Dissertations / Theses on the topic 'CD11b/CD18'

Les neutrophiles sont les premiers leucocytes a acceder au site inflammatoire. C'est l'adherence, via les integrines 2, qui leur permet d'assurer leurs fonctions. Les mecanismes d'activation de ces integrines sont mal connus. Cette etude analyse donc le role de l'oxydoreduction dans l'activation des integrines 2 des neutrophiles. Nous montrons que les oxydants activent les integrines 2, se traduisant par l'adherence des neutrophiles et l'apparition de la conformation active des integrines. Cette activation implique les tyrosine kinases et la formation de ponts disulfure. Ensuite, le dpi (diphenyleneiodonium) et les piegeurs de radicaux libres inhibent l'adherence et l'apparition de la conformation active des integrines 2, induite apres la stimulation des neutrophiles par le tnf-. L'oxydase impliquee dans le mecanisme n'est pas la nadph-oxydase, puisque les memes resultats sont retrouves avec les neutrophiles de patients cgd (granulomatose septique chronique). Le pp2, inhibiteur specifique des kinases src, bloque l'adherence des neutrophiles et l'apparition de la conformation active des integrines 2 induite par le tnf-. Parmi les kinases src, seules les kinases fgr sont activees par le tnf- et ceci de facon dependante de l'oxydoreduction, car inhibee par le dpi et les piegeurs de radicaux libres. De la meme facon, le sb203580, inhibiteur specifique des map kinases p38, bloque l'adherence des neutrophiles et l'apparition de la conformation active des integrines 2 induite par le tnf-. Cette activation est regulee de facon dependante de l'oxydoreduction, car elle est bloquee par le dpi et les piegeurs de radicaux libres. Nous avons donc mis en evidence un nouveau mecanisme de regulation de l'activation des integrines 2, impliquant la stimulation d'une oxydase, differente de la nadph-oxydase, qui modifie le potentiel d'oxydoreduction du neutrophile, entrainant l'oxydation de groupements thiols et l'activation des kinases p38 et fgr.

Pour defendre l'organisme face a une agression tissulaire, les polynucleaires neutrophiles adherent a l'endothelium, le traversent et migrent dans le tissu conjonctif jusqu'au site inflammatoire ou ils liberent leurs produits de secretions, phagocytent les particules cibles, puis meurent par apoptose. Ce sont les integrines leucocytaires (cd11a, b, c, d/cd18) qui assurent les fonctions adhesives des neutrophiles. Parmi ces integrines, nous avons montre avec une souris invalide en cd11b, que le recepteur cd11b/cd18 est l'adhesine majeure des neutrophiles qui intervient dans l'adherence de ces cellules aux surfaces proteiques, dans la phagocytose et l'explosion respiratoire, et de facon inattendue, dans l'apoptose de ces cellules. Nous n'avons pas retrouve de recepteur des autres familles d'integrines en dehors d'une faible quantite de l'heterodimere cd49f/cd29. Par ailleurs, nous avons montre que la leucosialine (cd43), une mucine anti-adhesive fortement exprimee par les neutrophiles, subissait un clivage proteolytique au cours de l'activation cellulaire, ce qui pourrait faciliter la liaison de cd11b/cd18 avec ses ligands. Pour comprendre cette derniere interaction, nous avons caracterise le domaine d'adherence de l'integrine cd11b/cd18. Il s'agit d'un domaine extracellulaire d'environ 200 acides amines (domaine a ou i) qui adopte une structure de type alpha/beta et qui contient un site de fixation pour cation divalent a sa surface appele midas, metal ion-dependent adhesion site. C'est au niveau de ce site que se lient l'antagoniste nif (neutrophil inhibitory factor) et l'opsonine ic3b, deux ligands de cd11b/cd18. Le changement de conformation qui survient lors de l'activation des integrines pourrait modifier la coordination du metal du domaine a et faciliter ainsi l'interaction de midas avec ses ligands. Si la reaction inflammatoire est vitale pour l'organisme, une reponse excessive peut aggraver le traumatisme initial. La connaissance du role et du mode d'action des integrines leucocytaires devrait aider a la conception de nouveaux anti-inflammatoires.

A desnutrição é uma condição nutricional que pode afetar muitos aspectos da resposta imunológica, como alterações na migração celular, na fagocitose, na resposta bactericida, mudanças na produção de radicais livres e espécies de nitrogênio e na produção de citocinas pró-inflamatórias. Logo, indivíduos desnutridos apresentam maior susceptibilidade a infecções. Visto que a glutamina é um aminoácido de extrema importância para a funcionalidade de diversas células do sistema imune e que as mesmas apresentam aumento da utilização desse aminoácido durante processos infecciosos, investigou-se, neste trabalho, quais os efeitos da glutamina sobre alguns aspectos da mobilização, migração e sinalização celular em um modelo experimental de desnutrição proteica. Para tanto, utilizou-se camundongos da linhagem BALB/c machos, os quais foram divididos em dois grupos, Controle e Desnutrido, que passaram a receber dietas isocalóricas contendo 12% (normoproteica) e 2% de caseína (hipoproteica), respectivamente, durante 5 semanas. Para as avaliações in vivo, animais de ambos os grupos receberam por via endovenosa 100µL de solução contendo 1,25µg de LPS e após 1 hora 0,75mg/Kg de L-glutamina (GLUT). Após o período de desnutrição ou de indução ao processo inflamatório, os animais foram eutanasiados e as amostras biológicas coletas. Foram avaliados nos animais estimulados in vivo hemograma, mielograma, as citocinas IL-10 e TNF-α circulantes e a expressão de CD11b/CD18 nos granulócitos do sangue periférico. Foi avaliado, in vitro, a capacidade migratória, a expressão de CD11b/CD18 de polimorfonucleados da medula óssea e do sangue periférico, bem como a síntese de citocinas IL-1α, IL-6, IL-10, IL-12 e TNF-α e a expressão de NF-κB e IκBα em células cultivadas em meio com 0; 0,6; 2 e 10 mM de GLUT. Os animais desnutridos apresentaram anemia, leucopenia, hipoplasia medular e diminuição na concentração sérica de proteínas, albumina e pré-albumina. A GLUT, in vitro, apresentou capacidade de reduzir a produção de IL-1α e IL-6, bem como a ativação da via do NF-κB. No modelo in vivo a GLUT, em animais estimulados com LPS, alterou a cinética de migração neutrofílica e reduziu a expressão de CD18, bem como diminuiu os níveis de TNFα circulantes.
Malnutrition is a nutritional condition that can affect many aspects of immune responses, affecting cell migration, phagocytosis, bactericidal response and changing free radicals production as nitrogen species and production of proinflammatory cytokines. Therefore, malnourished individuals are more susceptible to infections. Once glutamine is an amino acid of extreme importance to the functionality of various immune cells and those cells exhibit increased use of this amino acid during infectious processes. In this work was investigated, the effects of glutamine in some aspects of mobilization, cell migration and signaling in an experimental model of protein malnutrition. For this purpose, we used BALB/c mice, which received isocaloric diets, normoproteic or hypoproteic, containing respectively, 12% (Control group) and 2% (Malnourished group) of protein for a period of 5 weeks. The animals in both groups, for in vivo evaluations, received intravenous 100 µl of a solution containing 1.25µg of LPS and after 1 hour 0.75mg/kg of L-glutamine (GLUT). After the malnutrition period or the inflammatory process induction, the animals were euthanized and biological samples were collected. Were evaluated blood count, bone marrow, the cytokines IL-10 and TNF-α circulating and expression of CD11b/CD18 in granulocytes from peripheral blood of animals stimulated in vivo. In vitro were evaluated the migratory capacity, the expression of CD11b/CD18 polymorphonuclear bone marrow and peripheral blood, as well as the cytokines synthesis IL-1α, IL-6, IL-10, IL-12 and TNF-α and the expression of NF-κB and IκBα in cultured cells in media with 0; 0.6; 2 and 10 mM GLUT. Malnourished animals presented anemia, leukopenia, marrow hypoplasia and lower serum proteins, albumin and prealbumin. The GLUT in vitro has the capacity to reduce IL-1α and IL-6 as well as the activation of the NF-κB. In in vivo model, the GLUT altered neutrophil migration kinetics and reduced the expression of CD18, as well as decreased levels of circulating TNF-α in animals stimulated with LPS.

Nous avons demontre que les glycoproteines recombinantes gp160 et gp120 du vih1 activent le complement humain en l'absence d'anticorps. Les glycoproteines gp160 et gp120 induisent un clivage de c3 dans du serum humain normal. Ce clivage est lie a une activation de la voie classique du complement qui peut etre augmente en presence d'anticorps anti-vih1. Cette activation du complement permet aussi une opsonisation des particules virales puisque l'infection de cellules cibles par le vih1 ou le vih2 peut etre facilitee par une pre-incubation du virus dans du serum humain normal. La pre-incubation des cellules avec des anticorps anti-cr1 ou anti-cr3 inhibe l'infection des cellules des lignees pro-monocytaires, comme des monocytes, indiquant que la penetration du virus s'effectue par l'intermediaire des recepteurs cr1 (cd35) et cr3 (cd11b/cd18). L'infection mediee par les molecules cr1 et cr3 se produit independamment des molecules cd4. Nos etudes montre par ailleurs que la stimulation des recepteurs du complement induit simultanement dans les cellules infectees, une translocation du nf-kappab, une augmentation de la replication virale et une deregulation de la synthese des cytokines. Cette deregulation pourrait etre une consequence d'une anomalie de maturation des cellules. D'autre part, nous avons identifie l'apparition chez les patients infectes par le vih d'une sous-population de monocytes plus matures dont l'emergence dependrait de la deregulation de l'equilibre des cytokines lymphocytaires

A icterícia por hiperbilirrubinemia indireta afeta mais de 60% dos recém-nascidos a termo. O tratamento, quando necessário, é realizado através da fototerapia. Não existem estudos na literatura avaliando os efeitos da fototerapia na função dos neutrófilos de recém-nascidos. O melhor entendimento da função dos neutrófilos nos recém-nascidos antes e após a fototerapia seria importante para avaliar as possíveis repercussões na expressão dos neutrófilos desencadeadas pelo tratamento fototerápico. O objetivo deste estudo foi avaliar e comparar a função dos neutrófilos, através da mensuração pela citometria de fluxo da expressão dos principais marcadores de superfície em recémnascidos ictéricos, antes e após 24 horas de fototerapia. Metodologia: Foram incluídos recém-nascidos com idade gestacional ≥ 35 semanas e peso de nascimento ≥ 2000g, que possuiam critérios da Academia Americana de Pediatria para tratamento fototerápico. Os critérios de exclusão foram: mal-formações congênitas, síndromes com alterações cromossômicas, erro inato do metabolismo, infecções do grupo STORCH, asfixia neonatal, sepse ou suspeita de sepse, exsanguineotransfusão, transfusão de hemocomponentes e uso de imunoglobulina. Foi realizada a avaliação de expressão da intensidade média de fluorescência (IMF) de CD10, CD11b, CD11c, CD15, CD16, CD18, CD62L, CD64 e CD66, antes do início e após 24 horas do início da fototerapia. Foram utilizados o teste T de Student para análise dos dados. Resultados: Foram incluídos 25 recém-nascidos no estudo, com idade mediana de 53 (27.5-75.5) horas de vida e bilirrubina média de 13.6±2.85 mg/dL. Não houve diferença estatística na expressão de CD11b, CD15, CD18, CD62L, CD64 e percentual de neutrófilos antes e após 24 horas de fototerapia. Ocorreu aumento da expressão de CD10 8 (p=0.038) e CD16 (p=0.017) e redução da expressão de CD11c (p=0.023) e CD66acde (p=0.004) após 24 horas de fototerapia. Conclusão: Os recém-nascidos submetidos ao tratamento fototerápico apresentaram aumento da expressão de CD10 e de CD16 e diminuição da expressão de CD11c e de CD66acde após 24 horas de exposição, que pode estar relacionado a um efeito antiinflamatório da fototerapia nos recém-nascidos expostos a este tratamento.
Jaundice due to indirect hyperbilirubinemia affects more than 60% of term neonates. The treatment when necessary is carried out using phototherapy. There are no studies in the literature evaluating the effect of phototherapy on the function of neonates' neutrophils. A better understanding of the function of neutrophils in neonates before and after phototherapy would be important in order to assess potential effects on the expression of neutrofils triggered by the phototherapy treatment. The aim of this study was to assess and compare the function of neutrophils by measuring the expression of the main surface markers in icteric neonates, using flow cytometry, before and after 24 hours of phototherapy. Methodology: Neonates at a gestational age ≥ 35 weeks and at a birth weight ≥ 2000g who met the criteria of the American Academy of Pediatrics for phototherapy were included. The exclusion criteria were: congenital malformations, syndromes with chromosomal alterations, inborn errors of metabolism, infections of the STORCH group, neonatal asphyxia, sepsis or suspicion of sepsis, exchange transfusion, transfusion of blood components, and use of immunoglobulin. The evaluation of the MFI expression of CD10, CD11b, CD11c, CD15, CD16, CD18, CD62L, CD64 and CD66 was performed before and 24 hours after the initiation of phototherapy. The chi-square and Student T tests were used for data analysis. Results: Twenty-five neonates were included in the study at the mean age of 53 (27.5- 75.5) hours of life and with a mean bilirubin level of 13.6±2.85 mg/dL. There was no statistical difference in the expression of CD11b, CD15, CD18, CD62L, CD64 and percentage of neutrophils before and after 24 hours of phototherapy. There was an increase in the expression of CD10 (p=0.038) and CD16 (p=0.017) and a reduction in 10 the expression of CD11c (p=0.023) and CD66acde (p=0.004) after 24 hours of phototherapy. Conclusion: The newborns submitted to phototherapy had increased expression of CD10 and CD16 and decreased expression of CD11c and CD66acde after 24 hours of exposure, which may be related to an anti-inflammatory effect of phototherapy on the neonates exposed to this treatment.

The aim of this work was to evaluate some clinical, histopathological, parasitological and immunological aspects of dogs naturally infected with Leishmania chagasi. The principal aim was to compare the third receptor of complement CR3 (CD11b/CD18) in spleen, liver, lymph nodes (axilar, cervical and polpliteal) with clinical, histological and parasitological findings. This study was carried out with ten control dogs (uninfected animals) and thirty infected dogs. All them was mongrel dogs with undefined age and was obtained from the municipality of Belo Horizonte, metropolitan area. The infected animals were divided in two groups: (1) group denominated asymptomatic composed by ten animals without clinical signs of the disease; (2) group denominated symptomatic composed by twenty animals with classical clinical signs of the disease as skin lesions (alopecia, eczema and ulcers), loss weight and lymphopathy. During necropsy, fragments of spleen, liver, lymph nodes (axillary, cervical, and popliteal) and skin (ears, nose and abdomen) were collected and fixed with formaldehyde solution 10% for histological analysis. Paraffined sections of all tissues were mounted on histological slides and stained by Hematoxylin-Eosin (H&E) and the strepto-avidin peroxidase immunohistochemical method for microscopical and parasitological analysis, respectively. Frozen tissue sections of all organs, except skin samples, were stained by the strepto-avidin peroxidase immunohistochemical method for CR3 (CD11b/Cd18) tissue characterization. The tissue and cellular CR3 expression was evaluated by morphometrical digital analysis. Densitometrical CR3 expression was higher in infected animals than controls, but it was not different when compared between animals with different defined clinical status. CR3 cell expression in spleens was higher in symptomatic animals than in asymptomatic ones where the parasite load was higher. In another side, CR3 cell expression in livers was higher in asymptomatic animals than in symptomatic ones, where the tissue parasite load was lower. However, there was a positive correlation between the parasite load and cellular CR3 expression in the spleens and cervical lymph nodes of infected dogs and there is a negative correlation in liver. We can say, that the immune response appears to be organ specific (immune response compartmentalization) whereas inflammatory cells play a distinct role. Sometimes, they could act to perpetuate the infection or they could act as effector cells in order to control the infection. Following our results where the symptomatic animals showed higher parasite loads and higher CD11b/CD18 expression in their lymphoid organs as spleen and lymph nodes, we can conclude that these cells (monocyte-macrophages) might serve to perpetuate intracellular infection.
Este trabalho teve como objetivo estudar alguns aspectos clínicos, histopatológicos, parasitológicos e imunológicos, de cães naturalmente infectados com Leishmania (Leishmania) chagasi. O enfoque principal foi o de comparar a expressão do receptor do complemento do tipo 3 (CR3 - CD11b/CD18) no baço, fígado, linfonodos (axilares, cervicais e poplíteos) com alguns aspectos clínicos, histológicos e parasitológicos. Para isso, foram utilizados dez animais não infectados (grupo controle) e trinta animais infectados. Todos eram provenientes da região do Município de Sabará/MG sem raça e idade definidos. Os animais infectados foram subdivididos em dois grupos: grupo denominado assintomático composto por dez animais que não apresentavam sinais clínicos da doença; (2) grupo denominado sintomático: composto por vinte animais que apresentavam sinais clínicos clássicos da doença como lesões de pele (alopecia, eczemas, seborréia, ulcerações), perda de peso e linfadenopatias. Em necropsia, fragmentos de baço, fígado, linfonodos (axilares, cervicais e poplíteos) e pele (orelha, espelho nasal e abdômen) foram coletados, fixados em solução de formol a 10% tamponado e em seguida processados pelas técnicas rotineiras de histopatologia. Cortes parafinados dos diversos tecidos foram montados em lâminas histológicas e corados pela Hematoxilina e Eosina (H&E), e pela técnica Imuno-histoquímica da estrepto -avidina- peroxidade para análises microscópica e parasitológica, respectivamente. Cortes criopreservados dos mesmos tecidos, com a exceção dapele, foram corados pela técnica imuno-histoquímica da estrepto-avidina-peroxidade para marcação tecidual das proteínas CD11b e CD18 (CR3). A expressão tecidual e celular de CR3 (CD11b/CD18) foi acessada por técnicas de morfometria digital (avaliação do número e técnicas de densitométrica óptica). Nossos resultados revelaram uma expressão densitométrica e celular do CR3 aumentada em animais infectados quando comparada a animais controle, mas não diferente entre os animais assintomáticos e sintomáticos. Correlações positivas foram encontradas entre a presença do parasitismo tecidual e a expressão das proteínas CD11b e CD18 no baço e linfonodo cervical e negativa para e o parasitismo hepático. De fato, animais sintomáticos apresentaram uma maior expressão de CR3 no baço e nos linfonodos cervicais, associada também a um maior parasitismo tecidual. Por outro lado, no fígado ocorreu uma maior expressão tecidual de CR3 em animais assintomáticos do que os sintomáticos. Entretanto, isto foi associado a um menor parasitismo nesses animais. Podemos dizer, então que a resposta imune parece ser órgão-específica (compartimentalização da resposta imune), em que as células inflamatórias exercem um papel imune distinto em diferentes órgãos. Às vezes, podem atuar como fonte de perpetuação da infecção, ou às vezes, como células efetoras capazes de controlar a infecção por Leishmania. Seguindo nossos resultados, em que os animais sintomáticos apresentam maior expressão de CR3 e maior taxa de parasitismo no baço e linfonodos, podemos permite atribuir a essas células (monócitos-macrófagos) papel na manutenção da infecção.

Bordetella pertussis is an important human pathogen that causes an infection disease called whooping cough. This gram-negative bacterium produces an adenylate cyclase toxin (CyaA) that recognizes an integrin receptor CD11b/CD18 present on the surface of myeloid phagocytes and delivers an adenylate cyclase (AC) domain into the cell cytosol. This thesis deals with the endocytic machinery of CyaA and its potential use as a specific marker for endocytosis of the CD11b/CD18 receptor molecule. Detoxified mutant of CyaA, CyaA-AC- , that has the capacity to promote calcium influx as well the potassium efflux, was shown to trigger activation of the integrin receptor CD11b/CD18 followed with endocytic uptake by clathrin-dependent pathway. On the other side, the inactive mutant CyaA-KP-AC- that is unable to provoke integrin activation was endocytosed by clathrin-independent pathway. These results suggest that the various endocytic pathways of the CD11b/CD18 are determined by different conformational states of the receptor molecule.