Academic literature on the topic 'Bifidobacterium bifidum'

La production de beta-d-galactosidase (EC. 3. 2. 1. 23), de n-acetyl-beta-d-glucosaminidase (EC. 3. 2. 1. 30), de neuraminidase (EC. 3. 2. 1. 18) et d'alpha-l-fucosidase (EC. 3. 2. 1. 51) a été optimisée par fermentation. La bactérie anaérobie Bifidobacterium bifidum souche AA/22 a été cultivée en milieu liquide renfermant par litre : 37 g d'un extrait sec de cerveau-cœur, 10 g de glucose et des facteurs bifidigènes (1 g de gynolactose ou 66 ml de lait de femme). La fermentation est conduite sous N2/CO2 à 37°C et à ph 6,8. L'extraction des systèmes enzymatiques par une technique aux ultra-sons a été optimisée en tampon phosphate de sodium 20 mm ph 6,8 renfermant de l'EDTA 20 mm et 0,1 p. 100 de nonidet P 40. Après centrifugation d'une heure à 100 000 g la solution enzymatique obtenue renferme: 7 U de beta-d-galactosidase, 1,6 U de n-acetyl-beta-d-glucosaminidase, 90 mU de neuraminidase et 400 mU de fucosidase par mg de protéine. Une neuraminidase a été purifiée jusqu'à homogénéité en électrophorèse dénaturante (SDS). La masse moléculaire de l'enzyme native est de 75 kDa, elle est constituée par deux sous-unités identiques (35 kDa). Le phi, la température et le ph optimum d'action sont respectivement de 4,2, 50°C et 5,0. Cette neuraminidase est sensible à l'action de la température, elle n'est stable qu'en dessous de 48°C. L'activité est indépendante des métaux. Elle permet l'hydrolyse des liaisons alpha 2,3 plus rapidement que les alpha 2,6 et les alpha 2,8. L'enzyme agit aussi bien sur les glycopeptides que sur les glycoprotéines natives.

Nous avons etudie la capacite de bifidobacterium bifidum dsm 20082 a assimiler des saccharides. Cette etude a ete realisee en utilisant la technique de microcalorimetrie. Les resultats obtenus montrent que bifidobacterium bifidum est capable de croitre sur milieu riche (tpy) en presence ou en absence de saccharides. Sur milieu semi-synthetique (garches modifie), seules les n-acetylhexosamines permettent une croissance bacterienne, elles sont donc assimilees comme seule source de carbone. De plus, la quantite de chaleur degagee est proportionnelle a la consommation du saccharide. Les facteurs bifidogenes ne sont en realite que des nutriments preferentiels des bifidobacteries. Nous nous sommes interesses ensuite aux mecanismes d'incorporation de differents saccharides, glucose, fructose, galactose, n-acetylglucosamine, lactose et lacto-n-biose. La determination du mecanisme de transport de chaque saccharide a ete realisee a l'aide d'inhibiteur de translocation et de l'etude de la phosphorylation des saccharides. Les six mecanismes de transport se sont averes etre constitutifs. Le saccharide utilise lors de la culture n'entraine qu'une adaptation de la bacterie au saccharide, voire aucun changement dans la capacite d'incorporation. Les systemes de transport montrent une grande specificite vis-a-vis du saccharide qu'ils transportent. Le glucose est vehicule par un symport a cation regule par les ions potassium, avant d'etre phosphoryle par une glucokinase atp-independante. Le galactose traverserait la membrane par un mecanisme de diffusion. La galactokinase est activee en presence d'atp. Le lacto-n-biose et le lactose sont incorpores par des symports a proton. La -d-galactosidase est presente en grande quantite au niveau intracellulaire afin de liberer le glucose et le galactose. Le fructose est vehicule par un symport a proton. La fructokinase voit son activite diminuer de 60% en presence d'atp. Bifidobacterium bifidum aurait trouve a ce niveau un moyen de reguler le transport du fructose par un mecanisme de retro-inhibition.

Quatre activités exoglycosidasiques de bifidobacterium bifidum souche AA/22 ont été étudiées. Il s'agit des activités: béta-galactosidase, n-acétyl-beta-hexosaminidase, alpha-neuraminidase et alpha-fucosidase. Ces activités sont endo-cellulaires, leur extraction est réalisée par ultra-sons. Le schéma de purification suivi nous a permis d'obtenir six fractions. Trois fractions ne contenant qu'une seule activité : une alpha-neuraminidase et deux beta-galactosidases. Trois fractions possèdent chacune deux activités : une béta-galactosidase et une alpha-fucosidase ; une alpha-neuraminidase et une n-acétyl-béta-hexosaminidase ; une béta-galactosidase et une n-acétyl-béta-hexosaminidase. Toutes ces fractions ne révèlent qu'une seule bande en électrophorèse non dénaturante. Nous avons vérifié que celles-ci correspondaient bien aux activités suivies. Les deux activités béta-galactosidase purifiées séparément sont homogènes en électrophorèse dénaturante. Toutes ces activités ont des températures optimales comprises entre 40 et 48°C. Les pH optimaux sont compris entre 5 et 6. 5 et les masses moléculaires relatives déterminées en gel filtration sur Superose 6 varient de 97000 à 420000. Les pHi sont acides (4 a 5. 1). Seule une activité béta-galactosidase est sensible à l'EDTA et à l'EGTA, de plus Elle est activée par le calcium et le magnésium. Les paramètres enzymatiques des béta-galactosidases ont été réalisés sur le pNP-Gal et sur le lactose, ils mettent en évidence trois groupes de réactivité différente. Tous ces paramètres nous permettent de conclure que Bifido bacterium bifidum souche AA/22 possède au moins trois béta-galactosidases différentes. Nous n'avons pas prouvé que dans les fractions contenant deux activités, nous étions en présence d'un complexe enzymatique. Mais nous avons montré que la présence d'une activité influençait la réactivité de l'autre activité présente.

In this thesis, the field of the bifidobacteria! physiology in relation to β- and α-galactosidases is described and perspectives of them for oligosaccharides synthesis are discussed- The experimental work focused on the isolation and characterisation of these cell constituents from Bifidobacterium bifidum NCIMB41171. To generate a basis for subsequent work the construction of a genomic DNA library was carried out. This resulted in the isolation of four different β-galactosidases (bbgI, bbgII, bbgIII and bbgIV) and one α-galactosidase (melA) genes. Molecular characterisation of the gene products indicated their putative location, which was subsequently confirmed after expression in an E. coli host. Nucleotide and amino acid sequence comparisons with other known bifidobacterial enzymes revealed aspects of either their evolution or conservation among species.

Submitted by Lucelia Lucena (lucelia.lucena@ufpe.br) on 2015-03-10T18:06:55Z No. of bitstreams: 2 Gabriela Teixeira _ Dissertação Mestrado.pdf: 1514043 bytes, checksum: f74fa7770b03bc783658b45328e64e05 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2015-03-10T18:06:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Gabriela Teixeira _ Dissertação Mestrado.pdf: 1514043 bytes, checksum: f74fa7770b03bc783658b45328e64e05 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-03<br>A adição de culturas probióticas tem sido testada em vários produtos lácteos, e a maior parte dos microrganismos consegue permanecer viável, alcançando características desejáveis no produto final. O objetivo da pesquisa foi desenvolver requeijão cremoso com probióticos, Lactobacillus acidophilus e Bifidobacterium bifidum, a fim de se tornar uma alternativa saudável de um alimento de amplo consumo. Foram elaboradas 3 formulações: requeijão cremoso fresco padrão, requeijão cremoso fresco com probióticos, requeijão cremoso fresco probiótico com reduzido teor de gordura. Para a caracterização do produto foram realizadas análises para determinação da composição centesimal, em triplicata para determinação de umidade, cinzas, lipídios e proteínas, e carboidratos. A contagem de coliformes totais e Escherichia coli foram realizadas nas amostras para análise da qualidade higiênico-sanitária. Realizou-se a contagem de L. acidophilus e B. bifidum durante o período de armazenamento de 15 dias. A avaliação da resistência das culturas probióticas às condições digestivas foi realizada empregando-se um modelo in vitro, utilizando suco gástrico e entérico simulados e enzimas do trato gastrintestinal. A análise da cor foi realizada por colorimetria em escala CIELab. A análise sensorial foi aplicada pelo teste de aceitação por escala hedônica para avaliação dos atributos e avaliação da qualidade global e intenção de compra. A composição centesimal dos requeijões padrão e adicionado de probióticos atendeu aos requisitos da legislação para o produto. O requeijão proposto como light apresentou redução de 26% no valor calórico total e 43% no teor de lipídeos em relação ao padrão. Quanto a acidez titulável, observou-se que o armazenamento influenciou significativamente os seus valores nas preparações com probióticos, diferindo do padrão que não apresentou alterações nos valores durante o armazenamento. A qualidade higênico-sanitária foi satisfatória, visto que as amostras foram negativas para presença de coliformes totais e Escherichia coli. As contagens individuais de Lactobacillus acidophilus e Bifidobacterium bifidum, estiveram de acordo com as exigências da legislação para alimentos com alegações de propriedades funcionais. O requeijão cremoso fresco probiótico apresentou contagem de L. acidophilus de 4,0x107UFC/g e B. bifidum de 2,0x108UFC/g aos sete dias de armazenamento e o requeijão cremoso fresco probiótico com reduzido teor de gordura apresentou contagem de L. acidophilus de 5,0x109UFC/g e B. bifidum de 2,0x109UFC/g. A redução de gordura no produto até os níveis estudados não interferiu na viabilidade dos probióticos no requeijão cremoso durante o armazenamento de 15 dias. Após a simulação da digestão in vitro, houve redução da população total de probióticos em ambas as formulações com resultados mais expressivos para a formulação com reduzido teor de gordura afirmando o efeito protetor das gorduras para a sobrevivência dos probióticos ao trato gastrintestinal. A análise instrumental da cor dos requeijões cremosos indicou produtos com boa luminosidade, com acentuação da cor amarela ao longo do tempo de armazenamento. A avaliação sensorial demonstrou que a adição de probióticos resultaram em requeijões cremosos com melhor perfil de características e maior aceitabilidade e intenção de compra que a preparação padrão. Pode-se concluir que os probióticos melhoraram a qualidade sensorial do produto, sendo tais amostras preferidas pelos julgadores. O requeijão cremoso tradicional e com baixo teor de gordura são tecnologicamente viáveis para a incorporação das culturas probióticas de L. acidophilus e B. bifidum.

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:48:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maikel_Possamai.pdf: 915835 bytes, checksum: b9f7340ba0b838b5bd95229abaed0be6 (MD5) Previous issue date: 2010-08-20<br>Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior<br>Two experiments were conducted to evaluate the effect of using probiotics and symbiotic in piglets diets in the nursery phase. The first experiment was the performance of piglets from 21 to 35, from 36 to 49 days and in total period, being also held the count of lactic bacteria, fecal coliforms and clostridia in the piglets faeces at 35 and 49 days old. The economic viability of probiotics and symbiotic used in piglets diets was also evaluated. There were used 120 piglets, with 21 days old, with initial average weight of 5.80 ± 0.30 kg, distributed in a randomized blocks design, in a factorial scheme consisting of two levels of probiotics (0.30 and 0.60%) and three levels of inulin inclusion (0.00; 0.25 and 0.50%), totalizing six treatments with five replicates. In the metabolism trial were used 24 barrows, with average initial weight of 18.00 ± 0.38 kg, distributed individualy in metabolic cages, and the experimental design and treatments used were the same described in the performance experiment, with four replicates. In this trial were determined the values of digestible energy, metabolizable energy, the digestibility and metabolizability coefficients of gross energy and at the end of metabolism trial, were collected fecal samples, by means of retal massage to determine fecal pH. The inclusion of probiotic and inulin in the diets did not influence (P>0.05) the performance of piglets, from 21 to 35 and from 21 to 49 days of age, the cost index, the index of economic efficiency, the count of lactic bacteria, fecal coliforms and clostridia in the faeces. In the metabolism trial was observed that the inclusion of probiotics in the diets did not influence in the energy metabolization. Nevertheless, the levels of inclusion of inulin reduced (P<0.05) the digestible energy and the digestibility coefficient of gross energy, but did not influence in the coefficient of gross energy metabolization. The pH fecal values were not influenced by the inclusion of probiotic and symbiotic. The use of probiotic and inulin, and their association, did not change the performance, thefaeces microbial counts, the economic viability and gross energy metabolization of piglets from 21 to 49 days old<br>Foram realizados dois experimentos para avaliar o efeito do uso de probióticos e simbiótico em rações para leitões na fase de creche. O primeiro experimento foi o de desempenho dos leitões dos 21 aos 35, dos 36 aos 49 dias e no período total, sendo também realizada a contagem das bactérias lácticas, coliformes e clostrídios nas fezes dos leitões, aos 35 e 49 dias de idade. A viabilidade econômica da utilização dos probióticos e simbiótico nas rações dos leitões também foi avaliada. Foram utilizados 120 leitões, com 21 dias de idade, com peso médio inicial de 5,80 ± 0,30 kg, distribuídos em um delineamento experimental de blocos ao acaso, em um esquema fatorial constituído de dois níveis de probióticos (0,30 e 0,60%) e três níveis de inclusão de inulina (0,00; 0,25 e 0,50%), totalizando seis tratamentos com cinco repetições. No ensaio de metabolismo foram utilizados 24 suínos machos castrados, com peso vivo médio inicial de 18,00 ± 0,38 kg, distribuídos individualmente em gaiolas de metabolismo, e o delineamento experimental e tratamentos utilizados foram os mesmos descritos no experimento de desempenho, com quatro repetições. Foram determinados os valores de energia digestível, energia metabolizável, os coeficientes de digestibilidade e metabolizibilidade da energia bruta e no final do ensaio metabólico foram coletadas amostras de fezes, por meio de massagem retal, para determinar o pH fecal. A inclusão do probiótico e inulina nas rações não influenciou (P>0,05) o desempenho dos leitões, dos 21 aos 35 e dos 21 aos 49 dias de idade, o índice de custo, o índice de eficiência econômica, a contagem de bactérias acidoláticas, coliformes e clostrídios das fezes. No ensaio metabólico foi observado que a inclusão de probiótico nas rações não influenciou na metabolizibilidade da energia. No entanto, os níveis de inclusão de inulina reduziram (P<0,05) os valores de energia digestível e o coeficiente de digestibilidade da energia bruta, mas não influenciaram no coeficiente de metabolizibilidade da energia bruta. Os valores de pH fecal não foram influenciados pela inclusão de probiótico e simbiótico. O uso de probiótico e inulina, e sua associação, não alteraram o desempenho, a contagem de micro-organismos, a viabilidade econômica e a metabolizibilidade da energia bruta de leitões dos 21 aos 49 dias de idade

Lactic acid bacteria have been reported to be used as a health adjunct in food for u many years. However, these health benefits have not been proven. and how these bacteria pass through the digestion process and remain viable in the human intestinal tract is still not clear. The aim of this work was to isolate mutants from Lactobacillus acidophilus or Bifidobacterium bifidum that could tolerate the conditions of the digestion process (low pH and bile conduction) and to characterize these isolated mutants. Acid- and bile-tolerant mutants of L. acidophilus were isolated from parental strains successfully using natural selection techniques. These mutants survived and grew at conditions of pH 3.5 with 0.2% mixed bile salts added. After the selection, phenotypic characterization was identified to further clarify desirable traits for use as probiotic adjuncts in foods. These phenotypic characteristics included protease, aminopeptidase, ß-galactosidase, and bile salt hydrolase activity. Based on different protease, aminopeptidase, and ß-galactosidase activity, selected acid- and bile-tolerant mutants contained different growth characteristics compared with their parents. All the isolates tested showed different bile salt hydrolase activity, and this activity was not strain and medium dependent. Plasmid profiles and fatty acid analysis were conducted to provide more information of these acid/bile tolerant isolates and whether or not they were mutants from their parent strains rather than only adapted variants. Results showed the acid-/bile-tolerant isolates contained different plasmid profiles and cell wall fatty acids compared with their parents, which indicated these isolates were mutants. Protein expression by two-dimensional gel electrophoresis showed different protein expression patterns between acid- and bile-tolerant mutants and their parents. fm1her suggesting these isolates were mutants. We observed the protein production in parent strains decreased as the pH decreased. and protein expression in mutants remained the same as pH decreased. Two of the proposed health benefits of probiotic bacteria are anticholesterol activity and antimicrobial activity. These were evaluated using selected acid- and bile-tolerant mutants. Results showed no decrease of cholesterol in the test medium during bacterial growth. The observed antimicrobial activity was due to the presence of active cells. and this may relate to the acid production during cell growth and not to the production of antimicrobial substances. We concluded that the acid-/bile-tolerant isolates were mutants, and they survived and grew better in harsh environments compared with their parent strains. These mutants may be useful as a food adjunct in the future, but further study is needed to establish their use and possible probiotic benefits.