Dissertations / Theses: 'Bioquímica'

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(UPC), Universidad Peruana de Ciencias Aplicadas. "Bioquímica Y Biología Celular - TF78 20700." Universidad Peruana de Ciencias Aplicadas (UPC), 2018. http://hdl.handle.net/10757/623216.

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Abstract:

Curso general de la Carrera de Terapia Física, de carácter teórico-práctico dirigido a los estudiantes del segundo ciclo que busca desarrollar la competencia general de Razonamiento Cuantitativo. El curso de Bioquímica y Biología Celular tiene como objetivo demostrar que todos los seres vivos están formados por células y moléculas, definiendo los fundamentos físico-químicos que rigen su comportamiento. Se da énfasis al conocimiento de la estructura celular, en la función de las proteínas y en los mecanismos enzimáticos, se plantea la utilización programada de energía a través de las vías metabólicas. Se estudian los sistemas moleculares que regulan la autoperpetuación de la información genética. Proporciona al estudiante los lineamientos generales de la bioquímica y la biología celular básica para desarrollar habilidades de investigación, expresión de ideas fundamentadas, aprendizaje autónomo y trabajo en equipo, que le permitirán desarrollarse y desenvolverse en la práctica clínica y la investigación científica.

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Seiva, Fábio Rodrigues Ferreira [UNESP]. "A bioquímica do envelhecimento e obesidade." Universidade Estadual Paulista (UNESP), 2011. http://hdl.handle.net/11449/102642.

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Abstract:

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-08Bitstream added on 2014-06-13T20:23:13Z : No. of bitstreams: 1 seiva_fr_dr_botfm.pdf: 3896394 bytes, checksum: 25ac2f0fac725c9d2ad1833b75059c15 (MD5)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
O envelhecimento populacional mundial é considerado um processo relativamente novo na história da humanidade e está associado a melhorias na área de prevenção e tratamento na saúde publica, bem como à diminuição da taxa de fertilidade, elevando rapidamente assim, o número de pessoas com mais de 60 anos em vários países ao redor do mundo (ACEVEDO, 1998). Embora esse aumento possa ser visto como um ponto positivo, ainda é preciso alcançar também melhorias na qualidade de vida entre as pessoas idosas. Comorbidades e complicações advindas de processos que acompanham o envelhecimento, tais quais, diabetes, sobrepeso e obesidade, hipertensão arterial, doenças neurodegenerativas e principalmente complicações cardiovasculares, ainda são problemas, que além de onerarem o sistema único de saúde, elevam a taxa de mortalidade na população senil. GH, ou hormônio de crescimento, produzido e secretado na hipófise anterior, atua direta ou indiretamente, via IGF-I (hormônio de crescimento insulina-símile) produzido principalmente no fígado, levando ao crescimento longitudinal ósseo, muscular e das cartilagens. O GH também é um importante mediador de algumas vias metabólicas, como a oxidação lipídica. Em relação ao metabolismo dos carboidratos, o GH apresenta efeitos antagônicos aos efeitos clássicos da insulina, sendo por muitos, considerado um hormônio diabetogênico (COPELAND et al, 1990; HAJIMA et al, 2005)
Life expectancy is increasing in world population and with it, the incidence of public health problems such as obesity and cardiac alterations. Because growth hormone (GH) concentration is referred to be decreased in aging conditions, a question must be addressed: what is the effect of GH on aging related adverse changes? To investigate the effects of GH on cardiac energy metabolism and its association with calorimetric parameters, lipid profile and oxidative stress in aged and obese rats, initially 32 male Wistar rats were divided into two groups (n=16):(C) given standard-chow and water;(H) given hypercaloric-chow and receiving 30% sucrose in its drinking water. After 45 days, both C and H groups were divided into two subgroups (n=8):(C+PL) standard-chow, water and receiving saline subcutaneously;(C+GH) standard-chow, water and receiving 2 mg/kg/day rhGH subcutaneously;(H+PL) hypercaloricchow, 30% sucrose, receiving saline subcutaneously;(H+GH) hypercaloric-chow, 30% sucrose, receiving rhGH subcutaneously. After 30 days, C+GH and H+PL rats had higher body mass index, Lee-index, body fat content, percent-adiposity, serum triacylglycerol, cardiac lipid-hydroperoxide and triacylglycerol than C+PL. Energy-expenditure (RMR)/body weight, oxygen consumption and fat-oxidation were higher in H+GH than in H+PL. LDLcholesterol was highest in H+GH rats, whereas cardiac pyruvate-dehydrogenase and phosphofrutokinase activities were higher in H+GH and H+PL rats than in C+PL. In conclusion, the present study brought new insights on aging and obesity, demonstrating for the first time that GH therapy was harmful in aged and obesity conditions, impairing calorimetric parameters, lipid profile and oxidative stress. GH was disadvantageous in old rats, having undesirable effects on cardiac energy metabolism

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Dias, Dácio de Castro. "Hematologia e bioquímica sérica em muares." Universidade de São Paulo, 2014. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10136/tde-28072014-153256/.

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Abstract:

Os objetivos deste trabalho foram determinar valores hematológicos e bioquímicos para muares de três faixas etárias e compará-los com os das raças formadoras. Para o desenvolvimento do trabalho foram utilizados 288 animais, machos ou fêmeas, sendo: 10 jumentos, 30 éguas e 260 muares. Os muares foram divididos em três grupos: G1 (animais entre dois meses e um ano de idade), G2 (animais entre um e três anos de idade) e G3 (animais acima de três anos de idade). Foram realizadas as seguintes avaliações laboratoriais: hemograma, contagem de plaquetas, fibrinogênio, glicemia, ureia, creatinina, creatinoquinase, aspartato aminotransferase, gama glutamiltransferase, fosfatase alcalina, lactato desidrogenase, bilirrubinas, proteína total, albumina, triglicérides, colesterol, lactato, sódio, cloro, potássio, cálcio, fósforo, magnésio e ferro. Além do estabelecimento dos valores de referência do hemograma e bioquímica sérica para muares de três faixas etárias, conclui-se também que: hematologicamente os muares estão mais próximos dos asininos que dos equinos; há diferença significativa nos valores bioquímicos e hematológicos entre as faixas etárias; há influência sexual nos valores hematológicos e bioquímicos de maures, mas é clinicamente menos significativa do que a influência etária; o hemoparasita Theileria equi pode ser encontrado no esfregaço sanguíneo de um número significativo de muares, mesmo que estes não apresentem sintomatologia clínica.
The purpose of this study was to determine hematological and biochemical values of three age groups of mules and to compare them with the forming races. For the development of this study, it was used 288 animals, males or females, as follows: 10 donkeys, 30 mares and 260 mules. The mules were divided into three groups: G1 (animals between two months and one year old), G2 (animals between one and three years old) and G3 (animals above three years old). The following laboratory evaluations were performed: blood count, platelet count, fibrinogen, glucose, urea, creatinine, creatine kinase, aspartate aminotransferase, gamma glutamyl transferase, alkaline phosphatase, lactate dehydrogenase, bilirubin, total protein, albumin, triglycerides, cholesterol, lactate, sodium, chlorine, potassium, calcium, phosphorus, magnesium and iron. In addition to the establishment of reference values for blood count and serum biochemistry for mules of three age groups, it is also concluded that: hematologically, the mules are closer to donkeys than the horses; there is a significant difference in biochemical and haematological values between age groups; there is a sexual influence in the mules haematological and biochemical values, but it is clinically less significant than the age influence; the hemoparasite Theileria equi can be found in the blood smear in a significant number of mules, even if they do not show clinical symptoms.

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Seiva, Fábio Rodrigues Ferreira. "A bioquímica do envelhecimento e obesidade /." Botucatu : [s.n.], 2011. http://hdl.handle.net/11449/102642.

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Abstract:

Orientador: Ethel Lourenzi Barbosa Novelli
Banca: Ana Angélica Fernandes
Banca: Célia Nogueira
Banca: Maria S. Marques
Banca: Haydée Moreira
Resumo: O envelhecimento populacional mundial é considerado um processo relativamente novo na história da humanidade e está associado a melhorias na área de prevenção e tratamento na saúde publica, bem como à diminuição da taxa de fertilidade, elevando rapidamente assim, o número de pessoas com mais de 60 anos em vários países ao redor do mundo (ACEVEDO, 1998). Embora esse aumento possa ser visto como um ponto positivo, ainda é preciso alcançar também melhorias na qualidade de vida entre as pessoas idosas. Comorbidades e complicações advindas de processos que acompanham o envelhecimento, tais quais, diabetes, sobrepeso e obesidade, hipertensão arterial, doenças neurodegenerativas e principalmente complicações cardiovasculares, ainda são problemas, que além de onerarem o sistema único de saúde, elevam a taxa de mortalidade na população senil. GH, ou hormônio de crescimento, produzido e secretado na hipófise anterior, atua direta ou indiretamente, via IGF-I (hormônio de crescimento insulina-símile) produzido principalmente no fígado, levando ao crescimento longitudinal ósseo, muscular e das cartilagens. O GH também é um importante mediador de algumas vias metabólicas, como a oxidação lipídica. Em relação ao metabolismo dos carboidratos, o GH apresenta efeitos antagônicos aos efeitos clássicos da insulina, sendo por muitos, considerado um hormônio diabetogênico (COPELAND et al, 1990; HAJIMA et al, 2005)
Abstract: Life expectancy is increasing in world population and with it, the incidence of public health problems such as obesity and cardiac alterations. Because growth hormone (GH) concentration is referred to be decreased in aging conditions, a question must be addressed: what is the effect of GH on aging related adverse changes? To investigate the effects of GH on cardiac energy metabolism and its association with calorimetric parameters, lipid profile and oxidative stress in aged and obese rats, initially 32 male Wistar rats were divided into two groups (n=16):(C) given standard-chow and water;(H) given hypercaloric-chow and receiving 30% sucrose in its drinking water. After 45 days, both C and H groups were divided into two subgroups (n=8):(C+PL) standard-chow, water and receiving saline subcutaneously;(C+GH) standard-chow, water and receiving 2 mg/kg/day rhGH subcutaneously;(H+PL) hypercaloricchow, 30% sucrose, receiving saline subcutaneously;(H+GH) hypercaloric-chow, 30% sucrose, receiving rhGH subcutaneously. After 30 days, C+GH and H+PL rats had higher body mass index, Lee-index, body fat content, percent-adiposity, serum triacylglycerol, cardiac lipid-hydroperoxide and triacylglycerol than C+PL. Energy-expenditure (RMR)/body weight, oxygen consumption and fat-oxidation were higher in H+GH than in H+PL. LDLcholesterol was highest in H+GH rats, whereas cardiac pyruvate-dehydrogenase and phosphofrutokinase activities were higher in H+GH and H+PL rats than in C+PL. In conclusion, the present study brought new insights on aging and obesity, demonstrating for the first time that GH therapy was harmful in aged and obesity conditions, impairing calorimetric parameters, lipid profile and oxidative stress. GH was disadvantageous in old rats, having undesirable effects on cardiac energy metabolism
Doutor

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Rodrigues, Dina Maria Ferreira. "Queijos simbióticos: caracterização microbiológica e bioquímica." Master's thesis, Universidade de Aveiro, 2009. http://hdl.handle.net/10773/3103.

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Abstract:

Mestrado em Métodos Biomoleculares
Ao longo da última década o queijo tem demonstrado ser um bom suporte de microrganismos probióticos viáveis. No entanto, os estudos sobre queijos probióticos e simbióticos são ainda escassos existindo o interesse em estudar novos potenciais produtos alimentares nomeadamente na área de alimentos simbióticos. Os prebióticos inulina e frutooligossacarídeo (FOS) foram estudados de forma a analisar o seu potencial efeito sobre o crescimento/sobrevivência de bactérias probióticas (Lactobacillus casei-01 e Bifidobacterium lactis B94) em queijo, avaliando-se simultaneamente o seu potencial tecnológico através da caracterização da glicólise, proteólise e da lipólise em queijos probióticos, queijos simbióticos com adição de FOS e queijos simbióticos com adição de FOS/Inulina (50:50), ao longo de 60 dias de maturação. Adicionalmente procedeu-se ao estudo do perfil metabólico nos vários tipos de queijo ao longo da maturação. Os compostos prebióticos não afectaram significativamente o crescimento/viabilidade das estirpes em estudo tendo-se observado um crescimento exponencial de ambas as estirpes bacterianas até aos 15 dias de incubação atingido valores na ordem dos 1010 de unidades formadoras de colónias (ufc) por grama de queijo. Os índices de proteólise por sua vez revelaram uma elevada degradação da caseína em queijos probióticos e simbióticos inoculados com B. lactis B94 ou com L. casei-01, tendo-se observado um aumento da concentração de aminoácidos em especial após 30 dias de maturação. A lipólise por sua vez, caracterizou-se pelo aumento gradual de ácidos gordos livres ao longo do tempo de maturação, tendo-se observado um maior incremento nos queijos simbióticos e em especial nos inoculados com B.lactis B94. Adicionalmente, observaram-se diferenças em termos qualitativos no perfil de ácidos gordos livres, tendo-se detectado a presença de isómeros de ácido linoleico conjugado e ácidos (alpha)-linolénico e y-linolénico após 15 dias de maturação, em especial nos queijos simbióticos. O estudo dos perfis metabólicos por espectroscopia de RMN, permitiu observar diferenças entre os vários tipos de queijo inoculados com as duas estirpes probióticas que se demonstraram mais pronunciadas consoante o tempo de maturação. Através da análise de componentes principais foi possível discriminar para todos os tipos de queijo, independentemente da estirpe inoculada, amostras com diferentes tempos de maturação. Tendo em conta os objectivos deste trabalho poder-se-á concluir, de acordo com resultados obtidos, que foi demonstrado o potencial benéfico dos vários tipos de queijo estudados. ABSTRACT: Over the last decade it has been shown that cheese is a suitable vehicle to support viable probiotic microorganisms. However, studies on probiotic cheeses are still scarce and there is interest in studying new potential food products in particular the synbiotic foods. The prebiotic inulin and fructooligosaccharides (FOS) were studied in order to evaluate its potential effect on growth/survival of probiotic bacteria (Lactobacillus casei-01 and Bifidobacterium lactis B94) in cheese and simultaneously evaluate their technological potential through the characterization of glycolysis, lipolysis and proteolysis in probiotic cheeses, synbiotic cheese with the addition of FOS as well as synbiotic cheese with the addition of FOS / Inulin (50:50), over 60 days of maturation. Additionally it was performed the study of metabolic profile of the various types of cheese, throughout the period of maturation. Prebiotic compounds did not affect significantly the growth/viability of the strains under study but there has been an exponential growth of both bacterial strains up to 15 days of incubation, with an increase of about two log units, reaching values around 1010 colony forming units (cfu) per gram of cheese. Rates of proteolysis, in turn, revealed a considerable degradation of the casein on probiotic and synbiotic cheeses, inoculated with B. lactis B94 or with L. casei-01 with an increase of free aminoacids, especially after 30 days of ripening. Lipolysis, on the other hand, was characterized by a gradual increase of free fatty acids throughout the maturation period, being the increment larger in synbiotic cheeses mainly in those inoculated with B. lactis B94. Additionally it was observed differences in the qualitative profile of free fatty acids and it was detected the presence of isomers of conjugated linoleic acids, (alpha)-linolenic acid as well as y-linolenic after 15 days of ripening, especially in synbiotic cheeses. The study of metabolic profiles by NMR spectroscopy, allowed to observe differences between the various types of cheeses inoculated with the two probiotic strains that have shown to be more pronounced through the maturation time. By the principal component analysis it was possible to discriminate for all kinds of cheese, regardless of the strain inoculated, samples with different maturation times. Considering the objectives of this study it could be concluded, according to results obtained, that it was fully demonstrated the potential benefit of various types of cheese studied.

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Rojas, Domínguez Paulina Soledad. "Búsqueda de marcadores periféricos y genéticos predictivos de la respuesta al tratamiento de la depresión mayor con Venlafaxina." Tesis, Universidad de Chile, 2007. http://www.repositorio.uchile.cl/handle/2250/105622.

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Abstract:

Memoria para optar al título de Bioquímico
En la depresión se postula una reducción en la neurotransmisión serotoninérgica y/o noradrenérgica y en péptidos neuroprotectores como el factor neurotrófico derivado de cerebro (BDNF). Además del riesgo genético, existe una relación entre el estrés y el desarrollo de la depresión. En el estrés crónico y en la depresión se observa atrofia neuronal, reducción del BDNF y fallas cognitivas. Estos efectos se relacionan con el aumento de los glucocorticoides (GCs) circulantes debido a una sobreactivación del eje hipotálamo-hipófisis-glándula adrenal (HHA). La actividad del eje HHA se controla por la secreción de la hormona liberadora de corticotropina (CRH) hipotalámica, la cual estimula la secreción de la hormona adrenocorticotropa (ACTH) de la hipófisis; este efecto es potenciado por el péptido arginina-vasopresina (AVP) durante el estrés. La ACTH estimula la secreción de los GCs adrenales los que se unen a su receptor (GR) a nivel del eje HHA inhibiendo su activación, efecto que está reducido en la depresión quizás debido a variaciones polimórficas funcionales del GR. Los fármacos antidepresivos que son inhibidores selectivos de la recaptación de noradrenalina (ISRN) y no de serotonina (ISRS) normalizan el eje HHA y aumentan el número del GR en linfocitos. Los fármacos antidepresivos aumentan la expresión de genes neuroprotectores como el gen del BDNF y el de la proteína de unión al elemento de respuesta al AMP cíclico (CREB): los sujetos depresivos tienen niveles séricos del BDNF menores que los pacientes tratados farmacológicamente. En esta memoria se determinó si los niveles periféricos del BDNF, la CREB y el GR, así como si ciertas variantes polimórficas del GR, sirven como marcadores predictivos de la respuesta clínica de pacientes con depresión mayor tratados con venlafaxina, un fármaco antidepresivo de acción dual (ISRS/ISRN). La severidad y evolución de la depresión se determinó por el test de Hamilton de depresión (HAM-D). Los sujetos depresivos (n=18) y sanos (n=10) presentaron niveles similares del cortisol en orina de 24 h y en el ritmo de secreción circadiana del cortisol salival indicando una actividad normal del eje HHA. Ambos grupos suprimieron la secreción de cortisol luego de la ingesta de dexametasona (agonista del GR). El 61% de los pacientes redujeron el puntaje del HAMD ≥ al 25% en la primera semana de tratamiento, considerándose como respondedores tempranos. El 39% restante, respondedores tardíos, comenzaron a reducir el puntaje del HAM-D a la segunda semana de tratamiento. Estos últimos presentaron niveles mayores de la ACTH basal y de la inducida por la inyección de un análogo de AVP (DDAVP) que los respondedores tempranos y los sujetos sanos, indicando una mayor sensibilidad de los receptores de AVP. La DDAVP provocó una mayor secreción del cortisol en ambos grupos de pacientes con respecto al grupo control. El 44 % de los pacientes remitieron (HAMD ≤ 7) y presentaron un nivel más bajo de la ACTH y del cortisol basal. Se buscaron polimorfismos descritos en el gen del GR en los sujetos del estudio y en una muestra poblacional de Santiago (n=105) mediante la amplificación de ADN genómico por PCR. No se encontraron los polimorfismos de los codones 22, 23, 363, 641 y 729 salvo en el codón 22 en un paciente respondedor temprano y el del codón 363 en un sujeto del grupo poblacional. Los niveles del GR en relación a la β-actina en linfocitos no variaron durante el tratamiento con venlafaxina en los dos grupos de respondedores. La relación entre las isoformas del GRα (A y B) aumentó en las primeras semanas de tratamiento en los respondedores tardíos; en contraste, esta razón disminuyó en los respondedores tempranos. En ambos grupos de pacientes se observó un leve aumento de los niveles de la CREB total en las primeras semanas, aumento que en los respondedores tardíos se mantuvo hasta la tercera semana de tratamiento. Se observó un leve aumento, aunque no significativo, en los niveles de la CREB activa (fosforilada) en la primera semana de tratamiento en el grupo de respondedores tempranos. Este resultado se correlacionó con el aumento en los niveles séricos del BDNF y la respuesta clínica del grupo de respondedores tempranos a la semana de tratamiento. Se concluye que la secreción de la ACTH basal e inducida por la DDAVP antes del tratamiento, y los niveles del BDNF durante la terapia con venlafaxina se correlacionan con la respuesta clínica. Este es el primer estudio en que se evalúan tanto potenciales marcadores periféricos y genéticos como la funcionalidad del eje HHA en relación a la respuesta al tratamiento con un solo antidepresivo en un período de seis semanas.

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Ribeiro, Caroline Fidalgo. "Caracterização bioquímica e funcional da deubiquitinase USP2a." reponame:Repositório Institucional da UFPR, 2016. http://hdl.handle.net/1884/45421.

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Abstract:

Orientador : Prof. Dr. Silvio Marques Zanata
Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 29/08/2016
Inclui referências : f. 81-84
Área de concentração: Patologia
Resumo: USP2a é uma importante enzima deubiquitinase (DUB) capaz de remover a ubiquitina de diferentes substratos, como da enzima FASN e do receptor de fator de crescimento epidermal (EGFR). Em tumores de próstata observa-se uma correlação positiva entre a expressão de USP2a e a tumorigênese, caracterizando-a como uma proteína oncogênica. Essa característica da DUB está principalmente relacionada com sua função estabilizadora da enzima FASN, responsável pela síntese de ácidos graxos na célula. A USP2a também resgata o EGFR da degradação, mantendo seus níveis celulares elevados. Sabe-se que o direcionamento de proteínas da membrana plasmática para a via do corpo multivesicular requer a ação dos complexos proteicos ESCRTs. Um deles, o ESCRT-0, possui duas subunidades: Hrs, responsável por direcionar o complexo aos endossomos precoces, e a subunidade STAM, capaz de interagir com diferentes DUBs. Sabe-se que a USP2a co-localiza com EEA1, um marcador de endossomos precoces, então decidiu-se analisar se a USP2a interage também com STAM, e identificar o sítio dessa interação. Para isso, linhagens celulares normais e tumorais de próstata foram modificadas para expressar permanentemente a forma selvagem e o mutante cataliticamente inativo de USP2a, e também foram silenciadas para a expressão de STAM. As sequências de STAM, de sua região SH3 e do mutante STAM SH3 foram clonadas, com o intuito de se obter plasmídeos de superexpressão para esses construtos. A primeira evidência de interação entre USP2a e STAM foi observada em ensaio de co-imunoprecipitação com células tumorais de próstata superexpressando USP2a, mas esse resultado ainda não foi totalmente confirmado. A região de STAM que pode contribuir para essa interação não foi identificada devido a baixos níveis de expressão dos construtos. Uma relação indireta entre USP2a e STAM foi observada, com o aumento da ubiquitinação de STAM com a superexpressão da forma selvagem da enzima em células de próstata, sem alterar os níveis celulares da proteína. Observou-se também que STAM é capaz de modular a reciclagem de EGFR em linhagens celulares de próstata, uma vez que seu silenciamento aumenta a taxa de degradação de EGFR. Analisou-se também o efeito fenotípico da deleção do gene fasn em camundongos com tumores de próstata induzidos pela perda de Pten. Verificou-se que a inibição genética de FASN reduz a incidência de formas agressivas de tumores de próstata nos animais. Os resultados obtidos sugerem que FASN, assim como USP2a, pode ser um importante alvo farmacológico para o tratamento de tumores de próstata. Palavras-chave: USP2a. ESCRT-0. STAM. EGFR. FASN.
Abstract: USP2a is an important deubiquitinating enzyme (DUB) capable of removing ubiquitin from different substrate proteins, like FASN and epidermal growth factor receptor (EGFR). In prostate tumors there is a positive correlation between USP2a expression level and tumorigenesis, which makes it an oncogenic protein. This characteristic is mainly related with its ability to stabilize FASN, the enzyme that synthesizes fatty acids in cells. USP2a also rescues EGFR from lysosomal degradation, keeping its cellular levels raised. orting of plasma membrane proteins into multivesicular body pathway requires the ESCRTs complexes. One of these, the ESCRT-0, has two subunits: the subunit Hrs, that is responsible for targeting the complex to early endosome, and the subunit STAM, which interacts with different DUBs. -localizes with EEA1, a marker of early endosomes, so we decided to analyze if USP2a also interacts with STAM, whether this interaction is needed to taking USP2a to early endosome and identify the protein site required for this interaction. For this, normal and tumoral prostate cell lines were modified to permanently overexpress USP2a wild type and its catalytically inactive mutant, these cell lines also had the STAM expression knocked down. Molecular cloning of STAM, its SH3 region and a mutant lacking SH3, all tagged with GFP, were performed in order to obtain plasmids for overexpression of this constructs. The first sign of interaction between USP2a and STAM was observed with a co-immunoprecipitation assay in prostate tumoral cells overexpressing USP2a, but it was not fully confirmed. The region of STAM constructs. Indirect relationship between USP2a and STAM was observed, since overexpression of wild type USP2a is related with enhanced ubiquitination of STAM in prostate cell lines, even though the protein level remains the same. STAM is also capable of affect EGFR recycling in prostate cell lines, since STAM knocked down cells shown enhanced degradation of EGFR. It was also analyzed the effect of fasn gene deletion on Pten loss driven prostate tumors. The genetic ablation of FASN reduced the incidence of aggressive prostate tumors in mice, suggesting that FASN, as well as USP2a, could be an important pharmacological target for treatment of prostate cancer. Key words: USP2a. ESCRT-0. STAM. EGFR. FASN.

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Matos, Amanda Dupas de. "Avaliação bioquímica nutricional de cultivares de arroz." Universidade do Vale do Rio dos Sinos, 2014. http://www.repositorio.jesuita.org.br/handle/UNISINOS/3763.

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Abstract:

Submitted by Silvana Teresinha Dornelles Studzinski (sstudzinski) on 2015-06-05T12:52:21Z No. of bitstreams: 1 Amanda Dupas de Matos.pdf: 534443 bytes, checksum: 00c5612cbb7be0307b022cbbd64abc5c (MD5)
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Nenhuma
O arroz é um cereal reconhecido pelas suas propriedades funcionais devido principalmente aos compostos bioativos presentes nas camadas mais externas do grão. Embora exista grande variedade fenotípica de arroz, a maior parte apresenta pigmentação de pericarpo marrom-claro, podendo ser consumida na forma integral ou polida. Trabalhos científicos têm demonstrado que o arroz pode apresentar diferenças nutricionais e funcionais relacionadas à pigmentação do pericarpo. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi analisar a quantidade de compostos fenólicos totais (CFST), atividade antioxidante (AAO) e teor proteico de diferentes cultivares de arroz com pericarpo pigmentado e não pigmentado, bem como avaliar CFST e AAO de infusões de arroz cru. A AAO foi determinada a partir da concentração de CFST e expressa em diferentes unidades. Os resultados mostraram diferença na quantidade de CFST e AAO (g grão/g DPPH) entre as cultivares de arroz analisadas (intra grupo cru e intra grupo cozido) com destaque para o arroz preto e vermelho. Após o cozimento, houve diferença nos grãos de arroz vermelho e marrom-claro quanto aos teores de CFST e no arroz integral marrom-claro quanto a AAO (g/g DPPH). Quanto à capacidade de sequestro do radical (%Inibição), não houve diferença entre os grãos de arroz vermelho e marrom-claro crus e cozidos e entre os grãos de arroz marrom-claro e polido cozidos. No ensaio de infusões, o arroz vermelho foi o grão de maior liberação de CFST para a água de embebição. Quanto à %Inibição das infusões, houve diferença nos grãos de arroz preto e vermelho quando comparados com os grãos de arroz marrom-claro e polido. Na caracterização proteica, não houve diferença entre as cultivares (intra grupo base úmida e intra grupo base seca), contudo os grãos de arroz preto, vermelho e marrom-claro diferiram quando comparados entre grupos (base úmida vs base seca). O grão de arroz preto foi o que apresentou maior estabilidade dos compostos bioativos sendo menos suscetíveis à degradação térmica. O conhecimento dos potenciais químicos e funcionais dos grãos de arroz permitirá o desenvolvimento de novas possibilidades de utilização desses grãos como veículo de substâncias antioxidantes visando a promoção da saúde.
Rice is a cereal recognized by its functional properties mainly due to the bioactive compounds present in the outer layers of the grain. Although there is great phenotypic variety of rice, most part of has light brown pericarp and canbe consumed in the whole or polished form. Researchershave reported that rice canprovide nutritional and functional differences related to pigmentation of the pericarp.Therefore, the aim of this study was to analyze the amount of total soluble phenolic compounds (TSPC), antioxidant activity (AOA) and protein content of different rice cultivars with pigmented and non-pigmented pericarp and evaluate TSPC and AOA raw rice infusions. The AOA was determined from the concentration of TSPC and expressed in different units. The results showed differences in the quantity of TSPC and AOA (g/g DPPH) between the analyzed rice cultivars (raw and cooked intragroup) with emphasis on the black and red rice. After cooking, red and light brown rice differed in levels of TSPC and light brown rice in the AOA (g/g DPPH). Regarding the capacity to radical sequester (%Inhibition), there was no difference between the red and light brown rice, cooked and raw, and between cooked light brown and polished rice. In infusions, red rice was the one with most released TSPC to soaking water. As to %Inhibition of infusions, there were differences in the black and red rice compared to the light brown and polished rice. In protein characterization, there was no difference between cultivars (dry and wet basis intragroup), owever black, red and light brown grains differed when compared between groups (dry vs wet basis). The black rice showed stability of bioactive compounds such as less susceptibility to thermal degradation. The knowledge of the chemical and functional potential of the rice will allow the development of new possibilities using these grains as means for antioxidants aimed to health promotion.

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Guimarães, Dimitrius Santiago Passos Simões Fróes. "Caracterização bioquímica e celular da proteína TRIM49." Universidade de São Paulo, 2017. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17131/tde-10042018-112409/.

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Abstract:

A autofagia é o processo de degradação de estruturas celulares através do seu direcionamento ao lisossomo. As proteínas TRIMs reconhecem as -cargas? autofágicas e reúnem o complexo de nucleação do fagóforo, contudo se desconhece a função de cada domínio e a importância da atividade de E3 ligase para a sua atividade. A proteína TRIM49 clonada e expressa em E. coli ou em células humanas HEK293T não apresentou atividade de E3 ubiquitina ligase in vitro e reduziu os níveis totais de ubiquitinação in vivo, indicando que não é um E3 ubiquitina ligase. Células desafiadas com Htt74Q apresentaram menores níveis de citotoxicidade quando co-transfectadas com TRIM49 selvagem, mas não com os mutantes do domínio RING ou SPRY, indicando os dois domínios são necessários para sua atividade celular. A proteína selvagem se colocaliza com o marcador autofágico LC3, após o bloqueio da autofagia com bafilomicina A1. Os resultados indicam que a TRIM49 pode atuar na degradação intracelular de proteínas, por um mecanismo não dependente de atividade de E3 ligase.
Autophagy is the process of degradation of intracellular proteins through their directioning to the lysosome. TRIM proteins can directely recognize autophagic cargo and also act as a hub for the phagophore nucleation complex, however the function of each domain and the role of the E3 ligase activity in this process is unknown. The TRIM49 protein cloned and expressed in E. coli or in human cells HEK23T showed no ubiquitin E3 ligase activity in vitro and cells transfected with the wild type protein showed lower levels of polyubiquitinated proteins, indicating that TRIM49 is not a bona fide E3 ubiquitin ligase. Cells challenged with Htt74Q presented lower cytotoxicity levels when cotransfected with wild type TRIM49, when compared with the RING domain mutant or with the truncated protein lacking the SPRY domain, indicating that both domains are required for its cellular activity. The wild type protein colocalizes with the autophagic marker LC3 after treatment with the autophagy inhibitor bafilomycin A1. Taken together, these results indicate that the TRIM49 protein plays a role in protein degradation independently of a E3 ligase activity.

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SOUSA, Karina Pires. "Caracterização bioquímica de metaloproteinases de parasitas tripanosomatídeos." Master's thesis, Instituto de Higiene e Medicina Tropical, 2013. http://hdl.handle.net/10362/14029.

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Abstract:

A identificação e caracterização de processos mediados por metaloproteinases de uma grande variedade de eucariotas está a avançar rapidamente, tanto a nível molecular como celular – e os muitos papéis que as proteases desempenham nestes organismos estão a ser trazidas para o foco. As metaloproteinases de matriz executam tarefas de ―housekeeping” comuns a muitos organismos, bem como funcionam a um nível muito mais específico no ciclo de vida dos parasitas, por exemplo. Papéis pivotais foram propostos em diferentes processos, como invasão e egressão de células, enquistação e desenquistação, catabolismo de proteínas, diferenciação, progressão do ciclo celular, citoaderência, e ainda estimulação e evasão ao sistema imune. No presente estudo, é feito o reconhecimento e a caracterização de metaloproteinases de dois diferentes extractos de parasitas protozoários: Trypanosoma brucei brucei e Leishmania infantum. A classificação de metaloproteases foi obtida a partir da inibição diferencial da actividade destas proteases sobre diferentes substratos (gelatina e caseína), tendo sido efectuada uma prospecção de inibidores selectivos com potencial para serem empregues em novas estratégias de quimioterâpeutica contra estes agentes. Adicionalmente, é feito um estudo bioinformático sobre uma metaloproteinase comum aos parasitas aqui abordados, alargando o estudo a outros organismos relacionados. Os resultados obtidos demonstram a presença de metaloproteinases capazes de degradar proteínas de matriz em ambos os extractos estudados, sendo possível inibir a sua actividade com concentrações relativamente moderadas de inibidores. Além disso, sugerem que em todos os eventos patológicos abordados neste estudo, a presença de metaloproteinases activas é estável no seu ciclo de vida e provavelmente na progressão da patologia provocada pelos diferentes agentes em estudo. A análise de todos os resultados e observações poderá possivelmente levar à identificação e integração de elementos comuns nos processos de invasão celular e progressão parasitária aqui abordados. Por essa razão, a compreensão destas interacções permanece um desafio importante.
The identification and characterization of metalloprotease-mediated processes from a variety of eukaryotes is progressing at a rapid rate, both at the molecular and cellular levels – and the many roles that proteases play in these organisms are coming into focus. Matrix metalloproteinases carry out housekeeping tasks common to many eukaryotes, as well as functioning at a much more specific level in parasitic life cycles, for instance. Central roles have been proposed in diverse processes, such as cell invasion and egress, encystation, excystation, catabolism of proteins, differentiation, cell cycle progression, cytoadherence, and both stimulation and evasion from immune responses. In this study, a characterization of the metalloproteases from two different extracts is presented: Trypanosoma brucei brucei and Leishmania infantum. Classification into the metalloprotease class has been accomplished by means of differential inhibition of the activity of these proteases over different substrates (gelatin and casein), and a survey of selective inhibitors with potential use on new chemotherapeutical strategies against these agents was performed. Additionally, a bioinformatic study regarding a metalloprotease which is common to the parasites in study is conducted, and branches out this study to related organisms. The results herein presented demonstrate the presence of metalloproteases capable of degrading matrix proteins in all of the extracts studied, and that their activity can be inhibited with moderate concentrations of inhibitors. Furthermore, the results suggest that in all the pathological events discussed here, the presence of active metalloproteases is indeed stable to their life cycles and in the progression of the pathology caused by the diverse biological agents in study. The analysis of all the results and observations may possibly lead to the identification and integration of common elements in the processes of cellular invasion and parasitic progression explained here. For that reason, the understanding of these interactions remains an outstanding challenge.

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Destro, Mariana Malavazi [UNESP]. "Isolamento ambiental e caracterização bioquímica de Cryptococcus." Universidade Estadual Paulista (UNESP), 2016. http://hdl.handle.net/11449/141467.

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Abstract:

Submitted by MARIANA MALAVAZI DESTRO null (m_destro@hotmail.com) on 2016-07-07T16:27:57Z No. of bitstreams: 1 Dissertação para arquivar Unesp.pdf: 751238 bytes, checksum: ef14aad090e2f5e2974329d58301aef8 (MD5)
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Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
A criptococose é uma infecção fúngica causada por levedura do gênero Cryptococcus. Dentre as principais micoses sistêmicas nas últimas décadas, a criptococose vem assumindo um relevante papel, com altos índices de morbidade e mortalidade principalmente em pacientes imunodeprimidos. O presente trabalho teve por objetivo verificar a ocorrência de Cryptococcus spp. em amostras ambientais na área urbana de Bauru-SP, Brasil, estabelecendo os focos ambientais, com a finalidade de compreender a eco-epidemiologia do microrganismo. Cinquenta amostras ambientais de dez locais representativos foram processadas e semeadas em ágar semente de Níger (NSA) e Sabouraud. As colônias com características macro e micromorfológicas compatíveis com Cryptococcus foram submetidas a provas bioquímicas, sendo que 12/50 (24%) das amostras foram positivas para o gênero Cryptococcus. A partir dos resultados obtidos, pode-se concluir que foram encontradas espécies causadoras de criptococose no município de Bauru, constituindo-se na existência de focos ambientais, com potencial patogênico para o homem e animais. A compreensão da eco-epidemiologia do Cryptococcus constitui em uma importante ferramenta na estratégia de medidas preventivas.
Cryptococcosis is a fungal infection caused by yeasts of the genus Cryptococcus. One of the main systemic mycoses in recent decades, has been assuming an important role, with high rates of morbidity and mortality especially in immunosuppressed patients. The present study aimed to verify the existence of Cryptococcus spp. from environmental samples in the urban area of Bauru-SP, Brazil, establishing the environmental focus, with the purpose of understand the eco-epidemiology of the micro-organism. Fifty environmental samples from ten representative sites were processed and seeded in agar Niger seed (NSA) and Sabouraud. The colonies with macro and micromorphological compatible with Cryptococcus underwent biochemical tests, and 12/50 (24%) of the samples were positive for the genus Cryptococcus. From the results obtained, it can be concluded that species that cause cryptococcosis were found in the city of Bauru-SP, Brazil, constituting the existence of outbreaks with potential environmental pathogenic for human and animals. The eco-epidemiological understanding of the Cryptococcus constitutes an important tool in the strategy of preventive measures.

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Destro, Mariana Malavazi. "Isolamento ambiental e caracterização bioquímica de Cryptococcus /." Araçatuba, 2016. http://hdl.handle.net/11449/141467.

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Abstract:

Resumo:A criptococose é uma infecção fúngica causada por levedura do gênero Cryptococcus. Dentre as principais micoses sistêmicas nas últimas décadas, a criptococose vem assumindo um relevante papel, com altos índices de morbidade e mortalidade principalmente em pacientes imunodeprimidos. O presente trabalho teve por objetivo verificar a ocorrência de Cryptococcus spp. em amostras ambientais na área urbana de Bauru-SP, Brasil, estabelecendo os focos ambientais, com a finalidade de compreender a eco-epidemiologia do microrganismo. Cinquenta amostras ambientais de dez locais representativos foram processadas e semeadas em ágar semente de Níger (NSA) e Sabouraud. As colônias com características macro e micromorfológicas compatíveis com Cryptococcus foram submetidas a provas bioquímicas, sendo que 12/50 (24%) das amostras foram positivas para o gênero Cryptococcus. A partir dos resultados obtidos, pode-se concluir que foram encontradas espécies causadoras de criptococose no município de Bauru, constituindo-se na existência de focos ambientais, com potencial patogênico para o homem e animais. A compreensão da eco-epidemiologia do Cryptococcus constitui em uma importante ferramenta na estratégia de medidas preventivas
Abstract:Cryptococcosis is a fungal infection caused by yeasts of the genus Cryptococcus. One of the main systemic mycoses in recent decades, has been assuming an important role, with high rates of morbidity and mortality especially in immunosuppressed patients. The present study aimed to verify the existence of Cryptococcus spp. from environmental samples in the urban area of Bauru-SP, Brazil, establishing the environmental focus, with the purpose of understand the eco-epidemiology of the micro-organism. Fifty environmental samples from ten representative sites were processed and seeded in agar Niger seed (NSA) and Sabouraud. The colonies with macro and micromorphological compatible with Cryptococcus underwent biochemical tests, and 12/50 (24%) of the samples were positive for the genus Cryptococcus. From the results obtained, it can be concluded that species that cause cryptococcosis were found in the city of Bauru-SP, Brazil, constituting the existence of outbreaks with potential environmental pathogenic for human and animals. The eco-epidemiological understanding of the Cryptococcus constitutes an important tool in the strategy of preventive measures
Orientador:Marcia Marinho
coorientador: Juliana Regina Peiró
Banca:Luzia Helena Queiroz
Banca:Simone Baldini Lucheis
Mestre

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Silva, Dalva Maria Almeida. "Temperaturas supraótimas no crescimento e bioquímica da mamoneira." Universidade Estadual da Paraíba, 2012. http://tede.bc.uepb.edu.br/jspui/handle/tede/2838.

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Abstract:

Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2017-07-21T14:51:01Z No. of bitstreams: 1 PDF - Dalva Maria Almeida Silva.pdf: 13093272 bytes, checksum: 444f0e34705f8454eaf5d61de8f8fce2 (MD5)
Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2017-08-29T15:44:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Dalva Maria Almeida Silva.pdf: 13093272 bytes, checksum: 444f0e34705f8454eaf5d61de8f8fce2 (MD5)
Made available in DSpace on 2017-08-29T15:44:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Dalva Maria Almeida Silva.pdf: 13093272 bytes, checksum: 444f0e34705f8454eaf5d61de8f8fce2 (MD5) Previous issue date: 2012-08-30
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES
The castor bean (Ricinus communis.L) is an important oilseed crop. Its main commercial product is the ricinoleic acid. This crop is easy to grow and it is drought-tolerant. So, it is an interesting option for small farmers in the semiarid region of Brazilian Northeast. Castor crops may be affected by climate change in the future, and the development of this culture would become impossible. The aim of this study was to evaluate and to quantify the effects of temperatures above the optimum temperature for photosynthesis upon growth and biochemical metabolism of different genotypes of castor bean. The experiment was conducted under controlled conditions in phytotron units that simulated different environmental conditions of temperature and moisture. The genotypes BRS Energia, BRS Gabriela, CNPA 2001- 50, CNPA 2009- 7, and BRA 3182 were evaluated in a randomized design with four replicates in a 5 x 2 factorial scheme. The analyzed factors were the 5 genotypes and 2 environmental conditions: 30/20 ºC (day/night) and 40/30 º C (day/night). The castor plants, specially genotypes BRS Energia and BRA 3182, presented significant reduction in the growth rate, plant height, protein content, and some sugars production in the environment 40/30 ºC. The trehalose and sucrose levels were increased, however traces of glucose levels were detected in the HPLC analysis.
A mamoneira (Ricinus communis.L) é uma oleaginosa de importância comercial e social sendo seu principal produto o ácido ricinoléico. É de fácil cultivo e tolerante á seca, tornando-se uma opção para agricultores familiares do semiárido brasileiro. Com as projeções futuras para o clima, o crescimento e desenvolvimento dessa cultura podem ser comprometidos tornando inviável seu cultivo. Objetivou-se com este trabalho avaliar e quantificar os efeitos de temperaturas supraótimas, no crescimento e na bioquímica, dos diferentes genótipos de mamoneira. O experimento foi conduzido em condições controladas (câmaras climatizadas), simulando condições de temperatura e umidade, no período de 60 dias. Cinco genótipos de mamoneira foram testados (BRS Energia, BRS Gabriela; CNPA 2001- 50; CNPA 2009- 7; BRA 3182), utilizou-se delineamento experimental inteiramente casualizado, com dois níveis de temperatura, 30/20ºC (dia/noite) e 40/30ºC (dia/noite) com quatro repetições. Na faixa de temperatura 40/30° C foi verificado que a mamoneira, em especial os genótipos BRS Energia e BRA 3182, apresentam significativa redução do crescimento, com relação à altura de planta, redução de proteínas e alguns açúcares. Houve incremento no teor de trealose e sacarose, na temperatura 40/ 30°C, contudo apenas traços de glicose foram detectados via HPLC.

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Silva, Mariana dos Santos. "Análise bioquímica e funcional de bandagem bucal antimicrobiana." Universidade de São Paulo, 2013. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/25/25149/tde-14102013-153219/.

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Abstract:

O efeito de fármacos pode ser potencializado através do desenvolvimento de novos sistemas de liberação como os sistemas mucoadesivos. Estes sistemas permanecem em contato íntimo com o tecido de absorção, às mucosas, liberando o fármaco no local de ação, com o consequente aumento da biodisponibilidade, podendo promover efeitos locais e sistêmicos. Através do desenvolvimento da bandagem bucal antimicrobiana e testadas sua eficiência sobre a cultura de algumas bactérias bucais (S. mutans e C. albicans) se fez necessário continuar os estudos desse material. O objetivo deste trabalho foi analisar as propriedades bioquímicas e funcionais da bandagem bucal antimicrobiana no que tange a: degradação no meio salivar; adequação da composição para a melhoria da aderência à mucosa bucal; desempenho quanto à liberação controlada de fármacos; absorção de água, perda de massa; medida do pH do líquido residual em diferentes períodos de tempo; citotoxicidade da bandagem em cultura de fibroblastos. As bandagens avaliadas tinham diferentes composições quitosana, quitosana com glicerol, quitosana e alginato com/sem glicerol, e todas com/sem fármaco. Através das análises realizadas foi possível observar que as bandagens que absorveram mais água em tampão foi a membrana híbrida (203%) e em saliva foi a híbrida com glicerol (30%). A membrana que perdeu mais massa em tampão e em saliva foi a híbrida com glicerol (40% e 30%), isso quer dizer que elas se decompõe e liberam suas propriedades no meio. A liberação controlada do fármaco pode avaliar que a membrana híbrida liberou de forma crescente o fármaco (0,075%), facilitando sua liberação. No teste de citotoxicidade todas as bandagens com fármaco foram citotóxicas, já as bandagens de quitosana e quitosana com glicerol promoveram o crescimento celular.
The effect of drugs may be enhanced through the development of new delivery systems as mucoadhesive systems. These systems remain in intimate contact with the tissue absorption, in this case the mucosa, releasing the drug at the site of action, with the consequent increase in bioavailability and may promote local and systemic effects. Mucoadhesion is currently explained by six theories: electronics, adsorption, wetting, diffusion, fracture and mechanics (Carvalho et al., 2010). In 2011, Kloster et al. developed an oral bandage and tested antimicrobial efficiency in the culture of some oral bacteria (S. mutans e C. albicans), the results were promising. The aim of this study was to analyze the biochemical and functional properties of oral antimicrobial bandage with respect to: the salivary environment degradation; the composition adjustment for improving the adherence to the buccal mucous membrane; the performance as to the controlled releasing of drugs; water absorption while analyzing the mass loss; pH measurements of the residual liquid in different periods of time; the plaster cytotoxicity in cell and fibroblast culture. Through the analyzes it was observed that the bandages absorb water and lose mass, it means that they decompose and release their property in the middle. The bandages with drug in viability analysis were cytotoxic cell and different concentrations of drug should be study.

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Zanoelo, Fabiana Fonseca. "Caracterização bioquímica das ß-glucosidases do Scytalidium thermophilum." Universidade de São Paulo, 2005. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59139/tde-05072007-161456/.

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Abstract:

A celulose é a mais abundante fonte de carbono presente na madeira e nos resíduos agrícolas, e a sua hidrólise completa é realizada pela ação sinergística de diferentes enzimas, como: as endo-1,4-ß-D-glucanase, exo-1,4-ß-glucanase e ß-glucosidase ou celobiase. O presente trabalho descreve algumas propriedades fisiológicas e bioquímicas do sistema ß-glucosidásico do fungo termofílico Scytalidium thermophilum. Tal fungo foi isolado originalmente do solo da Índia e gentilmente cedido pelo Dr. G. Straastma (Holanda). O meio M8 favoreceu a produção das ß-glucosidases. Entre os açúcares testados como fonte de carbono, avicel e celobiose foram os melhores indutores das ß-glucosidases extracelular e micelial. Quando o fungo foi crescido em dois estágios, observou-se inicialmente a repressão da síntese por glicose e a indução por avicel ou celobiose. Utilizando-se ciclo-heximida, observou-se a síntese \"de novo\" das proteínas. A ß-glucosidase extracelular foi purificada utilizando-se um fracionamento protéico e uma coluna de troca-iônica DEAE-celulose, de onde foram obtidos duas atividades enzimáticas denominadas ß-glucosidases I e II. A ß-glucosidase I foi aplicada em coluna de troca iônica CM-celulose, enquanto que a ß-glucosidase II foi aplicada em Sephadex G-100. A ß-glucosidase I foi purificada 2 vezes com 4.0% de recuperação, ao passo que a ß-glucosidase II foi purificada 2,4 vezes com 2.0% de recuperação. A ß-glucosidase micelial foi purificada utilizando-se um choque térmico, fracionamento protéico, coluna de filtração Sephadex G-100 e uma coluna troca-iônica DEAE-celulose. Foi purificada 23 vezes com recuperação de 25%. A ß-glucosidases extracelular I e micelial apresentaram um temperatura ótima aparente de 70 e 60°C e um pH de 5.5 e 6.0, respectivamente. Ambas enzimas foram inibidas por Ag+2 e Hg+2. A ß-glucosidases extracelular I e micelial possuem um peso molecular de 40.7 kDa e 39kda (SDS-Page) e 57 kDa e 33,8 kda (Sephadex G-100), respectivamente. A ß-glucosidase extracelular I foi capaz de hidrolisar PNP-glu, PNP-xil, celobiose, xilana e CMC, enquanto que a ß-glucosidase micelial hidrolisou PNP-glu, PNP-fuc, PNP-xil, PNPgal, ONPG e lactose. Ambas enzimas foram ativadas por glicerol a 1M. A ß-glucosidase extracelular I foi ativada por xilose, frutose e lactose, e se mostrou resistente a glicose 50mM, enquanto que a ß-glucosidase micelial foi ativada por glicose e xilose. ß-glucosidases extracelular I e micelial apresentaram um PI de 4.0 e 6.5, respectivamente. Os parâmetros cinéticos estimados para a ß-glucosidase extracelular I foram de Km 4,33 e 0,342mM e Vmáx de 5,37 e 2,0µmoles/min/mg prot. para celobiose e PNP-glu, respectivamente. O valor de Ki (Constante de Inibição) foi de 71mM para glicose. Para a ß-glucosidase micelial, os valores de Km e Vmáx foram de 0,29mM e 13,27µmoles/min/mg prot; 0,5 mM e 7,25µmoles/min/mg prot e 1,61 mM e 4,12µmoles/min/mg prot para os substratos PNP-glu, PNP-fuc e celobiose, respectivamente. Na presença de glicose e xilose os valores de Km e Vmáx foram de 1,26mM e 40,04 µmoles/min/mg.prot, e 1,33mM, e 30,49 µmoles/min/mg prot, respectivamente para o PNP-glu. O valor de Ki (Constante de Inibição) foi de 1,32mM para celobiose. A análise dos produtos de hidrólise das ß-glucosidases extracelular I e micelial foram anlisadas em TLC, e revelaram que ambas enzimas realizam hidrólise quando celobiose foi utilizada a 10mM, e transglicosilação quando celobiose foi utilizada a 250mM. Os resultados aqui apresentados demonstram importante papel importante do Scytalidium como produtor de ß-glucosidase com potencial na sacarificação enzimática da celulose.
Cellulose is the most abundant carbon source found in woods and waste residues. In nature the complete hidrolysis of cellulose occurs by the sinergistic action of several enzymes such endo-1,4-ß-D-glucanase, exo-1,4-ß-glucanase e ß-glucosidase or cellobiase. The present work describe some physiological and biochemical properties of ß-glucosidase system from thermophilic fungus Scytalidium thermophilum. The fungus was gift to Dr. Straastma (Mushroom Experimental Station, The Netherlands). The culture medium M8 enhance the production of ß-glucosidase. Among carbohydrates tested as carbon source, avicel and cellobiose were the best inducers of ß-glucosidase extracellular and mycelial. When the fungus was grown in two stages, observed the repression by glucose, and induction by avicel or cellobiose. The presence of cycloheximide inhibited the syntesis of ß-glucosidase, suggesting that the enzyme produced in the presence of indutors required \"de novo\" synthesis. Extracellular ß-glucosidase was purified using the precipitation with 75% amonium sulfate, ion exchange cromatography column DEAE-cellulose, and were obtained two activities: ß-glucosidase extracellular I and II. The ß-glucosidase I was applied to a CM-cellulose colunm, while ß-glucosidase II was applied to a Sephadex G-100 colunm. The ß-glucosidase II was purified two times and 4% yield, and the ß-glucosidase II was purified 2,4 times and 2% yield. The mycelial ß-glucosidase was purified using the termic treatment, a precipitation with 75% amonium sulfate followed by Sephadex G-100 and DEAEcellulose. The enzyme was purified 23 time with 23% yield. The ß-glucosidase extracellular II and mycelial shown optima of temperature and pH of 60°C and 70°C, 4.4 and 6.0, respectively. Hg+2 and Ag+2 ions were strong inhibitors of ß-glucosidase extracellular I and mycelial. The molecular weight of ß-glucosidase extracellular I and mycelial was stimated as 40.7 KDa and 39KDa (SDS-PAGE) and 57kDa and 33.8 kDa (Sephadex G-100). The ß-glucosidase extracellular I hydrolyzed PNP-glu, PNP-xyl, cellobiose,xylan and CMC, while ß-glucosidase mycelial hydrolyzed PNP-fuc, PNP-xyl, PNP-gal, ONPG and lactose. Both enzymes were activeted by glycerol 1M. The ß-glucosidase extracellular I was activeted by xylose, fructose and lactose, and show strong at glucose 50mM. The ß-glucosidase mycelial was activeted by glucose and xylose. ß-glucosidase extracellular I and mycelial shows PI 4.0 and 6.5, respectively. The kinects studies reveled for ß-glucosidase extracellular I a Km of 4,33 and 0,342mM and Vmáx of 5,37 and 2,0µmoles/min/mg prot for cellobiose and PNP-glu, respectively. The Ki values obtained from Dixon plots was 71mM for glucose. To ß-glucosidase mycelial the Km and and Vmáx were 0,29mM e 13,27µmoles/min/mg prot; 0,5 mM e 7,25µmoles/min/mg prot and 1,61 mM and 4,12µmoles/min/mg prot for PNP-glu, PNPfuc and cellobiose, respectively. Using xylose or glucose the Km and Vmáx was 1,26mM e 40,04 µmoles/min/mg.prot, and 1,33mM, e 30,49 µmoles/min/mg prot, respectively for PNP-glu. The Ki values obtained from Dixon plots was 1,32mM using cellobiose. The products of hydrolisis of cellobiose by the action of purified enzymes glucosidase extracellular I and mycelial were analised in thin-layer-cromatography, and show hydrolisis of cellobiose at 10mM,and transglycosilation reaction when cellobiose was using at 250mM. The intrinsic biochemical and regulatory properties the ß-glucosidase system of Scytalidium support the idea that organism may be useful for biotechnological applications.

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Díaz, Camal Nidya. "Bioquímica, Farmacología y Toxicidad de los Medicamentos Antidepresivos." Tesis de maestría, Universidad Autónoma del Estado de México, 2022. http://hdl.handle.net/20.500.11799/112706.

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Abstract:

Tesis de Maestría
Desde la década de los noventa, ha crecido el interés en el ámbito científico por el estudio de los contaminantes emergentes, es decir, compuestos químicos cuya presencia en el medio ambiente ha pasado desapercibida. Los residuos farmacéuticos pertenecen a este grupo y representan un grave problema medioambiental debido a su elevado consumo. Los fármacos antidepresivos ilustran esta cuestión, ya que se recetan habitualmente en todo el mundo debido al aumento de la incidencia de los trastornos depresivos y de ansiedad, por lo que su consumo ha ido en aumento, siendo los ISRS los fármacos de primera línea que se recetan para contrarrestar los síntomas de estas enfermedades. Además, la pandemia del COVID-19, tras alterar la vida cotidiana con efectos sanitarios y económicos, ha provocado un impacto negativo en nuestra salud física y mental, provocando un aumento de los niveles de estrés, depresión y ansiedad, y por tanto, del consumo de estos fármacos. La presencia de antidepresivos en diferentes ecosistemas, incluso en concentraciones traza, podría tener un impacto negativo en la biodiversidad, particularmente en los organismos acuáticos, ya que son los más vulnerables debido a su constante exposición al agua, contenida en ríos y lagos contaminados con estos compuestos, durante su ciclo de vida. En este documento se describen los fármacos antidepresivos, en particular los ISRS, su consumo, sus características farmacológicas, sus efectos ecotoxicológicos en diferentes eslabones de la cadena trófica, así como los métodos y técnicas de eliminación más eficaces publicados en los últimos años.
Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología

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Costa, Roner Ferreira da. "Bioquímica quântica das estatinas, aspirina e anti-hipertensivos." reponame:Repositório Institucional da UFC, 2011. http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/12543.

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Abstract:

COSTA, Roner Ferreira da. Bioquímica quântica das estatinas, aspirina e anti-hipertensivos. 2011. 185 f. Tese (Doutorado em Física) - Programa de Pós-Graduação em Física, Departamento de Física, Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2011.
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As doenças cardiovasculares (CVDs) compreendem um amplo espectro de doenças do coração e vasos sanguíneos (artérias e veias), entre as quais se incluem a doença das artérias coronárias, o ataque cardíaco, a angina, a síndrome coronariana aguda, o aneurisma da aorta, arritmias cardíacas, a doença cardíaca congênita, a insuficiência cardíaca e a doença cardíaca reumática. Entre os principias fármacos que tratam as doenças cardiovasculares estão: (i) as estatinas, que atuam inibindo a 3-hidroxi-3-metilgluratil coenzima A (HMG-CoA) redutase no processo de conversão da HMG-CoA em mevalonato, numa das etapas da biossíntese do colesterol. Observa-se em ensaios clínicos que a ação das estatinas pode diminuir os níveis de colesterol de baixa densidade (LDL) entre 20\% e 60\%, reduzindo os eventos coronarianos em até 1/3 no período de cinco anos; (ii) a aspirina, com a qual há mais de 400 preparações nos EUA e se produz cerca de 20 mil toneladas anualmente. Após mais de um século de prática clínica, a aspirina continua sendo a droga antitrombótica, antitérmica, analgésica e antiproliferativa mais amplamente recomendada. Ela age bloqueando a biossíntese de hormônios inflamatórios prostanóides através da inibição das enzimas ciclooxigenase COX-1 e COX-2; (iii) os anti-hipertensivos, para os quais a Enzima Conversora de Angiotensina (ECA) é o principal alvo (inibidores da ECA estão no mercado a mais de 20 anos) visando o combate das pressões arteriais elevadas, que provocam alterações nos vasos sanguíneos e na musculatura do coração, e levam a hipertrofia do ventrículo esquerdo do coração, acidente vascular cerebral, infarto do miocárdio, morte súbita, insuficiências renal e cardíaca, etc. A hipertensão arterial (HTA) ou hipertensão arterial sistêmica (HAS), conhecida popularmente como pressão alta, é uma das doenças com maior prevalência no mundo moderno. A ECA atua na regulação da pressão sanguínea via conversão do decapeptídeo angiotensina I no potente vasopressor angiotensina II e também pela inativação da bradicinina, sendo componente central do Sistema Renina-Angiotensina-Aldeosterona (SRAA), que controla a pressão sanguínea e tem forte influência nas funções relacionadas ao coração e os rins, bem como na contração dos vasos sanguíneos. Nesta tese realiza-se um estudo da bioquímica quântica de estatinas (atorvastina, rosuvastatina, cerivastatina, mevastatina, sinvastatina e fluvastatina), da aspirina/bromoaspirina e de anti-hipertensivos (captopril, enalapril, lisinopril, ramipril, trandolapril e perindopril) levando-se em conta dados cristalográficos dos seus sítios de ligação nas proteínas HMGR, COX-1 (o da aspirina foi simulado partindo-se dos dados da bromoaspirina) e ECA, respectivamente. As simulações computacionais foram realizadas considerando-se a Teoria do Funcional de Densidade (DFT) na aproximação da densidade local (LDA) e funcional de troca e correlação PWC, com energia de interação entre os resíduos das proteínas circunscritos ao sítio de ligação de raio r e os fármacos calculada através do método de fracionamento molecular com capas conjugadas (MFCC). Os resultados obtidos para as estatinas sugerem que: (i) as mais (menos) eficazes são a atorvastatina e a rosuvastatina (sinvastatina e fluvastatina), o que está de acordo com a clínica e valores dos seus índices de concentrações inibitórias IC50; (ii) sítios de ligação com raios de pelo menos 12 Å (além do raio de 9,5 Å sugerido pela análise estrita de dados cristalográficos) devem ser considerados para que resíduos importantes como E665, D767, e R702 sejam considerados para que as eficiências das estatinas sejam corretamente explicadas. Para a aspirina/bromoaspirina utilizou-se um refinamento quântico de segunda ordem dos dados cristalográficos para se demonstrar que a energia de ligação de ambos com a COX-1 são aproximadamente a mesma, o que explica resultados experimentais de IC50 similares. A existência de resíduos atrativos e resulsivos é destacada, mostrando-se que Arg120 é o resíduo que mais atrai o ácido salicílico após acetilação da Ser530, seguido de Ala527, Leu531, Leu359 e Ser353; por outro lado, Glu524 é o resíduo repulsivo mais efetivo (intensidade comparável ao Arg120), nunca tendo sido antes considerado como resíduo importante no sítio de ligação da aspirina/bromoaspirina na COX-1. Finalmente, no caso dos anti-hipertensivos, obtém-se que é necessário se considerar raios do sítio de ligação de 16 Å para se obter que o lisinopropil e o ramipril (trandolapril e perindopril) apresentam as maiores (menores) energias de ligação, o que explica a maior (menor) constante de inibição dos mesmos entre os anti-hipertensivos estudados para a ACE da Drosophila melanogaster.

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Thomaz, Daniel [UNESP]. "Melhoramento das condições de hidratação da levedura seca instantânea de panificação por tratamentos com soluções de aditivos." Universidade Estadual Paulista (UNESP), 2008. http://hdl.handle.net/11449/87980.

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Abstract:

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-29Bitstream added on 2014-06-13T19:28:58Z : No. of bitstreams: 1 thomaz_d_me_araiq.pdf: 857603 bytes, checksum: b018c2e63051b94c8ef590d12caf9e91 (MD5)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
A hidratação é uma fase crítica no uso da levedura seca instantânea por depender do meio líquido usado, da temperatura e do tempo de hidratação. A levedura seca apresenta-se como um material biológico de grande heterogeneidade celular. Hidratação direta do fermento seco com soluções de aditivos, bem como, o tratamento do fermento seco, mas previamente hidratado com água foram acompanhados por medidas de viabilidade e atividade de fermentação (variações em volume de massa e evolução de CO2). O efeito do tempo de abertura da embalagem do fermento seco sobre as variações em viabilidade celular teores de glicerol interno e atividade de fermentação também foram determinados. Os seguintes tratamentos foram aplicados a levedura, previamente hidratada em água: (a) incubação em solução de citrato; (b) aplicação de choque térmico as células suspensas em solução de citrato. A levedura seca foi hidratada diretamente em água a temperatura ambiente e em solução de lisina a 37oC. As hidratações diretas do fermento seco com soluções de citrato 0,15 mol.L-1 a pH 6,9 e 7,5 por 40 min a temperatura ambiente proporcionaram aumentos em volume de massa da ordem de 25-29% (35,4-36,6 mL/180 min de fermentação) em relação ao controle (28,3 mL/180 min de fermentação). No entanto, a hidratação direta do fermento seco com água por 10 min a temperatura ambiente proporcionou um volume de massa (36,0 mL/150 min de fermentação) tão bom quanto aos obtidos com solução de citrato, mas com tempos de hidratação e fermentação menores. As hidratações diretas, do fermento seco, com soluções de glicose 2,0% e 0,5% por 40 min a temperatura ambiente proporcionaram aumentos em volume de CO2 da ordem de 33-38% (53,7-56,0 mL/180 min de fermentação) em relação ao controle (40,5 mL/180 min de fermentação).
Hydration is a critical phase in the use of instant dry yeast because it depends on the liquid media used, temperature and hydration time. Instant dry yeast is showed as biological material of great cellular heterogeneity. Direct hydration of instant dry yeast in additive solutions as well as the treatment of the instant dry yeast, but previously hydrated in water, were followed by viability measures and activity of fermentation (variations in dough volume and CO2 evolution). The time effect of the opened packing of the instant dry yeast on the fermentation activity, the internal glycerol and the cellular viability variations were also determined. The following treatments were applied to yeast, previously hydrated in water: a) incubation in citrate solution; b) application of heat shock to suspension cells in citrate solution. Instant dry yeast was directly hydrated in water at room temperature and in lysine solution at 37oC. Direct hydrations of instant dry yeast in 0,15 mol.L-1 citrate solutions at pH 6.9 and 7.5 for 40 min at room temperature provided increases in dough volume around 25- 29% (35.4-36.6 mL/180 min of fermentation) in relation to the control (28.3 mL/180 min of fermentation). However, direct hydration of instant dry yeast in water for 10 min at room temperature provided a dough volume (36.0 mL/150 min fermentation) as good as the ones obtained after citrate hydration, but with shorter hydration and fermentation time. Direct hydration of instant dry yeast in 2.0% e 0.5% glucose solutions for 40 min at room temperature provided increases in CO2 evolution around 33-38% (53.7-56,0 mL/180 min of fermentation) in relation to the control (40.5 mL/180 min of fermentation). However, direct hydration of instant dry yeast in water for 10 min at room temperature provided a CO2 evolution (79.0 mL/180 min of fermentation) bigger than the CO2 evolution previously obtained with glucose hydration.

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Thomaz, Daniel. "Melhoramento das condições de hidratação da levedura seca instantânea de panificação por tratamentos com soluções de aditivos /." Araraquara : [s.n.], 2008. http://hdl.handle.net/11449/87980.

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Abstract:

Orientador: Cecília Laluce
Banca: Rubens Monti
Banca: Sandra Regina Pombeiro Sponchiado
Banca: Maristela de Freitas Sanches Peres
Resumo: A hidratação é uma fase crítica no uso da levedura seca instantânea por depender do meio líquido usado, da temperatura e do tempo de hidratação. A levedura seca apresenta-se como um material biológico de grande heterogeneidade celular. Hidratação direta do fermento seco com soluções de aditivos, bem como, o tratamento do fermento seco, mas previamente hidratado com água foram acompanhados por medidas de viabilidade e atividade de fermentação (variações em volume de massa e evolução de CO2). O efeito do tempo de abertura da embalagem do fermento seco sobre as variações em viabilidade celular teores de glicerol interno e atividade de fermentação também foram determinados. Os seguintes tratamentos foram aplicados a levedura, previamente hidratada em água: (a) incubação em solução de citrato; (b) aplicação de choque térmico as células suspensas em solução de citrato. A levedura seca foi hidratada diretamente em água a temperatura ambiente e em solução de lisina a 37oC. As hidratações diretas do fermento seco com soluções de citrato 0,15 mol.L-1 a pH 6,9 e 7,5 por 40 min a temperatura ambiente proporcionaram aumentos em volume de massa da ordem de 25-29% (35,4-36,6 mL/180 min de fermentação) em relação ao controle (28,3 mL/180 min de fermentação). No entanto, a hidratação direta do fermento seco com água por 10 min a temperatura ambiente proporcionou um volume de massa (36,0 mL/150 min de fermentação) tão bom quanto aos obtidos com solução de citrato, mas com tempos de hidratação e fermentação menores. As hidratações diretas, do fermento seco, com soluções de glicose 2,0% e 0,5% por 40 min a temperatura ambiente proporcionaram aumentos em volume de CO2 da ordem de 33-38% (53,7-56,0 mL/180 min de fermentação) em relação ao controle (40,5 mL/180 min de fermentação).
Abstract: Hydration is a critical phase in the use of instant dry yeast because it depends on the liquid media used, temperature and hydration time. Instant dry yeast is showed as biological material of great cellular heterogeneity. Direct hydration of instant dry yeast in additive solutions as well as the treatment of the instant dry yeast, but previously hydrated in water, were followed by viability measures and activity of fermentation (variations in dough volume and CO2 evolution). The time effect of the opened packing of the instant dry yeast on the fermentation activity, the internal glycerol and the cellular viability variations were also determined. The following treatments were applied to yeast, previously hydrated in water: a) incubation in citrate solution; b) application of heat shock to suspension cells in citrate solution. Instant dry yeast was directly hydrated in water at room temperature and in lysine solution at 37oC. Direct hydrations of instant dry yeast in 0,15 mol.L-1 citrate solutions at pH 6.9 and 7.5 for 40 min at room temperature provided increases in dough volume around 25- 29% (35.4-36.6 mL/180 min of fermentation) in relation to the control (28.3 mL/180 min of fermentation). However, direct hydration of instant dry yeast in water for 10 min at room temperature provided a dough volume (36.0 mL/150 min fermentation) as good as the ones obtained after citrate hydration, but with shorter hydration and fermentation time. Direct hydration of instant dry yeast in 2.0% e 0.5% glucose solutions for 40 min at room temperature provided increases in CO2 evolution around 33-38% (53.7-56,0 mL/180 min of fermentation) in relation to the control (40.5 mL/180 min of fermentation). However, direct hydration of instant dry yeast in water for 10 min at room temperature provided a CO2 evolution (79.0 mL/180 min of fermentation) bigger than the CO2 evolution previously obtained with glucose hydration.
Mestre

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Duffau, Garrido Boris Ettienne. "Implementación de dos metodologías alternativas para la determinación de alucinógenos derivados de feniletilamina 25-C, 25-I y 25-B NBOMe en muestras incautadas y biológicas." Tesis, Universidad de Chile, 2016. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/149993.

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Abstract:

Magíster en Bioquímica, Área de especialización: Toxicología y Diagnóstico Molecular
El consumo de drogas de síntesis ha ido en aumento, estos nuevos derivados sintéticos son análogos estructurales de la feniletilamina N-sustituidos, este grupo ha provocado severos casos de intoxicación e incluso probablemente la muerte de varios usuarios. En Chile estas drogas se presentarían principalmente como tres derivados conocidos como 25-I-NBOMe, 25-C-NBOMe y 25-B-NBOMe, y ya han desplazado al LSD como el principal alucinógeno consumido y sin conocerse todavía la concentración de sustancias activas presentes en cada dosis. En este trabajo se desarrollan dos metodologías analíticas para la determinación de compuestos NBOMes en estampillas incautadas en Chile; estas son cromatografía planar instrumental HPTLC y cromatografía de gases con detector de masas GC/MS como técnicas alternativas de fácil manejo y costo. Estas metodologías demostraron ser robustas y confiables para el propósito previsto y una vez validado los métodos se analizaron muestras reales de estampillas, donde más del 90% del total corresponde a 25-C-NBOMe, en un rango de la concentración muy amplio. Posteriormente se implementó y validó una metodología para la detección del principal componente encontrado en estampillas (25-C-NBOMe) pero para la matriz orina como diagnóstico de intoxicación aguda. Según nuestro conocimiento, este es el primer reporte acerca de la composición química de las estampillas de derivados NBOMes empleando las técnicas desarrolladas en este trabajo
The consumption of synthetic drugs has increased, these new synthetic derivatives are structural analogs of N-substituted phenylethylamine, and this group has caused severe cases of poisoning and even death probably in several users. In Chile these drugs are mainly represented as three derivatives known as 25-I- NBOMe, 25-C-NBOMe and 25-B-NBOMe, and have displaced the LSD as the main hallucinogen consumed without know the concentration of active substances in each dose yet. In these work two analytical methodologies for the determination of NBOMes compounds in seized blotters in Chile are developed; these techniques are instrumental planar chromatography HPTLC and gas chromatography with mass detector GC / MS as alternatives with easy handling and cost. These methods proved to be robust and reliable for the intended purpose and once the implemented methods were validated, we analyzed real samples of blotters, where more than 90% of the total was identified as 25-C-NBOMe in a wide range of concentration. Subsequently we implemented and validated a methodology for the detection of the main component found in blotters (25-C-NBOMe) but for analysis of urine as diagnosis of acute poisoning. To the best of our knowledge, this is the first report about chemical composition of blotters with NBOMe derivatives using the techniques developed in this work

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Farro, Erick Giancarlo Suclupe. "Caracterização estrutural e bioquímica das arabinanases de Bacillus licheniformis." Universidade de São Paulo, 2016. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-14102016-091118/.

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Abstract:

As mudanças climáticas estão causando prejuízos em vários setores da economia mundial. Na reunião da COP21, que teve como foco estas mudanças climáticas, participantes do mundo todo decidiram tomar atitudes urgentes para tentar conter aumento da temperatura média global. Dentro deste cenário, a produção e o consumo de energia têm uma importância central, onde fontes de energia renováveis vêm sendo preferidas às fontes de energias fósseis. O Brasil tem uma participação importante na geração de energia renovável mundial aportando um 40% do total de sua matriz energética. A degradação dos componentes da parede celular vegetal tem um vasto potencial na geração de biocombustíveis e outros compostos verdes a partir da celulose, hemicelulose e lignina. Para isto estudos das enzimas capazes de degradas estes componentes vem sendo realizados, com ênfase nas enzimas hidrolases de glicosídeos. Dentre as hidrolases, encontram-se as arabinanases, enzimas capazes de hidrolisar o arabinano, componente polissacídeo da hemicelulose, em L-arabinose. Neste trabalho, estudos envolvendo duas arabinanases de Bacillus licheniformis foram realizados, iniciando na etapa de clonagem dos genes. Os produtos foram transformados em Escherichia coli e expressos e purificados. A avaliação da estabilidade térmica indicou uma afinidade das enzimas por metais divalentes. Tentativas de cristalização resultaram na formação de um cristal, que possibilitou a determinação da estrutura uma das arabinanases. Através de ensaios bioquímicos, foi determinada a especificidade por substrato, temperatura e pH ótimos e a atividade frente a metais. Foi observado que as enzimas são seletivas para arabinano não ramificado, tem temperatura ótima em 45 e 40 graus, para BlAbn-1 e BlAbn-2, respectivamente, e pH ótimo em 8 e 7. Por último, foram realizados ensaios complementares de sinergismo e atividade oxidativa. Embora os ensaios de atividade oxidativa tenham sido inconclusivos, os ensaios de sinergismo mostraram que a enzima BlAbn-1 é capaz de aumentar em 30% a atividade do coquetel enzimático Accellerase 1500 sobre biomassa pré-tratada e sobre celulose pura. Este efeito é ainda maior na presença de sulfato de níquel.
Climate change is causing losses in different sectors of the world economy. At the meeting of COP21, focused on climate changes, participants from around the world decided to take urgent actions to try to halt the increase in global average temperature. Within this scenario, the production and consumption of energy are of central importance, where renewable energy sources have been preferred to fossil fuels. Brazil has an important role in the global renewable energy generation by contributing 40% of its total energy mix. The degradation of the components of plant cell wall has a vast potential in the generation of biofuels and other green chemical from cellulose, hemicellulose and lignin. Thus, studies of enzymes that degrade these components have been carried out, with emphasis on glycoside hydrolases. Among the hydrolases are the arabinanases, enzymes capable of hydrolyzing arabinan, a polysaccharide component of hemicellulose, in L-arabinose. In this work, studies involving two arabinanases from Bacillus licheniformis were carried out, starting in gene cloning step. The products were transformed into Escherichia coli, expressed and purified. The evaluation of the thermal stability of the enzymes showed an affinity for divalent metals. Crystallization attempts resulted in the formation of a single crystal, which made it possible to determine the crystal structure of one arabinanase. Through biochemical assays, it was determined the substrate specificity, optimum temperature and pH and activity against metals. It was observed that the enzymes are selective for non-branched arabinan, have optimum temperature at 45 and 40 degrees, to BlAbn-1 and BlAbn-2, respectively, and optimum pH of 8 and 7. Finally, additional tests were performed to evaluate the possible synergism and oxidative activity. Although the oxidative activity assays were inconclusive, the synergism tests showed that BlAbn-1 is able to increase by 30% the activity of the enzymatic cocktail Accellerase 1500 on pre-treated biomass and on pure cellulose. This effect is even greater in the presence of nickel sulfate.

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Rodrigues, Eleonora Carmona. "Caracterização citogenética e bioquímica do fungo celulolítico Humicola sp." Universidade de São Paulo, 1987. http://teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11138/tde-20181127-154952/.

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Abstract:

O presente trabalho foi realizado com a finalidade de estudar aspectos biológicos básicos do fungo celulolítico Humicola sp. Assim, através da auxanografia, determinou-se que biotina e tiamina eram necessárias ao meio mínimo, para o desenvolvimento de culturas transferidas por inoculação de ponto; contudo, raramente ocorreu germinação nesse meio, quando suspensões de esporos foram semeadas. Devido ao crescimento não individualizado em meio completo, cinco redutores de crescimento foram ensaiados, optando-se pela utilização de citrato de sódio 0,700%, o qual possibilitou redução de 70,1% no diâmetro da colônia, sem prejuízo da sobrevivência. Para indução de mutação foram utilizados: ácido nitroso, etil metano sulfonato, luz ultra-violeta e radiação gama, sendo estabelecidas as curvas de sobrevivência de esporos desse fungo, quando submetidos a esses mutagênicos. Foram então isolados três mutantes auxotróficos e 27 mutantes morfológicos, que posteriormente foram caracterizados. Observações citológicas de núcleos em 250 esporos da linhagem selvagem indicaram que a classe mais freqüente, constituía de 12 núcleos por esporo, evidenciando o estado multinuclear dos conídios desse·fungo. Isso pode permitir a ocorrência de heterocariose, e ser responsável, pelo menos em parte, pela variabilidade observada. As curvas de distribuição do numero de núcleos por esporo dos mutantes morfológicos, apresentaram máximos para as classes 6, 12, 18 e 24 núcleos, sendo que a linhagem mor10 apresentou pico em 3, podendo ser esse o numero básico de núcleos em esporos dessa espécie. Estudo do comportamento cromossomal durante a divisão nuclear demonstrou que a mitose é similar a de outros fungos filamentosos. O número de cromossomos, observados no final da metáfase, não pode ser determinado, com segurança, mas sugeriu-se estar entre 6 e 8. Em culturas de Humicola sp foi freqüentemente observada anastomose de hifas, possibilitando a ocorrência de heterocariose e/ou heteroplasmose e, indicando que o ciclo parassexual pode ocorrer nessa espécie. A interação entre vários pares de mutantes morfológicos produziu conídios pigmentados semelhantes aos da linhagem selvagem, indicando a ocorrência de algum tipo de sintrofismo ou complementação morfológica. A linhagem selvagem e alguns mutantes morfológicos apresentaram variabilidade quanto à morfologia e produção de celulases. Assim, após várias tentativas de estabilização da linhagem selvagem e de alguns mutantes morfológicos, foram determinadas as atividades exoglucanase, endoglucanase, β-glicosidase, amilase e protease neutra dos mesmos. A atividade β-glicosidase do mutante mor13 foi superior à do selvagem e mor21 destacou-se como melhor produtor de amilase, apesar do selvagem ter demonstrado boa produção das referidas enzimas. Coeficiente de correlação altamente significativo foi verificado entre as atividades exoglucanase-endoglucanase, sugerindo que as mesmas devem ser correguladas nesse microorganismo. Correlações significativas foram verificadas, também entre exoglucanase - protease, endoglucanase - protease e β-glicosidase - protease.
This research was carried out aiming to study some biological aspects of Humicola sp., a cellulolytic fungus. Through the auxanographical assay, it was determined that biotin and thiamine are essential for the growth of this fungus. It rarely occured germination in minimal medium, when spore suspensions were plated. Since the colonies were not grown in complete medium independently, five growth reducers were tested. Sodium citrate at the concentration of 0.700% reduced in 70.1% of the colony size, however did not affect the fungus survival. Nitrous acid, sulfonethylmethane, ultra-violet light and gamma ray were used to induce mutation. The survival ratio of this fungus was observed. From these treatments, three auxotrophic and 27 morphological mutants were isolated and characterized. From the cytological observation, multinuclear conditions were observed in the spore ce11s and myce1ium both wild and mutant strains. It might be possible the occurrence of heterokaryosis and probably it is·responsible for part of the variability. Observations of the nuclei in 250 spores of wild strains showed that the most frequent class included 12 nuclei per spore. Classes with 6, 12, 18 and 24 nuclei per spore were observed in morphological mutants. Three nuclei as the most frequent class was observed in the mutant strain mor10. It suggested that the basic number of nuclei in this fungus is three. The chromosomal behaviour showed a typical mitosis similar to other filamentous fungi. The chromosome number observed at the end of metaphase could not properly determined, however it might be between 6 and 8. In general, Humicola sp. showed anastomosis and it allows the occurrence of heterokaryosis and/or heteroplasmosis. It suggests that the parasexual cycle can occur in this fungus. The association of two morphological mutants produced pigmented spores suggesting some kind of synthrophism or morphological complementation. The wild strain and some morphological mutants showed wide variability concerning to morphology and cellulase production. Five enzyme systems: exoglucanase, endoglucanase, Βglucosidase, amylase and neutral protease activities were analysed in wild and selected mutants. Besides the suitable production of Βglucosidase and amylase by the wild strain, the mutant mor13 was better producer of Βglucosidase and mor21 for amylase. Highly significant level of correlation was observed between exoglucanase and endoglucanase activities showing co-regulation of these enzymes in this fungus. Significant level of correlations were obtained to exog1ucanase-protease, endoglucanase-protease and Βg1ucosidase-protease production, as well.

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PIRES, Isa Raquel Paiva. "Transglutaminases de Anopheles gambiae: caracterização molecular, bioquímica e histológica." Master's thesis, Instituto de Higiene e Medicina Tropical, 2012. http://hdl.handle.net/10362/11345.

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Abstract:

A malária é causada por parasitas protozoários do género Plasmodium spp, a sua transmissão aos humanos deve-se à picada infecciosa de mosquitos fêmea do género Anopheles spp, sendo Anopheles gambiae o vector mais eficiente de malária em todo o mundo. O intestino médio do mosquito representa um dos ambientes mais desafiantes à sobrevivência e desenvolvimento do parasita, e é, portanto, também um dos locais mais atraentes para novas estratégias de controlo da malária, pois é onde se observa uma diminuição acentuada na população de parasitas invasores. A transglutaminase (TGM) desempenha um papel importante e diversificado em mamíferos, tais como a coagulação e a formação da barreira epitelial, catalisando o “crosslinking” entre proteínas. Em invertebrados, como Drosophila sp, a proteína TGM mostrou estar envolvida na defesa imunitária. O mosquito A. gambiae tem codificado no seu genoma três TGMs, o gene AGAP009099, já caracterizado, é expresso exclusivamente nas MAGs (glândulas auxiliares masculinas). Os genes AGAP009098 e AGAP009100, cujas funções não foram ainda clarificadas, são expressos ubiquamente e em baixos níveis. No presente trabalho, propõe-se a caracterização das duas proteínas codificadas por estes genes, de forma a identificar o modo como estas proteínas interagem dentro do mosquito, a esclarecer o seu papel na invasão do intestino médio de A. gambiae por Plasmodium spp., o que permitirá averiguar o seu envolvimento ao nível da imunidade inata do mosquito. Foi produzida e purificada a proteína recombinante AgTGM98-1, que se utilizou para a produção de um anticorpo anti-AgTGM98. A atividade de TGM no mosquito não se mostrou estatisticamente significativa entre os estadios larvares, pupas e adultos. A caracterização bioquímica de AgTGM98 e AgTGM100 revelou a possível existência de proteínas do tipo TGM. Através de western blotting, verificou-se uma diminuição de AgTGM98, comparando mosquitos não infetados com infetados por P. berghei, o que sugere alterações na expressão desta proteína face à invasão pelo parasita, o que pode significar o seu envolvimento direto na infeção. Caracterizou-se, por imunohistoquímica (IHC) a localização de AgTGM98 e AgTGM100 em intestinos médios de mosquitos. A proteína AgTGM98 apresentou uma localização membranar, na parte basal do intestino médio e com distribuição ao longo deste. Contrariamente, a AgTGM100 tem uma localização intracelular e uma distribuição presente apenas no proventrículo e zona mais apical do intestino médio durante uma fase da sua existência, sendo com o passar do tempo detectada em todo o intestino médio.
Malaria is caused by protozoan parasites of the genus Plasmodium spp, its transmission to humans. Malaria is due the bite of infected female mosquitoes of the genus Anopheles spp, being Anopheles gambiae the most efficient vector of malaria worldwide. The mosquito midgut is one of the most challenging environments for the survival and development of the parasite, representing a bottleneck in the parasite development, which makes it one of the most attractive sites for designing new strategies for malaria control. Transglutaminase (TGM) plays an important and diversified role in mammals such as coagulation and formation of the epithelial barrier, catalyzing protein crosslinking. In invertebrates, such as Drosophila sp, TGM protein was shown to be involved on immune defense. The mosquito A. gambiae has encoded on his genome three TGMs, the gene AGAP009099, already characterized, is expressed exclusively in MAG (male auxiliary glands). The genes AGAP009098 and AGAP009100, although still unclear their functions are ubiquitously expressed at low levels. In this work, we propose the characterization of the two proteins coded by these genes, in order to identify how these proteins interact within the mosquito, to help clarifying the invasion of the midgut of A. gambiae by Plasmodium spp., and clarify their role in innate immunity. We had been able to produce and purify a recombinant protein AgTGM98-1, which was used for the production of an anti-AgTGM98 antibody. The activity of mosquito TGMs was not statistically significant between the larval stages, pupae and adults. Biochemical characterization of AgTGM98 and AgTGM100 revealed the possible existence of TGMs-like proteins. By western blotting, it was observed a decrease in the amount of AgTGM98, when comparing non-infected mosquitoes with P. berghei infected mosquitoes, which suggest changes in the expression of this protein, related to parasite invasion, which may indicate its direct involvement in infection. We had also characterized, by immunohistochemistry (IHC) the location of AgTGM98 and AgTGM100 in midguts of mosquitoes. The protein AgTGM98 localizes on the midgut basal membrane with a distribution along this organ. By opposition to AgTGM100, which has an intracellular localization in the proventriculus and apical region, becoming evenly distributed all over the midgut over time.

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Almeida, Maria do Rosário Rodrigues de. "Caracterização genética e bioquímica de variantes moleculares de transtirretina." Doctoral thesis, Universidade do Porto. Reitoria, 1995. http://hdl.handle.net/10216/10314.

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Tabacchi, B. Patricia, and A. Fred García. "Caracterización bioquímica del alga gigartina chamissoi (Bahía de Ancón)." Revista de Química, 2013. http://repositorio.pucp.edu.pe/index/handle/123456789/99553.

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Marchese, Roselei Maria Machado. "Produção de vídeos didáticos sobre a bioquímica dos carboidratos." reponame:Repositório Institucional da UnB, 2011. http://repositorio.unb.br/handle/10482/9815.

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Abstract:

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas Instituto de Física, Instituto de Química, Programa de Pós-Graduação em Ensino de Ciências, Mestrado Profissional em Ensino de Ciências, 2011.
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Este trabalho descreve o desenvolvimento de um material didático interativo naforma de vídeo flash com a proposta de facilitar a aprendizagem de conceitos da bioquímica de carboidratos e promover a integração interdisciplinar com conceitos biológicos do ciclo do carbono. A proposta surgiu da percepção das dificuldades que o professor enfrenta para ministrar de forma significativa aulas sobre a bioquímica de carboidratos, bem como a dificuldade que os alunos tem de entender e contextualizar o conteúdo. O trabalho foi desenvolvido tendo como base a teoria da aprendizagem significativa de Ausubel. Antes de construir o vídeo flash consideramos a pesquisa realizada através de questionário com professores de biologia, e química do ensino médio e também de bioquímica do ensino superior. Depois de construído, o vídeo flash foi avaliado por meio de um pré e pós teste, além da comparação entre alunos que usaram e não usaram esse material. O resultado da análise estatística dos testes aplicados aos alunos do ensino médio foi positivo, demonstrando que o uso do material auxilia na construção de conhecimentos. A avaliação subjetiva confirmou que os alunos gostaram deestudar com o material pois a grande maioria considerou produtivo o seu uso. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT
This paper describes the development of an interactive educational material in the form of flash video with the proposal to facilitate the learning of concepts of the biochemistry of carbohydrates and promote interdisciplinary integration with biological concepts of the carbon cycle. The proposal arose from the perception of the difficulties facing the teacher to teach classes significantly on the biochemistry of carbohydrates, as well as the difficulty that students have to understand and contextualize the content. The work was based on theoretical; the method of Ausubel's meaningful learning. Before building the flash video, consider using a questionnaire survey conducted with teachers of biology, chemistry and Secondary Education, and biochemistry of higher education. Once completed, the flash video was evaluated through a pre and post test, and the comparison between students who used and did not use this material. The result of statistical analysis applied to test high school students was positive, demonstrating that the use of the material helps to build knowledge. Subjective evaluation confirmed that the students liked de estudar with the material because the vast majority considered productive use.

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Rosa, Priscila Machado da. "Avaliação bioquímica de células-tronco mesenquimais de camundongos NOD." reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS, 2013. http://hdl.handle.net/10183/87589.

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Abstract:

A hiperglicemia é uma característica do diabetes mellitus responsável por complicações micro e macrovasculares, que são a principal causa de morbidade/mortalidade em pacientes diabéticos, representando um problema clínico e econômico. Diante de um quadro de hiperglicemia, o aumento na produção de espécies reativas de oxigênio aumenta a atividade de rotas metabólicas que causam dano vascular. Células-tronco mesenquimais (MSCs) são células multipotentes que têm sido vistas como uma atraente ferramenta para o estudo de terapia celular em diversas doenças como diabetes mellitus tipo 1. Devido à origem perivascular das MSCs, elas podem ser alvos da hiperglicemia, levando a um aumento do estresse oxidativo. O objetivo deste estudo foi avaliar e comparar alterações ultra-estruturais e parâmetros de estresse oxidativo de MSCs derivadas de pâncreas e rim de camundongos NOD diabéticos, NOD não diabéticos, e BALB/c. Nossos resultados mostram um aumento do estresse oxidativo causado pela hiperglicemia em MSCs de camundongos NOD diabéticos. Estas células mostraram uma mudança expressiva na morfologia ultraestrutural das mitocôndrias, aumento na produção de espécies reativas, desequilíbrio da atividade de enzimas antioxidantes e dano oxidativo em proteínas em comparação com os controles não diabéticos, NOD e BALB/c.
Hyperglycemia is a characteristic of diabetes mellitus responsible for micro- and macro- vascular complications which are the main cause of morbidity/mortality in diabetic patients representing a clinical and economic issue. Under hyperglycemic conditions the increase in reactive oxygen species production activates four main pathways that cause vascular damage. Mesenchymal stem cells (MSCs) are multipotent cells which have been seen as attractive tools in cell therapy for many diseases such as diabetes mellitus type 1. Due to the perivascular origin of MSCs they can be affected by hyperglycemia which increases oxidative stress. Our aim in this study was evaluate and compare ultrastructural changes and oxidative stress parameters on MSCs derived from pancreas and kidney of diabetic NOD mice, nondiabetic NOD mice and BALB/c mice. Our results show an increase of oxidative stress caused by hyperglycemia in MSCs from diabetic NOD mice (NOD+). These NOD+MSCs showed an expressive change in ultrastructural morphology of mitochondria, an increase in reactive species content, imbalance of antioxidant enzymes activity and an oxidative damage in proteins compared to no diabetic controls NODand BALB/c.

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Duffeck, Carlos Eduardo. "Prospecção de queratinases microbianas : produção e caracterização bioquímica funcional /." São José do Rio Preto, 2020. http://hdl.handle.net/11449/192738.

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Abstract:

Orientador: Ronivaldo Rodrigues da Silva
Resumo: Atualmente, a avicultura é um dos setores de grande impacto na economia brasileira. Nos últimos anos, tem sido observado um aumento na produção de frangos de corte, fazendo com que este segmento da indústria gere toneladas de queratina com o descarte de penas. Isso aponta para a necessidade de degradar este material que emerge como um problema ambiental. Neste cenário, as enzimas queratinolíticas têm despertado interesse biotecnológico devido a peculiar capacidade para a degradação de queratina e a possibilidade de aplicar o hidrolisado protéico para suplementação de ração animal e uso como biofertilizantes. Desta forma, neste trabalho, nós propomos prospectar queratinases pela bactéria Citrobacter diversus e o fungo Coriolopsis byrsina e, em seguida, investigar as características bioquímicas destas enzimas, a fim de propor aplicação na degradação de penas de frango. Em nossos resultados, a bactéria C. diversus foi capaz de degradar quase completamente as penas de frango (0,5%) em meio submerso após 36 h de fermentação. O estudo com o extrato enzimático mostrou máxima atividade caseinolítica a pH 9-10,5 e 50-55 ºC, e queratinolítica a pH 8,5-9,5 e 50 ºC. Em destaque, conforme a estabilidade em incubação por 1 h a 50ºC, foi detectado aproximadamente 50% e 100% da atividade queratinolítica e caseinolítica, respectivamente. Sob estabilidade a pH por 48 h a 4ºC, o extrato enzimático manteve maior atividade na faixa de pH 6-8. A atividade caseinolítica foi inibida por EDTA e PMSF,... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
Abstract: Currently, poultry is one of the sectors of great impact on the Brazilian economy. In recent years, there has been an increase in the production of broilers, causing this segment of the industry to generate tons of keratin with the disposal of feathers. This points to the need to degrade this material, which emerges as an environmental problem. In this scenario, keratinolytic enzymes have aroused biotechnological interest due to the peculiar capacity for the degradation of keratin and the possibility of applying protein hydrolyzate to supplement animal feed and use as biofertilizers. Thus, in this work we propose to prospect keratinases for the bacterium Citrobacter diversus and the fungus Coriolopsis byrsina and, next, to investigate the biochemical characteristics of these enzymes, in order to propose application in the degradation of chicken feathers. In our results, the bacterium C. diversus was able to degrade chicken feathers almost completely (0.5%) in submerged medium after 36 h. The study with the enzymatic extract showed maximum caseinolytic activity at pH 9-10.5 and 50-55 ºC, and keratinolytic activity at pH 8.5-9.5 and 50 ºC. Notably, after enzyme pre-incubation for 1 h at 50 ºC, approximately 50% and 100% of keratinolytic and caseinolytic activity were detected, respectively. Under pH stability for 48 h at 4ºC, the enzyme extract maintained greater activity in the pH 6-8 range. Caseinolytic activity was inhibited by EDTA and PMSF, and keratinolytic activity was i... (Complete abstract click electronic access below)
Mestre

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Rocha, Sónia Graziela Ferreira Moreira da. "Contribuição para a caracterização bioquímica da doença Niemann Pick." Master's thesis, Universidade de Aveiro, 2011. http://hdl.handle.net/10773/7979.

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Abstract:

Mestrado em Biologia Molecular e Celular
A doença de Niemann-Pick tipos A e B (NPD A/B) é uma patologia metabólica hereditária do catabolismo lisossomal dos esfingolípidos causada por mutações no gene SMPD1 que se encontra localizado no cromossoma humano 11p15.4. Este gene codifica a enzima esfingomielinase ácida que catalisa a hidrólise de esfingomielina em ceramida e fosforilcolina. Na doença NPD A/B, a deficiente actividade da esfingomielinase ácida origina a acumulação de esfingomielina em vários tipos de células. Esta doença pode manifestar-se nos primeiros meses de vida e os sintomas principais incluem hepatoesplenomegalia, evidência de envolvimento intersticial pulmonar, atraso do desenvolvimento psico-motor e envolvimento neurológico. No entanto, existem formas clínicas de início mais tardio, com uma evolução mais lenta e sem envolvimento neurológico. Em termos terapêuticos, a suplementação enzimática tem sido investigada encontrando-se actualmente em fase de ensaio clínico. A identificação bioquímica da doença é efectuada através do estudo do nível de actividade enzimática da esfingomielinase ácida em amostras de leucócitos obtidos de sangue total periférico, ou de fibroblastos de pele cultivados, com o substrato natural marcado radioactivamente ou, mais recentemente, com um substrato artificial marcado com um grupo cromogénico. Apesar de tecnicamente mais simples, menos dispendioso e seguro na detecção de mutações com impacto na função catalítica da enzima, o substrato artificial cromogénico não permite detectar mutações específicas que interfiram com o reconhecimento e/ou associação da enzima com o substrato natural (variante pseudo-normal). Apesar de raras, a presença deste tipo de variantes, em homozigotia ou heterozigotia composta, poderá dificultar seriamente o diagnóstico bioquímico da patologia se este for efectuado com substratos sintéticos. No sentido de contribuir para a melhoria da qualidade do diagnóstico bioquímico da NPD A/B, o presente trabalho tem por objectivo a implementação dum ensaio enzimático da esfingomielinase ácida utilizando um substrato sintético fluorogénico. Os resultados obtidos em amostras de leucócitos, fibroblastos e amniócitos sugerem que a inclusão futura deste ensaio fluorimétrico no painel de testes bioquímicos de rastreio pós-natal e pré-natal de Doenças Lisossomais de Sobrecarga permitirá a identificação e a caracterização molecular de doentes com NPD A/B, incluindo os indivíduos afectados com a variante pseudo-normal e, desse modo, contribuirá para um melhor conhecimento sobre a epidemiologia genética da doença na população portuguesa.
Niemann-Pick disease types A and B (NPD-A/B), is an inherited metabolic disorder of lysosomal sphingolipid catabolism caused by mutations in the gene SMPD1 which is located on human chromosome 11p15.4. This gene encodes the enzyme acid sphingomyelinase that catalyzes the hydrolysis of sphingomyelin to ceramide and phosphorylcholine. In NPD-A/B disease, the deficient activity of acid sphingomyelinase results in the accumulation of sphingomyelin in various cell types. The first disease symptoms may appear early in life and include hepatosplenomegaly, evidence of interstitial lung involvement, delayed psychomotor development and neurologic involvement. However, there are clinical forms of later onset, slower evolution and without neurological involvement. In therapeutic terms, the enzyme supplementation has been investigated and is currently undergoing clinical trial. The biochemical identification of the disease is performed by studying the level of enzymatic activity of acid sphingomyelinase in samples of leukocytes obtained from peripheral whole blood, or cultured skin fibroblasts, with the radiolabeled natural substrate or, more recently, with an artificial substrate labeled with a chromogenic group. Although technically simpler, cheaper and safer for the detection of mutations with impact on the catalytic activity of the enzyme, the artificial chromogenic substrate fails to detect specific mutations that interfere with the recognition and/or association of the enzyme with the natural substrate (pseudo-normal variant). Although rare, the presence of such variants in homozygosity or compound heterozygosity, may seriously hamper the biochemical diagnosis of the condition, when using synthetic substrates. In order to contribute to improving the quality of the biochemical diagnosis of NPD A/B, this work aims at the implementation of an enzymatic assay of acid sphingomyelinase using a synthetic fluorogenic substrate. The results obtained in samples of white blood cells, fibroblasts and amniocytes suggest that the future inclusion of this fluorimetric assay in the panel of biochemical tests for postnatal and prenatal screening of lysosomal storage diseases will allow the identification and molecular characterization of patients with NPD-A/B, including individuals affected with the pseudo-normal variant, and thereby contribute to a better understanding of the genetic epidemiology of the disease in the Portuguese population.

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Silva, Sara Raquel dos Santos da. "Tradução e revisão de protocolos no domínio da bioquímica." Master's thesis, Universidade de Aveiro, 2013. http://hdl.handle.net/10773/12004.

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Abstract:

Mestrado em Tradução Especializada
O presente projeto insere-se no Mestrado em Tradução Especializada em Saúde e Ciências da Vida. Este trabalho visa a tradução de quatro protocolos de kits enzimáticos, destinados exclusivamente para a investigação, e de três protocolos experimentais, utilizados nos laboratórios do Departamento de Química, da Universidade de Aveiro. Pretende-se efetuar uma análise crítica à obrigatoriedade ou não de tradução deste género textual, do ponto de vista legal, quer a nível Europeu quer a nível nacional. Mais do que abordar criticamente a legislação referente à tradução de textos de instruções, o projeto visa principalmente descrever e analisar possíveis problemas de tradução, tendo por base o carácter funcionalista da análise textual de Nord e a organização do método tradutivo proposto por Gouadec. Por último, sendo a revisão uma parte importante no processo de tradução, propõe-se a revisão de um protocolo experimental previamente traduzido, com uma abordagem à Norma Europeia de Tradução no que se refere a esta questão e à aplicabilidade desta à prestação de serviços de um tradutor freelance.
This project is part of the Master’s Degree in Specialised Translation in the field of Health and Life Sciences. The aim is to translate four enzymatic kit protocols, intended to be used for research purposes only, as well as three experimental protocols, used in laboratorial classes at the Department of Chemistry in the University of Aveiro. A critical analysis can be found on this piece of work regarding the matter of whether or not the translation of this text genre is mandatory, from a legal point of view, considering both European and Portuguese legislation. More than just presenting critical considerations regarding legislation on the translation of instrumental texts, the main aim of this project is to describe and analyse possible translation problems, based on the functionalist nature of Nord’s text analysis and the translation methodology by Gouadec. Last but not least, since revision is an important part of the translation process, an approach is made regarding the revision of an experimental protocol previously translated, taking into account the European Standard for Translation Services and its possible application to services provided by freelance translators.

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Almeida, Maria do Rosário Rodrigues de. "Caracterização genética e bioquímica de variantes moleculares de transtirretina." Tese, Universidade do Porto. Reitoria, 1995. http://hdl.handle.net/10216/10314.

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Loguercio, Rochele de Quadros. "Grupos nos liminares do saber : casos da educação em bioquímica." reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS, 2004. http://hdl.handle.net/10183/4882.

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Abstract:

Esta pesquisa desenvolve uma análise da formação de grupos educacionais que se estabeleceram fora do espaço instituído das faculdades de educação e passaram a ocupar um lugar nos institutos ou departamentos de bioquímica, configurando, desta forma, um novo lugar de saber que passou a ser chamado de Educação em Bioquímica. A proposta de análise é a busca de condições históricas para emergência desses grupos, bem como um entendimento de como essa formação se deu dentro das Sociedades que congregam os pesquisadores em bioquímica e, para operacioná-la, partiu-se de uma perspectiva pós-estruturalista e pós-moderna de investigação, inspirada nos entendimentos de história, ciências e educação de dois pensadores sociais que são Jean-François Lyotard e Michel Foucault. Em função da produtividade crescente no novo campo de saber da Educação em Bioquímica e das diferentes abordagens percebidas nas apresentações em eventos da comunidade de bioquímicos, passou-se a investigar três desses grupos no seu movimento diário de pesquisa, procurando perceber as estratégias de validação do conhecimento de cada grupo, suas semelhanças e diferenças no campo da Educação Bioquímica, seus possíveis embates e, principalmente, suas positividades em termos de produção do saber num campo de conhecimentos que se organiza entre dois estabelecidos e distintos campos de conhecimento: das ciências educacionais e das ciências da vida. Uma das questões importantes nas perspectivas pós-modernas e pós-estruturalistas em educação é a possibilidades de ler textos que estão visibilizados de outras formas que não as da fala e da escrita. A possibilidade de mostrar como os lugares podem dizer de seus ocupantes e das suas relações, também, é uma abordagem que esse trabalho de pesquisa evidencia, bem como, traz à discussão as diferenças das linguagens características de um fazer científico e de um fazer educacional tendo como pano de fundo as falas da Educação em Bioquímica. Pretende-se mostrar que as linguagens dos campos de origem - bioquímica e educação – conformam e determinam um modo de literatura que oscila entre esses dois saberes e que de alguma forma reproduz em microescala uma discussão maior que acontece entre as ciências da vida e as ciências humanas. Enfim, procurou-se mapear a emergência histórica, a produção e a produtividade de alguns grupos importantes na área, as formas de legitimação e os processos de construção e sobrevivência desses grupos que trabalham nos limiares do saber.

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Flores, Ortega Alejandra. "Conformational properties of constrained proline analogues and their application in nanobiology." Doctoral thesis, Universitat Politècnica de Catalunya, 2009. http://hdl.handle.net/10803/6477.

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Abstract:

This thesis is composed of two parts:

We have used different computer simulation techniques to investigate the impact of different chemical modifications on the conformational preferences of proline and to examine the application of conformationally constrained proline analogues in Nanobiology.

Specifically, the first part shows the conformational study of proline derivatives that were obtained by introducing one or more double bonds in the pyrrolidine ring, by replacing the α-hydrogen atom by an alkyl group or by incorporating a polar substituent at the β- or γ-position of the pyrrolidine ring. These conformational investigations were performed using Quantum Mechanical calculations at the DFT (Density Functional Theory) levels. Furthermore, the influence of the solvent on the preferences of the different proline derivatives was examined using the Polarizable Continuum Model (PCM).

The second part of the work consists on the design of a constrained proline derive able to protect a tumor-homing peptide from the attack of proteases but retaining, or even enhancing, its intrinsic biological activity. For this purpose, the bioactive conformation of the tumor-homing peptide was determined and characterized using a computational strategy based on the combination of Simulated Annealing combined with Molecular Dynamics. After this, the designed proline was derivative was introduced in the biological peptide using a targeted replacement strategy. The efficiency of the synthetic derivative was examined in silico using classical force-field simulations.
La presente Tesis consta de dos partes:

Se han empleado distintas técnicas de simulación computacional para investigar el efecto de diferentes modificaciones químicas en las preferencias conformacionales de las prolina, así como para examinar la aplicación de análogos de prolina conformacionalmente restringidos en Nanobiología.

Concretamente, la primera parte presenta el estudio conformacional de los derivados de la prolina que se obtienen al introducir uno o más enlaces dobles en el anillo de pirrolidona, al substituir el hidrógeno α por un grupo alquilo o al incorporar un grupo polar en la posición β ó γ del anillo de pirrolidona. Estos estudios conformacionales se desarrollaron mediante métodos mecano-cuánticos basados en la Teoría del Funcional de la Densidad (DFT). Además, el efecto del disolvente en las preferencias de los diferentes derivados de prolina se investigo empleado el método PCM (Polarizable Continuum Model).

La segunda parte del trabajo consistió en el diseño de un análogo de prolina capaz de proteger un péptido que actúa como marcador tumoral del ataque de las proteasas a la vez que retiene, o incluso mejora, su actividad biológica. Para conseguir esto, inicialmente se determinó y caracterizó la conformación bioactiva del péptido empleando una estrategia computacional basada en la combinación de templado simulado y Dinámica Molecular. A continuación el derivado de prolina diseñado se incorporó en una posición específica del péptido y la eficiencia del sistema resultante fue estudiada in silico usando simulaciones basadas en potenciales clásicos.

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García, Vizcaíno Eva María. "Implicación de SIRT1, una desacetilasa dependiente de NAD+, en la regulación de la transcripción por TGFβ." Doctoral thesis, Universidad de Murcia, 2006. http://hdl.handle.net/10803/117851.

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Abstract:

TGFβ produce numerosas respuestas en células eucarióticas. Los principales mediadores de la señalización de TGFβ son las Smad. Proteínas accesorias que interaccionen con las Smads pueden ser responsables de parte de las respuestas de TGFβ. En una búsqueda de nuevas proteínas que interaccionan con Smad2, utilizando el Sistema Doble Híbrido Cyto-Trap, hemos hallado 110 proteínas diferentes. Entre ellas, encontramos Sirt1, una desacetilasa de histonas de tipo III dependiente de NAD+. Hemos realizado un estudio del papel del Sirt1 en la señalización de TGFβ. Hemos mostrado la interacción Smad2/Sirt1 in vivo e in vitro. Hemos realizado un amplio estudio molecular y funcional de la interacción Smad2/Sirt1. Determinamos que Sirt1 no desacetila a Smad2, pero está involucrada en la regulación dependiente de TGFβ de cierto grupo de genes. Finalmente, asociamos el papel de Sirt1 en la regulación de la transcripción por TGFβ a genes específicos que quedan agrupados en funciones celulares concretas.
TGFβ is able to generate a numerous responses in eukaryotic cells. The main mediators in TGFβ signalling are the Smad proteins. Accessory Smad interacting proteins could be responsible for a fraction of the TGFβ-dependent responses. In a search for new Smad2 interacting proteins by using the Cyto Trap Two Hybrid System, we have found 110 different proteins. Among them, we found Sirt1, a type III histone deacetylase dependent on NAD+. We have studied the role of Sirt1 in TGFβ signalling. We have showed that Smad2 and Sirt1 interact both in vivo and in vitro. We did a deep molecular and functional study of the Smad2/Sirt1 interaction. We have shown that Sirt1 does not deacetylase Smad2 but it is involved in TGFβ-dependent transcription of certain set of genes. Finally, we have linked Sirt1 role to TGFβ dependent regulation of genes associated to specific cell processe

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Parra, Carrillo Magdalena. "Caracterización cinética y aplicaciones biotecnológicas de peroxidasas." Doctoral thesis, Universidad de Murcia, 2014. http://hdl.handle.net/10803/277214.

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Abstract:

Estudio de la bibliografía especializada y realización de ensayos preliminares que permitan la proposición de un mecanismo de reacción sometido a análisis cinético, que aporte expresiones útiles para un diseño experimental , aplicable para comprobar la validez del mecanismo de reacción planteado, así como para la caracterización cinética de los sistemas enzimáticos investigados, superando a otros métodos descritos en la bibliografía. • Caracterización cinética y optimización de la biodegradación enzimática por peroxidasas, de los colorantes Índigo Carmín (IC) y Remazol Brilliant Blue Royal (RBBR), mediante un método espectrofotométrico. • Caracterización cinética y optimización de la biodegradación de IC, por sistemas enzima-mediador en presencia de mediadores naturales. • Caracterización cinética y optimización de la biodegradación de RBBR por sistemas enzima-mediador en presencia de mediadores naturales. • Caracterización cinética y optimización de la determinación de fenoles con aplicaciones biotecnológicas, mediante un método espectrofotométrico y ultrasensible de bioanálisis enzimático. Metodología Ensayos espectrofotométricos Los espectros de absorción fueron registrados con un espectrofotómetro de visible-ultra violeta Perkin-Elmer Lambda 35, otros datos cinéticos o de punto final en la zona del visible fueron obtenidos mediante un lector de microplaca SpectraMax 340PC384. Ensayos de cromatografía líquida líquida de alta resolución (HPLC) Los cromatogramas realizados se llevaron a cabo con un cromatógrafo HPLC Agilent 1200 Rapid Resolution. Las especies eluídas fueron monitorizadas a diferentes longitudes de onda, tomando el máximo de absorción para cada una de ellas. Biodegradación de IC con peroxidasas La reacción se realizó en tubos de plástico con una concentración de enzimas HRP y SBP que varió entre 2.5-30 nM , la concentración de contaminante entre 10-120 M y la de peróxido de hidrógeno también entre 10 y 120 M , todo ello a pH óptimo de 10 mM de tampón citrato de pH 5.0 y 4.0 para HRP y SBP respectivamente, a 25 ºC.Se analizaron las reacciones en el espectrofotómetro y en el HPL, determinando los parámetros cinéticos como la absorbancia máxima (Amax), la velocidad en estado estacionario VSS y la constante de biodegradación (). Biodegradación de IC con sistemas lacasa/peroxidasa-mediador Se comparó el estudio a 25 ºC de SBP con el de TvL para la degradación de IC entre con los mediadores MSG, ASG, SGA y SGO con el fin de contrastar los rendimientos de biodegradación del colorante. Biodegradación de RBBR con sistemas lacasa-mediador Se optimizaron las condiciones de reacción para la degradación de RBBR con sistemas EML a temperatura ambiente, eligiendo el sistema mediador más eficaz para dicha reacción. Bioanálisis enzimático de fenoles Se diseña y optimiza un método de análisis enzimático espectrofotométrico para el análisis de distintos tipos de fenoles industriales (fármacos, contaminantes y fitoquímicos). La reacción se realiza en presencia de AA como reductor acoplado y biomolécula detectora, catalizada por HRP. Conclusiones • Se ha caracterizado cinéticamente y optimizado la biodegradación enzimática de IC y RBBR por H2O2, catalizada por las peroxidasas HRP y SBP, mediante un método espectrofotométrico • Se ha conseguido la caracterización cinética y la optimización de la biodegradación enzimática del IC, por varios sistemas enzima-mediador (EMS). En concreto, las enzimas SBP con H2O2 y TvL con O2, en presencia del premediador natural SGO, y de los mediadores naturales, MSG, ASG y SGA. • Se ha estudiado la caracterización cinética y la optimización de la biodegradación enzimática de RBBR por TvL con O2, ante el premediador natural SGO y los mediadores naturales MSG, ASG y SGA. • Se ha desarrollado un método espectrofotométrico y ultrasensible de bioanálisis enzimático, útil para la determinación de concentraciones nanomolares, de diferentes contaminantes, fármacos y fitoquímicos fenólicos de interés biotecnológico. En consecuencia, se han alcanzado satisfactoriamente, los objetivos propuestos al comienzo de esta Tesis Doctoral.
Kinetic characterization and optimization of a spectrophotometric method, for the enzymatic biodegradation by peroxidases, of the dyes Indigo Carmine (IC) and Remazol Brilliant Blue Royal (RBBR). • Kinetic characterization and optimization of the IC biodegradation, by enzyme-mediator systems in the presence of natural mediators. • Kinetic characterization and optimization of the RBBR biodegradation, by enzyme-mediator systems with natural mediators. • Kinetic characterization and optimization of the determination of bioactive phenols, by using a spectrophotometric and ultrasensitive method of enzymatic bioanalysis. Methodology Spectrophotometric assays Absorption spectra were recorded in a visible-ultraviolet Perkin-Elmer Lambda 35 spectrophotometer and other data adquisition in endpoint or kinetic were recorded with an absorbance microplate reader SpectraMax 340PC384. Liquid chromatography Chromatograms were realized with an HPLC Agilent 1200 Rapid Resolution chromatograph. The monitoring of the eluted species was performed at different wavelengths, taking the maximum absorbance wavelengths of the different substances. Biodegradation of the dyes IC and RBBR by POD. This chapter describes a new ecofriendly alternative for removal Remazol Brilliant Blue (RBBR) and Indigo Carmine by soybean (SBP) and horseradish (HRP) peroxidases. Thus, studies for optimization of reaction conditions (pH, concentration of enzymes/substrates/hydrogen peroxide) have been proposed. Biodegradation of IC by enzyme-mediator systems. A reaction mechanism is proposed beside the pH results. This mechanism involves enzymatic and nonenzymatic reactions, in which a premediator (PM), mediator (M) and the mediator radical (MR) are considered. Vss values were determined from enzymes, mediator and IC effects. Thus, the assay conditions for biodegradation of IC, with the enzyme-mediator systems, were optimized. Vss values were determined from enzyme, mediator and RBBR effects. The experimental data obtained confirmed the reliability of the reaction mechanism proposed. Thus, the assay conditions for biodegradation of RBBR, with the enzyme-mediator systems, were optimized. Biodegradation of RBBR by laccase-mediator systems. Remazol Brilliant Blue Royal (RBBR) biodegradation was carried out by laccase from Trametes villosa (TvL) using the natural mediators ASG, MSG, SGA and SGO Enzymatic bioanalysis of phenols. A number of analytical methods with different sensitivity, complexity, quickness and cost have been proposed The aim of this chapter is the possible determination of phenols of biotechnological interest, in nanomolar concentrations, by using an enzymatic and spectrophotometric method of bioanalysis, easy, quick and with low cost. Conclusions • It has characterized kinetically and optimized the enzymatic biodegradation of IC and RBBR by H2O2, catalyzed by the peroxidases HRP and SBP, with a spectrophotometric method. • It has reached the kinetic characterization and the optimization of the enzymatic biodegradation of IC, by several systems enzyme-mediator (EMS). In particular, the enzyme SBP with H2O2 and TvL with O2, in presence of the natural premediator SGO and the natural mediators MSG, ASG and SGA. • It has been studied the kinetic characterization and the optimization of the enzymatic biodegradation of RBBR by TvL and O2, with the natural premediator SGO and the natural mediators MSG, ASG and SGA. • It has carried out a spectrophotometric and ultrasensible method of enzymatic biodegradation, useful for the determination of nanomolar concentrations of different phenolic contaminants, drugs and phytochemicals of biotechnological interest. In consequence, the proposed objectives at the beginning of this Doctoral Thesis have been successfully reached.

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Yokaichiya, Daniela Kiyoko. "O ensino a distancia aplicado a uma disciplina de bioquimica : bioquimica da nutrição." [s.n.], 2001. http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/314724.

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Abstract:

Orientadores: Bayardo Baptista Torres, Eduardo Galembeck
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Made available in DSpace on 2018-07-28T21:31:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Yokaichiya_DanielaKiyoko_M.pdf: 18485238 bytes, checksum: b7408e4f9bac302d5d9d8676cdd19cf2 (MD5) Previous issue date: 2001
Resumo: Através de um programa de formação pedagógica para pós-graduandos, o grupo de Ensino de Bioquímica da Universidade Estadual de Campinas - Unicamp e da Universidade de São Paulo - USP vem promovendo o desenvolvimento de novas disciplinas especiais de bioquímica. Uma delas foi a Bioquímica da Nutrição inteiramente planejada e aplicada por pós-graduandos para alunos de graduação. A impossibilidade de atender o grande número de inscritos para a Bioquímica da Nutrição e seus excelentes resultados de avaliação foram fatores que estimularam a iniciativa de adaptar a referida disciplina para o ensino a distância. Os objetivos da disciplina, o seu conteúdo e as formas de avaliação foram completamente reestruturados de modo que pudessem ser veiculados pela Internet. A versão virtual da disciplina foi oferecida para 25 alunos da graduação durante quatro meses. Para ser totalmente veiculada pela Internet, foi criada uma "homepage" contendo as diferentes seções necessárias para a comunicação/interação dos participantes. As ferramentas computacionais usadas foram: e-mail, para comunicação entre alunos e professores; salas de discussão para abordagem de temas prédeterminados; possibilidades de "download" de textos e softwares educacionais usados como principal referência para as atividades; dicas e apoio técnico sempre disponfveis aos alunos. A versão virtual da disciplina também contou com a participação de alunos de pós-graduação do Departamento de Bioquímica da Unicamp como monitores. A avaliação da disciplina, feita por alunos e monitores, mostra que experiência da disciplina virtual foi proveitosa para ambos. Através desta experiência, foi possível conhecer as ferramentas necessárias para a construção de uma disciplina a distância, as estratégias possíveis de interação a distância para tornar o ensino interessante e gerar bons resultados e o potencial de expansão de disciplinas especiais de bioquímica para um público mais amplo e mais diversificado, possibilitando abordagem, atualização e disseminação dos novos conhecimentos de Bioquímica
Abstract: As a part of a pedagogic program for graduate students, the Biochemistry Teaching Group - gathering teachers and students from the Biochemistry Departments of the State University of Campinas (Unicamp) and University of São Paulo (USP) leads the creation of new special biochemistry disciplines, designed for undergraduate students and entirely planed and taught by graduate students. One of them was Nutrítional Biochemistry. The impossibility of accepting the great number of students registered for Nutritional Biochemistry and its excellent evaluation arouse the aim for its adaptation to Distance Education (DE). The discipline's objectives, contents and evaluation forms were completely restructured to fit the Internet resources. The Internet version of this discipline was structured for 25 student and the classes were scheduled to be completed in four months. A homepage containing ali different sections necessary. to mediate communication/interaction among the participants was created. The computational tools used were: e-mail communication between students and teachers, computer conferencing in small groups willing the discussion of pre-defined subjects, texts and software download to be used as main references. The participation of graduate students from Unicamp's Biochemistry Department as teachers was maintained in the Internet version since the integration between graduate and undergraduate students was considered a productive experience for both parts. The planning and application of Nutritional Biochemistry provided the knowledge of different tools to be used in a DE discipline. The interaction strategies motivated and stimulated the student's interest. The excellent results obtained with this experience established the basis for a potential expansion of Biochemistry disciplines designed for a wider and more diversified publico This should impreve the update and dissemination of information on Biochemistry
Mestrado
Bioquimica
Mestre em Biologia Funcional e Molecular

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Lissner, Lílian Juliana. "Fenotipagem comportamental de ratos tratados com MPTP : um modelo da fase inicial da doença de Parkinson." reponame:Repositório Institucional da UFPR, 2017. http://hdl.handle.net/1884/47781.

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Abstract:

Orientador : Prof. Dr. Claudio da Cunha
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências : Bioquímica. Defesa: Curitiba, 20/12/2016
Inclui referências : f. 54-57
Resumo: Ratos tratados com a neurotoxina 1-metil-4-fenil-1,2,3,6- tetrahidropirindina (MPTP) têm sido utilizados como modelo de déficit cognitivo observado na fase inicial da doença de Parkinson (DP). A principal vantagem deste modelo é que os animais apresentam déficit cognitivo na fase inicial da DP, mas não apresentam déficits sensório-motores grosseiros que possam afetar os comportamentos nas tarefas cognitivas. O objetiv do presente estudo foi realizar um acompanhamento detalhado e longitudinal de parâmetros como imobilidade,locomoção, rotações e visitas em áreas da caixa moradia onde os animais geralmente dormem, bebem e se alimentam. 100 ?g de uma solução de MPTP foi bilateralmente infundida na substância negra parte compacta (SNc) de ratos machos adultos. Os ratos SHAM operados receberam uma infusão de salina o qual é utilizado como veículoPor uma semana antes e 3 semanas após a cirurgia, os ratos foram individualmente alojados em caixas Noldus Phenotyper sob sistema de monitoramento contínuo (Ethovision). Embora severos escores comportamentais variaram ao longo do tempo, animais MPTP e SHAM diferiram de forma leve no parâmetro de locomoção. Eles apresentaram redução significativa de locomoção 21 dias após a cirurgia e uma tendência a caminhar mais lentamente 14 e 21 dias após a cirurgia. Os picos de atvidade locomotora (acrofase) não diferiram entre os grupos. A preferência por sacarose foi testada uma vez por semana e o tempo gasto nas áreas de bebida e comida foram avaliados continuamente. Digerença entre os grupos não foi observada. Não foi observada também diferença entre os grupos no parâmetro de análise da marcha no equipamento Catwalk (Noldus). Quando uma das garrafas de água foi substituída por sacarose, não foi observada diferença entre os grupos. Esses achados proporcionam um forte apoio a hipótese de que os ratos tratados com MPTP não apresentam alterações motoras e alterações motivacionais que possam afetar nas medidas comportamentais que avaliam deficits cognitivos. Palavra-chave: Doença de Parkinson; dementia; depressão; acinesia; modelo animal; dopamina; sono; cronobiologia; ritmos biológicos.
Abstratc: Rats treated with the neurotoxin 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6- tetrahydropyrindine (MPTP) have been used as a model of cognitive deficits observed in the early phase of Parkinson's disease (PD). The main advantage of this model is that the animals present the cognitive observed in the early phase of PD, but do not present gross sensorimotor deficits that could affect the behaviors scored in cognitive tasks. The goal of the present study was to make a detailed and longitudinal follow up of immobility, locomotion, gait, rotations, and visits to areas of the home cage where the animals usually sleep, drink, and feed. 100 ?g MPTP was bilaterally infused into the substantia nigra pars compacta of adult male Wistar rats. SHAM operated rats received intranigral infusion of saline. For 1 week before surgery and 3 weeks after surgery rats were individually housed in Noldus Phenotyper cages under a continuously video-tracking system (Ethovision). Although several scored behaviors varied along the time, MPTP and SHAM animals differed in very few locomotor parameters. They presented significantly reduced locomotion 21 days after surgery and a trend to walk more slowly 14 and 21 days after surgery. The peaks of locomotor activity (acrophase) did not differed among groups. The preference for drinking sucrose was tested once a week and the time spent in the feeding and dinking areas evaluated continuously. No significant difference among groups was observed. No significant difference among groups was observed for gait parameters analyzed in a Cat-Walk apparatus (Noldus). When one of the water supply was replaced by sucrose, no significant difference among groups was observed for sucrose preference. These finding provide a stronger support to the assumption that the MPTP rats do not present motor sensorymotor and motivational alterations that can affect the behaviors measured to evaluate cognitive impairment. Keywords: Parkinson's disease; dementia; depression; akinesia; animal model; dopamine; sleep; chronobiology; biological rhythms.

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Todo, Bom Maritza Araujo. "Utilização do sólido fermentado de Rhizopus microsporus CPQBA 312-07 DRM na resolução de álcoois secundários : identificação de enantiopreferência anti-kazlauskas." reponame:Repositório Institucional da UFPR, 2014. http://hdl.handle.net/1884/38311.

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Abstract:

Orientadora : Profª Drª Nadia Krieger
Co-orientador : Prof. Dr. Leandro Piovan
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências : Bioquímica. Defesa: Curitiba, 28/08/2014
Inclui referências : fls. 88-99
Resumo: O sólido fermentado de Rhizopus microsporus CPQBA 312-07 DRM contendo lipases tem sido utilizado no tratamento de efluentes com elevado teor de lipídios e na síntese enzimática do biodiesel. Entretanto, a enantiosseletividade das lipases imobilizadas naturalmente no sólido fermentado ainda é desconhecida e estudos utilizando sólidos fermentados na resolução cinética enzimática de compostos racêmicos são escassos. A obtenção de compostos enantiomericamente puros é considerada essencial na fabricação de diversos produtos de alto valor agregado e a resolução cinética enzimática tem se revelado mais eficiente que outros processos de separação de enantiômeros. Neste contexto, este trabalho almejou estudar a aplicação do sólido fermentado produzido por R. microsporus na resolução cinética de álcoois secundários. Vários parâmetros foram estudados na reação de transesterificação do (R,S)-1-fenil-1-etanol em frascos agitados. O progresso das reações foi avaliado através de cromatografia em fase gasosa em coluna quiral e os parâmetros de excesso enantiomérico (ee), conversão e razão enantiomérica (E) foram calculados. A otimização da reação levou a um aumento de cerca de oito vezes da conversão inicial e embora não tenha sido possível identificar as lipases responsáveis pela transesterificação, a enantiopreferência foi para o isômero S do substrato. Este comportamento também foi observado nas resoluções dos álcoois (R,S)-p-nitro-fenil-1-etanol e (R,S)-p-metoxi-fenil-1-etanol. Este comportamento é diferente do observado para a maioria das lipases, que segue a regra de Kazlauskas, ou seja, possuem enantiopreferência para o isômero R do substrato. Este resultado é relevante, uma vez que lipases cuja enantiopreferência seja anti- Kazlauskas são bastante incomuns. Dessa forma, a utilização do sólido fermentado contendo lipases produzidas por Rhizopus microsporus mostrou potencial para aplicação na resolução de álcoois secundários e a enantiopreferência anti- Kazlauskas torna interessante estudos de identificação e caracterização das lipases contidas no sólido fermentado. Palavras-chave: lipases, fermentação em estado sólido, Rhizopus microsporus, álcoois secundários, resolução cinética enzimática.
Abstract: The fermented solid from Rhizopus microsporus CPQBA 312-07 DRM containing lipases have been previously used in the treatment of effluents with high lipid content and in enzymatic synthesis of biodiesel. However, the enantioselectivity of the lipases naturally immobilized on the fermented solid is still unknown and studies using fermented solids in enzymatic kinetic resolution of racemic compounds are scarce. The synthesis of enantiopure compounds is considered essential in the manufacture of several products with high added value and the enzymatic kinetic resolution has proven to be more effective than others methods of separation of enantiomers. In this context, this work aimed to study the application of the fermented solid produced by R. microsporus in the kinetic resolution of secondary alcohols. Several parameters were studied in transesterification reactions of the (R,S)-1-phenyl-1-ethanol in shake flasks. The progress of the reactions was evaluated by gas chromatography on a chiral column and the parameters enantiomeric excesses (ee), conversion and the enantioselectivity ratio (E) were calculated. The optimization of the reaction led to an increase of about eight times of the initial conversion and, although it has not been possible to identify the lipases responsible for the transesterification, their enantiopreference was for the S isomer of the substrate. This behavior was also observed in the resolution of alcohols (R,S)-pnitro- 1-phenyl-ethanol and (R,S)-p-methoxyphenyl-1-ethanol. This behavior is different from that observed for the majority of lipases, which follow the Kazlauskas's rule, having an enantiopreference for the R isomer of the substrate. This result is relevant since lipases that have enantiopreference anti-Kazlauskas rule are quite unusual. Thus, the use of a fermented solid containing lipases produced by Rhizopus microsporus showed potential for the application in the resolution of secondary alcohols and the anti-Kazlauskas enantiopreference fosters studies on the identification and characterization of the lipases contained in the fermented solid. Keywords: lipases, solid state fermentation, Rhizopus microsporus, secondary alcohols, enzymatic kinetic resolution.

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Bezerra, Iglesias de Lacerda. "Caracterização estrutural e estudo do potencial anti-inflamatório de polissacarídeos estraídos dos vinhos Cabernet Franc, Cabernet Sauvignon e Sauvignon Blanc." reponame:Repositório Institucional da UFPR, 2016. http://hdl.handle.net/1884/41909.

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Abstract:

Orientador : Prof. Dr. Guilherme Lanzi Sassaki
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências : Bioquímica. Defesa: Curitiba, 25/02/2016
Inclui referências : f. 90-108
Resumo: Existem poucos trabalhos sobre caracterização de polissacarídeos de vinhos. A estrutura e as quantidades de polissacarídeos liberados dependem do processo de vinificação e podem influenciar as propriedades sensoriais, a qualidade dos vinhos e possivelmente os benefícios para a saúde. No entanto, não foram encontrados na literatura científica, estudos que mostrem alguma relação entre os polissacarídeos encontrados nos vinhos e atividades biológicas, como a anti-inflamatória. Com isso, esse trabalho teve como objetivo a caracterização estrutural dos polissacarídeos encontrados em três tipos de vinhos: Cabernet Franc (ACF), Cabernet Sauvignon (ACS) e Sauvignon Blanc (ASB) e avaliação da capacidade das amostras estudadas de inibirem mediadores inflamatórios in vitro. Os vinhos foram concentrados e os polissacarídeos foram obtidos por meio de precipitação etanólica seguida de centrifugação, diálise, liofilização, congelamento e degelo, precipitação de Fehling e fracionamento por coluna de troca iônica. Os polissacarídeos foram caracterizados estruturalmente por métodos químicos, por ressonância magnética nuclear (RMN) 1D e 2D de 1H e 13C, cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas de ionização eletrônica (GC-MS), análise de metilação e cromatrografia líquida de exclusão estérica acoplada à índice de refração de espalhamento de luz laser em multiângulos (HPSEC-MALLS). Os rendimentos dos polissacarídeos dos vinhos foram: 0,16% (ACF), 0,05% (ACS) e 0,02% (ASB). A composição monossacarídica mostrou a presença de Gal, Ara, Rha, GalA, Glc, 2-O-metil-Xyl, 2-O-metil-Fuc e Man em diferentes concentrações. Todas as frações apresentaram teor de <1% de proteínas. As frações apresentaram um perfil de eluição heterogênea em HPSEC-MALLS, sugerindo uma mistura de polissacarídeos. Através da RMN heteronuclear de 2D-HSQC e a análise de metilação foi possível identificar a presença de arabinogalactanas do tipo II, ramnogalacturananas do tipo I e II, mananas e dextrinas. O potencial anti-inflamatório dos polissacarídeos foi avaliado através da inibição de NF-?B em células RAW-Blue. Todas as frações estudadas apresentaram propriedade anti-inflamatória quando testadas in vitro na dose 100 ?g/mL. Os resultados das análises químicas, espectrométricas e espectroscópicas forneceram um "fingerprint" molecular para os polissacarídeos de cada tipo vinho, uma vez que os polissacarídeos dos vinhos apresentaram rendimentos e quantidades diferentes, podendo auxiliar na determinação de uma assinatura dos vinhos analisados. Palavras-chave: vinhos, polissacarídeos, inflamação.
Abstract: There are few works about characterization of polysaccharides of wines. The structure and amounts of polysaccharides released depend on the wine-making process and can influence the sensory properties, quality of the wines and benefits for health. However, there were not found in scientific literature, studies showing a relationship between the polysaccharides found in wines and biological activities. This work aimed structural characterization of the polysaccharides found in three types of wines: Cabernet Franc (ACF), Cabernet Sauvignon (ACS) and Sauvignon Blanc (ASB). The wines were concentrated and the polysaccharides were obtained via ethanolic precipitation followed centrifugation, dialysis, freeze dry, freezing-thawing, fehling precipitation and fractionation with ion exchange columnn. The polysaccharides have been characterized structurally by chemical methods, nuclear magnetic resonance (NMR) 1D and 2D ¹H and ¹³C NMR, gas chromatography-mass spectrometry electron ionization (GC-MS), methylation analysis and liquid cromatrografia coupled steric exclusion the laser light scattering refractive index in multi angles (HPSEC-MALLS). The anti-inflammatory potential of the polysaccharides through inhibition of NF-?B in Raw-Blue cells. Polysaccharide yields were: 0,16% (ACF), 0,05% (ACS) and 0,02% (ASB). The fractions showed monosaccharide composition containing Ara, Rha, GalA, Glc, Gal, Man, Xyl e Fuc in different concentrations. All fractions have <1% content of protein. All the samples showed a heterogeneous elution profile, suggesting the presence of polysaccharide mixture. By heteronuclear NMR 2D-HSQC and methylation analysis was possible to identify the presence of type II arabinogalactan, type I and II rhamnogalacturanans, mannans, and dextrins. The anti-inflammatory potential of the polysaccharides was evaluated through the inhibition of NF-?B in RAW-blue cells. All samples showed anti-inflammatory property when tested in vitro in a dose100 ?g/mL. The results of chemical, spectrometric and spectroscopic analyzes can furnish a fingerprint for each wine, since the profile of the mixtures had different yields and quantities, aiding for a non-volatile based singular signature. Keywords: wines, polysaccharides, inflammation.

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Dias, Glauco Silva. "Aumento de escala da produção de ésteres etílicos em reatores de leito fixo com sólido fermentado por Burkholderia lata CPQBA 515-12 DRM 01." reponame:Repositório Institucional da UFPR, 2015. http://hdl.handle.net/1884/38095.

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Abstract:

Orientador : Prof. Dr. David Alexander Mitchell
Co+orientadora : Profª Drª Nadia Krieger
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências : Bioquímica. Defesa: Curitiba, 30/03/2015
Inclui referências
Resumo: Os ésteres alquílicos do biodiesel são produzidos na indústria geralmente por transesterificação alcalina homogênea de triacilgliceróis provenientes de óleos vegetais com metanol. Este processo necessita de etapas de purificação do biodiesel para remoção do catalisador e do sal formado, de tratamento dos efluentes alcalinos gerados e ainda da recuperação do subproduto glicerol. Além disso, matérias-primas neutras e com baixo teor de água são requeridas, o que contribui para elevar o custo de produção do biodiesel. Uma das alternativas para contornar os problemas associados à catálise química é a utilização do processo enzimático com lipases, que podem catalisar reações de esterificação e de transesterificação e dispensam o uso de matérias-primas purificadas. Recentemente, no Laboratório de Tecnologia Enzimática e Biocatálise da Universidade Federal do Paraná, foi desenvolvido um processo com o intuito de reduzir os custos da produção enzimática do biodiesel. Este processo se consistiu na utilização de um sólido fermentado por Burkholderia lata (SFBL) para catalisar a esterificação etílica de ácidos graxos da borra de soja. O processo foi desenvolvido em escala laboratorial, com a utilização de biorreator de leito fixo contendo 12 g de SFBL e produziu altos rendimentos de ésteres etílicos (92%) em 31 h. Assim sendo, o objetivo geral deste trabalho foi de aumentar em pelo menos dez vezes a escala da produção de biodiesel a partir deste processo. Para tanto, foi montado um biorreator de leito fixo com três colunas em série preenchido com 120 g de SFBL, com circulação do meio reacional composto por oleína e etanol (1245 g). Para a remoção da água formada na reação, foi dimensionado um reservatório de meio reacional com barreira física, que favoreceu o aumento da velocidade inicial da reação, obtendo-se 88% de rendimento em 24 h. O sistema foi operado por 6 ciclos consecutivos de síntese (288 h). A conversão obtida ao final do primeiro ciclo, 91%, decresceu para 51% no final do sexto ciclo reacional. No primeiro ciclo, foi produzido 1 kg de ésteres e, até o sexto ciclo, foram acumulados 4,7 kg de ésteres, o que é equivalente a uma produção de 39 g de éster por g de sólido fermentado. Estes resultados são promissores, pois mostram que altas conversões podem ser mantidas no escalonamento do processo enzimático de produção do biodiesel usando sólidos fermentados como catalisadores. Palavras-chave: biodiesel, aumento de escala, esterificação, lipases, Burkholderia lata, fermentação em estado sólido, reator de leito fixo.
Abstract: The ethyl esters that comprise biodiesel are produced industrially by homogeneous alkaline transesterification of the triacylglycerols of vegetable oils with methanol. This process requires steps for the removal from the biodiesel of the catalyst and of the salt that is formed, for the treatment of the alkaline effluent that is generated and for the recovery of the glycerol by product that is produced. Beyond this, the oil must be neutral and have a low moisture content, meaning that it makes a significant contribution to the cost of the biodiesel. One possible strategy for avoiding problems associated with chemical catalysis is to use lipases as catalysts, given that they can catalyze both esterification and transesterification and do not require highly purified raw materials. Recently, a process was developed in the Enzyme Technology and Biocatalysis Laboratory of the Federal University of Paraná, with the intention of reducing the costs of the enzymatic route. This process uses a fermented solid, produced using Burkholderia lata (denominated FSBL), to catalyze the ethyl esterification of fatty acids obtained from soybean soapstock. The process was operated at laboratory scale, using a packed-bed bioreactor containing 12 g of FSBL, and gave high ester yields, of 92% in 31 h. The objective of the current work was to increase the scale of this biodiesel production process at least 10-fold. To this end, a bioreactor consisting of three packed-beds in series was filled with a total of 120 g of FSBL and 1245 g of a medium comprised of olein and ethanol was recirculated through the reactor from a reservoir. The reservoir had an internal weir in order to retain the aqueous phase, such that only the organic phase was fed back to the reactor. This water removal strategy increased the initial velocity of reaction, giving 88% conversion in 24 h. This system was operated for six consecutive 48-h cycles of ester synthesis. The conversion that was obtained decreased from 91% at the end of the first reaction cycle to 51% at the end of the sixth reaction cycle. In the first cycle, 1 kg of esters was produced, while the six cycles produced a cumulative total of 4.7 kg of esters, which is equivalent to 39 g of ester produced per g of fermented solid that was used. These results are promising, since they demonstrate that high yields can be maintained in the scale-up of enzymatic biodiesel production processes involving fermented solids as the catalyst. Keywords: biodiesel, scale-up, esterification, lipases, Burkholderia lata, solid-state fermentation, packed-bed reactor

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Mijares, Arevalo Ana. "Estudo da ação citotoxica da tetrahidroxibenzoquinona (THQ) como modelo de estresse oxidativo." [s.n.], 1990. http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/314511.

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Abstract:

Orientador: Maria Edwiges Hoffmann
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Made available in DSpace on 2018-07-13T23:03:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MijaresArevalo_Ana_M.pdf: 4000765 bytes, checksum: 1c88b10486b148b82bff17f409073eec (MD5) Previous issue date: 1990
Resumo: Este trabalho tem como objetivo o estudo do mecanismo de ação citotóxica da THQ em células da linhagem V79. A THQ sofre autooxidação espontânea em condições fisiológicas com produção do ânion superóxido, peróxido de hidrogênio, radical hidroxila, radical semiquinona e ácido rodizônico. Estudamos a ação da THQ sobre o DNA celular, enfocando seu efeito sobre a replicação semiconservativa. Verificamos que as espécies geradas durante a autooxidação da THQ estão envolvidas no evento da inibição da sintese de DNA promovido por essa quinona. Entre estas, o 'H IND. 2¿ 'O IND. 2' tem papel central, através de um mecanismo independente de ferro. Evidenciamos também o envolvimento de radicais hidroxila nesse evento, assim como no mecanismo de inibição da replicação do DNA de células expostas ao 'H IND. 2¿ 'O IND. 2' Aqui, distintamente da THQ, o ferro participa do. evento da inibição da replicação, evidenciando a ocorrência da Reação de Fenton como mecanismo de produção dos radicais hidroxila. No caso da THQ estes radicais parecem estar sendo formados via Reação de Fenton Orgânica. A cinética de recuperação da inibição da replicação causada pela THQ indica a presença de lesões no DNA. Detectamos a produção de quebras simples nas fitas do DNA de células expostas à THQ , através da técnica de sedimentação em gradiente de sacarose alcalino. Estas quebras são independentes da presença de 'H IND. 2¿ 'O IND. 2' e Fe, sugerindo que os eventos de inibição da replicação e de produção de quebras do DNA não são mediados por um mecanismo único
Abstract: This work investigates the THQ citotoxicity mechanisms on V79 cell line. THQ undergoes spontaneous autoxidation under physiological conditions generating superoxide anion radical, hydrogen peroxide, hydroxyl radical and rodizonic acid. THQ has an genotoxic action, inhibiting the DNA semiconservative replication process and inducting the production of DNA single strand breaks. The intermediates of THQ autoxidation are involved on the DNA synthesis inhibition mechanism. Among these, hydrogen peroxide plays a central role, through an iron independent pathway. Hydroxyl radical was evidenciated as the final oxidant of DNA synthesis inhibition mechanism in cells exposed to THQ and H202. In the latter, iron is participating in the mechanism, indicating a Fenton type reaction for the hydroxyl radicaIs generation.For THQ, these radicaIs seems to be generated through an Organic Fenton Reaction. The recovery kinetics pattern of DNA synthesis inhibition induced by THQ indicates the presence of DNA lesions. The DNA single strand breaks, detected by DNA sedimentation in alkaline sucrose gradient, are not H202 and Fe dependent. These results suggest that the two events studied, DNA synthesis inhibition and DNA single strand breaks, are not mediated by a single mechanism
Mestrado
Bioquimica
Mestre em Ciências Biológicas

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Gesztesi, Jean-Luc. "Ação de esteres de sacarose em cultura de tecido." [s.n.], 1990. http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/314512.

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Orientador: Maria Edwiges Hoffmann
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Made available in DSpace on 2018-07-13T23:04:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gesztesi_Jean-Luc_M.pdf: 11207657 bytes, checksum: 7d0d2662428bf64b269cd28fd02dc2c7 (MD5) Previous issue date: 1990
Resumo: Os ésteres de sacarose apresentam um grande potencial de emprego, constituindo-se numa fonte de matéria-prima renovável de importância para a indústria de alimentos e de cosméticos. Apesar do enorme interesse industrial que os estearatos de sacarose tem despertado nos últimos anos, os seus efeitos em células de mamíferos não foram estudados de modo sistemático e conclusivo. Visando estudar a ação de estearatos de sacarose em células de mamíferos, purificamos e identificamos quimicamente os derivados mono e diestearato de sacarose a partir de uma mistura industrial. Devido às suas estruturas químicas, estes dois derivados apresentam características de agentes anfifílicos, sendo classificados como surfactantes do tipo não iônico. A determinação dos efeitos biológicos do monoestearato de sacarose (MES) e do diestearato de sacarose (DES) foi efetuada em cultura de tecidos in vitro, empregando células humanas (hemácias, linfócitos, fibroblastos primários da derme e fibroblastos de pulmio estabelecidos em cultura) e de roedor (fibroblastos V-79). Vários marcadores da atividade citotóxica foram empregados para a caracterização dos potenciais citotóxicos dos sucroderivados, tais como aIterações na morfologia, perda de viabilidade, perda de adesão,inibição da proliferação e morte das células. Contrariamente ao DES, o MES exibiu uma potente ação citotóxica, constatada em todos os tipos celulares estudados, mostrando, urna atuação não seletiva sobre as células. Os resultados obtidos mostram que o MES apresenta um potencial citotóxico mais elevado que os outros agentes surfactantes avaliados (dodecil sulfato de sódio e Triton X-1OO) que são classificados corno agentes agressivo para as células. O mecanismo de ação do MES foi interpretado corno sendo similar ao descrito para outros surfactantes, causando alterações estruturais e funcionais das membranas celulares. A ausência de citotoxicidade do DES, o qual também apresenta anfifilicidade, foi interpretada corno sendo resultante da modificação das propriedades físico-químicas, decorrentes de urna segunda esterificação na molécula de sacarose. Os efeitos do MES sobre as membranas celulares foram comprovados através da determinação de sua ação hemolítica em eritrócitos e de sua capacidade de inibir a captação de uridina em fibroblastos. Contrariamente ao MES, o DES não causou alterações ao nível das membranas celulares, em concordância com o esperado pela sua ausência de citotoxicidade. Os efeitos deletérios do MES foram consideravelmente atenuados na presença de proteínas séricas, possivelmente devido a formação de um complexo detergente-proteína, inativo sobre a membrana celular. Este achado pode explicar a ausência de efeitos tóxicos do MES em animais, reportada na literatura
Abstract: The food and cosmetic industries have recently focused attention on the possible use of fatty acid sucrose ester as a renewable raw material. Despite the above interest on sucrose esters, their action on mammallian cells was not investigated systematically and conclusively. In order to study the sucrose stearate effect on mammallian cells, the mono-and di-derivatives were separated from an industrial product, purified and chemically identified. The compounds showed properties of amphiphilic agents and were classified as non ionic surfactants. The biological actions of sucrose monostearate ester (SME) and sucrose distearate ester (SDE) were performed on in vitro tissue cultures, using human cells (erythrocytes, limphocytes, dermal fibroblast or a cell line obtained from lung fibroblast) and with rodent cells (fibroblast V-79). Several cytotoxicity end points (morphological alterations, cell viabi!ity, cell detachment, cell growth inhibi tion and cell death) were employed to characterize the cytotoxic potential of those purified sucrose ester derivatives. SME showed a non-selective and a potent cytotoxic action on alI cell types analyzed. None of those effects were obtained with SDE. The results indicated also that SME had the strongest activity when compared to other surfactants known to be aggressive on cells (sodium dodecyl sulfate and Triton X-IOO). The mechanism for the SME action was assumed to be similar to those described for surfactants, causing structural and functional alterations on cell membrane. The absence of cytotoxicity observed with SDE (also an amphiphilic compound) was interpreted as a consequence of changes on the physico-chemical properties resulting from a second esterification in the sucrose molecule. The effects of SME on cell membranes were observed through the determination of the hemolytic potential on erythrocytes and on the fibroblast membrane mediated uridine uptake. The SDE, in opposition to SME, did not induce modifications at the cell membrane level, according to the observed absence of cytotoxicity action. The damaging SME action, both on cells and membranes, were significantly diminished in the presence of serum proteins, probably forming an inactive detergent-protein complex on cell membranes. This finding can explain why SME is normally reported as a nontoxic surfactant in animals
Mestrado
Bioquimica
Mestre em Ciências Biológicas

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Carter, Jaña Javier Antonio. "Regulación de la expresión y función de la polimerasa del antígeno O de Shigella flexneri 2a : rol del antiterminador RfaH y de los reguladores del largo de cadena Wzz." Tesis, Universidad de Chile, 2008. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/105165.

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Prado, Maria Aparecida da Silva. "Estudo teórico das interações Mg2+ e bases nucleotídicas." reponame:Repositório Institucional da UnB, 2006. http://repositorio.unb.br/handle/10482/2241.

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Abstract:

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, 2006.
Submitted by Alexandre Marinho Pimenta (alexmpsin@hotmail.com) on 2009-11-20T19:38:43Z No. of bitstreams: 1 2006_MariaAparecidadaSilvaPrado.pdf: 1309633 bytes, checksum: fb83770e3380a466ff78fc3640d30357 (MD5)
Approved for entry into archive by Joanita Pereira(joanita) on 2009-11-20T20:19:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_MariaAparecidadaSilvaPrado.pdf: 1309633 bytes, checksum: fb83770e3380a466ff78fc3640d30357 (MD5)
Made available in DSpace on 2009-11-20T20:19:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_MariaAparecidadaSilvaPrado.pdf: 1309633 bytes, checksum: fb83770e3380a466ff78fc3640d30357 (MD5) Previous issue date: 2006
Neste trabalho, estudamos as formas de interação e as energias de complexação em sistemas compostos de bases nucleotídicas, íons Mg2+ e H2O, utilizando-se cálculos ab initio. A partir dos resultados obtidos, fizemos uma avaliação da aplicabilidade de campos de força e métodos semi-empíricos para estudar estes sistemas. Os cálculos ab initio de alto nível foram realizados com o objetivo de indicar, em primeiro lugar, os efeitos importantes e que devem ser considerados no estudo de tais sistemas. Nesta etapa, analisamos os efeitos de correlação eletrônica, o efeito de muitos corpos e o efeito BSSE (basis set superposition error). Os efeitos de correlação eletrônica foram importantes no estudo das energias de interação dos complexos; o efeito de muitos corpos, por sua vez, se mostrou importante no estudo das energias de interação dos complexos formados, e deve ser considerado ao se utilizar metodologias baseadas em soma de interações individuais. Além disso, foi feita uma avaliação de métodos e funções de bases, com o intuito de se estabelecer uma metodologia adequada para o estudo das interações nucleobases-[Mg(H2O)n]2+ e nucleobases-(H2O)n. Definiu-se, então, a partir dos resultados obtidos, métodos e conjuntos de base que pudessem representar os sistemas analisados mais adequadamente. Os resultados de cálculos utilizando campos de força e métodos semi-empíricos, quando comparados aos resultados ab initio, se mostraram altamente limitados para o estudo destes sistemas. __________________________________________________________________________________________ ABSTRACT
In this work, we analyzed the forms of interaction and energetic behavior of systems composed of nucleic bases, magnesium ions, and water with ab initio methods. Based on the obtained results we evaluated the possible use of force fields and semi empirical methods on these systems. High-level ab initio calculations were performed aimed at revealing the important effects which should be considered in our study. Electronic correlation and many-body effects were shown to be important to the study of the interaction energy of the complexes. Many-body effects on interaction energies must be considered when accurate energies are pursued. We also evaluated different basis functions and ab initio methods in order to establish a proper methodology to the study of the systems nucleic bases-[Mg(H2O)n]2+ e nucleic bases- (H2O)n. Force fields and semi empirical methods, on the other hand, were shown to be severely limited to this study.

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Barschak, Alethea Gatto. "Efeito in vitro dos ácidos etilmalônico e metilsucínico sobre as atividades enzimáticas dos complexos da cadeia respiratória mitocondrial e da creatina quinase em córtex cerebral, músculo esquelético e músculo cardíaco de ratos jovens." reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS, 2003. http://hdl.handle.net/10183/1957.

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Abstract:

A deficiência de desidrogenase das acil-CoA de cadeia curta (SCAD) é um erro inato do metabolismo devido a um defeito no último ciclo de β-oxidação, sendo específica para ácidos graxos de cadeia curta (4 a 6 carbonos), resultando no acúmulo de ácidos orgânicos de cadeia curta, principalmente dos ácidos etilmalônico e metilsucínico, formados pela metabolização por rotas secundárias do butiril-CoA acumulado. A deficiência de SCAD manifesta-se principalmente no período neonatal ou durante a infância e até mesmo na idade adulta. Os achados clínico-laboratoriais são heterogêneos, incluindo acidose metabólica, acidose lática, vômitos, atraso no desenvolvimento, convulsões, fraqueza muscular e miopatia crônica. No entanto, o sintoma mais comum apresentado pelos pacientes portadores dessa deficiência é a disfunção neurológica, a qual pode estar relacionada ao acúmulo de ácidos orgânicos de cadeia curta e sua toxicidade ao sistema nervoso central. No presente trabalho nosso objetivo foi investigar o efeito in vitro dos ácidos etilmalônico e metilsucínico sobre algumas atividades enzimáticas fundamentais para o metabolismo energético. Visando contribuir para uma melhor compreensão da fisiopatogenia dessa doença testamos o efeito desses metabólitos sobre a atividade dos complexos da cadeia respiratória e da creatina quinase em córtex cerebral, músculo esquelético e músculo cardíaco de ratos jovens. Verificamos que os ácidos etilmalônico e metilsucínico, na concentração de 1 mM, inibiram significativamente a atividade do complexo I+III da cadeia respiratória em córtex cerebral de ratos, porém não alteraram a atividade dos demais complexos da cadeia respiratória (II, SDH, II+III, III e IV) nesses tecido bem como não alteraram a atividade de todos os complexos da cadeia repiratória em músculo esquelético e músculo cardíaco dos ratos nas concentrações de 1 e 5 mM. Observamos também que o ácido etilmalônico (1 e 2,5 mM) reduziu de forma significativa a atividade total de creatina quinase em córtex cerebral de ratos, mas não alterou essa atividade nos músculos esquelético e cardíaco. Por outro lado o ácido metilsucínico não modificou a atividade total da creatina quinase em nenhum dos três tecidos estudados, córtex cerebral, músculo esquelético e músculo cardíaco de ratos. Testamos então o efeito do ácido etilmalônico sobre a atividade da creatina quinase nas frações mitocondrial e citosólica de córtex cerebral, músculo cardíaco e músculo esquelético de ratos. O ácido (1 e 2,5 mM) inibiu significativamente a atividade da creatina quinase apenas na fração mitocondrial de córtex cerebral. Demostramos também que o antioxidante glutationa (1 mM) preveniu o efeito inibitório do ácido etilmalônico sobre a atividade total da creatina quinase em córtex cerebral. A glutationa (0,5 mM) e o ácido ascórbico (0,5 mM) também preveniram o efeito inibitório do ácido etilmalônico sobre a atividade da creatina quinase na fração mitocondrial de córtex cerebral. Por outro lado a adição de L-NAME ou trolox não alterou o efeito inibitório do ácido etilmalônico sobre a atividade da creatina quinase. Esses resultados indicam que o ácido etilmalônico possui um efeito inibitório específico sobre a isoforma mitocondrial da creatina quinase do cérebro, ou seja, sobre a CKmi a, não afetando a isoenzima citosólica cerebral ou as isoenzimas citosólicas e mitocondrial presentes no músculo esquelético e no músculo cardíaco. Além disso, o efeito da glutationa, que atua como um agente redutor de grupos tióis, indica que a ação inibitória do ácido etilmalônico sobre a creatina quinase pode estar relaciona à oxidação de grupos sulfidrila essenciais à atividade da enzima. Já a prevenção do efeito inibitório do ácido etilmalônico causada pelo ácido ascórbico sugere que o ácido pode estar envolvido com a formação dos radicais superóxido e hidroxila, uma vez que este agente antioxidante atua sobre esses radicais livres. Essas observações em seu conjunto indicam que os ácidos etilmalônico e metilsucínico comprometem o metabolismo energético cerebral através da inibição de atividades enzimáticas essenciais para a produção e transporte de energia pela célula. É, portanto, possível que esse possa ser um dos mecanismos envolvidos com o dano cerebral que ocorre nos pacientes afetados por deficiência de SCAD.

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Lima, Pedro Antônio Schmidt do Prado. "O polimorfismo T102C do receptor serotonérgico 5-HT2A participa na manutenção do tabagismo e dos mecanismos de preferência alimentar." reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS, 2004. http://hdl.handle.net/10183/4367.

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Abstract:

A serotonina tem sido relacionada aos comportamentos apetitivo, emocional, motor, cognitivo e autonômico. Os neurônios serotonérgicos estão localizados nos núcleos da rafe, projetam-se para todas as regiões do sistema nervoso central e atuam através de sete tipos de receptores diferentes (5-HT1-7). Os receptores do tipo 2 são categorizados em 3 sub-tipos (A, B e C). Os receptores 5-HT2A são receptores pós sinápticos que promovem a ativação da fosfolipase C, responsável pela hidrólise de fosfolipídios da membrana neuronal, dando origem aos segundos mensageiros diacilglicerol e trifosfato de inositol. O gene do receptor 5-HT2A apresenta alguns polimorfismos, entre os quais o T102C, onde na posição 102 pode estar ou uma timina (T) ou uma citosina (C). Este polimorfismo, apesar de não determinar uma alteração na seqüência de amionoácidos que compõem o receptor determina sua expressão em quantidade diferente. Nesta tese, o polimorfismo T102C do gene do receptor 5-HT2A foi empregado como uma ferramenta para o estudo da neuroquímica do tabagismo e do comportamento alimentar. No estudo acerca do tabagismo, um grupo de 625 sujeitos foi genotipado e classificado de acordo com seu comportamento em relação ao fumo (fumantes atuais, exfumantes ou não fumantes). Foram encontradas diferenças na distribuição dos genótipos quando fumantes atuais foram comparados com ex-fumantes e não fumantes, sugerindo que o polimorfismo T102C está associado com a manutenção, e não o início, do hábito de fumar. O genótipo CC era mais freqüente nos fumantes atuais do que nos ex-fumantes e não fumantes. No estudo sobre o comportamento alimentar, um grupo de 240 sujeitos idosos foi genotipado e sua dieta espontânea foi avaliada tanto quanto ao conteúdo de macro quanto de micro-nutrientes. Foram encontradas diferenças na dieta relacionadas ao polimorfismo T102C. Os indivíduos TT comem uma maior quantidade e proporção de proteínas, apesar de não alterar a quantidade de calorias ingeridas. Eles ingerem mais carne vermelha todos os aminoácidos essenciais. Concluindo, através de um instrumento da genética molecular que identifica sujeitos com suscetibilidade para terem uma menor ou maior quantidade de receptores 5-HT2A, para o qual não há agonistas específicos, é possível sugerir o provável envolvimento deste receptor tanto nos mecanismos de manutenção da adição ao tabaco quanto nos de preferência alimentar.

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Oliveira, Ricardo Vígolo de. "Influência do tratamento crônico com cafeína em modelos animais de esquizofrenia : parâmetros cognitivos e comportamentais." reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS, 2005. http://hdl.handle.net/10183/4386.

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Abstract:

A esquizofrenia envolve um conjunto de sintomas de sensopercepção, cognição e afeto que compromete significativamente a vida do sujeito. O mais aceito modelo para se entender essa doença é o modelo de hiperatividade dopaminérgica, pois drogas como anfetamina e cocaína, que aumentam a atividade dopaminérgica, mimetizam alguns sintomas dessa patologia, e os fármacos usados para o tratamento são os que bloqueiam os receptores de dopamina. Além da dopamina, o sistema glutamatérgico também tem sido relacionado à esquizofrenia, pelo fato de antagonistas de receptores glutamatérgicos do tipo NMDA, tais como PCP, MK-801 e cetamina, provocarem alguns sintomas dessa doença, como desorganização cognitiva e delírios em pessoas saudáveis. adenosina, por sua vez, desempenha um papel neuromodulatório tanto da atividade dopaminérgica quanto da atividade glutamatérgica, inibindo o tônus de ambos neurotransmissores por diferentes vias. Assim, sugerimos que antagonistas de receptores adenosinérgicos, como a cafeína, também seriam um modelo farmacológico para a doença. Com base nisso, demonstramos previamente que camundongos tratados cronicamente com cafeína desenvolvem tolerância cruzada ao efeito do antagonista NMDA MK-801 em provocar hiperlocomoção, mas não em seu déficit cognitivo na esquiva inibitória. Buscando ampliar e melhor caracterizar essa interação, os seguintes parâmetros foram avaliados em camundongos: atividade locomotora realizando-se as curvas de dose e de tempo; memória de trabalho, avaliada na tarefa de alternação tardia; memória de longa duração, avaliada na tarefa de esquiva inibitória e a avaliação de ataxia. Os resultados nos mostraram que camundongos subcronicamente tratados com cafeína na bebida (1 mg/mL, por 1, 3, ou 7 dias) apresentaram habituação semelhante entre os grupos e que MK-801 (0,25 mg/kg, i.p.) produziu hiperlocomoção nos animais tratados com água e 1 dia de cafeína, com efeito diminuído depois de 3 dias e praticamente abolido depois de 7 dias. Depois de 7 dias, o efeito também foi dose-dependente, sem tolerância cruzada na dose de 0,1 mg/mL, intermediária na dose de 0,3 mg/mL e total a 1,0 mg/mL. Os escores de ataxia induzidos por 0,5 mg/kg de MK-801 não foram afetados pelo tratamento com cafeína por 7 dias a 1 mg/mL, mas uma hiperlocomoção transitória foi observada. O tratamento com cafeína por 7 dias a 1 mg/mL preveniu os déficits induzidos por 0,01 mg/kg de MK-801 na tarefa de esquiva inibitória e os atenuou, a 0,4 mg/kg de MK-801, na tarefa de alternação tardia, no labirinto em T. Conclui-se, então, que a hiperlocomoção e os déficits cognitivos – mas não a ataxia – induzidos por MK-801 podem estar influenciados pela atividade reduzida da adenosina. Assim, os estudos sobre a ação da adenosina podem se fazer relevantes para a melhor compreensão da neurobiologia da esquizofrenia. Estes resultados são concordantes com o novo modelo proposto, que é o de hipofunção adenosinérgica na esquizofrenia.
Schizophrenia is a mental disorder, which comprises several symptoms of perception, cognition and affect that impair the subject’s life. The most accepted model to understand this disease is dopaminergic hyperactivity, since dopaminergic agonists, as amphetamine or cocaine, increase its activity, mimicking some symptoms, and the pharmacological treatment is by blocking dopamine receptors. Furthermore, the glutamatergic system has been associated to schizophrenia, since NMDA antagonists, as PCP, MK-801 and ketamine, may provoke several symptoms of this disease, such as cognitive impairments and delusions in healthy individuals. The neuromodulator adenosine exerts a neuromodulatory role on both dopaminergic and glutamatergic systems, decreasing their activity. Thus, we have suggested that adenosine receptor antagonists, such as caffeine, could be a model of schizophrenia. Based on this hypothesis, we have demonstrated the mice chronically treated with caffeine develop cross tolerance for the effect of the NMDA antagonist MK-801 in locomotion, but not in cognitive deficit in inhibitory avoidance task. In order to further characterize this interaction, the following parameters have been evaluated in mice: locomotor activity with time and dose curves; working memory in the delayed alternation task, long-term memory in the inhibitory avoidance task and ataxia. The results show that mice subchronically treated with caffeine in drinking solution (1 mg/mL for 1, 3 and 7 days) and control group presented similar habituation, and MK-801 (0.25 mg/kg i.p.) produced hyperlocomotion in mice treated with water and 1 day of caffeine, but this effect was diminished after 3 and almost abolished after 7 days. After 7 days of caffeine treatment, the effect was also dose-dependent, with no effects of 0.1 mg/mL, an intermediate effect at 0.3 mg/mL and complete tolerance at 1.0 mg/mL. Ataxia scores induced by 0.5 mg/kg MK-801 were not affected by caffeine treatment for 7 days at 1 mg/mL, but a short-lived hyperlocomotor effect was observed. Performance deficit in the inhibitory avoidance task induced by MK-801 (0.01 mg/kg) was prevented in mice subchronically treated with caffeine for 7 days at 1 mg/mL, whereas cognitive impairments in the delayed alternation task, in the T-maze, by MK-801 (0.4 mg/kg) were attenuated by such caffeine treatment. We concluded that hyperlocomotion and cognitive effects, but not ataxia, induced by MK- 801 might be influenced by reduced adenosinergic activity. Therefore, studies on adenosine activity may be relevant to the comprehension of the neuropathology of schizophrenia. These findings agree with a model of adenosine hypofunction in schizophrenia.

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Pettenuzzo, Letícia Ferreira. "Efeito da administração crônica pós-natal dos ácidos propiônico e metilmalônico sobre o comportamento de ratos no labirinto aquático de Morris (Water Maze) e sobre alguns parâmetros bioquímicos de estresse oxidativo em hipocampo." reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS, 2001. http://hdl.handle.net/10183/1318.

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Abstract:

As acidemias propiônica e metilmalônica são desordens neurometabólicas hereditárias caracterizadas por progressiva deterioração neurológica, retardo mental, atraso no desenvolvimento psicomotor, convulsões e coma. A fisiopatologia do dano cerebral característico destas doenças ainda é pouco conhecida. No presente estudo investigamos o efeito de administração crônica (5o ao 28o dia de vida) dos ácidos propiônico (PA) e metilmalônico (MA), que são os metabólitos acumulados em maiores concentrações nos pacientes portadores das acidemias propiônica e metilmalônica, respectivamente, sobre o comportamento de ratos e sobre alguns parâmetros bioquímicos de estresse oxidativo no hipocampo dos animais. O comportamento dos animais foi avaliado 30 dias após o término do tratamento nas tarefas do labirinto aquático de Morris e no campo aberto. Os parâmetros bioquímicos avaliados foram o potencial antioxidante total do tecido (TRAP) e a atividade das enzimas catalase, superóxido dismutase e glutationa redutase. Todos as análises bioquímicas foram realizadas em hipocampo, estrutura fundamental para a localização espacial, requerida na tarefa do labirinto aquático de Morris. As doses de propionato ou metilmalonato foram administradas de acordo com as preconizadas nos modelos experimentais destas acidemias, tomando em consideração o peso e da idade dos animais. Os ratos controles receberam solução salina nos mesmos volumes. A administração de PA ou MA não alterou o peso dos animais. Entretanto foi encontrado um déficit de aprendizado e memória no grupo tratado com PA, e um déficit de memória no grupo tratado com MA. Nenhum dos grupos testados apresentou alterações na atividade motora (número de cruzamentos) na tarefa do campo aberto. Também determinamos o efeito da co-administração de ácido ascórbico nos animais tratados cronicamente com PA ou MA. Encontramos que o ácido ascórbico preveniu o déficit cognitivo provocado pela administração crônica de PA e MA. Por outro lado, verificamos que os tratamentos crônicos com PA e MA diminuíram o TRAP no hipocampo dos ratos, sem alterar a atividade de nenhuma das enzimas testadas. A prevenção do déficit cognitivo pelo ácido ascórbico associada à diminuição do TRAP no hipocampo dos animais tratados cronicamente com PA ou MA sugere que o estresse oxidativo pode estar relacionado com o déficit cognitivo encontrado no presente trabalho. Concluindo, nossos resultados indicam que o estresse oxidativo pode estar envolvido, ao menos em parte, com o dano cerebral nos pacientes afetados pelas acidemias propiônica e metilmalônica.

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Marisco, Patricia da Costa. "Efeito da amônia sobre as convulsões e a inibição da sucinato desidrogenase induzidas por ácido metilmalônico." reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS, 2001. http://hdl.handle.net/10183/1593.

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Abstract:

A hiperamonemia é um achado comum em crianças com acidemia metilmalônica, um erro inato do metabolismo caracterizado por retardo mental, convulsões e acúmulo tecidual de ácido metilmalônico (MMA). Embora existam evidências de que o MMA induza convulsões por inibição da sucinato desidrogenase (SDH), muito pouco se sabe sobre a contribuição da hiperamonemia para o desenvolvimento das convulsões nestes pacientes. No presente estudo investigou-se os efeitos do acetato de amônio sobre a ação convulsivante do MMA in vivo e do cloreto de amõnio sobre a inibição da SDH estriatal induzida pelo MMA in vitro. Ratos adultos foram injetados com acetato de amônio (1,5 mmol/kg, s.c.) ou acetato de sódio (1,5 mmol/kg, s.c.) e, após 5 minutos, injetados unilateralmente no estriado com MMA (3 µmol/µl) neutralizado para pH 7,4 com NaOH ou NaCl (4,5 µmol/µl). O pré-tratamento com acetato de amônio aumentou o número e durações dos episódios convulsivos induzidos pelo MMA. O cloreto de amônio não teve efeito sobre a atividade da sucinato desidrogenase e não alterou a inibição da SDH induzida pelo MMA in vitro. Estes resultados sugerem que a amônia potencializa os efeitos comportamentais induzidos pelo MMA por mecanismos que não envolvam adicional inibição da SDH. Este estudo provê evidências de que a hiperamonemia pode potencializar os efeitos neurotóxicos do MMA.

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Pereira, Grace Schenatto. "Sistema purinérgico na memória da tarefa de esquiva inibitória em córtex cingulado e córtex pré-frontal de ratos." reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS, 2001. http://hdl.handle.net/10183/1743.

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Abstract:

A memória pode ser definida como o armazenamento e a evocação de uma informação aprendida. Sendo um processo dinâmico, requer a ativação de diversos sistemas para que a informação adquirida seja consolidada. O ATP é um importante neurotransmissor que, após a sua liberação e conseqüente ativação de seus receptores específicos, precisa ser inativado. Esta remoção do ATP da fenda sináptica ocorre através de sua hidrólise promovida pelas ectonucleotidases. Como um dos produtos da hidrólise do ATP, a adenosina é considerada um potente neuromodulador e exerce suas ações através de receptores específicos com ações excitatórias (A2A e A2B ) ou inibitórias (A1 e A3). Vários trabalhos já demonstraram a participação do sistema purinérgico nos processos relacionados a memória da tarefa da esquiva inibitória. Estudos realizados em nosso laboratório mostraram a participação das ectonucleotidases sinaptossomais de hipocampo, córtex entorrinal e córtex parietal na consolidação da memória para esquiva inibitória. No entanto, existem poucos estudos a respeito do sistema purinérgico nos mecanismos de consolidação da memória em outras regiões cerebrais, tais como o córtex cingulado anterior (CA) e posterior (CP) e a área pré-central medial (FR2). Portanto, na primeira parte deste estudo, avaliamos as atividades ectonucleotidásicas em sinaptossomas de CA, CP e FR2 de ratos submetidos à tarefa de esquiva inibitória. Nossos resultados demonstraram um aumento na hidrólise de ATP em sinaptossomas de FR2 e CA; e na hidrólise de ADP em sinaptossomas de FR2 e CP. Este aumento na hidrólise de ATP e ADP ocorreu devido ao choque administrado na tarefa, já que o grupo de animais que não recebeu choque não apresentou alterações na hidrólise de ATP e ADP. Este efeito observado provavelmente não está associado à consolidação da memória, mas a mudanças neuroquímicas e neurohumorais induzidas pelo estresse após o choque. Além disso, foi observado um aumento relacionado ao aprendizado na atividade ATPásica e ADPásica em CP e CA, respectivamente. Estes resultados sugerem fortemente que estas enzimas participam da consolidação da memória em CP e CA. O aumento na hidrólise de ATP e ADP sugere um possível aumento na concentração de adenosina nestas regiões. Portanto, na segunda parte deste estudo, verificamos a influência de agonistas e antagonistas de receptores de adenosina nas memórias de curta (STM) e de longa (LTM) duração na tarefa de esquiva inibitória. Então, neste estudo administramos intrafusões de análogos de adenosina em CP, imediatamente após o treino em esquiva inibitória. Os resultados demonstraram que a intrafusão de DPCPX, um antagonista de receptores A1, em CP, na concentração de 50 nM, aumentou significativamente a retenção da tarefa em ambas STM e LTM. Além disso, a administração de CPA, um agonista de receptores A1 de adenosina, não alterou ambas STM e LTM nas concentrações testadas. Portanto, este estudo sugere que os receptores A1 exercem uma modulação inibitória em CP tanto na STM quanto na LTM para o aprendizado de esquiva inibitória. A regulação dos níveis de ATP e adenosina pelas ectonucleotidases em CP, CA e FR2 controlaria a ativação dos receptores A1 nestas estruturas, podendo exercer efeitos modulatórios na consolidação da memória nestas estruturas.

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Dissertations / Theses on the topic 'Bioquímica'

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