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Dissertations / Theses on the topic 'Cellules de muscle lisse vasculaires'
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Bea, Marie-Luce. "Caracterisation de cellules musculaires lisses vasculaires d'origine corticale renale en culture et etude de leurs recepteurs de la bradykinine et du facteur atrial natriuretique." Paris 7, 1991. http://www.theses.fr/1991PA077132.
Full textAbstract:
Une culture de cellules musculaires lisses vasculaires a ete obtenue a partir de cortex renal de lapin. Ces cellules ont ete caracterisees en culture secondaire par une etude ultrastructurale, par leurs activites enzymatiques creatine phosphokinase et renine, et par leur presence d'un antigene specifique du muscle lisse vasculaire. Ces cellules synthetisent des derives de l'acide arachidonique, majoritairement de la prostaglandine e#2, et possedent un cotransporteur na#+/k#+/2 cl#-. Des recepteurs b#2 de la bradykinine ont ete mis en evidence sur ces cellules, leur stimulation induisant une augmentation de la concentration cytosolique de calcium par activation de canaux calciques et probablement par une activation simultanee de la phospholipase c, ainsi qu'une augmentation de la synthese de pge#2 par une stimulation de la phospholipase a#2. Ces cellules possedent des recepteurs b et c du facteur atrial natriuretique ayant une constante de dissociation k#d de 78 pm et un nombre total de sites de liaison de 30000 sites/cellule. L'anf induit une augmentation de la production de gmp cyclique pour des concentrations de 10 pm a 0,1 m. A 37c, les recepteurs c representent apparemment 90% des sites de liaison et a 4c cette proportion est de 35%. En presence d'un inhibiteur de l'internalisation a 37c cette proportion de recepteurs c diminue a 45%. La degradation de l'anf iode est due principalement a l'action d'une carboxypeptidase dont les produits de degradation majeurs sont la tyrosine et le tripeptide c terminal. L'occupation des recepteurs c ne modifie pas la reponse en gmp cyclique a l'anf. Ainsi, dans notre modele cellulaire, les recepteurs c ne jouent pas de role tampon et ne semblent pas impliques dans la degradation de cette hormone
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Laemmel, Eric. "Etude du comportement prolifératif et sécrétoire des cellules musculaires lisses vasculaires sur supports protéiques héparinés : Contribution à l'amélioration des greffons vasculaires." Compiègne, 1997. http://www.theses.fr/1997COMP1001.
Full textAbstract:
Le remplacement d'un fragment de vaisseau malade par un greffon synthétique conduit à différentes réponses biologiques (thrombose, épaississement intimaI) qui peuvent amener une occlusion postopératoire de la prothèse. Le vaisseau hôte va réagir en formant un épaississement intimaI aux sites d'anastomoses. Cette prolifération, dépendante de facteurs de croissance, met enjeu principalement les cellules musculaires lisses (CML), suite à une lésion ou à un dysfonctionnement des cellules endothéliales. Nous avons développé un modèle de coculture pour étudier les réponses et les interactions des cellules endothéliales et des CML dans le cadre d'une lésion vasculaire. Les cellules ont été isolées à partir de l'artère aorte bovine. Dans notre modèle, l'héparine s'est montrée efficace pour freiner la prolifération des CML. Nous avons ensuite lié de manière covalente l'héparine sur deux supports protéiques constitués de gélatine et/ou d'albumine à l'aide d'un carbodiimide hydrosoluble. Nous observons une inhibition de la croissance des CML qui est proportionnelle à la fixation d'héparine sur ces membranes. Cette modification chimique de la surface protéique conduit à des variations des états énergétiques, physico-chimiques et structurales de ces surfaces qui se reflètent en partie sur la prolifération cellulaire. Ces supports héparinés semblent aussi avoir des répercussions sur la sécrétion des protéines de la matrice extra cellulaire, mais pas sur la sécrétion de métalloprotéinase(s) matricielle(s). Nos études sur la coagulation montrent que les supports héparinés acquièrent des propriétés anticoagulantes dès les plus faibles quantités d'héparine fixéeReplacement of a piece of sick vessel by a synthetic graft induces various biological responses (thrombosis, intimaI thickening) that can produce post-operative prosthesis occlusion. The host vessel reacts by forming an intimaI thickening at the sites of anastomosis. This growth factor-dependent proliferation primarily involves smooth muscle cells (SMC) and is triggered by an injury or dysfunction of endothelial cells. We have developed a co-culture model to study the interaction between endothelial cells and SMC and their biological response to vascular injury. Cells were isolated from bovine aorta arteries. Ln our model, heparin was shawn to be very effective in slowing down SMC proliferation. Heparin was covalently bound to two proteinic supports, which were composed of gelatin and/or albumin, using a water-soluble carbodiimide. We observed an inhibition of SMC growth that was proportion al to the amounts of heparin linked to these supports. Chemical modifications of proteinic surfaces lead to fluctuations of their physico-chemical, structural, or energetical states, that could in part impact cell proliferation. These heparinised supports also seemed to influence the secretion of extracellular matrix proteins, but not of matrix metalloproteinases. Our coagulation studies demonstrate that heparinized supports acquire anticoagulant properties starting with the lowest amounts of fixed heparin
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Gomez, Delphine. "Reprogrammation épigénétique des cellules musculaires lisses aortiques : application au remodelage anevrysmal." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077269.
Full textAbstract:
L'anévrysme de l'aorte thoracique (TAA) est une dilatation chronique de la paroi aortique. Il se caractérise par une dégradation de la matrice extracellulaire et la raréfaction en cellules musculaires lisses (CML). Ces manifestations sont communes à tous les TAA (génétiques ou non génétiques). Notre hypothèse est qu'au monomorphisme tissulaire s'ajoute un ensemble de perturbations cellulaires et moléculaires communes. Ainsi, une dérégulation de la voie TGF-pl/Smad a été suspectée. Nous démontrons que l'activation de la voie Smad2 est un événement commun à tous les types de TAA. Cette activation est indépendante du TGF-pl. Ce travail met en évidence le contrôle de la dérégulation Smad2 par un mécanisme épigénétique. La régulation épigénétique, qui maîtrise à la fois la surexpression et l'activation de Smad2 confère des propriétés uniques : autonomisation, héritabilité, stabilité, spécificité cellulaire. Ce mécanisme entraine l'activation du gène SMAD2 par la modification du code histone et le recrutement de facteurs nucléaires (p53). L'ensemble de ce processus entraîne une modulation phénotypique de la CML anévrysmale. Smad2, en tant que facteur de transcription, induit la surexpression d'inhibiteurs de protéase. Cette modification du profil d'expression de la CML conduit à l'établissement d'un phénotype protecteur anti-apoptotique. En conclusion, ce travail démontre l'instauration d'une régulation épigénétique de la voie Smad2 et d'une reprogrammation épigénétique de la cellule musculaire lisse anévrysmale. Cette étude permet une meilleure compréhension de l'impact de la signalisation Smad2 et de l'importance des processus chroniques compensatoires dans la CML anévrysmaleThoracic aortic aneurysm (TAA) is a chronic dilatation of the aortic wall. It is characterized by the extracellular matrix degradation and Smooth Muscle Cell (SMC) rarefaction. These features are common to ail types of TAA (genetic and non genetic forms). Our hypothesis is that there is, in addition to the tissue features, common cellular and molecular perturbations in TAA. Thus, the dysregulation of the TGF-pl/Smad pathway was predicted. We demonstrated a common activation of Smad2 in TAA, whatever the etiology. This activation is independent of TGF-pl. This work demonstrates that the Smad2 perturbation is controlled by an epigenetic mechanism. The epigenetic regulation of both activation and expression of Smad2 confers properties such as autonomization, heritability, stability and cell specificity. This mechanism induces SMAD2 activation by both histone code modification and transcription factor recruitment (p53). This process leads to a phenotypic switch of the aneurysmal SMC. Smad2, as a transcriptional factor, induces the overexpression of protease inhibitors and causes the development of an anti-apoptotic protective phenotype. In conclusion, we demonstrate the involvement of an epigenetic regulation of the Smad2 pathway and the phenotypic modulation of the aneurysmal SMC. This study underlines the impact of the Smad2 signaling pathway and the importance of chronic compensatory processes in the aneurysmal SMC
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Mohamadi, Amel. "Rôle des cellules musculaires lisses vasculaires et des intégrines dans la génération de thrombine dans le compartiment sanguin et vasculaire." Thesis, Université de Lorraine, 2016. http://www.theses.fr/2016LORR0339/document.
Full textAbstract:
Une des propriétés majeures de la thrombine est le caractère pléiotropique de ses effets physiologiques et pathologiques, à la fois dans le compartiment sanguin et tissulaire de la paroi. Notre hypothèse est que les changements phénotypiques des cellules musculaires lisses vasculaires (CMLVs) participent aux modifications des propriétés pro- et anticoagulantes de la paroi. Les objectifs ont été d’étudier : (i) le rôle prothrombotique des CMLVs dans l’hypertension chez le rat SHR et le syndrome métabolique (Smet) chez le rat Zucker, (ii) les mécanismes de régulation de la génération de thrombine par l’intégrine αvβ3 des CMLVs (récepteur de la pro- thrombine), et de développer des glyco-peptides fluorés pour l’imagerie permettant d’évaluer l’activité de cette intégrine dans la paroi, et (iii) d’évaluer l’effet de variants génétiques du locus 9p21 de susceptibilité aux maladies coronariennes sur le phénotype de coagulation. Résultats : Les CMLVs sont responsables du phénotype prothrombotique de la paroi artérielle associée à l’hypertension chez le rat SHR. Les acides gras libres et l’inflammation vasculaire augmentent la génération de thrombine dans les 2 compartiments ce qui se traduit par une fibrinolyse diminuée et une activité métallo-protéinase augmentée chez Le rat Zucker. L’invalidation de l’intégrine αvβ3 des CMLVs diminue la génération de thrombine dans les 2 compartiments et ralentit la survenue de thrombose carotidienne en réponse à une stimulation l’angiotensine. Le traçage de l’intégrine αvβ3 par des glyco-peptides comprenant une séquence RGD a été validé au niveau plaquettaire et des CMLVs. La souris invalidée pour le locus 9p21 exprime un phénotype pro-thrombotique qui est retrouvé chez l’homme pour certains variants (rs10120688 et rs1333040) dans ce locus. En conclusion, la CML est un support cellulaire clé de réactions procoagulants et pourrait être impliqué via les intégrines et/ou ses récepteurs pour la thrombine dans un couplage thrombine tissulaire – rigidité cellulaire dans les pathologies vasculairesOne of the major properties of thrombin is the pleiotropic character of its physiological and pathological effects, both in the blood compartment and the tissue of the arterial wall. We hypothesized that the phenotypic changes of vascular smooth muscle cells (VSMCs) are involved in modifications of pro- and anti-coagulant properties of the arterial wall. The objectives were to examine: (i) the prothrombotic role of VSMCs in hypertension of SHR rats and in the metabolic syndrome (Smet) of Zucker rats, (ii) regulatory mechanisms of thrombin generation by integrin αvβ3 of VSMCs (a pro-thrombin receptor), and to develop fluorinated glyco- peptides for imaging, to assess the activity of this integrin in the wall, and (iii) evaluate the effect of genetic variants of the 9p21 locus that give a susceptibility to coronary heart disease on the coagulation phenotype. Results: The VSMCs are responsible for the prothrombotic phenotype of the arterial wall associated with hypertension in SHR rats. Free fatty acids and vascular inflammation increase thrombin generation in the two compartments resulting in decreased fibrinolysis and an increased metallo-proteinase activity in the Zucker rats. The invalidation of integrin αvβ3 of VSMCs reduced thrombin generation in the two compartments and slowed angiotensin-induced carotid thrombosis. Tracing of the integrin αvβ3 by glyco-peptides including RGD was validated at the platelet level and VSMCs. Mice invalidated for the 9p21 locus express a prothrombotic phenotype that is found in humans for certain variants (rs10120688 and rs1333040) in this locus. In conclusion, the VSMC is a cell supported key to procoagulant reactions and may be involved via integrins and/or its receptors for thrombin in the ”tissular thrombin - cell rigidity” coupling in vascular pathologies
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Lévesque, Lucie. "Étude des effets de contraintes dynamiques sur l'organisation d'échafaudage collagène-cellules." Master's thesis, Université Laval, 2017. http://hdl.handle.net/20.500.11794/27637.
Full textAbstract:
Au cours des trente dernières années, l’ingénierie du tissu vasculaire a connu un essor considérable dû à un besoin clinique important de greffons vasculaires adéquats pour le remplacement d’artères de faible diamètre. En effet, les greffes autologues ou synthétiques actuels de faible diamètre s’accompagnent souvent d’une défaillance à l’intérieur de 5 à 10 ans. Malgré les efforts injectés dans les dernières années, la translation vers la clinique d’artères régénérées ne connait pas les résultats escomptés. L’un des défis majeur dans l’ingénierie tissulaire est le contrôle des fonctions cellulaires qui dicte la maturation des constructions. De nombreuses études ont été menées sur la réponse des cellules musculaires lisses (abréviation en anglais : SMC désignant «smooth muscle cell») en 2D sous contrainte cyclique, mais peu ont examiné l'effet de la contrainte cyclique sur les SMC en 3D afin d'optimiser les stratégies de contrôle de bioréacteurs pour la maturation et régénération des tissus. Ainsi, ce projet de recherche vise à faire l’étude des effets de stimuli mécaniques cycliques sur des échafaudages cellularisés de collagène. Le collagène a été utilisé comme échafaudage dû à ses excellentes propriétés biologiques et aussi car il est présent dans la paroi des artères physiologiques. Un système permettant d’imposer des stimuli mécaniques cycliques en 2D aux constructions 3D de collagène cellularisées a donc été développé. Les contraintes cycliques ont révélé une orientation préférentielle des cellules dans le sens de la contrainte, ainsi qu’une orientation des fibrilles de collagène dans ce même sens par les cellules. De plus, le remodelage effectué par les cellules a permis d’augmenter les propriétés viscoélastiques de la construction et d’obtenir un comportement mécanique à la relaxation de contrainte semblable aux veines saphènes. Les cellules ont également démontré une désensibilisation face aux contraintes cycliques. Cette recherche a ainsi permis de répondre à certaines questions reliées aux comportements cellulaires dans un environnement 3D sous condition de stimulation mécanique. L’approfondissement des connaissances des comportements cellulaires en environnement 3D sous contrainte cyclique demeurent un défi clé dans l’obtention d’artères régénérées ayant des propriétés physiologiques similaires à celles d’artères natives.In the last thirty years, vascular tissue engineering has emerged as an important field in tissue engineering due to a significant clinical need for adequate vascular graft for replacement of small diameter artery. Indeed, the current autologous or synthetic grafts of small diameter present a high failure rate within 5 to 10 years. Despite the efforts injected in the recent years, the clinical translation of engineered artery constructs is far from being successful. One of the challenges encountered in tissue engineering is the control of cellular functions that dictates the maturation of tissue engineering constructs. Furthermore, numerous studies have been conducted on the response of smooth muscle cells (SMC) in 2D under cyclic strain, but a few have examined the effect of cyclic strain on SMCs in 3D to optimize the control strategies of bioreactors for tissue maturation and generation. Thus, this research project aims to study the effects of cyclic mechanical stimuli on cellularised collagen scaffolds. Collagen has been used as a scaffold due to its excellent biological properties and since it is found in the wall of physiological arteries. A system for imposing cyclic mechanical stimuli in 2D to 3D cellularised collagen constructs was therefore developed. The cyclic stresses revealed a preferential orientation of the cells in the direction of the strain, as well as an orientation by the cells of the collagen fibrils in the same direction. Moreover, the remodeling performed by the cells led to an improvement of the viscoelastic properties of the construct and to a mechanical behavior similar to the saphenous vein under stress-relaxation. The cells also shown a desensitization to cyclic mechanical stimuli. Thus, this research allowed to answer some of the questions related to cellular behavior in a 3D environment under mechanical stimulation. Deepening our knowledge of cell behavior in 3D environment under cyclic mechanical stimuli remains a key challenge in obtaining regenerated artery with similar physiological properties than native arteries.
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Hénaut, Lucie. "Implication du récepteur sensible au calcium exprimé par les cellules musculaires lisses aortiques dans la prévention des calcifications vasculaires." Amiens, 2013. http://www.theses.fr/2013AMIED010.
Full textAbstract:
La calcification vasculaire (CV) est un processus fréquent de dégénérescence vasculaire qui compromet l’intégrité des vaisseaux et augmente le risque de mortalité par accidents cardiovasculaires. Le calcium et le phosphate sont des agents à fort pouvoir pro-calcifiant. Ainsi, le dysfonctionnement du métabolisme phosphocalcique est un facteur de risque majeur de développer des CV. Au niveau des cellules parathyroïdiennes, l’activation du récepteur sensible au calcium (CaSR) régule la synthèse et la sécrétion de la parathormone (PTH) en réponse à des variations de la calcémie. Ce récepteur apparaît donc comme une cible thérapeutique de choix dans le contrôle du métabolisme phosphocalcique. Actuellement, le calcimimétique Cinacalcet®, un modulateur allostérique du CaSR parathyroïdien, est utilisé en thérapeutique pour réguler les désordres phosphocalciques observés chez les patients atteints d’insuffisance rénale chronique (IRC). Cette action pourrait atténuer le développement des CV. De nombreuses études suggèrent que l’activation locale par les calcimimétiques du CaSR exprimé par les cellules musculaires lisses vasculaires (CMLV) pourrait réduire le développement des CV. Cependant, les mécanismes impliqués n’ont pas encore été élucidés. L’objectif de ce travail était d’identifier les mécanismes cellulaires et moléculaires par lesquels l’activation locale du CaSR protège les CMLV de la calcification. Afin de répondre à cet objectif, nous avons développé un modèle de calcification in vitro de CMLV isolées à partir d’aortes humaines (CMLVh). Nous démontrons que l’exposition des CMLVh à des concentrations élevées de calcium extracellulaire favorise la sécrétion d’une matrice collagénique, siège de la calcification. Dans ces conditions pro-calcifiantes, l’ajout de calcimimétiques (AMG 641 ou R-568) ralentit la sécrétion de matrice, réduisant ainsi la formation de la calcification. Ces données confirment qu’en dehors de son action systémique régulatrice des désordres phosphocalciques, le CaSR, lorsqu’il est activé au niveau des CMLVh bloque localement la sécrétion de collagène de type I, inhibant ainsi la formation minérale. Enfin, l’usage des calcimimétiques favorise l’expression du CaSR à la surface des CMLVh, bloquant ainsi la perte d’expression du CaSR observée en conditions pro-calcifiantes, ce qui pourrait amplifier les effets protecteurs observés sur la formation du dépôt minéral.
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Hodroj, Wassim. "Étude comparative de l'angiotensine II et de l'angiotensine IV in vitro au niveau des cellules musculaires lisses vasculaires humaines : caractérisation fonctionnelle des effets de l'angiotensine IV sur le transport de glucose insulino-dépendant." Lyon 1, 2007. http://www.theses.fr/2007LYO10138.
Full text
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Bérard, Annie. "Activités réductases des cellules musculaires lisses vasculaires sur les dérivés monohydroxylés, et signalisation inter-cellulaire." Bordeaux 2, 1993. http://www.theses.fr/1993BOR2P030.
Full text
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André, Gwennan. "Rôles de la protéine G monomérique Rac1 in vivo dans les cellules musculaires lisses : implications en physiopathologies vasculaires, bronchiques et digestives." Nantes, 2013. http://www.theses.fr/2013NANT28VS.
Full textAbstract:
La protéine G monomérique Rac1 est une protéine de signalisation connue pour réguler des fonctions clés des cellules musculaires lisses (CML) in vitro. L'objectif de ma thèse a été d'identifier le rôle in vivo de Rac1 dans ces cellules. Pour cela, nous avons développé un nouveau modèle murin permettant une délétion inductible du gène Rac1 spécifiquement dans les CML (souris SM-Rac1-KO). La caractérisation phénotypique de ces animaux a permis de mettre en évidence que la déficience en Rac1 dans les CML vasculaires induit une augmentation de la pression artérielle. Cette hypertension se définit par une altération de la voie de signalisation NO/cGMP et une perte d’inhibition de la protéine contractile RhoA par son régulateur p116RIP3. Nous avons ainsi pu mettre en évidence que la protéine Rac1 est un régulateur de la contraction des CML vasculaires et joue un rôle important dans le contrôle de la pression artérielle. A l'inverse, nous avons observé que les souris SM-Rac1-KO présentent une diminution de la broncho-réactivité. Mes résultats mettent en évidence que Rac1, dans les CML des voies aériennes, participe à l'augmentation de la concentration calcique intracellulaire nécessaire à la broncho-constriction. De plus, nous avons démontré que dans un modèle d'asthme allergique, la baisse d'expression ou d'activité de Rac1 dans les CML aériennes prévient l'hyper-réactivité bronchique caractéristique de la pathologie. L'appareil digestif est également un système riche en CML et nos premiers résultats montre une altération du transit intestinal chez les souris SM-Rac1-KO qui se traduit par un arrêt de la prise de poids des animaux après l'induction de la délétion de Rac1 dans les CML. L'ensemble de ce travail démontre que Rac1 joue un rôle essentiel dans la contraction des CML. Mes résultats mettent en évidence que les voies de signalisation contrôlées par Rac1 diffèrent en fonction de l'origine des CML, ce qui mène à des effets différents de Rac1 sur les niveaux de contraction des CML.
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Lacape, Geneviève. "Contribution à l'étude d'un mécanisme d'information transcellulaire : le métabolisme d'acides gras hydroxyles par les cellules musculaires lisses vasculaires." Bordeaux 2, 1992. http://www.theses.fr/1992BOR2B001.
Full text
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Herbert, Jean-Marc. "Effet des polysaccharides sulfates sur la proliferation des cellules musculaires lisses vasculaires en culture." Clermont-Ferrand 2, 1986. http://www.theses.fr/1986CLF21019.
Full textAbstract:
Les polysaccharides sulfates presentent d'importants effets regulateurs de la proliferation des cellules vasculaires en culture. L'heparine, le polysulfate de pentosane et les fractions qui en sont derivees, inhibent la croissance cellulaire. Ces effets apparaissent a des concentrations qui peuvent etre atteintes apres injection parenterale
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Poulette, Sylvie. "Recepteurs des angiotensines et des kinines des cellules musculaires lisses artérielles en culture : rôle des kinines sur le trophisme des cellules artérielles." Bordeaux 2, 1995. http://www.theses.fr/1995BOR28382.
Full text
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Dilasser, Florian. "Rôle in vivo de la protéine G monomérique Rac1 dans les cellules musculaires lisses de la sphère pulmonaire : implications en physiopathologies bronchiques et vasculaires." Thesis, Nantes, 2018. http://www.theses.fr/2018NANT1026.
Full textAbstract:
La fonction majeure des cellules musculaires lisses (CML) est la contraction. Dans certaines situations pathologiques, une dérégulation des CMLs conduit à une hyperréactivité et à leur dédifférenciation menant à un remodelage tissulaire. La protéine Rac1 régule in vitro des fonctions essentielles aux CMLs. L’objectif de ma thèse a été de déterminer le rôle de Rac1 in vivo dans les CMLs pulmonaires (bronchiques et vasculaires) et son importance dans le développement de pathologies. La mise en place de modèles expérimentaux m’a permis de mettre en évidence une hyperactivité de Rac1 dans les CMLs bronchiques de souris asthmatiques et dans les CMLs d’artères pulmonaires (AP) de souris atteintes d’hypertension artérielle pulmonaire (HTAP). Par des approches in vivo et in vitro, j’ai démontré que Rac1 joue un rôle essentiel dans la contraction et la prolifération des CMLs bronchiques. A l’inverse, mes résultats démontrent que Rac1 dans les CMLs vasculaires pulmonaires est impliquée dans la production d’espèces réactives de l’oxygène induisant la prolifération des CMLs et le remodelage des AP associé à l’HTAP. Mes résultats démontrent un rôle différent de Rac1 en fonction de l’origine des CMLs mais identifient Rac1 comme une cible thérapeutique pour les pathologies associées à une hyperréactivité et/ou à un remodelage des CMLs. Un screening in silico, des tests in vitro et ex vivo, nous ont permis d’identifier un inhibiteur de Rac1 : la molécule A41. La nébulisation de l’A41 prévient l’hyperréactivité ainsi que le remodelage bronchique chez les souris asthmatiques, confirmant nos résultats sur le rôle de Rac1 dans l’asthme allergique et son intérêt thérapeutiqueContraction is the major function of smooth muscle cells (SMC). In certain pathological situations, SMCs deregulation leads to hyperreactivity and dedifferentiation promoting tissue remodeling. The Rac1 protein regulates in vitro essential SMCs functions. The objective of my thesis was to determine the role of Rac1 in vivo in pulmonary SMCs (bronchial and vascular) and its importance in the development of pathologies. The implementation of experimental models allowed me to highlight Rac1 hyperactivity in bronchial SMCs from asthmatic mice and in pulmonary artery (PA) SMCs from mice with pulmonary hypertension (PAH). Through in vivo and in vitro approaches, I have demonstrated that Rac1 plays an essential role in the contraction and proliferation of bronchial SMCs. Conversely, my results show that Rac1 in pulmonary vascular SMCs is involved in the production of reactive oxygen species inducing SMCs proliferation and PA remodeling associated with PAH. My results demonstrate a different role of Rac1 depending on the origin of SMCs but identify Rac1 as a therapeutic target for pathologies associated with hyperreactivity and/or remodeling of SMCs. An in silico screening, in vitro and ex vivo tests, allowed us to identify a Rac1 inhibitor: the A41 molecule. Nebulization of A41 prevents hyperreactivity and bronchial remodeling in asthmatic mice, confirming our results on the role of Rac1 in allergic asthma and its therapeutic interest
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Renault, Marie-Ange. "Mécanisme de régulation de l'expression de l'ostéopontine dans les cellules musculaires lisses artérielles : rôle de l'ostéopontine dans l'angiogénèse." Bordeaux 2, 2004. http://www.theses.fr/2004BOR21135.
Full textAbstract:
L'ostéopontine (OPN) est une protéine surexprimée au cours des processus de remodelage vasculaire. Dans le cadre de la caractérisation du rôle de l'OPN et des nucléotides extracellulaires dans la migration des cellules musculaires lisses artérielles, mon travail de thèse a été 1) de déterminer les mécanismes impliqués dans la régulation de l'expression de l'OPN par l'UTP et 2) de démontrer le rôle de l'OPN dans l'angiogenèse in vivo. L'étude du promoteur de l'OPN nous a montré que AP-1, USF et NF-Kb sont impliqués dans l'expression de l'OPN induite par l'UTP. AP-1 et USF sont activés via les ERK 1/2 et NF -kB via la PKCdelta. Nous avons aussi comparé la signalisation mise en jeu dans la régulation de l'expression de l'OPN par l'UTP, l'angiotensine II et le PDGF. A l'aide du modèle d'ischémie de la patte chez la souris, nous avons démontré que l'angiogenèse est réduite chez les souris OPN-/- par rapport aux sauvages et que sa cinétique varie avec le sexeOsteopontin (OPN) is a protein, which has been largely involved in vascular remodeling. We are interested in understanding the mechanisms involved in SMC migration and the role of extracellular nucleotides. In this context, the aims of my PhD. Work was 1) to understand the mechanisms involved in UTP-induced OPN expression in aortic smooth muscle cells and 2) to demonstrate the role of OPN in angiogenesis in vivo. I showed, by using promoter analysis methods, that at least three transcription factors (AP-1, USF, NF-kB) are involved in UTP-induced OPN expression. AP-1 and USF are activated via ERK 1/2 whereas NF-kB is activated via PKCdelta. Moreover this study compares transduction pathways involved in UTP, angiotensin II and PDGF-induced OPN expression. The role of OPN in angiogenesis was demonsttrated using hindlimb ischemia mouse model. I put into evidence that angiogenesis was delayed in OPN-/- mice versus C57BL/6 mice ; moreover I showed that its kinetic is different in male and female
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Zhang, Liang. "Évaluation du rôle de nouvelles isoformes de PDE dans la compartimentation des nucléotides cycliques dans les cellules musculaires lisses vasculaires et les cardiomyocytes." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2017. http://www.theses.fr/2017SACLS290.
Full textAbstract:
Les deux nucléotides cycliques, AMPc et GMPc, sont des seconds messagers importants qui régulent une grande variété de fonctions cellulaires, en particulier la fonction contractile cardiovasculaire, la croissance des cardiomyocytaires et la prolifération des cellules musculaires lisses vasculaires. Les phosphodiestérases (PDE) dégradent les nucléotides cycliques et exercent un contrôle local de leur concentration intracellulaire. Une altération de la voie de signalisation des nucléotides cycliques est impliquée dans plusieurs situations pathologiques telles que l’hypertension artérielle systémique ou pulmonaire, l’athérosclérose et l'hypertrophie cardiaque. Ainsi, les PDE constituent de puissantes cibles thérapeutiques pour restaurer un contrôle correct des nucléotides cycliques. Onze familles de PDEs sont actuellement décrites, les PDE1-6 étant les plus étudiées et les PDE 7-11 représentant de nouvelles familles.L'objectif de cette thèse était d'étudier le rôle respectif de 4 familles de PDEs, la PDE1, famille stimulée par le complexe Ca2+/calmoduline, les PDE5 et PDE9 spécifiques du GMPc, et la PDE8 spécifique de l'AMPc, dans le contrôle des concentrations intracellulaires d'AMPc ([AMPc]i) et de GMPc ([GMPc]i) dans les cellules musculaires lisses aortiques de rat (CMLARs) et les myocytes cardiaques de rat en utilisant une approche pharmacologique facilitée par le développement de nouveaux inhibiteurs sélectifs de PDEs. Les activités d'hydrolyse d’AMPc et de GMPc ont été mesurées par dosage enzymatique, tandis que les [AMPc]i et [GMPc]i ont été suivies sur cellules isolées, in situ, en temps réel, grâce à l'utilisation de l'imagerie FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer). Dans les CMLARs en culture, une activité d'hydrolyse des nucléotides cycliques via les PDE1, PDE5 et PDE9 a été observée. Nous avons montré un rôle fonctionnel de la PDE1 non stimulée dans le contrôle de l’augmentation de la [GMPc]i induite par le peptide natriurétique de type C (CNP). Il est intéressant de noter que, lors de l’élévation de la concentration intracellulaire en Ca2+, la PDE1 exerce également un contrôle de la réponse GMPci induite par le monoxyde d’azote (NO) et de la réponse AMPc médiée par la stimulation des récepteurs β-adrénergiques (β-AR). La PDE5 exerce un rôle majeur dans la réponse GMPc provoquée par l'activation de la guanylyl cyclase (GC) soluble par le NO ou des GC membranaires par les peptides natriurétiques, CNP et ANP. En revanche, la PDE9 ne régule que la réponse GMPc induite par le NO dans les RASMC cultivées. Aucune activité ou fonction hydrolytique de l'AMPc n'a été révélée avec l'inhibiteur de la PDE8 dans les CMLARs ou les cardiomyocytes de rat. Dans ces cellules cardiaques, l'activité d'hydrolyse médiée par la PDE1 n'a été détectée que sur la réponse GMPc et uniquement en présence de Ca2 +/Calmoduline. L'inhibiteur de la PDE1 n'a que légèrement affecté la réponse AMPc médiée par les récepteurs β-AR, par augmentation du pic du signal FRET.En conclusion, notre travail démontre que dans les cellules musculaires lisses vasculaires, les PDE1, PDE5 et PDE9 exercent une régulation spécifique et locale des [AMPc]i et [GMPc]i, renforçant le rôle clé des PDEs dans la compartimentation subcellulaire de la signalisation des nucléotides cycliquesThe two cyclic nucleotides cAMP and cGMP are important second messengers that regulate a large variety of cellular functions, in particular cardiovascular contractile function, cardiomyocyte cell growth and vascular smooth muscle cell proliferation. Phosphodiesterases (PDEs) degrade cyclic nucleotides, and exert a fine local control of their intracellular concentration. Alteration of cyclic nucleotides signaling pathway is involved in several pathological situations such as systemic and pulmonary arterial hypertensions, atherosclerotic lesions and cardiac hypertrophy. Thus, PDEs constitute potent therapeutic targets to restore a right cyclic nucleotide function. Eleven families of PDEs are now described, PDE1-6 being the most studied and PDE 7-11 representing the new families.The aim of the present thesis was to investigate the respective role of 4 PDE families, the Ca2+/calmodulin-stimulated PDE1, the cGMP-specific PDE5 and PDE9, and the cAMP-specific PDE8, in controlling intracellular cAMP ([cAMP]i) and intracellular cGMP ([cGMP]i) concentrations in both rat aortic smooth muscle cells (RASMCs) and cardiac myocytes by using a pharmacological approach taken advantage of the development of new selective PDE inhibitors. Cyclic AMP- and cGMP-hydrolyzing activities were measured by enzymatic assay on cell lysate, whereas real-time [cAMP]i and [cGMP]i were followed in situ in isolated cells using Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET) imaging. In cultured RASMCs, PDE1, PDE5 and PDE9 hydrolyzing activities were observed. We showed a functional role of basal PDE1 in controlling [cGMP]i increased by the C-type Natriuretic Peptide (CNP). Interestingly, upon high intracellular Ca2+ concentration, PDE1 also regulated the Nitric Oxide (NO)-mediated [cGMP]i response and the β-adrenoceptor (β-AR)-mediated [cAMP]i response. PDE5 exerted a major role in degrading [cGMP]i produced by the activation of either the soluble guanylyl cyclase (GC) elicited by NO or the particulate GCs by the natriuretic peptides, CNP and ANP. By contrast, PDE9 only regulated NO-induced [cGMP]i increase in cultured RASMCs. No cAMP-hydrolyzing activity or function was revealed with the PDE8 inhibitor in RASMCs or cardiac myocytes. In rat cardiomyocytes, PDE1-mediated hydrolyzing activity was only detected on cGMP in the presence of Ca2+/calmodulin. Unexpectedly, PDE1 inhibition slightly affected the β-AR-mediated [cAMP]i response by increasing the peak of FRET signal.In conclusion, our work underscores the distinct role of PDE1, PDE5, and PDE9 in locally regulating the [cAMP]i and [cGMP]i, in vascular smooth muscle cells, strengthening the concept of PDEs as key actors of cyclic nucleotide subcellular compartmentation
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Schordan, Eric. "Implication de la protéine apparentée à l'hormone parathyroïdienne (PTHrP) dans la prolifération des cellules musculaires lisses vasculaires et identification d'une cible nucléaire de la PTHrP." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2005. https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2005/SCHORDAN_Eric_2005.pdf.
Full textAbstract:
In vivo, les cellules musculaires lisses vasculaires sont continuellement soumises au stretch mécanique. Dans des conditions pathologiques, ce stretch mécanique est augmenté et participe au remodelage vasculaire. Notre laboratoire avait montré que la PTHrP exerce des effets paradoxaux sur la prolifération des CMLV, à savoir une inhibition auto/paracrine et une stimulation intracrine. Dans cette étude, des CMLV issus de vaisseaux de résistance (rein) et de conductance (aorte) ont été utilisées. Le rôle de la PTHrP sur la prolifération des CMLV stretchées a été appréhendé. Nous montrons que l'expression de PTHrP est augmentée en réponse au stretch mécanique et qu'elle s'oppose par un mécanisme intracrine à l'effet inhibiteur du stretch sur la prolifération. De plus, nous montrons que l'expression de la PTHrP est contrôlée de façon post transcriptionnelle par le stretch mécanique. Ces résultats suggèrent que la PTHrP pourrait jouer un important rôle dans la modulation de la prolifération des CMLV en réponse au stretch mécanique. L'élucidation des voies intracrines de la PTHrP est un enjeu de taille. Les précédents modèles n'ont pu être utilisés pour étudier les effets de la PTHrP endogène. Pour cela, des cultures de CMLV ont été obtenues à partir de souris transgéniques dont l'exon 4 de la PTHrP a été " floxé ". Ces cellules ont été transféctées par la Cre recombinase pour exciser le gène de la PTHrP et étudier les effets de la PTHrP endogène ainsi que les effets de la PTHrP auto/paracrine et intracrine par la transfection de différentes constructions de PTHrP. Une des cibles nucléaires identifiées est la culline 3, impliquée dans la dégradation de la cycline E, Nrf2 et la Topoisomérase I. Son expression est stimulée dans les CMLV en réponse à la PTHrP comprenant la SLN et le stretch mécanique, ainsi que dans les carcinomes rénaux à cellules claires surexprimant la PTHrP, suggérant une possible implication de la PTHrP et la culline 3 dans la cancérogénèseIn vivo, vascular smooth muscle cells (VSMC) are continuously exposed to mechanical cyclic stretch due to the pulsatile blood flow from the cardiac contractile cycle. Stretch is altered in pathological conditions and contribute to vascular remodeling by modulating VSMC proliferation and death. We have previously shown that PTHrP inhibits VSMC proliferation through the auto/paracrine pathway but stimulates VSMC proliferation through the intracrine pathway by translocating into the nucleus. Here we used VSMC isolated from both resistance and compliance vessels to study the role of PTHrP in VSMC proliferation under experimental stretch. We show that PTHrP gene expression is up-regulated by stretch and that PTHrP opposes the inhibitory effect induced by stretch on VSMC proliferation through the intracrine pathway. In addition, we demonstrate that PTHrP expression is controlled at the post-transcriptional level by stretch. These results strongly suggest that PTHrP plays a critical role in the modulation of VSMC proliferation in response to stretch. Elucidation of intracrine pathway of PTHrP is a reel challenge, nothing is known for years. Previous models are unable to define effect of endogenous PTHrP. Here, I used primary VSMC derived from transgenic mice in which exon 4 of the PTHrP was floxed. These cells were transfected with a Cre recombiase to obtain PTHrP null cells. Then it was possible to study endogenous PTHrP and intracrine or paracrine effect of PTHrP with transfection of different mutant construction. One of the nuclear target identified was the cullin-3 which is implicated in degradation of the cycle E, Nrf2 and the topoisomerase I. Cullin 3 expression is upregulated in VSMC both in response of transfection with PTHrP and mechanical stretch but not with transfection with a mutant PTHrP without the nuclear localization signal and in clear cell renal carcinoma which strongly expressed PTHrP indicating a possible implication of PTHrP and cullin 3 in cancer
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Régent, Alexis. "Étude du rôle des cellules musculaires lisses vasculaires (CMLV) et des anticorps anti-CMLV dans la pathogénie de l’artérite à cellules géantes (maladie de Horton)." Thesis, Paris 5, 2014. http://www.theses.fr/2014PA05S021/document.
Full textAbstract:
Rationnel : L’artérite à cellules géantes (ACG) est une vascularite primitive des gros vaisseaux dont le diagnostic repose sur la mise en évidence d’un infiltrat inflammatoire et de cellules géantes à la biopsie d’artère temporale (BAT). On note également un remodelage de la paroi vasculaire lié à une prolifération des cellules musculaires lisses vasculaires (CMLV) pouvant aboutir à une occlusion artérielle. Objectif : Caractériser les auto-anticorps dirigés contre les cellules endothéliales (CE) et les CMLV au cours de l’ACG et préciser le rôle des CMLV dans le remodelage pariétal. Méthodes : La recherche d’auto-anticorps a reposé sur un immunoblot 2D couplé à la spectrométrie de masse. Les protéomes des CMLV d’artère ombilicale, d’artère pulmonaire et d’aorte humaines normales a été comparés par protéomique différentielle (2D-DIGE). Nous avons utilisé la 2D-DIGE et des puces d’expression pan-génomiques pour comparer les CMLV issues de BAT de patients suspects d’ACG (avec un diagnostic final d’ACG ou non), afin d’identifier les mécanismes contribuant à la prolifération des CMLV. Résultats : Chez 15 patients atteints d’ACG, nous avons notamment identifié la lamine, la vinculine et l’annexine A5 comme cible des auto-anticorps anti-CMLV. Les antigènes cibles identifiés sont liés à Grb2, une protéine adaptatrice impliquée dans la prolifération des CMLV. Nous avons mis en évidence des protéomes différents au sein des CMLV humaines normales selon leur origine vasculaire et avons principalement identifié des protéines du cytosquelette et du métabolisme énergétique.A partir des CMLV isolées des BAT et à l’aide d’Ingenuity®, nous avons identifié l’endothéline 1 (ET-1) et la paxilline comme des molécules impliquées dans le remodelage vasculaire. En immunohistochimie et par qPCR, nous avons confirmé l’expression de l’ET-1 et de ses récepteurs ETAR et ETBR au sein des artères temporales de patients atteints d’ACG. Enfin, nous avons inhibé la prolifération des CMLV avec du macitentan, un inhibiteur d’ETAR et en particulier avec son métabolite actif, mais pas avec d’autres inhibiteurs des récepteurs de l’ET-1. Conclusion : Nous avons identifié chez les patients atteints d’ACG des anticorps anti-CMLV dont le rôle pathogéne potentiel reste à définir. Les différences protéiques observées à partir des CMLV humaines normales pourraient correspondre à des phénotypes différents. A partir d’un matériel biologique unique, nous avons pu montrer que la prolifération excessive des CMLV au cours de l’ACG pouvait être inhibée par le macitentan ce qui permet d’envisager un usage thérapeutique de cette moléculeBackground : Giant cell arteritis (GCA) is a large vessel vasculitis and its diagnosis usually relies on the identification of an inflammatory infiltrate made of mononuclear cells and giant cells upon temporal artery biopsy. There is also a remodeling process in the arterial wall due to an excessive proliferation of vascular smooth muscle cells (VSMC) which can sometimes lead to arterial occlusion. Purpose: Identify auto-antibodies targeting either endothelial cells (EC) and/or VSMC during GCA and better understand the role of VSMC in the remodeling process. Methods : Auto-antibodies were detected by a 2-dimensionnal immunoblot and their target antigens were identified by mass spectrometry. Proteoms of umbilical artery, pulmonary artery and aorta VSMC were compared by 2 dimension differential in gel electrophoresis (2D-DIGE). In order to identify mechanisms involved in VSMC proliferation in GCA, we used both 2D-DIGE and pan genomic chips in order to compare VSMC isolated at the time of temporal artery biopsy (TAB) from patients with a final diagnosis of GCA or another diagnosis. Results : In 15 patients with GCA, we identified lamin, vinculin and Annexin A5 as target antigens of anti-VSMC antibodies. Target antigens were linked with Grb2, an adaptator protein involved in VSMC proliferation. Normal VSMC originating from different vascular beds have differ in protein contents with differential expression of cytoskeleton and energy metabolism proteins. We compared VSMC from TAB with Ingenuity software and identified endothelin-1 (ET-1) and paxillin as proteins involved in vessel remodeling. We confirmed by immunohistichemistry and qPCR that ET-1 and its receptor ETAR and ETBR were expressed in temporal arteries from patients with GCA. Last, we reduced VSMC proliferation with Macitentan, an ETAR and ETBR antagonist and significantly inhibited VSMC proliferation with its active metabolite whereas other ET-1 inhibitors had no effect. Conclusion : We identified anti-VSMC auto-antibodies in patients with GCA. Their pathogenic role remains to be determined. Normal VSMC from different vascular locations differ in protein conten which might reflect different phenotypes and different properties. The escessive proliferation of VSMC from patients with GCA was inhibited by Macitentan. This drug might constitute a future therapeutic option
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Said, Rose. "Caractérisation des propriétés pro- et anti-coagulantes associées aux cellules musculaires lisses vasculaires." Thesis, Université de Lorraine, 2012. http://www.theses.fr/2012LORR0004/document.
Full textAbstract:
L'objectif principal de ce travail était de comparer l'implication (i) de cellules vasculaires, cellules musculaires lisses vasculaires (CML) et cellules endothéliales (CE), ou des cellules circulantes, les plaquettes, et (ii) des microparticules (MP) issues de ces différentes cellules dans la génération de la thrombine mais également dans son inhibition par les systèmes anticoagulants de la protéine C activée (PCa) et de l'inhibiteur de la voie du facteur tissulaire (TFPI), et d'identifier les mécanismes et les déterminants responsables des différences observées entre ces supports cellulaires pour la coagulation. Nous avons démontré que l'intégrine [alpha]v[gamma]3 qui est le récepteur pour la prothrombine sur les surfaces vasculaires était impliquée dans la génération de thrombine à la surface des CML soumises ou non à des déformations mécaniques cycliques. A l'état de base, les CML et les CE ont un potentiel thrombinique similaire, mais moins important que celui des plaquettes. Nous avons montré un rôle synergique du TFPI avec la PCa dans l'inhibition de la génération de thrombine à la surface de ces cellules plus importante avec les CML qu'avec les CE. L'ensemble de nos résultats suggère que les CML pourraient exercer des effets procoagulants comparables aux CE mais avec des régulations différentes en réponse aux facteurs pro- et anticoagulants, et que les MP issues de cellules vasculaires ont un pouvoir thrombogène très supérieur à leurs cellules d'origineThe main objective of this study was to compare the implication (i) of vascular cells, smooth muscle cells (SMC) and endothelial cells (EC), or circulating cells, platelets, and (ii) microparticles (MP) derived from these different cells in the generation of thrombin but also in its inhibition by the activated protein C (APC) and the tissue factor pathway inhibitor (TFPI), and to identify the mechanisms and determinants responsibles for observed differences between these different cell supports for coagulation. We have demonstrated that [alpha]v[gamma]3 integrin, the prothrombin receptor on the vascular surfaces, was involved in the generation of thrombin on the surface of these cells subjected or not subjected to cyclic mechanical deformations. At baseline, SMC and EC, have equivalent thrombin generating capacities, but less than that of platelets. We have shown a synergistic role of TFPI with APC in the inhibition of thrombin generation at the surface of these cells, more important with SMC than with EC. Taken together, our results suggest that SMC may exert procoagulant effects comparable to EC but with different regulations in response to pro-and anticoagulant factors, and that MP derived from vascular cells have a very higher thrombogenic activity compared to their parent cells
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Beroud, Jacqueline. "Différenciation de cellules mésenchymateuses périnatales vers un phénotype musculaire lisse : base de la construction d'un feuillet vasculaire." Thesis, Université de Lorraine, 2015. http://www.theses.fr/2015LORR0344/document.
Full textAbstract:
Les pathologies vasculaires représentent aujourd’hui l’une des principales causes de mortalité mondiale et leur nombre ne cesse d’augmenter. Les greffons autologues (disponibilité faible) et les prothèses synthétiques inadaptées pour des vaisseaux de diamètre inférieur à 6 mm ne répondent pas à la demande et il existe aujourd’hui, un réel besoin en substitut vasculaire pour les petits vaisseaux. Ainsi, le concept de l’ingénierie vasculaire semble très prometteur. Cette approche est fondée sur l’utilisation de matrices « scaffold » associées à une composante cellulaire pour construire, dans des conditions environnementales adaptées, un vaisseau qui réponde et réagisse aux contraintes physiologiques. Dans cet objectif, la fonctionnalisation d’une media vasculaire constituée de cellules musculaires lisses (CML) est prérequise. Aux CML matures qui ne sont pas de bons candidats (perte de leur phénotype contractile lors de la culture), nous avons identifié les cellules souches mésenchymateuses (CSM) de la gelée de Wharton (tissu conjonctif du cordon ombilical) comme source cellulaire majeure. Leur facilité de récupération, leur présence en grand nombre, leur faible immunogénicité et leur capacité de prolifération et différenciation en font d’excellents candidats en ingénierie tissulaire. Dans ce travail nous avons déterminé les conditions favorables à l’obtention d’un phénotype CML fonctionnelles et montré l’impact de différents paramètres environnementaux (apport en oxygène, facteurs de croissance, teneur en sérum…) sur le comportement des CSM de la gelée de Wharton. Nous avons pu montrer que 1) ces cellules étaient capables de se différencier en cellules au phénotype contractile comparable à celui des CML matures. 2) L’utilisation des films multicouches de polyéléctrolytes (FMP) en tant que support d’adhérence cellulaire a montré que les CSM de la gelée de Wharton avaient un comportement spécifique selon la charge de surface conduisant vers une cultures tridimensionnelle inadaptée sur (PAH-PSS)3 PAH et en monocouche sur films (PAH-PSS)4, 3) Ces cellules pouvaient être cultivées sur des hydrogels d’alginate fonctionnalisés par les FMP pour fournir un feuillet cellulaire susceptible de recréer une media vasculaireVascular diseases represent today one of the leading causes of global mortality and the number is increasing. Autologous transplants (limited availability) and synthetic prostheses unsuitable for vessels with a diameter less than 6 mm are not sufficient and there is now a real need of vascular substitute for small vessels. Thus, the concept of vascular engineering seems very promising. This approach is based on the use of "scaffold" associated with a cellular component to build in suitable environmental conditions, a vessel that reacts with the physiological constraints. To this aim, the functionalization of an incorporated media vascular smooth muscle cells (SMC) is a prerequisite. Insteag of using Mature CML which are not good candidates (loss of contractile phenotype in culture), we identified mesenchymal stem cells (MSCs) from Wharton's jelly (connective tissue of the umbilical cord) as a major cellular source. Their easiness of recovery, their presence in large numbers, their low immunogenicity, their proliferation and differentiation capacity make them excellent candidates for tissue engineering. In this work we determined the conditions for obtaining a functional CML phenotype and showed the impact of different environmental parameters (oxygen level, growth factors, serum content ...) on the behavior of CSM jelly Wharton. We have shown that: 1) these cells were able to differentiate into cells in contractile phenotype comparable to that of mature SMC. 2) The use of multilayer films of polyelectrolytes as cell adhesion support has shown that MSCs from the Wharton jelly had a specific behavior according to surface charge leading to an inappropriate three-dimensional cultures (PAHPSS)3-PAH and monolayer films on (PAH-PSS)4, 3) These cells could be grown on functionalized alginate hydrogels to provide a cellular sheet which may recreate a vascular media
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Vallin, Benjamin. "Caractérisation fonctionnelle de nouvelles isoformes d'adénylyl cyclase 8 identifiées dans les cellules musculaires lisses vasculaires trans-différenciées." Thesis, Paris 6, 2017. http://www.theses.fr/2017PA066117/document.
Full textAbstract:
La trans-différenciation des cellules musculaires lisses vasculaires (CMLV) vers un phénotype migratoire, prolifératif et sécrétoire joue un rôle clé dans la progression des lésions athéromateuses et l’hyperplasie intimale qui sous-tend la resténose post-angioplastie. Nos travaux suggèrent que la transition phénotypique des CMLV implique, chez le rat, la souris et l’Homme, l’expression de novo de l’Adénylyl Cyclase 8 (AC8), une enzyme catalysant la synthèse de l’AMP cyclique (AMPc) (Clément et al., 2006; Gueguen et al., 2010; Keuylian et al., 2012; résultats non publiés). Ce travail de thèse avait pour objectif d’appréhender le rôle de l’AC8 dans la trans-différenciation des CMLV en évaluant son impact sur la signalisation AMPc. L’étude des dynamiques de production du second messager avec le biosenseur T-Epac-VV montre que l’AC8 inhibe les hausses d’AMPc dans les CMLV trans-différenciées à l’Interleukine-1β. Cette fonction non canonique est assurée par de nouvelles isoformes d’AC8 que nous avons identifiées et clonées, les AC8E1 à 4, qui partagent une délétion des cinq premiers domaines transmembranaires. Des dosages de l’accumulation d’AMPc couplés à des expériences de co-immunoprécipitation et d’immunocytochimie révèlent que les AC8E exprimées de façon hétérologue dans des cellules HEK s’hétéro-dimérisent avec les AC en transit dans le réticulum, suppriment leur activité enzymatique et préviennent leur adressage à la membrane plasmique. L’induction des AC8E dans les CMLV trans-différenciées pourrait prévenir les effets vasculoprotecteurs de l’AMPc (Douglas et al., 2005; Katakami et al., 2010), favorisant ainsi l’acquisition et/ou le maintien du phénotype synthétiqueThe phenotypic switch of vascular smooth muscle cells (VSMC) towards a migratory, proliferative and secretory state plays a key role in atherosclerotic plaque expansion and intimal hyperplasia leading to post-angioplasty restenosis. Our previous results suggest that the trans-differentiation of rat, mouse and human VSMC involves the de novo expression of the Adenylyl Cyclase 8 (AC8), an enzyme that catalyzes the synthesis of cyclic AMP (cAMP) (Clement et al., 2006; Gueguen et al., 2010; Keuylian et al., 2012; unpublished results). The main goal of my PhD was to decipher the impact of AC8 expression on cAMP signaling in trans-differentiated VSMC. Using the FRET-based biosensor T-Epac-VV, we showed that the de novo expression of AC8 limits increases in cellular cAMP. This non-canonical function relies on a new family of AC8 isoforms that we have identified and cloned: the AC8E1 to 4. They share a common deletion of the first five transmembrane domains. The biochemical characterization of AC8E over-expressed in HEK cells allowed us to elucidate their functioning. cAMP accumulation assays, co-immunoprecipitation experiments and immunocytochemistry revealed that AC8E hetero-dimerize with functional AC during their maturation in the reticulum, suppress their enzymatic activity and prevent their traffic to the plasma membrane. Numerous studies have shown that increases in cAMP concentration within trans-differentiated VSMC antagonize pathological vascular remodeling (Douglas et al., 2005; Katakami et al., 2010). Thus, the induction of AC8E in trans-differentiated VSMC could prevent the vasculoprotective effects of cAMP and promote the acquisition of a synthetic phenotype
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Ait, Aissa Karima. "Étude de l'implication des cellules musculaires lisses vasculaires dans la distensibilité et le phénotype thrombotique dans des modèles murins." Thesis, Université de Lorraine, 2012. http://www.theses.fr/2012LORR0202/document.
Full textAbstract:
L'hypothèse que l'hypertension peut conférer un état d'hypercoagulabilité découle des principales complications liées à l'hypertension, l'infarctus du myocarde et accident vasculaire cérébral. Notre objectif était de déterminer si l'hypertension spontanée confère des changements dans les protéines de la coagulation et de la capacité de production de thrombine dans le sang et la paroi vasculaire. Nous avons utilisé le modèle de rats spontanément hypertendus (SHR) par rapport aux rats Wistar. La génération de thrombine est plus faible dans le plasma riche en plaquettes et plasma sans plaquettes de SHR par rapport à Wistar. Ceci est lié aux faibles concentrations en facteur tissulaire (TF) et en prothrombine, ainsi qu?un taux plus élevé de TFPI dans le plasma des SHR. En revanche, l'ajout d'anneaux d'aorte thoracique de SHR à un pool de plasma Wistar a donné lieu à une augmentation plus importante dans la génération de thrombine par rapport à l'ajout d'anneaux équivalent du Wistar. Alors qu'aucune différence n'a été observée pour les cellules endothéliales, la formation de thrombine était plus élevée à la surface de culture CML aortiques des SHR que des Wistar. L'exposition des phospholipides chargés négativement est plus élevée sur les anneaux et les CML des SHR que les Wistar. Les activités TF et TFPI étaient plus élevés chez les CML des SHR. Ces résultats montrent une opposition de génération de thrombine à la surface de la paroi artérielle et dans le plasma des rats SHR par rapport aux rats Wistar. Le phénotype thrombotique plus élevé de la paroi vasculaire SHR est dû à la capacité du CML à soutenir la génération de thrombine. Ces résultats suggèrent que le remodelage de la membrane phospholipidique et la synthèse de molécules pro-coagulantes induites par hypertension dans les CML sont des substrats pour une formation de thrombine accrue dans la paroi vasculaireThe hypothesis that hypertension may confer a hypercoagulable state arises from the main complications associated with hypertension, stroke and myocardial infarction. Our objective was to determine whether spontaneous hypertension confers changes in the coagulation proteins and the thrombin generating capacity in blood and the vascular wall. We used the model of spontaneously hypertensive rats (SHR) compared with Wistar rats. Thrombin generation was lower in platelet-rich plasma and platelet-free plasma from SHR compared to Wistar. This was related to lower tissue factor (TF) and prothrombin as well as higher TFPI levels in SHR plasma. In contrast, the addition of thoracic aorta rings of SHR to a Wistar plasma pool resulted in a higher increase in thrombin generation compared to the addition of equivalent rings from Wistar. Whereas no difference was observed for endothelial cells, thrombin formation was higher at the surface of cultured SHR aortic SMCs than from Wistar. Exposure of negatively-charged phospholipids was higher on SHR than on Wistar rings as well as on SMCs. TF and TFPI activities were higher in SHR SMCs. These results show opposite thrombin generating capacity of plasma and vessel walls in SHR compared to Wistar. The higher prothrombotic phenotype of the SHR vessel wall was due to the ability of SMCs to support thrombin generation. These findings suggest that the hypertension-induced membrane phospholipid reorganization and synthesis of procoagulant molecules in SMCs provide substrates for increased thrombin formation within the vessel wall
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Malam-Souley, Rabé. "Effets de l'ATP exogène sur la prolifération des cellules musculaires lisses artérielles en culture et caractérisation des récepteurs purinergiques P2 impliqués." Bordeaux 2, 1994. http://www.theses.fr/1994BOR28318.
Full textAbstract:
Dans des conditions pathologiques ou interventionnelles, l'ATP peut être libéré, au niveau de la paroi artérielle, par les cellules sanguines et les cellules pariétales. Le but de ce travail est d'identifier le rôle de l'ATP dans la genèse d'atteintes artérielles (athérosclérose ou resténose après angioplastie) mettant en jeu la migration et la prolifération des cellules musculaires lisses artérielles (CML). Nous avons entrepris d'étudier les effets de l'ATP exogène sur la prolifération des CML en culture et d'en étudier les mécanismes. Dans un premier temps, il a été démontré que l'ATP exogène induit, au niveau des CML en culture, plusieurs réponses liées à l'activation mitogène (production des phosphatidylnositides, augmentation du calcium intracellulaire libre, expression de gènes dépendants du cycle cellulaire). Cette étude montre que l'ATP n'induit qu'une progression limitée des CML en culture, jusqu'en milieu de la phase G1 du cycle cellulaire. Par contre une stimulation transitoire par l'ATP induit une progression plus soutenue des CML en phase G1 : les CML ainsi activées deviennent plus réceptives à l'action de facteurs de progression (insuline, PDGF), suggérant que l'ATP peut être assimilé à un facteur de compétence favorisant la prolifération des CML. La seconde étape de notre travail a permis de démontrer que seuls les récepteurs P2u et P2y sont impliqués dans l'induction des réponses liées à l'activation mitogène des CML artérielles en culture et que l'acquisition de l'état de compétence est lié à la fixation de l'ATP aux récepteurs P2u de la CML. Ce travail montrant que l'ATP exogène pourrait intervenir sur un processus-clé de la genèse des lésions intimales, la prolifération des CML artérielles, en se liant aux récepteurs P2u et P2y reste cependant à compléter puisque les CML, suivant leur état phénotypique, répondent différemment aux différents agonistes des récepteurs P2, suggérant ainsi une modulation de l'expression de ces récepteursIn pathological or interventional conditions, exogenous ATP can be released by arterial smooth muscle cells (SMC), endothelial cells, or by blood cells such as platelets or erythrocytes. The aim of this work was to identify the role of ATP in the genesis of arterial lesions (atherosclerosis and restenosis) by studying the effects of ATP on proliferation of arterial SMC and to determine some of the mechanisms involved in these responses. In a first time, we demonstrated that exogenous ATP induced several cell responses (inositol-phosphate hydrolysis, cytosolic calcium release, cell cycle dependent gene expression) involved in mitogenic SMC activation. These studies suggested that ATP induced a limited cell cycle progression of SMC in culture from the quiescent state G0 to the middle of the G1-phase of the cell cycle. After a transient stimulation by ATP, this agonist induced a more sustained cell cycle progression through the G1-phase. So, ATP could be considered as a competence factor that makes SMC more sensitive to other factors such as insulin or PDGF, and could contribute to their proliferation. In a second time, we demonstrated that ATP-induced mitogenic responses were mediated via P2y- and P2u purinoceptors. The study demonstrated that exogenous ATP could play a key role in the genesis of atherosclerosis and restenosis, however, this work must be completed since responses of SMC to preferential agonists of P2u- and P2y-purinoceptors were different according to the phenotypic state of arterial SMC, suggesting that SMC responses to ATP might be different in normal and pathological arteries
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Ebrahimian, Talin. "Expression et fonction de la NOS neuronale dans les cellules musculaires lisses de la paroi vasculaire." Paris 7, 2003. http://www.theses.fr/2003PA077155.
Full text
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Belozertseva, Ekaterina. "Effets du récepteur minéralocorticoïde, de l’intégrine αv et de vimentine sur les fonctions des cellules musculaires lisses vasculaires et la rigidité artérielle." Thesis, Université de Lorraine, 2016. http://www.theses.fr/2016LORR0165/document.
Full textAbstract:
La rigidité artérielle et la fibrose ont une valeur prédictive dans le développement des maladies cardiovasculaires (CV). Ces 2 phénotypes impliquent les cellules musculaires lisses vasculaires (CMLVs) notamment des récepteurs membranaires et les protéines du cytosquelette. Les objectifs ont été d’étudier : (i) l’influence du récepteur minéralocorticoïde (MR) sur la réactivité vasculaire, (ii) le rôle de l’intégrine αvβ3 dans le développement de la rigidité artérielle et la fibrose vasculaire, et (iii) l’impact de la vimentine et la synémine sur la structure et la fonction artérielle. Ces trois études ont utilisées des souris avec invalidation génétiques des protéines d’intérêt. Résultats : l’absence du MR diminue la réactivité vasculaire en altérant le couplage contraction/relaxation des CMLVs via des mécanismes Ca2+- et NO-dépendants (une diminution de la vasoconstriction en réponse au Ca2+ extracellulaire et une altération de la vasorelaxation endothélium-dépendante en réponse à l’acétylcholine). L’invalidation de la sous-unité αv prévient la fibrose en réponse à l’administration d’angiotensine II. L’absence de la vimentine et non celle de la synémine augmente la rigidité artérielle via des changements des adhésions focales des CMLVs mais aussi des cellules endothéliales. En conclusion, les récepteurs membranaires et protéines intracellulaires étudiées influencent la fonction et la structure des artères grâce à des actions spécifiques sur le tonus musculaire, la mécanotransduction et l’organisation ultra-structurale des CMLVs. Ces études montrent au niveau cellulaire et moléculaire le déterminisme plurifactoriel des phénotypes de rigidité-fibrose de la paroi artérielle. Ces résultats nécessitent des travaux plus mécanistiques pour affirmer l’implication de ces protéines dans les maladies CV liées au vieillissementArterial stiffness and fibrosis have a predictive value in the development of cardiovascular diseases (CV). These two phenotypes involve vascular smooth muscle cells (VSMCs) including membrane receptors and cytoskeletal proteins. The objectives were to examine: (i) the influence of the mineralocorticoid receptor (MR) on vascular reactivity, (ii) the role of avb3 integrin in the development of arterial stiffness and vascular fibrosis, and (iii) the impact of vimentin and synemin on arterial structure and function. The mice with genetic invalidation of the proteins of interest were used in these three studies. Results: the absence of MR decreased vascular reactivity by altering the contraction/relaxation coupling of VSMC through Ca2+- and NO-dependent mechanisms (a decrease of vasoconstriction in response to extracellular Ca2+ and impaired endothelium-dependent vasorelaxation in response to acetylcholine). The invalidation of the αv subunit prevented fibrosis in response to the administration of angiotensin II. The absence of vimentin, and not that of the synemin, increased arterial stiffness via changes in focal adhesions of VSMCs as well as endothelial cells. In conclusion, the studied membrane receptors and intracellular proteins that influenced the structure and function of arteries through specific actions on muscle tone, the mechanotransduction and the ultra-structural organization of VSMCs. These studies show the multifactorial dependency of the stiffness-fibrosis phenotypes of the arterial wall at the cellular and molecular levels. These results require more mechanistic work to determine the role of these proteins in CV diseases related to aging
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Grassin, Delyle Stanislas. "Rôle de l'hémokinine-1 et des récepteurs des tachykinines dans la contraction de préparations de muscles lisses bronchiques et vasculaires et dans la prolifération des cellules B." Versailles-St Quentin en Yvelines, 2011. http://www.theses.fr/2011VERS0032.
Full textAbstract:
Suite à l’identification de l’hémokinine-1 (HK-1), quatrième peptide de la famille des tachykinines, les objectifs de notre travail ont été de caractériser son expression et sa fonction dans les cellules B et le tissu pulmonaire, ainsi que le rôle des tachykinines dans la contraction des veines saphènes. Nos résultats ont démontré que l’HK-1 était exprimée dans les cellules B et facilitait leur prolifération par un mécanisme indépendant des récepteurs connus jusqu’à présent. Nous avons ensuite décrit ses propriétés contractiles sur le muscle lisse bronchique, liées à l’activation conjointe des récepteurs NK1 et NK2, tout en observant une désensibilisation fonctionnelle des récepteurs NK1. Enfin, nous avons montré que la neurokinine A pouvait contracter le muscle lisse vasculaire par l’intermédiaire des récepteurs NK2, et que ces derniers étaient également sujets à désensibilisation. Nos travaux ont permis une meilleure connaissance de la physiopathologie du système des tachykininesHemokinin-1 (HK-1) is the last discovered peptide of the tachykinin family. Our work was aimed at characterizing its expression and function in B cells and lung tissue, as well as the role of tachykinins in the contraction of saphenous veins. Our results showed that HK-1 was expressed in B cells and facilitated their proliferation through a mechanism independent of the actually known receptors. We then described its contractile properties on bronchial smooth muscle, following a mixed activation of NK1 and NK2 receptors, and a desensitization of the NK1 receptors was observed. Last, we showed that neurokinin A was able to contract vascular smooth muscle through NK2 receptors, which were also subject to desensitization. Our work contributed to a better knowledge of the tachykinin-related physiopathology
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Rouillon, Camille. "Rôle du facteur d’échange nucléotidique Arhgef1 dans l’hémostase." Thesis, Université de Lorraine, 2019. http://www.theses.fr/2019LORR0092.
Full textAbstract:
Une des propriétés majeures de la thrombine est le caractère pléiotropique de ses effets physiologiques et pathologiques à la fois dans le compartiment sanguin et tissulaire de la paroi. La voie de signalisation RhoA est activée par la fixation de la thrombine aux récepteurs PARs et cette voie est un régulateur principal de la mécanotransduction et de la plasticité cellulaire. Le facteur d’échange de RhoA, Arhgef1, est impliqué dans le développement de l’hypertension dépendante de l’angiotensine II et dans l’athérothrombose. Notre hypothèse est que le contrôle de la signalisation intracellulaire de RhoA par Arhgef1 est un élément régulateur de la coagulation plasmatique et pourrait participer aux modifications phénotypiques des plaquettes et des cellules vasculaires et ainsi contribuer à l’augmentation de la génération de thrombine tissulaire. Les objectifs ont été de caractériser la génération de thrombine et la fonction plaquettaire depuis leur activation jusqu’à leurs implications dans un modèle de thrombose tissulaire et d’étudier le rôle prothrombotique des cellules musculaires lisses vasculaires (CMLVs) chez des souris Arhgef1 -/-. Résultats : Les souris Arhgef1-/- ont une numération plaquettaire normale mais présentent une diminution significative de l’activation plaquettaire, de la génération de thrombine en sang total et en présence de plaquettes (mais pas en plasma pauvre en plaquettes) et de l’adhérence plaquettaire par rapport aux souris contrôles. Ces modifications se traduisent, in vivo, par un plus grand nombre d’arrêts transitoires de l’écoulement sanguin dans le modèle de saignement à la queue et un allongement du temps de survenue du thrombus occlusif carotidien en réponse au FeCl3 chez les souris Arhgef1 -/- comparées aux contrôles. Les CMLVs des souris Arhgef1 -/- génèrent moins de thrombine à leur surface et ont une prolifération diminuée par rapport aux CMLVs des souris contrôles. En conclusion, les résultats démontrent le rôle d’Arhgef1 dans les fonctions plaquettaires et dans la régulation du phénotype des CMLVs. Le mécanisme principal fait intervenir la Rho GTPase dans l’adhésion plaquettaire et la génération de thrombine à la surface CMLVs qui contrôlent la formation du thrombus. Ces résultats suggèrent que ce facteur d’échange est capable d’amplifier la thrombose artérielle et pourrait être impliqué via les récepteurs à la thrombine dans le couplage thrombine tissulaire-rigidité cellulaire via les plaquettes et les CMLVs dans les pathologies vasculairesOne of the major properties of thrombin is the pleiotropic character of its physiological and pathological effects in both the blood and the tissue compartment of the vessel wall. The RhoA signaling pathway is activated by the binding of thrombin to the PARs receptors and this pathway is a major regulator of mechanotransduction and cellular plasticity. The RhoA exchange factor, Arhgef1, is involved in the development of angiotensin II-dependent hypertension and in atherothrombosis. Our hypothesis is that the control of intracellular RhoA signaling by Arhgef1 is a regulatory element of plasma coagulation and could participate in phenotypic modifications of platelets and vascular cells and thus contribute to the increase of tissue thrombin generation. The objectives were to characterize thrombin generation and platelet function from their activation to their implications in a model of tissue thrombosis, and to study the prothrombotic role of vascular smooth muscle cells (VSMCs) in Arhgef1 -/- mice. Results: Arhgef1 -/- mice had a normal platelet count but showed a significant decrease in platelet activation, thrombin generation in whole blood and in the presence of platelets (but not in platelet poor plasma) and platelet adhesion compared to control mice. These modifications result, in vivo, by a greater number of transitory stopping of the blood flow in the tail bleeding model and an increase in the time of occurrence of the carotid occlusive thrombus in response to FeCl3 in Arhgef1 -/- mice compared to controls. The VSMCs of Arhgef1 -/- mice generate less thrombin at their surface and have decreased proliferation compared to VSMCs of the control mice. In conclusion, the results demonstrate the role of Arhgef1 in platelet function and in the regulating of the phenotype of VSMCs. The main mechanism involves Rho GTPase in platelet adhesion and in thrombin generation at the VSMC surface that control thrombus formation. These results suggest that this exchange factor is able to amplify aterial thrombosis and could be involved via thrombin receptors in tissue thrombin-cell stiffness coupling via platelets and VSMCs in vascular pathologies
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Hugou, Isabelle Anne. "Etude des enzymes de peroxydations lipidiques au cours du processus athéroscléreux : expression des PGH [prostaglandines] synthétases, de la 15 lipoxygénase et des no synthétases dans les cellules musculaires lisses vasculaires humaines et de lapin." Bordeaux 2, 1994. http://www.theses.fr/1994BOR28300.
Full textAbstract:
Les lésions athéroscléreuses résultent d'une importante réponse inflammatoire et fibroproliférative dûe à une modification de l'endothélium et des cellules musculaires lisses. Les principales molécules agissant sur la prolifération de ces cellules vers le PDGF, l'IL1. . . Pour les activateurs et la PGI2 et le NO pour les inhibiteurs. La synthèse de PGI2 dans les cellules musculaires lisses artérielles est diminuée au cours du processus athéroscléreux et rendrait compte en partie de la progression fibroproliférative. La diminution de cette synthèse pourrait s'expliquer par l'augmentation de l'activité lipoxygénase dans ces cellules. Les dérivés monohydroxylés (L5 et 12-HETE) sont connus comme étant des inhibiteurs de la synthèse de PGI-2. Nous avons montré que l'augmentation de la synthèse du 15-HETE dans les plaques résultait de l'induction du gène de la 15-lipoxygénase dans les macrophages et les cellules musculaires lisses. Au cours de l'établissement des plaques, on peut observer ube augmentation de la synthèse de la PGI-2, resonsable, semble-t-il, de la réponse inflammatoire. Grâce à l'hybridation, in situ, nous avons pudsémontrer que cette synthèse accrue provenait d'une induction du gène de la PGH Synthétase-2 dans les macrophages. Par cette même technique, nous montrons qu'il n'y a pas d'induction des gènes des NO Synthétases dans la paroi vasculaire. Ces études ont été réalisées sur des sortes de lapins nains et athéroscléreux ainsi que sur des prélèvements humains obtenus en per-opératoires. Nous avons mis en évidence une synthèse de 15-HETE par la PGH Synthétase 2 dans les tissus humains préincubés avec de l'aspirine. Les outils moléculaires que nous avons développés (Hybridation in situ), vont pouvoir permettre des études plus fines concernant la régulation de l'expression de ces enzymes dans l'athérosclérose L'effet de l'aspirine sur la synthèse du 15-HETE mériterait des études plus approfondies quant au rôle de cette molécule dans la pathogénieAtherosclerotic lesions arise from an important inflammatory and fibroproliferative response due to endothelial and smooth muscle cells modification. The main molecules acting on cells proliferation are PDGF, IL1. . . As inducers and PGI2, NO as inhibitors. PGI2 synthesis in arterial smooth muscle cells is diminished during atherosclerotic process and should account for a part of the fibroproliferative progression. In these cells, lipoxygenase activity enhancement should explain this decrease in prostacyclin synthesis. Monohydroxylated derivatives (15- and 12-HETE) are known as inhibitors of this synthesis. We have showed that 15-HETE synthesis enhancement in plaques result in 15-lipoxygenase gene induction in macrophages and smooth muscle cells. During plaques installation, we observed PGH2 synthesis augmentation, maybe responsible of the inflammatory response. With in situ hybridization, we demonstrated PGH Synthase-2 gene induction in macrophages accountable for this increased synthesis. With the same technic, NO Synthases genes induction is not seen in vascular cells. Studies have been carried out on healthy and atherosclerotic rabbit aortas, and humans arteries obtained during cardiac surgery. Human tissues preincubated with aspirin are able to synthesize 15-HETE by PGH Synthase-2 pathway. Molecular tools developed (in situ hybridization), should allow more precise studies concerning regulation of enzymes expression in atherosclerosis. Aspirin action on 15-HETE synthesis should worth studing more extensive as for this molecule effect in this disease
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Duplàa, Cécile. "Etude de la régulation d'intercellular Adhesion Molécule-1 (ICAM-1) et de Vascular Cell Adhesion Molécule-1 (VCAM-1) dans les cellules musculaires lisses en culture." Bordeaux 2, 1994. http://www.theses.fr/1994BOR28281.
Full textAbstract:
Le recrutement des cellules musculaires lisses (CML) dans l'intima représente un événement clé dans les pathologies artérielles. La compréhension des mécanismes régulant les capacités migratoires et synthétiques des CML, c'est à dire l'état de différenciation, est déterminante dans la perspective du contrôle du développement ou de l'arrêt du processus d'hyperplasie intimale. Certaines protéines membranaires (les intégrines ou les molécules d'adhésion) en permettant les interactions cellule/cellule ou cellule/matrice extracellulaire sont des acteurs du changement de phénotype de la CML. Nous avons abordé ce problème par l'analyse de l'expression des protéines membranaires ICAM-1 et VCAM-1, qui n'avaient jamais été étudiées sur les CML. Nous rapportons la conception d'une méthode d'analyse semi-quantitative des ARN par PCR. La méthode développée est simple et rapide, elle repose sur l'incorporation durant l'amplification par PCR de nucléotides biotynylés. Les produits d'amplification séparés sur un gel d'électrophorèse sont transférés sur une membrane nylon et sont révélés par le système streptavidine/peroxydase/diaminobenzidine. La quantification des produits de PCR est réalisée par analyse vidéométrique digitalisée. Cette méthode nous a permis d'étudier les variations d'expression transcriptionnelle d'ICAM-1, dans les CML en culture stimulées par les cytokines IL-1 beta, et IFN gamma, et par les facteurs de croissance, PDGF et TGF beta. L'expression de VCAM-1 et d'ICAM-1 ne suivent pas le même profil d'activation. Le TNF alpha provoque une augmentation dose et temps dépendante des ARNm et de l'expression protéique du VCAM-1 et d'ICAM-1. IL-1 beta active uniquement ICAM-1, l'expression de VCAM1 et d'ICAM-1 est diminuée par les facteurs de croissance, IFN gamma et TNF alpha, contrairement à leur action sur l'expression d'ICAM-1, n'ont pas d'effet synergique sur celle de VCAM-1. Nous nous sommes proposés de rechercher dans les CML humaines l'existence potentielle des différentes formes épissées du VCAM-1. Cette étude a été abordée par des techniques de PCR, de RNase protection et criblage d'une banque d'ADNc. Nous avons révélé la présence dans les CML de deux formes épissées. La régulation d'ICAM-1 et de VCAM-1 à la surface des CML intimales et leur absence au niveau de la média pourraient les impliquer aussi bien comme simples marqueurs de l'inflammation locale, comme molécules favorisant les interactions cellulaires que comme marqueurs de la différenciationAortic smooth muscle cells (SMC) recruitment in the intima is the major event in the vessel wall pathologies. Understanding of mechanisms underlying "synthetic" and "migratory" SMC phenotype, i. E. Differenciation state, is important for attempt to control intima hyperplasia expansion. Some membrane proteins (integrins or adhesion molecules) involved in cell-matrix and cell-cell adhesion, could modify SMC phenotype. We approach this phenotypic variability by abalysis of ICAM-1 and VCAM-1 membrane proteins expression. A method for relative quantitation of specific mRNA expression by PCR has been developed by using the incorporation of biotinylated dUTP. Transferred biotinylated PCR products gave a sensitive colorimetric signal which could be quantitated by video analysis. We used this approach to analyse variability of expression of ICAM-1 and VCAM-1 in cultured SMC stimulated by IL-1 beta, TNF alpha, and IFN gamma cytokines and by PDGF and TGF beta growth factors. Differences were noted between the expression of ICAM-1 and VCAM-1 gene. TNF alpha led to an increase in both VCAM-1 and ICAM-1 mRNA and cell surface protein expression in a dose-and time-dependent manner. Il-1 beta induced amounts of ICAM-1 but not VCAM-1. Growth factors seem repressed ICAM-1 and VCAM-1 expression. IFN gamma and TNF alpha have synergic effect on ICAM-1 expression but not on VCAM-1. We have searched for potential alternatif splicing of VCAM-1 in human SMC. This study has been realised by PCR technology, RNase protection, and cDNA library screening. We have detected in SMC two spliced forms. The fact that in physiopathological conditions of aortas, ICAM-1 and VCAM-1 are only expressed in the intimal space and absent in the media could involve them as inflammation markers, or as molecules implicated in cellular interactions or as differenciation markers
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Zurlo, Giada. "Rôle de SIRT1 et de la biogenèse mitochondriale dans la prolifération des cellules du muscle lisse de l'artère pulmonaire." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2015. http://www.theses.fr/2015SACLS205/document.
Full textAbstract:
L’hypertension artérielle pulmonaire (HTAP) est une maladie mortelle caractérisée par un important remodelage vasculaire, principalement dû à l’hyperprolifération et à la résistance à l’apoptose des cellules du muscle lisse de l’artère pulmonaire (CML-AP). Récemment il a été montré que les CML-AP présentent un remodelage du métabolisme énergétique, avec une régulation négative de l’oxidation phosphorylante associée à une activation de la voie glycolytique, qui semble contribuer à leur phénotype particulier. La désacétylase sirtuine1 (SIRT1) est un important modulateur du métabolisme énergétique, notamment via son activation de peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator-1 alpha (PGC-1α), régulateur clé de la biogenèse mitochondriale. Dans cette étude, nous montrons pour la première fois que la prolifération des CML-AP de rat et humaines est caractérisée par une réduction de l’activité de SIRT1, et est augmentée suite à l’inhibition pharmacologique ou la sous-expression spécifique de SIRT1. De plus, suite à hypoxie chronique, des souris génétiquement déficientes en SIRT1 présentent un remodelage vasculaire plus important que celui observé chez les souris contrôles, ce qui est associé à une augmentation accentuée de l’hypertrophie et de la pression systolique du ventricule droit. Au contraire, l’activation pharmacologique de SIRT1 inhibe fortement la prolifération des CML-AP, et est associée à l’activation de la biogenèse mitochondriale. L’ensemble de ces résultats suggère que l'inactivation de SIRT1 joue un rôle causal dans l’hyperprolifération des CML-AP et cette enzyme pourrait être une nouvelle cible thérapeutique prometteuse pour le traitement de l’HTAPPulmonary arterial hypertension (PAH) is a lethal disease characterized by an intensive vascular remodelling, mainly due to hyper-proliferation and resistance to apoptosis of pulmonary artery smooth muscle cells (PASMCs). Recently it has been found that PASMCs, similarly to cancer cells, demonstrate a shift in energy metabolism from oxidative phosphorylation towards glycolysis thus contributing to their particular phenotype. The deacetylase sirtuin1 (SIRT1) is an important modulator of energy metabolism, particularly via its activation of peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator-1 alpha (PGC-1α), the master regulator of mitochondrial biogenesis. Here we show for the first time that rat and human PASMC proliferation is characterised by a diminution of SIRT1 activity, and is potentiated by SIRT1 pharmacological inhibition or specific downregulation. Moreover, after chronic hypoxia exposure, SIRT1 KO mice display a more intense vascular remodelling compared to their control littermates and this is associated with an exacerbated increase in right ventricle systolic pressure and hypertrophy. Conversely, pharmacological SIRT1 activation strongly inhibits PASMC proliferation, and is associated with the activation of mitochondrial biogenesis. In general, the data obtained show that SIRT1 inactivation plays a causative role in PASMC proliferation and this enzyme could be a promising therapeutic target for PAH treatment
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AMMARGUELLAT, FATIMA. "Effets directs de l'erythropoietine sur les cellules du muscle lisse vasculaire de rats spontanement hypertendus. Recherche d'un recepteur specifique de l'erythropoietine." Paris 6, 1996. http://www.theses.fr/1996PA066009.
Full textAbstract:
L'erythropoietine (epo) principalement synthetisee dans le rein a pour fonction principale de stimuler l'erythropoiese et donc d'augmenter la production d'erythrocytes. L'epo recombinante est frequemment utilisee comme traitement chez les malades anemiques. Chez les insuffisants renaux la production d'epo est particulierement diminuee et ils developpent presque tous une anemie. Elle peut etre corrigee par administration d'epo mais ce traitement entraine un certain nombre d'effets secondaire dont une aggravation ou une induction de l'hypertension arterielle dans 20 a 30% des cas. Une augmentation de la pression arterielle s'observe presque exclusivement chez les patients uremiques et enn particulier ceux qui sont genetiquement hypertendus. Nous avons confirme l'hypothese d'un effet direct de l'epo sur les cellules de muscle lisse vasculaire (vsmc) de rats normotendus (wky) et spontanement hypertendus (shr). Nous avons demontre que l'epo induisait: une augmentation de la synthese d'adn superieure chez le shr, une activation de la phospholipase c, une modulation de l'expression de proto-oncogenes jun-b, c-myc, c-fos et une augmentation du nombre de cellules en presence de serum chez le shr. Nous avons mis en evidence l'expression d'un arnm de l'epo dans les deux souches de rats. En conclusion l'effet de l'epo est le plus souvent chronique et plus prononce chez les hypertendus
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Hassan, Ghada Shawki. "Présence des jonctions de type gap dans les cellules endothéliales et les cellules du muscle lisse vasculaire humaines et leur contribution à la modulation du calcium intracellulaire." Sherbrooke : Université de Sherbrooke, 2001.
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Hassan, Ghada Shawki. "Présence des jonctions de type gap dans les cellules endothéliales et les cellules du muscle lisse vasculaire humaines et leur contribution à la modulation du calcium intracellulaire." Thèse, Université de Sherbrooke, 2001. http://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/4147.
Full textAbstract:
L'interaction entre les cellules endothéliales (CEs) et les cellules du muscle lisse vasculaire (CMLVs) joue un rôle important dans la modulation du tonus vasculaire. Ce dialogue entre les deux types de cellules peut être médié par des facteurs relâchés par les CEs et les CMLVs, ou par une communication physique directe via les jonctions de type gap. L'objectif de notre étude est de tester les hypothèses suivantes: (1) le contact physique entre les cellules endothéliales (CE) et du muscle lisse vasculaire (CMLV) module le Ca[indice supérieur 2+] intracellulaire ([Ca][indice inférieur i]) de ces cellules; (2) cette modulation s'effectue via une communication à travers les jonctions gaps et (3) l'augmentation du [Ca][indice inférieur i] par l'ET-1, un facteur relâché dans le système vasculaire, peut être transférée entre les cellules couplées via des jonctions intercellulaires. Afin de vérifier ces hypothèses, nous avons testé: (1) l'effet du contact physique entre les cellules en culture pure et en co-culture sur le niveau basal calcique des CEs et des CMLVs; (2) la présence des sous-unités des jonctions de type gap; (3) la capacité de ces jonctions de permettre le passage de molécules de faible poids moléculaire ainsi que; (4) l'effet de l'ET-1 sur le transfert du calcium entre des cellules en contact. En utilisant la technique de mesure du [Ca][indice inférieur i] dans les CEs aortiques humaines ou les CMLVs en culture, nos résultats démontrent qu'en co-culture de CE-CMLV, le contact physique entre les deux types de cellules semble induire une augmentation significative du [Ca][indice inférieur n] des CEs sans affecter le niveau basal du [Ca][indice inférieur i] des CMLVs. De plus, l'utilisation de la technique d'immunofluorescence indirecte suggère la présence des jonctions gaps formées surtout de Cx40 dans les CEs et les CMLVs aortiques humaines. En utilisant la technique de double marquage d'un groupe de cellules, les cellules donneuses avec la sonde fluorescente de faible poids moléculaire, la calcéine, et un autre groupe avec la sonde membranaire fluorescente, la DiI, nos résultats démontrent que les jonctions entre les CEs, entre les CMLVs ainsi que entre les deux types cellulaires permettent le transfert intercellulaire de molécules de faible poids moléculaire. De plus, en utilisant la technique de balayage rapide par microscopie confocale, nous avons montré la propagation d'une vague calcique entre deux CEs en contact en réponse à l'ET-1. Nous avons aussi démontré, à l'aide de la technique de l'immunofluorescence indirecte et d'anticorps dirigés contre l'ET-1, la présence de ce peptide dans nos CEs et CMLVs d'aorte d'origine humaine. Nos résultats suggèrent donc que le niveau élevé du [Ca][indice inférieur i] observé dans les co-cultures de CEs-CMLVs peut être modulé par la formation de jonctions gaps entre les deux types de cellules, un phénomène qui peut avoir d'importantes implications dans des maladies vasculaires telle l'athérosclérose, et que la réponse calcique à l'ET-1, un facteur impliqué dans l'athérosclérose, peut se propager entre des cellules en contact.
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El, Mabrouk Mohammed. "Rôle de l'activation des MAP kinases dans les voies impliquées dans la croissance des cellules du muscle lisse vasculaire dans l'hypertension artérielle." [Montréal] : Université de Montréal, 2002. http://wwwlib.umi.com/cr/umontreal/fullcit?pNQ80440.
Full textAbstract:
Thèse (Ph. D.)--Université de Montréal, 2003."NQ-80440." "Thèse présentée à la faculté des études supérieures en vue de l'obtention du grade de philosophiae doctor (Ph. D.) en sciences biomédicales." Version électronique également disponible sur Internet.
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Peyot, Marie-Line. "Effets de l'adénosine extracellulaire sur l'apoptose et la prolifération de cellules musculaires lisses artérielles." Bordeaux 2, 2000. http://www.theses.fr/2000BOR28791.
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Couffinhal, Thierry. "Etude de l'expression des E-sélectines, d'intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) et du vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1) dans les cellules de la paroi artérielle." Bordeaux 2, 1994. http://www.theses.fr/1994BOR28285.
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Dans l'athérosclérose, la cellule endothéliale (CE) activée joue un rôle central dans le recrutement monocytaire pariétal. Parallèlement, le recrutement macrophagique au sein des plaques joue un rôle important dans l'activation des CE et des cellules musculaires lisses (CML). Les travaux de la littérature ont permis d'individualiser, in vitro, le rôle des protéines d'adhésion endothéliales E-selectines, ICAM-1 et VCAM-1 dans l'adhésion des monocytes et des T lymphocytes. Cependant, peu de données étaient disponibles, in vivo, dans l'athérosclérose. Notre premier travail s'est attaché à définir, par des techniques immunohistochimiques, la relation entre le degré de maturation de l'infiltrat macrophagique et l'expression des protéines d'adhésion sur l'endothélium vasculaire. Parallèlement, l'analyse immunohistochimique des plaques athéroscléreuses nous a permis de révéler successivement l'expression d'ICAM-1 puis de VCAM-1 à la surface des CML néointimales, les CML de la média étant par contre négatives. La libération locale de cytokines et de facteurs de croissance par les cellules de la plaque posent le problème de leur capacité à induire les molécules d'adhésion à la surface des CML. Nous avons recherché la présence de VCAM-1, d'ICAM-1 et des E-selectines sur les CML humaines en culture et comparé les effets des différentes cytokines sur l'expression de ces molécules d'adhésion. Une méthode d'analyse semi-quantitative des ARN par PCR a été conçue et validée. Nous avons pu démontrer que l'athérosclérose s'associe à une forte induction des protéines d'adhésion, non seulement à la surface des CE, facorisant ainsi le recrutement macrophagique, mais aussi à la surface des CML, posant le problème de leur rôle dans les interactions cellulaires au sein de la plaque. On conçoit aisément le rôle de ICAM-1 etde VCAM-1 dans l'interaction des CML avec les leucocytes entraînant la CML dans le processus inflammatoire global au sein de la plaque. Une hypothèse plus séduisante serait d'envisager le rôle de ces molécules d'adhésion dans l'interaction CML/CML et donc dans l'organisation structurale de la plaque et le contrôle de son évolutionIn atherosclerosis, activated endothelial cells (EC) play a key role in monocyte recruitment by the vascular wall. In the intima, the monocyte/macrophage is involved in EC and smooth muscle cells (SMC) activation. Publications rose the importance of endothelial adhesion proteins E-selectin, ICAM-1 and VCAM-1 in monocytes and T lymphocytes adhesion in vitro. However, little was known in atherosclerosis in vivo. Our first work was to define, by immunohistochemistry methods, the relation between the degree of monocyte maturation and adhesion proteins expression on vascular endothelium. Parallely, immunohistochemistry analysis of atherosclerosis plaques, showed ICAM-1 and VCAM-1 expression on intimal SMC. SMC of the media were negative. Cytokines and growth factors secreted by activated cells in atherosclerotic plaques could be responsible for adhesion protein expression. So, we have looked for E-selectin, ICAM-1 and VCAM-1 expression on human cultured SMC and compared cytokines effects on their expression. A quantitative RT-PCR analysis was conceived and validated. We have demonstrated that atherosclerosis is associated with an important induction of adhesion proteins, not only on EC surface, promoting monocyte recruitment, but also on SMC surface, arising the question about their role in cell interactions in the plaque. It is easy to imagine ICAM-1 and VCAM-1 function in SMC/lymphocyte interactions, with the induction of an inflammatory process in the atherosclerosis plaque. An other hypothesis would be to consider these adhesion molecules in SMC/SMC interactions, and so involved in the struxtural organisation of the plaque and its evolution
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Maltais, Jean-Sébastien. "RAGE comme nouvelle cible thérapeutique prévenant le stress du réticulum endoplasmique et l’apoptose des cellules du muscle lisse vasculaire associés avec le diabète." Thèse, Université de Sherbrooke, 2016. http://hdl.handle.net/11143/8804.
Full textAbstract:
Résumé : Les maladies cardiovasculaires représentent, par une large mesure, la première cause de morbidité et de mortalité chez les diabétiques. L’activation de RAGE par les produits de glycation avancée (AGE) générés en conditions hyperglycémiques est associée à une multitude de complications diabétiques vasculaires, notamment par une signalisation favorisant l’inflammation chronique ainsi que la mort des cellules formant les tissus et les organes exposés aux AGE. La surexpression de RAGE dans les cellules musculaires lisses des plaques athérosclérotiques vulnérables suggère que le récepteur pourrait contribuer à la survenue des accidents vasculaires. Nous avons donc émis l’hypothèse que l’activation de RAGE dans les cellules musculaires lisses était impliquée dans leur apoptose. Pour le vérifier, nous avons, dans un premier temps, mis au point une nouvelle méthode de détection sans marqueur basée sur le principe de la résonance des plasmons de surface (SPR) pour mesurer l’apoptose d’une monocouche cellulaire en temps réel et caractériser avec précision les paramètres cinétiques des phases d’initiation et d’exécution. Cet essai a permis de montrer que l’activation de RAGE induit l’apoptose dans plus de 75,6% des cellules musculaires lisses stimulées avec le CML-HSA pendant 20 heures. De surcroît, nous avons remarqué que l’activation de RAGE générait un fort stress du réticulum endoplasmique, indiqué par la formation d’un grand nombre de granules de stress ainsi que par l’augmentation de l’expression du marqueur de stress réticulaire HuR et de la caspase-9, deux importants régulateurs de l’apoptose induite par le stress réticulaire endoplasmique. Afin de vérifier le potentiel d’un antagoniste à bloquer l’activation du récepteur, nous avons ensuite synthétisé le peptide iRAGE dont la séquence est dérivée d’un site de liaison du CML-HSA ayant la particularité de posséder de nombreuses charges négatives à pH physiologique. Le prétraitement avec iRAGE s’est montré efficace pour prévenir l’activation de NF-κB, l’induction de l’apoptose et l’augmentation du stress réticulaire endoplasmique. Nous suggérons un modèle de fonctionnement par lequel iRAGE inhibe la signalisation de RAGE en empêchant la liaison des ligands multimériques et en stabilisant les récepteurs sous forme de monomères. À terme, la synthèse d’un antagoniste de RAGE utilisable en clinique pourrait constituer une avancée majeure dans la prévention des complications vasculaires et l’amélioration de la qualité de vie chez les diabétiques.Abstract : Cardiovascular diseases represent, to a large extent, the first cause of morbidity and mortality among people with diabetes. RAGE activation by advanced glycation end products (AGE) generated in hyperglycemic conditions is associated to a multitude of vascular diabetic complications, in particular by a signaling promoting chronic inflammation as well as death of cells forming tissues and organs exposed to AGE. Overexpression of RAGE in smooth muscle cells of vulnerable atheromatous plaques suggests the receptor could contribute to heart attacks and strokes. Therefore, we hypothesize that RAGE activation in smooth muscle cells is involved in apoptosis. To verify this hypothesis, we first designed a new label-free assay based of surface plasmon resonance (SPR) to measure apoptosis of a cell monolayer in real-time and to characterize precisely the kinetic parameters of the initiation and execution phases. This assay showed that RAGE activation induces apoptosis of more than 75.6% of smooth muscle cells stimulated with CML-HSA for 20 hours. Moreover, we noticed that RAGE activation generated strong endoplasmic reticular stress, indicated by the formation of a great number of stress granules as well as the increased expression of stress marker HuR and caspase-9, two important regulators of reticular stress-induced apoptosis. In order, to assess the potential of an antagonist to block RAGE activation, we then synthesized the iRAGE peptide whose sequence is derived from a binding site of CML-HSA that has the particularity of owning numerous negative charges at physiological pH. Pretreatment with iRAGE was successful to prevent activation of NF-κB, induction of apoptosis and generation of endoplasmic reticular stress. We suggest a model by which iRAGE inhibits RAGE signaling by hindering the binding of multimeric ligands and by stabilizing the receptors in a monomer state. Ultimately, the synthesis of a RAGE antagonist usable in clinic could constitute a major progress in the prevention of vascular complications and in the quality of life of people with diabetes.
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Hagerimana, Aline. "Étude de la modulation de c-fos par le facteur activateur des plaquettes (PAF) dans les cellules du muscle lisse vasculaire et les monocytes." Sherbrooke : Université de Sherbrooke, 2002.
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Hagerimana, Aline. "Étude de la modulation de c-fos par le facteur activateur des plaquettes (PAF) dans les cellules du muscle lisse vasculaire et les monocytes." Mémoire, Université de Sherbrooke, 2002. http://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/3272.
Full textAbstract:
La prolifération des cellules du muscle lisse vasculaire (CMLV) constitue un des éléments principaux qui mènent au développement des lésions vasculaires apparaissant lors de l'athérosclérose, de la sténose post-angioplastie coronarienne ou de la résistance vasculaire suite à l'hypertension artérielle. Il est évident qu'un processus inflammatoire est à l'origine des premières lésions et que les cellules inflammatoires et leurs médiateurs y contribuent de façon essentielle. Un de ces médiateurs, le facteur activateur des plaquettes (PAF) est produit par les leukocytes et par les cellules de la paroi vasculaire, et le récepteur du PAF humain (hPAFR) est exprimé autant sur les leucocytes que sur les CMLV. Le PAF influence la prolifération des CMLV et il est connu que fos est un des marqueurs précoces de la prolifération. Notre projet de recherche consistait en l'étude des effets du PAF sur la modulation de l'expression de c-fos , au niveau de l'ARNm dans les CMLV et les cellules Mono-Macl, une lignée monocytaire."--Résumé abrégé par UMI.
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Roszkowska, Monika. "Mécanismes moléculaires de la transdifférenciation des cellules musculaires lisses et calcification dans l'athérosclérose." Thesis, Lyon, 2018. http://www.theses.fr/2018LYSE1059/document.
Full textAbstract:
Chez les patients atteints d'athérosclérose, les calcifications vasculaires sont une caracteristique des plaques d'athérome. Elles résultent de la trans-différenciation des cellules musculaires lisses (CMLs) en cellules de type ostéoblastique et/ou chondrocytaire, notamment en réponse à des cytokines inflammatoires. Les CMLs forment alors des cristaux par l'activité de la phosphatase alcaline non-spécifique du tissu (TNAP). A la lumière de résultats récents, nous avons émis l'hypothèse que la TNAP module la trans-différenciation des CMLs. Nos objectifs étaient donc de déterminer l'effet de la TNAP dans la trans-différenciation des CMLs, et d'étudier les mécanismes impliqués dans son induction. Nous avons observé que l'ajout de phosphatase alcaline purifiée ou la surexpression de TNAP stimule l'expression de marqueurs chondrocytaires en culture de CMLs et de cellules souches mésenchymateuses. De plus, l'inhibition de la TNAP bloque la maturation de chondrocytes primaires. Nous avons observé un rôle des cristaux formés par la TNAP, puisque l'ajout de cristaux seuls ou associés à une matrice collagénique a reproduit les effets de la TNAP. Nous suspectons que la TNAP agit en hydrolysant le PPi et en générant des cristaux. Ces cristaux ensuite induisent l'expression du facteur ostéogénique BMP-2 et l'inhibition des effets de la BMP-2 annule les effets de la TNAP. De plus, nous étions intéressés par les la localisation et la fonction de marqueurs de minéralisation comme les annexines en parallèle de la TNAP. Nous avons observé que l'activité TNAP des CMLs induit la minéralisation en grande partie quand la TNAP est associée aux vésicules matricielles et au fibres de collagèneVascular calcification (VC) is a hallmark of atherosclerosis plaques. Calcification (formation of apatite) of advanced lesions share common features with endochondral ossification of long bones and appears to stabilize plaques. This process is associated with trans-differentiation of vascular smooth muscle cells (VSMCs) into chondrocyte-like cells. On the other hand, microcalcification of early plaques, which is poorly understood, is thought to be harmful. The two proteins necessary for physiological mineralization are tissue-nonspecific alkaline phosphatase (TNAP) and collagen. Under pathological conditions, TNAP is activated by inflammatory cytokines in VSMCs, whereas collagen is produced constantly. The activation of TNAP appears to induce calcification of these cells. Therefore, the objective of this PhD thesis was to study the role of TNAP and generated apatite crystals in the VSMC trans-differentiation and determine underlying molecular mechanisms. Based on the obtained results, we propose that activation of BMP-2, a strong inducer of ectopic calcification, and formation of apatite crystals generated by TNAP represents a likely mechanism responsible for stimulation of VSMC trans-differentiation. Moreover, we were interested in localization and function of mineralization markers such as TNAP and annexins in mineralization process mediated by trans-differentiated VSMCs and VSMC-derived matrix vesicles (MVs). We observed that, similarly as in the case of typical mineralizing cells, increased TNAP activity in VSMC-derived MVs and association with collagen were important for their ability to mineralize
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Stepien, Olivier. "Etude des mécanismes impliqués dans l'hypertrophie vasculaire : rôle des ions calcium dans la transmission du signal mitogénique dans les cellules musculaires lisses." Paris 11, 1999. http://www.theses.fr/1999PA11T038.
Full textAbstract:
Certaines circonstances pathologiques telles que l'hypertension, l'athérosclérose ou la resténose après une intervention vasculaire comme l'angioplastie ou la greffe peuvent induire une réponse proliférative des cellules musculaires lisses (CML) de la paroi artérielle. La régulation de la concentration intracellulaire des ions calcium ([Ca2+]i) semble jouer un rôle important dans le contrôle de la croissance des CML et des composés tels que les antagonistes des canaux calciques sensibles aux variations du potentiel de membrane (dihydropyridines, benzothiazépines et phénylalkilamines) sont capables de ralentir la prolifération des CML. Ces molécules qui sont d'efficaces agents antihypertenseurs semblent jouer un rôle critique dans la physiologie cardio-vasculaire puisqu'ils possèdent, en plus de leur propriété d'antagoniste des canaux calciques, des activités anti-athérogéniques. Les objectifs de ce travail ont été de définir les mécanismes par lesquels, une dihydropyridine comme l'amlodipine, en ralentissant la croissance des cellules musculaires lisses, exerce son effet anti-athérogénique. Pour cela nous avons examiné l'effet de ce composé sur certains des événements essentiels de la croissance cellulaire dont l'expression des proto oncogènes c-fos, c-jun, c-myc, les variations de la concentration intracellulaire de calcium et l'activité des protéines MAPK p42 et p44 déclenchés par différents facteurs impliqués dans la réponse proliférative des CML. Nos études réalisées sur un modèle in vitro de culture de CML d'aorte de rat ont montré que 1) l'amlodipine inhibe la prolifération des CML en agissant sur des événements précoces du cycle cellulaire 2) elle réduit l'expression des proto-oncogènes c-fos, c-jun et c-myc 3) elle inhibe la libération du calcium des stocks intracellulaires induite par la thrombine et la thapsigargine 4) elle n'influence pas l'activité des MAPK p42 et p44 stimulée par la thrombine 5) la phase de mobilisation des ions calcium est nécessaire à l'effet mitogène de la thrombine mais n'influence pas l'activation des MAPK p42 et p44 par cet agoniste. Nos résultats apportent donc, sur le plan fondamental, de nouvelles connaissances sur les mécanismes de la transmission du signal mitogénique par la thrombine et sur les effets intracellulaires de l'amlodipine. Les effets de l'amlodipine décrits dans cette étude et qui s'ajoutent aux propriétés princeps de ce composé doivent participer à son activité anti athérogénique.
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Ruiz, Matthieu. "Rôle de PGC-1α dans le système cardiovasculaire : Recherche d'activateurs cœur-spécifiques et étude de ses mécnismes de régulation dans le muscle lisse aortique." Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00834420.
Full textAbstract:
L'insuffisance cardiaque (IC) reste la cause majeure de morbimortalité dans les pays industrialisés justifiant ainsi la recherche de traitements plus ciblés. Caractérisée par des désordres métaboliques importants qui impliquent notamment une dysfonction mitochondriale, le métabolisme énergétique apparait comme une composante majeure du développement de l'IC. Ces dernières années, le co-activateur transcriptionnel PGC-1α a été proposé comme un acteur central du contrôle de la fonction mitochondriale et constitue ainsi une cible thérapeutique d'intérêt. Ainsi, l'objectif principal de ce travail est de développer un test cellulaire robotisé permettant la recherche d'activateurs de PGC-1α dans un contexte cardiaque.La mise en place de ce test cellulaire de criblage dans des cellules H9c2 différenciées en cellules pseudo-cardiaques a permis l'identification de trois familles majeures : les hormones stéroïdiennes, les vitamines B et les acides gras, capables d'activer l'expression de PGC-1α et par ce biais d'induire une biogenèse mitochondriale ainsi qu'une augmentation de la respiration mitochondriale. La validation de ces effets dans des cardiomyocytes de rat adulte a permis d'une part de valider la pertinence du test et du choix du modèle cellulaire et d'autre part de vérifier qu'une induction de l'expression de PGC-1α se répercute bien sur la cascade transcriptionnelle de la biogenèse mitochondriale. Ce test constitue donc un atout majeur dans le recherche de nouveaux activateurs de PGC-1α pour mieux comprendre ses mécanismes de régulation dans le cœur, mais offre aussi des perspectives intéressantes pour la recherche de composés pharmacologiques à visée thérapeutique.Par ailleurs, peu de connaissances sont disponibles dans la littérature concernant le contrôle de la biogenèse mitochondriale dans le muscle lisse vasculaire et plus particulièrement dans l'hypertension artérielle. Ainsi, la deuxième partie de ce travail a été de caractériser la biogenèse mitochondriale dans un contexte d'hypertension. A travers l'utilisation d'un modèle expérimental d'hypertension et après confirmation dans des cellules musculaires lisses en culture, nous avons montré une induction importante de la biogenèse mitochondriale dans l'hypertension par un mécanisme stress oxydant-dépendant. De plus, cette induction est corrélée à une forte activation de la CaMKII, totalement bloquée par la présence d'un anti-oxydant : le resvératrol. Ces résultats suggèrent donc un contrôle de la biogenèse mitochondriale dépendante de la balance pro/anti-oxydante via l'activation de la CaMKII dans le muscle lisse vasculaire.
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Chataigneau, Thierry. "Caractérisation d'une conductance chlorure activée par le calcium dans les cellules musculaires lisses de l'aorte de rat : régulation par la voie du monoxyde d'azote (NO) et implication dans le contrôle du tonus vasculaire." Poitiers, 1996. http://www.theses.fr/1996POIT2321.
Full textAbstract:
L'endothelium exerce un important controle du tonus vasculaire par l'intermediaire des facteurs relaxants et contracturants qu'il synthetise. L'un de ces facteurs, le monoxyde d'azote (no), est un puissant vasodilatateur dont les effets sont principalement medies par le gmpc. Il est reconnu que les canaux potassiques dependants du calcium sont actives par la voie du no tandis que les canaux calciques sont generalement inhibes. Cependant, nous ne possedons aucune information des effets du no sur les conductances chlorures du muscle lisse vasculaire. Nous avons caracterise le courant chlorure active par le calcium (i#c#l#,#c#a) dans les cellules musculaires lisses fraichement isolees d'aorte de rat avec la technique du patch-clamp en configuration cellule entiere. Cette conductance a ete isolee a l'aide de solutions de chlorure de cesium qui permettent de bloquer le courant potassique active par le calcium et sensible au tea qui a ete mis en evidence dans le courant global. I#c#l#,#c#a est un courant rectifiant dans le sens sortant et ne presentant pas d'inactivation ; il est significativement inhibe par le dids qui est le plus efficace des trois bloqueurs de conductance chlorure testes. Il est active dans une gamme physiologique de concentrations calciques intracellulaires et le seuil d'activation est proche de 100 nm. I#c#l#,#c#a est active par la norepinephrine et l'atp, et pourrait etre responsable de la depolarisation initiant le couplage excitation-contraction. Notre etude montre pour la premiere fois que i#c#l#,#c#a est regule positivement par la voie du no. L'effet potentialisateur du nitroprussiate de sodium, un nitrovasodilatateur donneur de no, n'est observe qu'apres activation prealable du canal chlorure par le calcium. Deux mecanismes de regulation ont ete determines impliquant tous les deux le gmpc. Le premier resulte vraisemblablement d'un effet direct du gmpc tandis que le second proviendrait d'une phosphorylation du canal ou d'une proteine associee par la proteine kinase dependante du gmpc. L'etude de l'influence de i#c#l#,#c#a sur l'activite contractile de l'aorte de rat indique que le courant chlorure entrant contribue au maintien de la contraction noradrenergique. En revanche, i#c#l#,#c#a s'opposerait aux contractions induites par des solutions hyperpotassiques depolarisantes contenant au moins 50 mm kcl et permettant l'inversion du sens du courant. I#c#l#,#c#a contribuerait a l'effet relaxant du no dans ces conditions
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Larrieu, Daniel. "Etude de la différenciation des cellules musculaires lisses in vitro : rôle du facteur de transcription NFAT2 et de l'organisation tridimensionnelle de la fibre élastique." Bordeaux 2, 2004. http://www.theses.fr/2004BOR21151.
Full textAbstract:
Les cellules musculaires lisses (CML) sont capables de moduler leur phénotype. Cette modulation phénotypique, associée à des propriétés de prolifération et de migration, est impliquée dans des processus physiopathologiques, tels que l'athérosclérose et l'hypertension. Les facteurs induisant ces variations phénotypiques sont mal connus. Dans ce manuscrit, j'ai exploré, l'étude, in vitro, du rôle du facteur de transcription NFAT2 dans le processus de différenciation des CML. L'état de différentiation des CML a été suivi à l'aide d'un marqueur de différenciation, sm-MHC, et d'un marqueur de dédifférenciation, 2PIA2. J'ai mis en évidence que la translocation nucléaire du NFAT2 est primordiale au maintien et à l'acquisition de l'état différencié des CML. De plus, j'ai montré que l'anticorps 2P1A2, reconnaissait un epitope conformationnel membranaire de l'isoforme non-musculaire de la myosine IIA qui possède une distribution près du noyau et orientée vers les pseudopodes de CML dédifférenciées. La différenciation est fonction de la fibre élastique. La fibre élastique est un des composants majeurs de la paroi artérielle. Les amines oxydases telles que la lysyloxydase sont importantes dans la formation de la trame élastique. Nous avons mis en évidence une relation entre la diminution d'une autre amine oxydase, la semi-carbazide sensitive amine oxydase (SSAO), l'amincissement de la fibre élastique et la dédifférenciation des CML dans la survenue des anévrismes aortiques humainsSmooth muscle cells (SMC) are capable of modulating their phenotype. This phenotypic modulation, associated with proliferation and migration properties, is implicated in physiopathological processes like arteriosclerosis and hypertension. Factors wich induce these phenotypic variations are poorly known. In this manuscript, I have explored, the study, in vitro, of the NFAT2 transcription factor role in SMC differentiation process. SMC differentiation state have been followed with the help of a differentiation marker, sm-MHC, and a dedifferentiation marker, 2P1A2. I emphasized that NFAT2 nuclear translocation is essential to the maintain and the acquisition of differentiated SMC state. Moreover, I showed that 2P1A2, recognized a membrane conformation epitope of the non-muscle myosin II A which have a distribution near the nucleus and oriented towards pseudopode in dedifferentiated SMC. SMC differentiation state is function of elastic fibre. Elastic fibres is one of major components of the arterial wall. Amine oxydases like lysil oxidase are important in the formation of elastic scaffold. We emphasized a relation between the decrease of an other amine oxydase, the semi-carbazide sensitive amine oxydase (SSAO), the decrease of elastic lamellar thickness and the dedifferentiation of SMC in the apparition of human aortic anevrysm
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Ke, Xuedan. "Effet de l'homocystéine sur le phénotype des cellules musculaires lisses artérielles : effet direct ou dysfonction endothéliale ?" Thesis, Aix-Marseille 2, 2010. http://www.theses.fr/2010AIX22952/document.
Full textAbstract:
La modulation phénotypique des cellules musculaires lisses (CML) artérielles d’un phénotype contractile vers un phénotype synthétique en réponse à des stimuli pathogènes est impliquée dans le développement de l’artériosclérose. Il est clairement établi que l'homocystéine (HCY) induit un remodelage de type artériosclérose au niveau des artères élastiques. Ce remodelage pathologique induit par l'HCY est dominé par l'accumulation de CML présentant un phénotype synthétique associée à une dysfonction endothéliale. Cependant, l'effet de l'HCY sur le phénotype des CML n’a pas été clairement décrit. Compte tenu du rôle déterminant des cellules endothéliales dans la modulation du phénotype des CML artérielles, l’objectif de notre travail est de déterminer dans quelle mesure l’effet de l’HCY sur le phénotype des CML est direct ou est dépendant d’une dysfonction endothéliale. Nous avons montré que des concentrations pathologiques d’HCY augmentent la prolifération de CML d’artères ombilicales humaines en culture et augmentent leur potentiel protéolytique par un mécanisme dépendant des espèces réactives de l'oxygène. Dans le même temps, l’HCY ne modifie pas l'expression des collagènes de type I et III et de la fibronectine, ni l'expression de protéines contractiles (SM a-actine, calponine hl, SMMHC et smoothéline B). Que ce soit sur des CML pré-conditionnées ou non par du milieu de culture conditionné (MC) de cellules endothéliales de veine ombilicales (HUVEC), nous avons montré que le MC d’HUVEC stimulées par 100µM d'HCYne lève pas l'inhibition de la prolifération des CML induite par les HUVEC et ne modifie pas l'expression des collagènes de type I et III et de la fibronectine, ni l'expressìon de protéines contractiles. Nos résultats sont en faveur d’un effet modulateur direct de l'HCY orientant le phénotype des CML vers un phénotype synthétique. S’il est connu que l'HCY induit une dysfonction endothéliale, cette dysfonction ne semble pas avoir de conséquences sur le phénotype des CMLPhenotype switching of arterial smooth muscle cells (SMC) from a contractile phenotype through a synthetic phenotype in response to pathogenic stimuli is involved in the development of arteriosclerosis. It is well established that homocysteine (HCY) induces arteriosclerosis in elastic arteries. This pathologic arterial remodelling is characterized by the accumulation of SMC showing synthetic phenotype associated with an endothelial dysfunction. However, the effects of HCY on SMC phenotype are unclear. Since endothelial cells play a key role in the regulation of SMC phenotype, the goal of our study is to determine whether HCY modulates the SMC phenotype through a direct effect or through the induction of an endothelial dysfunction. We found that pathologic concentrations of HCY increase the proliferation of human arterial umbilical SMC in culture and increase their proteolytic potential through a reactive oxygen species dependant mechanism. We also found that HCY has not effect on the expression of type I and III collagen and fibronectin, as well as contractile proteins (SM a-actine, calponine hl, SMMHC et smootheline B). Using pre-conditionned or not pre-conditionned SMC by conditionned culture medium (MC) from human umbilical vein endothelial cells (HUVEC), we found that MC from HUVEC stimulated with 100µM of HCY prevent the inhibition of proliferation induced HUVEC and did not altered the expression of type I and III collagen and fibronectin, as well as contractile proteins. Our results suggest that HCY can directly modulate the SMC phenotype towards a synthetic phenotype. Although HCY as been previously shown to induce an endothelial dysfunction, this latter does not seem to be involve in the modulation of SMC phenotype associated with hyper homocysteinemia
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Déléris, Paul. "Etude du métabolisme intranucléaire du phosphatidylinositol 3, 4, 5-trisphosphate dans les cellules musculaires lisses d'aorte du porc." Toulouse 3, 2003. http://www.theses.fr/2003TOU30139.
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Ruiz, Matthieu. "Rôle de PGC-1α dans le système cardiovasculaire : recherche d’activateurs cœur-spécifiques et étude de ses mécanismes de régulation dans le muscle lisse aortique." Thesis, Paris 11, 2012. http://www.theses.fr/2012PA114830/document.
Full textAbstract:
L’insuffisance cardiaque (IC) reste la cause majeure de morbimortalité dans les pays industrialisés justifiant ainsi la recherche de traitements plus ciblés. Caractérisée par des désordres métaboliques importants qui impliquent notamment une dysfonction mitochondriale, le métabolisme énergétique apparait comme une composante majeure du développement de l’IC. Ces dernières années, le co-activateur transcriptionnel PGC-1α a été proposé comme un acteur central du contrôle de la fonction mitochondriale et constitue ainsi une cible thérapeutique d’intérêt. Ainsi, l’objectif principal de ce travail est de développer un test cellulaire robotisé permettant la recherche d’activateurs de PGC-1α dans un contexte cardiaque.La mise en place de ce test cellulaire de criblage dans des cellules H9c2 différenciées en cellules pseudo-cardiaques a permis l’identification de trois familles majeures : les hormones stéroïdiennes, les vitamines B et les acides gras, capables d’activer l’expression de PGC-1α et par ce biais d’induire une biogenèse mitochondriale ainsi qu’une augmentation de la respiration mitochondriale. La validation de ces effets dans des cardiomyocytes de rat adulte a permis d’une part de valider la pertinence du test et du choix du modèle cellulaire et d’autre part de vérifier qu’une induction de l’expression de PGC-1α se répercute bien sur la cascade transcriptionnelle de la biogenèse mitochondriale. Ce test constitue donc un atout majeur dans le recherche de nouveaux activateurs de PGC-1α pour mieux comprendre ses mécanismes de régulation dans le cœur, mais offre aussi des perspectives intéressantes pour la recherche de composés pharmacologiques à visée thérapeutique.Par ailleurs, peu de connaissances sont disponibles dans la littérature concernant le contrôle de la biogenèse mitochondriale dans le muscle lisse vasculaire et plus particulièrement dans l’hypertension artérielle. Ainsi, la deuxième partie de ce travail a été de caractériser la biogenèse mitochondriale dans un contexte d’hypertension. A travers l’utilisation d’un modèle expérimental d’hypertension et après confirmation dans des cellules musculaires lisses en culture, nous avons montré une induction importante de la biogenèse mitochondriale dans l’hypertension par un mécanisme stress oxydant-dépendant. De plus, cette induction est corrélée à une forte activation de la CaMKII, totalement bloquée par la présence d’un anti-oxydant : le resvératrol. Ces résultats suggèrent donc un contrôle de la biogenèse mitochondriale dépendante de la balance pro/anti-oxydante via l’activation de la CaMKII dans le muscle lisse vasculaireHeart failure (HF) is still the major cause of morbimortality in industrialized countries that justify the research of new treatments. Characterized in part by metabolic disorders including mitochondrial dysfunction, energetic metabolism appears as an essential component in HF development. These last years, PGC-1α has been proposed as a central actor of mitochondrial function control and thus as a therapeutic target of interest.The development of a cellular robotized assay in cardiac-like differentiated H9c2 cells allowed identification of three families: steroid hormones, B vitamins and fatty acids, able to induce the expression of PGC-1α and thus up-regulate mitochondrial biogenesis and mitochondrial respiration. The validation of these effects in adult rat cardiomyocytes lets in the one hand to validate the suitability of the assay and in the other hand to confirm that PGC-1α induction leads to mitochondrial biogenesis activation. Consequently, this assay constitutes a major asset to find new activators of PGC-1α to better understand its regulation in heart and provides interesting perspectives for the research of therapeutic pharmacologic compounds.Mechanisms controlling mitochondrial biogenesis in response to hypertension in vascular smooth muscle remain unclear. In this context, the second part of this work was to identify how mitochondrial biogenesis is modulated in arterial hypertension. Using an experimental model of hypertension and after validation in cultivated smooth muscle cells, we show a mitochondrial biogenesis induction in response to hypertension in relation with an increase in oxidative stress. Moreover, this induction is associated with a significant increase in CaMKII activity which was totally blocked by an antioxidant: resveratrol. These results suggest a regulation of mitochondrial biogenesis by oxidative stress via a CaMKII mechanism in vascular smooth muscle
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Belmokhtar, Karim. "Rôle de BMP2 sur la différenciation vasculaire des cellules souches mésenchymateuses issues de la moëlle osseuse." Thesis, Tours, 2011. http://www.theses.fr/2011TOUR3312.
Full textAbstract:
Nous avons déterminé la capacité de régénération du tissu vasculaire in vivo des CSM traitées avec BMP2 à la dose de [100 ng.mL-1] dans un modèle rat. Nous avons ainsi rapporté qu’une prothèse revêtue de CSM traitée par BMP2 pendant 1 semaine et implantée 14 jours chez le rat permettait la reconstitution des trois tuniques de la paroi mimant la structure de l’aorte. La capacité proangiogénique des CSM était augmentée par BMP2 grâce à la mise en jeu de voies intracellulaires impliquant le facteur induit par l’hypoxie (HIF-1α) via JAK/STATs. Nous avons montré que les CSM migraient sous l’influence de BMP2 par stimulation de l’activité du complexe enzymatique NADPH oxydase via l’augmentation de l’expression des protéines PAK1, Vav2 et RAC1 GTPase/PI3K. Ce travail a confirmé l’intérêt de l’utilisation de CSM conjointement à rh-BMP2, une protéine impliquée dans l’embryogénèse vasculaire, pour la bioingénierie de la régénération vasculaireWe determined the capacity to regenerate vascular tissue in vivo, of MSC treated with BMP2 at a dose of [100 ng.mL-1] in a rat model. We have reported that a prosthesis coated with CSM treated 1 week with BMP2 and implanted in rats 14 days allowed the reconstruction of the three tunics of the wall that mimic the structure of the aorta. The proangiogenic capacity of MSCs was increased by BMP2 through the intracellular pathways involving hypoxia inducible factor (HIF-1α) via JAK / STAT. We have shown that MSCs migrated under the influence of BMP2 by stimulating the activity of the enzyme complex NADPH oxidase via the increased expression of PAK1 protein, Vav2 and RAC1 GTPase/PI3K. This work confirmed the interest of the use of MSC in conjunction with rh-BMP2, a protein involved in vascular embryogenesis for bioengineering for vascular regeneration
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Vromman, Amélie. "Etude des voies de signalisation impliquées dans les réponses physiopathologiques des cellules musculaires lisses vasculaires au cours de l'angiopathie amyloïde cérébrale et de la re-sténose post-angioplastie." Thesis, Paris 6, 2014. http://www.theses.fr/2014PA066481.
Full textAbstract:
L'angiopathie amyloïde cérébrale (AAC) est caractérisée par des dépôts amyloïdes au sein des parois cérébrovasculaires, associés à des altérations vasculaires et des troubles cognitifs. L'inflammation étant un processus délétère au cours de l'AAC, je me suis intéressée à l'effet inflammatoire sur les cellules musculaires lisses (CML) vasculaires du peptide amyloïde principalement accumulé au sein des parois artérielles, le peptide A 1-40. Cette étude met en évidence que le peptide A 1-40 n'induit pas directement de réponse inflammatoire de la part des CML, mais les sensibilise aux stimuli pro-inflammatoires. Aussi, cette sensibilisation cellulaire résulte d'une pré-activation des voies PI3K/Akt et NF- B, insuffisante à elle-seule pour induire une réponse inflammatoire. Dans une seconde partie de ma thèse, je me suis intéressée aux mécanismes moléculaires impliqués dans la migration des CML au cours de la re-sténose post-angioplastie. Lorsque l'athérosclérose conduit à une sténose artérielle, l'angioplastie est l'opération chirurgicale rétablissant le flux sanguin. Cependant, dans les 6 mois postopératoires, 10 à 20% des patients présentent une re-sténose post-angioplastie. Un des principaux facteurs impliqué dans ce processus est la migration des CML de la paroi vers la lumière artérielle. Dans ce contexte, j'ai pu démontrer que la re-sténose post-angioplastie chez le rat est dépendante du niveau d'expression de l'adénylyl cyclase 8 (AC8). Dans cette étude, nous avons également montré que l'expression de l'AC8 induit la migration des CML et l'activation de la métalloprotéinase matricielle-2, en stimulant les voies Epac2/Rap1 et PI3K/AktCerebral amyloid angiopathy (CAA) is defined by amyloid deposits within cerebral vasculature associated with vascular damages and cognitive impairment. As inflammation is a deleterious event during CAA, I explored the inflammatory effect in vascular smooth muscle cells (VSMC) of the amyloid peptide which is mainly accumulated in arterial wall, the peptide A1-40. This study evidenced that A1-40 does not directly induce inflammatory response of VSMC but sensitizes these cells to pro-inflammatory stimuli. Furthermore, this sensitization results from a pre-activation of PI3K/Akt and NF-B pathways, insufficient alone to induce inflammatory response.In the second part of my thesis, I studied the molecular mechanisms involved in VSMC migration occurring in post-angioplasty restenosis. When atherosclerosis leads to arterial stenosis, angioplasty is the surgery practiced to restore blood flow. However, during the 6 month post-surgery, 10 to 20% of patients display post-angioplasty restenosis. One of the main components of this event is the migration of VSMC from the wall to arterial lumen. In this context, I demonstrated that the severity of rat post-angioplasty restenosis is dependent to the level of adenylyl cyclase 8 (AC8) expression. In this study, we have also shown that AC8 expression promotes VSMC migration and matrix metalloproteinase-2 activation through Epac2/Rap1 and PI3K/Akt pathways
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Oliveira, Silva Cristina de. "Diabète de type II et expression des protéines CD36, NF-kB et PPARγ dans les cellules musculaires lisses aortiques : modulation par les produits avancés de glycation et par l'insuline." Montpellier 1, 2004. http://www.theses.fr/2004MON1T009.
Full textAbstract:
LES COMPLICATIONS CARDIOVASCULAIRES DU DIABETE DE TYPE II ET DES SYNDROMES D'INSULINORESISTANCE RESULTENT D'UN ENCHAINEMENT ATHEROGENE METTANT EN JEU L'HYPERGLYCEMIE CHRONIQUE, LA FORMATION EXCESSIVE DES AGEs, LEUR INTERACTION AVEC RAGE, L'ACTIVATION DE NF-kB ASSOCIEE A LA LIBERATION DE CYTOKINES PROINFLAMMATOIRES, UN STRESS OXYDANT QUI MODIFIE LES LDL ET UNE SUREXPRESSION DU RECEPTEUR SCAVENGER CD36. BIEN CONNU DANS LES MONOCYTES/MACROPHAGES, CET ENCHAINEMENT QUI CONDUIT AUX CELLULES SPUMEUSES ET A LA STRIE LIPIDIQUE EST BEAUCOUP MOINS CARACTERISE DANS LES CELLULES MUSCULAIRES LISSES VASCULAIRES (CML). NOUS AVONS DONC RECHERCHE UNE EVENTUELLE ACTION MODULATRICE DE L'INSULINE SUR CETTE SEQUENCE, AU NIVEAU DE L'EXPRESSION DES PROTEINES NF-kB, PPARγ ET CD36 DANS LES CML AORTIQUES DE RATS GK STIMULES PAR AGEs. AU NIVEAU DU TISSU AORTIQUE DU RAT GK NOUS AVONS CARACTERISE LES ELEMENTS DE L'ENCHAINEMENT PATHOGENE : SURPRODUCTION D'ANION SUPEROXYDE, SUREXPRESSION DES PROTEINES RAGE, NF-kB ET CD36 ASSOCIEES A UNE AUGMENTATION DES AGEs ET DES AOPP PLASMATIQUES. DANS LES CML EN CULTURE, L'INSULINE DIMINUE LA REPONSE DE NF-kB, PPARγ ET CD36 CONSECUTIVE A LA STIMULATION PAR LES AGEs. CETTE MODULATION PAR L'INSULINE EST PLUS FAIBLE DANS LES CML DE RATS GK. L'AGONISTE DE PPARγ, 15-dPGJ2 DIMINUE AUSSI LA REPONSE DE NF-kB. NOS RESULTATS SONT COMPATIBLES AVEC LE CONCEPT D'UNE TRANSFORMATION DES CML EN CELLULES SPUMEUSES ET JUSTIFIENT LES APPROCHES THERAPEUTIQUES UTILISANT L'INSULINE ET DES AGONISTES DE PPARγ DANS LA PREVENTION DES COMPLICATIONS VASCULAIRES DU DIABETE DE TYPE II.
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Filip, Anna. "La semicarbazide-sensitive amine oxydase : son rôle dans la différenciation cellulaire des chondrocytes et des cellules musculaires lisses vasculaires et son implication dans des pathologies articulaires et cardiovasculaires." Thesis, Université de Lorraine, 2014. http://www.theses.fr/2014LORR0244/document.
Full textAbstract:
La « semicarbazide-sensitive amine oxidase » (SSAO) catalyse la déamination oxydative des amines primaires en aldéhyde, peroxyde d’hydrogène et ammoniac. Elle participe à la différenciation cellulaires, l’inflammation et la transmigration leucocytaire à travers l’endothélium lymphatique. Nos objectifs ont été d’étudier le rôle de la SSAO (i) dans la différenciation chondrocytaire hypertrophique, en relation avec le développement de l’arthrose en utilisant des chondrocytes de rat en culture primaire et des genoux arthrosiques de patients (ii) dans le développement de l’athérosclérose en invalidant des souris ApoE-/- qui développent naturellement l’athérosclérose pour le gène de la SSAO. Au niveau articulaire, la SSAO a été détectée dans le cartilage de rat et humain. In vitro, la SSAO (activité et expression) augmentent au cours de la différenciation terminale de chondrocytes de rat. Son inhibition par le LJP1586 entraîne un retard de différenciation chondrocytaire. La SSAO augmente également dans les zones arthrosiques du cartilage humain parallèlement à l’augmentation de l’hypertrophie. La SSAO jouerait donc un rôle dans la différenciation terminale des chondrocytes (hypertrophie) possiblement via le transport de glucose et dans le développement de la maladie. Au niveau vasculaire, les souris femelles ApoE-/-SSAO-/- de 25 semaines présentent une augmentation de la surface des plaques d’athérome par rapport aux ApoE-/-. Ceci est associée à une diminution de l’expression d’α-actine dans le média sous les plaques et de smMHC dans l’aorte abdominale (AA) sans modification ni de l’infiltration des lymphocytes T; ni des monocytes/ macrophages dans la paroi artérielle, ni du profil cytokinique pro-/anti-inflammatoire dans la rate. A 15 semaines, les souris femelles ApoE-/-SSAO-/-, sm-MHC a diminué dans les AA de ces souris par rapport aux ApoE-/- ainsi qu’une réorientation du trafic des cellules immunitaires vers la paroi aortique sans modification significative de la surface des plaques a été détecté. La SSAO jouerait donc un rôle précoce dans le développement de l’athérosclérose via une modification du trafic des cellules immunitaires et du phénotype des CML dans la paroiThe semicarbazide-sensitive amine oxidase (SSAO) catalyzes the oxidative deamination of primary amines into aldehydes, hydrogen peroxide and ammonia. The SSAO was implicated in cellular differentiation, inflammation and transmigration of leukocyte through the lymphatic. The objectives of this work were to study the role of SSAO (i) in chondrocyte differentiation and in the development of osteoarthritis using rat chondrocyte primary cell culture and osteroarthritic samples from patients. (ii) in the development of atherosclerosis using ApoE-/- mice, which develop naturally atherosclerosis, invalidated for the SSAO gene. Concerning the articulation, the SSAO (expression and activity) was detected in the rat and human cartilage. In vitro, SSAO increases during chondrocyte terminal differentiation (hypertrophy) and the inhibition of its activity by LJP1586, decreases the level of differentiation. In human arthritic cartilage, SSAO was higher that in healthy cartilage, in association with an increase in hypertrophic markers. The SSAO plays a role in the terminal differentiation of chondrocytes and might be involved in the development of osteoarthritis. At the vascular level, 25 week-old female ApoE-/-SSAO-/- mice presented a 50% increase in plaque surface associated with an 80% decrease in α-actin expression in the media of aortic sinus and a decrease in sm-MCH in abdominal aortas (AA) compared to ApoE-/- mice. These results were not due neither to a modification of monocytes/ macrophages, Tcell infiltration in the plaque nor in a pro- or anti-inflammatory cytokine change in spleen. In 15 week-old ApoE-/-SSAO-/- mice, even if no modification of plaque surface was found, a decrease in sm-MHC was noticed in the AA from ApoE-/-SSAO-/- compare to ApoE-/- mice. More over, the immune cell trafficking was increased in the aortic wall of ApoE-/-SSAO-/- compared to ApoE-/- mice. Thus, SSAO is involved in the early development of atherosclerosis in changing the immune cell trafficking and the VSMC phenotype