Dissertations / Theses on the topic 'Canal épithélial à Na+ ENaC'

Le canal sodique épithélial, ENaC, est une protéine hétéromérique constituée de trois sous-unités: [alpha], [bêta] et [gamma]. ENaC est exprimé au niveau de la membrane apicale des cellules épithéliales du néphron, du colon distal et des voies aériennes. Au niveau du néphron, l'activité et l'expression de ENaC sont finement régulées par deux hormones: l'aldostérone et la vasopressine, ce qui fait de ENaC un élément clé du maintient de la pression artérielle. ENaC joue également un rôle dans la régulation de la pression artérielle dans le colon distal. Il existe plusieurs mutations du canal directement liées à des troubles graves de la pression artérielle: le syndrome de Liddle et le pseudoaldostéronisme de type I (PHA I). La première pathologie est un gain de fonction du canal provoquant une hypertension précoce et sévère alors que le PHA I est une perte de fonction caractérisée par une diminution de la réabsorption sodium et une hypotension. ENaC est également une cible thérapeutique de choix dans les hypertensions de type 1. Il a récemment été démontré que la sous-unité [alpha] ENaC était impliquée dans l'augmentation de l'activité du canal de cobaye mais pas de rat par deux ligands extra-cellulaires: le cpt-cAMP un analogue perméant de l'AMPc, et le glibenclamide, un inhibiteur des canaux K[indice inférieur ATP]. Notre objectif est de déterminer les sites d'interaction des ces ligands avec ENaC ce qui permettra de mieux comprendre la relation structure/fonction de la boucle extra-cellulaire. Des techniques de biologie moléculaire nous ont permis de construire des sous-unités [alpha] chimériques contenant des séquences de rat et de cobaye. Ces chimères ont été coexprimées dans l'ovocyte de xénope avec les sous-unités [bêta] rat et [gamma] rat et les courants macroscopiques ont été enregistré en voltage clamp à deux électrodes. Nous avons ainsi déterminé que les régions centrales et terminales de la boucle extra-cellulaire de la sous-unité [alpha]gp conféraient une sensibilité partielle au cpt-cAMP. La réalisation de mutants nous a permis d'identifier cinq acides aminés dans la région terminale de la boucle dont une isoleucine en position 510 indispensable à l'activation du canal par le cpt-cAMP. Nous avons montré en patch clamp en configuration"outside out" que cette augmentation du courant macroscopique résultait d'une augmentation de la NPo du canal et non de sa conductance unitaire. Concernant l'interaction entre le glibenclamide et la sous-unité [alpha], nous avons employé la même approche que pour le cpt-cAMP. Nos résultats préliminaires indiquent que la totalité de la boucle extra-cellulaire est impliquée dans l'interaction avec le glibenclamide. Comme pour le cpt-cAMP, la région terminale de la boucle extra-cellulaire confère la plus grande sensibilité au ligand. Cependant, nous n'avons pas identifié tous les acides aminés interagissant avec le glibenclamide. Nous soupçonnons l'isoleucine 510 de jouer un rôle dans cette interaction.

Le canal épithélial sodique ENaC est responsable de la réabsorption du sodium dans les cellules principales du tubule collecteur rénal. La cristallisation d'ASIC, un autre membre de la famille ENaC/Deg, a été publiée mais la constitution du pore interne reste indéterminée. La mutation aS589C du filtre de sélectivité d'ENaC permet le passage du Cd2+ externe capable d'inhiber le canal muté. Nous avons montré que la chaine latérale de la aSer589 n'est pas orientée vers l'intérieur du pore, permettant au Cd2+ de traverser le canal et d'interagir avec la cysteine gCys546. Puis nous nous sommes intéressés au mécanisme d'inhibition d'ENaC par les réactifs sulfhydryl (MTS) internes. Nous avons mis en place une nouvelle approche couplant la méthode d'analyse par substitution de cystéines avec des perfusions internes de MTSEA-biotine. Ainsi, nous pouvons mettre en corrélation les acides aminés accessibles aux MTS internes et ceux qui sont importants dans la fonction du canal.

Le canal sodique épithélial sensible à l'amiloride (ENaC) est une protéine composée de trois sous unités similaires [alpha][bêta][gamma] codées par trois gènes distincts et associées en un complexe hétérotétramérique [alpha]2[bêta][gamma]. ENaC est localisée au niveau de la membrane apicale des cellules épithéliales à jonctions serrées. C'est une protéine clé de la réabsorption du sodium au niveau du néphron distal, des voies aériennes supérieures et du colon distal. Son rôle dans la régulation du volume extracellulaire et la pression sanguine a été renforcé par la découverte de deux maladies génétiques humaines liées à la fonction du canal : le syndrome de Liddle et le pseudoaldostéronisme de type I (PHA I) due respectivement à un gain et une perte de fonction du canal. L'activité et l'expression de ce dernier sont finement régulées. Sa régulation par les sérines protéases et le sodium extracellulaire (auto-inhibition) a été mis en évidence par Chraïbi et collaborateurs en 1997, mais peu de choses sont connues sur les mécanismes et le rôle fonctionnel de la boucle extracellulaire dans ces différentes voies de régulation. Notre objectif est d'identifier les sites potentiels impliqués dans ces différentes voies de régulation. Pour ce faire, des mutations au niveau de la partie terminale de la boucle extracellulaire des sous unités [alpha], [bêta] et [gamma] du canal ont été réalisées par mutagenèse dirigée et l'effet des sérines protéases et du sodium extracellulaire a été étudié. Nos résultats, obtenus par la technique de voltage-clamp à deux électrodes, montrent que le domaine WPS (un domaine conservé dans les trois sous unités des différentes espèces et situé au niveau de la partie terminale de la boucle extracellulaire du canal) est impliqué dans la régulation d'ENaC par les sérines protéases et le sodium extracellulaire. Nous avons montré plus particulièrement que le tryptophane [alpha]W453 a un rôle fonctionnel majeur dans ces deux voies de régulation. Sa substitution par une arginine au niveau de la sous unité [alpha] rend ENaC résistant à la trypsine et abolit totalement l'inactivation du canal par le sodium extracellulaire. Par contre, la même mutation au niveau de la sous unité [gamma] ne change ni la réponse du canal à la trypsine ni sa sensibilité au sodium extracellulaire, alors que les canaux portant la mutation W/R au niveau de la sous unité [bêta] ont une sensibilité intermédiaire. L'ensemble de ces résultats montre le rôle fonctionnel de la boucle extracellulaire d'ENaC dans la régulation du canal par les sérine-protéases et le sodium extracellulaire.

Le CFTR est un canal chlorure qui est muté dans la mucoviscidose. Son dysfonctionnement en tant que canal est à l'origine des manifestations pathologiques de la maladie, notamment en ce qui concerne les modifications des sécrétions des différents organes touchés. Mais le CFTR est également une protéine capable de réguler l'activité d'autres protéines, comme le canal sodique ENaC. Dans la mucoviscidose, l'activité de ce dernier est anormalement élevée, sans mutation sur le gène codant pour la protéine. D'où l'hypothèse d'une régulation de ENaC par le CFTR. Etant donné les informations divergentes dans la littérature, nous avons abordé ce problème en utilisant un système cellulaire dans lequel l'expression du CFTR est régulée. Nous avons ainsi pu établir qu'il existe bien une interaction entre ces deux protéines. L'expression du CFTR induit une diminution de la réponse du canal ENaC à une augmentation de l'AMPc intracellulaire. Cette inhibition est d'autant plus importante que le niveau d'expression du CFTR est important. Cette interaction a lieu uniquement après stimulation du CFTR. Nous avons également pu observer l'effet prédominant des ions chlorure sur l'activité du canal ENaC, ceux-ci diminuant l'effet inhibiteur du CFTR. Nous résultats permettent d'expliquer, du moins en partie, les divergences observées dans la littérature, liées à l'importance du niveau d'expression du CFTR. L'implication des ions chlorures dans l'activité du canal ENaC ouvre de nouvelles voies de recherche thérapeutiques.

I. DESCRIPTION DE PROJET DE RECHERCHE

Le canal sodium épithélial bloquable par l’amiloride (ENaC) est une protéine intégrale de la membrane apicale des épithéliums impliqués dans l’absorption du sodium. Deux fonctions majeures sont directement liées au fonctionnement d’ENaC. D’une part, la régulation de la balance sodée par le rein et donc de la pression artérielle et d’autre part, la clairance du fluide alvéolaire pulmonaire.

Le transport vectoriel de sel et d’eau à travers ces épithéliums à jonctions serrées repose sur un transport actif de sodium entraînant un flux osmotique d’eau. Ce transport de sodium s’effectue en deux étapes: l’entrée apicale, par diffusion, facilitée via ENaC, et la sortie basolatérale, active, par les pompes Na+/K+ ATPases.

Ces dernières années, un intérêt grandissant est porté sur les acides gras polyinsaturés à longues chaînes de type oméga 3 (PUFAs) et leurs implications dans divers processus physiologiques. Entre autres effets, les PUFAs modulent différents types de canaux ioniques (canaux Na+ dépendant du voltage, Ca++ L-type, K+).

Les études in vivo impliquant un effet à long terme des PUFAs décrivent des mécanismes inhibiteurs. Cependant, lors d’une étude précédente, axée sur la composition lipidique des membranes de cellules rénales en culture et l’influence de l’ajout d’acides gras saturés et insaturés sur le transport du sodium, nous avons constaté que les acides gras polyinsaturés à longues chaînes de type oméga 3 augmentaient la réabsorption du sodium. Ces résultats pourraient être intéressants, car les canaux sodiques de l’épithélium alvéolaire sont en contact direct avec le surfactant, dont la composition lipidique varie en fonction de l’apport alimentaire en PUFAs. Chez les prématurés humains, le syndrome de détresse respiratoire est une des causes les plus fréquentes de mortalité. Dans un certain nombre de cas, on peut restaurer une fonction pulmonaire satisfaisante par l’administration de surfactant.

Dans ce travail, nous avons opté pour une approche fondamentale des mécanismes de régulation du canal sodium épithélial par l’acide eicosapentanoïque (EPA, C 20:5, n-3). Des études électrophysiologiques, biochimiques et d’imagerie cellulaire ont été réalisées sur la lignée cellulaire A6 de rein d’amphibien, qui sert d’épithélium modèle pour l’étude d’ENaC depuis plus de 25 ans. Cette lignée exprime des canaux sodiques très sélectifs et possède des propriétés électrophysiologiques facilitant l’étude de leur régulation.

Ce travail nous a permis de mettre en évidence de nouveaux mécanismes fondamentaux dont la pertinence physiologique et /ou clinique ne pourra être établie qu’en transposant cette étude sur un modèle in vivo, comme nous le proposons dans les perspectives.

Dans le présent travail, nous avons étudié :

1.\
Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques
info:eu-repo/semantics/nonPublished

Le canal à sodium épithélial sensible à l'amiloride (ENaC) est impliqué dans la régulation de l'absorption du sodium dans le tubule collecteur rénal et l'épithélium du colon distal. De façon inattendue, il a été montré que les kératinocytes de l'épiderme expriment les transcrits de ENaC. Afin de préciser son rôle potentiel dans les kératinocytes, nous avons étudié son expression dans la peau humaine, les kératinocytes humains en culture et le follicule de vibrisse de rat. Nous avons montré que les sous-unités de ENaC (α, β et γ) sont exprimées dans l'épiderme et les kératinocytes en culture (transcrits et protéines). Les kératinocytes ne semblent pas le siège d'un transport transépithelial. Cependant, nous avons montré, par patch-clamp sur cellules entières, la présence d'un canal à sodium. Ayant des propriétés similaires à celles de ENaC, dans une faible proportion des kératinocytes cultivés testés. L'inhibition spécifique de ENaC par le benzamil ou l'amiloride ne modifie pas la taille des kératinocytes et leur efficacité de clonage. L'expression de ENaC est liée à la différenciation kératinocytaire, avec une augmentation importante de l'expression des trois transcrits et, au niveau protéique, de la seule sous-unité β (mais pas des sous-unités α et γ) dans les cellules différenciées de grande taille. Le ENaC pourrait être impliqué, par un mécanisme inconnu, dans la formation ou le maintien des dômes produits par les kératinocytes confluents (les inhibiteurs de ENaC diminuent le nombre de dômes). Par ailleurs, les transcrits de ENaC sont détectés spécifiquement dans la gaine épithéliale externe du follicule de vibrisse, organe mécano-sensoriel, au niveau des couches les plus internes du renflement et du collet. Ceci suggère une implication de ENaC dans la mécano-perception, d'autant que celui-ci appartient à une famille de canaux ioniques dont certains sont mécanosensibles. Une modulation du transport ionique lors de la différenciation épidermique et l'implication de ENaC en physiopathologie cutanée humaine sont discutées.

Le canal sodium présent sur la membrane apicale d'un grand nombre de cellules épithéliales est la cible moléculaire majeure des régulations par l'aldostérone et la vasopressine. Le diurétique amiloride agit en bloquant ce canal. Parmi les différents dérivés de l'amiloride, le phénamil est le plus sélectif et celui qui possède la meilleure affinité pour le canal. Sous forme radio-marquée, le phénamil a permis de titrer le nombre des canaux dans différents tissus comme le rein, la thyroïde et la barrière hémato-encéphalique. Dans ces tissus, les canaux observés lient tous l'amiloride et le phénamil, mais possèdent des caractéristiques variables. Leur observation indique qu'il existe une famille de canaux cationiques sensibles à l'amiloride. Le récepteur du [3H]phénamil a été purifié à homogénéité. Il est formé d'un homodimère de 185 KDA constitué après la formation de ponts disulfurés entre deux sous-unités de 100 KDA. La réincorporation de la fraction purifiée provoque l'apparition d'une activité de transport du sodium, électronique, blocable par le phénamil et par l'amiloride. La purification de la protéine a rendu possible la production d'anticorps polyclonaux et monoclonaux, qui permettent d'identifier la protéine en western blot et en immunoprécipitation. Elle a également conduit au clonage d'un cDNA codant pour le récepteur de l'amiloride humain. Enfin, le gène de la protéine humaine a été localisé sur le chromosome 7, non loin de la région impliquée dans la mucoviscidose qui est une maladie héréditaire qui touche les épithéliums

Nos travaux ont démontré l’existence d’une régulation réciproque entre le métabolisme du Na+ et la voie de transcription proinflammatoire NFκB dans les cellules principales du tube collecteur rénal. L’aldostérone active la voie canonique NFκB selon un mécanisme dépendant du récepteur aux minéralocorticoïdes et de la kinase induite par l’aldostérone, SGK1. Inversement, la stimulation de la voie canonique NFκB diminue le transport sodé transépithélial en inhibant la transcription de SGK1 par liaison direct à son promoteur. IKKβ, une molécule régulatrice de NFκB, participe à la régulation de l’expression de la Na, K-ATPase en modulant la vitesse de dégradation de la sous-unité α. Afin d’étudier le rôle de la polycystine-1, une protéine impliquée dans la polykystose rénale dominante, sur le transport transépithélial, nous avons généré une lignée cellulaire rénale surexprimant de manière conditionnelle cette protéine. La surexpression de la polycystine-1 ne s’accompagne pas d’anomalie du transport transcellulaire de Na+ mais est associée à des modifications de la perméabilité paracellulaire et une modification du pattern d’expression des claudines.

Dans mon projet de doctorat, j’ai étudié des fonctions primordiales de l’épithélium respiratoire telles que la régulation du transport ionique, la clairance liquidienne et la réparation épithéliale. J’ai particulièrement mis l’emphase sur le rôle des canaux potassiques qui interviennent dans ces trois fonctions de l’épithélium respiratoire. J’ai tout d’abord prouvé que la modulation des canaux potassiques régulait l’activité du promoteur de αENaC, en partie via la voie de signalisation ERK1/2, dans des cellules alvéolaires. Cette régulation entraîne une variation de l’expression génique et protéique du canal ENaC. Physiologiquement, il en résulte une augmentation du phénomène de clairance liquidienne suite à l’activation des canaux K+, tandis que l’inhibition de ces canaux la diminue sévèrement. J’ai aussi pu démontrer que l’absence de canal KvLQT1 entraînait une diminution du courant (ENaC) sensible à l’amiloride, dans les cellules de trachée en culture primaire, isolées de souris KO pour kcnq1. Dans la seconde partie de mon étude, j’ai évalué l’impact de l’hyperglycémie sur la capacité de transport ionique et de réparation de cellules épithéliales bronchiques saines ou Fibrose Kystique. Mes résultats montrent que l’hyperglycémie diminue le transport transépithélial de chlore et le transport basolatéral de potassium. Des études préalables du laboratoire ayant montré que les canaux K+ et Cl- contrôlent les processus de réparation, j’ai donc évalué si ceux-ci étaient modifiés par l’hyperglycémie. Et en effet, l’hyperglycémie ralentit la vitesse de réparation des cellules issues des voies aériennes (CFBE-wt et CFBE-ΔF508). J’ai donc démontré que le transport de potassium intervenait dans des fonctions clés de l’épithélium respiratoire, comme dans la régulation génique de canaux ioniques, le contrôle de la clairance liquidienne alvéolaire, et que l’hyperglycémie diminuait le transport ionique (K+ et Cl-) et la réparation épithéliale.
During my Ph.D. training, I studied 3 important functions of respiratory epithelium : regulation of ion transport, liquid clearance and epithelial repair. I focused on potassium channels, because they control these three respiratory epithelial functions. First, I proved that αENaC promoter activity was regulated following K+ channel modulation, in alveolar cells. This regulation of αENaC promoter which might be through a modification of ERK1/2 phosphorylation, was followed by ENaC mRNA and protein expression regulation. I then showed that activation of KvLQT1 and KATP channels increased alveolar liquid clearance, whereas inhibition of these K+ channels decreased the alveolar clearance. I showed that the absence of KvLQT1 channel inhibited the amiloride-sensitive current (ENaC), in tracheal epithelial cells isolated from KvLQT1-KO mice. In the second part of my Ph.D. project, I studied the impact of hyperglycemia on Cystic Fibrosis (CF) and non-CF epithelial cells. I first observed that K+ and Cl- currents were reduced by hyperglycemia. Because we have previously shown that wound-healing process was dependant on K+ and Cl- channels, I then evaluated the impact of hyperglycemia on wound-healing. As expected, hyperglycemia slowed the repair rate of non-CF (CFBE-wt) and CF (CFBE-ΔF508) cell monolayers.

Le transport actif de sodium par les cellules épithéliales alvéolaires est le principal mécanisme impliqué dans la régulation du niveau de liquide dans le poumon distal. Le canal épithélial sodique (ENaC) exprimé par les cellules épithéliales alvéolaires est essentiel à la résorption du liquide des poumons à la naissance ainsi que la résolution de l'œdème pulmonaire chez l'adulte. L'activité et l'expression du canal ENaC sont modulées par de nombreux stress pathophysiologiques. L'inflammation pulmonaire constitue un facteur important dans l'inhibition de l'expression du canal ENaC et pourrait favoriser la formation d'œdème pulmonaire. Nous avons précédemment démontré que différentes cytokines pro-inflammatoires, ainsi que les lipopolysaccharides (LPS) de Pseudomonas aeruginosa, inhibent l'expression de l'ARNm αENaC par des mécanismes de régulation transcriptionnelle et post-transcriptionnelle. Ces résultats suggèrent que les mécanismes qui modulent la stabilité des ARNm αENaC pourraient jouer un rôle important dans la régulation du niveau d’expression du transcrit en condition inflammatoire. Le principal objectif de mes travaux était de caractériser les mécanismes de modulation de l’ARNm αENaC dans les cellules épithéliales alvéolaires lors de différents stress pathophysiologiques et déterminer si cette modulation pouvait s’expliquer en partie par une régulation de la stabilité du transcrit. Mes travaux montrent que les LPS et la cycloheximide inhibent l’expression de l’ARNm αENaC de façon similaire via l’activation des voies de signalisation des MAPK ERK1/2 et p38. Cependant, les mécanismes de modulation de l’expression de l'ARNm αENaC sont différents puisque les LPS répriment la transcription du gène, alors que la cycloheximide diminuerait la stabilité du transcrit via des mécanismes post-transcriptionnels impliquant la région 3' non traduite (3'UTR) de l'ARNm αENaC. Pour mieux étudier le rôle du 3'UTR dans ce processus, nous avons développé un modèle Tet-Off nous permettant de mesurer la demi-vie de l’ARNm αENaC indépendamment de l’utilisation d’un inhibiteur de la transcription comme l'actinomycine D (Act. D). Nous avons montré que la demi-vie de l’ARNm αENaC était de 100min, un temps beaucoup plus court que celui rapporté dans la littérature. Nous avons démontré que l’Act. D a un effet stabilisateur important sur l’ARNm αENaC et qu’il ne peut être utilisé pour évaluer la stabilité du transcrit. À l’aide de différents mutants de délétion, nous avons entrepris de déterminer la nature des régions du 3’UTR impliquées dans la modulation de la stabilité du transcrit. Nous avons trouvé que le 3’UTR joue un rôle à la fois de stabilisation (région 3’UTR proximale) et de déstabilisation (région 3’UTR distale) du transcrit. Notre système nous a finalement permis de confirmer que la diminution de l’ARNm αENaC observée en présence de TNF-α s’expliquait en partie par une diminution importante de la stabilité du transcrit induite par cette cytokine. Enfin, nous avons identifié la nature des protéines pouvant se lier au 3’UTR de l’ARNm αENaC et déterminé lesquelles pouvaient moduler la stabilité du transcrit. Des trois protéines candidates trouvées, nous avons confirmé que la surexpression de DHX36 et TIAL1 diminue le niveau de transcrit par un mécanisme impliquant la stabilité du messager. Les travaux présentés ici montrent la complexité des voies de signalisation induites par différents stress sur les cellules épithéliales alvéolaires et montrent comment la stabilité de l’ARNm αENaC et en particulier, les séquences du 3’UTR jouent un rôle important dans la modulation du niveau de transcrit. Le modèle Tet-Off que nous avons développé permet d’estimer le temps de demi-vie réel de l’ARNm αENaC et montre que le 3’UTR du messager joue un rôle complexe dans la stabilisation du messager en condition de base ainsi qu’en condition pro-inflammatoire. Enfin, nous avons identifié deux protéines liant l’ARNm qui pourraient jouer un rôle important dans la modulation de la stabilité du transcrit.
The epithelial sodium channel (ENaC) expressed in alveolar epithelial cells plays a major role for lung liquid clearance at birth and lung edema resorption in adulthood. The expression and activity of ENaC are inhibited by many pathophysiological stress that could have an impact in the clinical outcome of acute respiratory distress syndrome (ARDS). Pulmonary inflammation is an important factor in this inhibition that may promote or sustain pulmonary edema. We have previously shown that pro-inflammatory cytokines and lipopolysaccharide (LPS) from Pseudomonas aeruginosa inhibit αENaC mRNA expression by transcriptional and post-transcriptional mechanisms, suggesting that a modulation of αENaC mRNA stability could play a role in this process. The main objective of the present work was to characterize how different pathophysiological stress affect αENaC mRNA expression in alveolar epithelial cells and determine whether this modulation could be explained in part by regulating the stability of the transcript. Our study shows that LPS and cycloheximide decrease the level of αENaC mRNA with a similar time course and via the activation of the MAPK ERK1/2 and p38 signaling pathways. Despite similarities, there were important differences in the mechanisms involved in the modulation of αENaC mRNA expression. While LPS repress αENaC mRNA transcription, cycloheximide triggers post-transcriptional mechanisms involving the 3' untranslated region (3'UTR) of αENaC mRNA. To further study the role of αENaC 3'UTR in this process, we developed a Tet-Off model that allows us to measure the half-life of αENaC mRNA regardless of the use of a transcription inhibitor such as actinomycin D (Act. D). Using this system, we showed a 100 min half-life for αENaC mRNA, a much shorter time then the one reported for this mRNA using Act. D. We showed that Act. D has an important stabilizing effect on αENaC mRNA and cannot be used to assess the stability of the transcript. Using deletion mutants of the αENaC 3'UTR region, we determined how different portions of 3'UTR were important in modulating stability of the transcript. We found that the 3'UTR has dual functions, with portions important to promote stabilization (proximal 3'UTR) and others that strongly destabilize (distal 3'UTR) the transcript. Our system also allowed us to confirm that the decreased expression of αENaC mRNA induced by TNF-α results in part by a decreased stability of the mRNA. Finally, we identified several RNA-binding proteins that interact specifically with αENaC 3'UTR and determined if these proteins had an impact on transcript stability. Surexpression of two of these proteins in alveolar epithelial cells, DHX36 and TIAL1 was able to decrease the level of αENaC mRNA via a downregulation of mRNA stability. The work presented here shows the complexity of the signal transduction pathways elicited by different pathological stress conditions in alveolar epithelial cells and is the first to show that αENaC mRNA stability elicited by sequences in 3’UTR plays an important role in modulating the level of the transcript. The Tet-Off model that we developed allows to accurately estimate the half-life of αENaC mRNA and shows that the 3’UTR portion of the mRNA plays a complex role in the modulation of transcript stability in basal and pro-inflammatory conditions. Finally, we identified two putative RNA-binding proteins able to specifically recognize αENaC 3’UTR and modulate the transcript stability.