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Archimbaud, Éric. "Cellules à cytotoxicité non HLA-restreinte et leucémies aigües." Lyon 1, 1992. http://www.theses.fr/1992LYO1H098.
Full text
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Awad, Ali. "Les cellules Natural Killer (NK) dans l’allergie : effet de la chimiokine CCL18 sur les cellules NK humaines et rôle des cellules NK sur les éosinophiles." Thesis, Lille 2, 2014. http://www.theses.fr/2014LIL2S002/document.
Full textAbstract:
Les maladies allergiques sont en constante augmentation tant en prévalence qu’en gravité. Les éosinophiles sont fortement impliqués dans le dommage et le dysfonctionnement tissulaire et participent à l’entretien de l’inflammation allergique. Différentes cellules de l’immunité innée sont impliquées dans le contrôle de la réaction allergique. Parmi elles, les cellules NK, connues essentiellement pour leurs fonctions anti-tumorales et anti-microbiennes, pourraient réguler différents aspects de la réaction. Dans le sang périphérique de patients asthmatiques, les cellules NK présentent des capacités cytotoxiques accrues, ainsi qu’une prédominance de cellules NK2 comparativement à la prédominance de cellules NK1 chez les sujets non allergiques. Chez des patients atteints de dermatite atopique, le nombre et la cytotoxicité des cellules NK périphériques sont diminués, ainsi que leur capacité à produire de l’IFN-g. De plus, le dialogue entre les cellules NK et les cellules dendritiques est moins efficace chez le sujet asthmatique, menant ainsi à une capacité réduite de production d’IFN-g par les cellules NK. Dans des modèles murins d’inflammation pulmonaire, la déplétion en cellules NK par l’anti-NK1.1 ou l’anti-ASGM1 avant l’immunisation inhibe l’éosinophilie pulmonaire, l’infiltrat des LT CD3+ et l’augmentation des taux d’IL-4, IL-5 et IL-12 dans le LBA. Néanmoins, la déplétion avec l’anti-ASGM1 après l’établissement de l’inflammation éosinophilique retarde sa résolution, suggérant un rôle double des cellules NK dans l’inflammation allergique. Le recrutement et la fonction des cellules NK humaines dans l’allergie par le biais de l’analyse in vitro du rôle de CCL18 sur les cellules NK a été analysé. Cette chimiokine est préférentiellement produite au niveau du poumon et possède une double fonction dans la pathologie allergique puisqu’elle recrute les LTh2, mais également les LT reg et génère des DCs tolérogènes capables d’induire des LT reg, uniquement chez des donneurs non allergiques. Nous avons évalué la réponse des cellules NK de sujets allergiques vis-à-vis de CCL18 et l’avons comparée à celle de cellules NK provenant de sujets non allergiques. Nos travaux ont montré que CCL18 attire in vitro les cellules NK de sujets non allergiques et induit leur cytotoxicité, de façon dépendante des protéines G. Par contre, les cellules NK de sujets allergiques ne répondent pas au CCL18. La deuxième partie du travail s’est basée sur l’hypothèse d’un dialogue entre les cellules NK et les éosinophiles qui modifierait leurs fonctions respectives. Des cellules NK et des éosinophiles autologues ont été cocultivés pendant 3 et 12h, à différents ratios. Nous avons montré que les cellules NK activent directement les éosinophiles comme en témoignent l’augmentation de la libération de l’ECP, l’EDN, et de l’expression du CD63, du CD69 et la diminution de l’expression du CD62L sur les éosinophiles. De plus, les cellules NK induisent l’apoptose et la mortalité des éosinophiles dès la première heure de coculture. Cependant l’apoptose et la mortalité des cellules NK ne sont pas modifiées. La fixation des cellules NK empêche presque totalement l’activation et l’apoptose des éosinophiles, suggérant l’implication de molécules de surface et peut être de facteurs solubles. Les interactions entre molécules de surface restent à déterminer, et l’IFN-g et le TGF-β ne sont pas impliqués. Cependant, les voies de signalisation p38MAPkinase, ERK, JNK et PI3kinase interviennent dans l’activation des éosinophiles. La voie mitochondriale et ROS sont impliquées dans l’apoptose des éosinophiles induite par les cellules NK.En résumé, ces travaux ont permis de montrer que les cellules NK de sujets allergiques présentent un dysfonctionnement dans la réponse vis-à-vis de CCL18 comparativement aux sujets non-allergiques. De plus, nos résultats suggèrent que les cellules NK pourraient réguler l’inflammation à éosinophiles en induisant leur activation et/ou leur apoptoseAllergic diseases are steadily increasing both in prevalence and severity. Known physiopathological mechanisms involve the induction of a Th2 response by dendritic cells, leading to IgE production and inflammation, in particular linked to the recruitment of eosinophils. Eosinophils are heavily involved in injury and tissue dysfunction and contribute to the maintenance of inflammation. Different cells of innate immunity were shown to be involved in the control of allergic reaction. Among them, (NK) cells, primarily known for their anti-tumor and anti-microbial functions, may regulate different aspects of allergic reaction as suggested by studies in humans or mice. In the peripheral blood of patients with asthma, NK cells exhibit increased cytotoxic capacity, and a predominance of NK2 cells compared to the prevalence of NK1 cells in non-allergic subjects. In patients with atopic dermatitis, the number and cytotoxicity of peripheral NK cells are reduced, as well as their ability to produce IFN-g. Moreover, the dialogue between NK cells and dendritic cells is less effective in asthmatic patients, leading to a reduced capacity of IFN-g production by NK cells. In murine models of pulmonary inflammation, depletion of NK cells by anti-NK1.1 or anti-ASGM1 before immunization inhibits pulmonary eosinophilia, the infiltration of CD3+ T cells and increased levels of IL-4, IL-5 and IL-12 in the bronchoalveolar lavage. However, depletion with anti-ASGM1 after the establishment of eosinophilic inflammation delays its resolution, suggesting a dual role of NK cells in allergic inflammation.We studied the recruitment and function of human NK cells in allergy through in vitro analysis of the role of CCL18 on NK cells. This chemokine is preferentially produced in the lungs and has a dual role in allergic diseases since it recruits Th2 cells but also regulatory T cells and generates tolerogenic DCs capable of inducing regulatory T cells only from non-allergic donors. We evaluated the response of NK cells in allergic subjects towards CCL18 and compared it to that of NK cells from non-allergic donors. We showed that CCL18 attracts NK cells from non-allergic subjects and induces their cytotoxicity in a G protein dependent pathway. However, NK cells from allergic subjects did not respond to CCL18. This chemokine has no effect on the proliferation of NK cells, but may negatively regulate IFN-g production.The second part of the thesis is based on the hypothesis of a dialogue between NK cells and eosinophils which would modify their respective functions. NK cells and autologous eosinophils were cocultured during 3 and 12 hours, at different ratios. We showed that NK cells directly activate eosinophils as evidenced by the increased release of ECP, eosinophil derived neurotoxin EDN, and the expression of CD63, CD69, and reduced expression of CD62L on living eosinophils. In addition, coculture with NK cells induced apoptosis and mortality of eosinophils in the first hours of coculture. However, apoptosis and death of NK cells were not changed. Fixation of NK cells prevented almost completely the activation and apoptosis of eosinophils, suggesting the involvement of surface molecules, however soluble factors cannot be excluded. These interactions require cell contact, but the molecules involved remain to be determined. Concerning soluble factors, IFN-g and TGF-β are not involved in these mechanisms. However, the signaling pathways p38MAPkinase, ERK, JNK and PI3-kinase are involved in eosinophils activation. Concerning eosinophil apoptosis induced by NK cells, the mitochondrial pathway is more involved than the caspase pathway.In summary, our studies show that NK cells from allergic patients exhibit a defect in their response towards CCL18 compared to non-allergic subjects. In addition, these results suggest that NK cells may regulate eosinophilic inflammation by inducing their activation and / or apoptosis
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Congy-Jolivet, Nicolas. "Rôle majeur du FcyRIIIa/CD16a parmi les récepteurs activateurs des cellules tueuses naturelles (cellules NK) : etude de son expression et des réponses fonctionnelles induites par son engagement." Thesis, Tours, 2009. http://www.theses.fr/2009TOUR3132.
Full textAbstract:
Les cellules NK sont capables d’ADCC (Antibody Dependent Cytotoxicity) suite à l’engagement durécepteur Fc!RIIIa/CD16a, et de fonctions effectrices directes antivirales et anti-tumorales: c’est la«cytotoxicité naturelle ». Ainsi activées elles peuvent également répondre en produisant des cytokines, commel’IFN-!. La dégranulation et la synthèse d’IFN-! par les cellules NK observées après engagement du récepteurCD16a, dont l’expression est indépendante du polymorphisme V158F, ont été largement supérieures à cellesobtenues avec les autres récepteurs activateurs. Son engagement par les AcMor thérapeutiques a produit desréponses fonctionnelles variables selon l’AcMor, et selon les donneurs de cellules. La perte d’expression duCD16a membranaire s’est révélé être un marqueur sensible de l’activation des cellules NK, même quand cedernier n’était pas engagé. Enfin, l’emploi de d’inhibiteur d’ADAM17 (TMI-2 et TIMP3) a permis d’observerle maintien de l’expression du CD16a après activation cellulaire sans augmenter les réponses fonctionnelles.Ce travail souligne la place centrale de l’engagement du CD16a dans l’activation NKNK cell can trigger ADCC (Antibody Dependent Cytotoxicity) through the engagement of theFc!RIIIa/CD16a receptor, and « Natural Cytotoxicity » after integration of cellular signals coming from theiractivating and inhibitory receptors. Moreover, activated NK cells produce cytokines such as IFN-!.Engagement by monoclonal antibodies (mAb) of CD16a was strongly more efficient than that of any otheractivating receptor to induce degranulation and IFN-! synthesis. Functional responses depend on thetherapeutic mAb used to engage CD16a and on the donor of NK cells. CD16a down-modulation was a verysensitive marker of NK cell activation, whatever the mean of activation. It was inhibited in the presence ofTMI-2 and TIMP3 (ADAM17 inhibitors), whereas CD16-dependent functional responses were not increased.This work highlighted the major role of the CD16a receptor in the activation of NK cells
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Bielawska, Aleksandra. "Cytotoxicité des cellules tueuses naturelles vis à vis des cellules endothéliales organospécifiques : vers une immunothérapie tumorale." Thesis, Orléans, 2009. http://www.theses.fr/2009ORLE2008/document.
Full textAbstract:
Plusieurs mécanismes peuvent réduire l’angiogenèse tumorale d’où les stratégies visant à bloquer les cellules endothéliales (CE). Les cellules tueuses naturelles (NK) (natural killer cells) stimulées, s’arment pour l’élimination des cellules « dangereuses ». Notre hypothèse est qu’en conditions pathologiques (tumeur), les CE, acteurs de l’angiogenèse tumorale seraient reconnues comme telles et candidates à l’attaque par les NK. Les interactions entre les NK et les CE sont abordées à l’aide de CE humaines in vitro, quant aux mécanismes moléculaires de l’adhésion des NK en conditions statiques et conditions de flux. Ceci montre que les NK activées par l’IL-2 reconnaissent et adhérent aux CE selon leur origine tissulaire. Ce mécanisme est indépendant des sélectines mais dépend soit des intégrines, soit des co-récepteurs similaires aux lectines de type C. La cytotoxicité des NK vis-à-vis des CE s’exerce par la voie perforine-granzyme. En outre, stimulées par l’IL-2, les NK induisent la translocation de Bid et libération du cytochrome C dans les CE cibles lesquelles expriment les récepteurs de “mort”, voie alternative d’apoptose. Ce modèle in vitro est validé avec des NK du sang humain. A visée in vivo, les expériences réalisées avec des CE murines et des NK de la rate de souris indiquent que l’efficacité des NK activées par l’IL-2 est directement reliée à leur adhésion, laquelle dépend de l’origine tissulaire des CE. Nous démontrons que l’IL-12 (interleukine connue pour inhiber l’angiogenèse tumorale) active les NK en synergie avec l’IL-2. Les NK reconnaissant et tuant les CE in vitro suggère l’hypothèse qu’in vivo elles inhibent l’angiogenèse tumoraleThere are several mechanisms by which tumor angiogenesis may be reduced. They are addressed to tumor endothelial cell (EC) to block their activation and proliferation. Among the natural protection mechanisms, natural killer (NK) cells play an important role. Stimulated NK cells may eliminate potentially “dangerous” cells. Hence, we hypothesized that ECs involved in tumor angiogenesis may be recognized as “dangerous” cells and killed by NK cells. First, the adhesive interactions between NK cells and ECs were investigated. Using human in vitro cell lines, molecular mechanisms of NK cells adhesion to ECs under static and flow in vitro conditions were examined, showing that IL-2 activated NK cells were able to adhere to ECs. The molecular mechanism was shown not to be selectin - dependent but integrin and/or C type lectin like - dependent. Subsequently, cytotoxicity of NK cells toward ECs was analyzed. Its molecular mechanism was mainly perforin-granzyme dependent. NK cells were shown to induce in target ECs Bid translocation and cytochrome c releasing. To validate in vitro cellular model most of these experiments were repeated with freshly isolated human blood NK cells. The in vivo approach necessitated that adhesion and cytotoxicity were performed using murine ECs lines and freshly isolated NK cells from murine spleen. It was found that IL-12 synergizes with IL-2 to stimulate NK cells killing activity toward ECs. The demonstration that, under specific conditions stimulated NK cells are able to kill ECs in vitro allows hypothesizing that in vivo NK cells may participate in tumor angiogenesis inhibition
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Tabiasco, Julie. "Cytoxicité et transfert synaptique médié par les cellules NK." Toulouse 3, 2002. http://www.theses.fr/2002TOU30206.
Full text
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El, Costa Hicham. "Cellules NK utérines humaines du 1er trimestre de gestation : fonctions effectrices et leur régulation." Toulouse 3, 2009. http://thesesups.ups-tlse.fr/720/.
Full textAbstract:
Les cellules Natural killer (NK) humaines sont massivement recrutées au site d'implantation embryonnaire et constituent la population dominante de cellules immunitaires d'origine maternelle dans l'utérus en début de gestation. Elles possèdent un potentiel cytotoxique limité et parfaitement contrôlé (contrairement aux cellules NK du sang périphérique) évitant ainsi toute menace pour le fœtus. Le but de notre travail a été d'étudier les mécanismes moléculaires qui contrôlent la fonction cytotoxique des cellules NK utérines en début de gestation. Nous avons tout d'abord caractérisé le phénotype des cellules NK utérines au niveau de la decidua basalis (dNK) de 1er trimestre de gestation. Contrairement aux cellules NK du sang périphérique (PB-NK), les cellules dNK expriment un répertoire de récepteurs activateurs et inhibiteurs unique et très conservé chez tous les individus. Nous avons ensuite étudié l'implication de différents récepteurs activateurs et inhibiteurs dans la régulation des fonctions effectrices des cellules dNK. Nous avons ainsi mis en évidence que le potentiel cytotoxique des cellules dNK était médié par l'engagement spécifique du récepteur activateur NKp46, et à un niveau moins élevé, des récepteurs activateurs NKG2C et CD2 alors que le récepteur NKp30 n'est pas impliqué. Ce potentiel cytotoxique est contrôlé négativement par le co-engagement du récepteur inhibiteur NKG2A dont le ligand physiologique est HLA-E (exprimé par le trophoblaste d'origine fœtale). Nous avons également décelé un fort potentiel de sécrétion de cytokines/chimiokines des cellules dNK (IFN-gamma, TNF-a, MIP-1a, MIP-1ß, GM-CSF) lorsque le récepteur activateur NKp30 est engagé, alors que l'engagement du récepteur NKp46 est sans effet. .In early h, decidual NK s (dNK) are abundant and considered as cytokine producers but poorly cytotoxic despite their cytolytic granule content, suggesting a negative control of this latter effector function. Decidual NK cells express a large panel of activating and inhibitory receptors. However, little is known about the contribution of the different receptors expressed by dNK cells, to the cytotoxic function. The purpose of our study was to investigate the implication of activating and inhibitory receptors in the effector function of dNK cells and to investigate how these functions are regulated. We first found that freshly isolated dNK, in contrast to peripheral blood NK cells, exhibit a unique repertoire of activating and inhibitory receptors, identical among all the donors tested. We then demonstrated that in freshly isolated dNK, mAb-specific engagement of NKp46- and to a lesser extent NKG2C-, but not NKp30-activating receptors induced intracellular calcium mobilization, perforin polarization, granule exocytosis and efficient target cell lysis. NKp46-mediated cytotoxicity is co-activated by CD2 but dramatically blocked by NKG2A (inhibitory receptor) co-engagement, indicating that the dNK cytotoxic potential could be tightly controlled in vivo. Such NKG2A-mediated inhibition might be critical for the outcome of pregnancy. Finally, we found that in dNK, mAb-specific engagement of NKp30, but not NKp46, triggered the production of proinflammatory molecules (such as IFNgamma. . . ). We hypothesized that during pregnancy complications (viral infection), NKG2A-mediated inhibition could be prevented, and thus dNK cells could participate to the elimination of viral infected cells. We indeed found that dNK cells in contact with hCMV-infected fibroblasts proliferate, polarize their cytolytic granules to the immune synapse and kill infected target cells
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Veuillen, Caroline. "Caractérisation des mécanismes d'échappement tumoral à la lyse NK dans la LLC-B et le cancer de la prostate." Thesis, Aix-Marseille 2, 2011. http://www.theses.fr/2011AIX20708.
Full textAbstract:
De nombreuses données expérimentales et cliniques ont montré l'importance des cellules Natural Killer (NK) dans l'immunosurveillance antitumorale. Les stratégies thérapeutiques basées sur les cellules NK pourraient donc être une alternative de choix dans le traitement de certains types de cancers. Nous avons focalisé notre étude sur deux types de cancer incurables malgré les récents progrès thérapeutiques : la leucémie lymphoïde chronique B (LLC-B) et le cancer de la prostate. Le but de notre étude est une meilleure compréhension des mécanismes mis en place par les cellules B leucémiques et les cellules tumorales prostatiques pour échapper à la réponse antitumorale des cellules NK. La connaissance de ces mécanismes d'échappement est un pré-requis indispensable à l'utilisation des cellules NK dans les thérapies antitumorales. Concernant la LLC-B, nos résultats suggèrent que les cellules NK de patients, fonctionnellement compétentes, ne peuvent pas initier une réaction immunitaire appropriée envers les cellules B leucémiques due au manque de reconnaissance de ces dernières. Concernant le cancer de la prostate, nos données préliminaires montrent que les cellules NK circulantes de patients sont également fonctionnellement compétentes, quelque soit le stade de la maladie, malgré la diminution significative de l'expression du récepteur NKp30. Ainsi, le degré d’immunogénicité des cellules B leucémiques et celui des cellules tumorales prostatiques devra être autant pris en compte que la fonctionnalité des cellules NK dans les stratégies visant à optimiser l'activité antitumorale de ces dernièresMany experimental and clinical data have enlightened the importance of Natural Killer (NK) cells in tumor immunosurveillance. Therapeutic strategies based on NK cells could be an alternative in the treatment of certain cancers. We focused our study on two types of incurable cancers despite recent advances in treatment: B chronic lymphocytic leukemia (B-CLL) and prostate cancer. The aim of our study is a better understanding of the mechanisms set up by leukemic B cells and prostate cancer cells to escape from NK antitumor response. The knowledge of these escape mechanisms is an essential prerequisite to the use of NK cells in antitumor therapies. Regarding B-CLL, our results suggest that NK cells, although functionally competent, can not initiate an appropriate immune response against leukemic B cells due to a lack of recognition of the latter. Concerning the prostate cancer, our preliminary data show that circulating NK cells are functionally competent, whatever the stage of disease, despite the significant decrease in expression of the receptor NKp30. Thus, the degree of immunogenicity of leukemic B cells and of the prostate cancer cells must be taken into account as well as the functionality of NK cells in strategies aiming at improving NK antitumor activity
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Avril, Tony. "Etude des mécanismes de résistance des cellules trophoblastiques à la cytotoxicité naturelle." Tours, 2000. http://www.theses.fr/2000TOUR4007.
Full textAbstract:
Pendant la grossesse, la survie du foetus dépend de l'intégrité du trophoblaste, seul tissu d'origine foetale au contact du système immunitaire maternel. Le principal objectif de ce travail a été d'étudier les mécanismes de résistance des cellules trophoblastiques, En partiuclier des cellules choriocarninolateyses (CC) (issues de la transformation maligne du trophoblaste), à la cytotoxicité naturelle (lyse nk). Dans la première partie, nous montrons que le blocage de l'interaction des molécules HLA de classe I (exprimées sur les CC) avec les récepteurs inhibiteurs CD94/NKG2 ou CD158 (exprimés sur les cellules effectrices) ne diminue pas la résistance des CC JEG-3 A la lyse nk. Ces résultats indiquent que cette résistance est essentiellement indépendante des molécules HLA de classe I, notamment d'HLA-G. Dans la deuxième partie, nous montrons : 1) Qu'en présence de PHA, les CC sont sensibles à la lyse NK ; 2) Que l'engagement des récepteurs activateurs CD16 et 2B4 exprimés par les cellules NK entraine la lyse des CC JAR dans un modèle de lyse redirigée, alors que le ligand de 2B4, la molécule CD48, n'est pas exprimé sur les CC ; 3) Que les CC sont sensibles à l'ADCC exercée par des PBL en présence d'anticorps anti-TJA (produits par les femmes de phénotype P/P qui font des avortements spontanés à répétition). Ainsi l'absence d'activation des effecteurs par les CC, due au moins en partie à l'absence d'expression de ligands des récepteurs activateurs tels que CD48, pourrait constituer un mécanisme de résistance des CC à la lyse NK. Enfin, dans la dernière partie, nous montrons que le blocage de l'interaction molécules HLA de classe I / récepteurs inhibiteurs CD94/NKG2 ou CD158 n'affecte pas la sensibilité à la lyse exercée par des PBL stimulés par l'il-2 (lyse LAK) des cellules lymphoblastoides JY et CC JEG-3, ce qui suggère que les molécules HLA de classe I régulent peu la sensibilité des cellules cibles à la lyse LAKNo summary available
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Campigna, Emmanuelle. "Biomolécules innovantes pour la thérapie des cancers." Montpellier 1, 2009. http://www.theses.fr/2009MON1T026.
Full textAbstract:
Les cellules Natural Killer (NK) sont des cellules du systèmes immunitaire qui ont un rôle crucial dans l'élimination des cellules transformées lors des stades précoces de la tumorigénèse. L'immunosurveillance anti-tumorale médiée par les cellules NK dépend de la balance entre les signaux activateurs et inhibiteurs résultant de l'interaction entre les ligands exprimés par les cellules tumorales et les récepteurs de surface des cellules NK. Le récepteur NKG2D est un des récepteurs activateurs constitutivement exprimé par les cellules NK. Ce récepteur lie divers lignands dont MICA (MHC-1 Chain-related protein A) et Rae1δ (Retinoic acid early transcript 1) qui sont exprimés respectivement par les cellules transformées humaines et murines. Les cellules NK expriment aussi des récepteurs s'associant à la partie Fc des anticorps (Ac) (FcƴR). Ces récepteurs sont responsables du mécanisme de cytotoxicité dépendante des Ac qui est notamment activé par les Ac monoclonaux utilisés en thérapie anti-cancéreuse. Nous avons produit les biomolécules recombinantes à l'aide de fragments d'Ac anti -tumoraux dans le but de restaurer les ligands MICA ou Rae1-δ à la surface des cellules tumorales et de façon exogène. Nous avons démontré que les cellules tumorales associées aux biomolécules sont efficacement lysées par les cellules NK. Nous avons également montré que les biomolécules humaines induisent une augmentation synergique de la lyse des cellules tumorales lorsqu'elles sont associées à des Ac thérapeutiques et en présence de cellules mononucléées du sang périphérique non activées (hPBMCs). In vivo, la biomolécule murine composée du ligand Rae1-δ a un effet inhibiteur sur la croissance tumorale de souris immunocompétentes greffées avec des cellules cancéreuses syngéniquesNatural Killer (NK) are immune cells playing crucial role in the transformed cell elimination at carly stage of tumorigenesis. It is now well established that NK cells participate by their constitutive expression of Fcƴ receptor to the antibody dependant celle cytotoxicty (ADCC) phenomenom and by so to the efficacy of cancer treatment with anti-tumor naked monoclonal antibodies (mAbs). NKG2D (NK Group 2-D) is one of the other constitutive NK cells activator receptors expressed by NK cell. This receptor binds several ligands including MICA (MHC classI Chain-related protein A) in human and Rae1-δ (Retinoic acid early transcript 1) in mice. We produced recombinant biomolécules based on anti-tumor antibody fragment directed against HER2 or CEA and both murine and human NKG2D ligands with the goal to immunotarget and increase the presence of these ligands at the tumor cell membrane. In vitro, tumor cells incubated with these purified biomolecules showed positive staining for NKG2D ligands and were more efficiently lysed by NK cells. More importantly, we demonstrated that these biomolecules can act in combination with naked mAbs to generate additive cytotoxicity against tumor cells by noon activated hPBMCs. In vivo, after intravenous injection, biomolecules showed specific tumor localization. In immunocompetent mice, the murine anti-HER2-RAE1 δ biomolecule inhibited syngeneic tumor development
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Germaud, Nathalie. "Polymorphisme du gène NCR3/NKp30 et variabilité de la fonction des cellules Natural Killer humaines." Phd thesis, Université René Descartes - Paris V, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00789417.
Full textAbstract:
Les cellules Natural Killer (NK) sont non, seulement de précieux effecteurs cytotoxiques de la réponse immunitaire innée dirigée contre les tumeurs et les infections, mais aussi d'importants immunorégulateurs. Leur activation dépend d'une balance complexe entre des signaux émanant de multiples récepteurs, tantôt inhibiteurs, tantôt activateurs. Parmi les récepteurs activateurs, NCR3 représente un acteur important de la lyse tumorale et de l'interaction avec les cellules dendritiques. Dans le but de caractériser la variabilité interindividuelle de la réponse NK et d'établir une référence pour des études ultérieures dans un contexte pathologique, nous avons examiné, dans un échantillon de 43 donneurs sains, les corrélations entre la variabilité fonctionnelle des cellules NK en réponse à la stimulation de leur récepteur NKp30 et le niveau d'expression des transcrits de NCR3 ainsi que celui de la protéine correspondante, au regard du polymorphisme génomique. Nous avons mis en évidence une étroite corrélation entre l'expression membranaire de NKp30 et NKp46 et la fonction cytotoxique NK, mais pas avec la sécrétion de cytokines. Nous avons retrouvé l'effet déjà connu du variant rs986475 sur l'expression de l'un des transcrits alternatifs de NCR3, T3. Nous avons également identifié un autre variant, rs11575836, influençant le niveau de transcrits T1, en relation avec la cytotoxicité induite par la signalisation NKp30. Cette étude pointe le doigt sur la spécificité des voies de signalisation des fonctions NK et le réseau complexe de gènes impliqués dans leur régulation. Nous avons par ailleurs évalué la variabilité génétique de NCR3 dans la myasthénie auto-immune où les cellules NK pourraient jouer un rôle. Le re-séquençage du gène NCR3 n'a pas révélé d'association avec un polymorphisme commun mais a permis d'identifier deux mutations rares, " faux-sens ", retrouvées uniquement chez des patients myasthéniques. L'une d'elle, L19R, est non-conservative et représente un candidat particulièrement intéressant à examiner en détail du fait de sa localisation dans une région très conservée dans la phylogénie. Même si de nombreux points restent à élucider, ces résultats indiquent qu'il devrait être possible de relier de façon globale et intégrative le polymorphisme de l'ADN, ainsi que l'expression des transcrits et des protéines, à la réponse fonctionnelle des cellules NK
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Xiong, Yu. "Impact du G-CSF sur le phénotype et les fonctions des cellules NK dans le cadre d’une immunothérapie post-allogreffe de cellules souches hématopoïétiques." Thesis, Université de Lorraine, 2016. http://www.theses.fr/2016LORR0106/document.
Full textAbstract:
Les cellules Natural Killer (NK) sont capables de lyser les cellules tumorales sans la nécessité de reconnaitre un antigène tumoral spécifique. Cette propriété leur confère un avantage par rapport aux lymphocytes T et les rend intéressantes à utiliser en tant que cellules effectrices pour l’immunothérapie adoptive. A ce jour, le potentiel thérapeutique des cellules NK n’a pas été complétement exploré notamment dans le contexte du traitement de la rechute post-allogreffe de cellules souches hématopoïétiques. Actuellement, les patients en rechute post-greffe sont traités avec des injections de lymphocytes du donneur (DLI) parfois issues de petites fractions du greffon de cellules souches hématopoïétiques congelées. Les cellules souches périphériques étant fréquemment utilisées comme source de cellules souches et parfois utilisées comme DLI, nous avons souhaité évaluer l’impact du G-CSF sur le phénotype et les fonctions des cellules NK présentes dans ces fractions. Dans cet objectif, nous avons comparé différentes sources de cellules NK isolées à partir de sang de donneurs sains, de sang mobilisé de donneurs sains ou de patients et observé l’évolution des différentes sous-populations de cellules NK issues de ces prélèvements au décours d’une expansion en présence d’IL-15. Nos résultats ont montré que l’administration de G-CSF diminuait la proportion de cellules NK CD56brightCD16+ au profit d’une population CD16-, diminuait la prolifération des cellules NK lors de l’expansion en culture, et modifiait les propriétés fonctionnelles des cellules NKThe ability of natural killer (NK) cells to kill tumor cells without the need to recognize a tumor-specific antigen provides advantages over T cells and makes them appealing for a use as effectors for adoptive immunotherapy. However, the full therapeutic potential of NK cell-based immunotherapy has not been fully investigated in the context of leukemic relapse after hematopoietic stem cell transplantation. Today, patients relapsing after hematopoietic stem cell transplantation are often treated with donor lymphocyte infusion (DLI) based on small cell fractions frozen at the time of the stem cell transplantation. Since peripheral blood stem cells are increasingly used as stem cell source and as source of cells for DLI, we aimed to evaluate the impact of G-SCF mobilization on NK cell phenotype and functions. Therefore, we compared the expansion capacity, the phenotype and the function of NK cells from blood for healthy donors, from allogeneic HSCT healthy donors or from autologous HSCT from patients. We also determine the impact of G-CSF on NK cell subset repartition before and after expansion in presence of IL-15. Our results showed that G-CSF administration to patients decreases CD56brightCD16+ NK cell population, proliferation and function. Overcoming this impairment in lymphoid capacity may be important to facilitate post-transplant immunotherapy
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Terrisse, Anne-Dominique. "Modulation de l'activité des cellules tueuses naturelles par les fragments de dégradation de la chromatine." Toulouse 3, 1993. http://www.theses.fr/1993TOU30169.
Full textAbstract:
Les cellules tueuses naturelles sont des lymphocytes cytotoxiques intervenant dans la defense antitumorale de l'organisme et possedant une activite immunomodulatrice. Une correlation inverse a ete etablie entre l'activite cytotoxique de ces cellules et le developpement de cancers ou de lupus. Des phenomenes de mort cellulaire, responsables de la presence de fragments de chromatine dans la circulation, ont egalement ete decrits dans ces pathologies. L'existence de recepteurs pour l'adn et les nucleosomes a la surface des lymphocytes pose la question d'une relation entre la presence de fragments de chromatine dans le milieu extracellulaire et l'inhibition de l'activite tueuse naturelle. L'effet et le mecanisme d'action des fragments de degradation de la chromatine sur la cytotoxicite des cellules tueuses naturelles ont donc ete etudies. Les fragments de chromatine (adn, histones et nucleosomes) inhibent de maniere dose-dependante la cytotoxicite mediee par les cellules tueuses. L'effet inhibiteur des nucleosomes est reversible et necessite un contact direct avec les cellules. Les nucleosomes ne modifient pas durablement le potentiel cytotoxique des cellules tueuses et inhiberaient l'activite cytotoxique par interaction avec les structures membranaires des cellules. Cette etude a mis en evidence une liaison des nucleosomes aux cellules cibles tumorales, et a un moindre degre, aux lymphocytes cytotoxiques. Cette liaison est suivie d'une endocytose des nucleosomes par les cellules cibles. Les nucleosomes ne perturbent ni la reconnaissance des cellules cibles par les effecteurs, ni l'expression des molecules d'adhesion intervenant au cours de cette reconnaissance. Les nucleosomes ne modifient pas l'emission du coup lethal, responsable de la mort de la cellule cible. Une augmentation de la stabilite des conjugues effecteurs/cibles a ete mise en evidence par cytometrie de flux, en presence de nucleosomes. Ce resultat suggere que les nucleosomes pourraient inhiber le potentiel cytotoxique des cellules tueuses naturelles en diminuant leur aptitude au recyclage
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Loyon, Romain. "Etude du role de l'IL-21 dans l'interaction entre les cellules à cytotoxicité naturelle et les lymphocytes T CD4 chez l'homme." Thesis, Besançon, 2014. http://www.theses.fr/2014BESA3020.
Full textAbstract:
L'objectif de cette thèse était de caractériser phénotypiquement et fonctionnellement les cellules NK activées par l'IL-21 et d'étudier leur interaction avec les lymphocytes T CD4*. Les lymphocytes Natural Killer (NK) sont essentiels pour la protection exercée par l'immunité innée. Les cellules NK, en plus de leurs fonctions cytotoxiques, peuvent orienter la réponse immunitaire adaptative vers un profile TH1 grâce à leur production d'IFN-y. Dans cette étude, nous avons montré que l'IL-21, une cytokine produite in vivo au cours de l'inflammation chronique ou de maladies infectieuses, induit la différenciation d'une sous-population spécifique de cellules NK co-exprimant ÇD86 et HLA-DR. Les cellules NK HLA-DR* induites par l'IL-21 sont capables d'apprêter et de présenter des antigènes aux lymphocytes T CD4*. De plus, ces cellules produisent MIF (Macrophage Migration Inhibitory Factor) et apportent un signal de costimulation durant le priming des lymphocytes T CD4 naïfs en induisant leur différenciation vers un profile central mémoire (Tcm) peu différencié. Les Tcm activés en présence des cellules NK HLA-DR" sont CXCR3' CCR4' CCR6' CXCR5' et produisent de PIL-2 et du TNF-a. La costimulation des lymphocytes T ÇD4 par les cellules NK HLA-DR" prévient l'acquisition d'un phénotype effecteur mémoire induit par l'IL-2. Ainsi, ces résultats montrent une nouvelle fonction pour l'IL-21 qui peut moduler l'interaction NK/CD4 et favoriser l'expansion des lymphocytes centraux mémoiresNatural Killer lymphocytes are critical for innate immunity-mediated protection. Main roles of NK cell rely on their cytotoxic functions or depend on the tuning of TH1 adaptive immunity by IFN-y. Here, we provide evidence that 1L-21, a cytokine produced in vivo during chronic inflammation or infectious diseases, promotes the differentiation of a specifie subset of NK co-expressing CD86 and HLA-DR. IL-21-propagated HLA-DR' NK were able to process and present antigens to CD4' T lymphocytes. More importantly, IL-21-propagated HLA-DR' NK produced macrophage migration inhibitory factor and provided a co-stimulatory signaling during naive CD4* T cell priming inducing the differentiation of uncommitted central memory (Tcm) lymphocytes. Tcm expanded in the presence of HLA-DR* NK were CXCR3 CCR4" CCR6' CXCR5' and produced IL-2, as well as low levels of TNF-a. Co-stimulation of CD4* T cells by HLA-DR' NK prevented the acquisition of effector memory phenotype induced by IL-2. Altogether, these results demonstrate a novel function for IL-21 in tuning NK and CD4~ T cell interactions promoting a specifie expansion of central memory lymphocytes
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Bloch-Queyrat, Coralie. "Activation et inhibition de la réponse cytotoxique des cellules NK par le récepteur 2B4 : rôle de l'adaptateur SAP." Paris 6, 2007. http://www.theses.fr/2007PA066012.
Full text
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Rabot, Magali. "Le récepteur CD160 exprimé par les cellules "natural killer" humaines : fonctions effectrices et voies de signalisation." Toulouse 3, 2007. http://www.theses.fr/2007TOU30015.
Full textAbstract:
Les cellules Natural Killer (NK) sont une composante majeure de l'immunité innée de part leur potentiel cytotoxique. Elles sont en effet capables d'éliminer des cibles telles que des cellules infectées par un virus ou bien des cellules tumorales. De plus, la capacité de ces cellules NK à sécréter un grand nombre de médiateurs solubles leur confère un rôle important dans la mise en place et l'orientation de l'immunité adaptative. Ces cellules NK expriment une grande diversité de récepteurs leur permettant de discriminer une cellule saine d'une cellule qui ne l'est plus. Ces récepteurs, qui peuvent être activateurs ou inhibiteurs, contrôlent leur activation et leurs fonctions effectrices. Nous nous sommes intéressés au cours de ce travail à l'étude d'un de ces récepteurs, le récepteur CD160, exprimé par la sous-population majoritaire dans le sang circulant et hautement cytotoxique des cellules NK, de phénotype CD56dim CD16+. Dans un premier temps, nous avons démontré qu'il s'agissait d'un récepteur activateur de cytotoxicité NK, impliqué dans la lyse de cellules cibles. Nous avons de plus établi que le ligand physiologique de CD160 est la molécule du Complexe Majeur d'Histocompatibilité de classe I (CMH I) HLA-C. Dans un deuxième temps, nos résultats ont permis de déterminer que l'engagement du récepteur CD160 par son ligand HLA-C induit non seulement la cytotoxicité contre des cellules cibles mais aussi la sécrétion de plusieurs médiateurs solubles tels que des cytokines (IFN-g, TNF-a et IL-6) et des chimiokines (IL-8 et MIP-1b). Ces médiateurs solubles, notamment l'IFN-g retrouvé en grande quantité, seraient capables de favoriser et d'influencer la mise en place d'une éventuelle réponse immunitaire adaptative. CD160 est donc un récepteur activateur dont l'engagement induit les deux fonctions effectrices majeures des cellules NK : cytotoxicité et sécrétion de cytokines. De plus, nous avons également mis en évidence que ces fonctions effectrices sont contrôlées par des récepteurs inhibiteurs exprimés par les cellules NK. . .
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Bouachour, Thomas. "Activation des cellules Natural Killer par les endocannabinoïdes Anandamide et 2-Arachidonoyl-glycérol." Phd thesis, Université d'Angers, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01003790.
Full textAbstract:
Les endocannabinoïdes, anandamide (AEA) et 2-arachidonoylglycérol (2-AG), appartiennent au système endocannabinoïde et sont impliqués dans la régulation de nombreux systèmes biologiques. Ils ont un rôle dans la modulation du système immunitaire et la défense anti-tumorale. Dans cette étude, nous avons montré que l'AEA et le 2-AG peuvent moduler l'activation des cellules Natural Killer CD56 + CD3- (NK) et des cellules NK92. A de faibles doses, ils potentialisent la production d'IFN γ induite par des doses suboptimales d'IL-12, d'IL-15 et d'IL-2. En outre, l'AEA et le 2-AG potentialisent la cytotoxicité des cellules NK. Des expériences de quantification des transcrits codant FasL, TRAIL, perforine et granzyme et des expériences d'inhibition indiquent que cette augmentation de la cytotoxicité est corrélée à une augmentation de l'expression de FasL, tandis que la production de granzyme, de perforine et l'expression TRAIL reste inchangées. Les effets des endocannabinoides sur les cellules NK sont inhibés en présence d'un antagoniste du récepteur endocannabinoidien de type 2 (CB2). Ces travaux in vitro on été confirmés in vivo sur un model de tumeur murine. Les cellules NK murines stimulées ex-vivo par les endocannabinoides et réinjectées en intra-tumoral, induisent un ralentissement significatif de la croissance tumorale Ces résultats montrent pour la première fois que les endocannabinoïdes AEA et 2-AG utilisées à faible dose sont impliqués dans la modulation des activités régulatrices (objectivée par la production d'IFN γ) et cytotoxiques des cellules NK.
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Winnock-Garcia-Manzano, Maria. "Caractérisation phénotypique, morphologique et fonctionnelle de la population lymphocytaire hépatique humaine." Bordeaux 2, 1993. http://www.theses.fr/1993BOR28237.
Full text
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Masson, d'Autume Adèle de. "Lymphocytes B régulateurs dans la GVH chronique humaine et rôle de la myosine 18A dans la cytotoxicité des lymphocytes NK." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2016. http://www.theses.fr/2016USPCC177/document.
Full textAbstract:
L’allogreffe de cellules souches hématopoïétiques allogéniques (HSCT, hematopoietic stem cell transplantation) reste le seul traitement curatif pour de nombreux patients atteints d’hémopathies malignes. Dans près d’un cas sur deux, l’allogreffe se complique de réaction chronique du greffon contre l'hôte (GVH (graft-versus-host) chronique). Les lymphocytes B régulateurs sont une population de lymphocytes B sécrétant de l’interleukine (IL)-10 et capables d’inhiber les réactions inflammatoires. Nous avons montré que chez l’homme atteint de GVH chronique active, la fréquence des lymphocytes B régulateurs est diminuée dans le sang périphérique. Les lymphocytes B régulateurs sont principalement enrichis dans la population B de phénotype mémoire et plasmablastique. Une augmentation de la fréquence des plasmablastes et une diminution du nombre de lymphocytes B de phénotype mémoire chez les patients allogreffés atteints de GVH chronique active suggèrent des altérations de la différenciation terminale des lymphocytes B. Nos travaux ont également porté sur les lymphocytes NK qui ont un rôle cytotoxique. Nous avons identifié l’un des récepteurs de surface des lymphocytes NK, CD245, comme étant la myosine 18A. La myosine 18A est impliquée dans l’organisation du cytosquelette et constitue un récepteur du surfactant A. Nous avons montre qu’il s’agissait d’un récepteur co-activateur de la cytotoxicité NK et que cette augmentation de cytotoxicité pourrait être liée à la stimulation de l’expression de la molécule de stimulation CD137 (4-1BB) à la surface du lymphocyte NK. Ces résultats suggèrent un potentiel rôle thérapeutique de l’utilisation d’anticorps agonistes spécifiques de CD245Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) remains the only curative treatment for many patients with haematological malignancies. In almost half of the cases, it is complicated by chronic graft-versus-host disease (cGVHD). Regulatory B cells are a population of B cells secreting interleukin (IL)-10 that can inhibit the immune responses. We have shown that in patients with active cGVHD, the frequency of regulatory B cells is decreased in the peripheral blood. Regulatory B cells are enriched in the memory B cell and plasmablast B cell pools. Increased plasmablasts frequencies and decreased memory B cells frequencies were found in patients with active cGVHD, suggesting alterations in the terminal differentiation of B cells. Our work also focused on NK cells that have a cytotoxic role. We identified one surface receptor of NK cells, CD245, as myosin 18A. Myosin 18A is involved in the organization of the cytoskeleton and is a receptor of the surfactant A. We have shown that myosin 18A was a coactivating receptor of the NK cytotoxicity and that this increase in cytotoxicity could be linked to the stimulation of the expression of CD137 (4-1BB) on the surface of the NK lymphocyte. These results suggest a potential therapeutic role of the use of specific CD245 agonist antibodies
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Juompan, Laure. "Etude des interactions "lipoprotéines de basse densité/système immunitaire" : sur la fonction tueuse naturelle et au cours du sida." Toulouse 3, 1993. http://www.theses.fr/1993TOU30204.
Full textAbstract:
Un prealable a l'utilisation des lipoproteines de basse densite (ldl) et des ldl modifiees comme transporteurs de medicaments immunotropes est la connaissance de leurs interactions avec les cellules immunes. Le but de ce travail etait d'etudier: 1- les effets des ldl natives et modifiees sur la fonction natural killer (nk) qui est impliquee dans les defenses antitumorales et antivirales, 2- l'activite des recepteurs des ldl et des ldl modifiees, a la surface des lymphocytes t helper et des monocytes au cours de l'infection par le vih. 1- les ldl modifiees par acetylation et dans une moindre mesure les ldl natives, inhibent a forte concentration la fonction nk de l'homme. L'inhibition par les ldl modifiees est due a l'acetylation de la molecule d'apolipoproteine b. Elle est correlee a une endocytose des ldl modifiees par les lymphocytes cd56#+ responsables de la fonction nk. L'endocytose assuree par les lymphocytes est dependante de la concentration en lipoproteines, saturable et inhibable par les ldl acetylees et les ldl froides. Elle est environ 50 fois inferieure a l'endocytose des ldl acetylees par les monocytes. 2- l'etude de l'endocytose des ldl par les lymphocytes infectes in vitro ou preleves chez des sujets infectes par le vih montre que: -l'endocytose des ldl augmente fortement lorsque les lymphocytes t sont actives, - l'infection ne perturbe pas l'endocytose assuree par les lymphocytes t cd4#+ et t cd8#+. De la meme facon, l'endocytose des ldl modifiees par les monocytes des sujets infectes n'est pas alteree. Au contraire, elle augmente au cours de l'evolution de la maladie. Puisque les lymphocytes t actives surexpriment le recepteur des ldl et que la presence du virus vih n'abaisse pas l'efficacite de l'endocytose des ldl par les lymphocytes cd4#+ ni celle des ldl modifies par les monocytes, leur utilisation comme transporteurs de medicaments antiviraux vers ces cellules cibles du virus vih peut etre envisagee
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Charrier, Mélinda. "Caractérisation phénotypique et fonctionnelle de sous-populations Natural Killer (NK) chez des patients atteints d’un cancer bronchique non à petites cellules et impact d’une vaccination avec des exosomes de cellules dendritiques (Dex) autologues." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2016. http://www.theses.fr/2016SACLS438.
Full textAbstract:
Depuis peu, l’immunothérapie a émergé comme une nouvelle stratégie chez les patients atteint de Cancer Bronchique Non à Petites Cellules (CBNPC), confirmant ainsi le rôle du système immunitaire dans cette maladie. Malgré ces nouveaux traitements (thérapies ciblées, immunothérapie), les taux de réponses restent faibles avec un impact modeste sur la survie globale. Des biomarqueurs sont donc nécessaire pour définir les populations cibles de ces traitements. Une des pistes explorées est le statut immunitaire des patients, en effet celui-ci a un impact pronostic et pourrait influencer la réponse aux traitements standards tels que la chimiothérapie, les thérapies ciblées et même l’immunothérapie. Parmi les cellules du système immunitaire, les cellules Natural Killer (NK) auraient un rôle effecteur dans le CBNPC. Il est maintenant clairement établit que les cellules NK favorisent la mise en place d’une immunité adaptative fonctionnelle et efficace. Ainsi une altération des fonctions NK pourrait être un mécanisme associé à l’échappement à l’immunité adaptative de la tumeur. Dans notre première étude, nous avons mis en évidence que les exosomes de cellules dendritiques stimulaient les cellules NK via NKp30, cette activité étant associée à un gain de survie sans progression chez des malades inopérables porteurs d’un CBNPC avancé. Notre second projet a révélé, pour la première fois, un rôle pronostic des transcrits de NCR3 (gène de NKp30) chez des patients naïfs de tout traitement. L’activation des cellules NK via NKp30 pourrait être une stratégie efficace d’immunomodulation chez les patients atteints de CBNPC avancé. Ces travaux confirment le rôle important des cellules NK dans le CBNPC avancéRecently, immunotherapy has emerged as a new strategy in Non-Small Cell Lung Cancer (NSCLC) patients, confirming the key role of the immune system in this disease. Despite these new treatments (targeted therapies, immunotherapy), response rates remain low with a modest impact on overall survival. Biomarkers are needed to define the target population of these treatments. One of the options explored is the immune status; indeed the immune status of cancer patients has a prognosis impact and may influence the response to standard treatments such as chemotherapy, targeted therapies and even immunotherapy. Among the immune cells, Natural Killer cells (NK) have an effector role in NSCLC. It is now established that NK cells can promote a functional and efficient adaptive immunity. Therefore, an impaired NK functions could be a mechanism associated with the escape from adaptive immunity of the tumor. In our first study, we demonstrated that exosomes from dendritic cells stimulated NK cells through NKp30, this activity is being associated with improved survival in advanced NSCLC. Our second project has revealed, for the first time, a independent prognostic role of NCR3 transcript (NKp30 gene) for naïve advanced NSCLC. Activation of NK cells via NKp30 could be an effective strategy for immunomodulation in advanced NSCLC patients. These studies confirm a major role of NK cells in advanced NSCLC
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Dutertre, Charles-Antoine. "De l'importance de la caractérisation des différentes isoformes de RFC gamma des cellules NK pour l'optimisation fonctionnelle des anticorps monoclonaux à usage thérapeutique." Paris 7, 2008. http://www.theses.fr/2008PA077132.
Full textAbstract:
De gros efforts ont été faits pour optimiser les propriétés cytotoxiques des anticorps monoclonaux (AcM) à usage thérapeutique, en particulier leur capacité d'engagement du RFcγIIIA (CD16) activateur exprimé à la surface des cellules NK capables d'induire une cytotoxicité cellulaire dépendante d'anticorps (ADCC). La première partie de nos travaux a visé à déterminer l'expression de RFcγll par les cellules NK, ainsi que leur rôle dans le contrôle de l'ADCC, et nous a permis de mettre en évidence une nouvelle sous-population de cellules NK CD56dim/CD3ˉ/NKp46⁺/RFcγlllAbright/RFcγllbright exprimant fortement le RFcγllB inhibiteur. Nous avons montré que les cellules NK RFcγllBbright, détectée chez tous les donneurs sains, présentent un profil d'expression de récepteurs NK (NKR) différent de celui des cellules NK RFcγll'°/ˉ(exprimant majoritairement le RFcγIIC activateur), ainsi qu'une dégranulation réduite au cours de leur activation RFcγ-dépendante. La seconde partie de nos travaux a permis de démontrer qu'un AcM anti-CD20 développé par le Laboratoire français du Fractionnement et des Biotechnologies, l'EMAB-6, présente in vitro une activité cytotoxique contre les cellules de leucémie lymphoïde chronique B (LLC-B) beaucoup plus élevée que celle du rituximab, grâce a sa capacité de fixation au RFcγlllA beaucoup plus importante que le rituximab. Nos études ont permis de confirmer qu'un faible taux de fucosylation de l'AcM EMAB-6 était responsable de cette propriété et qu'un meilleur engagement du RFcylllA donne un avantage cytotoxique d'autant plus important à cet AcM par rapport au rituximab que la densité de molécules CD20 à la surface des cellules cibles était plus faibleImportant efforts have been devoted to the optimization of cytotoxic therapeutic monoclonal antibodies (mAb), in particular to the improvement of their capacity to engage the activating RFcγIIIA (CD16) expressed on NK cells that are capable of antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC). In the present work, we examined the expression of FcγRIl by human NK cells, as well as their role in the control of ADCC, which made it possible to define a novel NK cell subpopulation, CD56dim/CD3ˉ/NKp46⁺/RFcγlllAbright/RFcγllbright that strongly expresses inhibitory FcyRIlB. We showed that FcYRMBbright NK cells, detected in all the donors tested, exhibit an expression profile of NK cell receptors (NKR) different from that of NK RFcγll'°/ˉ cells (that predominantly express the activating FcγRIIC), as well as a reduced degranulation following FcγR-dependent activation. The second part of our work allowed the demonstration that an anti-CD20 EMAB-6 antibody developed by the Laboratoire français du Fractionnement et des Biotechnologies, presents a much higher cytotoxic activity against B cell chronic lymphocytic leukemia (B-CLL) cells in vitro than rituximab, a marketed anti-CD20 therapeutic mAb. This increased activity was linked to a much higher binding capacity to FcyRIIIA as compared to its non-optimized counterpart or to rituximab. Our studies also confirmed that the low fucose level of the EMAB-6 mAb is essential to its increased FcγRIIIA binding and efficacy. Finally, the better cytotoxic activity of this antibody as compared to rituximab was found even increased when the density of CD20 on target cells was lower
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Côte, Marjorie. "Caractérisation moléculaire et fonctionnelle de la syntaxine 11 et de son partenaire MUNC18-2, impliqués dans la lymphohistiocytose familiale." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T059.
Full textAbstract:
La Lymphohistiocytose Familiale (LHF) est une pathologie immunitaire de transmission autosomique récessive. Elle est caractérisée par une activation lymphocytaire et macrophagique exagérée, ces cellules infiltrant les différents organes du patient et les détruisant en produisant de grandes quantités de cytokines inflammatoires. Chez les patients atteints de LHF, des défauts en perforine (LHF2), Munc13-4 (LHF3) et syntaxine 11 (LHF4) ont été précédemment décrits. Ces gènes codent pour des protéines impliquées dans lʼactivité cytotoxique des lymphocytes T et des cellules natural killer (NK). Mon travail de thèse permet de montrer que le gène codant pour la protéine Munc18-2 (ou syntaxin-binding protein 2, STXBP2) est muté chez un certain nombre de patients présentant une LHF, permettant la caractérisation dʼune nouvelle forme génétique dénommée LHF de type 5 (FHL5). Les lymphoblastes de ces patients ont une expression fortement diminuée ou indétectable de la protéine Munc18-2. Un défaut dʼexocytose des granules cytotoxiques est mis en évidence dans les cellules NK de patients, après que les granules ont polarisé au niveau de la synapse immunologique. Ce défaut est complémenté par lʼexpression ectopique de Munc18-2. Nous montrons également que la syntaxine 11 est le principal partenaire de Munc18-2 dans les lymphocytes, son expression stable nécessitant la présence de Munc18-2. Certains patients présentant une LHF5 et associant à leur désordre immunitaire une pathologie intestinale, nous ont fait rechercher un rôle de Munc18-2 au niveau des les cellules épithéliales de lʼintestin. Munc18-2 est localisé à la membrane apicale des cellules épithéliales intestinales et il pourrait ainsi réguler la fusion de compartiments intracellulaires avec la membrane plasmique. Pour approcher le rôle de Munc18-2 dans la polarisation et le trafic intracellulaire des cellules épithéliales de lʼintestin, nous avons utilisé la lignée Caco2 dans laquelle nous avons éteint lʼexpression de Munc18-2. Cependant, nos résultats ne permettent pas à lʼheure actuelle de définir un rôle précis de Munc18-2 au niveau de lʼintestin à lʼaide de cette lignée de cellules épithéliales, probablement du fait dʼune expression résiduelle de la protéine. Notre travail permet donc dʼidentifier un défaut en Munc18-2 à lʼorigine de la LHF5 et un rôle essentiel de cette protéine à une étape tardive de la voie de sécrétion des granules cytotoxiques en sʼassociant à la syntaxine 11, elle-même responsable dʼune forme génétique de LHF. Outre lʼintérêt fondamental que représente la compréhension des mécanismes dʼexocytose, notre travail participe à une meilleure compréhension de la physiopathologie de la lymphohistiocytose familiale et de sa composante intestinale lorsquʼelle résulte dʼun défaut en Munc18-2Familial hemophagocytic lymphohistiocytosis (FHL) is a genetically heterogeneous autosomal recessive immune disorder characterized by the occurrence of uncontrolled activation of lymphocytes and macrophages infiltrating multiple organs. Disease-causing mutations in the perforine (FHL2), Munc13-4 (FHL3) and syntaxin 11 (FHL4) genes have been identified in individuals with FHL. This study shows that the gene encoding for the syntaxin-binding proteins 2 (STXBP2, also known as Munc18-2) is mutated in a subset of patients with FHL, designated as FHL5. Lymphobasts isolated from these patients have a severe decreased in Munc18-2 expression. NK cells exhibited impaired cytotoxic granules exocytosis although perforin-containing granules were able to polarize toward the immunological synapse. This defect could be overcome by ectopic expression of wild type Munc18-2. Furthermore, this work provide evidence that syntaxin 11 is the main partner of Munc18-2 in lymphocytes, as its expression required the presence of Munc18-2. These data indicate that Munc18-2 is required at a late step of the secretory pathway for the release of cytotoxic granules by binding to syntaxin 11, which deficiency also causes FHL. Moreover, some FHL5 patients associate to their immune disturbance an intestinal disorder. This additional phenotype strongly suggests that Munc18-2 has a non-redundant function in gut epithelial cells. Munc18-2 is localized to the apical membrane of intestinal epithelial cells and seems to regulate the fusion of intracellular compartments to the plasma membrane. The function of Munc18-2 in the polarization and intracellular trafficking of epithelial cells was thus investigated using Caco2 cell line in which Munc18-2 gene was silenced. So far, no precise role of Munc18-2 in intestinal cell can be evidenced. Beside the fundamental interest of this study in understanding the molecular mechanisms regulating the exocytic machinery from different cells, our work contributes to a better understanding of the pathophysiology of the LHF and its intestinal expression when resulting from Munc18-2 deficiency
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Ivagnes, Alexandre. "Valeur prédictive du récepteur NKp30 dans la réponse à l’imatinib mesylate des tumeurs stromales gastrointestinales et identification d’un nouveau mécanisme inhibiteur des cellules Natural Killer par la voie TNFα/TNFR2/BIRC3/TRAF1." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2017. http://www.theses.fr/2017SACLS237/document.
Full textAbstract:
Depuis ces 10 dernières années, l’immunothérapie est à l’avant-garde de la thérapie anticancéreuse. Les cellules Natural Killer (NK) font partie du système immunitaire inné et possèdent la capacité unique de lyser les cellules tumorales sans activation préalable par un antigène spécifique. Elles jouent un rôle majeur dans le contrôle de plusieurs cancers hématologiques et solides dont les tumeurs stromales gastrointestinales (GIST). Leur activation dépend de l’équilibre entre leurs récepteurs activateurs et inhibiteurs. Les Natural Cytotoxicity Receptors (NCR) font partis des récepteurs activateurs les plus importants dans leur reconnaissance des cibles et comprennent le NKp30, NKp44 et NKp46. Le NKp30 possède 3 isoformes: NKp30a et NKp30b sont immunostimulantes induisant la sécrétion d’Interféron (IFN) γ et de Tumor necrosis factor (TNF) α alors que NKp30c est immunosuppressive favorisant la production d’interleukine 10 (IL-10). L’IFNγ est un puissant activateur des cellules immunitaires tandis que l’IL-10 est une cytokine anti-inflammatoire. Le TNFα a été décrit initialement comme un facteur sérique induisant la nécrose des tumeurs, cependant son rôle a depuis été élargi à des fonctions homéostatiques. De nombreuses études laissent à penser que les fonctions antitumorales des cellules NK ne se limitent pas à l’élimination des cellules tumorales. Malgré les progrès importants réalisés dans la compréhension des cellules NK, de nombreux travaux sont encore à mener pour exploiter pleinement leur potentiel antitumoral.Notre équipe a démontré l’importance capitale des cellules NK dans les GIST. Ainsi l’infiltrat NK prédit la survie sans progression des patients. De plus nous avons montré que l’expression préférentielle de l’isoforme immunosuppressive NKp30c impactait négativement le pronostic des patients GIST. Suite à ces résultats, nous avons cherché à mieux caractériser l’impact des isoformes du récepteur NKp30 chez les patients GIST en réponse à l’IM. Dans un premier temps, nous avons démontré qu’un haut ratio d’expression entre NKp30b et NKp30c prédisait une meilleure réponse à l’imatinib mesylate (IM, un inhibiteur de tyrosine kinase, traitement de référence des GIST) et que l’expression des isoformes de NKp30 impactait l’environnement cytokinique de la tumeur. De plus, nous avons établi pour la première fois le lien entre la présence de ligands solubles de NKp30, B7 Homolog 6 soluble (sB7-H6) et BCL2 Associated Athanogene 6 soluble (sBAG6), et la diminution de la survie sans évènement des patients GIST traités à l’IM.Malgré l’infiltration immunitaire de nombreuses tumeurs, les fonctions antitumorales des lymphocytes sont inhibées par le microenvironnement tumoral. Ainsi, nous avons étudié quelles voies de signalisation étaient associées à l’inhibition des cellules NK présentes dans cet environnement. Pour cela, nous avons réalisé un microarray à partir des cellules NK infiltrant les GIST et avons mis en évidence le rôle délétère de la voie TNFα/TNF Receptor 2/Baculoviral IAP Repeat Containing 3 (BIRC3)/TNF Receptor Associated Factor 1 (TRAF1) dans la fonctionnalité des cellules NK. En effet, l’activation de cette voie dans les cellules NK entraine la diminution de la transcription du gène du récepteur activateur NKp46 ainsi que son expression membranaire. Cette diminution était corrélée avec l’expression de l’isoforme NKp30c. Par ailleurs, nous avons pu mettre en évidence chez la souris que le TNFα facilitait la dissémination métastatique de la lignée tumorale sensible aux cellules NK B16F10.Nos résultats sur les cellules NK ont renforcé leur grand potentiel en tant que cible thérapeutique pour l’immunothérapie anticancéreuse. En effet, l’importance du récepteur NKp30 et de ses isoformes dans la prédiction de la réponse à l’IM dans les GIST et la mise en évidence d’un nouveau mécanisme inhibiteur des cellules NK par la voie TNFα/TNFR2/BIRC3/TRAF1 ouvrent la voie à de nouvelles stratégies dans le traitement des cancersOver the last 10 years, immunotherapy has been at the forefront of cancer therapy. Natural Killer (NK) cells are part of the innate immune system and have the unique ability to lyse tumor cells without any antigen specific priming. They have a key prognostic role in several hematological and solid cancers including gastrointestinal stromal tumors (GIST). A balance between activating and inhibitory receptors triggers NK cell activation. Natural cytotoxicity receptors (NCR) are among the most clinically relevant activating receptors and include NKp30, NKp44 and NKp46. NKp30 can be expressed in 3 different isoforms: NKp30a and NKp30b are both immunostimulatory, inducing interferon (IFN) γ and tumor necrosis factor (TNF) α secretion whereas NKp30c is immunosuppressive, producing interleukin 10 (IL-10). IFNγ is a potent activator of immune cells whereas IL-10 is an anti-inflammatory cytokine. TNFα was first described as a serum factor, inducing tumor necrosis but its role has since been broadened to homeostatic functions. Ample evidence suggests that anti-tumor functions of NK cells are tightly regulated and expand far beyond the simple killing of malignant cells. Despite the tremendous progress in understanding NK cell biology, further work is warranted to fully exploit the anticancer potential of these cells.Our group demonstrated the crucial role that NK cells have in GIST. Indeed, NK cell infiltrate positively correlates with progression-free survival. Moreover, we showed that the preferential expression of the immunosuppressive isoform NKp30c, negatively impacts the clinical outcome of GIST patients. To further extend these observations, we explored the influence of various NKp30 isoforms in GIST patients.Firstly, we revealed that a high ratio between the expression of NKp30b and NKp30c isoforms predicted a stronger imatinib mesylate (IM) response (a tyrosine kinase inhibitor, TKI – first line standard of care in GIST) and that tumor cytokine milieu is modified following NKp30 isoform expression. Furthermore, we demonstrated a link between the presence of soluble ligands of NKp30, soluble B7 Homolog 6 (sB7-H6) and soluble BCL2 Associated Athanogene 6 (sBAG6), and a decrease in event-free survival in IM-treated GIST patients.Despite the presence of immune infiltration in many tumors, antitumor functions of lymphocytes are inhibited by the tumor microenvironment. Thus, we explored which signaling pathways were associated with NK cell inhibition in the tumor microenvironment. To do so, we performed a microarray from GIST infiltrating NK cells which highlighted the deleterious effect of TNFα/TNF Receptor 2/Baculoviral IAP Repeat Containing 3 (BIRC3)/TNF Receptor Associated Factor 1 (TRAF1) pathway on the function of NK cells. Next, we demonstrated that activation of this pathway in NK cells decreased gene transcription and protein expression of the activating receptor NKp46 (also called Natural Cytotoxicity Triggering Receptor 1 NCR1). This decrease positively correlated with NKp30c isoform expression. Moreover we showed that in mice, TNFα increases the metastatic dissemination of the NK sensitive tumor cell line, B16F10.Results from our research on NK cells strengthen the potential of NK cells as a therapeutic target for anti-tumor immunotherapy. Taken together, this thesis demonstrates the key role of the NKp30 receptor and its isoforms in the IM therapy as predictive marker in GIST response and describes for the first time a new NK cell inhibitory mechanism via the TNFα/TNFR2/BIRC3/TRAF1 pathway, paving the way for novel therapeutic strategies in cancer treatment
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Valentin, Hélène. "Étude des mécanismes de déclenchement et de contrôle de l'activation des lymphocytes via les molécules CD2 et CD3 : impacts en immunothérapie." Compiègne, 1990. http://www.theses.fr/1990COMPD276.
Full textAbstract:
La prolifération du lymphocyte T humain nécessite l'envoi de plusieurs signaux simultanés : des signaux primaires administrés via les molécules CD2 ou CD3 et des signaux complémentaires. L'activation du lymphocyte T par des paires d'anticorps CD2 met en jeu les cellules accessoires (monocytes) Ces cellules agissent en sécrétant de MU et/ou en établissant des contacts cellulaires faisant Intervenir entre autre les molécules de surface CD18ICD1 1 a (LFA-1) et HLA-classe 1. En absence de cellules accessoires, IIIL2 et IL4 sont capables de compléter un premier signal délivré la cellule T au travers de la molécule CD2. D'autres signaux complémentaires permettent d'activer le lymphocyte T via les molécules CD2 et CD3. Un anticorps dirigé contre la molécule CD5 induit la prolifération des cellules T après un premier signal délivré via les molécules CD2 et CD3. En revanche, un second signal est induit par l'intermédiaire des molécules CDw52 et CD45R pour l'activation des lymphocytes T via la molécule CD2. Par ailleurs, l'anticorps K20 dirigé contre un épitope particulier de la molécule CD29 semble jouer un rôle dans la transmission d'un signal négatif dépendant du métabolisme de l'AMP cyclique. Cette molécule serait impliquée dans les phénomènes de suppression de l'activité des lymphocytes T CD4+ CD29+ (mémoires) stimulés via les molécules CD2 ou CD3. Enfin, différents signaux peuvent être délivrés aux lymphocytes T par l'intermédiaire de la molécule CD2 d'un part en fonction de la paire d'anticorps CD2 utilisée et d'autre part en fonction des épitopes des molécules de surface des cellules T impliqués (CL r52 et CD29). Ces résultats laissent entrevoir la complexité des signaux administrés à la cellule T via les molécules Cn2 et CD3. L'activité cytotoxique peut être modulée en fonction de la paire d'anticorps CD2 utilisée. Une activité T cytotoxique est directement induite après stimulation via la molécule CD2 contrairement à une activité LAK dont la régulation semble dépendre de la sécrétion de lymphokines (IL2 et 1L4). L'ensemble de ces résultats laissent entrevoir le rôle prépondérant joué par certaines molécules de surface de cellules immunocompétentes et par les lymphokines dans l'activation lymphocytaire T et non T. Les molécules CD2, CD5, CD29 et CDw52 peuvent représenter des outils très précieux pour la manipulation du système immunitaire dans les stratégies thérapeutiques des cancers.
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Maucourant, Christopher. "Caractérisation du découplage des fonctions des cellules natural killer au cours des infections par les virus de la dengue, du zika et du chikungunya Control of Acute Arboviral Infection by Natural Killer Cells HLA-C-restricted viral epitopes are associated with an escape mechanism from KIR2DL2+ NK cells in Lassa virus infection." Thesis, Sorbonne université, 2019. http://www.theses.fr/2019SORUS274.
Full textAbstract:
L'histoire récente à été marquée par des épidémies récentes de dengue (Denv), Chikungunya (CHIKV) et Zika (ZIKV). Bien que ces maladies soient largement asymptomatiques, elles peuvent générer de sérieuses complications comme des formes chroniques d'arthralgies et peuvent causer des hémorragies pouvant conduire au décès (Majoritairement DENV), des microcéphalies (Maj. ZIKV) et des Syndromes de Guillain-Barré (Zikv et Chikv). Ces épidémies récentes ont poussé l'OMS à classer ces maladies comme maladies à déclaration obligatoire. A ce jour aucun traitement spécifique existe contre ces maladies rendant prioritaire la compréhension de l'immunité dirigée contre ces virus. Bien que peu de choses soient connues sur l'immunité dirigée contre ces virus, certaines études ont montré le rôle de l'immunité innée dans la clairance de ces infections. Parmi les cellules de l'immunité innée on trouve les cellules Natural Killer qui ont la capacité de s'activer sans immunisation préalable via la reconnaissance de molécules de stresse. Une fois activées, ces cellules ont la capacité de produire des cytokines afin d'induire l'activation de l'immunité adaptatives et de tuer les cellules infectées. Les premiers travaux menés au laboratoire ont montré un découplage des fonctions NK au cours de ces infections : Cytoxicité uniquement au cours des infections par CHIKV, production de cytokines au cours des infections par DENV. Nous nous sommes intéressé à créer des modèles d'étude des interactions entre les cellules NK et des cibles infectées par ces virus afin de caractériser les couples ligands/récepteurs mis en jeu ainsi que les voies de signalisation impliquées dans ce découplage fonctionnelRecent history has been marked by recent epidemics of dengue fever (Denv), Chikungunya (CHIKV) and Zika (ZIKV). Although these diseases are largely asymptomatic, they can generate serious complications such as chronic forms of arthralgia and can cause hemorrhages that can lead to death (mainly DENV), microcephalies (Mainly ZIKV) and Guillain-Barré Syndromes (Zikv and Chikv). These recent epidemics have prompted WHO to classify these diseases as notifiable diseases. To date, no specific treatment exists against these diseases, making it a priority to understand the immunity directed against these viruses. Although little is known about immunity against these viruses, some studies have shown the role of innate immunity in the clearance of these infections. Among the innate immunity cells : Natural Killer cells have the ability to be activated without prior immunization via the recognition of stress molecules. Once activated, these cells have the ability to produce cytokines to induce the activation of adaptive immunity and can kill infected cells. Initial work in the laboratory showed a decoupling of NK functions during these infections: Cytoxicity only during CHIKV infections, cytokine production during DENV infections. We have been interested in creating models to study interactions between NK cells and targets infected with these viruses in order to characterize the ligand/receptor pairs involved and in order to characterize the signalling pathways involved in this functional decoupling
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Nicoletti, Simon. "Natural Killer Cells and Pre-B Acute Lymphoblastic Leukemia : Evidence for an Unconventional Cytotoxicity Pathway." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2017. http://www.theses.fr/2017SACLS383.
Full textAbstract:
Les cellules Natural Killer (NK) représentent une population de cellules innées lymphoïdes aux fonctions anti-infectieuses et antitumorales. Les leucémies aiguës lymphoblastiques pré-B (LAL pré-B) constituent le cancer de l’enfant le plus fréquent et ont été décrites comme résistantes à la cytotoxicité médiée par les NK bien que les bases moléculaires demeurent inconnues.L’objectif de ces travaux a été de caractériser cette résistance. En développant un essai de cytotoxicité par cytométrie en flux et en utilisant des cellules effectrices activées in vitro, nous avons établi la sensibilité retardée des LAL pré-B à la cytotoxicité NK : initialement résistantes après 4h d’incubation, elles sont fortement tuées après 25h.Cette cytotoxicité est contact-dépendante mais ni la voie de l’exocytose des granules cytotoxiques ni celle des récepteurs de mort n’y contribuent. La mort cellulaire des cibles est de profil apoptotique mais indépendante des caspases ; la signalisation mitochondriale l’amplifie partiellement. Interférer avec les dérivés de l’oxygène par un antioxydant diminue la cytotoxicité. Nous montrons que les cellules NK de patients atteints de granulomatose septique chronique liée à l’X présentent un défaut de cette nouvelle cytotoxicité. Nous démontrons l’expression par les NK des composants clefs d’une NADPH oxydase distincte du complexe utilisé par les phagocytes. Nos travaux établissent l’existence d’une voie de cytotoxicité non conventionnelle et en définissent les principaux prérequis moléculairesNatural Killer (NK) cells are innate lymphoid cells with anti-infectious and anti-tumoral activities. Among neoplasia, pre-B acute lymphoblastic leukemias (pre-B ALL) represent the most common form of cancer in childhood and were shown to be resistant to NK cell mediated cytotoxicity although the mechanisms explaining this phenomenon are incompletely understood.In the present work, we investigated the relative immune resistance of pediatric pre-B ALL targets to activated NK cells. We developed a flow cytometry based cytotoxicity assay to assess the NK activity and the involvement of long term cytotoxic pathways. Although pre-B ALL blasts were strongly resistant at 4h, we found a considerable delayed NK killing at 25h.Further investigations revealed that cell contact was mandatory for efficient killing but also that neither the granule exocytosis nor the death receptor pathway were involved. Target cell death was caspase independent but mitochondria signaling amplified it. We then showed that NK cells from patients with X-linked chronic granulomatous disease could not kill efficiently ALL blasts and that NK cells expressed key components of a NADPH oxidase complex that was distinct from the phagocyte type. Our work reveals an uncharacterized effector pathway among cytotoxic lymphocytes and establishes key molecular requirements for this unconventional pathway
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Bielawska, Aleksandra Kiéda Claudine Duś Danuta. "Cytotoxicité des cellules tueuses naturelles vis à vis des cellules endothéliales organospécifiques vers une immunothérapie tumorale /." S. l. : S. l. : S. n. ; S. n, 2009. ftp://ftp.univ-orleans.fr/theses/aleksandra.bielawska_1191.pdf.
Full textAbstract:
Thèse de doctorat : Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie : Orléans : 2009. Thèse de doctorat : Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie : Académie des sciences de Pologne : 2009.Thèse soutenue en co-tutelle. Titre provenant de l'écran-titre.
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Cheminant, Morgane. "Rôle des récepteurs NK dans les lymphoproliférations T matures. Exemple des leucémies/lymphomes T de l'adulte associés à l'HTLV-1 et des lymphoproliférations T intestinales primitives." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2018. http://www.theses.fr/2018SACLS301.
Full textAbstract:
Les lymphomes T périphériques (PTCLs) sont des entités hétérogènes dont la classification a récemment été révisée. Plus de 25 entités de lymphomes T ou NK matures sont ainsi classées selon leur présentation clinico-biologique et leur origine cellulaire présumée, justifiant l’étude approfondie de leur phénotype. Des récepteurs NK (NKRs) ont été mis en évidence dans certains lymphomes cutanés. En outre, un lymphome intra-épithélial intestinal, appelé maladie coeliaque réfractaire de type II (MCRII), dérive d’un lymphocyte caractérisé par des marqueurs T et NK. Ces constatations nous ont amenés à évaluer l’expression de NKRs sur un panel représentatif de PTCLs, constitué en particulier de PTCLs primitifs intestinaux et de leucémies/lymphomes T de l’adulte associés à l’HTLV-1 (ATL). Dans l’ATL, nous montrons que KIR3DL2 est exprimé par les cellules tumorales des formes aigües. Le virus HTLV-1 et la méthylation de son promoteur jouent un rôle dans l’expression de KIR3DL2. Enfin, un anticorps monoclonal dirigé contre KIR3DL2, IPH4102, est capable de tuer spécifiquement les cellules primaires d’ATL KIR3DL2 ex vivo par un mécanisme dépendant d’effecteurs NK autologues. Dans les lymphoproliférations T intestinales primitives, nous montrons que NKp46 est un nouveau biomarqueur pour leur diagnostic et leur stratification thérapeutique. En effet, NKp46 est exprimé sur les cellules anormales de la MCRII, et sur les lymphomes T primitifs intestinaux agressifs, mais pas sur les indolents et les MC non compliquées. Enfin, les cellules primaires exprimant NKp46 sont sensibles ex vivo à la cytotoxicité induite par un anticorps monoclonal dirigé contre NKp46 et couplé à une toxine.Ces résultats nous ont permis de discuter l’origine cellulaire de ces lymphomes et le rôle de ces NKRs dans la lymphomagénèse. Dans une optique translationnelle, l’expression des NKRs peut aider au diagnostic de ces entités parfois difficiles à individualiser, et enfin constituer une cible thérapeutique intéressantePeripheral T-cell lymphoma (PTCLs) are heterogeneous entities whose classification has recently been revised. More than 25 entities are thus classified according to their clinico-biological presentation and their presumed cellular origin, justifying the in-depth study of their phenotype. NK receptors (NKRs) have been demonstrated in some cutaneous lymphomas. In addition, a less known intestinal lymphoma, called type II refractory celiac disease (RCDII), arises from an intraepithelial lymphocyte characterized by T and NK markers. These findings led us to evaluate the expression of NKRs on a representative panel of PTCLs, focusing on primary gastrointestinal (GI) T-cell lymphoproliferative diseases (T-LPD) and HTLV-1 associated adult T leukemia/lymphoma (ATL).In ATL, we show that KIR3DL2 expression is mainly associated with acute-type ATL. HTLV-1 has a preferential tropism for KIR3DL2+ lymphocytes and may play a role in KIR3DL2 expression induction, combined with the hypomethylation status of KIR3DL2 promoter. The benefit of targeting KIR3DL2 by IPH4102 should be further investigating in acute ATL patients.In GI T-LPD, we show that NKp46 is a novel biomarker useful for diagnosis and therapeutic stratification, as NKp46 is a hallmark of RCDII tumor cells, shared by EATL. Strong preclinical rationale identifies anti-NKp46-PBD as a promising therapy for RCDII, EATL and MEITL.These results allowed us to discuss the cellular origin of these lymphomas and the role of NKRs in lymphomagenesis. From a translational point of view, NKRs could represent useful biomarkers in these entities that are sometimes difficult to individualize, and finally constitute an interesting therapeutic target
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Quillet, Anne. "Role des antigenes hla classe i dans la susceptibilite a la cytotoxine naturelle nk/lak." Paris 7, 1988. http://www.theses.fr/1988PA077142.
Full text
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Jarousseau, Annie-Claude. "Susceptibilite des cellules choriocarcinomateuses bewo, jeg-3 et jar aux cytotoxicites nk, lak et ctl exercees par des lymphocytes sanguins humains ; etude de leurs proprietes adhesives vis-a-vis des effecteurs et du role des molecules de classe i du cmh a leur surface." Tours, 1996. http://www.theses.fr/1996TOUR3310.
Full text
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Carré, Thibault. "Analyse des bases moléculaires de la résistance tumorale à la cytotoxicité spécifique et naturelle dans le contexte microenvironnemental." Thesis, Paris 11, 2012. http://www.theses.fr/2012PA11T057.
Full textAbstract:
Au cours de la réponse immunitaire antitumorale, l’instabilité génétique des tumeurs combinée à la pression de sélection du système immunitaire peut conduire, via l’immunoediting, à l’émergence de variants tumoraux résistants à la lyse par les effecteurs cytotoxiques. Une meilleure compréhension de ces mécanismes potentiellement impliqués dans la susceptibilité tumorale à la lyse naturelle et/ou spécifique pourrait permettre le développement de stratégies d’immunothérapie intégratives plus efficaces. Dans ce cadre nous avons étudié un modèle de résistance à la lyse spécifique impliquant un remaniement du cytosquelette d’actine (i). Nous avons pu mettre en évidence que l’inhibition conjointe de protéines interagissant avec l’actine (caldesmone, ézrine, radixine et moésine) générait une réduction de la susceptibilité des cellules tumorales à la lyse par les lymphocytes T cytotoxiques (CTLs). Parallèlement, nous avons identifié les microARNs différentiellement exprimés entre le variant résistant et la lignée parentale et étudié leur implication dans la susceptibilité tumorale à la lyse par les CTLs. Dans le but de déterminer le rôle d’une pression de sélection par les cellules tueuses naturelles (NK pour Natural Killer), de l’immunité innée, sur les cellules tumorales et l’émergence de variants résistants, nous avons aussi établi un modèle de coculture continue de cellules tumorales de mélanomes avec des cellules NK (ii). Les cellules tumorales obtenues sont résistantes à la lyse NK (mais toujours sensibles à la lyse spécifique par un clone lymphocytaire T cytotoxique) et établissent moins de contact et de synapse immunologique avec les cellules NK que la lignée parentale. L’analyse transcriptomique a révélé la baisse d'expression de B7-H6 (ligand d'un récepteur activateur des cellules NK) qui contribue partiellement au phénomène de résistance. De nombreux gènes impliqués dans les phénomènes de migration/invasion/adhérence sont également modulés et certaines propriétés cellulaires (croissance en milieu semi-solide, adhérence, migration) semblent refléter l’acquisition d’une agressivité tumorale accrue suite à la coculture. Nous avons finalement analysé l’impact sur la réponse antitumorale de la connexine-43, impliquée dans la formation des jonctions communicantes (GJ pour Gap Junction) (iii). Nous avons montré que sa présence à la synapse entre cellules tumorales et CTL n'exerce aucun impact sur la susceptibilité à la lyse. Néanmoins, les GJs sont impliquées dans l’émergence par stimulation antigénique de lymphocyte T CD8+ spécifique hautement réactifDuring antitumor immune response, cancer cells genetic instability combined with immune system selective pressure may drive to the emergence of tumor variant resistant to lysis by cytotoxic effector cells through a phenomenon called immunoediting. A better understanding of those mechanisms putatively involved in tumor susceptibility to natural and/or specific lysis would enable new integrative and more effective immunotherapeutic strategies. In this context, we studied a model of resistance to specific lysis linked to actin cytoskeleton remodeling (i). We showed that combined inhibition of actin interacting protein (caldesmone, ezrin, radixin and moesin) reduced tumor cells susceptibility to cytotoxic T lymphocytes (CTLs) lysis. Moreover, we identified microRNAs differentially expressed between parental cell line and resistant variant and are currently studying their impact on tumor susceptibility to CTLs lysis. In order to depict the role of innate immunity Natural Killer (NK) cells selective pressure, on tumor cells and on the emergence of resistant variants, we also established a maintained coculture model of melanoma cells with NK cells (ii). Selected cells obtained were resistant to NK cells-mediated lysis (but still susceptible to CTLs-mediated specific lysis) and formed less contact and immune synapse with NK cells than parental cell line. Transcriptomic analysis revealed the reduced expression of B7-H6 (ligand of an NK cells activating receptor) partially contributing to the resistance phenotype. The expression of several genes involved in migration/invasion/adhesion is also modulated and some cell characteristics (cell growth in semi-solid medium, adhesion, migration) tend to reflect the acquisition through coculture of an increased aggressiveness. Finally, we evaluated the impact of connexin-43 (Cx43), involved in the establishment of Gap Junctions (GJs), on antitumor response (iii). We showed that despite localization at the immune synapse between tumor target cell and CTL, Cx43 and GJs do not modulate susceptibility to CTL-mediated specific lysis. Nevertheless, GJs contribute to the emergence of highly reactive specific CD8+ T lymphocytes following antigen stimulation
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Verrier, Thomas. "Function and plasticity of NKp46 expressing innate lymphoid cells." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2016. http://www.theses.fr/2016USPCC173/document.
Full textAbstract:
Les cellules lymphoïdes innées de groupe 3 (ILC3) contribuent activement à l’homéostasie intestinale par leur production d’Interleukin-22 (IL-22). Ces ILC3 regroupent 2 sous-populations majeures, les LTi (« Lymphoid Tissue inducer »), caractérisées par l’expression du récepteur au chimiokine CCR6, et les ILC3 exprimant le facteur de transcription (FT) T-bet, qui comprennent une population positive pour le marqueur de surface NKp46, récepteur originalement utilisé pour identifier les ILC de groupe 1 (ILC1). Les ILC1 jouent un rôle prépondérant dans la réponse aux pathogènes intracellulaires et anti-tumorale. Jusqu’à présent, trois populations majeures composent les ILC1 : les lymphocytes cytotoxiques Natural Killer (NK ou ILC1b), qui dépendent largement du FT Eomes et expriment l’intégrine CD49b ; les ILC1 hépatiques et intestinaux, qui dépendent du FT T-bet et expriment CD49a (ILC1a) ; et une population CD49a+ et DX5+ indépendante du FT Nfil3 localisée dans les glandes salivaires ou l’utérus (ILC1ab). Mes travaux visent à comprendre la biologie des ILC exprimant NKp46, ainsi que les facteurs impliqués dans leur développement, leur maturation et leur fonction. La majeure partie de ma thèse se concentre sur les NKp46+ ILC3. Premièrement, nous démontrons un rôle majeur pour le récepteur aux chimiokine CXCR6 dans la localisation des NKp46+ ILC3 dans les villi de la lamina propria intestinale (Satoh-Takayama et al. 2014). Deuxièmement, j’ai mis en évidence que NKp46+ ILC3 pouvait perdre l’expression de NKp46 (Verrier et al. 2016). Déclenchée par le TGFβ, cette perte d’expression est associée à une plus forte capacité à produire de l’IL-22, mais aussi à l’acquisition de marqueurs identifiant les LTi (CCR6, MHC-II), démontrant ainsi la plasticité des NKp46+ ILC3. Enfin, en collaboration avec le groupe de Rachel Golub, nous avons confirmé le rôle présumé de la molécule Notch dans cette plasticité (Chea et al. 2016). Dans ce manuscrit, je discuterai du développement et de l’hétérogénéité des ILC3, ILC1a, ILC1b et ILC1ab. L’ensemble de mes résultats soutient une vision dynamique de la biologie des ILC reflétant l’adaptation de ces cellules effectrices face à leur environnement. En caractérisant les différents acteurs impliqués dans ce processus dynamique, mes travaux pourront servir au développement de thérapies visant à contrôler l’équilibre entre ces différentes populations dans divers pathologies comme le cancer, les infections virales, ou encore les maladies intestinalesGroup 3 Innate Lymphoid cells (ILC3) actively maintain mucosal homeostasis through the production of Interleukin-22 (IL-22). ILC3 encompass 2 major populations, LTi (« Lymphoid Tissue inducer »), characterized by the expression of the chemokine receptor CCR6, and ILC3 that express the transcription factor T-bet, which include a population expressing the surface marker NKp46, a receptor originally used to identify group 1 ILC (ILC1). ILC1 plays a major role in the defense against intracellular pathogens and anti-tumoral responses. Three major ILC1 populations have been identified: the cytotoxic lymphocytes « Natural Killer » (NK or ILC1b), which largely rely for on the transcription factor Eomes their generation and express the integrin CD49b; hepatic and intestinal ILC1 that depends on the T-bet transcription factor and express CD49a (ILC1a); and a population that expresses CD49a and CD49b (ILC1ab) and populates the salivary gland and the uterus, which is independent of the transcription factor Nfil3. My work aimed to understand the biology of NKp46 expressing ILC, as well as factor involved in their development, maturation and function. The major part of my work focuses on NKp46+ ILC3. First, we demonstrate a major role for the chemokine receptor CXCR6 in their localisation in the lamina propria villi (Satoh-Takayama et al. 2014). Second, I showed that NKp46+ ILC3 could lose NKp46 expression (Verrier et al. 2016). Induced by TGFβ, this loss of expression was associated with higher IL-22 production and by the acquisition of markers identifying LTi (CCR6, MHC-II), demonstrating NKp46+ ILC3 plasticity. Finally, in collaboration with Rachel Golub’s group, we confirmed a putative role for Notch-signaling in this plasticity (Chea et al. 2016). In this manuscript, I will discuss the development and the heterogeneity of ILC3, ILC1a, ILC1b and ILC1ab. All the results I generated support a dynamic vision of ILC biology, which reflects how they adapt in response to environmental cues. By characterizing the different actors involved in this dynamic process, my work could be used to design therapies aiming at controlling the equilibrium between these different populations in diverse pathologies such as cancer, viral infection, or intestinal diseases
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Smalls-Mantey, Adjoa. "The innate immune effector cell response against HIV-1." Thesis, University of Oxford, 2013. http://ora.ox.ac.uk/objects/uuid:d97fadc3-bb4a-43dd-9138-6ab023aef60d.
Full textAbstract:
Since being identified as the cause of AIDS in 1983, HIV-1 infection has reached pandemic proportions. Despite public awareness about prevention, the growing incidence of HIV-1 infection and the limitations of current antiretroviral therapy underscore the imperative need for a vaccine. Understanding the basis of an immune response that controls infection or provides sterilizing immunity remains a major goal in the search for effective vaccines or immunotherapies. Research into correlates of immunity to HIV-1 have largely focused on CD8+ T cells or neutralising antibodies (NAbs) but to date these responses have not proved effective in containing viral replication in vaccinees who become infected. Natural killer cells (NKs), monocytes (MCs), and neutrophils (PMNs) are cells of the innate immune system with intrinsic cytotoxic function that can be enhanced by antibodies (Abs) in what is termed antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC). In my studies I investigated the production of PMNs from human stem cells, the elimination of HIV-1 infected cells by these effector cells, the modulation of cellular cytotoxicity by Ab, and characterized how Abs facilitate a potent ADCC response. I developed a novel flow cytometry assay to measure cytotoxic activity against HIV-1 infected CD4+ T cells. Using this, effector cells were shown to have different cytotoxic capacities which were enhanced by Ab. Comparing ADCC mediated by patient serum revealed that higher levels correlated with IgG binding to infected cells. I observed no correlation between serum-mediated ADCC and markers of disease progression including patient status, viral RNA load, CD4+ T cell count, or NAb titers. The data presented here have implications for acquisition and control of early HIV-1 infection by NKs, MCs, and PMNs prior to activation of an adaptive immune response, at later stages in the presence of HIV-1-specific Abs, and are relevant to vaccine-induced anti- HIV-1 Ab-based effector mechanisms.
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Oh, Jun Seok. "Critical Roles of Cytomegalovirus-Induced Natural Killer Cells in Chronic Hepatitis C Virus Infection and Rituximab-Mediated Cancer Therapy." Thesis, Université d'Ottawa / University of Ottawa, 2017. http://hdl.handle.net/10393/36228.
Full textAbstract:
Natural Killer (NK) cells, members of the innate lymphoid cells (ILCs), are known to play an important role in the defense against foreign cells and abnormal host cells that have arisen due to viral infection or cancer inducing mutations. The typical immune response of NK cells involves the release of cytotoxic granules containing perforin and granzyme, and the secretion of immune-regulatory cytokines such as interferon gamma (IFN-γ). Unlike the adaptive lymphocytes such as T cells and B cells, NK cells do not require prior sensitization, enabling them to initiate an immune response much faster. This unique feature of NK cells is made possible by the utilization of an array of germline encoded receptors; but on the other hand, it limits NK cells ability to respond against rapidly evolving pathogens. NK cells overcome this shortcoming with an antibody-assisted process called antibody dependent cellular cytotoxicity (ADCC).
A novel subset of human NK cells, which displays potent and broad antiviral responsiveness in concert with virus-specific antibodies, was recently discovered in cytomegalovirus positive (CMV+) individuals. This NK cell subset, called g-NK cell, was characterized by a deficiency in the expression of FcεRIγ, an adaptor protein that associates with CD16 which enables ADCC. Surprisingly, despite this deficiency, g-NK cells displayed an enhanced ADCC as compared to their conventional counterparts. Furthermore, having a long-lasting memory-like NK-cell phenotype suggests a role for g-NK cells in chronic infections.
This study investigates the importance of g-NK-cells in clinical settings, first by investigating whether the presence of g-NK cells is associated with the magnitude of liver disease during chronic hepatitis C virus (HCV) infection. Analysis of g-NK cell proportions and function in the peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) of healthy controls and chronic HCV subjects showed that chronic HCV subjects had slightly lower proportions of g-NK cells, while having similarly enhanced ADCC responses compared to conventional NK cells. Notably, among CMV+ chronic HCV patients, lower levels of liver enzymes and fibrosis were found in those possessing g-NK cells. g-NK cells were predominant among the CD56neg NK cell population often found in chronic HCV patients, suggesting their involvement in the immune response against HCV.
Rituximab is a chimeric anti-CD20 antibody used to treat B cell lymphoma patients; and studies have suggested that its efficacy is associated with the ADCC potency and CD16 affinity. Since g-NK cells are characterized by their superior ADCC compared to their conventional counterpart, I decided to investigate whether the presence of g-NK cells can improve the effectiveness of rituximab against malignant B cells in the context of lymphoma and leukemia. The analysis of g-NK cells’ ADCC response against rituximab-coated lymphoma cell lines and B cells from a CLL patient indicated a superior ADCC by g-NK cells compared to their conventional NK cell counterparts.
Taken together, for the first time, my findings indicate that the presence of g-NK cells in CMV+ individuals is associated with milder liver disease in chronic HCV infection. In addition, an enhanced ADCC response by g-NK cells upon encountering rituximab coated target cells suggests the beneficial roles of g-NK cells, and opens an avenue for novel therapeutic approaches where g-NK cells can be utilized to treat persistent diseases such as chronic viral infection and cancer.
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Machado, Tiago Clemente. "Novo papel da galectina-1 como molécula efetora de células citotóxicas." Universidade de São Paulo, 2014. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42133/tde-11072014-141421/.
Full textAbstract:
A exocitose de grânulos secretórios é o principal mecanismo efetor de células TCD8+. No entanto, pouco se sabe sobre a composição dos grânulos líticos dessas células. Resultados prévios do nosso grupo identificaram algumas dezenas de novas proteínas desses grânulos. Dentre elas foi identificada Gal-1. A literatura relata que Gal-1 age por via exógena através de sua secreção por via não convencional. Dados iniciais do nosso grupo apontam um novo cenário para esta proteína no qual ela está presente em grânulos citotóxicos. Através das técnicas de microscopia eletrônica e confocal e de ensaios de citotoxicidade, nossos resultados sugerem que Gal-1 participa do papel citotóxico das CTLs modulando a via dos receptores de morte FAS-FASL. Nós também mostramos que Gal-1 interfere com o tempo de contato entre APCs e linfócitos TCD8+, com a ativação dessas células e com o controle da proliferação dos linfócitos. Nossos resultados apontam um novo cenário para Gal-1, no qual ela está presente em grânulos líticos das CTLs e está relacionada a resposta efetora dessas células.Exocytosis of secretory granules is the main effector mechanism of CD8+ T cells. In particular, little is known about CTLs lytic granules composition. Previous results from our group identified a few dozens of new proteins associated with these granules. Among them, we identified galectin-1. Literature reports the extracellular action of Gal-1. Initial data from our group suggested a new scenario for this protein, since Gal-1 was found inside cytotoxic granules. Here, we show by transmission electron and confocal laser scanning microscopy and cytotoxicity assays that Gal-1 has a role on CTL killing probably mediating the FAS-FASL pathway. We also show that Gal-1 is regulates the time of contact between APCs and TCD8+ lymphocytes, the activation of APCs and the proliferation of CD8 T cells. Taken together, our findings suggest a new scenario, in which Gal-1 is present in CTL granules and participates in cytotoxic effector response.
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Michaud, Annie. "Le récepteur de l'IL-7 sur les cellules NK matures humaines : nature et fonction." Thèse, 2008. http://hdl.handle.net/1866/7644.
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Samarani, Suzanne. "Les associations potentielles de gènes KIR avec la susceptibilité/résistance au développement de la maladie de Crohn." Thèse, 2018. http://hdl.handle.net/1866/21854.
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Lewis, David. "Soypeptide lunasin in cytokine immunotherapy for lymphoma." Thesis, 2014. http://hdl.handle.net/1805/4845.
Full textAbstract:
Indiana University-Purdue University Indianapolis (IUPUI)Immunostimulatory cytokines can enhance anti-tumor immunity and are part of the therapeutic armamentarium for cancer treatment. We previously reported that chemotherapy-treated lymphoma patients acquire a deficiency of Signal Transducer and Activator of Transcription 4 (STAT4), which results in defective IFNy production during clinical immunotherapy. With the goal of further improvement in cytokine-based immunotherapy, we examined the effects of a soybean peptide called lunasin that exhibits immunostimulatory effects on natural killer cells (NKCs). Peripheral blood mononucleated cells (PBMCs) from healthy donors and chemotherapy-treated lymphoma patients were stimulated with or without lunasin in the presence of IL-12 or IL-2. NK activation was evaluated, and its tumoricidal activity was assessed using in vitro and in vivo tumor models. Chromatin immunoprecipitation (ChIP) assay was performed to evaluate the histone modification of gene loci that are regulated by lunasin and cytokine. Adding lunasin to IL-12- or IL-2-cultuted NK cells demonstrated synergistic effects in the induction of IFNG and genes involved in cytotoxicity. The combination of lunasin and cytokines (IL-12 plus IL-2) was capable of restoring IFNy production by NK cells from post-transplant lymphoma patients. In addition, NK cells stimulated with lunasin plus cytokines have higher tumoricidal activity than those stimulated with cytokines alone using in vitro tumor models. The underlying mechanism responsible for the effects of lunasin on NK cells is likely due to epigenetic modulation at target gene loci. Lunasin represents a different class of immune modulating agent that may augment the therapeutic responses mediated by cytokine-based immunotherapy.