Dissertations / Theses: 'Cellules de mammifères'

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Guerquin, Marie-Justine. "Détermination sexuelle des cellules germinales foetales chez les mammifères." Paris 7, 2009. http://www.theses.fr/2009PA077012.

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Abstract:

L'infertilité ou l'hypofertilité est un problème majeur de santé publique. La perturbation du développement des cellules germinales fœtales (CGF) est fréquemment suspectée dans ces pathologies. Pourtant peu d'informations concernant les acteurs impliqués dans la prolifération, la différenciation (méiose ou quiescence) et la mort des cellules germinales f��tales (CGF) sont connues. Le but de ce travail a été de mieux comprendre les mécanismes gouvernants la différenciation sexuelle germinale en s'intéressant notamment : i) au rôle de la dégradation de l'AR, seule molécule impliquée à ce jour, dans la différenciation mâle des cellules germinales, ii) au rôle de l'environnement somatique testiculaire dans la détermination mâle des cellules germinales et iii) aux mécanismes d'apoptose germinale très précoces différents suivant le sexe de la cellule germinale qui pouraient être considéré comme le premier signe de détermination sexuelle Nous avons démontré que la dégradation de l'AR dans le testicule fœtal est nécessaire à l'établissement de la quiescence des CGF mâles. De plus, nous avons mis en évidence que l'orientation des CGF murines dans le sens mâle ou femelle repose aussi sur un dialogue somatique/germinal, indépendant de l'AR. En parallèle, nous avons mis en évidence que CGF XX et XY activent des voies d'apoptoses différentes suivant leur sexe génétique suite à un stress génotoxique à un stade où les CG sont indifférenciées et considérées jusqu'alors comme identiques entre elles
The infertility or the hypofertility is a major problem of public health. The disturbance of the development of the fetal germ cells (FGC) is frequently suspected in these pathologies. Nevertheless not enough information concerning the actors involved in the proliferation, the differentiation (meiosis or « quiescence phase ») and the death of the fetal germ cells is known. The purpose of this work was to understand the ruling mechanisms of the sexual differentiation of the FGC by being interested in particular i) in the role of the degradation of the retinoic acid (RA), the only molecule implied this day in the male differentiation of germ cells, ii) in the role of the testicular somatic environment in the male determination of germ cells and iii) In the earlier mechanisms of the fetal germ cell death different according to the sex of the fetal germ cell which could be considered as the first sign of sexual determination. We demonstrated that the degradation of the RA in the fetal testis is necessary for the establishment of the quiescence of the fetal male GC. Furthermore, we put in evidence that the orientation of the murine FGC toward the male or female pathways relaying also on a somatic / germinal dialogue, independent from the RA In parallel, we put in evidence that XX and XY FGC activate different apoptotic pathways in function with their genetic sex further to a genotoxic stress at a stage where the CG is undifferentiated and considered as identical between them

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Hilgers, Geneviève. "Etude des mécanismes de type SOS chez les cellules de mammifères." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 1990. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/213168.

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Argüeso, Lleida Andrea. "Développement d’approches de modifications ciblées du méthylome dans les cellules mammifères." Thesis, Strasbourg, 2018. http://www.theses.fr/2018STRAJ068.

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Abstract:

La méthylation de l’ADN est une modification épigénétique sur les cytosines des dinucléotides CpG catalysée par les enzymes DNMT. Les cellules cancéreuses présentent des hyperméthylations aberrantes sur les promoteurs de gènes dits suppresseurs de tumeurs, ce qui contribue à leur répression transcriptionnelle et favorise la progression tumorale. De par sa nature réversible, la méthylation de l’ADN est une cible de choix pour des thérapies épigénétiques ; cependant, les inhibiteurs de DNMT ont une action de déméthylation globale du génome qui conduit à une forte toxicité. Mon travail a consisté à développer des stratégies de déméthylation ciblée sur des régions spécifiques du génome. Premièrement, j’ai validé une stratégie induisant une reprogrammation épigénétique spécifique et durable du gène suppresseur de tumeurs SERPINB5 dans des cellules de cancer du sein. Deuxièmement, j’ai optimisé des stratégies d'édition de l’épigénome comme outil en recherche fondamentale
DNA methylation takes place on cytosines of CpG dinucleotides in mammals and is catalysed by DNMT enzymes. Cancer cells are characterised by frequent promoter hypermethylation leading to transcriptional repression of tumor suppressor genes and favouring tumor progression. Because of its reversible nature, DNA methylation is a target of choice in epigenetic therapies. However, current DNMT inhibitors act in a global and non-specific manner, leading to side effects and toxicity in normal cells. During my thesis I have developed strategies to perform targeted demethylation in specific regions of the genome without affecting global methylation. First, I have validated a strategy inducing the specific and durable epigenetic reprogramming of the tumor suppressor gene SERPINB5 in a breast cancer cell line, which can pave the way to further biomedical research. Second, I have optimised epigenome editing strategies as a regular tool in basic research

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Brouillette, Suzanne. "Étude de la recombinaison intermoléculaire dans les cellules somatiques de mammifères." Thèse, Université de Sherbrooke, 1987. http://hdl.handle.net/11143/11745.

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Abstract:

La plupart des essais de recombinaison dans les cellules de mammifères sont basés sur la reconstitution d'un marqueur de sélection. Nous avons élaboré un essai intermoléculaire où les recombinants sont isolés sur la base de la présence de séquences provenant des deux molécules parentales. Nous étudions la recombinaison intermoléculaire entre un vecteur procaryotique et un vecteur eucaryotique dans des cellules de souris 3T6. Après cotransfection au DEAE-dextran, l'ADN extrachromosomique est extrait des cellules et les molécules plasmidiques sont isolées par transformation bactérienne. Les plasmides recombinants sont alors identifiés par hybridation in situ avec une sonde provenant de séquences exclusives au vecteur eucaryotique. Les deux vecteurs ont des séquences en commun. Ainsi, notre essai permet de comparer directement les événements de recombinaison intermoléculaire homologue et non-homologue en absence de sélection pour un mécanisme particulier de recombinaison. Nos résultats démontrent que la recombinaison intermoléculaire non-homologue est le mécanisme prépondérant dans les cellules même lorsque les partenaires partagent d'importantes étendues de séquences. De plus, nous démontrons que la fréquence relative des deux types d'événements de recombinaison est influencée par l'étendue de l'homologie entre les deux molécules, par l'état réplicatif du vecteur eucaryotique mais pas par la linéarisation comme telle. En effet, la linéarisation du vecteur procaryotique ou des deux molécules parentales à des sites analogues dans l'homologie n'a pas influencé la fréquence relative des deux mécanismes de recombinaison ni la fréquence de recombinaison totale. Par contre, le rapport des recombinaisons homologues versus non-homologues a augmenté significativement après linéarisation du vecteur eucaryotique ou des deux partenaires à des sites asymétriques dans l'homologie. Les recombinants intermoléculaires homologues isolés ne possèdent pas les deux jonctions générées lors d'un seul événement de recombinaison réciproque. Dans presque tous les cas, ils possèdent plutôt une jonction homologue et une jonction non-homologue. Nous proposons un modèle de recombinaison décrivant les mécanismes menant à leur formation. Selon notre modèle, la jonction homologue est générée par le chevauchement des extrémités homologues permettant l'appariement des séquences entre les deux partenaires. Une ligation bout-à-bout des extrémités libres non-homologues génère la jonction non-homologue.

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Rivard, Diane. "Étude de la recombinaison intramoléculaire dans les cellules somatiques de mammifères." Mémoire, Université de Sherbrooke, 1989. http://hdl.handle.net/11143/12049.

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Abstract:

Les lignées cellulaires de souris et de rat porteuses du génome intégré du virus du Py peuvent produire des formes virales libres. Ces formes virales intégrées s'excisent suite à une recombinaison intrachromosomique. La lignée CYP est l'une d'elles. La majorité des clones de cette lignée produisent des molécules libres qui correspondent au génome viral normal. Le clone C12/a1 fait pourtant exception en libérant outre du Py, une molécule de taille supérieure appelée RMI. Celle-ci consiste en une chimère composée de 1,03 copies du génome du Py et de 1,6 Kpb. de séquences cellulaires de souris adjacentes au site d'intégration. Le rapport RMI/Py dans le clone C12/a1 est de 20 pour 1. Nous avons élaboré un essai de recombinaison extrachromosomique, afin de recréer les événements qui génèrent ces molécules circulaires libres. Ces essais intramoléculaires ont été effectués avec des vecteurs porteurs de séquences d'ADN génomique du clone C12/a1, potentiellement impliquées dans les mécanismes d'excision qui engendrent les molécules libres trouvées dans le clone C12/a1. Ces vecteurs sont introduits dans des cellules de souris 3T6, par transfection au DEAE-dextran. Après des temps variables d'incubation, l'ADN extrachromosomique est extrait et les formes circulaires libres sont clonées dans des vecteurs phagique et plasmidique. Les recombinants sont identifiés par hybridation in situ à l'aide de sondes spécifiques aux séquences recherchées. La structure même des vecteurs permet une étude comparative des mécanismes de recombinaison homologue, illégitime et site-spécifique en système eucaryotique. Par ailleurs, la production extrachromosomique de la molécule RMI revêt une importance particulière: en effet, celle-ci est le premier exemple de molécule issue d'un événement de recombinaison site-spécifique à partir d'un génome intégré. Habituellement, les molécules libres s'excisent suite à une recombinaison homologue ou illégitime. Par rapport à un essai intrachromosomique, un essai extrachromosomique pouvant produire du RMI faciliterait l'étude du mécanisme de recombinaison site-spécifique. Les essais de recombinaison intramoléculaire, tels que développés, ont permis de produire les formes d'excision homologues et illégitimes. Toutefois, la production de RMI n'a pas été décelée par une telle approche. En fait, aucune molécule de type site-spécifique n'a été identifiée. De même, la recherche de recombinant comportant une jonction site-spécifique s'est avérée infructueuse. De plus, en utilisant un vecteur incapable de recombinaison homologue, mais dont les séquences impliquées dans la recombinaison site-spécifique sont intactes, aucun recombinant ayant une jonction site-spécifique n'est identifié. Par contre, des recombinants illégitimes sont produits. Une étude approfondie des recombinants Py a été effectuée afin de vérifier si la résolution de cette molécule se fait de façon homologue ou spécifique. Les résultats obtenus établissent que la résolution de Py se réalise aléatoirement au niveau des 1541 pb. d'homologie du vecteur, et n'est pas spécifique aux répétitions directes de 182 pb. du virus, inclusent dans cette homologie. En conclusion, l'essai de recombinaison extrachromosomique élaboré a permis de reproduire les mécanismes d'excision de type homologue et illégitime. Cependant, les molécules hypothésées comme étant produites par recombinaison site-spécifique n'ont pu être produites. Ceci pourrait être dû au fait que l'événement est rare, ou encore que notre essai ne permet pas la mise en évidence d'un tel mécanisme.

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Daclin, Marie. "Mécanismes de développement des cellules épendymaires : origine et lignage des cellules épendymaires dans le cerveau des mammifères." Thesis, Paris Sciences et Lettres (ComUE), 2018. http://www.theses.fr/2018PSLEE015.

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Abstract:

Les cellules épendymaires sont des cellules multiciliées qui tapissent les parois de toutes les cavités du cerveau. Une fois différenciées, ces cellules ne se divisent plus au cours de la vie. Le battement de ces multiples cils motiles joue un rôle important pour maintenir un flux constant de liquide cérébrospinal à travers toutes les cavités cérébrales. Les cellules épendymaires assurent également des fonctions critiques d’échanges moléculaires avec le liquide cérébrospinal. Dans son ensemble, l’implication des cellules épendymaires et de leurs cils motiles s’avère d’une importance majeure dans le maintien des circuits neuraux ainsi que dans le fonctionnement plus global du cerveau. Récemment, une nouvelle caractéristique des cellules épendymaires a été identifiée ; elles font partie d’un microenvironnement appelé une « niche » centrée autour de cellules souches neurales dans le cerveau du rongeur adulte. Ces cellules souches neurales adultes sont capables de produire de nouveaux neurones qui migreront vers le bulbe olfactif des rongeurs adultes. Concernant leur origine, il a été montré que les cellules épendymaires multiciliées dérivent des cellules souches neurales durant les stades tardifs embryonnaires. Ces mêmes cellules souches peuvent d’ailleurs donner naissance à la plupart des différents types de cellules du cerveau. Cependant, les mécanismes par lesquels les cellules souches décident de leur destin cellulaire restent largement méconnus. Dans ce projet, nous étudions quel type de division donne naissance à des cellules épendymaires et nous nous intéressons également au lignage épendymaire. Nos données suggèrent que les cellules épendymaires ne migrent pas après leur dernière division et qu’elles restent à proximité de l’endroit où elles ont été produites. Chose particulièrement intéressante, nous montrons que les cellules épendymaires peuvent être générées par division symétrique ou asymétrique. Nos résultats révèlent aussi que les cellules souches neurales embryonnaires se divisent de manière asymétrique pour donner naissance à la fois à une celluleépendymaire et à une cellule souche neurale adulte. Ces données viennent s’ajouter à la connaissance actuelle que nous avons du développement du cerveau. De plus, elles pourraient contribuer à ouvrir de nouvelles perspectives et stratégies thérapeutiques pour soigner les maladies neurodégénératives à beaucoup plus long terme
Ependymal cells are multiciliated cells lining the walls of all brain cavities. Once they are mature, they do not divide during life. Their motile ciliary beating endorses a crucial role in maintaining a proper flow of cerebrospinal fluid throughout all brain cavities. Ependymal cells also ensure critical molecular exchanges of the cerebrospinal fluid. On the whole, the involvement of ependymal cells and their multiple motile cilia in the maintenance of the neural circuits and more globally in the well-functioning of the entire brain have proven paramount. More recently, a new characteristic of ependymal cells has been brought to light. Namely, they are part of a microenvironment so called a “niche” surrounding adult neural stem cells in the adult rodent brain. Noteworthy, these adult neuralstem cells are capable of producing new neurons that will migrate to the olfactory bulb of rodents. In terms of their origin, it was shown that multiciliated ependymal cells derive from neural stem cells during late embryonic stages. Besides, the same stem cells can give rise to most cell types of the brain. However, little is known about how fate-decision is made in neural stem cells. In this project, we tackle more particularly how multiciliated ependymal cells arise from the neural stem cells. Most specifically, we address the type of celldivision and the ependymal cell lineage. We find that ependymal cells are not migrating subsequent to their last division, but rather stay where they were first produced. Most interestingly, they can be generated through both symmetric and asymmetric cell division. We also show that embryonic neural stem cells divide asymmetrically to give rise to both an ependymal cell and an adult stem cell. We are confident that these data bring major new insights in the current understanding of neural development. Additionally, these findingscould contribute in opening new therapeutic perspectives and strategies to cure neurodegenerative diseases in a much longer term

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Monnin, Julie. "Etude du potentiel progéniteur des cellules de Mûller dans la rétine de mammifères." Besançon, 2007. http://www.theses.fr/2007BESA2029.

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Abstract:

Chez les Mammifères, la rétine, comme les autres tissus du système nerveux central, est dépourvue d'un potentiel de régénération efficace. Depuis le début du XXlème siècle, une source de régénération de la rétine adulte a cependant pu être envisagée: les cellules de Müller, cellules gliales spécifiques de la rétine. En effet, ces cellules ont montré une capacité à se dédifférencier et à se redifférencier en cellules rétiniennes, nerveuses et gliales, dans de nombreux cas d'atteintes rétiniennes, chez les oiseaux et les rongeurs. Ce travail de doctorat fait suite à ces études en suivant deux axes de recherches. Le premier, basé sur l'étude in vivo des cellules de Müller en cas de maladie rétinienne neurodégénérative (souris rd10) a montré que la dégénérescence des bâtonnets chez la souris rd10 induisait une surexpression de la Destine (marqueur de progéniteur) par les cellules de Müller dans les premiers jours de dégénérescence et tout au long de la vie de l'animal. Les cellules de Müller adoptent donc des caractéristiques de progéniteur en cas d'atteinte chronique de la rétine. Le second, basé sur l'étude in vitro des propriétés progénitrices des cellules de Müller a permis de mettre au point un protocole d'obtention de neurosphères (amas de cellules à potentialité progénitrice) à partir de cellules de Müller de rat. Ces neurosphères sont caractérisées par une hétérogénéité, autant du point de vue de leur composition cellulaire que du potentiel de différenciation des cellules qui les constituent. Ce travail confirme donc le potentiel progéniteur des cellules de Müller de mammifère et laisse entrevoir leur implication dans un processus régénératif de la rétine
Ln higher Vertebrates, the retina, as part of the central nervous system, lacks of efficient regenerative capacities. Nevertheless, recent studies have highlighted that Müller cells, the specific glial cells of the retina, could be part of a regenerative process. Indeed, in birds and rodents with retinal injuries, these cells undergo dedifferentiation and redifferentiation in glial or neural retinal cell types. This work completes these observations through two approaches: the first is conducted in vivo by studying Müller cells in case of inherited retinal degeneration (rd 10 mice), and the second is performed in vitro and aims to specify the progenitor capacities of Müller cells and their redifferentiation potential. The results show that Müller cells respond to rod degeneration by an over expression of nestin (progenitor marker) that lasts aIl along the life-time of the animal (at least 1 year). It emphasizes that Müller cell acquire progenitor properties in case of retinal inherited degeneration. Moreover, the in vitro study has allowed the establishment of a neurosphere (progenitor cluster) production method from rat Müller cells. These neurospheres are heterogeneous, as weIl by their cell content as by the differentiation potential of their constituting cells. This work confirms the progenitor and neurogenic potentials of mammalian Müller cells, and gives the potential to consider their involvement in a regeneration process of the retina

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Gavin-Plagne, Lucie. "Cryoconservation de cellules spermatiques et de cellules souches pluripotentes de mammifères dans un milieu synthétique et chimiquement défini." Thesis, Lyon, 2018. http://www.theses.fr/2018LYSE1197/document.

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Abstract:

Cette thèse s’inscrit dans le cadre du projet CRB-Anim (Centre de Ressources Biologiques d’Animaux Domestiques) dont le but est de constituer une cryobanque nationale et d’améliorer les techniques de cryoconservation. Aujourd’hui, les ressources biologiques de type reproductif (embryons, sperme, ovocytes) et de type somatique (fibroblastes et cellules souches pluripotentes) sont conservées dans des milieux contenant des produits d’origine animale (POA). L’utilisation actuelle des POA (sérums, lait, jaune d’œuf) pose des problématiques sanitaires (risque de contamination) et scientifiques (manque de reproductibilité liée à la variabilité de composition des POA). Cette étude a pour objectif d’évaluer l’effet d’un milieu de préservation synthétique, chimiquement défini, breveté pour la congélation de cellules de sang de cordon (STEMALPHA.CRYO3) sur la cryoconservation de sperme ovin et bovin, et de cellules souches pluripotentes de lapin. Pour cela, une approche biologique (étude in vitro et in vivo sur le terrain), alliée à une approche physique (étude des cinétiques de refroidissement et caractérisation des propriétés thermodynamiques des milieux de congélation) ont été mis en place.Nos résultats montrent l’intérêt de l’utilisation du STEMALPHA.CRYO3, en tant que substituant aux sérums, dans les solutions de cryoconservation des cellules souches pluripotentes. Néanmoins, notre étude indique que ce produit n’est pas efficace pour protéger le sperme lors de la congélation. Cette thèse confirme l’intérêt de standardiser les procédures de cryoconservation afin d’assurer la qualité des ressources biologiques pour les cryobanques et les échanges internationaux
Nowadays, reproductive (embryos, sperm, oocytes) and somatic (fibroblasts and pluripotent stem cells) resources are cryopreserved in media containing animal-derived products (serum, egg yolk, milk). Using these products raises sanitary (risk of contamination) as well as scientific concerns (reproducibility limits due to the variability of their composition). This study aims to replace animal derived-product in assessing the effect of a synthetic and chemically defined medium, STEMALPHA.CRY03® (Stem Alpha, France), on the cryopreservation of ovine and bovine sperm, and on rabbit pluripotent stem cells. First, a physical approach permitted to study the cooling rates and the characterization of thermodynamic properties of the freezing media. The differential scanning calorimetry allowed us to define their phase transition temperatures (crystallization temperature, melting temperature and enthalpy variation of crystallization, proportional to the amount of crystallized ice). Second, a biological approach was used for the cryopreservation of bovine and ovine sperm, as well as rabbit pluripotent stem cells. Flow cytometry and computer- assisted sperm analyses showed that STEMALPHA.CRY03® impaired bovine sperm, compared to a medium containing animal derived-product. These last results were confirmed in ovine species. Nevertheless, artificial insemination by laparoscopy (n = 270 ewes) counteracts this impairment and allowed an average pregnancy rate of 70 %. Moreover, without any additive in the freezing medium, a similar pregnancy rate was obtained. The study of pluripotent gene expression profile, and analyses of viability and growth rates for the cryopreservation of rabbit pluripotent stem cells confirmed that synthetic media, STEMALPHA.CRY03® (with 4, 5 or 10 % of cryoprotectant) and CryoStor® CS10 (containing 10 % of cryoprotectant) were more efficient than serum-based media. We demonstrate that it is possible to cryopreserve sperm cells and pluripotent stem cells in synthetic and chemically defined media. 0ur results confirmed the interest of a standardized approach for cryopreservation procedures of genetic resources in mammals. This work meets the needs of cryobanking activities (quality policy) and of the regulation development within the framework of international trade

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Sonet, Jordane. "Synthèse et régulation des sélénoproteines mammifères." Thesis, Pau, 2017. http://www.theses.fr/2017PAUU3050.

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Abstract:

Le Sélénium (Se) est un oligo-élément essentiel qui est incorporé dans une famille indispensable de protéines, les sélénoprotéines, sous la forme d’un résidu acide aminé rare, la sélénocystéine. Dans les études épidémiologiques, il apparait clairement que des faibles niveaux de sélénium dans les fluides biologiques sont associés avec (i) une augmentation du risque de cancers (colon, prostate, poumon) et de maladies cardiovasculaires, (ii) une altération de la fonction immunitaire et (iii) finalement une réduction de l’espérance de vie. Dans le génome humain, vingt-cinq gènes de sélénoprotéine ont été identifiés. Ces gènes expriment, de par la complexité de la régulation du génome, de nombreuses isoformes de chacun des 25 gènes pour constituer le sélénoprotéome. Quand la fonction est connue, ces protéines participent à des processus essentiels de défense antioxydante, d’homéostasie redox et de signalisation redox. Ces enzymes sont finement régulées par l’apport en sélénium et d’autres stimuli cellulaires. Pour comprendre la fonction et la régulation du sélénoprotéome humain, qui est exprimé à un niveau trace, il s’avère critique de développer une stratégie innovante basée sur une approche multidisciplinaire de détection et quantification du sélénium par différents outils de spectrométrie de masse élémentaire (ICP MS) et moléculaire (ESI-MS/MS). Tout d’abord, le sélénium possède un profil isotopique bien particulier avec six isotopes stables (74Se, 76Se, 77Se, 78Se, 80Se and 82Se) qui sert de signature dans nos analyses en ICP-MS ou en ESI-MS/MS. En parallèle, l’utilisation de sélénium isotopiquement enrichi permet également des marquages cellulaires en multiplexing. Ainsi, en couplant des méthodes de séparation en phase liquide (HPLC) ou en gel d’électrophorèse (IEF ou SDS-PAGE échantilloné par ablation laser) avec l’ICP MS, nous avons mis au point plusieurs méthodes permettant la détection de plusieurs sélénoprotéines de manière simultanée dans différentes lignées cellulaires. De plus, un médicament sélénié sous forme de triglycéride obtenu via un mélange d’huile de tournesol et de sélénite a été testé comme source de sélénium non toxique pouvant stimuler la production de sélénoprotéines. Plusieurs lignées cellulaires humaines cancéreuses et non-cancéreuses ont été expérimentées avec succès permettant de valider cette nouvelle source de sélénium dans la synthèse des sélénoprotéines
Selenium (Se) is an essential trace element, which is incorporated as a rare aminoacid, selenocysteine, in twenty five selenoproteins, to constitute the selenoproteome. Selenoprotein family is one of the most important bioactive form of selenium in human health. Initially demonstrated in Kashin Beck and Keshan diseases, selenium deficiency is associated with several pathological conditions, including cancer, neurodegenerative diseases, immune and muscular disorders. Chronic selenium deficiency is hypothesized to decrease antioxidant defenses and redox regulatory pathways through a dysregulation of selenoprotein expression. We are interested in understanding the synthesis and regulation of human selenoproteins, which is critically dependent on the availability of adequate analytical methodology. To understand the function and regulation of human selenoproteome, which is expressed at a trace levels, it appears critical to develop innovative strategies based on a multidisciplinary approach to detect and quantify selenium by various elemental and molecular mass spectrometer tools. First, selenium has a particular isotopic profile with six stable isotope (74Se, 76Se, 77Se, 78Se, 80Se and 82Se) used as a signature in our analysis with ICP-MS or ESI-MS/MS. In parallel, the use of isotopically enriched selenium also allows cellular labelling and tracing of selenoproteins and other seleno-coupounds. By coupling liquid phase separation methods (HPLC) with specific mass spectrometry analytical tools, we have developed several methods for detecting several selenoproteins simultaneously in various human cell lines

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Hamdi, Imane. "Impact biologique de biomolécules extraites de microalgues sur des cellules mammifères en culture." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2017. http://www.theses.fr/2017SACLE019.

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Abstract:

Les microalgues forment un groupe varié de microorganismes océaniques ou d’eau douce. Il s’agit d’organismes microscopiques unicellulaires ou pluricellulaires, eucaryotes ou procaryotes. De part de leur diversité biologique, métabolique et reproductive, les microalgues offrent une série d’opportunités pour isoler des substances naturelles qui pourraient être originales pour l’alimentation, la santé ou des applications biotechnologiques.Dans ce contexte, les microalgues représentent un terrain original d’investigation pour la recherche et la découverte de biomolécules antiprolifératives et/ou anticancéreuses. Nos travaux ont ainsi eu pour objectif d’extraire et de purifier des molécules bioactives à partir de l’espèce microalgue N. gaditana qui pourraient agir sur le cytosquelette de cellules mammifères et plus particulièrement sur le réseau de microtubules.Notre démarche associant les procédés de chimie analytique et screening biologique a permis d’extraire et d’identifier trois familles de substances bioactives : des lipides (Triglycérides et Acides gras), des phtalates et des pigments. Les lipides et les pigments sont connus pour leur présence dans les microalgues, en revanche, cette étude est la première à mettre en évidence la présence de phtalates dans des microalgues notamment dans N. gaditana.Dans la suite des travaux, nous avons étudié l’effet d’un type de phtalate (Benzyl butyl phtalate : BBP) sur le réseau de microtubules de cellules HeLa. Ce composé s’est avéré provoquer une altération de microtubules avec un effet plus importante en présence de lipide (Acide linoléique) qui s’accompagne par la formation de gouttelettes lipidiques. Nous nous somme de même intéressé à l’impact d’un pigment (Phéophorbide A) sur la morphologie de cellules et sur le réseau de microtubules. Cette molécule semble avoir un effet direct ou indirect sur la polymérisation de la tubuline.Dans ce travail, nous avons enfin utilisé un procédé biotechnologique pour solubiliser le BBP ou le phéophorbide A qui sont très hydrophobes dans l’eau à l’aide d’un polymère pMeOx-p(THF)-pMeOx. Les résultats montrent un gain d’efficacité qui permet de réduire de manière significative les concentrations bioactives du BBP et du phéophorbide A.L’ensemble des résultats montrent que l’espèce N. gaditana contient des molécules bioactive d’intérêt pour lutter contre la division cellulaire et qui pourraient se révéler être des candidats médicament pour lutter contre le cancer
Microalgae form a group of diverse oceanic or clean water microorganisms. They are unicellular or multicellular, eukaryotic or prokaryotic microscopic organisms. Thanks to their diversity and speed reproduction, microalgae represent an untapped source that offers great opportunities for the isolation of original natural molécules with putative interest for food, health or biotechnological applications.In the recent years, microalgae have been the subject of intensive investigation notably for the discovery of anti-proliferative and candidate anticancer biomolecules. In this context, the present work aimed to extracting and purifying bioactive molecules from the microalgae N. gaditana acting on the cytoskeleton and more particularly on the microtubule network.A combined approach based on analytical chemistry and biological screening led us to extract and identify three families of substances: lipids (Triglycerides and fatty acids), pigments and phthalates. The first two families are known for their presence in microalgae. However, this study is the first one to show the presence of phthalates in microalgae, particularly in the N. gaditana specie.We then investigated the effect of a pure phthalate (Benzyl butyl phthalate: BBP) on the microtubules network of HeLa cells. This compound revealed to induce alterations of microtubules and that this effect became more important in the presence fatty acid (linoleic acid). This effect was associated with an induction of formation of lipid droplets. We also invastigated the impact of a type of pigment, Pheophorbide A, on cell morphology and on the microtubule network. This molecule appeared to have a direct or indirct effect on the polymerization of tubulin.Finally, we evaluated the interest of a biotechnological process based on the solubilization of hydrophobic phthalate and pheophorbide A in water using a synthetic triblock molecules studied in water by a synthetic triblock pMeOx-p(THF)-pMeOx polymer. This process revealed a significant gain of activity of these two molecules.Altogether, our results show that N. gaditana contains active biomolecules with putative interest to block cell division. They may be in the future a candidate molecules notably to fight cancer

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Teissier, Anne. "L'évolution du néocortex des Mammifères : gène Dbx1 et les cellules transitoires de la plaque corticale." Paris 6, 2010. http://www.theses.fr/2010PA066336.

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Abstract:

L’évolution du cerveau chez les mammifères à permis l’augmentation du nombre de neurones et la formation d’un néocortex en six couches. Au cours du développement du télencéphale de la souris, le facteur de transcription Dbx1 est exprimé aux stades précoces de la neurogénèse par des progéniteurs palliaux présents à la frontière entre le pallium et le sous-pallium (PSB). Nous avons caractérisé par traçage génétique une nouvelle population de cellules glutamatergiques dérivant des progéniteurs exprimant Dbx1 à la PSB et migrant tangentiellement dès E11. 5 pour peupler l’ensemble du pallium à E14. 5. Cette population se distribue de façon homogène dans la plaque corticale (PC) de l’ensemble du neocortex à la naissance avant de mourir massivement par apoptose durant la première semaine postnatale. L’ablation génétique de ces cellules induit la différenciation précoce des progéniteurs corticaux conduisant à une diminution du nombre total de neurones générés. La cinétique de ces défauts nous permet de suggérer que ces cellules transitoires envoient des signaux pendant leur migration pour maintenir les progéniteurs dans un état de prolifération. L’expression du gène Dbx1 à la PSB étant spécifique des mammifères, l’acquisition de cette nouvelle population pourrait donc être à l’origine de l’augmentation du nombre de neurones dans le cortex cérébral

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Maruotti, Julien. "Nouvelles voies d'établissement de cellules embryonnaires pluripotentes chez la souris, et applications à d'autres mammifères domestiques." AgroParisTech, 2010. http://www.theses.fr/2010AGPT0001.

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Majo, François. "Renouvellement de l'épithélium de la cornée chez les mammifères." Paris 7, 2005. http://www.theses.fr/2005PA077184.

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Bitbol, Michel. "Etude de l'orientation érythrocytaire, et des effets d'entrée d'une suspension sanguine dans un écoulement capillaire plan." Paris 7, 1985. http://www.theses.fr/1985PA077008.

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Gabriel, Bruno. "Electroperméabilisation de cellules de mammifères. Analyse des réponses cellulaires, en particulier du stress oxydatif." Toulouse 3, 1992. http://www.theses.fr/1992TOU30227.

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Abstract:

L'application d'impulsions electriques externes controlees sur une cellule induit une modification localisee de son potentiel electrique transmembranaire. Au-dela d'une valeur seuil, cette modulation s'accompagne de l'apparition d'un etat permeable non selectif, transitoire et reversible de la membrane plasmique. Les modifications membranaires induites par le traitement electrique ne peuvent pas exister independamment de la cellule elle-meme. Un aspect essentiel est la survie cellulaire apres electropulsation. Nos travaux montrent que la concentration externe en ions calcium est un facteur limitant pour la survie cellulaire. Il apparait que certains composes (serum, ions potassium. . . ) permettent d'augmenter la survie apres electropulsation lorsqu'ils sont presents dans le milieu. L'etat physiologique de la cellule est egalement a prendre en compte. Un tel parametrage physiologique d'un effet physique est generalement neglige. Nous avons montre que l'electropermeabilisation d'une cellule d'ovaire de hamster chinois declenche une reaction de stress caracterisee par la liberation d'especes oxygenees reactives. Cette flambee oxydative est determinante pour la survie cellulaire apres traitement electrique. Les donnees experimentales obtenues par chimioluminescence predisent une dependance directe entre l'intensite du stress et la surface membranaire structuralement affectee. Une verification experimentale de cette conclusion thermodynamique nous a ete fournie par une approche combinant fluorescence et imagerie. L'analyse de la reaction de photooxydation du 5-(n-hexadecanoyl)-amino-fluoresceine insere dans la membrane cellulaire montre que cette reaction est acceleree lorsque la cellule est electropulsee. Une etude au niveau de la cellule isolee montre qu'il y a compartimentation topologique et temporelle de la reaction au niveau de la membrane electropermeabilisee, en domaines reactionnels independants, caracterises par une localisation et une reactivite differentes

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Legendre, Jean-Yves. "Étude du transfert de gènes chez les cellules mammifères par des techniques non-virales." Paris 11, 1993. http://www.theses.fr/1993PA114806.

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Lirsac, Pierre-Noël. "L'immobilisation de cellules de mammifères en gel d'alginate : aspects techniques et cellulaires : perspectives biotechnologiques." Compiègne, 1990. http://www.theses.fr/1990COMPD252.

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Abstract:

L'immobilisation de cellules de mammifères par inclusion dans un gel d'alginate de calcium est une technique rendue délicate par les multiples paramètres pouvant intervenir. L'influence de quelques données, teneur en alginate, nature et concentration du cation de gélification, composition du milieu d'inclusion, est détaillée. Il s'avère cependant que la valeur de certains paramètres est étroitement liée au type cellulaire immobilisé. Les modèles cellulaires testés sont des cellules de neuroblastomes murin N18, des chondrocytes articulaires de lapin et des macrophages alvéolaires de babouin. Le procédé d'immobilisation décrit permet d'obtenir des macrobilles d'alginate de calcium. Mécaniquement résistantes, elles peuvent contenir une très grande quantité de cellules (jusqu'a 40 10 6 cellules/ml de gel), dont l'état de différenciation semble contrôlable par les conditions de milieu extérieur. L'immobilisation confère aux cellules une longévité proche de celle qu'elles ont en culture adhérente dans les mêmes conditions. Cette longévité est même doublée dans le cas des macrophages alvéolaires. Les possibilités métaboliques de dissolution des particules phagocytées par des macrophages alvéolaires sont utilisées dans un contexte toxicologique de protection des travailleurs. Des macrophages alvéolaires sont immobilisés après avoir phagocyté des particules. Grâce aux activités enzymatiques et à l'acidité des phagolysosomes, les particules sont partiellement dissoutes et la fraction dissoute est quantifiée dans le milieu d'incubation des billes. Les macrophages alvéolaires immobilisés constituent ainsi un modèle biologique performant d'étude in vitro de la dissolution des particules inhalées, même très insolubles.

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Malcles, Marie-Hélène. "Aspects de la régulation de la réplication des papillomavirus dans les cellules de mammifères." Montpellier 2, 2002. http://www.theses.fr/2002MON20075.

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Le, Rolle Morgane. "Voie de signalisation WNT/ β-catenin et différenciation des cellules germinales chez les mammifères." Electronic Thesis or Diss., Université Côte d'Azur (ComUE), 2019. http://theses.univ-cotedazur.fr/2019AZUR6014.

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Abstract:

La préservation de la fertilité suscite une inquiétude croissante. Depuis les dernières décennies, la fertilité a diminué dans les pays industrialisés. En conséquence, un nombre croissant de couples a recours à la procréation médicalement assistée, sans grand succès par manque de connaissances sur les cellules reproductrices (cellules germinales). L’étude de ces cellules constitue un socle essentiel pour des applications médicales, mais jusqu’à présent, les mécanismes moléculaires qui régissent leur développement restent peu compris en raison de l’absence de modèles d'étude physiologiques.Les cellules germinales sont produites au cours du développement embryonnaire, se multiplient pour constituer un stock suffisant, se différencient dans la gonade en fonction du sexe de l'embryon, puis entrent en méiose pour devenir des gamètes fertiles, les ovocytes (femelles) et les spermatozoïdes (mâles). Mon laboratoire d’accueil a démontré que la voie de signalisation canonique WNT/β-catenin est nécessaire au développement de l'ovaire in vivo et qu'en absence d'activation de cette voie dans l'ovaire embryonnaire de souris, la prolifération et la différenciation des cellules germinales primordiales sont perturbées.Tirant partie de notre expertise dans l'analyse de modèles de différenciation gonadique, nous nous sommes intéressés au mécanisme d'action de la voie WNT/β-catenin dans la différenciation des cellules germinales, en analysant au moyen de modèles murins de perte et gain de fonction de β-catenin les conséquences de la modification de son expression dans les cellules de la gonade.Dans un premier temps, nous avons démontré que le maintien, après la naissance, de l'activité de la voie WNT/β-catenin dans les cellules souches spermatogoniales du testicule de souris stimule leur prolifération de manière massive, provoquant un défaut de différenciation en spermatozoïdes. Dans un deuxième temps, nous avons montré que l'ablation génétique du gène Ctnnb1 (codant pour β-catenin) dans les cellules germinales primordiales in vivo entraîne une perte précoce de leur pluripotence et une différenciation prématurée en ovogonies. Nous avons démontré, pour la première fois in vivo, que tandis que le développement ovarien progresse, β-catenin forme des complexes protéiques avec POU5F1 et CDH1 qui transitent du noyau des cellules germinales à leur membrane, permettant ainsi leur sortie de pluripotence et leur différenciation. Nos résultats indiquent que l'E3-ubiquitine ligase ZNRF3 régule la pluripotence des cellules germinales par une boucle de rétroaction négative.Ces données indiquent que dans l'ovaire comme dans le testicule, une régulation fine de l'activité de la voie de signalisation WNT/β-catenin est requise pour déterminer la fenêtre de différenciation des cellules germinales primordiales in vivo. De plus, la voie WNT/β-catenin contrôle la sortie de pluripotence des cellules germinales primordiales via une activité non-transcriptionnelle de β-catenin, permettant à terme de coordonner le développement des cellules somatiques et germinales de la gonade. Dans les années à venir, nos travaux pourraient aider à la génération des gamètes in vitro
Since the last decennials, fertility is decreasing in industrial countries, and nowadays, infertility reaches a prevalence of 9 to 18% of the general population, with a significant proportion of cases being due to defective gametogenesis. Accordingly, fertility preservation raises a growing concern. Nowadays, a growing number of couples undergo Assisted Reproductive Technology with little success due to the lack of knowledge on mechanisms orchestrating germ cell differentiation. Little is known about how primordial germ cells become gametogenesis-competent cells (gonocytes), because of the lack of suitable physiological models. Primordial germ cells give rise to the next generation by differentiating from pluripotent progenitors into highly specialized cells, the gametes, which in turn generate a totipotent zygote after fertilization. After specification in the early embryo, primordial germ cells colonize the gonad, lose pluripotency and gain their capacity for irreversible sexual differentiation. Gonocytes then become either female (oogonia) or male (spermatogonia), and eventually progress into meiotic divisions. So far, the mechanisms of germ cell changes in potency remain largely elusive.My host laboratory has demonstrated that activation of the canonical WNT/β-catenin signalling is required for ovarian development. Thus, absence of WNT/β-catenin activation eventually triggers defects in germ cell proliferation and sexual differentiation. However, genetic models of cell-specific ablation of Ctnnb1 (encoding β-catenin) were still missing to assess the contribution of WNT/β-catenin in the germ cells. We decided to analyse the role of this signalling pathway by generating specific mouse models for β-catenin loss or gain of function and by investigating the consequences of WNT/β-catenin deregulation in either the somatic or the germ cells of the developing gonad. We first demonstrated that WNT/β-catenin regulates spermatogonial stem cell proliferation and differentiation in the post-natal testis, demonstrating that this signalling activity must be finely tuned over time to ensure spermatogenesis.Secondly, we showed that genetic elimination of Ctnnb1 in mouse primordial germ cells in vivo leads to a precocious loss of pluripotency and to premature germ cell differentiation into gonocytes. We demonstrated, for the first time in vivo, that while ovarian development is getting forward, β-catenin forms proteic complexes containing POU5F1 and CDH1 that transit from the nucleus of the germ cells to their membrane, thus allowing primordial germ cells to exit pluripotency and eventually differentiate. Our results also reveal that the ZNRF3 E3-ubiquitine ligase negatively regulates germ cell exit from pluripotency through a negative feedback loop.Collectively, our results show that the WNT/β-catenin signalling is necessary for determining the proper window of differentiation in both somatic and germ cells. Moreover, WNT/β-catenin controls the germ cell exit from pluripotency through β-catenin non-transcriptional activity, eventually coordinating the development of the different cell types of the fetal ovary. In the future, our results might help to recapitulate gametogenesis in vitro

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Pircher, Renée. "Étude des facteurs de croissance transformants (TGFs) produits par les cellules aviaires et de mammifères." Paris 11, 1985. http://www.theses.fr/1985PA112214.

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Abstract:

Cette thèse présente les résultats de l’étude des Transforming Growth Factors (TGFs), dans le milieu conditionné par des fibroblastes aviaires et de mammifères normaux ou transformés par des rétrovirus. Cette étude a conduit à la mise en évidence d’une forme non encore décrite de TGFs, à savoir une forme inactive in vitro sur des cellules indicatrices NRK-49F et devenant active après acidification, dans le milieu de culture de fibroblastes normaux ou transformés. Deux des paramètres de la transformation cellulaire, à savoir la capacité des cellules à croître en milieu gélifié par l’agar et la tumorigénicité ne sont pas liés systématiquement à une modification de la production de TGF. La forme latente de l’activité TGF peut être activée par d’autres traitements que l’acidification et une forme équivalente semble être présente dans les embryons entiers de poule et dans les plaquettes sanguines humaines.

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Marangoni, Elisabetta. "La protéine KU86 : une cible pour la modulation de la radiosensibilité des cellules de mammifères." Paris 11, 2000. http://www.theses.fr/2000PA11T069.

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Abstract:

Les cassures double brin de - l'ADN (CDB) sont considérées comme les lésions majeures responsables de la mort cellulaire inquite par les radiations ionisantes. Dans les cellules de mammifères elles sont réparées par un mécanisme de ligation qui implique différents complexes de protéines, dont le complexe DNA-PK (DNA-dependent Protein Kinase). Ce complexe DNA-PK est composé d'un hétérodimère à fonction régulatrice, Ku70/Ku86, impliqué dans la détection et la liaison aux CDB, et d'une large sous-unité catalytique (DNA PKcs). Le but de notre travail a été de cibler la protéine Ku86 dans des cellules de rongeurs et humaines radiorésistantes, afin de diminuer sa fonction (détection des CDB) et donc d'augmenter la radiosensibilité de ces cellules. Nous avons utilisé des approches de dominance négative et d'antisens dans les différents modèles cellulaires. Les résultats obtenus dans les fibroblastes nous ont permis de conclure que la protéine Ku86 est nécessaire pour l'activation du complexe DNA-PK et que son activation conduit à une déficience importante dans la réparation des CDB et à une augmentation significative de la radiosensibilité. L'utilisation d'oligonucléotides antisens a mis en évidence des troubles sévères dans la prolifération cellulaire quand les niveaux de la protéine Ku86 sont fortement diminués, ce qui pourrait suggérer un nouveau rôle de l'hétérodimère Ku70/Ku86. Les résultats obtenus dans les cellules tumorales humaines ont été variables selon l'approche utilisée et semblent confirmer l'importance du complexe DNA-PK dans la réponse aux radiations ionisantes, en suggérant toutefois que d'autres mécanismes de réparation des CDB pourraient compenser l'absence de Ku86 et contribuer au phénotype radiorésistant de certaines lignées tumorales.

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Boubakour-Azzouz, Imenne. "Réparation des cassures double brin de l'ADN et stabilité génomique dans les cellules de mammifères." Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077221.

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Abstract:

La réparation des cassures double brin de l'ADN (CDBs) est critique pour la survie cellulaire. Les deux voies principales qui assurent la réparation des CDBs chez les eucaryotes, le end-joining (EJ) et, à un moindre degré, la recombinaison homologue (RH), peuvent être mutagènes. Le but de mon travail de thèse a été de déterminer si certaines conditions de stress peuvent affecter l'équilibre efficacité versus fidélité de la réparation des cellules souches embryonnaires (ES) murines. Dans une première étude, nous avons examiné si deux CDBs colinéaires induites par la méganucléase I-Scel, à 9 kpb de distance, dans des régions non-homologues, peuvent provoquer des réarrangements génomiques par EJ. Parallèlement, nous avons développé un système d'étude de réparation des CDBs à l'aide de substrats extra-chromosomiques. Les CDBs sont mimées par des plasmides linéarisés in vitro avant leur transfection dans les cellules ES, plasmides qui peuvent être réparés par EJ ou par RH avec un plasmide portant une séquence homologue. Nous avons analysé les effets d'un stress (privation de sérum) qui bloque la prolifération des cellules ES, sur la contribution de chaque mécanisme de réparation, EJ et RH, et la « fidélité » de réparation de chacun. Nos systèmes ne nous ont pas permis de mesurer de façon précise les fréquences de RH et de EJ. Ils nous ont toutefois permis de montrer que dans des situations de stress qui conduisent à l'apparition de CDBs, la fidélité de la réparation peut ne pas être affectée
Repair of DNA double-strand breaks (DSBs) is critical for cell survival. However, both DSBs repair mechanisms, end-joining (EJ) and, to a lesser extent, homologous recombination (HR), can be mutagenic. The aim of my thesis work was to determine whether specific stress conditions can affect the balance between efficiency and fidelity of DSBs repair in murine embryonic stem cells (ES). In a fîrst study, we investigated whether two colinear DSBs induced by the méganuclease l-Scel 9 kbp apart, in two non-homologous regions, can trigger genomic rearrangements by end-joining. In a second study, we have developed a strategy based on plasmids recombination. Linear plasmids, used to mimic DSBs, are transfected in ES cells where they are repaired by EJ or HR with a plasmid sharing a homologous region. We analysed the effects of a growth-limiting stress (serum starvation) on the respective contributions of NHEJ and HR, and their fidelity. The Systems did not allow us to precisely determine the NHEJ and HR frequencies. However, our studies showed that in stress conditions induced by multiple DSBs, repair fidelity can be increased

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Yahia, Yousra. "Caractérisation de mutants du domaine carboxy-terminal de l’ARN polymerase II dans des cellules mammifères." Thesis, Montpellier, 2017. http://www.theses.fr/2017MONTT154.

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Abstract:

La plus grosse sous-unité (Rpb1) de l'ARN polymérase II est caractérisée par une structure unique et flexible au niveau du domaine C-terminal (CTD) qui consiste en une répétition en tandem d'une séquence consensus heptapeptidique Y1-S2-P3-T4-S5-P6-S7. Le CTD est essentiel pour pour la viabilité cellulaire et est requis pour d'importantes activités associées avec la transcription par l'ARN Pol II, dont la régulation de la synthèse de l'ARN et des événements de maturation co-transcriptionnels (mise en place de la coiffe 5', épissage, terminaison en 3'... etc). Forts d'un système permettant l'expression conditionnelle de mutants du CTD, nous disséquons le CTD afin de comprendre l'implication de résidus/répétitions spécifiques sur la transcription dans des cellules mammifères. Nos résultats montrent que le CTD est crucial pour le contrôle de la transcription pervasive et indiquent une implication inédite des complexes Mediateur et Integrateur dans le processus de terminaison de la transcription
The largest subunit (Rpb1) of RNA polymerase II has a unique and flexible structure at its C-terminal domain (CTD) that consists of tandem repeats with the consensus heptad sequence Y1-S2-P3-T4-S5-P6-S7. The CTD is essential for cellular viability and is required for important activities associated with RNA pol II transcription, including the regulation of RNA synthesis and co-transcriptional processing events (5’ capping, splicing, 3’ termination…etc). Using a conditional CTD mutant expression system, we dissect the importance of specific residues/repeats on transcription in mammalian cells. Our results indicate the importance of the CTD in the control of pervasive transcription and hints to novel roles of the Mediator and Integrator complexes in transcription termination processes

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Costa, Annie. "Intérêt de l'analyse quantitative de la queuosine et de ses dérives par CLHP dans la détection et l'exploration in vitro et in vivo d'une hypomodification des ARNt porteurs de ces nucléosides hypermodifiés." Dijon, 2002. http://www.theses.fr/2002DIJOMU05.

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Abstract:

Chez les eucaryotes supérieurs, on recense quatre types d'ARNt modifiés par la queuosine (Q) ou ses dérivés et qui sont désignés ARNt-Q : les ARNt asn et ARNt his portant la Q et les ARNt asp et ARNt tyr portant respectivement la mannosyl-Q et la galactosyl-Q. Selon la nature, l'âge et l'état normal ou néoplastique des tissus étudiés, les ARNt-Q ont été décrits comme totalement ou partiellement modifiés. Afin de déterminer quel(s) ARNt-Q étai(ent) spécifiquement affecté(s) par une variation de modification, nous avons développé un protocole d'ananlyse par CLHP des nucléosides d'ARNt totaux qui permet de doser les trois queuosines et les quatre ARNt-Q correspondants. Ce protocole a été appliqué au dosage des ARNt-Q modifiés présents dans le foie de différents animaux, dans des cellules normales ou néoplastiques de foie de rat en culture, ainsi que dans des tumeurs humaines du tractus génital féminin. Nos résultats montrent que les ARNt-Q des foies de mammifères adultes sont totalement modifiés en queuosines. Par contre, une diminution du taux de modification des ARNt-Q est observée dans les foies de rats nouveau-nés et dans les foies de poulets élevés en batterie. Une hypomodification importante des ARNt-Q est également constatée dans des cellules d'hépatome de rat. Les tumeurs humaines du tractus génital féminin présentent, elles aussi, une diminution du contenu en queuosines de leur ARNt. Dans toutes ces études, nous avons pu démontrer que les ARNt asp sont toujours les moins affectés par l'hypomodification. Ces observations montrent que l'hypomodification des ARNt-Q est la conséquence, soit d'une diminution de l'apport en queuine, soit d'un dysfonctionnement métabolique spécifique aux cellules tumorales. Les mécanismes impliqués dans l'hypomodification des ARNt-Q de tissus tumoraux et dans cette sorte de "protection" constante des ARNt asp modifiés restent à élucider.

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Brette, Fabien. "Couplage excitation-contraction des cardiomyocytes isolés de mammifères : effet du gonflement cellulaire et étude du rétrocontrôle du courant calcique dans les microdomaines." Tours, 2000. http://www.theses.fr/2000TOUR4021.

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Abstract:

Le travail de recherche effectué au cours de cette thèse a pour objet d'étudier le couplage excitation-contraction dans les cardiomyocytes isolés de mammifères. Nous avons mesuré le courant calcique de type L dans des myocytes ventriculaires de cobaye isolés enzymatiquement grâce à la technique du patch clamp en configuration cellule entière. 80% des cellules présentent un courant calcique avec une inactivation multiphasique. Nous avons montré que ce décours multiphasique était du à la libération de calcium par le réticulum sarcoplasmique. Nous avons conclu qu'un lien fonctionnel dans les cellules ventriculaires de cobaye existe entre le DHPr et le RyR et celui-ci est dû à la présence de microdomaine dans les « fuzzy space » (espace flou). Une relation entre le décours multiphasique et la facilitation dépendante du potentiel du courant calcique a été observée. L'état de phosphorylation des cellules est impliqué et le le Cs + pourrait induire une activation de la PKA. D'autre part, nous avons mené une étude complète sur l'effet du gonflement cellulaire sur les différentes phases du couplage excitation-contraction. Nous avons utilisé la technique de patch clamp, la fluorimétrie pour mesurer le transitoire calcique, un détecteur de bord pour mesurer la contraction, un microscope confocale pour visualiser la membrane plasmique et enfin des techniques biochimiques pour vérifier l'état de phosphorylation de protéines. Un effet biphasique a été trouvé. Au bout d'une minute d'exposition à une solution hypoosmotique, une augmentation de la durée du potentiel d'action, de la contraction, du transitoire calcique a été observée. Une exposition plus longue (10 min) fait diminuer tous ces paramètres. L'amplitude du courant calcique diminue dès le passage de la solution hypoosmotique. D'autre part, le système de tubule T visualisé en microscopie confocale n'est pas altéré par le choc hypoosmotique et l'état de phosphorylation des phospholambanes n'est pas modifié.

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Ribet, Carole. "Analyse cinétique de l'interférence par l'ARN dans les compartiments nucléaire et cytoplasmique des cellules de mammifères." Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2005. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00084397.

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Abstract:

L'interférence par l'ARN (ARNi) désigne la dégradation spécifique de séquence des ARN induite par des ARN double brin. Dans les cellules de mammifères, l'ARNi peut être induite par des petits ARN interférants (siARN). L'ARNi est effectuée par le complexe RISC (RNA induced silencing complex) contenant, entre autre, la séquence d'ARN guide, qui permet la reconnaissance de la cible et la nucléase Ago2, responsable de son clivage.
Ces travaux ont porté sur l'analyse cinétique de la dégradation des ARNm induite par les siARN dans des cellules de mammifères. Nous avons mesuré les vitesses de dégradation des ARNm de β-globine et de lymphotoxine-α sous interférence et montré, d'une part, que les différences d'efficacité des siARN sont liées à des différences de vitesses de dégradation et, d'autre part, que ces vitesses s'accélèrent entre 16h et 24h après la transfection pour deux siARN inhibant 80 à 90% des messagers. Nous avons aussi observé qu'un même siARN induit des inhibitions différentes pour les deux messagers de la lymphotoxine-α, ce qui nous a amené à proposer l'existence d'une interaction entre la traduction et l'interférence par l'ARN.
Nous avons analysé l'impact de l'interférence sur le métabolisme nucléaire des ARNm. Nous avons ainsi démontré que les siARN induisent la dégradation des ARN nucléaires avec une efficacité qui dépend d'une compétition cinétique entre l'interférence et les réactions de maturation et d'export qui affectent le transcrit ciblé. De plus, nous avons observé que la dégradation d'un ARN messager pouvait s'accompagner d'une accumulation de ses précurseurs, probablement par une augmentation de synthèse. Ainsi, l'interférence permet-elle de mettre en évidence de nouvelles régulations du métabolisme nucléaire des ARN.

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Debin, Arnaud. "Formation et stabilité des triples hélices purines : études in vitro et dans les cellules de mammifères." Paris 11, 2000. http://www.theses.fr/2000PA11T013.

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Abstract:

Les oligonucléotides qui forment des triples hélices (OFT) sont de courts fragments d'acides nucléiques capables de reconnaître sélectivement des séquences d 'ADN double brins. Dans ce travail, nous avons étudié la formation et la stabilité de triples hélices obtenues à l'aide d'oligonucléotides composés de purines, les OFT (G,A). Nous avons sélectionné in vitro les séquences d'ADN double brin capable de former des triples hélices stables à 20°C et 50°C dans des conditions ioniques déterminées. Cette sélection a été obtenue par une double approche aptamère dans laquelle les séquences de départ des oligonucléotides et les duplex cibles d 'ADN sont aléatoires. Les séquences sélectionnées obéissent à 2 règles : - elles possèdent toutes un grand pourcentage de guanine: elles sont dites riches en G - pour un nombre de G donné, la stabilité du triplex résultant est plus grande si les guanines se suivent en bloc non interrompu par des adénines. Cette étude démontre l 'importance cruciale de la composition relative en guanine de l'OFT sur la stabilité de la triple hélice. Elle conduit à la notion de triples hélices riches en G, qui englobe les triples hélices purines G,A mais aussi les triples hélices mixtes G,T. L'étude de la formation et de la stabilité des triples hélices riches en guanine in vitro, dans des conditions ioniques mimant les conditions ioniques intracellulaires, a confirmé la grande sensibilité des triples hélices purines aux concentrations en magnésium mais aussi au potassium, notamment sur la cinétique de formation, limitant potentiellement leur utilisation en culture cellulaire. Afin de surmonter l'effet inhibiteur du potassium, un nouveau concept d'oligonucléotide OFT, que nous appelons le concept " oligonucléotide ZIPPER", a été développé. Nous avons ensuite étudié la stabilité et la formation des triples hélices purines ex vivo, grâce à l'utilisation d'une technique d 'empreinte au Diméthylsulfate (DMS), permettant la visualisation de l'empreinte de 1'oligonucléotide sur l'ADN directement dans les cellules. Ceci a permis de démontrer la stabilité des triples hélices dans les cellules de mammifères lorsqu'elles sont introduites artificiellement dans les cellules après préformation in vitro. En revanche, nous n’avons pu détecter par cette méthode la formation des triples hélices directement dans les cellules
Triplex-Forming Oligonucleotides (TFOs) are short nucleic acid fragments able to recognize selectively double-stranded DNA sequences. In this thesis, we have studied the formation and stability of triples helices using purine TFOs (composed of Guanines and Adenines). Firstly, we have selected double-stranded DNA sequences capable offorming stable triplexes at 20 or 5. Q. °C with corresponding 13mer purine oligonucleotides. This selection was obtained by a double aptamer approach where both the starting sequences of the oligonucleotides and the target DNA duplex were random. The results of selection were confirmed by a cold exchange method and the influence ofthe position of a 'mismatch' on the stability ofthe triplex was documented in several cases. The selected sequences obey two rules: (i) they have a high G content; (ii) for a given G content the stability of the resulting triplex is higher if the G residues lie in stretches. Secondly, triplex formation was studied in conditions mimicking potassium concentrations and temperatures in cells. In presence of 1OmM Mgcl2, KCl concentrations up to 150 mM significantly lowered both efficiency (triplex: initial duplex) and rate constants of triplex formation. For 20 mer TFO, no dissociation of triplex was observed during 24 hours either in the absence of monovalent cations or in the presence of 150 mM KCl. In this case, the negative effect of the KCl is probably due to the self-association of the oligonucleotide in competitive structures. This negative effect may be overcome by the prior formation of a short duplex either on the 3 '-or 5'- end of the 20mer TFO. We refer to these partial duplexes as 'zipper' TFOs. It was demonstrated that a 'zipper' TFO could forma triplex over the full lengh of the target, thus unzipping the short complementary strand. Thirdly, triplex stability and formation was studied in live mammalian cells. Ex vivo DMS footprint analysis after electroporation of the pre-formed into the cell have shown the presence of the triple helix inside the cells. However we were unable to show triplex formation inside cells using various methods of oligonucleotide delivery, and using various target sequences. Our results show that neither (i) chromatinization of the DNA target, (ii) intracellular K+ concentration nor (iii) cytoplasmic versus nuclear separation of the TFO and DNA target are responsible for the intracellular arrest of triplex formation. We suggest the existence of a cellular mechanism, based on a compartmentalization of TFOs and/or TFO trapping, which separates oligonucleotides from the DNA target. Further work is needed to find oligonucleotide derivatives and means for their delivery to overcome the problem of triplex formation inside cells

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Ribet, Carole. "Analyse cinétique de l'interférence par l'ARN dans les compartiments nucléaire et cytoplasmique des cellules de mammifères." Paris 11, 2005. http://www.theses.fr/2005PA11T069.

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Lepetit-Stoffaes, Jean-Pascal. "Étude comparative de combinaisons de peptides pour la livraison de protéines dans les cellules de mammifères." Doctoral thesis, Université Laval, 2018. http://hdl.handle.net/20.500.11794/34493.

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Abstract:

Encore aujourd'hui, l’expression de protéines recombinantes dans les cellules de mammifères se fait principalement par transfection d’acides nucléiques codant pour cette protéine. Or, une alternative, la livraison directe de protéines, suscite un intérêt grandissant depuis près de trente ans, avec la découverte de séquences peptidiques ayant la capacité de pénétrer les cellules et de déstabiliser les membranes. Ainsi, des stratégies de livraison de protéines employant ces peptides se sont détachées des systèmes synthétiques tels que les polymères et les lipides cationiques. Parmi ces peptides, on retrouve notamment, d’une part, les peptides de pénétration cellulaire (Cell Penetrating Peptides - CPP) qui sont capables d’amener une protéine liée dans la cellule par endocytose, mais peinent à franchir la barrière endosomale ; d'autre part, des peptides de fuite des endosomes (Endosomal Leakage Domains - ELD), permettant de déjouer ce goulot d’étranglement de la livraison. Cette thèse s'intéresse principalement à l’étude de la livraison de protéines via la combinaison de CPP et d’ELD. Une avenue d'intérêt qui a été identifiée consiste à co-incuber les cellules avec différentes combinaisons d'un mélange de ces peptides avec la protéine à livrer, sans liaison covalente. Ainsi, les peptides CPP-ELDs ont permis de livrer la protéine fluorescente GFP seule, mais aussi la GFP fusionnée à un domaine d’importation nucléaire qui a pu rejoindre le noyau de divers types cellulaires. En particulier, le peptide 6His-CM18-PTD4 a été particulièrement investigué pour la livraison de diverses protéines d’intérêt. 6His-CM18-PTD4 a permis la livraison du facteur de transcription HoxB4 ainsi que des nucléases Cas9 et Cpf1 pour réaliser leur fonction d’édition génomique. Les propriétés et mécanismes de livraison des CPP-ELDs ont été étudiés. Ainsi, des mécanismes d’endocytose et de translocation directe vers le cytoplasme ont été identifiés et étudiés. La répartition entre ces voies d’entrée cellulaire peut varier suivant la nature du peptide CPP-ELD ou de divers facteurs de livraison tels que sa concentration. Globalement, les mécanismes de livraison ont été étudiés par l’emploi de la protéine GFP et d’autres sondes fluorescentes (calcéine, FITC-dextranes). Les CPP-ELDs sont capables de livrer des molécules de petite taille (600 Da) jusqu’à des poids moléculaires importants (250 kDa). Cette capacité à livrer de grandes protéines a été validée par l’entrée cellulaire des nucléases Cas9 et Cpf1, ainsi que d’anticorps. L’analyse de la composition ainsi que des structures secondaires supposées a permis d’identifier des critères nécessaires pour l’efficacité de livraison dans les cellules de mammifères pour des applications de recherche et thérapeutiques.
The expression of proteins in mammalian cells is still today mostly done by transfection of nucleic acids coding for the protein. An alternative, the direct delivery of proteins, has roused a growing interest for the past thirty years, since the discovery of peptide sequences with the capacity to penetrate the cells and destabilize the membranes. Thereby, strategies of protein delivery associating these peptides to the cargo protein differentiate from synthetic systems like cationic polymers and lipids. Among these peptides are found Cell Penetrating Peptides (CPP), which are able to bring a linked protein to the cell by endocytosis, but lack to cross the endosomal barrier. We also find peptides, which permit the endosomal escape of a cargo, the Endosomal Leakage Domains (ELD), in order to evade this bottleneck. This thesis is interested in the study of protein delivery, by means of the combination of CPP and ELD. An identified way of interest consists in co-incubating the mammalian cells with different combinations of a mix of these peptides with the protein to be delivered, without covalent link. Thereby, the CPP-ELDs permitted the delivery of the GFP fluorescent protein alone, as well as the GFP in fusion with a nuclear localization domain, which was found in the nuclei of several cellular types. In particular, the 6His-CM18-PTD4 peptide has been notably investigated for the delivery of various proteins. It enabled the delivery of the HoxB4 transcription factor, as well as the Cas9 and Cpf1 nucleases to realize their genome editing function. The properties and mechanisms of CPP-ELDs have been studied. Therefore, the endocytosis mechanism and the direct translocation to the cytoplasm have been identified and studied. The balance between these cellular pathways can vary depending on the nature of the CPP and the ELD, and on the delivery factors such as the peptide concentration. Overall, the delivery mechanisms have been studied by using GFP protein, and other fluorescent probes (calcein and FITC-Dextrans). The CPP-ELDs are able to deliver small size molecules (600 Da) to molecules with high molecular weight (250 kDa). The capacity to deliver big proteins has been confirmed by the cellular entry of the Cas9 and Cpf1 nucleases, but also with antibodies. The analysis of the biochemical properties and assumed secondary structures allowed identifying several criteria required for the efficient delivery in mammalian cells, for discovery and therapeutic applications.

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Laboureau, Éric. "Partage de phase par affinité avec les ions métalliques immobilisés : application à l'étude de cellules de mammifères." Compiègne, 1997. http://www.theses.fr/1997COMP1082.

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Abstract:

Ce travail s'inscrit dans le cadre d'une recherche d'une meilleure compréhension des phénomènes mis en jeu lors du partage de phase par affinité avec les ions métalliques immobilises (IMAP) de cellules de mammifères. L'application d'une technique de pseudo bio-affinité, comme l'affinité avec les ions métalliques immobilisés, permet de réaliser des séparations de cellules ou d'organites, basées sur des caractéristiques structurales très fines, ainsi que de récupérer des cellules viables et intactes en vue d'études ultérieures. Du fait de son affinité modérée (10 4 à 10 6) et l'absence de forces de cisaillement, l'IMAP est particulièrement bien adaptée à la séparation de cellules ou à l'étude des modifications structurales et métaboliques. Dans un premier temps, nous avons déterminé plus précisément les sites potentiels de reconnaissance des cellules par les ions métalliques immobilisés en partage de phase. Nous avons utilisé comme modèles des érythrocytes de mouton. Dans des systèmes contenant des concentrations croissantes de ligand, nous avons comparé le coefficient de partage de cellules intactes avec celui de stromas, puis avec celui de protéines membranaires extraites de ces stromas. Ceci nous a permis de montrer que les protéines membranaires, et plus particulièrement la glycophorine, étaient impliquées dans cette reconnaissance. Dans un deuxième temps, nous avons mis au point un nouveau type de système IMAP contenant un ligand chélate métallique dans chacune des phases. Nous avons observé que les cellules se répartissaient entre les deux phases en fonction de la concentration de ligand qui y était présenté. Ce système a confirmé que le partage de cellules en IMAP est donc bien dicté principalement par l'affinité des ions métalliques immobilisés pour les protéines de la surface cellulaire via leur résidus histidines accessibles. Dans un troisième temps, nous avons étudié le comportement d'un mélange complexe de cellules en IMAP, à savoir les cellules mononuclées de sang de cordon ombilical humain. Nous avons montré que cette technique permet l'enrichissement sélectif de sous-populations cellulaires. Il faut noter qu'une fois encore les cellules sont réparties dans le système en fonction de leur affinité avec les ions métalliques chélates, et que des cellules ayant peu de sites potentiels à leur surface se retrouvent dans la phase inferieure ou l'interphase (ne contenant pas de ligand). Les cellules CD34+ notamment (cellules souches hématopoïétiques) ont pu être sensiblement enrichies par IMAP, sans utiliser de ligand bio-spécifique (anticorps) pouvant conduire à des modifications fonctionnelles de ces cellules.

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Farges-Haddani, Bérangère. "Les peptides de colza : une alternative aux protéines animales dans les procédés de culture de cellules de mammifères ?" Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 2005. http://docnum.univ-lorraine.fr/public/INPL_T_2005_FARGES_HADDANI_B.pdf.

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Abstract:

En vue d'améliorer les performances de procédés de culture en masse de cellules animales pour la production de protéines thérapeutiques, et de limiter les risques de contamination par des molécules d'origine animale, nous avons étudié les effets d'une supplémentation, par des fractions peptidiques de colza, de milieux de culture sans sérum et/ou sans protéine animale. Des fractions peptidiques de diverses compositions ont été générées par hydrolyse enzymatique d'extrait protéique et fractionnement membranaire. Ces fractions, riches en matière azotée, montrent un effet variable sur les cellules CHO, avec un fort effet promoteur de croissance cellulaire d'une fraction composée d'une large gamme de taille de peptides. Des études cinétiques de cultures en masse en bioréacteurs agités ont confirmé l'impact de cette fraction sur : l'accélération de la croissance cellulaire, le prolongement de la survie cellulaire, l'augmentation de la production spécifique de la protéine produite, et le ralentissement du métabolisme central et du décès cellulaire. Nousavons également montré que les peptides présents dans le mélange ajouté au milieu de culture interviennent, non seulement, comme additifs nutritionnels, mais également, comme facteur de croissance et/ou de survie. D'autres atouts supplémentaires de ces peptidesont été mis en évidence, tels que : une adaptation plus facile de diverses lignées cellulaires à ce milieu sans sérum, une bonne cryoconservation des cellules, une bonne filtrabilité. Enfin, nous avons formulé un milieu de culture particulièrement simple, complètement exempt de molécule d'origine animale, et stimulant la croissance de différentes lignées cellulaires utilisées en industrie, soit adhérentes, soit en suspension, à différentes échellles de culture. L'ensemble de nos résultats converge vers un intérêt de cette nouvelle source peptidique comme additif dans les procédés de culture en masse de cellules animales
In order to improve the performances of animal cell culture processes for the production of therapeutic proteins, and to limit the risks of contamination by animal derived molecules, the effects of a supplementation of serum-free and animal-protein free culture media with rapeseed peptidic fractions were performed. Peptide fractions of various compositions were generated by enzymatic hydrolysis on proteic extract and membrane fractionation. These fractions, rich in nitrogen matter, displayed a variable effect on CHO cells, with a strong cell growth promoting effect of a fraction containing peptides with a broad range of size. In fact, this fraction increased the cell growth, prolonged cell survival, increased the specific production of the recombinant protein, and reduced the whole metabolism of carbohydrates. We also showed that tis peptidic fraction was utilized as nutritioinal additives, but also, as survival and/or growth promoting factors. Other additional advantages ot these peptides were highlighted, such as : an easier adaptation of various cell lines to serum-free conditions, a good cryoprotection of cells during the freezing process au good filterability. Indeed, a very simple culture medium was designed, completely free from animal molecules, and stimulating the growth of adherent or suspension cells from different industrial strains, for various culture scales. These results taken together suggest the use of this new particularly interesting peptidic source as an additive in animal cell culture processes

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Atieh, Thérèse. "Développement du système universel de génétique inverse pour les arboviruses applicable dans les cellules mammifères et moustiques." Thesis, Aix-Marseille, 2017. http://www.theses.fr/2017AIXM0659/document.

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Abstract:

La génétique inverse est la manipulation génétique des virus à ARN pour créer un virus de type sauvage ou modifié. Les techniques de génétique inverse conduit à bien comprendre les fonctions des gènes viraux et leur pathogénicité dans les cellules d’hôte ou de vecteur. Les virus à ARN comme les arbovirus ceux qui ont comme vecteurs les arthropodes représente une vraie menace pour la santé humaine mondiale. Les techniques de génétique inverse sont un moyen adéquat pour protéger l’homme contre les virus par la création des vaccins at par bloquer leur transmission par les vecteurs comme les moustiques. De nos jours, la plupart des systèmes de génétique inverse se concentraient exclusivement sur l’étude d’interaction entre les virus et les cellules de mammifères. Cependant, la transmission de l'arbovirus se situe entre un hôte mammifère et un vecteur d'invertébré.Nous présentons ici ISA (Infectious-Subgenomic-Amplicons) comme une méthode universelle de génétique inverse qui a prouvé son applicabilité sur les cellules de mammifères et de moustiques pour générer des virus infections ARN simple brin de polarité positive.Ainsi, ISA est une méthode adéquate pour étudier le cycle de vie de l'arbovirus chez le moustique vecteur et l'hôte mammifère at ainsi avoir une idée générale de la circulation de l’arbovirus pour créer d’autre outils de blocage
Reverse genetics, the genetic manipulation of RNA viruses to create a wild-type or modified virus, has led to important advances in our understanding of viral gene function and interaction with host cells. Since arboviruses the most threatening viruses to human and animal are RNA viruses, thus reverse genetics is an extremely powerful technique with important application for the protection from these viruses and to control their spread.Hitherto, most reverse genetics systems focused exclusively on mammalian cells. However, arbovirus transmission is between a mammalian host and invertebrate vector.Herein, we present ISA (Infectious-Subgenomic-Amplicons) as a universal reverse genetic method that proved it applicability to rescue infectious single stranded positive RNA viruses on mammalian and mosquito cells.Thereby, ISA is an adequate method to study the arbovirus life cycle in mosquito vector and mammalian host. Thus, providing information about the global arbovirus circulation to provide further technique that protect mammalian from their infection and inhibit vector to transmit the virus

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Ganier, Olivier. "Etude des fonctions de la cycline A2 dans la progression du cycle cellulaire des cellules de mammifères." Paris 6, 2007. http://www.theses.fr/2007PA066207.

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Abstract:

Le déroulement ordonné des phases G1, S, G2 et M du cycle cellulaire est principalement contrôlé par l'activité des kinases dépendantes des cyclines (CDK). La cycline A2 est présente dès la transition G1/S jusqu'en prométaphase. Afin de déterminer ses fonctions spécifiques dans la progression du cycle cellulaire des cellules de mammifères, nous avons inhibé son expression par interférence à l'ARN. Ceci conduit à une accélération de l'entrée en phase S suivante. Sa ré-expression restreinte au cycle cellulaire précédent est suffisante pour rétablir un "timing" correct d'entrée en phase S. L'inhibition de l'expression de la cycline A2 conduit à une stabilisation anormale de ORC1 sur la chromatine dès la mitose précédente et durant la phase G1 suivante et son expression ectopique conduit également à une accélération de l'entrée en phase S, suggérant que la phase S est régulé lors du cycle cellulaire précédent et que l'action de la cycline A2 sur ORC1 participe à cette régulation.

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Canal, Frédéric. "Rôle de la protéine Nfs1 dans la biosynthèse des centres fer-soufre dans les cellules de mammifères." Paris 11, 2007. http://www.theses.fr/2007PA11T045.

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Ripoll, Pierre-Jean. "Construction d'un vecteur épisomique circulaire (circosome) en vue de transfert de gène dans les cellules de mammifères." Bordeaux 2, 1997. http://www.theses.fr/1997BOR28464.

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Mangion, Mathias. "Développement et caractérisation de la gésifection comme méthode de livraison d'acides nucléiques dans les cellules de mammifères." Doctoral thesis, Université Laval, 2020. http://hdl.handle.net/20.500.11794/67903.

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Abstract:

La livraison d’acides nucléiques a révolutionné la recherche biomédicale depuis des décennies. Il existe de nombreuses manières de livrer des acides nucléiques dans des cellules de mammifères. Chaque méthode possède ses avantages et ses inconvénients. Parmi elles, celles dites hybrides, représentent une alternative très intéressante puisqu’elles résultent de la combinaison de méthodes de livraison traditionnelles pour en obtenir une nouvelle aux propriétés améliorées. Cette thèse se consacre à l’étude d’une de ces méthodes de livraison hybride appelée gésifection. Cette dernière consiste à combiner des nanovésicules biologiques appelées « gésicules » avec un agent chimique nommé bromure d’hexadiméthrine pour livrer des acides nucléiques dans des cellules de mammifères. Bien que cette méthode ait fait l’objet de peu de recherches, les résultats publiés jusqu’à présent apparaissent suffisamment intéressants pour poursuivre son développement et sa caractérisation. Cette thèse est divisée en quatre chapitres. Le chapitre 1, est dédié à la revue de la littérature. Il présente un tour d’horizon des méthodes de livraison d’acides nucléiques, puis une présentation des mécanismes impliqués dans la pénétration cellulaire, et enfin, un état des lieux concernant les travaux sur les gésicules. Les chapitres 2, 3 et 4, présentent les travaux expérimentaux réalisés dans le cadre de cette thèse. Le chapitre 2 est consacré au développement d’une méthode optimisée pour produire et utiliser les gésicules pour la livraison d’acides nucléiques. Les gésicules se sont révélées être des particules très résistantes puisque leur capacité de livraison a été maintenue après plusieurs semaines de conservation à différentes températures, ainsi qu’après plusieurs cycles de congélation décongélation. Par ailleurs, les expériences de gésifection ont démontré la capacité de cette méthode à livrer de l’ADN dans des cellules primaires (connues pour être réfractaires) mais également des acides ribonucléiques (ARN) et des plasmides de grandes tailles. Le chapitre 3 est consacré à des expériences de caractérisation des gésicules au niveau morphologique et de leur contenu protéique. Les gésicules ont été visualisées par microscopie électronique avec la confirmation de la présence de la protéine VSV-G à leur membrane. Enfin, une analyse par spectrométrie de masse a permis de fournir la première description du contenu protéique des gésicules. Cela a permis de faire apparaître toute la complexité de ces nanovésicules. Le dernier chapitre de cette thèse (chapitre 4) est dédié à l’identification des mécanismes de pénétration et de transport cellulaire impliqués dans la gésifection. Tout d’abord, une série d’expériences préliminaires a permis d’établir des conditions expérimentales garantissant la fiabilité des résultats (efficacité des lavages, efficacité et innocuité des inhibiteurs métaboliques). Les résultats ont démontré que les complexes de gésifection pénètrent dans les cellules HeLa par macropinocytose et endocytose dépendante des clathrines. Leur parcours intracellulaire jusqu’au noyau de la cellule implique quant à lui, les dynéines et les microtubules. En conclusion, cette thèse contribue significativement au développement de la méthode de gésifection en décrivant un procédé de production et d’utilisation efficaces, et en apportant une meilleure compréhension de la composition et du fonctionnement des gésicules pour livrer des acides nucléiques.
The delivery of nucleic acids has revolutionized the biomedical field for decades, for research as well as for therapeutic applications. There are many nucleic acids delivery methods for mammalian cells. Each has its advantages and disadvantages. Hybrid methods represent a very interesting alternative for the delivery of nucleic acids since it consists in combining elements of existing vectors to develop more efficient new ones. This thesis is devoted to the study of one of these hybrid delivery methods called gesifection. Gesifection involves virus-like particles, pseudotyped with the VSV glycoprotein, able to deliver nucleic acids when combined with a chemical agent named polybrene. Even though the gesifection’s efficiency has been stated in only a few publications, the results were interesting enough for us to investigate the depth of its potential. This thesis is divided into 4 main parts. The chapter 1 is dedicated to a review of the literature and presents the main methods of nucleic acid delivery, followed by a presentation of the mechanisms involved in cell penetration and finally, an inventory of the gesicles and their uses. The chapter 2 of this thesis presents the work that allowed us to optimize the production of gesicles, to determine the best way to use them, to demonstrate their great robustness as well as their capacity to transfect primary cells, large plasmids and also interfering RNAs. The chapter 3 is dedicated to the characterization of gesicles. We have highlighted the formation of gesifection complexes, successfully carried out the purification of gesicles efficient for nucleic acid delivery, visualized the gesicles with their membrane composed of VSV-G proteins and finally, provides the first description of their protein content, showing all the complexity of these particles. Finally, the chapter 4 studies the mechanisms of penetration and cell transport involved during the gesifection. Our results revealed for the first time, that the gesifection complexes enter in HeLa cells by macropinocytosis and clathrin-dependent endocytosis. Furthermore, their intracellular course involves dyneins and microtubules. All of the results presented in this thesis provide a better understanding of gesifection for future developments.

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Ait, Ghezala Hayet. "La terminaison de la traduction et la régulation traductionnelle de l'activateur de la transcription ATF4 chez les mammifères." Paris 6, 2012. http://www.theses.fr/2012PA066315.

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Abstract:

Le taux de synthèse protéique est un des déterminants majeurs de la croissance des cellules, de leur progression à travers le cycle cellulaire et de leur prolifération. Il est contrôlé par plusieurs voies de signalisation qui mettent en jeu des protéines kinases et des cascades de phosphorylation qui ont pour cibles des facteurs agissant principalement dans les étapes d'initiation et d'élongation du processus de traduction de l'ARN messager en protéine. Ces voies de signalisation, et en particulier la voie de la protéine kinase mTOR (mammalian Target of Rapamycin), permettent d'adapter le taux de synthèse protéique à la disponibilité en nutriments et en énergie et à diverses stimulations extracellulaires provoquées par des hormones, des facteurs de croissance ou des stress. Notre équipe a montré qu'une déplétion du facteur de terminaison de la traduction eRF3a dans des cellules humaines en culture entraînait un arrêt du cycle cellulaire par inhibition de la voie mTOR chez les eucaryotes. Cette déplétion induit parallèlement une augmentation de l’expression d’un certains nombre de gènes, en particulier des gènes impliqués dans la biosynthèse des acides aminés et des gènes sous le contrôle de ATF4 comme les gènes REDD1 ou TRIB3 qui sont connus pour être des inhibiteurs de la voie mTOR. Ces gènes sont habituellement exprimés en condition de stress à travers la voie eIF2α. Nous avons montré que la déplétion du facteur eRF3a agit sur la voie mTOR par l’intermédiaire du gène REDD1, et ceci indépendamment de la voie eIF2α. Nous avons ainsi identifié un nouveau mécanisme de régulation de la voie mTOR qui passe par l’induction de l’expression d’ATF4
The rate of protein synthesis is a major determinant of cell growth, proliferation through the cell cycle and cell proliferation. It is controlled by several signaling pathways involving protein kinases and phosphorylation cascades that target factors acting mainly in the initiation and elongation steps of the mRNA translation process. These signaling pathways, and in particular the protein kinase mTOR (mammalian Target of Rapamycin), adjust the rate of protein synthesis to nutrient and energy availability and to various extracellular stimuli caused by hormones, growth factors or stress. We have shown that the depletion of the translation termination factor eRF3a in human cells induces a cell cycle arrest by inhibiting the mTOR pathway in eukaryotes. This depletion induces in parallel an increase in the expression of numerous genes, especially genes involved in the biosynthesis of amino acids and genes under the control of ATF4, as REDD1 or TRIB3, known to be inhibitors of the mTOR pathway. These genes are usually expressed under stress conditions through the eIF2α pathway. We have shown that eRF3 depletion acts on the mTOR pathway through the REDD1 gene, independently of the eIF2α pathway. We have characterized a new mTOR regulation mechanism, which involves ATF4 induction

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Gress, Steeve. "Toxicités cardiaques et gonadique d'un herbicide à base de glyphosate chez des mammifères." Caen, 2014. http://www.theses.fr/2014CAEN2053.

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Gasnier, Céline. "Mécanisme d'intoxication de cellules de mammifères par des herbicides à base de glyphosate et détoxification : Thèse sur un ensemble de travaux." Caen, 2009. http://www.theses.fr/2009CAEN2026.

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Abstract:

Les polluants, dont les xénobiotiques, sont très présents dans l’environnement et les organismes vivants ; ils perturbent en particulier les fonctions de reproduction. Métabolisés et détoxifiés en grande partie par le foie, les mécanismes d’intoxication et de détoxification sont ici détaillés en introduction, explicitant le rôle des gènes nouvellement impliqués. Notre principal exemple expérimental étudie les herbicides à base de glyphosate (Roundup) sur des cellules humaines, car ils sont les herbicides les plus utilisés dans le monde. Leurs résidus (glyphosate, AMPA) sont des contaminants majeurs des rivières. De plus, leur utilisation sur 80% des OGM agricoles les fait entrer dans la chaîne alimentaire. Nous avons réalisé 3 articles scientifiques. Tout d’abord, les mécanismes toxiques à partir de très basses dilutions (100. 000) en 72h, selon le temps et la dose, sont élucidés sur des cellules embryonnaires (E293) et placentaires (JEG3). Ensuite, les effets perturbateurs endocriniens de 4 Roundup sont caractérisés sur les récepteurs aux androgènes, aux estrogènes, et l’aromatase, sur des cellules transfectées ou non. Le potentiel génotoxique est également démontré. Certains Roundup pourraient être in vivo des cancérogènes, mutagènes, reprotoxiques (CMR). Des extraits spécifiques de plantes en mélanges dosés (Dig1, le plus étudié, mais aussi Dig2, Circ1, Sp1, Uro1, de Sevene Pharma) sont capables de prévenir l’intoxication des cellules hépatiques (HepG2 et Hep3B), et cette partie valorise nos résultats en expliquant la détoxification au moins en partie. D’autant que des médicaments à base de certains de ces composés ont été mis sur le marché dès 2008 par Sevene Pharma
Pollutants, like xenobiotics, are very present in the environment and living organisms, and some are able to disrupt in particular reproductive functions. Largely metabolized and detoxified by the liver, the mechanisms of intoxication and detoxification are detailed here in the introduction, explaining the role of newly involved genes. Our main experimental example studies the glyphosate-based herbicides (Roundup) on human cells, because they are the most commonly used herbicides in the world. Their residues (glyphosate, AMPA) are major contaminants of rivers. Moreover, because they are used on 80% of agricultural GMOs, they enter the food chain. We performed 3 scientific articles. First, their toxic mechanisms are elucidated on embryonic (E293) and placental (JEG3) cells at very low dilutions (100. 000) in 72 hours, depending on the time and dose. Then, the endocrine disrupting effects of 4 Roundup are characterized on the androgen and estrogen receptors, and aromatase, in cells transfected or not. Their genotoxic potential was also demonstrated. Some Roundup may be carcinogens, mutagens, reprotoxic (CMR) in vivo. Specific plant extracts in dosed mixtures (Dig1, the most studied, but also Dig2, Circ1, Sp1, Uro1 of Sevene Pharma) are able to prevent the intoxication of liver cells (HepG2 and Hep3B), and this complete our results in explaining the detoxification at least in part. This is true especially because drugs based on some of these compounds have been marketed since 2008 by Sevene Pharma

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Ahmed-Seghir, Sana. "Implication de l’ADN polymérase spécialisée zêta au cours de la réplication de l’hétérochromatine dans les cellules de mammifères." Thesis, Paris 11, 2015. http://www.theses.fr/2015PA11T052/document.

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Abstract:

La synthèse translésionnelle (TLS) est un processus important pour franchir des lésions de l’ADN au cours de la duplication du génome dans les cellules humaines. Le modèle « d’échange de polymérases » suggère que la polymérase réplicative est transitoirement remplacée par une polymérase spécialisée, qui va franchir le dommage et permettre de continuer la synthèse d’ADN. Ces ADN polymérases spécialisées appelées Pol êta (η), iota (ι), kappa (κ), zêta (ζ), et Rev1 ont été bien caractérisées pour leur capacité à franchir différents types de lésions in vitro. Un concept en émergence est que ces enzymes pourraient également être requises pour répliquer des zones spécifiques du génome qui sont « difficiles à répliquer ». Polζ est constituée d’au moins 2 sous-unités : Rev3 qui est la sous-unité catalytique et Rev7 sous-unité augmentant l’activité de Rev3L. Jusqu'ici, la fonction la mieux caractérisée de Polζ était de sa capacité à catalyser l'extension d'un mésappariement en face d'une lésion d'ADN. Cependant, il a été montré que la sous unité catalytique Rev3 de levure et humaine interagissent avec les deux sous-unités accessoires de Polδ que sont pol31 et pol32 chez la levure et p50 et p66 chez l’humain. Il a aussi été mis en évidence que Rev3L est importante pour la réplication des sites fragiles (SFCs) dans les cellules humaines, zones connues pour être à l’origine d’une instabilité génétique et pour être répliquées de manière tardive (en G2/M). Tout ceci suggère que Polζ pourrait jouer un rôle dans la réplication du génome non endommagé, et plus spécifiquement lorsque des barrières naturelles (e.g. ADN non-B) entravent la progression normale des fourches de réplication.Chez la levure S. cerevisiae, l’inactivation du gène rev3 est viable et conduit à une diminution de la mutagenèse spontanée ou induite par des agents génotoxiques suggérant que Polζ est impliquée dans le franchissement mutagène des lésions endogènes ou induite. En revanche, l’inactivation du gène Rev3L chez la souris est embryonnaire létale alors que la plupart des autres ADN polymérases spécialisées ne sont pas vitales. Ceci suggère que Polζ a acquis des fonctions essentielles au cours de l’évolution qui restent inconnues à ce jour. Les fibroblastes embryonnaires murins (MEF) Rev3L-/- présente une grande instabilité génétique spontanée associée une forte augmentation de cassures et de translocations chromosomiques indiquant que Polζ est directement impliquée dans le maintien de la stabilité du génome. Afin de clarifier le rôle de cette polymérase spécialisée au cours de la réplication du génome, nous avons entrepris de procéder à une étude sur les relations structure/fonction/localisation de la protéine Rev3. Notre étude met en évidence que la progression en phase S des cellules Rev3L-/- est fortement perturbée, notamment en fin de phase S. Dans ces cellules invalidées pour Rev3L, on constate des changements dans le programme de réplication et plus particulièrement dans des régions de transition (TTR) répliquées à partir du milieu de la phase S. Nous montrons aussi un enrichissement global en marques épigénétiques répressives (marques associées à l’hétérochromatine et méthylation de l’ADN) suggérant qu’un ralentissement de la progression de la fourche de réplication à des loci particuliers peut promouvoir une hétérochromatinisation lorsque Rev3L est invalidé. De manière intéressante, nous constatons une diminution de l’expression de plusieurs gènes impliqués dans le développement qui pourrait peut-être expliquer la létalité embryonnaire constatée en absence de Rev3L. Enfin, nous mettons en évidence une interaction directe entre la protéine d’organisation de l’hétérochromatine HP1α et Rev3L via un motif PxVxL. Tout ceci nous suggère fortement que Polζ pourrait assister les ADN polymérases réplicatives Polδ et Polε dans la réplication des domaines compactés de la chromatine en milieu et fin de phase S
DNA polymerase zeta (Polζ) is a key player in Translesion DNA synthesis (TLS). Polζ is unique among TLS polymerases in mammalian cells, because inactivation of the gene encoding its catalytic subunit (Rev3L) leads to embryonic lethality in the mouse. However little is known about its biological functions under normal growth conditions.Here we show that S phase progression is impaired in Rev3L-/- MEFs with a delay in mid and late S phase. Genome-wide profiling of replication timing revealed that Rev3L inactivation induces changes in the temporal replication program, mainly in particular genomic regions in which the replication machinery propagates a slower velocity. We also highlighted a global enrichment of repressive histone modifications as well as hypermethylation of major satellites DNA repeats in Rev3L-deficient cells, suggesting that fork movements can slow down or stall in specific locations, and a delay in restarting forks could promote heterochromatin formation in Rev3L-depleted cells. As a direct or indirect consequence, we found that several genes involved in growth and development are down-regulated in Rev3L-/- MEFs, which might potentially explain the embryonic lethality observed in Rev3L KO mice. Finally we discovered that HP1α directly interacts and recruits Rev3L to pericentromeric heterochromatin. We therefore propose that Polζ has been co-opted by evolution to assist DNA polymerase ε and δ in duplicating condensed chromatin domains during mid and late S phase

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Lefebvre, Patricia. "Modulation de la réparation des bases alkylées dans l'ADN des cellules de mammifères sous l'influence de différents traitements." Paris 6, 1990. http://www.theses.fr/1990PA066204.

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Abstract:

Dans un travail precedent effectue au laboratoire, il avait ete montre que les cellules h4 (hepatome de rat) devenaient plus resistantes vis-a-vis de l'effet letal et mutagene des agents alkylants lorsqu'elles etaient pretraitees par des doses non toxiques et repetees de ces composes. Cette resistance avait etre reliee a l'augmentation de deux proteines intervenant dans la reparation de l'adn: la o#6-methylguanine-adn-methyltransferase (methyltransferase) et la 3-methyladenine-adn-glycosylase. Le but de notre travail consistait a rechercher si ce phenomene etait du a un mecanisme identique a celui qui a ete decrit au cours de l'adaptation chez e. Coli. Nos resultats ont montre qu'il existait un phenomene specifique des cellules de mammiferes, au cours duquel un traitement par une dose unique et peu toxique d'agents chimiques ou physiques, creant des lesions dans l'adn cellulaire, est capable d'augmenter l'activite de trois proteines intervenant dans la reparation de l'adn, celle de la methyltransferase et a un degre moindre celles de la 3-methyladenine-adn-glycosylase et de l'uracile-adn-glycosylase. Les resultats suggerent que les cassures produites dans l'adn cellulaire par ces traitements seraient a l'origine de l'induction de ces proteines. Ce phenomene, qui est donc different du phenomene d'adaptation decrit chez e. Coli, semble se produire specifiquement dans les cellules transformees (cellules tumorales et lignees etablies) et n'a pas pu etre mis en evidence dans les cellules normales. Les proteines induites augmentent la resistance des cellules vis-a-vis de l'effet letal et mutagene des drogues alkylantes et un tel processus pourrait donc jouer un role dans les phenomenes de resistance qui se produisent au cours des traitements en cancerologie

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Levillain, Olivier. "Etude du métabolisme de la citrulline, de l'arginine et de l'ornithine le long du néphron de plusieurs mammifères." Paris 7, 1992. http://www.theses.fr/1992PA077108.

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Abstract:

Une production locale d'urée, dans le rein, pourrait contribuer à la création ou à l'entretien du gradient de concentration d'urée médullaire qui participe au processus de concentration de l'urine et donc permet de conserver l'eau de l'organisme. Nous avons localisé et quantifié la production d'urée par les différents segments du néphron à partir d'arginine (arg) marquée au carbone 14 à l'aide d'un microdosage enzymatique. Chez toutes les espèces étudiées (rat, souris, lapin, cobaye mérion et chat), la production d'urée est toujours localisée dans la pars recta corticale (CPST) et médullaire (OSPST) du tubule proximal. L'intensité de cette production est maximale dans l' OSPST. Chez certaines espèces, le tubule proximal contourne (PCT), les segments grêles et le canal collecteur produisent aussi de l'urée. La synthèse d'arginine par les différents segments du néphron a aussi été étudiée a l'aide d'un microdosage enzymatique en utilisant comme précurseur de la citrulline marquée au C¹⁴. Chez toutes les espèces, la synthèse d'arginine a été observée uniquement dans le tubule proximal, avec une intensité maximale dans la partie initiale du PCT. La fraction d'arginine immédiatement hydrolysée, in situ, est de 5% dans le PCT et varie entre 40 et 70% dans le CPST et l'OSPST. L'ornithine est métabolisée pour donner chez le rat, des polyamines dans le PCT et ou de l'énergie dans tous les segments du néphron alors que dans le PCT de chien, il y a synthèse de proline. L'arginase est l'enzyme clé de ces voies métaboliques.

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Million, Karine. "Différenciation des cellules épithéliales respiratoires chez les mammifères : modulation par les retinoides et expression des protéines p63 et p73." Paris 7, 2001. http://www.theses.fr/2001PA077141.

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Piché, Alain. "Résolution d'une molécule d'ADN hybride virale-cellulaire dans des cellules de mammifères : rôle de la protéine virale grand T." Thèse, Université de Sherbrooke, 1987. http://hdl.handle.net/11143/11748.

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Abstract:

RmI est une molécule hybride contenant 1,03 copie du génome du virus du polyome liée à une insertion cellulaire d'ADN de souris par des répétitions virales directes de 182 pb. Dans ce travail, nous avons examiné la recombinaison intramoléculaire de RmI en utilisant différents recombinants contenant cette molécule. Après transfection dans diverses lignées cellulaires, la recombinaison a été mise en évidence par la production de plages de lyse, ou directement par la méthode de Southern. Nous avons montré que des molécules de taille génomique étaient produites à une fréquence élevée dans des cellules de souris et qu'il s'agissait là d'un événement de recombinaison réciproque. Il semble que la présence de la protéine virale grand T soit nécessaire à cet événement de recombinaison.

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Girard, Franck. "Régulation du cycle cellulaire des cellules somatiques mammifères : rôle de de la cycline A en phase S : importance de la compartimentation dans l'activation du MPF à la transition G2/M." Montpellier 1, 1993. http://www.theses.fr/1993MON1T027.

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Delpech, Nathalie. "Effet et mécanisme d'action d'un facteur endothélial, l'endothéline, sur la régulation béta-adrénergique du courant calcique des cellules atriales de mammifères." Poitiers, 1996. http://www.theses.fr/1996POIT2298.

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Abstract:

Notre travail a pour but d'etudier l'interaction de l'endotheline (et-1), facteur endothelial vasoconstricteur, avec la regulation beta-adrenergique du couplage excitation-contraction du muscle cardiaque, par l'analyse de l'effet de l'et-1 sur le courant calcique de type l, i#c#a#l, a l'origine de la contraction. I#c#a#l a ete enregistre par la technique de patch clamp, sur des myocytes isoles de cur de rats et de cobayes. Nous avons observe qu'independamment du type cellulaire, cellules atriales et ventriculaires de rat ou de cobaye, l'et-1 n'a pas d'effet sur i#c#a#l. Basal. En revanche, l'et-1 inverse l'augmentation beta-adrenergique de i#c#a#l sur les cellules atriales de rat et de cobaye, et sur les cellules ventriculaires de cobaye, mais pas sur les cellules ventriculaires de rat. Les effets plus constants et reproductibles de l'et-1 sur cellules atriales de rat nous ont amene a choisir cette preparation pour la suite de notre etude. L'utilisation du bq 123 et de l'irl 1038, antagonistes specifiques des recepteurs respectivement et#a et et#b, et l'utilisation de l'et-3 ont permis de montrer une action de l'et-1 via l'activation des recepteurs et#a. Ce resultat est en accord avec les etudes biochimiques definissant une majorite de recepteurs et#a dans le coeur. L'absence d'effet de l'et-1 sur i#c#a#l basal et son antagonisme vis a vis de la stimulation beta-adrenergique de i#c#a#l suggerent une action sur i#c#a#l seulement lorsque le canal est phosphoryle. L'incapacite de l'et-1 a diminuer i#c#a#l augmente par le bayk 8644 confirme cette hypothese. Nous avons verifie si le mecanisme d'action de l'et-1 pouvait impliquer une interaction avec la voie de phosphorylation ampc-dependante du canal calcique. Apres augmentation de i#c#a#l par la forskoline, le 8brampc et l'ampc associe a l'ibmx, l'et-1 diminue encore i#c#a#l. Ces resultats excluent donc une action de l'et-1 par la voie de phosphorylation pka-dependante. Il est connu que l'et-1 est capable d'activer l'hydrolyse des phosphoinositides par la plc, conduisant ainsi a une augmentation du taux intracellulaire d'ip#3 et de dag. Une action de l'et-1 par augmentation du calcium libre intracellulaire via ip#3 est exclue dans nos conditions experimentales, ou toute variation intracellulaire de calcium est tamponnee. Une activation de la pkc par le dag est egalement improbable puisque l'effet de l'et-1 est maintenu en presence d'un inhibiteur specifique de la pkc, le pkc 19-31. En conclusion, l'action inhibitrice de l'et-1 sur la stimulation beta-adrenergique du courant calcique des myocytes cardiaques ne semble pas impliquer les voies de phosphorylation par la pka et la pkc ; nous pouvons alors supposer son intervention dans l'activation de phosphatases

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Demion, Marie. "Caractérisation fonctionnelle et moléculaire du courant cationique non selectif activé par le calcium sur les cellules sinusales et auriculaires de mammifères." Poitiers, 2006. http://www.theses.fr/2006POIT2325.

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Abstract:

Recent studies, on cardiac tissue at the ventricular level, showed in pathological conditions the expression of a calcium-activated nonselective cationic channel (NSCCa) supposed to be implicated in the genesis of arrhythmias. The aim of the present study was to search for this current on other cardiac levels: atria and sino-atrial nodes. Using the inside-out configuration of the patch-clamp technique, we showed the presence, on human atrial cardiomyocytes and mouse SAN cells, of a nonselective cationic current, permeable to monovalents cations but impermeable to divalents cations and anions. The current/voltage relationship is linear with a unitary conductance close to 20 pS. This current is activated by rise of intracellular calcium and membrane depolarization but inhibited by internal ATP. It is blocked by flufenamic acid and glibenclamide. This current probably corresponds to the new cloned protein TRPM4, which shares the same electrophysiological properties. We detected its mRNA transcript on human atrium and mouse SAN tissues and its protein on mouse SAN tissue. If the physiological impact of this channel is unclear, it could be implicated on arrhythmias genesis during ischemia. As the calcium/ATP ratio is increased and then is in favour of its activation. Also, we described at the unitary level on human atrial cardiomyocytes, a new chloride current activated by cell swelling so called ICl. Swell. It could be implicated in the regulatory volume decrease observed during atrial dilatation.

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Aussedat, Baptiste. "Nouveaux vecteurs pseudo-peptidiques de structure linéaire, branchée ou dendrimérique : étude du transport d'une cargaison peptidique dans les cellules de mammifères." Paris 6, 2007. http://www.theses.fr/2007PA066558.

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Abstract:

L’OBJECTIF DE CE TRAVAIL A ÉTÉ LE DÉVELOPPEMENT DE NOUVEAUX VECTEURS PSEUDO-PEPTIDIQUES, DE STRUCTURE VARIABLE, STABLES EN MILIEU BIOLOGIQUE, CAPABLES DE TRANSPORTER PLUS EFFICACEMENT UNE CARGAISON PEPTIDIQUE DANS DES CELLULES CHO. Afin de pouvoir accéder à des transporteurs de structure variée, la bis-ornithine, un nouvel acide aminé C,-disubstitué a été synthétisé. Ce composé est la pièce maîtresse d’unités monomériques, dont l’agencement modulable permet d’accéder à des structures hétérofonctionnalisées : linéaires, branchées ou dendrimériques. Neuf nouveaux transporteurs ont ainsi été synthétisés sur support solide. Leur aptitude à transporter une espèce peptidique (le PKCi : inhibiteur des protéines kinases C) dans des cellules CHO a été évaluée, grâce à une nouvelle méthode de quantification, utilisant la spectrométrie de masse MALDI-TOF. Certains de ces composés sont jusqu'à 10 fois plus efficaces que les peptides vecteurs les plus utilisés. Une étude, par microscopie confocale, de la localisation intracellulaire de la cargaison, a permis de souligner une distribution, fonction de la nature du transporteur utilisé.

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Papouli, Efterpi. "Etude des réponses de cellules de mammifères aux agents pontant l'ADN : identification de gènes impliqués dans le sensibilité à la mitomycine C." Toulouse 3, 2001. http://www.theses.fr/2001TOU30069.

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Douzery, Emmanuel. "Phylogénie moléculaire des mammifères ongulés : hybridation ADN/ADN sur le génome nucléaire et évolution du génome mitochondrial." Montpellier 2, 1994. http://www.theses.fr/1994MON20248.

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Abstract:

L'etude de la phylogenie moleculaire des mammiferes ongules (artiodactyla, cetacea, perissodactyla, proboscidea, sirenia et hyracoidea) est envisagee par deux approches complementaires: les hybridations adn/adn sur la fraction non repetee du genome nucleaire, et le sequencage de deux genes mitochondriaux, le cytochrome b et l'arnr 12s. Dans un premier temps, les taux d'evolution des genomes nucleaires (fraction non repetee) d'une part et mitochondriaux (cytochrome b) d'autre part sont compares. L'hypothese du temps de generation comme mecanisme explicatif de differences de taux d'evolution entre lignees est alors testee dans le cadre du modele bovidae/cervidae. Dans un second temps, les relations evolutives entre artiodactyles et cetaces sont apprehendees par hybridation adn/adn et comparaison de sequences d'arnr 12s. Le manque de fiabilite des phylogenies a quatre especes pour reconstruire l'histoire des ruminantia, suiformes et cetacea est souligne, pour les methodes de distance et de parcimonie. Dans un troisieme temps, la phylogenie interordinale des ongules est abordee. La necessite d'employer de nombreuses sequences homologues pour resoudre le probleme des liens entre ruminantia, tylopoda, suiformes et cetacea est de nouveau mise en evidence. Le seul arnr 12s ne suffit cependant pas a donner une image robuste, et ce gene est alors combine au cytochrome b. La tendance generale indique enfin qu'il faudra se tourner vers le sequencage de genomes mitochondriaux complets chez de nombreuses especes, afin d'esperer resoudre la phylogenie des mammiferes ongules

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Dissertations / Theses on the topic 'Cellules de mammifères'

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