Dissertations / Theses on the topic 'Cartílags'

Les lesions de cartílag articular tant traumàtiques com degeneratives són les més difícils i frustrants de tractar per als cirurgians ortopèdics i els pacients que la pateixen. Durant els darrers seixanta anys, cap de les tècniques emprades per tractar-les ha donat resultats satisfactoris. Això ha fet que els cirurgians i enginyers biomèdics investiguin el paper de l'enginyeria de teixits i la bioimpressió com a alternativa viable per al seu tractament en diverses especialitats. L’augment de la literatura científica dels darrers anys, indica que aquesta nova possibilitat de cartílag bioimprès podria convertir-se en una solució alternativa. La bioimpressió podria proporcionar la nova i esperada solució. S’han aplicat diversos mètodes de recerca: una revisió d’abast, una part de recerca qualitativa i un altre quantitativa. La visió proporcionada en aquesta tesi és polièdrica, ja que es te en compte les ultimes investigacions en el camp de la bioimpressió, però també les opinions dels clínics, per a la resolució del problema.
Las lesiones de cartílago articular tanto traumático como degenerativas son las más difíciles y frustrantes de tratar para los cirujanos ortopédicos y los pacientes que las padecen. Durante los últimos sesenta años, ninguna de las técnicas utilizadas para tratarlas ha dado resultados satisfactorios. Esto ha hecho que los cirujanos e ingenieros biomédicos investiguen el papel de la ingeniería de tejidos y la bioimpresión como una alternativa viable para su tratamiento en diversas especialidades. El aumento de la literatura científica en los últimos años indica que esta nueva posibilidad de cartílago bioimpreso podría convertirse en una solución alternativa. La bioimpresión podría proporcionar la nueva y esperada solución. Se han aplicado varios métodos de investigación: una revisión de alcance, una parte de investigación cualitativa y otra cuantitativa. La visión proporcionada en esta tesis es poliédrica, ya que se tiene en cuenta las últimas investigaciones en el campo de la bioimpressió, pero también las opiniones de los clínicos, para la resolución del problema.
Both traumatic and degenerative joint cartilage injuries are the most difficult and frustrating to treat for orthopedic surgeons and their patients. During the last sixty years, none of the techniques used to treat cartilage lesions have yielded satisfactory results. This has made biomedical surgeons and engineers investigate the role of tissue engineering and bioprinting as a viable alternative for your treatment in diverse specialties. The increase in the scientific literature in recent years indicates that this new possibility of bioprinted cartilage could become an alternative solution. Bioprinting could provide the new and expected solution. Various research methods: a scoping review, a part of qualitative research and another quantitative part have been applied. The view provided in this thesis is polyhedral, as it considers the latest research in the field of bioprinting, but also the opinions of clinicians, to solve the problem.

El xoc femoroacetabular (XFA), com un canvi en la morfologia de l’fèmur proximal o l’acetàbul, produeix una alteració mecànica en l’articulació del maluc que pot iniciar el procés degeneratiu i finalment l’osteoartritis. Hi ha dos problemes seriosos associats amb XFA; La delaminació condral, que passa amb més freqüència amb el cap no esfèrica de l’fèmur (tipus CAM) a causa de les forces de tall repetides, i el dany labral que és més freqüent amb la sobrecobertura acetabular (tipus pinça) a causa de les forces de compressió repetides. El propòsit d’aquest estudi va ser avaluar els resultats a curt i mitjà termini de l’ús de la bastida a força de quitosà amb microfractura durant el tractament artroscòpic de XFA i lesions condrals acetabulares associades en pacients joves actius. Els casos inclosos tenien malucs no artrítiques no displàsiques a l’edat de 18 a 55 anys. El tractament artroscòpic va consistir en la resecció de la deformitat de Cam (femoroplastia), la resecció de la deformitat de la pinça (acetabuloplastia), la reparació de l’labrum estripat i el maneig de l’cartílag acetabular segons el grau de dany. Les lesions de cartílag de gruix parcial es van tractar mitjançant desbridament superficial. Lesions acetabulares petites de gruix complet (<2 cm2) van ser tractades per microfractures. Les lesions grans de gruix complet (≥2 cm 2) van rebre augment pels implants basats en Chitosan. El resultat clínic es va avaluar en 23 pacients inclosos en l’estudi. Els resultats van mostrar una millora significativa en els quatre escales de 21 pacients (91%) durant el primer any. La millora funcional no ha canviat significativament per a les mateixes pacients durant el segon any fins el punt final de l’estudi, ja que va referir la comparació amb els escales corresponents del primer any, excepte per la puntuació iHOT33 que va mostrar una millora significativa addicional. És important assenyalar que les complicacions majors, com infecció, TVP, inestabilitat i fractures, no es van registrar en cap cas del nostre estudi. Un pacient va necessitar artroplàstia total de maluc. Es va produir hipoestesia perineal en 3 pacients i es va recuperar en 2-6 setmanes, i un pacient va necessitar un programa de fisioteràpia prolongat per la rigidesa muscular postoperatòria. La qualitat de la reparació de l’cartílag es va avaluar en vint-pacients mitjançant tècniques de mapeig T2 de ressonància magnètica (RM) després de 24 mesos. Els temps de relaxació T2 de l’àrea de reparació s’han comparat amb el cartílag posterior corresponent. L’anàlisi quantitativa de relaxació T2 va mostrar una diferència no significativa entre l’àrea perifèrica de el teixit de reparació (en la unió condrolabral) i el cartílag acetabular natiu posterior. A més, es va poder observar una diferència no significativa entre els valors de T2 de l’àrea central de el teixit de reparació (prop de el centre de l’articulació) i el cartílag acetabular posterior natiu. Es van publicar dos articles d’aquest treball; el primer va incloure els resultats clínics obtinguts als 38 mesos de seguiment, el segon va incloure el resultat radiològic de l’estudi de mapatge quantitatiu T2 imatges de ressonància magnètica. L’estudi va concloure l’eficàcia de la utilització d’implants basats en Chitosan amb microfractura per al tractament de defectes condrals acetabulares de gran espessor associats amb XFA, com es mostra a la millora clínica i el resultat radiològic. Això va proporcionar una modalitat prometedora per a la preservació de les articulacions del maluc en pacients joves actius.
El choque femoroacetabular (CFA), como un cambio en la morfología del fémur proximal o el acetábulo, produce una alteración mecánica en la articulación de la cadera que puede iniciar el proceso degenerativo y finalmente la osteoartritis. Hay dos problemas serios asociados con CFA; La delaminación condral, que ocurre con mayor frecuencia con la cabeza no esférica del fémur (tipo CAM) debido a las fuerzas de corte repetidas, y el daño labral que es más frecuente con la sobrecobertura acetabular (tipo pinza) debido a las fuerzas de compresión repetidas. El propósito de este estudio fue evaluar los resultados a corto y mediano plazo del uso del andamio a base de quitosano con microfractura durante el tratamiento artroscópico de CFA y lesiones condrales acetabulares asociadas en pacientes jóvenes activos. Los casos incluidos tenían caderas no artríticas no displásicas en la edad de 18 a 55 años. El tratamiento artroscópico consistió en la resección de la deformidad de Cam (femoroplastia), la resección de la deformidad de la pinza (acetabuloplastia), la reparación del labrum desgarrado y el manejo del cartílago acetabular según el grado de daño. Las lesiones de cartílago de espesor parcial se trataron mediante desbridamiento superficial. Lesiones acetabulares pequeñas de espesor completo (<2 cm2) fueron tratadas por microfracturas. Las lesiones grandes de espesor completo (≤2 cm2) recibieron aumento por los implantes basados en Chitosan El resultado clínico se evaluó en 23 pacientes incluidos en el estudio. Los resultados mostraron una mejora significativa en los cuatro escalas de 21 pacientes (91%) durante el primer año. La mejora funcional no ha cambiado significativamente para los mismos pacientes durante el segundo año hasta el punto final del estudio, ya que refirió la comparación con los escalas correspondientes del primer año, excepto por el puntaje iHOT33 que mostró una mejora significativa adicional. Es importante señalar que las complicaciones mayores, como infección, TVP, inestabilidad y fracturas, no se registraron en ningún caso de nuestro estudio. Un paciente necesitó artroplastia total de cadera. Se produjo hipoestesia perineal en 3 pacientes y se recuperó en 2-6 semanas, y un paciente necesitó un programa de fisioterapia prolongado para la rigidez muscular postoperatoria. La calidad de la reparación del cartílago se evaluó en veintiún pacientes mediante técnicas de mapeo T2 de resonancia magnetica (RM) después de 24 meses. Los tiempos de relajación T2 del área de reparación se han comparado con el cartílago posterior correspondiente. El análisis cuantitativo de relajación T2 mostró una diferencia no significativa entre el área periférica del tejido de reparación (en la unión condrolabral) y el cartílago acetabular nativo posterior. Además, se pudo observar una diferencia no significativa entre los valores de T2 del área central del tejido de reparación (cerca del centro de la articulación) y el cartílago acetabular posterior nativo. Se publicaron dos artículos de este trabajo; el primero incluyó los resultados clínicos obtenidos a los 38 meses de seguimiento, el segundo incluyó el resultado radiológico del estudio de mapeo cuantitativo T2 imágenes de resonancia magnetica. El estudio concluyó la eficacia de la utilización de implantes basados en Chitosan con microfractura para el tratamiento de defectos condrales acetabulares de gran espesor asociados con CFA, como se muestra en la mejoría clínica y el resultado radiológico. Esto proporcionó una modalidad prometedora para la preservación de las articulaciones de la cadera en pacientes jóvenes activos.
Femoroacetabular impingement (FAI), as a change in the morphology of the proximal femur or the acetabulum, produces a mechanical disturbance in the hip joint which can initiate the degenerative process and finally osteoarthritis. There are two serious problems associated with FAI; chondral delamination which occurs more frequently with the non-spherical head of femur ( CAM type) because of repeated shear forces, and labral damage which is more frequent with the acetabular over-coverage ( pincer type) due to repeated compressive forces. The purpose of this study was to evaluate the short-term and mid-term results of using the chitosan-based scaffold with microfracture during the arthroscopic treatment of FAI and associated acetabular chondral lesions in young active patients. The included cases were non-arthritic non-dysplastic hips in the age of 18 to 55 years old. The arthroscopic treatment consisted of resection of the Cam deformity (femoroplasty), resection of the pincer deformity (acetabuloplasty), repair of the torn labrum, and management of the acetabular cartilage according to the degree of damage. Partial thickness cartilage lesions were treated by superficial debridement. Small full-thickness acetabular lesions (<2 cm2) were treated by microfractures. Large full-thickness lesions (≤2 cm2) received augmentation by the chitosan-based scaffold material. Clinical outcome was evaluated in 23 patients included in the study. The results showed a significant improvement in the four PROs of 21 patients (91%) during the first year. The functional improvement hasn’ t changed significantly for the same patients during the second year up to the endpoint of the study as referring the comparison with the corresponding first year PROs except for the iHOT33 score which showed further significant improvement. It is importantly noted that major complications, such as infection, DVT, instability and fractures, were not recorded in any case of our study. One patient needed total hip arthroplasty. Perineal hypoesthesia occurred in 3 patients and recovered within 2-6 weeks, and one patient needed prolonged physiotherapy program for postoperative muscular stiffness. Cartilage repair quality was assessed in twenty-one patients by T2 mapping techniques of MRI after 24 months. T2 relaxation times of the repair area have been compared with the corresponding posterior cartilage. Quantitative T2 relaxation analysis showed a non-significant difference between the peripheral area of the repair tissue (at the chondrolabral junction) and the native acetabular cartilage posteriorly. Also, a non-significant difference could be observed between the T2 values of the central area of the repair tissue (close to the center of the joint) and the native posterior acetabular cartilage. Two articles were published from this work; the first included the clinical results obtained at mean 38 months follow-up, the second included the radiological outcome of the quantitative T2 mapping study. The study concluded the efficacy of using the chitosan-based scaffold with microfracture for treatment of large full thickness acetabular chondral defects associated with FAI as shown the clinical improvement and radiological outcome. This provided a promising modality for preservation of hip joints in young active patients
Universitat Autònoma de Barcelona. Programa de Doctorat en Cirurgia i Ciències Morfològiques

El objetivo de esta tesis fue obtener un cultivo primario de condrocitos de Equus caballus post-mortem, aislados de cartílago hialino articular esternocostal. Se colectaron un total de 24 de cajas torácicas de caballos beneficiados para consumo humano y animal, obtenidos del Camal de Equinos Casablanca ubicado en el distrito de Pachacamac, Lima; de cada una de ellas se obtuvieron 4 muestras de cartílago de forma semiovalada irregular de 0.8 cm de ancho, 0.6 cm de largo y 0.2 cm de alto aproximadamente. El aislamiento de condrocitos se realizó de forma mecánica, con la técnica de cuchillas cruzadas de Freshney (2005), y de forma enzimática con solución de tripsina 0.05 % con 0.5 g de EDTA, solución de colagenasa 0.2% y 0.04 %. Luego las células fueron cultivados en Basal Medium Eagle (BME) + 10% Suero Bovino Fetal (SBF), BME + 5%SBF, Tissue Culture Medium-199 (TCM-199) + 10%SBF y TCM-199 + 5%SBF; por un periodo de 10 días a 37 °C, 5% de CO 2 y 5% de humedad. Posteriormente, las células fueron resuspendidas de las placas en solución de tripsina (tripsina 0.05%, EDTA 0.2 g.), para contarlas en una cámara de Neubauer y así determinar la tasa de proliferación y la tasa de supervivencia. Se observó un incremento en la proliferación celular tanto en BME como en TCM-199 con 10% de SBF, siendo la tasa de proliferación obtenida para BME+10%SBF de 4,550+/-1,366, para TCM-199+10%SBF de 3,709+/-1,183, para BME+5%SBF de 0,438+/-0,095 y para TCM-199+5%SBF de 0,388+/-0,093; por tanto, el medio de cultivo que obtuvo la mejor tasa de proliferación fue BME + 10%SBF. La tasa de supervivencia no superó el valor de 1 en todos los medios; sin embargo, la que se acercó más a este valor fue la obtenida con BME + 10%SBF (0.987+/-0.025). En conclusión, se logró obtener un cultivo primario de condrocitos a partir de cartílago hialino articular esternocostal de Equus caballus post-mortem, siendo BME + 10% SBF el medio que presentó los mejores resultados.
--- The objective of this thesis was to obtain a primary culture of chondrocytes from postmortem Equus caballus, isolated from hyaline articular sternocostal cartilage. We collected a total of 24 rib cages of benefit horses for human and animal consumption, obtained from Casablanca Equine Camal located in the district of Pachacamac, Lima; from each one we obtained 4 irregular semi-oval samples of 0.8 cm width, 0.6 cm long and 0.2 cm tall. The isolation of chondrocytes was performed mechanically, with the technique of cross blades from Freshney (2005), and so enzymatically with 0.05% trypsin solution with 0.5 g of EDTA, 0.2% and 0.04% collagenase solution. Then they were grown in Basal Medium Eagle (BME) + 10% Fetal Bovine Serum (FBS), BME + 5% FBS, Tissue Culture Medium-199 (TCM-199) + 10% FCS and TCM-199 + 5% FBS; for a period of 10 days at 37 ° C, 5% CO2 and 5% humidity. Subsequently, cells were resuspended from the plates in trypsin solution (trypsin 0.05%, EDTA 0.2 g.), to count them in a Neubauer chamber and to determine the proliferation rate and survival rate, respectively. We observed an increase in cell proliferation in both BME and in TCM-199 with 10% FBS, the proliferation rate obtained for BME +10% FBS was 4.550 + / -1.366, for TCM-199 +10% FBS was 3.709 + / -1.183, for BME +5% FBS was 0.438 + / -0.095 and for TCM-199 + 5 % SBF was 0.388 + / -0.093, therefore the culture medium that obtained the best proliferation rate was BME + 10% FBS. The survival rate did not exceed the value of 1 in all media, but the one closer to this value was the obtained with BME + 10% FBS (0987 + / -0025). In conclusion, it was possible to obtain a primary culture of chondrocytes from hyaline articular sternocostal cartilage of Equus caballus post-mortem, being BME + 10% FBS the medium which had the best results.
Tesis

Las lesiones condrales y osteocondrales en la rodilla aparecen en gente joven, activa y con gran expectativa de vida. Estás suponen un gran problema, puesto que este una vez destruido, ya no se repara. Debido a la escasa capacidad intrínseca de curación del cartílago, sus lesiones tienden a causar morbilidad en forma de dolor articular y disfunción. Existen diferentes técnicas quirúrgicas que mejoran la sintomatología y la historia natural de las lesiones condrales. Las lesiones del cartílago articular en la rodilla se agrupan en función si afectan al compartimento femorotibial o el femoropatelar. Este estudio analiza la evolución del tratamiento de las lesiones condrales en dos técnicas diferentes: mosaicoplastia e implantes sintéticos. La primera parte del trabajo presenta un estudio retrospectivo sobre lesiones condrales y osteocondrales en cóndilos femorales tratadas con trasplante de autoinjerto osteocondral (mosaicoplastia). Con el objetivo de evaluar los resultados clínicos, de calidad de vida y satisfacción del paciente. Así como la integración del implante en la zona afecta entre los 4 y 7 años postoperatorios mediante resonancia magnética nuclear . Los pacientes con lesiones condrales y osteocondrales de 1 a 4 cm2 en cóndilos femorales tratadas mediante mosaicoplastia presentan buenos resultados clínicos y funcionales (IKDC y EVA), una mejoría en la calidad de vida (SF-36) y en el grado de satisfacción. A los 4 años la puntuación media del IKDC fue de 75% (rango 36 a 100%), SF-36 del 83% (rango 64 a 93%) y la EVA era ≤3 en 13 de 14 pacientes. Y a los 7 años de la intervención la puntuación media del IKDC fue de 88% (rango 69 a 98%), el SF-36 del 90% (rango 81 a 95%) y la EVA era ≤3 en todos los pacientes. Los resultados más pobres se observan en lesiones >2 cm2 y pacientes >45 años. La RNM a los 7 años mostró una correcta integración del implante en todos excepto en 3 pacientes que se observaban fisuras en la superficie del cartílago articular trasplantado, sin significación clínica. Por lo tanto recomendamos la el tratamiento con autoinjerto osteocondral o mosaicoplastia en pacientes jóvenes con lesiones osteocondrales de tamaño limitado. La segunda parte del trabajo es un estudio prospectivo sobre lesiones condrales en la articulación femoropatelar tratadas con implantes sintéticos biodegradables (Trufit®). Hasta ese momento, sólo se había descrito su utilización sobre lesiones en los cóndilos femorales, con buenos resultados a corto plazo. El objetivo del trabajo era evaluar los resultados clínicos, cuestionarios funcionales de la rodilla y cuestionario sobre calidad de vida en pacientes con lesión condral de la rótula tratados mediante implantes sintéticos biodegradables. También, las características en la resonancia magnética nuclear de los implantes sintéticos reabsorbibles utilizados en la reparación de defectos condrales de la rótula a los 6, 12, 18 y 24 meses postoperatorios. Los pacientes presentan una correcta evolución postoperatoria respecto al preoperatorio: en cuanto a la clínica, mejora del dolor (EVA), función articular (KOOS), calidad de vida (SF-36) y grado de satisfacción a los 12 meses de la intervención. Estos resultados se deterioraron progresivamente a los 18 y 24 meses. Al los dos años de la intervención en todos excepto un paciente, el estudio mediante RNM reveló algún grado de insuficiencia en la incorporación del implante y alteración en la superficie articular en forma de colapso y fisuras. En todos los casos se procedió a la retirada del implante, el estudio morfológico del material extraído demostró el fracaso en la restauración del hueso subcondral a pesar de la formación de cartílago hialino en su superficie. Después de nuestro estudio no recomendamos el empleo de TruFit® para defectos condrales rotulianos en pacientes jóvenes y activos.
Chondral and osteochondral lesions in the knee appear in young, active and demanding people with high expectations of life. This represents a big problem, since the cartilage once destroyed, has no potential to repair. Due to poor intrinsic healing capacity the Chondral and osteochondral lesions tend to cause morbidity in form of pain and dysfunction. There are different surgical techniques. Articular cartilage injuries in the knee are grouped depending on the compartment affected: the tibiofemoral or the patellofemoral. This study analyses the evolution of the treatment of chondral injuries in two different techniques: mosaicplasty and synthetic implants. The first part of the paper presents a retrospective study of chondral and osteochondral lesions in femoral condyles treated with osteochondral autograft transplantation (mosaicplasty). In order to assess clinical outcomes, quality of life and patient satisfaction. As well, the integration of the implant in the affected area between 4 and 7 years postoperatively by nuclear magnetic resonance. Patients with chondral and osteochondral lesions of 1 to 4 cm2 in femoral condyles treated by mosaicplasty have good clinical and functional results (IKDC and EVA), an improvement in quality of life (SF-36) and satisfaction. At 4 years the average IKDC score was 75% (range 36-100%), SF-36 of 83% (range 64-93%) and EVA was ≤3 in 13 of 14 patients. Seven years postoperatively the mean IKDC score was 88% (range 69-98%), the SF-36 90% (range 81-95%) and EVA was ≤3 in all patients. The poorest results were seen in lesions> 2 cm2 and patients> 45 years. MRI at 7 years showed correct integration of the implant in all cases except in three patients in which surface fissures were observed in the transplanted articular cartilage without clinical significance. Therefore we recommend treatment with osteochondral autograft or mosaicplasty in young patients with osteochondral lesions of limited size. The second part of the study is a prospective study of chondral injuries in the patellofemoral joint treated with biodegradable synthetic implants (Trufit®). Until then, in the literature its use had only been descibred in injuries in the femoral condyles, with good short-term results. The objective of this study was to evaluate clinical outcomes, functional knee questionnaires and quality of life questionnaires in patients with patellar chondral lesions treated with biodegradable synthetic implants. Also, the nuclear magnetic resonance characteristics of synthetic resorbable implants used to repair chondral defects of the patella at 6, 12, 18 and 24 months postoperatively. Patients had good results in terms of clinical improvement in pain (VAS), joint function (KOOS), quality of life (SF-36) and degree of satisfaction at 12 months after surgery. These results deteriorated progressively at 18 and 24 months. Two years after surgery in all patients except one, the MRI study revealed some degree of failure in the incorporation of the implant and alterations in the cartilage surface such as collapse and fissures. In all cases we proceeded to remove the implants, the morphology of the removed material showed the failure in restoration of the subchondral bone despite the formation of hyaline cartilage on the surface. After our study we do not recommend using TruFit® for patellar chondral defects in young and active patients.

Proyecto Integrador (I.Biom.)--FCEFN-UNC, 2017
Diseña e implementa los algoritmos necesarios para la segmentación automática del cartílago articular de la rodilla en imágenes de resonancia magnéticas

Les malalties articulars representen un problema de salut rellevant amb un prevalença molt alta (a Europa pot variar entre el 11% i el 25%) i que continua augmentant dia a dia en el món occidental. Durant els últims 20 anys, les cèl·lules mare mesenquimals adultes (CMMA) i les seves propietats regeneratives s’han estudiat intensament per trobar aplicacions factibles per a la cura d’aquestes malalties. La combinació d’aquestes cèl·lules amb materials sintètics, com els biopolímers, ha fet sorgir una nova branca mèdica, la medicina regenerativa. El treball que es presenta a continuació aborda el desenvolupament d’una teràpia basada en la medicina regenerativa pel tractament de lesions osteocondrals, on el cartílag articular afectat no es pot reparar ni regenerar per si sol. Es planteja el disseny i la realització d’un assaig preclínic per a la regeneració d’una lesió osteocondral artificial en model animal, oví en aquest cas, mitjançant una combinació de CMMA i un biopolímer. Com a punt de partida, es realitzen estudis de caracterització de les diferents fonts cel·lulars de CMMA provinents de tres teixits diferents: cartílag hialí, moll d’os i greix. S’han posat a punt els mètodes d’aïllament i expansió, i s’ha realitzat una caracterització de les cinètiques de creixement de les CMMA, obtenint resultats que indiquen una relació inversament proporcional entre la densitat de sembra i la velocitat específica màxima de creixement. Es demostra que les CMMA són mesenquimals amb l’anàlisi del fenotip, la fisiologia, la morfologia i la multipotencialitat que han mostrat al ser analitzades. Es dissenya un assaig preclínic per a la regeneració de lesions osteocondrals, en el model animal escollit, mitjançant un constructe format per CMMA i un polímer sintètic, l’Àcid poli-làctic-co-glicòlic (PLGA). La fabricació i la caracterització del constructe PLGA-CMMA es realitza en funció de l’assaig dissenyat. El PLGA s’estudia a nivell de porositat i de la seva capacitat per ser colonitzat homogèniament per les CMMA. Histològicament es demostra la colonització homogènia de les CMMA. Un cop caracteritzat el constructe es posa a punt un experiment pilot on s’aïllen CMMA de cartílag hialí extretes d’una ovella, s’expandeixen, es colonitzen en un cilindre de PLGA i es reintrodueixen artroscòpicament a l’articulació femorotibial, on prèviament s’ha generat una lesió osteocondral artificial, per avaluar la possible regeneració o reparació amb els resultats macroscòpics, imatges de ressonància magnètica i histologia de les mostres. Els resultats mostren un constructe biocompatible i bioreabsorbible que regenera cartílag hialí en alguns casos. Per confirmar aquests resultats es realitza un assaig preclínic de les mateixes característiques que el pilot, amb la comparació de les diferents fonts cel·lulars caracteritzades, amb un nombre superior d’animals i amb els temps d’estudi ampliats a 6 i 12 mesos . Els resultats mostren la seguretat del tractament desenvolupat i una eficàcia major en el tractament basat en l’aplicació de PLGA colonitzades amb CMMA provinents de moll d’os. Aquesta memòria s’estructura, doncs, de manera que inicialment es fa una introducció (capítol 1), on es realitza una descripció exhaustiva del cartílag hialí, els diferents tractaments de les patologies osteocondrals, el concepte de la medicina regenerativa, les CMMA, els biopolímers i les interaccions cèl·lula-polímer. Seguidament (capítol 2), es plantegen els principal objectius del treball. Al capítol 3 es realitza la caracterització cel·lular de les CMMA. A continuació ( capítol ) es realitzen els estudis previs amb el PLGA, les CMMA i la seva colonització, per a posar a punt el estudi pilot en model animal. Al capítol 5 es realitza l’assaig preclínic. En el capítol 6, s’exposen les principals conclusions extretes del treball. Finalment, es presenten els materials i mètodes emprats (capítol 7), i s’afegeix l’apèndix (capítol 8).
The joint diseases represent a significant health problem with a very high prevalence (in Europe varies between 11% and 25%) and still rising every day in the western world. Last 20 years, the adult mesenchymal stem cells and their regenerative properties have been studied intensively to find feasible applications for the cure of these diseases. The combination of these cells with synthetic materials such as biopolymers, has emerged a new branch of medicine, regenerative medicine. The work presented below focuses on the development of a therapy-based regenerative medicine for the regeneration of osteochondral injury where the cartilage is affected and cannot repair or regenerate itself. In this dissertation we present a design and realization of a preclinical trial for osteochondral injury regeneration, in sheep animal model, through a combination of CMMA and a biopolymer. As starting point, studies were performed to characterize different cellular sources of CMMA from three different tissues: hyaline cartilage, bone marrow and fat. Different methods have been set up for isolation and expansion of CMMA, and growth kinetics have been characterized, obtaining results that indicate an inverse relationship between seeding density and the maximum specific growth rate. We show that the CMMA are mesenchymal stem cell because of phenotype analysis, physiology, morphology and multipotentiality. A preclinical trial for regeneration of osteochondral lesions in animal model (sheep) is designed and composed by a construct consisting in CMMA colonized in a synthetic polymer, poly-Lactic Acid-co-glycolic (PLGA). The fabrication and characterization of PLGA-CMMA construct is performed based on the trial design. The PLGA is studied in terms of porosity and its ability to be homogeneously colonized by the CMMA. The homogeneous colonization of CMMA is demonstrated histologically. Once the construct is characterized, we set up a pilot experiment where hyaline cartilage was taken from a sheep and then CMMA were isolated, expanded, colonized in a cylinder of PLGA and reintroduced arthorscopically to the femorotibial joint, where previously we had generated an artificial osteochondral injury, to assess the regeneration or repair of articular cartilage. The regeneration evaluation was based on the macroscopic results, magnetic resonance imaging and histology samples. The results show the construct to be biocompatible, bioreabsorbible and hyaline cartilage regeneration in some cases. To confirm these results we performed a preclinical trial of the same features as the pilot, with comparison of different cell sources characterized before (bone marrow, hyaline cartilage and fat), with a larger number of animals and extended period study to 6 and 12 months. The results show safety and higher efficacy in the treatment based on the application of PLGA colonized with CMMA from bone marrow. This work is structured initially with an introduction (Chapter 1), which performs an exhaustive description of the hyaline cartilage, the different treatments of osteocondral pathologies, the concept of regenerative medicine, the CMMA, the biopolymers and cell-polymer interactions. Then (chapter 2), we set the main objectives of the work. In chapter 3 cellular characterization of CMMA is performed. Then (chapter 4) the preliminary studies with PLGA, the CMMA and colonization is performed in order to set up the pilot study in animal model. Chapter 5 performs preclinical trial. Chapter 6 summarizes the main conclusions of the work. Finally, there is the materials and methods (Chapter 7) used in this work, and Appendix (Chapter 8).

Memoria para optar el título de Bioquímico
No autorizada por el autor para ser publicada a texto completo en el Portal de Tesis Electrónicas
Las estrategias clínicamente usadas para el tratamiento de lesiones articulares se enfocan en aliviar el dolor y la inflamación, porque el cartílago adulto tiene una mínima capacidad regenerativa. Así, frente a un daño severo el cartílago hialino es remplazado por cartílago fibroso, que se distingue del primero en la composición de su MEC y en consecuencia, en sus propiedades biomecánicas. El objetivo del presente trabajo es desarrollar una estrategia de terapia celular que permita regenerar el cartílago articular. La hipótesis de trabajo es que células troncales mesenquimáticas (MSC) autólogas, embebidas en ácido hialurónico (HA) e implantadas en una lesión condral grave, en presencia de dexametasona como anti-inflamatorio e inductor de diferenciación, regeneran in vivo cartílago hialino y no fibrocartílago. Para evaluar dicha hipótesis, se produjo quirúrgicamente una lesión de 20,25 mm2 x 1,5 mm de profundidad (aproximadamente 30 mm3) en el cartílago patelar de conejos New Zealand. Dos semanas después, en dicha lesión se implantaron 1x106 cMSC, previamente aisladas de la médula ósea del mismo animal, embebidas en HA. A partir de ese momento, se inyectó intra-articularmente 0,25 mg/Kg de dexametasona una vez a la semana. A las 6 semanas post-implante, los conejos fueron sometidos a eutanasia, se disectaron sus cartílagos articulares y se analizaron molecularmente en función de la expresión de col1, col2, vers, agg y gapdh, para discriminar entre cartílago hialino y fibroso. Los resultados obtenidos en este trabajo muestran que es factible obtener MSC a partir de aspirados de médula ósea de conejo, dado que las células adherentes aisladas proliferan en presencia de un medio definido suplementado con suero fetal bovino (SFB) y se diferencian in vitro a adipocitos, osteocitos y condrocitos. Por su parte y como era de esperar, se observó que las lesiones condrales de espesor completo cicatrizan a expensas de tejido fibroso, que expresa altos niveles de col1 y vers y bajos niveles de col2 y agg. En cambio, si a 2 semanas post-lesión, en ella se implantan cMSC embebidas en HA y luego se inyecta intra-articular y post-operatoriamente dexametasona, 6 semanas post-implante se genera un cartílago que expresa altos niveles de col2 y agg y bajos niveles de col1 y vers. Estos resultados sugieren que es posible regenerar cartílago hialino utilizando MSC en presencia de HA y dexametasona en un plazo de 6 semanas. Lo cual debe corroborarse con estudios histológicos y funcionales, para poder afirmar que se dispone de una estrategia terapéutica que garantiza la regeneración del cartílago hialino

La resonancia magnética de cartílago articular se ha mostrado recientemente como un instrumento para la caracterización de la morfología, la bioquímica y la función del cartílago de la rodilla. Esta tecnología puede aportar el cálculo de volumen y espesor del cartílago, así mismo se puede realizar la medición de los tiempos de relajación (T1 y T2). Los estudios transversales y longitudinales que utilizan estas técnicas de imagen son prometedores para la evaluación de cartílago y para el estudio de la osteoartritis y otras enfermedades asociadas a la movilidad. Esta tesis describe la implementación de un sistema de procesamiento de imágenes médicas que respeta las especificaciones del DICOM estándar. El proyecto propone un método que consiste en la elaboración de un algoritmo de procesamiento aplicado a las imágenes de DICOM que corresponden a una secuencia T2 con el fin de obtener los mapas de éste mismo parámetro con los cuales se hizo la cuantificación de alteraciones en el cartílago. Las mediciones fueron hechas mediante un equipo Verio de SIEMENS con un campo magnético a 3.0 T. Se aplicó este estudio a 18 pacientes con un rango de edad de 40 ± 14 años. Por tratarse de una propuesta de método, no se realizó estudio estadístico alguno.

Introducción:
Basándose en la capacidad condrogénica de su capa profunda, el periostio ha sido empleado para el recubrimiento y reparación de lesiones condrales y osteocondrales.
Los objetivos de este trabajo son:
1. Analizar las propiedades viscoelásticas del tejido de reparación obtenido a partir de injertos libres de periostio invertido sobre defectos osteocondrales de espesor completo.
2. Determinar si la similitud de las características histológicas del tejido de reparación a partir de los mencionados injertos con el cartílago sano se corresponde con una semejanza en el comportamiento biomecánico.
3. Determinar la influencia de la movilización continua pasiva sobre la naturaleza y propiedades mecánicas del tejido de reparación.
4. Evaluar la durabilidad del tejido de reparación a largo plazo.
Material y método:
Se realizaron defectos de 4x4 mm en el surco patelar de la rodilla derecha de 57 conejos New Zealand adolescentes de tres meses de edad que fueron recubiertos con un autoinjerto libre de periostio invertido. De los 50 conejos aptos 24 fueron sometidos a movilización contínua pasiva durante 2 semanas 8 horas diarias y 26 a movilidad libre. Las patas izquierdas fueron utilizadas como control. El sacrificio se realizó a las 8 semanas en 43 conejos y a las 36 semanas en otros 7. Se realizó estudio histológico (aplicando una modificación de la escala de O´Driscoll), histomorfométrico y mecánico empleando un sistema de indentacion para calcular la rigidez elástica del tejido de reparación.
Resultados:
Los resultados macroscópicos fueron 65.1% buenos, 27.9% regulares y 6.9% malos a las 8 semanas. A las 36, 14.2%, 71.4% y 14.2%. En el 69.7% de los casos el tejido fue considerado hialino. No hubo diferencias según movilidad a las 8 semanas. A las 36, el porcentaje de tejido hialino disminuyó, pero en un grado mucho mayor en el grupo de MAI.
A las 8 semanas, el tejido regenerado era más grueso que el control, sin observarse influencia de la movilización sobre los parámetros histomorfométricos. A las 36 semanas el tejido mostraba características estructurales peores y menor grosor, apareciendo fenómenos degenerativos.
El coeficiente de rigidez elástica mostró una relación inversamente proporcional al grosor del tejido en estudio
Conclusiones:
1. El tejido de reparación cuando presenta características hialinas, tiene un comportamiento viscoelástico similar al del cartílago hialino.
2. La rigidez elástica es menor en el tejido regenerado que en el cartílago normalprobablemente por un mayor grosor del primero.
3. La MCP no influye en la aparición de uno u otro tipo de tejido ni en los parámetros histológicos, histomorfométricos ni mecánicos a las 8 semanas, Sin embargo, a largo plazo parece ejercer un efecto protector sobre el tejido de reparación.
4. A las 36 semanas aparecieron fenómenos degenerativos y un aumento de la rigidez elástica, datos que confirman la escasa durabilidad del tejido de reparación.
Introduction:
Periosteum has been used to resurface chondral defects based on its capability to regenerate cartilage.
The objectives of this study are:
1. To analyse the viscoelastic properties of the regenerated tissue obtained from periosteal grafts in full-thickness defects.
2. To correlate the histological and histomorphometrical characteristics with the mechanical properties of the tissue.
3. To find the influence of continuous passive motion on the histological and mechanical properties.
4. To evaluate the durability of the regenerated tissue.
Material and method:
Full thickness 4mm defects were performed in the patellar groove of the right knee of 57 young New Zealand white rabbits. All of them were resurfaced with free periosteal autografts with the deep aspect facing the joint. 50 rabbits underwent histologic, hystomorphometric and mechanical study. 24 were placed on a continuous passive motion machine 8 hours a day during 2 weekse and 26 returned to cage activity.Left limbs were used as control. 43 animals were sacrifized at 8 weeks and 7 at 36 weeks postoperatively.
Results:
Macroscopic results were good in 65.1% of the cases, fair in 27.9% and poor in 6.9% at 8 weeks. At 36 weeks results were 14.2%, 71.4% and 14.2% respectively. Regenerated tissue was considered to be hyaline in 69.7% of the cases. There were no differences induced by motion at 8 weeks. Hyaline tissue decreased at 36 weeks, more significantly in the IAM group.
At 8 weeks regenerated tissue was thicker than control independently of the motion protocol. Tissue was thinner at 36 weeks, and showed worse structural characteristics with degeneative changes.
Elas tic stiffness was inversely proportional to the thikness of the tissue.
Conclusions:
1. Regenerated hyaline tissue shows viscoelastic properties similar to those of the normal cartilage.
2. Elastic stifness is lower in the regenerated tissue than in control cartilage , probably due to its higher thickness.
3. There is no influence of the CPM on the histological, histomorphometrical and mechanical parametres at 8 weeks, but at 36 weeks there is a protective effect of the CPM over the regenerated tissue.
4. Regenerated tissue showed degenerative changes at 36 weeks with an increase in elastic stiffness. These data confirm the scarce durability of the regenerated tissue.

La prevalencia de las lesiones del cartílago articular tanto degenerativas como post-traumáticas se considera elevada. Teniendo en cuenta que se trata de un tejido avascular e hipocelular, su capacidad de respuesta reparativa mediante mecanismos biológicos se encuentra limitada. Muchas de las técnicas quirúrgicas empleadas en la actualidad para el tratamiento de dichas lesiones permiten obtener tejido fibrocartilaginoso. Las técnicas en las que se emplean soportes macroporosos, andamiajes o scaffolds sintetizados mediante ingeniería tisular han conseguido obtener cartílago regenerativo de características hialinas, evitando en gran medida la morbilidad y ciertas complicaciones inherentes a las primeras. En el presente trabajo hemos utilizado el conejo de raza New Zealand de doce semanas de edad como animal de experimentación. Siguiendo los protocolos legales establecidos para la cirugía experimental, hemos creado una lesión en la superficie del complejo osteocondral de la rodilla del animal utilizando un instrumento de biopsia cutánea de tres milímetros de diámetro. A continuación, rellenamos el defecto inducido con un implante de diferente composición según la serie considerada. Distinguimos cuatro series quirúrgicas según los biomateriales utilizados para la síntesis de cada uno de los andamiajes implantados. En la serie I, los soportes están compuestos por el 90% de acrilato de etilo (EA) y el 10% de ácido metacrílico (MAAc). La serie II es aquella cuyos scaffolds están constituidos por el 90% de EA y el 10% de acrilato de hidroxietilo (HEA). La composición química de los implantes de la serie III es EA al 50% y HEA al 50%. Por último, el polietilacrilato (PEA) es el componente único de los andamiajes de la serie IV. Cada serie la componen cuatro animales, dos en cuyos implantes se han incorporado condrocitos alogénicos y otros dos sin células condrales en el interior de sus soportes tridimensionales. Así pues, en el presente estudio se han intervenido un total de dieciséis animales. Tras la intervención, los conejos son trasladados a sus respectivas jaulas en las que pueden desplazarse y reciben agua y alimento ad libitum. A los tres meses de la cirugía, los animales son sacrificados. Las muestras obtenidas son procesadas para su posterior estudio histológico. Hemos utilizado tinciones histológicas de rutina, técnicas de histoquimia y técnicas de inmunohistoquimia para la detección de colágeno tipo II, osteocalcina y Ki-67. Todos los implantes han sido estables en el interior del defecto inducido sin la necesidad de utilizar técnicas de contención del mismo. Los andamiajes compuestos por el biomaterial más hidrófobo (PEA) han quedado en la superficie del complejo osteocondral sin signos de deformabilidad. Sin embargo, los soportes con los biomateriales más hidrófilos (HEA al 50%) utilizados en la serie III, aparecen en profundidad respecto a la superficie de la articulación y con una forma cóncava. El crecimiento celular en el interior de los andamiajes ha sido satisfactorio tanto en los que hemos introducido previamente células condrales como en los que no lo hemos hecho. Aunque en todas las series el complejo osteocondral ha quedado restituido, la mejor respuesta tisular se ha obtenido en la serie II con incorporación previa de condrocitos alogénicos en sus implantes y en la serie IV sin presiembra previa de células condrales en los mismos.
Many of the surgical techniques employed nowadays in the treatment of cartilage articular lesions allow fibrocartilaginous tissue to be obtained. In the current study, we used twelve-week old New Zealand rabbits. Following the legal protocols established for experimental surgery, a lesion on the surface of the osteochondral complex of the animal’s knee was created using a cutaneous biopsy instrument of 3 mm in diameter. The induced defect was then filled with an implant of different compositions for each specific series. Four different series of surgery were distinguished according to the biomaterials used for the synthesis of each implanted scaffold. In series I, the supports were composed of 90% ethyl acrylate (EA) and 10% methacrylic acid (MAAc). Series II employed scaffolds composed of 90% EA and 10% hydroxyl acrylate (HEA). The chemical composition of series III implants was 50% EA and 50% HEA. Finally, series IV implants were solely composed of polyethyl acrylate (PEA). Each series included four animals, two of which had implants containing allogeneic chondrocytes and the remaining two containing no chondral cells inside the three-dimensional structure. Thus, a total of sixteen rabbits were used for this study. Three months after surgery, the animals were put down. The gathered samples were processed for the subsequent histological study. We used routine histological staining, histochemistry and immunohistochemistry techniques in order to detect type-II collagen, osteocalcin and Ki-67. All the implants remained stable inside the induced defect, and did not require the use of contention techniques. The scaffolds made up of the most hydrophobic biomaterial (PEA) remained on the surface of the osteochondral complex and showed no signs of deformability. On the opposite, the structures containing more hydrophilic biomaterials (50% HEA), such as those used in series III, appeared in depth with regard to the articulation surface, and concave shaped. Although the osteochondral complex was regenerated in all of the series, the best tissular response was obtained in series II with allogeneic chondrocytes implants, and in series IV with no chondral cells.

Introducción La cirugía de las perforaciones timpánicas es una técnica bien conocida por el otorrinolaringólogo. Actualmente el injerto más utilizado en su realización es la fascia de músculo temporal con un porcentaje de cierre elevado en población adulta y variable en población pediátrica. Cada vez es más utilizado en niños el injerto de cartílago, que es más resistente pudiendo aportar mayor tasa de éxito. Pero por su grosor, algunos autores lo han asociado con peores resultados auditivos. Actualmente no existe en la literatura un consenso con evidencia científica suficiente sobre qué tipo de injerto ofrece mejores resultados anatómicos y auditivos en niños. Hipótesis El empleo de cartílago como injerto para el cierre de las perforaciones timpánicas en niños es más eficaz que el injerto estándar de contrastada efectividad que es la fascia de músculo temporal, sin obtener peores resultados auditivos. Objetivos Comparar en niños el cierre de la perforación timpánica mediante cartílago en contraste con fascia de músculo temporal. Comprar en niños los cambios auditivos de la cirugía de las perforaciones timpánica sutilizando como injerto cartílago en contraste con fascia de temporal. Analizar en niños si el cierre de las perforaciones timpánicas se ve afectado por las siguientes variables: edad, sexo, estación del año en que se realiza la cirugía, oído operado, tamaño de la perforación, estado del oído contralateral al operado, localización de la perforación, cirugía previa, etiología de la perforación, abordaje y complicaciones. Material y métodos Se estudiaron 114 pacientes operados de perforación timpánica entre el 2003 y 2013 con un seguimiento mínimo de un año. Se compararon los resultados en cuanto a cierre de la perforación timpánica en el grupo operado con fascia y en el operado con cartílago. También se compararon los cambios auditivos en ambos grupos mediante la curva audiométrica más reciente y la posible influencia en los resultados de las variables edad, sexo, oído operado, etiología de la perforación, localización de la perforación, historia de cirugía previa, estado del oído contralateral, estación del año en el momento de la cirugía, abordaje y complicaciones. Resultados Se observa una relación estadísticamente significativa entre el cierre de las perforaciones timpánicas infantiles y el material de injerto utilizado, siendo mejores los resultados cuando éste es cartílago. También se observa relación con el tamaño de la perforación, con resultados más favorables en perforaciones menores al 50% y, con la presencia de complicaciones en el postoperatorio. Conclusiones En nuestra muestra el cartílago fue más efectivo para la reconstrucción de la membrana timpánica que la fascia de músculo temporal. Los cambios auditivos tras la cirugía de las perforaciones timpánicas fueron similares empleando cartílago y fascia. El tamaño de las perforaciones mayor o igual al 50% de las superficie timpánica y la presencia de complicaciones en el postoperatorio fueron factores de mal pronóstico en cuanto al cierre de las perforaciones timpánicas. La edad, el sexo, el oído afecto, la localización de la perforación, el antecedente de cirugía previa, el estado del oído contralateral, la estación del año en que se realiza la cirugía, el abordaje empleado y los valores auditivos preoperatorios no influyeron en el pronóstico de la cirugía.
Introduction Tympanic perforation surgery is well knows technique to otolaryngologist. Actually, temporalis muscle fascia is the most use graft material to close tympanic perforations. Fascia has better success in adult people than in children. Other materials as cartilage grafts had been proposed in children. But, some authors have doubts about hearing results using cartilage. Actually there’s no consensus about the ideal graft material for closure tympanic membrane perforations. Hypothesis Cartilage graft is better than fascia to close tympanic membrane perforations in children, with equivalent hearing results. Objectives Compare closure tympanic outcomes using cartilage and temporalis fascia in children. To compare hearing results using cartilage and temporalis fascia as a graft materials to close tympanic membrane perforations in children. Materials and methods A total of 114 children who underwent tympanic membrane perforation surgery from 2003 to 2013 were reviewed in this study. We compare closure tympanic membrane and hearing outcomes in the two groups, fascia and cartilage graft. Variables such as age, sex, side, site, size, aetiology, previous surgery, season, approach and postoperative complications were evaluated. Results The study showed a significant difference between closure of tympanic membrane perforations with cartilage and fascia, in favour of the cartilage grafting materials. It wasn’t significant differences in audiometric results between two grafts materials. Children with bigger tympanic membrane perforations and postoperative complication had poorer results. Conclusions Cartilage graft has better results than temporalis fascia to close tympanic perforations in our patients. Postoperative audiometric results are similar between the two groups, cartilage graft and fascia graft. Perforation larger than 50% and postoperative complications were negative prognostic factors for perforation closure. Age, sex, side, site, aetiology, previous surgery, season and approach were not prognostic factors.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario
El óxido nítrico ( NO), producido en grandes cantidades por los ˙ condrocitos y células inflamatorias en una articulación dañada puede generar activación de enzimas degradativas de la matriz del cartílago, disminución en la síntesis de sus biomoléculas y apoptosis de condrocitos. Parte del ˙NO producido se transforma en nitrito, el cual se puede medir por la reacción de Griess. El objetivo de este estudio fue comparar el promedio de nitrito en líquido sinovial y suero sanguíneo entre grupos de equinos Fina Sangre de Carrera con cuadros articulares inflamatorios agudos y crónicos con reagudización, para establecer si la menor cantidad de cartílago articular en el caso de los cuadros crónicos se traduce en una menor concentración de nitrito tanto en LS como en suero sanguíneo. Se tomaron muestras de líquido sinovial y suero sanguíneo de equinos que cursaran con un cuadro inflamatorio agudo de la articulación carpal (n=10), principalmente fractura en chip o sinovitis diagnosticadas clínica y/o radiológicamente al momento de la toma de muestra, se incluyen equinos con diagnóstico de cuadro crónico al momento de la toma de muestra (n=15), desde la misma articulación. Además se obtuvo muestras de suero sanguíneo desde equinos normales para usarlos como control (n=10). En todas las muestras se determinó la concentración de nitrito por reacción de Griess y además se midió la concentración de proteínas como indicador del estado del animal por el método colorimétrico de Lowry et al. No se encontraron diferencias significativas en la concentración de proteínas en LS entre los grupos agudos (26,1 ± 6,2 mg/mL) y crónicos con reagudización (25,2 ± 8,1 mg/mL). Tampoco se encontraron diferencias significativas en la concentración de nitrito tanto en el LS Created with novaPDF Printer (www.novaPDF.com). Please register to remove this message. 4 entre los grupos agudo (95,1 ± 41,4 μmol/L) y crónico con reagudización (75,8 ± 21,2 μmol/L) como en el suero con valores de 471,4 ± 115,4 μmol/L para los cuadros agudos en comparación con los cuadros crónicos con reagudización (427,9 ± 101,9 μmol/L) y con los cuadros normales (455,9 ± 91,1 μmol/L). Se encontraron diferencias significativas (p<0,05) en los valores de proteínas séricas entre los grupos agudo y normal, pero a favor del grupo normal, obteniendo el grupo agudo un promedio de 56,5 ± 11,2 mg/mL, los normales 67,0 ± 3,1 mg/mL, y finalmente el grupo de los crónicos reagudizados con 60,7 ± 7,5 mg/mL. La concentración de nitrito en el líquido sinovial en los grupos agudo y crónico reagudizado no muestra diferencia significativa, lo que podría deberse a que ambos grupos están cursando un cuadro inflamatorio, que genera infiltración con células que también producen ˙NO. La ausencia de diferencia en la concentración de nitrito en el suero sanguíneo entre los grupos agudo, crónico reagudizado y normal, sugiriere que la concentración de nitrito en el suero sanguíneo no es un buen reflejo de la producción de ˙NO a nivel articular.

Publicación a texto completo no autorizada por el autor
Determina los resultados de la timpanoplastía transcanal con cartílago en el Hospital Nacional Daniel Alcides Carrión durante el período abril 2009 a abril del 2011. La investigación es analítica, retrospectiva de corte transversal, y según su intervención es observacional. El grupo etáreo con mayor porcentaje que se realizó timpanoplastía transcanal con cartílago fue menor de 19 años (39.1%) y el sexo prevalente fue femenino (69.6%). La causa de perforación del tímpano es la infección (95.5%), el oído más afectado es el derecho (60.9%), la perforación es central en todos los pacientes y el tamaño de ésta es del 25 al 50% del tímpano, en el 56.5% de los pacientes. El rango audiométrico pre quirúrgico fue de 21 a 40 dB (hipoacusia leve) en el 56.5% de los pacientes y el post quirúrgico fue de 21 a 40 dB en el 60.9% de los pacientes, además para el 56.5% hubo una mejoría de la audición (de 10 dB a más de ganancia auditiva). Por último, en el 82.6% de los casos el tímpano se regeneró íntegramente al mes de la cirugía y con respecto a algún tipo de complicación, el 87% no la tuvo. Se concluye que el 56.5% de los pacientes post-operados de timpanoplastía transcanal en el Hospital Nacional Daniel Alcides Carrión, durante el período abril 2009 a abril del 2011, tuvo incorporación del injerto y ganancia auditiva mayor a 10dB.

Com és ben conegut, el cartílag hialí articular té una capacitat de reparació molt limitada. Les lesions condrals són causa de dolor, rigidesa, disminució de moviment i finalment destrucció de l’articulació. Els tractaments clàssics de reparació es basen en el transplantament osteocondral o en l’estimulació del sagnat subcondral per a produir una reparació secundària al reclutament de cèl·lules mare pluripotencials. Des de fa uns 20 anys, es van publicar els primers resultats clínics de la reparació de lesions condrals mitjançant el transplantament de condròcits autòlegs (ACI). Aquesta tècnica té l’inconvenient de que són necessàries 2 cirurgies; una primera per a l’obtenció de condròcits que es repliquen per a implantar-los en una segona cirurgia mitjançant una artrotomia. Estudis recents han qüestionat aquesta tècnica, ja que s’han obtingut resultats similars al comparar-la als 5 anys amb tècniques habituals d’estimulació del sagnat subcondral com les microfractures. També s`ha qüestionat el teixit de reparació, que es considera allunyat histològicament del cartílag hialí, amb característiques similars a un fibrocartílag. Sembla que la sembra en monocapa dels condròcits amb la tècnica ACI, condiciona la disposició tridimensional habitual d’aquestes cèl·lules i això contribueix a una producció inadequada de matriu extracel·lular, i secundàriament a una pèrdua del fenotip cel·lular. Recentment amb tècniques d’enginyeria tissular s’estan dissenyant matrius de suport tridimensional biodegradables (scaffolds en anglès) que permeten la sembra de condròcits per a la seva implantació, afavorint la producció de matriu extracel·lular i mantenint la ultraestructura de del cartílag hialí sa. Els 2 estudis que conformen aquesta tesi per compendi de publicacions es basen en la utilització de matrius de suport tridimensionals biodegradables de policaprolactona. En ambdós articles estudiem la capacitat de reparació de lesions condrals a la tròclea femoral del conill com a model animal d’aquestes matrius de suport, comparant-les amb tècniques clàssiques de reparació. En el primer article comparem 5 modalitats de reparació condral. En especial la tècnica ACI amb la implantació de matrius de suport de policaprolactona sembrades amb condròcits i matrius de suport de policaprolactona sense condròcits però realitzant perforacions subcondrals. Es van obtenir millors resultats histològics i biomecànics amb les matrius de suport de policaprolactona sembrades amb condròcits que amb les altres tècniques emprades, amb unes característiques del teixit de reparació similars al cartílag hialí sa. En el segon article es va estudiar la capacitat de reparació d’aquestes lesions condrals amb matrius de suport de policaprolactona i de policaprolactona amb àcid hialurònic sense condròcits sembrats. Es van realitzar perforacions subcondrals per afavorir el sagnat medul·lar i per tant l’aport de cèl·lules mare pluripotencials, amb la finalitat d’estalviar el procés d’obtenció i cultiu de condròcits que és un fet limitant en aquests tipus de cirurgies a la pràctica clínica habitual. Es va demostrar que afegir àcid hialurònic a les matrius de policaprolactona els hi confereix una major hidrofília. Finalment els resultats van demostrar que les matrius de suport de policaprolactona amb àcid hialurònic proporcionen una millor capacitat per a la reparació de les lesions condrals creades a la tròclea femoral del conill i que aquestes matrius es degraden més ràpidament que les matrius de policaprolactona. El teixit de reparació aconseguit va presentar característiques histològiques compatibles amb un cartílag hialí sa.
As is well known, the hyaline articular cartilage has a limited capacity for repair. Chondral injuries may cause pain, stiffness, decreased movement and, ultimately, destruction of the joint. The classic repair treatments are based on osteochondral transplantation or the stimulation of subchondral bone to bring about a repair secondary to the recruitment of pluripotent stem cells. In the last two decades, the first clinical results relative to the repair of chondral injuries by means of autologous chondrocyte transplantation (ACI) were published. This technique has the disadvantage that two surgeries are needed; the first to obtain chondrocytes that replicate so as to be implanted in a second surgery via an arthrotomy. Recent studies have questioned this technique because similar results were obtained, at 5 years, upon comparing it to the usual subchondral bleeding stimulation techniques such as microfractures. The repair tissue has also been brought to question as it is considered histologically distinct from hyaline cartilage, with characteristics similar to fibrocartilage. It seems that the seeding of chondrocytes in a monolayer with the ACI technique determines the three-dimensional arrangement of these cells and this contributes to an inadequate production of extracellular matrix and, secondarily, to a loss of the cellular phenotype. As of recently, three-dimensional biodegradable support matrices (scaffolds) are being designed with tissue engineering techniques that permit the seeding of chondrocytes for implantation, favoring the production of extracellular matrix and maintaining the ultrastructure of healthy hyaline cartilage. The two studies that comprise this thesis being a compendium of published works are based on the use of three-dimensional biodegradable polycaprolactone (PCL) matrices. The ability to repair chondral injuries on the femoral trochlea of of these matrices in an experimental animal model are studied in both papers, comparing them with classical techniques of repair. The first article, compared five modalities of Chondral repair: PCL matrices (isolated, seeded with chondrocytes or combined with microfractures) are compared to the introduction of chondrocytes (ACI technique) and a control group for the repair of these chondral injuries. The best histological and biomechanical results were obtained with the PCL matrices seeded with chondrocytes, which had repair tissue characteristics similar to healthy hyaline cartilage, in comparison to other techniques. In the second article, the ability to repair these chondral injuries with conventional PCL matrices or PCL matrices along with hyaluronic acid without seeded chondrocytes was studied. In this investigation, subchondral microfracturing was carried out to promote bleeding and therefore the drawing in of pluripotent stems cells. This was done in order to save the process of obtaining and culturing chondrocytes, considered one of the limiting factors of this technique in clinical practice. The results shown that adding hyaluronic acid to the PCL matrix makes it more hydrophilic and increases the ability to repair chondral injuries created in the femoral trochlea of rabbits. Moreover, the PCL matrices with the addition of Hyaluronic acid have proven to degrade more rapidly than the regular PCL matrices. Finally, the repair tissue acquired presented histological features compatible with healthy hyaline cartilage.

Durant els últims anys, el nostre grup s’ha centrat en l’estudi de models experimentals de formació de cartílag i ós amb l’objectiu d’entendre els paràmetres biomecànics i biològics que regulen la formació dels teixits que formen l’esquelet. En particular, resultats previs obtinguts en el nostre laboratori indiquen que quan els fibroblasts embrionaris de ratolí (de l’anglès, “mouse embryonic fibroblasts”, MEFs) es cultiven in vitro en el pèptid auto-ensamblable RAD16-I, emprant un sistema de cultiu tridimensional (3D), els MEFs són capaços d’adquirir una capacitat de diferenciació multipotencial, iniciant un procés espontani de diferenciació condrogènica. En aquesta tesis, es va estudiar amb més detall el procés amb l’objectiu d’entendre els possibles mecanismes moleculars que modulen el procés de diferenciació condrogènica d’aquestes cèl•lules. Per a tal efecte es va avaluar l’influencia que les propietats de la matriu poden tenir en el procés de diferenciació i la possible participació de gens involucrats en l’organització primerenca de teixits. De manera interesant, es va veure que només sota certes condicions mecàniques caracteritzades per una rigidesa de la matriu baixa (G’=0,1KPa), el sistema va ser capaç d’iniciar la diferenciació condrogènica, cosa que va semblar venir regulada per la balança entre l’inductor condrogènic BMP4 i el seu antagonista Noggin, d’una manera similar al que succeeix in vivo. Per una altra banda, en aquesta tesis es va descriure un model nou i simple en el qual es podrien estudiar in vitro els esdeveniments moleculars involucrats en la formació d’ós, a través del procés d’ossificació endocondral. Per a tal efecte, cultius tridimensionals de MEFs en procés de condrogènesis es van cocultivar amb cèl•lules endotelials. Aquestes noves condicions van permetre al sistema redirigir-se cap a una diferenciació osteogènica, provat per l’expressió del marcador hipertròfic col•lagen tipus X i la mineralització de la matriu en les zones d’interacció entre els MEFS i les cèl•lules endotelials. Tals resultat suggereixen un clar diàleg entre ambdós tipus cel•lulars. Finalment també es va descriure el desenvolupament d’un nou material per a diferents aplicacions en l’àmbit de l’enginyeria de teixits, format per la simple combinació del pèptid d’auto-assemblatge RAD16-I i el polisacàrid heparina. Es va observar que aquest material exhibia la unió i alliberació seqüencial del factor de creixement – amb domini d’unió de l’heparina – VEGF165. A part, el nou material va permetre la formació d’estructures tubulars en un cultiu 3D de cèl•lules endotelials. Aquests resultats suggereixen que aquest sistema podria promoure el desenvolupament d’un teixit vascularitzat i com a conseqüència, afavorir la regeneració d’un teixit fet malbé. Aquesta plataforma es podria emprar en diferents aplicacions de l’enginyeria de teixits fent servir molècules amb afinitat d’unió de l’heparina com el TGFβ-1, el qual és un conegut inductor condrogènic.
Nuestro grupo se ha centrado el en estudio de modelos experimentales de formación de cartílago y hueso con el objetivo de entender los parámetros biomecánicos y biológicos que regulan la formación de los tejidos que forman el esqueleto. En particular, resultados previos de nuestro laboratorio indican que cuando los fibroblastos embrionarios de ratón (del inglés, mouse embryonic fibroblasts , MEFs) se cultivaron in vitro en el péptido de auto-ensamblaje RAD16-I usando un sistema de cultivo tridimensional (3D), los MEFs adquirieron una capacidad de diferenciación multipotencial iniciando un proceso espontáneo de diferenciación condrogénica. En esta tesis, se estudió con más detalle el proceso con el objetivo de entender los posibles mecanismos moleculares que modulan el proceso de diferenciación condrogénica de estas células. Para ello se evaluó la influencia que las propiedades de la matriz ejercen en el proceso de diferenciación y la posible participación de genes involucrados en organización temprana de tejidos. De forma interesante, solamente bajo ciertas condiciones mecánicas, caracterizadas por la baja rigidez de la matriz (G’ ~ 0.1 kPa), el sistema inició la diferenciación condrogénica, la cual pareció ser regulada por el balance entre el inductor condrogénico BMP4 y su antagonista Noggin en una forma similar a la que ocurre in vivo.Además, en esta tesis se describió un nuevo y simple modelo en el cual se podrían estudiar in vitro los eventos moleculares involucrados en la formación de hueso a través del proceso de osificación endochondral. Para ello, cultivos 3D de MEFs experimentando condrogénesis fueron cocultivados con células endoteliales. De manera importante, en estas nuevas condiciones el sistema se redirigió hacia una diferenciación osteogénica probado por la expresión del marcador hipertrófico colágeno tipo X y la mineralización de la matriz en las zonas de interacción entre los MEFs y las células endoteliales, lo que sugiere un diálogo entre ambos tipos celulares. Finalmente, se describió el desarrollo de un nuevo biomaterial para aplicaciones en ingeniería de tejidos formado por la simple combinación del péptido de auto-ensamblaje RAD16-I y el polisacárido heparina. De forma interesante, este material exhibió la unión y liberación secuencial del factor de crecimiento- con dominio de unión de la heparina- VEGF165. Además, el nuevo material permitió la formación de estructuras tubulares en un cultivo 3D de células endoteliales. Estos resultados sugieren que este sistema podría promover el desarrollo de un tejido vascularizado y, como consecuencia, favorecer la regeneración en un tejido dañado. Esta plataforma podría ser usada en otras aplicaciones de ingeniería de tejidos usando moléculas con afinidad de unión de la heparina como el TGFβ-1, el cual es un conocido inductor condrogénico.
Our group is focused on experimental models of cartilage and bone development in order to understand the biomechanical and biological parameters that regulate skeletal tissue formation. Previous results in our laboratory indicated that when mouse embryonic fibroblasts (MEFs) were cultured in vitro in three-dimensional (3D) scaffolds based on the self-assembling peptide RAD16-I, cells acquired multipotential capacity and engaged in a spontaneous process of chondrogenic differentiation. This thesis focuses on understanding the possible molecular mechanisms modulating the default cartilaginous commitment of these cells. Thus, the influence of matrix properties on the differentiation process was evaluated as well as the potential participation of genes involved in early tissue organization. Interestingly, cells only underwent chondrogenic differentiation under certain mechanical conditions, characterized by low stiffness (G’ ~ 0.1 kPa). Similarly to in vivo processes, the mentioned differentiation appeared to be regulated by the balance on the expression of the chondrogenic inductor BMP4 and its antagonist Noggin.Moreover, a novel and simple model was described in which the molecular events involved in bone formation through endochondral ossification could be studied in vitro. For this purpose, co-cultures of endothelial cells with 3D cultures of MEFs undergoing chondrogenesis were developed. Importantly, cells committed to osteogenic lineage under these new conditions. The osteogenic differentiation was evidenced by the expression of the hypertrophic marker collagen type X and the presence of calcium mineralized matrix at the interface between MEFs and endothelial cells, which suggested a cross-talk between both cell types. Finally, a newly designed biomaterial for tissue engineering applications was developed by combining self-assembling peptide RAD16-I and polysaccharide heparin. Interestingly, this material exhibited sequential binding and delivery of the growth factor -containing heparin binding domain- VEGF165. The new material supported the development of tubular-like structures in a 3D culture system of endothelial cells. These results suggested that this system could promote the development of a vascularized tissue and, as a consequence, promote tissue regeneration in an injured tissue. This platform could be used in other tissue engineering applications using heparin-binding affinity molecules such as TGFβ-1, which is a well-known chondrogenic inductor.

El objetivo de este trabajo ha consistido en el estudio de la regulación de la proliferación celular y de la expresión de los genes de interés por glucocorticoides (GCs) y vitamina D (VitD), así como analizar el efecto del IGF-I y de la GH sobre la regulación observada por GCs y/o por VitD.
Se ha demostrado que los GCs y la VitD regulan la proliferación celular y la expresión de los genes estudiados. El IGF-I y la GH modulan parte de los efectos de los GCs y de la VitD sobre la proliferación celular y la expresión génica.
Concentraciones bajas de Dx (10-9 M) no interfieren en la proliferación de los condrocitos mientras que a partir de 10-7 M la inhiben de forma significativa y concentración dependiente. El Mifepristone (MF), bloqueador antagonista del receptor de GCs, revierte la inhibición de la proliferación celular producida por la Dx 10-6 M. La Dx inhibe la expresión de los genes IGF-I, IGFBP3, GHR, SOX9, COL2A1 y aggrecan mientras que estimula la expresión de IGF-IR y COMP. El MF revierte la inhibición que la Dx produce sobre la expresión de GHR, SOX9, COL2A1 y aggrecan pero no la inhibición de la expresión de IGF-I y de IGFBP3. La síntesis de las proteínas IGF-I e IGFBP3 está inhibida por Dx 10-6 de forma paralela a la inhibición de la expresión génica.
La VitD inhibe la proliferación celular de forma significativa y concentración dependiente a partir de 10-10 M y estimula la expresión de los genes del eje GH-IGFs (IGF-I, IGFBP3, IGF-IR y GHR) y COMP mientras que inhibe la expresión de SOX9, COL2A1 y aggrecan. La síntesis de las proteínas IGF-I e IGFBP3 está estimulada por VitD de forma paralela a la estimulación de la expresión génica.
La expresión de IGF-II no se regula significativamente ni por GCs ni por VitD, por lo tanto, el IGF-I, y no el IGF-II, es el gen regulado por GCs y VitD en condrocitos de cartílago de crecimiento epifiseal fetal humano.
El IGF-I es un potente estimulador de la proliferación celular y estimula la expresión de su propio gen, de IGFBP3, de SOX9 y de COL2A1 y aggrecan mientras que inhibe la expresión de IGF-IR y de COMP.
El IGF-I revierte la inhibición de la proliferación celular producida por la Dx y por la VitD. El IGF-I revierte la inhibición que la Dx produce sobre la expresión de COL2A1 y aggrecan pero no la producida sobre la expresión de IGF-I, IGFBP3 y de SOX9. La expresión de IGFBP3 está incrementada cuando se incuban los condrocitos con IGF-I y VitD respecto a la incubación con IGF-I o con VitD solos. El IGF-I no revierte la inhibición que la VitD produce sobre la expresión de SOX9 pero sí la producida sobre la expresión de COL2A1 y aggrecan.
La GH no tiene efecto significativo sobre la proliferación celular ni sobre la expresión génica en condrocitos de cartílago de crecimiento epifiseal fetal humano en las condiciones experimentales utilizadas. La presencia de GH en el medio de cultivo que contiene además VitD incrementa la expresión de IGF-I y GHR respecto a las células tratadas con VitD sola. El tratamiento conjunto con Dx, GH y VitD revierte la inhibición que la Dx produce sobre la expresión de IGF-I y GHR.
Nuestros resultados sugieren que, en tratamientos crónicos con GCs que provocan un retraso de crecimiento, el mantenimiento de niveles óptimos de VitD puede contribuir a mejorar la respuesta al tratamiento con GH.
Circulating supraphysiologic glucocorticoid (GC) concentrations inhibit skeletal growth. Growth plate cartilage and bone are target tissues for vitamin D (Vit D) and deficiency states during infancy (rickets or VitD insensitivity) provoke growth delay.
With the aim of analysing the molecular mechanisms involved in skeletal growth inhibition produced by both GC excess and VitD deficiency, as well as the interaction of VitD with GH to oppose gene expression inhibition produced by high GC concentrations, VitD effects on proliferation and gene expression were studied in chondrocytes from human fetal epiphyseal cartilage.
Results: Low-dose Dx (10-9 M) maintained proliferation whereas higher concentrations dose-dependently inhibited it. A similar effect was observed with VitD. IGF-I significantly stimulated proliferation and completely opposed the inhibition produced by Dx or VitD. GH had no significant effect. The addition of GH to Dx (10-6 M) and/or VitD (10-6 M) did not limit the inhibitory effects of Dx and/or VitD.
Dx dose-dependently inhibited expression of GH-IGF axis genes (IGF-I, IGFBP-3, GHR), transcription factor and matrix proteins (SOX9, COL2A1, aggrecan), whereas it stimulated expression of IGF-IR and the matrix protein COMP.
VitD had an opposite effect, which was also dose-dependent, by stimulating expression of IGF-I, IGFBP-3, IGF-IR, GHR and COMP, whereas it inhibited expression of SOX9, COL2A1 and aggrecan.
GH alone had a variable effect, which did not reach statistical significance.
VitD opposed IGF-I and GHR expression inhibition produced by Dx whereas it did not limit IGFBP-3 inhibition.
The combination of VitD with GH not only completely opposed inhibition by Dx of GHR and IGF-I expression, but stimulated it.
Conclusions: VitD up-regulated IGF-I, IGFBP-3, GHR and IGF-IR and COMP gene expression in human foetal epiphyseal chondrocytes. Addition of VitD to GH resulted in the highest increase in IGF-I expression. In the presence of pharmacological GC concentrations, VitD rescued IGF-I & GHR gene expression inhibition, although not IGFBP-3. Addition of VitD to GH resulted in significant stimulation of IGF-I expression, even in the presence of GC at high concentrations.

Objetivos/Hipótesis: Diversos tejidos se han utilizado como injerto desde que apareció la Timpanoplastía, siendo el de preferente uso la Fascia de Temporal. Actualmente diversos estudios plantean la utilidad del Cartílago como injerto en la Timpanoplastía, sosteniendo que no se ve afectada la audición, y que los resultados audiológicos comparados con el uso de Fascia de Temporal, son similares. El presente estudio pretende determinar si existen diferencias audiológicas entre la Timpanoplastía con Cartílago y la Timpanoplastía con Fascia de Temporal Diseño del estudio: Estudio Observacional Analítico Retrospectivo. Materiales y Métodos: Se hizo una revisión retrospectiva delas Timpanoplastías realizadas en el Servicio de ORL del Hospital Nacional Daniel A. Carrión del Callao de Enero a Mayo del 2001. Se estableció 2 grupos, Grupo A(Timpanoplastía con Fascia de Temporal), Grupo B (Timpanoplastía con Cartílago). Se evaluó las audiometrías pre y post operatorias de los pacientes, comparando sus resultados. Resultados: El Grupo A (Timpanoplastía con Fascia de Temporal) estuvo conformado por 7 casos, el Grupo B (Timpanoplastía con Cartílago) estuvo conformado por 13 casos. En ambos grupos hubo mejoría en la audición. En el grupo A el promedio de la mejoría del GAP vía aérea/vía ósea fue de 15dB, mientras que en Grupo B fue de 8dB. Conclusiones: Los resultados demuestran que si existen diferencias audiológicas entre la Timpanoplastía con Fascia de Temporal y la Timpanoplastía con Cartílago, en ambas existe mejoría en la audición pero esta es más evidente en las Timpanoplastía con Fascia de Temporal. Palabras clave: Timpanoplastía, Timpanoplastía con Cartílago, Timpanoplastía con Fascia de Temporal.
Tesis de segunda especialidad

Se estudia la efectividad de la extracción, modelaje y reposición del cartílago cuadrangular en pacientes con desviación de la región anterior del septum nasal, para lo cual se analizó los datos obtenidos de las historias clínicas y directamente de los pacientes atendidos en el transcurso de esta investigación. Los casos clínicos corresponden a pacientes diagnosticados y operados desde diciembre del 2001 hasta abril del 2002. El sexo masculino fue discretamente más afectado con una relación de 9 a 8. El 82.3% fueron pacientes entre 15 y 35 años. Todos los pacientes procedían de Lima. La mayor cantidad de pacientes tenían el antecedente de traumatismo nasal (76.5%). De los cuales solo un paciente refirió el antecedente de traumatismo obstétrico(parto instrumentado). La sintomatología más frecuente fue la obstrucción nasal (100%), seguido de dolor faringeo (47.1 %). El grado de obstrucción nasal fue severo en 52.9% de los pacientes, moderada en 41.2% y leve en el 5.9%. Se encontró en el 58.8% de los pacientes que la desviación septal se ubicó a la derecha. El 94.1% de los pacientes refirió una mejoría respiratoria marcada, la cual fue progresiva en el transcurso de los días postoperatorios. Todos los pacientes a quienes se le realizó una rinoplastía conjunta quedaron satisfechos con los resultados estéticos. La conclusión más importante de este trabajo de investigación es que realizando la extracción del cartílago cuadrangular con el posterior modelaje y reposición corrige adecuadamente la alteración funcional y estética en las desviaciones de la región anterior del septum nasal la cual no se corrige adecuadamente con las técnicas clásicas.
Tesis

El documento digital no refiere asesor
Demuestra que el extracto de Zea mays L reduce las modificaciones histológicas en el cartílago hialino a nivel de la articulación maleolar en términos de la estructura, células y estado de integridad del cartílago, en ratas artríticas inducidas por pristane. Realiza un modelo de artritis en ratas Sprague Dawley inducido por pristane vía subdérmica (0.2 ml). Se distribuyeron en control positivo (n=10) vehículo (1ml/100g), Metotrexato (n=10) 0,1mg/Kg, Indometacina (n=10) 0.6 mg/kg, Zea mays 1% (n=10) 100mg/Kg, Zea mays 10% (n=10) 1000mg/Kg, Metotrexato +Zea mays 10% (n=10) 1000mg/Kg + 0,1mg/Kg, control negativo (n=5) VO (21 días), evaluándose la estructura, modificaciones celulares y estado de integridad del cartílago histológicamente a nivel de la articulación maleolar. Encuentra que Zea mays 1%, 10% y Metotrexato + Zea mays 10% presentaron diferencias al control positivo en estructura del cartílago. Las modificaciones celulares evidenciaron diferencias sólo en control positivo y en Metotrexato con Zea mays 10%. Hay diferencias en relación a la integridad del cartílago entre Zea mays 10% y Metotrexato + Zea mays 10% en comparación al control positivo. En el control positivo el 70% desarrolló artritis moderada y en Zea mays 1% fue 60%. El grupo Zea mays 10% desarrolló artritis moderada (40%), y otro 40% no desarrolló la enfermedad. El grupo Metotrexato +Zea mays 10%, el 70% no desarrolló la enfermedad, y ninguno hizo artritis moderada. Demuestra que la reducción de las modificaciones histológicas en el cartílago hialino a nivel de la articulación maleolar en términos de la estructura, células y estado de integridad del cartílago, tratadas Zea mays L en ratas son significativas.
Tesis

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario
Los cartílagos ungueales, extensiones cartilaginosas de la falange distal, proporcionan apoyo en la cara palmar del pie, ayudan al retorno venoso de este y disipan fuerzas de impacto. Estos pueden osificarse reduciendo la disipación de energía provocando un T-BIRT generando lesiones en estructuras óseas y blandas del pie. Las alteraciones de conformación de los miembros y del casco tendrían un efecto predisponente en la osificación, asociándose esta última con lesiones en otras estructuras como ligamentos colaterales de la articulación interfalángica distal y falange distal. El objetivo del presente estudio fue analizar algunas variables podométricas del casco y su relación con la caracterización radiográfica de los cartílagos ungueales de la falange distal en equinos de equitación. Se utilizaron 22 equinos mestizos de entre dos a 25 años de edad, sometidos a despalme en los últimos 30 días, a los cuales se le efectuaron estudios radiográficos y mediciones podométricas en ambos miembros torácicos. Se evaluó conformación a través de la vista latero medial estricta y dorso palmar sin oblicuidad realizando el estudio podométrico a través de diversas mediciones. Los cartílagos ungueales se evaluaron a través de la vista dorso palmar sin oblicuidad siguiendo la clasificación establecida por Dyson (2010) (grado 0 a 5). Además, se utilizó la vista dorso proximal dorso distal en 45° y pálmaro proximal pálmaro distal oblicua para pesquisar cualquier alteración de los miembros en estudio. Los datos fueron sometidos a estadística descriptiva y análisis de correlación de Spearman o Pearson, dependiendo de la normalidad de las variables, utilizando el programa InfoStat®. Los resultados en la vista dorso palmar indicaron que un 90,9% de los animales presentó algún grado de osificación, y solo 40,9% un grado igual o superior a tres. Esta osificación fue mayor en el miembro izquierdo y en el cartílago lateral posiblemente relacionado al tipo de trabajo al cual son sometidos estos ejemplares y a que el lado lateral aterriza primero al momento del apoyo del casco causando vibraciones que son disipadas a través de este lado del cartílago. Además, se observó que el grado de osificación en el miembro izquierdo y derecho aumento con la edad. En la vista latero medial estricta un 51% de los miembros totales presentó un eje podofalángico normal, y un 49% un eje podofalángico alterado, del cual un 42% corresponde a un eje quebrado hacia atrás y un 7% un eje quebrado hacia adelante, posiblemente por una disminución excesiva de talones por los herradores. En el estudio estadístico no existió una asociación significativa entre las variables podométricas de la falange distal y el grado de osificación de los cartílagos ungueales. Existió una asociación positiva entre el valor de la carga podal relativa y absoluta de la primera y segunda región del pie, y entre el grado de osificación del cartílago ungueal del lado lateral con el medial.
Ungueal cartilages of the foot, cartilaginous extensions of the distal phalanx, provide support to the palmar aspect of foot, help venous return of it and dissipate impact forces. These can be ossified reducing the dissipation of energy causing a T-BIRT generating lesions in bone and soft structures of the foot. Alterations in the conformation of the limbs and the hoof would have a predisposing effect on ossification, the latter being associated with lesions in other structures such as collateral ligaments of the distal interphalangeal joint and distal phalanx. The objective of the present study was to analyze some podometric variables of the hoof and its relationship with the radiographic characterization of the cartilage of the foot in the distal phalanx in horses. Twenty two crossbreed horses were used, between two and 25 years old, subjected to hoof trimming in the last 30 days, which were submitted to radiographic studies and podiatric measurements in both thoracic limbs. Conformation was evaluated through a strict lateromedial view and the dorsopalmar view without obliquity, developing the podometric study through various measurements. Ungular cartilages were evaluated through the dorsopalmar view without obliquity following the classification established by Dyson (2010) (grade 0 to 5). In addition, we used the dorsoproximal-palmarodistal oblique view at 45° and the palmaroproximal-palmarodistal oblique view, to investigate any alteration of the limbs under study. Data were subjected to descriptive statistics and Spearman or Pearson correlation analysis, depending on the normality of the variables, using the InfoStat® program. The results in the dorsopalmar radiographic view indicated that 90.9% of the animals presented some degree of ossification, and only 40.9% had a degree equal or greater than three. This ossification was greater in the left limb and in the lateral cartilage, possibly related to the type of work that these specimens are submitted, since the lateral side lands first at the moment of the support of the hoof causing vibrations that are dissipated through this side of the cartilage. It was also observed that the degree of ossification in the left and right limb increases with age. In the strict lateromedial view, 51% of the total limbs presented a normal phalangeal axis, and 49% an altered phalangeal axis, of which 42% corresponds to a broken back axis and 7% a forward broken axis, possibly due to an excessive reduction of heels by the farrier. In the statistical study there was no significant association between the podometric variables of the distal phalanx and the degree of ossification of the ungular cartilages. There was a positive association between the value of the relative and absolute foot loading of the first and second region of the foot, and between the degree of ossification of the ungual cartilage on the lateral and medial side of the foot

La biomimètica o biomimetisme són termes que simbolitzen el concepte “aprendre de la naturalesa”, és a dir, aprendre dels seus sistemes, processos i models, a fi d’utilitzar la natura com a font d’inspiració per solucionar problemes de l’home. El biomimetisme és actualment un concepte recurrent en l’àrea d’enginyeria de teixits i d’ell en sorgeixen idees per obtenir plataformes més elegants i sofisticades que puguin imitar millor les interacciones entre les cèl•lules i el seu ambient. Aquesta tesi pretén desenvolupar models, en dues i en tres dimensions, mitjançant la recreació d’un o més factors característics de l’ambient natural de la cèl•lula i que juguen un paper important en el comportament cel•lular. Se sap que tant les propietats químiques com les mecàniques de la matriu extracel•lular influeixen sobre les funcions cel•lulars. És per això que es va dissenyar un nou film polimèric que pogués combinar un hidrogel, amb propietats mecàniques variables, amb un monòmer reactiu capaç d’immobilitzar biomolècules. Degut a la complexitat del polímer dissenyat, va ser necessari recórrer a una tècnica de polimerització superficial molt versàtil com és la deposició química iniciada en fase vapor (més coneguda pel seu acrònim en anglès iCVD). Els polímers varen ser àmpliament caracteritzats i es va corroborar que podien ser modificats amb petites biomolècules com ara pèptids senyalitzadors. Les superfícies resultants són bioactives i permeten l’adhesió de cèl•lules endotelials. Unes altres superfícies biomimètiques, rellevants en l’àmbit de l’enginyeria de teixits d’os, es varen obtenir a partir d’una hidroxiapatita sintetitzada pel mètode de sol-gel submergint-la en diferents medis fisiològics. La dissolució i posterior reprecipitació dels ions proporcionen una capa d’apatita amb una composició similar a la que es troba in vivo. Els experiments evidencien la importància de partir d’un material relativament soluble. És per això que la hidroxiapatita pura no és capaç d’induir la precipitació d’aquesta apatita biomimètica in vitro. Diversos investigadors han relacionat la capacitat de formar apatita amb la bioactivitat del material, entenent bioactivitat com l’habilitat d’aquests materials de promoure la unió amb l’os. Per a l’enginyeria de teixits, però, és necessari un ambient tridimensional per tal de generar un teixit artificial. S’ha desenvolupat un nou model basat en l’ús d’un gel molt tou per tal d’obtenir un teixit dur com el de l’os. Malgrat que aquests dos conceptes poden semblar contradictoris, les cèl•lules adquireixen l’habilitat d’allargar-se ràpidament i crear una densa xarxa cel•lular dins d’aquest ambient poc restrictiu des d’un punt de vista mecànic. La consegüent contracció del sistema acaba formant un constructe més petit i resistent. Aquest és un sistema biomimètic ja que promou una gran interacció cel•lular i també la condensació de les cèl•lules, esdeveniments que tenen lloc també durant el desenvolupament de l’os i el cartílag. El model es va caracteritzar extensament amb cèl•lules ostoprogenitores MC3T3-E1 que es diferenciaren amb inducció química. A més a més, es va demostrar que l’ambient tridimensional podia promoure l’expressió espontània de marcadors osteogènics. Degut a les interessants propietats del sistema, el mateix model es va utilitzar per induir la diferenciació condrogènica de fibroblastos dermals humans. Aquests tipus cel•lular no ha estat gaire explorat en l’àmbit de l’enginyeria de teixits, malgrat que ofereix un gran potencial en teràpia regenerativa. Aquest treball proporciona proves de la capacitat condrogènica d’aquestes cèl•lules en el sistema tridimensional prèviament desenvolupat.
La biomimètica o biomimetismo son términos que simbolizan el concepto “aprender de la naturaleza”, es decir, aprender de sus sistemas, procesos y modelos, y utilizarlos como fuente de inspiración para solucionar problemas del hombre. El biomimetismo es actualmente un concepto recurrente en el área de ingeniería de tejidos y de este surgen ideas para obtener plataformas más elegantes y sofisticadas que puedan mimetizar mejor las interacciones entre las células y su ambiente. La presente tesis se centra en desarrollar modelos, tanto en dos como en tres dimensiones, mediante la recreación de uno o más factores que caracterizan el ambiente natural de la célula y que tienen su rol importante en el comportamiento celular. Se conoce que tanto las propiedades químicas como mecánicas de la matriz extracelular influyen en las funciones celulares. Debido a esto, se diseñó un nuevo film polimérico que pudiera combinar un hidrogel, con propiedades mecánicas variables, con un monómero reactivo, capaz de inmovilizar biomoléculas. Debido a la complejidad del polímero diseñado, fue necesario recurrir a una técnica de polimerización superficial muy versátil como es la deposición química iniciada en fase vapor (más conocida por su acrónimo en inglés iCVD). Los polímeros fueron ampliamente caracterizados y se corroboró que podían ser modificados con pequeñas biomoléculas como péptidos señalizadores. Las superficies resultantes son bioactivas y permiten la adhesión de células endoteliales. Se obtuvieron otro tipo de superficies biomiméticas relevantes en el ámbito de la ingeniería de tejidos de hueso, a partir de una hidroxiapatita sintetizada por el método sol-gel sumergiéndolas en diferentes medios fisiológicos. La disolución y posterior reprecipitación de los iones proporcionan una capa de apatita con una composición similar a la que se encuentra in vivo. Los experimentos evidencian la importancia de partir de un material relativamente soluble. Precisamente debido a esto la hidroxiapatita pura no es capaz de inducir la precipitación de esta apatita biomimética in vitro. Varios investigadores han relacionado la capacidad de formar apatita con la bioactividad del material, entendiendo bioactividad como la habilidad de estos materiales de promover la unión con el hueso. De todos modos, en ingeniería de tejidos, es necesario un ambiente tridimensional para generar un tejido artificial. Se ha desarrollado un nuevo modelo basado en el uso de un gel blando para obtener tejido duro como el del hueso. Aunque estos conceptos pueden parecer contradictorios, las células adquieren la habilidad de estirarse rápidamente y de formar una densa red celular dentro de este gel tan poco restrictivo desde un punto de vista mecánico. La consiguiente contracción del sistema acaba formando un constructo mucho más pequeño y resistente. Este es un sistema biomimético ya que promueve una gran interacción celular y también la condensación de las células, eventos que también ocurren durante el desarrollo de hueso y cartílago. El modelo se caracterizó extensamente con células osteoprogenitoras MC3T3-E1 que se diferenciaron bajo inducción química. Además, se demostró que el microambiente tridimensional podía promover la expresión espontánea de marcadores osteogénicos. Debido a las interesantes propiedades del sistema, el mismo modelo se usó para inducir la diferenciación condrogénica de fibroblastos dermales humanos. Este tipo celular no ha sido demasiado explorado en ingeniería de tejidos, a pesar de que puede tener un gran potencial en terapia regenerativa. Este trabajo proporciona pruebas de la capacidad condrogénica de estas células en el sistema tridimensional previamente desarrollado.
Biomimetics or biomimicry are terms that imply “learning from nature”, from its systems, processes and models, in order to use nature as inspiration to solve human problems. In tissue engineering, biomimetics is nowadays a recurrent term and a source of ideas to obtain more elegant and sophisticated platforms that could better mimic the interactions between cells and their environment. This thesis is focused on developing models both in two- and three-dimensions by recreation of one or more factors of the cell natural environment that are known to play an important role in cell behavior. Since both the chemical and mechanical properties of the extracellular matrix are known to effectively influence cell function, an innovative polymeric thin film was designed combining a hydrogel with tunable mechanical properties and a reactive molecule, capable to immobilize biomolecules. Due to the complexity of the polymers, a versatile technique such as initiated chemical vapor deposition (iCVD) was required for the synthesis. Extensive characterization revealed that nanostructured hydrogels were obtained and that small biomolecules, such as signaling peptides, could be attached on the surface. The final surfaces are bioactive and support endothelial cell attachment. Relevant biomimetic surfaces for bone tissue engineering could also be obtained from a sol-gel synthesized hydroxyapatite after immersion in different physiological media. The dissolution and posterior reprecipitation of the ions rendered a final apatite layer with a composition similar to that found in vivo. The experiments evidenced the importance of starting from a rather soluble material and, thus, pure hydroxyapatite was not able to promote apatite precipitation in vitro. This capacity has been related to the material bioactivity by many researchers in terms of its ability to bond to bone in tissue engineering applications. However, for tissue engineering a three-dimensional environment is required to build tissue-like constructs. A new model was developed based on the use of a very soft gel to obtain hard tissue. Although the concepts might seem to work in opposite directions, cells gain the ability to rapidly elongate and form a dense cellular network within this unrestrictive environment. Subsequent contraction of the whole system rendered a smaller and stronger final tissue-like construct. This system was considered biomimetic as it promotes high cell-cell interaction and cellular condensation, which are events that occur in bone and cartilage development. This system was extensively characterized with osteoprogenitor MC3T3-E1 cells that could undergo full osteogenic differentiation under chemical induction. More interestingly, the three-dimensional microenvironment was also able to promote by itself spontaneous expression of bone-related markers. Due to the interesting properties of this system, the same model was used to induce chondrogenic differentiation of human dermal fibroblasts. This cell type has been poorly explored for tissue engineering applications, but it might have great potential in future therapeutic platforms. This work provides proof of concept of chondrogenic potential of these cells in this three-dimensional system.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario
La osteoartritis (OA) o enfermedad degenerativa articular (EDA) es la principal causa de invalidez en el equino. Es una afección multifactorial en la que participan diversos mediadores químicos, entre ellos las metaloproteinasas (MMPs), que actúan degradando los componentes de la matriz extracelular (MEC) del cartílago articular, generando una cadena de reacciones que llevan a la destrucción progresiva del mismo. Se ha demostrado que recuentos elevados de células nucleadas en el líquido sinovial están relacionados con un incremento en la actividad de las MMPs, especialmente la MMP-9, lo que incide en el establecimiento y posterior progreso de la OA. Como una forma de validar un modelo de normalidad articular en base a la observación macroscópica, en este estudio se obtuvo muestras de la articulación metacarpo falángica equina, realizando una clasificación entre articulaciones normales y patológicas según la apariencia macroscópica del cartílago articular, separando luego las articulaciones normales según su recuento celular en un grupo normal con recuento celular elevado (> 600 células nucleadas/µl) y en otro normal con bajo recuento celular (< 300 células nucleadas/µl). Además, se incorporó un grupo articular con daño crónico de la articulación como control positivo. A todas las muestras se les determinó la concentración de proteínas totales y la actividad gelatinolítica para las MMPs 2 y 9 mediante zimografía. Además, se realizaron cortes histológicos del cartílago articular con el fin de evaluar la pérdida de matriz extracelular, mediante la medición del grosor de la zona superficial del cartílago. También en estos cortes se realizó recuento de condrocitos y se evaluó la cantidad de grupos isógenos. La muerte celular se evaluó mediante el recuento de lagunas vacías en un área determinada de cartílago articular. En el grupo patológico se detectó una marcada disminución en el grosor de la zona superficial del cartílago articular y se encontró el mayor recuento de lagunas vacías. En ambos grupos normales a la inspección macroscópica no se detectó diferencias en el grosor de la zona superficial del cartílago ni en el recuento de condrocitos y de grupos isógenos. Sin embargo, se encontró diferencia significativa en la cantidad de lagunas vacías, siendo ésta mucho mayor en el grupo con un recuento celular elevado. También se encontró una relación entre la mayor actividad gelatinolítica de MMP-9 y un mayor recuento de células nucleadas en el líquido sinovial

La medicina regenerativa és una disciplina que ha guanyat reconeixement en les últimes dècades pel fet que moltes malalties no són tractables amb fàrmacs convencionals. Molts grups de recerca i empreses inverteixen temps i diners en la producció de nous paradigmes per curar malalties com el Parkinson, l'artrosi o la regeneració de medul·la espinal. Aquestes propostes es basen en l'ús de teixits biomimètics per reparar òrgans danyats. En aquesta tesi es presenta un nou model experimental per estudiar la formació d'os i cartílag i eventualment la reparació d'aquests teixits.
Hem utilitzat Fibroblasts Embriònics de Ratolí (MEFs) combinats amb diferents materials biomimètics per estudiar os i cartílag in vitro i in vivo. Aquests MEFs es van cultivar in vitro i in vivo en RAD16-I, un pèptid auto-ensamblable amb estructura similar a matrius extracel·lulars genèriques, amb l'objectiu d'estudiar l'evolució dels fibroblasts en aquestes dues condicions. També s'han recobert superficialment micropartícules de hidroxiapatita obtenint càrregues inorgàniques similars a l'os i biològicament actives per a utilitzar-les com a substituts d'os o cartílag. Amb la idea de millorar els recobriments superficials, hem desenvolupat una plataforma que permet dur a terme proves combinatòries amb factors de creixement i altres compostos biològicament actius.
Cultius in vitro de MEFs han mostrat que quan fibroblasts embrionaris primaris de ratolí es cultiven en RAD16-I, estableixen una xarxa intercel·lular que causa una contracció cel·lular organitzada, proliferació i migració cel·lulars i culmina amb la formació d'una estructura bilateral i simètrica amb un eix central distingible. Durant aquest procés morfològic, augmenta l'expressió d'un grup de gens mesodèrmics (brachyury, Sox9, Sox5, Sox6, Runx2). L'expressió de brachyury està localitzada primer en l'eix de simetria central i després s'extén als dos costats de l'estructura. Per acabar, la formació espontània d'un teixit similar al del cartílag acompanya l'expressió de Sox9 i Runx2.
L'estudi in vivo de MEFs es va fer gràcies a la tècnica de presa d'imatges no invasiva basada en bioluminiscència (BLI) que ha desenvolupat en el grup de recerca del dr. Jerónimo Blanco. Aquests experiments han mostrat que el RAD16-I és una matriu molt permissiva per a la supervivència i proliferació cel·lulars in vivo. A més, sembla que les pobres propietats mecàniques que té el RAD16-I no li suposen cap desavantatge en termes de creixement cel·lular in vivo.
Finalment, hem desenvolupat diferents tipus de micropartícules de hidroxiapatita (HA) no recobertes, i recobertes mitjançant polimerització assistida per plasma. Els recobriments permeten afinar les propietats de la HA i produir partícules que satisfacin les necessitats de diferents aplicacions mèdiques en reparació d'os i cartílag. També hem desenvolupat un mètode per produir plataformes basades en plaques de 96 pous que permetin fer proves combinatòries amb compostos biològicament actius per vàries aplicacions en medicina regenerativa.
En conclusió, hem aportat noves idees i eines que permetran trobar teixits regeneratius basats en l'ús de fibroblasts i materials biomimètics.
La medicina regenerativa es una disciplina que ha ganado reconocimiento en las últimas décadas porque muchas enfermedades no son tratables con fármacos convencionales. Muchos grupos de investigación y empresas invierten tiempo y dinero en la producción de nuevos paradigmas para curar enfermedades como el Parkinson, la artrosis o la regeneración de médula espinal. Estas propuestas se basan en el uso de tejidos biomiméticos para reparar órganos dañados. En esta tesis se presenta un nuevo modelo experimental para estudiar la formación de hueso y cartílago y tal vez la reparación de estos tejidos.
Hemos utilizado Fibroblastos Embrionarios de Ratón (MEFs) combinados con diferentes materiales biomiméticos para estudiar hueso y cartílago in vitro e in vivo. Estos MEFs se cultivaron in vitro e in vivo en RAD16-I, un péptido auto-ensamblable con estructura similar a matrices extracelulares genéricas, con el objetivo de estudiar la evolución de los fibroblastos en estas dos condiciones. También se han recubierto superficialmente micropartículas de hidroxiapatita obteniendo cargas inorgánicas similares al hueso y biológicamente activas para utilizarlas como sustitutos de hueso o cartílago. Con la idea de mejorar los recubrimientos superficiales, hemos desarrollado una plataforma que permite llevar a cabo pruebas combinatorias con factores de crecimiento y otros compuestos biológicamente activos.
Cultivos in vitro de MEFs han mostrado que cuando fibroblastos embrionarios primarios de ratón se cultivan en RAD16-I, establecen una red intercelular que causa una contracción celular organizada, proliferación y migración celulares y culmina con la formación de una estructura bilateral y simétrica con un eje central distinguible. Durante este proceso morfológico, aumenta la expresión de un grupo de genes mesodérmicos (brachyury, Sox9, Sox5, Sox6, Runx2). La expresión de brachyury está localizada primero en el eje de simetría central y después se extiende a los dos lados de la estructura. Para terminar, la formación espontánea de un tejido similar al del cartílago acompaña a la expresión de Sox9 y Runx2.
El estudio in vivo de MEFs se hizo gracias a la técnica de toma de imágenes no invasiva basada en bioluminiscencia (BLI) que han desarrollado en el grupo de investigación del dr. Jerónimo Blanco. Estos experimentos han mostrado que el RAD16-I es una matriz muy permisiva para a la supervivencia y proliferación celulares in vivo. Además, parece que las pobres propiedades mecánicas que tiene el RAD16-I no le suponen ninguna desventaja en términos de crecimiento celular in vivo.
Finalmente, hemos desarrollado diferentes tipos de micropartículas de hidroxiapatita (HA) no recubiertas, y recubiertas mediante polimerización asistida por plasma. Los recubrimientos permiten afinar las propiedades de la HA y producir partículas que satisfagan las necesidades de diferentes aplicaciones médicas en reparación de hueso y cartílago. También hemos desarrollado un método para producir plataformas basadas en placas de 96 pozos que permitan hacer pruebas combinatorias con compuestos biológicamente activos para varias aplicaciones en medicina regenerativa.
En conclusión, hemos aportado nuevas ideas y herramientas que permitirán hallar tejidos regenerativos basados en el uso de fibroblastos y materiales biomiméticos.
Regenerative medicine is a discipline that has gained recognition in the last decades because many diseases are not treatable with traditional drugs. Many research groups and companies invest time and money in the production of new paradigms to cure conditions such as Parkinson's, arthrosis or spinal cord injuries. These approaches are based in the use of biomimetic tissues to replace damaged organs. In this work we present a new experimental model to study the formation of bone and cartilage and eventually to repair these tissues.
We have used Mouse Embryonic Fibroblasts (MEFs) combined with different biomimetic materials to study bone and cartilage formation in vitro and in vivo. MEFs have been cultured in vitro and in vivo in RAD16-I, a synthetic self-assembling peptide with structure similar to generic extracellular matrix milieu, to study the evolution of these fibroblasts in both conditions. Also, hydroxyapatite microparticles have been surface coated to produce biologically active bone-like inorganic charges for use in cartilage or bone substitutes. In order to improve the particles' coatings, we have developed a platform that allows us to perform combinatorial testing of growth factors and other biologically active compounds.
In vitro cultures of MEFs has shown that when primary mouse embryonic fibroblasts are cultured in a soft nanofiber scaffold, they establish a cellular network that causes an organized cell contraction, proliferation, and migration that ends in the formation of a symmetrically bilateral structure with a distinct central axis. A subset of mesodermal genes (brachyury, Sox9, Sox5, Sox6, Runx2) is upregulated during this morphogenetic process. The expression of brachyury was localized first at the central axis, extending then to both sides of the structure. The spontaneous formation of cartilage-like tissue mainly at the paraxial zone followed the expression of Sox9 and Runx2.
In vivo study of MEFs was facilitated by a non-invasive bioluminescence imaging (BLI) technique to detect luciferase-expressing cells, developed by Dr. Blanco's research group. These experiments showed that RAD16-I is a very permissive scaffold for cell survival and proliferation in vivo. Furthermore, it seems that the poor mechanical properties of RAD16-I are no disadvantage in terms of cell growth in vivo.
Finally, we have developed different types of coated and uncoated hydroxyapatite (HA) microparticles by plasma polymerization. The coatings permit to tune the properties of HA and produce particles that suit the needs of different medical applications in bone and cartilage repair. Moreover, we have developed a method to produce platforms based on 96-well plates that allow the combinatorial testing of biologically active compounds for various applications in regenerative medicine.
In conclusion, we have supplied new insights and tools that will enhance the finding of new regenerative tissues based on fibroblasts and biomimetic materials.

Publicación a texto completo no autorizada por el autor
Compara los resultados audiométricos y anatómicos en las timpanoplastías tipo I realizadas con cartílago y con fascia temporal en pacientes con otitis media crónica para ello se realizó un estudio, descriptivo, retrospectivo, de casos. La muestra seleccionada estuvo comprendida por 63 casos (pacientes a los que se les realizó timpanoplastías tipo I con cartílago y con fascia temporal por otitis media crónica) en el periodo que corresponde al estudio. Los instrumentos empleados estuvieron conformados por una ficha de recolección de datos convenientemente elaborada para los fines de estudio. Se concluye en el estudio que: No existen diferencias estadísticamente significativas entre los resultados anatómicos del tímpano reconstruido con cartílago y con fascia temporal en la timpanoplastía tipo I. (P>0.05). No existen diferencias estadísticamente significativas entre los resultados audiométricos en las timpanoplastías tipo I realizadas con cartílago y con fascia temporal. (P>0.05). La tasa de éxito en las timpanoplastías tipo I con cartílago fue del 90.9% y las realizadas con fascia de músculo temporal fue del 84.6%.

Publicación a texto completo no autorizada por el autor
El documento digital no refiere asesor
Determina si hay reparación de defectos osteocondrales en condilos femorales usando cartílago costal e injerto de cresta iliaca autologos en ratas blancas. Se experimentó con 60 ratas blancas de entre 110 y 120 gr. Se formaron dos grupos de 30 especímenes cada uno (control y experimental). Al control solo se le hizo la exceresis del condilo femoral medial y al grupo experimental, ademas, se coloco cartilago costal sobre el defecto con injerto de cresta iliaca interpuesto, ambos autólogos. Los especímenes fueron sacrificados a los 60 días y evaluados microscópicamente. Se usó el test de t-student. Hubo diferencia significativa entre los grupos control y experimental, considerando el puntaje total de las cinco variables estudiadas. Así mismo se encontró diferencia significativa con la variable morfología celular; con las variables metacromasia, regularidad de superficie, grosor del cartílago e integración con el cartílago adyacente, no se encontró diferencia significativa. No hubo reparación de los defectos osteocondrales amplios de los cóndilos femorales.
Trabajo académico

[spa] Uno de las principales preocupaciones es la reanudación del crecimiento tras la hemiepifisiodesis temporal. Investigadores describen que inmediatamente después de la retirada del material, se produce una aceleración del crecimiento. Si éste, esta limitado a un la do de la fisis ( hemiepifisiodesis), conlleva una pérdida de corrección alcanzada, a veces, tan severa que requiere repetir el tratamiento. Existe gran controversia en la literatura, sobre el principal responsable de este fenómeno. El efecto rebote es enigmatico, difícil de predecir, con cronología incierta, y producida por mecanismo desconocido, y conlleva un fallo en la hemiepifisiodesis, y la necesidad de realizar una nueva cirugía. El objetivo principal, es observar, en un modelo experimental, la cronología del rebote, evaluar su incidencia, intensidad, factores asociados. Se estudian 22 conejos, se realiza hemiepifisiodesis en tibia proximal, con placa en 8. Tras 3 semanas se retira implante, los conejos se sacrifican en intervalos 3dias-3 semanas. Estudios histológicos y radiológicos.
[eng] One of the main concerns were related to resumption of growth after temporal epifisiodesis. Investigators noted that immediately after removal of the device there were a spurt of growth. If this spurt, is limited to one side of the physis ( hemiepiphysiodeis), may result in a loss of the correction achieved. This loss ,be severe enough to require a repeated treatment Controversy exists in the literature about the primary responsible for this phenomenon. Rebound growth is enigmatic, unpredictable, of uncertain chronology ,produced byan unknown mechanism, eventually, result in the failure of the hemieiphysiodesis and in the need of a new surgical procedure. The aim of this stydy, was observe, in a controlled experimental model, chronology of rebound growth, evaluated its incidence, intensity looking for possible factors associated to it. Twenty-two rabbits were submitted to proximal medial tibial hemipiphysiodesis using eight-plate. After 3 weeks, the plate is removal. The rabbits were sacrificed at intervals from 3 days to 3 weeks. Histological and radiological studies were performed.
[cat] Una de les principals preocupaciones esta relacionada amb la represa del creixement rere epifisiodesis temporal. Investigadors descriuen que immediatament després de la retirada del material té lloc una aceleració del creixement. Quan aquest està limitat a un costat de la fisis ( hemiepifisiodesi),això comporta una pèrdua de la correció assolida, de vegades, tan severa que requereix repetir el tractament. Existeix gran controvèrsia a la literatura sobre el principal responsable d'aquest fenomen. L'efecte rebot és enigmàtic, impredictible, cronologia incerta, prodüida per un mecanisme desconegut, i que pot conduir a un error en l 'hemiepifisiodesis, i en la necessitat de realitzar un nou procediment quirúrgic. L'objectiu principal, és observar en un model experimental controlat, la cronologia del ' efecte rebot, avaluar la seva incidència, la intensitat, cercant possibles factors associats a ell. S'estudien 22 conills, es realitza a la tíbia proximal medial hemipifisodesi, utilitzan placa en 8. Després de 3 setmanes, es retira l'implant. Els conills són sacrificats a intervals de 3 dies fins a 3 setmanes. Estudis histològics I radiologicos.