Dissertations / Theses: 'Apoptose – Dissertation universitaire'

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Daressy, Florian. "Caractérisation et études précliniques d'un nouvel inhibiteur naturel de MCL-1 Natural Sesquiterpenoids From Winteraceae As Covalent MCL-1 Inhibitors." Thesis, université Paris-Saclay, 2020. http://www.theses.fr/2020UPASL055.

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Abstract:

Les protéines de la famille BCL-2 jouent un rôle majeur dans l'homéostasie cellulaire de par leur implication dans le processus apoptotique qui se fait à travers des interactions dynamiques entre les membres pro- et anti-apoptotiques composant cette famille. Parmi les membres anti-apoptotiques, MCL-1 est très fréquemment surexprimé dans les tumeurs où il est impliqué dans leur développement tout comme dans les résistances aux traitements de chimiothérapies ou de radiothérapies. Des inhibiteurs synthétiques ciblant cette protéine anti-apoptotique ont déjà été développés, certains étant même en évaluation clinique. Dans ce contexte, notre but était de développer un inhibiteur de MCL-1 naturel. Les produits naturels joue un rôle très important dans le développement de nouvelles molécules thérapeutiques. En effet, depuis les années 1940, 75% des 175 molécules utilisées dans le traitement du cancer sont soit des molécules naturelles, soit des dérivés de molécules naturelles. Nous avons donc isolé et purifié un nouveau composé, le NA1-115-7 puis nous avons évalué son efficacité in vitro, son mécanisme d'action et pour finir, nous l'avons testé in vivo grâce à l'utilisation de nano-émulsions
Proteins of the BCL-2 family play a major role in cellular homeostasis since they regulate apoptotic cell death through dynamic interactions between the anti- and pro-apoptotic members. Over-expression of anti-apoptotic members (BCL-2, BCL-xL, MCL-1...), and particulary MCL-1, participates in the development of tumors as well as in their resistance to chemotherapy or radiotherapy treatments. Synthetic inhibitors targeting this anti-apoptotic protein have therefore been developed, some of which being currently in clinical trials. In this context, our goal is to obtain natural inhibitors of the BCL-2 family, and more specifically of MCL-1. Natural products are playing a significant role in drug discovery and development processes. Since the 1940’s, 75% of the 175 small molecules used in cancer therapy are either natural products or derivatives of natural products. We have isolated and purified a new compound called NA1-115-7, evaluated its efficiency in vitro and characterized its mechanism of action before testing it in vivo, thanks to a nano-emulsion formulation

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Bugueno, Valdbenito Isaac Maximiliano. "Impact de l'infection par Porphyromonas gingivalis sur la réponse inflammatoire locale et systémique." Thesis, Strasbourg, 2019. http://www.theses.fr/2019STRAJ090.

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Abstract:

Les mécanismes impliqués dans l’initiation et le développement des parodontites, ainsi que la dissémination des parodontopathogènes via la circulation systémique et ses effets au niveau vasculaire, restent peu connus. L'infection chronique a été décrite comme un mécanisme potentiel impliqué dans l'aggravation de l'athérothrombose. A l’heure actuelle, le rôle joué par Porphyromonas gingivalis (P.gingivalis) est considéré comme majeur dans les phénomènes associés, tels que sa capacité à perturber la barrière épithéliale ainsi que l’endothélium vasculaire, l’induction d’une réponse inflammatoire soutenue contribuant à la destruction tissulaire. Dans ces travaux de thèse, nous avons évalué les effets de P.gingivalis sur l’apoptose et l’inflammation des cellules épithéliales (GEC), fibroblastiques (FB) et dans un modèle 3D de microtissus (MT), ainsi que dans des cellules endothéliales (EC). Finalement, nous avons évalué son rôle dans la réponse inflammatoire liée à la signalisation via les TLR-2 et TLR-4 et cinq protéines adaptatrices contenant le domaine du récepteur Toll/interleukine-1 (TIR). Nous avons mis en évidence que P.gingivalis est capable d'activer l'inflammation et la réponse du système immunitaire entraînant la destruction du parodonte en modulant différentiellement des processus biologiques primordiaux tels que l'apoptose (modulation de l’apoptosome Apaf-1 et son inhibiteur XIAP), le cycle cellulaire (P53, P21, CDK4), l'inflammation (modulation des TLR-2, TLR-4 et ses adaptateurs MAL et TRAM et des protéines inflammatoires telles que TNF-α), lui permettant d’échapper au système immunitaire, de contribuer à la destruction parodontale et sa dissémination systémique et d’exercer des effets sur l’endothélium. La mise en évidence de nouveaux mécanismes ou de nouvelles cibles cellulaires affectées par ce pathogène pourrons nous permettre de développer de nouvelles stratégies thérapeutiques
The mechanisms involved in the initiation and development of periodontitis, as well as the dissemination of periodontal pathogens via the systemic circulation and their effects at the vascular level, remain poorly described. Chronic infection has been identified as a potential mechanism involved in atherothrombosis worsening. Indeed, Porphyromonas gingivalis (P.gingivalis) is considered to be a major periodontal pathogen involved in the onset and development of the diseases. Its ability to disrupt the epithelial barrier, as well as the endothelium barrier, and to induce a sustained inflammatory response contributes to tissue destruction. In this thesis, we evaluated the effects of P.gingivalis on apoptosis and inflammation of epithelial cells (GEC), fibroblasts (FB) and in a 3D model of microtissues (MT), as well as in endothelial cells (EC). Finally, we evaluated its role in the signaling-related inflammatory response via TLR-2 and TLR-4 and its five TIR-domain-containing adaptors proteins (TIR). We have shown that P.gingivalis is able to activate the inflammation and host-immune response, resulting in the destruction of the periodontium through modulation of primordial biological processes of various cell types, such as apoptosis (modulation of apoptosome Apaf-1 and its inhibitor XIAP), cell cycle (P53, P21, CDK4), inflammation (modulation of TLR-2, TLR-4, its MAL and TRAM adaptors proteins and inflammatory proteins such as TNF-α) , allowing it to escape from the immune system contributing to periodontal destruction and its systemic dissemination. The discovery of new mechanisms or new molecular targets affected by this pathogen will allow us to develop new therapeutic strategies

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Hochane, Mazène. "La protéine apparentée à l'hormone parathyroïdienne (PTHrP) dans la biologie de la cellule mésangiale : rôles dans l'inflammation, la croissance et la survie." Phd thesis, Université de Strasbourg, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00867932.

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Abstract:

La glomérulonéphrite mésangioproliférative (GNMP) se caractérise par une inflammation locale et la prolifération et l'apoptose des cellules mésangiales (CM). La protéine apparentée à l'hormone parathyroïdienne (PTHrP) a été impliquée dans ces processus dans divers types cellulaires. Nous avons analysé les effets de la PTHrP sur ces processus dans les CM. Nous montrons que la PTHrP majore la prolifération des CM par voie intracrine et diminue leur apoptose par voie paracrine. La PTHrP stimule les voies de l'AMPc/PKA et PI3-K/Akt conduisant à l'activation du NFkB et à la majoration de la cyclooxygénase-2 (Cox-2). La Cox-2 était responsable de la survie des CM par la PTHrP. Par ailleurs, l'IL-1beta et le TNF-alpha majorent l'expression de la PTHrP dans les CM, et la PTHrP elle-même induisait l'expression de cytokines et chimiokines. L'expression des cytokines (IL-17, IL-16), était brève (pic à 2h). L'expression des chimiokine (RANTES, MIP-2, TARC et I-TAC) était plus prolongée (4h). Dans un modèle murin de GNMP, la PTHrP était surexprimée à J1 dans les glomérules malades. Elle pourrait contribuer à l'inflammation locale, à la prolifération et à la survie des CM.

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Verneuil, Laurence. "L' apoptose caspase-dépendante dans les interactions hôte / virus et en immunopathologie." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077200.

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Abstract:

L'apoptose est un processus physiologique actif de mort cellulaire impliquant un programme génétiquement contrôlé d'autodestruction de la cellule. Deux voies effectrices de l'apoptose sont décrites, la voie des récepteurs membranaires de mort cellulaire se liant à un ligand et la voie mitochondriale impliquant le relarguage de molécules effectrices pro-apoptotiques. Ces deux voies activent en aval les caspases effectrices de l'apoptose. Un dysfonctionnement des mécanismes régulateurs de l'apoptose peut engendrer des pathologies. Nos travaux ont exploré un rôle possible de l'induction de l'apoptose et les mécanismes moléculaires impliqués, dans l'infection par le cytomégalovirus (CMV) et la GVHD aiguë (maladie du greffon contre l'hôte). Des protéines anti-apoptotiques du CMV humain sont connues, en revanche aucune protéine pro-apoptotique n'a été décrite. Dans un modèle cellulaire, in vitro, nous avons montré que, l'expression du récepteur viral de chimiokines US28, produit d'un gène du CMV, induisait une apoptose caspase dépendante de manière constitutive (indépendante d'un ligand), et indépendante de la voie mitochondriale et de celle des récepteurs de mort. Dans le contexte de la greffe de moelle osseuse, la GVHD correspond à une réponse allogénique par les lymphocytes T d'un donneur contre des cellules cibles épithéliales d'un receveur. Dans un modèle murin de GVHD aiguë, in vivo, nous avons montré une apoptose des cellules endothéliales précédant l'induction de l'apoptose des cellules épithéliales dans la muqueuse orale, dépendante de l'expression de FasL (ligand du récepteur de mort Pas) par les lymphocytes T activés du donneur, sans conditionnement préalable
Apoptosis is an active physiological process involving a genetically regulated cell suicide process. Two effector cytolytic pathways of apoptosis are involved: one is triggered by the engagement of cell-surface death receptors of the Fas/tumor necrosis factor receptor (TNFR) family, and the other is the mitochondrial pathway, which involves released of pro-apoptotic effectors. These two pathways trigger the effector caspases activation. A deregulation of apoptosis control mechanisms can provide some pathologies. We investigate a possible implication of apoptosis induction and the molecular mechanisms involved in the cytomegalovirus infection and in the acute graft versus host disease (GVHD). HCMV (human cytomegalovirus) encodes proteins with antiapoptotic properties but no proapoptotic protein is known. Here we show, in vitro, that the G protein coupled receptor (GPCR), US28 encoded by HCMV, constitutively induced a caspase-dependent apoptosis but independent of the mitochondrial pathway activation and of cellular TNF family death receptor activation. In the context of allogeneic bone marrow grafting, the GVHD corresponds to an allogeneic response of donor effector cells against recipient epithelial target cells. In a murine model of acute GVHD, in vivo, our results shown that endothelial cell death precedes the induction of epithelial cell death in the oral mucosa and that FasL expression by allogeneic actived lymphocytes T is required, in the absence of any conditioning treatment

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Duplaquet, Leslie. "Implication du récepteur à activité tyrosine kinase (RTK) MET sur la balance survie/apoptose et identification de nouvelles mutations de RTKs dans les cancers colorectaux métastatiques." Thesis, Lille 2, 2018. http://www.theses.fr/2018LIL2S031/document.

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Abstract:

Les RTKs sont impliqués dans le dialogue au sein des tissus par la régulation de nombreuses réponses cellulaires dont la survie, la prolifération ou la mobilité. Dans les cancers, ces récepteurs sont fréquemment dérégulés notamment par des mutations activatrices. Ainsi, la suractivation des RTKs induit la transformation cellulaire et la tumorigenèse en favorisant par exemple la survie cellulaire. Depuis le début des années 2000, le développement de molécules inhibitrices de l’activité tyrosine kinase (TKI) et d’anticorps bloquant l’interaction ligand/récepteur ont montré que les RTKs représentent des cibles thérapeutiques majeures dans le traitement des cancers.MET est un RTK exprimé par les cellules épithéliales, dont le ligand est l’Hepatocyte Growth Factor/Scatter Factor (HGF/SF). En plus de son rôle pro-survie, MET peut également favoriser l’apoptose en absence de ligand et sous l’effet d’un stress. MET est alors clivé par les caspases et libère dans le cytosol un fragment de 40 kDa nommé p40MET. Ce fragment active la voie intrinsèque de l’apoptose en causant la perméabilisation des mitochondries. Cependant, les mécanismes moléculaires responsables de cette perméabilisation et l’impact physiologique de la fonction pro-apoptotique de MET étaient encore inconnus.Mon travail de thèse a permis de démontrer que le fragment p40MET se localise dans la région des MAMs, constituant l’interface entre le réticulum endoplasmique et les mitochondries, où il favorise un transfert de calcium entre les deux organites. Ce transfert déclenche une surcharge de calcium dans les mitochondries, responsable de leur perméabilisation. De plus, nous avons développé une lignée de souris transgéniques dans lesquelles MET est muté sur l’un des sites caspases. Ces souris sont incapables de produire le fragment p40MET pro-apoptotique. Ce modèle nous a permis de démontrer l'importance du clivage de MET dans l’amplification de l’apoptose in vivo. Ainsi, nos travaux apportent les premières preuves de la fonction de MET en tant que récepteur à dépendance au sein d’un organisme et décrivent un nouveau mécanisme de signalisation pro-apoptotique par la dérégulation des flux calciques.Ces dernières années, la découverte de mutations touchant les RTKs dans les cancers a augmenté de façon exponentielle. Toutefois, pour une grande majorité de mutations, leurs conséquences fonctionnelles sont totalement inconnues. Ainsi, en parallèle de mon principal sujet de thèse nous avons évalué la pertinence biologique et clinique des mutations de RTK identifiées par séquençage haut débit à partir d’échantillons de patients. Le séquençage de tissus sains, de tumeurs colorectales et de métastases hépatiques de 30 patients a permis d'identifier de nombreuses mutations somatiques. Parmi elles, certaines affectent le domaine kinase des récepteurs et sont présentes à la fois dans les tumeurs et les métastases. L’analyse fonctionnelle que j’ai menée sur 7 de ces mutations révèle qu’elles ne provoquent ni la suractivation de la kinase ni la transformation des fibroblastes NIH3T3. Au contraire, deux mutations de RTKs provoquent une inhibition drastique de leur activité kinase. Ces résultats démontrent que ces variants de RTK ne sont pas des cibles appropriées pour l’utilisation de TKI à des fins thérapeutiques et démontre l’intérêt de coupler la recherche de variants à des études fonctionnelles [...]
RTKs are involved in tissue dialogue by regulating many cellular mechanisms such as survival, proliferation or mobility. In cancers, these receptors are frequently deregulated, as a result of various molecular alterations leading to their activation. RTKs overactivation induces cell transformation and tumorigenesis notably by promoting survival. Since the early 2000s, the development of tyrosine kinase inhibitors (TKI) demonstrated that RTKs represent major therapeutic targets in cancer treatment.MET receptor and its ligand the Hepatocyte Growth Factor/Scatter Factor (HGF/SF) are known to promote survival of many epithelial structures during embryogenesis and later during adulthood. Besides pro-survival role of the ligand-activated MET, the receptor is also able to promote apoptosis, which has led to classify it within the dependence receptor family. Indeed, in absence of its ligand and under stress conditions, MET is cleaved by caspases leading to the production of an intracellular fragment of nearly 40 kDa named p40MET able to amplify apoptosis. This fragment activates the intrinsic pathway of apoptosis by causing mitochondrial permeabilization. However, the molecular mechanisms involved in this permeabilization and the physiological impact of the pro-apoptotic function of MET were still unknown.My PhD work has evidenced p40MET localization at the MAM microdomain and characterized a calcium transfer from the endoplasmic reticulum to the mitochondria triggered by p40MET. This calcium transfer triggers a calcium overload in mitochondria leading to their membrane permeabilization and apoptosis. In addition, we engineered a knock-in mouse model expressing mutated MET at the C-terminal caspase site. These mice are unable to produce the pro-apoptotic p40MET fragment. This model allowed us to assess the importance of MET cleavage in physiological apoptosis in vivo. Altogether, our work brings the first evidence for MET function as a dependence receptor in an organism and demonstrates a new signaling mechanism involved in apoptosis amplification by p40MET through calcium flux deregulation. This process may be relevant in the physio-pathology of organs where MET is expressed.In recent years, the discovery of mutations affecting RTKs in cancers has increased exponentially. However, for a large majority of mutations, their functional consequences are totally unknown. Thus, in parallel of my main thesis topic, we evaluated the biological and clinical relevance of RTKs mutations identified by high throughput sequencing from patient samples. Sequencing of healthy tissues, colorectal tumours and liver metastases of 30 patients has identified many somatic mutations. Some of them affect the receptor kinase domain and are present in both tumors and metastases. Functional analysis of 7 of these mutations shows that they do not cause neither kinase overactivation nor transformation of NIH3T3 fibroblasts. On the contrary, two RTK mutations cause drastic inhibition of the corresponding kinase activity. These findings indicate that these RTK variants are not suitable targets for TKI. Therefore, it appears important to set up reliable functional assays to interpret identified variants and classify them as pathogenic or neutral.In conclusion, my work opens up new perspectives on therapeutic strategies targeting RTKs in cancers. First of all, the pro-apoptotic capacities of some RTKs are undoubtedly a brake to tumorigenesis, and their stimulations could reinforce the effectiveness of anti-cancer therapies. On the other hand, we have shown that RTKs mutations in the kinase domain do not necessarily lead to overactivation of the receptor suggesting that they are probably not involved in tumorigenesis and that treatment with TKIs targeting them would be ineffective. This functional information could notably influence the choice of a suitable targeted therapy

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Rouquet, Nicolas. "Apoptose hépatocytaire induite par las systèmes FAS et TNF : applications thérapeutiques." Paris 5, 1996. http://www.theses.fr/1996PA05CD21.

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Abstract:

Un nombre croissant de pathologies sont associées soit à une apoptose excessive (maladies neurodégénératives, infections virales) ou au contraire à une apoptose déficiente (cancers, syndromes auto-immuns). Grâce aux connaissances acquises ces dernières années sur les régulateurs et les effecteurs de l'apoptose, identifier des agents restaurant l'apoptose dans les cellules tumorales, ou des composés inhibant des processus de destructions cellulaires massives semble désormais envisageable. Parmi la liste des agents inducteurs d'apoptose, le ligand Fas (FasL) et la cytokine TNF, exprimés par le système immunitaire, participent à la défense de l'organisme contre les cellules autoréactives, infectées ou transformées. Diverses situations pathologiques suggèrent que le foie est un organe particulièrement sensible à l'action cytotoxique de FasL et du TNF. Nos travaux se placent dans une perspective i) d'utilisation d'anticorps cytotoxiques anti-Fas dans une thérapie anti-tumorale ii) de recherche d'inhibiteurs de l'action cytotoxique de FasL et du TNF dans des maladies infectieuses associées à une destruction massive hépatocytaire par ces inducteurs d'apoptose. Dans un premier temps, nous avons voulu déterminer la sensibilité d'hépatocytes transformés à l'apoptose induite par FasL et le TNF. A l'aide d'un modèle transgénique d'hépatocarcinome, obtenu par ciblage hépatique de l'expression des séquences codant pour la protéine virale grand T de SV40 (Tag), nous avons montré que les hépatocytes issus de ces souris transgéniques exprimant Tag présentent une résistance spécifique à Fas mais pas au TNF. In vivo, les nodules néoplasiques exprimant fortement Tag sont complètement protégés de la cytotoxicité induite par l'injection d'anticorps agonistes anti-Fas. De plus la résistance à Fas est une propriété intrinsèque de Tag et non un effet secondaire dû à l'acquisition d'un phénotype transformé, puisque des résultats similaires ont été obtenus dans un second modèle de souris transgénique exprimant un mutant non transformant de Tag. La propriété de certaines protéines virales d'inhiber l'apoptose des cellules infectées apparaît maintenant comme un mécanisme fréquent de protection contre le système immunitaire, permettant la dissémination et la production des particules virales, et pourrait favoriser l'émergence de tumeurs dans le cas de protéines virales transformantes comme Tag. Certaines maladies hépatiques sont, au contraire caractérisées par une apoptose massive, telles que les hépatites virales fulminantes ou certaines complications des chocs septiques. Ces maladies peuvent être mimées chez la souris, respectivement par l'injection d'anticorps agonistes anti-Fas, ou de lipopolysaccharides (LPS) qui provoquent une cytotoxicité induite par le TNF. Nous avons montré qu'un peptide synthétique inhibiteur de cystéine protéases, enzymes impliquées dans la voie de signalisation de Fas et du TNF, bloque efficacement l'apoptose induite par ces agents. L'injection intrapéritonéale de ce peptide protège les souris de l'effet létal de l'injection d'anticorps anti-Fas ou de LPS, et exerce même un effet curatif, démontrant le fort pouvoir de ce peptide à stopper une cascade d'événements apoptotiques déjà engagée. Enfin nous avons montré qu'in vitro le système Fas nécessite l'intervention de différents co-stimuli, qui entraînent une apoptose par des voies de transduction distinctes. Préciser la participation de ces co-stimuli et de ces voies de transduction à l'extrême sensibilité des hépatocytes à l'action de Fas et du TNF dans certaines pathologies, devrait permettre de concevoir des agents thérapeutiques anti-apoptotiques plus spécifiques. A l'instar du peptide inhibiteur de la voie commune de transduction de Fas et du TNF, ces agents ouvrent la voie au traitement symptomatique de pathologies caractérisées par une apoptose hépatique massive qui mettent souvent en jeu le pronostic vital des patients.

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Mortuaire, Geoffrey. "Modulation des mécanismes inflammatoires impliquant les polynucléaires éosinophiles au cours de la polypose naso-sinusienne associée à l'asthme." Thesis, Lille 2, 2015. http://www.theses.fr/2015LIL2S010/document.

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Abstract:

Contexte : La polypose naso-sinusienne (PNS) est une maladie inflammatoire chronique multifactorielle dont l’étiologie reste imprécise. Les acteurs de l’immunité innée et acquise sont diversement impliqués avec un rôle central joué par l’éosinophile(EO). L’asthme associé à la PNS est un facteur de résistance à la corticothérapie constituant à l’heure actuelle la seule option thérapeutique médicale.Objectifs : Caractériser sur le plan histologique, biologique et cellulaire les patients atteints de PNS afin de définir des profils phénotypiques inflammatoires en relation avec l’asthme et de préciser les mécanismes d’immuno-modulation de l’EO.Matériel: Une étude prospective était menée incluant les patients atteints de PNS réfractaires au traitement médical. Après recueil du consentement éclairé et accord institutionnel, les sécrétions nasales et les polypes étaient prélevés au bloc opératoire. Les corticoïdes locaux et généraux étaient au préalable arrêtés pendant 1 mois. Etaient réalisés un dosage des marqueurs d’inflammation (interleukine 5 (IL-5), Immunoglobulines E (IgE), eosinophil-derived neurotoxin (EDN), IL-9), une analyse histologique du polype sous microscopie optique et une analyse cytométrique des récepteurs d’adhésion (béta(β) intégrines, CD44), d’activation (CD69) et du récepteur alpha à l’IL-5 (IL-5Rα) sur les EOs purifiés sanguins et tissulaires. Ces paramètres étaient comparés à la présence d’un asthme.Résultats: Une classification histologique des polypes en 3 sous-types était établie: le polype œdémateux riche en EOs (64% des cas), le polype fibreux riche en collagène et glandes sous-muqueuses (9%) et le polype intermédiaire à composante mixte fibreuse et œdémateuse mais à prédominance éosinophile (27%). Il n’existait pas de corrélation entre cette classification et le statut clinique. L’asthme était associé à une plus forte éosinophilie tissulaire (p=0.026). Cette infiltration cellulaire était associée à la présence d’une plus forte concentration en IL-5, IgE et EDN dans les sécrétions nasales et dans le polype chez les patients asthmatiques (p≤0.04). La domiciliation des EOs dans le polype était favorisée par une diminution de l’expression membranaire des βintégrines et du CD44 après migration tissulaire (p≤0.02). Cette migration s’accompagnait d’une activation cellulaire CD69+ et d’une augmentation de l’expression membranaire de l’IL-5Rα sur les EOs purifiés quel que soit le statut clinique des patients. L’expression de l’IL-5Rα sur les EOs tissulaires était relativement plus faible en cas d’asthme associé (p≤0.04). Les analyses fonctionnelles par mise en culture d’EOs purifiés confirmaient le rôle anti-apoptique de l’IL-5 à forte concentration chez les patients asthmatiques. La co-culture IL-5/IL-9 permettait de renforcer cette action anti-apoptotique IL-5 dépendante en induisant l’expression membranaire de l’IL-5Rα chez les patients asthmatiques.Discussion: Ces résultats confirment le rôle majeur de l’EO en particulier chez les patients asthmatiques. L’architecture du polype conséquence du remodelage tissulaire ne détermine pas la cortico-résistance habituellement associée à l’asthme dans la mesure où les sous-types histologiques sont distribués de manière équivalente quel que soit le statut clinique des patients. Le profil inflammatoire (IL-5, IgE, IL-9) conditionne la domiciliation tissulaire des EOs en modulant l’expression des protéines d’adhésion et d’interaction. Il influence aussi la survie tissulaire des EOs en contrebalançant une diminution d’expression de l’IL-5Rα IL-5 dépendante par une synergie d’action IL-5/IL-9 anti-apoptotique [...]
Background: The chronic rhinosinusitis with nasal polyps (CRSwNP) is a plurifactorial inflammatory disease whose etiology is still unknown. Innate and acquired immune agents are key factors with a pivotal role of the eosinophil (EO). Asthma is recognized as a major factor of medical failure. Objectives: Setting histological, biological and cellular patterns of inflammation in CRSwNP in accordance with the asthmatic status of the patient and describing the membrane immune phenotype of EOs both in blood and polyp compartments. Materiel: A prospective study was conducted enrolling patients with medical refractory CRSwNP. With institutional review board agreement, nasal secretions and polyp specimens were harvested through endoscopic surgical procedure. A 1-month corticosteroid wash-out was required prior to surgery. Inflammatory biomarkers measurements (interleukin-5 (IL-5), Immunoglobulins E (IgE), eosinophil-derived neurotoxin (EDN), IL-9), histological study on microscopic slides and cytometric analyses of adhesion receptors (beta(β) integrins, CD44), activation proteins (CD69) and of the IL-5 receptor alpha (IL-5Rα) were performed on purified EOs collected from the blood and the polyp. Data were compared with the asthmatic status of the patients.Results: A histological classification was established. Three subtypes were observed. The edematous polyp with huge EO infiltration (64%), the fibrous polyp with a collagen framework and a large amount of seromucous glands (9%) and the intermediate polyp with mixed fibro-edematous stroma and EO infiltration (27%). No correlation was described between this classification and the clinical status. CRSwNP with concomitant asthma was depicted with a major eosinophilia (p=.026). High IL-5, IgE and IL-9 concentrations in nasal secretions and polyp were also associated with asthma (p≤.04). EO homing into the polyp was partly promoted by the β integrins and CD44 membrane downregulation observed during tissular migration (p≤.02). CD69 activation process and IL-5Rα surface enhancement on EOs were observed in CRSwNP with or without asthma during tissue migration. The IL-5Rα expression was slightly reduced in asthmatic CRSwNP patients by comparison with the non-asthmatic counterparts (p≤.04). In vitro analyses showed the anti-apoptotic function of IL-5 in EOs of the asthmatic patients. The co-culture with IL-5 and IL-9 led to the up-regulation of the IL-5Rα surface expression. Discussion: Our results stress the major role of the EO in particular in asthmatic CRSwNP patients. The remodeling process implied in the polyp formation is not directly involved in the corticosteroid resistance as the 3 subtypes of polyps were evenly observed whatever the clinical status. High IL-5, IgE and Il-9 environment promotes EO polyp migration and activation by the regulation of adhesion and activation proteins on the EO membrane. The synergistic action of pro Th2 cytokines (IL-5/IL-9) balances the IL-5Rα downregulation observed in high IL-5 rate conditions. Conclusion: The cellular and inflammatory phenotype profiles in CRSwNP are correlated to the asthmatic status of the patients. Taken together, our results suggest that processes of immune modulation are key factors of inflammatory homeostasis in CRSwNP. Intricate mechanisms of up and down regulation of cytokines receptors expression could be involved in the incomplete efficacy of targeted therapies whose evaluation is still pending

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Conti, Filoména. "Etude des facteurs de risque du rejet chronique d'allogreffe hépatique chez l'homme." Paris 5, 1999. http://www.theses.fr/1999PA05CD01.

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Abstract:

Après transplantation hépatique, 50% environ des patients présentent un rejet aigu, dont le traitement repose sur la corticothérapie à fortes doses. Dans 30% des cas, le rejet est corticorésistant et dans 10% des cas, il évolue vers le rejet chronique, dont le mécanisme reste mal connu. Cette thèse regroupe des travaux de recherche clinique, qui ont permis d'identifier les facteurs de risque de corticorésistance et de rejet chronique, et des travaux in vitro, visant à apprécier les paramètres biologiques associés à ces facteurs de risque. Nos résultats montrent l'absence de lésions hépatiques résiduelles après un épisode unique de rejet aigu. En revanche, les rejets récidivants induisent une altération de la fonction hépatique. Nous avons également montré que le rejet aigu récidivant, la corticothérapie pré-transplantation et la transplantation pour hépatopathie auto-immune sont des facteurs de risque de corticorésistance du rejet aigu. De plus, le rejet aigu corticorésistant favorise l'évolution vers le rejet chronique. Ces données ont changé notre attitude thérapeutique : un traitement immunosuppresseur faible, limitant les effets secondaires, est conservé chez les patients sans rejet aigu, le traitement est renforcé après un premier épisode de rejet aigu afin d'éviter l'altération ultérieure du greffon. Nous évitons la corticothérapie avant transplantation et nous mettons en place une immunosuppression renforcée en cas d'hépatopathie auto-immune. Les travaux in-vitro avaient pour but de mieux comprendre le rôle des cytokines, de l'apoptose et du complément au cours du rejet. Nous avons montré que l'IL-10, qui possède des propriétés immunosuppressives, n'est pas surexprimée au cours du rejet aigu ou chronique. In vitro, l'IL-10 diminue la prolifération lymphocitaire de façon synergique avec la ciclosporine ou le tacrolimus. L'association de l'IL-10 à la ciclosporine ou au tacrolimus pourrait donc améliorer la prophylaxie du rejet. Nous avons constaté la présence d'une diminution de sécrétion d'IL-1Ra en cas de corticorésistance. La persistance de cette anomalie au long cours est en faveur d'un défaut constitutionnel. Les patients porteurs d'un défaut de production de l'IL-1ra pourraient donc bénéficier d'un traitement anti-rejet comportant l'IL-1ra. L'IL-4 est fortement exprimée au cours du rejet aigu, et surtout du rejet chronique, et les données in vitro suggèrent qu'elle pourrait jouer un rôle effecteur au cours du rejet. Par ailleurs, nous avons mis en évidence une apoptose des hépatocytes et des cellules biliaires, favorisée par l'IL-4 et les acides biliaires, qui pourrait être impliquée dans l'évolution vers le rejet chronique. Des immunosuppresseurs ayant des activités anti-IL-4 pourraient donc être utilisés dans la prévention du rejet chronique. Nos résultats suggèrent enfin une possible implication du complément dans les lésions vasculaires et biliaires observées au cours du rejet chronique et de certaines complications biliaires. De nouveaux travaux vont compléter cette thèse, notamment : (1) l'évaluation de la production d'IL-1Ra avant la transplantation, dans le but d'en apprécier le retentissement sur le rejet ultérieur et d'en tirer une prophylaxie du rejet incluant l'IL-1Ra ; (2) l'évaluation des mécanismes d'apoptose au cours du rejet.

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Bruneel, Arnaud. "Etude protéomique des cellules endothéliales et identification de protéines impliquées dans leur apoptose induite par l'étoposide." Paris 5, 2004. http://www.theses.fr/2004PA05P629.

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Abstract:

L'électrophorèse bi-dimensionnelle (2D) permet aujourd'hui de séparer plusieurs centaines de protéines sur un gel avec un pouvoir de résolution pouvant atteindre quelques centièmes d'unité pH ; par ailleurs, les techniques de spectrométrie de masse MALDI-TOF (matrixassisted laser desorption/ionization-time of flight) et ESI-MS/MS (electospray ionizationtandem mass spectrometry) fournissent des données de masse et/ou de séquencepeptidique permettant leur identification. Nous avons utilisé cette association analytique pour étudier le contenu protéique global, ou protéome, des cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine (HUVECs) en primocultures. Ce modèle, bien qu'imparfaitement représentatif de l'endothélium humain in vivo, est très utilisé en recherche et a fortement contribué à l'avancée des connaissances concernant la physiopathologie vasculaire. Près d'un millier de protéines d'HUVECs ont été séparées entre les pH 3 et 10 ; parmi elles, 162, fortement exprimées à pH acide, ont été identifiées. L'étude fonctionnelle de ces identifications a permis, d'une part, de mieux caractériser les cellules endothéliales humaines et a, d'autre part, révélé certaines protéines spécifiques de l'endothélium comme l'endothélial protein disulfide isomérase (endoPDI). L'étude protéomique différentielle des HUVECs traitées par l'étoposide, un anticancéreux inducteur d'apoptose, a montré les modulations d'expression significatives de huit protéines : la cofiline, les GRPs 78 et 94 (glucose regulated proteins), la laminin receptor protein, la valosin containing protein, la protease inhibitor 9, l'apolipoprotéine A1 et la tropomyosine. Ces variations ont confirmé l'implication de la voie mitochondriale dans notre modèle d'apoptose et ont également suggéré celle du réticulum endoplasmique. Enfin, l'étude protéomique des effets du phorbol myristate acétate, un activateur de la protéine kinase C, a montré de nombreuses différences d'expression par rapport à l'état quiescent qui devraient permettre de mieux comprendre les voies biochimiques de la régulation de la protéine anti-apoptotique bcl-2 ainsi que de l'initiation du processus d'angiogenèse. En perspective, ces résultats suggèrent qu'il sera bientôt possible d'identifier des molécules protectrices pour l'endothélium vasculaire et donc bénéfiques pour les patients traités par les chimiothérapies anticancéreuses
In this work, we have carried out the proteomic study of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) using the combination of 2D-electrophoresis, automated trypsin digestion, peptide mass fingerprinting analysis after MALDI-TOF MS and peptide sequencing using nano LC-ESI-MS/MS. The overall functional characterization of the 162 identified proteins from primary cultures of HUVECs confirms the metabolic capabilities of endothelium and illustrates various cellular functions more related to cell motility and angiogenesis, protein folding, anti-oxidant defenses, signal transduction, proteasome and resistance to apoptosis. In comparison with controls cells, the differential proteomic analysis of HUVECs treated by the pro-apoptotic topoisomerase inhibitor etoposide further revealed the modulation of eight proteins namely, GRP78, GRP94, valosin-containing protein, proteinase inhibitor 9, cofilin, 37 kDa laminin receptor protein, bovine apolipoprotein and tropomyosin. These data suggest that etoposide-induced apoptosis of human vascular endothelial cells results from the intricate involvement of multiple apoptosis processes including at least the mitochondrial and the endoplasmic reticulum stress pathways. The presented 2D pattern and protein database,as well as the data related to apoptosis of HUVECs, are available at http://www. Huvec. Com

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Pârvu-Ferecatu, Iona Costina. "Etude de nouvelles activités de p53 et Rb à la mitochondrie et dans le contrôle de l'apoptose." Versailles-St Quentin en Yvelines, 2008. http://www.theses.fr/2008VERS0043.

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Abstract:

Les protéines p53 et Rb sont des régulateurs du cycle cellulaire et de l’apoptose et leur activité est altérée dans la plupart des cancers humains. Les travaux réalisés dans le cadre de ma thèse visaient à mieux comprendre le rôle de p53 et de Rb, tant dans l'apoptose que dans le contro��le de la survie cellulaire. Ainsi, nous avons mis en évidence, en condition de stress, que la protéine p53 est capable d’induire une nouvelle voie d’apoptose indépendante de la mitochondrie et qui est contrôlée par la caspase-9. L’action de celle-ci repose sur sa capacité à cliver la protéine Rb pour générer une forme tronquée p76Rb qui est capable de protéger les cellules de la mort induite par p53. Par ailleurs, nous avons décrit pour la première fois une localisation mitochondriale de protéines p53 et Rb dans de nombreux modèles de cellules en prolifération. A la mitochondrie, la protéine p53 est située au niveau des membranes tandis que la protéine Rb est retrouvée dans des compartiments internes de l’organite. Les régions de p53 qui sont impliquées dans la localisation mitochondriale sont distinctes de celles mise en jeu dans la fixation de p53 à l’ADN nucléaire ou à la mitochondrie en condition de stress. La protéine VDAC, une protéine canal de la membrane externe, apparaît comme un partenaire mitochondrial avec lequel p53 interagit en l'absence de stress. Le domaine à poche de la protéine Rb est nécessaire pour permettre à la protéine de se lier à la mitochondrie. Ces résultats suggèrent soit que la mitochondrie constitue un site de séquestration de p53 et de Rb, soit que ces protéines possèdent une activité spécifique au niveau de cet organite
Since their discovery, p53 and Rb proteins have been considerably studied mainly due to their regulatory function of cell cycle and apoptosis; their activities are found to be inactivated in most human cancers. During my PhD, I focused my interest in better understanding the role of p53 and Rb proteins in both apoptotic and living cells. First, we demonstrated that in stress conditions p53 is able to activate a mitochondria-independent alternative apoptotic pathway, which is under control of caspase-9. Moreover, we show that this caspase is able to cleave Rb protein, to generate a truncated p76Rb form which protects cells from p53-dependent apoptosis. Afterwards, we brought evidences of a mitochondrial localization of these proteins in proliferative cells, in many cell models, localization that has never been described before in such conditions. At mitochondria, p53 is mainly located at membranes level (inner or outer) while Rb displays more of an internal placement (inner-membrane or matrix). The domains of p53 involved in mitochondria localization of living cells seem to differ from those involved in nuclear or mitochondrial localization in stress conditions. The VDAC protein, one of most abundant proteins of mitochondrial outer-membrane, is the mitochondrial partner of p53 solely in living conditions. As for Rb, the pocket domain appears to be the one required for mitochondrial binding of the protein. These results suggest either that mitochondria may represent a sequestration site for both p53 and Rb, or that these proteins may be directly involved in mitochondria activity

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Chollat-Namy, Marie. "Effet de l’inactivation du gène suppresseur de tumeur p53 et de sa réactivation pharmacologique sur la réponse cytotoxique anti-tumorale The Pharmalogical Reactivation of p53 Function Improves Breast Tumor Cell Lysis by Granzyme B and NK Cells Through Induction of Autophagy Mutant P53 Gain of Function Stimulates PD-L1 Expression." Thesis, université Paris-Saclay, 2020. http://www.theses.fr/2020UPASL032.

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Abstract:

Le système immunitaire joue un rôle important dans le contrôle et l'éradication du cancer. Des acteurs majeurs de la réponse immune antitumorale sont les cellules tueuses naturelles (ou cellules NK) et les lymphocytes T cytotoxiques (ou CTL), capable de reconnaitre et détruire des cellules tumorales par l’exocytose de perforine et de granzymes contenus dans leur granule cytotoxique. Il a été montré au sein du laboratoire l’implication de la protéine suppresseur de tumeur p53 dans cette voie apoptotique. Or, plus de 50% des tumeurs humaines présentent des mutations inactivatrices de p53 ce qui favorise le développement tumoral. De ce fait, l’inactivation fréquente de p53 dans les tumeurs humaines pourrait leur permettre d’échapper à la destruction par les CTL et les cellules NK.Dans ce contexte, mes travaux de thèse ont montré que la réactivation pharmacologique de la fonction de p53 sauvage dans des cellules tumorales exprimant une p53 mutée augmente leur susceptibilité à la lyse induite par les cellules NK grâce à l’induction d’un processus d’autophagie. De plus, j’ai cherché à déterminer le lien entre les mutations de p53 et l’expression à la surface des cellules tumorales de PD-L1 qui empêche l’activation optimale des cellules cytotoxiques et conduit à leur épuisement. Mes travaux actuels suggèrent que l’expression de p53 mutantes induits une surexpression de PD-L1 à la surface des cellules cancéreuses. Les mécanismes expliquant ce phénomène sont en cours d’études
Immune system plays an important role in the control and destruction of cancer cells. The major effectors of antitumor immune response are Natural Killer (NK) cells and the cytotoxic T lymphocytes, which recognize et destroy tumor cells by exocytosis of perforin and granzymes contained in cytotoxic granules. It has been previously shown in the laboratory that the tumor suppressor p53 plays an important role in this apoptotic pathway. However more than 50% of human tumors have p53 inactivating mutations which favor tumor development. Consequently, frequent p53 inactivation in human tumor could enable them to escape from destruction by cytotoxic immune cells. In this context, my thesis work has shown that the pharmacological reactivation of wild type p53 function in cancer cells expressing a mutated p53 increased their susceptibility to NK cell-mediated apoptosis cells through the induction of an autophagic process. Moreover, I tried to determine the link between p53 mutations and the expression of the immune checkpoint ligand PD-L1 which prevent efficient activation of cytotoxic cells and promote immune cells exhaustion. My work suggests that the expression of p53 mutants promotes an the expression of PD-L1 at the cancer cell surface. The study of the underlying mechanisms is still in progress

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Thomas, Mélissa. "Origins of Cellular Lethality Resulting From a Defect in Homologous Recombination in Human Cells." Thesis, université Paris-Saclay, 2021. http://www.theses.fr/2021UPASL027.

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Abstract:

La recombinaison homologue (RH) est impliquée dans la réparation des cassures double brin à l'ADN, et dans la gestion des fourches de réplication bloquées. Rad51 et BRCA2 en sont deux protéines pivots.J'ai montré que l'inhibition de la RH ainsi que la surexpression de Rad51 sont létales dans les cellules humaines, mais qu'un faible nombre de cellules arrivent à survivre. De plus, dans plusieurs cancers, les gènes de la RH sont mutés (BRCA1/2 dans les cancers du sein et de l'ovaire) ou la surexpression d'un gène de la RH est observée. Mon projet a pour but d'identifier les mécanismes et les causes de la létalité induite par une dérégulation de la RH dans les cellules humaines, ainsi que de comprendre comment certaines cellules arrivent à y survivre. L’analyse du cycle cellulaire et du marquage Histone H3 phosphorylée a révélé que les cellules humaines inactivées pour la RH ou surexprimant RAD51 s’accumulent à la transition G2/M. Parallèlement la vidéomicroscopie a suggéré que les cellules mourraient par apoptose, ce qui a été corroboré par des expériences utilisant l'Annexin-V comme marqueur d’apoptose et par des Western-Blot. Les Western Blots montrent que le checkpoint G2/M est activé, via l'analyse de la cyclineB1 et de cdk1, et que l'apoptose est déclenchée, via l'analyse du clivage de PARP. Mon hypothèse principale de travail étant que la surexpression d'un dominant négatif de Rad51 et possiblement la surexpression du Rad51 WT, entraîne des défauts de réplication dont l'accumulation entraînerait une activation du checkpoint. Des expériences d'incorporation de BrdU et de peignage moléculaire sont venus confirmer mon hypothèse : dans les cellules ayant une dérégulation de la RH, la vitesse de réplication est diminuée et il y a plus de fourches bloquées. Des analyses in-silico ont révélées que les cancers mutés dans la RH sont fréquemment co-mutés dans des gènes impliqués dans le checkpoint G2/M ou dans le redémarrage des fourches. Une liste de gènes candidats, enrichie de résultats de séquençages de fibroblastes de patients FANCD1, a été testée, confirmant l'analyse in-silico
Homologous recombination (HR) is involved in repairing DNA double strand breaks, and in protecting and restarting stalled or collapsed replication forks. Rad51 and BRCA2 are two key proteins of HR. I have showed that inhibiting HR, as well as over expressing Rad51, is lethal in human cells, although a very few cells still survive the inhibition. Moreover, many cancers carry mutations in an HR gene (BRCA1/2 in breast and ovary cancers) or over express an HR gene. My project aims to identify the mechanisms and the causes behind the lethality triggered by a dysregulation of HR, and to understand how a few cells manage to survive it. I have determined, through FACS and phosphorylated histone H3 labeling (IF), that HR deficient human cells, or those over expressing Rad51, accumulate at the G2/M checkpoint.At the same time, time-lapse microscopy experiments seemed to indicate that the cells died from apoptosis, which was confirmed by data from experiments using Annexin-V as an apoptosis marker and from Western-Blots. Western-Blots showed that the G2/M checkpoint is activated, through analysis of CyclinB1 and of cdk1, and that apoptosis is triggered, through analysis of PARP cleavage. My main working hypothesis was that overexpressing a dominant negative form of Rad51, and possibly also overexpressing Rad51 WT, would lead to replication defects, whose accumulation would in turn lead to an activation of the checkpoint. BrdU incorporation experients and use of the molecular combing technique confirmed this hypothesis : in HR-dysregulated cells, replication speed is slowed down and there are more stalled forks. In-silico analyses have showed that HR-mutated cancers often carry a second mutation in another gene, involved in either the G2/M checkpoint or in restarting stalled replication forks. Based on these analyses and on results from RNAseq experiments performed on FANCD1 patients' fibroblasts, candidate genes have already been listed, confirming the in-silico analysis

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Logette, Emmanuelle. "Etude de la régulation transcriptionnelle du gène de la Caspase-2 : un nouveau rôle dans le métabolisme lipidique." Dijon, 2005. http://www.theses.fr/2005DIJOMU07.

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L'apoptose est un processus physiologique nécessaire au bon développement embryonnaire et à l'homéostasie cellulaire chez l'adulte. Un dérèglement de l'apoptose peut entraîner l'apparition de cancers. Les caspases sont les enzymes clefs du déclenchement de cette mort cellulaire. Le contrôle de l'apoptose impose donc un contrôle permanent de l'activité de ces enzymes. De nombreuses études sur l'apoptose concernent la régulation des caspases à différents niveaux mais très peu de travaux concernent la régulation transcriptionnelle de ces protéines. Dans ce travail, nous nous sommes intéressés à la régulation transcriptionnelle du gène de la caspase-2 humaine. Nous montrons que ce gène est régulé par des protéines impliquées dans le métabolisme lipidique et que la caspase-2 possède une nouvelle fonction dans ce processus biologique, mais dont la position exacte n'est pas encore identifiée. Nous avons également envisagé d'utiliser les statines dans une nouvelle stratégie anticancéreuse.

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Rialland, Pascale. "Mécanismes moléculaires de régulation de la durée de vie des cellules dentritiques spléniques murines." Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05T010.

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Abstract:

La durée de vie des cellules dendritiques (CDs) contrôle l'amplitude des réponses immunitaires et la tolérance mais les mécanismes moléculaires précis régulant leur survie in vivo sont méconnus. Les cellules Bid-/- résistent à l'apoptose induite par différentes voies cytotoxiques. J'ai montré que la cross-présentation des antigènes aux lymphocytes T est accrue dans des souris Bid-/- en absence de signaux de maturation. Nous n'avons pas pu confirmer l'hypothèse selon laquelle cette augmentation de cross-présentation serait due à un défaut d'élimination des CDs immatures par les LTs. J'ai montré que l'injection de poly(I:C) induit in vivo l'apoptose des CDs conventionnelles spléniques murines, apoptose reposant en partie sur le récepteur cytosolique MDA-5. En réponse au poly(I:C), les CDs CD8α+ produisent des interférons de type I qui contrôlent leur durée de vie. J'ai ainsi mis en évidence une nouvelle voie d'apoptose des CDs par les ARNdb et un nouveau rôle immunorégulateur des IFN-I
Regulation of dendritic cell (DC) lifespan contributes to the maintenance of tolerance and to the regulation of immune responses amplitude. However, the molecular mechanisms involved in this control are not fully elucidated. Bid-/- cells are resistant to apoptosis induced by different cytotoxic pathways. I show that antigen cross-presentation to T lymphocytes is improved in Bid-/- mice in absence of inflammatory signals. We postulated that this increased cross- presentation could be due to a defect of immature DC elimination by T lymphocytes, hypothesis we couldn't confirm. We also show that poly(LC) injection induces splenic conventional DC apoptosis in vivo. Apoptosis relies partially on recognition of poly(I:C) by the cytosolic receptor MDA-5. CD8α+ DCs respond to poly(I:C) by producing type I interferons, that control their lifespan. Our results highlight a new pro-apoptotic pathway in DCs induced by poly(I:C) and identify a new feedback regulatory role for the type I IFN response

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Filomenko, Rodolphe. "Régulation de la mort cellulaire induite par des agents cytotoxiques : rôles de la PKC zeta et de la caspase-10." Dijon, 2004. http://www.theses.fr/2004DIJOMU11.

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Le travail réalisé au cours de cette thèse souligne que présente la protéine Kinase Czêta et la caspase-10 dans l'élaboration de nouvelles stratégies de chimiosensibilisation. Il est possible d'induire la mort par apoptose (processus physiologique nécessaire au bon fonctionnement de l'organisme) par des agents cytotoxiques dans le but d'éliminer les cellules tumorales, qui sont capables de mettre en place des mécanismes de résistance très complexes. J'ai montré que des cellules exprimant une PKC zêta non fonctionnelle sont plus sensibles à la mort cellulaire induite par l'étoposide et par le TNF alpha. L'expression de cette protéine mutée inhibe l'activation du facteur de transcription NF-kB contrôlant la traduction de protéines impliquées dans la prolifération et la survie cellulaire. Des tumeurs induites chez la souris nude, par des cellules exprimant la protéine non fonctionnelle, ont une croissance tumorale ralentie et sont plus sensibles à l'apoptose que les tumeurs établies par les cellules contrôles suite à un traitement par l'étoposide ou par le TNF alpha. J'ai également établi que la caspase-10 est essentielle à l'apoptose induite par l'étoposide d'une manière indépendante au récepteur de mort Fas. Des cellules exprimant une forme déficiente de cette caspase, sont plus résistantes à l'apoptose chimio-induite. C'est la première fois que cette caspase est impliquée de façon post-mitochondriale, puisqu'elle n'influe pas sur le niveau de la dépolarisation mitochondriale et sur la libération du cytochrome c, et qu'elle module l'activation d'autres caspases dans ces voies de mort.

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Haddad, Mohamed. "Isolement, détermination structurale de saponosides de quatre plantes de la famille des mimosaceae, ploygalaceae et caryophyllaceae et leur évaluation biologique dans les domaines de l'immunologie et la cancérologie." Dijon, 2004. http://www.theses.fr/2004DIJOPE03.

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Abstract:

Les saponosides sont des glycosides triterpéniques ou stéroi͏̈diques réputés pour leurs propriétés biologiques et pharmacologiques, notamment des activités immunomodulatrices, antiinflammatoires ou hypocholestérolémiantes. L'étude de quatr espèces végétales a conduit à l'isolement et à la caractérisation de 21 saponosides triterpéniques, 2 oligosaccharides et 5 couples de saponosides isomères acylés par des acides méthoxycinnamiques, parmi lesquels 17 sont de nouveaux composés naturels. Les structures ont été élucidées par l'utilisation de méthodes spectroscopiques. Deux saponosides ont montré une activité pro-apoptotique sur cellules Jurkat. La plupart des saponosides testés ont montré une activité immunomodulatrice sélective sur splénocytes et sur cellules Jurkat. L'importance du groupement monoterpène-quinovosyle dans l'induction de l'apoptose de cellules Jurkat et l'importance des groupements N-acétamido et méthoxycinnamoyle pour la cytotoxicité des saponosides a été mise en évidence.

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Prunet, Céline. "Activités cytotoxiques, oxydatives et pro-inflammatoires de différents oxystérols présents dans la plaque d'athérome." Dijon, 2005. http://www.theses.fr/2005DIJOMU13.

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Abstract:

Notre travail montre que la mort cellulaire induite par le 7-cétocholestérol et par le 7β-hydroxycholestérol (dérivés oxydés du cholestérol appelés oxystérols) est un processus complexe associant un phénotype apoptotique et un type de mort alternatif indépendant des caspases. L'induction d'un stress oxydatif participe à cette cytotoxicité. Dans des cellules musculaires lisses, Nox-4 (une isoforme de la NADPH oxydase) initie une voie de signalisation apoptotique impliquant le réticulum endoplasmique. L'estérification des oxystérols par l'acide oléique abolit leurs propriétés cytotoxiques et oxydantes. Par ailleurs, certains oxystérols induisent la sécrétion des cytokines IL-8, MIP-1β, MCP-1 et TNF-alpha. In vivo, les taux circulants de CRP, de TNF-alpha et d'IL-10 sont augmentés chez des patients porteurs d'une artériopathie des membres inférieurs de stade I. Ainsi, nos résultats soulignent la participation des oxystérols dans l'athérogénèse ou dans ses complications athérothrombotiques.

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Frisan, Emilie. "Etude de la différenciation érythroïde des syndromes myélodysplasiques de faible risque : rôle des protéines GATA-1 et Hsp70." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05T007.

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Abstract:

L'engagement des progéniteurs hématopoïétiques normaux vers la lignée érythroïde est contrôlé par le stem cell factor (SCF) et) l'érythropoïétine (Epo) alors que la différenciation érythroïde terminale dépend de l'Epo. La dysérythropoïèse des syndromes! myélodysplasiques (SMP), maladies clonales de la cellule souche hématopoïétique, associe un défaut de différenciation des| progéniteurs et un excès d'apoptose des précurseurs. Ce travail montre : (1) l'implication du réticulum endoplasmique dans l'apoptose en aval du récepteur à domaine de mort Pas, (2) le défaut d'activation des MAPK par le récepteur de l'Epo chez les patients résistants au traitement par l'Epo, et (3) le clivage du facteur de transcription érythroïde GATA-1 par la caspase-3 par défaut de localisation nucléaire de la protéine chaperon Hsp70. L'export nucléaire d'Hsp70 dépend de sa phosphorylation en réponse au| SCF et serait augmenté par une expression ectopique du récepteur au SCF dans les érythroblastes matures de SMD
Normal hematopoietic progenitors commitment into erythroid lineage is controlled by stem cell factor (SCF) and erythropoietin (Epo) while erythroid terminal differentiation is only Epo-dependent. DyserythropoYesis of myelodysplastic syndromes (MDS) which clonal disorders of the hematopoietic stem cell, combines a defective differentiation of the progenitors and an increased apoptosis of the precursors. This work shows (1) the implication of endoplasmic reticulum in MDS apoptosis downstream of death domain) receptor Fas, (2) defective Epo-dependent activation of the MAPK in patients resistant to Epo treatment, and (3) a caspase-3-mediated Cleavage of the erythroid transcription factor GATA-1 due to a defective nuclear localization of the chaperone protein Hsp70 in MDS. Nuclear export of HspVO is regulated by AKT phosphorylation in response to SCF and would be increased by an ectopic expression) of SCF receptor in MDS mature erythroblasts

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Ameqrane, Ilhame. "Dégénérescence rétinienne chez la souris rd10 Implication de SIRT 1 et PGC-1 alpha ?" Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T041.

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Abstract:

Les rétinopathies pigmentaires constituent un groupe d’affections rétiniennes héréditaires touchant 1/4000ème de la population dans les pays occidentaux et présentant une dégénérescence progressive des photorécepteurs conduisant, à plus ou moins longue échéance, à la cécité. Malgré les nombreux travaux portant sur ces pathologies, il n’existe à ce jour aucun traitement efficace pour prévenir la perte des photorécepteurs. Il est donc nécessaire de mieux connaître les voies de signalisations impliquées dans l’évolution des dégénérescences rétiniennes. Parmi les modèles d’étude de ces pathologies, nous avons choisi de travailler avec la souris rd10 qui présente un avantage certain car la dégénérescence rétinienne débute au stade post natal 18 jours, soit après la mise en place des différentes couches rétinienne. SIRT 1 est une protéine déacétylase étudiée notamment dans le cadre du fonctionnement cérébral basal et des dégénérescences affectant le système nerveux central. Cette protéine joue un rôle essentiel dans la survie cellulaire, l’homéostasie énergétique et la réparation de l’ADN. Une de ces cibles est la protéine PGC-1 alpha, qui a surtout été étudiée pour son rôle dans le métabolisme cellulaire et mitochondrial. Des études récentes ont montré que la désacétylation de PGC-1 alpha par SIRT 1 permettait de réduire la mort neuronale inhérente à des pathologies telles la maladie d’Alzheimer et de Huntington. La rétine est un tissu nerveux appartenant au système nerveux central. Nous nous sommes donc intéressés à l’implication possible de SIRT 1 et de PGC-1 alpha lors d’une dégénérescence rétinienne, notamment la rétinopathie pigmentaire. Cependant, aucune étude de ces protéines n’a été menée dans la rétine, normale ou dégénérative. Dans un premier temps, nos travaux ont porté sur la caractérisation de SIRT 1 et PGC-1 alpha dans la rétine de souris normale. Chez la souris rd10, nous avons montré une altération de l’expression de SIRT 1 au cours de la dégénérescence. Celle-ci est corrélée à l’apoptose des photorécepteurs. Enfin, l’étude de PGC-1 alpha dans la rétine de souris rd10 a montré une diminution de son acétylation dès les stades précoces de la dégénérescence rétinienne, supposant que l’activation de la protéine est augmentée pendant le processus dégénératif. La désacétylation de PGC-1 alpha étant effectuée par SIRT 1, ce résultat suggère que la régulation de la voie SIRT 1/ PGC-1 alpha pourrait être importante au cours des dégénérescences rétiniennes. Cette étude est la première à caractériser SIRT 1 et PGC-1 alpha dans les différentes couches rétiniennes de même que la première à mettre en évidence l’implication probable de ces protéines au cours de la dégénérescence rétinienne
Retinopathies are characterized by a progressive degeneration of photoreceptors, leading to blindness. Until now, there are no treatments to prevent the loss of photoreceptors, that’s why it’s important to study the mechanisms involved in the degenerative processes. Rd10 mouse is a good model for retinopathy because the first steps of degeneration occur after the development of the different retinal layers. SIRT 1 is a desacetylase protein involved in DNA repair and in survival cell. PGC-1 alpha is a target of SIRT1, has particularly been studied for its roles in mitochondrial metabolism. PGC-1 alpha desacetylation by SIRT1 has been shown to reduce neuronal death in several neurodegenerative diseases. Retina is part of the central neuronal system, that’s why we studied the involvement of SIRT1 and POGC-1 alpha in a model in retinitis pigmentosa. First, we characterized SIRT1 and PGC-1 alpha expression in normal mouse retina. In rd10 retina, we observed an alteration of SIRT1 expression correlated with photoreceptor apoptosis. Then, we showed a decrease in PGC-1 alpha acetylation since early stages of degeneration, supposing that the activation of the protein increases during the degenerative process. PGC-1 alpha is known to be desacetylated only by SIRT1 which suggest that SIRT1/PGC-1 alpha axis could be important in the development of retinal degeneration. This study is the first to characterize SIRT1 and PGC-1 alpha in retina and to highlight their potential involvement during retinal degeneration

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Chauvier, David. "Camptothécine versus homocamptothécine : approche moleculaire et cellulaire. Induction de l'apoptose et modulation de la résistance multiple." Reims, 2001. http://www.theses.fr/2001REIMP206.

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La spectrofluorimètrie a permis de suivre l'hydrolyse de l'homocamptothécine (hCPT), en absence et présence de topoisomérase I (top1) et/ou ADN. La stabilisation du complexe de clivage par hCPT impliquerait un système de complémentarité stérique de son cycle E avec un site du complexe ADN-top1, plutôt qu'une réaction d'ouverture du cycle E comme pour les camptothécines (CPTs). HCPT/CPT ont été détectées dans le cytoplasme des cellules MCF7 et HT29 par microspectrofluorimètrie confocale laser en excitation bi-photonique. L'induction de l'apoptose par hCPT dans les cellules HT29 implique la dissipation du Djm, acidification du cytosol, production d'espèces réactives de l'oxygène, libération du cytochrome C, activation de la caspase-3, régulation transcriptionelle, une production de novo de céramide. Enfin, hCPT/CPT sont des substrats de MRP1 mais pas de Pgp. Utilisées à des concentrations sub-toxiques en association avec la daunorubicine (DNR), hCPT/CPT potentialisent la cytotoxicité de la DNR en inhibant l'activité d'efflux de MRP1, restaurant l'accumulation nucléaire de DNR dans des lignées K562 et MCF7 résistantes aux anthracyclines
Homocamptothecin (hCPT), a topoisomerase I (top1) inhibitor, combines higher cytotoxicity and lactone stability in aqueous buffer than camptothecin (hCPT). Spectrofluorometry has allowed the real-time investigation of its hydrolysis kinetic in absence and presence of top1 and/or ADN. The stabilisation of the cleavable complex by hCPT implies steric contacts of the b-hydroxylactone ring with the DNA-top1 complex, rather than opening of the lactone ring, as observed for CPTs. HCPT/CPT have been detected in the cytoplasm of MCF7 and HT29 cancer cells by 2-photon laser confocal microspectrofluorometry,. The induction of apoptosis by hCPT is mediated in HT29 cells by DYm disruption, cytosolic acidification, reactive oxygen species, cytochrome C release, caspase-3 activation, gene expression, de novo synthesis of ceramide. HCPT/CPT have been identified to be substrates of MRP1 but not Pgp proteins. Sub-toxic doses of hCPT/CPT potentiated daunorubicin (DNR) cytotoxicity by inhibition of MRP1 activity, in correlation with increase of the nuclear accumulation of DNR in anthracyclins-resistant K562 and MCF7 cells

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Oulès, Bénédicte. "Impact physiologique du transfert de calcium entre le réticulum endoplasmique (RE) et la mitochondrie : rôle de l'isoforme SERCAI tronquée (S1T) dans le stress du RE et la maladie d'Alzheimer." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2009PA05T063.

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Abstract:

Le transfret de calcium (Ca2+) entre le réticulum endoplasmique (RE) et la mitochondrie est médié par des sites de contact dynamiques. Nous avons montré que l'isoforme tronquée de la SERCA1 (S1T) ignitie et amplifie la voie pro-apoptotique du stress du RE. De plus, elle détermine une fuite localisée du Ca2+ au niveau des sites de contacts RE-mitochondrie induisant l'apoptose. Nous avons également montré que S1T est surexprimée dans la maladie d'Alzheimer. Parallèlement, l'Aβ s'accumule au niveau des sites de contact RE-mitochondrie. Par ailleurs, l'analyse de la signalisation calcique subcellulaire nous a permis de démontrer une dérégulation majeure de celle-ci. Enfin, nous avons révélé que le Ca2+ contrôle les processus bioénergétiques altérés dans la maladie de Leigh due au déficit du complexe II de la chaîne respiratoire mitochondriale. Nos résultats ont mis en évidence l'impact du transfert du Ca2+ entre le RE et la mitochondrie dans les pathologies du RE et de la mitochondrie
Calcium (Ca2+) transfer between endoplasmic reticulum (ER) and mitochondria is mediated through dynamic contacts sites. We showed that the truncated isoform of SERCA1 (S1T) initiates and simplifies the proapoptotic pathway of the ER stress signaling. In addition, owing to its localization at the ER-mitochondria contacts sites, it determines a localized ER Ca2+ leak towards the mitochondria leading to mitochondrial apoptosis. We also demonstrated that S1T is overexpressed in Alzheimer's disease. In parallel, Aβ accumulates in ER-mitochondria contact sites. In addition, an extensive analysis of subcellular Ca2+ signaling allowed us to demonstrate its drastic deregulation. Lastly, we have revealed that Ca2+ control bioenergetics pathways in Leigh's disease related to mitochondrial respiratory chain complex II deficiency. Our results showed the impact of Ca2+ transfer from ER to mitochondria-related pathologies

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Carocci, Margot. "Sur la route d'un virus recombinant EMCV-FMDV." Paris 7, 2011. http://www.theses.fr/2011PA077186.

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Abstract:

La Fièvre Aphteuse est une maladie animale très contagieuse à fortes répercussions économiques. L'agent responsable, FMDV, un picornavirus, se réplique et dissémine rapidement. Ce projet de thèse consiste à produire un virus recombinant chimère EMCV-FMDV utilisable comme vaccin vivant atténué marqueur contre FMD. Son génome sera constitué de régions codant les protéines non structurales du virus de l’encéphalomyocardite (EMCV), celles qui codent les protéines de capside seront issues du FMDV. Dans le but d'atténuer la virulence de l'EMCV, une délétion dans la protéine 2A a été introduite. L'étude du virus délété, EMCV1. 26Δ2A, a permis de montrer qu'il entraine la mort des cellules par apoptose contrairement au virus sauvage, suggérant que la protéine 2A de l'EMCV est nécessaire à l'inhibition de l'apoptose. De plus, nous avons pu montrer que le virus EMCV1. 26Δ2A était fortement atténué in vitro et in vivo, et qu'il protège efficacement des souris contre une dose létale du virus sauvage. Nos résultats indiquent que ce virus est un bon candidat comme vaccin vivant atténué contre l'EMCV et une base sûre pour la conception du virus chimère EMCV-FMDV. La production de ce virus recombinant chimère a nécessité plusieurs étapes de clonage qui ont permis d'obtenir un plasmide contenant un ADNc génomique EMC V1. 26 A2 A-PI FMDV (pMCl). Après transfection de pMCl, la production d'antigènes de capside FMDV a pu être détectée mais ces premiers essaies n'ont pas permis d'obtenir de virus infectieux. La formation de particules virales recombinantes ou les éventuelles étapes limitantes du cycle viral restent à déterminer mais les résultats obtenus jusque là sont encourageants et prometteurs
Foot and Mouth Disease is a highly contagious animal disease with important economic impacts. The causative agent, FMDV, a picornavirus, replicates and spreads extremely rapidly. The recent outbreaks in countries previously FMD-free demonstrated the need to develop control strategies to stop or at least slow the spread of the virus. The aim of this project is to develop a safe recombinant virus that would be made of FMDV capsid proteins, and the non structural proteins of the Encephalomyocarditis virus (EMCV). This recombinant virus will serve as a marker vaccine against FMD. In order to attenuate EMCV virulence, a deletion in the 2A protein was introduced. Study of EMCV1. 26 Δ 2A virus showed that it causes cell death by apoptosis in contrast to the wild type, suggesting that the EMCV 2A protein is necessary to inhibit apoptosis. Moreover, we have shown that EMCV1. 26 Δ 2A virus was strongly attenuated in vitro as in vivo, and efficiently protected mice after challenge with a lethal dose of wild type virus. Our results indicate that this virus is a good candidate for a live attenuated vaccine against EMCV and a safe base for the production of the EMCV-FMDV chimera virus. The production of this recombinant chimera virus required several cloning steps, leading to the construction of the EMC VA2 Δ -PI FMDV genomic cDNA (pMCl). The first attempts to produce recombinant virus EMC V Δ 2A-P1 FMDV allowed detection of FMDV capsid antigens, but did not succeed yet to produce infections recombinant virus. The formation of recombinant viral particles or the eventual limiting steps of the viral cycle remain to be determined. However, the results obtained up to now are heartening and promising

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Awad, Ali. "Les cellules Natural Killer (NK) dans l’allergie : effet de la chimiokine CCL18 sur les cellules NK humaines et rôle des cellules NK sur les éosinophiles." Thesis, Lille 2, 2014. http://www.theses.fr/2014LIL2S002/document.

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Abstract:

Les maladies allergiques sont en constante augmentation tant en prévalence qu’en gravité. Les éosinophiles sont fortement impliqués dans le dommage et le dysfonctionnement tissulaire et participent à l’entretien de l’inflammation allergique. Différentes cellules de l’immunité innée sont impliquées dans le contrôle de la réaction allergique. Parmi elles, les cellules NK, connues essentiellement pour leurs fonctions anti-tumorales et anti-microbiennes, pourraient réguler différents aspects de la réaction. Dans le sang périphérique de patients asthmatiques, les cellules NK présentent des capacités cytotoxiques accrues, ainsi qu’une prédominance de cellules NK2 comparativement à la prédominance de cellules NK1 chez les sujets non allergiques. Chez des patients atteints de dermatite atopique, le nombre et la cytotoxicité des cellules NK périphériques sont diminués, ainsi que leur capacité à produire de l’IFN-g. De plus, le dialogue entre les cellules NK et les cellules dendritiques est moins efficace chez le sujet asthmatique, menant ainsi à une capacité réduite de production d’IFN-g par les cellules NK. Dans des modèles murins d’inflammation pulmonaire, la déplétion en cellules NK par l’anti-NK1.1 ou l’anti-ASGM1 avant l’immunisation inhibe l’éosinophilie pulmonaire, l’infiltrat des LT CD3+ et l’augmentation des taux d’IL-4, IL-5 et IL-12 dans le LBA. Néanmoins, la déplétion avec l’anti-ASGM1 après l’établissement de l’inflammation éosinophilique retarde sa résolution, suggérant un rôle double des cellules NK dans l’inflammation allergique. Le recrutement et la fonction des cellules NK humaines dans l’allergie par le biais de l’analyse in vitro du rôle de CCL18 sur les cellules NK a été analysé. Cette chimiokine est préférentiellement produite au niveau du poumon et possède une double fonction dans la pathologie allergique puisqu’elle recrute les LTh2, mais également les LT reg et génère des DCs tolérogènes capables d’induire des LT reg, uniquement chez des donneurs non allergiques. Nous avons évalué la réponse des cellules NK de sujets allergiques vis-à-vis de CCL18 et l’avons comparée à celle de cellules NK provenant de sujets non allergiques. Nos travaux ont montré que CCL18 attire in vitro les cellules NK de sujets non allergiques et induit leur cytotoxicité, de façon dépendante des protéines G. Par contre, les cellules NK de sujets allergiques ne répondent pas au CCL18. La deuxième partie du travail s’est basée sur l’hypothèse d’un dialogue entre les cellules NK et les éosinophiles qui modifierait leurs fonctions respectives. Des cellules NK et des éosinophiles autologues ont été cocultivés pendant 3 et 12h, à différents ratios. Nous avons montré que les cellules NK activent directement les éosinophiles comme en témoignent l’augmentation de la libération de l’ECP, l’EDN, et de l’expression du CD63, du CD69 et la diminution de l’expression du CD62L sur les éosinophiles. De plus, les cellules NK induisent l’apoptose et la mortalité des éosinophiles dès la première heure de coculture. Cependant l’apoptose et la mortalité des cellules NK ne sont pas modifiées. La fixation des cellules NK empêche presque totalement l’activation et l’apoptose des éosinophiles, suggérant l’implication de molécules de surface et peut être de facteurs solubles. Les interactions entre molécules de surface restent à déterminer, et l’IFN-g et le TGF-β ne sont pas impliqués. Cependant, les voies de signalisation p38MAPkinase, ERK, JNK et PI3kinase interviennent dans l’activation des éosinophiles. La voie mitochondriale et ROS sont impliquées dans l’apoptose des éosinophiles induite par les cellules NK.En résumé, ces travaux ont permis de montrer que les cellules NK de sujets allergiques présentent un dysfonctionnement dans la réponse vis-à-vis de CCL18 comparativement aux sujets non-allergiques. De plus, nos résultats suggèrent que les cellules NK pourraient réguler l’inflammation à éosinophiles en induisant leur activation et/ou leur apoptose
Allergic diseases are steadily increasing both in prevalence and severity. Known physiopathological mechanisms involve the induction of a Th2 response by dendritic cells, leading to IgE production and inflammation, in particular linked to the recruitment of eosinophils. Eosinophils are heavily involved in injury and tissue dysfunction and contribute to the maintenance of inflammation. Different cells of innate immunity were shown to be involved in the control of allergic reaction. Among them, (NK) cells, primarily known for their anti-tumor and anti-microbial functions, may regulate different aspects of allergic reaction as suggested by studies in humans or mice. In the peripheral blood of patients with asthma, NK cells exhibit increased cytotoxic capacity, and a predominance of NK2 cells compared to the prevalence of NK1 cells in non-allergic subjects. In patients with atopic dermatitis, the number and cytotoxicity of peripheral NK cells are reduced, as well as their ability to produce IFN-g. Moreover, the dialogue between NK cells and dendritic cells is less effective in asthmatic patients, leading to a reduced capacity of IFN-g production by NK cells. In murine models of pulmonary inflammation, depletion of NK cells by anti-NK1.1 or anti-ASGM1 before immunization inhibits pulmonary eosinophilia, the infiltration of CD3+ T cells and increased levels of IL-4, IL-5 and IL-12 in the bronchoalveolar lavage. However, depletion with anti-ASGM1 after the establishment of eosinophilic inflammation delays its resolution, suggesting a dual role of NK cells in allergic inflammation.We studied the recruitment and function of human NK cells in allergy through in vitro analysis of the role of CCL18 on NK cells. This chemokine is preferentially produced in the lungs and has a dual role in allergic diseases since it recruits Th2 cells but also regulatory T cells and generates tolerogenic DCs capable of inducing regulatory T cells only from non-allergic donors. We evaluated the response of NK cells in allergic subjects towards CCL18 and compared it to that of NK cells from non-allergic donors. We showed that CCL18 attracts NK cells from non-allergic subjects and induces their cytotoxicity in a G protein dependent pathway. However, NK cells from allergic subjects did not respond to CCL18. This chemokine has no effect on the proliferation of NK cells, but may negatively regulate IFN-g production.The second part of the thesis is based on the hypothesis of a dialogue between NK cells and eosinophils which would modify their respective functions. NK cells and autologous eosinophils were cocultured during 3 and 12 hours, at different ratios. We showed that NK cells directly activate eosinophils as evidenced by the increased release of ECP, eosinophil derived neurotoxin EDN, and the expression of CD63, CD69, and reduced expression of CD62L on living eosinophils. In addition, coculture with NK cells induced apoptosis and mortality of eosinophils in the first hours of coculture. However, apoptosis and death of NK cells were not changed. Fixation of NK cells prevented almost completely the activation and apoptosis of eosinophils, suggesting the involvement of surface molecules, however soluble factors cannot be excluded. These interactions require cell contact, but the molecules involved remain to be determined. Concerning soluble factors, IFN-g and TGF-β are not involved in these mechanisms. However, the signaling pathways p38MAPkinase, ERK, JNK and PI3-kinase are involved in eosinophils activation. Concerning eosinophil apoptosis induced by NK cells, the mitochondrial pathway is more involved than the caspase pathway.In summary, our studies show that NK cells from allergic patients exhibit a defect in their response towards CCL18 compared to non-allergic subjects. In addition, these results suggest that NK cells may regulate eosinophilic inflammation by inducing their activation and / or apoptosis

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Minatchy-Noléo, Marie-Nathalie. "Rôle des caspases dans l'apoptose induite par les médicaments anticancereux et dans la différenciation des cellules erythroleucémiques de Friend." Paris 5, 2005. http://www.theses.fr/2005PA05S002.

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Abstract:

Les caspases sont des protéases a cystéines qui participent à des évènements conduisant à la mort cellulaire. Elle sont aussi impliquées dans des phénomènes de différenciation cellulaire. Mes travaux consistent a mettre en évidence le rôle des caspases au cours de ces deux phénomènes. La première partie de mon travail a permis d'identifier deux types de mort cellulaire différentes. Une induite par l'Ara-c et le VP-16 qui correspond a l'apoptose classique avec clivage et activation des caspases, clivage de la PARP, fragmentation apoptique de l'ADN, et qui est retardée par le gène anti-apoptique Bcl-2. L'autre induite par la daunorubicine qui a été définie comme nécrotique et qui ne montre pas d'activité enzymatique caspase. La deuxième partie de mon travail montre que lors de la différenciation érythroïde des cellules de Friend induite par le DMSO, la caspase-3 n'est ni clivée ni activée
Caspases are cystein proteases, which are known to be involved in the events inducing cell differentiation and cell death. My work consists in the analysis of the role of caspase during differentiation and cell death by drugs of the erythroleukemic Friend cell line. The first part of this work shows that, when treated with Ara-c or VP-16, these cells undergo the classical apoptoss, which is caspase-dependent, and which ise delayed bt the anti-apoptic gene bcl-2. However when treated by daunorubicine, cells die by a non-dependent caspase necrosis. In the second part of my work, we show that caspases are not implicated during the the erythroleukemic differentiation of Friend cells by DMSO

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Essayagh, Sanah. "Interactions entre endothélium vasculaire et microparticules d'apoptose ou d'activation cellulaire : étude des conséquences fonctionnelles et des mécanismes impliqués." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077173.

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Abstract:

Les microparticules (MPs) sont des fragments membranaires émis par les cellules activées ou apoptotiques, dont le rôle dans les communications inter-cellulaires est reconnu. Au cours des pathologies vasculaires, et spécialement dans les situations de thrombose ou les états pro-thrombotiques, le nombre de MPs augmente dans le sang. Leur origine cellulaire varie selon le contexte pathologique et les MPs ne sont pas seulement des marqueurs de l'activation ou de la souffrance cellulaire, mais sont également des acteurs physiopathologiques. Nous nous sommes intéressés à leurs effets sur les fonctions endothéliales et, parmi celles-ci : activité pro-coagulante membranaire, libération de facteur Willebrand et expression de molécule d'adhésion, adhésion plaquettaire et leucocytaire, formation d'un thrombus en système en flux. Nous avons mis en évidence le rôle des radicaux oxygénés (ROS) comme médiateurs de certains effets des MPs de monocytes. L'étude de l'effet des MPs sur la production de ROS et les signaux cellulaires en aval ont permis de montrer que l'inhibition de cette voie métabolique réduit signifïcativement le développement d'un phénotype endothélial prothrombotique en partie sous le contrôle de la voie p38/MAPK. Un résultat original de ce travail est le recrutement ROS-dépendant des plaquettes à Pendothélium activé par les MPs de monocytes. Nous avons aussi montré que les MPs issues de cellules musculaires lisses induisaient une dysfonction endothéliale en modifiant la biodisponibilité du NO. Enfin, nous avons comparé l'effet de MPs de monocytes, plaquettes et cellules musculaires lisses sur l'expression de protéines membranaires et la génération de RQS
Microparticles (MPs) are small membrane vesicles shed by ectocytosis from activated or apoptotic cells. Their involevement in trans-cellular communication is now established. During vasculopathies, especially thrombotic events, their number increases in the systemic circulation and their cellular origin depends on pathology. MPs are physiopathological mediators and may change the endothelial phenotype. We investigated the effects of MPs interaction on prothrombotic activity, Weibel-Palade bodies secretion, cell adhesion molecules expression and blood cell recruitment. We show that reactive oxygen species (ROS) are second messengers for monocyte derived MP (M-MPs) effects. M-MPs induced ROS induce transient platelet recruitement at the endothelial surface and TF-dependant activity via the p38/MAPK pathway. MPs derived from apoptotic smooth muscle cells induce endothelial dysfunction by reducing NO bioavailibility. This effect also involve ROS generation and is dependant on the adhesion of microparticles to the endothelial cells mediated by beta-3 integrin. Besides, we compared endothelial effects of MPs derived from monocytes, platelets and smooth muscle cells on cell adhesion molecule expression and ROS generation

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Gibault, Laure. "Altérations génomiques récurrentes des sarcomes de l'adulte à génomique complexe : perte d'expression de PTEN et DKK1, mécanismes et implications biologiques." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05T011.

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Abstract:

Les sarcomes de l'adulte à génomique complexe (SAGC) sont des tumeurs mésenchymateuses rares caractérisées par de nombreux remaniements chromosomiques. Ces tumeurs comprennent notamment les léiomyosarcomes, les myxofibrosarcomes, les rhabdomyosarcomes et liposarcomes pléiomorphes, les sarcomes indifférenciés. L'analyse des données d'Hybridation Génomique Comparative et de transcriptome sur une série de 167 SAGC met en évidence de fréquentes délétions des chromosomes Iq, 2q, 13, I0q, du 16q, des gains des chromosomes 5p et 17p. 46% des tumeurs présentent une perte d'une ou deux copies de PTEN, avec de rares mutations mais une perte d'expression protéique dans 68% des cas. Il existe une fréquente activation des voies de signalisation AKT et mTOR d'aval. L'expression du gène DKK1, inhibiteur de la voie WNT canonique, est réprimée dans les LMS et une partie des sarcomes indifférenciés. La voie WNT est cependant très rarement activée, suggérant un autre rôle potentiel de DKK1
Adult soft tissue sarcomas with complex genomics (SCG) are rare tumors of mesenchymal lineage characterized by very complex naryotypes and genomic profiles, encompassing leiomyosarcomas, myxofibrosarcomas, pleiomorphic liposarcomas/rhabdomyosarcomas and undifferentiated pleiomorphic sarcomas. Array-Comparative Genomic Hybridation and transcriptome analysis evidenced frequent losses of chromosomes Iq, 2q, 13, IQq, du 16q, and 5p and 17p gains. Loss of 1 or 2 PTEN alleles was observed in 46% SGC, with rare mutations but loss of protein expression in 68% tumors. Frequent activation of AKT and subsequent mTOR pathway was observed. DKK1, inhibitor of the WNT canonical pathway, is not expressed in LMS and part of SCG. However, WNT canonical pathway was rarely activated, suggesting other potential roles for DKK1

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Rigaud, Stéphanie. "Identification et caractérisation d'un nouveau syndrome lymphoprolifératif lié à l'X causé par des mutations dans le gènes BIRC4 codant la molécule anti-apoptopique XIAP." Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05T041.

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Abstract:

L'homéostasie des lymphocytes au cours de la réponse immunitaire est un mécanisme soumis à une régulation très fine. Chez l'homme, des défauts d'homéostasie lymphocytaire conduisent à de nombreuses maladies. Le syndrome de Purtilo ou syndrome lymphoprolifératif lié à l'X (XLP) est une immunodéfïcience primaire rare caractérisée par une sensibilité accrue des patients à l'infection par le virus Epstein-Barr. La majorité des patients souffrent d'une mononucléose infectieuse sévère associée à un syndrome d'hémophagocytose. Le gène responsable de 80% des formes de XLP a été identifié en 1998, il s'agit du gène SH2D1A qui code pour SAP, une protéine adaptatrice de signalisation. Mon travail de thèse a consisté à étudier les formes de XLP sans mutation de SAP. Les résultats obtenus au cours de cette étude ont permis d'identifier le gène BIRC4 codant pour XIAP, et d'analyser et de caractériser les défauts moléculaires, cellulaires et fonctionnels associés à des mutations dans ce gène
The homeostasis of the immune response requires tight regulation of the proliferation and apoptosis of activated lymphocytes. In humans, defects in immune homeostasis result in lymphoproliferation disorders. The X-linked lymphoproliferative syndrome (XLP) is a rare, inherited immunodeficiency that is characterized by lymphohystiocytosis, hypogammaglobulinaemia and lymphomas, and that usually develops in response to infection with Epstein-Barr virus (EBV). Mutations in the signalling lymphocyte activation molecule (SLAM)-associated protein SAP, a signalling adaptor molecule, underlie 80% of cases of familial XLP. During my PhD, we identify mutations in the gene that encodes the X-linked inhibitor-of-apoptosis XIAP (also termed BIRC4) in patients with XLP from three families without mutations in SAP. By identifying an XLP immunodeficiency caused by mutations in XIAP, we show that XIAP is a potent regulator of lymphocyte homeostasis in vivo

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Fraisse, Ingrid. "Etude de la régulation du gène vrille, impliqué dans la croissance et la prolifération chez Drosophila melanogaster." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077182.

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Abstract:

Le gène vrille (vri) de Drosophila melanogaster a été isolé au laboratoire et est homologue de gènes impliqués dans des processus de croissance, de prolifération et d'apoptose. Il code un facteur de transcription de type bZIP réprimant les gènes Cycle et cryptochrome dans le cycle circadien. L'altération de son homologue humain, E4BP4/NF-IL3, esta l'origine de leucémies. L'expression du gène vri est dynamique au court du développement et l'on ne sait pas à quelles voies de signalisation ce facteur de transcription appartient. Afin de comprendre précisément son rôle dans des phénomènes indispensables au développement tels que la croissance ou l'apoptose nous avons choisi de rechercher des cibles de la protéine VRI ainsi que des régulateurs du gène codant ce facteur. L'approche bioinformatique a permis de mettre en évidence des cibles parmi lesquelles on retrouve vri lui-même. Le facteur de la sous-famille des PAR-bZIP, PDP1, pourrait être un régulateur de vri. PDP1 est un transactivateur de gènes myogéniques et est impliqué dans la régulation de la croissance larvaire. Il joue également un rôle antagoniste à celui de VRI dans le cycle circadien. La réalisation d'outils moléculaires et génétiques nous ont permis de confirmer in vivo ces résultats. Il semble que VRI et PDP1 pourraient agir de concert pour réguler la croissance des tissus pendant le développement embryonnaire et larvaire. D'autre part, aucune étude n'a été réalisée concernant le rôle de PDP1 dans la formation des tissus adultes. Les outils génétiques réalisés au cours de ma thèse, m'ont permis de supposer un rôle de PDP1 dans la différentiation des tissus musculaires et alaires de l'adulte
The Drosoplhila melanogaster vrille (vri) gene solated in the lab is homologuous of genes involved in growth, proliferation or apoptosis. It encoded a bZIP transcription factor repressing the Cycle and cryptochrome key genes of the circadian clock. The alteration of its human homolog, E4BP4/NF-IL3, is responsible of leukaemia The vri gene pattern is dynamic during the development but we don't know in which pathway vri implicated. To understand its role in the very important process during the development like growth or apoptosis, we choose the look for the VRI targets and regulators. By bioinformatics approaches we find that vri could be its own target. The PAR-bZIP factor, PDP1 should be a vri regulator. PDP1 is a transactivator of myogenic gènes et is involved in regulation of larval growth. It play a VRI antagonistic role in the circadian clock. Molecular and genetic tools, allow us to confirm these results in vivo. It seems that VRI and PDP1 may act together to regulate the tissue growth during the embryogenesis and larval development. Furthermore, any studies were made about PDP1 role in adult tissues formation. The genetic tools made during my thesis, let me suppose a role of PDP1 in the muscular and wing differentiation adult tissues

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Prévotat, Laurent. "Apoptose et voie WNT/beta-caténine : induction et régulation par le monoxyde d’azote dans des cellules cancéreuses coliques humaines." Dijon, 2006. http://www.theses.fr/2006DIJOS030.

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Les cancers sont le plus souvent la conséquence d’une perturbation de l’équilibre entre la vie et la mort cellulaire. Ainsi, tout agent cytotoxique capable d’intervenir sur ces processus est potentiellement utilisable dans le traitement des cancers. Nous avons démontré, que le GTN (GlycerylTriNitrate), un donneur endogène de monoxyde d’azote (NO), induit l’apoptose des cellules cancéreuses coliques humaines de manière dépendante des caspases-1 et -10 et les sensibilise à l’apoptose induite par le ligand de Fas. Nous avons également analysé les effets du GTN sur la voie de signalisation Wnt/beta caténine impliquée dans la survenue des cancers colorectaux. J’ai démontré que le GTN diminue très fortement l’activité de cette voie en activant une enzyme sensible aux inhibiteurs de sérine protéases, TPCK et AEBSF. Nous avons ainsi mis en évidence un mécanisme original de régulation de la voie Wnt/ beta caténine qui s’ajoute à ceux impliquant le protéasome, les caspases ou encore les calpaïnes
Deregulation of signaling pathways involved in survival or cell death is the leading cause of cancer. Therefore, any cytotoxic agent able to modulate these pathways is potentially efficient in cancer treatment. We demonstrate that, glyceryltrinitrate (GTN), an endogenous nitric oxide (NO) donor, induces caspase-1 and -10-dependant human colon cancer cells apoptosis. Moreover, GTN sensitizes these cells to Fas ligand induced apoptosis. We also analyze GTN effects on the oncogenic signaling Wnt/ beta catenin pathway which is highly active in colorectal cancer. I demonstrate that GTN induces a strong decrease of this activity mediated by an enzyme sensitive to two serine protease inhibitors, TPCK and AEBSF. Therefore, we describe an original regulatory mechanism of the Wnt/betacatenin pathway additionally to proteasome, calpain or caspase degradation pathways

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Li, Li. "Evaluation d’un effet anti-apoptotique du fibroblaste gingival et étude des mécanismes impliqués : contribution au développement d’une thérapie cellulaire de l’anévrisme de l’aorte abdominale." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T023.

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L’anévrisme de l’aorte abdominale est une pathologie vasculaire qui se caractérise par une dégradation de la matrice extracellulaire et s’accompagne d'une diminution du nombre de cellules musculaires lisses (CML). Les travaux précédents du laboratoire ont montré dans un modèle de culture d'artère ex vivo que le fibroblaste gingival (FG) inhibe la dégradation des fibres élastiques. Cet effet est lié à une stimulation par le fibroblaste gingival de la synthèse de TIMP-1 par les CML de la paroi aortique (Gogly, 2007). Dans le but de développer une thérapie cellulaire avec les FGs, il est donc important de savoir si FGs ont aussi un effet protecteur pour les cellules de la paroi artérielle. Nous avons d’abord montré que la présence de FG en co-culture avec des fragments d'aortes, conduit à une diminution du nombre de cellules en apoptose dans la paroi aortique. Le milieu conditionné par les FGs a un effet similaire. Pour étudier les mécanismes de cet effet anti-apoptotique, nous avons utilisé des cellules en monocouche (une lignée de fibroblaste humain Wi26 et des HUVEC). Les FGs inhibent l’activité des Caspases 3 et 9. L’inhibition de l’activité de la Caspase 9 a démontré que les FGs modulent la voie mitochondriale de l'apoptose. Ceci est confirmé par les études du potentiel membranaire mitochondrial (Δψm) et de la libération du cytochrome c. L'analyse de l'expression des protéines pro- (Bax) et anti-apoptotiques (Bcl-2, Bcl-xl, Hsp27) par Western blots a aussi montré une augmentation de l’expression de Bcl-2 et une inhibition de Bax. Nous avons également montré que la surexpression de Bcl-2 induite par le milieu conditionné par les FGs passe par la voie de signalisation FAK/Pi3K, et une induction de la phosphorylation de la MAP Kinase Erk1/2. Enfin, parmi les différents facteurs sécrétés par les FGs nous avons analysé les effets du TIMP-1 et du TGF-beta1 en utilisant des anticorps bloquants. Les résultats ont montré une inhibition de l'expression de Bcl-2 par l’anticorps anti-TIMP-1 et une inhibition de l'expression de Bcl-2 accompagné d’une diminution de la phosphorylation de Erk1/2 par l’anticorps anti-TGF-beta1. Le TIMP-1 et le TGF-beta1 contribuent donc, au moins en partie, aux effets antiapoptotiques des FGs. Ce travail de recherche nous permet d’avoir une meilleure compréhension des mécanismes d’inhibition du processus apoptotique par les FGs, et contribue au développement d’une nouvelle stratégie de thérapie cellulaire basée sur l'utilisation de fibroblastes gingivaux
The abdominal aortic aneurysm is a vascular disease characterized by a degradation of the extracellular matrix. It is accompanied by a decrease of smooth muscle cells (SMCs). Previous work performed in the laboratory showed that the gingival fibroblast (GF) inhibits the degradation of elastic fibers in an ex vivo artery culture model. This effect is linked to the stimulation of the synthesis of TIMP-1 by SMCs of the aortic wall by gingival fibroblast (Gogly, 2007). In order to contribute to the development of a cell therapy with GFs, it is important to know whether GFs also have a protective effect on the arterial wall cells. We first showed that the presence of GFs in co-culture with fragments of aorta, lead to a decrease of the number of apoptotic cells in the aortic wall. The treatment of aorta segments with GFs conditioned medium gave similar results. To study the mechanisms of this anti-apoptotic effect, we used cells in monolayer (a line of human fibroblast Wi26 and HUVEC). The GFs inhibit the activity of caspases 3 and 9. The inhibition of the caspase 9 activity showed that GFs modulate the mitochondrial pathway of apoptosis. This is confirmed by studies of mitochondrial membrane potential (Δψm) and the release of cytochrome c. The analysis of pro- (Bax) and anti-apoptotic (Bcl-2, Bcl-xl, Hsp27) protein expression also showed an increase of the expression of Bcl-2 and an inhibition of Bax. Next, we showed that overexpression of Bcl-2 by the GFs conditioned medium go through the FAK/Pi3K signaling pathway and the induction of phosphorylation of MAP kinase Erk1 / 2. Finally, among the various factors secreted by the GFs, we analysed the effects of TIMP-1 and TGF-beta1 using blocking antibodies. The results showed an inhibition of the expression of Bcl-2 by anti-TIMP-1 and an inhibition of the expression of Bcl-2 accompanied by a decrease of the phosphorylation of Erk1 / 2 by the antibody anti-TGF-beta1. Therefore the TIMP-1 and the TGF-beta1 contribute, at least partially, to the anti-apoptotic effects of GFs. Thus, this research permits to have a better understanding of the mechanisms of these anti-apoptotic effects of GFs and contributes to the development of a new cell therapy strategy based on GFs

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Ye, Yunbin. "The effect of a Grb2-SH3 inhibitor on Bcr-Abl expressed K562 cell." Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05S008.

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Abstract:

Dans la LMC, Grb2 se lie à Bcr-Abl et active la voie de Ras qui induit la transformation de cellules souches hématopoïétiques. Le peptidimer-c a été conçu pour bloquer l'interaction entre Grb2 et ses ligands. Dans les cellules K562 exprimant Bcr-Abl, le peptidimer-c peut pénétrer dans les cellules et d'interagir avec les domaines SH3 de Grb2. Il inhibe la prolifération des cellules dans une manière dose-dépendante. Le traitement combiné du peptidimer-c avec l'imatinib ou d'autres médicaments a un effet synergique ou additif sur l'inhibition du clonage de cellules. Le peptidimer-c induit la nécrose et l'apoptose. Il induit l'arrêt en phase S, par régulation négative de la cycline A et de la cdk2. Par ailleur, le peptidimer-c provoque le changement de l'expression de certaines gènes impliques dans l'apoptose, l'angiogenèse, le cycle cellulaire dans les cellules K562
In CML, Grb2 binds to Bcr-Abl and activates the Ras signal pathway which induces the transformation of haemotopoietic stem cell. Peptidimer-c had been designed to block the interaction between the Grb2 and its ligands. In Bcr-Abl positive K562 cells, the peptidimer-c can enter the cells and interact with Grb2 SH3 domains. It inhibits K562 cell proliferation in a dose-dependent manner. The combined treatment of peptidimer-c with Gleevec and other anti-CML drugs had synergetic or additive effects on the inhibition of K562 colony formation. Peptidimer-c significantly increases K562 cell hypodiploid percentage. It results in K562 cell necrosis, induces the cell apoptosis by activating the caspase-3. It induces S phase arrest, concomitantly with down-regulation of cyclin A and phospho-cdk2. Gene chip assay demonstrated that peptidimer-c causes the change of gene expression of K562 cells which are those for apoptosis, angiogenesis, cell cycle, and some other functions

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Essabbani, Abdellatif. "La clusterine : un nouveau régulateur de la voie NF-қB et de la mort cellulaire." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T025.

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Abstract:

La clusterine: un nouveau régulateur de la voie NF-қB et de la mort cellulaire Plusieurs fonctions physiologiques ont été attribuées à la clusterine (CLU), dont le rôle important au cours de l'inflammation et de la tumorogenèse. Nous avons montré que CLU interagit avec Iқb-α phosphorylé et diminue la translocation de p50/p65. Nous avons aussi généré un ensemble de constructions " flaggées " pour les différentes isoformes de CLU. Les résultats de cette étude montrent que la régulation de la voie NF-қB pourrait être restreinte à des séquences particulières de CLU. Nous avons développé une nouvelle approche de ciblage de CLU par la technique d' « exon skipping » qui permet d'induire préférentiellement la forme nucléaire épissée du gène très mal caractérisée. Nous avons montré que la surexpression de cette forme par cette stratégie induit la mort cellulaire
Clusterin: a new regulator of NF-kappaB pathway and cell death Clusterin is a multifunctional protein that plays numerous roles in mammalian cells. By mean of transcriptomic analysis, we previously demonstrated that lower expression of clu both in tissues and cultured fibroblast-like synoviocytes of rheumatoid arthritis patients compared to osteoarthritic patients. We showed that CLU interacts with phospho-IkB-a and decreases the translocation of p50/p65 to the nucleus. To specify the interaction sites of CLU with its partners and to study the CLU isoforms roles, we generated several molecular constructs coding for various CLU regions of interest and test their role on NF-қB pathway and CLU subcellular localization. We have also developed a new approach of "exon skipping" in order to induce preferential expression of the nuclear spliced form of the gene. This strategy will allow a good understanding of nuclear forme poorly characterized

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Geoffroy, Marine. "Rôle de la claudine 1 dans les cellules cancéreuses mammaires triple-négatives et son implication dans les effets anticancéreux de dérivés de la troglitazone." Thesis, Université de Lorraine, 2018. http://www.theses.fr/2018LORR0056/document.

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Abstract:

Un défi majeur en cancérologie est le traitement des tumeurs mammaires dites triple-négatives (ER-, PR-, HER2-). Elles sont le plus souvent résistantes aux traitements conventionnels et présentent un haut risque de récidive. De plus, l’absence de cibles thérapeutiques ne permet pas le développement de thérapie spécifique. 78% de ces tumeurs expriment faiblement la claudine 1 et sont de très mauvais pronostic. Cette protéine est impliquée dans l'adhérence des cellules entre elles et pourrait jouer un rôle suppresseur de tumeur dans les cancers mammaires. Dans ce contexte, nous étudions si sa réexpression pourrait être une piste de traitement. Au laboratoire, nous avons développé des dérivés de la famille des thiazolidinediones (TZD) qui stimulent l’expression de la claudine 1 et induisent l’apoptose des cellules cancéreuses mammaires. Les objectifs de ma thèse ont consisté 1) à déterminer l’implication de la claudine 1 dans l’effet pro-apoptotique de ces composés 2) à l’étude de leurs mécanismes d’action 3) évaluer si l’expression de la claudine 1 pourrait sensibiliser les cellules cancéreuses triple-négatives aux agents de chimiothérapie. Au cours de cette thèse, nous avons montré que la surexpression de la claudine 1 et le composé Δ2-TGZ induisent l’apoptose des cellules triple-négatives « claudin 1-low » MDA-MB-231 et Hs578T. De plus, la claudine 1 est impliquée dans l’effet pro-apoptotique de la Δ2-TGZ dans les cellules MDA-MB-231. Par ailleurs, nous avons démontré que les dérivés TGZ, la Δ2-TGZ et l’AB186, agissent de manière précoce en modifiant la morphologie des cellules suivie d’une réexpression de la claudine 1 membranaire et d’une inhibition de la migration cellulaire avant même d’induire la mort cellulaire par apoptose. De plus, la surexpression de la claudine 1 inhibe la migration cellulaire associée à la perte des fibres de stress et la formation des jonctions intercellulaires. Nous avons également montré que la réexpression de la claudine 1 sensibilise les cellules MDA-MB-231 à l’agent de chimiothérapie, le 5-FU. L’ensemble des résultats de thèse a permis de mieux comprendre le mécanisme d’action de la Δ2-TGZ et de l’AB186 sur les cellules cancéreuses mammaires mais aussi d’identifier la claudine 1 comme cible potentielle prometteuse dans les cellules triple-négatives « claudin 1-low »
A major challenge in oncology is the treatment of triple-negative breast cancer (ER-, PR-, HER2-) as no targeted therapy are available. These tumors present often a chemotherapy resistance and a higher relapse incidence. 78% of them do not express claudin 1 and display a poor prognosis. Claudin 1 is involved in cell-cell adhesion and may be a tumor suppressor gene in breast cancer. In this context, we study if claudin 1 re-expression could be a possible approach. In the laboratory, we developed derivatives thaziolidinediones (TZD) compounds, which increase claudin 1 expression and lead to apoptosis of breast cancer cells. The goals of my thesis is 1) to characterize the involvement of claudin 1 in their pro-apoptotic effect 2) to study their mechanism of action 3) to determine if claudin 1 could sensitize the TNBC cells to the chemotherapy agents. During my thesis, we showed that claudin 1 overexpression and the compound Δ2-TGZ induce apoptosis of TNBC « claudin 1-low » MDA-MB-231 and Hs578T cells. Claudin 1 is involved in the pro-apoptotic effect of Δ2-TGZ in MDA-MB-231 cells. Then, we demonstrated that Δ2-TGZ and AB186 lead to early action through a modification of cell morphology followed an expression of claudin 1 at the membrane and an inhibition of cell migration before the apoptosis process. In addition, claudin 1 overexpression decreases the cell migration through the loss of stress fibers and the formation of cell junctions. We showed that claudin 1 overexpression potentialize the pro-apoptotic effect of Δ2-TGZ in MDA-MB-231 cells. Finally, we observed that claudin 1 sensitize the MDA-MB-231 cells to 5-FU. In fine, our data allowed a better understanding of Δ2-TGZ and AB186 mechanism of action and identification of claudin 1 as a promising target in TNBC « claudin 1-low »

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Shlyakhtina, Yelyzaveta. "Role of TRAIL-receptors in apoptosis and nonapoptotic signaling in cancer cells populations undergoing fractional killing." Thesis, Strasbourg, 2016. http://www.theses.fr/2016STRAJ053/document.

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Abstract:

TRAIL (Tumor necrosis factor-Related Apoptosis-Inducing Ligand) induit l’apoptose des cellules cancéreuses de manière sélective, tout en épargnant les cellules saines. TRAIL peut aussi activer des voies de signalisation de survie cellulaire dans des cellules cancéreuses résistantes à l’induction de la mort programmée après traitement. Les cellules cancéreuses que nous avons étudiées sont caractérisées par un phénotype de mort cellulaire fractionnée en réponse à TRAIL, c’est-à-dire que seule une fraction de la population meurt en présence de TRAIL, alors que l’autre fraction active la survie cellulaire. Lors de notre étude nous avons montré que les récepteurs de TRAIL jouent un rôle particulièrement important dans l’engagement de ces cellules vers l’une ou l’autre de ces voies. De telles recherches permettront de mieux appréhender la complexité de la signalisation TRAIL-dépendante, et de proposer des thérapies combinées qui réduiront la progression tumorale induite par TRAIL
Tumor necrosis factor-Related Apoptosis-Inducing Ligand (TRAIL) gives a promise for cancer selective therapy as it exclusively induces apoptosis in tumor cells while sparing normal tissues. TRAIL also activates pro-survival pathways in cancer cells resistant to TRAIL-induced cell death. In this study we used clonal populations of cancer cells that respond in fractional killing upon TRAIL treatment: only a fraction of a clonal cancer cell population dies while another survives, activates non-apoptotic cascades and proliferates. We found that TRAIL receptors play an important role in the bifurcation of TRAIL signaling in populations of cancer cells that respond in fractional killing upon TRAIL challenge. These results will provide insights for evaluating whether combined therapies targeting components promoting the activation of pro-survival signaling would allow the use of rhTRAIL/DR5 agonistic antibodies to activate TRAIL-mediated killing while avoiding TRAIL-induced tumor progression

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Silina, Linda. "Targeting TYRO3 : A Novel Strategy to Radiosensitise Bladder Cancer Cells Review of Preclinical Studies to Improve Radiotherapy Response in Muscle-Invasive Bladder Cancer: Lessons and Perspectives TYRO3 Targeting as a Radiosensitizing Strategy in Bladder Cancer TYRO3 as a Molecular Target for Growth Inhibition and Apoptosis Induction in Bladder Cancer." Thesis, université Paris-Saclay, 2020. http://www.theses.fr/2020UPASL024.

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Abstract:

Le cancer de la vessie est un problème majeur de santé publique. Il est le quatrième cancer le plus fréquent chez l’homme en termes d’incidence. 25% des cancers diagnostiqués sont des tumeurs envahissant le muscle (TVIM) présentant un mauvais pronostic. La cystectomie est le traitement standard de référence pour les TVIM, même si elle présente des inconvénients importants. La radiothérapie, associée à une chimiothérapie et à une résection transurétrale de la tumeur, émerge comme traitement conservateur alternatif. La chimiothérapie n’épargne pas les tissus sains et présentent de nombreux effets secondaires indésirables. Il est donc d’importance de découvrir de nouvelles stratégies de radiosensibilisation pour les tumeurs de la vessie. TYRO3 est un récepteur à activité tyrosine kinase de la famille TAM (qui comprend TYRO3, AXL et MERTK). TYRO3 est surexprimé dans de nombreux types de cancers et favorise la prolifération, la survie et la résistance des cellules tumorales à la chimiothérapie. De plus, la surexpression de TYRO3 a été associée à une diminution de la survie globale des patients. Cependant, le rôle de TYRO3 dans le cancer de la vessie n'a pas encore été étudié. Dans cette thèse, je me suis intéressée : (1) Au rôle de TYRO3 dans le cancer de la vessie; (2) A l'effet radiosensibilisant de la perte d’expression ou de l’inhibition de TYRO3 dans les cellules cancéreuses de la vessie; (3) A l'effet de l'inhibition ou de la perte d’expression de TYRO3 sur l’urothélium humain sain.Nous avons démontré que TYRO3 est surexprimé dans 50% des TVIM. De plus, nous avons mis en évidence que les cellules tumorales de vessie surexprimant TYRO3 développaient une dépendance à ce récepteur pour leur survie et leur croissance. Les résultats des données transcriptomiques suggèrent que la perte d’expression de TYRO3 induit des modifications importantes dans le contrôle du cycle cellulaire et de l’apoptose, ce qui laisse supposer que TYRO3 pourrait augmenter la sensibilité de ces tumeurs à la radiothérapie. La perte d’expression ou l’inhibition de TYRO3 dans les cellules dérivées de tumeur de vessie induit une radiosensibilisation significative des cellules traitées. A l’inverse, la surexpression de TYRO3 par transfection plasmidique sur des cellules exprimant peu TYRO3 induit une radiorésistance. En association avec le rayonnement, la perte d’expression de TYRO3 conduit à un arrêt du cycle cellulaire et à une persistance à 24h des foyers de réparation (détectés par immunofluorescence). Enfin, les travaux sur les cellules dérivées de l’urothélium sain ont montré que la perte d’expression de TYRO3 n'affectait pas leur viabilité suggérant que le ciblage de TYRO3 pourrait améliorer l'efficacité de la radiothérapie tout en épargnant les tissus normaux environnants
Bladder cancer (BCa) is a major global health problem. It is the fourth most common cancer in men in industrialized countries. 25% of all diagnosed BCa are Muscle-invasive bladder cancers (MIBC) which have poor prognosis. Cystectomy is the standard treatment for MIBC, but for patients with comorbidities it presents significant drawbacks including increased risk of infection and impacted quality of life. Radiotherapy coupled with chemotherapy and tumor transurethral resection has emerged as a promising bladder sparing. Chemotherapy does not spare normal tissue and results in side effects. Therefore, it is of great interest to discover novel radiosensitisation strategies for bladder tumors.TYRO3 is a receptor tyrosine kinase of the TAM family (comprising TYRO3, AXL and MERTK) and is known to regulate diverse biological. TYRO3 is overexpressed in many types of cancer and promotes tumor cell proliferation, survival and resistance to chemotherapy. In addition, higher levels of TYRO3 expression have been associated with decreased overall survival in patients of diverse cancers. However, the role of TYRO3 in BCa has so far not been studied. In this thesis, I investigated:(1)The role of TYRO3 in BCa; (2) The radiosensitising effect of TYRO3 downregulation and inhibition in BCa cells; (3) The effect of TYRO3 downregulation and inhibition on normal human urothelial tissue.We first demonstrated that TYRO3 is overexpressed in 50% of MIBCs. TYRO3 overexpression conferred a TYRO3-dependance to bladder tumor cells for cell growth and viability. Transcriptomic analysis of TYRO3-downregulated cells suggested that TYRO3 signaling controlled cell cycle and protected from apoptosis, which indicated a potential to improve radiation response. TYRO3 downregulation lead to a significantly increased radiosensitivity of BCa cells and conversely, TYRO3-overexpression induced radioresistance. In combination with radiotherapy, TYRO3 dowregulation lead to a cell cycle arrest and a long term persistence of Ionizing Radiation-Induced Foci (IRIF). Finally, I demonstrated that TYRO3 downregulation and inhibition did not impact viability of normal human bladder cells suggesting that inhibiting TYRO3 could improve radiotherapy efficiency while sparing normal surrounding tissues

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Jia, Jieshuang. "Study of molecules with nonsense mutation correction capacity." Thesis, Lille 2, 2015. http://www.theses.fr/2015LIL2S009/document.

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Abstract:

Les mutations non-sens représentent environ 10% des mutations trouvées dans les maladiesgénétiques héréditaires. Les ARNm portant une mutation non-sens sont dégradés par un mécanismeappelé nonsense-mediated mRNA decay (NMD) pour empêcher la synthèse de protéines tronquéesqui pourraient être toxiques ou non-fonctionnelles pour la cellule. Plusieurs stratégies ont étédéveloppées pour sauver une mutation non-sens. Dans notre laboratoire, nous étudions deux d'entreelles qui sont (i) l'inhibition du NMD et (ii) l'activation de la translecture du PTC qui est un mécanismeconduisant à l'incorporation d'un acide aminé à la position du PTC. Pour trouver de nouveauxmoyens thérapeutiques pour les maladies génétiques héréditaires, notre laboratoire a testédifférentes molécules par criblage, pour identifier celles qui ont la capacité d'inhiber le NMD. Chaquemolécule sélectionnée par le crible est étudiée afin de mesurer son efficacité d'inhibition du NMD etd'activation de la translecture. Nous avons ainsi montré que i'amlexanox non seulement inhibe NMDmais active également la translecture du PTC. Cependant, l'efficacité de I'amlexanox reste modeste.Nous avons donc recherché d'autres familles de molécules qui sont capables de sauver une mutationnon-sens et qui ont une efficacité de correction des mutations non sens meilleure ou démontrentune plus grande spécificité. Dans mon étude, j'ai trouvé deux familles de protéines particulières quesont les inducteurs d'apoptose et les inhibiteurs du cytosquelette. J'ai trouvé que les inducteursd'apoptose peuvent inhiber le NMD en activant les caspases qui clivent les facteurs du NMD (UPF1 etUPF2). J'ai aussi montré que les inhibiteurs du cytosquelette peuvent inhiber le NMD et que certainsd'entre eux peuvent activer la translecture de PTC en induisant les facteurs du NMD (UPF1 et / ouUPF3X) à se concentrer dans les P-bodies et/ou dans d'autres foyers cytoplasmiques. Les rendementsde ces molécules sur l'inhibition du NMD sont similaires ou meilleure que I'amlexanox. Les inducteursd'apoptose et les inhibiteurs du cytosquelette nous démontrent qu'il est possible de trouver desmolécules très différentes capables de corriger des mutations non sens avec une bonne efficacité
Nonsense mutations represent approximately 10% of mutations found in the inherited geneticdiseases. mRNAs harboring a nonsense mutation are rapidly degraded by a quality-controlmechanism called nonsense-mediated mRNA decay (NMD) to prevent the synthesis of toxic or nonfunctionaltruncated proteins. Some stratégies have been developed to correct nonsense mutations.In our lab, we study 2 of them which are (i) the NMD inhibition and (ii) the PTC-readthroughactivation which is a mechanism leading to the incorporation of an amino-acid at the PTC position. Todesign new therapeutic tools for the inherited genetic diseases, our lab tested molecules byscreening to find ones with the capacity of NMD inhibition. For each molecules selected in thescreen, we measure the efficiency of NMD inhibition and PTC-readthrough activation of thesemolecules in cell lines harboring a nonsense mutation. We have shown that amlexanox not onlyinhibits NMD but also activâtes PTC readthrough. But the efficacy of amlexanox is still low. Wewanted to find other families of molecules capable of rescuing the expression of nonsense mutationcontainingmRNA with a higher efficacy or with some specificity. In my study, I found two spécialfamilies, one is the family of apoptosis inducers and the other is the family of cytoskeleton inhibitors.I found that apoptosis inducers can inhibit NMD by activating caspase pathway and cleave NMDfactors (UPF1 and UPF2). I also found that cytoskeleton inhibitors can inhibit NMD and some of themcan activate PTC-readthrough by inducing NMD factors (UPF1 or/and UPF3X) to concentrate in Pbodiesor in other cytoplasmic foci. The efficiencies of these molecules on NMD inhibition are similaror higher than amlexanox. Apoptosis inducers and cytoskeleton inhibitors demonstrated thatmolecules which can inhibit NMD or/and activate PTC-readthrough can be found and candemonstrate a higher correction of nonsense mutation efficiency than the existing molecules(ataluren or amlexanox for example)

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Schaeffer, Céline. "Effets protecteurs d'un neuropeptide, le CGRP, sur des cellules du système cardiovasculaire soumises à un stress oxydant." Dijon, 2003. http://www.theses.fr/2003DIJOMU14.

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Abstract:

Des cellules musculaires lisses de rat ont été soumises à un stress radicalaire induit par un système générateur de peroxyde d'hydrogène : le système Glucose-Glucose Oxydase ce qui entraîne la mort cellulaire par apoptose. Un prétraitement des cellules avec du h-CGRP diminue significativement ce propessus d'apoptose. L'étude de l'influence du prétraitement par le CGRP a également été réalisée sur des cultures de cardiomyocytes de rat nouveau né soumis à une ischémie/reperfusion simulée in vitro. Le prétraitement par le CGRP réduit significativement la perte de cellules à la reperfusion et améliore le rétablissement fonctionnel lors de la reperfusion. L'action cytoprotectrice exercée sur les CML est due à une suractivation des MAP kinases ERK 1/2 et P38. Ces sur-activations sont provoquées par la fixation du CGRP sur le récepteur spécifique de la famille CGRP/adrénomédulline. De plus, la PKC ainsi que la protéine Ki-Ras sont également activées par cette fixation du CGRP au récepteur. Le CGRP agit également sur la production de radicaux libres puisque leur présence est diminuée lorsque les cellules sont prétraitées par le CGRP.

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Arico, Sébastien. "Etudes des relations entre l'autophagie et la mort induite par les anti-inflammatoires non stéroïdiens dans les cellules cancéreuses coliques humaines HT-29." Paris 5, 2005. http://www.theses.fr/2005PA05S012.

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Abstract:

La macroautophagie est une voie majeure du catabolisme lysosomal. Cette voie, conservée au cours de l'évolution, se caractérise par la séquestration et la dégradation dans le lysosome d'une portion de cytoplasme. Ce processus actif à l'état basal, assure le recyclage des macromolécules à durée de vie longue ainsi que certains organites tels que les mitochondries. L'autophagie permet ainsi la survie des cellules lors de conditions nutritionnelles défavorables. Paradoxalement, l'autophagie est associée à un processus de mort cellulaire programmée indépendant de l'apoptose. Ces travaux s'inscrivent dans une meilleure compréhension des voies de signalisation regulant l'autophagie en étudiant, d'une part son rôle dans la progression tumorale à travers l'action du gène supresseur de tumeur PTEN dans la lignée cancéreuse colique humaine HT-29, et d'autre part les relations entre l'autophagie et la mort induite par le traitement de ces cellules par des anti-inflammatoires non stéroïdiens
Macroautophagy is amajor lysosomal catabolic pathway conserved from yeast to human. This process involves the sequestration and delivery of cytoplasmic contents including organelles like mitichondria, into the lysosome for degradation. Moreover, this process promotes cell survival during cellular stress like starvation. However autophagy has been associated to non-apoptotic programmed cell death. The role of autophagy in cell survival or cell death is unclear. This study focuses, in a first part, on the relationship between autophagy and cancer in HT-29 human colon cancer cells through the regulatory action of tumor suppressor gene PTEN on this process. In a second part, the relationship between autophagy and cell death induced in response to non-steroidal anti-inflammatory drugs were assessed on this model

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Jarray, Rafika. "Etude biologique de cibles dans le processus angiogénique." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05P621.

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Abstract:

Le besoin de définir de nouveaux marqueurs prédictifs de l’activité thérapeutique des anti-angiogéniques actuels devient nécessaire. Une meilleure compréhension des mécanismes fondamentaux régulant l’angiogenèse permettrait d’améliorer leur efficacité. Nous avons cherché, d’une part à identifier en aval de l’axe VEGF/VEGFRs de nouvelles protéines clés impliquées dans la régulation de l’angiogenèse, et d’autre part à développer des inhibiteurs potentiels d’une protéine tyrosine kinase, FAK (Focal Adhesion Kinase). 1. Nous avons identifié par criblage différentiel un gène codant pour Phactr-1 (Phosphatase-1 and Actin Regulator) dont l’expression est modulée par le VEGF-A165 dans les cellules primaires endothéliales humaines (HUVEC). L’extinction de Phactr-1 par siRNA entraîne une altération de la tubulogenèse in vitro, ainsi que l’activation de la voie apoptotique extrinsèque. Sa déplétion perturbe également les cycles de polymérisation/dépolymérisation de l’actine sous stimulation par le VEGF-A165. Ceci s’accompagne d’un défaut de la dynamique du lamellipode. De plus, l’expression de Phactr-1 est modulée par les récepteurs et corécepteurs VEGFR-1/NRP-1. 2. Nous avons développé des inhibiteurs chimiques du domaine kinase de FAK et procédé à leur évaluation biologique. L’activité biochimique des différentes librairies a été évaluée par un test sur protéine purifiée utilisant le TR-FRET. Ces librairies ont été testées sur les HUVEC pour évaluer leur activité cytotoxique. Les meilleurs composés inhibent la phosphorylation de FAK dans les HUVEC et également la tubulogenèse in vitro. Les résultats obtenus nous ont permis d’établir des pharmacomodulations en vue de développer des composés plus sélectifs
Molecular biomarker research in angiogenesis inhibition is an actively growing field. Although current data are extremely promising, it is still uncertain which biomarkers can reliably predict the efficacy of anti-angiogenic therapy. With increasing numbers of inhibitors being developed, the need for biomarkers is more critical than ever for clinical use in human disease management and knowledge. We sought, first to identify downstream of the axis VEGF / VEGFR new key proteins involved in the regulation of angiogenesis, and also to develop potential inhibitors of a protein tyrosine kinase, FAK(Focal Adhesion Kinase). 1. We identified by differential screening Phactr-1 gene (Phosphatase-1 and Actin Regulator) whose expression is modulated by VEGF-A165 in primary human endothelial cells (HUVEC). The extinction of Phactr-1 by siRNA results in impaired tubulogenesis in vitro, and activation of the extrinsic apoptotic pathway. Its depletion also disrupts the cycles of polymerization / depolymerization of actin by stimulation with VEGF-A165. This is accompanied by a defect in lamellipodium dynamics. In addition, the expression of Phactr-1 was modulated by the VEGFR-1/NRP-1. 2. We have developed chemical inhibitors of the kinase domain of FAK and performed their biological evaluation. The biochemical activity of the different libraries was assessed by a test on purified protein using the TR-FRET. These libraries were tested on HUVEC to assess their cytotoxic activity. The best compounds inhibit the phosphorylation of FAK in HUVEC and also tubulogenesis in vitro. The results allowed us to establish pharmacomodulations to develop more selective compounds

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Nugues, Anne-Lucie. "Altération du ripoptosome dans la leucémie aiguë myéloïde." Phd thesis, Université du Droit et de la Santé - Lille II, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01018661.

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Abstract:

Les protéines receptor-interacting protein kinase 1 (RIP1) et RIP3 ont été identifiées comme intervenant dans la régulation de la mort cellulaire apoptotique ou nécroptotique mais également dans la survie cellulaire. Ces deux protéines possèdent un domaine sérine/thréonine kinase, un domaine d'interaction spécifique RHIM (RIP homotypic interacting motif) et diffèrent dans leur domaine C-terminal car seule RIP1 possède un domaine de mort. Ces protéines font partie d'un ensemble de protéines régulatrices nommé ripoptosome. Des études ont montré une altération du ripoptosome dans les leucémies lymphoïdes chroniques (LLC) et les leucémies aigües lymphoïdes (LAL). Nous nous sommes intéressés aux leucémies aigües myéloïdes (LAM). L'analyse de l'expression des protéines RIP1 et RIP3 a été réalisée dans des blastes triées CD34+ de patients atteints de LAM ou dans des cellules CD34+ de donneurs sains en Q-RT-PCR. Les premières analyses montrent que RIP3 est significativement sous-exprimée chez les patients atteints de LAM en comparaison avec les cellules CD34+ issues de donneurs sains. Aucune différence n'a été mise en évidence pour l'expression de RIP1 dans les deux types de cellules CD34+. Afin de comprendre l'implication de l'extinction de RIP3 dans les LAM, nous avons étudié sa réexpression dans une lignée cellulaire leucémique murine (DA1-3b) où RIP3 n'est pas exprimée par métylation de son promoteur, au moyen d'un système d'expression conditionnelle (LacSwith II, IPTG). Après 10h d'induction de l'expression, on constate que la protéine RIP3 sauvage (RIP3-WT) induit une apoptose dans les cellules DA1-3b. Afin de déterminer l'implication des domaines de RIP3, nous avons utilisé une protéine mutante kinase Dead (RIP3-KD, activité kinase abolie) et une protéine mutante dans la séquence d'interaction spécifique avec RIP1 (RIP3-RHIM). L'analyse de la mortalité cellulaire en cytométrie en flux et en microscopie électronique montre que les protéines RIP3-WT et -KD induisent toutes les deux la mort apoptotique des cellules DA1-3b respectivement de 15% et de 50% après 10h d'expression. On constate donc que la protéine RIP3-KD induit une mort plus importante et plus précoce que la protéine sauvage. La protéine RIP3 mutée dans son domaine RHIM ne peut plus induire de mort cellulaire. Il semble donc que le domaine kinase de RIP3 jouerait un rôle régulateur dans la mort cellulaire induite par RIP3. L'utilisation du modèle de leucémie murine DA1-3b a permis de réaliser un étude in vivo de l'expression conditionnelle de RIP3-WT et -KD. Seule l'expression de RIP3-KD est capable de prolonger significativement la survie des souris.De plus, il a été démontré que RIP3 pouvait également induire la nécroptose dans les cellules lorsque l'apoptose ne peut aboutir, notament lorsque les caspases sont inhibées à l'aide d'un inhibiteur de pan-caspases le Z-VAD-FMK. Le traitement des cellules exprimant RIP3-WT par 50µM de Z-VAD-FMK induit une plus forte mortalité (45%) des cellules tandis que dans les cellules exprimant RIP3-KD, l'inhibiteur des caspases inhibe complètement le processus apoptotique et permet la survie des cellules (10%). Une étude en microscopie électronique a permis de déterminer que la présence de Z-VAD-FMK induit un switch de l'apoptose vers la nécroptose. Il semble donc que le domaine de kinase possède un rôle important dans la signalisation de la nécroptose car la protéine RIP3-KD n'est plus capable d'initier le switch entre l'apoptose et la nécroptose. Quelques données préliminaires semblent indiquer que les calpaïnes ainsi que la caspase 12 pourraient également être impliquées dans la balance apoptose/nécroptose. [...]

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Prola, Alexandre. "Rôle de la sirtuine 1 dans la modulation de la réponse des cardiomyocytes au stress RE et à l’apoptose." Thesis, Paris 11, 2014. http://www.theses.fr/2014PA114815/document.

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Abstract:

Des altérations de fonctions physiologiques du réticulum endoplasmique (RE) induisent un processus appelé stress RE. Dans le domaine cardiovasculaire, plusieurs travaux ont montré que le stress RE contribue au développement de la majorité des pathologies cardiaques. En réponse au stress RE, la réponse UPR (Unfolded Protein Response) est activée afin de restaurer l’homéostasie du RE et de permettre la survie de la cellule. Néanmoins, dans le cas d’un stress RE excessif ou prolongé, les altérations ne pouvant plus être compensées, la cellule est éliminée par apoptose contribuant au développement de la pathologie cardiaque. Une thérapie prometteuse pour lutter contre ce type de pathologie consisterait donc à moduler la réponse au stress RE afin d’inhiber l’apoptose des cardiomyocytes. Au cours de ma thèse, je me suis intéressé aux modifications induites en réponse au stress RE dans le cœur et au rôle de la sirtuine 1 (SIRT1) dans la modulation de cette réponse. SIRT1 est une déacétylase activée par différents stress cardiaques et connue pour favoriser la survie cellulaire. D’une part, j’ai mis en évidence que le stress RE induit une modification importante de l’architecture des cardiomyocytes et en particulier une augmentation des contacts RE/mitochondries associée à une altération de la fonction mitochondriale. D’autre part, en utilisant une lignée cellulaire (H9c2), des cardiomyocytes de rat adulte et des souris invalidées pour SIRT1, j’ai démontré in vitro et in vivo (i) que SIRT1 est activée et joue un rôle cardioprotecteur en réponse au stress RE, (ii) que SIRT1 limite la réponse UPR en régulant spécifiquement la voie PERK, et (iii) que SIRT1 régule la voie PERK en déacétylant le facteur d’initiation de la traduction, eIF2 sur deux résidus lysine. Ces résultats montrent donc pour la première fois que SIRT1 est impliquée dans la régulation de la réponse apoptotique au stress RE des cardiomyocytes et suggèrent que cette déacétylase serait une cible thérapeutique intéressante pour prévenir l’apoptose dans les pathologies cardiaques liées au stress RE
Impairment of physiological functions of the endoplasmic reticulum (ER) induces the so-called ER stress. ER stress has been implicated in many cardiovascular diseases including ischemic heart, hypertrophy and heart failure. To overcome the deleterious effect of ER stress, an evolutionarily conserved adaptive response known as Unfolded Protein Response (UPR) is activated in order to restore ER homeostasis and promote cell survival. Nevertheless, in the case of prolonged or severe ER stress, apoptotic cell death is ultimately activated to eliminate stressed cells, thus contributing to the development of the pathology. The modulation of ER stress response, in order to reduce cardiomyocyte apoptosis, thus appears as a promising therapeutic strategy for such pathologies. During my Ph.D thesis, I studied the modification that occur during ER stress response in the heart and the role of the sirtuine 1 (SIRT1) in the modulation of this response. SIRT1 is a deacetylase activated in response to many cardiac stresses to promote cell survival. First, we showed that ER stress induces important structural modifications of cardiomyocytes and in particular an increase in contact sites between ER and mitochondria associated with an alteration of the mitochondrial function. Secondly, using a cell line (H9c2), freshly isolated adult rat ventricular cardiomyocytes and SIRT1-KO mice, we demonstrated in vitro and in vivo (i) that SIRT1 is activated and plays a cardioprotective role in ER stress response, (ii) that SIRT1 attenuates the UPR by specifically regulating the PERK pathway, and (iii) that SIRT1 modulates PERK axis by deacetylating the translation initiation factor, eIF2on two lysine residues. Collectively, our results provide the first evidence that SIRT1 modulates ER stress-induced apoptosis in the heart and suggest that this deacetylase may represent a therapeutic target to prevent apoptosis in cardiac pathologies associated to ER stress

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Gourdier, Isabelle. "Exploration de la résistance à l'oxaliplatine dans les cancers colorectaux : implication de la voie apoptotique mitochondriale." Montpellier 1, 2002. http://www.theses.fr/2002MON13520.

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Abstract:

La résistance tumorale à la chimiothérapie constitue un obstacle majeur au traitement des cancers colorectaux. Celle thèse a pour objectif l'identification de mécanismes cellulaires-clés conduisant à la résistance à l'oxaliplatine des cancers colorectaux. Pour cela, nous avons développé des modèles cellulaires de résistance, par exposition de plusieurs lignées cellulaires humaines de cancer colorectal, à des concentrations croissantes d'oxaliplatine. Ces travaux ont permis de mettre en évidence une association entre résistance à l'oxaliplatine et résistance à l'apoptose de type mitochondrial, d’abord dans le modèle HCT116 puis dans le modèle SW620. L’état de résistance à l’oxaliplatine a ainsi pu être associé à des altérations fonctionnelles de la voie apoptotique mitochondriale (résistance croisée à des inducteurs apoptotiques agissant directement au niveau de la mitochondrie). Dans certain nombre de cas, les altérations de l'apoptose ont pu être associées à une dérégulation de la protéine pro-apoptotique Bax au niveau génétique (mutation de Bax), transcriptionnel (sous-expression des transcrits de Bax) et/ou protéique (sous expression ou perte totale d'expression de la protéine Bax). L'identification de telles altérations de l'apoptose en relation avec l'acquisition de résistance à l'oxaliplatine ouvre deux champs d'application clinique qui sont : (i) la mise en œuvre d 'une méthode de diagnostic de la résistance à l'oxaliplatine basée sur la définition de marqueurs d’altérations de l 'apoptose de type mitochondrial des cellules tumorales, (ii) la conception d'une stratégie visant à augmenter l'efficacité de l'oxaliplatine par l'association à une substance modulatrice des phénomènes de résistance à l 'apoptose de type mitochondrial
Tumor resistance to chemotherapy limits considerably the efficacy of colorectal cancer treatment. The aim of this thesis was to identify major cellular mechanisms leading to oxaliplatin resistance of colorectal cancers. For this purpose, we developed cellular models to study resistance, submitting several human colorectal cell lines to increasing concentrations of oxaliplatin. In this study, oxaliplatin resistance was found to be associated with a mitochondrial apoptosis defect, first in the HCT116 cellular model and then in a second cellular model: SW620. Indeed, oxaliplatin resistance was found to be associated with functional alterations in the mitochondrial apoptotic pathway (cross-resistance to apoptosis inducers acting directly on the mitochondria). In some cases, apoptosis alterations were found to be associated with a dysregulation of the pro-apoptotic protein Bax at several levels: genetic (Bax mutation), transcriptional (over-expression of Bax transcripts) and/or proteomic ( dawn-expression or complete loss of expression of Bax protein). Identification of these alterations in the mitochondrial apoptotic pathway in relation to acquisition of oxaliplatin resistance opens new clinical horizons among which are:(i) the development of a method to predict oxaliplatin resistance, based on the identification of tumor markers of mitochondrial apoptosis defects, and (ii) the conception of a therapeutic strategy designed to increase oxaliplatin efficacy by addition of a substance able to modulate phenomena of mitochondria-mediated apoptosis resistance

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Dubuisson, Agathe. "Génération et caractérisation de nouveaux anticorps anti-DR4 et anti-DR5." Thesis, Bourgogne Franche-Comté, 2018. http://www.theses.fr/2018UBFCI005/document.

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Abstract:

Le développement d'anticorps thérapeutiques a suscité beaucoup d'intérêt au cours des dernières décennies. Plus de 30 d'entre eux ont été approuvés et sont utilisés pour traiter des patients atteints de cancer. Les récepteurs agonistes de TRAIL (DR4 ou DR5) sont surexprimés par les cellules tumorales et capables de déclencher leur mort. Ils représentent donc des cibles idéales. Malgré des résultats encourageants, la plupart des essais cliniques basés sur des anticorps monoclonaux ciblants DR4 ou DR5 ont été interrompus. Cependant, les connaissances actuelles ouvrent des perspectives thérapeutiques de choix pour l'utilisation de tels anticorps en oncologie. Afin de développer de nouveaux anticorps anti-DR4 et anti-DR5 reconnaissant sélectivement les protéines natives d’intérêt, et doués de propriétés antitumorales, nous avons opté pour une approche d'immunisation génétique basée sur des injections hydrodynamiques d'ADN complémentaire. Cette approche nous a permis d'obtenir des réponses humorales significatives, et après fusions des rates correspondantes, de générer 21 anticorps monoclonaux capables de reconnaître spécifiquement et avec une très grande affinité les récepteurs DR4 ou DR5, sous leurs formes natives. Parmi ces anticorps monoclonaux, deux sont doués de propriétés pro-apoptotiques, et quatre sont capables d'accroitre le potentiel pro-apoptotique du ligand TRAIL. Les propriétés antitumorales de l'anticorps anti-DR4 le plus puissant, l’AcM-C#16, ont également été validées in-vivo dans des modèles de xénogreffes.L'ensemble de ce travail démontre, et ce pour la première fois, que la méthode d'immunisation ADN par injection hydrodynamique peut être utilisée pour générer des anticorps monoclonaux thérapeutiques efficaces ciblant des récepteurs de la superfamille du TNF. Au-delà du système TRAIL, cette approche d'immunisation, peu exploitée, pourrait ouvrir de nouvelles perspectives thérapeutiques en l'adaptant à de nouvelles cibles
Development of therapeutic antibodies has attracted many interests in recent decades. More than 30 of them have been approved and are used to treat cancer patients. TRAIL agonist receptors (DR4 or DR5) are overexpressed by the tumour cells and are able to trigger their death. Therefore, they represent ideal targets. Despite encouraging results, most clinical trials based on monoclonal antibodies targeting DR4 or DR5 have been discontinued. However, current knowledge opens therapeutic perspectives of choice for the use of such antibodies in oncology. In order to develop new anti-DR4 and anti-DR5 antibodies recognizing selectively the native form of the proteins of interest, and endowed with antitumor properties, we have chosen to perform a genetic immunization approach based on hydrodynamic injections of complementary DNA. This approach allowed us to obtain significant humoral responses, and after fusions of the corresponding spleens, to generate 21 monoclonal antibodies capable of recognizing specifically and with very high affinity DR4 or DR5 receptors, in their native forms. Of these monoclonal antibodies, two are display pro-apoptotic properties, and four are capable of enhancing TRAIL pro-apoptotic potential. The antitumor properties of the most potent anti-DR4 antibody, mAb-C16, have also been validated using in-vivo xenografts models.Altogether this work demonstrates, for the first time, that the DNA immunization hydrodynamic injection method can be used to generate therapeutically effective monoclonal antibodies targeting TNF superfamily receptors. Beyond the TRAIL system, this immunization approach, scarcely exploited, could open new therapeutic perspectives by adapting it to new targets

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Sabbah, Emmanuelle. "Propriétés apoptotiques de la protéine de régulation Vpr du VIH-1 : interaction entre Vpr et le translocateur de nucléotides à adénine, neurotoxicité de Vpr." Paris 5, 2004. http://www.theses.fr/2004PA05P615.

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Abstract:

Les propriétés apoptotiques de la protéine Vpr du VIH-1 ont été étudiées en caractérisant l'interaction entre Vpr et le translocateur de nucléotides à adénine (ANT) et la neurotoxicité de Vpr. La cartographie des épitopes de Vpr reconnus par des anticorps anti-Vpr a été réalisée. Des techniques de physico-chimie et de biochimie ont permis de déterminer que Vpr se lie à un domaine de l'ANT comprenant sa première boucle intermembranaire via les régions minimales (27-51) et (71-82). Dans notre modèle tridimensionnel, le domaine N-terminal de Vpr pénètre dans la cavité de l'ANT. La microscopie et la cytométrie en flux ont permis d'évaluer les capacités apoptotiques de Vpr et de dérivés sur des cultures primaires de neurones de rat. La région neurotoxique de Vpr est située dans le domaine (70-96). L'activation de la caspase 3 et une surproduction d'espèces activées de l'oxygène ont été observées. Ces résultats pourraient être utilisées dans la recherche d'agents anti-apoptotiques
The apoptotic properties of the HIV-1 Vpr protein were studied by caracterising the interaction between Vpr and the adenine nucleotide translocator (ANT) and the Vpr neurotoxicity. A mapping of the Vpr epitopes recognized by several anti-Vpr antibodies was done. Biochemical and biophysical techniques have allowed us to determine that Vpr binds to an ANT domain encompassing its first intermembranous loop via the minimal regions (27-51) and (71-82). In the tridimensionnal model we proposed, the Vpr N-terminal region is located in the ANT barrel. Microscopy and flow cytometry were used to evaluate the Vpr apoptotic properties over primary cultures of rat neurons. The Vpr neurotoxic region is located in the (70-96) fragment. Caspase-3 activation and reactive oxygen species hyperproduction were observed. These results could be used during the search of anti-apoptotic agents

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Vetillard, Alexandra. "Rôle de la kinase Akt dans la chimiorésistance : Régulation de l’équilibre Apoptose-Sénescence." Thesis, Angers, 2015. http://www.theses.fr/2015ANGE0078.

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Abstract:

Activée par la chimiothérapie, la sénescence est un mécanisme suppresseur de tumeur qui empêche la progression tumorale. Cependant, certaines cellules cancéreuses sont capables d’émerger et de provoquer une rechute clinique. Les mécanismes mis en place par les cellules pour échapper à la sénescence ne sont pas encore clairement connus. Nous avons récemment décrit que les cellules qui échappent à la sénescence résistent à l’anoïkis et sont dépendantes de Mcl-1. Dans cette étude, nous caractérisons plus en détail cette émergence en réponse à l'irinotécan, un traitement de première ligne utilisé dans le cancer colorectal. Nos résultats indiquent que la kinase Aktest activée comme une voie de survie lors de l'étape précoce de la sénescence et qu’elle est également réactivée lors de l’émergence. L'inhibition de la kinase avec le GSK690693 empêche l’émergence et améliore l’efficacité du traitement, à la fois in vitro et in vivo. Cette amélioration a été corrélée à l'inhibition de la sénescence et l’activation concomitante de l'apoptose via l’inactivation de Mcl-1 par Noxa. De plus, en utilisant des cellules p21Waf1 déficientes, nous avons confirmé que la voie p53-p21, principal régulateur de la sénescence, favorise l’émergence. A l’inverse, son inhibition améliore l'efficacité du traitement par induction de l'apoptose. Ces résultats mettent en évidence que l'inhibition d’Akt améliore l’efficacité de l’irinotécan et empêche l'émergence de cellules persistantes en diminuant la sénescence au profit de la réponse apoptotique. Par conséquent, nous proposons que l’utilisation d’inhibiteurs d’Akt en thérapies séquentielles devrait être considérée dans le futur pour améliorer le traitement des cancers colorectaux réfractaires à l’irinotécan
Activated by chemotherapy, senescence is a tumor suppressive mechanism that prevents tumor progression. However, some cancer cells can emerge to induce clinical relapse. The mechanisms set up by cells to escape senescence are not yet clearly known. We have recently described that cells that escape senescence are more transformed than non treated parental cells ; they resist anoikis and depend on Mcl-1. In this study, we further characterize this emergence in response to irinotecan, a first line treatment used in colorectal cancer. Our results indicate that the Akt kinase was activated as a feedback pathway during the early step of senescence and also during emergence. Inhibition of the kinase with GSK690693 prevented cell emergence and improved treatment efficacy, both in vitro and in vivo. This improvement was correlated with senescence inhibition, p21waf1 down regulation and a concomitant activation of apoptosis due to Noxa upregulation and Mcl-1 inactivation. Indeed, Noxa inactivation prevented apoptosis and increased the number of emergent cells. Moreover, using p21waf1-deficient cells, we further confirmed that an intact p53-p21-senescence pathway favored cell emergence and that its down regulation improved treatment efficacy through apoptosis induction. These results highlight that Akt inhibition improves irinotecan treatment and prevent cell emergence by switching the senescence response to apoptosis. Therefore, we propose that use of Akt inhibitors in sequential therapies should be considered in future to improve the treatment of irinotecan-refractory colorectal cancers

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Baloche, Valentin. "Contributions négatives et positives de la galectine-9 au développement tumoral : étude dans des modèles tumoraux murins syngéniques In the MB49 Murine Model, Genetic Ablation of Galectin-9 Enhances Anti-Tumor Immune Response: Possible Role of a Greater CXCL9/Il-6 Production Tumor Exosomal Micrornas Thwarting Anti-Tumor Immune Responses in Nasopharyngeal Carcinomas Interferon β and Anti-PD1/PD-L1 Checkpoint Blockade Cooperate in NK Cell-Mediated Killing of Nasopharyngeal Carcinoma Cells Interferon Beta Increases NK Cell Cytotoxicity against Tumor Cells in Patients with Nasopharyngeal Carcinoma via Tumor Necrosis Factor Apoptosis-Inducing Ligand Emerging Therapeutic Targets for Nasopharyngeal Carcinoma: Opportunities and Challenges Galectin-9 Promotes a Suppressive Microenvironment in Human Cancer by Enhancing STING Degradation." Thesis, université Paris-Saclay, 2020. http://www.theses.fr/2020UPASS117.

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Abstract:

Comme les autres galectines, la galectine-9(gal-9) est une lectine animale qui interagit avec un sous-groupe défini de polysaccharides portés par des glycoprotéines ou des glycolipides. La gal-9 associée aux cellules exerce de multiples fonctions dans le cytoplasme, dans le noyau et à la surface de la membrane plasmique. Quelques publications suggèrent que la gal-9 intra-cellulaire inhibe la mobilité des cellules malignes et exerce un effet antimétastatique. En outre la gal-9 peut être sécrétée dans le milieu extra-cellulaire où elle se comporte comme une cytokine avec des effets principalement immunosuppresseurs. Ces effets ont été mis en évidence dans un contexte tumoral chez l’homme et dans des modèles murins. Cependant, on ne disposait pas jusqu’à présent d’un modèle tumoral murin permettant d’évaluer les effets pro-tumoraux ou antitumoraux de la gal-9 indépendamment de la gal-9 des cellules infiltrantes. Pour résoudre ce problème, nous avons dérivé, en employant la technologie CRISPR/Cas9, des clones isogéniques invalidés ou non pour la gal-9 à partir de 2 lignées tumorales murines : CT26 (fond génétique BALB/c) et MB49 (fond génétique C57BL/6). Dans le cas de la lignée MB49, nous avons pu mettre en évidence un phénotype remarquable in vivo. Lors de transplantations itératives, on assiste pour les tumeurs dérivées des clones invalidées à une réduction drastique de la croissance tumorale au bout de 3 ou 4 passages sur les souris syngéniques mais pas sur les souris immunodéficientes. L’émergence de la réponse immunitaire responsable de cet arrêt de la croissance tumorale a été étudiée par immunohistochimie, dosage de cytokines en multiplex dans les extraits tumoraux et analyse du transtriptome par RNAseq. L’augmentation de la production intra-tumorale d’interféron-γ, de CXCL9 et d’Il-6 semble jouer un rôle important dans le renforcement de la réponse immunitaire contre les tumeurs KO-gal-9
Like other galectins, galectin-9 (gal-9) is an animal lectin which interacts with a defined subgroup of glycans carried by glycoproteins or glycolipids. Gal-9 associated with cells performs multiple functions in the cytoplasm, in the nucleus and at the surface of the plasma membrane. Some publications suggest that intracellular gal-9 inhibits the mobility of malignant cells and exerts an anti-metastatic effect. In addition, gal-9 can be secreted into the extracellular medium where it behaves like a cytokine with mainly immunosuppressive effects. These effects have been demonstrated in the context of human tumors and in mouse tumor models. However, so far there was no murine tumor model available to assess the pro-tumor or anti-tumor effet of gal-9 independently of gal-9 produced by infiltrating cells. To address this issue, we derived isogenic clones invalidated or not for gal-9 from 2 murine tumoral lines : CT26 (BABL/c genetic background) and MB49 (C57BL/6 genetic background), using CRISPR/Cas9 technology. In the case of the MB49 line, we were able to demonstrate a remarkable phenotype in vivo. During serial transplantations, we saw, for tumors derived from invalidated clones, a dramatic reduction in tumor growth after 3 or 4 passages in syngenic mice but not in immunodeficient mice. The emergence of the immune response responsible for this arrest of tumor growth was investigated by immunohistochemistry, multiplex cytokine assay in tumor extracts and transcriptome analysis by RNAseq. Increased intra-tumor production of interferon-γ, CXCL9 and Il-6 appears to play an important role in enhancing the immune response against KO-gal-9 tumors

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Ragagnin, Audrey. "Mort neuronale et maladies à prions." Thesis, Strasbourg, 2014. http://www.theses.fr/2014STRAJ094/document.

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Abstract:

La conversion conformationnelle de la protéine prion cellulaire PrPC neuroprotectrice en protéine prion PrPSc infectieuse et pathogène caractérise les maladies à prions. Dans le cerveau infecté par les prions, la perte de PrPC, le gain de PrPSc neurotoxique et l’inflammation concourent à la mort neuronale par des mécanismes encore mal connus.Ces travaux valident les cultures organotypiques de cervelet de souris comme système expérimental ex vivo favorable à l’étude de ces mécanismes et montrent que l’absence de PrPC aussi bien que PrPSc activent des mécanismes apoptotiques et autophagiques qui conduisent à la mort des cellules de Purkinje du cervelet. Une deuxième étude in situ chez la souris montre que la compartimentation anatomo-fonctionnelle du cervelet est un paramètre endogène de la pathogenèse des prions de tremblante 22L. Une troisième série d’expériences in situ montre que les prions provoquent l’augmentation du récepteur TNFR1 de la cytokine pro-inflammatoire TNF-α à la membrane des astrocytes enveloppant les synapses excitatrices des cellules de Purkinje dans le cortex cérébelleux de souris infectées. Ceci implique une composante astrocytaire dans la réaction des complexes synaptiques aux prions
The conversion of the protective cellular prion protein PrPC into an infectious, neurotoxic conformer PrPSc is a feature of prion diseases. In the prion-diseased brain, the loss of PrPC, the production of pathogenic PrPSc and inflammation contribute to neuronal death by still unknown mechanisms.The present results validate cerebellar organotypic cultures as a valuable experimental system to study ex vivo these mechanisms and provide insight into the apoptotic and autophagic processes activated by the absence of PrPC in Prnp-deficient mice and by PrPSc prions and lead to the death of the cerebellar Purkinje cells. A second line of research in situ showed that the anatomo-functional compartmentation of the mouse cerebellum is an endogenous parameter of the pathogenesis of the 22L scrapie prions. Finally, another in situ approach revealed that prions increase the levels of TNFR1, a receptor for the pro-inflammatory cytokine TNF-α at the membrane of the astrocytes enveloping Purkinje cell excitatory synapses in the cerebellar cortex of infected mice. This implies that the response of synaptic complexes to prions involves a glial component

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Schulz, Cathrin. "Tumour-selective apoptosis : identification of NMHCIIa as novel death receptor interactor regulating the response to TRAIL." Phd thesis, Université de Strasbourg, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01069133.

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Abstract:

The cytokine TRAIL is a promising cancer therapeutic candidate as it induces apoptosis selectively in transformed cells. TRAIL-induced clustering of its receptors (DR) is essential for the DISC complex formation, which induces cell death. The mechanism for TRAIL's tumour selective effect is largely unknown. We identified the cytoskeleton proteins non-muscle myosin heavy chain IIa, IIb (NMHCIIa, NMHCIIb), myosin regulatory light chain (MLC2) and ß-actin as novel DR-interactors. An initially weak and TRAIL-induced abrogation of NMHCII/DR interaction correlated with efficient DISC formation in tumour cells. In contrast, a robust NMHCII/DR interaction that was sustained upon TRAIL stimulus was accompanied by incomplete DISC arrangement. Weakening the NMHCII/DR interaction in normal cells using chemical inhibitors enhanced TRAIL-induced apoptosis. Intriguingly, siRNA-mediated NMHCIIa- but not NMHCIIb depletion potently released TRAIL resistance in normal cells and influenced DISC composition. Reduced NMHCII/DR interaction in transformed cells was characterised by diminished MLC2 phosphorylation and altered protein expression of upstream regulatory kinases. Our results suggest that normal cell resistance to TRAIL-apoptosis is based on the interaction of cytoskeleton components with DR that is impaired upon transformation. Since NMHCII function in cell adhesion and migration, it will be interesting to study possible roles of the interaction in cell detachment and altered TRAIL sensitivity; moreover this link may provide clues as to the cause of TRAIL resistance in some cancers.

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Paucard, Alexia. "Etude des mécanismes mis en jeu lors d'un stress oxydatif induit par l'injection intrastriatale de malonate chez le rat." Paris 5, 2003. http://www.theses.fr/2003PA05P643.

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Abstract:

L'existence d'un stress oxydatif (SO) a été rapportée dans diverses pathologies cérébrales. Dans ce contexte, notre travail a consisté à rechercher les mécanismes déclenchés par le SO ainsi que leur contribution à la mort neuronale. Le SO a été induit par l'injection de malonate (3 æmol), une toxine mitochondriale, dans le striatum de rats. Dans ce modèle, nous avons montré une chute précoce du glutathion total, le principal antioxydant endogène, associée à une lésion massive et à un œdème cérébral. L'a-phényl tert-butyl nitrone, un composé antioxydant, a exercé dans ce modèle un effet antiœdémateux. L'injection de malonate entraîne également une production de NO, par la NO-synthase neuronale. Ce NO module l'activation de la caspase 3, une des enzymes mises en jeu lors de la mort par apoptose. Cependant, l'inhibition de la caspase-3 n'a pas exercé d'effet neuroprotecteur. Le SO induit par le malonate déclenche donc des mécanismes conduisant principalement à une mort de type nécrotique
Oxidative stress (OS) has been reported in various cerebral pathogenesis. In this context, our work aimed to elucidate the mechanisms triggered by OS and their contribution to neuronal death. Our model of OS consisted in an injection of malonate (3 æmol), a mitochondrial toxin, in the striatum of rats. In this model, we showed an early drop of total glutathione, the major endogenous antioxidant, associated with a massive lesion and a cerebral edema. A-phenyl tert-butyl nitrone, an antioxidant compound, exerts in this model an antiedematous effect. Malonate injection was followed by NO production by the neuronal NO-synthase. This NO modulates caspase-3 activation, one of the enzymes implicated in apoptotic cell death. Nevertheless, inhibition of caspase-3 did not exert a neuroprotective effect. Thus the OS induced by malonate leads to neuronal death mainly through necrotic mechanisms

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El, ali Zeina. "Rôle du facteur de transcription Nrf2 dans le contrôle de l'allergie cutanée en réponse aux molécules allergisantes." Thesis, Paris 11, 2013. http://www.theses.fr/2013PA114847/document.

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Abstract:

Les réactions allergiques telles que les réactions d’hypersensibilité de contact (HSC) sont un problème de santé publique. Il s’agit d’une réaction inflammatoire aiguë qui survient suite à des expositions répétées d’une molécule allergisante avec la peau et dans laquelle les cellules dendritiques (DC) jouent un rôle essentiel. Les composés chimiques tels que le dinitrochlorobenzène (DNCB) ou le cinnamaldéhyde (CinA), responsables d'HSC, sont capables d’induire un stress chimique et de produire des espèces réactives de l’oxygène (ERO). Parmi les voies de détoxication en réponse aux xénobiotiques, la voie Nrf2/Keap1 est une voie centrale connue pour la détection de composés électrophiles. A l’état basal et en absence de stress, Nrf2 est couplé à son répresseur cytosolique Keap1 qui assure sa dégradation via le protéasome. En présence d’un stress chimique, Nrf2 transloque dans le noyau et induit l’expression des gènes antioxydants [hème-oxygénase 1 (ho-1), NADPH quinone oxydoréductase (nqo1), glutathione-s-transférase (gst)]. En absence de Nrf2, nous avons montré que le DNCB et le CinA induisent la mort cellulaire des DC via l'activation des caspases impliquées dans la voie mitochondriale ou intrinsèque de l'apoptose. Cette mort cellulaire induite par le DNCB est ERO dépendante tandis que celle induite par le CinA est moins sensible à la production des ERO. En présence de Nrf2, la survie des DC est régulée par l'expression de bcl-2, un gène antiapoptotique, et des gènes antioxydants. Nrf2 semblerait activer ou réprimer la transcription des gènes et ce en fonction de la molécule testée, du temps de traitement. Par ailleurs, nous avons également montré que Nrf2 joue un rôle clef dans les phases de sensibilisation et d'élicitation de la réaction d'HSC mais également au cours de l'irritation. Des transferts adoptifs de DC ont permis de montrer le rôle clef de Nrf2 dans la DC au cours de l'HSC. Enfin, notre étude montre que Nrf2 régule les Treg au niveau du tissu cutané et participe à la tolérance cutanée
Allergic reactions such as contact hypersensitivity (CHS) are a problem of public health occurring after repeated exposures to contact sensitizers. CHS is a common skin disease involving dendritic cells (DC) playing a key role in this pathology. Contact sensitizers, like dinitrochlorobenzene (DNCB) or cinnamaldehyde (CinA) are known to induce reactive oxygen species (ROS) production. The Nrf2/Keap1 pathway is central for detoxification. In the absence of a chemical stress, Keap1 associates with Nrf2 and leading to its degradation. In the presence of an electrophilic compound like contact sensitizers, Keap1’s conformation is modified leading to Nrf2 translocation to the nucleus and transcription of its target genes [heme-oxygénase 1 (ho-1), NADPH quinone oxydoreductase (nqo1), glutathione-s-transferase (gst)]. We showed, for the first time, that Nrf2 controls the loss of mitochondrial membrane potential and caspase-3/7 activity in DC activated by contact sensitizers. In the absence of Nrf2, DNCB and CinA induced DC apoptosis via caspase activation involved in intrinsic pathway of apoptosis also called ‘mitochondrial pathway’. This apoptosis was mainly mediated by the production of ROS in response to DNCB. However, ROS faintly control CinA-induced cell death. We also showed that Nrf2 controls the transcription of the anti-apoptotic gene bcl-2 in response to DNCB or CinA and also the transcription of immune related and antioxidant genes that could be implicated in DC apoptosis.Otherwise, we also showed that Nrf2 plays a key role in sensitization and elicitation phases of CHS and even in the irritation phase. Adoptive transfer experiments showed that Nrf2 plays a crucial role in DC during CHS.Finally, we showed that Nrf2 regulates skin Treg and participates to skin tolerance

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Dissertations / Theses on the topic 'Apoptose – Dissertation universitaire'

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