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Dissertations / Theses on the topic 'Cellules humaines – Culture – Méthodologie'
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Bisson, Francis. "Effets de couches nourricières murines et humaines sur la préservation des capacités prolifératrices des cellules épithéliales humaines cultivées in vitro." Thesis, Université Laval, 2012. http://www.theses.ulaval.ca/2012/29206/29206.pdf.
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Roumagnac, Isabelle. "Etude d'un modèle de cellules mucosecrétantes humaines en culture." Grenoble 2 : ANRT, 1986. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb37600870r.
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Roumagnac, Isabelle. "Etude d'un modele de cellules mucosecretantes humaines en culture." Paris 6, 1987. http://www.theses.fr/1987PA066207.
Full textAbstract:
Un modele de cellule epitheliales intestinales d'origine humaine, en culture, ayant une differenciation en cellules mucosecretantes, et la mise au point d'un dosage elisa de ces mucines ont ete developpes pour etudier la regulation de la mucosecretion
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Butruille, Yves. "La muco- secretion des cellules bronchiques humaines en culture." Lille 2, 1996. http://www.theses.fr/1996LIL2T004.
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Fossoyeux-Comte, Emmanuelle. "Culture de preadipocytes : méthodologie et intérêt." Bordeaux 2, 1988. http://www.theses.fr/1988BOR2P112.
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Thomas, Jeannie Marie-France. "Métabolisme de l'acide arachidonique dans les cellules endothéliales humaines en culture." Grenoble 2 : ANRT, 1987. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb376091286.
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Ragab-Thomas, Jeannie. "Metabolisme de l'acide arachidonique dans les cellules endotheliales humaines en culture." Toulouse 3, 1987. http://www.theses.fr/1987TOU30194.
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8
Najad, Benhayoun Majda. "Interaction des dérivés du polystyrène avec les cellules endotheliales humaines en culture." Paris 13, 1989. http://www.theses.fr/1989PA132024.
Full textAbstract:
Des microbilles de polystyrène substitué par des groupements sulfonates (psso#3-na) ou sulfamides d'acides aminés (psso#2-asp et psso#2-glu), présentant des propriètés antithrombiques analogues à celle de l'héparine, ont été utilisées comme supports pour la culture de cellules endotheliales de la veine ombilicale humaine. Pour cela, nous avons déterminé la cinétique de croissance de ces cellules sur ces billes en comparaison avec la croissance observée sur les boîtes de culture du commerce en polystyrène traité pour la culture. Nous avons également déterminé un aspect de leur fonctionnalité par l'étude de la production de protéines spécifiques de ces cellules. Les résultats obtenus ont montré que les cellules endotheliales avaient une croissance normale sur les billes de psso#3-na, alors que sur les billes de psso#2asp et psso#2-glu, la croissance etait inhibée. L'interaction de ces cellules avec ces billes dépend d'au moins une protéine adhesive, la fibronectine. En effet, l'utilisation de cette protéine comme substrat biologique sur les billes a amélioré la croissance des cellules endotheliales sur les resines de psso#3-Na mais pas sur les resines de psso#2-asp et psso#2-glu. Si l'on observe que, quantitativement, les adsorptions de la fn sur ces diverses résines sont équivalentes, il semble y avoir une difference dans la conformation de la proteine adsorbee. L'étude de la production de certaines protéines caracteristiques (le facteur von willebrand, l'activateur tissulaire du plasminogene et son inhibiteur rapide, le pai) de la cellule endothéliale en culture sur les billes de psso#3-na a montré que l'absence éventuelle d'une de ces protéines dans les surnageants de culture sur billes proviendraient seulement d'une adsorption non spécifique sur les billes et non d'une inhibition des fonctions des cellules endotheliales par les billes elles-mêmes
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Spilmont, Christophe. "Morphogenese et activite secretoire des cellules glandulaires tracheales humaines en culture tridimensionnelle." Reims, 1993. http://www.theses.fr/1993REIMM203.
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TOSONI-PITTONI, ELIANE. "Expression d'antigenes immunoprotecteurs du virus epstein-barr dans les cellules humaines en culture." Paris, Institut national d'agronomie de Paris Grignon, 1988. http://www.theses.fr/1988INAPA020.
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Brun, Manuel. "Effets cellulaires et moléculaires de l'hydroxyurée sur les cellules endothéliales humaines en culture." Antilles-Guyane, 2004. http://www.theses.fr/2004AGUY0110.
Full textAbstract:
Depuis 1995,l'administration d'hydroxyurée(HU) aux patients drépanocitaires montre une capacité à réduire la fréquence des crises vaso-acclusives et à diminuer l'incidence des complications majeures de cette pathologie. Cependant son mécanisme d'action précis resteàélucider. Dans ce contexte ,notre objectif est d'étudier les effets de l'HU sur l'endothélium. Une étude ciblée sur des gènes candidats combinée à une approche de type analyse du transcriptome (sur 406 gènes humains) a démontré la capacité de l'HU sur les cellules endothéliales humaines en culture à:diminuer la synthèse d'un facteur vasoconstricteur(l'endotheline-1). Induire la sur-expression de facteurs pro-inflammatoires comme ICAM-1 IL-8 et la chemokine RANTES. L'utilisation d'hinibiteurs spécifiques a suggéré l'implication de la guanylate cyclase soluble et de la voie liée au NFkB dans la sur expression de RANTES et IL-8. D'autre part ,la modulation d'ICAM-1 (récepteur endothélial majeur des globules rouges parasités par Plasmodium falciparum) par l'HU nous a suggéré de mener une étude dans le contexte de l'infection palustre. En effet, les zones endémiques de la malaria et de la drépanocytose étant largement chevauchantes,toute utilisation de l'HU dans cette zone doit faire l'objet d'étude préalables. Ainsi ,en utilisant un modèle murin de neuropaludisme,nous avons montré qu'un traitement à l'HU diminuait de façon significative la mortalité des animaux infectés. Ce travail démontre donc que l'endothélium est une cible de l'HU. Les résultats obtenus ouvrent également de nouvelles perspectives thérapeutiques au niveau du traitement de la drépanocytose et du paludismeSince 1995,administration of hydroxyurea(HU) to sickle cell patients allows to reduce vaso occlusive crisis frequency and to decrease incidence of some of the main complications of that disease. However,its mechanism of action remains to be elucidade. In this contex,our goal is to study the effects of HU on the endothelium. A targeted study on candidates genes associated to an transcriptome analysis approach (on 406 human genes),has demonstrated the capacity of HU in human endothelial cells in culture to:decrease the synthesis of a vaconstrictor factor (endothelin-1),increase the expression of pro inflammatory factors such as ICAM-1,il-8 and the chemokine RANTES. Involvement of the soluble guanylate cyclase and the NFKB pathways in over expression of RANTES and IL-8 has been suggested by the use of specific inhibitors. In addition ,modulation of ICAM-1(a major endothelial receptor of Plasmodium Falciparum parasited red blood cells) by HU suggested the need of study in the field of paludous infection ,indeed, since sickle cell dasease (SCD) and malaria endemic areas are largely overlapping,any utilisation of that drug in this area should be preceded of safety studies. Hence,using an murine model of neuromalaria,we showed that administration of HU significantly recuded the mortality of treated mice. Finally ,this work demonstrates that endothelium is a target of HU. The above mentioned results also opens new therapeutic avenues in the field of SCD and malaria treatment
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Taris, Christine. "Etude comparative du caryotype de cellules rénales humaines saines et tumorales." Bordeaux 2, 1988. http://www.theses.fr/1988BOR2P096.
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Martin, Céline. "Étude des procédés d’amplification de cellules souches mésenchymateuses humaines." Thesis, Université de Lorraine, 2016. http://www.theses.fr/2016LORR0261/document.
Full textAbstract:
L'essor des thérapies régénératives au cours des 10 dernières années a entraîné un effort de recherche important, mais l'obtention des cellules souches humaines en quantité suffisante reste cependant encore problématique, notamment concernant les cellules souches mésenchymateuses (CSM). Ces travaux ont donc mis en œuvre une approche à la croisée de la biologie et du génie des procédés afin d'identifier les verrous limitant la croissance des CSM. L'étude des méthodes d'intensification de culture a été entreprise grâce à l'utilisation de microporteurs et d'une plateforme de minibioréacteurs de 200~mL. Puis le développement d'un milieu de culture sans sérum a été testé dans le but de maximiser la croissance cellulaire dans des conditions biochimiques contrôlées. Les CSM humaines en tant que modèle type en thérapie cellulaire ont été démontrées comme extrêmement sensibles aux phases de congélation/décongélation, aux variations de température, à un vieillissement prématuré et nécessitant un milieu de culture complexe riche en facteurs de croissance et d'adhérence. Suite à cette étude, plusieurs écueils pourront être évités lors de la montée en échelle d'un procédé de culture de CSM afin d'intégrer leurs paramètres biologiques intrinsèques aux paramètres d'ingénierie des bioréacteurs (transfert de chaleur, contraintes hydrodynamiques, surface d'adhérence)Progress in regenerative medicines over the past ten years have led to an important research mobilisation, but obtaining a sufficient amount of human stem cells remains nonetheless problematic, especially for mesenchymal stem cells (MSC). Hence, this work developed an approach coupling biology and process engineering to identify barriers limiting MSC growth. The study of scaled-up amplification methods was performed using microcarriers and a 200~mL minibioreactors platform. In order to maximise MSC growth in a biochemically controlled environment, a serum free medium development was tested as well. Human MSC as model cell type for cellular therapies have thus been demonstrated as extremely sensitive to freeze/thaw cycles, temperature variations, subject to premature aging and needing a complex medium enriched in multiple growth and adherence factors. Following this study, several pitfalls might be avoided during MSC process scale-up by integrating the cells biology into the bioreactors' process engineering parameters (heat transfer, hydrodamic stress, adhesion surface)
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Hagry, Catherine. "Approche d'un modèle expérimental d'étude pharmacologique : les cultures de cellules endothéliales humaines." Bordeaux 2, 1993. http://www.theses.fr/1993BOR2PE86.
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Castillon, Nicolas. "Culture tridimensionnelle de cellules épithéliales respiratoires humaines : applications à la thérapie génique et cellulaire." Reims, 2003. http://www.theses.fr/2003REIMM207.
Full textAbstract:
@Nous avons pu mettre en évidence que des cellules épithéliales respiratoires humaines cultivées sous forme de sphéroi͏̈des pouvaient mimer, à long terme, la structure et la fonctionnalité d'un épithélium respiratoire de surface. Nous avons étudié la capacité de ces structures 3-D à recoloniser un épithélium respiratoire dénudé. Par utilisation d'un vecteur lentiviral, codant la protéine GFP, nous avons également étudier la capacité de ces sphéroi͏̈des polarisés et différenciés à être transduits. Notre étude a pu montrer que ces structures 3-D pouvaient régénérer un épithélium respiratoire pseudostratifié et pouvaient être transduites par un vecteur lentiviral avec une expression à long terme de la protéine GFP et un maintien de la fonctionnalité épithéliale (fréquence ciliaire, sécrétion de chlore). Ces sphéroi͏̈des pourraient ainsi être un outil potentiel de thérapie génique et cellulaire dans la régénération d'un épithélium respiratoire mucoviscidosique@We have shown that human airway epithelial cells cultured as 3-D spheroid could mimic for a long term an airway surface epithelium structure and functionality. We analyzed the potential capacity of these 3-D structures to regenerate an airway epithelium and to be transduced using a pseudotyped lentiviral vector encoding GFP. Our results demonstrate that the spheroids can regenerate a well-differentiated human airway epithelium and can be efficiently transduced by a pseudotyped lentiviral vector with a sustained and long-term expression of the GFP, without any alteration of the spheroid structure and functionality (ciliary beating frequency and CFTR Cl- channel activity). The spheroids could be proposed as a potential tool for gene and cell therapy in order to repopulate a denuded airway epithelium in cystic fibrosis
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Roussie, Martine. "Liaison et activité biologiques des hormones gonadotropes aux cellules de granulosa humaines in vitro." Tours, 1989. http://www.theses.fr/1989TOUR3805.
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Galy, Anne. "Cellules épithéliales thymiques humaines en culture : modulation de leur prolifération et de leur fonction humorale." Lyon 1, 1989. http://www.theses.fr/1989LYO1T164.
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Falson, Odile. "Effet de la nicotine sur les cellules endothéliales vasculaires humaines en culture : prolifération cellulaire et production dePGI2." Lyon 1, 1987. http://www.theses.fr/1987LYO11751.
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XUEREB, JEAN-MARIE. "Regulation de l'expression du facteur tissulaire par les cellules musculaires lisses arterielles humaines en culture." Toulouse 3, 1998. http://www.theses.fr/1998TOU30052.
Full textAbstract:
Les cellules musculaires lisses (cmls) assurent la vasomotricite des arteres. Elles sont quiescentes, contractiles, synthetisent peu de matrice extracellulaire et n'expriment pas le facteur tissulaire (ft), le principal initiateur de la coagulation. Dans les plaques d'atherome ou lors des phenomenes de restenose apres angioplastie, les cmls perdent le phenotype contractile au profit d'un phenotype secreteur, proliferent et expriment le ft qui participe aux complications thrombotiques associees a la rupture des plaques d'atherome. Cette modulation phenotypique est observee in vitro. Les cmls ressemblent a celles localisees dans la neointima des lesions vasculaires. L'objectif etait d'etudier l'expression du ft par les cmls en culture et sa modulation par differents agonistes ou agents pharmacologiques. Nous montrons qu'en presence de serum, les cmls expriment le ft et son activite fonctionnelle. Dans les cmls quiescentes l'expression de ft est faible et induite par differents agonistes. L'expression du ft induite par svf et pdgf, depend de l'activation d'erk 1/2, emprunte les voies ras et pkc, celle induite par le lps depend de la pkc. L'augmentation de la concentration d'ampc intracellulaire bloque l'activation d'erk et la synthese de ft induite par le pdgf. L'heparine et certains polysaccharides sulfates (sps) inhibent la migration, la proliferation et la synthese de matrice extracellulaire in vitro et in vivo. Nous montrons que ces molecules inhibent la synthese de ft, la proliferation et les activites erk et pkc des cmls stimulees par le svf. Dans les cmls stimulees par egf ou pdgf, l'inhibition de l'expression du ft par l'heparine n'est pas associee a une inhibition des activites erk, pkc ou de la proliferation. L'heparine n'inhibe pas l'expression de ft et l'activite pkc induites par le lps. Outre leur effet sur la proliferation, les sps pourraient diminuer le risque de thrombose associe aux lesions vasculaires en modulant l'expression du ft par les cmls.
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Ha, Thi Binh Minh. "Contributions à l'étude des méthodes de production de masse des cellules endothéliales cornéennes humaines." Thesis, Saint-Etienne, 2014. http://www.theses.fr/2014STET001T/document.
Full textAbstract:
La bioingénierie de greffons endothéliaux cornéens est une des solutions réalistes en cours de développement dans quelques laboratoires pour palier au grand déséquilibre entre pénurie mondiale de dons de cornée et besoins immenses et croissant des populations. Cette véritable médecine régénérative consistera à injecter des cellules endothéliales (CEs) dans la chambre antérieure aux stades précoces des dystrophies endothéliales et, pour les stades avancées des pathologies endothéliales, à reconstruire in vitro des greffons endothéliaux composés d'un support transparent et biocompatible colonisé par une monocouche des CEs. Dans les 2 cas, la première étape obligatoire est la production de masse de CEs ou de "CE-like". Dans ce travail, nous avons exploré les différentes possibilités pour obtenir suffisamment de CEs fonctionnelles pour envisager des applications cliniques : 1- L'expansion de CEs natives prélevées sur des cornées de donneurs, ou culture primaire, se heurtent aux capacités prolifératives limitées des CEs in vitro. Un des prérequis étant la compréhension des mécanismes d'arrêt de la prolifération des CEs humaines, nous avons fait la synthèse bibliographique des connaissances sur leur cycle cellulaire et leur sénescence, et présentons 2 articles originaux: le premier utilise un microarray spécifique de 112 gènes de contrôle du cycle cellulaire pour comparer les profils transcriptionnels des CEs de 6 modèles biologiques comportant théoriquement un stimulus prolifératif croissant: in vivo, post mortem, organoculture, culture primaire confluente, culture primaire non confluente et lignée immortalisée. Nous identifions de nombreux acteurs impliqués dans l'arrêt du cycle, en particulier ceux impliquant une réponse à des dommages oxydatifs de l'ADN. Le second article explore les capacités prolifératives résiduelles des CEs de donneurs âgés de plus de 50 ans, sont les plus nombreux en Europe et donc les pourvoyeurs habituels de CEs pour la bioingénierie. Nous montrons qu'une optimisation des techniques de culture permet d'obtenir in vitro une mosaïque endothéliale de 2000 cellules/mm2. Enfin, un troisième article montre qu'un stimulus physique inattendu constitué d'un train d'impulsion électrique permet d'obtenir un très grand nombre de figures mitotiques mais uniquement dans des zones de faible DCE, démontrant encore une fois l'importance majeur de l'inhibition de contact dans l'arrêt prolifératif. 2- La sélection et l'expansion, par culture en sphère, des progéniteurs endothéliaux de la périphérie endothéliale pourrait être un moyen de contourner la sénescence de la majorité des CEs. La synthèse bibliographique montre que la plupart des travaux publiés émanent d'une seule équipe japonaise. Dans notre second article, nous avons montré l'existence de rares "label-retaining cells" dans les cornées de donneurs âgés, qui pourraient correspondre à ces progénieteurs. Nous avons aussi montré qu'il était possible d'obtenir des sphères avec ces donneurs. 3- La différenciation de cellules souches embryonnaires, mésenchymateuses ou des cellules pluripotentes induites est enfin la troisième voie qui pourrait permettre de produire des CEs en grand nombre. La méthode d'induction de la différenciation pourrait reproduire le schéma physiologique et désormais bien caractérisé de formation de l'endothélium à partir du mésenchyme périoculaire dérivé de la crête neurale et que nous rappelons au début de notre mémoire bibliographique. Nous rappelons également les méthodes utilisables pour caractériser les cellules obtenues: vérification de leur identité par immunomarquage d'un panel de protéines caractéristique (en absence de marqueur unique spécifique) et vérification de leur fonctionnalité par mesures de leurs capacités de pompage ionique, au minimum de façon indirecte sur chambre d'électrophysiologie de type Ussing, au mieux de façon directe en quantifiant la déturgescence d'une cornée humaine conservée dans le bioréacteur breveté du BiiGCCorneal endothelial engineering is becoming a more and more realistic solution to restore vision from corneal edema. This method focus to regenerate corneal endothelium by direct injection of corneal endothelial cells (ECs) into patient anterior chamber at the early stage of endothelial dystrophies, or by grafting a transparent biocompatible material covered by a monolayer of ECs. These two techniques require both in vitro isolation and amplification of ECs or endothelial-like cells. In this thesis, different strategies to obtain a high quantity of functional ECs for clinical application are explored: 1- Due to the limit proliferative capacity of EC, the first strategy consists to analyze mechanisms implicated EC cell cycle arrest and then to optimize protocol for native EC isolation or for cell proliferation activation ex vivo. This is summarized in three publications. The first publication describes the cell cycle regulation by comparing transcriptional expression of 112 genes in 6 biological models of EC with different proliferative profile: in vivo, postmortem, organ-culture, confluent primary culture, non confluent primary culture and immortalized cell line. , The key molecular actors identified using the combining microarray analysis and gene ontology methods are consistent with previous findings about oxidative DNA damage mechanism. The second publication characterizes EC differentiation process and its impact on EC proliferative capacity in old donor corneas. Analyses of differentiation/progenitor markers and of proliferative capacity underline the differentiation process of EC from the centre to the peripheral corneal endothelium. Thereby, an optimized culture protocol was developed, allowing the formation of high-density monolayer (> 2000 cells/mm2) with stable endothelial morphology. We proved the possibility to make profit from a majority of old-donor cornea grafts invalidated for penetrating graft In the third publication, the activation of endothelial cell cycle by electric pulses directly in corneal graft was characterized. We confirm the activation of endothelial cell cycle at different phases but also the damage of tissue during electroporation. 2- Second strategy consists of the amplification of ECs from potential EC progenitors. Using sphere forming culture and a new method to detect slow-cycling cells, we demonstrate the existence of "young" ECs population with higher proliferative capacity in corneal periphery. The isolation of ECs by sphere formation is one possible step for ECs selection in vitro. 3- The differentiation of embryonic stem cells, mesenchymal stem cells or induced pluripotent stem cells into corneal endothelial cells is the third approach considered by our laboratory. The manipulation of stem cells differentiation would be based on the molecular mechanisms implicated in the formation of corneal endothelium from periocular mesenchymal cells described in the first part of the bibliography. Finally, in order to validate the quality of endothelial cell mass obtained, we revisited recent methods for the evaluation of corneal endothelial identity (immunolocalisation of specific markers), for the measurement of pump activity of cell monolayer (Ussing chamber, perfusion chamber) or directly in deswelled cornea using the bioreactor patented by the BiiGC laboratory
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Gérard, Baudry. "Mise au point d'une méthode de culture de cellules épidermiques humaines dans le cadre des méthodes alternatives." Nantes, 1985. http://www.theses.fr/1985NANT091P.
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Nasarre, Patrick. "Fonctions régulatrices de la sémaphorine SEMA3F sur la morphologie, ládhérence et la migration de cellules tumorales humaines en culture." Poitiers, 2004. http://www.theses.fr/2004POIT2324.
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Blaise, Véronique. "Etude des recepteurs de substances vasoactives (peptide natriuretique auriculaire, bradykinine) sur les plaquettes humaines et sur les cellules glomerulaires renales humaines en culture." Besançon, 1996. http://www.theses.fr/1996BESA3705.
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BLANCHERE, MARIE. "Mecanismes d'action des androgenes et role des interactions stroma-epithelium dans les cellules prostatiques humaines en culture. Alterations dans les cellules tumorales." Paris 6, 2001. http://www.theses.fr/2001PA066024.
Full textAbstract:
La prostate depend des androgenes, mais leur mecanisme d'action dans le controle de la croissance prostatique est complexe, mal compris et probablement indirect. Nous avons etudie, dans des cellules prostatiques humaines en culture : fibroblastes, cellules epitheliales immortalisees pnt2 et lignees cancereuses, differentes voies d'action des androgenes impliquees dans ce controle et leurs modifications dans les cellules tumorales. Dans les fibroblastes et les pnt2, les androgenes stimulent l'expression de leur recepteur (ra). Le tgf dont la secretion est stimulee par les androgenes dans les pnt2 et qui inhibe leur proliferation, pourrait jouer le role de relais dans l'action des androgenes sur la croissance epitheliale. Les cellules cancereuses deviennent insensibles a l'action antiproliferative du tgf dont la secretion et/ou l'activation sont diminuees. Toutefois, dans les lncap, les androgenes stimulent la secretion de tgf ouvrant la voie a d'autres effets du tgf tels que l'induction de la mobilite cellulaire et l'apparition de metastases. Cette regulation disparait au stade d'androgeno-independance. L'aromatisation des androgenes est une autre voie d'action possible. Les cellules prostatiques expriment une aromatase fonctionnelle et les recepteurs et de l'stradiol. Comme les androgenes, les strogenes induisent l'expression du ra dans les fibroblastes et la secretion de tgf dans les cellules epitheliales. Dans les cellules cancereuses, le rapport re/re est inverse, l'activite aromatase diminuee et son inhibition par le tgf, observee dans les cellules non tumorales, disparait. Enfin, dans les pnt2, le stroma induit l'expression du ra, augmente la secretion de tgf2 et inhibe la proliferation, temoignant d'une regulation
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Fayette, Jérôme. "Effet des cellules dendritiques humaines générées in vitro sur la réponse immunitaire humorale." Lyon 1, 1998. http://www.theses.fr/1998LYO1T259.
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Le, Bel Gaëtan. "Impact d'une couche nourricière humaine et du temps post-mortem sur la culture de cellules cornéennes humaines." Doctoral thesis, Université Laval, 2020. http://hdl.handle.net/20.500.11794/70367.
Full textAbstract:
En raison de la pénurie mondiale de cornées de donneurs utilisées pour traiter les pathologies cornéennes, des alternatives visant à restaurer les déficiences visuelles, comme la production de tissus cornéens humains par génie tissulaire, sont envisagées. Pour traiter les dommages affectant plus précisément l'épithélium cornéen, comme la déficience en cellules souches limbiques (DCSL), l'équivalent cornéen doit avoir un épithélium capable d'auto-renouvellement permettant la bonne cicatrisation de la cornée après la greffe. Pour cultiver des cellules épithéliales de cornées humaines (CECH) in vitro, l'utilisation d'une couche nourricière est nécessaire afin de maintenir la sous-population de cellules souches cornéennes essentielle à la bonne prolifération de ces cellules. Les conditions de culture doivent donc permettre le maintien du phénotype souche de ces cellules, tout en favorisant leur prolifération et en évitant leur différenciation terminale. Cependant, d'autres paramètres comme l'intervalle post-mortem du tissu cornéen à partir duquel sont extraites les CECH cultivées, peuvent influencer la réussite de la culture. La caractérisation des cultures de CECH est importante afin d'optimiser la réussite de la greffe. Les travaux présentés dans cette thèse ont permis de démontrer que la co-culture de CECH avec une couche nourricière murine a entraîné une augmentation significative de l'expression et de la liaison à l'ADN de NFI. Cela est causé par une forte expression de l'isoformes NFI-B présentant une stabilité accrue engendrée par une hyper-glycosylation. Le maintien de l'isoforme NFI-B au cours des passages a été corrélé avec une entrée en différenciation plus rapide des CECH en culture. Ces travaux ont également montré que l'effet de cette couche nourricière murine sur les niveaux d'expression et la capacité de liaison à l'ADN des facteurs de transcription Sp1 et NFI a pu être confirmé dans un autre type cellulaire. En effet, la co-culture de cellules endothéliales cornéennes humaines avec la couche nourricière murine a également causé une augmentation significative de l'expression et de la liaison à l'ADN de NFI. Dans cette étude, cela était associé à une amélioration de la morphologie des cellules endothéliales cornéennes humaines. Ces travaux ont aussi montré que l'intervalle post-mortem influençait de manière négative la prolifération des CECH et le maintien des cellules souches lors des cultures en monocouche. De même, lorsque les mêmes populations cellulaires ont été utilisées pour reconstruire une cornée humaine par génie tissulaire, la capacité de cicatrisation des épithéliums cornéens reconstruits a diminué avec l'augmentation de l'intervalle post mortem. L'étude du transcriptome de ces populations cellulaires par biopuce à ADN, a également révélé que l'intervalle post-mortem avait un impact sur le profil transcriptomique pour les cellules cultivées en monocouche. Il a aussi été montré qu'un greffon reconstruit à partir des CECH co-cultivées avec une couche nourricière humaine a permis de cicatriser la surface cornéenne d'un œil atteint de DCSL. Ces différents résultats mettent en lumière que l'utilisation d'une couche nourricière humaine pour la culture des CECH, associée à un intervalle post-mortem court des tissus dont elles sont issues, est à privilégier pour favoriser une bonne prolifération in vitro des CECH cultivées en monocouche.Because of the worldwide shortage of graftable corneas used to treat corneal pathlogies, alternatives to restore visual impairments, such as the production of a human cornea tissues by tissue engineering, have been considered. To treat injuries affecting the corneal epithelium, such as limbal stem cell deficiency (LSCD), the corneal equivalent must have an epithelium able to self-renewal allowing healing of the patient's corneal epithelium after the transplantation. To culture human corneal epithelial cells (HCECs) in vitro, the use of a feeder layer is necessary so as to maintain the subpopulation of corneal stem cells, which is essential for the proper proliferation of these cells. Therefore, the culture conditions must allow the maintenance of the stem phenotype of these cells, while promoting their proliferation and delaying their terminal differentiation. Other parameters, such as the post-mortem interval of the corneal tissue from which the cultured HCECs are derived, can influence the success of the culture. It is therefore important to characterize the cultures of HCECs in order to optimize the success of a transplant, namely, when these cells are transplanted in order to regenerate the injured corneal epithelium of a patient. The work presented in this thesis demonstrates that the co-culture of HCECs with a murine feeder layer resulted in a significant increase in the expression and the binding to DNA of NFI. This was shown to be caused by strong expression of the NFI-B isoform with increased stability due to hyper-glycosylation. The preservation of the NFI-B isoform with cellular passages was correlated with a faster differentiation of the HCECs in culture. This work also shows that the effect of this murine feeder layer on the expression levels and the DNA binding capacity of the transcription factors Sp1 and NFI was confirmed in another cell type. Indeed, the co-culture of human corneal endothelial cells with the murine feeder layer also caused a significant increase in the expression and binding to DNA of NFI. In this study, this was associated with an improvement in the morphology of human corneal endothelial cells. This work also showed that post-mortem interval could have a negative influence on the proliferation of HCECs and on the maintenance of stem cells during monolayer cultures. When the same cell populations were used to reconstruct a human cornea with tissue engineering, the healing capacity of the reconstructed corneal epithelia was decreased by the increase in post-mortem interval. This was notably validated by a study of the transcriptome of these cell populations by DNA microarray. It has also been shown that a graft reconstructed with HCECs co-cultivated with human feeder layer has enabled to heal the corneal surface an eye with LSCD. These different results highlight that the use of a human feeder layer for culture, associated with a short post-mortem interval of the donor tissues, is to be favoured in order to promote a good in vitro proliferation of HCECs cultivated in monolayer.
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Sánchez-Aguilar, Ricardo. "Mise au point d'un système de multi-minibioréacteurs pour la culture de cellules animales." Master's thesis, Université Laval, 2006. http://hdl.handle.net/20.500.11794/18311.
Full text
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MALET, CATHERINE, and René Ozon. "Effets de l'estradiol et de ses antagonistes : progestatifs et antiestrogenes sur les cellules mammaires humaines en culture." Paris 6, 1993. http://www.theses.fr/1993PA066602.
Full textAbstract:
Les interactions de l'estradiol (e2) avec la progesterone (p) et les progestatifs d'une part, les antiestrogenes triphenylethyleniques d'autre part, ont ete etudiees sur un systeme de cellules mammaires humaines normales en culture mis au point dans le laboratoire et permettant de separer cellules epitheliales et fibroblastes. E2 stimule la multiplication des cellules epitheliales avec un effet dose-dependant, objective par des etudes de comptage cellulaire quotidien, mesure d'adn, incorporation de thymidine-h3, mais aussi l'aspect ultrastructural des cellules en microscopie electronique. A l'inverse, la progesterone et ses derives freinent la multiplication cellulaire induite par e2 et favorisent la differenciation cellulaire. L'antagonisme entre e2 et p s'exerce au moins par 3 mecanismes dans ces cellules: p - stimule l'activite de l'enzyme 17beta-estradiol deshydrogenase (e2dh) qui transforme e2 en estrone, moins actif, diminue le taux de recepteurs de e2, etudies par methode immunocytochimique semi-quantitative, et diminue l'expression du protooncogene c-myc, intermediaire de l'effet proliferatif de e2 dans plusieurs modeles e2-dependants et stimule par e2 dans ces cellules. Les antiestrogenes triphenylethyleniques, le tamoxifene et surtout son metabolite actif le 4-hydroxytamoxifene ont eux aussi un effet cytostatique sur les cellules epitheliales mammaires normales, comme cela etait connu sur les cellules mammaires cancereuses. Eux aussi freinent l'expression du protooncogene c-myc, etudie en immunocytochimie. Cette etude participe a une meilleure connaissance de l'hormonodependance du tissu mammaire et a des consequences en pathologie et therapeutique. Il semble qu'un strict equilibre entre e2 et p devrait etre respecte, en terme d'eutrophie mammaire et que toute situation d'hyperestrogenie relative devrait etre evitee et/ou corrigee. Par ailleurs, la constatation d'un effet cytostatique des antiestrogenes sur les cellules mammaires encore normales en fait une arme therapeutique qui devrait pouvoir etre utilisee dans le cadre de la prevention du cancer du sein
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Chauvière, Gilles. "Adhésion des Escherichia coli entérovirulents et des lactobacilles sur des cellules intestinales humaines en culture : étude de leurs intéractions." Paris 11, 1993. http://www.theses.fr/1993PA114831.
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Guerrero, Julien. "Devenir des cellules souches mésenchymateuses humaines dans un environnement tridimensionnel : application à l’ingénierie du tissu osseux." Thesis, Bordeaux, 2014. http://www.theses.fr/2014BORD0200/document.
Full textAbstract:
L’ingénierie tissulaire osseuse a pour objectif de repousser les limitesexistantes de la régénération osseuse. Les stratégies proposées consistent àassocier à une matrice tridimensionnelle (3D) des cellules autologues, capables derégénérer en 3D un tissu fonctionnel. Le but de ce travail a été d’étudier l’importancede la communication cellulaire entre les cellules du compartiment stromal et lescellules endothéliales au sein d’une matrice tridimensionnelle poreuse constituée depolysaccharides naturels biodégradables. Nos résultats montrent que l’architecture etla nature de cette matrice permettent de guider la différenciation ostéoblastique descellules humaines mésenchymateuses issues de la moelle osseuse. L’organisationcellulaire en agrégats observée stimule les interactions cellulaires, et plusparticulièrement la formation de jonctions communicantes de type GAP et l’activitédes Connexines 43. Nous avons en également étudié la fonction des Pannexines 1et 3 dans la culture 3D. En conclusion, l’ensemble de nos travaux démontre que lesinteractions cellule-cellule constituent des événements majeurs dans cesmécanismes de régénération tissulaire. Les données cellulaires et expérimentalestémoignent de l’intérêt d’utiliser la totalité de la suspension de moelle osseuse pourfavoriser à la fois l’ostéoformation et la vascularisation du tissuBone tissue engineering aims to resolve the existing limitations of boneregeneration methods. One of the proposed strategies consists on the association,within a three-dimensional (3D) matrix, with autologous cells able to regenerate afunctional 3D tissue. The purpose of this study was therefore to investigate theimpact of cellular communication, between cells of the stromal compartment andendothelial cells, within the three-dimensional porous matrix made of biodegradablenatural polysaccharides, focusing on bone repair. Our results show that thearchitecture and the nature of the 3D macroporous matrix promotes the guidance ofmesenchymal stems cells, derived from human bone marrow, towards theosteoblastic lineage. Also, that the organization in aggregates, promoted by the 3Dmatrices, stimulated cell communication, evidenced by the formation of GAPjunctions and activity of Connexins 43. We also focused on the function ofPannexines 1 and 3 for the 3D culture in these matrices of polysaccharides. Inconclusion, this work shows that cell-cell interactions play a major role in order toimprove bone tissue regeneration. Also, cellular and experimental data demonstratesthe advantage of using a total fraction of bone marrow cells to promote both boneformation and vascularization
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Pelletier, Bernard. "Mise au point d'un nouveau modèle de cellules épithéliales humaines normales et son utilisation comme cible de composés génotoxiques." Dijon, 1988. http://www.theses.fr/1988DIJOS036.
Full textAbstract:
L'utilisation d'un milieu de culture conditionné par une culture confluente de fibroblastes. De la présence sur le support de culture d'une matrice extracellulaire d'origine fibroblastique permettant d'augmenter significativement le rendement des cultures primaires des cellules épithéliales. La présence de facteur d'adhésion et de croissance est également responsable de la stimulation de l'adhésion et induit la synthèse d'ADN. Ces cellules épithéliales sont capables de réparer les alkylations de l'ADN. Elles activent métaboliquement le benzo(a)pyrène et réparent l'adduit qui en résulte. Aucune génotoxicité n'est détectée pour le clofibrate
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Ellie, Emmanuel. "Mise au point de cultures de tissu nerveux périphérique destinées à l'étude physiopathologique des neuropathies humaines." Bordeaux 2, 1989. http://www.theses.fr/1989BOR23094.
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Imbert, Nathalie. "Perméabilités et homéostasie calciques des cellules musculaires humaines, normales et dystrophiques, se contractant in vitro." Poitiers, 1995. http://www.theses.fr/1995POIT2338.
Full textAbstract:
L'absence de la dystrophine dans les cellules musculaires squelettiques est responsable de la dystrophie musculaire de duchenne (dmd). La localisation de cette proteine au niveau de la face cytoplasmique du sarcolemme semble lui conferer des roles multiples qui se resument a (i) un maintien de la stabilite mecanique de la membrane et (ii) une regulation fonctionnelle des proteines sarcolemmales, notamment celles assurant le transit des ions ca#2#+. La cellule musculaire dmd, se caracterise par une augmentation de la ca#2#+#i#, supposee deletere par activation d'enzymes proteolytiques ca#2#+-dependantes. La culture de muscle humain recree in vitro une partie de la myogenese, constituant ainsi un modele d'etude de la mise en place des mecanismes regulateurs du ca#2#+ interne. Afin d'augmenter le degre de maturation des cellules musculaires humaines, des cocultures nerf-muscle ont ete realisees permettant d'obtenir des cellules humaines se contractant. La ca#2#+#i au repos et apres stimulations pharmacologiques a ete etudiee grace a la cytofluorimetrie laser. Les resultats ont confirme que la contraction pouvait etre un facteur determinant dans l'apparition des anomalies de l'homeostasie calcique: (i) les myotubes dmd cocultives presentent une ca#2#+#i anormalement elevee, a partir du moment ou ils se contractent ; (ii) cette augmentation n'est plus observee lorsqu'ils sont cocultives en presence de ttx (inhibition de la contraction) ; (iii) sur ces memes myotubes (avec ttx), les augmentations transitoires de ca#2#+ lors de stimulations mettant en jeu des mecanismes de regulation calcique membranaire (ach et k#+ 100 mm), ont une amplitude similaire aux cellules normales (a la difference des reponses obtenues sans ttx). Des chocs hypoosmotiques ayant pour but de faire gonfler la cellule et d'exercer une tension sur la membrane, entrainent une augmentation de calcium plus frequemment chez les dmd (81%) que dans les cellules controles (54%). L'etude pharmacologique (gd#3#+) est en faveur d'une intervention de canaux mecanosensibles dans les cellules dmd. Enfin, l'etude des canaux calciques voltage-dependants confirme que des alterations du cytosquelette peuvent modifier les cinetiques des canaux de type l. Ces resultats semblent confirmer l'hypothese selon laquelle la cellule musculaire deficiente en dystrophine doit se contracter pour que se developpent les anomalies calciques. Les canaux mecanosensibles actives par l'etirement pourraient constituer une voie d'entree importante du calcium dans ces cellules, a condition qu'elles se contractent
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Falson-Boutherin, Odile. "Effet de la nicotine sur les cellules endothéliales vasculaires humaines en culture prolifération cellulaire et production de PGI /." Grenoble 2 : ANRT, 1987. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb37604936t.
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Masini-Etève, Valérie. "Activité biologique de différentes fractions du plasma humain sur culture de cellules cutanées humaines agressées ou non agressées." Paris 11, 1995. http://www.theses.fr/1995PA114851.
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ROULIER, SYLVIE. "Role des retinoides au cours de la croissance et de la differenciation des cellules placentaires humaines en culture." Paris 6, 1995. http://www.theses.fr/1995PA066456.
Full textAbstract:
La vitamine a (retinol) joue un role important durant l'implantation et le developpement foeto-placentaire. De plus, l'acide retinoique (ar) est un agent morphogene et teratogene puissant. Cependant, son action sur le placenta reste peu connue. Au cours de ce travail, nous avons tente de mieux comprendre son mecanisme d'action, en particulier, au cours de la croissance et de la differenciation des cellules trophoblastiques humaines. Nous avons etabli la presence des recepteurs nucleaires de l'ar (rar alpha, beta et rxr alpha) dans les cellules trophoblastiques normales de placentas humain a terme, et dans les cellules trophoblastiques de la lignee de choriocarcinome jeg 3. Nous avons alors recherche les effets possibles de l'ar sur ces cellules. Pour cela, nous avons suivi les deux criteres de differenciation que sont la secretion d'hormone chorionique gonadotropine humaine (hcg) et l'expression du recepteur de l'egf (egfr). Dans les cellules normales, l'ar seul n'agit pas sur la secretion d'hcg mais diminue l'expression de l'egfr. Dans les cellules tumorales, l'ar est capable d'augmenter la secretion d'hcg et de diminuer l'expression de l'egfr. Nous avons egalement etudie la regulation de l'expression des recepteurs nucleaires de l'ar. Dans les cellules normales, le recepteur rar beta est induit par son ligand et l'expression du recepteur rxr alpha est augmentee par le traitement par l'egf. Dans les cellules tumorales, des modulations differentes sont observees. En effet, dans ce cas, c'est la forme rxr qui est modulee par l'ar mais pas par l'egf. En conclusion, nos resultats revelent la complexite des mecanismes d'action de l'ar, et montrent que les cellules trophoblastiques normales et les cellules tumorales ne repondent pas de la meme facon a l'action de l'ar
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Berlier, Jessica. "Identification de facteurs favorisant la survie des cellules souches mésenchymateuses humaines carencées en sérum." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2016. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/235574.
Full textAbstract:
La thérapie cellulaire régénératrice permet de soigner un organe ou un tissu lésé par la transplantation de cellules saines isolées chez le patient ou un donneur sain. Les cellules transplantées se substitueront aux cellules défaillantes et régénéreront le tissu endommagé.Les cellules stromales mésenchymateuses (MSC) utilisées dans le cadre de la thérapie cellulaire sont amplifiées par culture ex vivo avant leur implantation chez le patient. Cette étape requiert la présence de facteurs de croissance généralement apportés par l’ajout de sérum, souvent d’origine animale (sérum fœtal bovin [FBS]), au milieu de culture. L’origine animale du FBS pose de nombreux problèmes de biosécurité. En effet, le risque de contamination du FBS par des virus et/ou des prions n’est pas négligeable et des anticorps dirigés contre les protéines animales ont été mis en évidence dans le sérum de certains patients transplantés. La mise au point de milieux de culture dépourvus de sérum mais préservant la viabilité et les fonctions des cellules représente dès lors un enjeu important.Au cours de ce travail, nous avons étudié les effets de la privation en sérum sur la viabilité de MSC isolées à partir de moelle osseuse humaine et des cellules SaOS-2, une lignée cellulaire ostéoblastique. Dans ces cellules, la carence en sérum inhibe les voies de signalisation MAPK ERK1/2, p38 MAPK ainsi que la voie de la PKB et favorise l’expression et l’activation des membres pro-apoptotiques de la famille des Bcl-2. In fine, elle conduit à l’activation des caspases-3/7 et à l’apoptose. Les MSC présentent toutefois une certaine tolérance à la privation en sérum.Nous avons ensuite évalué l’action de deux facteurs, le Glucose-dependent Insulinotropic Peptide (GIP) et l’adénosine triphosphate (ATP) sur les effets délétères et la mortalité induits par la carence en sérum. En effet, dans d’autres types cellulaires, le GIP et l’ATP exercent une action anti-apoptotique en réponse à différents stress cellulaires dont la privation en sérum.Après avoir vérifié la présence et la fonctionnalité du récepteur au GIP (GIPR) dans les MSC humaines ainsi que dans les cellules SaOS-2, nous avons montré que le GIP diminue de moitié la mortalité cellulaire et l’activation des caspases-3/7 observées dans les MSC carencées en sérum. L’utilisation de la forskoline et d’un inhibiteur spécifique de l’adénylate cyclase nous a permis de montrer que l’effet protecteur du GIP nécessite l’activation de la voie de l’adénylate cyclase et l’accumulation d’AMPc intracellulaire. Le GIP est cependant sans effet sur les voies de signalisation MAPK ERK1/2, p38 MAPK et PKB.L’expression des différents membres de la famille des récepteurs purinergiques avait déjà été documentée dans les MSC humaines. Nos résultats ont montré que l’ATP protège partiellement les MSC et les cellules SaOS-2 de la mort cellulaire provoquée par la culture en absence de sérum. De manière intéressante, nous avons observé que le nucléotide abolit l’activation des caspases-3/7. La présence d’ATP permet également de restaurer l’activité des MAPK ERK1/2 et p38 MAPK. Le nucléotide ne module pas la voie de signalisation de la PKB. Ensuite, nous avons confirmé l’implication des différentes voies de signalisation MAPK ERK1/2 et p38 MAPK grâce à l’utilisation de PD0325901, un inhibiteur des MEK1/2, et de SB203580, un inhibiteur de l’activité de la p38 MAPK. Ces deux inhibiteurs contrecarrent l’effet protecteur de l’ATP sur la viabilité des MSC. En outre, à l’instar du GIP, l’ATP entraine une augmentation de l’AMPc intracellulaire, probablement via l’activation du récepteur P2Y11. Cette accumulation d’AMPc participe à l’effet protecteur de l’ATP. L’ajout d’ATP dans le milieu de culture sans sérum module également l’expression des membres de la famille des Bcl-2 dont, notamment, mcl-1 qui code pour une protéine anti-apoptotique, et puma et bmf, deux gènes codant pour des protéines pro-apoptotiques. L’ATP inhibe l’activité de la protéine pro-apoptotique Bad en prévenant sa déphosphorylation.Enfin, nous avons montré que les MSC carencées en sérum libèrent de l’ATP dans le milieu extracellulaire à des concentrations 10 fois supérieures à celles mesurées dans des conditions de culture standards (10% FBS). Ceci pourrait représenter un mécanisme intrinsèque de protection contre la mort cellulaire. En conclusion, nous avons montré que le GIP et l’ATP protègent les MSC humaines et les cellules SaOS-2 de la mort cellulaire induite par la privation en sérum. Nous avons déterminé que la voie de l’adénylate cyclase-AMPc est impliquée dans cet effet protecteur. De même, l’ATP préserve l’activité des voies de signalisation MAPK ERK1/2 et p38 MAPK. Le facteur de transcription CREB pourrait être l’élément central de l’action protectrice du GIP et de l’ATP. Enfin, nos résultats suggèrent que, lorsqu’elles sont carencées en sérum, les MSC seraient capables d’activer un processus intrinsèque de survie via la libération de facteurs tels que l’ATP dans le milieu extracellulaire.Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine)
info:eu-repo/semantics/nonPublished
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Ganem, Joseph-Yves. "Mise en culture et hétérotransplantation de tumeurs carcinoi͏̈des humaines et animales : études biochimique et ultrastructurale." Paris 5, 1988. http://www.theses.fr/1988PA05P622.
Full text
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Cot, Christine. "Utilisation de cellules nerveuses foetales murines et humaines dans une perspective de thérapie génique." Montpellier 2, 1998. http://www.theses.fr/1998MON20112.
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Pouillot, Séverine. "Validation de méthodes de transfert de cellules souches embryonnaires humaines pour la thérapie de la cardiomyopathie associée à la dystrophie musculaire de Duchenne." Thesis, Evry-Val d'Essonne, 2008. http://www.theses.fr/2008EVRY0022/document.
Full textAbstract:
La cardiomyopathie associée à la DMD est une atteinte pour laquelle il n’existe pas actuellement de traitement. Les cellules souches embryonnaires humaines (hES), par leurs propriétés d’autorenouvellement et de différenciation, sont envisagées comme outil thérapeutique. Pour une recherche sur l’implantation de cellules, il n’existait pas de modèle in vitro au long cours. Nous avons ainsi développé un modèle de culture organotypique de tranches de cœur dans lequel nous avons, plusieurs mois après transplantation, retrouvé les cellules hES greffées, différenciées en cardiomyocytes. Par ailleurs, nous avons optimisé la différenciation cardiaque pour améliorer le rendement en cardiomyocytes, en induisant la différenciation cardiaque et en cultivant les cellules hES en bioréacteur. Le modèle d’étude au long terme permettant le suivi des cellules greffées dérivées de cellules hES nous permettra de valider les premières étapes précédant les études in vivo dans des modèles pathologiquesCardiomyopathy associated with DMD is a frequent occurrence with no treatment. Human embryonic stem cells (hESC), because of their self-renew differentiation properties are the best candidates to cardiac cellular therapy. To investigate cells implantation, there was no long term in vitro model. Thus, we have developed an organotypic model of heart slices in which we have, several months after transplantation, found grafted hES cells with evidence of cardiac differentiation. In addition, we have optimised cardiac differentiation to improve cardiac yield, inducing cardiac differentiation and cultivating hES cells in bioreactors. During long term culture model allows the study of grafted hES cells, combines to hESC-derived cells in reasonable number and purity, will constitute validation of the first steps before in vivo studies in pathological models
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Meng, Shiyun. "Préparation d'un substrat biodégradable et multifonctionnel et modulation électrique des fonctions cellulaires des osteoblasts = : Preparation of multifunctional biodegradable substrate and electrical modulation of osteoblast cellular functions." Doctoral thesis, Université Laval, 2010. http://hdl.handle.net/20.500.11794/21934.
Full textAbstract:
L'activité cellulaire répond à la stimulation électrique (SE). Le but de cette thèse était le développement d'un composite multifonctionnel et l'étude de la réponse des ostéoblastes à la SE transmise par un tel composite. Les objectifs spécifiques étaient les suivants: a) synthèse des particules de haute conductivité en polypyrroles (PPy) avec des rendements élevés en contrôlant la taille et la régularité moléculaire; b) bioactivation des particules PPy par dopage à l'héparine (HE); c) préparation de composites multifonctionnels électriquement stables et présentant une haute affinité biologique; d) étude de la prolifération et de la minéralisation des ostéoblastes sur un échafaudage conducteur sous SE. Le chapitre I résume les phénomènes bioélectriques chez l'humain à différents niveaux, les mécanismes possibles de l'action de l'électricité sur les cellules, et l'étude de la SE en génie tissulaire osseux. Ce chapitre propose également une revue critique des différentes techniques et des différentes méthodologies de SE utilisées pour des études environnementales, scientifiques et pour les soins cliniques. Les hypothèses et les objectifs de la thèse sont présentés. Le chapitre II décrit la synthèse des nanoparticules en PPy par polymérisation en emulsion en utilisant le réactif de Fenton comme oxydant. Ces nanoparticules présentent une morphologie polygonale creuse, avec une épaisseur approximative de 50 nm et un diamètre de 400-500 nm. Les caractéristiques cristallines de ces nanoparticules ont été démontrées. Un mécanisme plausible de synthèse est proposé. Le chapitre III rapporte la bioactivation des particules en PPy en utilisant F héparine (HE) comme dopant, la préparation d'une membrane conductrice biodégradable, et la culture de fibroblastes sur ces membranes. Le dopage avec HE améliore la stabilité électrique de la membrane conductrice et augmente l'adhésion et la prolifération de cellules. Le chapitre IV démontre que la SE induite par la membrane conductrice peut moduler l'activité des ostéoblastes et accélérer la formation osseuse. Un champ électrique optimal de 200 mV/mm avec une durée de stimulation entre 2 et 8 h a favorisé la prolifération des ostéoblastes et augmenté l'expression et la production de ses marqueurs spécifiques de maturation (ALP) et de minéralisation (CO). Le chapitre V présente une discussion générale, le sommaire des conclusions et les perspectives de recherche pour le futur. L'implication de ces travaux en génie tissulaire et en santé humaine est également abordée.
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Neaud, Véronique. "Isolement et maintien en culture des cellules de Kupffer humaines : interactions in vitro avec les cellules d'une lignée tumorale et les lymphocytes associés au foie." Bordeaux 2, 1994. http://www.theses.fr/1994BOR28313.
Full textAbstract:
Grâce à leur localisation stratégique à l'intérieur du sinusoide hépatique, les cellules de Kupffer (CK), macrophages résidents du foie, jouent un rôle essentiel dans les processus d'échange et de défense. Notre travail a consisté à étudier le rôle des CK humaines dans la destruction des cellules tumorales et dans le recrutement des lymphocytes. La compréhension de ces mécanismes a nécessité dans un premier temps la mise au point d'un modèle d'étude, in vitro, d'isolement et de culture des CK humaines à partir d'hépatectomies partielles. Les techniques de perfusion à la collagénase, de gradient de Métrizamide et d'élutriation centrifuge, nous ont permis d'obtenir les CK abec une bonne pureté et une excellente viabilité. Pendant leur maintien en culture, ces cellules conservent intactes leurs caractéristiques ultrastructurales et leurs propriétés de phagocytose. Dans un deuxième temps, nous avons montré que les CK humaines isolées à partir de patients porteurs de métastases hépatiques détruisaient, in vitro, les cellules K562 d'une lignée érythroleucémique par au moins 2 mécanismes distincts : une lyse extracellulaire et une phagocytose. Le processus de phagocytose, constitué de stades successifs de contact, internalisation et digestion, ne nécessitait pas d'activation préalable des CK, se déroulait dès les premières heures de coincubation puis se répétait plusieurs fois au cours du temps. Finalement, l'analyse in vitro des cocultures entre CK et lymphocytes associés au foie isolés à partir du foie d'un même patient , a indiqué que les lymphocytes adhéraient de façon spécifique aux macrophages sans système jonctionnel vrai mais avec densification ponctuelle de leur membrane plasmique. Le nombre des contacts augmentait de façon significative au cours du temps et certaines cellules présentaient des signes morphologiques d'activationKupffer cells (KC), the resident liver macrophages, are involved in a great number of functions that are of vital importance for the organism. The aim of our study was to analyse possible interations between KC, tumor cells and liver associated lymphocytes. We isolated KC from liver samples resected during partial hepatectomy. The techniques of collagenase perfusion and centrigugal elutriation we used enabled us to isolate KC with good viability and high purity. Ultrastructural and functional characteristics of cultured KC were similar to those of normal in vivo liver. Then, we co-cultivated KC ans erythromyeloidleukemia cell line K562. We demonstrated that human KC killed tumor cells by phagocytosis. This process could be divided into different stages including uptake, internalization and lysis. Finally we co-cultivated KC and liver assocated lymphocytes (LAL). Our observations showed that LAL adhered to KC without junctional complexes but with occasional densification of the plasma membrane
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Lupien, Caroline. "Mise au point d'une méthode de culture des cellules de Müller de rétines humaines et régulation transcriptionnelle du gène de la GFAP dans ces cellules." Thèse, Université du Québec à Trois-Rivières, 2000. http://depot-e.uqtr.ca/3083/1/000672727.pdf.
Full text
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Dannhoffer, Luc. "Transports ioniques transépithéliaux dans les voies aériennes humaines non-mucoviscidosiques et mucoviscidosiques." Paris 12, 2006. https://athena.u-pec.fr/primo-explore/search?query=any,exact,990002464370204611&vid=upec.
Full textAbstract:
Nous avons étudié l'expression de CFTR dans les épithéliums bronchique, bronchiolaire et alvéolaire humain à l'aide de 2 anticorps anti-CFTR (MAB25031 et MAB1660). Nous avons montré que, dans le poumon humain adulte, CFTR est fortement exprimé tout le long de l'épithélium de surface des voies aériennes. Le profil d'expression de CFTR est similaire dans l'épithélium de surface bronchique et bronchiolaire et diminue légèrement au niveau alvéolaire. Plusieurs études ont suggéré que le NO pouvait moduler les transports ioniques dans divers épithéliums. Nous avons observé que le NO inhibait de manière non sélective les transports ioniques transépithéliaux dans les voies aériennes non-CF et CF. Ces effets semblent impliquer la voie du GMPc. Dans la dernière partie de ce travail, nous avons montré que 10% de cellules épithéliales bronchiques de phénotype non-CF permettaient de normaliser transports ioniques et la sécrétion d'IL-8 dans une culture primaire de cellules épithéliales CF1/ We studied the expression of CFTR in human bronchial, bronchiolar and alveolar epithelia with 2 CFTR antibodies (MAB25031 and MAB1660). We observed that CFTR was strongly expressed in the surface epithelium all along the human bronchial tree. The pattern of CFTR expression was similar in bronchial and bronchiolar epithelia and slightly decreased in alveolar epithelium. 2/ Several studies suggested that nitric oxide (NO) could modulate ion transports in various epithelia ; then we studied the effect of NO on ion transport in human airways. We observed that NO non-selectively inhibits ion transports in non-CF and CF airways. CGMP pathway seemed to be implicated in NO effects. 3/ We finally demonstrated that 10% of non-CF bronchial epithelial cells in a primary culture of CF bronchial epithelial cells could normalize ion transports and IL-8 secretion
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Beaulieu, Leclerc Véronique. "Optimisation des conditions de culture des cellules endothéliales cornéennes humaines par l'utilisation du facteur de croissance transformant β-1 (TGF-β1) dans une culture à deux phases." Master's thesis, Université Laval, 2017. http://hdl.handle.net/20.500.11794/27584.
Full textAbstract:
Contexte: Les cellules endothéliales cornéennes humaines (CECH) peuvent adopter un phénotype fibroblastique en culture, les rendant inutilisables en génie tissulaire de la cornée. Le facteur de croissance transformant β (TGF-β) serait impliqué dans ce phénomène, mais il est aussi connu pour maintenir les CECH en état de quiescence in vivo. Objectifs: Comparer l’effet du TGF-β1 sur le phénotype des CECH lors des phases de prolifération ou de maturation des cultures et optimiser les conditions de culture des CECH. Méthodes: Des CECH ont été cultivées en présence ou non de TGF-β1 et de facteur de croissance épidermal (EGF) dans une culture à deux phases. La morphologie, l’expression de marqueurs de fonctionnalité, la résistance trans-endothéliale et la perméabilité des cultures ont été analysées à l’approche de la confluence (phase de prolifération) et suivant la phase de maturation post-confluence. Résultats: L’ajout de TGF-β1 lors de la prolifération a généré des CECH fibroblastiques et la perte des marqueurs de jonctions cellulaires, indépendamment de la présence d’EGF. En phase de maturation, les CECH présentaient un phénotype endothélial et des jonctions cellulaires fonctionnelles. Elles avaient une forte résistance trans-endothéliale et une faible perméabilité. Les résultats démontrent que le TGF-β1 favorise la formation d’une barrière endothéliale semi-perméable lors de la maturation des cultures de CECH, se rapprochant ainsi de l’état physiologique des CECH in vivo.Background: Human corneal endothelial cells (HCEC) easily become fibroblastic when cultured, rendering them unsuitable for tissue engineering of the cornea. Transforming growth factor β (TGF-β) could be a key factor in this phenomenon; however, it is also known to maintain the endothelium in a quiescent state in vivo. Purpose: To compare the effects of TGF-β1 on HCEC’s phenotype during either the proliferation or the maturation phase of the cultures and optimize culture conditions for HCECs. Morphology, functionality markers, trans-endothelial resistance and permeability of the cultures were analyzed at confluency (proliferation phase) and after the post-confluence maturation phase. Results: Adding TGF-β1 during proliferation produced fibroblastic HCECs and loss of the cell junction’s markers, independently from the presence of EGF. On contrast, during the maturation phase, HCECs had an endothelial phenotype and functional cell junctions. They produced a high trans-endothelial resistance and a low permeability. Overall, results show that TGF-β1 promotes formation of a typical leaky endothelial barrier during the maturation phase of cultured HCECs, thus approaching the physiological properties of in vivo HCECs.
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Parent, Victor. "Développement d'un milieu sans sérum et d'un procédé à grande échelle pour la prolifération de cellules humaines précurseurs du muscle." Doctoral thesis, Université Laval, 2017. http://hdl.handle.net/20.500.11794/27863.
Full textAbstract:
La dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) est une maladie génétique affectant un garçon sur 3500. Elle entraîne une dégénération progressive et irréversible des muscles. Actuellement, la maladie est incurable et aucune thérapie ne permet de traiter les patients de façon efficace et sécuritaire. La thérapie cellulaire, qui consiste à injecter des cellules musculaires humaines saines, les myoblastes, dans les muscles des personnes atteintes de la DMD, a déjà donné des résultats cliniques prometteurs. Par contre, quelques problèmes entravent le développement de cette thérapie. Entre autre, le milieu de culture utilisé pour l’expansion des myoblastes contient du sérum fœtal bovin (FBS). Le FBS est un produit animal non défini pouvant être contaminé par des bactéries, des virus ou des prions. Les risques possibles pour la santé des patients peuvent entraver l'acceptation de la thérapie. Il est donc préférable de remplacer le FBS par un mélange d'additifs définis, notamment par des cytokines. De plus, les procédés de production actuels sont inadéquats pour répondre à la demande en cellules musculaires. Ce projet vise à élaborer un milieu de culture sans sérum pour la prolifération in vitro des cellules musculaires et à développer un procédé de production à grande échelle de ces cellules. Pour développer un milieu sans sérum, une méthode en boucle a été utilisée. Celle-ci se divise en 3 étapes : a) monter une banque de facteurs potentiels en identifiant les récepteurs cellulaires par RT-PCR et par un criblage de la littérature, b) tester ces facteurs en culture en utilisant, entre autre, une planification statistique des expériences (DOE) permettant de vérifier les effets individuels et synergiques de ces additifs et c) ajouter les additifs générant une réponse bénéfique au milieu de culture. Cette boucle a été itérée jusqu'à ce que le nombre de facteurs testés soit suffisant pour que la réponse cellulaire avec le nouveau milieu soit comparable au milieu avec FBS. Pour atteindre l'objectif de mise à l’échelle, le projet s’est limité à la sélection de microporteurs permettant une adhésion efficace des myoblastes. Suite à l'essai par DOE de 9 milieux de base et de 72 additifs, un milieu sans sérum, le LOBSFM, a été développé. Il s'agit, à notre connaissance, du seul milieu de culture sans sérum existant qui est aussi efficace que le milieu traditionnel pour la prolifération des myoblastes. Un brevet a été déposé pour protéger ce milieu. Il permet la prolifération spécifique des myoblastes (~80% myoblastes dans la culture, vérifié par marquage immunocytochimique) aussi efficacement que le milieu standard contenant 15% de FBS, durant au moins 60 jours de culture. De plus, les myoblastes cultivés dans le LOBSFM conservent leur capacité de fusionner et ainsi former des fibres musculaires. Pour ce qui est du procédé de culture, les microporteurs poreux Cytoline2™ ont permis d'obtenir une concentration cellulaire finale de 1,5E6 cell/mL, comparable à la culture en flacon statique. Les pores protègent les myoblastes contre les contraintes hydrodynamiques et permettent une récupération simple des cellules.Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a genetic disease affecting one boy out of 3500. It leads to progressive and irreversible muscle degeneration. Currently, there is no cure for this disease and no therapy allows an efficient and safe treatment. Cell therapy consists in injecting healthy human muscle cells, myoblasts, into the muscles of DMD patients. Promising results have been obtained in clinical trials using this approach. However, some problems need to be overcome. Particularly, the original culture medium used to expand myoblasts contains Foetal Bovine Serum (FBS). FBS is an undefined product derived from animal, which can be contaminated with bacteria, viruses or prions. The possibility of harmful consequences for the patients hampers the acceptability of the therapy, so FBS must be replaced by a mixture of defined factors such as specific recombinant cytokines. Moreover, the production processes are currently inappropriate to meet the demand for muscle cells. Therefore, this project aims to develop a serum-free medium for the in vitro proliferation of muscle cells and a large-scale process for the production of those cells. A multi-step method was used to develop the serum-free medium. It is divided into three main steps: a) to build a panel of potential factors from a screen of the literature followed by the detection of more than 100 receptors and autocrine factors using RT-PCR, b) to test those factors in culture using statistical design of experiment (DOE) allowing to verify individual and synergistic effects and c) to add the factors that generate beneficial response to the culture medium. Those steps are followed until a cellular response comparable to the culture in standard medium is obtained. To achieve the scale-up objective, the project was limited to the selection of microcarriers that allowed the proper adhesion of myoblasts. The potential factors identified in the first stage, together with additional ones taken from the literature, formed a panel of 9 basal culture media and 72 additives that have been tested by means of DOE. At the end of this process, a serum-free medium, LOBSFM, was developed. To our best knowledge, it is the only existing efficient serum-free medium for myoblast proliferation and a patent has been obtained to protect its use. It allows a specific expansion of myoblasts (~80% myoblasts, verified by immunostaining) comparable to a standard medium containing 15% FBS over a 60-day culture period. Moreover, myoblasts kept their ability to form muscle fibers. Porous microcarriers Cytoline2 allowed a final cell concentration of 1.5E6 cells/mL, comparable to cell expansion in static culture plate. The pores protected the cells against mechanical stresses while the cell recovery remained easy.
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Hennebicq, Sylviane. "Relation entre glycosylation et contrôle de certaines étapes de la différenciation de cellules tumorales coliques humaines en culture (doctorat)." Lille 2, 1999. http://www.theses.fr/1999LIL2T009.
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LEYGUE, ETIENNE. "Expression et e2-dependance du proto-oncogene c-myc dans les cellules epitheliales mammaires humaines normales (emh) en culture." Paris 6, 1994. http://www.theses.fr/1994PA066632.
Full textAbstract:
Le proto-oncogene c-myc, gene clef de la multiplication cellulaire, est implique comme intermediaire de l'effet proliferatif de l'oestradiol (e2) dans les lignees cancereuses mammaires humaines. Sur un modele original de culture de cellules epitheliales mammaires humaines normales (emh), nous avons montre que la croissance etait stimulee par e2 et freinee par les antioestrogenes. Il importait donc de verifier si l'effet proliferatif de e2 faisait intervenir le proto-oncogene c-myc. L'arnm et la proteine c-myc ont ete caracterises dans les cellules emh par northern blot, immunocytochimie et western blot. Le taux d'arnm est identique a celui des cellules cancereuses e2-dependantes mcf-7 et inferieur a celui des cellules e2-independantes mda-mb-231. En revanche, le taux de proteine est inferieur a celui des mda-mb-231 et des mcf-7. Ces resultats, ainsi que ceux obtenus par protection a la rnase suggerent l'existence de mecanismes differents controlant l'expression de c-myc dans ces trois types cellulaires. L'expression de c-myc est e2-dependante dans les cellules emh. E2 induit une stimulation diphasique de l'arnm et de la proteine. Les modifications de cet effet en presence d'actinomycine d et de cycloheximide sont en faveur d'une action transcriptionnelle de e2. L'antioestrogene 4-ohtam inhibe la stimulation de la proteine par e2. Le proto-oncogene c-myc parait donc jouer un role dans les mecanismes par lesquels e2 et les antioestrogenes controlent la croissance du tissu mammaire sain et cancereux. Des modifications de ces mecanismes peuvent intervenir dans la deregulation de la croissance cellulaire et participer au processus qui en plusieurs etapes conduit une cellule normale a devenir cancereuse. Une meilleure comprehension des differences observees dans ces voies communes controlant la multiplication cellulaire pourrait permettre de mieux definir les points les plus sensibles aux efforts therapeutiques a entreprendre
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Josset, Yannick. "Etablissement d'un modele de culture de cellules osseuses humaines : application a l'evaluation de la biocompatibilite des biomateriaux in vitro." Reims, 1999. http://www.theses.fr/1999REIM0201.
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VIVILLE, STEPHANIE. "Utilisation des cellules embryonnaires et de la recombinaison homologue en vue de creer des modeles murins de maladies genetiques humaines." Strasbourg 1, 1991. http://www.theses.fr/1991STR15011.
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