Academic literature on the topic 'Anticorps bispécifique'

Une connaissance approfondie de la biologie et de l’immunologie des tumeurs, mais aussi la conception de formats innovants d’anticorps et d’autres charpentes (ou scaffolds) protéiques ont permis de générer une véritable explosion de nouvelles molécules à visée thérapeutique au cours de ces 10 dernières années. Dans ce cadre, les anticorps bispécifiques (Abs) tiennent une place de choix. Ils permettent en effet, (1) d’apporter des propriétés biologiques et pharmacologiques nouvelles qui dépendent de l’engagement simultané des deux cibles, (2) d’améliorer le profil de sécurité par rapport à une combinaison d’anticorps en favorisant sa localisation tumorale en oncologie, et également (3) de combiner en une seule molécule les activités de deux anticorps conventionnels, réduisant ainsi les coûts de développement clinique et de fabrication. Cet article de revue a pour objectif d’analyser les différentes molécules bispécifiques décrites à ce jour dans le domaine de l’immuno-oncologie, et de présenter leurs différents formats et principales propriétés.

Nous avons developpe et etudie in-vitro ainsi qu'in-vivo deux nouveaux types d'anticorps bispecifiques (ac-bs). Le premier de ces ac-bs a ete developpe pour cibler et concentrer une cytokine specifiquement dans un site tumoral. Pour cela, nous avons couple chimiquement un fragment fab' d'ac monoclonal (acm) anti-tumeur (anti-antigene carcinmbryonnaire (ace)) avec un fragment fab' d'acm anti-cytokine (anti-facteur de necrose tumoral (tnf)). A l'aide de cet ac-bs nous avons realise un ciblage tumoral specifique de tnf chez la souris nue porteuse de carcinome de colon humain. En comparaison aux souris temoins n'ayant recu que du tnf seul, nous avons a l'aide de cet ac-bs augmente par un facteur 3 la concentration de tnf dans les tumeurs portees par les souris nues. Le second type d'ac-bs developpe est dit bi-paratopique car capable de fixer simultanement 2 epitopes du meme antigene cible. Nous avons produit 6 ac biparatopiques a l'aide de 4 fragments fab' d'acm dirige contre un epitope different de l'ace en couplant chimiquement 2 a 2 ces 4 fragments. Nous avons demontre in vitro la bi-paratopicite de ces 6 acs et observe l'augmentation des constantes d'affinite pour l'ace de ces acs bi-paratopiques. L'evaluation in vivo des 6 acs biparatopiques en comparaison aux acs parentaux a permis de selectionner 1 ac bi-paratopique pour sa capacite a se localiser et son temps de retention au site tumoral plus important.

L'objectif de cette thèse est de concevoir un nouveau type d’anticorps thérapeutiques bispécifiques pour éliminer de manière ciblée des facteurs solubles pro-tumoraux du microenvironnement tumoral selon un mécanisme de sweeping antibody via le ciblage du récepteur de la transferrine (TfR1). Le TfR1 est un récepteur surexprimé dans de nombreuses tumeurs. Il permet l’apport cellulaire en Fer selon un mécanisme FcRn-like. Le facteur soluble à éliminer choisi pour cette preuve de concept est l’interleukine (IL-6), une cytokine multifonctionnelle impliquée dans la progression tumorale. Trois formats d’anticorps différents bispécifiques ont été conçus à partir d’anticorps antagonistes internalisants ciblant le TfR1 et d’un anticorps anti-IL-6 non neutralisant à liaison pH-dépendante. Nous avons mis en évidence que (1) les 3 formats d’anticorps bispécifiques conservent les propriétés de liaison à l’IL-6 (liaison à pH physiologique mais pas à pH acide) et au TfR1 des anticorps parentaux (blocage de l’internalisation du ligand holo-transferrine via le TfR1) et (2) qu’ils permettent l’internalisation de l’IL-6 via le TfR1. L’activité sweeping a été évaluée in vitro par une comparaison des activités inhibitrices des anticorps bispécifiques et de la combinaison des anticorps parentaux sur des lignées cellulaires à croissance IL-6 dépendante (myélome XG-6 et XG-7) ou non (lymphome RAJI). L’élimination de l’IL-6 a également été mise en évidence in vivo en monitorant la concentation d’IL-6 dans le plasma de souris xénogreffées avec une lignée de cancer du pancréas productrice d’IL-6. Les résultats de cette thèse montrent qu’il est possible d’obtenir une activité sweeping TfR1-dépendante ce qui ouvre un large panel d’applications thérapeutiques dans le ciblage de facteurs solubles pro-tumoraux par l’utilisation de récepteurs tumeurs spécifiques-TfR1-like
The objective of this thesis is to design a new type of bispecific therapeutic antibodies to selectively eliminate soluble pro-tumoral factors from the tumor microenvironment by a sweeping antibody mechanism by targeting the transferrin receptor (TfR1). TfR1 is an overexpressed receptor in many tumors. It allows iron cell supply by a FcRn-like mechanism. The soluble factor chosen for this proof of concept is interleukin (IL-6), a multifunctional cytokine involved in tumor progression. Three different bispecific antibody formats have been developed based on internalizing antagonistic antibodies targeting TfR1 and a pH-dependent non neutralizing anti-IL-6 antibody. We highlight that (1) the 3 formats of bispecific antibodies retain the binding properties to IL-6 (binding at physiological pH but not at acidic pH) and TfR1 of parental antibodies (blocade of holo transferrine internalization) and (2) allow the internalization of IL-6 via TfR1. Sweeping activity was evaluated in vitro, by comparing the inhibitory activities of bispecific antibodies and the combination of parental antibodies on cell lines with IL-6 growth dependent (myeloma XG-6 and XG-7) or not (lymphoma RAJI). IL-6 elimination was also demonstrated in vivo by monitoring IL-6 elimination in the plasma of xenografted mice with an IL-6-producing pancreatic cancer line. The results of this thesis show that it is possible to obtain a TfR1-dependent sweeping activity, which opens up a wide range of therapeutic applications in the targeting of pro-tumor soluble factors by the use of specific TfR1-like tumor receptors

Stimuler la réponse immunitaire anti-tumorale constitue une voie d’avenir indiscutable pour le traitement des cancers. Aujourd'hui, les thérapies ciblées à base d'anticorps ont une place majeure dans l’immunothérapie des cancers du sein de par leur impact positif sur le pronostic des patientes. Cependant, les cancers du sein triple négatifs (TNBC) résistent aux innovations thérapeutiques actuelles, et, par défaut de traitement ciblé efficace, restent de sombre pronostic. Notre équipe développe des stratégies d’immunothérapie à base d'anticorps bispécifiques (bsFabs) conçus à partir de fragments d'anticorps de camélidés qui présentent la particularité de cibler simultanément les cellules immunitaires et tumorales. Ainsi, mon projet visait à évaluer le potentiel anti-tumoral de deux bsFabs sur des modèles précliniques de TNBC à travers leur capacité à activer et à rediriger le système immunitaire contre les cellules tumorales. La finalité du projet est de proposer un nouvel axe de thérapie ciblée susceptible d'améliorer le pronostic des patientes atteintes de TNBC
Mounting evidence of the key contribution of NK cells in immunity against cancer has boosted the investigations on NK cell-based therapies. Among these strategies, monoclonal antibody-based therapeutics (mAbs) are currently the fastest growing segment of the medicine market. Despite therapeutic innovations, triple negative breast cancers (TNBC) remain insensitive to the current targeted or hormono-therapies. Our objective is to manipulate NK cell functions and tumor targets using an original format of nanobody-based bispecific antibodies (bsFab) to revert the dampened immune response for treating TNBC. Thus, we generate two bsFabs able to crosslink NK and tumor cells. NK antitumor effects driven by mAbs and bsFabs, alone or in combination, were investigated in vitro and in vivo on preclinical TNBC models. Here, we demonstrate the potential of bsFabs to enlarge the number of patients eligible for breast cancer immunotherapy and prompt to consider combination strategies

L'imagerie TEP par la technique de préciblage, exposée dans cette thèse, est proposée avec le gallium-68. Ce travail s'articule en deux axes. La première partie évalue une nouvelle technique de production chimique par le N,N′-(o-phénylène)dimalémide d'un anticorps bispécifique ciblant à la fois un antigène tumoral et un haptène. La seconde partie étudie le radiomarquage et les propriétés radiochimiques des complexes du 68Ga avec différents chélatants pour la fonctionnalisation de l'haptène bivalent di-HSGL. L'optimisation de la technique de synthèse de l'anticorps bispécifique a montré qu'un pourcentage de 5 % (p/p) de pepsine est suffisant pour obtenir une digestion optimale de l'anticorps en F(ab')2. Les études sur la réduction des ponts disulfures du F(ab')2 et sur l'intégrité des Fab' formés montrent qu'un réducteur doux limite la dégradation du Fab' tout en maintenant un bon rendement de réduction. L'étude d'affinité indique que l'affinité de l'anticorps bispécifique synthétisé avec le dimalémide est suffisante pour le ciblage efficace de tumeurs positives à l'antigène CEA. La deuxième partie de ce travail concerne l'étude radiochimique du chélatant cyclique DOTA et acyclique HBED complexés au 68Ga. L'ensemble des résultats de radiomarquage et des études de stabilité semblent montrer que l'HBED est un chélatant de choix pour le radiomarquage de l'haptène avec le 68Ga. Son radiomarquage est réalisable à faible température et avec une activité spécifique supérieure à celle du DOTA. Le rendement de radiomarquage du complexe HBED-68Ga et l'optimisation de la technique doivent permettre d'injecter le peptide radiomarqué sans purification du produit fini
In this study, the affinity enhancement system is proposed with nuclear imaging using gallium-68. This work is presented in two parts. The first part investigates new chemistry system used N,N′-(o-phenylene)dimalemide to produce a bispecific antibody which targets a tumour antigen and a hapten. The second part evaluates radiolabel and radiochemistry properties of 68Ga complexes using two chelators in order to radiolabel divalent hapten named di-HSGL. Synthesise optimisations show that the optimal digestion of antibody is realized with 5 % of pepsin (p/p). F(ab')2 reduction studies indicate that cysteamine, a soft powerful reducing agent, is enough to reduce disulfide bonds and does protect the integrity of created Fab'. Eventually, the affinity studies of the new divalent vector confirm the good affinity constants to both antigen and hapten. The second part presents radiochemistry studies of DOTA and HBED chelators for 68Ga. They show HBED is more interesting than DOTA to radiolabel hapten with 68Ga. Radiolabel is made at room temperature. Its specific activity is better than DOTA's one. Radiolabel rate and method optimization should allow to inject the final product without purification stage

LE FACTEUR DE NECROSE TUMORALE ALPHA (TNFalpha) A MONTRE UN EFFET RADIOSENSIBILISANT DANS PLUSIEURS MODELES IN VITRO ET IN VIVO. EN CLINIQUE, SON UTILISATION SYSTEMIQUE A ETE MARQUEE PAR UNE TOXICITE MAJEURE. NOTRE METHODE DE CIBLAGE PAR LES ANTICORPS BISPECIFIQUES (AcBs) A PERMIS DE DELIVRER LE TNFalpha AU SEIN DE LA TUMEUR EN CIBLANT L'ANTIGENE CARCINOEMBRYONNAIRE (ACE). LE PREMIER OBJECTIF A ETE DE MONTRER L'EFFET RADIOSENSIBILISANT DU TNFalpha IN VITRO DANS DIFFERENTS MODELES DE CANCERS DIGESTIFS EXPRIMANT L'ACE EN ESSAYANT D'ANALYSER LE MECANISME IMPLIQUE, EN PARTICULIER, CONCERNANT LE CYCLE CELLULAIRE. LE SECOND OBJECTIF A ETE DE TRANSPOSER CES RESULATS IN VIVO DANS DIFFERENTS MODELES PRE-CLINIQUES EN UTILISANT UN AcBs ANTI-ACE/ANTI-TNFalpha. IN VITRO, NOUS AVONS MONTRE UN EFFET ADDITIF DE L'ASSOCIATION RADIOTHERAPIE (RT) + TNFalpha DANS DEUX MODELES DE TUMEUR HUMAINE EXPRIMANT L'ACE : LES LIGNEES COLIQUE LS174T ET PANCREATIQUE BxPC-3. APRES TRAITEMENT PAR LE TNFalpha, L'ETUDE DU CYCLE CELLULAIRE A MIS EN EVIDENCE UNE DIMINUTION DE L'ARRET EN G2 RADIO-INDUIT ET DE LA PHASE S AU DEPEND D'UNE AUGMENTATION DU NOMBRE DE CELLULES DANS LA PHASE G1. IN VIVO, DES SOURIS NUES GREFFEES ONT RECU DIFFERENTS TRAITEMENTS : SERUM PHYSIOLOGIQUE (NaCI), TNFalpha, AcBs, TNFalpha + AcBs, RT + NaCI, RT + TNFalpha + AcBs. UNE DIFFERENCE SIGNIFICATIVE DU DELAI DE PROGRESSION TUMORALE A ETE MISE EN EVIDENCE ENTRE LE GROUPE RT + NaCI ET LE GROUPE RT + AcBs + TNFalpha. DES EXPERIENCES AVEC DES SOURIS TRANSGENIQUES POUR L'ACE GREFFEES AVEC DES TUMEURS COLIQUES MURINES TRANSFECTEES AVEC LE GENE DE L'ACE ONT MONTRE UN DELAI DE PROGRESSION TUMORALE NETTEMENT INFERIEUR DANS LE GROUPE RT + TNFalpha HUMAIN + AcBS DONT DEUX GUERISONS. DES EXPERIENCES UTILISANT UN TNFalpha MURIN SONT EGALEMENT EN COURS AFIN D'EVALUER TOUT LE POTENTIEL THERAPEUTIQUE ET LES TOXICITES LIMITANTES DE CETTE STRATEGIE DANS UN MODELE ANIMAL IMMUNOCOMPETENT AVANT L'OUVERTURE D'UNE ETUDE CLINIQUE DE PHASE I.

Le système immunitaire protège un organisme du développement de pathogènes et participe activement au maintien de la tolérance immunitaire. Les cellules dendritiques (DC) sont des cellules spécialisées dans l’équilibre pro et anti-inflammatoire de la réponse immunitaire. Les DC jouent un rôle important dans de nombreux contextes pathologiques notamment la transplantation d’organes, en oncologie et dans les pathologies inflammatoires. Elles sont modulables grâce à divers facteurs, intrinsèques et extrinsèques. Parce qu’elles sont capables d’induire une réponse tolérogène, ces cellules représentent des cibles intéressantes pour moduler la réponse immunitaire dans le contexte de la transplantation d’organes et des pathologies inflammatoires. Certains agents pathogènes utilisent des mécanismes d’échappement au système immunitaire en favorisant l’induction d’une tolérance immunitaire. Cette modulation est réalisée par le ciblage des récepteurs de reconnaissance des pathogènes (PRR) sur la présence des DC, induisant la synthèse d’une cytokine antiinflammatoire IL-10, un des inducteurs de la tolérance immunitaire. Notre stratégie a été de construire un anticorps bispécifique ciblant deux PRR différents à partir d’une banque d’anticorps anti-PRR. Notre travail montre que cet anticorps bispécifique est capable d’orienter les DC vers d’un profil tolérogène. Cet anticorps bispécifique induit un phénotype de DC semi-mature avec un profil de sécrétion pro-tolérogène avec de l’IL-10 et peu de cytokines inflammatoires. Le profil de tolérance immunitaire induite par ces cellules reste à explorer. Nos travaux ouvrent de perspectives intéressantes sur l’association des PRR en vue d’obtenir la modulation des cellules de l’immunité
The immune system protects an organism from the development of pathogens and actively participates in maintaining immune tolerance. Dendritic cells (DC) are specialized cells in the balance and anti-inflammatory immune response. DC play an important role in many pathological contexts, including organ transplantation, oncology and inflammatory diseases. Various factors, both intrinsic and extrinsic, can modulate. Because they are capable to inducing a tolerogenic response, these cells represent interesting targets for the immune response in the context of organ transplantation and in inflammatory pathologies. Some pathogens use mechanisms of escape to the immune system by promoting the induction of immune tolerance. This modulation is achieved by targeting the pathogen recognition receptors (PRRs) present on the surface of DC, inducing the synthesis of an anti-inflammatory cytokine IL-10, one of the main inducers of immune tolerance. Our strategy was to construct a bispecific antibody targeting two different PPRs from an anti-PRR antibody library. Our work shows that this bispecific antibody is able to direct the DC to a pro-tolerogenic profile. This bispecific antibody induces a semi-mature DC phenotype with a secretion profile of pro-tolerogenic cytokines such as IL-10 and few inflammatory cytokines. The immune tolerance profile of these DC remains to be explored. Our work opens interesting perspectives on the association of PRRs in order to obtain the modulation of the cells of the immunity

Dans le but d'améliorer le ciblage des radioisotopes pour le diagnostic et la thérapie des cancers, nous avons développé des anticorps bispécifiques ( AcBs ) qui ciblent 2 épitopes du même antigène ou 2 antigènes distincts. Dans la première partie de la thèse, nous avons préparé des AcBs dirigés contre 2 épitotes de l'antigène carcinoembryonnaire ( ACE ). Ces anticorps ont été nommés anticorps biparatopiques (AcBp). Nous avons préparé 6 AcBp et montré qu'ils ont une affinité supérieure à celle des fragments parentaux. L'évaluation in vivo a mis évidence un AcBp qui se localise mieux que ses fragments parentaux dans un modèle carcinome colique humain exprimant l'ACE. Nous avons ensuite poursuivi ces travaux en modifiant les liens de couplage des AcBp ou en préparant des anticorps triparatopiques dirigés contre trois épitotes de l'ACE. Dans la deuxième partie, nous avons appliqué le concept des AcBs aux cancers du sein en préparant des anticorps dirigés contre l'ACE et ErbB-2. Nous avons montré que dans un modèle tumoral exprimant l'ACE et ErbB-2, ce type d'anticorps se localise mieux que les fragments anti-ErbB-2 parentaux. Par contre, le taux de captation tumorale de l'AcBs est inférieur à celui des fragments anti-ACE parentaux. Cela peut être expliqué par le fait que l'AcBs est internalisé dans les cellules après fixation de son fragment anti-ErbB-2 sur son antigène cible. Dans la troisième partie, nous avons développé un Acbs pour le ciblage de cytokines, en couplant un fragment Fab' anti-interleukine 2 (IL-2) et un fragment Fab' anti-antigène associé aux mélanomes ( HMW-MAA). Les résultats préliminaires n'ont pas montré d'effet de IL-2 sur la biodistribution d'anticorps radiomarqués dans un modèle de mélanome humain et les études de paramètres vasculaires ont confirmé que l'IL-2 n'avait pas d'effet vasoactif dans ce modèle. L'ensemble de ces travaux a montré différents aspects de l'utilisation des AcBs et leur intérêt pour le diagnostic et la thérapie des cancers.

Le laboratoire a développé une nouvelle génération d’anticorps bispécifiques, basée sur l’utilisation de domaines variables d’anticorps de lamas simple-chaîne lourde (VHH). Les domaines humains Ck et CH1 ont été utilisés comme motif de dimérisation de 2 VHH, liant l’antigène carcinoembryonnaire (CEA) et le récepteur activateur FcγRIIIA (ou CD16A) exprimé par les cellules Natural Killer. Différents formats d’anticorps bispécifiques ont été produits en système bactérien et caractérisés in vitro et in vivo. Après incubation à 37°C en sérum humain, les formats bsFab sont stables au moins 7 jours, et les bsFab2 31h. Une biodistribution en souris nude montre une rétention des bsAb dans les tumeurs CEA+. Un suivi de la compétition avec les IgG humaines sériques pour la liaison au CD16A humain a montré que les bsAb ne sont pas en compétition avec les IgG humaines. De plus, les bsAb sont capables d’induire une cytotoxicité de Natural Killer de donneurs à très faibles concentrations in vitro
The lab has designed a new kind of bispecific antibodies, based on the use of llama domain antibodies (VHH). Human Ck and CH1 domains have been used as a natural dimerization motif to bring together two domain antibodies binding to carcinoembryonic antigen (CEA) and activating receptor FcγRIIIA (CD16A) expressed by NK cells. Differents bispecific antibodies formats (bsFab and bsFab2) with variable binding profiles on the target cells have been produced in bacterial system and caracterized in vitro and in vivo. BsFab are stable at least for 7 days when incubated in human serum at 37°C, and bsFab2 are stables for 31h. Biodistribution in nude mice showed that bsAb are retained in CEA+ tumor. A competition study of CD16A binding with human IgG showed that bsAb are not in competition with human IgG, contrary to Fc-bearing molecules. Moreover, bsAb are able to induce, via CD16A binding, donnor’s Natural Killer cytotoxicity in vitro et very low concentrations

Deux souches d'hybrides d'hybridomes, l'une E13 sécrétant une IgG1 anti-Cytomegalovirus, l'autre 70B12 sécrétant une IgG3 anti-Chlamydia trachomatis, ont été fusionnées pour obtenir des anticorps monoclonaux bispécifiques murins et démontrer la réassociation hétérologue "in vivo" des chaînes lourdes gamma 1 et gamma 3. Après fusion, nous avons obtenu des clones de "quadromes" avec un rendement de 27%. 77 % de leur surnageant présentent des immunoglobulines à la fois positives sur cellules MRC5 infectées par Cytomegalovirus et sur cellules Hela infectées par Chlamydia trachomatis. Mais cette double spécificité ne prouve pas l'existence d'anticorps hybrides car l'hybride d'hybridomes peut produire simultanément l'anticorps bispécifique et les deux anticorps monospécifiques parentaux. Parmi les sept clones choisis au hasard, six présentent dans leur surnageant des immunoglobulines hybrides IgG1/IgG3. Après immunopurification de deux ascites différentes, 10 % d'anticorps hybrides ont été mis en évidence. Ce ne sont pas des hétéroaggrégats formés à partir de deux immunoglobulines parentales. Ces anticorps présentent les quatre types de chaînes lourdes et légères, et des paires homologues de chaînes lourdes et légères de chaque type sont capables de se réassocier pour donner les deux activités immunologiques
A fusion technique between E13 hybridomas secreting an anti-Cytomegalovirus (IgG1) and 70B12 hybridomas secreting an anti-Chlamydia trachomatis (IgG3) was set up to obtain murin bispecific monoclonal antibodies and to demonstrate the possible "in vivo" association between gamma 1 and gamma 3 heavy chains. After fusion, 27 % of seeded wells showed hybridomas growth and 77% of their supernatants were reactive with both Cytomegalovirus infected cells and Chlamydia trachomatis infected cells. But, this double specificity is not sufficient to prove the existence of a hybrid antibody molecule : hybrid hybridoma can produce simultaneously the bispecific antibody and the parental monospecific antibodies. Among seven clones random selected, six surpernatants of them showed IgG1/IgG3 hybrid immunoglobulins and 10% hybrid antibodies were revealed in immunopurified ascites of two hybrid hybridomas ascites. We showed that they were not heteroaggregats made up of two parental immunoglobulins. These antibodies exhibited four types of heavy and light chains ; and heavy chain of each type might associate with light chain of homologue type to give two immunological activities

Avec quatorze anticorps utilisés en oncologie, les anticorps monoclonaux ont enfin une place de choix dans l'arsenal thérapeutique anticancéreux. Cependant, l'un des modes d'action les plus importants de ces molécules, la cytotoxicité à médiation cellulaire dépendante des anticorps (ADCC), souffre de plusieurs limites en raison de la nécessité d'une interaction optimale avec le FcγRIIIA. L'équipe du Dr. Daniel Baty a conçu de nouveaux formats d'anticorps bispécifiques basés sur l'utilisation de domaine unique d'anticorps de lamas (sdAb) et capables de contourner la plupart de ces limites. Des banques de phages issus de lamas immunisés ont permis de sélectionner deux sdAbs (d'affinités différentes) dirigés contre le FcγRIIIA exprimé par des cellules NK et les macrophages, ainsi qu'un sdAb dirigé contre l'antigène tumoral carcino-embryonnaire (ACE). En utilisant les domaines CH1 et Ck d'IgG1 humaine comme motif d'hétérodimérisation et les sdabs anti-ACE et anti-FcγRIII précédemment sélectionnés, nous avons développé des formats innovants d'anticorps bispécifiques Fab-like nommés bsFabs. Ces molécules sont faciles à produire, très stables et peuvent déclencher la lyse des cellules tumorales par les cellules NK humaines à des concentrations de l'ordre du picomolaire. Elles ne se lient pas au récepteur inhibiteur FcγRIIB, n'entrent pas en compétition avec des IgG sériques pour la liaison aux récepteurs, et leur activité cytotoxique est indépendante de la glycosylation du Fc et du polymorphisme du FcγRIIIA
With fourteen antibodies used in oncology, monoclonal antibodies finally have a place in the therapeutic arsenal against cancer. However one of the modes of action of the most important of these molecules, cell-mediated cytotoxicity antibody-dependent (ADCC), suffers from several limitations due to the need for optimal interaction with the FcγRIIIA. Daniel Baty's team has developed new formats of bispecific antibodies based on the use of single domain llama antibodies (SdAb) that are capable of circumventing most of the these limitations. Phage libraries from immunized llamas were used to select two sdAbs directed against the FcγRIIIA expressed by NK cells and macrophages (with different affinities for FcγRIII), as well as one SdAb directed against the tumor antigen carcinoembryonic (CEA). Using CH1 and Ck domains of human IgG1 as a motif for heterodimerization and sdabs previously selected, we have developed innovative anti-CEA and anti-FcγRIII formats of bispecific antibodies Fab-like named bsFabs. These molecules are easy to produce, very stable and can trigger tumor cell lysis by human NK cells at picomolar concentrations. They do not bind FcγRIIB inhibitory receptor, do not compete with serum IgG and their cytotoxic activity is independent of FcγRIIIA polymorphism. In addition, they slow tumor growth in mouse model. In terms of pharmacokinetics, although bsFabs have a reasonable tumor retention, one of the limitations of these formats is size, which leads to rapid renal elimination. Such findings led us to consider the creation of new antibody formats to both increase tumor retention and secondly the half-life of antibodies in the body