Dissertations / Theses: 'Biología de los gametos'

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Almela, Veracruz Laura. "Aportaciones a la crioconservación de gametos masculinos en la raza bovina murciano levantina : recongelación de espermatozoides." Doctoral thesis, Universidad de Murcia, 2014. http://hdl.handle.net/10803/284850.

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Abstract:

La raza bovina Murciano Levantina (ML) se utilizaba para labores agrícolas por su aptitud de trabajo. Hoy se encuentra en peligro de extinción por pérdida de utilidad ante la aparición de maquinaria agrícola. Los escasos criadores que la mantienen, no se dedican a la producción de ganado bovino, siendo los aspectos del folclore regional los que la hacen acorde con su aptitud de tracción. El Banco de Germoplasma de la raza se inició en el año 2000 y en la actualidad hay 7280 dosis seminales congeladas y almacenadas en N2L, pertenecientes a 13 toros ML, todos ellos muy emparentados. Con estas dosis se atiende tanto a la conservación in vivo, por cesión a los ganaderos y obtención de nuevos reproductores, como a la conservación ex situ in vitro para la futura reconstrucción de la raza en caso necesario; aunque el número de toros es insuficiente, puesto que se requiere semen de 25 toros conservados in vitro. El almacenamiento de dosis seminales es costoso por el aumento continuo de los precios del N2L y actualmente existen métodos para disminuir las necesidades de gametos masculinos; el sexado espermático disminuiría a la mitad estos gastos, aunque posteriormente sería necesaria la recongelación de los gametos. Los objetivos del presente trabajo son conseguir eficacia y eficiencia en el semen recongelado, disminuyendo el número de dosis seminales almacenadas, que serían descongeladas del Banco de Germoplasma, y a las que se les aplicaría un tratamiento similar al requerido por la tecnología de sexado espermático; siendo un objetivo derivado el estudio con técnicas convencionales del semen recongelado y relacionar los parámetros de calidad seminal del semen recongelado con aquellos toros que alcancen mejores valores de fertilidad con semen solamente congelado. Otro objetivo es poner a punto una técnica de recongelación que permita almacenar dosis seminales de forma más eficiente. En este trabajo se han utilizado los datos procesados de dosis seminales de 12 toros de esta raza y los espermatozoides congelados pertenecientes a 6 de esos toros. Los métodos de estudio del eyaculado y de las dosis seminales son los convencionales para la especie bovina. Las técnicas de congelación y recongelación utilizadas son las mismas que para el Banco de Germoplasma. En las experiencias de aplicación de frío, el semen descongelado fue sometido a una recongelación después de haber sufrido un tratamiento (CT), o bien recongelado sin tratamiento (ST). Para conocer el valor de los parámetros estudiados han sido utilizadas técnicas de microscopía óptica y fluorescencia, resistencia en baño de agua termostático, tinciones de E-N, IP, lectinas, azul de toluidina e IA con semen redescongelado a siete novillas de la raza Frisona. En el ganado Murciano Levantino existe variabilidad en los valores promedio de calidad seminal entre los sementales, aunque esto no es debido a la edad. Además, no existen diferencias reseñables en los valores promedio de los parámetros de semen procedente del primer y segundo eyaculado de cada toro. El análisis de los resultados permite conocer el daño en los espermatozoides durante la recongelación, siendo la calidad seminal en el semen descongelado superior a la del redescongelado; con gran variabilidad entre toros. Un semental presentó mejores valores para los parámetros tras la congelación y redescongelación, aunque en algún parámetro no hubo diferencias en ningún toro. Las anomalías espermáticas frecuentemente encontradas fueron las “colas en látigo”, pero ligeramente inferiores en el semen recongelado CT. La inseminación de 7 novillas Frisonas proporcionó un porcentaje de fertilidad del semen recongelado ST del 57’1%, lo que concluye que la recongelación espermática se puede utilizar como técnica de predicción de la fertilidad y ser utilizada para la conservación in vitro.
The Murciano Levantina (ML) bovine breed used to be employed for farming purposes because of their work aptitude. Nowadays, it is an endangered breed because it is no longer used for the mentioned purposes due to the arrival of technology and farming equipment. In addition, there are few ML bovine breeders and this is not their main occupation. This breed is mainly used during popular celebrations and festivals for transport. The Germplasm Bank breed has been carried out since 2000 and currently, there are 7280 seminal doses of 13 ML bulls with high consanguinity among them. With these doses it is possible to carry out both in vivo conservation, cession to the breeders and new breeding males; and ex situ in vitro conservation for the future reconstruction of the race -if necessary. Although the number of seminal doses may seem enough for the recovery of the breed in the future, the number of bulls is not sufficient, because the in vitro cryopreservation of spermatozoa belonging to, at least, 25 bulls is necessary. The storage of seminal doses implies more maintenance costs because of the continued increase in prices; currently there are some methods to reduce the male gametes necessities; the sexing sperm could reduce in the middle these expenses, although, afterwards could be necessary the gametes refreezing. The objectives of the present work are to obtain effectiveness and efficiency in refrozen semen, diminishing the number of frozen seminal doses stored at the Germplasm Bank, which would receive a treatment similar to that required by sexing technologies; being a derivative objective to study the usage of conventional technologies of refrozen semen, connecting the refrozen seminal quality parameters with the best fertility parameters in frozen semen. Another goal is the development of a refreezing technique that allows the storage of seminal doses more efficiently. In this work we have used the processed data of seminal doses belonging to 12 bulls of that breed and the frozen spermatozoa of 6 of those bulls. The methods to study the ejaculates and seminal doses are the conventional ones employed in bovine species. The freezing and refreezing techniques used are the same than those used for the Germplasm Bank. In the experiences with the application of cold, the thawed semen was refrozen after undergoing a certain treatment (CT), or it was refrozen without any treatment (ST). In order to know the value of the studied parameters the following methods have been used: the optical and fluorescent microscopy techniques, resistance in thermostatic water bath study, eosine-nigrosine, PI, lectins (PNA) and toluidine blue stainings and artificial insemination using refrozen semen in 7 Frisone breed heifers. In the ML livestock there is variability in the seminal quality average values among the studs, although this is not due to the bulls’ age. Additionally, there are not important differences regarding the average values between the first and the second ejaculation in each bull. Statistical results permit to know the damage in spermatozoa during recryopreservation, and it was observed that the seminal quality is higher in frozen semen than in refrozen semen, with a high variability among bulls. Among the bulls, one of them presented the best results in each parameter studied after cryopreservation and recryopreservation, although there were no differences among the bulls regarding some parameters. The most frequent sperm abnormalities were the “tails in whip”, but they were slightly lower in CT refrozen semen. The artificial insemination of 7 Frisone heifers showed a percentage of fertility with ST refrozen semen of 57’1%. These results conclude that the re-frozen semen can be used as a predictive technique of fertility, and thus, it can be used for the in vitro conservation of the studied bovine breed.

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Romar, Andrés Raquel. "Efecto de las células oviductales y del cumulus oophorus sobre diferentes parámetros biológicos relacionados con la fecundación in vitro en la especie porcina." Doctoral thesis, Universidad de Murcia, 2001. http://hdl.handle.net/10803/10854.

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Abstract:

El objetivo del presente trabajo consistió en valorar el efecto de las células epiteliales del oviducto porcino y del cumulus oophorus sobre distintos parámetros relacionados con la fecundación in vitro en la especie porcina. Las variables estudiadas fueron el porcentaje de penetración, el número medio de espermatozoides por ovocito, el porcentaje de formación de pronúcleo masculino, el porcentaje de monospermia, el porcentaje de cigotos divididos a las 48 horas postfecundación, el porcentaje de blastocistos, el número medio de núcleos por blastocisto, la resistencia de la zona pelúcida a la digestión con pronasa y la densidad y distribución de los gránulos corticales en los diferentes grupos experimentales.
The objective of this experimental work was to study the effect of porcine epithelial oviductal cells and cumulus cells on several parameters related to in vitro fertilization in pigs. Studied variables were rate of penetration, mean number of sperm cells per penetrated oocyte, rate of male pronuclear formation, cleavage rate at 48h postinsemination, blastocyst formation rate, mean number of cells per blastocyst, resistance of zona pellucida to pronase digestion and density and distribution of cortical granules in the different experimental groups.

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Pimentel, Poulain Mariana Zita, and Seguel Ruth Ximena Torres. "Los gametos humanos ante el derecho." Tesis, Universidad de Chile, 2002. http://www.repositorio.uchile.cl/handle/2250/115480.

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Abstract:

Memoria (licenciado en ciencias jurídicas y sociales)
No autorizada por los autores para ser publicada a texto completo
Esta memoria pretende desentrañar misteriosos caminos para quienes optamos por la vía del Derecho, no sólo en el área de la ciencia médica, sino también incorporarlos al ámbito de la llamada Bio-jurídica. A la luz de la importancia que tendrá este tema en el futuro, exponemos, cómo podríamos llegar a disponer de nuestra carga genética y de nuestras células sexuales reproductoras, óvulo y espermio, llamadas genéricamente gametos humanos. Para ello proponemos en una primera parte, cómo ellos, que pertenecen o emanan del cuerpo humano, pueden desligarse y pasar pertenecer a otra persona; como los podemos defender en el ámbito constitucional, civil, penal e internacional; que naturaleza jurídica tienen, si pueden o no ser considerados bienes. Luego pedimos ayuda a la ciencia para que nos informe cómo se forman y los usos que se les puede dar de acuerdo al estado actual de la misma y que, hoy por hoy, tiene al mundo sumido en un total asombro y temor a lo desconocido. Todo esto con apoyo de la ética.

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Ventura, Rauld Deborah. "El estatuto jurídico de los gametos humanos." Tesis, Universidad de Chile, 2000. http://www.repositorio.uchile.cl/handle/2250/114451.

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Abstract:

Memoria (licenciado en ciencias jurídicas y sociales)
No autorizada por el autor para ser publicada a texto completo
El presente estudio se refiere al estatuto jurídico aplicable a los gametos humanos según la legislación vigente en Chile. Así, intentaremos determinar qué normas jurídicas regulan su uso, cuáles son los vacíos legales respecto al tema y por qué es importante legislar acerca de los gametos. La determinación del estatuto jurídico de los gametos humanos y su consiguiente protección es el complemento necesario a la protección del embrión. Esto, en atención a que, al ser los gametos la "materia prima" que dará origen a un embrión humano, la protección jurídica no puede circunscribirse únicamente a este último, puesto que toda intervención, alteración o modificación realizada sobre las células germinales repercutirá posteriormente en el embrión a que den origen. De esta manera, todo intento por determinar el estatuto jurídico del embrión humano y su protección legal debe necesiaramente incluir la determinación del estatuto jurídico de los gametos y su consiguiente protección.

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Ispizúa, Muñoz Jorge Antonio. "Criopreservación : bancos de gametos y embriones y su regulación jurídica." Tesis, Universidad de Chile, 2004. http://www.repositorio.uchile.cl/handle/2250/114961.

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Abstract:

Memoria (licenciado en ciencias jurídicas y sociales)
No autorizada por el autor para ser publicada a texto completo
Los objetivos perseguidos en la presente memoria, apuntan a demostrar que es posible aceptar los procesos de criopreservación de gametos, pronúcleos, y embriones, no solo porque representa una realidad en muchas partes del mundo. Si fuera ese el argumento para aceptarla, sería lo mismo que no dar fundamento alguno. Entonces, lo primero que debemos lograr, es demostrar que nuestro ordenamiento jurídico, debe dar acogida a los procesos antes referidos. Para ello, deberemos preocuparnos de manera previa, de la naturaleza jurídica de gametos, pronúcleos, y embriones. Nuestro análisis apuntará a dejar en evidencia, que de las células mencionadas, solamente los embriones, ya implantados en las paredes del útero de una mujer, podrán tener conocimiento legal, como si se tratase de personas, o al menos de una que está por nacer. Antes de ese momento, consideramos que el tratamiento, y por ende el tutelaje del que pueden ser merecedores, será más cercano al otorgado a las cosas.

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Barboza, Calle Yesly Katerine. "La donación de gametos para la reproducción humana asistida desde la perspectiva biojurídica." Bachelor's thesis, Universidad Católica Santo Toribio de Mogrovejo, 2018. http://hdl.handle.net/20.500.12423/1976.

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Abstract:

La presente investigación hace referencia a la donación de gametos en el marco de las Técnicas de Reproducción Humana Asistida y su relación con el acto jurídico de donación, con ello se busca analizar si el acto de donación se desnaturaliza cuando hablamos de la donación de gametos, debido a que existe una actividad mercantil, es decir una venta donde se entrega un bien personal llamado gameto a cambio de una suma de dinero, y al mismo tiempo se busca establecer límites éticos y jurídicos para regular el uso de las Técnicas de Reproducción Humana Asistida, para evitar la instrumentalización de la persona y la afectación a su dignidad. Para ello es necesario el planteamiento de mecanismos que permitan un desarrollo integral de la persona, salvaguardando los derechos de cada ser humano en tanto es persona.
Tesis

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Selva, Pareja Laia. "La donación de gametos y su registro en la reproducción humana asistida. Aspectos bioéticos, sociales y legales." Doctoral thesis, Universitat de Barcelona, 2019. http://hdl.handle.net/10803/667598.

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Abstract:

Como consecuencia del estilo de vida y de factores no fácilmente cuantificables, cada vez se retrasan más la paternidad y la maternidad, lo que deriva con frecuencia en problemas de fertilidad. Con objeto de evitar el denominado Permanent Involuntary Childlessness y sus efectos colaterales, como la estigmatización social o la frustración personal, quienes desean tener descendencia a pesar de las dificultadas citadas recurren a las Técnicas de Reproducción Humana Asistida. La infertilidad y/o los nuevos modelos de familia conllevan que a veces se recurra a la donación de gametos, lo que genera una casuística enorme. En efecto, estas donaciones, efectuadas en un marco jurídico no siempre explícito e incluso a veces oscilante, arrastran tras de sí numerosas implicaciones sociales y éticas, extendiendo la relación de los usuarios de estas TRHA a terceros, esto es, a los donantes y a los menores que nacen con las técnicas que comentamos. De hecho, conciliar el anonimato con el derecho a conocer los orígenes es uno de los grandes retos por resolver. Pues bien, con esta tesis nos planteamos conocer la realidad bioética, social y legal del proceso de donación. Para ello, contrastaremos las opiniones de los estudiantes universitarios de la Facultat de Dret, Economia i Turisme, y la Facultat d’Infermeria i Fisioteràpia de la Universitat de Lleida, con un grupo de investigadoras de diversos campos del conocimiento. Dada la dificultad inherente a analizar dichos conocimientos y actitudes, y ante la ausencia de instrumentos adecuados para hacerlo, hemos decidido diseñar, elaborar y validar un cuestionario al que denominamos Cuestionario LSP2016. Nuestro enfoque es tanto cualitativo como cuantitativo. Hemos iniciado nuestro trabajo con una revisión de la bibliografía para el desarrollo argumental y una scoping review sobre los instrumentos que existen; a continuación, hemos realizado una revisión sistemática de las páginas webs de las clínicas con programas de donación de Barcelona, así como un estudio etnográfico. Para la validación del cuestionario, hemos empleado la técnica Delphi, una discusión con expertas, una prueba piloto y un test-retest con una muestra heterogénea para que el cuestionario quede validado para la población general. Al desarrollo cualitativo de estas metodologías le acompañan diferentes pruebas estadísticas para la validación de contenido, constructo y criterio, y para evaluar su confiabilidad. Finalmente, hemos realizado el trabajo de campo con la propuesta final del Cuestionario LSP2016, así como las pruebas estadísticas pertinentes para la obtención de resultados. Por último, hemos procedido a la discusión de todos los apartados por separado, finalizando con las conclusiones pertinentes. Sin perjuicio de la lectura de las mismas, podemos destacar la enorme diferencia existente, en cuanto al enfoque, entre las expertas y los resultados del trabajo de campo realizado con los estudiantes.
Com a conseqüència de l’estil de vida i de factors que no són fàcilment quantificables, cada vegada es retarda més la paternitat i maternitat, la qual cosa deriva amb freqüència en problemes de fertilitat. Per tal d’evitar el denominat Permanent Involuntary Childlessness i els seus efectes col·laterals, com són l’estigmatització social o la frustració personal, aquelles persones que desitgen tenir descendència malgrat les dificultats nombrades, recorren a les Tècniques de Reproducció Humana Assistida. La infertilitat i/o els nous models de família comporten que, de vegades, es recorri a la donació de gàmetes, el que genera una gran casuística. En efecte, aquestes donacions, efectuades en un marc jurídic no sempre explícit i inclús, de vegades oscil·lant, comporten nombroses implicacions socials i ètiques, duent la relació dels usuaris d’aquestes TRHA a terceres persones, és a dir, als donants i als menors que neixen mitjançant aquestes tècniques que comentem. De fet, conciliar l’anonimat amb el dret a conèixer els orígens és un dels grans repte per resoldre. Per tant, amb aquesta tesi ens plantegem conèixer la realitat bioètica, social i legal del procés de donació. Per fer-ho, contrarestarem les opinions dels estudiants universitaris de la Facultat de Dret, Economia i Turisme, i la Facultat d’Infermeria i Fisioteràpia de la Universitat de Lleida, amb un grup d’investigadors de diferents camps de coneixement. Donada la dificultat inherent d’analitzar aquests coneixements i actituds, i davant l’absència d’instruments idonis per dur-ho a terme, hem decidit dissenyar, elaborar i validar al que denominem Cuestionario LSP2016. El nostre enfocament és tant qualitatiu com quantitatiu. Hem iniciat el nostre treball amb una revisió de la bibliografia per redactar el desenvolupament argumental i una scoping review sobre els instruments que existeixen; a continuació, hem realitzat una revisió sistemàtica de les pàgines webs de les clíniques amb programes de donació de Barcelona, així com un estudi etnogràfic. Per dur a terme la validació del qüestionari, hem realitzat la tècnica Delphi, una discussió amb expertes, una prova pilot i un test-retest amb una mostra heterogènia per tal de que el qüestionari estigui validat per a la població general. Al desenvolupament qualitatiu d’aquestes metodologies l’acompanyen diferents proves estadístiques per la validació del contingut, constructe, criteri, i per avaluar la confiabilitat. Finalment, hem realitzat el treball de camp amb la proposta final del Cuestionario LSP2016, així com les proves estadístiques pertinents per l’obtenció de resultats. Per últim, hem dut a terme la discussió de tots els apartats per separat, finalitzant amb les conclusions pertinents. Sense prejudicis de la lectura de les mateixes, podem destacar la gran diferència existent, entre les expertes i els resultats del treball de camp realitzat amb els estudiants.
The paternity and maternity are increasingly retarded year on year as a consequence of the lifestyle and non-easily quantifiable factors. This fact often leads to fertility issues. All aimed to avoid the Permanent Involuntary Childlessness and its collateral effects, such as the social stigmatization or the personal frustration, the ones who desire having offspring they turn to Assisted Reproductive Technology despite the mentioned difficulties. Infertility and new family types usually lead to the donation of gametes, which creates a huge casuistry. In effect, these donations generate debates over legal, social and bioethical dilemmas by the community experts around the world. Nowadays, one of the major challenges to resolve is, in fact, the reconciliation of the anonymity by getting to know their origins. This thesis aims at knowing the bioethical, social and legal reality of the donation process. In order to achieve it we will be contrasting the students’ opinions of the Facultat de Dret, Economia i Turisme and Facultat d’Infermeria i Fisioteràpia of Universitat de Lleida with a group of researches in the various fields of knowledge. Nevertheless, given the inherent difficulty with analysing knowledge and attitudes, and the lack of appropriate instruments to carry it out, we have designed, elaborated and validated a questionnaire entitled as Cuestionario LSP2016. During the process, we have combined qualitative and quantitative approaches. Firstly, we have looked over literature, which facilitate us the development of arguments and a scoping review about the available instruments. Secondly, we systematically reviewed Barcelona fertility clinics, which are involved in the recruitment of egg donors by analysing their websites, as well as an ethnographic study. Delphi technique has been used for the questionnaire validation, apart from an experts’ discussion, a pilot study and a test-retest including a heterogeneous group in order to get the questionnaire validated for the general population. The qualitative development of these methods is formed by different statistical analysis, which are going to be used for the content, construct and criterion-related validity and reliability. Lastly, we have done a research work considering the final proposal of the Cuestionario LSP2016 and the corresponding statistical analysis in order to obtain the results. Finally, we proceed with a discussion for each section and the appropriate conclusions. Without prejudice of the lecture, we highlight the enormous difference, in terms of approaches, between the experts and the students’ research work.

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Almiñana, Brines Carmen. "Optimización del sistema de fecundación in vitro en la especie porcina: condiciones de maduración y cocultivo en gametos." Doctoral thesis, Universidad de Murcia, 2008. http://hdl.handle.net/10803/10984.

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Abstract:

En un intento de optimizar el sistema de fecundación in vitro en la especie porcina se estudió la influencia de distintas condiciones de maduración y de cocultivo de los gametos. Se evaluó la reducción del tiempo de coincubación de los gametos a 10 min observándose un claro efecto del ratio espermatozoides:ovocito. El estudio de las necesidades de los espermatozoides en términos de aditivos del medio de fecundación y tiempo de coincubación reveló variaciones entre verracos. La utilización de un tiempo de coincubación tan corto como 2 min fue suficiente para obtener unas tasas de penetración y monospermia similares a las alcanzadas por los sistemas de FIV tradicionales. El sistema de FIV en pajuela con 10 min de coincubación aumentó la penetración monoespérmica y mejoró la calidad de los blastocistos. La adición de 5 nM de 9- cis ácido retinoico al medio de maduración aumentó significativamente la formación de blastocistos.
The present study was conducted in an attempt to optimize porcine in vitro fertilization system. For this purpose, the influence of maturation and gamete coculture conditions were studied. The coincubation time may be reduced to 10 min to increase the efficiency of fertilization depending on the sperm:oocytes ratio. The needs of boar spermatozoa for IVF, in terms of additives to IVF medium and coincubation times vary among boars. The use of coincubation time as brief as 2 min is long enough to obtain good fertilization rates similar to those achieved from current long term exposure times in IVF. A straw IVF system in combination with a 10 min coincubation increased monospermic penetration and the quality of blastocysts compared with the microdrop-IVF system. The addition of 5 nM of 9- cis retinoic acid in the IVM medium increased blastocyst formation rate, suggesting that RA may play an important role during IVM.

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Charcos, Valero Miguel José. "Biología de garaje y Medicina." Doctoral thesis, Universidad de Alicante, 2016. http://hdl.handle.net/10045/54649.

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Avilés, López Karen Guadalupe. "Estudio de la funcionalidad espermática, interacción de gametos y análisis proteico en espermatozoides Epididimarios y Eyaculados en la especie porcina." Doctoral thesis, Universidad de Murcia, 2011. http://hdl.handle.net/10803/108090.

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Abstract:

La capacitación es un proceso fisiológico que el espermatozoide debe experimentar para que la fecundación del ovocito tenga lugar. Este proceso se encuentra regulado en el espermatozoide por diferentes vías moleculares, varias de las cuales, a día de hoy, se desconocen o no están totalmente dilucidadas. Estos eventos moleculares que acontecen en el espermatozoide durante el proceso de capacitación están condicionados por distintos factores que rodean su entorno, entre los cuales podemos destacar el ambiente epididimario, el plasma seminal o las secreciones del aparato reproductor femenino como el fluido oviductal. El objetivo principal de este trabajo fue analizar el comportamiento de espermatozoides epididimarios-EP (en contacto con el fluido epididimario y no con el plasma seminal) y eyaculados-EY (en contacto con el plasma seminal) sometidos a 3 tratamientos diferentes: 1) Espermatozoides no tratados (grupo control-C); 2) Lavados a través de gradientes de Percoll e incubados en medio de capacitación TALP (grupo lavados-L); 3) Espermatozoides lavados e incubados en Fluido Oviductal Porcino (grupo FOP).

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(UPC), Universidad Peruana de Ciencias Aplicadas. "Bioquímica Y Biología Celular - TF78 20700." Universidad Peruana de Ciencias Aplicadas (UPC), 2018. http://hdl.handle.net/10757/623216.

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Abstract:

Curso general de la Carrera de Terapia Física, de carácter teórico-práctico dirigido a los estudiantes del segundo ciclo que busca desarrollar la competencia general de Razonamiento Cuantitativo. El curso de Bioquímica y Biología Celular tiene como objetivo demostrar que todos los seres vivos están formados por células y moléculas, definiendo los fundamentos físico-químicos que rigen su comportamiento. Se da énfasis al conocimiento de la estructura celular, en la función de las proteínas y en los mecanismos enzimáticos, se plantea la utilización programada de energía a través de las vías metabólicas. Se estudian los sistemas moleculares que regulan la autoperpetuación de la información genética. Proporciona al estudiante los lineamientos generales de la bioquímica y la biología celular básica para desarrollar habilidades de investigación, expresión de ideas fundamentadas, aprendizaje autónomo y trabajo en equipo, que le permitirán desarrollarse y desenvolverse en la práctica clínica y la investigación científica.

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Cánovas, Bernabé Sebastián. "Interacciones homólogas y heterólogas in vitro de gametos porcinos, bovinos y humanos y sus aplicaciones en el estudio de la fecundación." Doctoral thesis, Universidad de Murcia, 2007. http://hdl.handle.net/10803/10851.

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Abstract:

La interacción entre gametos es crucial para la fecundación. La zona pelúcida (ZP) se considera responsable de bloquear la polispermia, pero in vitro estas funciones no son totalmente eficientes. La polispermia es frecuente en fecundación in vitro (FIV) en porcino y bovino, mientras que la interacción heteróloga espermatozoide-ovocito ha sido demostrada. Los objetivos fueron estudiar el bloqueo de la polispermia para mejorar los resultados de FIV e investigar las interacciones heterólogas entre espermatozoide humano y ovocito porcino. Los resultados demuestran que se produce endurecimiento de la ZP de ovocitos bovinos y porcinos de forma previa a la fecundación, utilizando DTSP o fluido oviductal bovino. Cuando se utilizan estos ovocitos en FIV aumenta la monospermia y el rendimiento final. En las interacciones heterólogas los espermatozoides humanos pueden unirse a ZP porcina y sufren la reacción acrosómica, pero no penetran los ovocitos sin ZP. En ICSI activan el ovocito y forman pronúcleos.
The interaction between gametes is crucial to fertilization. The zona pellucida (ZP) is responsible to block of polyspermy, but in vitro these functions are not efficient. The polyspermy is frequently in bovine and porcine in vitro fecundation. Besides the heterologous interaction between spermatozoa-oocyte had been described. The aims were study the block of polyspermy to improve the output of IVF and research the heterologous interactions between human spermatozoa and porcine oocyte.The results show that there is hardening of bovine and porcine ZP previously at fertilization, in vivo and using DTSP or bovine oviductal fluid. When these oocytes are used in IVF improve the monospermy and the output. In heterologus interactions the human spermatozoa could bind to porcine ZP and it triggers the acrosome reaction, but not penetration in ZP-free oocyte was observed. In ICSI the oocyte activation and

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Del, Valle Mendoza Juana, and Tapia Ángela Cornejo. "Bioquímica, Biología Cecular y Molecular II (ME67), guía de prácticas, 2014-I." Universidad Peruana de Ciencias Aplicadas (UPC), 2014. http://hdl.handle.net/10757/320255.

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Abstract:

En este curso el alumno basándose en la curiosidad innata del ser humano, adentrará en el conocimiento profundo de la Bioquímica, a fin de obtener la base necesaria que le permita enfrentar los cursos posteriores que se desarrollarán en los siguientes años de su carrera. El objeto de esta guía es encaminar al alumno, bajo la dirección del Docente, por el mundo biológico desde lo más simple a lo complejo; la guía consta de una parte introductoria, con indicaciones generales a tomar en cuenta en todas las prácticas, y las indicaciones específicas por tema a desarrollar.

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Del, Valle Mendoza Juana, Tapia Ángela Cornejo, Fiorella Orellana, and Verónica Casabona. "Bioquímica, Biología Celular y Molecular III (ME68), guía de prácticas, ciclio 2014-I." Universidad Peruana de Ciencias Aplicadas (UPC), 2014. http://hdl.handle.net/10757/320266.

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Abstract:

En este curso el alumno basándose en la curiosidad innata del ser humano, adentrará en el conocimiento profundo de la Bioquímica, a fin de obtener la base necesaria que le permita enfrentar los cursos posteriores que se desarrollarán en los siguientes años de su carrera. El objeto de esta guía es encaminar al alumno, bajo la dirección del Docente, por el mundo biológico desde lo más simple a lo complejo; la guía consta de una parte introductoria, con indicaciones generales a tomar en cuenta en todas las prácticas, y las indicaciones específicas por tema a desarrollar.

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Tapia, Alamos Lucía. "Función de las Metalotioneínas en el metabolismo celular de cobre." Tesis, Universidad de Chile, 2002. http://www.repositorio.uchile.cl/handle/2250/106697.

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Abstract:

Doctor en Ciencias con mención en Biología Molecular, Celular y Neurociencias
Copper is an essential micronutrient for life, it is required by a wide range of species, from bacteria to yeast, plant and humans. Copper essentiality is based in the capacity of the metal to be an intermediary in the transfer of electrons; thus, redox active enzymes that participate in physiological process like cellular respiration, iron transport and metabolism, and neurotransmitter synthesis utilize it. On the other hand, as a consequence of its redox properties, copper is potentially toxic to membranes, DNA and proteins through a Fenton´s type reaction. To prevent excess or deficit, living organisms have developed mechanisms that regulate copper in plasma and tissue stores, through specialized tissues such as intestinal mucosa and hepatic tissue. A number of molecules at a cellular level regulate the uptake, efflux, storage and utilization of the metal. The evidence indicates that copper handling is tightly regulated, thus, under normal conditions it is almost impossible to find a free copper ion inside the cell. Metallothioneins (MTs) are proteins involved in the regulation of intracellular copper metabolism. MTs are found in all eukaryots as well as some prokaryots; the structure is highly conserved across species. Physical-chemical properties allow MTs to coordinate the binding of multiple atoms of copper with a high affinity, and at the same time since these are kinetically labile they can be transferred to other molecules. Copper induces MT expression, thus intracellular MT content is related to an increase in cell resistance to copper toxicity. These properties suggest that MTs have an important role in cellular copper metabolism, storage and/or delivery of copper ions to specific cupro-enzymes. Since the role of MT has not been fully characterized, the goal of this doctoral thesis was to evaluate MT function in copper metabolism of cells maintained in sub, iso- and supra- physiological concentrations of copper. The results of this thesis indicate that in the absence of MT, cultured cell grown in low and normal concentration of copper have a decreased capacity to store copper; moreover they are more sensitive to an increment in intracellular copper, decreasing their viability. The increment in intracellular copper relative to wild cells is not explained by an increase in copper uptake, suggesting a difference in the efflux rate. The analysis of efflux of newly incorporated copper showed that in absence of MT, the retention of this copper is slightly lower; this may explain in part, the lower copper content observed in these cells. Finally, I have demonstrated that in the absence of MTs, the capacity of copper to induce gene expression of MT, SOD1 and Ccs1 its chaperone is lost. This observation could partially explain the increased vulnerability of MT null cells to lower intracellular copper concentrations. I propose as conclusions of this thesis that the presence of MT is important to maintain an appropriate regulation of intracellular copper homeostasis in cells grown at physiological copper concentrations and especially in response to extracellular copper excess. This response is dependent on the capacity of MT to store copper under physiological conditions and in response to excess, sequester intracellular copper in a safe form.

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Córdova, Gómez Alejandro. "Evaluación de tres tiempos de co-cultivo de gametos, sobre la tasa de división y desarrollo embrionario in vitro de ovocitos bovinos." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2013. https://hdl.handle.net/20.500.12672/9607.

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Abstract:

Publicación a texto completo no autorizada por el autor
Evalúa los tres tiempos de co-incubación entre gametos bovinos durante la fecundación In vitro, para luego determinar las tazas de división y desarrollo embrionario al día 7 post fecundación. Ovocitos bovinos fueron obtenidos mediante aspiración folicular, fueron madurados In vitro y luego se inseminaron con una concentración de 1,5x106 esp/ml en medio TL-STOCK a 38,5º C, 5% de CO2 y atmósfera saturada de humedad. Luego de 6 horas (T1=245), 12 horas (T2=278) y 18 horas (T3=287) de co-incubación, los Complejos Cumulus-Ovocito (CCOs) con los espermatozoides adheridos al cumulus, se retiraron de las gotas de fecundación y fueron lavados y transferidos a gotas con medio de incubación. Los presuntos cigotos se cultivaron In vitro, en un primer cultivo en medio KSOM y posteriormente en medio de cultivo SOF hasta el término de la evaluación del desarrollo embrionario. La evaluación del efecto tiempos de cocultivo sobre las tasa de división y de blastocistos se realizó mediante la prueba paramétrica de análisis de varianza A las 72 horas de fecundación se obtuvieron tasas de división, ≥ 2 células de: 38.3%, 63.3% y 73.4% para los grupos T1, T2 y T3 respectivamente. Al comparar las tasas de división, sólo se encontró diferencia estadística significativa entre los grupos T1 y T2 y T1 y T3, (p<0.05). Al día 7 de cultivo, la tasa de desarrollo de blastocistos fue de 24.4%; 21.6% y 24.6% para los grupos T1, T2 y T3 respectivamente, no encontrándose diferencia estadística significativa entre los grupos. Los resultados obtenidos en el presente estudio muestran que no existe diferencia estadística entre los tres grupos evaluados respecto al desarrollo embrionario al estadio de blastocisto, lo cual sugiere que al co-incubar gametos bovinos por 6,12 ó 18 horas se pueden obtener embriones de las mismas características que los obtenidos con los protocolos tradicionales.
Tesis

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Piña, Fernández Samuel. "Biología y conservación del Ferreret, Alytes muletensis." Doctoral thesis, Universitat de les Illes Balears, 2014. http://hdl.handle.net/10803/293899.

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Abstract:

El conocimiento de la estructura y dinámica de la población de una especie dada se fundamenta principalmente en el conocimiento de la fracción adulta. Hasta la fecha dicho conocimiento era mínimo para Alytes muletensis, reduciéndose a aspectos etológicos como la reproducción, y en muchos casos la información obtenida provenía de poblaciones cautivas. El presente conjunto de trabajos asienta las bases para el conocimiento de la fracción adulta, como es la identificación de los miembros de la población a partir de técnicas de fotoidentificación, así como la determinación del sexo a partir de la construcción de funciones discriminantes de clasificación sexual a partir de un estudio morfológico. Gracias a la obtención de esta metodología se ha podido continuar en el estudio de la estructura y dinámica poblacional. Así, se han comparado las longitudes y condiciones corporales procedentes de individuos de poblaciones naturales y artificiales, hecho que ha permitido conocer mejor la idoneidad del hábitat. Los individuos procedentes de poblaciones artificiales presentan una longitud y condición corporal mayor que los de poblaciones naturales, dando lugar a pensar que, desde el punto de vista del individuo, los hábitats óptimos para la especie son aquellos más similares a los artificiales. Además, se han podido establecer parámetros propios de poblaciones silvestres como es el caso del tamaño de puesta, la edad media, la esperanza de vida o la tasa de crecimiento, tanto para machos como para hembras. Estos datos han sido de vital transcendencia ya que han permitido elaborar el primer ciclo de vida sencillo con el que se han podido calcular las primeras tasas de supervivencia de cada sexo para una población silvestre. Este hecho supone un antes y un después en el conocimiento de la dinámica de la población que permitirá en un futuro mejorar este ciclo de vida en función de diferentes situaciones y tipos de poblaciones. El conjunto de trabajos realizados se complementa con la detección de los primeros casos de malformaciones en individuos adultos. También se presta especial atención a la interacción entre Natrix maura y la fracción adulta de la población, hecho que ha permitido conocer el impacto de la llegada de ejemplares de culebra viperina sobre la actividad reproductora.

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Akabane, Hiroto. "Protein kinase C activity in mouse eggs regulates gamete membrane interaction." Huntington, WV : [Marshall University Libraries], 2006. http://www.marshall.edu/etd/descript.asp?ref=655.

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Galián, Megías José Antonio. "Estudio de la evolución del espaciador ribosomal intergénico 45S (IGS45S) y otras familias de ADN repetido en plantas, mediantes técnicas moleculares y citogenéticas." Doctoral thesis, Universidad de Murcia, 2014. http://hdl.handle.net/10803/146174.

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Abstract:

Tesis por compendio de publicaciones
El objetivo fundamental de esta tesis fue ahondar en los procesos de evolución molecular de algunas de las distintas familias de ADN repetido que se usan de forma rutinaria en los trabajos de taxonomía, filogeografía y filogenética de plantas, para con herramientas de biología molecular (PCR, clonación, secuenciación…) y citogenética molecular (FISH) poner a prueba las teorías generalmente aceptadas sobre los procesos de variación y homogeneización de tales secuencias repetidas. En el primer trabajo de esta tesis como compendio de artículos, utilizando la secuencia de ADN satélite E180 previamente descrita para el género Medicago, diseñamos primers específicos para (1) evaluar la robustez y sensibilidad tanto de la PCR como del FISH para detectar familias de ADN repetido, (2) obtener nuevos datos sobre la evolución genómica (cariotípica) del género Medicago usando ADNsat como marcador, y (3) evaluar el rastro filogenético dejado por una familia de ADNsat en un género tan particular como Medicago, donde se tiene la evidencia de que complejos patrones de hibridación han jugado un papel fundamental en su historia evolutiva. Nuestros resultados demuestran que la detección tanto por técnicas moleculares como citogenéticas de la familia repetida E180 es altamente reproducible a través del género, y que los patrones cromosómicos sirvieron para diferenciar complejos de especies estrechamente relacionados (son taxón-específicos). El segundo trabajo de esta tesis vino motivado por las continuas referencias bibliográficas que usaban las secuencias de la familia de ADN ribosomal nuclear 5S como marcador genético en la práctica de concatenar partes diferentes de dos genes seguidos para usarlas como pertenecientes a un mismo gen, en la creencia de que la homogeneización de secuencia dentro de la familia era completa. En consecuencia comparamos la integridad de la secuencia (longitud, motivos universales conservados y estructura secundaria) y el comportamiento filogenético de zonas 5S codificantes completas en comparación con las quiméricas (concatenadas) de un grupo de genes de ADNrn 5S obtenido de varias especies estrechamente relacionadas. Los resultados que se desprenden sugieren que la homogeneización de secuencias no está operando, ni siquiera dentro de un mismo tándem, en la región codificante del ADNrn 5S, la cual había sido tradicionalmente considerada como un ejemplo de secuencia altamente conservada. De esta manera, la generalizada práctica de concatenar secuencias de genes 5S puede incrementar la diversidad haplotípica, distorsionando los patrones de evolución génica y conduciendo a relaciones haplotípicas incorrectas en algunas reconstrucciones evolutivas. En el tercer y último trabajo de la tesis, estudiamos la secuencia del espaciador intergénico (IGS) del ADNr 45S de Ginkgo biloba y Medicago arborea respectivamente. En el caso de G. biloba, y basándonos en trabajos previos, intentamos discernir si las familias de ADNrn 45S y 5S estaban o no combinadas en el mismo locus. Usando técnicas de citogenética molecular y secuenciación de ADN mostramos que la única organización existente en esta especie es la asociada (primera vez que se demuestra en gimnospermas), donde el gen 5S aparece insertado dentro del IGS 45S.

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Sánchez, Mir Laura. "Control diferencial de la ruta de MAP quinasas de integridad celular por GTPasas de la familia Rho en Schizosaccharomyces pombe." Doctoral thesis, Universidad de Murcia, 2014. http://hdl.handle.net/10803/277324.

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Abstract:

Tesis por compendio de publicaciones
Las rutas de señalización mediadas por MAP quinasas (MAPK) tienen un papel fundamental en la respuesta de células eucariotas frente a estímulos ambientales. La levadura con fisión Schizosaccharomyces pombe representa un modelo particularmente adecuado para abordar estudios básicos sobre dichas rutas de señalización, debido a la gran homología funcional que existe entre sus circuitos reguladores y los de organismos superiores. En S. pombe, la ruta de MAPKs de integridad celular (CIP) participa en la regulación de numerosos procesos biológicos como la construcción de la pared celular, la citocinesis, la morfogénesis, la fusión de vacuolas durante el estrés hipotónico, y la homeostasis iónica mediante la modulación de la activación de la MAPK Pmk1 en respuesta a cambios en las condiciones ambientales. Aunque la GTPasa Rho2 es el principal activador de la ruta de integridad celular a través del ortólogo de PKC Pck2, Pmk1 puede ser activada en ausencia de ambos dependiendo de la naturaleza del estímulo recibido, lo que indica la existencia de elementos reguladores adicionales aguas arriba del módulo de MAPKs. Se ha propuesto a la GTPasa Rho1 como candidata para tal función, mientras que el ortólogo de PKC Pck1 parece regular negativamente la actividad de la CIP. Hemos investigado el posible papel de Rho1 y Pck1 como reguladores de la CIP empleando un mutante hipoactivo de Rho1 (rho1-596) y un mutante carente de Pck1 en distintos fondos genéticos. Las evidencias obtenidas mostraron que Rho1 y Pck1 son activadores de la ruta adicionalmente a Rho2 y Pck2, lo que pone de manifiesto la naturaleza ramificada de los mecanismos de señalización que actúan aguas arriba del módulo de MAPKs. Por otra parte Rho2 se localiza en la membrana plasmática y en el área de división celular, y es farnesilada in vivo en el motivo -CAAX de su extremo C-terminal, siendo esta modificación esencial para su localización y función activadora de la CIP. Sin embargo, la presencia de un residuo de cisteína previo al motivo -CAAX sugiere que Rho2 podría encontrarse palmitoilada en dicho residuo. Para estudiar la relevancia biológica de la palmitoilación de Rho2 creamos una serie de cepas que expresan versiones mutantes tanto de Rho2 como de Rho1 afectadas en lipidación, y estudiamos su localización y función biológica. Los resultados obtenidos permitieron concluir que en la levadura con fisión, la GTPasa Rho2 es palmitoilada in vivo, siendo esta modificación crítica para su correcta localización en membrana plasmática y para ejercer su regulación de la morfogénesis y la ruta de integridad celular. Por último, son numerosos los estudios que han puesto de manifiesto la importancia de la localización subcelular de los componentes de los módulos de MAP quinasas en la respuesta a estrés. En el caso de la ruta de integridad celular, la MAPK Pmk1 muestra una localización núcleo/citoplasmática constitutiva, así como en el huso mitótico, el corpúsculo polar del huso, y en el septo durante la separación celular. Sin embargo, a diferencia del modelo descrito en ERK1/2 en mamíferos, el patrón de localización de Pmk1 no se modifica en respuesta a estrés, lo que indica que tanto la forma activa como inactiva de la MAP quinasa son capaces de entrar en el núcleo. En base a esto, nos planteamos el estudio de la relevancia biológica de la localización nuclear de Pmk1 sobre su función biológica. Para ello recurrimos a la caracterización de mutantes de S. pombe que expresan una versión de Pmk1 anclada a la membrana plasmática y excluida del núcleo constitutivamente en distintos fondos genéticos. Los resultados mostraron que aunque la localización nuclear de Pmk1 en Schizosaccharomyces pombe no es crítica para ejercer la mayor parte de sus funciones biológicas, sí es necesaria para la regulación transcripcional en respuesta al estrés de pared celular, lo que revela la importancia del control espacio-temporal de la actividad de las MAPKs en los organismos eucariotas.
SUMMARY Mitogen-activated protein kinase (MAPK) signaling pathways play a fundamental role in the response of eukaryotic cells to environmental changes. Fission yeast Schizosaccharomyces pombe has emerged as an excellent model organism to study mechanisms and cellular events linked to MAPK activation, given the significant functional homology between their regulatory circuits and those of higher cells. In S. pombe the cell integrity pathway (CIP) participates in multiple biological processes like cell wall construction, vacuole fusion during hypotonic stress, cytokinesis, morphogenesis, and ionic homeostasis by fine tuning of MAPK Pmk1 activation in response to various environmental conditions. Although the small GTPase Rho2 is a main positive regulator operating upstream the CIP through protein kinase C ortholog Pck2, Pmk1 can still be activated in the absence of either Rho2 or Pck2 depending on the nature of the stimulus, suggesting the existence of additional upstream regulatory elements to modulate its activity. The essential GTPase Rho1 is a candidate to control the activity of the CIP, whereas Pck1 appears to negatively regulate Pmk1 activity. To study the role of Rho1 GTPase and PKC ortholog Pck1 in the CIP, we characterized a S. pombe mutant that expresses hypomorphic Rho1 allele (rho1-596) and a mutant lacking Pck1 in distinct genetic backgrounds. The evidences obtained in this study revealed that Rho1 and Pck1 are positive upstream activators of the CIP in addition to Rho2 and Pck2 during cell growth and cell wall stress. This model shows the branched nature of the upstream signal network that regulates the CIP. Rho2 positively regulates the CIP and is involved in the control of cell polarity and cell wall biosynthesis in fission yeast. Rho2 locates along the plasma membrane and the division area and it has been described that becomes farnesylated in vivo at its -CAAX motif. This lipid modification appears essential for both localization and function within the MAPK pathway. Moreover, there is a second conserved cysteine residue upstream the Rho2 CAAX motif which might be palmitoylated in vivo like other Rho GTPases such as human RhoB. To investigate the role of palmitoylation in Rho2-signaling we constructed rho2Δ strains expressing the wild type, unpalmitoylated, or unprenylated versions of Rho2 as well as Rho2 chimeras fused to the carboxyl end from the essential GTPase Rho1, and we study their location and Rho2-dependent signalling within the CIP. Our results showed that in fission yeast Rho2 becomes palmitoylated in vivo and this modification is required for plasma membrane localization and proper signaling to the CIP. Pmk1 is constitutively localized in both cytoplasm and nucleus, as well as in the mitotic spindle and septum during cytokinesis. However, contrary to the current model for ERK1/2, its localization pattern appears unaffected by its activation status. In this context, we questioned the biological significance of nuclear localization of MAPK Pmk1. We have addressed this issue by characterization of mutants expressing Pmk1 versions excluded from the cell nucleus and anchored to the plasma membrane in different genetic backgrounds. We have found that nuclear localization of Pmk1 is not critical to exert their biological functions, although its presence in the nucleus is necessary for transcriptional regulation under cell wall stress. These evidences highlight the relevance of the spatial/temporal activity control of MAPK activity in eukaryotes.

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Burzio, Menéndez Verónica. "Clonamiento, expresión y caracterización de las subisoformas de la Proteínasa CK1 α." Tesis, Universidad de Chile, 2003. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/106704.

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Abstract:

Doctor en Ciencias con Mención en Biología Molecular, Celular y Neurociencias
La proteínaquinasa CK1 es una enzima altamente ubícua y conservada en todos los eucariontes estudiados y, particularmente, dentro de los vertebrados. En estos organismos, la enzima existe como una familia de siete miembros genéticamente distintos, denominados CK1#, #, #1, #2, #3, # y #. Hasta el momento se ha determinado que los mensajeros de tres de estas isoformas, #, #1 y #3, sufren procesamiento alternativo, dando lugar así a nuevas variantes. En particular, el mRNA de la isoforma a da origen a 4 subisoformas, definidas por la presencia o ausencia de 2 segmentos adicionales, llamados inserto L e inserto S. El primero se ubica en medio del dominio catalítico de la enzima, en la llamada region “bisagra” y el segundo se encuentra localizado en el extremo C-terminal. La coexistencia de algunas o todas estas variantes se ha descrito anteriormente en rata, pollo y humano y las secuencias de los insertos se encuentran altamente conservadas entre estas especies. En esta Tesis, se clonaron las cuatro variantes de procesamiento de CK1# de pez cebra ( Danio rerio ) y se expresaron tanto en células de E. coli como en células eucarióticas en cultivo. La caracterización bioquímica de las variantes recombinantes expresadas en bacterias determinaron que las que contienen el inserto L tienen una menor afinidad por ATP, al igual que por el inhibidor específico, CKI-7, que compite por el sitio de unión del nucleótido. Estas variantes, además, muestran una mayor actividad hacia #-caseína, aunque no existen diferencias en el valor de la Km aparente entre las cuatro isoformas con respecto a los sustratos proteicos y peptídicos ensayados, #-caseína, fosvitina y el péptido RRKDLHDDEEDEAM SITA, derivado del inhibidor-2 de la proteína fosfatasa 1 (PPI2). Las variantes L también exhiben una mayor termolabilidad a 40°C, comparadas con las que no contienen este inserto. Esta secuencia contiene además un sitio canónico para la fosforilación por PKA y, al ser incubadas con esta enzima, la fosforilación es estimulada en 2 veces para CK1#, 6 veces para #S, 16 veces para #L y aproximadamente 70 veces para #LS. Esto sugiere que la PKA fosforila a CK1#, en particular dentro de los insertos y especialmente el inserto L. Por otro lado, las cuatro variantes poseían actividad autofosforilativa y tirosinaquinasa. Otro aspecto abordado en esta Tesis fue la fosforilación de NFAT4 por CK1. El trabajo de Zhu y col. (1998) demuestra que este factor de transcripción es fosforilado in vivo por CK1# y que esta fosforilación previene la entrada de NFAT4 al núcleo. En esta publicación se describe un putativo sitio de acoplamiento o “docking” dentro de la secuencia donde interactúa CK1. En nuestro estudio se utilizaron péptidos sintéticos que abarcaban las regiones conservadas A y Z y la región “linker” entre ellas (L). Tanto las variantes de CK1a de pez cebra como CK1 nativa purificada de hígado de rata fosforilaban residuos no canónicos contenidos en la región A2, pero no la Z, a diferencia de lo encontrado por Zhu y col. (1998). Una extensión de residuos acídicos presentes en la región L demostró ser esencial para la fosforilación eficiente del dominio A2, como se pudo determinar por un aumento en la Km de un orden de magnitud provocada por la deleción de la región L o por la sustitución de los residuos acídicos por glicinas o alaninas. Este resultado también difiere de los de Zhu y col., que habían ubicado el sitio “docking” en la región A2. Por otro lado, al reemplazar una de las serinas del extremo N-terminal de la región A2, la Ser177, por fosfoserina, se desencadena un efecto jerárquico que provoca un aumento dramático en la eficiencia de fosforilación del péptido. Estos datos son consistentes con un mecanismo bifásico de fosforilación, en que la región L provee un sitio “docking” funcional que facilita la fosforilación no canónica de la Ser177, la que, consiguientemente, gatilla una cadena de fosforilaciones jerárquicas río debajo de este residuo. Con objeto de realizar estudios sobre el comportamiento in vivo de las variantes de CK1#, se transfectaron células Cos-7 con construcciones de CK1# y CK1#L. Mediante inmunocitoquímica, se determinó que la CK1# se localizaba en forma generalizada dentro de la célula, predominantemente en el citoplasma. CK1#L, en contraste, se localizaba en forma predominante en el núcleo, lo que sugiere que la secuencia PVGKRKR, contenida dentro del inserto L, constituiría una señal de localización nuclear funcional. La variante más larga también exhibió una vida media 4 veces menor que CK1#, siendo de 97 y 400 minutos, respectivamente, como fue determinado por experimentos de pulso y caza en células transfectadas y marcadas metabólicamente con 35 S. Mediante experimentos de RT-PCR utilizando RNA total de embriones y adultos de pez cebra, se determinó que la proporción relativa de los transcritos de las cuatro subisoformas varía a lo largo del desarrollo y en adulto, observándose un aumento relativo de #S y una caída en el nivel de #L entre los estadíos de 1 célula y larva (4-5 días). Además, por hibridación in situ utilizando una sonda general para las cuatro variantes de CK1#, se observó una expresión generalizada de los mensajeros de esta isoforma de CK1 hasta las 24 h de desarrollo y, entre los 2 y 3 días, una localización más específica en la cabeza y el primordio de la aleta pectoral. En síntesis, la presencia del inserto L confiere a la enzima algunas propiedades que la distinguen de las variantes que no contienen este inserto: Altera el sitio de unión a ATP, disminuyendo levemente la afinidad por el nucleótido, disminuye la estabilidad de la enzima, tanto in vivo como in vitro frente a una temperatura de 40°C, aumenta el nivel de fosforilación de la CK1# en presencia de PKA y concentra la enzima en el núcleo, probablemente debido a la secuencia PVGKRKR contenida en el inserto L.

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Ponce, Brenda Gabriela. "Estudios evolutivos de la planta holoparásita ombrophytum subterraneum." Bachelor's thesis, Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2016. http://bdigital.uncu.edu.ar/14012.

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Abstract:

En el presente trabajo se obtuvieron y analizaron genes mitocondriales y un gen nuclear de la especie holoparásita Ombrophytum subterraneum (familia Balanophoraceae) y de su hospedador Baccharis sp. (familia Asteraceae) para evaluar la incidencia de la THG. Los análisis filogenéticos revelaron en primer lugar que las secuencias de los genes analizados de O. subterraneum presentan una alta tasa de sustitución. En la secuencia del gen cox1, se observó la presencia de un intrón del grupo I (común en plantas holoparásitas) y la ausencia del mismo en Baccharis sp. La secuencia del intrón, también está presente en la especie hermana de Ombrophytum, Lophophytum mirabile (Balanophoraceae). Estas observaciones indicarían que el ancestro de dichas parásitas obtuvo el intrón de otra angiosperma y este fue heredado de forma vertical en Ombrophytum y Lophophytum. En este caso, no es posible especificar el donante por el cual el ancestro obtuvo el intrón por THG. Además, entre las restantes secuencias mitocondriales de O. subterraneum analizadas, se registró un segundo evento de adquisición horizontal. En este caso, el gen mitocondrial ccmC de O. subterraneum proviene de la familia de su hospedador. La baja tasa de sustituciones observada en la secuencia de ccmC de ombrophytum y la presencia de sitios de edición indican, por un lado, que el evento de THG es relativamente reciente, y por otro, que la transferencia ocurrida entre hospedador-parasito habría sido a partir de un fragmento de ADN.
Fil: Ponce, Brenda Gabriela. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.

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Lima, Andeilma Fernandes de. "Jogos digitais: uma vivência na sala de aula de biologia." Universidade Estadual da Paraíba, 2017. http://tede.bc.uepb.edu.br/jspui/handle/tede/2804.

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Abstract:

Submitted by Andressa Lima (andressa@uepb.edu.br) on 2017-04-19T18:16:09Z No. of bitstreams: 1 PDF -ANDEILMA FERNANDES DE LIMA.pdf: 20793406 bytes, checksum: 3f4c1d5d398c6d963700f2780796fe4d (MD5)
Approved for entry into archive by Luciana Medeiros (luciana@uepb.edu.br) on 2017-08-25T15:42:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF -ANDEILMA FERNANDES DE LIMA.pdf: 20793406 bytes, checksum: 3f4c1d5d398c6d963700f2780796fe4d (MD5)
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We live today in a society that is submerged by technologies, but it has not always been so, many changes have occurred in this scenario, so that today we have access to so much information and resources. But these transformations were not restricted to the technological field, we saw several changes in school pedagogical profiles, from the traditional to the progressive, and in this case we experienced the difficulties of understanding the need for a social formation of citizens capable of interfering in the environment in which they live. We perceive the greatness of the game in human life, its presence in our culture and beyond. And in a mixture of school, play and technology, we broadened our understanding of the need to establish new interfaces for teaching biology in and out of school spaces, this because it needs to motivate a new generation of students (Digital natives) to glimpse in the School a formative space connected to its reality, using as a resource the digital games (DNA GAME). In view of this scenario, the present research aimed to analyze the potentialities and limitations of a digital game in an experience in the biology classroom and to make possible the use of questionnaires, observations and the game "DNA GAME" as instruments of collection of data, inferring from them, the results found with all sensitivity that the qualitative method requires. In the possession of the data and supported by a theoretical basis based on renowned authors, we conclude that the use of digital games as an interface in the teaching of Biology can favor positively the process of construction of the student's knowledge, that is, to improve the teaching process -learning of learners. We also consider that the game "DNA GAME" developed for this research showed that it is possible to develop digital interfaces as a new educational practice to be used by a typical digital generation
Vivemos hoje em uma sociedade que se encontra submersa por tecnologias, mas nem sempre foi assim, muitas mudanças ocorreram neste cenário, para que hoje tenhamos acesso a tantas informações e recursos. Mas essas transformações não se restringiram ao campo tecnológico, vislumbramos diversas alterações nos perfis pedagógicos escolares, do tradicional ao progressista, e nesse caso vivemos as dificuldades de se fazer compreender a necessidade de uma formação social de cidadãos capazes de interferir no meio em que vivem. Percebemos a grandeza do jogo na vida humana, sua presença em nossa cultura e além dela. E num misto de escola, jogo e tecnologia, ampliamos nossa compreensão a respeito da necessidade de se estabelecer novas interfaces para o ensino de Biologia nos espaços escolares e fora dele, isso por necessitar motivar uma nova geração de alunos (Nativos digitais) a vislumbrar na escola um espaço formador conectado a sua realidade, usando como recurso os jogos digitais (DNA GAME). Diante desse cenário, a presente pesquisa objetivou analisar as potencialidades e limitações de um jogo digital em uma vivência na sala de aula de Biologia e para que isso se tornasse possível fez uso de questionários, observações e do jogo “DNA GAME” como instrumentos de coleta de dados, inferindo a partir deles, os resultados encontrados com toda sensibilidade que o método qualitativo requer. Em posse dos dados e amparados por uma base teórica fundamentada em autores renomados, concluímos que o uso de jogos digitais como interface no ensino de Biologia pode favorecer de forma positiva o processo de construção do conhecimento do aluno, ou seja, melhorar o processo de ensino-aprendizagem dos discentes. Consideramos ainda que o jogo “DNA GAME” desenvolvido para realização desta pesquisa, nos mostrou que é possível desenvolver interfaces digitais como nova prática educativa a ser usada por uma geração tipicamente digital.

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Herrera, Arcos Brenda Wendolyn. "Análisis comparativo de la proliferación celular en el mesodermo de embriones transgénicos de ratón con expresión generalizada del Gen Oct4." Thesis, Universidad de las Américas Puebla, 2010. http://catarina.udlap.mx/u_dl_a/tales/documentos/lbi/herrera_a_bw/.

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Abstract:

Oct-4 es un factor de transcripción involucrado en el establecimiento de la pluripotencialidad celular. Se expresa en las líneas celulares pluripotentes, en las células de carcinoma embrionario (EC por sus siglas en inglés embryonal carcinomal cells), en las células tallo (ES por sus siglas en inglés embryonic stem cells) y en las células germinales embrionarias (EG por sus siglas en inglés embryonic germ cells). Hasta el estadio de mórula, Oct-4 se expresa en el núcleo de todas las células y después de la implantación se expresa en el epiblasto. Conforme avanza la gastrulación, la expresión disminuye gradualmente a partir de la región anterior del embrión y al término del desarrollo embrionario su expresión está confinada solo a las células germinales primordiales. Dependiendo de los niveles de expresión de Oct4, las células se diferencian. Cuando el nivel se eleva por arriba de lo normal diferencian a endodermo primitivo y si disminuye se diferencian en trofoectodermo. En el presente trabajo se analizó la proliferación celular inducida por la sobre-expresión generalizada de Oct-4.
(cont.) Nos enfocamos en la región del mesodermo presomítico que da lugar a las somitas, que al diferenciarse generan los huesos y cartílago de vértebras y costillas, músculo esquelético de la espalda, de la pared corporal y las extremidades. Para este análisis utilizamos ratones transgénicos que integran en su genoma distintos transgenes, que al expresarse resultan en la activación generalizada del gen Oct4 en todo el embrión. Estos embriones transgénicos se denominan tgo7. Nuestros resultados muestran que no existe una diferencia significativa en la proliferación celular entre los embriones transgénicos y los silvestres. Por ello se sugiere que podría haber una migración celular defectuosa en los embriones tgO7, la cual generaría una acumulación celular excesiva, provocando así un aumento en el tamaño de la parte caudal de los embriones transgénicos. .

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Sánchez, Quinto Andrés. "Influencia del crecimiento de Bacillus subtilis conteniendo varias copias del gen vgb de Vitreoscilla stercoraria en diferentes concentraciones de oxígeno y a diferentes presiones." Thesis, Universidad de las Américas Puebla, 2010. http://catarina.udlap.mx/u_dl_a/tales/documentos/lbi/sanchez_q_a/.

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Abstract:

It is important to understand how B. subtilis grows in harsh conditions to demonstrate the probability of microbial growth in low O2 conditions, even in anoxia and low atmospheric pressure. In this study we used three strains of B.subtilis where two expressed the gene vgb of Vitreoscilla stercoraria using plasmids pUB110::sspE::vgb (multicopy), pTrp::vgb (with one integrative copy) which affects the growth of B . subtilis and a third one wild-type. Strains were inoculated in nephelometric flasks with 2xYT medium. Bacterial growth of the three strains of B.subtilis was measured by the absorbance values obtained from a SPECTRONIC 20D + spectrophotometer (Milton Roy) at 37 ° C in five conditions: aerobic, microaerophilic, vacuum, anaerobiosis and anaerobiosis + vacuum. The strains grew in all different conditions however, the best growth was observed from the aerobic and microaerophilic conditions. The strain with plasmid pUB110:: sspE::vgb (multicopy) increased in greater proportion in the vacuum conditions and in anaerobiosis. The wild type strain with the plasmid pUB110:: sspE::vgb had a better growth with less lag phase in the absence of oxygen.
(cont.) However, the strain with the plasmid pTrp: vgb grew poorly, probably due to fact that when this plasmid becomes integrated in the bacterial chromosome, disrupts the gene for starch utilization, affecting in some way growth and development. Growth rate (k), generation time (g) and statistics analysis where corroborated in the logarithmic phase of each bacterial growth curve. We conclude that since B.subtilis can growth under extreme environmental situations, including anoxic conditions, could offer the possibility to be used as a starter to colonize neighbor planets in our solar system with low atmospheric pressures provided that necessary nutrients are provided. Additionally, recent evidence of water in Mars suggests that this could be a possibility in the next decades. .

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Hernández, Santin Cristina. "Efecto del borde en la interacción quercus-herbívoro en el parque estatal "Flor del bosque": una medida del estado de "salud" del bosque de encinos." Thesis, Universidad de las Américas Puebla, 2010. http://catarina.udlap.mx/u_dl_a/tales/documentos/lbi/hernandez_s_c/.

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Abstract:

México es considerado el centro biológico de diversidad de encinos en el continente Americano contando con 161 especies de Quercus (Fagaceae) de los cuales 109 son endémicos. La herbivoría o consumo de plantas realizado por animales puede verse afectada por diversos factores como la cantidad de luz, la forma de herbivoría y el borde, entre otros. El efecto de borde representa los cambios en la distribución de una variable como consecuencia de la transición entre dos habitats. El estudio de este fenomeno resulta importante dado que la fragmentación que sufren hoy en día los ecosistemas incrementa el área de borde y expone al bosque de encinos a los efectos positivos o negativos que pueda representar. El presente estudio pretende determinar el impacto de la herbivoría ocasionada por insectos sobre el bosque de encinos dado el borde Quercus-Euclayptus presente en el parque estatal Flor del Bosque. Para esto, elegimos 3 sitios dentro de la zona de estudio con 3 cuadrantes en el gradiente de perturbación: perturbado o borde (0m), intermedio (30m) y conservado o interior (60m).
(cont.) En cada uno eligimos por sorteo 10 arboles tomando mensualmente de febrero a octubre 2010 45 hojas sobre las que se cuatificamos el porcentaje de herbivoría y contabilizamos el número de minas y agallas sobre su superficie. También realizamos un muestreo de oportunidad de morfoespecies de orugas y colocamos mensualmente de marzo a octubre 2010 un total de 5 trampas de tronco en cada cuadrante. Separamos por morfoespecies a los invertebrados encontrados. Los datos se analizaron por medio de medidas repetidas tomando como factores la distancia el sitio y el mes asi como sus interacciones. Para la herbivoría externa todos sus fatores e interacciones resultaron significativos encontrando mayor nivel de herbivoría en el interior del bosque. Respecto al tiempo, la herbivoría aumenta conforme transcurren los meses siendo mayor de Agosto a Octubre y en Febrero. La herbivoría interna indica que la distribución de minas presenta mayor número de ocurrencias hacia el interior del borde mientras que las agallas presentan el caso opuesto. Encontramos 127 morfoespecies de invertebrados en las trampas de tronco con mayor abundancia en el borde y hacia los meses de septiembre y octubre.
(cont.) En cuanto a las larvas de lepidóptera, encontramos 26 morfoespecies alimantandose de encinos. El borde Quercus-Eucalipto influencía negativamente a las especies de encinos, causando menores niveles de herbivoría en el borde que en el interior del bosque. Es importante continuar el monitoreo de la zona y realizar campañas de reforestación.

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Valdés, González Luciano. "Amplificación, clonación y análisis in silico de una posible lipasa de Bacillus cereus: búsqueda de una enzima de interés en la síntesis de biodiesel." Thesis, Universidad de las Américas Puebla, 2013. http://catarina.udlap.mx/u_dl_a/tales/documentos/lbi/valdes_g_l/.

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Latorre, Hidalgo Claudio. "Clima y vegetación del desierto de Atacama durante el cuaternario tardío, II región, Chile." Tesis, Universidad de Chile, 2002. http://www.repositorio.uchile.cl/handle/2250/106692.

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Abstract:

Doctor en Ciencias con mención en Biología
En esta tesis se presentan los resultados obtenidos utilizando un nuevo método paleoecológico diseñado específicamente para las regiones áridas del mundo: las paleomadrigueras de roedores. Estas madrigueras milenarias constituyen un verdadero archivo de cambio biológico y climático del paisaje del norte de Chile. En el primer capítulo de esta tesis se presentan los resultados de ocho transectos altitudinales, realizados en el norte de Chile entre 18° y 26° de latitud sur. Esto permite aclarar cuales son los controles climáticos actuales sobre la vegetación y su uso como análogo moderno. El segundo capítulo entrega los detalles del primer estudio chileno de paleomadrigueras, realizado sobre 49 muestras provenientes de la Segunda Región de Chile. Los resultados obtenidos indican que, para los últimos 45.000 años, la vegetación invadió amplias extensiones del desierto absoluto durante períodos breves de incremento de lluvia estival, entre 13.800-9500 y 7000-3000 años calendario atrás. El último capítulo aporta nuevos antecedentes obtenidos de 44 paleomadrigueras encontradas en la Cordillera Domeyko de la Segunda Región, entre 3100 y 3400 m de altitud. Las muestras detallan con precisión las fases húmedas descritas previamente. Los resultados obtenidos de ambos estudios discrepan de que es la insolación directa sobre Sudamérica lo que ha regulado la intensidad pasada de la circulación atmosférica sobre el Altiplano durante los últimos 22 mil años. En cambio, se propone que la circulación sobre los Andes Centrales, hoy en parte regulada por El Niño-Oscilación del Sur, fue afectada preferentemente por cambios en las temperaturas superficiales del Océano Pacífico tropical asociados a factores extra-regionales.
This thesis presents the results obtained from a new paleoecological method specifically designed for use in the arid regions of the world. Known as rodent middens, these constitute veritable archives of past biological and climatic change of the Atacama Desert of northern Chile. The first chapter of this thesis presents the results obtained from eight altitudinal surveys performed in northern Chile between 18° and 26° latitude south. The results from this study afford the basic modern analogue for interpreting the midden records and also provide considerable insight into what climatic controls affect plant distributions in the Atacama Desert today. In the second chapter I present the results from 49 middens collected from Chile’s Second Region, the first such study in all of Chile. Results indicate that plants invaded considerable expansions of the desert for brief periods of increased summer rainfall during the past 45,000 years, radiocarbon dated between 13,800-9500 and 7000-3000 calendar years ago. The final chapter presents the results obtained from 44 rodent middens collected from the prepuna vegetation belt, between 3100-3400 m in elevation. The results from this study replicate and enhance our dating of the wet phases previously described. Results from both midden studies reject local insolation over South America as a major forcing factor of the intensity of atmospheric circulation over the central Andes for the past 22,000 years. This system today is partly affected by El Niño-Southern Oscillation, and we propose that sea surface temperatures changes of the tropical Pacific Ocean associated with extra-regional factors, are chiefly responsible for climate change over the central Andes.

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Schmid, Daniela [Verfasser]. "Proteomanalysen von Gameten der Braunalge Scytosiphon lomentaria / Daniela Schmid." München : Verlag Dr. Hut, 2011. http://d-nb.info/1018982620/34.

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Zúñiga, Sáez Héctor Julio. "Monografía: Biología de la chía (Salvia hispánica L.)." Tesis, Universidad de Chile, 2014. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/148778.

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Abstract:

Memoria para optar al Título Profesional de: Ingeniero Agrónomo
La chía (Salvia hispánica L.), planta anual de verano originaria del sur de México y norte de Guatemala, es conocida como la especie vegetal con mayor concentración de ácido graso α-linolénico de la serie omega 3. Además, posee proteína, fibra y antioxidantes de gran valor nutricional. Esta composición química determina grandes beneficios para la salud, como la disminución del riesgo de padecer enfermedades cardiovasculares. Debido al creciente interés por la producción del cultivo de chía en Chile y al insuficiente conocimiento que se posee de éste, los objetivos del estudio fueron recopilar y analizar información sobre la biología de la chía, basados en la relevancia que tiene ésta materia cuando se pretenden elaborar sistemas productivos. Los temas tratados fueron: citogenética, morfoanatomía, taxonomía, fisiología y fenología de Salvia hispánica L. El estudio concluye que, existe una disímil oferta información sobre los capítulos planteados y que a pesar del exhaustivo tratamiento de esta, no fue posible elaborar los capítulos con la profundidad esperada, debido a la escasa información actualmente publicada. Sin embargo, la generación de investigaciones e información sobre la especie es creciente en el tiempo, en cuanto a número de artículos y diversidad de temas investigados.
Chia (Salvia hispanica L.) is a native plant from southern Mexico and northern Guatemala, renowned for its highest concentration á-linolenic fatty acid (Omega 3) of the plant species. Furthermore, owns protein, fiber and great nutritional value antioxidants. This chemical composition predisposes great healthy benefits, such as cardiovascular diseases risk reduction. As a result of the increasing interest in chia crop production and insufficient knowledge possessed in Chile, the objectives of this study were to compile and analyze information about the biology of chia, considering the relevance of this matter when it pretends to develop successfully production systems. Topics discussed included: cytogenetic, morphology, anatomy, taxonomy, physiology and phenology of Salvia hispanica L. The study concludes that, there is an uneven information offer about the outlined chapters and despite the exhaustively treatment given to this, it was not possible to elaborate the chapters with the expected deepness, because of the low amount of information sources currently published. However, the generation of research and information about chia rises over time, as to number of articles and variety of topics research.

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Kaufmann, Joshka [Verfasser]. "From gametes to species : genetic and non-genetic effects in parasite-mediated selection / Joshka Kaufmann." Kiel : Universitätsbibliothek Kiel, 2015. http://d-nb.info/106981461X/34.

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Shin, Jae Yen. "Caracterizaciónde la viabilidad, la actividad GTPasica y la polimerizaciónde las mutantes EcFtsZ E83Q y G67P." Tesis, Universidad de Chile, 2003. http://www.repositorio.uchile.cl/handle/2250/106711.

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Abstract:

Magister en Ciencias con mención en Biología
La FtsZ polimeriza para formar el anillo Z alrededor del perímetro transversal en el centro de la célula cuando la bacteria E. coli inicia la formación del septo. En este proceso participan varias proteínas Fts para formar el divisoma y FtsZ es la que se encuentra en mayor concentración. Una vez formado el anillo Z no se sabe cómo este induce la división celular. La polimerización de la FtsZ ha sido caracterizada in vitro y se sabe que induce su actividad GTPásica y forma protofilamentos por interacciones longitudinales que dan origen a láminas y túbulos a través de interacciones laterales. Estas características también son propias de la tubulina, proteína que presenta similitud estructural con la FtsZ, por esto, ambas proteínas se consideran homólogas. Se desconoce cuales son los polímeros funcionales dentro de la célula y que tipo de interacciones están involucradas. De allí que un buen modelo para entender las interacciones en los polímeros de la FtsZ son los microtúbulos. Una comparación estructural entre la tubulina y la FtsZ mostró que la hélice H3 de la FtsZ, donde se destaca la presencia de aminoácidos cargados, y el “loop” formado entre la hebra beta S3 y la hélice H3, rica en glicinas, estarían involucrados en las interacciones laterales. Con el fin de demostrar la importancia de las interacciones laterales de la FtsZ en la formación de los polímeros funcionales en la división celular de E. coli se construyeron mutantes puntuales de la EcFtsZ: E83Q y R85Q en la hélice H3 y G67P en el “loop” S3-H3. Los resultados mostraron que la viabilidad se redujo en las células que expresan solo las EcFtsZ mutantes con respecto al tipo silvestre en el siguiente orden: tipo silvestre > E83Q > G67P > R85Q. La caracterización in vitro de estas mutantes mostró que su polimerización decreció en el mismo orden que la viabilidad y que la actividad GTPásica decreció de manera diferente, de acuerdo al siguiente orden: tipo silvestre > G67P > E83Q > R85Q. Estos resultados muestran que hay una relación directa entre la polimerización y la viabilidad y que la velocidad de hidrólisis de GTP no está relacionada en forma directa con la viabilidad. Se concluye que en la polimerización de EcFtsZ y por ende en la división celular de E. coli son necesarias las interacciones intermoleculares de EcFtsZ mediadas por la hélice H3 y el “loop” S3-H3.
FtsZ polymerizes forming the Z ring around the perimeter in the middle of the E. coli dividing cell. In this process many Fts proteins are involved to form the divisome and FtsZ is the most abundant protein. After the Z ring formation, the mechanism that induces the cell cleavage is not totally understood. In vitro FtsZ polymerization induces the GTPase activity and form protofilaments, by longitudinal interactions, that assemble into sheets and tubes by lateral interactions. These characteristics are also observed in tubulin, which has a similar tridimensional structure with FtsZ, therefore both proteins are considered homologues. The FtsZ functional polymers in the living cells are unknown as well as the interaction involved. Thus, microtubules are a good model to understand the interactions involved in the FtsZ polymers. The structural comparison between tubulin and FtsZ indicates that lateral interaction of FtsZ through charged aminoacids, could be mediated by the H3 helix as found in tubulin. The same is valid for the glycine rich loop β strand S3–helix H3. To know, the role of the FtsZ lateral interactions in the E. coli dividing cells the following point mutations were constructed in the EcFtsZ: E83Q and R85Q located in the H3-helix and G67P in the S3-H3 loop. The viability of the cells that express the mutant EcFtsZ was reduced respect to the wild type in the following order: wild type > E83Q > G67P > R85Q. The in vitro characterization of these mutants showed that the polymerization decreased in the same order that the viability and the GTPase activity decreased in a different manner with following order: wild type > G67P > E83Q > R85Q. These results indicate that a direct relation exists between the viability of the cells and the polymerization of EcFtsZ and that the hydrolysis rate of GTP is not directly related with the viability. It is concluded that in the EcFtsZ polymerization, hence in the cellular division of E. coli, the intermolecular interactions of EcFtsZ, mediated by H3 helix and S3-H3 loop, are necessary.

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Santo, Pâmala Jéssica de Oliveira. "Análise do uso de jogos didáticos de biologia no ensino médio : desvelando sua eficácia na aprendizagem dos alunos." Pós-Graduação em Ensino de Ciências e Matemática, 2014. https://ri.ufs.br/handle/riufs/5168.

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Abstract:

This research investigated the effectiveness of educational game on student learning in high school biology process. The didactic game was chosen for this research as a suggestion of the National Curriculum Guidelines for Secondary Education (2002) and have that reinforced by the National Curriculum Guidelines for Secondary Education (2006) indicated. Therefore, the theoretical framework consists of a brief history of science teaching in Brazil, with emphasis on the use of educational resources throughout the twentieth century and also the proposals present in the Brazilian official curriculum documents on the use of the process teaching and learning. For both, were used as support mainly studies Nardi (2005), Krasilchik (2000), Barra and Lorenz (1986), Santos and Mortimer (2006), and the official curriculum documents Brazilians as the National Curriculum Guidelines (1998) and the National Curricular Parameters for the Middle (2002) education. Discussions on the didactic game, its qualities and advantages were based mainly on studies of Huizinga (2000), Kishimoto (1994), Kishimoto (2008), Zanon, Guerreiro e Oliveira (2008), Miranda (2001) and other authors who did research on this feature. The field research was developed in a state school in Aracaju. Classes were given in two classes in the 1st and 3rd year high school using two different instructional procedures. In a class of each level (ie, one 1st and one 3rd year) were given two hours lecture week in a four-week period, using a didactic game - these classes were called "experimental groups". In the other two classes were taught lessons without the use of educational games - these classes are called "control group". Students were assessed through tests and it was found from the analysis of the results that the methodology was effective in games provide more learning contents. Students who used the didactic game had superior performance to students who did not have access to this feature. We sought to understand the students opinions about lessons with educational games and the results showed that students in the experimental classes considered efficient games to promote interaction, cooperation, socialization, motivation, mobilization, interest, encouragement, and dynamic learning contents studied . The students of the control groups expressed that they feel the need to have lessons with games and establish positive relationship with the resource, they demonstrate knowledge of the benefits of this feature. Therefore, the educational games are considered effective remedies with regard to learning and are well accepted by students
O presente trabalho de pesquisa investigou a eficácia do jogo didático no processo de aprendizagem dos alunos de Biologia do Ensino Médio. O jogo didático foi escolhido para esta pesquisa por ser uma sugestão dos Parâmetros Curriculares Nacionais para o Ensino Médio (2002) e ter essa indicação reforçada pelas Orientações Curriculares Nacionais para o Ensino Médio (2006). Portanto, o referencial teórico compõe-se de um breve histórico sobre o ensino de Ciências no Brasil, com ênfase no uso de recursos didáticos ao longo do século XX e, também, das propostas presentes nos documentos curriculares oficiais brasileiros sobre a utilização destes no processo de ensino e aprendizagem. Para tanto, foram utilizados como respaldo, principalmente, os estudos de Nardi (2005), Krasilchik (2000), Barra e Lorenz (1986), Santos e Mortimer (2006), e os documentos curriculares oficiais brasileiros como as Diretrizes Curriculares Nacionais (1998) e os Parâmetros Curriculares Nacionais para o Ensino Médio (2002). As discussões sobre o jogo didático, suas qualidades e vantagens foram baseadas, principalmente, nos estudos de Huizinga (2000), Kishimoto (1994), Kishimoto (2008), Zanon, Guerreiro e Oliveira (2008), Miranda (2001) e outros autores que fizeram pesquisas com esse recurso. A pesquisa de campo foi desenvolvida em uma escola pública estadual de Aracaju. Foram ministradas aulas em duas turmas do 1º e 3º ano Ensino Médio utilizando-se dois procedimentos didáticos diferenciados. Em uma turma de cada nível (ou seja, uma do 1º e outra do 3º ano) foram ministradas 2horas/aulas por semana, em um período de quatro semanas, utilizando-se de um jogo didático - essas turmas foram denominadas de grupos experimentais . Nas outras duas turmas foram ministradas aulas sem a utilização dos jogos didáticos essas turmas foram denominadas de grupos controle . Os alunos foram avaliados por meio de testes e foi verificado a partir da análise dos resultados que a metodologia com jogos foi eficaz em proporcionar maior aprendizagem dos conteúdos. Os estudantes que fizeram uso do jogo didático tiveram desempenho superior aos alunos que não tiveram acesso a esse recurso. Buscou-se também compreender a opinião dos alunos sobre aulas com jogos didáticos e os resultados mostraram que os alunos das turmas experimentais consideraram os jogos eficazes em promover interação, cooperação, socialização, motivação, mobilização, interesse, estímulo, dinâmica e a aprendizagem dos conteúdos estudados. Os discentes das turmas controle expressaram que sentem necessidade de aulas com jogos e já estabelecem relação positiva com o recurso, pois demonstram saber dos benefícios desse recurso. Portanto, os jogos didáticos são considerados materiais didáticos eficazes no tocante à aprendizagem e são bem aceitos pelos alunos.

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Sánchez, Hernández Miriam. "Efecto de la testosterona en el sistema reproductor e inmunitario de la dorada (Sparus aurata L.). Identificación de una variante constitutivamente activa del receptor de andrógenos.= Effect of testosterone on reproductive and immune systems of gilthead seabream (Sparus aurata L.). Identification of a constitutively active androgen receptor variant." Doctoral thesis, Universidad de Murcia, 2013. http://hdl.handle.net/10803/129378.

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Abstract:

En la siguiente Tesis Doctoral hemos analizado la influencia de la testosterona (T) exógena sobre el metabolismo de esteroides sexuales y la fisiología de la gónada de la dorada (Sparus aurata L.). Además hemos descrito la presencia de un mecanismo de procesamiento alternativo del ARN, para el receptor de andrógenos (AR), cuya expresión varía con el estado reproductor y se correlaciona con el nivel de T. Esta forma truncada del AR está presente en los granulocitos acidófilos (GAs), descubriéndonos así nuevos mecanismos de regulación en la biología de los neutrófilos de vertebrados. El uso de la dorada como ejemplar de estudio se debe a que es una especie de alto interés comercial en el Mar Mediterráneo. La dorada es un teleósteo marino que presenta un hermafroditismo protándrico, siendo los ejemplares machos durante sus dos primeros años de vida, y pudiendo cambiar de sexo a partir del segundo año. El ciclo reproductor (CR) de los ejemplares macho se caracteriza por presentar cuatro etapas secuenciales: espermatogénesis (ES), puesta (P), post-puesta (PP) y quiesciencia (Q) durante el primer CR. La etapa de Q es sustituida por una etapa de involución testicular (IT), en el segundo CR que permite el cambio de sexo. Tras la puesta, el testículo suele sufrir una serie de cambios morfológicos, entre los que se encuentra una infiltración masiva de leucocitos, la cual es mayor en la etapa IT, antes del cambio de sexo. En primer lugar, quisimos comprobar la capacidad de la T exógena para modificar el balance de las hormonas sexuales esteroideas y la fisiología de la gónada. Con este fin, incorporamos la T en las doradas utilizando el sistema de micropartículas in situ (ISM) (T-ISM). La T exógena promueve un incremento supra-fisiológico en los niveles plasmáticos de T y una disminución de los niveles de 17β-estardiol (E2). Sin embargo, no se vieron alterados los niveles de 11-cetotestosterona (11KT). La T, además, bloquea la proliferación de las células germinales del testículo aunque el incremento en la expresión del gen que codifica para dmrt1 podría prevenir la eliminación completa de las células germinales. Por otra parte, comprobamos que los andrógenos, al igual que había sido demostrado para los estrógenos, están implicados en la migración de leucocitos hacia la gónada. Además, la T de los T-ISM promueve una disminución de la expresión de los genes que codifican receptores Toll-like (tlrs), quedando inhibida la capacidad de reconocer y responder a patógenos. Posteriormente, identificamos una variante, constitutivamente activa, del AR que carece de dominio de unión al ligando (ARΔLBD) en testículo y riñón cefálico (RC) de dorada y su expresión varía con el estado reproductor y con los niveles plasmáticos de testosterona. Esta variante se forma por un procesamiento alternativo del ARNm del AR. Nuestros datos sugieren que este procesamiento alternativo es capaz de modificar la fisiología del testículo, debido a que los andrógenos son capaces de modular el procesamiento alternativo del AR. Además, los andrógenos, concretamente la T, es capaz de regular la respuesta inmunitaria a través de la variante ARΔLBD. Otro dato interesante es que sólo los AGs expresan esta forma truncada mientras que los macrófagos (MØs) no la expresan. Además, el procesamiento alternativo del AR también no sólo se ve modulado por T, sino también por estímulos inmunitarios, aunque esta modulación depende del estado reproductor de los individuos. Todos estos datos nos indican una interacción entre los estímulos endocrinos e inmunitarios en la regulación del procesamiento alternativo del AR así como de las funciones de los AGs. Además, la T podría estar implicada en los cambios fisiológicos de la gónada a través de la regulación del ARΔLBD.
During the development of this thesis, we want to analyze the effect of exogenous androgens, mainly testosterone (T), and the activity of androgen receptor (AR) in immune-reproductive interaction in the sparidae, gilthead seabream (Sparus aurata L.). Furthermore, we described the presence of a mechanism, in which the unique AR gene can give diverse transcripts either in testis or immune organs. The gilthead seabream is a marine, protandrous teleost fish with significant economic value in the Mediterranean aquaculture. The specimens of this specie are male during the two first years, and present a reproductive cycle (RC) divided in four stages. In first RC, the stages are spermatogenesis (SG), spawning (S), post-spawning (PS) and resting (R); in the second RC, the last stage is substituted by testicular involution (TI) stage. After spawning there are various changes in gonad, between which are a massive infiltration of leukocytes, being higher in TI and that can lead to sex change. For this motive this specie can being used as a model for studying the immune-reproductive interactions. In first place, we wanted to observe the capacity of exogenous T to modify the balance of sex steroid hormones and on the physiology of the gonad (proliferation, apoptosis, leukocyte influx and immune status) of mature male specimens of the gilthead seabream. To this end, we used the in situ forming microparticle (ISM) system, which delivers sex steroids without promoting significant physiological alterations in gilthead seabream and that has been previously used in our laboratory to show that T modulates the inflammatory response of head kidney (HK) leukocytes in the gilthead seabream. The results suggest that in mature males, exogenous T can blocked the cell proliferation and increase the migratory influx of leukocyte, although decrease the ability to recognize and response to pathogens. Secondly, we identified a truncated form of the AR generated by alternative splicing that lacks the ligand-binding domain (ARΔLBD) either in testis, HK and acidophilic granulocytes (AGs). We studied the modulation of this variant by androgens and immune stimulus in order to demonstrate its mediation in the role of androgens in the immune response. The results showed that T is able to regulate the testicular morphology through the modulation of the expression of ARΔLBD variant. Furthermore, T was also able to regulate the immunecompetence through ARΔLBD variant. Interestingly, ARΔLBD variant only is expressed in AGs but no in macrophages (MØ). Furthermore, the stimulation with bacterial DNA, also regulated the alternative splicing of AR, but depending of the reproductive stage. These data suggest a crosstalk between endocrine and immune stimuli in the regulation of AR alternative splicing and AGs function. Furthermore, T might be implicated, in the migratory influx into gonad and the physiological changes in gonad through by means of regulation of ARΔLBD.

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Alcaraz, Pérez Francisca. "El pez zebra (Danio rerio) como modelo de estudio in vivo del papel de la telomerasa en la hematopoyesis= The zebrafish (Danio rerio)as a model to stydy in vivo the role of telomerase in hematopoiesis." Doctoral thesis, Universidad de Murcia, 2014. http://hdl.handle.net/10803/134061.

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Abstract:

Objetivos. En el presente trabajo se han cumplido dos objetivos concretos: 1. Desarrollo de un nuevo sistema chivato basado en la luciferasa para el estudio de promotores tanto constitutivos como inducibles en el contexto de un organismo completo. 2. Estudio del papel extracurricular del componente de ARN de la telomerasa (TR) en la hematopoyesis usando el pez cebra como modelo. - Metodología. Embriones de pez cebra han sido manipulados genéticamente mediante la microinyección de plásmidos, morfolinos y ARN (solos o en combinación) en el estadío de desarrollo de 1-8 células para recrear las distintas condiciones experimentales de estudio. Para el abordaje del primer objetivo, el estudio de la actividad promotora en el contexto de un organismo completo se ha llevado a cabo mediante la medida de luminiscencia. Para el cumplimiento del segundo objetivo, el recuento de los distintos tipos de células sanguíneas en las distintas condiciones experimentales se ha abordado mediante la tinción específica con TSA (neutrófilos) o con o-dianisidina (eritrocitos), o mediante el uso de distintas líneas de pez cebra transgénico que expresan proteínas fluorescentes en neutrófilos y en macrófagos. La funcionalidad de los neutrófilos se ha estudiado mediante ensayos de reclutamiento a una herida y de respuesta a una infección bacteriana. El estudio de la actividad telomerasa se ha realizado mediante una técnica específica y cuantitativa llamada Q-TRAP basada en la amplificación de la secuencia telomérica, y la longitud de los telómeros se ha cuantificado mediante Q-FISH, que consiste en una hibridación in situ con una sonda telomérica fluorescente. El estudio de la expresión de genes se ha llevado a cabo mediante RT-PCR y PCR a tiempo real, y también mediante hibridación in situ con sondas de ARN. Peces cebra han sido mantenidos según se indica en el manual del pez cebra. Todos los experimentos cumplen con la directiva de la Unión Europea (86/609/EU) y han sido aprobados por el Comité de Bioética del Hospital Clínico Universitario “Virgen de la Arrixaca” (España) y por el Comité Institucional del Cuidado y Uso Animal del Hospital Infantil de Boston (EEUU). - Resultados y conclusiones. Para el desarrollo del primer objetivo se combinaron las ventajas que tiene el ensayo clásico de la doble luciferasa con las que tiene el pez cebra como modelo vertebrado para desarrollar una técnica que permita analizar la actividad promotora y la función génica en el contexto de un organismo completo. El resultado fue una técnica rápida y sensible que puede ser utilizada como una nueva herramienta para caracterizar in vivo la mínima región promotora de un gen, la respuesta de promotores inducibles ante distintos estímulos, la validación de construcciones genéticas y la función de un gen de interés. La técnica desarrollada resulta muy valiosa cuando se combina con las ventajas que ofrece el pez cebra para hacer escrutinios a gran escala basados en el fenotipo, convirtiéndose en un sistema muy prometedor para la identificación y la validación de fármacos o genes que, por ejemplo, reviertan el fenotipo. El desarrollo del segundo objetivo de esta tesis muestra varias evidencias que apoyan al pez cebra como modelo para estudiar el papel del componente de ARN de la telomerasa (TR) en la disqueratosis congénita, que es una enfermedad hereditaria de envejecimiento prematuro, cuyos pacientes mueren principalmente debido al fallo de la médula ósea. En este modelo, la inhibición genética de TR resultó en la afectación de la mielopoyesis, a pesar de que el desarrollo de las células madre hematopoyéticas fue normal. Sorprendentemente, la neutropenia causada por la ausencia de TR fue independiente de la longitud telomérica y de la actividad telomerasa. El análisis genetico mostró que TR modula la decisión del destino mieloide/eritroide mediante el control de los niveles de los factores de transcripción mieloide y eritroide spi1 y gata1, respectivamente, mediante la estimulación de gcsf y mcsf. Este modelo de pez cebra deficiente en TR ilumina el papel extracurricular de TR, y podría establecer dianas terapéuticas para la disqueratosis congénita.
The zebrafish (Danio rerio) as a model to study in vivo the role of telomerase in hematopoiesis - Objectives. The specific objectives of the present work are: 1. Development of a new luciferase-based reporter system for studying both constitutive and inducible promoters in the context of a whole organism. 2. Study the non-canonical role of the telomerase RNA component (TR) in hematopoiesis using the zebrafish. - Methodology. Zebrafish embryos were genetically modified by injecting plasmids, morpholinos and RNA (alone or in combination) whitin the 1- to 8-cell developmental stage to simulate the different experimental conditions. For approaching the first goal, the study of the promoter activity in the context of a whole organism was carried out by measurement of luminiscence. To addressing the second goal, the counting of the different blood cells in the different experimental conditions was carried out by specific staining with TSA (neutrophils) or o-dianisidine (erythrocytes), or by using different transgenic zebrafish lines expressing fluorescent proteins in neutrophils or macrophages. The neutrophil functionality was studied by quantifying the recruitment to a wound and the response to a bacterial infection. The telomerase activity was determined by using a specific and quantitative assay based in the amplification of the telomere sequence and called Q-TRAP, and the telomere length was quantified by a whole-mount in situ hybridization with a fluorescent telomeric probe (Q-FISH). The study of gene expression was carried out by RT-PCR and real time PCR, and also by in situ hybridization with RNA probes. Zebrafish were maintained as described in the zebrafish handbook. The experiments performed comply with the Guidelines of the European Union Council (86/609/EU). Experiments and procedures were performed as approved by the Bioethical Committee of the University Hospital “Virgen de la Arrixaca” (Spain) and by the Children's Hospital Boston institutional Animal Care and Use Committee (USA). - Results and conclusions. Firstly, we have adapted the classical dual luciferase reporter assay from cell lines to whole zebrafish embryos/larvae. The result is a rapid and sensitive technique that can be used as a new tool to characterize the minimum promoter region of a gene as well as the in vivo response of inducible promoters to different stimuli. We have illustrated the usefulness of this system for studying both constitutive and inducible promoters. This assay has several advantages compared with the classical in vitro (cell lines) and in vivo (transgenic mice) approaches. Among others, the assay allows a rapid and quantitative measurement of the effects of particular genes or drugs in a given promoter in the context of a whole organism and it can also be used in high throughput screening experiments. We have showed several evidences supporting the zebrafish as a new model to study the role of the telomerase RNA component (TR) in DC, which is an inherited premature disease whose patients usually die of bone marrow failure. In this model, genetic depletion of TR results in impaired myelopoiesis, despite normal development of hematopoietic stem cells (HSCs). Interestingly, the neutropenia caused by TR depletion is independent of telomere length and telomerase activity. Genetic analysis shows that TR modulates the myeloid-erythroid fate decision by controlling the levels of the master myeloid and erythroid transcription factors spi1 and gata1, respectively, through stimulation of gcsf and mcsf. This model of TR deficiency in the zebrafish illuminates the non-canonical roles of TR, and could establish therapeutic targets for DC.

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Costa-Arbulú, César Manuel. "Biosensores." Universidad Peruana de Ciencias Aplicadas - UPC, 2006. http://hdl.handle.net/10757/272699.

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Beltrán, Apablaza Marianela del Carmen. "Regulación de la liberación de calcio en vesículas de retículo sarcoplasmático de músculo esquelético de conejo. Participación de Mg2+, estado redox y calsecuestrina." Tesis, Universidad de Chile, 2002. http://www.repositorio.uchile.cl/handle/2250/106686.

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Abstract:

Doctor en ciencias con mención en Biología
El canal de calcio/receptor de ryanodina permite que el calcio contenido en el retículo sarcoplasmático (RS) sea liberado hacia el mioplasma. Múltiples componentes celulares regulan la actividad de este canal de calcio, entre los que se distinguen: Ca 2+ , Mg 2+ , H + , ATP 2- , calcio luminal, agentes que reaccionan con grupos SH, entre otros. Por otra parte, existen evidencias que sugieren que calsecuestrina, una proteína del lumen del RS, estaría regulando la cinética de liberación de calcio. Originalmente, a esta proteína se le atribuyó un papel de tampón de calcio, lo que permite acumular grandes cantidades de este ion al interior del RS. Es importante establecer la cinética de disociación del calcio desde la calsecuestrina para investigar si es una etapa limitante de la liberación de calcio. En esta tesis se caracterizó la participación de Mg 2+ , de calsecuestrina y del estado redox de proteínas, en la cinética de liberación de calcio inducida por cafeína. Se utilizó una preparación de vesículas aisladas de RS de músculo esquelético de conejo y se midió la liberación de calcio siguiendo la señal de indicadores fluorescentes de calcio. Cafeína indujo liberación transitoria y parcial de calcio en el intervalo de [Mg 2+ ] libre 0,05 - 2,5 mM. En vesículas nativas, en [Mg 2+ ] 0,1 - 0,5 mM este primer evento de liberación fue seguido por oscilaciones de calcio. En ausencia de cafeína se observaron oscilaciones espontáneas de calcio. La magnitud y la duración del primer evento de liberación inducido por cafeína disminuyeron con el aumento de [Mg 2+ ]. Al oxidar las vesículas, aumentó la duración del primer evento de liberación en todas las concentraciones de Mg 2+ probadas. Lo inverso ocurrió al reducir las vesículas. El patrón oscilatorio también se modificó al tratar las vesículas con los reactivos redox. Se sabe que estos reactivos modifican la afinidad del sitio inhibitorio para Mg 2+ . Estos resultados indican que las vesículas de RS poseen todos los elementos requeridos para la generación de oscilaciones de calcio, que previamente habían sido observadas sólo en células y en fibras musculares. Además, los resultados indican que la liberación de calcio inducida por cafeína está directamente regulada por [Mg 2+ ] libre y que al modificar el(los) sitio(s) inhibitorio(s) para Mg 2+ , cambia marcadamente la respuesta a cafeína. En vesículas sin calsecuestrina disminuyó la cantidad de calcio acumulada tanto en forma pasiva como en forma activa. El calcio acumulado fue liberable por agonistas del canal de ryanodina. La liberación de calcio presentó una constante de velocidad de liberación menor que en vesículas control. También se redujo la duración de la liberación neta de calcio. No se observaron oscilaciones de calcio en vesículas sin calsecuestrina. Esta proteína fue fundamental no sólo para que las vesículas acumularan grandes cantidades de calcio sino que también para su posterior liberación con una cinética rápida acorde con las exigencias del músculo esquelético. Estudios cinéticos de la disociación del calcio unido a calsecuestrina indican que la disociación del calcio desde calsecuestrina en solución o asociada a membranas fue más rápida que los cambios de fluorescencia intrínseca asociados. Se utilizó una preparación de membranas de la zona de unión del RS al túbulo transversal. Estas membranas son denominadas JFM, del inglés j unctional f ace m embranes . En las JFM, la disociación de calcio y el cambio de fluorescencia intrínseca fueron más rápidos que en calsecuestrina en solución. El t 1/2 de la disociación de calcio en JFM fue de 6,5 mseg a 25 #C. Es probable que a 37 #C, la disociación de calcio sea aun más rápida. Estos resultados sugieren que la disociación de calcio desde calsecuestrina in vivo no es limitante de la velocidad de liberación de calcio desde el RS.

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Callén, Moréu Elsa. "Genética y biología molecular de la anemia de Fanconi." Doctoral thesis, Universitat Autònoma de Barcelona, 2004. http://hdl.handle.net/10803/3881.

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Abstract:

La anemia de Fanconi (FA) es un desorden genético de naturaleza autosómica recesiva y caracterizado por una serie de malformaciones congénitas, fallo de médula ósea y una elevada predisposición a adquirir tumores sólidos y leucemia mieloide aguda. Las células FA, poseen una elevada inestabilidad cromosómica tanto espontánea como inducida por agents inductors de enlaces cruzados.
Otros rasgos celulares son la sensibilidad frente al daño oxidativo, fallos en el ciclo cellular, niveles elevados de apoptosis regulación deficiente de la transcripción y disfunción telomérica.
Hasta el momento, se ha descrito que existen 12 genes diferentes que pueden causar esta enfermedad, aunque no todos ellos han sido clonados y caracterizados. De entre ellos, FANCA es el que más frecuentemente se halla mutado entre la población y presenta un amplio espectro de mutaciones, siendo las grandes deleciones una de las principales.
Un conocimiento más profundo de la biología de esta enfermedad nos va a permitir adquirir una visión más global de la reparación del daño en el DNA en respuesta a determinados agentes así como un mejor entendimiento de las interacciones moleculares que se establecen entre distintos síndromes genéticos y que tienen un indiscutible valor diagnóstico y terapéutico.
En este trabajo de tesis se han planteado cuatro objetivos principales y generales, que son:
- Establecer potenciales relaciones entre las características hematológicas de la enfermedad y algunas características celulares tales como el acortamiento telomérico y las anomalías cromosómicas numéricas o estructurales.
- Caracterizar genéticamente a la población afectada por la anemia de Fanconi española.
- Explorar el papel de la ruta FA en la biología y el mantenimiento telomérico.
- Estudiar la biología molecular de la ruta FA en respuesta al daño genómico.
Con los estudios llevados a cabo, se ha observado un acortamiento telomérico acelerado en los pacientes Fanconi acompañado de un incremento en el número de fragmentos extrateloméricos y fusiones, aunque este exceso de fusiones terminales ocurre de manera independiente a la presencia de TRF2 en el telómero. Además, este acortamiento no está directamente relacionado con la severidad de la enfermedad a nivel hematológico.
Si que se relaciona, sin embargo con la enfermedad hematológica la frecuencia espontánea de roturas cromosómicas.
Por otra parte, se ha estudiado y caracterizado exhaustivamente la población Fanconi española, haciendo especial énfasis en los portadores de mutaciones en el gen FANCA y en la población de etnia gitana, poseedores de la mayor frecuencia de portadores de mutaciones en FANCA a nivel mundial.
Un dato importante extraído de estos estudios es la participación de la histona H2AX dentro de la ruta Fanconi en respuesta a la irradiación con UV-C.
Fanconi anemia (FA) is an autosomic recessive genetic disorder characterized by a subset of congenital malformations, bone marrow failure and a high predisposition to solid tumours and acute myeloid leukaemia acquisition. FA cells harbour a high spontaneous and induced by interstrand crosslinking agents chromosomic instability.
Some other cellular features are the sensibility in front of oxidative damage, cell cycle failure, increased levels of apoptosis, impaired transcription regulation and telomeric dysfunction.
Up to date, there have been described 12 genes that cause this disease though not all of them have been cloned and characterized so far. Among them, FANCA is the most prevalent gene in the affected population and it can be affected by a wide spectrum of mutations, being large deletions one of the most common.
Acquire a sight about the biology of this illness will allow us having a wider view about/on DNA damage repair in response to some agents. At the same time, we can have a better knowledge about the molecular interactions established among different genetic syndromes with an indisputable diagnostic and therapeutic value.
Within the present thesis four main objectives have been raised:
- Establishment of potential relationship between the haematological disease and telomere shortening, and numerical or structural chromosomal abnormalities
- Genetic characterization of Fanconi anemia Spanish population
- Explore the role of the FA pathway on telomeric biology and maintenance
- Study the molecular biology of the FA pathway in response to genomic damage
As a conclusion of these studies, an accelerated telomeric shortening together with and increased number of extratelomeric fragments and end-to-end fusions has been observed in the FA patients compared to age-matched controls. The excess of terminal fusions is not related with an impaired role of TRF2. This telomeric shortening is not related with the hematologic disease observed in these patients.
However, the spontaneous frequency of chromosomal breaks seems to correlate with the haematological severity.
Spanish FA population has been extensively studied and characterized, especially those belonging to FA-A complementation group and the gypsy population, which has come out to be the group with the highest frequency of FANCA mutated carriers worldwide.
An important point unraveled from our studies is the role of histone H2AX in the FA pathway in response to UV-C irradiation.

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Lax, Pérez Antonio Manuel. "Ca2+-ATPasa y Muerte Celular Inducida por Ca2+ en células Cardíacas H9c2." Doctoral thesis, Universidad de Murcia, 2009. http://hdl.handle.net/10803/285677.

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Abstract:

La Ca2+-ATPasa de RS puede hidrolizar ATP a través de una ruta alternativa en la que solo intervienen conformaciones de la proteína que no unen Ca2+. El mecanismo molecular de esta actividad hidrolítica implica un cambio conformacional inducido por ATP que produce aproximaciones de los dominios citosólicos. El uso de indicadores fluorescentes y compuestos que movilizan Ca2+ permite caracterizar flujos y depósitos intracelulares de Ca2+ que están implicados en la generación de señales intracelulares de Ca2+ en células H9c2. La mitocondria es capaz de interpretar señales citosólicas de Ca2+ que se generan en el retículo sarco-endoplásmico (RSE). El efecto apoptótico que se observa en presencia del inhibidor Tapsigargina (TG) es dependiente de la concentración usada. La muerte celular se produce antes cuando TG provoca apertura del poro de permeabilidad transitoria mitocondrial. El daño producido en el RSE activa la ruta apoptótica mitocondrial con participación de cas pasa 8 en un lazo que amplifica la cascada degradativa de las caspasas. Las células disponen de mecanismos alternativos de muerte celular en los que no participan caspasas.

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Gaviño, Ambriz María Victoria. "Implicaciones Jurídicas de la Biología Sintética y las Necesidades de su Regulación." Doctoral thesis, Universidad de Alicante, 2016. http://hdl.handle.net/10045/55731.

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Healey, David W. (David Wendell). "Phenotypic heterogeneity and evolutionary games in microbial populations." Thesis, Massachusetts Institute of Technology, 2015. http://hdl.handle.net/1721.1/98544.

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Abstract:

Thesis: Ph. D., Massachusetts Institute of Technology, Department of Biology, 2015.
This electronic version was submitted by the student author. The certified thesis is available in the Institute Archives and Special Collections.
Cataloged from student-submitted PDF version of thesis.
Includes bibliographical references (pages 92-96).
One of the most interesting discoveries of the last decade is the surprising degree of phenotypic variability between individual cells in clonal microbial populations, even in identical environments. While some variation is an inevitable consequence of low numbers of regulatory molecules in cells, the magnitude of the variability is nevertheless an evolvable trait whose quantitative parameters can be "tuned" by the biochemical characteristics and architecture of the underlying gene network. This raises the question of what adaptive advantage might be conferred to cells that implement high variation in their decision-making. Currently, the predominant answer in the field is that stochastic gene expression allows cells to "hedge their bets" against unpredictable and potentially catastrophic environmental shifts. We proposed and experimentally demonstrated an alternative solution: that heterogeneity implements the evolutionarily stable mixed strategy (or mixed ESS), from the field of evolutionary game theory. In a mixed ESS, phenotypic heterogeneity is a result of competitive interactions between cells in the population rather than a response to uncertain environments, so unlike with bet-hedging, in a mixed ESS the evolutionary fitness of different phenotypes is frequency dependent. Each phenotype can invade the other when rare, and the resulting equilibrium-the stable mix of the two-is not necessarily the one that maximizes the population's fitness. We demonstrated these and other predictions of the mixed ESS using engineered "pure strategist" strains of the yeast GAL network. We demonstrated also that the wild type mixed strategist can invade both pure strategists and is uninvasible by either. Taken together, our results provide experimental evidence that evolutionary hawk-dove games between identical cells can explain the phenotypic heterogeneity found in clonal microbial populations.
by David W. Healey.
Ph. D.

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Cuenca, Ibáñez José. "Mechanisms of sexual polyploidization and inheritance in triploid citrus populations." Doctoral thesis, Universitat Politècnica de València, 2013. http://hdl.handle.net/10251/34671.

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Abstract:

Citrus is the main fruit crop in the world and Spain is the 6th producer and the major exporter for the fresh fruit market. Seedlessness is one of the most important fruit quality traits for this market since consumers do not accept seedy fruits. Recovery of triploid hybrids has become an important breeding strategy to develop new seedless citrus varieties and several of them have been already released from citrus breeding programs worldwide. Despite the undisputable importance of polyploidy in plant species, their genetics are much less well known than those of their diploid counterparts. Citrus triploid hybrids can be routinely recovered from sexual polyploidization (2x ¿ 2x) or interploid crosses (2x ¿ 4x and 4x ¿ 2x). In 2x ¿ 2x sexual crosses, spontaneous triploid hybrids arise from the union of an unreduced (2n) megagametophyte with haploid pollen. In the case of interploid sexual crosses (2x ¿ 4x and 4x ¿ 2x), triploid hybrids result from the fecundation of a diploid gamete arising from the tetraploid parent and a haploid gamete arising from the diploid parent. The genetic and phenotypic structures of triploid populations greatly depend on the parental heterozygosity restitution (HR) in the diploid gamete at each locus, which is mainly affected by the triploid recovery strategy. In 2x ¿ 2x crosses, HR depends on the underlying mechanism leading to the unreduced gamete formation, which are genetically equivalent to First Division Restitution (FDR) or Second Division Restitution (SDR) mechanisms. Moreover, under each restitution mechanism, HR also depends on the locus-centromere genetic distance. In the case of interploid crosses, parental heterozygosity restitution from tetraploid parents depends on the double reduction frequency. In citrus, the unreduced gamete formation mechanism is still controversial; FDR has been the mechanism proposed for sweet orange, whereas SDR has been proposed for clementine. On the other hand, inferring the allelic configurations of genetic markers is a main challenge in polyploidy crops to infer genotypic and gametic structures with the objective to analyze meiosis and inheritance mechanisms. According to this scientific context, the objectives of the thesis where: (i) to develop a new approach for allele dosis assignation when using co-dominant markers, (ii) to implement and apply methods for the analysis of 2n gametes origin and locate centromeres, and (iii) to take advantage of this knowledge to locate a major gene of resistance to Alternaria Brown Spot (ABS) which is a major constraint for triploid mandarin breeding. For microsatellite (SSR) markers, we have demonstrated that triploid progeny genotyping can be successfully performed using the microsatellite allele-counting peak ratio (MAC-PR) method. However, SSR analysis remains relatively costly and time consuming compared with actual SNP genotyping methods. Moreover, with the increasing availability of EST databases and whole genome sequences, SNPs have become the most abundant and powerful polymorphic markers that can be selected along the entire genome. In this thesis, a new method based on competitive allele-specific PCR has been developed to assign SNP allele dosage in an accurate, simple, and cost effective way. Combining the MAC-PR and the new developed SNP genotyping methods offers the possibility to utilize a broad range of molecular markers in genotyping triploid genotypes. Both methods have been used in further works included in this thesis. SDR has been demonstrated as the mechanism underlying unreduced gamete production in `Fortune¿ mandarin by genotyping triploid progenies with SSR markers. In addition, a new method to locate the centromere, based on the best fit between observed heterozygosity restitution within a linkage group and theoretical functions under either partial or no chiasma interference hypotheses has been developed and successfully applied. To expand the knowledge of the mechanism underlying unreduced gamete formation to other citrus genotypes besides clementines and `Fortune¿ mandarin, a maximum likelihood method based on parental heterozygosity restitution of centromeric loci was developed and successfully applied in sixteen mandarin cultivars. The new method developed in the study allows inferring the restitution mechanism both at population level and even at individual level. Maternal origin of 2n gametes was confirmed for all triploid hybrids and SDR was proposed as the restitution mechanism for all analyzed progenies. The information acquired from the mode of heterozygosity restitution in citrus was useful to determine the genetic and phenotypic structures of new triploid populations arising from different breeding strategies. We studied these structures for the resistance to Alternaria brown spot (ABS), a serious fungal disease producing necrotic lesions on fruits and young leaves in susceptible citrus genotypes. In the present work, different approaches were combined taking advantage of the particular genetic structures of 2n gametes resulting from SDR to map a genome region linked to ABS resistance in triploid citrus progeny. The monolocus dominant inheritance of the susceptibility, proposed on the basis of diploid population studies, was corroborated in triploid progeny. A 3.3 Mb genomic region linked to ABS resistance was located near the centromere on chromosome III, which includes clusters of resistance genes. SSR and SNP markers were developed for an efficient early selection of ABS resistant hybrids and they are currently used in our breeding program to perform marker assisted selection. The knowledge obtained in this thesis on the mechanism of sexual polyploidization and inheritance of concrete traits in citrus will allow implementing much more efficient triploid breeding programs on the basis of current and future needs. Indeed, applied outcomes of this PhD are already routinely used in the IVIA triploid breeding program.
Cuenca Ibáñez, J. (2013). Mechanisms of sexual polyploidization and inheritance in triploid citrus populations [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/34671
TESIS
Premiado

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Schmidt, Victor T. "The effects of polyspermy, sexual conflict, and gene introgression on gamete incompatibility." View electronic thesis (PDF), 2009. http://dl.uncw.edu/etd/2009-2/schmidtv/victorschmidt.pdf.

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Herms, Fiol Albert. "Biología celular de los cuerpos lipídicos. Biogénesis, Acumulación y Metabolismo." Doctoral thesis, Universitat de Barcelona, 2014. http://hdl.handle.net/10803/284755.

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Abstract:

Los cuerpos lipídicos (CLs) son los principales orgánulos encargados del almacén de lípidos, siendo el mayor reservorio energético de las células. Están formados por un núcleo de lípidos neutros hidrófobos separados del citoplasma por una monocapa de fosfolípidos en la que se anclan determinadas proteínas. Fueron descritos a finales del siglo XIX por Hanstein, Altmann y Wilson en diferentes publicaciones y originalmente fueron llamados liposomas o microsomas. Desde entonces estos orgánulos han sido denominados de múltiples maneras: cuerpos lipídicos, gotas lipídicas, adiposomas, gránulos, inclusiones lipídicas, triglicéridos intramiocelulares, partículas lipídicas, oleosomas o cuerpos de aceite. Inicialmente fueron considerados como simples orgánulos estáticos únicamente implicados en el almacén lipídico y básicamente importantes en tejidos especializados como el tejido adiposo. No obstante, la presencia de CLs no es exclusiva de tejidos especializados como el adiposo, sino que sucede en todas las células eucariotas y en muchos procariotas. En la última década el número de estudios sobre estos orgánulos ha incrementado exponencialmente especialmente desde el descubrimiento de la perilipina, la primera proteína residente en CLs descrita, en el laboratorio de C. Londos en 1991. Poniendo de manifiesto que se trata de orgánulos complejos, recientemente se ha descrito la implicación de los CLs en múltiples procesos como el metabolismo energético, la síntesis de lípidos y hormonas, la señalización celular, el almacén y la degradación de proteínas, la secreción de lipoproteínas, la respuesta inflamatoria, el ciclo vital de algunos patógenos, el cáncer o la longevidad. Además, la acumulación excesiva de CLs es una característica común en múltiples patologías asociadas con la obesidad como el síndrome metabólico, la esteatosis hepática y la ateroesclerosis, subrayando la relevancia del estudio de la biología de estos orgánulos.

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Ausín, Herrero Pilar 1974. "Estructura, biología y función muscular esquelética en mujeres con EPOC." Doctoral thesis, Universitat Pompeu Fabra, 2016. http://hdl.handle.net/10803/403649.

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Abstract:

La disfunción muscular es una importante afectación sistémica en la EPOC, con un origen multifactorial e impacto en la actividad física, capacidad de ejercicio, calidad de vida y mortalidad de los pacientes. Hasta el momento se sabe que existen diferencias clínicas, funcionales y biológicas de la enfermedad en relación al sexo. Sin embargo no se ha analizado en profundidad si existen también diferencias respecto de la disfunción y estructura muscular. Objetivo: Analizar las diferencias en la presentación clínica y específicamente en la función, estructura y biología musculares, en función del sexo. Métodos: Se incluyeron 21 mujeres y 19 hombres con EPOC estable así como 8 mujeres y 7 hombres sanos. Se analizaron variables clínicas, de función pulmonar y muscular, actividad física y capacidad de esfuerzo así como marcadores de inflamación sistémica y pulmonar (condensado exhalado). Además se realizó biopsia abierta del vastus lateralis del cuádriceps a todos los sujetos, estudiándose la estructura (tipo y tamaño de fibras, así como signos histológicos de daño-regeneración) e inflamación musculares. Resultados: Las pacientes con EPOC presentan más signos histológicos de daño en el músculo cuádriceps que los hombres con la enfermedad a pesar de que los niveles de afectación funcional, estado nutricional, inflamación sistémica y actividad física fueron similares. Este fenómeno era evidente aún en estadios moderados de la enfermedad. Sin embargo, los signos precoces de regeneración muscular fueron inferiores en las mujeres con EPOC respecto de los varones. Así mismo, el shift hacia un aumento en la proporción de fibras de tipo II fue también inferior en las mujeres con EPOC. Asimismo, las mujeres con EPOC presentan mayor disminución de fuerza muscular, de la capacidad de esfuerzo y de los niveles de vitamina D, así como una tendencia a una superior percepción de la disnea. También se confirma la ausencia de relaciones en los niveles de inflamación entre los compartimentos sistémico, pulmonar y muscular. Conclusiones: Las mujeres con EPOC presentan una afectación muscular diferenciada de los varones con mayores signos de daño, menores de reparación y menor shift hacia fibras de tipo II. Existen diferentes factores que se asocian a la afectación muscular en estas mujeres, como los niveles de vitamina D, la hipoxia o el nivel de actividad física, aunque no pueden descartarse otros como la acción estrogénica que también podrían contribuir a estas diferencias.
Skeletal muscle dysfunction is an important systemic manifestation of the COPD. This dysfunction has a multifactorial origin that provokes significant impact on physical activity, exercise tolerance, quality of life and mortality of the patients. Several studies have showed differences related to gender in disease expression including symptoms, functional aspects and biology, however the effect of gender in muscle dysfunction in COPD is so far an unexplored area. Aim: to determine whether gender modifies clinical presentation and functional status of the disease, with special focus on muscle structure, biology and function. Methods: 21 female and 19 male COPD patients as well as 8 healthy women and 7 healthy men were consecutively recruited. Anthropometry, body composition, lung function, symptoms, health-related quality of life, physical activity, limb muscle function, exercise capacity, markers of systemic and pulmonary (breath condensate) inflammation were assessed in all the subjects. Open biopsies of the vastus lateralis muscle were obtained in all the subjects and analysis of muscle structure (fiber typing, fiber size and muscle damage-regeneration signs) and muscular inflammation were performed. Results: COPD women showed more evident histological signs of muscle injury in quadriceps muscle than COPD men in spite of similar functional and nutritional impairment, systemic inflammation and physical activity between both groups. This phenomenon was evident even in moderate stage of the disease. However the early regeneration signs were lower in COPD women compare to COPD men. Moreover, muscular shift from type I to type II fibers was also lower in women COPD in comparison with COPD men. Furthermore, women COPD showed lower quadriceps force, exercise capacity and vitamin D and higher perception of dyspnoea in COPD women. It also confirms the lack of relationship between systemic, pulmonary and muscular inflammation. Conclusions: COPD women show differences in muscular structure compared to COPD men with more signs of injury, less signs of regeneration and lower shift from type I to type II fibers. There are some factors related to muscular dysfunction in COPD women as vitamin D levels, hypoxia or level of physical activity, however other factors as oestrogens activity could also contribute to these differences.

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Muñiz, López Ruth. "Biología y conservación del Águila Harpía (Harpia harpyja) en Ecuador." Doctoral thesis, Universidad de Alicante, 2016. http://hdl.handle.net/10045/68272.

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Santos-galvão, Luzia Cristina de Melo. "Saberes experienciais dos professores de ciências e biologia do município de Aracaju: indícios de concepções sobre a aprendizagem dos alunos." Pós-Graduação em Ensino de Ciências e Matemática, 2013. http://ri.ufs.br:8080/xmlui/handle/123456789/5204.

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Abstract:

With the passing of time society has been transforming. This transformation, in most cases, is given by advancements and changes taking place as in ambit political as in technological, year after year, with great reflexes also in the educational field. Today, the teachers, when well advised, can rely on a technical and methods apparatus that may be used to assist their work on development of their classes and, in consequence, to facilitate the learning process of their students, particularly, in science education and biology. The research presented here has as objective unveiling the experiential knowledge of teachers of Science and Biology, two schools in the state education network in the city of Aracaju-Sergipe, through the evidence of conceptions about the student learning. How problematic we have the following questions: which teachers' conceptions of science and biology in relation: previous knowledge of the students; experimental activities, the use of educational games and audiovisual resources; research content in the classroom, the students' errors, and the evaluation process in the classroom, all these questions related to the student learning? Will teachers believe that for students to learn science and biology is necessary to adopt techniques and methods in their pedagogical practice? As a theoretical reference, we seek for broach the main theorists who talk so much about the process of student learning, how much the assumptions presented above, citing authors like: Vigotskii, Libâneo, Perrenould, Luckesi, among others. Concerning the nature and techniques of data collection, the research has a qualitative approach with phenomenological focus, using how instruments interviews, questionnaires and observations, having as contributions theoretical, authors as: Gil (1996), Laville and Dionne (1999), Milk (1999) and Triviños (1999). We found that teachers are aware of the need to innovate the way develop their lessons, by the use of methods and techniques different of traditional. However, we found some difficulties, such as: lack of materials, short class time assigned to disciplines, especially biology, lack of support at the time of development of their activities. Something extremely important was the similarities of the conceptions of teachers on research environments. Despite some differences in the physical aspect of the two schools, respondents forwarded the same difficulties earlier said.
Com o passar do tempo a sociedade vem se transformando. Esta transformação, na maioria dos casos, se dá por avanços e mudanças que ocorrem tanto em âmbito político quanto em tecnológico, ano após ano, tendo grandes reflexos também no campo educacional. Hoje, os professores, quando bem assessorados, podem contar com um aparato de técnicas e métodos que podem ser utilizados para auxiliar o seu trabalho no desenvolvimento de suas aulas e, em consequência, facilitar o processo de aprendizagem dos alunos, em particular, no Ensino de Ciências e Biologia. A pesquisa aqui apresentada tem como objetivo desvelar os saberes experienciais dos professores de Ciências e de Biologia, de duas escolas da rede estadual de ensino no Município de Aracaju Sergipe, através dos indícios de concepções sobre a aprendizagem do aluno. Como problemática temos as seguintes questões: quais as concepções dos professores de Ciências e Biologia em relação: os conhecimentos prévios dos alunos; às atividades experimentais; à utilização de jogos educativos e recursos audiovisuais; à pesquisa de conteúdos em sala de aula; os erros dos alunos; e o processo avaliativo em sala de aula, todas estas questões relacionada à aprendizagem do aluno? Será que os professores acreditam que para os alunos aprenderem Ciências e Biologia é preciso adotar técnicas e métodos na sua prática pedagógica? Como referencial teórico, procuramos abordar os principais teóricos que discorrem tanto sobre o processo de aprendizagem do aluno quanto sobre os pressupostos anteriormente apresentados, citando autores, como: Vigotskii, Libâneo, Perrenould, Luckesi, dentre outros. Em relação à natureza e técnicas de coleta de dados, a pesquisa possui uma abordagem qualitativa com enfoque fenomenológico, utilizando como instrumentos entrevistas, questionários e observações, tendo como aportes teóricos os seguintes autores: Gil (1996), Laville e Dionne (1999), Leite (1999) e Triviños (1999). Observamos que os professores tem consciência da necessidade de inovar a forma como desenvolvem as suas aulas, pela utilização de técnicas e métodos diferentes dos tradicionais. Contudo, encontram algumas dificuldades, como: falta de materiais, curto tempo de aula atribuído às disciplinas, principalmente a de Biologia, falta de apoio no momento do desenvolvimento de suas atividades. Algo de extrema relevância, foi as semelhanças das concepções dos professores nos dois ambientes de pesquisa. Apesar de certas diferenças no aspecto físico das duas escolas, os pesquisados remeteram as mesmas dificuldades ditas anteriormente.

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Briceño, de Lara Zuleika Coromoto. "Aproximación proteómica y metabolómica de la producción de metabolitos secundarios en líneas celulares elicitadas de Solanum Lycopersicum." Doctoral thesis, Universidad de Murcia, 2014. http://hdl.handle.net/10803/146258.

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Abstract:

l cultivar de tomate MT presenta una serie de características fenotípicas, como un corto ciclo biológico (inferior a 3 meses) y pequeño tamaño (menos de 20 cm), que hacen que sea más adecuado para estudios en laboratorio que otros cultivares de tomate. El objetivo general planteado al iniciar este trabajo fue determinar el comportamiento in vitro del cv. MT, así como llevar a cabo un estudio de los perfiles de metabolitos secundarios y de los patrones de expresión proteica en suspensiones celulares sometidas a la elicitación con MJ, en presencia y en ausencia de dos tipos de β-CDs: metiladas al azar (CDsM) o hidroxipropiladas al azar (CDsH). El fin último es explorar el potencial de las suspensiones celulares derivadas del cv. MT para utilizar este sistema en la producción de metabolitos con alto valor añadido. Para abordar este objetivo se han utilizado diversas técnicas de análisis cromatográfico (HPLC-MS y GC-MS), electroforético (SDS-PAGE e IEF), citológico (TTC y FDA) y espectrofotométrico (determinaciones de metabolitos y de diversas actividades enzimáticas); también se ha llevado a cabo la microsecuenciación de fragmentos peptídicos por nanoLC ESI MS/MS y se han utilizado las herramientas bioinformáticas correspondientes para el análisis de los resultados. Las suspensiones celulares presentaron una acumulación de compuestos fenólicos y triterpenos máxima durante la fase de crecimiento exponencial. La elicitación de las suspensiones celulares con MJ y CDsM o CDsH, separadamente o en combinación, dio lugar a un aumento de los niveles de isofucosterol,sitosterol y taraxasterol, si bien los mayores cambios se registraron en los tratamientos con CDsM. Sin embargo, los mayores niveles de fenoles solubles totales se obtuvieron en los tratamientos combinados, sobre todo en el tratamiento CDsM+MJ. Además, ambos elicitores (CDs+MJ) actuaron de forma sinérgica en la producción de ácido cafeico en el medio intracelular, indicando que la naturaleza fisicoquímica de las CDs influyó en su capacidad para estimular la producción de metabolitos y para actuar como agentes secuestrantes. Por otra parte, en los tratamientos de elicitación se observó, en general, una diminución de las actividades enzimáticas peroxidasa, PAL, endoquitinasa y 1,3-glucanasa en presencia de CDsM y un aumento de dichas actividades enzimáticas en presencia de CDsH, en los tratamientos con MJ y, sobre todo, en los combinados (CDs+MJ), lo que indica que las CDs y el MJ son capaces de regular diferencialmente la actividad de estas enzimas. El análisis del proteoma extracelular de las suspensiones celulares mediante separación monodimensional en geles de poliacrilamida y microsecuenciación en las suspensiones elicitadas con CDsM+MJ permitió la identificación de diez fragmentos trípticos cuyas secuencias de aminoácidos mostraron homología con varías proteínas PR de S. lycopersicum, quitinasas, una proteína asociada a la muerte celular biótica y una peroxidasa catiónica. Estas proteínas podrían formar parte de las respuestas de defensa en suspensiones celulares de tomate MT. Además de las proteínas inducidas en el tratamiento de elicitación, se identificaron una serie de proteínas constitutivas, como proteínas PR del tipo PR-1 y PR-5, endoquitinasas, quitinasas, peroxidasas, una proteína inhibidora de endoglucanasas fúngicas específicas de xiloglucano (XEGIP) y otras enzimas hidrolíticas implicadas en la ruptura de xilanos y arabinoxilanos como la LeXYL2 y la α-L-Arabinofuranosidasa, que pueden estar implicadas en la modificación de la arquitectura de la pared celular durante el crecimiento del cultivo.
ABSTRACT The tomato cultivar Micro-Tom displays several phenotypic characteristics such as small size (less than 20 cm) and a reduced life cycle (less than three months), which make it more suitable for laboratory experiments than standard cultivars. The overall objective proposed in this research is to know the in vitro behavior of Micro-Tom as well as analyzing the response of MT cell cultures to elicitation with methyl jasmonate (MJ) and two cyclodextrins (randomly methylated cyclodextrins, CDsM, and randomly hydroxypropyl -cyclodextrins, CDsH), alone or in combination, exploring the changes on both secondary metabolite and protein expression patterns that occur in these cell cultures in the presence of these elicitors. To address this objective, a variety of different techniques including: chromatographic (HPLC-MS and GC-MS), electrophoretic (SDS-PAGE and IEF), cytological (TTC and FDA) and spectrophotometric (for the determination of metabolites and enzymatic activities) methods were used. Moreover, tryptic fragments of SDS-PAGE bands of interest were analyzed by nanoLC ESI MS/MS and the LC-ESI-MS/MS spectra submitted to the database-mining tool for protein identification. An accumulation of both phenolic and triterpenoids compounds was seen during the exponential phase of non-elicited cell suspension cultures. Under elicitation conditions, an increase in the levels of isofucosterol, -sitosterol and taraxasterol was observed, although the highest levels of these compounds were found in CDsM-treated cells. In contrast, the highest levels of phenolic compounds were detected in the presence of both elicitors, especially in CDsM+MJ-treated cells. Moreover, both elicitors act synergistically to stimulate the production of caffeic acid in the intercellular medium, suggesting that the physicochemical properties of CDs have a great influence in their ability to induce the production of secondary metabolites and in their metabolite-sequestering properties. On the other hand, a decrease in the enzymatic activities of peroxidase, PAL, endochitinase and -1,3-glucanase was observed in CDsM-treated cells whereas an increase of these enzymatic activities occurred in the presence of CDsH, MJ, and in the combined treatments, indicating that both elicitors are able to differentially regulate the activity of these enzymes. Analysis of the extracellular proteome showed the presence of amino acid sequences homologous to several pathogenesis-related (PR) proteins, a cationic peroxidase, and a biotic cell death-associated protein, which suggests that MJ and CDs could play a role in mediating defense-related gene product expression in MT. Moreover, several constitutive proteins were also identified such as PR 1 and 5 proteins, endochitinases, chitinases, peroxidases, an inhibitor protein of xyloglucan-specific fungal endoglucanase (XEGIP), and other hydrolytic enzymes like LeXYL2 and L-arabinofuranosidase, which are cell wall-degrading enzymes involved in the breakdown of xylans and arabinoxylans, suggesting their involvement in the modification of the cell wall architecture during cell culture growth.

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Fernández, Sánchez Laura. "Protective effects of antiapoptotics and antioxidants in the treatment of retinal neurodegenerative diseases." Doctoral thesis, Universidad de Alicante, 2015. http://hdl.handle.net/10045/46846.

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Del, Valle Mendoza Juana, and Tapia Ángela Cornejo. "Bioquímica y Biología Celular (TF52), guía de prácticas, ciclo 2014-I." Universidad Peruana de Ciencias Aplicadas (UPC), 2014. http://hdl.handle.net/10757/320245.

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Abstract:

En este curso el alumno basándose en la curiosidad innata del ser humano, adentrará en el conocimiento profundo de la Biología y Bioquímica, a fin de obtener la base necesaria que le permita enfrentar los cursos posteriores que se desarrollarán en los siguientes años de su carrera. El objeto de esta guía es encaminar al alumno, bajo la dirección del Docente, por el mundo biológico desde lo más simple a lo complejo; la guía consta de una parte introductoria, con indicaciones generales a tomar en cuenta en todas las prácticas, y las indicaciones específicas por tema a desarrollar.

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Dissertations / Theses on the topic 'Biología de los gametos'

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