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Soares, Lara Rafaelle Pinho. "A vulnerabilidade na negociação processual atípica." Faculdade de Direito, 2016. http://repositorio.ufba.br/ri/handle/ri/19279.
Full textAbstract:
Submitted by Ana Valéria de Jesus Moura (anavaleria_131@hotmail.com) on 2016-05-25T14:53:14Z
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A vulnerabilidade na negociação processual atípica - Lara Rafaelle Pinho Soares.pdf: 1366522 bytes, checksum: 31a82347ae8cbce956a26b3451c222a9 (MD5)Approved for entry into archive by Ana Valéria de Jesus Moura (anavaleria_131@hotmail.com) on 2016-05-25T14:54:19Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Ficha catalográfica Lara Soares.pdf: 49819 bytes, checksum: 564ff4d831820bdb1248a1b6e8bdbff0 (MD5) A vulnerabilidade na negociação processual atípica - Lara Rafaelle Pinho Soares.pdf: 1366522 bytes, checksum: 31a82347ae8cbce956a26b3451c222a9 (MD5)
Made available in DSpace on 2016-05-25T14:54:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Ficha catalográfica Lara Soares.pdf: 49819 bytes, checksum: 564ff4d831820bdb1248a1b6e8bdbff0 (MD5) A vulnerabilidade na negociação processual atípica - Lara Rafaelle Pinho Soares.pdf: 1366522 bytes, checksum: 31a82347ae8cbce956a26b3451c222a9 (MD5)
A publicação do Código de Processo Civil de 2015 deu novas diretrizes ao Direito processual civil brasileiro, destacando-se o caráter humanístico que passou a integrar as suas normas. O presente trabalho, assim, trata de uma das inovações trazidas pelo referido diploma, qual seja,o negócio jurídico processual atípico, disciplinado pelo art. 190, com recorte metodológico em uma das limitações impostas pela lei: a vulnerabilidade para negociar processualmente. Nesse sentido, o estudo atém-se à evolução histórica e jurídica da disposição dos interesses das partes, evidenciando os contornos da vontade e limites sofridos por ela na atualidade. Ademais, destaca a essencialidade da manifestação de vontade para a existência do negócio jurídico, inclusive o processual atípico, e enfrenta a limitação imposta pelo parágrafo único do referido artigo no que se refere à situação de manifesta vulnerabilidade. Faz-se, então, uma conceituação e análise da vulnerabilidade nos âmbitos material e processual do Direito, por intermédio de uma abordagem transversal doutrinária e legal, revelando as técnicas e meios de sua tutela na esfera jurídica. Além disso, demonstra de que maneira a situação de desigualdade causada pela vulnerabilidade reclama tratamento distinto para a manutenção e preservação do princípio da igualdade em sentido material. Finalmente, essa dissertação estuda a (im) possibilidade de celebração de negócio jurídico processual atípico por vulneráveis, diante do questionamento referente à validade da manifestação da vontade das pessoas que se encontram em estado de vulnerabilidade, estabelecendo os critérios e limites para esse tipo de situação.
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Paiva, Franciely Paula Toniolo de. "Quorum sensing em Escherichia coli enteropatogênica atípica." Universidade de São Paulo, 2011. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-23032011-172812/.
Full textAbstract:
Escherichia coli enteropatogênica atípica (aEPEC) faz parte de um grupo de patógenos capazes de formar um tipo de lesão característica em cultura de tecidos epiteliais, denominada attaching and effacing (A/E). Os genes que são necessários para produção da lesão A/E estão localizados em uma ilha de patogenicidade denominada região LEE (locus of enterocyte effacement). A transcrição de genes da região LEE está sujeita a regulação por vários fatores, entre eles quorum sensing, termo utilizado para designar um mecanismo de regulação gênica dependente da concentração celular. Esse mecanismo é usado por bactérias Gram-positivas e Gram-negativas e em ambos os casos envolve a produção e detecção de moléculas sinalizadoras extracelulares, denominadas autoindutores. Até o momento, pelo menos quatro sistemas de quorum sensing foram descritos, entre eles o sistema de autoindutor AI-3 encontrado em bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. Diversos mecanismos celulares, entre eles a expressão de fatores de virulência em amostras de EPEC e EHEC, são regulados por esse fenômeno. O principal objetivo deste estudo foi verificar se existe uma possível regulação por quorum sensing na interação in vitro de uma amostra de E. coli da microbiota intestinal com amostras de aEPEC. Após a confirmação da produção de AI-3 por amostras de E.coli da microbiota intestinal foram realizados ensaios de adesão e quantificação utilizando meio pré-condicionado com esta amostra, epinefrina e bloqueadores que confirmaram que os padrões de adesão de aEPEC obtidos em menor tempo são devidos a presença de AI-3 no meio pré-condicionado, indicando a participação de quorum sensing nessa interação. Além disso, foi observado um fenômeno citotóxico nas células que não é produzido pelo AI-3.Atypical Enteropathogenic Escherichia coli (aEPEC) are part of a group of pathogens capable of forming a type of lesion characteristic of epithelial tissues in culture, called attaching and effacing (A/E). The genes that are required for production of A/E lesion are located in a pathogenicity island called LEE region (locus of enterocyte effacement). The transcription of LEE genes in the region is subject to regulation by various factors, including quorum sensing, a term used to describe a mechanism of gene regulation dependent on cell concentration. This mechanism is used by Gram-positive and Gram-negative and in both cases involves the production and detection of extracellular signaling molecules, called autoinducers. So far, four systems of quorum sensing have been described, including the system of autoinducers AI-3 found in Gram-positive and Gram-negative bacteria. Several cellular mechanisms, including expression of virulence factors in EPEC and EHEC are regulated by this phenomenon. The main objective of this study was to determine whether there is a possible regulation by quorum sensing in the in vitro interaction of a strains of E. coli of the intestinal microbiota with strains aEPEC. After confirming the production of AI-3 in E. coli of the intestinal microbiota were performed adhesion assays and quantification using means preconditioned with this strains, epinephrine, and blockers who confirmed that patterns of adherence of aEPEC obtained in less time are due to the presence of AI-3 in the preconditioned means, indicating the involvement of quorum sensing in this interaction. Furthermore, we observed a phenomenon that cytotoxic cells is not produced by AI-3.
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Culler, Hebert Fabricio. "Formação de biofilme por Escherichia coli enteropatogênica atípica." Universidade de São Paulo, 2010. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-17082010-122633/.
Full textAbstract:
As Escherichia coli enteropatogênica atípicas (EPECa) são capazes de causar a lesão A/E e não transportam o pEAF. Biofilmes microbianos são definidos como comunidades complexas formadas por microrganismos aderidos a superfícies envoltas por uma matriz de exopolissacarídeos. O objetivo deste estudo foi verificar a capacidade de formação de biofilme de 92 amostras de EPEC atípicas em superfícies abióticas e células pré-fixadas, utilizando três metodologias (contagem de UFC/cm2), ensaio colorimétrico com cristal violeta e CLSM). O gene shf e bfpA parecem não ter relação com a formação de biofilme. Não houve diferença significativa de formação de biofilme nas superfícies testadas. Através de CLSM foi possível verificar a formação de biofilme em EPECa. Os biofilmes visualizados em CLSM revelaram uma grande heterogeneidade das amostras. Uma metodologia qualitativa, como CLSM deve ser empregada para indicar a formação de biofilme. A adesão e formação de biofilme por EPEC atípica de longo período pode ser uma possível explicação para os casos de diarréia persistente.The atypical Escherichia coli enteropathogenic (EPECa) are capable to cause the lesion A/E and they don\'t transport the pEAF. Microbial biofilms are defined as complex communities formed by microrganisms adhered to surfaces embedded in an exopolysacharidic matrix. The objective of this study was to verify the capacity of formation of biofilm of 92 strains of atypical EPEC in abiotics and pre-fixed cells surfaces, using three methodologies (counting of UFC/cm2), colorimetric assay with violet crystal and CLSM). The gene shf and bfpA seem not to have relationship with the biofilm formation. There was not significant difference of biofilm formation in the tested surfaces. Through CLSM it was possible to verify the biofilm formation in EPECa. The biofilms visualized in CLSM revealed a great heterogeneity of the strains. A qualitative methodology, like CLSM should be used to indicate the biofilm formation. The adhesion and biofilm formation for atypical EPEC of long period can be a possible explanation for the cases of persistent diarrhea.
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Muñoz, Pedro Felipe Neves de. "Degeneração atípica: uma incursão ao arquivo de Elza." reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, 2010. https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/6099.
Full textAbstract:
Made available in DSpace on 2013-01-07T15:55:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2
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28.pdf: 2021618 bytes, checksum: 1abe144a89ab2af917ac42b767794e7b (MD5)
Previous issue date: 2010Esta investigação histórica da teoria e prática psiquiátrica no Brasil pretende analisar os Estados Atípicos de Degeneração, um grupo de categorias diagnósticas sugerido pela Classificação Psiquiátrica da Sociedade Brasileira de Psiquiatria, Neurologia e Medicina-Legal, em 1910. Para realização deste estudo, selecionamos um caso clínico específico do Pavilhão de Observação, instituição que se localizava no complexo do antigo Hospício Nacional de Alienados, responsável pelo ensino de psiquiatria e triagem de pacientes. Este caso versa sobre uma mulher alemã, denominada em nossa pesquisa de Elza, que se envolveu em uma trama de intrigas que culminou em sua internação no Pavilhão de Observação, em junho de 1925, através da polícia e a pedido do marido, sob a alegação de abandono do lar conjugal, adultério e suspeita de loucura. No Pavilhão, Elza foi diagnosticada como portadora de um estado atípico de degeneração, com síndrome paranóide de interpretação e delírio de ciúmes , conseguindo sair de lá através de um habeas corpus. Nosso principal objetivo é analisar as relações entre gênero, prática psiquiátrica e degeneração atípica, através de uma incursão no arquivo de Elza, caracterizado por uma rede de discursos que articularam disputas por autoridade e verdade entre os diferentes protagonistas do caso. Nesse sentido, seguindo o curso das atipicidades desta história, nós iremos debater as diferenças culturais, questões de classe social, gênero e direitos civis dos homens e mulheres na legislação brasileira e alemã, nas primeiras décadas do século XX.
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Castilhone, Caroline Arantes Magalhães. "Enterohemolisina de Escherichia coli enteropatogênica atípica: novas características fenotípicas." Universidade de São Paulo, 2008. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-03062008-182407/.
Full textAbstract:
EPEC atípicas (EPECa) são isoladas de surtos diarréicos em crianças, adultos e animais em países industrializados e em desenvolvimento. Hemolisinas são toxinas que atuam sobre a membrana de eritrócitos e de diversos tipos celulares. Tal grupo de toxinas é reconhecido como importante fator de virulência envolvido na patogênese bacteriana, por isso o objetivo foi avaliar a expressão de enterohemolisina em isolados de EPECa e analisar características fenotípicas como interferência do meio de cultivo e adesão a componentes de matriz extracelular. Observou-se prevalência de 5,4% de isolados enterohemolíticos, e variações na expressão da toxina foram associadas à concentrações de lactose e caseína nos meios de cultivo. Além disso, verificou-se forte associação entre produção de enterohemolisina e ligação à fibronectina celular.Atypical EPEC (aEPEC) are isolated from diarrheal outbreaks in children, adults and animals in industrialized and developing countries. Hemolysins are toxins that act on the red cell membrane and various cell types. This group of toxins is recognized as an important virulence factor involved in the bacterial pathogenesis. The aim of this study was the evaluation of the enterohemolysin expression in aEPEC isolates as interference of the culture media and adhesion to components of extracellular matrix. The prevalence of enterohemolytic isolates was 5.4%, and variations in toxin expression were associated with lactose and casein concentrations in culture media. Moreover, it was found association between production of enterohemolysin and adhesion to cellular fibronectin.
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González, Luna Alejandro, Pizarro Jorge Luis Nuñez, and Echegaray Clodo Iván Rodríguez. "Presentación atípica del síndrome de Gorham-Stout. Caso clínico." Sociedad Argentina de Pediatría, 2015. http://hdl.handle.net/10757/555429.
Full textAbstract:
Gorham-Stout syndrome is an extremely rare pathology, of unknown etiology. It is characterized by proliferation of vascular channels that causes destruction and reabsorption of the bone matrix. We present a nine year-old male patient with an acute episode characterized by fever, chest pain, respiratory distress and dyspnea. The patient was submitted to computed tomography scan and a biopsy. The findings in the biopsy were multiple lytic lesions, osteolysis, and a mediastinal lymphangioma (lymphangiomatosis). The diagnosis was Gorham-Stout syndrome with atypical presentation.jorgeluisnp@gmail.com
El síndrome de Gorham-Stout es una patología ósea extremadamente rara de etiología desconocida, caracterizada histopatológicamente por proliferación de los canales vasculares, que origina destrucción y resorción de la matriz ósea. Se presenta el caso de un paciente varón de nueve años de edad con un cuadro agudo caracterizado por fiebre, dolor torácico, dificultad respiratoria y disnea ante pequeños esfuerzos. Se realizaron estudios de imágenes y patología, en los que se encontraron lesiones liticas múltiples y presencia de un linfangioma mediastínico. Se diagnosticó síndrome de Gorham-Stout. Esta es una presentación atípica debido a la localización de la linfangiomatosis y al tamaño de la masa.
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Machado, Júnior Almiro José 1975. "Estudo cefalométrico em telerradiografia lateral de crianças com deglutição atípica." [s.n.], 2012. http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/309346.
Full textAbstract:
Orientador: Agrício Nubiato CrespoTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas
Made available in DSpace on 2018-08-19T19:16:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MachadoJunior_AlmiroJose_D.pdf: 1095965 bytes, checksum: 92816607e4e1b74ea207d920583c774b (MD5) Previous issue date: 2012
Resumo: A permanência da deglutição infantil após a troca dos dentes decíduos é classificada como deglutição atípica e vem sendo atribuída à sucção sem fins nutritivos, alimentação por mamadeira, respiração oral e alterações anatômicas. Estudos têm avaliado padrões cefalométricos em respiradores orais, nas diferentes maloclusões, em diferentes tipos faciais, em malformações orofaciais, e na anatomia da via aérea faríngea. Entretanto há reduzido número de estudos que avaliam possíveis alterações cefalométricas em crianças com deglutição atípica, sem que fossem observadas diferenças com o grupo de deglutição normal. O objetivo deste estudo foi avaliar possíveis alterações cefalométricas em telerradiografias de crianças com deglutição atípica na dentição mista fisiológica. Métodos: Por meio de análise cefalométrica em telerradiografias laterais foram mensuradas as distância entre H (hióide) e MP (plano mandibular) e H (hióide) e T (túber), via aérea inferior (PAS), e os ângulos formados entre plano palatino e plano oclusal (PP-PO), plano palatino e plano mandibular (PP-MP) , plano oclusal e plano mandibular (PO-MP), plano e ramo mandibular (MA), plano de Frankfurt e processo odontóide (CC1), linha SN (sela - násio) e processo odontóide (CC2) em dois grupos : grupo experimental (deglutição atípica) e grupo controle (deglutição normal), ambos na dentição mista fisiológica. Tais medidas foram submetidas ao teste estatístico Mann-Whitney com nível de significância de 5%. Resultados: a diferença média da variável MP-H foi de 4 mm, da medida T-H foi de 7 mm, da medida PAS foi de 3mm, da medida MA foi de 3 graus; para as medidas CC1 e CC2 a diferença média foi de 4 e 5 graus respectivamente. Houve diferença estatísticamente significante destas variáveis entre os grupos estudados. Para as medidas PP-PO, PP-PM, PO-PM, não houve diferenças significativas. Conclusões: a medida radiográfica do osso hióide está alterada no grupo de deglutição atípica, em posição mais baixa e mais posterior; a medida PAS é menor no grupo de deglutição atípica; as medidas verticais da face não estão alteradas; o ângulo mandibular está aumentado no grupo de deglutição atípica e há rotação posterior do crânio no grupo de deglutição atípica
Abstract: The permanence of the child swallowing after the exchange of primary teeth is classified as atypical swallowing and has been attributed to non-profit nutritional sucking, bottle feeding, mouth breathing and anatomical changes. Cephalometric studies have examined patterns in mouth breathers, in different malocclusions, in different facial types, in orofacial malformations, and pharyngeal airway anatomy, without consensus among the studies. However there are few studies evaluating possible cephalometric changes in children with atypical swallowing. Without differences were observed with the group of normal swallowing. The aim of this study was to assess possible changes in cephalometric radiographs of children with atypical deglutition in physiological mixed dentition. Methods: By means of cephalometric analysis on lateral cephalograms were measured distance between the H (hyoid) and MP (mandibular plane) and H (hyoid) and T (tuber), lower airway (PAS), and the angles between the palatal plane and occlusal plane (PP-PO), palatal plane and mandibular plane (PP-MP), occlusal plane and mandibular plane (PO-PM), and mandibular plane (MA), the Frankfurt plane, and odontoid process (CC1) line SN (sella - nasion) and the odontoid process (CC2) into two groups: experimental group (tongue thrusting) and control group (normal swallowing), both in physiological mixed dentition. These measures were submitted to Mann-Whitney statistical test with a significance level of 5%.Results: The mean difference of the variable MP-H was 4 mm, the TH was measured 7 mm, the measured SBP was 3 mm, the measure was 3 MA degrees, for CC1 and CC2 measures the average difference was 4 and 5 degrees respectively. There was a statistically significant difference of these variables between the groups. For measures PO-PP, PP-AM, AM-PO, no significant differences. Conclusions: the radiographic measurement of the hyoid bone is altered in the group of atypical swallowing, being higher and more later; PAS is lower in the group of atypical swallowing; the vertical measurements of the face are not changed; mandibular angle is increased in the group of atypical swallowing; there is posterior rotation of the skull in the group of atypical swallowing
Doutorado
Ciencias Biomedicas
Doutor em Ciências Médicas
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Nára, Júlia Mitico. "Adesinas fimbriais em Escherichia coli enteropatogênica atípica: prevalência e proteômica." Universidade de São Paulo, 2012. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-19092012-090153/.
Full textAbstract:
EPECa apresenta padrões de aderência localizado-like (LAL), agregativo (AA), difuso (DA), indeterminado ou são não aderentes (NA) em células epiteliais in vitro. Como esses fenótipos de aderência são também observados em outros patotipos de E. coli, o objetivo foi pesquisar nas EPECa a presença de genes de adesinas encontrados em outras E. coli patogênicas e analisar comparativamente por proteoma os extratos protéicos dos isolados BA320 (LAL), Ec292/84 (AA), 9100-83 (DA) e BA4013 (NA). Neste estudo, observou-se a presença de diferentes estruturas filamentosas ancoradas a superfície nos quatro isolados e a presença dos genes fimA, fimH, papA, ecpA, ldaH, pilS, daaC, sfpA, lpfAO113 e os variantes polimórficos (lpfA1 e lpfA2). Por proteômica foram identificadas as proteínas H-NS, OmpX, Usp, FucU, MglB e uma possível proteína filamentosa nos isolados de fenótipos de adesão LAL, AA e DA. Concluiu-se que, os genes das fímbrias tipo 1 e ECP são altamente prevalentes nas EPECa e as proteínas identificadas podem estar associadas ao processo de adesão das bactérias.aEPEC is classified according to its adhesion in vitro pattern in localized-like (LAL), aggregative (AA), diffuse (DA), and indeterminate adherence patterns as well as nonadherent (NA) strain. Since some aEPEC display the adherence phenotype observed for other pathotypes of E. coli, the aim was to investigate, in aEPEC, the presence of adhesin genes present in other pathogenic E. coli and analyze, by comparative proteomic analyses, the protein extracts isolated from BA320 (LAL), Ec292/84 (AA), 9100-83 (DA) and BA4013 (NA). We observed the presence of different filamentous structures anchored to aEPEC surface and presence of fimA, fimH, papA, ecpA, ldaH, pilS, daaC, sfpA, lpfAO113 genes and polymorphic variants (lpfA1 and lpfA2). By proteomic analyses the proteins H-NS, OmpX, FucU, MglB were identified and a putative filamentous protein was found in aEPEC with the phenotypes LAL, AA and DA. We conclude that the genes encoding type 1 fimbriae and ECP pilus are highly prevalent in aEPEC, and the proteins identified can be associated to bacterial adhesion processes.
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Zamboni, Andresa [UNIFESP]. "Estudos genéticos sobre a virulência de Escherichia coli enteroagregativa atípica." Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2006. http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/9598.
Full textAbstract:
Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0
Previous issue date: 2006-12-31Escherichia coli enteroagregativa (EAEC) é um patógeno emergente, associado à doença diarréica, que apresenta como característica o padrão de adesão agregativo (AA) a superfície de células HEp-2. O fenótipo AA está associado à presença de um plasmídeo de 65 MDa, conhecido como plasmídeo pAA, detectado através de uma sonda genética denominada de CVD432 ou simplesmente AA. Algumas amostras de EAEC, entretanto, apresentam o padrão AA, mas não são portadoras do plasmídeo. No plasmídeo pAA estão presentes vários genes relacionados com as propriedades de virulência, dentre os quais aqueles que codificam as adesinas fimbrias AAF (“Aggregative Adherence Factor” - AAF/I, AAF/II e AAF/III), o regulador de transcrição AggR, a proteína antiagregação (Aap) e as toxinas Pet e EAST1. Outros fatores de virulência de EAEC são codificados por genes cromossômicos, entre eles, a enterotoxina ShET1, o sideróforo Yersiniabactin (irp2), uma ORF críptica (Shf), e uma a-hemolisina. A maioria dos estudos sobre mecanismos de virulência de EAEC compreende amostras que apresentam o padrão AA e que reagem com a sonda AA, ou seja, as amostras de EAEC típicas. Pouco se conhece sobre a presença de potenciais fatores de virulência em amostras de EAEC sonda-negativas, descritas por nós como EAEC atípicas. Neste estudo analisamos 28 amostras de EAEC atípicas isoladas de crianças com diarréia (N = 18) e sem diarréia (N = 10) provenientes de várias cidades brasileiras quanto à presença de seqüências genéticas associadas aos fatores de virulência codificados no plasmídeo pAA e no cromossomo. A maioria das amostras era portadora de dois ou mais genes de virulência, sendo a média dois; porém, duas amostras controles foram negativas para todos os marcadores de virulência pesquisados. Os genes astA, pet, shf, shET/1/pic, irp2 e hly foram encontrados mais freqüentemente em amostras isoladas de casos do que de controles. Quatro amostras apresentaram o gene aggR e em uma delas foi encontrado também as seqüências genéticas aafA e aap. A combinação dos genes astA e shf, foi encontrada em 16 (57%) amostras e 7 (25%) amostras eram portadoras das sequências genéticas astA, shf e irp2.Entre as amostras estudadas, os marcadores genéticos codificados por genes plasmidiais, astA, relacionada a produção de EAST1, e shf associada a uma ORF críptica, foram os mais freqüentes (61%) e apresentaram uma freqüência significantemente maior nos casos do que nos controles estudados (P = 0,003 e P = 0,020, respectivamente). A maioria das amostras de EAEC atípicas estudadas reagiu com um dos 175 antissoros utilizados, sendo que alguns desses, como os sorogrupos O42, O126 e O162 foram os mais freqüentes e encontrados apenas nas amostras isoladas de casos. A análise do perfil plasmidial de 12 amostras isoladas de crianças com diarréia mostrou a presença de mais de um plasmídeo de alto peso molecular na maioria das amostras estudadas. Duas amostras, uma contendo apenas um plasmídeo e uma outra sem nenhum plasmídeo foram então selecionadas para caracterização dos genes envolvidos no padrão AA. A amostra RN691-2 portadora de um único plasmídeo e apresentando resistência antimicrobiana múltipla, foi submetida a experimentos de transformação, conjugação e cura, não sendo possível à obtenção de um transformante, transconjugante ou mesmo a amostra isogênica sem o plasmídeo. Com o objetivo de identificar o(s) gene(s) envolvidos no padrão AA da amostra RN153-1, sem nenhum plasmídeo, foi construída uma biblioteca genômica e identificado um clone-cosmídeo, designado pVIII-F-1, que apresentou o padrão AA em células HEp-2 de maneira semelhante à amostra selvagem. Para localizar o gene necessário para a adesão, o clone cosmídeo foi submetido a mutagênese com o transposon mini-Tn10 (CmR), sendo identificado o mutante pVIII-F-1
Escherichia coli enteroaggregative (EAEC) is emerging as a significant diarrheal pathogen. EAEC is defined by its characteristic “stacked brick” aggregative adherence (AA) pattern of adherence to HEp-2 cells. Most EAEC strains harbor a 60 to 65-MDa virulence plasmid (pAA). A 1-Kb fragment of pAA, referred to as the AA probe or CVD432, has been widely used for epidemiological studies. The pAA also encodes AA fimbrae (AAF) I, II, and III; the transcriptional activator AggR; enteroaggregative heatstable enterotoxin 1 (EAST1); a 104-KDa cytotoxin designated Pet; the cryptic secreted protein Shf; and a novel antiaggregation protein (dispersin) encoded by the aap gene. In addition to the pAA plasmid, some EAEC strains express putative virulence factors that are encoded on the chromosome, including a 116-KDa secreted mucinase (Pic), yersiniabactin (Irp2), and the E. coli a-hemolysin (a-Hly). Shigella enterotoxin 1 (ShET1) is encoded by the antisense strand of the pic gene. Few studies have evaluated the prevalence of EAEC markers in probe-negative strains, reported by us as atypical EAEC. By using atypical EAEC strains isolated in a case-control study, we assessed the prevalence of putative virulence factors, such as AAF/I, AAF/II, AAF/III, AggR, Aap, EAST-1, Pet, Shf, ShET1/Pic, Irp2, and a-Hly, in an attempt to identify their roles as enteric virulence factors. The majority of strains carried two or more of the genes, with two being the modal value; but two strains isolated from a control did not test positive for any of the factors. The AAF, aggR, and aap genes were present in only a minority of strains. The astA, pet, shf, ShET1/pic, irp2 and hly genes were found more frequently in the patients than in the controls. The combination astA and shf was found in 16 strains (57%), followed by 7 strains (25%) possessing the combination astA, shf, and irp2. The common virulence markers found in strains included the Pet, EAST1, Shf, Irp2, ShET1/Pic, and Hly virulence markers. EAST1 and Shf were the most frequently detected markers (61%) in strains and were found to be significantly associated with diarrhea (P = 0,003 and P = 0,020, respectively). The majority (75%) of the EAEC isolates reacted with one of the antisera used. It was interesting that the strains belonging to serogroups O42, O126 and O162 were detected only in children with diarrhea.Plasmid analysis of 12 strains isolated from diarrhea showed that the majority of strains contained large plasmids. Two strains, one carrying only one plasmid (MA691-2) and another one any plasmid (RN153-1), were chosen for genetic studies on the identification of genes responsible for the AA phenotype. Plasmid from MA691-2 strain was transferred to E. coli K12 and no transformant or transconjugant harboring the plasmid or isogenic derivative strain lacking the plasmid was identified. A genomic cosmid library of EAEC RN153-1 was generated in E. coli K12, and the resulting clones were screened for aggregative adherence to HEp-2 cells. One cosmid clone, pVIII-F-1, exhibited the same adherence as the wild-type, albeit to a lesser extent. Transposon mutagenesis was utilized to identify the region of cosmid pVIII-F-1 responsible for the aggregative phenotype. Plasmid pBSL181 carrying mini-Tn10
TEDE
BV UNIFESP: Teses e dissertações
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Munhoz, Danielle Dias. "Expressão e produção da fímbria ECP por Escherichia coli enteropatogênica atípica." Universidade de São Paulo, 2015. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-24022016-094800/.
Full textAbstract:
E. coli enteropatogênica atípica (aEPEC) é um importante patótipo causador de diarréia. As cepas de aEPEC não produzem BFP, sugerindo que outras fimbriais estão envolvidas na adesão de aEPEC ao hospedeiro. ECP é encontrada na maioria das cepas patogênicas e não patogênicas de E. coli. O objetivo do estudo foi avaliar a expressão e produção de ECP em cepas de aEPEC. A presença do operon ecp foi avaliada por PCR e a expressão avaliada por PCR utilizando cDNA obtido a partir do cultivo bacteriano em LB, DMEM e DMEM pré-condicionado. A produção de ECP foi avaliada por imunofluorescência. Foi observado que a expressão, por todas as cepas, só ocorreu quando foram cultivadas em DMEM pré-condicionado. Houve expressão diferencial do operon com o cultivo em LB ou DMEM. A produção de ECP foi observada apenas puma cepa quando cultivada em LB. Já em DMEM, três cepas produziram ECP. Houve um aumento do número de cepas produtoras da fímbria com o cultivo em DMEM pre condicionado. Esses resultados sugerem que a sinalização celular pode interferir na expressão e produção da ECP.Atypical enteropathogenic E. coli (aEPEC) is an pathotype that causes diarrhea. aEPEC does not produce BFP, suggesting that other pili must be involved in aEPEC adhesion to the host cell. ECP is found in most pathogenic and non-pathogenic E. coli. The objective of this study was to evaluate the expression and production of ECP in aEPEC. The presence of ecp operon was assessed by PCR and the expression evaluated by PCR using cDNA obtained from bacterial growth in LB, DMEM and preconditioned DMEM. ECP production was evaluated by immunofluorescence. It was observed that the operon expression by all strains only occurred when they were grown in preconditioned DMEM. There was differential expression of ecp operon when strains were grown in LB or DMEM. ECP production was observed only by one strain when grown in LB. Three strains producted ECP grown in DMEM, but there was a higher production of the pili when strains were grown in DMEM preconditionated. These results suggest that cellular signaling may interfere with the expression and production of ECP.
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Rocha, Sérgio Paulo Dejato da. "Análise estrutural e funcional da região LEE de Escherichia coli enteropatogênica atípica." Universidade de São Paulo, 2010. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-05102010-154953/.
Full textAbstract:
aEPEC é capaz de causar lesão A/E, provocada por proteínas codificadas na região LEE. Foi realizada a análise estrutural e funcional da região LEE de amostras de aEPEC que expressam os padrões ALL, AA e AD, e amostra não aderente (NA). O padrão de adesão característico e capacidade de causar a lesão A/E foram investigados em células epiteliais. As amostras mantiveram o padrão de adesão independentemente da origem da linhagem celular. A lesão A/E foi detectada em algumas linhagens celulares após o contato com as amostras ALL e AD. A presença da região LEE foi detectada intacta e ensaios de PCR em tempo real, microarray e imunodetecção, mostrando a funcionalidade da mesma em todas as amostras. Um plasmídio que expressa a proteína EspFu foi introduzido em todas as 4 amostras, demonstrando não influenciar nos padrões de adesão e nem na capacidade de causar a lesão A/E nas amostras ALL, AA e AD. Mas, a amostra NA expressou o padrão ALL e foi capaz de causar a lesão A/E. Assim, EspFu desempenhou papel na adesão celular além do estabelecimento da lesão A/E in vitro.aEPEC is capable to cause A/E lesion, triggered by proteins encoded by LEE region. We analyzed structurally and functionally the LEE region of aEPEC strains displaying LAL, AA, DA, and one nonadherent (NA) strain. The adherence characteristics and ability to cause A/E were investigated in epithelial cells. The displayed adherence patterns were independent of the cell line origin. A/E lesion was detected in some cellular lines after contact only with ALL- and AD-strains. LEE region presence was detected intact and real time PCR, microarray and immunodetection, in all samples tested. An EspFu-expressing plasmid was introduced in all strains, demonstrating no influence of this protein neither in the adherence patterns nor in the capacity to cause A/E of the LAL-, AA- and DA-strains. But, NA-strain expressed the LAL pattern and was able to cause A/E. Therefore, EspFu was shown to play a role in cell adhesion in addition to the establishment of the A/E lesion in vitro.
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Bianchi, Matheus Viezzer. "Caracterização de um surto de doença das mucosas atípica por BVDV-1d." reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS, 2016. http://hdl.handle.net/10183/135522.
Full textAbstract:
O vírus da diarreia viral bovina (BVDV) é um Pestivirus, pertencente à família Flaviviridae, o qual é dividido em dois genótipos ou espécies (BVDV-1 e BVDV-2), e em pelo menos 20 subgenótipos de BVDV-1 (1a-1t) e três de BVDV-2 (2a-2c). O BVDV também pode ser classificado em biótipos [citopático(cp) e não-citopático (ncp)]. As perdas reprodutivas podem ser a consequência econômica mais importante da infecção. A infecção persistente (PI) pode ocorrer quando há uma infecção entre os 42 e 125 dias de gestação, e se o feto sobreviver, o bezerro será imunotolerante ao vírus e como resultado pode desenvolver doença das mucosas (DM). O objetivo desse estudo é descrever um surto de infecção por BVDV-1d em bezerros de corte que apresentaram lesões de DM atípica, abordando aspectos clínicos, epidemiológicos, virológicos e patológicos. O surto ocorreu em uma propriedade rural de bovinos de corte Angus localizada em Glorinha, Rio Grande do Sul, Brasil. Em um intervalo de 15 dias, 11 de 164 bezerros apresentaram sinais clínicos de anorexia, sialorreia acentuada, perda de peso e andar rígido com claudicação, progredindo para decúbito e morte em um curso clínico de sete dias. Todos esses 11 bezerros apresentavam em mucosa oral e nasal, região interdigital de membros torácicos e pélvicos extensas áreas de ulceração. Três bezerros foram necropsiados: úlceras orais e nasais foram observadas, frequentemente envolvendo gengiva, palato duro, palato mole e plano nasal; ulcerações lineares multifocais na língua, esôfago e rúmen; e também ulcerações multifocais arredondadas no abomaso. Além disso, o bezerro #2 exibiu na pele de regiões ventrais do corpo espessamento difuso com formação crostosa acentuada, ocasionalmente áreas de ulceração. Microscopicamente, as lesões ulcerativas em mucosas e pele consistiam em necrose superficial, com numerosas células apoptóticas, células epiteliais vacuolizadas e hiperqueratose paraqueratótica difusa acentuada. O exame imuno-histoquímico (IHQ) da pele dos três bezerros evidenciou acentuada imunomarcação no citoplasma de células epiteliais, enquanto na mucosa oral evidenciou moderada a acentuada imunomarcação. Todos os 11 bezerros mortos foram positivos no RT-PCR para detecção do Pestivirus, assim como outros 11 bezerros vivos (de 387 animais restantes no rebanho). Após quatro semanas, os exames de RT-PCR e IHQ dos 11 bezerros vivos foram repetidos com resultados positivos, comprovando o status de animais PI. O sequenciamento de partes do genoma determinou que todos animais haviam sido infectados por um BVDV- 1 do subgenótipo “d”. BVDV cp foi isolado das amostras de 8 bezerros mortos; enquanto apenas BVDV ncp foi isolado de amostras dos 11 bezerros vivos. Os achados patológicos, moleculares e virológicos permitiram concluir que esse foi um surto de DM atípico em bezerros causado por BVDV-1d com lesões restritas ao trato alimentar superior e pele. Como as características epidemiológicas e clínicas de doenças vesiculares podem ser muito similares ao observado, recomenda-se que os testes diagnósticos específicos para BVDV (histopatologia, IHQ e RT-PCR) sejam empregados rotineiramente na necropsia em surtos com lesões atípicas similares em bovinos.Bovine viral diarrhea virus (BVDV) is a Pestivirus, belonging to the Flaviviridae family, also divided in two genotypes or species (BVDV-1 and BVDV-2), and in at least 20 subgenotypes of BVDV-1 (1a-1t) and three of BVDV-2 (2a-2c). BVDV can also be classified into biotypes (cytopathic and noncytopathic). Reproductive losses may be the most economically important consequence of the infection. Persistent infection (PI) may occur when there is an infection between 42 and 125 days of gestation, and if the fetus survives, the calf will be immunotolerant to the virus and a possible outcome is mucosal disease (DM). The aim of this study is to describe an outbreak of BVDV-1d infection in calves of a beef herd cattle that presented atypical DM lesions, with a clinical, epidemiological, virological and pathological approach. The outbreak occurred in a beef Angus cattle farm located in Glorinha, Rio Grande do Sul state, Brazil. Within 15 days, 11 of 164 calves presented clinical signs of anorexia, severe sialorrhoea, weight loss and stiff gait with lameness, progressing to recumbency, and death in a clinical course of seven days. All these 11 calves presented in oral and nasal mucosa, interdigital region of thoracic and pelvic limbs extensive areas of ulceration. Three calves were necropsied: oral and nasal ulcers were observed, often involving gingiva, hard palate, soft palate and nasal planum; multifocal linear ulcerations in tongue, esophagus and rumen; and also rounded multifocal ulcerations in the abomasum. In addition, calf #2 showed diffuse thickening of the skin with severe crust formation, occasionally ulceration, in ventral body regions. Microscopically, ulcerative lesions observed in mucosas and cutaneous lesions consisted of superficial necrosis, with numerous apoptotic cells, vacuolation of epithelial cells and severe diffuse parakeratotic hyperkeratosis. Immunohistochemistry (IHC) of skin of the three calves showed severe immunostaining in the cytoplasm of epithelial cells, while oral mucosa showed moderate to severe immunostaining. All 11 dead calves were positive in RT-PCR for detection of Pestivirus along with other 11 live calves (from 387 remaining animals from herd). After four week, RT-PCR and IHC of these 11 live animals were repeated with positive results, which prove the PI status of these animals. All animals were infected by BVDV-1 of subgenotype ”d” according to parts of the genome of the virus that were sequenced.. Cytopathic BVDV was isolated from samples of 8 dead calves; only non-cytophatic BVDV were isolated from samples of 11 live animals. Pathological, molecular and virological findings allowed us to conclude that this was an outbreak of atypical DM in calves caused by BVDV-1d with lesions restricted to the upper alimentary system and skin. Since epidemiological and clinical features of vesicular diseases may be very similar to what was observed, it is recommended that BVDV diagnostic tests (histopathology, IHC and RT-PCR) should be routinely included in the necropsy workup in outbreaks with similar atypical lesions in cattle.
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Terrones-Campos, Cynthia, Teresa Andrade, Arnaldo Lachira, Omar Valladolid, and Claudio F. Lanata. "Toxocariosis atípica: reporte de un caso en la costa norte del Perú." Instituto Nacional de Salud (INS), 2014. http://hdl.handle.net/10757/314463.
Full textAbstract:
Se presenta el caso de un varón de cuatro años y medio con toxocariosis atípica, procedente de La Matanza, Morropón,
Piura. El paciente presentó síntomas inespecíficos durante nueve días; la sospecha de toxocariosis derivó del hallazgo
de eosinofilia periférica marcada (15% ó 1470 células/μL) en el hemograma. El diagnóstico se confirmó por serología
mediante el método de enzimoinmunoanálisis (ELISA) demostrando la presencia de anticuerpos anti-Toxocara de tipo
IgG, así como de tipo IgM. El cuadro se autolimitó antes de que el paciente recibiera tratamiento con albendazol 15mg/
kg/día durante cinco días.We present the case of a 4.5 years old boy with atypic toxocariasis, from La Matanza, Morropon, Piura. The patient had non-specific symptoms during 9 days. Suspicion of Toxocariasis was supported by marked eosinophilia in the cell blood count (15% or 1470 cells/μL). Diagnosis was confirmed by laboratory with ELISA serology demonstrating the presence of IgG and IgM anti-Toxocara antibodies. Symptoms receded before the patient received a five-day treatment with albendazol 15mg/kg/day.
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Hernandes, Rodrigo Tavanelli [UNIFESP]. "Estudo da aderência localizada de uma amostra de Escherichia coli enteropatogênica atípica." Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2006. http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/21543.
Full textAbstract:
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Previous issue date: 2006Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) compreende uma das seis categorias diarreiogênicas da espécie. Atualmente, ela é dividida em duas subcategorias, EPEC típica (tEPEC) e EPEC atípica (aEPEC), tendo por base a presença do plasmídio EAF (EPEC adherence factor), que só ocorre entre as tEPEC. As EPEC promovem, no epitélio intestinal, a lesão attaching and effacing (A/E), cujos determinantes genéticos estão localizados em uma ilha de patogenicidade denominada região LEE (locus of enterocyte effacement). Um dos genes presentes nessa região, o gene eae, codifica uma proteína de membrana externa (intimina) responsável pela aderência íntima às células intestinais, observada na lesão A/E. Uma característica fenotípica marcante das tEPEC é a produção do padrão de adesão localizada (AL), no qual são observadas microcolônias bacterianas compactas sobre células HeLa e HEp-2, após 3 horas de contato. O padrão AL está associado com a expressão da fímbria denominada bundle-forming pilus (BFP), que é codificada pelo plasmídio EAF e promove agregação bactéria-bactéria, dentro das microcolônias, bem como a interação inicial, que precede a aderência íntima mediada por intimina. Por outro lado, a maioria das aEPEC promove a formação de microcolônias mais frouxas, após ensaios mais prolongados (ensaios de 6 horas), o que caracteriza a chamada adesão semelhante à AL (AL-like). Durante um estudo anterior, sobre o potencial de virulência de 59 amostras de aEPEC, foi observado que 9 delas produziam AL típica (em 6 horas), mesmo na ausência de BFP. Após um amplo estudo das suas características fenotipicas e genotipicas, uma amostra (1551-2) foi selecionada para a identificação da estrutura responsável pela formação de microcolônias compactas. Ensaios de microscopia eletrônica revelaram que o padrão AL da amostra 1551-2 refletia bactérias internalizadas e que um mutante não-polar em eae (1551-2:eae- ), perdia essa propriedade, embora continuasse aderindo de forma difusa (AD). O seqüenciamento da região variável do gene eae revelou que a intimina da amostra 1551-2 pertence ao subtipo omicron (ο). Para caracterizar a adesina responsável pela AD no mutante 1551-2:eae- , foram obtidos mutantes não aderentes utilizando-se o transposon Mini-Tn10. Um desses mutantes foi empregado para a absorção de um soro produzido com a amostra 1551- 2:eae- Esse soro foi capaz de inibir a adesão da amostra 1551-2:eae- a células HeLa e, em ensaios de immunoblot, revelou uma banda de aproximadamente 25 kDa. Podemos concluir que o padrão AL da amostra 1551-2 reflete um processo de internalização provavelmente mediado por intimina, e que novos fatores de virulência, possivelmente uma proteína de ~25 kDa, poderiam desempenhar importante papel na interação de amostras de aEPEC in vitro.
Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) comprise one of the 6 diarrheagenic categories of the species. Presently, it is sub-grouped into two sub-categories, typical EPEC (tEPEC) and atypical EPEC (aEPEC), based on the presence of the EAF (EPEC adherence factor) plasmid, which occurs only in tEPEC. EPEC promote, in the intestinal epithelium, an attaching and effacing lesion (A/E) whose genetic determinants are located in a pathogenicity island named LEE (locus of enterocyte effacement). One of the LEE genes, the eae gene, encodes an outer membrane protein (intimin), which is responsible for the intimate adherence to the intestinal cells, observed in the A/E lesions. A marked phenotypic characteristic of tEPEC is the production of the localized pattern of adherence (LA), where compact bacterial microcolonies are detected on HeLa and HEp-2 cells, after 3 hours of contact. The LA pattern is associated with the expression of the bundle-forming pilus (BFP), which is encoded on the EAF plasmid and promotes bacterium-bacterium aggregation within the microcolonies as well as the initial interaction that precedes the intimate adherence by intimin. On the other hand, most aEPEC form microcolonies looser than those seen in LA, after more prolonged assays (6 h assays), a phenotype that characterizes the so called LA-like pattern of adherence. During a previous study on the virulence potential of 59 strains of aEPEC, it was observed that 9 of them produced typical LA, even in the absence of BFP. After an ample analysis of their phenotypic and genotypic characteristics, one strain (1551-2) was selected for the identification of the structure responsible for compact microcolony formation in this strain. Electron microscopy assays have revealed that the LA pattern of strain 1551-2 reflected, in fact, internalized bacteria, and that a non-polar mutant in eae (1551-2:eae- ), had lost this property but maintained a strong diffuse adherence. Sequencing experiments of the variable region of the 1551-2 intimin molecule revealed that it corresponds to intimin subtype omicron (ο). To further characterize the adhesin responsible for the diffuse adherence phenotype in strain 1551-2:eae- , non-adherent mutants were obtained by transposon mutagenesis with Mini-Tn10. One of these non-adherent mutants was then used to absorb an antiserum produced against strain 1551-2:eae- . This absorbed antiserum inhibited the diffuse adherence of strain 1551-2:eae- to HeLa cells and, in immunoblot experiments, it has revealed a protein band of approximately 25kDa. From the data presented in this study, it is possible to conclude that the LA phenotype of aEPEC strain 1551-2 comprises, rather, an internalization process probably mediated by intimin, and that novel virulence factors, possibly a ~25 kDa protein, could play an important role in the interaction of aEPEC strains in vitro.
BV UNIFESP: Teses e dissertações
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Junior, Afonso Gomes Abreu. "Caracterização da proteína Pic (protein involved in colonization) em Escherichia coli enteropatogênica atípica." Universidade de São Paulo, 2015. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-10062015-160611/.
Full textAbstract:
A serinoprotease Pic é uma proteína autotransportadora que apresenta papel importante na colonização da mucosa intestinal por E. coli enteroagregativa (EAEC). Uma cepa de E. coli enteropatogênica atípicas (aEPEC) albergando o gene pic foi detectada em um estudo prévio. O presente estudo teve como objetivo caracterizar a proteína Pic produzida por essa cepa de aEPEC (BA589). O gene pic em BA589 está presente em um plasmídeo de alto peso molecular (~98 kb) e o sequenciamento desse gene mostrou identidade de 99% com pic de EAEC 042. Pic da cepa BA589 (Pic589) foi capaz de clivar mucina bovina, hemaglutinar eritrócitos de coelho e clivar moléculas das três vias sistema complemento. O mutante BA589Dpic todas essas atividades in vitro. A cepa selvagem foi capaz de colonizar o intestino de camundongos tratados com estreptomicina, o que não foi observado com o mutante BA589Dpic. Desta forma, a serinoprotease Pic representa um fator de virulência adicional na cepa de aEPEC BA589, relacionada às etapas de adesão, colonização e evasão do sistema imune inato.The serine protease Pic is an autotransporter protein that plays an important role in the colonization of the intestinal mucosa by enteroaggregative E. coli (EAEC). An atypical enteropathogenic E. coli (aEPEC) strain harboring the pic gene has been detected in a previous study. The present study aimed to characterize the protein Pic produced by that aEPEC strain (BA589). In BA589 pic is located in a high molecular weight plasmid (~98 kb), and sequencing of this gene showed 99% identity with pic from EAEC 042. Pic from BA589 (Pic589) was able to cleave bovine mucin, hemagglutinate rabbit erythrocytes and cleave molecules of the three complement system pathways. The mutant BA589Dpic lost all these capacities. The wild type strain was able to colonize the intestine of streptomycin treated mice, which was not observed with the mutant BA589Dpic. Thus, the serine protease Pic represents an additional virulence factor in aEPEC strain BA589, associated with adherence, colonization and evasion of innate immune system.
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Porto, Sérgio Gilberto. "Ação rescisória atípica: instrumento de defesa da ordem jurídica : possibilidade jurídica e alcance." Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul, 2007. http://hdl.handle.net/10923/2482.
Full textAbstract:
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Previous issue date: 2007The 'ação rescisória (motion to alter the sentence)', according to the most representatives of the doctrine, has applies only to the situations code quoted in article 485 of the Code of Civil Procedure. From this point of view, the variety of admissible hypotheses is sealed. The Brazilian Constitution, on the other hand, offers to the parties certain written procedural garantees. The confront of these rules, considered a literal statute violation (art. 485, V Code of Civil Procedure) is capable of altering the sentence, ergo, also included, latu sensu, in the legal authorization of the Code of Civil Procedure. However, there are hypotheses in which certain constitutional procedural guarantees are not written in the Brazilian Constitution. Despite this circumstance, such hypotheses are still recognized as real clauses offered by the State to the parties in the litigations in regard to the open texture of some articles in the Brazilian Constitution. If these clauses for some reason would be disrespected, this woukd represent an error of constitutional order as serious as disrespecting the written clauses. The disrespect to the implicit garantees, as consequence, also lacks correction, as it could happen to the written garantees. It is possible to operate this correction even though the sentence which has this error has become unchangeable. In this case, the proper remedy to recognize this kind of mistake is the motion to alter the sentence because this motion has the power to invalid the prior decision which had constitutional error. It happens even when the violated guarantee is not written in the legal system and also when it does not represent, in a narrow sense, literal breaking of the law, but, according to systematic interpretation, when it characterizes breaking of the constitutional system and, therefore, susceptible of repairing. This circumstance shows the necessity of one adequate understanding of the idea of the legal possibility to alter the 'res judicata', once that the narrow conception could be able to matter in suppression of constitutional right. The proposal of this study follows the route of understanding the mechanism of amend the sentence as a way to protect the legal system. It makes no difference whether the garantee is implicit or explicit, thus it always is possible to modify the sentence in this point of view. This essay does not aim to underestimate the "Ação Rescisória" as just a tool to modify the sentence in the hypotheses of the procedure statute, assuming that the statute is not the only source of construction of the legal system. The judge has the capacity to develop the law exactly in order to surpass gaps or deficiencies.
A ação rescisória, segundo orientação de parcela representativa da doutrina processual, apenas tem cabimento nas hipóteses expressamente elencadas no artigo 485, do Código de Processo Civil, sendo, pois, para essa linha de pensamento, o rol de hipóteses de admissibilidade taxativo. A Constituição da República, de outro lado, oferece às partes certas garantias processuais, de regra, expressamente previstas. A afronta de tais cláusulas, por se enquadrarem no conceito de violação de literal disposição da lei (485, V, CPC), é capaz de ensejar a rescindibilidade do julgado, portanto, também incluídas, lato sensu, na previsão expressada pelo permissivo do Código de Processo Civil. Contudo, existem hipóteses em que certas garantias Constitucional-processuais não se encontram expressadas em nenhum dispositivo da Carta da república. Muito embora tal circunstância não deixam de ser reconhecidas, no plano material, como verdadeiras cláusulas assegurativas oferecidas pelo Estado às partes nos litígios, face à textura aberta da Carta Constitucional. Essas, se desrespeitadas representam vícios de ordem constitucional tal qual àquelas que são expressamente previstas.O desrespeito às garantias implícitas, como conseqüência, também enseja correção, assim como aquela que deve ser imposta ao desatendimento às garantias expressas. Essa correção é, pois, capaz de ser efetivada, muito embora a decisão que apresenta tal vício tenha passado em julgado. Nessa hipótese, o remédio adequado para reconhecimento da mácula é a demanda de cunho rescisório, eis que essa tem a capacidade de invalidar a sentença que contenha vício de constitucionalidade. Isso procede mesmo quando a garantia violada não se encontre explicitamente inserida na ordem constitucional e, por decorrência, não represente, em sentido estrito, literal violação de lei, mas, em interpretação sistemática, induvidosamente, caracterize violação à ordem jurídica constitucional e, portanto, passível de reparação. Essa circunstância demonstra a necessidade de uma adequada compreensão da idéia da possibilidade jurídica de rescindibilidade do julgado, vez que a visão estrita poderá importar em supressão de direito de natureza constitucional. A proposta, assim, a partir da constatação enunciada, em sua concepção teórica segue o rumo de compreender o sistema de rescindibilidade como forma de defesa da ordem jurídica, sejam seus comandos expressos ou implícitos. A Ação Rescisória, portanto, não é um mero instrumento de ataque à sentença passada em julgado em hipóteses previamente reconhecidas pelo legislador processual como viciadas, na medida em que a lei não é a única fonte de construção da ordem jurídica e dispõe o julgador de capacidade criativa de direito, justamente, para superar lacunas ou deficiências.
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Dulguer, Michelle Vanzella [UNIFESP]. "Estudo sobre a adesão da Escherichia coli enteropatogênica atípica O26:H11 a células epiteliais." Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2006. http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/21218.
Full textAbstract:
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Previous issue date: 2006Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
O sorogrupo O26 de Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) atípica é um dos sorogrupos mais frequentes implicados na diarréia infantil, sendo um sorogrupo muito comum também em amostras de E. coli enterohemorrágica (EHEC). O sorotipo mais frequente dentro do sorogrupo O26 tanto em amostras de EPEC quanto em amostras de EHEC é a O26:H11. Num recente estudo, amostras de EPEC atípica O26:H11 isoladas de crianças com diarréia apresentaram um padrão de adesão localizado (AL), porém eram desprovidas da fímbria BFP responsável pelo fenótipo AL das EPEC típicas. Uma dessas amostras, E. coli 22, foi escolhida para caracterização de seus determinantes genéticos. Foi construída uma biblioteca genômica da amostra 22 na E. coli DH5α e identificado um clone cosmídeo denominado pV-B-6, aderente a células HeLa. O clone pV-B-6 exibiu um padrão de adesão difusa (AD) sobre as células epiteliais, diferente da formação de microcolônias presentes na adesão AL apresentada pela amostra 22. O cosmídio pV-B-6 foi submetido a mutagênese utilizando o transposon mini-Tn10::kan e identificado um mutante não aderente (pV-B-6-Tn). Um fragmento de 2,3 kb EcoRI-HindIII contendo 1 kb do mini-Tn10 foi clonado, sendo identificado um gene, ldaH, que possuía 73% de identidade com a subunidade fimbrial faeH da de fímbria K88 ETEC. Essa região foi denominada de “locus for diffuse adherence” (lda). O presente trabalho teve como objetivo caracterizar a adesina codificada pelo locus lda, a qual é responsável por conferir o padrão AD a células HEp-2 na amostra pV-B-6. A análise em SDS-PAGE de extratos parcialmente purificados das amostras 22 e pV-B-6 mostrou uma banda protéica de aproximadamente 25 kDa, que estava ausente nos extratos do mutante pV-B-6-Tn. A proteína de 25 kDa foi cortada do gel, sendo determinado o sequenciamento da região amino-terminal. A sequência de aminoácidos correspondeu ‡ forma madura de LdaG, a principal subunidade estrutural da adesina. A expressão de Lda foi induzida em meio ágar MacConkey a 37o C. Para demonstrar que a adesina LDA era a responsável pelo padrão AD a células HEp-2, foi produzido um anti-soro LdaG em coelho. A especificidade do soro anti-LdaG foi determinada pela reação de “Imuno blot”. Apenas a proteína de 25 kDa foi reconhecida pelo soro imune, apresentando uma reação fortemente positiva com a amostra selvagem E. coli 22 e com o clone pV-B-6. Nenhuma reação do soro anti-LdaG foi observada no mutante, demonstrando, assim, a especificidade desse soro. Ensaios de inibição de adesão revelaram que o anti-soro LdaG reconheceu os epítopos da adesina responsáveis pela fenótipo AD, visto que foi capaz de inibir totalmente a adesão do clone pV-B-6. A imunomarcação com o anti-soro LdaG identificou na amostra 22 uma matriz de superfície amorfa sem nenhuma aparência de estrutura fimbrial. Quando observado em aumento maior, verificou-se a presença de estruturas fibrilares muito finas formando estruturas semelhantes a uma malha. Em contrapartida, nenhuma marcação foi observada no mutante LDA1. Foi determinada a incidência do gene ldaH em 65 amostras de EPEC atípica, isoladas em diferentes cidades brasileiras de crianças com diarreia aguda e de controles e pertencentes a 34 diferentes sorogrupos. Nenhuma dessas 65 amostras produtoras do padrão ALL em ensaios de 6 horas apresentou a sequência ldaH. Também foram estudadas 13 amostras de EPEC atípica que pertenciam aos sorogrupos O26, O55 e O111. O gene ldaH foi encontrado em quatro amostras, todas do sorogrupo O26 e que apresentavam o padrão AL em ensaios de três horas. No entanto, tanto os experimentos de PCR para amplificação do gene estrutural ldaG, como os experimentos de “Imuno blot” utilizando o anti-soro LdaG não revelaram a proteína de 25 KDa. Ensaios de inibição de adesão e imunofluorescência com soro antiK88 foram realizados com o intuito de investigar a relação antigênica entre as adesinas LDA e K88. Os resultados mostraram que ambas as adesinas são antigenicamente distintas, uma vez, que o soro anti-K88 não inibiu a AD e nem reconheceu qualquer estrutura presente na superfície da amostra pV-B-6. Neste estudo foi avaliado o papel da adesina LDA na virulência bacteriana, utilizando o modelo do camundongo tratado com estreptomicina e comparando a amostra selvagem 22 com a isogênica apresentando deleção do gene ldaG. Os resultados obtidos mostraram que aparentemente, a adesina LDA est· envolvida no processo de colonização, uma vez que a amostra selvagem 22 aderiu e colonizou mais eficientemente o ceco de camundongos C57BL/6J do que a amostra 22 ∆ldaG Concluindo, nossos resultados levaram a identificação e caracterização da adesina LDA responsável pela aderência difusa a células HEp-2. LDA È uma adesina afimbrial que contém uma subunidade principal, LdaG, cuja expressão é induzida em ágar MacConkey a 37o C. Estudos futuros são necessários para caracterizar melhor o papel da adesina LDA na virulência bacteriana.
The O26 serogroup of enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) is one of the most frequently implicated in infant diarrhea and is also common among enterohemorrhagic E. coli (EHEC) strains. The most common O26 strains belong to EPEC/EHEC serotype O26:H11. In a previous report, atypical EPEC strains O26:H11 isolated from children with diarrhea exhibited a localized adherence (LA) pattern within 3 hours, but do not harbor the BFP fimbriae correlated with the LA phenotype of typical EPEC. One isolate, E. coli 22 was used to characterize its genetic determinants. A genomic cosmid library of E. coli 22 was generated in E. coli K12 and the resulting clones were screened for LA adherence to HEp-2 cells. One cosmid clone, pV-B-6, exhibited adherence in a diffuse pattern over the entire epithelial cell rather than the LA microcolony formation seen with E. coli 22. Transposon mutagenesis was utilized to identify the region of cosmid pV-B-6 responsible for the adhesive phenotype. One isolate tested negative for adherence (pV-B-6-Tn) was chosen for further analysis. DNA sequencing of a subclone of pV-B-6 revealed an open reading frame, ldaH, whose predicted protein product shares 73% amino acid identity with that of the E. coli K88 fimbrial gene faeH. This region was named the locus for diffuse adherence (lda). The aim of this study was to characterize the adhesin encoded by the lda locus that is responsible for mediating diffuse adherence to HEp-2 cells. SDS-PAGE of whole-cell cell lysates from E. coli 22 and pV-B-6 showed a broad band with an apparent molecular mass of 25 kDa, which was absent in the pV-B-6-Tn extracts. The 25-KDa band was excised from the gel, and its N-terminal amino acid sequence determined. The sequence corresponds to the mature form of LdaG, the major structural subunit. The expression of LdaG is induced on MacConkey agar at 37o C. To provide further evidence that the LDA adhesin was responsible for the diffuse adherence seen on HEp-2 cells, we raised polyclonal rabbit antiserum against the major structural subunit LdaG. Imuno blot analysis 17 showed that the antiserum recognized the 25-kDa band present in wildtype E. coli 22 and pV-B-6, but not the pV-B-6-Tn mutant. Treatment of pV-B- 6 with the antiserum completed inhibited diffuse adherence of pV-B-6 to the HEp-2 cells. Immunogold labeling with LdaG antiserum identified an amorphous surface matrix with no obvious fimbrial structure. At higher magnification, very fine wiry fibrils forming mesh-like structures could be visualized. To determine whether the lda locus was specific to our O26:H11 strain or if it is present in other E. coli strains, we performed colony blots and HEp-2 adherence on a collection of 65 atypical EPEC strains representing 34 O serogroups. Most (61.5%) of strains were positive for HEp-2 localized-like adherence assay and all strains were ldaH probe negative. We also tested 13 atypical EPEC strains, which belonged to Dr. Luiz R. Trabulsi and ldaH was found in four O26 LA positive strains. These strains were tested with an ldaG gene probe, but were negative. By using a K88 antiserum, it was possible to demonstrate different antigenic determinants, between LDA and K88 adhesins. A streptomycin-treated mouse model was used to compare the intestinal colonization capacity of E. coli 22 strain with that of its ∆ldaG derivative (LDA1). The results showed that E. coli 22 adheres and colonizes the cecum of C57BL/6J mice more efficiently than the LDA1. In conclusion, we were able to characterize the LDA adhesin responsible for diffuse adherence to HEp-2 cells. LDA is an afimbrial adhesin that contains a major subunit, LdaG, whose expression is induced on MacConkey agar at 37o C. Additional work is needed to characterize the role in virulence of the LDA adhesin.
FAPESP: 01/03525-1
BV UNIFESP: Teses e dissertações
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Culler, Hebert Fabricio 1984. "Envolvimento dos genes qseC e sdiA na formação de biofilme por Escherichia coli enteropatogênica atípica." [s.n.], 2015. http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/317062.
Full textAbstract:
Orientador: Marcelo Palma SirciliTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Made available in DSpace on 2018-08-27T01:00:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Culler_HebertFabricio_D.pdf: 4509234 bytes, checksum: 996664e9d72f80df8f43076b618a7f73 (MD5) Previous issue date: 2015
Resumo: As Escherichia coli enteropatogênicas atípicas são capazes de formar biofilme em superfícies abióticas e bióticas. Diversos mecanismos em E. coli são regulados por Quorum Sensing, incluindo a expressão de fatores de virulência e formação de biofilme. Quorum Sensing é um sistema de sinalização que confere às bactérias a habilidade de responder à moléculas químicas denominadas autoindutores (AI). SdiA e QseC são receptores de quorum sensing encontrados em diversas bactérias, entre elas EPECa. SdiA detecta moléculas autoindutoras do tipo 1 (AI-1) denominadas N-acil homoserina lactonas (AHLs). Entretanto as Escherichia coli não possuem a sintase para estas moléculas e, deste modo, SdiA detecta AHLs produzidas por outras bactérias. O receptor QseC detecta moléculas autoindutoras do tipo 3, além dos hormônios humanos adrenalina e noradrenalina. Neste estudo verificamos a influência da deleção de sdiA e qseC na formação e arquitetura do biofilme, formação de película, anel e também na transcrição de alguns dos genes envolvidos nestes fenótipos (bcsA, csgA, csgD, fliC, fimA e rpoS) em duas amostras de EPECa, sendo uma do sorotipo O55:H7 e outra do sorotipo ONT:H25. Os resultados das análises nas duas amostras de EPECa foram distintos, confirmando a grande heterogeneidade reportada em outros estudos em amostras deste patótipo. A amostra ONT:H25?sdiA formou espesso biofilme em placas de 96 poços e espessa estrutura (em anel) como anéis na parede do tubo de ensaio em relação às amostras selvagem e complementada. Além disso, o mutante sdiA desta amostra foi capaz de formar película na superfície do meio enquanto as amostras selvagem e complementada foram negativas. A amostra O55:H7?sdiA não apresentou diferença significativa na formação (das estruturas analisadas) destas estruturas em relação às amostras selvagem e complementada. Análises de qRT-PCR demonstraram (maiores níveis de transcrição de) um aumento na transcrição de csgA, csgD e fimA na amostra ONT:H25 deletada em sdiA, possivelmente indicando que o aumento na formação de biofilme por esta amostra esteja relacionado ao aumento da expressão das fímbrias tipo 1 e curli. A adição de AHLs à amostra selvagem ONT:H25 diminuiu a formação de biofilme e os níveis transcricionais de csgD e fimA, enquanto na amostra deletada não houve diferença, indicando que sdiA participa da regulação da formação de biofilme em EPECa e que as AHLs aumentam os efeitos repressores deste receptor nos genes relacionados à formação de biofilme. Quanto às amostras deletadas em qseC foi possível verificar uma diminuição da formação de biofilme em relação às amostras selvagens e complementadas, mas não houve diferença na formação de película na interface ar-líquido e também na formação de anel na parede dos tubos. A amostra ONT:H25?qseC foi negativa para expressão de fímbria curli em placas contendo vermelho congo e apresentou aumento da transcrição de bcsA e fimA, enquanto teve a transcrição de csgA, csgD e fliC diminuída em relação à amostra selvagem. A adição de adrenalina aumentou a formação de biofilme e motilidade nas duas amostras mutantes indicando a possível presença de outro receptor em EPECa responsável pela detecção destes hormônios na ausência de QseC. Portanto, conclui-se que estes dois receptores de quorum sensing estão relacionados, direta ou indiretamente, à formação de biofilme em EPECa
Abstract: Atypical enteropathogenic Escherichia coli are capable to form biofilm on biotic and abiotic surfaces. Several E. coli mechanisms are regulated by Quorum Sensing, including expression of virulence factors and biofilm formation. Quorum Sensing is a signaling system that confers bacteria the ability to respond to chemical molecules known as autoinducers. SdiA and QseC are Quorum Sensing receptors found in several bacteria, including aEPEC. SdiA detects type 1 autoinducer molecules (AI-1) known as N-acil homoserin lactones. However, Escherichia coli do not produce this kind of molecules and SdiA detects AHLs produced by other bacteria. QseC receptor detects type 3 autoinducer molecules and the human hormones adrenalin and noradrenaline. In this study the influence of the sdiA and qseC deletion in the biofilm formation and architecture, pellicle and ring-like structure formation and transcription of some genes (bcsA, csgA, csgD, fliC, fimA and rpoS) in two strains of aEPEC (O55:H7 and ONT:H25) was verified. The results of the analysis of the two aEPEC strains were distinct, confirming the heterogeneity reported by other studies in the same patotypes. The strain ONT:H25?sdiA formed a thick biofilm in 96-well plates and thick ring-like structure on the tube wall compared with the wild type and complemented strains. Furthermore, the sdiA mutant strain was capable to form pellicle on both surfaces, while the wild type and complemented strains were negative. The strain O55:H7?sdiA did not show a significant difference on the formation of these structures compared to the wild type and complemented strains. qRT-PCR analysis demonstrated an enhance on the transcription of csgA, csgD and fimA in the deleted sdiA ONT:H25 strain, suggesting that a relative increase of biofilm formation in ONT:H25 strain could be related to the increase of the expression of type 1 and curli fimbriae. The addition of AHLs to the wild type strain ONT:H25 decreased the biofilm formation and the transcriptional levels of csgD and fimA, but not in the mutant strain, indicating that sdiA plays a role in the regulation of biofilm formation in aEPEC. AHLs also increased the repressor efects of this receptor in biofilm related genes. The mutant qseC strains showed a decrease in biofilm formation when compared to wild type and complemented strains, but there was no difference in the pellicle formation in the air-liquid interface, as in the ring-like structure formation in the tube wall. The ONT:H25?qseC strain was negative to curli fimbriae expression in congo red plates and displayed an increase in the transcription of bcsA and fimA genes, while a decrease was verified in the csgA, csgD and fliC genes compared to the wild type strain. The addition of adrenalin increased the biofilm formation and motility in both mutant strains, possibly indicating the presence of other receptor in aEPEC involved in the detection of these hormones in the absence of QseC. In conclusion, these two Quorum Sensing receptors are related with biofilm formation in aEPEC
Doutorado
Genetica de Microorganismos
Doutor em Genetica e Biologia Molecular
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Galhardoni, Ricardo. "Avaliação e tratamento de pacientes com dor facial atípica através da estimulação magnética transcraniana repetitiva." Universidade de São Paulo, 2014. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5138/tde-12012015-130033/.
Full textAbstract:
Dor facial atípica (DFA) é uma condição álgica crônica destacada pela etiopatogenia ainda desconhecida e pela característica rebelde aos tratamentos vigentes. O objetivo deste estudo é avaliar o limiar e padrões de excitabilidade cortical de doentes com DFA através de Estimulação Magnética Transcraniana (EMT) e compará-los a controles saudáveis, além de avaliar a eficácia terapêutica da EMT repetitiva (EMTr) ativa em doentes com DFA comparados à EMTr placebo. Durante o período de março de 2010 a dezembro de 2013 foram avaliados 29 doentes com DFA - os quais preencheram os critérios segundo a classificação proposta pela Associação Internacional de Cefaleia (2004) - e 28 controles saudáveis. A avaliação foi iniciada com a investigação da excitabilidade cortical bilateral. Em seguida, os doentes foram aleatorizados em dois grupos (ativo e placebo) para o tratamento com EMTr sobre o córtex motor primário na área de representação da face, esquematizado da seguinte forma: cinco sessões consecutivas para a fase de indução, e uma sessão semanal (pelo período de oito semanas) para a de manutenção; frequência excitatória de 10Hz; 80% do limiar motor de repouso; e 3000 pulsos no total por sessão. Os doentes foram avaliados quanto às características dolorosas no momento basal, no dia sete após a semana de indução, e nos dias 21, 30 e 60 para acompanhamento na fase de manutenção. Em todas as avaliações, utilizou-se os seguintes questionários validados para a língua portuguesa: Inventário Breve de Dor; DN4, Inventário de Sintomas de Dor Neuropática, Questionário de descritores breve de dor McGill e Questionário de qualidade de vida SF-36. Os doentes do grupo ativo e placebo apresentaram excitabilidade cortical inicial diferenciada em relação aos controles nos padrões de inibição e facilitação intracortical (p < 0,001). Ao final da última avaliação, os doentes do grupo ativo apresentavam padrões de excitabilidade cortical mais próximos dos controles do que os doentes do grupo placebo, embora sem significância estatística. Não houve diferença entre os grupos ativo e placebo em todas as avaliações quanto às características de dor e de qualidade de vida, sendo que ambos apresentaram melhora da dor. Conclui-se que há diferenças neurofisiológicas entre os doentes com DFA e os controles, e que isso pode ser modificado através do EMTr. A ausência de efeito terapêutico da EMTr neste estudo indica que mais estudos utilizando-se outros parâmetros para a verificação da eficácia da EMTr na DFA são necessáriosAtypical facial pain (AFP) is a chronic condition with unknown physiopathology and refractory characteristics to the gold standard treatment. The aim this study was to compare the patterns of cortical excitability between AFP and health subjects (HS), and to assess the analgesic effect of repetitive transcranial magnetic stimulation (rTMS) in AFP patients. Twenty-eight HS and 29 patients with AFP were included according to the IHS criteria (2004). Participants underwent a cortical excitability battery bilaterally in the primary motor cortex (M1) representation of the masseter muscle. They were then randomized into active and sham rTMS groups. rTMS was performed over the contralateral motor cortex in the representation area of the face daily for a week and weekly for eight weeks in a total of 13 sessions (5 induction and 8 maintenance sessions). All participants received 10 Hz rTMS, at 80% of the rest motor threshold (total of 3000 pulses per session). Sham rTMS was performed with an identical sham coil that emitted a similar sound to the active one. Patients were clinically assessed at baseline, after the induction phase (one week) and after 21, 30 and 60 days after the beginning of the study. Evaluations included the following validated questionnaires to the Brazilian Portuguese language: brief pain inventory; DN-4; Neuropathic pain symptoms inventory, McGill pain questionnaire brief version and quality of life questionnaire SF-36. At the baseline assessment, patients with AFP showed defective intracortical excitability inhibition and facilitation (p < 0.001) compared to HS. After the final evaluation, the patients from the active group had cortical excitability patterns closer to HS than the patients from the sham group, although there was no significant difference. There was no difference between patients that underwent active and sham rTMS about their pain characteristics and quality of life; both had pain improvement. In conclusion, there are neurophysiological differences between patients with AFP and HS, which could be modified with rTMS. The absence of a therapeutic effect of rTMS on pain in this study indicates the need of more research with other TMS parameters to check the efficacy of rTMS in AFP
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Brito, Marcelo de. "A construção do sentimento de unidade: desdobramentos de uma abordagem corporal atípica no desenvolvimento humano." reponame:Repositório Institucional da UnB, 2013. http://repositorio.unb.br/handle/10482/16356.
Full textAbstract:
Submitted by Guimaraes Jacqueline (jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-10-01T12:30:14Z
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Este estudo, de ordem qualitativa, está contextualizado dentro de um projeto de extensão denominado Movi-mente que acontece na Universidade de Brasília (UnB) – Brasil. O foco central do estudo é a organização da arquitetura da abordagem de trabalho corporal que desenvolvemos. Além dessa estruturação buscamos investigar os desdobramentos que ocorreram e vêm ocorrendo na vida dos indivíduos em função da participação no projeto citado. Através dessa abordagem, que se ancora na corporeidade, buscamos desenvolver o sentimento de comunhão unitária ou a integração das dimensões humanas (física, emocional, mental, espiritual e social) e a ampliação da consciência de si. A base da praxis é constituída por motrivivências atípicas (não lineares) que visam gerar instabilidades (Kaos) e estimular a perceção. Através dos anos de convivência e da recolha de informações, constatámos que a abordagem que adotámos no projeto vem contribuindo para o desenvolvimento humano em todas as dimensões, comportando possibilidades para ampliação da consciência. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT
This study, of a qualitative nature, is contextualized within an extension project called Movi-mente which takes place at the Universidade de Brasilia (UnB) - Brazil. This study aims to organize the architecture of the body work approach we have developed and to investigate the development that have occurred and is occurring in individuals who are participating in it. Through this approach, which is anchored in the concept of corporeality, we intend to develop a sense of unified communion (integrated dimensions physical, emotional, mental, spiritual and social) and self-expansion. The praxis is based on atypical (non-linear) motor experiences that intend to generate instabilities (Kaos) and stimulate new perceptions. Through information gathering, we found out that the approach adopted in the project contributes to human development in all dimensions and creates opportunities for expansion of consciousness.
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Câmara, Fabiana Rodrigues de Arruda. "Relação ecológica entre as comunidades fitoplanctônica e zooplanctônica em reservatório eutrofizado durante período de pluviosidade atípica." Universidade Federal de São Carlos, 2011. https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/1704.
Full textAbstract:
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Previous issue date: 2011-02-28Universidade Federal de Sao Carlos
The study of the plankton community provides better understanding of trophic relationships through their responses in relation to environmental variables of freshwater ecosystems. These responses include the organization of the structure and species composition both in spatial and temporal scale. The study much more important in water scarce northeast Brazil where reservoirs are the main source of potable water supply. This thesis examines aspects related to the ecological relationship between phytoplankton and zooplankton communities in a eutrophic reservoir of Rio Grande do Norte State. The study was conducted during a period significantly affected by climatic change as a consequence of La Niña event (2008-2009), causing heavy rainfall in certain regions. Samples were collected monthly in the Armando Ribeiro Gonçalves reservoir (ARG), Assu, RN, during two distinct phases: Hydrodynamic Instability ( I e II) and Stability. The seasonal relationships between phytoplankton and zooplankton communities were analyzed from the data of morpho functional species data, their biomass, composition, frequency, diversity, richness, evenness, and dominance index. These biotic variables are tested to environmental variables such as water temperature, transparency, turbidity, conductivity, pH and total and inorganic nutrients (nitrate-N, Nnitrite, ammonia-N and Soluble Reactive Phosphorus, total Nitrogen and Phosphorus), measured in situ or by spectrophotometric methods, according with specific methodologies. In addition to descriptive aspect, experimental approach was used to explain certain biotic relationship found in descriptive study. The results demonstrate significant environmental variations and planktonic compositional changes, which are mediated by hydrodynamic forces such as atypical high rainfall, greater influx of river water, water turbulence and complete mixture of water column and heavy nutrient suspension. Phytoplankton species composition was classified according to morphofunctional characteristic and the succession of phytoplankton revealed how the composition and density of cyanobacteria altered during stable and unstable periods. The results also showed considerable reduction in the cyanobacteria biomass and concomitant increase in phytoplankton diversity. During the second period of hydrodynamic instability of planktonic species composition was shifted in favour of predominant species of non-toxic cyanobacterial, followed by members of Chlorophytes and Bacilariophytes along with the higher biomass of copepod nauplii, juvenile copepods and Cladocera. The presence of Chlorophyte and Bacillariophyte species with juvenile copepods and cladoceran indicate the features of better water quality in the ARG reservoir. During the study, we observed a negative correlation between zooplankton groups and Ostracods Calonoid Copepods. The results indicate the predominance of Physiocypria schubarti (Ostracod) over subdued Notodiaptomus cearensis (Clanoid Copepod) in the midst of filamentous cyanobacteria suggesting a mere co-existence of species without competition for food. Moreover, the high abundance of Ostracods in the water column is not a relevant factor that determines a reduction in the biomass of Calanoid Copepods. On the other hand, we can infer that the toxicity of filamentous cyanobacteria may affect some individuals in the population of Calanoid Copepods.
O estudo envolvendo a comunidade planctônica fornece um melhor entendimento das relações tróficas através de suas respostas em relação às variáveis ambientais dos ecossistemas continentais. Estas respostas incluem a organização na estrutura e composição das espécies tanto em escala espacial quanto temporal e são de suma importância no Nordeste do Brasil onde há escassez de água e os reservatórios são a principal fonte de abastecimento de água potável. Esta tese examina alguns aspectos referentes à relação ecológica entre as comunidades fitoplanctônica e zooplanctônica em um reservatório eutrofizados do Rio Grande do Norte. O estudo foi conduzido durante um período afetado pelo fenômeno La Niña (2008-2009), o que provocou elevados índices pluviométricos na região, sendo possível o estabelecimento de duas fases distintas: instabilidade hidrodinâmica (I e II) e estabilidade hidrodinâmica. As relações de sucessões sazonais entre as comunidades fitoplanctônica e zooplanctônica foram analisadas a partir dos dados morfofuncionais das espécies, biomassas, composição, frequência e índices de diversidade, riqueza, equitabilidade e dominância. Estas variáveis bióticas foram relacionadas com algumas variáveis ambientais, tais como, temperatura da água, transparência, turbidez, condutividade elétrica, pH e nutrientes inorgânicos e totais (N-nitrato, N-amoniacal, Fósforo Solúvel Reativo, Nitrogênio Total e Fósforo Total), mensurados in situ ou através de métodos espectrofotométricos, de acordo com metodologias específicas. Em adição aos aspectos descritos, abordagens experimentais foram realizadas para explicar algumas relações bióticas encontradas durante o estudo descritivo. Os resultados demonstram significantes variações ambientais e modificações na composição do plâncton, mediadas por forças hidrodinâmicas, tais como elevadas pluviosidades, maior entrada de água do rio, turbulência e mistura na coluna d`água. As espécies do fitoplâncton inseridas em classificações morfo-funcionais revelou revelou como a sucessão, composição e densidade de cianobactérias foram alteradas durante os períodos de estabilidade e instabilidade. Foi observada uma redução na biomassa de cianobactérias e concomitante aumento na diversidade fitoplanctônica durante o segundo período de instabilidade. Além disso, a composição das espécies planctônicas foi deslocada em favor da predominância de cianobactérias não-tóxicas, seguido por membros de Clorofíceas e Bacilariofíceas, assim como elevada biomassa de náuplios de Copepoda, Copepoditos e Cladocera. A presença de espécies de Clorofíceas e Bacilariofíceas, assim como de Copepodas jovens e Cladoceras indicam características de melhoria na qualidade da água do reservatório Armando Ribeiro Gonçalves. Durante o estudo foi observada uma correlação negativa entre os grupos zooplanctônicos Copepoda Calanoida e Ostracoda. Os resultados indicam uma predominância da espécie Physiocypria schubarti (Ostracoda) sobre Notodiaptomus cearensis (Copepoda Calanoida) em meio a uma abundante biomassa de cianobactéria filamentosa e co-existência de alguns indivíduos destas espécies sem que haja competição por alimento. Além disso, a elevada abundância de Ostracoda na coluna d`água não foi um fator determinante na redução da biomassa de Copepoda Calanoida. Por outro lado, podemos inferir que a toxicidade de cianobactérias filamentosas podem afetar alguns indivíduos da população de Copepoda Calanoida.
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Andrade, Fernanda Batista de. "Padronização e avaliação de PCR multiplex para o diagnóstico de Escherichia coli enteroagregativa típica e atípica." Universidade de São Paulo, 2013. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-06112013-111440/.
Full textAbstract:
O patótipo de Escherichia coli diarreiogênica denominado E. coli enteroagregativa (EAEC) é caracterizado pela expressão do padrão de adesão agregativo (AA) em células epiteliais cultivadas. Amostras de EAEC são classificadas como típicas ou atípicas, dependendo da presença ou não do gene aggR, respectivamente. O padrão AA no teste de adesão em células epiteliais é o diagnóstico padrão para a classificação de EAEC. Técnicas moleculares, como a PCR multiplex, são alternativas a esse teste. No presente estudo foi desenvolvida uma PCR multiplex para o diagnóstico molecular de EAEC típica e atípica, baseada na detecção dos genes aatA, aggR, aaiA e aaiG. A partir de colônias isoladas de E. coli de origem fecal o teste apresentou sensibilidade de 94,8%, especificidade de 94,7%, valor preditivo de teste positivo de 74,3% e valor preditivo de teste negativo de 99,1%. O teste desenvolvido mostrou-se uma alternativa diagnóstica sensível e específica para EAEC e permite um acréscimo significativo na detecção de EAEC atípica.The diarrheagenic Escherichia coli pathotype known as enteroaggregative E. coli (EAEC) is characterized by the expression of the aggregative adherence pattern (AA) on cultured epithelial cells. EAEC strains are classified as typical or atypical, depending on the presence or absence of the aggR gene, respectively. The AA pattern in the adherence assay with epithelial cells is the gold standard diagnostic for EAEC. Molecular techniques, such as multiplex PCR, are alternatives to this test. In the present study we developed a multiplex PCR for the molecular diagnostic of typical and atypical EAEC, based on the detection of aatA, aggR, aaiA and aaiG genes. The test presented 96.5% of sensitivity, 94.8% of specificity, 74.3% of positive predictive value and 99.1% of negative predictive value, when tested in isolated colonies of E. coli from feces. The test developed is a sensitive and specific diagnostic alternative for EAEC and allows a significant increase in atypical EAEC detection.
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Ruiz, Renato de Mello. "Caracterização genotípica e fenotípica de mutantes não aderentes de Escherichia coli enteropatogênica atípica do sorotipo O125ac:H6." Universidade de São Paulo, 2009. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-08052009-094943/.
Full textAbstract:
O sorotipo O125ac:H6 compreende amostras de Escherichia coli enteropatogênica atípicas que apresentam o padrão de adesão agregativa (AA) em células HEp-2. A construção de um banco de mutantes da amostra protótipo Ec292/84 com o transposon TnphoA gerou quatro mutantes não aderentes. O objetivo deste estudo foi a caracterização genotípica e fenotípica desses mutantes. As regiões adjacentes à inserção do TnphoA no mutante Ec2921/84::01 foram amplificadas, clonadas e seqüenciadas, revelando que a inserção do TnphoA ocorreu no gene secD, parte do sistema de secreção de proteínas do tipo 2 (SST2). O perfil de proteínas de membrana externa (OMP) dos mutantes, em comparação com a amostra selvagem, revelou a ausência de proteínas de 21 e 30 kDa nos mutantes. Um antissoro obtido contra o extrato de OMP da amostra protótipo inibiu o padrão AA e reconheceu a proteína de 30 kDa em immunoblottings com extratos de OMP. Esses dados indicam que esta proteína está envolvida no estabelecimento do padrão AA de E. coli O125ac:H6 e que essa proteína é transportada através do SST2.The serotype O125ac:H6 comprises atypical Enteropathogenic Escherichia coli strains that express the aggregative adherence (AA) pattern to HEp-2 cells. We obtained four nonadherent mutants using TnphoA insertion in the Ec292/84 strain. The aim of this study was the genetic and phenotypic characterization of these mutants. The genetic analysis of the mutants revealed that the insertion of TnphoA ocurred in the secD gene, part of the bacterial type 2 secretion system (T2SS). The mutant outer membrane proteins (OMP) profile, in comparison to the prototype strain, demonstrated the lack of expression of proteins of 21 and 30 kDa in the mutant profile. An antiserum raised against the OMP extract of the prototype strain, in addition to inhibit the AA pattern, recognized the 30 kDa protein in immunoblotting assays with OMP extract. These data indicate this OMP is involved in the establishment of the AA pattern presented by the atypical EPEC strains of the O125ac:H6 serotype, and that this protein is transported via the T2SS.
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Moura, Rodrigo Assunção. "Estudo das relações clonais entre amostras de Escherichia coli enteropatogênica atípica de origem animal e humana." Universidade de São Paulo, 2009. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-02022010-100915/.
Full textAbstract:
Quarenta e nove amostras EPEC típica (tEPEC) e atípica (aEPEC) pertencentes a diferentes sorotipos, isoladas de humanos e animais (cães, gatos, bovinos, ovinos, coelhos e sagüis) foram investigadas quanto ao perfil de virulência pela PCR e similaridade clonal por Multilocus Sequence Typing (MLST) e Pulsed-Field Gel Electrophoresis (PFGE). O objetivo deste estudo foi verificar se animais atuam como reservatório e fonte infecção de aEPEC para humanos. Os marcadores de virulência analisados revelaram que cepas aEPEC isoladas de animais possuem potencial para causar diarréia em humanos. As técnicas MLST e PFGE revelaram que amostras isoladas de animais e humanos compartilham relações clonais próximas ou idênticas. Estes resultados indicam que os animais estudados atuam como reservatório de aEPEC e representam fonte de infecção para humanos. Pelo fato de humanos, também atuarem como reservatório de aEPEC, ciclos de infecção cruzada animal-humano não podem ser descartados, pois a dinâmica de transmissão entre reservatórios de aEPEC não é muito bem compreendida.Forty-nine typical and atypical EPEC strains belonging to different serotypes, isolated from humans, pets (cats and dogs), farm (bovines, sheep and rabbits) and wild animals (monkeys) were investigated for virulence markers and clonal similarity by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) and multilocus sequence typing (MLST). The virulence markers analyzed revealed that atypical EPEC strains isolated from animals have the potential to cause diarrhea in humans. Close clonal relationship between human and animal isolates was found with MLST and PFGE. These results indicate that these animals act as atypical EPEC reservoirs and may represent sources of infection for humans. Since humans also act as a reservoir of atypical EPEC strains, the cycle of mutual infection of atypical EPEC between animals and humans, mainly pets and their owners, cannot be ruled out, since the transmission dynamics between the reservoirs are not yet clearly understood.
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Franzin, Fernanda Maria 1981. "Papel do sistema AI-3/epinefrina/norepinefrina na regulação da expressão gênica de Escherichia coli enteropatogênica atípica." [s.n.], 2013. http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/317064.
Full textAbstract:
Orientador: Marcelo Palma SirciliTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Made available in DSpace on 2018-08-24T04:50:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Franzin_FernandaMaria_D.pdf: 6490379 bytes, checksum: facd90d2115a20d8eccb498865503103 (MD5) Previous issue date: 2013
Resumo: Escherichia coli enteropatogênica atípica (aEPEC) faz parte de um grupo de patógenos capazes de formar um tipo de lesão em células epiteliais denominada Attaching and Effacing (A/E). Os genes requeridos para a formação da lesão A/E estão localizados em uma ilha de patogenicidade denominada Locus of Enterocyte Effacement (LEE). A regulação da expressão dos genes de LEE é um processo complexo e envolve inúmeros fatores e vias regulatórias, incluindo o sistema de quorum sensing AI- 3/Epinefrina/Norepinefrina. O sensor histidina-quinase QseC é responsável por detectar AI-3 produzido por outras bactérias e epinefrina/norepinefrina produzidas pelo hospedeiro e iniciar uma cascata regulatória que induz a expressão de genes de virulência. Para avaliar o papel desse sistema na regulação de fatores de virulência de aEPEC, um mutante para o gene qseC foi gerado e analisado a nível transcricional e fenotípico quanto a sua motilidade, capacidade de secretar proteínas e induzir lesão A/E, na presença e/ou ausência do sinal epinefrina. Ensaios de qRT-PCR demonstraram níveis transcricionais diminuídos para LEE e para os genes flhD, fliC e nleA no mutante, sugerindo que QseC regula a expressão desses fatores de virulência. Ensaios de motilidade, proteínas secretadas e FAS evidenciaram que a motilidade, a secreção de proteínas e a formação da lesão A/E estavam diminuídas no mutante, comprovando a participação de QseC na regulação desses fenótipos em aEPEC. Os mesmos ensaios realizados na presença de epinefrina demonstraram que esse sinal tem papel importante na regulação dos genes de LEE de aEPEC e que essa regulação não ocorre exclusivamente via QseC, mas envolve outro receptor para esse hormônio. Epinefrina regula a expressão dos genes de LEE, porém, parece não ser um sinal importante na regulação da expressão de NleA e flagelo/motilidade. A análise do transcriptoma da linhagem mutante demonstrou que, além de ter uma importância central na regulação da virulência de aEPEC, QseC age também como um importante regulador global da expressão gênica nessa linhagem, regulando, direta ou indiretamente, a expressão de, aproximadamente, 1505 genes, entre eles genes relacionados ao metabolismo, transporte, quimiotaxia, captação de íons, resistência à stress, formação de biofilme, regulação transcricional, etc. Um modelo geral simplificado da regulação gênica da virulência de aEPEC através do sistema AI-3/Epi/NE e seu sensor QseC foi proposto. Esse trabalho descreve pela primeira vez a regulação do tipo quorum sensing na modulação da expressão da virulência em uma EPEC atípica
Abstract: Atypical enteropathogenic Escherichia coli (aEPEC) is part of a group of pathogens capable of forming a characteristic lesion in epithelial cells called Attaching and Effacing (A/E). Genes required for A/E lesion formation are located on a pathogenicity island called Locus of Enterocyte Effacement (LEE). The regulation of LEE gene expression is a complex process and involves several factors and regulatory pathways, including the quorum sensing system AI-3/Epinephrine/Norepinephrine. The histidine kinase sensor QseC is responsible for detecting AI-3 produced by other bacteria and epinephrine/norepinephrine produced by the host, starting a regulatory cascade that induces the expression of virulence genes. In order to evaluate the influence of this system in the regulation of virulence factors of aEPEC, a qseC mutant has been generated, and transcriptional and phenotypical analyses were performed. Motility, ability to secrete proteins and induce A/E lesion, in the presence and/or absence of the epinephrine signal were analysed. qRT-PCR assays demonstrated reduced transcriptional levels of the LEE operons, and flhD, fliC and nleA genes in the mutant strain, suggesting that QseC regulates the expression of these virulence factors. Motility assays, secreted proteins and FAS have shown that motility, protein secretion and A/E lesion formation were decreased in the mutant, confirming the participation of QseC regulating these phenotypes in aEPEC. The same tests were performed in the presence of epinephrine, and demonstrated that this signal plays an important role in LEE gene regulation of aEPEC and this regulation does not occur exclusively via QseC, but involves other receptor for this hormone. Epinephrine regulates the expression of LEE genes, however, does not seem to be an important signal in the regulation of NleA and flagella/motility gene expression. Transcriptome analysis of the mutant strain has shown that, besides having a central role in the regulation of aEPEC virulence, QseC also acts as an important global regulator of gene expression in this strain, regulating, directly or indirectly, the expression of approximately 1505 genes, including genes related to metabolism, transport, chemotaxis, ion uptake, resistance to stress, biofilm formation, transcriptional regulation, and other. We proposed a simplified general model of virulence gene regulation of aEPEC through the AI-3/Epi/NE system and its sensor QseC. This is the first work describing the quorum sensing gene regulation modulating the virulence expression in atypical EPEC
Doutorado
Microbiologia
Doutora em Genética e Biologia Molecular
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Higa, Juliana Suyama 1983. "Influência do gene ycgR na regulação de fatores de virulência em amostra de Escherichia coli enteropatogênica atípica." [s.n.], 2015. http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/317063.
Full textAbstract:
Orientador: Marcelo Palma SirciliDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Made available in DSpace on 2018-08-26T15:41:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Higa_JulianaSuyama_M.pdf: 2740628 bytes, checksum: 20ced0f2848628f2541d4313632cfc0b (MD5) Previous issue date: 2015
Resumo: Escherichia coli (E.coli) enteropatogênica (EPEC), é um dos agentes causadores de diarreia em crianças, principalmente em países em desenvolvimento. EPEC pode ser dividida em típica (tEPEC) ou atípica (aEPEC) pela presença ou ausência do plasmídeo EAF, respectivamente e, mais precisamente pela expressão da fímbria Bfp. Uma característica de EPEC é a capacidade de causar uma lesão histopatológica denominada "attaching and effacing" (lesão A/E) no epitélio intestinal e os genes responsáveis pela formação da lesão A/E estão localizados na ilha de patogenicidade LEE (locus of enterocyte effacement). Outra característica de EPEC é a formação de microcolônias que possibilitam a formação de biofilme. Um dos mecanismos de regulação da formação de biofilme envolve a molécula sinalizadora Bis-(3'-5')-monofosfato de guanosina cíclico (c-di-GMP), um mensageiro secundário universal em bactérias que está envolvido na regulação de uma grande variedade de processos celulares. Para exercer sua função, c-di-GMP precisa se ligar e alterar alostericamente a estrutura de uma molécula efetora. Um dos receptores conhecidos para c-di-GMP é YcgR, uma proteína de domínio PilZ que possui um sítio de ligação para c-di-GMP e está envolvida diretamente na regulação do movimento flagelar através da ligação do complexo YcgR-c-di-GMP às proteínas da base do motor flagelar. Existem poucos dados na literatura sobre as funções de YcgR, todos focados apenas no seu papel na regulação da motilidade. Assim, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a influência de YcgR na motilidade, formação de biofilme, adesão e formação de lesão A/E em um amostra de aEPEC do sorotipo O55:H7. O gene ycgR foi deletado da amostra selvagem através da técnica de recombinação homóloga proposta por Datsenko e Wanner (2000). A complementação da amostra mutante foi realizada através da clonagem do gene ycgR no plasmídeo de expressão pBAD Myc HisA. Os resultados obtidos indicam que a deleção do gene ycgR reduz a motilidade e aumenta a formação do biofilme inicial na amostra O55:H7. Além disso, a adesão em células epiteliais e a formação da lesão A/E também foram reduzidas em comparação à amostra selvagem. Os resultados fenotípicos corroboram os observados na análise transcricional dos genes eae, ler e espA, que participam da formação da lesão A/E, e dos genes bscA, fimA e csgD, envolvidos na formação do biofilme inicial. Com exceção do gene csgD que apresentou um aumento na transcrição na amostra mutante, todos os outros genes avaliados apresentaram uma menor transcrição em relação à amostra selvagem. Poucos trabalhos na literatura demonstram o papel do mensageiro secundário em amostras de E. coli patogênicas, assim, estes resultados são os primeiros descritos para uma amostra de aEPEC e possibilitam que no futuro novos estudos possam analisar com mais detalhes a participação de c-di-GMP na regulação de fatores de virulência não só de aEPEC mas também de outras E.coli patogênicas
Abstract: Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) is a causative agent of diarrhea in children, especially in developing countries. EPEC can be categorized in 2 subgroups termed typical (tEPEC) or atypical (aEPEC) by the presence or absence of the EAF plasmid respectively, and more precisely by the expression of the Bfp fimbriae. One characteristic of EPEC is the ability to cause a histopathological lesion on epithelial cells called "attaching and effacing" (A/E lesion). The genes responsible for the production of the A/E lesion are encoded in a pathogenicity island named "locus of enterocyte effacement" (LEE). Another feature of EPEC is the formation of microcolonies, which allow biofilm formation. One of the regulation mechanisms of biofilm formation involves the signaling molecule bis- (3'-5') cyclic guanosine monophosphate (c-di-GMP), a ubiquitous second messenger in bacteria that participates in the regulation of a wide variety of cellular processes. To perform its function, c-di-GMP needs to bind and alter allosterically the structure of an effector molecule. One of the known (many?) receptors for c-di-GMP is YcgR, a Pilz domain protein that has a c-di-GMP binding site and is involved directly in the regulation of flagellar movement through the binding of the YcgR-c-di-GMP complex to flagellar motor proteins. There are few published data on the YcgR functions and they focus mainly on the role of the YcgR in motility regulation. The aim of this study was to evaluate the influence of YcgR in motility, biofilm formation, adhesion and A/E lesion formation in an aEPEC strain serotype O55:H7. ycgR gene deletion was performed by homologous recombination as proposed by Datsenko and Wanner (2000). Complementation of O55:H7 mutant strain was achieved by cloning ycgR in pBAD/Myc-HisA plasmid. The results indicate that the deletion of ycgR gene decreases the motility and increases the formation of initial biofilm on O55:H7 strain. Moreover, the adhesion on epithelial cells and the A/E lesion formation were also diminished in comparision to the wild type strain. The phenotypic results are consistent with the transcriptional analysis of eae, ler and espA genes involved in A/E lesion formation, and of bcsA, fimA and csgD genes involved in the initial steps of biofilm formation. With the exception of csgD gene that showed an increased transcription level in the mutant strain, all other analysed genes showed a decrease in transcription when compared to the wild type strain. Few studies demonstrate the role of a second messenger molecule in Escherichia coli pathogenic samples, and therefore, these results are the first report in this regard for an aEPEC strain. This work should encourage further studies in order to analyze in more detail the involvement of c-di GMP in the regulation of virulence factors not only in aEPEC, but also in other pathogenic Escherichia coli pathotypes
Mestrado
Microbiologia
Mestra em Genética e Biologia Molecular
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Melo, Keyde Cristina Martins de. "Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) atípica sorotipo O55:H7: descrição da antifagocitose a partir de um fator secretado." Universidade de São Paulo, 2011. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-24032011-091904/.
Full textAbstract:
Escherichia coli enteropatogênica atípica (EPECa) é causadora de diarréia infantil e apresenta alta heterogeneidade quanto aos fatores de virulência. O objetivo deste trabalho foi estudar o comportamento de EPECa na interação com fagócitos profissionais. Duas amostras de EPECa sorotipo O55:H7 mostraram-se capazes de reduzir a fagocitose. Os sobrenadantes dos cultivos foram submetidos a SPE e HPLC e as frações com efeito antifagocítico foram submetidas a espectrometria de massas. A fração capaz de reduzir a fagocitose de bactérias reduziu também a fagocitose de Saccharomyces cerevisiae. Além de mostrar que EPECa é capaz de induzir a antifagocitose, mostrou-se também que o fator antifagocitico é secretado, solúvel em meio aquoso, termoestável, apresenta baixo peso molecular, não é microbicida ou citotóxico e, por último, há indicativos de que possa apresentar uma região glicosídica. Estes achados sugerem que o fator antifagocítico pode, embora não sozinho, exercer um papel importante na adaptabilidade e patogenicidade das EPECa.Atypical enteropathogenic Escherichia coli (aEPEC) causes diarrhea mainly in children and presents a high heterogeneity of virulence factors. The objective of this work was to study the behavior of aEPEC regarding its interaction with professional phagocytes. Two samples of aEPEC serotype O55:H7 were able to reduce phagocytosis, The culture supernatants were submitted to SPE and HPLC and the active fractions were tested and analyzed by mass spectrometry. The results show that the fraction with bacterial antiphagocytic activity also reduces phagocytosis of Saccharomyces cerevisiae. In addition to demonstrating that aEPEC can induce antiphagocytosis, this work shows that it is due to a secreted antiphagocytic factor that is soluble in aqueous medium, is thermo-stable, has a low molecular weight, is not bactericide or cytotoxic and, finally, possibly presents a glycosidic region. These findings suggest that the antiphagocytic factor may, though maybe not alone, play an important role in the adaptability and pathogenicity of aEPEC.
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Rossato, Sarita Schneider. "Caracterização da adesão de Escherichia coli enteropatogênica atípica do sorotipo O26:H11 a componentes de matriz extracelular." Universidade de São Paulo, 2009. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-24012017-170752/.
Full textAbstract:
Cepas de Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) estão entre os patógenos mais freqüentemente envolvidos em casos de diarréia. Este patotipo é subdividido em EPEC típicas e atípicas, sendo que as típicas possuem o gene eae (EPEC attaching and effacing) e o plasmídeo EAF (EPEC adherence fator), e as atípicas albergam somente o gene eae. A principal característica de sua patogênese é a formação de uma lesão histopatológica no epitélio intestinal denominada attaching and effacing (A/E), que resulta da adesão íntima da bactéria ao enterócito. A adesão é uma etapa crítica na patogênese bacteriana, sendo o primeiro pré-requisito para que as E. coli colonizem com sucesso a mucosa do hospedeiro. A ligação da bactéria a um ou mais componentes teciduais da matriz extracelular como colágeno I e IV, laminina, fibronectinas celular e plasmática são indícios de que essas moléculas estão sendo usadas como substrato de adesão e colonização do hospedeiro pela bactéria patogênica. Adesinas com capacidade de interagir com componentes da matriz extracelular já foram identificadas em bactérias patogênicas, no entanto, ainda não foi caracterizada nenhuma proteína de EPEC atípica com essa capacidade de adesão. Essa propriedade foi evidenciada em um isolado de EPEC atípica durante pesquisas em nosso laboratório e neste trabalho visamos identificar e caracterizar a(s) proteína(s) envolvida(s) nesta habilidade adesiva. As proteínas possivelmente envolvidas apresentam massas moleculares relativas de 107, 44 e 35 kDa e a pré-incubação do isolado 2103 com componentes de matriz extracelular provoca uma variação no seu padrão de adesão e influencia o número de bactérias aderidas a células epiteliais. No entanto, como esse patotipo é muito heterogêneo essa característica não pode ser extrapolada para todos os isolados dessa categoria.Atypical Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) has been a leading cause of childhood diarrhea in developing countries. The main mechanism of atypical EPEC pathogenesis is a lesion called attaching and effacing (A/E), which is characterized by intimate adherence of the bacteria to the intestinal epithelium and destruction of microvillus. Nevertheless, it represents a heterogeneous group and other virulence factors may be involved in atypical EPEC pathogenesis. Previously, we have identified one isolate of atypical EPEC, serotype O26:H11, which secretes proteins that interact with ECM macromolecules. The interactions between pathogenic bacteria and ECM molecules such as fibronectin, laminin and collagen may play an important role in the bacterium adherence to and invasion of host cells. Adhesion is critical for successful E. coli colonization of gastrointestinal tract and is mediated by adhesins. The aim of this study is to identify and characterize putative adhesins that may contribute to the binding of the isolate of atypical EPEC to extracellular matrix components. The supernatant of the atypical EPEC isolate was submitted to a solid phase binding assay with matrigel (a mouse basement membrane composed mainly of laminin, collagen IV and fibronectin), the adhered proteins were stripped from the wells, separated by SDS-PAGE, transferred to nitrocellulose membranes and submitted to immunoblotting assay. Three major proteins of apparent molecular weights of 107, 44 e 35 kDa were recognized by the anti-proteins polyclonal serum (produced in rabbit immunized with the isolate\'s supernatant) through immunoblotting assay. Besides, we observed that in the presence of ECM components the isolate clearly changes its adherence pattern of the isolate to HEp-2 cells, and the number of adhered bacteria to epithelial cells. The atypical EPEC do not share a unique pattern of virulence, suggesting that many virulence factors may contribute to the pathogenesis. The identification of proteins involved in the adhesion with extracellular matrix components in one isolate of this category of diarrheagenic E. coli confirms the heterogeneity among the atypical EPEC.
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Henrich, Vanessa. "Aquisição fonológica atípica do português brasileiro: evidências sobre complexidade dos sistemas fonológicos de crianças com desvio fonológico." Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul, 2013. http://hdl.handle.net/10923/4280.
Full textAbstract:
Made available in DSpace on 2013-08-07T19:03:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2013This research has a sample of 111 phonological inventories of children with phonological deviation. It intended to verify if all hypothesis of Modelo Implicacional de Complexidade de Traços – MICT (MOTA, 1996) have confirmed themselves, they way they are supposed to. It is a quantitative study of descriptive cross-sectional type, in which the data was analysed statistically by Statistical Package for Social Sciences (SPSS) program. This research deals only with consonant acquirement. At the first moment it verified the segment status in each phonological inventory, if they were acquired, being acquired or absent. Done that, a comparison was established between the results of this sample and the results of Mota (1996) sample. The study verified that the general expectations of MICT were confirmed, with an exception of rhotic consonant order acquirement. The vibrant, executed as fricative, or [x], emerges early than the tap, differently than what MICT predicted. However, it was observed that the children who are still acquiring the vibrant, a lot of times replace it for a liquid or a glide, what suggests that even when pronounced as a fricative, it seems like an allophone of the vibrant. Another divergent occurrences were found and constitute only expected variations.
Este trabalho pretendeu verificar com uma amostra de 111 inventários fonológicos de crianças com desvio fonológico se todas as hipóteses do Modelo Implicacional de Complexidade de Traços – MICT (MOTA, 1996) se confirmam, como se espera. Trata-se de um estudo quantitativo do tipo transversal descritivo, no qual os dados foram analisados estatisticamente pelo programa Statistical Package for Social Sciences (SPSS). O estudo diz respeito especificamente à aquisição de consoantes, no primeiro momento verificou-se o status dos segmentos em cada um dos inventários fonológicos, no sentido de estarem adquiridos, em aquisição ou ausentes. Feito isso, estabeleceu-se uma comparação com os resultados desta amostra com os resultados da amostra de Mota (1996). Verificou-se, de modo geral que as expectativas do MICT foram confirmadas, com exceção da ordem de aquisição das consoantes róticas. A vibrante, realizada como fricativa, isto é, [x], emerge mais precocemente do que o tepe, diferente do que estava previsto no MICT. No entanto, foi observado que as crianças que ainda estão adquirindo a vibrante, muitas vezes a substituem por uma líquida ou glide, sugerindo que embora seja pronunciada como fricativa, figura como alofone da vibrante. Outras ocorrências divergentes encontradas constituem apenas variações esperadas.
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Masip, Sales Núria. "Estudi de la ciclina atípica CCNI com a potencial activador de CDK6 en línies de càncer de mama." Doctoral thesis, Universitat Internacional de Catalunya, 2022. http://hdl.handle.net/10803/673463.
Full textAbstract:
Fa quasi 40 anys del descobriment de les ciclines, les proteïnes oscil·lants tradicionalment dividies en dos grups, “cicle cel·lular” i “ciclines transcripcionals”, que duen a terme els seus rols juntament amb la seva parella ciclina depenent de cinases (CDKs). Des d’aleshores, s’han descrit varies parelles CDK-ciclina, com la família ciclina D (CCND) com a única activadora de CDK6. Aquest complex és un dels més rellevants en la progressió del cicle cel·lular controlant la transició G1-S, a través de la fosforilació de la proteïna de retinoblastoma (pRb) i el consegüent alliberament dels factors de transcripció E2F. Per aquest fet, CDK6 és la CDK diana farmacològica amb més èxit aplicada actualment a un gran nombre de càncers i, per tant, profunditzar en el coneixement sobre la biologia de CDK6 aportaria informació beneficiosa. Cal destacar, que la família de les ciclines s’ha estès per incloure altres proteïnes que presenten el característic domini cyclin box que determina la unió a CDK. Aquestes proteïnes, anomenades ciclines atípiques quasi no estan caracteritzades i la seva parella CDK segueix sense ser coneguda. A partir d’un assaig previ del doble híbrid en llevat, el nostre grup va identificar 10 nous complexes CDK-ciclina atípics, entre ells el format per ciclina I (CCNI) i CDK6 en el qual es centra aquesta tesi. Primerament, s’ha confirmat la interacció entre CCNI i CDK6 i s’ha demostrat que el complex és actiu. La sobreexpressió de CCNI incrementa la proliferació de línies cel·lulars tumorals i el creixement tumoral in vivo d’una manera similar a CCND1. I és més, l'acció proliferativa de CCNI pot ser anul·lada pel silenciament de CDK6 o el tractament amb palbociclib sostenint que CCNI actua a través de l'activació de CDK6. En línia amb aquests resultats, la sobreexpressió de CCNI correlaciona positivament amb una major expressió de gens regulats pel factor de transcripció E2F. En conclusió, aquesta tesi proposa a CCNI com un possible nou regulador de les vies d'activació de CDK6, enriquint la maquinària de control de la transició G1-S del cicle cel·lular.
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Cioccari, Giovani Matte. "Interpretação geoquímica e modelagem térmica na geração atípica de hidrocarbonetos: um exemplo na Formação Irati, Bacia do Paraná." reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS, 2018. http://hdl.handle.net/10183/178411.
Full textAbstract:
A avaliação da exploração de hidrocarbonetos nas bacias sedimentares brasileiras, especialmente nas paleozoicas, não pode desprezar o impacto dos eventos magmáticos. O magmatismo além das alterações nas propriedades petrofísicas das rochas também induz mudanças estruturais e estratigráficas nas bacias, atuando na formação das armadilhas, bem como formando barreiras ao fluxo de fluidos (selantes). No entanto, as rochas magmáticas podem apresentar feições estruturais e/ou texturais (tais como fraturas e vesículas) que formam um sistema permo-poroso, sendo então potenciais rochas reservatório. Contudo, é na interação com as rochas geradoras, e consequente geração de hidrocarbonetos, ou seja, na geração atípica, que as rochas magmáticas possuem um papel importante. A proposta deste estudo é analisar o processo de geração atípica de hidrocarbonetos por influência de intrusão ígnea com proposta inovadora da utilização de parâmetros orgânicos, inorgânicos e petrográficos integrados à modelagem numérica de fluxo de calor. A associação destes temas ainda é pouco empregada, mas permite discussões no tocante ao efeito térmico da intrusão ígnea na encaixante sedimentar no que diz respeito à geração de hidrocarbonetos. Como área de estudo, foram escolhidos afloramentos da Formação Irati (Membro Assistência) ao norte da Bacia do Paraná, onde as litologias típicas desta unidade (folhelhos orgânicos, margas e carbonatos) são intrudidas por soleiras ígneas.Como metodologia utilizou-se parâmetros orgânicos, inorgânicos e petrográficos para avaliar a influência térmica da soleira na rocha encaixante e determinar a auréola de contato gerada.A similação numérica unidimensional foi utilizada para entender como a mudança de parâmetros termofísicos e petrofísicos influenciam na predição do Tpeak da rocha encaixante.Os resultados de geoquímica orgânica e inorgânica sugerem que ocorrem percolações de fluidos através de células convectivas dentro rocha encaixante, gerando valores anômalos de maturação térmica e remobilizando elementos químicos. A origem destes fluidos possivelmente estaja associada às reações de evaporação da água do poro, devolatilização mineral e craqueamento térmico do querogênio causado pelo efeito térmico da intrusão ígnea. A simulação numérica mostra que o mecanismo de intrusão magmática tempo finito associado às reações de evaporação da água do poro e devolatilização mineral são elementos que devem ser considerados nas equações de dispersão de calor para correta calibragem térmica.Concluiu-se que a modelagem numérica integrada aos parâmetros orgânicos, inorgânicos e petrográficos constitui uma excelente técnica para avaliar a auréola de contato na rocha encaixante em bacias sedimentares, permitindo uma avaliação da evolução térmica mais precisa.Evaluation of the hydrocarbon exploration in the Brazilian sedimentary basins, cannot ignore the impact of the magmatic events, specifically the Paleozoic ones. The magmatism causes alterations in the petrophysical properties of the rocks. And in the basins induces structural and stratigraphic changes, that could result in the formation of traps, or working as barriers to the flow of fluids (sealants). Usually, magmatic rocks present structural and/or textured features (fractures and vesicles) that form a permo-porous system, and are thus potential reservoir rocks. However, it is in the interaction with the source rocks, and consequent generation of hydrocarbons, (atypical generation) that the magmatic rocks play an important role. In this study we will discuss about how to analyze the process of hydrocarbons atypical generation by influence of igneous intrusion with an innovative proposal of the use of organic, inorganic and petrographic parameters integrated to the numerical model of heat flow. The association of these themes is still little used, but it allows discussions the thermal effect of the igneous intrusion in the sedimentary host rock with respect to the hydrocarbon generation. Irati Formation outcrops (Assistência Member) located on the northern part of the Paraná Basin, were chosen because they are the typical lithologies of this unit (organic shales, marls and carbonates), and are intruded by igneous sills. As a methodology, organic, inorganic and petrographic parameters were used to evaluate the thermal influence of the sill in the host rock and to determine the generated contact aureole.Numerical simulation was used to understand how the change of thermophysical and petrophysical parameters influence the prediction of the host rock Tpeak.The results of organic and inorganic geochemistry suggest that fluid percolations occur through convective cells within the host rock, generating anomalous values of thermal maturation and remobilizing the chemical elements.The origin of these fluids may be associated with the pore-water evaporation, mineral devolatilization and thermal cracking of kerogen caused by the thermal effect of the igneous intrusion.The numerical simulation shows that the finite time intrusion mechanism of magma associated to the pore-water evaporation and mineral devolatilization reactions are elements that must be considered in the heat dispersion equations for the correct thermal calibration. Finally, that the numerical model integrated to the organic, inorganic and petrographic parameters constitutes an excellent technique to evaluate the contact aureole in the host rock in sedimentary basins, allowing an evaluation of the more precise thermal evolution.
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Rey, De Castro Zanelli María Rosa. "Actitudes hacia la jornada atípica en los trabajadores según su tiempo de servicio en el Centro de Producción Mantaro." Master's thesis, Tesis digitales - URP, 2011. http://cybertesis.urp.edu.pe/handle/urp/665.
Full textAbstract:
La tesis aborda como problema de investigación si tiempo de servicio de los trabajadores del
Centro de Producción Mantaro plantea diferencias en las actitudes ante la Jornada Atípica.
Para responder a esta interrogante se ha realizado una investigación no experimental, con
método descriptivo, comparativo, con diseño transversal.
Para la evaluación de las actitudes se utilizó el Cuestionario de Actitudes creado y validado por
la misma autora de la tesis reportando una validez de contenido muy alta obtenida con
criterio de jueces y una confiabilidad de 0.70 hasta un coeficiente de 0.81.
La población estuvo constituida por 109 trabajadores, distribuidos tal según tiempo de
servicio y grupo ocupacional.
El estudio encontró que la jornada atípica por los resultados encontrados nos revela actitudes
de aceptación, en todos los grupos en función al tiempo de servicio, y para cada uno de los
factores que podrían estar implicados por la jornada atípica, como es la familia, la economía
personal, el descanso físico y las relaciones laborales.
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Freitas, Natalia Cristina de. "Fímbrias Pil em Escherichia coli enteropatogênica atípica: Caracterização e investigação do papel de PilS e PilV na adesão bacteriana." Universidade de São Paulo, 2012. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42135/tde-20092012-095345/.
Full textAbstract:
Fímbrias do tipo IV estão associadas a diversos fenótipos em bactérias gram-negativas, e o presente estudo consistiu na caracterização da fímbria Pil e investigação de seu papel na adesão bacteriana de isolados de EPEC atípica. Por PCR e RT-PCR foram investigadas a presença e a funcionalidade do operon Pil e os resultados demonstraram que este está sendo transcrito somente nos isolados BA558 e BA956. Os genes pilS e pilV foram clonados em vetor de expressão para obtenção das proteínas Pil recombinantes e produção de anticorpos policlonais. A análise qualitativa dos testes de inibição da adesão utilizando os soros anti-PilS e anti-PilV juntos demonstraram que o isolado BA558 apresentou mudança de fenótipo de adesão. Esses resultados nos permitem concluir que o operon Pil está funcional em BA558 e BA956, e a expressão da fímbria Pil nessas cepas não está relacionada à formação de biofilme e autoagregação, porém a proteína fimbrial PilS juntamente com a adesina PilV parecem exercer uma função acessória importante na interação de BA558 às células HEp-2.Type IV fimbriae are associated with several phenotypes in gram-negative bacteria. The aim of this study was the characterization of the Pil fimbria and its role in the interaction of atypical EPEC isolates in bacterial adhesion. Using PCR and RT-PCR, we investigated the presence and functionality of the pil operon genes. The results showed that these genes are transcribed only in the BA558 and BA956 isolates. The pilS and pilV genes were cloned into an expression vector for recombinant proteins and polyclonal antibodies production. Qualitative analysis of the adherence inhibition assays using both rabbit sera changed to localized-like the phenotype of BA558 isolate adhesion. Together, these results allow us to conclude that the Pil operon is functional only in the BA558 and BA956 isolates and that the expression of Pil fimbriae in aEPEC is not related to biofilm formation and autoaggregation but, the fimbrial PilS protein together with PilV adhesin seem to play an important accessory function in the interaction between the BA558 and epithelial cells in vitro.
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Anacléto, Maria José Pinheiro. "Efeito de um episódio de chuva atípica sobre a comunidade de macroinvertebrados bentônicos em um barramento hidrelétrico no cerrado." Universidade Estadual da Paraíba, 2015. http://tede.bc.uepb.edu.br/tede/jspui/handle/tede/2257.
Full textAbstract:
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This study evaluated the temporal distribution of macroinvertebrate community relating one year of normal rainfall (2010) and one year of atypical rainfall (2014), in order to investigate the changes in the composition and structure of benthic macroinvertebrate communities in a hydropower project reservoir in a rain atypical scenario. The study was conducted in the same sampling area and sampling sites in the years 2010 and 2014, at the reservoir of Nova Ponte Hydroelectric Plant, located in the Triangulo Mineiro region, in Nova Ponte, River Basin Araguari, by using benthic macroinvertebrates as bioindicators in the environmental assessment. The results showed a low abundance and diversity of related organisms in 2014 year of atypical rain. The areas around the reservoir showed changes according to the use and occupation of land. However, human activities have tightly changing the water resources, interfering with the communities that live there.
O presente trabalho avaliou a distribuição temporal da comunidade de macroinvertebrados relacionando um ano de pluviosidade normal (2010) e um ano de pluviosidade atípica (2014), com o intuito de investigar as alterações na composição e estrutura de comunidades de macroinvertebrados bentônicos em um reservatório de empreendimento hidrelétrico em um cenário de chuva atípica. O estudo foi realizado na mesma área amostral e nos mesmos sítios amostrais nos anos 2010 e 2014, do reservatório da Usina Hidrelétrica de Nova Ponte, localizada na região do Triângulo Mineiro, no município de Nova Ponte, Bacia do Rio Araguari. Usando os macroinvertebrados bentônicos como bioindicadores na avaliação ambiental. Os resultados apresentaram uma baixa abundância e diversidade de organismos relacionado em um ano de chuva atípica. As áreas do entorno do reservatório apresentaram alterações de acordo com o uso e ocupação do solo. No entanto, as atividades humanas vem alterando fortemente os recursos hídricos, interferindo as comunidades que lá habitam.
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Agopian, Paula Ghedini Der. "Estudo do efeito de elevação atípica da transcondutância na região linear de polarização em dispositivos SOI nMOSFETS ultra-submicrométricos." Universidade de São Paulo, 2008. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/3/3140/tde-09022009-190025/.
Full textAbstract:
Este trabalho apresenta o estudo do efeito de elevação atípica da transcondutância na região linear de polarização devido ao efeito de corpo flutuante induzido pela porta (Gate Induced Floating Body Effect - GIFBE) de transistores da tecnologia SOI nMOSFET. Este estudo foi realizado com base em resultados experimentais e em simulações numéricas, as quais foram essenciais para o entendimento físico deste fenômeno. Além de contribuir com a explicação física deste fenômeno, este trabalho explora o efeito de corpo flutuante em diferentes estruturas (transistor de porta única, transistor de porta gêmea, transistor de múltiplas portas e transistores de canal tensionado), diferentes tecnologias e em função da temperatura (100K a 450K). A partir do estudo realizado em dispositivos SOI de porta única analisouse a influência das componentes da corrente de porta que tunelam através do óxido de porta do dispositivo, o potencial da região neutra do corpo do transistor, a taxa de recombinação de portadores, o impacto da redução da espessura do óxido de porta e também as dimensões físicas do transistor. Na análise feita da redução do comprimento de canal, verificou-se também que o GIFBE tende a ser menos significativo para dispositivos ultra-submicrométricos. Analisou-se também o efeito da elevação atípica da transcondutância para transistores SOI totalmente depletados, para os quais, este efeito ocorre apenas quando a segunda interface está acumulada, para as duas tecnologias estudadas (65nm e 130nm). A análise dos dispositivos de porta gêmea, que tradicionalmente são usados com a finalidade de minimizar o efeito de elevação abrupta de corrente de dreno, mostrou uma redução do GIFBE para este tipo de estrutura quando comparada à de porta única devido ao aumento da resistência série intrínseca à estrutura. O efeito de corpo flutuante também foi avaliado em função da temperatura de operação dos dispositivos. Para temperaturas variando de 100K a 450K, notou-se que o valor do limiar de GIFBE aumentou tanto para temperaturas acima de 300K quanto abaixo da mesma. Quando estes resultados são apresentados graficamente, observa-se que o comportamento do limiar de GIFBE com a temperatura resulta no formato de uma letra C, onde o valor mínimo está a 300K. Este comportamento se deve à competição entre o processo de recombinação e a degradação efetiva da mobilidade. Uma primeira análise do GIFBE em diferentes estruturas de transistores também foi realizada. Apesar dos transistores de canal tensionado apresentarem o efeito para valores menores de tensão de porta, este efeito se manifesta com menor intensidade nestes transistores, devido a alta degradação da mobilidade efetiva apresentada pelo mesmo. Entretanto, quando o foco são os transistores de múltiplas portas, os resultados obtidos demonstram que apesar destes dispositivos terem sido fabricados com dielétrico de porta de alta constante dielétrica, o GIFBE ainda ocorre. Esta ocorrência do GIFBE em FinFETs é fortemente dependente da largura do Fin, da dopagem da região de canal e conseqüentemente do acoplamento das portas laterais com a superior.This work presents the study of the Gate Induced Floating Body Effect (GIFBE) that occurs in the SOI MOSFET technology. This study has been performed based on experimental results and on numerical simulations, which were an essential auxiliary tool to obtain a physical insight of this effect. Besides the contribution on the physical explanation of this phenomenon, in this work, the floating body effect was evaluated for different structures (single gate and twin-gate transistors), different technologies (130nm and 65nm SOI CMOS technology) and as a function of the temperature (100K to 450K). From the study of the single gate devices, it was evaluated the gate tunneling current influence on GIFBE, the body potential in the neutral region, the recombination rate, the front gate oxide thickness reduction impact, besides the physical dimensions of the transistor. In the performed analysis, taking into account the channel length reduction, it was verified that the GIFBE tends to be less important for ultra-submicron devices. The GIFBE only occurs for fully depleted devices when the second interface is accumulated. In this situation, the floating body effect influence on fully depleted devices was also studied for both technologies (65nm and 130nm). The twin-gate devices analysis, that traditionally are used in order to minimize the Kink effect, show a GIFBE reduction for this structure when it is compared to the single gate one. This enhance in the electrical characteristics is due to the series resistance increase that is intrinsic of this structures. When the temperature variation from 100K to 450K was analyzed, it was obtained the C shape behavior for the floating body effect due to a competition between the recombination process and the effective mobility degradation factor. A first evaluation of the GIFBE occurrence in new devices was also performed. When the focus is the strained silicon transistor, a occurrence of GIFBE was obtained for a lower gate voltage. Although, the GIFBE occurs earlier for strained transistor. This effect is less pronounced in this device because it presents strong effective mobility degradation. When the focus is FinFETs, the results show that although this device was fabricated with a high-k gate dielectric, the GIFBE still occurs and is strongly dependent on the device channel width.
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Vasconcellos, Francielli Mahnic de. "Padrão de adesão agregativa e formação de biofilme em Escherichia coli enteroagregativa típica e atípica: papel da proteína Shf." Universidade de São Paulo, 2009. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-28102009-083025/.
Full textAbstract:
Escherichia coli enteroagregativa (EAEC) é caracterizada pela expressão do padrão de adesão agregativa (AA) em células HEp-2 e sua classificação em típica e atípica se baseia na presença ou ausência de aggR, respectivamente. O gene shf de EAEC codifica uma proteína com similaridade a IcaB, relacionada à formação de biofilme. Os objetivos deste estudo foram verificar a prevalência de shf em 113 amostras de EAEC isoladas no Brasil e investigar o envolvimento de Shf na formação de biofilme e no padrão AA de EAEC típica e atípica. O gene shf foi detectado em 25 EAEC típicas e em 16 atípicas. As amostras shf+ foram analisadas quanto ao sorogrupo, adesão em células HEp-2 e formação de biofilme. Nenhuma dessas características foi associada a shf e a formação de biofilme foi detectada em todas essas amostras. A mutagênese em shf resultou na diminuição da capacidade de formação de biofilme e na incapacidade de adesão. Foi demonstrado que o gene shf é prevalente e que Shf participa do estabelecimento do padrão AA e de formação de biofilme em EAEC típica e atípica.Enteroaggregative Escherichia coli (EAEC) is characterized by the expression of the aggregative adherence (AA) pattern to HEp-2 cells. The classification of EAEC in typical and atypical is based on the presence or absence of aggR, respectively. The shf gene encodes a protein with similarity to IcaB, associated with biofilm formation. The objectives of this study were to verify the prevalence of shf in 113 EAEC strains isolated in Brazil and investigate the role of the Shf in the establishment of the AA pattern and biofilm of typical and atypical EAEC. The shf gene was detected in 25 typical and in 16 atypical EAEC. The shf+ strains were analyzed regarding serogroups, adherence to HEp-2 cells and the ability to form biofilm. None of these characteristics was associated with the presence of shf and all strains were able to produce biofilm. The mutagenesis in shf reduced the biofilm formation and abolished the adherence to HEp-2 cells. This study demonstrated that shf is prevalent and Shf is involved in the AA and biofilm formation of typical and atypical EAEC.
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Vela, Gonzales Carlos Gil, and Rabanal Cristian Attilio Cadenillas. "Constitucionalidad y Legalidad en la aplicación de la Jornada de Trabajo Atípica Acumulativa en la Minería y Casuística aplicada." Master's thesis, Universidad Peruana de Ciencias Aplicadas (UPC), 2020. http://hdl.handle.net/10757/653469.
Full textAbstract:
La importancia de la Jornada Atípica Acumulativa en la minería en nuestro país radica en que facilita mayores niveles de producción y utiliza para ello la fuerza laboral de los trabajadores mineros en ciclos de trabajo (o también llamados sistemas de trabajo) que consisten en períodos acumulativos de trabajo y que son compensados también con períodos acumulativos de descanso, pero para ello debe cumplirse con diversos parámetros constitucionales (Constitución Política de 1993, Sentencias del Tribunal Constitucional y Convenio 01 de la Organización Internacional del Trabajo - OIT) así como con diversos parámetros legales (TUO de la Ley de Jornada y su Reglamento, Consolidación de los Descansos Remunerados y su Reglamento) y otros parámetros interpretativos sumamente importantes (Directivas e Informes del Ministerio de Trabajo – MTPE). De contar con dichos parámetros la jornada atípica acumulativa en la minería será constitucionalmente y legalmente válida.
Más, luego de precisar la constitucionalidad y legalidad de este tipo de jornada de trabajo, corresponde ahora definir algunos aspectos importantes de casuística respecto al cálculo de la Jornada Atípica Acumulativa en la Minería que servirán para despejar algunas dudas en este tema poco estudiado aún en el Derecho Laboral y en el Derecho Minero. Y finalmente corresponde desarrollar una propuesta normativa que regule todos los aspectos necesarios para la aplicación de este tipo especial de jornadas de trabajo.The importance of Atypical Cumulative Working Day in mining in our country is that it facilitates increased production and uses for this labor force miners to work cycles (also called work systems) consisting of periods cumulative work and are also offset by cumulative periods of rest, but this should be met with various constitutional parameters (1993 Constitution, Constitutional Court rulings and Convention 01 of the International Labour Organization - ILO) as well as various legal parameters (Journey Act and Regulations, Consolidation of Remunerated Breaks and Regulations) and other highly important interpretative parameters (Directives and Reports of the Ministry of Labour - MLEP). To have these parameters cumulative atypical journey in mining will be constitutionally and legally valid. Moreover, after specifying the constitutionality and legality of this type of working day, it is now necessary to define some important aspects of casuistry regarding the calculation of the Cumulative Atypical Working Day in Mining that will serve to clear up some doubts in this little studied subject still in the Labor Law and Mining Law. And finally it corresponds to develop a normative proposal that regulates all the necessary aspects for the application of this special type of working days.
Tesis
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Silva, Marcos da Costa. "Estudo de citocinas, imunofenotipagem, aberrações cromossômicas e da vitamina D em pacientes com diagnóstico de leucemia linfóide Crônica atípica." Universidade Federal da Bahia, 2016. http://repositorio.ufba.br/ri/handle/ri/23423.
Full textAbstract:
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CAPES
A Leucemia Linfóide Crônica (LLC) tem origem nos linfócitos B, derivada de uma única célula transformada devido a alterações genômicas, aumentando a resistência à apoptose. Essas células acumulam-se no sangue, medula óssea e órgãos linfoides secundários muitas vezes passando de 10.000 células/mm3 de sangue resultando em anormalidades imunológicas. Mais de 99% dessas células circulantes estão na fase G0 do ciclo celular. É uma doença de maior prevalência no idoso, com médias de idade entre 64-70 anos. Células LLC geralmente co-expressam antígenos de células T e B em sua superfície e esses marcadores são úteis para o diagnostico da LLC através da imunofenotipagem. É frequente, na prática clinico-laboratorial, resultados inconclusivos para LLC, chamadas de LLC atípicas isso ocorre, principalmente devido a resultados limítrofes na imunofenotipagem. Outra técnica utilizada no diagnóstico e prognóstico da LLC é a análise de alterações cromossômicas através da Hibridação In Situ por Fluorescência (FISH). É uma alternativa para elucidação dos casos inconclusivos. Pacientes com aberrações têm sobrevida menor que aqueles com cariótipo normal. Devido a isso objetivou-se estudar a ocorrência da LLC no Estado da Bahia e as características dos indivíduos com laudo de LLC atípica, quanto ao perfil imunofenotípico , a presença de aberrações cromossômicas incluindo os genes da família NTRK, produção de citocinas e vitamina D. Entendimento que poderá auxiliar no desenvolvimento de políticas publicas para a terceira idade no Estado. Foi observado nas amostras analisadas no estudo a ocorrência de 22% de LLC, sendo que, 8% corresponde a LLC atípica. O gênero feminino foi o menos acometido, possivelmente associado aos hormônios sexuais. O trabalho mostrou a importância do uso do FISH, pois solucionou 87% dos casos atípicos sendo que a aberração mais freqüente foi a translocação 11:14 associada ao linfoma do manto. A IL-17 A mostrou-se um possível marcador de evolução clínica da doença. TNF e IFN- mostraram-se marcadores de pior prognóstico. Além disso, a diminuição dos níveis de vitamina D como um sinal de pior prognóstico. Foi observado no trabalho a presença de alterações cromossômicas nos genes da família NTRK, NTRK1 e NTRK3 correspondendo a 24%. O conjunto desses resultados amplia os conhecimentos sobre a LLC além de possibilitar para os pacientes, quando possível, mudanças na conduta terapêutica.
Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL) originates from B lymphocytes, derived from a single cell transformed due to genomic changes, increasing resistance to apoptosis. These cells accumulate in the blood, bone marrow and secondary lymphoid organs often passing from 10,000 cells / mm3 of blood resulting in immunological abnormalities. More than 99% of these circulating cells are in the G0 phase of the cell cycle. It is a disease of higher prevalence in the elderly, with a mean age of 64-70 years. LLC cells generally co-express T-cell and B-cell antigens on their surface and such markers are useful for the diagnosis of CLL by immunophenotyping. In clinical-laboratory practice, inconclusive results for CLL, often called atypical CLLs, are common, mainly due to borderline immunophenotyping results. Another technique used in the diagnosis and prognosis of CLL is the analysis of chromosomal changes through Fluorescence In Situ Hybridization (FISH). It is an alternative for the elucidation of inconclusive cases. Patients with aberrations have a lower survival rate than those with normal karyotype. Due to this, we aimed to study the occurrence of CLL in the State of Bahia and the characteristics of individuals with atypical CLL, regarding the immunophenotypic profile, the presence of chromosomal aberrations including the NTRK family genes, cytokine and vitamin D production. Understanding that may assist in the development of public policies for the elderly in the State. The occurrence of 22% of CLL was observed in the samples analyzed in the study, and 8% corresponded to atypical CLL. The female gender was the least affected, possibly associated with sex hormones. The work showed the importance of using FISH, since it solved 87% of atypical cases and the most frequent aberration was the 11:14 translocation associated with mantle lymphoma. IL-17A was shown to be a possible marker of clinical evolution of the disease. TNF and IFN-γ were shown to be worse prognostic markers. In addition, the decrease in vitamin D levels as a sign of worse prognosis. The presence of chromosomal alterations in the NTRK, NTRK1 and NTRK3 family genes, corresponding to 24%, was observed in the study. Together, these findings broaden the understanding of CLL and make it possible for patients, when possible, to change their therapeutic behavior.
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Sampaio, Suely Carlos Ferreira [UNIFESP]. "Escherichia coli enteropatogênica atípica: interação com linhagens celulares intestinais polarizadas e potencial de induzir a produção de Interleucina–8." Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2008. http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/24334.
Full textAbstract:
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Previous issue date: 2008Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Colégio Doutoral Franco Brasileiro (CDFB)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
A principal diferença entre Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) típica (tEPEC) e atípica (aEPEC) é a presença do plasmídeo EAF (EPEC adherence factor) apenas em tEPEC. Apesar de os dois grupos promoverem uma lesão denominada attaching and effacing (lesão A/E) no epitélio intestinal, algumas diferenças em relação aos demais mecanismos de virulência podem existir. Neste estudo, duas amostras selvagens de aEPEC (1711-4, sorotipo O51:H40, e 3991-1, O não tipável, não móvel) foram analisadas quanto à capacidade de aderir, invadir, persistir e induzir a produção de IL-8 em células intestinais T84 e Caco-2, diferenciadas in vitro. Os resultados foram comparados com os obtidos com a amostra protótipo de tEPEC E2348/69. O papel do flagelo nos processos de adesão, invasão e indução da produção de IL-8 e de um sistema de secreção tipo III (SST3) na indução da produção de IL-8 foram também investigados com aEPEC 1711-4, utilizando-se mutantes isogênicos deficientes em flagelina ou EscN, respectivamente. As amostras aEPEC 3991-1 e 1711-4 aderiram significativamente mais às células T84 do que em Caco-2. Entretanto, aEPEC 1711-4 foi mais invasiva do que aEPEC 3991-1 e tEPEC E2348/69. Além disso, as amostras de aEPEC persistiram em ambas as linhagens celulares por um mínimo de 48 h, mas o índice de persistência foi maior para aEPEC 3991-1 em células Caco-2. Nesta linhagem celular, a produção de IL-8 foi significativamente maior nos tapetes celulares infectados com a amostra selvagem aEPEC 1711-4 em 3 h do que naqueles infectados com as demais amostras. Além disso, o mutante aEPEC 1711-4 ΔfliC induziu menor estimulação da produção de IL-8 em fase precoce (3 h), mas não no período tardio (24 h) após infecção. O mutante aEPEC 1711-4 ΔescN estimulou níveis de IL-8, em três horas, significativamente mais elevados do que a amostra selvagem, o que sugere um papel antiinflamatório dos efetores injetados pelo SST3 durante a fase inicial da interação bactéria-célula hospedeira. Nossos achados indicam que aEPEC é um patotipo heterogêneo quanto a sua habilidade de aderir, invadir, persistir e induzir a produção de IL-8, e sugerem que algumas aEPEC podem ser mais eficientes em induzir resposta inflamatória do que a tEPEC protótipo E2348/69. Na infecção de enterócitos in vitro, a integridade do flagelo da aEPEC 1711-4 é necessária para adesão e invasão eficientes e estimulação precoce, mas não tardia, da produção de IL-8.
The main difference between typical (tEPEC) and atypical (aEPEC) enteropathogenic Escherichia coli is the presence of EPEC adherence factor (EAF) plasmid in tEPEC. Although both groups can promote attaching and effacing lesions in the intestinal epithelium, some differences concerning virulence mechanisms may exist. In this study two wild type aEPEC strains (1711-4, serotype O51:H40 and 3991-1, O non typeable non motile) were analyzed concerning their capacity to adhere to, invade, persist and stimulate IL-8 production by differentiated epithelial intestinal cells Caco-2 and T84 in vitro. Results obtained with aEPEC strains were compared to those obtained with the tEPEC prototype strain E2348/69. The role of flagellum in adhesion, invasion and stimulation of IL-8 production and that of a type III secretion system (T3SS) were also investigated with aEPEC 1711-4, using isogenic mutants deficient in flagellin or EscN, respectively. aEPEC strains 3991-1 and 1711-4 adhered significantly more to T84 than to Caco-2 cells. On the other hand, aEPEC 1711-4 was more invasive than aEPEC 3991-1 and tEPEC E2348/69. Besides that, aEPEC strains persisted in both cell lineages for a minimum of 48 hours, although this index was higher for aEPEC 3991-1 in Caco-2 cells. In this cell lineage, IL-8 production was significantly higher in monolayers infected with the wild type aEPEC strain 1711-4 in 3 hours after infection than in those monolayers infected with other strains. Moreover, the aEPEC mutant 1711-4 ΔfliC induced lower IL-8 levels in early phase (3 h) but not at late phase (24 h). The aEPEC mutant 1711-4 ΔescN stimulated IL-8 levels, in early phase, significantly higher than that induced by the wild type strain, indicating an anti-inflammatory role for the effectors injected by the T3SS during the initial interaction between bacteria and host cell. Our findings indicate that aEPEC is a heterogeneous group of pathogens concerning their ability to adhere to, invade, persist and stimulate IL-8 production and suggests that some aEPEC are more prone to induce inflammatory response than the prototype tEPEC strain E2348/69. In the in vitro infection model of enterocytes, the integrity of flagella of aEPEC 1711-4 is necessary for efficient adhesion, invasion and early but not late stimulation of IL-8 production.
BV UNIFESP: Teses e dissertações
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Vargas, Maria Auxiliadora Ramos. "Da chuva atípica à falta de todo mundo : a luta pela classificação de um desastre no município de Teresópolis / RJ." Universidade Federal de São Carlos, 2013. https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/6684.
Full textAbstract:
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Previous issue date: 2013-04-22Disaster is a current and complex subject. The most common way in which this subject has been interpreted and widely advertised presents it with underlying objective and unique aspects in the social imaginary. This approach is supported primarily on discursive strategies and practices produced by a specific rationality than can be found in some institutions (and their representatives) who has the power to present a definition and promote intervention in the phenomenon that is disaster authorities . However there are evidences pointing out that disaster is not consolidated into a single representation. Instead it represents a force field made by multiple agents and interpretations, developed through different positions and rationalities, expressing tensions, disputes and classification struggle. Identify and discuss this particular field through sociological analysis noticing those institutionally situated actors and those who compose social groups that are directly affected is the main purpose of this work a qualitative research with the following methodological procedures: a literature review in Sociology and related areas, documentary collection and analysis, in-depth interviews. This thesis highlights the disaster in the city of Teresópolis/RJ as an important example of classification struggle and gets us close to vulnerability and abandonment processes concerning some specific social groups. It reveals power relations where there is an attempt at imposing monophonically scientific and technical knowledge to the detriment of popular culture which comes from life courses, in place experiences and past relation with threatening factors in an effort to attest diversity failure. However, multiple expressions of resilience among people affected by disaster are evidence of both the attempt to prevent them from speaking and the acknowledgement of a struggle in order to make their voices heard so that they become real participants in this political game and guarantee their condition as subjects of rights.
Desastre é um tema atual e complexo. A forma predominante como vem sendo interpretado e publicizado o projeta envolto por uma aparente objetividade e unicidade no imaginário social. Esta forma se encontra respaldada fundamentalmente nas estratégias discursivas e práticas geradas por uma racionalidade específica que está nas instituições (e seus representantes) a quem é delegado o poder de denominar e intervir sobre o fenômeno ou seja, as autoridades em desastres . Porém, há indícios de que o desastre não é feito de uma única representação, mas constitui um campo de forças formado por múltiplos agentes e interpretações, originados de posições e racionalidades diversas, expressando tensões, disputas e a luta pela sua classificação. Identificar e problematizar esse campo, à luz da análise sociológica observando aqueles agentes institucionalmente situados e os que constituem os grupos sociais diretamente afetados -, é o objetivo que norteia este trabalho - uma investigação de base qualitativa que se utilizou dos seguintes procedimentos metodológicos como referência: revisão bibliográfica atinente à Sociologia e áreas afins, levantamento e análise documentais e entrevistas em profundidade. A presente tese traz o desastre em desenvolvimento no município de Teresópolis/RJ como um exemplo relevante da luta pela sua classificação e nos aproxima de processos de vulnerabilização e abandono envolvendo grupos sociais específicos. Revela jogos de poder , onde há a tentativa de imposição monofônica do conhecimento científico e técnico em detrimento dos saberes populares, advindos das trajetórias de vida, experiências no lugar e da relação pretérita com fatores de ameaça num esforço de ver a diversidade sucumbir. No entanto, as múltiplas expressões de resistência dos afetados nos desastres denunciam, não só a tentativa de silenciar a sua vocalização, como também a existência de uma luta para que sejam centralmente ouvidos e se tornem partícipes nesse jogo político, sendo resguardados na sua condição de sujeitos de direitos.
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Porporatti, André Luís. "Avaliação de pacientes com odontalgia atípica perante Teste Sensorial Quantitativo (QST) e Teste de Controle de Modulação da Dor (CPM)." Universidade de São Paulo, 2013. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/25/25146/tde-14082013-090225/.
Full textAbstract:
Odontalgia Atípica (OA) é uma condição dolorosa orofacial crônica de intensidade moderada a severa, que ocorre nas estruturas dentoalveolares e na mucosa oral. É considerada de difícil diagnóstico por estar associada com a ausência de alterações clínicas e radiográficas perceptíveis. Seus aspectos patofisiológicos sensoriais e de manutenção e perpetuação da dor ainda são mal compreendidos. Os objetivos deste estudo foram: (1) avaliar as alterações somatossensoriais em pacientes com OA através dos testes sensoriais quantitativos (QST); (2) ampliar o conhecimento disponível sobre os mecanismos de modulação da dor através do teste de controle de modulação da dor (CPM); e (3) avaliar as condições psicológicas como ansiedade e depressão, qualidade do sono e qualidade de vida através de questionários auto-aplicáveis. Um total de 50 indivíduos foram incluídos, sendo 25 sujeitos do grupo sintomático com OA (19 mulheres, 58,25 +- 12,17 anos de idade) e 25 sujeitos saudáveis do grupo controle (19 mulheres, 58,92 +- 7,39 anos)(p>0.05). Os QSTs englobaram os testes de Limiar de Detecção Mecânica (MDT), Limiar de Sensibilidade Dolorosa Mecânica (PDT), Teste Mecânico de Alodinia com cotonete (DMA1) e escova dental (DMA2), Testes de Detecção Dolorosa do tipo quente (HPD) e gelado (CPD) e o Teste de Somação Temporal (WUR). O controle de modulação da dor foi feito através do teste CPM e as avaliações psicológicas através do Inventário de Ansiedade e Depressão de Beck, o Índice de Qualidade do Sono de Pittsburg e o Questionário de Qualidade de Vida SF-36. Os QSTs foram repetidos após a aplicação de uma pomada anestésica de Benzocaína 2%. A análise estatística foi feita através dos testes t pareado, teste t e o teste não paramétrico de Mann-Whitney, considerando-se um nível de significância de 5%. Os resultados indicaram que sujeitos com OA apresentam ganho sensorial por meio de estímulos térmicos do tipo quente (HPD) e gelado (CPD) e estímulos mecânicos dinâmicos (DMA1, DMA2 e WUR), e perda sensorial à estímulos mecânicos (MDT, PDT). Ainda, o teste CPM reduziu a intensidade da dor significativamente somente para o grupo controle. A aplicação tópica de anestesia indicou uma redução significativa na intensidade da dor nos indivíduos afetados. Além disso, sujeitos com OA apresentaram sintomas de maior depressão e ansiedade, qualidade do sono ruim e baixa qualidade de vida comparados à pacientes saudáveis. Este estudo enfatizou que alterações somatossensoriais significativas são encontradas em sujeitos com OA, onde envolve uma participação de processos periféricos de sensitização e condução da dor, associado à fenômenos de alodínia e hiperalgesia, o que sugere alterações em nível de sensitização central. O sistema modulátorio de dor mostra-se deficiente e as condições psicológicas estão afetadas em sujeitos com OA.Atypical Odontalgia (AO) is a chronic orofacial painful condition, which occurs in dentoalveolar structures and oral mucosa. AO is difficult to diagnose because it is associated with the absence of any clinical and radiographic alterations. Repetitive dental procedures are made, with the aim to relief pain. Sensory pathophysiological aspects and pain maintenance and perpetuation are still poorly understood. The aim of this study were: (1) evaluate somatosensory abnormalities in AO patients through quantitative sensory testing (QST), (2) evaluate mechanisms of pain modulation through the controlled pain modulation test (CPM), and (3) assess the psychological features such as anxiety, depression, sleep quality and quality of life through selfreported questionnaires. A total of 50 subjects were included, consisting of 25 subjects with symptomatic AO (19 women, 58.25 +- 12.17 years old) and 25 subjects in the control group (19 women, 58.92 +- 7.39 years old)(p>0.05). QST encompassed Mechanical Detection Threshold (MDT), Pain Detection Threshold (PDT), Dynamical Mechanical Allodynia with a cotton swab (DMA1) and with a toothbrush (DMA2), Cold Pain Detection (CPD), Heat Pain Detection (HPD) and Wind-up Ratio (WUR). Pain modulation was performed by CPM and psychological evaluations through Anxiety Inventory and Beck Depression Index, the Pittsburgh Sleep Quality and Quality of Life Questionnaire SF-36. QSTs were repeated after the administration of an anesthetic cream (2% Benzocaine). Statistical analysis was performed using the \"t\" test, paired t test and nonparametric Mann-Whitney test considering a significance level of 5%. Results indicated that AO subjects showed sensory gain through heat (HPD) and cold (CPD) stimuli and dynamic mechanical stimuli (DMA1, DMA2 and WUR), and sensory loss to mechanical stimuli (MDT, PDT). Moreover, CPM reduced pain intensity significantly only in the control group. A topical anesthesia showed a significant reduction in pain intensity in affected subjects. Furthermore, subjects with AO had symptoms of depression and anxiety, poor sleep quality and poor quality of life compared to healthy individuals. This study emphasized that somatosensory abnormalities are found in subjects with AO, which involves participation of peripheral sensitization associated with allodynia and hyperalgesia, suggesting central sensitization abnormalities. Pain modulation system proves deficient and psychological conditions are affected in subjects with AO.
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Pardini, Luciana Moura Campos. "Contribuições para a criação de uma biblioteca scFV a partir de fêmeas caninas com hiperplasia mamária atípica e carcinoma mamário." Botucatu, 2019. http://hdl.handle.net/11449/181191.
Full textAbstract:
Orientador: Patrícia Pintor dos ReisResumo: Os anticorpos são proteínas altamente específicas, com síntese estimulada pela presença de um antígeno, que podem ser usados como ferramentas em pesquisa, diagnóstico clínico, acompanhamento de patologias, inferência in silico e terapêutica. Diferentes metodologias baseadas no uso de anticorpos vêm sendo descritas e, a grande maioria delas utilizando como ferramenta a construção por técnicas moleculares da fração de ligação ao antígeno (Fab) ou as frações variáveis da imunoglobulina. O estudo e aplicação dos anticorpos desenvolvidos in vitro na prática médica humana cresceu muito nos últimos anos, no entanto o mesmo não ocorreu no campo da medicina veterinária, área que carece de estudos nesse sentido. Assim, este estudo buscou realizar a criação de uma biblioteca de frações variáveis de anticorpos em hiperplasia e neoplasia mamária em cães e criar um banco de dados gerado por sequenciamento em larga escala de sequências destes anticorpos para disponibilização pública, contribuindo, assim, para futuras aplicações e avanços científicos no campo da medicina veterinária.
Abstract: Antibodies are highly specific proteins, with stimulated synthesis by the presence of an antigen, which can be used as tools in research, clinical diagnosis, pathology monitoring, in silico inference and therapeutics. Different methodologies based on the use of antibodies have been described and the majority of them uses molecular techniques to construct the antigen binding fraction (Fab) or the variable fractions of the immunoglobulin. Description and application of antibodies developed in vitro in the human medical practice has grown a lot in the last years, however the same has not occurred in veterinary medicine field. Thus, this study aimed to create a library of variable fractions of antibodies in mammary hyperplasia and neoplasia in dogs and to create a database generated by large-scale sequencing of these antibodies for public availability, thus contributing to future applications and scientific advances in veterinary medicine.
Doutor
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Lima, Nicole Ribeiro. "Prevalência e caracterização de Escherichia coli enteroagregativa típica e atípica em amostras de carne moída na cidade de Londrina, PR." Universidade Estadual de Londrina. Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Microbiologia, 2016. http://www.bibliotecadigital.uel.br/document/?code=vtls000210933.
Full textAbstract:
Escherichia coli enteroagregativa (EAEC) é um patógeno emergente que pode causar diarreia aguda e persistente, em crianças e adultos. Surtos de diarreia em vários países foram associados à EAEC pela ingestão de alimentos contaminados. Nos últimos anos, diagnóstico molecular para caracterizar EAEC típica (EAECt) utilizando os genes aatA e aggR e para EAEC atípica (EAECa) os genes aaiC e aaiA, vem sendo utilizado como alternativa ao teste de adesão. Assim, o presente estudo teve como objetivo pesquisar a prevalência de EAECt e EAECa em 100 amostras de carne moída bovina na cidade de Londrina, através do teste de adesão em células HEp-2 e da pesquisa dos genes aatA, aggR, aaiC e aaiA e comparar os resultados utilizando marcadores moleculares e o padrão de adesão. Formação de biofilme, pesquisa de outros genes associado à virulência de EAEC, resistência a antimicrobianos, filogenia e sorotipagem, também foi realizada. No teste de adesão, 89 (89%) amostras apresentaram o padrão agregativo (AA) característico de EAEC. Utilizando somente os marcadores moleculares, 5% das amostras foram classificadas como EAECt (aggR) e 9% como EAECa (aaiC e/ou aaiA). Das 89 EAEC analisadas, 79 (86,7%) apresentaram formação de biofilme. As 14 (15,7%) amostras que apresentaram um dos genes utilizados como marcador molecular foram testadas para resistência a antimicrobianos, outros genes de virulência associados à EAEC, filogenia e sorotipagem. Foi verificada resistência a ampicilina em seis amostras (42,8%) e duas (14,2%) ao trimetoprim-sulfametoxazol. O gene astA foi encontrado em nove amostras (64,3%), aggA em cinco (35,7%) e o gene shf em três amostras (21,4%). Na análise filogenética as amostras foram classificadas em três grupos: quatro (28,6%) no A, sete (50%) no B1 e três (21,4%) no E. Foram identificados 10 sorotipos diferentes: O93:H9; O3:H2; O140:H20; O152:H8; O175:H7; O93:H19; O113:H21; O70:H8; ONT:H21 e ONT:H8. De acordo com nossos resultados o padrão de adesão continua sendo o melhor teste para detectar EAEC, uma vez que pelo diagnóstico molecular 84,3% das amostras deixaram de ser caracterizadas como EAEC. Os resultados mostram que a carne moída bovina pode ser considerada um importante reservatório de EAEC, o que traz preocupação para a saúde pública pela possibilidade de transmissão deste patotipo ao homem através de alimentos contaminados.Enteroaggregative Escherichia coli (EAEC) is an emerging pathogen that can to cause acute and persistent diarrhea in children and adults. Outbreaks of diarrhea in several countries were associated with EAEC by ingestion of contaminated food. In recent years, molecular diagnosis to characterize typical EAEC (EAECt) using the aatA and aggR genes and for atypical EAEC (EAECa) the aaiC and aaiA genes, has been used as an alternative to the adhesion test. Thus, the present study aimed to investigate the prevalence of tEAEC and aEAEC in 100 bovine ground beef samples in the city of Londrina, through the adhesion test in HEp-2 cells and the search of the aatA, aggR, aaiC and aaiA genes. Biofilm formation, investigation of other genes associated to the virulence of EAEC, resistance to antimicrobials, phylogeny and serotyping, were also performed. In the adhesion test, 89 (89%) samples presented the aggregative adhesion (AA), characteristic of EAEC. Using only the molecular markers, 5% of the samples were classified as tEAEC (aggR) and 9% as aEAEC (aaiC and / or aaiA). Of the 89 EAEC analyzed, 79 (86.7%) presented biofilm formation. The 14 (15.7%) samples that presented one of the genes used as molecular marker were tested for resistance to antimicrobials, other virulence genes associated with EAEC, phylogeny and serotyping. Resistance to ampicillin was verified in six samples (42.8%) and two (14.2%) to trimethoprim-sulfamethoxazole. The astA gene was found in nine samples (64.3%), aggA in five (35.7%) and shf gene in three samples (21.4%). In the phylogenetic analysis, the samples were classified into three groups: four (28.6%) in A, seven (50%) in B1 and three (21.4%) in E. Ten different serotypes were identified: O93:H9; O3:H2; O140:H2O; O152:H8; O175:H7; O93:H19; O113:H21; O70:H8; ONT:H21 and ONT:H8. According to our results, the adhesion pattern remains the best test to detect EAEC, since by the molecular diagnosis 84.3% of the samples were no longer characterized as EAEC. The results show that bovine ground meat can be considered an important reservoir of EAEC, which causes concern for public health by the possibility of transmission of this pathogen to man through contaminated food.
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Pastor, Vera Tomasa Victoria. "Análisis correlacional de las secuelas estructurales y funcionales que son ocasionadas por la respiración oral y que condicionan la deglución." Doctoral thesis, Universitat Ramon Llull, 2008. http://hdl.handle.net/10803/9263.
Full textAbstract:
L'objectiu principal de la investigació va ser estudiar els efectes ocasionats per un hàbit de respiració oral en les diferents estructures orofacials i analitzar la relació entre respiració oral i deglució atípica. Per a això, es van definir les estructures que poden sofrir alteració per la inspiració oral i que són objecte d'estudi.
La selecció de la mostra es va realitzar a partir de la revisió de 762 històries clíniques dels pacients que van iniciar tractament en el Servei de Logopèdia de l'Hospital de Nens de Barcelona.
Es van descartar 389 nens que no s'ajustaven als nostres criteris de selecció, quedant 373 per a la realització de la investigació (309 amb respiració oral i 64 amb respiració nasal).
Es va utilitzar per a la recollida de dades un protocol d'evolució i un protocol de trastorns miofuncionals.
L'anàlisi dels resultats es va realitzar a través d'una metodologia correlacional que ens va permetre comptabilitzar les diferències estructurals i funcionals entre els nens amb respiració oral i nasal. Es van obtenir estadístics Chi-quadrat i V de Cramer a partir de taules de contingències.
Els resultats obtinguts mostren diferències significatives en la majoria de les estructures orofacials entre els respiradores orals i nasals. I reflecteixen relació entre respiració oral i deglució atípica.
El objetivo principal de la investigación fue estudiar los efectos ocasionados por un hábito de respiración oral en las diferentes estructuras orofaciales y analizar la relación entre respiración oral y deglución atípica.
Para ello, se definieron las estructuras que pueden sufrir alteración por la inspiración oral y que son objeto de estudio.
La selección de la muestra se realizó a partir de la revisión de 762 historias clínicas de los pacientes que iniciaron tratamiento en el Servicio de Logopedia del Hospital de Nens de Barcelona.
Se descartaron 389 niños que no se ajustaban a nuestros criterios de selección, quedando 373 para la realización de la investigación (309 con respiración oral y 64 con respiración nasal).
Se utilizó para la recogida de datos un protocolo de evolución y un protocolo de trastornos miofuncionales.
El análisis de los resultados se realizó a través de una metodología correlacional que nos permitió contabilizar las diferencias estructurales y funcionales entre los niños con respiración oral y nasal. Se obtuvieron estadísticos Chi-cuadrado y V de Cramer a partir de tablas de contingencias.
Los resultados obtenidos muestran diferencias significativas en la mayoría de las estructuras orofaciales entre los respiradores orales y nasales. Y reflejan relación entre respiración oral y deglución atípica.
The main objective of the research was to study the effects caused by a habit of oral respiration on different orofacial structures and analyze the relationship between oral respiration and atypical swallowing.
Thereby, there were defined structures that may suffer alteration by the oral inspiration and which are under consideration.
The sample selection was made after reviewing medical history of 762 patients who started treatment within the Logopedia Service at "Hospital de Nens" in Barcelona.
It ruled that 389 children did not meet our criteria for selection, leaving 373 for conducting the research (309 to 64 with oral respiration and nasal respiration).
A development protocol and a miofunctional disorder protocol were both used for data collection.
The analysis of the results was conducted through a correlational methodology that allowed us to account for structural and functional differences between children with oral and nasal respiration. We obtained Chi-square statistical and V of Cramer from contingency tables.
The results show significant differences in most orofacial structures between oral and nasal respirators. And they reflect a relationship between oral respiration and atypical swallowing.
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Mota, Cristiane Moda. "Influência de diferentes condições de cultivo na formação de biofilme por Escherichia coli enteropatogênica atípica (EPECa) e pesquisa de genes relacionados." Universidade de São Paulo, 2014. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-06122014-083305/.
Full textAbstract:
EPECa tem sido identificada como o principal agente de diarreia aguda em crianças de países em desenvolvimento. Biofilmes são estruturas bacterianas envoltas por uma matriz de exopolissacarídeos. O objetivo deste estudo foi verificar a influência de diferentes condições de cultivo na formação de biofilme por EPECa isoladas de crianças com diarreia e pesquisar a presença de genes relacionados com a formação de biofilme. As sequências genéticas dos genes csgA, crl, fimH e bcsA foram pesquisadas através da PCR e verificadas em 6 (26%), 23 (100%), 22 (95,6%) e 23 (100%) das amostras respectivamente. A formação de biofilme em placas de MTP por EPECa foi melhor evidenciada em meio LB sem sal a 26 °C e em caldo E. coli a 37 °C, tanto em número de amostras quanto em intensidade da formação de biofilme. As microscopias confocal e de varredura propiciaram uma análise qualitativa de microcolônias e pilares, além de EPS respectivamente. As condições de cultivo devem ser usadas com precaução para realmente aferir a capacidade de formação de biofilme por amostras de EPECa.aEPEC has been identified as the main agent of acute diarrhea in children in developing countries. Biofilms are bacterial structures which are surrounded by a matrix of exopolysaccharides. The aim of this study was investigate the influence of different culture conditions on biofilm formation by 23 aEPEC strains isolated from children with diarrhea and search for the presence of genes related to biofilm formation. The genetic sequences of the csgA, crl, fimH and bcsA genes were screened by PCR and were found in 6 (26%), 23 (100%) 22 (95.6%) and 23 (100%) of the strains respectively. Biofilm formation in MTP plates for aEPEC strains was better evidenced in LB medium without NaCl at 26 ° C and in E. coli broth at 37 ° C, both in number and intensity of biofilm formation. The confocal and scanning electron microscopy provided a qualitative analysis of structures such as microcolonies and pillars, and respectively EPS. The growing conditions should be used with caution to measure the real ability of biofilm formation by strains of aEPEC.
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Abdalla, Cristina Martinez Zugaib. ""Avaliação crítica do uso da reação em cadeia da polimerase e exames complementares no diagnóstico da tuberculose cutânea e micobacteriose atípica"." Universidade de São Paulo, 2005. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5133/tde-27012006-084511/.
Full textAbstract:
Realizou-se estudo comparando o uso da reação em cadeia da polimerase à evolução clínica e painel de exames tradicionais para diagnóstico em pacientes com suspeita clínica de tuberculose cutânea e micobacteriose atípica. Observou-se sensibilidade da reação em cadeia da polimerase de 88%, especificidade de 83%, valor preditivo positivo de 82%, valor preditivo negativo de 88% e acurácia de 85% com concordância pelo teste de McNemar (p= 0,655). Os exames do painel de maior acurácia, após a reação em cadeia da polimerase, foram o teste tuberculínico com acurácia de 79% e a presença de dermatite crônica granulomatosa com reação em cadeia da polimerase positiva com acurácia também de 79%, ambos com concordância pelo teste de McNemar (p= 0,179 e p= 0,655, respectivamente)A study was performed comparing the polymerase chain reaction and the traditional panel of exams for the diagnosis in patients with a clinical suspicion of cutaneous tuberculosis and atypical mycobacteria infection to the clinical evaluation. It was observed that the sensitivity of the PCR was 88%, the specificity was 83%, the positive predictive value was 82%, the negative predictive value was 88% and the accuracy was 85% in agreement with the McNemar test (p=0.655). The panel exams of second highest accuracy, were the tuberculin test with an accuracy of 79% and the chronic granulomatous dermatitis with positive PCR, also with an accuracy of 79%, both in agreement with the McNemar test (p=0.179 and p=0.655, respectively)
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Bueris, Vanessa. "Interação de Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) atípica que apresenta o padrão de adesão localizada-like com a célula epitelial in vitro." Universidade de São Paulo, 2008. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-22092008-133111/.
Full textAbstract:
As EPEC típicas apresentam padrão de adesão localizada (LA) em células epiteliais, formando de microcolônias compactas. As EPEC atípicas aderem no padrão de adesão localizada-like (LAL), no qual não se observa microcolônias e que ocorre tardiamente em relação à LA. O objetivo deste estudo foi caracterizar a interação de EPEC atípica que apresenta o padrão LAL com a célula epitelial. A cinética da formação da lesão A/E, característica da patogênese de EPEC, demonstrou um atraso na adesão e na formação da lesão em EPEC atípica, que correspondeu à expressão tardia de Intimina, Tir e EspA. A complementação de EPEC atípica com o regulador perABC antecipou a expressão destes fatores e a formação da lesão A/E. Não foi observada relação entre outras adesinas descritas em DEC com o padrão LAL, bem como a mobilização dos receptores eucarióticos nucleolina e b1-Integrina para o foco de adesão. Observou-se a possível interação da Intimina com um peptídeo da membrana da célula epitelial de 300 kDa, podendo tratar-se de um provável receptor para essa adesina.Typical EPEC exhibit a localized adherence (LA) pattern in epithelial cells, where tight bacterial clusters are produced. Atypical EPEC produce a localized-like (LAL) adhesion pattern, in which the compact clusters are not formed and that occurs in a later stage of the infection. The aim of this study was to characterize the interaction of LAL-adherent atypical EPEC with the epithelial cell. The kinetics of the A/E lesion, the main feature of EPEC pathology, showed a clear delay in its formation by the atypical strains, probably a consequence of the delay observed in the expression of Intimin, Tir and EspA. The complementation of atypical EPEC with the perABC regulator revealed to be effective in not only advancing the expression of these factors, as well the formation of A/E lesion. No correlation was found between the presence of different adhesins already described in DEC and the LAL pattern. The analysis of the possible interaction of Intimin with epithelial cell receptors showed the presence of a 300 kDa peptide that it seems to interact with this adhesin.
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Dal'Maso, Vinícius Buaes. "Contribuição da análise molecular do gene CFTR na investigação diagnóstica de pacientes com suspeita de fibrose cística leve ou doença atípica." reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS, 2012. http://hdl.handle.net/10183/79587.
Full textAbstract:
A fibrose cística (FC) é diagnosticada na presença de achados fenotípicos, história familiar ou triagem neonatal positiva acompanhada de evidência laboratorial de disfunção da CFTR, seja pelo teste do suor, diferença de potencial nasal ou pela identificação de duas mutações conhecidas como causa de FC nos genes da CFTR. Objetivos: Avaliar a contribuição da análise molecular do gene CFTR na investigação diagnóstica da fibrose cística em pacientes com suspeita de FC leve ou doença atípica. Secundariamente, comparar as características dos pacientes em 3 grupos: grupo com identificação de duas mutações conhecidas como causadoras da FC, grupo com identificação de apenas uma mutação e grupo sem mutação identificada. Métodos: Estudo transversal em adolescentes e adultos (≥14 anos). Os pacientes foram submetidos à avaliação clínica, laboratorial e radiológica; espirometria, microbiologia do escarro, ecografia hepática, teste do suor e análise molecular do gene CFTR. Resultados: Foram avaliados 37 pacientes com achados fenotípicos de FC, com ou sem confirmação pelo teste do suor. Houve predomínio do sexo feminino (75,7%) com média de idade de 32,5 ± 13,6 anos. A análise molecular contribuiu para o diagnóstico definitivo de FC em 3 casos (8,1%) dentre 37 pacientes em avaliação. Em 7 pacientes (18,9%) foram identificadas apenas uma mutação causadora de FC e em 26 pacientes (70,3%) não foram identificadas mutações. Nenhuma característica clínica estudada se associou com o diagnóstico genético. A mutação p.F508del foi a mais comum, encontrada em 5 pacientes. A associação de p.V232D e p.F508del foi encontrada em 2 pacientes. Outras mutações encontradas foram: p.A559T, p.D1152H, p.T1057A, p.I148T, p.V754M, p.P1290P e p.R1066H e p.T351S. Conclusão: A análise molecular da região codificante do gene CFTR apresentou contribuição limitada para investigação diagnóstica de pacientes com suspeita de fibrose cística leve ou doença atípica. Além disso, não houve associação entre as características clínicas e o diagnóstico genético.Cystic fibrosis (CF) is diagnosed in the presence of phenotypic findings, family history or positive neonatal screening accompanied by laboratory evidence of CFTR dysfunction, either by sweat test, nasal potential difference or the identification of two mutations known to cause CF in the CFTR gene. Objectives: To evaluate the contribution of molecular analysis of CFTR gene in cystic fibrosis diagnostic investigation in patients with suspected mild FC or atypical disease. Secondarily, to compare the characteristics of patients into 3 groups: group with identification of two mutations known to cause CF, group with identification of just one mutation and group without mutations. Methods: Cross-sectional study in adolescent and adult (≥ 14 years). The patient underwent clinical, laboratory and radiological spirometry, sputum microbiology, liver ultrasound, sweat test and molecular analysis of the CFTR gene. Results: We evaluated 37 patients with phenotypic findings of FC, with or without confirmation by the sweat test. There was a predominance of females (75.7%) with a mean age of 32.5 ± 13.6 years. Molecular analysis contributed to the definitive diagnosis of CF in 3 cases (8.1%) among 37 patients under evaluation. In 7 patients (18.9%) were identified only one mutation that causes CF and in 26 patients (70.3%) were not identified mutations. No clinical feature studied was associated with genetic diagnosis. The P.F508del mutation was the most common, found in 5 patients. The association p.V232D and p.F508del was found in 2 patients. Other mutations found were: p.A559T, p.D1152H, p.T1057A, p.I148T, p.V754M, and p.P1290P p.R1066H and p.T351S. Conclusion: Molecular analysis of the CFTR gene coding region showed limited contribution to the diagnostic investigation of patients with suspected cystic fibrosis mild or atypical disease. Moreover, there was no association between clinical features and genetic diagnosis.
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Yamamoto, Denise [UNIFESP]. "Ocorrência e caracterização de eventos de invasão de linhagens celulares cultivadas in vitro por amostras de Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) atípica." Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2009. http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/9879.
Full textAbstract:
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Publico-115.pdf: 983090 bytes, checksum: 7f674d882f7cc66c5e1e6fe6b081c85c (MD5)Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior e Programa Brasil Alemanha
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
Escherichia coli Enteropatogênica (EPEC) produz lesão attaching/effacing (A/E) em células eucarióticas mediada pela adesina de membrana externa intimina. EPEC são sub-agrupadas em típica (tEPEC) e atípica (aEPEC). Recentemente demonstramos que a amostra de aEPEC 1551-2 (sorotipo O não-tipável, não-móvel) invade células HeLa por um processo dependente da expressão de intimina do subtipo omicron. Neste estudo, avaliamos se amostras de aEPEC expressando diferentes subtipos de intimina também são invasoras utilizando ensaios quantitativos de proteção com gentamicina. Também avaliamos se aEPECs invadem células intestinais diferenciadas T84 e Caco-2. Cinco das seis amostras testadas invadiram células HeLa e T84 numa faixa de 13.3%-20.9% e 5.8%-17.8%, respectivamente, do total de bactérias associadas às células. As amostras estudadas foram significantemente mais invasoras que a amostra protótipo de tEPEC E2348/69 (1.4% e 0.5% em células HeLa e T84, respectivamente). A amostra 1551-2 foi ainda testada em células Caco-2 diferenciadas, o que resultou num índice de invasão semelhante àqueles obtidos em células T84 (7,5%±1,7) e também significantemente maior que a tEPEC E2348/69 (1,8%±0,6). A invasão de células T84 foi confirmada por microscopia eletrônica de transmissão. Mostramos ainda que a invasão de células HeLa por aEPEC 1551-2 depende de filamentos de actina, mas não de microtúbulos. Além disso, a infecção de monocamadas não diferenciadas e o rompimento das tight junctions aumentaram a eficiência da invasão de células T84, sugerindo uma via de invasão preferencial pela superfície não diferenciada. Em resumo, amostras de aEPEC podem invadir cultura de células in vitro com eficiência variável e independentemente de subtipo de intimina.
Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) produce attaching/effacing (A/E) lesions on eukaryotic cells mediated by the outer membrane adhesin Intimin. EPEC are subgrouped into typical (tEPEC) and atypical (aEPEC). We have recently demonstrated that aEPEC strain 1551-2 (serotype O non-typable, non-motile) invades HeLa cells by a process dependent on the expression of intimin subtype omicron. In this study, we evaluated whether aEPEC strains expressing other intimin subtypes are also invasive using the quantitative gentamicin protection assay. We also evaluated whether aEPEC invade intestinal differentiated T84 cells. Five of six strains invaded HeLa and T84 cells in a range of 13.3%-20.9% and 5.8%-17.8%, respectively, of the total cellassociated bacteria. The strains studied were significantly more invasive than prototype tEPEC strain E2348/69 (1.4% and 0.5% in HeLa and T84 cells, respectively). aEPEC strain 1551-2 was also tested in differentiated Caco-2 cells, resulting in an invasion index similar to that obtained in T84 cells (7.5%±1.7%). This strain was also significantly more invasive than prototype tEPEC strain E2348/69 (1.8%±0.6%). Invasiveness of T84 cells was confirmed by transmission electron microscopy. We also showed that invasion of HeLa cells by aEPEC 1551-2 depended on actin filaments, but not on microtubules. In addition, infection of non-differentiated monolayers and disruption of tight junctions enhanced its invasion efficiency in T84 cells, suggesting preferential invasion via a non-differentiated surface. In summary, aEPEC strains may invade intestinal cells in vitro with varying efficiencies and independently of the intimin subtype.
CAPES - Probral: 281/07
TEDE
BV UNIFESP: Teses e dissertações
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Barbosa, Joana Lobato. "Avaliação da infecção experimental de neurônios e células da glia do gânglio cervical superior por uma cepa brasileira atípica de Toxoplasma gondii." Universidade Federal de Minas Gerais, 2015. http://hdl.handle.net/1843/BUBD-9XDHJ2.
Full textAbstract:
Approximately two billion people are infected chronically with Toxoplasma gondii worldwide, showing unknown consequences. The infection is extremely successful. The parasite is able to cross the biological brain barrier inducing a chronic stage after the establishment of an immune response. The reactivation of the disease in immunocompromised patients causes toxoplasmic encephalitis that can lead to death. The toxoplasmosis treatment is limited and can be toxic for the host. In Brazil, T. gondii shows an uncommon genetic population structure, which have shown to correlate to more severe manifestations of the disease. We used a newly isolated and genotyped virulent strain obtained from the peripheral blood of human newborns diagnosed with congenital toxoplasmosis from 12 regions of Minas Gerais/ Brazil. In order to analyze the in vitro infection of neurons and glial cells by the virulent TgCTBr9 strain we used primary neuron and glial cell cultures, obtained by the removal of the superior cervical ganglia from 1 to 2 days C57BL/6 mice. The cultures were infected with a MOI of 10 and followed for 24, 48, 72, 96 and 192 hours post-infection and then fixed for analysis of neuronal damage, infection rate and immunofluorescence staining for structural and functional markers. We found the parasite in neurons and glial cells in all times analyzed, and the rate of infection in these cells increased with time. At 72 hours of infection we started to detect the expression of components of the cyst wall and this deposition was completed 192 hours post-infection. At this time we also found bradyzoites. From 24 to 96 hours, the neuronal survival rate and the neurite density of infected cultures were not significantly different from their intraexperimental controls. However, evidence for neuronal damage was qualitatively observed at 96 hours post-infection when infection rate was significantly increased. Regarding neuronal function and morphology, we have found that tubulin is expressed around tachyzoites in infected neurons, which express progressive decrease in tyrosine hydroxylase staining intensity over time. Our data shows that the virulent TgCTBr9 strain is not only able to infect neurons and glial cells in vitro, but also undergoes spontaneous encystmen 192hs post-infection. This was an unprecedented result since there are no studies correlating this unusual strain and the pathogenesis of Toxoplasmosis in Brazil.Aproximadamente dois bilhões de pessoas, em todo o mundo, estão infectadas cronicamente com o parasito Toxoplasma gondii, com amplas consequências. A infecção é extremamente bem sucedida. O parasito é capaz de atravessar a barreira hemato-encefálica e após o estabelecimento de uma resposta imune eficaz, estabelecer infecção crônica. A reativação da doença em indivíduos imunocomprometidos causa encefalite toxoplásmica que pode levar à morte. O tratamento para toxoplasmose é limitado e pode ser tóxico ao hospedeiro. No Brasil, o T. gondii possui uma estrutura genética populacional incomum, que tem sido correlacionada com as manifestações mais graves da doença. Nós utilizamos uma cepa virulenta, recém isolada e genotipada, obtida a partir do sangue um de recém-nascido diagnosticado com toxoplasmose congênita em Minas Gerais/Brasil. Para avaliação da infecção in vitro de neurônios e células da glia pela cepa virulenta TgCTBr9, nós utilizamos culturas primárias de neurônios e células da glia obtidos a partir da remoção do gânglio cervical superior de camundongos C57BL/6 com 1 a 2 dias de vida. As culturas foram infectadas a um MOI de 10 e acompanhadas por 24, 48, 72, 96 e 192 horas pós infecção e então fixadas e analisadas para danos neuronais, infectividade e marcadores estruturais e funcionais. Foram detectados parasitos em neurônios e células da glia em todos os tempos analisados, além do crescente aumento da taxa de infecção ao longo do tempo. Com 72 horas de infecção foi identificada a expressão de elementos da parede do cisto e esse processo estava completo com 192 horas. Nesse tempo nós também observamos a presença de bradizoítos. De 24 a 96 horas, as taxas de sobrevida neuronal e da densidade neurítica não foram estatisticamente significantes em relação aos controles intraexperimentais. No entanto, evidências de danos neuronais foram qualitativamente observadas com 96 horas, quando a taxa de infecção é significativamente maior. Quanto à função neuronal e morfologia, foi observado que a -tubulina é expressa ao redor de taquizoítos em neurônios infectados que também demonstram diminuição na intensidade da expressão de tirosina hidroxilase com o aumento do tempo de infecção. Nossos resultados demonstram de forma original que a cepa virulenta TgCTBr9 não só é capaz de infectar neurônios e células da glia in vitro, mas também de se diferenciar e encistar espontaneamente com 192 horas.