O teste imuno-histoquímico utilizando anticorpo policlonal anti-circovírus suíno tipo 2 foi positivo em amostras provenientes de 50 (89,2%) entre 56 suínos examinados.
Dissertations / Theses on the topic "Anticorpo policlonal"
1
Schenato, Letícia Krause. "Anticorpo policlonal anti-BCG no diagnóstico dos granulomas imunológicos cutâneos." reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS, 2009. http://hdl.handle.net/10183/19085.
Full textAbstract:
Introdução: O emprego de técnicas de interpretação imunológica de agentes infecciosos, de uma maneira geral, confere maior sensibilidade e especificidade ao exame histopatológico; o anticorpo policlonal anti-BCG tem sido testado como uma coloração imunoistoquímica de triagem para espécimes de biópsias cutâneas, com suspeita de origem infecciosa; em casos de infecções fúngicas e bacterianas, os resultados mostraram-se claramente superiores aos conseguidos pelas técnicas histoquímicas convencionais. Objetivos: Verificar a positividade da reação imunoistoquímica com o anti-BCG em granulomas imunológicos cutâneos, que não puderam ter o seu diagnóstico etiológico definido pelos métodos histoquímicos usuais de coloração para agentes infecciosos (Grocott e Ziehl-Neelsen) e também descrever a sensibilidade e especificidade deste anticorpo, através da comparação com os exames culturais para fungos e micobactérias. Metodologia: Procedeu-se à técnica imunoistoquímica com o anti-BCG em 33 biópsias cutâneas com granulomas imunológicos, com colorações de Grocott e Ziehl-Neelsen negativas. Também foram selecionados 13 casos de hanseníase virchowiana e 11 de granulomas por degeneração do colágeno, para que servissem de controles positivos e negativos, respectivamente. A leitura das lâminas foi realizada por dermatopatologista do HCPA que não tinha conhecimento dos dados clínicos dos pacientes. Não foi realizada a quantificação do antígeno nos cortes. Resultados: Dos 33 casos estudados, 13 (39,4%) apresentaram imunoistoquímica positiva com o anti-BCG, os diagnósticos finais foram: 4 casos (12,12%) de tuberculose, 4 casos de esporotricose, 1 caso (3.03%) de cromomicose, 1 caso de hanseníase tuberculóide e 3 casos (9.09%) que não puderam ter o diagnóstico conhecido, pois perderam o acompanhamento médico. A sensibilidade do anti-BCG quando comparado com a cultura para fungos foi de 57,1% e a especificidade de 66,7%; na comparação com a cultura para micobactérias a sensibilidade foi de 100%, porém só haviam 2 exames positivos, e a especificidade foi de 67,7%. Nos casos de hanseníase virchowiana, a sensibilidade e a especificidade foi de 100%. Conclusão: A técnica imunoistoquímica com o anticorpo anti-BCG é relativamente fácil, rápida e de baixo custo e mostrou ser útil na identificação de microorganismos que não foram prontamente visualizados com as colorações de Grocott e Ziehl-Neelsen. Entretanto, o pequeno número de controles pode ter influenciado no desempenho do método.
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Menezes, Márcio Anunciação. "Anticorpos anti-intimina: análise da reatividade dos anticorpos policlonal e monoclonal, clonagem e expressão do fragmento variável de cadeia simples (scFv) do anticorpo monoclonal." Universidade de São Paulo, 2010. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-19032010-161924/.
Full textAbstract:
Intimina é o principal fator de virulência envolvido na patogênese de Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) e de Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC). A detecção de EHEC e EPEC típica ou atípica é de fundamental importância na definição da conduta terapêutica das infecções promovidas por E. coli, que ainda são a principal causa de diarreia aguda em crianças e adultos em muitos países desenvolvidos e em desenvolvimento. Anticorpos são ferramentas importantes na detecção de diversos patógenos. Neste trabalho avaliou-se a sensibilidade e especificidade dos anticorpos policlonal e monoclonal anti-intimina frente a isolados de EPEC e EHEC por immunoblotting. Os anticorpos apresentaram 100% de especificidade e a sensibilidade foi de 97%, 92% e 78%, quando se utilizou a fração enriquecida em IgG do soro de coelho, antissoro de rato e anticorpo monoclonal, respectivamente. Esse anticorpo monoclonal anti-intimina foi caracterizado como IgG2b e 1 µg desse anticorpo reconheceu 0,6 µg de intimina purificada com uma constante de dissociação de 1.3 x 10-8 M. A menor reatividade do anticorpo monoclonal em relação aos anticorpos policlonais levou-nos à clonagem e expressão do fragmento variável de cadeia simples desse anticorpo (scFv). Para isso, o mRNA do hibridoma anti-intimina foi extraído, reversamente transcrito para cDNA e amplificadas as cadeias leve e pesada da fração variável do anticorpo, utilizando iniciadores aleatórios comerciais. As cadeias amplificadas foram ligadas ao vetor pGEM-T Easy e sequenciadas. Iniciadores específicos foram desenhados e utilizados em uma estratégia de amplificação e união das cadeias, formando o scFv, que por sua vez foi clonado no vetor de expressão pAE. Linhagem de E. coli BL21(DE3)pLys foi transformada com o plasmídeo pAE-scFv antiintimina e submetida à indução protéica. O scFv anti-intimina foi expresso de forma insolúvel, solubilizado, purificado e submetido ao ensaio de refolding. O rendimento obtido foi de 1 mg de proteína por 100 mL de cultivo bacteriano. Para testar a funcionalidade do scFv, foram realizados ensaios de ELISA de captura e imunofluorescência. Os resultados mostraram que 275 ng de scFv reagiram com 2 µg de intimina purificada a uma absorbância de aproximadamente 0,75 e por imunofluorescência mostrou uma forte reatividade ao isolado de EPEC típica E2348/69. Este estudo demonstrou que o anticorpo recombinante anti-intimina obtido foi capaz de reconhecer a região conservada de intimina (Int388-667) na forma purificada e a intimina α no isolado de EPEC típica, e se mostrou mais eficiente que o anticorpo monoclonal nativo.Intimin is the major virulence factor involved in the pathogenesis of enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) and enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC). The detection of EHEC and typical or atypical EPEC has fundamental importance in defining the therapeutic management of infections caused by E. coli, which are still the leading cause of acute diarrhea in children and adults in many developed and developing countries. Antibodies are important tools in the detection of several pathogens. In this study it was evaluated the sensitivity and specificity of polyclonal and monoclonal antibodies against intimin in the detection of EPEC and EHEC by immunoblotting. All employed antibodies showed 100% specificity and the sensitivity was 97%, 92% and 78% for rabbit anti-intimin IgG-enriched fraction, rat antisera and monoclonal antibody, respectively. This anti-intimin monoclonal was characterized as IgG2b and 1 mg recognized 0.6 µg of purified intimin with a dissociation constant of 1.3 x 10-8 M. The less extent reactivity of monoclonal led us to clone and express the single chain fragment variable of this antibody (scFv). Thus, the anti-intimin hybridoma mRNA was extracted, reverse transcribed to cDNA and the light and heavy chains of variable fragment of the antibody were amplified using commercial random primers. The chains were amplified, ligated to the pGEM-T Easy vector and the insert was sequenced. Specific primers were designed and used in a strategy to amplify and link the chains, obtaining the scFv, which was cloned into the pAE expression vector. E. coli BL21(DE3)plys was transformed with the pAE-scFv anti-intimin plasmid and subjected to induction of protein expression. The scFv anti-intimin, expressed in the insoluble fraction, was purified and submitted to refolding. The yield was 1 mg of protein per 100 mL of bacterial culture. To test the functionality of the scFv, ELISA and immunofluorescence assays were performed. The results showed that 275 ng of scFv reacted with 2 µg of purified intimin resulting in an absorbance of 0.75. By immunofluorescence it was observed a strong reactivity to the typical EPEC isolate E2348/69. This study demonstrated that the recombinant anti-intimin antibody obtained was able to recognize the conserved region of intimin (Int388-667) in its purified form and α intimin in a typical EPEC isolate, and was more efficient than the native monoclonal antibody.
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Assmann, Ana Luiza Palma Guimarães. "Produção e caracterização de anticorpo policlonal e monoclonal anti-3abc do virus da febre aftosa." reponame:Repositório Institucional da UFPR, 2015. http://hdl.handle.net/1884/43999.
Full textAbstract:
Orientadora : Profa. Dra. Vanete Thomaz SoccolDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Tecnologia, Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia. Defesa: Curitiba, 27/02/2015
Inclui referências : f.98-108
Resumo: A febre aftosa é uma doença altamente contagiosa que acomete animais biungulados. Tem distribuição cosmopolita, mas é endêmica na Ásia, África e em alguns países da América do Sul, sendo que o Brasil é considerado zona livre com vacinação. No Brasil o controle epidemiológico da doença é realizado mediante a vacinação e vigilância sanitária sendo necessário diagnóstico diferencial entre animais vacinados de portadores do vírus, para provar a ausência da doença. Desta forma é fundamental o desenvolvimento de testes para diferenciar animais vacinados de doentes e para o controle do processo de produção da vacina. A resposta a anticorpos, contra proteínas não estruturais do vírus, tem sido amplamente utilizada para este propósito, como é o caso do ensaio imuno-enzimático-ELISA/EITB. A proteína 3ABC é uma proteína não estrutural do vírus da febre aftosa e está presente em altos níveis no soro de animais infectados. Visando a diferenciação entre animais doentes e vacinados a proteína ABC deve ser removida durante o processo de produção da vacina, para que o animal imunizado não apresente anticorpos detectáveis contra ela. O objetivo deste estudo foi produzir e caracterizar anticorpos policlonal e monoclonal contra a proteína 3ABC do vírus da febre aftosa, para serem utilizados no desenvolvimento de um teste imunoenzimático que permita monitorar os processos de purificação da vacina, para remover as proteínas não estruturais e controle de qualidade das partidas produzidas visando sua aprovação pelos órgãos fiscalizadores como o Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento (MAPA). Para a produção dos anticorpos policlonal e monoclonal primeiramente foi produzida a proteína 3ABC recombinante a partir do plasmídeo contendo gene que codifica a proteína 3ABC, já com a mutegênese do gene 3ABC no sítio ativo da protease 3Cpro para sua inativação, produzido por Gonzales, 2013. A produção da proteína foi realizada por fermentação da Escherichia coli recombinante em erlenmeyer de um litro e realizada as etapas de semi purificação (anticorpo policlonal) e ou purificação (anticorpo monoclonal). O anticorpo policlonal, produzido em coelhos, apresentou altos títulos a partir de 75 dias pós-imunização. A puriticação foi realizada por cromatografia de afinidade com proteína G, o que resultou em uma imunoglobulina altamente pura, tornando-a mais específica para a proteína de interesse. Para a produção do anticorpo monoclonal foram imunizados camundongos BALB/c por via intramuscular. A fusão realizada originou 217 colônias de hibridomas, sendo 10 deles positivos no tese ELISA indireto. Após clonagem e expansão dos clones positivos, foi realizado o teste de estabilidade permitindo a seleção de dois clones estáveis. Os anticorpos foram caracterizados pelas metodologias de ELISA e Western Blotting e mostraram alta reatividade contra a proteína 3ABC e podem ser utilizados no desenvolvimento do teste ELISA para o monitoramento dos processos de purificação da vacina contra a febre aftosa. Todos os experimentos foram realizados na empresa Ourofino Saúde Animal. Palavras chave: febre aftosa; proteína 3ABC; anticorpo policlonal anti-3ABC; anticorpo monoclonal anti-3ABC.
Abstract: FMD is a highly contagious disease that affects cloven-hoofed animals and is endemic in Asia, Africa and some countries in South America. In Brazil the epidemiological disease control is achieved by vaccination and health surveillance. For this control is necessary differential diagnosis between vaccinated animals and those carrying the virus, to prove the absence of the disease. Thus it is important to develop tests to differentiate vaccinated animals from sick animals. The antibody response against nonstructural proteins of the virus, have been widely used for this purpose, such as the enzyme-immunoassay ELISA / EITB. The 3ABC is a nonstructural protein of FMD virus and it is present in high levels in infected animals serum. It is necessary to be removed during vaccine production, so the immunized animal does not produce detectable antibodies against them. The aim of this study was to produce and characterize polyclonal and monoclonal antibodies against the 3ABC protein of FMD virus, for their use to develop an enzymatic immunoassay experiments. Such experiments will allows the monitoring of the vaccine purification processes, which removes non-structural proteins and also the quality control process of the produced batches for approval by regulatory agencies such as the Ministry of Agriculture Livestock and Supply (MAPA). In this study, the plasmid to heterologous protein 3ABC production was produced by GONZALEZ, 2013. The expression has been optimized for subsequent production of polyclonal and monoclonal antibodies. For animal's immunization, either rabbit or mouse, the protein used was the semi purified protein. And for the monoclonal antibody screening tests, the protein used was the purified protein. The purification in this stage was due to the need of a specific test to select the monoclonal antibody which is also highly specific. The polyclonal antibody produced in rabbits, showed high titers from 75 days post-immunization. The large amount of polyclonal antibody obtained enabled the using of affinity chromatography using protein G, as a purification method, which resulted in a highly pure immunoglobulin, making it more specific to the protein of interest. For the production of monoclonal antibody (Mabs) BALB/c Mice were immunized intramuscularly. The fusion carried out originated 217 hybridomas colonies, 10 of them were positives for antibody production by ELISA test. After cloning and expansion of positive clones, stability tests were performed wich allowed the selection of two stable clones. The antibodies were characterized by ELISA and Western Blotting approaches. The mabs obteined showed high reactivity against 3ABC protein and as a result they can be used in the development of an ELISA assay to monitor the purification processes of the vaccine against FMD. All experiments were performed in Ourofino Animal Health Company. Key-words: FMD; 3ABC protein; polyclonal anti-3ABC; monoclonal anti-3ABC.
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Sá, Gizele Lima de. "Produção e caracterização de um anticorpo policlonal monoespecífico contra rNcp43 para o diagnóstico da neosporose." Universidade Federal de Pelotas, 2012. http://repositorio.ufpel.edu.br/handle/ri/2317.
Full textAbstract:
Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2012-02-14Neosporosis is considered a disease of worldwide distribution. It is caused by the apicomplexa protozoan Neospora caninum, responsible for neuromuscular disorders in dogs and abortions in bovines, which makes it an important pathogen in cattle breeding. The diagnosis of this disease can be accomplished by identifying the parasites by histological sections or by detection of specific antibodies. However, serological methods can be hampered by cross-reactivity with other apicomplexa parasites, such as Toxoplasma gondii. Parasite-specific antigens used for detection of antibodies or in the production of antiserum for the detection of tachyzoites can improve the specificity and sensitivity of diagnostic tests and studies of the biology of the parasite. Among specific antigens of Neospora genus, NcSRS2 (Nc-p43) which is an immunodominant surface protein stands out. It is present in tachyzoites as well as bradyzoites. In this study, Nc-p43 protein was produced in its recombinant form (rNcp43), by inserting the gene NcSRS2 in the cloning vector pET100/DTOPO, which was used to transform Escherichia coli BL21 Star. rNc-p43 protein was evaluated for reactivity with immune sera from naturally infected bovine, ovine and canine species, and used to immunize BALB/c mice for the production of a polyclonal antibody (pAb). rNc-p43 (pAb/rNc-p43) antibody was conjugated to fluorescein isothiocyanate (FITC) and the reactivity with the native protein on the surface of the parasite was evaluated by immunofluorescence. rNc-p43 protein was recognized by anti N. caninum present in immune sera by ELISA and dot blot and it was able to generate antibodies against the p43 antigen. The pAb/rNc-p43 reacted with the rNc-p43 protein in indirect ELISA and Western blotting, detecting N. caninum tachyzoites in direct and indirect immunofluorescence, with a fluorescence pattern only in the apical complex of the parasite, maintaining affinity even after conjugation with FITC. pAb/rNc-p43 showed no cross-reactivity with T. gondii. The results of this study suggest that the rNc-p43 obtained and the pAb produced can be useful in developing diagnostic tests based on the detection of specific antibodies and the antigen present on the surface of the parasite.
A neosporose é considerada uma doença de distribuição mundial, causada pelo protozoário apicomplexa Neospora caninum, causador de desordens neuromusculares em cães e abortos em bovinos, o que o torna um patógeno de relevância na bovinocultura. O diagnóstico desta enfermidade pode ser realizado através da identificação do parasito em cortes histológicos ou pela detecção de anticorpos específicos. No entanto, os métodos sorológicos aplicados podem ser dificultados por reações cruzadas com outros parasitos apicomplexas, como Toxoplasma gondii. Antígenos específicos do parasito utilizados para detecção de anticorpos ou na produção de insumos biológicos para a detecção de taquizoítos podem melhorar a especificidade e a sensibilidade dos testes de diagnóstico e de estudos da biologia do parasito. Entre os antígenos específicos de Neospora, destaca-se a proteína de superfície imunodominante NcSRS2 (Nc-p43), presente tanto em taquizoítos quanto em bradizoítos. Neste estudo, a proteína Nc-p43 foi produzida em sua forma recombinante (rNc-p43), através da inserção do gene NcSRS2 no vetor de clonagem pET100/DTOPO, o qual foi utilizado para transformar a bactéria Escherichia coli BL21 Star. A proteína rNc-p43 foi avaliada quanto a reatividade com soros imunes de animais naturalmente infectados das espécies bovina, ovina e canina; e utilizada para imunizar camundongos da linhagem BALB/c para a produção de um anticorpo policlonal (pAb). O anticorpo anti rNc-p43 (pAb/rNc-p43) foi conjugado com isotiocianato de fluoresceína (FITC) e avaliado quanto a reação com a proteína nativa na superfície do parasito por imunofluorescência. A proteína rNc-p43 foi reconhecida por anticorpos anti N. caninum presente nos soros imunes, através de ELISA e Dot blot e foi capaz de gerar anticorpos contra o antígeno rNc-p43. O pAb/rNc-p43 reagiu com a proteína rNc-p43 em ELISA indireto e Western blotting, detectou taquizoítos de N. caninum em imunofluorescência indireta e direta, apresentando um padrão de fluorescência somente no complexo apical do parasito, mantendo sua afinidade mesmo após sua conjugação com FITC. O pAb/rNc-p43 não apresentou reação cruzada com T. gondii. Os resultados deste estudo sugerem que a rNc-p43 obtida e o pAb gerado podem ser úteis no desenvolvimento de testes de diagnóstico baseados na detecção de anticorpos específicos e do antígeno presente na superfície do parasito.
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Rubensam, Jane Maria. "Estudos sobre atividade de calpastatina em carne bovina e obtenção de anticorpo policlonal anti GST-calpastatina." [s.n.], 1999. http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/255369.
Full textAbstract:
Orientadores: Pedro Eduardo de Felicio, Carlos TermignoniTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos
Made available in DSpace on 2018-07-25T14:10:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rubensam_JaneMaria_D.pdf: 3334187 bytes, checksum: 061c9d779e7f5da6e43706dd56bfc44e (MD5) Previous issue date: 1999
Resumo: Este trabalho teve como objetivo estudar a relação da atividade de calpastatina e a força de cisalhamento da carne bovina bem como produzir anticorpo policlonal anti-calpastatina para futuro uso em estudos do potencial da calpastatina como indicador da maciez tendo em vista que esta característica é considerada como a mais importante para a qualidade sensorial da carne bovina. Foram realizados dois experimentos. No primeiro, estudou-se a influência do genótipo B0S indicus na atividade de calpastatina e na textura do músculo longissimus dorsi de novilhos criados no Sul do Brasil e a variabilidade destas características. A atividade de calpastatina foi determinada pelo ensaio de inibição da m-calpaína e a textura através da força de cisalhamento (Warner Bratzler Shear). Amostras de contrafilé (músculo L. dorsi) provenientes de 26 bovinos, sendo 14 Polled Hereford (HH), sete ¾ Hereford 1/4Nelore (3/4H1/4N) e cinco S/8Hereford 3/8Nelore (S/8H3/8N), machos castrados, abatidos aos dois anos de. idade, foram coletadas 24 h após o abate e analisadas quanto à atividade de calpastatina e textura, tanto no 1 ° dia post moriem quanto após um período de maturação de 10 dias a 2° C. A carne de novilhos S/8H3/8N apresentou, no 1° dia, maior (p
Abstract: The objective of this work was to study the relationship between the longissimus dorsi muscle calpastatin activity and the shear force trom steers of different genotypes as well to produce polyclonal anti-calpastatin antibodies to be used as meat tenderness predictor in further research. Tenderness is considered the most important sensory quality attribute of beef. Two experiments were conducted. In the first, it was studied the Bos indicus genotype influence on calpastatin activity and texture of boneless rib steaks (longissimus dorsi muscle) at 24 hours after slaughter and at the 10th day of aging at 2°C from steers raised in thé South of Brazil. Calpastatin activity was determined by m-calpain inhibition assay anel texture by shear force (Warner-Bratzler). Beef rib samples from 26 steers, being 14 Polled Hereford (HH), seven 3/4 Hereford 1/4 Nelore (3/4H1/4N) and five 5/8 Hereford 3/8 Nelore (5/8H3/8N) were analysed. Rib samples from 5/8H3/8N steers showed higher (p<0.05) calpastatin activity and shear force values than beef trom HH and 3/4H1/4N steers in the 1st day. No differences (p>0.05) were detected in the same traits between groups HH and 3/4H1I4N. After 10 days of aging, there was a difference in calpastatin activity, although non-significant (p>0.05), amongst group 5/8H3/8N (1.57U/g) and others (HH=1.23U/g; 3/4H1/4N=1.35U/g), and a significant difference in shear force between groups HH and 5/8H3/8N (3.67 and 5.00kg, respectively). It was concluded that the calpastatin activity determined 24 hs post mortem can be useful to predict the texture of beef, aged or not. Also, the increasing participation of Bos indicus genotype in the South Region cattle herds, besides the productivity advantages, may result in beef of lower texture quality. In the second experiment, polyclonal antibodies were raised in rabbits from a cloned pBSA1 (vector pGEX-5X-2, Pharmacia) encoding domains 2, 3, 4 and the 3' untranslated region of bovine calpastatin gene, kindly provided by Or. Mohammad Koohmaraie, leader researcher trom Meat Animal Research Center Roman L. Hurska, Clay Center, Nebraska, USA.. The cloned pBSA1 (KILLEFER & KOOHMARAIE, 1994) was used to expression of a GST-calpastatin form in Escherichia coli AD202 and DH5a cells. After purification in Glutathione Sepharose 4B column, aliquot of 100 µg GST-calpastatin was inoculated in rabbit, four times with 21 day intervals. The polyclonal antibodies purified in Protein G HiTrap recognized a 67 kDa protein from prerigor bovine heated muscle homogenates by Western blot method. By ELlSA competition assay, polyclonal anti-GST-calpastatin antibodies within the range of 60 to 230µg IgG/well detected until 70 mU of calpastatin trom bovine prerigor longissimus dorsi muscle homogenate in which original activity was ten times higher. GST -calpastatin was also expressed in E. coli XL 1 Blue that after an affinity purification was used to raise polyclonal antibodies in rabbits. The polyclonal antibodies anti-GST-calpastatin were used to perform an antibodies capture ELlSA test to identify calpastatin from a heated muscle homogenate. A 45 J..lg/ml of antiGST -calpastatin polyclonal antibodies concentration presented a proportional response in relation to the muscle heated homogenate calpastatin concentration. The polyclonal anti-GST -cal pastati n antibodies obtained in this work could be used to develop field tests useful to determine calpastatin activity in bovine muscles collected by biopsy
Doutorado
Doutor em Tecnologia de Alimentos
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Lorenzi, Marcel Salmeron. "Desenvolvimento de um programa de fitossanidade para Potyvirus e Potexvirus." [s.n.], 2009. http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/316669.
Full textAbstract:
Orientadores: Dagmar Ruth Stach-Machado, Gisele Abigail Montan TorresDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Made available in DSpace on 2018-08-13T19:49:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lorenzi_MarcelSalmeron_M.pdf: 4641112 bytes, checksum: 98293f35d81cf7287376bbbf8a203993 (MD5) Previous issue date: 2009
Resumo: No Brasil a batata é considerada uma das principais hortaliças produzidas, tanto em área plantada quanto em consumo. A produção anual é em torno de 2 milhões de toneladas, ocupando uma área superior a 130 mil hectares, gerando cerca de 500 mil empregos. Nos últimos anos, a bataticultura brasileira vem sofrendo perdas significativas devido ao aumento da incidência de viroses, principalmente provocadas pelo vírus Y da batata (Potato virus Y - PVY). Mundialmente, são conhecidas pelo menos três linhagens distintas do vírus Y: PVYO, PVYC e PVYN, cujos sintomas variam de acordo com o ambiente e a planta hospedeira. A linhagem PVYN apresenta uma variante denominada PVYNTN, que provoca sintomas de mosaico foliar mais intenso e a indução de formação de anéis necróticos nos tubérculos. A presença de focos de infecção de PVY em índices acima de 4% (limite de tolerância regulamentada pelo Ministério de Agricultura, Pecuária e Abastecimento) é suficiente para condenar o uso de determinadas lavouras para a produção de batata-semente, além de representar grandes danos em cultivos comerciais de batata para consumo. Já o PVX pode representar um grande problema quando em associação com o PVY. É um vírus cosmopolita, sendo transmitido mecanicamente e caracterizado por mosaico leve nas folhas, mais visíveis na metade inferior da planta. Atualmente, a análise de fitossanidade e a indexação viral da batata-semente destinada à multiplicação comercial no Brasil são efetuadas através da combinação da utilização de plantas indicadoras, que demanda tempo, e por testes sorológicos como ELISA, os quais representam custos adicionais à cadeia produtiva, uma vez que o Brasil é dependente da importação dos antisoros de detecção. Deste modo, considerando a relevância do estabelecimento de testes de diagnóstico nacionais que permitam a identificação específica dos vírus Y e X, em virtude da grande incidência de infecções do PVY e da grande necessidade de proteção contra o aumento da introdução do PVX, com oagravante de grandes prejuízos na co-infecção, os objetivos específicos deste projeto foram produzir soros policlonais específicos para o PVX e PVY, estabelecer ELISA indireto e desenvolver diagnóstico molecular dos vírus através de primers específicos e do IC-RTPCR. Esse trabalho conseguiu isolar e purificar os vírus X e Y através da indexação biológica e protocolos de extração. Com isso, foi possível produzir e caracterizar os anticorpos policlonais para o PVY e o PVX, com grande especificidade e poder de detecção. Após essas etapas, foi realizado a construção de primers específicos, e o desenvolvimento de técnicas moleculares de detecção baseadas na extração de material genético de folhas infectadas e PCR com os respectivos primers, obtendo-se os respectivos fragmentos esperados, concluindo com sucesso o estabelecimento do teste. Por fim, tentouse estabelecer o IC-RT-PCR, todavia o tamanho reduzido das partículas virais inviabilizou a realização do teste, mas a execução da detecção por ELISA e molecular separadamente foi estabelecido com sucesso, permitindo agregar novas tecnologias nacionais e contribuindo com a redução dos custos para a execução dos testes de fitossanidade, importantes e imprescindíveis para o controle das viroses predominantes na bataticultura nacional.
Abstract: The potato culture (Solanum tuberosum L.) represents the fourth major vegetal production in the world, reaching productivity indexes which overcome that of cerals in 5 times. Potato crop may be affected by several disease. Actually, some references point out near 40 in a total of 70 disorders are caused by viral agents. Among the most important viruses of potato, virus X and Y usually cause major concern, due to their harmfull effects in productivity and comercialization of potato. Nowadays, the viral infecctions have found their way into Brazil's potato production reagions in a very fast maner. The state of São Paulo is the most afeccted. Althought potato crop is among the stocks 10 major crops in the country, its production relies on virus-free imported potato-seeds to mantain its production. This is not only responsable by a considerable part of the production costs, but also represents a dangerous entrance door for a number of exotic pathogens inexistent in our territory. Thus, a fitosanity control of imported seed-potato lots, which enter Brazil via Santos harbor in the State of São Paulo, has fundamental importance. The usage of imunodiagnosis like ELISA, althought being efficient and widely applied, results in an additional cost due to the dependency of Brazil on the importation of policlonal antisera and monoclonal antibodys necessaries for the proper detection of the most important virus afeccting the national potato plantations. It has becoming a must for the seed-potato production a program in Brazil to have our independence of the diagnoses antiserum reagents for ELISA to at least the most important seed-potato viruses. The independence on importation of these biotecnological products and the modernization of imunodiagnosis by applying molecular techniques with specifics primers and like IC-RT-PCR (ImmoCapture - Reverse Transcriptase - Polimerase Chain Reaction), which makes possible to detect the major potato's virus in a fast, efficient and cheap way in order to screen the sanity of the material produced in the country, leading to a increase in production and stating the quality of it. This work isolated and purified the virus X and Y by biological indexing and extraction protocols. Therefore, it was possible to produce and to characterize the polyclonals antiserum to PVX and to PVY, with great specificity and power of detection. After these steps, it was made specifics primers and the development of molecular detection techniques based on extraction of genetic material from infected leaves and PCR with the primers. The expected fragments was obtained, concluding with successful the establishment of the test. Finally, there was the attempt to establish the IC-RT-PCR, however the small size of viral particles prevented the test, but the implementation of detection by ELISA and molecular separately was successful, add new national technologies allowing and contributing to the reduction of costs for implementing of the fitosanitty tests, importants and essentials for the control of viruses prevailing in the national potato culture.
Mestrado
Imunologia
Mestre em Genética e Biologia Molecular
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Ramos, Loyanne Carla Barbosa. "Interação anticorpo policlonal-complexo de rutênio como sistemas de liberação de óxido nítrico. Medida da especificidade e avaliação citotóxica." Universidade de São Paulo, 2012. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60138/tde-02102012-141825/.
Full textAbstract:
O óxido nítrico (NO) é um mensageiro biológico que tem importância vital em muitos processos fisiológicos e apresenta uma multiplicidade de funções de regulação no corpo humano, tais como neurotrasmissão, vasodilatação, participa nas respostas imunes e em vários processos associados com o desenvolvimento dos tumores. Vários estudos fornecem evidências sobre as propriedades tumoricidas do óxido nítrico e doadores de NO que podem ser usados para o tratamento de tumores malignos e são objetos de interesse na atualidade. Baseado nisto o objetivo deste trabalho foi de sintetizar e descrever aspectos estruturais dos compostos [Ru(bpy)2(dcbpy)] (dcbpy = ácido 4,4\'-dicarboxi-2,2\'-bipiridina, bpy = 2,2\'-bipyridina) [Ru(bpy)(dcbpy)2], cis-[RuCl2(dcbpy)2], cis-[Ru(dcbpy)2NO(L)]n+ (L = cloreto), [Ru(TERPY)(dcbpy)Cl] (TERPY = 2,2\': 6\'\', 2\'\' - terpiridina) and [Ru(TERPY)(dcbpy)NO], além de ensaios de citotoxicidade in vitro para alguns dos complexos sintetizados. Ensaios de citotoxicidade com solução aquosa de complexos rutênio-nitrosilo em linhagem de células metastáticas B16-F10 mostrou resultados relativamente baixos. Medidas de viabilidade celular mostrou que estes decrescem cerca de 10 % em relação ao controle. Este resultado foi interpretado como sendo devido a baixa interação entre o complexo e a célula. Bioconjugação de rutênio-nitrosilo com anticorpo policlonal IgG foi obtido por interação convalente e mostrou maior especificidade com um alvo na célula. Cromatografia de exclusão foi utilizada para separar o bioconjugado --IgG, que foi caracterizado por teste Western Blotting. Após a bioconjugação, o --IgG foi submetido a estudos de citotoxicidade com células metastáticas e a viablidade celular avaliada com ensaios MTT. Os resultados exibiram um incrível aumento na citotoxicidade de células B16-F10. Viabilidade celular foi determinada e valores de morte celular de cerca de 90 % obtida para uma das frações de --IgG. Nossos resultados demonstraram que o bioconjugado --IgG pode aumentar a resposta citotóxica e quiçá ser útil em terapia clínica.Nitric oxide (NO) is a biological messenger that has vital importance in many physiological processes and shows a multitude of regulatory roles in the human body, such as neurotrasmission, vasodilatation, immune responses and also participates in various processes associated with cancer development. Several studies provide evidences of the tumoricidal properties of NO donors that can be used for the treatment of malignant tumors and nowadays are objects of interest. Based on this the aim of this work was synthesize compounds that in a controlled manner can deliver NO in a biological process. The synthesis, structural aspects, and in vitro cytotoxic properties of [Ru(bpy)2(dcbpy)] (dcbpy = 2,2\'-bipyridine-4,4\'-dicarboxylic acid), 2\'-bipyridine; bpy = 2,2\'-bipyridine) [Ru(bpy)(dcbpy)2], cis-[RuCl2(dcbpy)2], cis-[Ru(dcbpy)2NO(L)]n+ (L = chloride), [Ru(TERPY)(dcbpy)Cl] (TERPY = 2,2\': 6\'\', 2\'\' - terpiridine) and [Ru(TERPY)(dcbpy)NO] are described. Citotoxicity assays with aqueous nitrosyl ruthenium complex in metastatic B16-F10 cells displayed very little effect. Cell viability measurement showed decrease around 10 % in comparison to the control. It was associated due to the low interaction between nitrosyl ruthenium specie and the cell. Bioconjugation of nitrosyl ruthenium specie with polyclonal antibody IgG was achieved by covalent interaction and showed more specific interaction between bioconjugated and target cell. Exclusion chromatography was used to isolate --IgG conjugated, which was characterized by Western Blotting test. Following bioconjugation, the --IgG was submitted to cytotoxic studies with metastatic cells and the viability evaluated by MTT assay. The results displayed incredible increase of citotoxicity for B16F10 cells. Cell viability was achieved to decrease until to 90 % in comparison to the control when one fraction of --IgG was used. Taken together, the present findings demonstrate that the --IgG complex may elicit citotoxicity responses that may find useful applications in clinical therapy.
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Antonangelo, Ana Teresa Burlamaqui Faraco. "Produção de um anticorpo policlonal anti-Duffy de Bos taurus taurus para detecção e quantificação do antígeno em eritrócitos bovinos /." Botucatu : [s.n.], 2008. http://hdl.handle.net/11449/102715.
Full textAbstract:
Resumo: As doenças infecciosas e parasitárias causam perdas importantes em vários setores da produção da pecuária mundial. Estima-se que mais de 600 milhões de bovinos de países tropicais e subtropicais estejam expostos à infecção por Babesia spp., gerando um prejuízo econômico de mais de 1,3 bilhão de dólares por ano. Parte significativa dessa soma destina-se a defensivos e insumos veterinários, os quais poderiam ser substituídos por tecnologias mais eficazes e econômicas, como, por exemplo, animais geneticamente resistentes a parasitas. Os gêneros Babesia e Plasmodium são hemoparasitas pertencentes ao filo Apicomplexa e apresentam características comuns no processo de invasão eritrocitária. A babesiose bovina causada por Babesia bigemina e Babesia bovis apresenta sinais clínicos similares a malária humana causada por Plasmodium vivax e Plasmodium falciparum. O antígeno Duffy é o único receptor para o P. vivax em humanos. A maioria dos indivíduos negros africanos é resistente a este parasita devido a uma mutação que provoca a ausência de expressão deste antígeno na superfície das hemácias.Tendo em vista esse fato, e que animais da subespécie Bos taurus taurus são mais susceptíveis à babesiose quando comparados à animais Bos taurus indicus, este projeto foi desenvolvido com o objetivo de averiguar se essa maior resistência dos animais zebuínos está associada ao fato do antígeno Duffy estar ausente ou expresso em menor quantidade nas hemácias desses animais. Para detecção e quantificação do antígeno Duffy, na superfície das hemácias de bovinos dessas subespécies, foi produzido um anticorpo policlonal anti-Duffy bovino, visto que sua detecção não é possível pelos anticorpos desenvolvidos para a proteína humana, em função dessa diferir da proteína bovina, principalmente na seqüência de aminoácidos da região N-terminal. Para... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)Abstract: Cattle business worldwide has been affected by all sorts of infections. It's estimated that more than 600 million bovines from tropical and sub-tropical areas are exposed to Babesia spp. infection causing loss of more than US$ 1,3 billion a year. An important part of this amount is spent on veterinarian drugs and vaccines. However this scenario could be changed if cheaper and more efficient technologies such as animal breeding for resistance to parasites were used. The genera Babesia and Plasmodium are hemoparasites which belong to phylum Apicomplexa and share features such as the RBCs invasion process. Clinic signs presented by cattle infected with Babesia bigemina and Babesia bovis are very similar to those presented by human beings infected with Plasmodium vivax and Plasmodium falciparum. The glycoprotein Duffy is the only human erythrocyte receptor for P.vivax. The majority of black African people are resistant to this parasite due to a mutation which abolishes expression of the Duffy antigen on its erythrocytes surfaces. Detailed information on molecular interaction between Babesia parasite and its receptors on the bovine host cells surface is limited. Moreover, animals from subspecies Bos taurus taurus are more susceptible to babesiosis infection than those from Bos taurus indicus. This project investigated if this higher resistance of Bos taurus indicus animals is due to the fact that the Duffy antigen is absent or less expressed on its RBC surface. Aiming at detecting and quantifying Duffy antigen on erythrocyte surfaces of Bos taurus indicus and Bos taurus taurus, a polyclonal antibody against bovine Duffy was produced, because antibodies against human Duffy can not recognize this bovine protein which has different aminoacid sequence at N-terminal. Synthetic decapeptide (YNETDVEAAA) corresponding to aminoacid 34 to 43 of the N-terminal extracelullar domain of the bovine protein... (Complete abstract click electronic access below)
Orientador: Lígia Souza Lima Silveira da Mota
Coorientador: Débora Colombi
Coorientador: Rogério Abdallah
Banca: Rosângela Zacarias
Banca: Ivan de Godoy Maia
Doutor
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Antonangelo, Ana Teresa Burlamaqui Faraco [UNESP]. "Produção de um anticorpo policlonal anti-Duffy de Bos taurus taurus para detecção e quantificação do antígeno em eritrócitos bovinos." Universidade Estadual Paulista (UNESP), 2008. http://hdl.handle.net/11449/102715.
Full textAbstract:
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Previous issue date: 2008-03-14Bitstream added on 2014-06-13T20:43:01Z : No. of bitstreams: 1
antonangelo_atbf_me_botib.pdf: 947571 bytes, checksum: 2289cbcd7df8db2d703a841907574c99 (MD5)Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
As doenças infecciosas e parasitárias causam perdas importantes em vários setores da produção da pecuária mundial. Estima-se que mais de 600 milhões de bovinos de países tropicais e subtropicais estejam expostos à infecção por Babesia spp., gerando um prejuízo econômico de mais de 1,3 bilhão de dólares por ano. Parte significativa dessa soma destina-se a defensivos e insumos veterinários, os quais poderiam ser substituídos por tecnologias mais eficazes e econômicas, como, por exemplo, animais geneticamente resistentes a parasitas. Os gêneros Babesia e Plasmodium são hemoparasitas pertencentes ao filo Apicomplexa e apresentam características comuns no processo de invasão eritrocitária. A babesiose bovina causada por Babesia bigemina e Babesia bovis apresenta sinais clínicos similares a malária humana causada por Plasmodium vivax e Plasmodium falciparum. O antígeno Duffy é o único receptor para o P. vivax em humanos. A maioria dos indivíduos negros africanos é resistente a este parasita devido a uma mutação que provoca a ausência de expressão deste antígeno na superfície das hemácias.Tendo em vista esse fato, e que animais da subespécie Bos taurus taurus são mais susceptíveis à babesiose quando comparados à animais Bos taurus indicus, este projeto foi desenvolvido com o objetivo de averiguar se essa maior resistência dos animais zebuínos está associada ao fato do antígeno Duffy estar ausente ou expresso em menor quantidade nas hemácias desses animais. Para detecção e quantificação do antígeno Duffy, na superfície das hemácias de bovinos dessas subespécies, foi produzido um anticorpo policlonal anti-Duffy bovino, visto que sua detecção não é possível pelos anticorpos desenvolvidos para a proteína humana, em função dessa diferir da proteína bovina, principalmente na seqüência de aminoácidos da região N-terminal. Para...
Cattle business worldwide has been affected by all sorts of infections. It´s estimated that more than 600 million bovines from tropical and sub-tropical areas are exposed to Babesia spp. infection causing loss of more than US$ 1,3 billion a year. An important part of this amount is spent on veterinarian drugs and vaccines. However this scenario could be changed if cheaper and more efficient technologies such as animal breeding for resistance to parasites were used. The genera Babesia and Plasmodium are hemoparasites which belong to phylum Apicomplexa and share features such as the RBCs invasion process. Clinic signs presented by cattle infected with Babesia bigemina and Babesia bovis are very similar to those presented by human beings infected with Plasmodium vivax and Plasmodium falciparum. The glycoprotein Duffy is the only human erythrocyte receptor for P.vivax. The majority of black African people are resistant to this parasite due to a mutation which abolishes expression of the Duffy antigen on its erythrocytes surfaces. Detailed information on molecular interaction between Babesia parasite and its receptors on the bovine host cells surface is limited. Moreover, animals from subspecies Bos taurus taurus are more susceptible to babesiosis infection than those from Bos taurus indicus. This project investigated if this higher resistance of Bos taurus indicus animals is due to the fact that the Duffy antigen is absent or less expressed on its RBC surface. Aiming at detecting and quantifying Duffy antigen on erythrocyte surfaces of Bos taurus indicus and Bos taurus taurus, a polyclonal antibody against bovine Duffy was produced, because antibodies against human Duffy can not recognize this bovine protein which has different aminoacid sequence at N-terminal. Synthetic decapeptide (YNETDVEAAA) corresponding to aminoacid 34 to 43 of the N-terminal extracelullar domain of the bovine protein... (Complete abstract click electronic access below)
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Galvão, Leidiane Amorim Soares. "Desenvolvimento de ferramentas de detecção das proteínas VP4 e VP6 para imunodiagnósticos de rotavírus do Tipo A." Universidade Federal do Amazonas, 2014. http://tede.ufam.edu.br/handle/tede/5365.
Full textAbstract:
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Dissertação - Leidiane A. S. Galvão.pdf: 2769437 bytes, checksum: cd70444b94b36102f02a5102e38a68c8 (MD5)Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-12-13T14:41:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Leidiane A. S. Galvão.pdf: 2769437 bytes, checksum: cd70444b94b36102f02a5102e38a68c8 (MD5)
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Made available in DSpace on 2016-12-13T14:41:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Leidiane A. S. Galvão.pdf: 2769437 bytes, checksum: cd70444b94b36102f02a5102e38a68c8 (MD5) Previous issue date: 2014-08-26
CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico
Due to rising rates of morbidity and mortality caused by human rotavirus, detection methods have been used routinely in clinical and epidemiological studies. The diagnosis of rotavirus infections is based on the detection of particles, antigens or viral RNA from the fecal material. This study aimed to develop the VP4 and VP6 protein detection tools for immunodiagnostic of Rotavirus group A. Rabbit and mice anti-VP4 and anti-VP6 IgGs were obtained from immunizations made with VP4 and VP6 recombinant proteins of Rotavirus A, both built in this study, and tested by flow cytometry and Western blot against the recombinant antigen and the native antigen. The region of the VP4 protein, selected for the generation of mice and rabbit anti-VP4 IgGs, was efficient to recognize native antigen in denatured form, as observed in western blot assays. The cytometry analysis demonstrated that generated anti-VP4 antibodies were not specific enough to be used in techniques where the VP4 protein is in its native form. Selected regions for production of VP6 protein have been efficient for the generation of anti-VP6 antibodies, able to recognize the native protein in its denatured and non-denatured form. Future studies will aim to increase the specificity of the antibodies obtained to allow their use in a greater number of immunoassays.
Devido as crescentes taxas de morbidade e mortalidade causada por Rotavírus humanos, métodos de detecção têm sido empregados rotineiramente em estudos clínicos epidemiológicos. O diagnóstico das infecções por Rotavírus baseia-se na detecção das partículas, antígenos ou RNA virais a partir de material fecal. O objetivo deste estudo foi desenvolver ferramentas de detecção das proteínas VP4 e VP6 para imunodiagnósticos de Rotavírus do tipo A. IgG de coelho e camundongos anti-VP4 e anti-VP6 foram obtidos a partir de imunizações feitas com as proteínas recombinantes VP4 e VP6 de Rotavírus A (ambas construídas neste estudo) e testados através de citometria de fluxo e western blot contra o antígeno recombinante e o antígeno nativo. A região da proteína VP4 selecionada para a geração de IgG de camundongo e coelho anti-VP4 foi eficiente para o reconhecimento do antígeno nativo em sua forma desnaturada, como foi possível observar nos ensaios de western blot. As análises de citometria demonstraram que os mesmos anti-VP4 gerados não foram específicos o suficiente para serem utilizados em técnicas onde a proteína VP4 está em sua forma nativa. As regiões selecionadas para a produção da proteína VP6 foram eficientes para a geração de anticorpos anti-VP6 capazes de reconhecer a proteína nativa em sua forma desnaturada e não desnaturada. Futuros trabalhos terão como objetivo o aumento da especificidade dos anticorpos obtidos de modo a permitir sua aplicação em um maior número de imunoensaios.
Book chapters on the topic "Anticorpo policlonal"
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Tilburg, Mauricio Fraga Van, Cícero Matheus Lima Amaral, Ilana Carneiro Lisboa Magalhães, Danielle Ferreira de Oliveira, Rebeca Veras Araújo, Ednardo Rodrigues Freitas, and Maria Izabel Florindo Guedes Guedes. "PROTOCOLO RÁPIDO E ECONÔMICO PARA PURIFICAÇÃO DE ANTICORPOS POLICLONAIS IGY ANTI-ZIKV." In As Ciências da Vida Frente ao Contexto Contemporâneo 2, 109–15. Atena Editora, 2019. http://dx.doi.org/10.22533/at.ed.32619030413.
Full textConference papers on the topic "Anticorpo policlonal"
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Carneiro, Matheus Vinícius De Souza, Paula Taquita Serra, Wenberger Lanza Daniel Figueiredo, and Maria Sílvia Prestes Pedrosa. "A EFICÁCIA DA IMUNIZAÇÃO PASSIVA COM ANTICORPOS POLICLONAIS CONTRA COVID-19 - REVISÃO DE LITERATURA." In I Congresso Brasileiro de Imunologia On-line. Revista Multidisciplinar em Saúde, 2021. http://dx.doi.org/10.51161/rems/992.
Full textAbstract:
Introdução: Na busca por tratamentos eficazes contra a covid-19, as terapias com anticorpos monoclonais e policlonais surgiram como um candidatos promissores. As terapias à base de anticorpos policlonais surgem como alternativa mais barata que as de anticorpos monoclonais. Objetivos: Relatar a eficácia do tratamento para covid-19 com anticorpos policlonais. Material e métodos: Realizou-se uma busca nas bases de dados do PubMed e SciELO combinando os descritores Monoclonal Antibodies, Coronavirus Infections, Coronavirus Infections, Immunotoxins, Antibodies, Bispecific, Coronavirus Infections. Foram utilizados filtros com busca preferencial por ensaios clínicos randomizados com até 1 ano de publicação. Localizou-se 52 estudos, da qual foram excluídos artigos não relacionados ao tema. Resultados: Obteve-se 5 estudos e a fim de avaliar a eficácia, segmentou-se em critérios clínicos. Dentre os 5 estudos, 3 avaliaram a terapia com plasma convalescente e 2 avaliaram a terapia com imunoglobulina intravenosa (IGIV). Cada estudo utilizou titulações e dosagens distintas, além de administrações em períodos diferentes. Dentre os estudos que avaliaram a eficácia da terapia com plasma convalescente, não verificou-se diminuição significativa da mortalidade geral e progressão da doença; contudo, em um dos trabalhos, observou-se que a administração precoce de plasma convalescente de alta titulação contra SARS-CoV-2 em idosos com infecção moderada reduziu a progressão da doença. Entre os dois estudos que avaliaram a eficácia da IGIV, um estudo relatou diminuição significativa da taxa de mortalidade hospitalar. Um dos trabalhos avaliou a eficácia da combinação da IGIV com outros medicamentos, relatando a ausência de efeito benéfico, não apontando melhora perceptível na taxa de mortalidade; no entanto, verificou-se que, quanto menor o tempo desde a admissão até a infusão de IGIV, menor o tempo de internação hospitalar. Conclusão: A terapia com plasma convalescente não foi capaz de reduzir de forma significativa a mortalidade e progressão da doença, enquanto a terapia com imunoglobulina intravenosa (IGIV) foi capaz de reduzir de forma significativa a taxa de mortalidade hospitalar. Contudo, em virtude do pequeno número de estudos, é necessário novos estudos a fim de embasar a eficácia das tratamentos com anticorpos policlonais na covid-19.
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Pedrosa, Maria Sílvia Prestes, Paula Taquita Serra, Wenberger Lanza Daniel De Figueiredo, and Matheus Vinícius De Souza Carneiro. "EFEITOS ADVERSOS NO TRATAMENTO POR IMUNIZAÇÃO MEDIADA POR ANTICORPOS - REVISÃO DE LITERATURA." In I Congresso Brasileiro de Imunologia On-line. Revista Multidisciplinar em Saúde, 2021. http://dx.doi.org/10.51161/rems/1003.
Full textAbstract:
Introdução: Desde do início da pandemia de COVID-19, foi exigido um rápido avanço da indústria farmacêutica, com a finalidade de achar tratamentos eficazes para o novo coronavírus e quais seriam os possíveis efeitos adversos ligados a estes fármacos. Dentro destes efeitos adversos, deve ser avaliado os riscos e os benefícios voltados à imunoterapia com anticorpos. Objetivos: Relatar as reações adversas do tratamento para COVID-19 por imunoterapia com anticorpos monoclonais e policlonais. Material e métodos: Realizamos uma revisão de literatura na plataforma de pesquisa PubMed combinando os descritores Monoclonal Antibodies, Immunotoxins, “Antibodies, Bispecific”eCoronavirusInfectionsdeestudosclínicosrandomizadosgratuitos completos publicados há 1 ano. Excluindo os textos não relacionados ao tema ou contendo dados secundários. Resultados: Obteve-se 9 artigos, nos quais foram descritos efeitos adversos destas medicações, e entre eles, consequências graves, como morte. Teve também em um artigo que relata não ter efeito adverso relacionado ao plasma e um outro artigo que não relatou efeitos adversos. Dessa forma, observamos que no LY-CoV555 os efeitos mais comuns foram náusea; no grupo REGN-CO2 foram reações de hipersensibilidade de grau 2; no grupo do Tocilizumabe os efeitos adversos relatados foram morte, hipersensibilidade a infusão, infecções, trombose, embolia pulmonar, acidente vascular cerebral, além de terem descrito que em pacientes graves aumentou a mortalidade comparado ao tratamento padrão; no grupo Tocilizumabe com Favipiravir, foi relatado efeitos comuns como aumento da transaminase, diarreia e hiperuricemia, não teve nenhuma reação adversa grave e as demais reações aliviaram com o tempo.
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Miranda, Bianca Meirelles, Thaís Vieira de Carvalho, Thaís Viana Fialho Martins, Priscila Ramos Vasconcelos, and Eduardo de Almeida Marques da Silva. "PRODUÇÃO E PURIFICAÇÃO DE ANTICORPOS POLICLONAIS ESPECÍFICOS PARA LECTINAS PROVENIENTES DE EXTRATO DE FORMAS PROMASTIGOTAS DE Leishmania infantum chagasi." In V Jornada Acadêmica Internacional da Bioquímica. São Paulo: Editora Edgard Blücher, 2015. http://dx.doi.org/10.5151/biochem-jaibqi-0038.
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