Academic literature on the topic 'Aujeszky, Doença de'

RESUMO Foi testada a eficiência de três diferentes formulações de vacina contra a doença de Aujeszky (DA). A vacina I foi formulada com antígeno em óleo com emulsão simples; a vacina II em óleo, acrescida de coadjuvante de imunidade celular e a vacina III constituída de antígeno e DEAE-dextran (DEAE-D) como adjuvante. Os testes de eficiência foram conduzidos em 48 leitões das raças Landrace e Large White, divididos em quatro grupos de 12 animais. Cada vacina foi aplicada em um grupo, ficando um como testemunha. Os leitões receberam duas doses de vacina no volume de 1ml, via intramuscular, com intervalo de 15 dias. Vinte e um dias após a segunda dose, foram desafiados com doses crescentes de vírus, log 10/ml (6,25; 7,25 e 8,25 para os vacinados e 4,25; 5,25 e 6,25 para os testemunhas) em 4 animais por diluição. As três vacinas conferiram proteção frente às diferentes concentrações de vírus utilizadas. A vacina l protegeu 96,1%, a vacina II, 90,9% e vacina III, protegeu 83,3%. Essas diferenças analisadas estatisticamente (p<0,05) não foram significativas. Os animais do lote testemunha, adoeceram com o quadro da DA, apesar da menor dose de desafio. Foram realizados quatro testes em coelhos. Nenhuma das três vacinas conferiu proteção aos coelhos.

<title>Resumo</title><p>A doença de Aujeszky (DA) é conhecida na suinocultura pelo seu grande impacto produtivo e econômico. Este trabalho teve como objetivo a descrição das ações de defesa sanitária animal utilizadas na identificação de focos dessa enfermidade. Foram selecionadas duas situações de foco de DA que ocorreram no Município de Cerqueira César, um caso apresentando somente animais sororreagentes (Foco 1) e outro em que havia animais com sinais clínicos da enfermidade (Foco 2). Estão descritos os métodos de identificação de focos utilizados nas ações de vigilância e o diagnóstico da situação epidemiológica encontrada. As medidas aplicadas na erradicação dos focos nos sistemas de produção de suínos infectados foram as prescritas na legislação de defesa sanitária animal e todos os focos identificados foram eliminados. Ao final, concluiu-se que as ações de defesa sanitária e a legislação em vigor foram eficazes, demonstrando que os sistemas de notificações das suspeitas da enfermidade são facilitadores das ações de vigilância.</p>

O objetivo deste trabalho foi desenvolver uma PCR em tempo real (qPCR) para o diagnóstico rápido e sensível da doença de Aujeszky. Os iniciadores amplificaram um fragmento de 123 pares de base do gene codificante da glicoproteína D. A qPCR foi testada em 25 amostras de cérebro de suíno positivas e 85 amostras negativas para DA no isolamento viral e na soroneutralização. A sensibilidade analítica foi calculada com acréscimo de um isolado brasileiro do SuHV-1 titulado em amostras de cérebro de suíno negativas na soroneutralização e na PCR. A técnica apresentou sensibilidade analítica de 10-0,5 TCID50/50µL. A qPCR foi capaz de distinguir reações inespecíficas devido a dímero de oligonucleotídeos iniciadores ou amplificações, além do alvo designado (evitando, assim, os falso-positivos), e de obter resultados rápidos.

Vacinas contra o herpes vírus bovino tipo-1 (IBRV, vírus da rinotraqueíte infecciosa) e o herpesvírus suíno (PRV, vírus da doença de Aujeszky) têm sido amplamente utilizadas em vários países para minimizar as perdas associadas à essas infecções. As vacinas tradicionais, no entanto, induzem uma resposta humoral indistinguível da resposta à infecção natural, o que não permite a distinção entre animais vacinados dos infectados naturalmente. Isto tem dificultado o estabelecimento de medidas de controle e erradicação dessas enfermidades. Nos últimos anos, a manipulação genética desses vírus tem permitido a obtenção de mutantes com marcadores antigênicos específicos. A estratégia consiste na deleção de uma ou mais glicoproteínas do envelope viral que não são essenciais para a replicação do vírus e o uso desses mutantes como vacinas. A utilização de um teste sorológico específico para a glicoproteína deletada permite a distinção entre animais vacinados dos infectados com o vírus de campo. A utilização de vacinas com marcadores antigênicos, também chamadas de vacinas diferenciais, tem sido a base de programas de controle e erradicação da doença de Aujeszky em vários países e começa a ser utilizada no controle da rinotraqueíte infecciosa bovina. Este artigo apresenta uma breve revisão sobre as bases moleculares e biológicas das vacinas diferenciais para o IBRV e PRV, assim como possíveis aplicações dessas vacinas no controle dessas enfermidades no Brasil em um futuro próximo.

A Doença de Aujeszky é um processo infeccioso de ampla difusão caracterizada por desenvolver infecções latentes e transtornos de ordem reprodutiva em suínos, levando a prejuízos econômicos substanciais dos agronegócios. Em função das futuras restrições comerciais internacionais pela ocorrência da doença, muitos países vislumbram a possibilidade da adoção de medidas e planos de erradicação da enfermidade. Este trabalho apresenta informações relativas ao sistema de criação, à distribuição geográfica e temporal de episódios, à densidade populacional, trânsito intra-estadual, trânsito interestadual de suínos oriundos dos Estados da Região Sul com destino ao Estado de São Paulo ou com passagem obrigatória pelo território paulista para chegar a outros Estados da Federação, para fins de cria ou abate, e interação desses dados com outros fatores epidemiológicos que possam favorecer a perpetuação da enfermidade.

A doença de Aujeszky ou pseudoraiva (DA), causada pelo vírus da pseudoraiva (PRV) é a maior preocupação na produção de suínos. No estado do Rio Grande do Sul, Brasil, a DA foi somente detectada em 1954, em bovino. Em 2003, ocorreram dois surtos de encefalite em granjas na região norte do estado, fronteira com o estado de Santa Catarina. O vírus da doença de Aujeszky (VDA) foi isolado a partir de animais coletados em oito granjas distintas da região e submetido a análises antigênicas e moleculares. As amostras de VDA isoladas foram comparadas com as amostras padrão NIA-3 e NP. A caracterização antigênica dos mesmos foi realizada com testes de imunoperoxidase frente a um painel de anticorpos mono-clonais (Mabs) preparado contra epitopos de glicoproteinas virais (gB, gC, gD e gE). A caracterização genômica foi realizada através da análise restrição enzimática (REA) sobre o genoma total das amostras, com a enzima de restrição (REA) Bam HI. O perfil antigênico das oito amostras isoladas no Rio Grande do Sul, bem como os apresentados pelas amostras padrão NIA-3 e NP, foram similares. A REA revelou que todos as oito amostras do Rio Grande do Sul apresentaram um arranjo genômico do tipo II, genótipo frequentemente encontrado em surtos prévios de DA em outros estados do Brasil. Os resultados aqui obtidos indicam que as oito amostras isoladas no Rio Grande do Sul são similares.

Este trabalho teve como objetivo a avaliação de duas estratégias para erradicação de focos da doença de Aujeszky (DA) em suínos criados comercialmente no estado de São Paulo. Foram identificados dois focos da enfermidade, no município de Cerqueira César, um apresentando somente animais sororreagentes (Foco 1) e outro, casos clínicos da doença (Foco 2). Foram avaliadas duas estratégias de erradicação, uma por eliminação dos sororreagentes e outra por despovoamento gradual, com acompanhamento durante 12 meses. A erradicação por eliminação dos sororreagentes foi aplicada no Foco 1 e compreendeu na identificação por exame sorológico, isolamento e abate dos positivos; vacinação dos negativos e reposição no plantel com animais provenientes de propriedade livre. No início dos trabalhos, 68% do plantel era positivo e ao final 51%. No Foco 2 utilizou-se o despovoamento gradual, onde todos os animais foram enviados ao abate sanitário, realizado vazio sanitário nas instalações, seguido pelo repovoamento com animais livres. Esta última estratégia, nas condições desse trabalho, mostrou-se a mais eficaz, pois erradicou a DA.

Relata-se a disseminação da infeção pelo vírus da doença de Aujeszky (VDA) a partir da comercialização de reprodutores suínos oriundos de duas granjas de reprodutores suídeos certificada (GRSC) que tiveram surto da DA. Após a confirmação do diagnóstico de DA, os suínos comercializados 37 a 45 dias anteriores aos surtos foram recolhidos, submetidos ao exame sorológico para o VDA e enviados ao abate. Nos rebanhos-destino foram realizados exames sorológicos para o VDA 17 a 37 dias após o recolhimento, naqueles que estavam lojados nas baias vizinhas àquelas onde haviam sido alojados os suínos comprados; seis meses mais tarde, foi realizada outra sorologia por amostragem dos reprodutores. No total, 52 rebanhos compraram suínos das duas granjas, e, destes, 37 (69,8%) receberam, pelo menos, um animal com sorologia positiva para o VDA. Somente sete (18,9%) deles apresentaram sorologia positiva para o VDA, e em 30 (81,1%), não houve indícios de disseminação da infecção. A contaminação pelo VDA de granjas GRSC representa enorme potencial para a disseminação da infecção, por meio do comércio de suínos de reposição. A rastreabilidade dos animais comercializados em um período anterior ao diagnóstico, com imediata remoção dos lotes de suínos dos rebanhos-destino, evitou a disseminação da infecção.

The suid herpesvirus 1 (SuHV-1) is the causative agent of pseudorabies or Aujeszky's disease, a contagious and epidemic disease that affects pigs in various stages of production. It is a notifiable disease by the World Organization for Animal Health, which can cause serious health barriers in international trade. The aim of this thesis was the development of molecular methods for direct application in the diagnosis and epidemiology of the etiological agent of pseudorabies. The molecular diagnostic methods developed for the detection of SuHV-1 had a high correlation with viral isolation and neutralization. Besides these, other techniques were developed to detect SuHV-1 and other agents causing respiratory diseases in pigs by multiplex PCR in real time. In addition to high sensitivity and specificity, these methods have been considered practical and quick to detect SuHV-1 and related agents. Since certain methods for diagnostic agent for pseudorabies have been developed methods for the molecular characterization of the virus. The first step was to make it practical and fast genotyping by restriction enzyme SuHV-1 then for further study by molecular sequence of the gene ul44, US9, US8, U14, ul49.5. The data generated in these analyzes allowed to define phylogenetic groups of the virus distributed around the world and to differentiate the viruses isolated from domescit and wild swine. The studies of this thesis developed new rapid, sensitive and specific diagnostics for detection of SuHV-1 which can be used in conjunction with molecular characterization techniques which will aid in the understanding of the epidemiology of pseudorabies.
O suid herpesvirus 1 (SuHV-1) é o causador da pseudorraiva ou doença de Aujeszky, enfermidade contagiosa e epidêmica que acomete suínos em diversas fases de produção. É uma enfermidade de notificação obrigatória pela Organização Mundial de Saúde Animal, o que pode acarretar sérias barreiras sanitárias no comércio internacional. O objetivo dessa tese foi o desenvolvimento de métodos moleculares para aplicação direta no diagnóstico e epidemiologia do agente etiológico da doença de Aujeszky. Os métodos moleculares de diagnóstico desenvolvidos para a detecção exclusiva do SuHV-1 obtiveram alta concordância com o isolamento e neutralização viral. Além desses, outras técnicas foram desenvolvidas para a detecção do SuHV-1 e outros agentes causadores de enfermidades respiratória de suínos por PCR multiplex em tempo real. Além da alta sensibilidade e especificidade, esses métodos foram considerados rápidos e práticos para a detecção de SuHV-1 e agente relacionados. Uma vez determinados os métodos para diagnóstico do agente da pseudorraiva, foram desenvolvidas metodologias para caracterização molecular do vírus. O primeiro passo foi tornar mais prática e rápida a genotipagem por restrição enzimática do SuHV-1 para em seguida aprofundar os estudos moleculares por sequencimento dos genes ul44, us9, us8, u14, ul49.5. Os dados gerados nessas análises permitiram definir grupos filogenéticos desse agente difundidos pelo mundo que podem ainda diferenciar o vírus isolado de suínos e de domésticos. Os trabalhos dessa tese permitiram desenvolver novos métodos de diagnóstico rápidos, sensíveis e específicos para detecção do SuHV-1 que podem ser utilizados em conjunto com técnicas de caracterização molecular que auxiliarão no entendimento da epidemiologia da pseudorraiva.

Aujeszky´s disease is a disease caused by Suid Herpesvirus 1 (SuHV-1) and responsible for considerable economic losses in the swine industry. The illness is marked by severe clinical signs with high letality in young animals and can establish latent infection in the neuronal ganglia. The first diagnostic in Brazil was done in 1912 in São Paulo (SP). New outbreaks occurred since then with an impact of one million reais per year in Santa Catarina State (SC). It is a notifiable disease since 1934 and an eradication program was approved in 2007. The objective of this work was to use molecular epidemiology as a tool to assist in the study of the outbreaks. Twenty five isolates from south and southeast regions, the standard strain Shope and the vaccine strain Bartha were multiplied in PK-15 cells and submitted to PCR for gE and gC genes. The strain Bartha (sB) only amplified for gC as expected. The amplicons were purified, quantified and sequenced using Big Dye Terminator Kit. Sequences were edited and aligned with Bioedit (v.7.0.5.3) and the phylogenetic trees constructed in MEGA 4.0 using the Neighbor-Joining Method. Sequences for gE were highly conserved and grouped in two major groups (A and B, divided in B1 and B2). A group were formed by Shope, isolates from 1983 and 1984 from Paraná (PR), Minas Gerais(MG) and two strains from SP. Isolates from SC and Rio Grande do Sul (RS) clustered in B1 group. The B2 group had three isolates, one from each southern state from outbreaks occurred in 1983 (SC), 2000 (PR) and 2003 (RS). Phylogenetic tree for gC had higher bootstraps values with almost all isolates in the same groups as in gE tree. Only two strains from RS (years 1954 and 2003) clustered in B2. All other strains from SC and two from SP clustered in B1 group. Strains Shope, Bartha and an isolate from SP (1990) clustered in a fourth and new group. Results showed that Brazilian isolates clustered in four different groups. The most recent outbreaks in PR and RS were caused by strains similar to those occurred in SC since 1984. Two alleles for gE were found and could be related to periods of outbreaks in southern states. The nonsynonymous mutations had no influence in the functional sites for N-glycosilation (N-g) in both genes. gC sequences had more variability, some triplets deletions and additions. None of the six N-g sites or the three heparin-binding domains were affected by the mutations. A hot spot region between nucleotides 535 and 559 resulted in a change from hydrophobic to a hydrophilic region in isolates related to Santa Catarina,Rio Grande do Sul and sB. Despite the many mutations in sB, these changes did not occur in 22-amino-acid N-terminal hydrophic domain. This domain functions as a signal sequence and was previous described that mutations in this region in sB were responsible for the reduction in N-g and maturation of gC, which would affect virulence. All Brazilian isolates, except for one sample from São Paulo, clustered in different clades from the international isolates. Results prove that Brazilian isolates diverge genetically from international strains but do not have significant mutations in amino acid compositon. It also showed a different result for the signal previously described for sB
A doença de Aujeszky é uma enfermidade causada pelo Herpesvírus suídeo 1 (SuHV-1) e é responsável por perdas econômicas consideráveis na indústria de suínos. É caracterizada por sinais clínicos graves com alta letalidade em animais jovens e pode estabelecer infecção latente no glânglios neuronais. O primeiro diagnóstico no Brasil ocorreu em 1912 em são Paulo (SP). Novos focos ocorreriam depois com um impacto de um milhão de reais por ano somente no estado de Santa Catarina (SC). É uma doença de notificação obrigatória desde 1934 e um programa de erradicação foi aprovado em 2007. O objetivo desse trabalho foi utilizar a epidemiologia molecular como uma ferramenta para assistir no estudo dos focos. Vinte e cinco isolatos das regiões sul e sudeste, a estirpe padrão Shope e a estirpe vacinal Bartha foram multiplicadas em células PK-15 e submetidas a uma PCR para os genes de gE e gC. A estirpe Bartha (sB) amplificou apneas para gC como esperado. Os amplicons foram purificados, quantificados eseqüenciados utilizando-se o Big Dye Terminator Kit. As seqüências foram editadas e alinhados com Bioedit (v. 7.0.5.3) e as árvores filogenéticas foram reconstruídas no MEGA 4.0 usando o método de Neighbor-Joining. As seqüências para gE foram altamente conservadas e agrupadas em dois grupos maiores (A e B, divided in B1 and B2). um grupo foi formado por Shope, isolados de 1983 e 1984 do Paraná (PR), Minas Gerais (MG) e dois isolados de SP. Isolados de SC e do Rio Grande do Sul (RS) agruparam-se no grupo B. O subgrupo B2 foi formado por isolados de focos ocorridos em 1983 (SC), 2000 (PR) e 2003 (RS). A árvore filogenética para gC teve valores de bootstraps maiores com quase todos os isolados nos mesmos grupos que da árvore de gE. Apenas dois isolados de RS (anos 1954 e 2003) agruparam-se em B2. Todos os outros isolados de SC e dois de SP agruparam-se em B1. Shope e sB e um isolado de SP (1990) agruparam-se em um quarto e novo grupo. Resultados mostraram que os isolados brasileiros agruparam-se em quatro diferentes grupos. Os focos mais recentes no PR e RS foram causados por isolados similares aos encontrados em SC desde 1984. dois alelos para gE foram encontrados e podem estar relacionados com os períodos dos focos nos estados do Sul. As mutações não-sinônimas não tiveram influência nos sítios funcionais para N-glicosilação (N-g) em ambos os genes. Seqüências de gC tiveram maior variabilidade e adições e deleções de trincas de nucleotídeos. Nenhum dos três domínios de ligação à heparina foram afetados pelas mutações. Um sítio quente entre os nucleotídeos 535 e 559 resultou em uma mudança de uma região hidrofóbica para hidrofílica nos isolatos de SC, RS e sB. Apesar das muitas mutações em sB, as mesmas não ocorreram no domínio hidrofóbico N-terminal de 22 aminoácidos. Esse domínio funciona como uma seqüência sinal e já foi descrito anteriormente como mutado em sB de modo a participar na redução da virulência da estirpe. Todos os isolados brasileiros, exceto um de SP, agruparam-se em clados diferentes dos isolados internacionais. Os resultados provam que os isolados brasileiros divergemgeneticamente das estirpes internacionais, mas não possuem mudanças ignificativas na composição dos aminoácidos

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-01-10Bitstream added on 2014-06-13T19:43:39Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_lg_dr_jabo.pdf: 2434476 bytes, checksum: 7f35c972fe80e9df46284df3347b98ab (MD5)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
A doença de Aujeszky (DA) é uma enfermidade conhecida na suinocultura pelo seu grande impacto produtivo e econômico. O Estado de São Paulo (SP) não é considerado área livre para DA, pois há evidências de circulação do vírus. Por isso, este trabalho teve como objetivo a identificação, o diagnóstico da situação epidemiológica e a avaliação de estratégias para a erradicação de focos de DA em sistema de produção de suínos no Estado de SP. Foram identificados dois focos da enfermidade no Município de Cerqueira César, um apresentou somente animais sororreagentes (Foco 1), e outro, casos clínicos da enfermidade (Foco 2). Para a erradicação da DA foram tomadas ações de defesa sanitária animal, sendo avaliadas duas estratégias: (A) eliminação de animais sororreagentes e (B) despovoamento gradual, com acompanhamento durante 12 meses. A erradicação por eliminação dos sororreagentes foi aplicada no Foco 1 e compreendeu: identificação por teste sorológico, isolamento e abate dos sororreagentes; vacinação dos negativos, reposição no plantel com animais livre de DA e avaliação dos índices produtivos. No início do estudo, 68% do plantel eram sororreagentes e, no final, 51%. No Foco 2 utilizou-se o despovoamento gradual; todos os animais foram enviados gradativamente ao abate sanitário, até que fosse estabelecido o vazio sanitário das instalações e, somente depois repovoado com animais livres da DA. Como essa última estratégia, apresentou maior eficácia, pois erradicou a DA no Foco 2, a mesma também foi aplicada no Foco 1, tendo em vista o insucesso da estratégia A inicialmente aplicada. Ao final, após monitoramentos sorológicos, concluiu-se que a DA foi erradicada em todos os focos identificados
Aujeszky´s disease (AD) is an important viral affection within the swine production, once it plays a significant role in economic losses. São Paulo state is not considered free of the disease, once evidences show that there is circulation of the virus. This study aimed to identify the epidemiologic situation and evaluation strategies for the eradication of outbreaks of AD in system of swine production in the state of Sao Paulo. Two outbreaks were identified in the Cerqueira César county, one of them only seroreagents were observed (Outbreak 1), and in the other, clinical signs were seen (Outbreak 2). In order to eradicate the disease, two sanitary strategies were tested: (A) eradication by means of positive serology and; (B) gradual depopulation, with a follow up of 12 months. The eradication by means of serology was used in the Outbreak 1, and included the identification, isolation and sacrifice of positives animals; vaccination of negative subjects, replacement with naive subjects, and assessment of production indices. At the beginning, 68% of animals were positive, and at the end 51% were positive. In Outbreak 2, gradual depopulation was employed, and all animals were sent to sanitary slaughter, until facilities were completely empty. Afterwards, animals free of the disease were used to repopulation. At the end of the study, it was observed that the last strategy was more effective, being, therefore, used in the outbreak 1. Finally, after serological monitoring, it was concluded that the AD was eradicated in all outbreaks identified

Orientador: Samir Issa Samara
Banca: Iveraldo dos Santos Dutra
Banca: Adolorata Aparecida Bianco Carvalho
Banca: Cláudia Del Fava
Banca: Fábio Carvalho Dias
Resumo: A doença de Aujeszky (DA) é uma enfermidade conhecida na suinocultura pelo seu grande impacto produtivo e econômico. O Estado de São Paulo (SP) não é considerado área livre para DA, pois há evidências de circulação do vírus. Por isso, este trabalho teve como objetivo a identificação, o diagnóstico da situação epidemiológica e a avaliação de estratégias para a erradicação de focos de DA em sistema de produção de suínos no Estado de SP. Foram identificados dois focos da enfermidade no Município de Cerqueira César, um apresentou somente animais sororreagentes (Foco 1), e outro, casos clínicos da enfermidade (Foco 2). Para a erradicação da DA foram tomadas ações de defesa sanitária animal, sendo avaliadas duas estratégias: (A) eliminação de animais sororreagentes e (B) despovoamento gradual, com acompanhamento durante 12 meses. A erradicação por eliminação dos sororreagentes foi aplicada no Foco 1 e compreendeu: identificação por teste sorológico, isolamento e abate dos sororreagentes; vacinação dos negativos, reposição no plantel com animais livre de DA e avaliação dos índices produtivos. No início do estudo, 68% do plantel eram sororreagentes e, no final, 51%. No Foco 2 utilizou-se o despovoamento gradual; todos os animais foram enviados gradativamente ao abate sanitário, até que fosse estabelecido o vazio sanitário das instalações e, somente depois repovoado com animais livres da DA. Como essa última estratégia, apresentou maior eficácia, pois erradicou a DA no Foco 2, a mesma também foi aplicada no Foco 1, tendo em vista o insucesso da estratégia A inicialmente aplicada. Ao final, após monitoramentos sorológicos, concluiu-se que a DA foi erradicada em todos os focos identificados
Abstract: Aujeszky's disease (AD) is an important viral affection within the swine production, once it plays a significant role in economic losses. São Paulo state is not considered free of the disease, once evidences show that there is circulation of the virus. This study aimed to identify the epidemiologic situation and evaluation strategies for the eradication of outbreaks of AD in system of swine production in the state of Sao Paulo. Two outbreaks were identified in the Cerqueira César county, one of them only seroreagents were observed (Outbreak 1), and in the other, clinical signs were seen (Outbreak 2). In order to eradicate the disease, two sanitary strategies were tested: (A) eradication by means of positive serology and; (B) gradual depopulation, with a follow up of 12 months. The eradication by means of serology was used in the Outbreak 1, and included the identification, isolation and sacrifice of positives animals; vaccination of negative subjects, replacement with naive subjects, and assessment of production indices. At the beginning, 68% of animals were positive, and at the end 51% were positive. In Outbreak 2, gradual depopulation was employed, and all animals were sent to sanitary slaughter, until facilities were completely empty. Afterwards, animals free of the disease were used to repopulation. At the end of the study, it was observed that the last strategy was more effective, being, therefore, used in the outbreak 1. Finally, after serological monitoring, it was concluded that the AD was eradicated in all outbreaks identified
Doutor

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-18T13:57:04Z No. of bitstreams: 1 Luiz Cosme da Silva Junior.pdf: 2139311 bytes, checksum: 61623be0472d19428bedbc6968b00716 (MD5)
Made available in DSpace on 2016-10-18T13:57:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luiz Cosme da Silva Junior.pdf: 2139311 bytes, checksum: 61623be0472d19428bedbc6968b00716 (MD5) Previous issue date: 2013-02-25
Aujeszky's disease (AD) is caused by Suid Herpesvirus 1 (SHV1) and affects a wide variety of animals, the pig being the most important host. The DA has caused considerable direct and indirect economic losses to the pig industry worldwide, from the impact on production. The use of control measures using diagnostic test able to differentiate infected animals from vaccinated animals and removal of positive animals in the squad is key to controlling the spread of the virus. The use of vaccines for the gE gene deleted of SHV1 has been used to decrease clinical signs and virus transmission. Although some epitopes gE gene has already been cloned into the Pichia pastoris expression system, relative to the portion extramembranares epitopes using synthetic sequence (gEs) yeast codon optimized for this has not yet been cloned in this system. In this work this sequence was cloned and expressed in P. pastoris, which produced the recombinant antigen gEr. The gEs was cloned in strains X-33 and KM71H this yeast. The two strains were induced to express cloned gEr. The recombinant protein was detected in both clones by colony blot and visualized on SDS-PAGE gel, revealing a protein of approximately 50 kDa.
A Doença de Aujeszky (DA) é causada pelo Herpesvírus Suino 1 (SHV1), que acomete uma ampla variedade de animais, sendo o suíno o hospedeiro principal. A DA tem causado consideráveis perdas econômicas diretas e indiretas à indústria suinícola mundial, decorrentes do impacto na produção. O emprego de medidas de controle utilizando teste diagnóstico capaz de diferenciar os animais infectados dos animais vacinados e a retirada dos animais positivos do plantel é fundamental para controlar a disseminação do virus. O uso de vacinas deletadas para o gene gE do SHV1 tem sido utilizada para diminuir os sinais clínicos e a transmissão do vírus. Apesar de alguns epítopos do gene gE já terem sido clonados no sistema de expressão Pichia pastoris, a porção referente aos epítopos extramembranares, utilizando sequência sintética (gEs) códon otimizada para esta levedura, ainda não foi clonada neste sistema. Neste trabalho essa sequência foi clonada e expressa em P. pastoris, que produziu o antígeno recombinante gEr. O gEs foi clonado nas linhagens X-33 e KM71H dessa levedura. As duas linhagens clonadas foram induzidas a expressar gEr. A proteína recombinante foi identificada em ambos os clones por colloning blot e visibilizada em gel SDS-PAGE, revelando uma proteína de aproximadamente 50 kDa.

Aujeszky's disease (AD) is an contagious infectious disease of viral etiology that constitutes a major obstacle to the exploration and international trade of swine. The Suid Herpesvirus 1 (SuHV-1) belongs to the subfamily Alphaherpesvirinae and among other features has the ability to establish latent infections in sensory neurons. Considered as a notifiable disease by the OIE, is present in the list of diseases of importance economic and epidemiology in swine. The production systems become more intensive and confined, and consequently the risk of spreading disease also increased. The adoption of strategies and public programs for control and eradication of AD, in order to prevent the spread of the disease, it is necessary to prevent extensive damage to the pig farm in Brazil. The aim of this work was to validate a real time PCR for the diagnosis of AD and to verify the performance of different systems: SybrGreen I, hybridization probe and Plexor. To check the performance of the following criteria were used: specificity and selectivity, sensitivity, limit of detection, repeatability and reproducibility and robustness. The best performance was achieved using the primers and probes designed to target gB, this fact influenced the decision-making in the choice of methodology to be validated and available in the Laboratory of Molecular Biology of the LANAGRO-MG, as a tool for the AD diagnostic in Brazil.
A doença de aujeszky (DA) é uma doença infecto-contagiosa de etiologia viral que se constitui em um importante obstáculo à exploração e ao comércio internacional de suínos. O SuHV-1 pertence a subfamília Alphaherpesvirinae e possui dentre outras características a capacidade de estabelecer infecções latentes nos neurônios sensoriais. Considerada como doença de notificação obrigatória pela OIE, está presente na lista de doenças de importância econômica e epidemiológica. Os sistemas de produção se tornaram mais intensivos e confinados, e consequentemente os riscos de disseminação de doenças também aumentaram. A adoção de estratégias e programas oficiais de controle e erradicação da DA, tendo em vista prevenir a disseminação da enfermidade, se faz necessário para evitar prejuízos extensos à exploração de suínos no Brasil. O presente trabalho teve como objetivo validar uma PCR em tempo real para o diagnóstico da DA e verificar o desempenho dos diferentes sistemas: SybrGreen I, Sonda de hibridização e Plexor. Para a verificação de desempenhos os seguintes critérios foram usados: Especificidade e Seletividade, Sensibilidade, Limite de detecção, Repetitividade e Reprodutibilidade e Robustez. O melhor desempenho foi alcançado utilizando os iniciadores e sonda desenhados para o alvo gB, este fato influenciou na tomada de decisão na escolha da metodologia a ser validada e disponibilizada para o Laboratório de Biologia Molecular do LANAGRO-MG, como ferramenta para o diagnóstico da DA no Brasil.

Aujeszky s disease (AD) or pseudorabies is an important viral disease of swine and has significant economic impact on the pig industry worldwide. The infection produces direct and indirect economic losses, mainly due to restrictions to international trade of swine products. Since the beginning of the 20th century, AD had been notified in several Brazilian regions, yet Rio Grande do Sul state (RS) remained as a provisionally free area under the International Organization of Epizooties (OIE) guidelines. In 2003, two outbreaks were notified in swine herds located in northern RS, boundary with Santa Catarina, a state where the infections is endemic. Control/eradication measures consisted in tracing back all swine movements, quarantine and eradication of the affected herds by sanitary slaughter under official inspection. In outbreak # 1 (Pinheirinho do Vale, January/2003) six herds were affected, one of which presented animals with clinical signs. Starting from this outbreak, 146 herds and 42.399 pigs were traced back, six herds (7.822 animals) being depopulated the herd where the index outbreak plus five other herds with positive serology. The outbreak #2 (Aratiba, September/2003) resulted in a wider spread of the infection, involving another three counties and 77 herds (nine with clinical signs; 68 with positive serology). From the index case, 109.316 pigs in 630 herds were traced back; 28.443 animals from positive herds were slaughtered. Total numbers reached 151.715 traced back animals in 776 herds; 71 herds were found serologically positive. The adopted measures were efficient to eliminate the outbreaks and to stop the disease spread to neighboring areas, reestablishing the sanitary status previous to the outbreaks.
A doença de Aujeszky (DA), ou pseudoraiva, é uma enfermidade infecto-contagiosa de etiologia viral de grande importância para a suinocultura comercial em todo o mundo. A infecção causa perdas econômicas diretas e indiretas, pela restrição ao comércio internacional de produtos suínos. Embora a DA venha sendo notificada em várias regiões do Brasil desde o início do século XX, o Rio Grande do Sul (RS) permanecia provisoriamente livre com base em critérios da Organização Internacional de Epizootias (OIE). Em 2003 ocorreram dois focos da enfermidade em municípios do norte do RS, limítrofes com Santa Catarina, Estado que tem registrado vários focos nos últimos anos. Como estratégia de combate foram determinados o rastreamento da movimentação de suínos, a interdição da área e a erradicação dos focos através de abate sanitário em matadouros sob Inspeção Federal. No evento 1 (Pinheirinho do Vale, janeiro de 2003) cinco unidades produtoras de leitões (UPLs) foram afetadas, sendo que uma apresentou animais com sinais clínicos. A partir desse foco foram rastreados 42.399 suínos em 146 rebanhos, sendo eliminados seis rebanhos o foco índice e cinco outras com sorologia positiva num total de 7.822 animais. No evento 2 (Aratiba, setembro de 2003), a disseminação da infecção foi maior, atingindo outros três municípios e 77 granjas (nove com sinais clínicos, 68 com sorologia positiva). Foram rastreados 109.316 suínos em 630 rebanhos, com a erradicação de 28.443 animais das granjas que apresentaram sinais clínicos ou sorologia positiva. No total foram rastreados 151.715 animais em 776 rebanhos, sendo detectados 71 rebanhos com sorologia positiva. Essas medidas foram eficazes na erradicação dos focos e impediram a disseminação da enfermidade para outras regiões, permitindo ao RS readquirir o status sanitário anterior aos surtos.

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária
A Doença de Aujeszky é causada por um herpesvírus e os seus hospedeiros naturais são os membros da família Suidae. É uma doença de notificação obrigatória, tem um elevado impacto económico e uma distribuição mundial. Portugal implementou o Plano de Controlo e Erradicação da Doença de Aujeszky (PCEDA) em 2002, sendo dos poucos países da União Europeia que ainda não erradicou a doença. Um dos objetivos deste estudo foi a análise da evolução da população suína em Portugal Continental entre 2011 e 2016. Esta análise é fundamental para permitir uma compreensão dos fatores que podem influenciar a correta implementação de um plano de controlo e erradicação da Doença de Aujeszky. O segundo objetivo principal desta dissertação foi a análise da evolução do PCEDA através da análise das proporções de explorações classificadas de acordo com o plano, da prevalência de explorações positivas e de uma análise mais detalhada da variação de classificações entre 2014 e 2016. Entre 2011 e 2016, observou-se um ligeiro aumento (2%) do número de animais acompanhado de uma ligeira diminuição (-2%) do número de explorações. A prevalência de explorações com classificação sanitária positiva diminuiu mais de metade em dois anos (10.8% para 4.6%), o que é um bom indicador da evolução positiva do plano. No fim de 2016, 53.1% das explorações analisadas nesta dissertação tinham estatuto oficialmente livre de doença com ou sem vacinação. Esta análise permitiu identificar possíveis pontos críticos de evolução do PCEDA e evidenciou a importância de existirem registos de qualidade para um bom acompanhamento dos resultados do plano e para um bom conhecimento da população suína portuguesa. Realça-se também a necessidade de uma implementação mais cuidada para permitir o acesso aos mercados de suínos vivos.
ABSTRACT - CONTROL AND ERADICATION PLAN OF AUJESZKY’S DISEASE IN CONTINENTAL PORTUGAL - DEMOGRAPHIC ANALYSIS AND EVOLUTION OF THE PLAN - Aujeszky’s Disease is caused by a herpesvirus and its natural hosts are the members of the Suidae family. It’s a notifiable disease; it has a high economic impact and a worldwide distribution. Portugal implemented Aujeszky's Disease Control and Eradication Plan (PCEDA) in 2002, and it’s amongst the few countries from the European Union that still haven’t eradicated the disease. One of the objectives of this study was the analysis of the evolution of swine population in mainland Portugal between 2011 and 2016. This analysis is fundamental to allow an understanding of the factors that can influence a correct implementation of a plan for the control and eradication of Aujeszky’s Disease. The second main objective of this dissertation was the analysis of the evolution of the Aujeszky's Disease Control and Eradication Plan in Portugal, by analysing the proportion of farms classified according to the plan, the prevalence of positive herds and a more detailed analysis of the variation of classifications between 2014 and 2016. Between 2011 and 2016, a slight increase (2%) in the number of animals was observed, accompanied by a small decrease (-2%) in the number of holdings. The prevalence of herds with a positive health classification decreased by more than half in two years (10.8% to 4.6%), which is a good indicator of the positive evolution of the plan. At the end of 2016, 53.1% of the herds studied in this dissertation had officially disease-free status, with or without vaccination. This analysis has allowed the identification of possible critical points of evolution of the Aujeszky's Disease Control and Eradication Plan and highlighted the importance of good records for the monitoring of the plan’s results and for a good knowledge of the portuguese swine population. The need for a more careful implementation to allow access to live pork markets is emphasized.
N/A

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Financiadora de Estudos e Projetos - Finep
The economic impact caused by Aujeszky's disease (AD) has decreased with the use of vaccines deleted for the gE gene of the AD Virus and diagnostic tests for the detection of antibodies specific to the protein corresponding to the deleted gene for differentiation of infected animals from the vaccinated - DIVA (Differentiating Infected from Vaccinated individuals). The goal of this work was to clone and express the gene related to the extramembrane portion of the gE glycoprotein of the DA virus in E. coli expression system using synthetic gene with optimized codons and thioredoxin fused protein (Trx), and to evaluate its potential use in ELISA. After cloning, expression and identification of recombinant gE protein (gErec*Trx) in Western blotting with anti-His antibody, gErec*Trx (approximately 60 kDa) was used as antigen in ELISA (ELISAgErec) using Protein G peroxidase as conjugate. Samples previously tested in virus neutralization (VN) and in commercial ELISA were tested in ELISAgErec, and the cutoff point (> 0.13) was defined by ROC curve analysis. A total of 599 sera from pigs were used, of which 208 were positive VN and 391 negative in commercial ELISA for the detection of antigE antibodies from the DA virus, of which 300 originated from Certified Porcine Breeding Farms (GRSCs) and 91 from Technological properties of the State of Pernambuco. ELISAgErec presented sensitivity of 97.6% and specificity of 96.4%. To evaluate the analytical sensitivity and limit of detection, the international reference serum for AD was used, and for analysis of the analytical specificity were tested sera from pigs Pathogen-Specific Free (SPF) vaccinated with the main vaccines used in pigs. ELISAgEr showed greater sensitivity than the commercial ELISA thus demonstrating its ability to distinguish healthy and vaccinated animals from infected animals. In addition, to showing good solubility, gErec remained immunoreactive in the same titre in ELISAgErec after several months stored at 4 °C, and even after thermal stress at 70 °C it presented the same results.
O impacto econômico causado pela Doença de Aujeszky (DA) tem diminuído com uso de vacinas deletadas para o gene gE do Vírus da DA e testes diagnósticos para detecção de anticorpos específicos para a proteína correspondente ao gene deletado, para diferenciação dos animais infectados dos vacinados - DIVA (Differentiating Infected from Vaccinated individuals). O objetivo com este trabalho foi clonar e expressar o gene referente a porção extramembranar da glicoproteína gE do vírus da DA em sistema de expressão E. coli utilizando gene sintético com códons otimizados e proteína fusionada a tiorredoxina (Trx), e avaliar seu potencial uso em ELISA. Após a clonagem, expressão e a identificação da proteína gE recombinante (gErec*Trx) em Western blotting com anticorpo anti-His, a gErec*Trx (aproximadamente 60 kDa) foi usada como antígeno em ELISA (ELISAgErec) utilizando Proteina G peroxidase como conjugado. Amostras previamente testadas em virusneutralização (VN) e em ELISA comercial foram testadas no ELISAgErec, e o ponto de corte (>0,13) foi definido por análise da curva ROC. Foram utilizados 599 soros de suínos, sendo 208 positivos virusneutralização (VN) e 391 negativos em ELISA comercial para detecção de anticorpos antigE do vírus da DA, sendo 300 oriundas de Granjas de Reprodutores Suínos Certificadas (GRSCs) e 91 de propriedades tecnificadas do estado de Pernambuco. O ELISAgErec apresentou sensibilidade de 97,6% e especificidade de 96,4%. Para avaliar a sensibilidade analítica e o limite de detecção foi testado o soro internacional de referência para a DA, e para avaliação da especificidade analítica foram testados soros de suínos Livre de Patógenos Específicos (SPF) vacinados com as principais vacinas usadas em suínos. O ELISAgEr apresentou maior sensibilidade que o ELISA comercial demonstrando assim sua capacidade de distinguir animais sadios e vacinados dos animais infectados. Além de apresentar boa solubilidade a gErec se manteve imunorreativa no mesmo título no ELISAgErec após vários meses estocada a 4 °C, e mesmo após estresse térmico a 70 °C apresentou mesmos resultados.

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária
A Doença de Aujeszky apresenta uma distribuição cosmopolita e é de declaração obrigatória para a Organização Mundial de Saúde Animal (OIE). Na União Europeia (UE) já poucos são os Estados Membros (EM) que ainda não estão livres da doença. O Plano de Controlo e Erradicação da Doença de Aujeszky (PCEDA) é um plano oficial coordenado pela Direção-Geral de Alimentação e Veterinária (DGAV). Devido à urgência de diminuir o período temporal até à erradicação da doença em Portugal foi necessário criar novas medidas que conduzissem ao objetivo. Neste trabalho é feita uma análise dos resultados do PCEDA e descreve-se a ocorrência da doença em função de variáveis como o tipo e o tamanho das explorações de suínos, a sua classificação sanitária, bem como a sua distribuição e densidade. Concluiu-se que os fatores de risco que influenciavam a probabilidade de uma exploração ter uma classificação sanitária positiva foram o tamanho de efetivo, a região onde se encontra, bem como alguns fatores de caracterização da vizinhança. No âmbito das atividades do PCEDA no ano de 2016, de modo a avaliar o cumprimento dos planos vacinais, foram realizadas em matadouro análises sanguíneas a 126 explorações para pesquisa de anticorpos vacinais e anticorpos virais. Com base nos dados recolhidos no matadouro foram criados dois modelos de classificação das explorações (J48 e Fast Frugal Trees). Estes modelos têm como objetivo identificar os fatores associados a falhas na cobertura vacinal e à classificação das explorações em relação ao seu grau de vacinação, com base nos dados existentes. As explorações selecionadas pelos modelos foram classificadas, principalmente de acordo com o tamanho do seu efetivo, com o índice de vacinação dos animais de substituição e com o facto de enviarem animais para outras explorações, sendo que os modelos criados pelo algoritmo Fast Frugal Trees apresentaram melhores resultados que os gerados pelo algoritmo J48. Estes modelos pretendem criar um mecanismo de amostragem de explorações baseado em risco para a realização de novas análises em matadouro, mais assertivas, e como tal com melhores resultados, tendo no final sido caracterizadas as explorações com um risco acrescido de apresentarem uma má cobertura vacinal.
ABSTRACT - Risk Based Surveillance Under The Aujeszky Disease Eradication - Pseudorabies (Aujeszky’s Disease) has been endemic in most parts of the world and is a notifiable disease to the World Organization for Animal Health (OIE). In the European Union, there are a few number of countries that still have the disease in their territory. The Aujeszky’s Disease Control and Eradication programme (PCEDA) is an official plan coordinated by the General Directorate of Food and Veterinary (DGAV). The urgency to eradicate the disease forced DGAV to apply new strategies and approaches. In this work, an analysis of the results of PCEDA are carried out and the occurrence of the disease is described based on factors as the type of the farm, size of the herd and sanitary classification, as well as its distribution and density. The risk factors with a significant influence in the probability of a farm been classified as infected were the size of the herd, the region and a few characteristics of the farm neighborhood. In the context of the activities of PCEDA in 2016, to assess the accomplishment of the vaccination program, DGAV carried out serological tests in 126 pig holdings, in blood samples collected at the slaughter house, to find vaccination and viral antibodies. Two classifications models (J48 and Fast Frugal Trees) were created with the results obtained in the slaughterhouse survey. The objective of these models was the identification of the factors related with gaps in the vaccination coverage and classification of the pigs’ farms vaccination ratio, based on existing data. The models with the best results were those created by the algorithm Fast and Frugal Trees. The farms selected by the models were classified primarily by their herd size, the vaccination status of the replacement animals and by the fact of sending, or not, animals to other farms. At the end, the main objective of the models was to create a better, risk-based sampling method to plan future slaughterhouse’s surveys with the goal of characterize the farm with the higher risk of having fails in the vaccination coverage.
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