Dissertations / Theses: 'Cellules souches hématopoïétiques – Croissance'

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Giroux, Catherine. "Effets du traitement à l'hémine sur l'expansion et la différenciation des cellules souches hématopoïétiques." Master's thesis, Université Laval, 2018. http://hdl.handle.net/20.500.11794/30248.

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Abstract:

L’hémine humaine, connue commercialement sous l’appellation Normosang® ou Panhematin® est un produit utilisé comme agent thérapeutique pour le traitement des attaques aigües de porphyrie, maladie génétique affectant la biosynthèse de l’hème. Récemment, le traitement d’une patiente atteinte d’anémie hémolytique auto-immune sévère et de réticulocytopénie a été pris en charge par un médecin hématologue d’Héma-Québec. Le traitement de cette patiente au Normosang® a entre autres contribué à l’augmentation de son nombre d’érythrocytes et a contribué au rétablissement de son état de santé. Nous avons ainsi entrepris ce projet dans le but d’évaluer les effets de l’hémine sur l’expansion et la différenciation des cellules souches hématopoïétiques de sang de cordon dans un milieu de culture favorisant la différenciation érythroïde. Le suivi de l’expansion montre que l’hémine semble avoir un effet positif sur la croissance des cellules lors de leur différenciation érythroïde. Les résultats montrent que l’hémine semble aussi avoir un effet sur les précurseurs érythroïdes engagés dans ’érythropoïèse. L’analyse de la différenciation montre que l’hémine semble stimuler la différenciation érythroïde, ainsi que l’énucléation. L’approfondissement de ces connaissances pourrait ultimement permettre d’élargir le spectre d’application clinique du Normosang®.
Human hemin, commercialized as Normosang® or Panhematin®, is a therapeutic agent approved for the treatment of acute attacks of porphyria, a genetic disease causing a malfunction of the heme biosynthesis pathway. Recently, the treatment of a patient with severe autoimmune hemolytic anemia and reticulocytopenia was managed by a hematologist from Héma-Québec. The treatment of this patient with Normosang® has, among other things, contributed to the increasing erythrocyte levels and contributed to the complete recovery of this patient. The aim of this project was to evaluate the effects of hemin on the expansion and differentiation of hematopoietic cord blood stem cells in a culture media favoring erythroid differentiation. Results show that hemin has a positive effect on cell growth during their erythroid differentiation. The results show that hemin also appears to have an effect on erythroid precursors. Differentiation analysis points to a possible role for hemin in the stimulation of erythroid differentiation as well as enucleation. More knowledge on the subject could ultimately support a larger spectrum of clinical applications.

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Le, Clech Mikaël. "Caractérisation d'un élément répresseur du gène TAL-1 dans le tissu hématopoi͏̈étique." Montpellier 2, 2004. http://www.theses.fr/2004MON20138.

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Bourette, Roland. "Expression fonctionnelle du récepteur du CSF-1 humain dans les cellules hématopoïétiques murines." Lyon 1, 1992. http://www.theses.fr/1992LYO10286.

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Abstract:

Le csf-1 est un facteur de proliferation et de differenciation des precurseurs monocytaires. Son recepteur transmembranaire, code par le proto-oncogene c-fms, possede une activite tyrosine kinase inductible. L'adnc du csf-1r humain a ete transfere par vecteur retroviral dans des lignees cellulaires hematopoietiques murines facteur-dependantes, non-repondeuses au csf-1. Nous avons recherche si le csf-1 devenait alors capable de stimuler la proliferation de ces cellules, et si cela les engageait dans la voie de la differenciation monocytaire. Nous avons demontre que l'expression du csf-1r humain dans diverses lignees myeloides murines il-3-dependantes leur conferait la capacite de proliferer a long terme en reponse au csf-1. Cet effet du csf-1 est correle a la capacite des cellules a proliferer en reponse au stem cell factor (scf), ce qui suggere une inter-relation de leurs voies de signalisation respectives. De plus, une lignee murine multipotente exprimant le csf-1r humain, cultivee en csf-1 pendant une longue periode, a conserve ses caracteristiques de cellules immatures, notamment sa capacite a se differencier en cellules erythroides matures. Enfin, nous avons montre que le csf-1r humain est fonctionnel dans des progeniteurs erythroides (bfu-e) de moelle osseuse murine, puisqu'il est capable de se substituer a l'il-3 comme facteur stimulant la croissance de ces progeniteurs in vitro. En conclusion, nous suggerons que le csf-1r humain favorise l'auto-renouvellement plutot que la differenciation dans une cellule hematopoietique murine immature. L'ensemble de ces resultats nous permet d'envisager l'isolement de lignees csf-1-dependante de cellules souches hematopoietiques de souris

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Lopez, Ponte Adriana. "Etude des facteurs intervenant dans la migration des cellules souches de la moelle osseuse adulte." Tours, 2007. http://www.theses.fr/2007TOUR4002.

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Abstract:

Le but de ce travail a été d'étudier les facteurs moléculaires et cellulaires intervenant dans la migration des cellules souches de la moelle osseuse adulte, comprenant les cellules souches hématopoïétiques et les cellules souches mésenchymateuses (CSM). Dans un premier temps, nous avons étudié l'effet direct de G-CSF sur les CSM dans la migration des CSH hors de la niche hématopoïétique. Nos résultats indiquent que le G-CSF induit directement les CSM en favorisant la sortie de cellules hématopoïétiques hors la niche par un mécanisme dépendant de MMP2. Dans un second temps, nous avons étudié la capacité de migration in vitro des CSM. Nous avons montré que les CSM peuvent migrer en réponse aux facteurs de croissance (PDGFAB et IGF1), et aux chimiokines (RANTES, MDC et SDF1). Nous avons aussi étudié la capacité in vivo de mobilisation des CSM dans un modèle des rats hypoxiques. Nous avons constaté que l'hypoxie augmentait les rCSM dans le sang périphérique. En parallèle, les plasmas des rats hypoxiques ont montré une forte activité chimiotactique vis-à-vis des rCSM
The aim of this work was to study the molecular and cellular factors involved in the migration process of bone marrow (BM) hematopoietic stem cells and mesenchymal stem cells (MSCs). Firstly, we investigated the direct effect of G-CSF on human stromal cells that could favor the emigration of hematopoietic cells from the niche. Our results indicate that G-CSF can directly induce BM MSCs to promote hematopoietic cell emigration from the niche through a MMP-dependant mechanism involving MMP2. Secondly, we evaluated the in vitro response of MSCs, pre-incubated or not with inflammatory cytokines, using a migration assay. We showed that MSCs are able to migrate in response to the growth factors PDGFAB and IGF1, and the chemokines RANTES, MDC and SDF1. We next studied in vivo MSC mobilization capacity in a model of hypoxic rats. We found that hypoxia dramatically increased circulating rMSCs. Interestingly, plasmas from hypoxic rats displayed a strong chemotactic activity for normal rMSCs

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Perruche, Sylvain. "Approche cellulaire basée sur l'utilisation de cellules apoptotiques pour favoriser la prise de greffe et l'induction de tolérance en allogreffe de cellules hématopoïétiques." Besançon, 2005. http://www.theses.fr/2005BESA3001.

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Abstract:

Nous avons montré que l'injection intraveineuse de cellules apoptotiques conjointement à un greffon de cellules médullaires allogéniques, favorisait la prise de greffe, et ce, malgré un greffon médullaire restreint et un conditionnement pré-greffe réduit. Cette approche est basée sur les propriétés immunomodulatrices attribuées aux cellules apoptotiques. L'effet bénéfique sur la prise de greffe est observé quelque soit l'origine des cellules apoptotiques (receveur, donneur, tierce partie et même xénogénique). L'administration simultanée de cellules apoptotiques au greffon médullaire semble intéressante pour favoriser la prise d'un greffon hématopoïétique après un conditionnement pré-greffe réduit. Préalablement à son utilisation en clinique, nous devons répondre à plusieurs questions. Le retard tout comme l'absence d'élimination des cellules apoptotiques sont associés au développement de pathologies auto-immunes systémiques. Cependant, nous n'avons pas détecté d'augmentation des auto-anticorps (Ac anti-ADN simple brin et Ac anti-cardiolipine), ni observé de lésions de type lupiques (glomérulonéphrites). Les cellules apoptotiques constituent une excellente source d'allo-antigènes et pourraient représenter un adjuvant favorisant les réponses immunes contre les cellules viables (ici la moelle osseuse) co-injectées. Nous n'avons pas détecté, par cytotoxicité dépendante du complément et cytométrie, d'allo-anticorps dirigés contre les cellules apoptotiques ou contre la moelle osseuse. Au contraire, lors du rejet de greffe, les cellules apoptotiques protègent le receveur d'une immunisation dirigée contre le donneur de moelle osseuse. Cet effet est lié à la production de TGF-β. Nous avons ensuite remarqué que les cellules apoptotiques étaient prises en charge par les macrophages et les cellules dendritiques au niveau de la rate. La déplétion des cellules phagocytaires du greffon n'altère pas l'effet favorable des cellules apoptotiques sur la prise de greffe. Par contre, l'élimination des macrophages du receveur, mais pas des cellules dendritiques, inhibe cet effet bénéfique tout comme la neutralisation du TGF-β. Le TGF-β et les macrophages du receveur sont impliqués dans l'expansion ou l'induction de lymphocytes T régulateurs après administration de cellules apoptotiques. Ces lymphocytes T CD4+CD25+ présentant un phénotype régulateur (CD62L+, Foxp3fort), exercent une activité suppressive in vitro, et pourraient participer à la prise de greffe. Ainsi, l'administration de cellules apoptotiques avec une allogreffe de cellules hématopoïétiques favorise la prise de greffe via le TGF-β, les macrophages du receveur et l'induction de lymphocytes T régulateurs. L'induction de lymphocytes T régulateurs par les cellules apoptotiques pourrait constituer un mécanisme additionnel de protection contre les réponses auto-immunes que nous souhaitons exploiter en transplantation.

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Debeissat, Christelle. "Rôle des basses concentrations en oxygène dans la préservation et la quiescence des cellules souches hématopoïétiques." Bordeaux 2, 2007. http://www.theses.fr/2007BOR21494.

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Abstract:

L'hématopoièse siège dans la moelle osseuse et assure la production continue des cellules sanguines à partir des cellules souches hématopoiétiques (CSH). Les CSH sont caractérisées par leur capacité de greffe hématopoiétique à long terme, et leur maintien à vie dépend de 2 équilibres fonctionnels majeurs : autorenouvellement/différentiation et quiescence/prolifération. La différenciation hématopoiétique suit schématiquement le gradient en oxygène (O2) médullaire, les CSH se trouvant à proximité de l'endoste dans des zones peu oxygénées, et les progéniteurs engagés dans des zones médullaires juxta-vasculaires plus oxygénées (4-5 % d'O2). Ces concentrations d'O2 sont primordiales dans le contrôle et la préservation de l'homéostasie hématopoiétique. Nous avons montré que la culture à 0,9 % d'O2 maintient des progéniteurs primitifs et des CSH capables de reconstitution hématopoiétique, alors que la culture à 20 % d'O2 entraîne leur disparition. Cette disparition est indépendante d'une boucle de VEGF autocrine ou paracrine, et non modifiée par l'addition de VEGF165 exogène. Certains de nos clients inattendus suggèrent que des molécules mimétiques de "l'hypoxie", présentes dans certains milieux, permettent le maintien voire l'expansion des CSH en culture à 20 % d'O2. D'autre part, à très basses concentrations d'oxygène (0,1 % d'O2), les cellules hématopoiétiques primitives entrent en quiescence. Nous avons montré sur une lignée hématopoiétique primitive (FDCP-mix) que cette quiescence est associée à une hypophosphorylation de la protéine du rétinoblastome (pRb) et une augmentation de p27, sans induction d'apoptose
Haematopoiesis occurs in the bone marrow and allows the permanent and controlled production of peripheral blood cells from haematopoietic stem cell (HSC). HSC are characterized by their long term hematopoietic reconstitution capacity, and their maintenance depends on 2 major functional equilibriums : self-renewal vs differentiation, and quiescence vs proliferation. Haematopoietic differentiation follows the oxygen (O2) gradient in the bone marrow : most primitive cells reside in low oxygenated endosteal areas, while differentiated haematopoietic cells are located in more oxygenated (4-5 % O2) juxta-vascular areas. These oxygen tensions are central in control and preservation of hematopoietic homeostasis. We confirm that culture at 0,9 % O2 maintains primitive progenitors and haematopoietic stem cell capable of hematopoietic reconstitution, while culture at 20 % O2 makes them disappear. Hypoxia-related HSC preservation is independent of a paracrine or autocrine VEGF loop, and is not modified by VEGF165 addition in the culture, whatever the O2 concentration. Furthermore, some of our unexpected results suggest that some media contain hypoxia-mimicking molecules that could maintain and even expend HSC in 20 % O2 culture. In addition, very low oxygen tension (0,1 % O2) induces primitive haematopoietic cell quiescence. We showed that in an haematopoietic primitive cell line (FDCP-mix), this quiescence is associated with retinoblastoma (Rb) protein hypophosphorylation and increased p27 expression, without apoptosis induction

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Peulve, Pascal. "Inhibition de la croissance, in vitro, des cellules hématopoïétiques humaines par les surnageants de cultures de la lignée Raji." Rouen, 1987. http://www.theses.fr/1987ROUES022.

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Abstract:

Les surnageants de cultures de la lignée lymphoblastique humaine Raji, contiennent au moins un facteur capable d'inhiber in vitro la croissance des cellules hématopoïétiques de type granulocytaire, monocytaire, érythrocytaire et lymphoïde. Ce facteur est labile a 56°C pendant 30 minutes et précipitable au sulfate d'ammonium a 80% de saturation. Il ne semble pas être cytotoxique pour les cellules et est différent de l'interféron, des pustaglandines, ou d'une molécule de type prostaglandine. Ce facteur semble agir sur les progéniteurs hématopoïétiques les plus immatures. La présence de sérums humains dans les cultures, permet de "supprimer" partiellement l'inhibition de croissance produite par le facteur

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Miri, Nezhad Ayda. "Etude du rôle des régulateurs Post-transcriptionnels Pumilio dans les cellules souches hématopoïétiques humaines." Thesis, Paris 5, 2013. http://www.theses.fr/2013PA05S003.

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Abstract:

Des mises au point de nouvelles stratégies d’expansion ex vivo des cellules souches hématopoïétiques (CSH) sont développées depuis quelques années afin de pallier le problème du faible nombre de ces cellules pour le traitement des hémopathies ou de certaines tumeurs solides. Notre équipe avait établi un modèle d’expansion des CSH via leur exposition aux homéoprotéines HOXB4 ou HOXC4. L’étude comparative des transcriptomes de ces cellules a permis l’identification de cibles précoces des facteurs HOXB4/C4 parmi lesquels les gènes codant les régulateurs post-transcriptionnels Pumilio (de la famille PUF). Les facteurs PUF sont impliqués en particulier dans le maintien des cellules souches germinales dans différents modèles animaux, chez les vertébrés ou les invertébrés. Cependant, le rôle des facteurs PUF humains (hPum1 et hPum2) dans les cellules hématopoïétiques humaines n’avait jamais été étudié.Mon travail de thèse exposé ici a consisté, d’une part, en l’étude du profil d’expression des facteurs hPum1 et hPum2 dans différentes lignées hématopoïétiques et au cours de l’hématopoïèse humaine, démontrant une expression plus importante de ces gènes dans les cellules les plus immatures ainsi que dans les progéniteurs dont la prolifération est activée. D’autre part, l’étude fonctionnelle des facteurs hPum1 et hPum2 a mis en évidence leur implication dans l’expansion et la survie des cellules CD34+. L’inhibition spécifique de hPum1 ou de hPum2 in vitro par des shARN, induit une diminution significative du nombre absolu des cellules ainsi qu’une augmentation de leur apoptose. Cela corrèle avec une accumulation des CSH en phase G0-G1 du cycle cellulaire. Par ailleurs, la répression de l’expression de hPum1 ou de hPum2 diminue la reconstitution de l’hématopoïèse in vivo dans des souris immunodéficientes NOD-SCID-γC-/-. L’analyse des ARNm cibles des facteurs Pum par une étude comparative des transcriptomes des CSH transduites ou non par des vecteurs lentiviraux contenant des shARN hPum1 ou hPum2, a permis l’identification de nombreux gènes impliqués dans le contrôle de la croissance, de la survie ou du cycle cellulaire. L’ensemble de nos résultats montre l’indispensable implication des facteurs Pumilio dans le maintien de l’état souche, la prolifération et la survie des CSH humaines. Nous avons démarré des études fonctionnelles dans les cellules leucémiques myéloïdes primaires afin d’évaluer le rôle éventuel des facteurs Pumilio dans la leucémogenèse. Ultérieurement, la caractérisation de hPum1 et hPum2 comme de nouvelles molécules impliquées dans l’expansion des CSH permettra d’envisager leur étude dans la perspective de nouvelles stratégies thérapeutiques
Ex vivo expansion of hematopoietic stem cells (HSCs) could improve new therapeutic strategies for the treatment of hematopoietic malignancies and solid tumors. Our team had developed an original method to expand human HSCs, consisting in the transfer into these cells of active HOXB4 or HOXC4 homeoproteins. The comparative transcriptomic analysis of CD34+ cells exposed or not to HOXB4 or HOXC4 proteins induced over-expression of Pumilio (PUF) genes. PUF proteins are post-transcriptional regulators of gene expression. They are involved in different biological functions among which the maintenance of stem cells. However, the function of human PUF factors (hPum1 and hPum2) in hematopoietic stem cells has never been investigated. The work that I developed during my thesis first consisted in analyzing the expression of PUF factors in different hematopoietic cell lines and during human hematopoiesis. The results highlighted a high expression of the hPum1 en hPum2 genes in the most immature cells and in the proliferating active progenitors. The study of human PUF factors by inducing their inhibition using specific shRNAs revealed their involvement in proliferation and survival of CD34+ cells. In vitro, inhibition of hPum1 or hPum2 decreases the expansion of human HSCs and increases cell apoptosis. The hPum1 or hPum2 repression also increases the number of HSCs in G0-G1 phase of the cell cycle. Moreover, the inhibition of hPum1 or hPum2 reduces the capacity of human HSCs to reconstitute in vivo hematopoiesis of immunodeficient NOD-SCID-γC-/- mice. The identification of PUF target mRNAs by a comparative transcriptomic analysis of human HSCs infected or not with lentiviral vectors containing hPum1/2 shRNAs, revealed a large number of genes involved in the regulation of cell growth, survival or cell cycle. On the whole, our results demonstrate the involvement of Pumilio factors in stemness maintenance, expansion and survival of human HSCs. Functional studies in primary myeloid leukemic cells are in progress to assess the potential role of the Pum factors in the leukemogenic process. Later on, identification of Pumilio factors as new regulators of HSCs expansion will allow consider them as new tools for therapeutic perspectives

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Lévêque, Catherine. "Etude de l'expression des récepteurs des cytokines par les cellules hématopoïétiques : aspects cellulaires et moléculaires." Rouen, 1998. http://www.theses.fr/1998ROUES047.

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Abstract:

La différenciation et la prolifération des cellules souches hématopoïétiques sont modulées par différents facteurs de croissance. Ces facteurs agissent par l'intermédiaire de récepteurs membranaires pour transmettre un signal intracellulaire. L'expression d'un récepteur rend la cellule qui l'exprime sensible au facteur correspondant. Pendant la maturation cellulaire, l'acquisition de l'expression de certains récepteurs est le reflet de ce phénomène. Mais, est-ce la différenciation cellulaire qui engendre l'expression des récepteurs des cytokines et/ou est-ce l'expression des récepteurs des cytokines qui entraîne la différenciation cellulaire? Les cellules des lignées TF-1 et U-937 ont permis la mise au point des techniques de biologie cellulaire (cytométrie en flux, immunocytochimie) et moléculaire (RT-PCR) pour la détection des récepteurs de l'IL-3 et du G-CSF. Une première étude sur les monocytes du sang périphérique a mis en évidence la modulation de l'expression du récepteur de l'IL-3 sous l'effet de différentes cytokines. L'IL-4 et l'IL-13 augmentent l'expression de ce récepteur sur les monocytes. Pour l'IL-4, cette expression est dépendante du temps d'incubation et de la concentration en cytokine. L'IL-10 et le TGF-β diminuent cette expression. En revanche, l'OSM et le LIF n'ont pas d'effet. L'expression de ce récepteur peut être régulée positivement ou négativement sous l'effet de différentes cytokines, rendant les cellules plus ou moins sensibles à l'IL-3. Une seconde étude sur les cellules souches hématopoïétiques CD34 + du sang de cordons ombilicaux n'a pas montré de variations significatives dans l'expression du récepteur de l'IL-3 en présence ou absence d'IL-4 avec la technique de cytométrie en flux. L'IL-4 sur les cellules souches hématopoiétiques ne fait pas apparaître de récepteur de l'IL-3 à la surface cellulaire. Pourtant, elle augmente le nombre absolu de cellules CD34 +, comme l'IL-6 et le SDF-1.

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Revol, Valérie. "Obtention et caractérisation d'une lignée de progéniteurs hématopoïétiques à partir de souris transgéniques pour le récepteur au CSF-1 humain." Lyon 1, 1997. http://www.theses.fr/1997LYO10273.

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Abstract:

Des travaux menes au laboratoire ont montre que des cellules hematopoietiques murines multipotentes de la lignee fdcp-mix exprimant le recepteur au csf-1 humain (csf-1r) de maniere ectopique, ne proliferent que si ce dernier est exprime sous sa forme membranaire a la surface de cellules stromales. Selon un procede similaire, une strategie visant a isoler des lignees de cellules hematopoietiques non transformees a partir de la moelle osseuse de souris a ete elaboree. Nous avons choisi de realiser des souris transgeniques pour le gene c-fms humain, qui code pour le csf-1r, afin de disposer, par simple prelevement de moelle osseuse, d'une source permanente de cellules hematopoietiques exprimant le csf-1r humain. Deux approches ont ete utilisees : l'infection retrovirale de cellules es et la microinjection de l'adnc c-fms dans des ovocytes fecondes. La seconde approche nous a permis d'etablir une lignee de souris transgeniques c-fms humain. Il nous a alors ete possible, apres ensemencement de cellules medullaires de souris transgeniques c-fms humain sur des cellules stromales ms-5 exprimant la forme membranaire du csf-1 humain (cellules 2m-1), d'isoler une lignee hematopoietique, denommee 47. 10. Cette lignee 47. 10 est heterogene et composee de cellules myeloides exprimant divers marqueurs immunologiques de differenciation myelomonocytaire (cellules lin+). Des cellules blastiques lin - peuvent etre enrichies par tri cellulaire et sont capables de regenerer la population initiale une semaine apres reensemencement sur cellules 2m-1. Des progeniteurs a tres fort potentiel de proliferation, ont egalement ete detectes et leur maintien depend du systeme csf-1r/csf-1 membranaire. La lignee 47. 10 apparait donc composee de progeniteurs immatures capables de differenciation myelomonocytaire spontanee et dont l'autorenouvellement est dependant de la presentation du csf-1 humain par les cellules stromales 2m-1.

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Marmier-Savet, Caroline. "Etude de l'impact de la mobilisation des cellules souches périphériques (CSP) mobilisées par le facteur de croissance des granulocytes (G-CSF) sur les donneurs sains et les receveurs après allogreffe de CSP à conditionnement non myélo-ablatif." Besançon, 2009. http://www.theses.fr/2009BESA0025.

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Abstract:

La greffe de Cellules Souches Hématopoïétiques (CSH) représente une alternative thérapeutique majeure dans le traitement de certaines hémopathies. Les CSH peuvent être obtenues par mobilisation des cellules souches périphériques (CSP) sanguines par le facteur de croissance des granuleux : le G-CSF. Les effets immunologiques de la mobilisation par G-CSF à court terme chez le donneur sont connus, en revanche, ses effets à long terme le sont moins. Nous avons réalisé une étude sur 24 donneurs afin d'observer les altérations induites par cette mobilisation. Des échantillons sanguins sont prélevés avant, au moment et 1, 3, 6 et 12 mois après la mobilisation. Le nombre de certaines cellules sanguines et de leur capacité à produire des cytokines ou des immunoglobines sont perturbés par la mobilisation mais retrouve des valeurs normales 3 à 6 mois après. En revanche, la mobilisation par G-CSF est associée avec une aneuploidie des cellules CD34- persistante au delà de 6 mois post-mobilisation. Le risque à long terme de l'administration de G-CSF devra être plus amplement étudié. La transplantation de CSP après conditionnement d'intensité réduite entraine moins de toxicité immédiate. Nous avons étudié plusieurs paramètres post-greffe de 20 receveurs. La prise de greffe était rapide, le nombre de cellules CD8 est revenu à une valeur normale 4 mois après greffe alors que la reconstitution des cellules CD4 est beaucoup plus lente. Plusieurs résultats (nombre de TREC, nombre de cellules mémoires. . . ) montrent que ce type de greffe favorise une reconstitution par expansion périphérique des cellules T qui avec d'autres cellules peuvent limiter la survenue d'infectons post-transplantation
The hematopoietic stem cells represent a major therapeutic alternative in the treatment of some disease. The hematopoietic stem cell can be obtained by mobilization of the peripheral stem cells blood (CSP) by the growth factor of the granulocyte : the G-CSF. The short-term immunological effects of the mobilization by G-CSF at the donor are known, on the other hand, the long-term effects are it less. We realized a study on 24 donors to observe the alteration inferred by this mobilization. Blood samples are taken, before, at the moment and 1, 3, 6 and 12 months after the mobilization. The number of certain blood cells and their capacity to produce cytokines or immunoglobulins are perturbed by the mobilization but find normal values 3 in 6 months later. On the other hand, the mobilization by G-CSF is associated with a persistent aneuploidy of CD34- cells beyond 6 months post-mobilization. The long-term risk of the administration of G-CSF must be more amply studied. The peripheral stem cells transplantation after reduced-intensy conditioning regimen lead to less immediate toxicity. We studied several parameters post-graft of 20 recipients. The engrafment was fast, the counts of CD8 cells came back to a normal value 4 months after graft while the reconstruction of CD4 cells is much slower. Several results (number of TREC, number of memory's cells. . . ) show that this type of graft facilitates a reconstruction by peripheral expansion of T cells which the other cells can limit the incidence of severe infection post-graft

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Brunet, de la Grange Philippe. "Régulation de l'hématopoïèse par les basses concentrations d'oxygène : rôles de l'antigène CD34 et du facteur de croissance VEGF165." Bordeaux 2, 2004. http://www.theses.fr/2004BOR21093.

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Abstract:

L'hématopoïèse, processus de production des cellules sanguines à partir des cellules souches, est notamment régulée par les concentrations d'O2 médullaires comprises entre 0 à 5 % (hypoxie). Nous avons établi des liens entre des facteurs intrinsèques à la cellule impliqués dans le processus de différenciation (antigène CD34) et leur sensibilité à l'hypoxie, et étudié les effets sur l'hématopoïèse de facteurs inductibles par l'hypoxie (Vascular Endothelial Growth Factor, VEGF). La culture de cellules hématopoiétiques CD34+ à 1 % d'O2 augmente ou stabilise l'expression du gène cd34 qui diminue à 20 % d'O2. Le maintien prolongé de cette expression associé à une expression membranaire durable de la protéine sont corrélés avec le statut immature des cellules. D'autre part, le VEGF165 permet la survie de cellules souches murines en culture liquide à 1 % d'O2. Ainsi l'hypoxie freine la différenciation des cellules souches par l'expression du gène cd34 et favorise leur survie par le VEGF165
Hematopoiesis, the process of mature blood production from stem cells, is in part regulated by bone marrow oxygen concentrations, which vary from 0 to 5 % (hypoxia). We studied in this work the relationships between cell intrinsic factors involved in the maturation process (CD34 antigen) and their sensitivity to hypoxia, and the effects of molecules inducible by hypoxia (Vascular Endothelial Growth Factor, VEGF) on hematopoiesis. We showed that cultures of CD34+ cells at 1 % O2 induce or stabilize the cd34 gene expression that decreases at 20 % O2. The prolonged maintenance of this expression associated with the long-lasting membrane expression of the protein were correlated with the primitiveness of cells. We also showed that VEGF165 led to the survival of murine stem cells cultured at 1 % O2. This work suggests that hypoxia slows down the differentiation of stem cells by inducing cd34 gene expression, and favours their survival through VEGF165

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Zemani, Faouzia. "Effets du fucoïdane, polysaccharide sulfaté extrait d'algues brunes, sur les propriétés proangiogènes des cellules progénitrices endothéliales : mécanisme d'action." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077052.

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Abstract:

L'injection de cellules souches hématopoïétiques ou de cellules progénitrices endothéliales (CPE) expandues ex vivo, a montré une augmentation de la néovascularisation au niveau des tissus ischémies chez les patients adultes. Leur identité ainsi que leur origine sont encore controversées. Cependant la transplantation autologue des CPE a ses limites en raison notamment d'un approvisionnement limité de ces progéniteurs. Plusieurs études ont cherché à mettre au point des procédés d'expansion ex vivo dans le but de développer un produit autologue de thérapie cellulaire. Ce travail a montré qu'un traitement des CPE avec un fucoïdane de faible masse molaire, P240red, extrait de l'algue brune Ascophyllum nodosum, augmente leur propriétés provasculogènes in vitro, ce polyfucose interagit directement avec la membrane cellulaire, et se substituerait ainsi aux giycosaminoglycannes dans ses interactions avec les facteurs de croissances, les stabilisant et les présentant de façon optimale à leurs récepteurs en agissant comme un co-récepteur. Par ailleurs l'injection du fucoïdane en intrapéritonéale à des souris augmente la mobilisation des progéniteurs dans le sang périphérique ainsi que le taux plasmatique de SDF-1. Nous avons également montré qu'une courte exposition des CPE avec cette chimiokine améliore leur capacité à migrer et à se différencier, et accélère leur adhérence ferme à l'endothélium en conditions dynamiques. En conclusion un traitement des CPE par le fucoïdane ou le SDF-1 durant l'expansion pourrait offrir une alternative intéressante d'activation ex vivo. Des expériences sont actuellement envisagées pour confirmer nos hypothèses et tester ces cellules conditionnées
Injection of haematopoietic stem cells or endothelial progenitor cells (EPC) expanded ex vivo has been shown to augment neovascularization in ischemic tissue in adult patients. Their identity and origin are still controversial. However, transplantation of autologous EPC has several limitations, including the limited supply of progenitors. Several studies have therefore attempted to expand these cells ex vivo in order to develop autologous product for cell therapy. This work demonstrates that treatment of EPC with low-molecular-weight fucoidan extracted from the brown algae Ascophyllum nodosum, P240red, enhances their provasculogenic properties in vitro. This polyfucose binds the cell membrane and seems to interact with growth factors similarly to glycosaminoglycans, thus controlling their stability and interaction with receptors. Thus, fucoidan could act as a co-receptor. In addition, intraperitoneal injection of fucoidan increases progenitors mobilization in peripheral blood and plasmatic SDF-1 level. We have also demonstrated that short time exposure of EPC to this chemokine improves their capability to migrate and differentiate as well as to accelerate under dynamic condition adhesion to the endothelium. In conclusion, fucoidan or SDF-1 treatment during EPC expansion might offer an interesting alternative of activation ex vivo. Investigations are presently considered to confirm our hypothesis and to test conditioned cells

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Briard, Diane. "Le fibroblaste humain : cellule effectrice dans l'hématopoi͏̈èse et dans la métaplasie myéloi͏̈de primitive avec myélofibrose." Paris 11, 2003. http://www.theses.fr/2003PA11T010.

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Abstract:

Ce travail a été réalisé dans le but de mettre en évidence le rôle prépondérant des fibroblastes dans l'hématopoïèse normale et pathologique. Bien que le rôle du microenvironnement dans l'hématopoïèse soit connu depuis longtemps, la première partie de cette étude montre que les fibroblastes sont, à eux seuls, capables d'agir directement, par contact ou par la sécrétion de facteurs de croissance et de cytokines, sur la prolifération et la différenciation des progéniteurs hématopoïétiques CD34+. Cette capacité d'action dans l'hématopoïèse est spécifique et dépendante de l'origine tissulaire des fibroblastes. En effet, les fibroblastes de la moelle osseuse régissent une différenciation myéloïde à partir des progéniteurs médullaires, mais ces derniers ne se différencient pas au contact des fibroblastes de la rate de patients atteints de Métaplasie Myéloide primitive avec Myélojibrose (MMM). A l'inverse, les fibroblastes spléniques de malades induisent une myéloprolifération des progéniteurs circulants, non observable lors de contacts avec des fibroblastes médullaires. Nous avons également mis en évidence, pour la première fois, le rôle des fibroblastes de la rate dans la différenciation NK et DC des progéniteurs circulants. En effet, par l'intermédiaire de l'IL-15 membranaire, qui se révèle être la forme bioactive de la cytokine, les fibroblastes régissent la différenciation des progéniteurs NK en cellules matures douées d'activité cytotoxique spontanée. En parallèle, les fibroblastes spléniques induisent également la différenciation DC de ces mêmes progéniteurs mais cette fois via l'action du M-CSF qu'ils sécrètent. Nous avons, par la suite, montré que ce sont ces cellules DC immatures qui lors d'interaction airecte avec les cellules NK stimulent l'activité lytique de ces dernières, via la sécrétion d'IL-12. Par extrapolation, nous pouvons envisager que la rate humaine soit un organe "sentinelle" de l'immunité naturelle. Enfin, nous avons étudié la différenciation lymphoïde au cours de la MMM et le rôle joué par les fibroblastes spléniques. Nous avons d'abord montré l'incapacité des progéniteurs circulants des malades, à se différencier dans la voie NK, que ce soit sous l'action d'une IL-15 exogène ou au contact d'une IL-15 membranaire. En fait, nous avons constaté que les progéniteurs ne répondait pas à l'action différenciatrice de l'IL-15 en raison de la dérégulation d'une des voies de transduction de l'IL-15, le complexe yc/Jak3 et la phosphorylation de STAT3, qui est spontanément activé indépendamment de l'IL-15. Nous avons aussi observé dans notre modèle de co-culture, une accumulation de cellules immatures des différentes lignées lymphoïdes, ce qui suggère, in-vitro, une déficience en cellules lymphoïdes chez les malades. Puis nous avons montré que les fibroblastes de la rate des malades étaient différents, car seulement capables de produire à partir des progéniteurs circulants normaux, des cellules NK en nombre réduit. Ces cellules NK n'ont pas d'activité cytotoxique spontanée, cette déficience semble liée au nombre réduit de DC simultanément produites qui rendent sans doute la coopération NK/DC beaucoup moins fonctionnelle. Il semble donc que les progéniteurs hématopoïétiques ne sont pas les seuls à être touchés au cours de cette hémopathie, mais que les cellules du microenvironnement le soient également, ce dont il faudrait tenir compte lors de futurs traitements.

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Xiong, Yu. "Impact du G-CSF sur le phénotype et les fonctions des cellules NK dans le cadre d’une immunothérapie post-allogreffe de cellules souches hématopoïétiques." Thesis, Université de Lorraine, 2016. http://www.theses.fr/2016LORR0106/document.

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Abstract:

Les cellules Natural Killer (NK) sont capables de lyser les cellules tumorales sans la nécessité de reconnaitre un antigène tumoral spécifique. Cette propriété leur confère un avantage par rapport aux lymphocytes T et les rend intéressantes à utiliser en tant que cellules effectrices pour l’immunothérapie adoptive. A ce jour, le potentiel thérapeutique des cellules NK n’a pas été complétement exploré notamment dans le contexte du traitement de la rechute post-allogreffe de cellules souches hématopoïétiques. Actuellement, les patients en rechute post-greffe sont traités avec des injections de lymphocytes du donneur (DLI) parfois issues de petites fractions du greffon de cellules souches hématopoïétiques congelées. Les cellules souches périphériques étant fréquemment utilisées comme source de cellules souches et parfois utilisées comme DLI, nous avons souhaité évaluer l’impact du G-CSF sur le phénotype et les fonctions des cellules NK présentes dans ces fractions. Dans cet objectif, nous avons comparé différentes sources de cellules NK isolées à partir de sang de donneurs sains, de sang mobilisé de donneurs sains ou de patients et observé l’évolution des différentes sous-populations de cellules NK issues de ces prélèvements au décours d’une expansion en présence d’IL-15. Nos résultats ont montré que l’administration de G-CSF diminuait la proportion de cellules NK CD56brightCD16+ au profit d’une population CD16-, diminuait la prolifération des cellules NK lors de l’expansion en culture, et modifiait les propriétés fonctionnelles des cellules NK
The ability of natural killer (NK) cells to kill tumor cells without the need to recognize a tumor-specific antigen provides advantages over T cells and makes them appealing for a use as effectors for adoptive immunotherapy. However, the full therapeutic potential of NK cell-based immunotherapy has not been fully investigated in the context of leukemic relapse after hematopoietic stem cell transplantation. Today, patients relapsing after hematopoietic stem cell transplantation are often treated with donor lymphocyte infusion (DLI) based on small cell fractions frozen at the time of the stem cell transplantation. Since peripheral blood stem cells are increasingly used as stem cell source and as source of cells for DLI, we aimed to evaluate the impact of G-SCF mobilization on NK cell phenotype and functions. Therefore, we compared the expansion capacity, the phenotype and the function of NK cells from blood for healthy donors, from allogeneic HSCT healthy donors or from autologous HSCT from patients. We also determine the impact of G-CSF on NK cell subset repartition before and after expansion in presence of IL-15. Our results showed that G-CSF administration to patients decreases CD56brightCD16+ NK cell population, proliferation and function. Overcoming this impairment in lymphoid capacity may be important to facilitate post-transplant immunotherapy

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Jeay, Sébastien. "Etude des voies de signalisation impliquées dans les effets anti-apoptotique et prolifératif de l'hormone de croissance." Paris 11, 2000. http://www.theses.fr/2000PA11T039.

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Abstract:

De nombreuses observations ont suggéré un rôle de l'hormone de croissance (GH) dans les fonctions immunitaires en participant à la prolifération des cellules hématopoïétiques. L'étude du cycle cellulaire par cytométrie de flux nous a permis de mettre en évidence les effets anti-apoptotiques et prolifératifs de la GH dans les cellules pro-B Ba/F3 exprimant le récepteur de la GH (GHR). Un mode d'action de type autocrine/paracrine est suggéré par la démonstration que les cellules Ba/F3 expriment de la GH endogène et que l'utilisation d'antagonistes de la GH induit la mort des cellules Ba/F3 exprimant le GHR. L'étude de l'expression des molécules de la famille Bcl-2 par western blot, et de l'activation du facteur de transcription NF-KB par gel shift montre que l'effet anti-apoptotique de la GH est relayé par la voie NF-KB/Bcl-2 dans les cellules Ba/F3. L'addition de GH exogène induit la prolifération des cellules Ba / F3 exprimant le GHR. L'utilisation d'inhibiteurs et de dominants négatifs, combinée avec l'analyse du cycle cellulaire par cytométrie de flux indique qu'une autre voie de signalisation est requise pour l'effet prolifératif de la GH : la voie PI 3-kinase/c-Myc. Les voies de signalisation impliquées dans les effets de la GH sur le cycle cellulaire et l'apoptose sont donc distinctes, même si des liens peuvent exister entre elles. Enfin, l'utilisation d'un anticorps neutralisant, dirigé contre l'IGF-1, nous a permis de suggérer que les effets de la GH, observés dans les cellules Ba/F3, sont directs, et non relayé par une production locale d'IGF-1. De plus, nous montrons que, contrairement à la GH, l'IGF-1 active la voie PI 3-kinase/ AKT et non la voie NF-KB pour protéger les cellules Ba/F3 de l'apoptose. Nos résultats montrent que les signaux anti-apoptotiques et prolifératifs de la GH sont directs et transmis par deux voies de signalisation différentes. Notre étude apporte des conclusions importantes quant au mode d'action éventuel que pourrait avoir la GH sur les cellules lymphocytaires in vivo
Several observations have suggested a role for growth hormone (GH) in the regulation of immune functions, participating in the proliferation of hematopoietic cells. Cell cycle analyses by flow cytometry revealed that GH exerts anti-apoptotic and proliferative effects in pro-B Ba/F3 cells expressing GH receptors (GHR). An autocrine/paracrine mode of GH action is suggested by the demonstration that Ba/F3 cells produce GH, and that addition of GH antagonists promotes apoptosis of Ba/F3 GHR cells. The study of the expression levels of members of Bcl-2 protein family by western blot, and also of the activation of the transcription factor NF-KB by gel shift, suggest that anti-apoptotic effect of GH is dependent upon NF-KB/Bcl-2 signaling pathway. Addition of exogenous GH promotes proliferation of Ba/F3 cells expressing GHRs. The use of inhibitors and dominant negatives, and cell cycle analyses, show that another signaling pathway is responsible for the proliferative effect of GH: the PI 3-kinase/c Myc pathway. Thus, signaling pathways involved in GH effects on cell cycle and apoptosis are distinct, even if links could exist between them. Using a blocking antibody against IGF-1, we suggest that GH effects are directs in Ba/F3 cells. Moreover, we show that IGF-1 activates PI 3-kinase/ AKT pathway but not NF-KB pathway to protect Ba/F3 cells from apoptosis. Our results show that GH is able to exert direct anti-apoptotic and proliferative effects through two different signaling pathways, and present important evidence to propose an eventual mechanism of action of GH on hematopoietic cells in vivo

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Hurot, Vincent. "Intérêt des facteurs de croissance hématopoi͏̈étique chez des patients ayant subi une greffe allogénique de cellules souches hématopoi͏̈étiques." Paris 5, 1999. http://www.theses.fr/1999PA05P048.

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Challier, Cécile. "Mpl : depuis la mise en évidence d'un potentiel transformant jusqu'à son utilisation comme marqueur de cellules souches hématopoïètiques embryonnaires." Paris 7, 2001. http://www.theses.fr/2001PA077175.

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Boiron, Jean-Michel. "Différentiation B et action de cytokines hématopoi͏̈étiques dans le myélome multiple humain." Bordeaux 2, 1995. http://www.theses.fr/1995BOR28369.

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Flippe, Léa. "Etude de la différenciation de cellules souches hématopoïétiques et de cellules T à partir de cellules souches pluripotentes." Thesis, Nantes, 2020. http://archive.bu.univ-nantes.fr/pollux/show.action?id=c61a0ae9-8328-4516-a59a-dd4bf879ebb5.

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Abstract:

La thérapie cellulaire basée sur l’utilisation des lymphocytes T a révolutionné les soins médicaux ces dernières années, cependant il existe encore certaines limites à leur utilisation. Ces limites sont liées à la difficulté de produire un nombre suffisant de cellules, de standardiser le produit et d'éditer le génome des cellules. Les cellules souches pluripotentes humaines (hPSCs) peuvent s'auto-renouveler et se différencier en lymphocytes T pour fournir un produit homogène standardisé d'origine définie en quantité indéfinie. Elles présentent donc un grand potentiel pour pallier aux limitations de la production de lymphocytes T thérapeutiques. Nous décrivons un protocole efficace pour la génération de progéniteurs hématopoïétiques et de lymphocytes T en deux étapes : la génération de progéniteurs hématopoïétiques à partir de corps embryonnaires puis la différenciation dirigée des progéniteurs hématopoïétiques dérivés des hPSCs en progéniteurs de lymphocytes T en présence de la signalisation Notch. Nous avons comparé le transcriptome des progéniteurs hématopoïétiques différenciés à partir de hPSCs avec des cellules souches hématopoïétiques (CSHs) de sang de cordon. Cette comparaison a révélé que la population cellulaire CD34+CD43+ est le plus proche des CSHs de sang de cordon que les autres populations différenciées. De même, nous avons comparé les progéniteurs T différenciées à partir de hPSCs avec des progéniteurs T issus du thymus. Ceci nous a montré que nous avons réussi à différencier les cellules jusqu'à l'étape DN2 du développement des lymphocytes T dans le thymus. De plus, la transduction de FOXP3 pendant la différenciation a entraîné une différenciation significative des cellules Foxp3+CD3+TCRαβ+CD8+ ou Foxp3+CD3+TCRαβ+CD4+. Collectivement, ces résultats sont d'un grand intérêt pour l'étude de l'hématopoïèse et de la lymphopoïèse. En outre, ces travaux constituent une étape vers l'utilisation des lymphocytes T dérivées de hPSCs en thérapie cellulaire
Cell therapy using T cells has revolutionized medical care in the last years but limitations are associated with the difficulty of genome editing, the production of sufficient number of cells and product standardization. Human pluripotent stem cells (hPSCs) can self-renew and differentiate into T cells to provide a standardized homogenous product of defined origin in indefinite quantity, therefore they are of great potential to alleviate limitations of therapeutic T cell production. We describe an efficient protocol for the generation of hematopoietic and T cell progenitors in two steps: generation of hematopoietic progenitor cells from embryoid bodies then directed differentiation of hPSC-derived hematopoietic progenitors into T-cell progenitors in the presence of Notch signaling. We compared the transcriptome of the hematopoietic progenitors differentiated from hPSCs with cord blood HSCs. This revealed that the CD34+CD43+ subset of cells is the closest to cord blood HSCs. Similarly, we compared the T cells differentiated from hPSCs with primary thymus tissue. This revealed that we managed to differentiate cells up to the DN2 step of T cells development in thymus. Moreover, FOXP3 transduction during the differentiation resulted in a significant differentiation of Foxp3+CD3+TCRαβ+CD8+ or Foxp3+CD3+TCRαβ+CD4+ cells. Collectively, these results are of great interest for the study of hematopoiesis and lymphopoiesis. In addition, this work is a step towards the use of human T cells derived from hiPSCs in cell therapy

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Habi, Ouassila. "Anémie de Fanconi : thérapie génique par les cellules souches hématopoïétiques." Thesis, Université Laval, 2008. http://www.theses.ulaval.ca/2008/25350/25350.pdf.

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Hamdan, Ghassan. "Résistance des cellules souches hématopoïétiques dans la leucémie myéloïde chronique." Thesis, Lyon 1, 2010. http://www.theses.fr/2010LYO10159.

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Abstract:

L’existance de cellules souches leucémiques (CSL) dans la Leucémie Myéloïde Chronique (LMC) prédit que que seule la destruction des CSL conduirait à une guérison. Une proportion importante de patients atteints de LMC développe une résistance aux drogues, environ ~ 30% des cas, Les mécanismes de résistance aux inhibiteurs de tyrosine kinase (TKI) dans la leucémie myéloïde chronique (LMC) restent souvent obscures. Les cellules souches leucémiques de la LMC pourraient rester viables et en repos, malgré la présence de facteurs de croissance ou de médicaments qui semblent les protéger de l'apoptose. Nous avons montré dans la première parti de cette étude que certains transporteurs telles ABCG2, hOCT-1 pourraient jouer un rôle avec le micro environnement dans la résistance des lignées LMC en adhésion au stoma médullaire. De plus, dans deuxième parti nous avons montré que le gène TWIST-1 (est un acteur clé de l'embryogenèse) est déréglementé dans les cellules de LMC innée des résistants à l'imatinib, et que la sur-expression de l’oncogène TWIST-1 pourrait représenter un nouveau facteur clé de pronostiques potentiellement utiles pour améliorer la guérison de LMC aux TKI. De plus, nous avons pu également montrer que le gène TP73 est impliqué dans la résistance des CSL de LMC. Ce gène pourrait être un facteur prédictif pour identifier une résistance potentielle des patients de LMC au moment du diagnostic. Nous avons montré également que ce gène est régulé par le micro-environnement. Nous avons montrés une sur-expression des isoformes tronquées dans les lignées LMC avec l’adhésion au stroma. Les résultats suggèrent que les molécules intrinsèques comme TWIST-1, les transporteurs et les isoformes de p73 sont dérégulées dans les CSL par des mécanismes extrinsèques qui interviennent avec le micro environnement leucémique par le mécanisme d’adhésion dans le phénomène de résistance aux traitements. Ce mécanisme spécial de résistance due à la conservation de ces CSL dans l’état immature en adhésion avec son micro environnement
The existence of Leukemia stem cells (CSL) in chronic myelogenous leukemia (CML) predicts that only the destruction of CSL lead to a cure. A significant proportion of CML patients develop resistance to drugs, ~ 30% cases, mechanisms of resistance to tyrosine kinase inhibitors (TKI) in chronic myeloid leukemia (CML) often remain obscure. Leukemic stem cells of CML could remain viable and quiet, despite the presence of growth factors or drugs that seem to protect them from apoptosis. We have shown in the first part of this study that some carriers such as ABCG2, hOCT could to be play a role with the microenvironment in the resistance among CML adhesion of stoma Bone marrow. Furthermore, in the second part we showed that the gene TWIST-1 (is a key player of the embryogenesis) is deregulated in cells of CML innately resistant to imatinib, and that overexpression of the oncogene TWIST-1 could represent a new prognostic factor key potentially useful for improving the querison CML to TKI. In addition, we also could show that the TP73 gene is involved in the resistance of CSL CML. This gene could be a predictor to identify potential resistance of CML patients at diagnosis. We have also shown that this gene is regulated by the microenvironment. We have shown an overexpression of truncated isoforms in CML cell lines with the accession to the stroma. The results suggest that intrinsic molecules such as TWIST-1 carriers and p73 isoforms are deregulated in CSL by extrinsic mechanisms involved with the leukemia microenvironment by the mechanism for participation in the phenomenon of drug resistance. This mechanism with its microenvironment

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Murr, Rabih. "TRRAP une protéine polyvalente : implication de TRRAP co-facteur des HAT, dans la réparation de l'ADN et dans d'autres processus cellulaires utilisant la chromatine." Lyon 1, 2007. http://www.theses.fr/2007LYO10324.

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Abstract:

La protéine TRRAP est une sous-unité de la plupart des complexes histones acétyltransférases (HATs). Le rôle principal de l’acétylation des histones est la régulation de la transcription, cependant des études récentes proposent son implication dans d’autres processus cellulaires utilisant l’ADN comme substrat. Le principal but de notre étude était d’identifier le rôle de TRRAP dans la réparation de l’ADN. Nous avons démontré que TRRAP est impliquée dans les deux types majeurs de réparation des cassures double brin, la recombinaison homologue et la recombinaison non homologue des extrémités. Le rôle de TRRAP dans la réparation peut être soit dépendante des HATs et permettant la relaxation de la chromatine afin de faciliter l’accès des protéines de réparation, soit indépendante des HATs, en tant que membre du complexe MRN. En deuxième partie de la thèse, nous avons identifié deux nouvelles fonctions de TRRAP: la première étant de contrôler la cascade de signalisation Wnt, à travers l’ubiquitination de β-Catenin. La deuxième se résume par la régulation de l’autorenouvellement des cellules souches hématopoïétiques. Ensemble, ces résultats soulignent le rôle multifonctionnel de TRRAP dans la régulation et la coordination de plusieurs processus cellulaires
TRRAP protein is a common component of several histone acetyltransferase (HAT) complexes. TRRAP and histone acetylation have been mainly studied in the context of gene transcription, however they have been recently implicated in other chromatin based processes. The main goal of our study was to investigate the role of TRRAP and histone acetylation in DNA repair. We demonstrated that TRRAP is implicated in two major types of double strand breaks repair, homologous recombination and non homologous end joining. The role of TRRAP in repair is either HAT-dependent leading to chromatin relaxation thus allowing the access of DNA repair proteins to the sites of breaks, or HAT-independent as a member of the MRN complex. In the second part of the thesis, we have identified two novel functions of TRRAP: First, we demonstrated that TRRAP is implicated in the Wnt signalling pathway, through ubiquitination of β-catenin on the chromatin. Second, TRRAP was shown to regulate the selfrenewal of hematopoietic stem cells through its transcription cofactor activity. Together, our results highlight the mutifunctional role of TRRAP and histone acetylation in the regulation and coordination of chromatin based processes

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Tordjman, Rafaèle. "Interactions entre processus angiogéniques et hématopoïèse." Paris 7, 2000. http://www.theses.fr/2000PA077265.

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Le stroma médullaire participe à la régulation du devenir des cellules souches hématopoïétiques (CSH): la survie, l'autorenouvellement et l'engagement. Cette régulation est relayée par des protéines d'interaction cellulaire. Afin de caractériser ces protéines, nous avons développé une technique originale de piégeage de gènes qui codent pour des protéines transmembranaires ou sécrétées. Elle a été appliquée à la lignée stromale MS-5, capable de mimer les fonctions du stroma médullaire. Cette approche a permis d'identifier des gènes candidats: thrombospondine-l, entactine, neuropiline-l (Np-l). Ce travail a été particulièrement axé sur la Np-let ses ligands. La Np-1 est un récepteur qui participe au guidage axonal au cours de l'embryogenèse. Nous avons montré que la Np-l est exprimée à la surface des cellules du stroma médullaire et qu'elle est capable de lier deux ligands, la sémaphorine III et le VEGF (Vascular Endothelial Growth Factor). L'addition de VEGF sur les cellules stromales qui expriment la Np-l induit la synthèse de thrombopoïétine et de Flt3-Ligand, cytokines impliquées dans les étapes précoces de l'hématopoïèse. La Np-l pourrait ainsi relayer des actions entre cellules stromales et CSH. En recherchant la présence de ligands de la Np-1 dans les cellules hématopoïétiques, nous avons montré in vivo que les érythroblastes humains sont les seules cellules qui expriment à la fois le VEGF et un autre facteur angiogénique, le P1GF (Placenta Growth Factor). La sécrétion de ces deux protéines augmente au cours de la différenciation érythrocytaire. Les cellules endothéliales et les macrophages sont des cibles potentielles du VEGF et du PlGF érythrocytaires puisqu'ils expriment des récepteurs pour ces facteurs et sont au contact des érythroblastes dans la moelle. Le surnageant des érythroblastes est en effet capable de faire migrer les monocytes (précurseurs des macrophages) et les cellules endothéliales et d'induire une perméabilité vasculaire. Ces effets sont relayés par le VEGF et le PIGF. Ces deux facteurs sécrétés par les érythroblastes pourraient donc jouer un rôle: (i) dans la formation de l'îlot érythroblastique (unité de maturation des érythroblastes dans la moelle) par migration du macrophage vers les érythroblastes, (ii) dans les interactions entre cellules endothéliales et érythroblastes impliquées en particulier dans le passage des cellules érythroides vers la circulation. Le concept d'interaction entre processus hématopoïétiques et angiogénèse ouvre un champ de réflexion à la fois dans chacun de ces deux domaines mais également dans celui des hémopathies malignes.

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Pietrzyk-Nivau, Audrey. "Génération de plaquettes in vitro à partir de cellules souches hématopoïétiques." Thesis, Paris 5, 2014. http://www.theses.fr/2014PA05P626/document.

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Abstract:

La mégacaryopoïèse représente le processus de différenciation des cellules souches hématopoïétiques (CSH) en mégacaryocytes (MK). Ce processus précède la thrombopoïèse qui aboutira à la formation des plaquettes sanguines. Ces processus complexes ont lieu 1) au sein de la structure tridimensionnelle (3D) de la moelle osseuse, 2) dans les vaisseaux sinusoïdes de la moelle et 3) dans la circulation sanguine. Le but général de ce travail a été de comprendre le mécanisme de chaque étape. Le premier objectif a été d’étudier les effets d’une structure poreuse 3D mimant celle de la moelle osseuse, sur la différenciation mégacaryocytaire et la production plaquettaire in vitro. Cette étude a permis de démontrer que la synergie entre l’organisation spatiale et les signaux du microenvironnement améliore la production en MK et en plaquettes. Par la suite, nous avons souhaité caractériser in vitro et in vivo les plaquettes produites en conditions de flux. Nous avons notamment mis en évidence la capacité des plaquettes produites in vitro dans un système de microfluidique, à s’incorporer et à participer à la formation d’un thrombus in vitro et in vivo contrairement aux plaquettes obtenues en statique. Ces travaux prouvent donc l’intérêt d’une part, de mimer le microenvironnement de la moelle osseuse et d’autre part, de reproduire les forces de cisaillement du sang afin d’améliorer et d’augmenter la production de plaquettes in vitro pour de futures applications en thérapeutique
Megakaryopoiesis is a process allowing hematopoietic stem cell (HSC) to proliferate and differentiate into megakaryocytes (MK). It is followed by thrombopoiesis allowing blood platelet production. These processes occur 1) in the bone marrow three-dimensional (3D) structure, 2) in the bone marrow sinusoid vessels and 3) in the blood flow. Our general aim was to decipher the mechanism associated to each process. The first objective was to study the effects of porous 3D structure on MK differentiation and platelet production. This study demonstrated that the synergy between spatial organization and biological cues improved MK and platelet production. We also characterized platelets produced from mature MK in flow conditions, with respect to their in vitro and in vivo properties. We highlighted the capacity of flow-derived platelets to incorporate in a thrombus in vitro and in vivo, compared to static-derived platelets. These works represent some new developments for mimicking the bone marrow structure and to reproduce blood shear forces in order to improve and increase in vitro platelet production for therapeutic use

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Trouche, Didier. "Régulation transcriptionnelle du gène c-fos et différenciation cellulaire." Châtenay-Malabry, Ecole centrale de Paris, 1993. http://www.theses.fr/1993ECAP0306.

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Le gène c-Fos est le prototype des gènes formant la réponse nucléaire précoce de la cellule, lors de l'entrée en cycle prolifératif. La protéine c-Fos possède des propriétés transformantes, et son expression est contrôlée de manière extrêmement stricte au cours du cycle cellulaire. Les études sur les mécanismes responsables de ce contrôle ont été principalement menées dans des systèmes cellulaires modèles, en particulier dans les fibroblastes 3T3. Elles mettent en évidence le rôle primordial joué par le SRE (Serum Response Element) dans le contrôle de la transcription. Nos résultats permettent d'établir que, dans des modèles cellulaires issus du système hématopoïétique, la transcription du gène Fos est régulée d'une manière tout à fait similaire : le processus de la différenciation, non terminale, n'affecte pas directement les mécanismes régissant la transcription du gène c-Fos. La différenciation terminale s'accompagne souvent d'un arrêt de la prolifération cellulaire, et simultanément, on observe une diminution de l'activité du promoteur c-Fos. L'étude d'un système bien connu de différenciation terminale, la différenciation myoblastique, nous a permis de montrer que la protéine MyoD, élément-clé du processus, est capable de réprimer la transcription du gène c-Fos.

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Çelebi, Betül. "Étude de la différenciation des cellules souches hématopoiétiques dans différents environnements." Doctoral thesis, Université Laval, 2012. http://hdl.handle.net/20.500.11794/23475.

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Abstract:

La transplantation de cellules souches hématopoïétiques de sang de cordon ombilical ne s'est pas révélée être favorable pour la reprise des neutrophiles et des plaquettes. L'expansion des cellules hématopoïétiques (CD34+) et leur différenciation en mégacaryocytes (MKs) ont été optimisées dans notre laboratoire. Par contre, l'expansion des MKs avec des cocktails de cytokines atteint rapidement un plateau. Pour pallier ce problème, de nouvelles stratégies doivent être étudiées pour augmenter l'expansion des cellules CD34+ et MKs ex vivo. L'objectif principal de ce projet était de maximiser l'expansion des progéniteurs myéloïdes et MKs en amplifiant les cellules CD34+ en présence de cellules et/ou protéines normalement présentes dans la moelle osseuse (MO) et pour éventuellement améliorer la reprise hématopoïétique à court terme après transplantation. Plusieurs stratégies ont été proposées pour ce projet de doctorat afin de favoriser les expansions des progéniteurs myéloïdes et MKs en présence des cocktails de cytokine : de développer un environnement endostéale en introduisant la co-culture avec les cellules souches mésenchymateuses (CSMs) de la MO, d'évaluer aussi différentes protéines de la matrice extracellulaire (MEC) afin de stimuler la croissance ex vivo, et de développer un bioréacteur qui recrée partiellement un microenvironnement similaire à la MO in vitro. Les résultats ont démontré que l'expansion des progéniteurs hématopoïétiques (PHs) était généralement meilleure dans les conditions qui ne nécessitent pas de contact avec des CSMs irradiées. Cette étude démontre pour la première fois que les CSMs se différencient en pseudo-ostéoblastes après irradiation (14 Gray) ce qui affecte la sécrétion de la neurotrophine-3 et de 1' insuline growth factor binding protein-2, afin de promouvoir l'expansion des PHs. Deuxièmement, nos résultats avec les protéines de la MEC ont démontré que l'utilisation du mélange protéique 4MECp (collagène type I et IV, laminine, fibronectine) permet aussi augmenter l'expansion des PHs. Finalement, nous avons conçu et validé un système de co-culture avec circulation en trois dimensions qui a favorisé l'expansion des PHs. En conclusion, cette étude de doctorat démontre que recréer partiellement la MO in vitro peut améliorer l'expansion des PH myéloides et mégacaryocytaires à partir de cellules CD34+. Cette étude confirme aussi l'importance qu'ont les CSMs, ostéoblastes et protéines MEC sur la différenciation et la prolifération des PHs.

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Benboubker, Lotfi. "Cellules souches hématopoi͏̈étiques du sang périphérique : caractérisation fonctionnelle et facteurs intervenant dans la capacité de mobilisation." Tours, 2002. http://www.theses.fr/2002TOUR3308.

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Abstract:

Le but de notre travail a été d'évaluer in vitro puis in vivo la qualité fonctionnelle des cellules souches hématopoi͏̈étiques primitives mobilisées par le G-CSF ou le GM-CSF et de rechercher parmi les facteurs pouvant intervenir dans la capacité de mobilisation des cellules souches sanguines (CSS), l'existence d'un éventuel facteur génétique. In vitro, nous avons montré que la proportion des cellules primitives circulantes après mobilisation par chimiothérapie et G-CSF ou GM-CFS sont comparables, atteignant les valeurs de la moelle osseuse. Cependant le G-CFS mobilise des LTC-IC ayant des capacités de prolifération augmentées par rapport au GM-CSF. Les greffons de CSS, pourtant qualitativement différentes in vitro, ne semblent pas posséder in vivo une capacité de reconstitution hématopoi͏̈étique à long terme modifié. Cette reconstitution est néanmoins caractérisée par des altérations profondes et durables de l'hématopoi͏̈èse, tout comme après autogreffe de moelle osseuse. Parmi les facteurs pouvant intervenir dans la capacité de mobilisation des CSH nous avons identifié pour la première fois chez l'homme, l'existence d'un facteur génétique, représenté par le polymorphisme du gène SDF1

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Catelain, Cyril. "Rôle du ligand de Notch Delta-4, sous forme menbranaire et soluble dans les propriétés des cellules souches hématopoïétiques humaines et murines." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077032.

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Abstract:

Notre équipe s'intéresse au rôle du ligand, Delta-like 4, sous sa forme membranaire ou soluble, de la voie de signalisation Notch dans le devenir des cellules souches hématopoïétiques (CSH). Pour aborder cette étude, nous avons eu recours à un modèle in vitro utilisant soit une lignée stromale exprimant le ligand, soit une protéine de fusion mimant son activité. Ce modèle d'étude exploite non seulement des progéniteurs humains de type CD34+ mais également des cellules Lin ̄Sca+ c-Kit+ de moelle murine. Ces progéniteurs humains ou murins poussent en suspension à l'aide des cellules stromales reconstituant au possible un environnement physiologique propice à la culture ex vivo de cellules souches. Le modèle murin permet d'envisager une recherche plus approfondie des facteurs agissant en aval de la voie de signalisation Notch (étude de souris génétiquement invalidées, expression exogène, inhibition d'expression protéique). Dans notre modèle d'étude murin, mbD4 module la prolifération des CSH en maintenant une plus forte proportion des cellules en phase GO du cycle cellulaire. De plus, mbD4 inhibe leur différenciation comme en témoigne la préservation partielle du potentiel CFC et LTC-IC in vitro et celle du potentiel de reconstitution in vivo. L'étude du transcriptome indique une augmentation de l'expression de gènes étant connus comme effecteurs directs de la voie de signalisation de Notch tels que c-Myc et Hes-1 et montrent également que l'exposition au ligand module principalement l'expression de gènes impliqués dans la régulation du cycle cellulaire (cyclines, Rb, pi 30) et de la transcription (Pum2 ; Gata2). Ce travail a fait l'objet de quatre publications scientifiques
Our team is interested in the role of the ligand, Delta-like 4 of the Notch pathway on the hematopoietic stem cell homeostasis. To approach this study, we had used an in vitro model using either a line stromale expressing the ligand, or a protein of fusion. This model of study exploits not only human progenitors of type CD34+ but also of the Lin ̄Sca+ c-Kit+ cells of murine marrow. These human or murine progenitors were in suspension using the cells stromales reconstituting with possible physiological environment favourable with the ex vivo stem cell culture. The murine model makes it possible to consider a thorough research of the factors acting downstream from the Notch pathway (study of genetically invalidated mice, exogenic expression, proteinic inhibition of expression). In our model of study murine, mbD4 module proliferation of the HSC by maintaining a stronger proportion of the cells in GO phase of the cellular cycle. Moreover, mbD4 inhibits their differentiation and maintains the potential CFC and LTC-IC in vitro and the potential of reconstitution in vivo. The study of the transcriptome indicate an increase in the gene expression being known like effector direct of the Notch pathway such as c-Myc and Hes-1 and also show that the exposure to the ligand module mainly the gene expression implied in the regulation of the cellular cycle (cyclines, Rb, p!30) and of the transcription (Pum2; Gata2). This work was the four scientific publication object

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Barroca, Vilma. "Renouvellement des cellules souches : plasticité des progéniteurs germinaux et rôle du gène Fancg dans la fonction des cellules souches hématopoïétiques." Phd thesis, Université d'Orléans, 2009. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00461254.

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Abstract:

La préservation d'un stock de cellules souches fonctionnelles est indispensable pour le maintien de nombreux tissus chez l'adulte. Les cellules souches se multiplient pour s'auto-renouveller et entrent en différenciation donnant naissance à des progéniteurs puis à des cellules matures. Récemment, la possibilité pour les progéniteurs de se reprogrammer en cellules souches et de réacquérir un potentiel de régénération à long terme a été suggérée notamment dans le tissu germinal. Ainsi, l'auto-renouvellement et la reprogrammation des progéniteurs pourraient jouer un rôle dans le maintien du pool de cellules souches. Mon travail de thèse portait sur l'étude de ces deux mécanismes de régénération des cellules souches chez la souris. J'ai tout d'abord étudié la reprogrammation des progéniteurs germinaux au cours de la spermatogenèse. Ce travail montre la capacité des progéniteurs germinaux mâles, les spermatogonies différenciées, à modifier leur programme de différenciation et à générer de nouvelles cellules souches germinales après transplantation testiculaire. Les progéniteurs germinaux pourraient ainsi constituer une réserve de " cellules souches potentielles ". Le tissu germinal possède donc une certaine plasticité. La seconde partie de mon travail porte sur l'implication du gène Fancg de l'anémie de Fanconi, voie de réponse aux dommages à l'ADN, dans l'auto-renouvellement et la fonctionnalité des cellules souches hématopoïétiques au cours de l'hématopoïèse. L'intégrité génétique des cellules souches doit en effet être préservée tout au long de la vie de l'individu. Cette étude montre que l'invalidation du gène Fancg perturbe le processus de migration, la quiescence, et la régulation de l'expression de certains gènes clés des fonctions des cellules souches. Ces altérations participent au déficit fonctionnel des cellules souches hématopoïétiques observées dans le modèle murin Fancg-/-.

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Li, Na. "Expansion des cellules souches hématopoïétiques dans les systèmes de cocultures des cellules endothéliales et des cellules stromales." Nancy 1, 2005. http://www.theses.fr/2005NAN11320.

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Abstract:

L'expansion ex vivo des cellules souches hématopoïétiques (CSH) permet d'élargir les indications de greffe en augmentant le pool de CSH et conduit au développement de conditions de culture adaptées au transfert de gène. Une meilleure définition d'une part des conditions de cultures contribuant à l'expansion des CSH, d'autre part des mécanismes susceptibles d'induire cette prolifération, constitue les conditions nécessaires à l'amélioration de notre compréhension de la régulation de l'hématopoïèse. Dans ce travail, nous avons choisi différentes cellules stromales et endothéliales : cellules souches mésenchymateuse (CSM), human umbilical vascular endothelial cell (HUVEC), et une lignée stromale de souris ostéopétrotique (OP9) pour étudier leur capacité à maintenir et amplifier des cellules CD34+ humaines issues des cellules souches sanguines (CSS). Nous avons montré que les cocultures avec les CSM, les HUVEC et les OP9 permettent une amplification des CSS plus durable et plus importante que les cultures de cytokines. Les CSM diminuent également l'alloréactivité des CSH amplifiées, ce qui favorise la prise du greffon. Nous avons aussi mis en évidence que l'IL-6 secrété par les CSM et les HUVEC contribue partiellement à ces effets positifs pour l'expansion des CSS. D'autre part, les OP9 favorisent l'expansion des CSS grâce à leur déficit de la production de macrophages. Ces modèles de coculture semblent intéressants pour mieux comprendre les mécanismes régulateurs de l'hématopoïèse et également les facteurs inhibiteurs, par exemple dans la physiopathologie des syndromes myélodysplasiques.

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Vandevelde, Amelle. "Rôle de PLZF dans la gestion du stress des cellules souches hématopoïétiques." Thesis, Aix-Marseille, 2017. http://www.theses.fr/2017AIXM0554.

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Abstract:

Les Cellules Souches Hématopoïétiques sont à l’origine de la production de toutes les cellules sanguines et immunitaires, grâce à leur double capacité à s’auto-renouveler et se différencier en progéniteurs puis en cellules matures fonctionnelles. Du fait de leur importance, leur physiologie est contrôlée par de nombreux signaux qui assurent un équilibre entre quiescence, prolifération, auto-renouvellement et différenciation. Mes travaux s’intéressent au rôle du facteur de transcription PLZF dans la régulation des CSH grâce à l’utilisation du modèle murin Zbtb16lu/lu, qui porte une mutation spontanée inactivant PLZF. En cas de stress régénératif, les souris Zbtb16lu/lu présentent des défauts de reconstitution de l’hématopoïèse caractérisés par un biais myéloïde, une forte expansion des LT-HSC et des dérégulations du cycle cellulaire, un phénotype similaire au vieillissement physiologique des CSH. De plus, lors d'expositions répétées au Lipopolysaccharide, un composant des bactéries à Gram négatif, les souris Zbtb16lu/lu montent une réponse pro-inflammatoire excessive qui induit un remodelage du compartiment CSH, ce qui suggère qu’elles ne parviennent pas à mettre en place de tolérance au LPS. Ainsi, nos résultats semblent positionner PLZF comme un régulateur central du destin des CSH
Hematopoietic stem cells (HSCs) are responsible for the production of all blood cells and possess the dual ability to self-renew and differentiate into progenitor and into mature cells. Given their importance, their physiology is tightly controlled by a plethora of signals that balance quiescence, proliferation, self-renewal and differentiation. In the present Phd work, I focused on the role of the transcription factor PLZF in HSC fate using the Zbtb16lu/lu mouse model, harbouring a spontaneous mutation inactivating PLZF. In a context of regenerative stress, Zbtb16lu/lu mice showed a decreased repopulation capacity characterized by a myeloid bias, expansion of LT-HSC and cell cycle dysregulation, features that seem to recapitulate HSC physiological aging. Furthermore, repeated injections of LPS, a component of Gram Negative bacteria, induced a strong pro-inflammatory response in Zbtb16lu/lu mice, that resulted in the reshaping of the HSC compartment and the failure to induce endotoxin tolerance. Taken together, our results suggest that PLZF is a central regulator of HSC fate

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Aspert-Houballah, Aurélie. "Impact psychologique de la greffe de cellules souches hématopoïétiques et traumatisme psychique." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05H134.

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Abstract:

L’allogreffe de cellules souches hématopoïétiques (CSH) représente l’un des traitements de la dernière chance des hémopathies à pronostic létal. Entre l’annonce de la maladie grave et les risques liés à la greffe, le risque de mort devient une menace réelle. Cette recherche tente de cerner les conséquences psychologiques de la greffe de CSH, notamment autour de la question du traumatisme psychique, par une analyse psychodynamique. Pour ce faire, elle utilise une évaluation longitudinale et hétérogène, associant psychométrie, tests projectifs et entretiens cliniques. Elle concerne un échantillon de quatorze jeunes adultes allogreffés entre le mois de mai 2009 et le mois de mai 2010. Neuf d’entre eux ont été évalués une fois avant la greffe puis plus d’un an après la greffe. Les résultats montrent une prédominance de la problématique de perte à traitement mélancolique au sein de cette population. La régression et le masochisme semblent apparaître comme des voies de dégagement efficaces. Le traumatisme psychique favorisé par le contexte de menace vitale, semble plutôt lié à cette problématique de perte qu’à l’annonce de la maladie grave ou la greffe de CSH à proprement parler. Le trauma apparaitrait, au sein d’une hypothèse psychosomatique du patient allogreffé, comme une issue possible à la destruction somatique entrainée par la déliaison pulsionnelle
Hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) has been reserved for hematologic life threatening diseases. Between the announcement of the diagnosis and the transplant’s risks, the threat of death becomes real. This study wants to examine the psychological consequences of this « last chance » treatment focusing on psychological traumatism, by means of a psychodynamic analysis. It uses a longitudinal and mixed evaluation combining psychometric tests, projective tests, and clinical interviews. Fourteen patients have been interviewed between May 2009 and May 2010. Nine have been evaluated twice, once before HSCT, and once at least one year after HSCT. The results show a predominance of a mournful problematic in this population. Regression and masochism seems to be good working-off mechanisms. Trauma due to life threatening context seems more associated with the mournful problematic than the announcement of the diagnosis or the HSCT. Trauma could be seen, in a psychosomatic hypothesis, as a possible working-off mechanism from somatic destruction by the defusion of instincts

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Feugier, Pierre. "Expansion des cellules souches hématopoiétiques issues de sang périphérique : Texte imprimé." Besançon, 2002. http://www.theses.fr/2002BESA3003.

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Cartron, Guillaume. "Etude quantitative et fonctionnelle du compartiment des progéniteurs primitifs après autogreffe de cellules souches hématopoïétiques chez l'homme." Tours, 2003. http://www.theses.fr/2003TOUR3311.

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Abstract:

L'intensification thérapeutique avec support de cellules souches hématopoïétiques (AGCS) constitue une thérapeutique de choix en hématologie. Nous avons explorer le compartiment des progéniteurs primitifs (PP) après AGCS sanguine et montré qu'il existait comme après AGCS médullaires, une altération profonde et durable de la reconstitution à long terme in vivo. In vitro, il existait une réduction constante et durable de la fréquence des LTC-IC et de la population CD34+/CD38_ associée à des anomalies fonctionnelles (réduction des potentiels prolifératifs et de différentiation érythroïde des LTC-IC). De même, il existait un déficit prolifératif des cellules CD34+ en réponse à une association de cytokines d'action précoce et une réduction du niveau d'expression de CD34 et de la capacité de c-Kit à fixer le SCF dans la population CD34+. Après AGCS il existe une altération profonde, constante et durable du compartiment des PP. Il s'agit d'anomalies quantitatives et qualitatives qui pourraient rendre compte d'une altération de la capacité d'auto-renouvellement du compartiment des PP après AGCS et compromettre la reconstitution médullaire à long terme
Intensive therapy with autologous stem cells transplantation (ASCT) is now widely used in hematology. We have assessed primitive progenitor cell compartment after ASCT using peripheral stem cells and shown a deep and durable decrease of clonogenic progenitor counts in vivo. In vitro studies have demonstrated a constant decrease of LTC-IC frequencies and CD34+/CD38_ counts associated with functional abnormalities (defect in proliferative and érythroïd differentiation of LTC-IC). We have shown also a proliferative defect of CD34+ cells in response to early-acting cytokines and a decrease of both CD34 antigen expression and ability of c-Kit to bind to SCF into CD34+ cell population. After ASCT, there are both quantitative and qualtitative defects of primitive progenitor cell compartment which could led to a impaired self-renewal of this compartment and jeopardize long-lasting marrow reconstitution

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Makanga, Dhon Bérenger Roméo. "Contribution à l'étude des fonctions anti-tumorales des cellules Natural Killer (NK) : Implication en greffe de cellules souches hématopoïétiques et dans le contexte des Immunothérapies." Thesis, Nantes, 2020. http://www.theses.fr/2020NANT1031.

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Abstract:

La greffe de Cellules Souches Hématopoïétiques (CSH) haplo-identiques non-T déplétées avec utilisation de Cyclophosphamide Posttransplant (PTCy) pour la prophylaxie de la maladie du greffon contre l’hôte (GvHD) est indiquée pour le traitement des leucémies aigües en l’absence de donneurs HLA identiques. Ces greffes présentent des incompatibilités HLA de classe I entre le donneur et le receveur propices aux alloréactivités des cellules Natural Killer (NK) qui ont une fonction anti-leucémique importante. Cependant, le rôle des cellules NK dans cette modalité de greffe reste à l’heure actuelle peu documenté. Dans ce travail, nous avons montré que les incompatibilités KIR/HLA entre le donneur et le receveur étaient associées à plus de GvHD aigüe et moins de rechute après greffe-PTCy, participant à l’activation et la différentiation plus précoce des cellules NK. Par la suite, nous avons montré que l’association du PTCy avec l’antithymoglobuline (ATG) réduit l’incidence de GvHD aigüe sans augmenter la rechute après greffe-PTCy. Dans le but d’identifier les sous-populations NK avec une forte potentialité anti-leucémique, nous avons défini 9 souspopulations NK sur la base de marqueurs de différentiation des cellules NK et réalisé des études in vitro du potentiel fonctionnel de chacune de ces populations NK contre des cibles leucémiques. Nos résultats montrent que les souspopulations NK NKG2A+ sont les plus efficaces contre les leucémies aigües lymphoïdes (LAL) et représentent les sous-populations NK les plus fréquentes du répertoire de cellules NK. En revanche, les sous-populations NK CD57+ et/ou KIR+, faiblement représentées dans le répertoire de cellules NK, sont les plus efficaces contre les leucémies aigües myéloïdes (LAM). La reconstitution rapide de certaines sous-populations NK, comme celles exprimant le récepteur NKG2A par exemple, semble être associée à la réduction de rechute après greffe-PTCy. Par ailleurs, nous avons développé une autre étude mettant en évidence que le faible nombre de ligands KIR chez des patients atteints de lymphomes Non- Hodgkiniens (LNH) favorise une bonne réponse des cellules NK dépendante du rituximab. En conclusion, nos données peuvent aider, d’une part, à optimiser la sélection de donneurs de CSH et, d’autre part, à renforcer la prédiction des réponses au rituximab chez les patients atteints de LNH en prenant en compte les paramètres immunogénétiques KIR/HLA
T cell-replete haplo-identical Hematopoietic Stem Cell Transplantation (HSCT), using Post-transplant Cyclophosphamide (PTCy) as a treatment for Graft-versus- Host-Disease (GvHD), constitute a potential curative treatment for leukemic patients without identical HLA donor. These graft modalities presentHLA class I incompatibilities between donor and recipient that could sustain Natural Killer (NK) cell alloreactivity with an important anti-leukemic function. However, the role of NK cells in this modality of transplantation remains poorly understood. In this work, we showed that KIR/HLA incompatibilities between donor and recipient were associated with more acute GvHD and less relapse after PTCy-HSCT, participating in the activation and earlier differentiation of NK cells. Subsequently, we showed that the association of PTCy with Anti-thymoglobulin (ATG) could reduce the incidence of acute GvHD without increasing relapse after PTCy-HSCT. In order to identify NK cell subsets with high anti-leukemic potential, we defined 9 NK cell subsets based on NK cell differentiation markers and performed in vitro studies of the functional potential of each of these NK populations against leukemic targets. Our results show that NKG2A+ NK cell subsets are the most effective against acute lymphoid leukemia (ALL) targets and represent the most frequent NK cell subsets in the NK cell repertoire. In contrast, CD57+ and/or KIR+ NK cell subsets, poorly represented in the NK cell repertoire, were the most effective against acute myeloid leukemia (AML) targets. The rapid reconstitution of certain NK cell subsets, such as those expressing NKG2A for example, seems to be associated with the reduction of relapse after PTCy-HSCT. Furthermore, we have investigated the influence of KIR/HLA interactions on Antibody Dependant Cellular Cytotoxicity (ADCC) modulation, showing that the low number of KIR ligands in lymphoma patients favors a good rituximab-dependent NK cell responses. In conclusion, our data may help to optimize the selection of HSC donors and improve the prediction of rituximab responses in lymphoma patients by taking into account immunogenetic KIR/HLA parameters

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Carion, Alexandra. "Rôle du microenvironnement médullaire dans la mobilisation des cellules souches et des progéniteurs hématopoi͏̈étiques." Tours, 2003. http://www.theses.fr/2003TOUR3305.

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Abstract:

En voulant préciser le rôle du microenvironnement médullaire dans la mobilisation des cellules souches hématopoi͏̈étiques (CSH) hors de la niche hématopoi͏̈étique, nous avons découvert que la capacité de mobilisation des CSH était associée à un facteur génétique, le polymorphisme du gène SDF1, suggérant une implication de cette chimiokine dans le processus de mobilisation. Cependant nous n'avons pas constaté in vivo d'inversion du gradient de SDF-1 entre la moelle et le sang mais une corrélation entre les taux circulants de la protéase MMP-9 et la capacité de mobilisation. Nous avons montré in vitro que la sécrétion de SDF-1 par les cellules stromales médullaires était constitutive, contrairement aux cellules endothéliales, et n'était pas augmentée par le G- ou le GM-CSF. Le rôle des cellules stromales dans la mobilisation des CSH est probablement déterminant par leur capacité à produire seules MMP-9, surtout après stimulation par le G-CSF, cette production variant selon le génotype SDF1
The aim of the study was to assess the specific role of human bone marrow (BM) microenvironment in G-CSF-induced hematopoietic stem cell (HSC) mobilization from the hematopoietic niche to peripheral blood (PB). We showed, for the first time in humans, that ability to mobilize HSC is associated with a genetic factor, the SDF1 gene polymorphism, suggesting a significant role for this chemokine in the mobilization process. However, we did not find in vivo any reversion of the positive SDF-1 gradient between BM and PB but found a correlation between PB levels of MMP-9 and HSC mobilizing capacity. Moreover, we showed in vitro that stromal cells constitutively secreted SDF-1, contrary to endothelial cells, this secretion being not increased by G-CSF used for HSC mobilization. The role of stromal cells in HSC mobilization is probably crucial through their particular capacity to produce MMP-9, notably after G-CSF stimulation, this production being influenced by the SDF1 genotype

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Jouni, Dima. "Rôle de l'oxyde nitrique dans la régulation des cellules souches hématopoétiques." Paris 7, 2011. http://www.theses.fr/2011PA077052.

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Abstract:

L'oxyde nitrique (NO) est un messager intra et inter cellulaire. Il est impliqué dans la survie, la prolifération et la migration des cellules. Dans le système hématopoïétique, NO est décrit comme régulateur des cellules souches hématopoïétiques HSC. Cependant les mécanismes impliqués dans sa régulation des CSH restent méconnus. Dans ce travail, nous avons montré que la production de NO par les cellules stromales est importante pour le maintient des progéniteurs humains in vitro. L'inhibition de la production de NO par les cellules stromales diminue l'expression d'AMLl et de CXCR4 (le récepteur de SDF-1) dans les cellules CD34+. Elle diminue également l'adhésion des cellules CD34+ au stroma et le nombre de progéniteurs. L'effet de NO sur le nombre de progéniteurs et sur l'expression d'AMLl serait contact-dépendant. En effet, la séparation des cellules hématopoïétiques du stroma, en utilisant des filtres, estompe l'effet de l'inhibition de la production de NO. Ces résultats suggèrent qu'AMLl est régulé indirectement par NO via la régulation de CXCR4 et de l'adhésion. In vivo, l'inhibition de la production de NO induit la mise en cycle des CSH, normalement quiescentes, via les mêmes mécanismes impliqués in vitro c'est-à-dire la diminution de l'expression de CXCR4 et d'AMLl. La prolifération des CSH est associée à une diminution de l'expression des cyclin dépendante- kinase p57, p21 et p!9. En accord avec la diminution de l'expression de CXCR4, l'inhibition de la production de NO induit la mobilisation des progéniteurs vers le sang et la rate. L'ensemble de ces résultats montre un rôle important de NO dans la régulation des CSH et des progéniteurs humains et murins
Nitric oxide (NO) is a small gaseous molecule produced by most cells. Since the 1980s, NO has emerged as an important messenger within and between cells. NO is involved in the survival, proliferation and cell migration. In the hematopoietic System, NO is described as a regulator of hematopoietic stem cells HSC. However, the mechanisms involved in its regulation of HSC remain unknown. In this work, we showed that NO production by stromal cells is important for the maintenance of human progenitors in vitro. Inhibition of NO production by stromal cells decreases the expression of AML1 and CXCR4 (the receptor of SDF-1) in CD34 + cells. It also decreases the adhesion of CD34 + cells to the stroma and the number of progenitor cells in cultures in a semi-solid medium. The effect of NO on the number of progenitors and the expression of AML1 is contact-dependent. Indeed, the separation between hematopoietic and stromal cells blurs the effect of inhibition of NO production. These results suggest that NO through the regulation of CXCR4 and adhesion indirectly regulates AML1. In vivo, inhibition of NO production enhances HSC proliferation by the same mechanisms involved in vitro; reduction of CXCR4 and AML1 expression. The proliferation of HSC is associated with decreased expression of cyclin dependent kinases p57, p21 and pi 9. Consistent with the decreased expression of CXCR4, inhibition of NO production induced mobilization of progenitors into the blood and spleen. All these results show an important role of NO in the regulation of HSCs and progenitors

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Dalle, Jean-Hugues. "Greffes non apparentées de sang placentaire : résultats en pédiatrie : propriétés phénotypiques et fonctionnelles des cellules NK d'origine placentaire et interactions in vitro avec les antithymoglobulines de lapin utilisées dans le conditionnement de ces greffes." Lille 2, 2005. http://www.theses.fr/2005LIL2S002.

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Abstract:

Nos objectifs étaient de confirmer faisabilité et efficacité des greffes de sang placentaire (SP) et d'étudier les propriétés in vitro des cellules NK placentaires et adultes. METHODES : Etude retrospective comparant les résultats des greffes allogéniques de moelle osseuse et de SP non apparentés. Etude in vitro des phénotypes et fonctions des NK en présence ou non d'antithymoglobulines (ATG). RESULTATS : Le recours au SP est plus rapide et aussi efficace que les CSH médullaires. Les NK de SP et adultes diffèrent peu. Cytotoxicité, prolifération et production d'IFN-γ sont identiques. L'addition d'ATG n'entraine pas d'apoptose, n'altère pas prolifération et cytotoxicité et amplifie la production d'IFN-γ. CONCLUSION : le SP non apparenté est une alternative efficace. Les cellules NK de SP sont matures. Nos résultats sont compatibles avec l'hypothèse selon laquelle une T-déplétion lors des greffes de CSH peut révéler un impact positif de l'alloréactivité NK
Our aim were to confirm efficacy of unrelated cord blood transplantation (CB) and to study in vitro properties of both umbilical and adult NK cells. METHODS : Retrospective clinical study comparing results of unrelated CB and bone marrow transplantation. In vitro studies of NK cells phenotype and functions with or without antihimoglobulins (ATG). RESULTS : the use of CB was quicker and also effective than adult stem cell use. NK cells from adult and CB do not differ. Cytotoxicity, proliferation and IFN-γ production were similar. ATG does not modify either proliferation, apoptosis or cytotoxicity but dramatically increase IFN-γ production. CONCLUSION : The use of unrelated CB as stem cell source was efficient. Umbilical NK cells were mature. Our results could explain at least partially the efficiency of T-cell depletion in order to obtain positive impact from NK alloreactivity in allogeneic stem cell transplantation

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Vesin, Rose-Marie. "Etude du rôle du facteur de transcription Helios dans les cellules souches hématopoïétiques." Thesis, Strasbourg, 2014. http://www.theses.fr/2014STRAJ117/document.

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Abstract:

Les cellules souches hématopoïétiques (CSH) sont à l’origine de l’ensemble des cellules hématopoïétiques, mais les mécanismes responsables de leurs réponses au stress ne sont que partiellement compris. J’ai étudié le rôle du facteur de transcription Helios dans les CSH, dans lesquelles il est fortement exprimé. J’ai trouvé que les CSH de souris nulles pour Helios (He-/-) possèdent un plus fort potentiel de reconstitution que les CSH WT dans des expériences de transplantations en série. De manière frappante, les souris âgées de 2 ans possèdent 8 fois plus de CSH fonctionnelles par rapport aux souris vieilles WT. De plus, le pool de CSH de long terme de souris He-/- vieilles ressemblent aux CSH WT jeunes en termes de phénotype et de fréquences. Les CSH He-/- vieilles présentent une dérégulation de gènes impliqués dans le vieillissement. De plus,les CSH He-/- jeunes sous-expriment des gènes codant des protéines impliquées dans la réparationde l’ADN ainsi que dans la voie p53. Quand les CSH He-/- et WT sont traitées avec différents agents radiomimétiques qui induisent des cassures simple et double brins à l’ADN, tels que la néocarzinostatine, la camptothécine ou l’étoposide, l’entrée en apoptose, en sénescence et l’arrêt de la prolifération des CSH He-/- sont altérées. Ce phénotype est accompagné d’une faible induction des gènes cibles de p53 et d’une altération du dégagement des foyers gammaH2AX. De plus, j’ai montré que Helios agit en synergie avec p53 pour réguler les réponses aux dommages à l’ADN des CSH. Mes résultats suggèrent qu’en synergie avec p53, Helios contrôle le vieillissement des CSH en prévenant l’accumulation des dommages de l’ADN des CSH
Hematopoietic stem cells (HSCs) give rise to all blood cell lineages but the mechanisms responsible of HSCs responses to stress remain partially understood. I studied the role of the transcription factor Helios in HSCs, where Helios is highly and specifically expressed. I found that HSCs from young Helios null mice (He-/-) reconstitute the hematopoietic system of irradiated recipient mice similarly to HSCs from WT mice in primary transplantations, but out-perform WT cells in secondary and tertiary transplantations. Strikingly, HSCs from 2-year-old He-/- mice had 8-fold higher reconstitution potential than old WT HSCs in primary transplantations. Moreover, the pool of long-term HSCs in old He-/- mice resembles that of young WT animals in both phenotype and frequency. HSCs from old He-/- mice present a down regulation of genes involved in aging. Further, young He-/- HSCs express reduced mRNA levels of genes encoding DNA repair proteins as well as those associated with thep53 pathway. When He-/- and WT HSCs were subjected to DNA damage by different agents like neocarzinostatin, camptothecin, or etoposide, DNA damage-induced apoptosis, senescence and cell cycle arrest were significantly impaired in He-/- HSCs. This phenotype was accompanied by a poor induction of p53 target genes and impaired clearance of gammaH2AX foci. Furthermore, I found that Helios synergies with p53 to regulate the DNA damage responses of HSCs. My results suggest that,in synergy with p53, Helios controls HSC aging by preventing the accumulation of DNA damage in these cells

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Djeghloul, Dounia. "Etude du vieillissement des cellules souches hématopoïétiques : rôle de l'axe miR125b/SUV39H1/H3K9me3." Sorbonne Paris Cité, 2016. http://www.theses.fr/2016USPCC072.

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Abstract:

Les cellules souches hématopoïétiques (CSH) assurent la production et le renouvellement continu des cellules sanguines tout au long de la vie d'un individu. Bien que le nombre de CSH augmente avec l'âge, leur capacité à générer la lignée lymphoïde B diminue alors que leur potentiel de différenciation myéloïde est maintenu. Les mécanismes responsables du vieillissement des CSH restent en grande partie inconnus. Mon projet de thèse a consisté à étudier les mécanismes épigénétiques responsables du vieillissement des CSH. Ce travail a montré une diminution de la modification répressive H3K9me3 et de la formation de l'hétérochromatine, impliquant l'histone méthyltransférase SUV39H1 et le miR-125b, dans les CSH avec l'âge. SUV39H1 catalyse la triméthylation de la lysine 9 de l'histone H3 (H3K9me3), et constitue un des principaux facteurs responsables de la formation de l'hétérochromatine. SUV39H1 est fortement exprimée dans les CSH de sujets jeunes et son inhibition conduit à une baisse du niveau de H3K9me3 et à une diminution de la capacité des CSH à générer des cellules B sans modifier leur potentiel myéloïde. L'expression de SUV39H1 diminue dans les CSH humaines et murines avec l'âge conduisant à une diminution de l'histone 1-13K9me3, et à une désorganisation de l'hétérochromatine associée à une dérépression transcriptionnelle de plusieurs régions génomiques répétées. La réexpression de SUV39H1 dans des CSH âgées augmente leur potentiel de différenciation B. Par ailleurs, mes travaux de thèse ont également permis d'identifier SUV39H1 comme étant un gène cible du miR-125b dans les CSH humaines. L'expression du miR-125b augmente dans les CSH avec l'âge et cette augmentation pourrait conduire à la diminution de SUV39H1 et à l'altération de l'hétérochromatine observées dans les CSH d'individus âgées. De plus, le miR-125b peut également jouer un rôle dans la perte du potentiel B des CSH avec l'âge. La surexpression du miR-125b dans les CSH diminue leur potentiel de différenciation B tandis que l'inhibition de l'activité de ce miR améliore le potentiel de différenciation B des CSH de personnes âgées, atténuant ainsi leur biais de différenciation myéloïde. L'ensemble de ce travail indique que la voie du miR¬125b/SUV39H1 joue un rôle important dans la régulation de la chromatine des CSH et dans la perte du potentiel de différenciation B des CSH au cours du vieillissement
Hematopoietic stem cells (HSC) produce ail blood cell lineages during the life of an indiv idual. With age, there is an increase in the number of HSC, and aged HSC have a reduced ability to generate B lymphoid cells whereas their myeloid lineage potential remains unchanged or even increases. The molecular mechanisms leading to HSC aging remain unclear. The aim of my thesis project was to identify epigenetic mechanisms implicated in the loss of HSC B cell potential with age. This work has allowed us to identify the histone methyltransferase SUV39H1 and regulation of heterochromatin as critical factors in the maintenance of HSC B cell potential. SUV39H1 catalyzes trimethylation of lysine 9 of histone H3 (H3K9me3) and is one of the principal enzymes involved in heterochromatin formation. SUV39H1 is highly expressed in HSC and pharmacological or siRNA-mediated inhibition of SUV39H1 in human HSC results in decreased H3K9me3 and reduced generation of B but not myeloid cells following in vitro differentiation. With age there is a decrease in the expression of SUV39H1 in both human and mouse HSC, leading to a decrease in global levels of H3K9me3. The resulting relaxation of heterochromatin structure leads to transcriptional

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Denis, Laure. "Contribution à l'étude de l'alloréactivité NK en greffe allogénique de cellules souches hématopoïétiques : implication des récepteurs KIR." Nantes, 2005. http://archive.bu.univ-nantes.fr/pollux/show.action?id=13195a70-7d5d-4220-9d93-f5d935ed7f11.

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Abstract:

La greffe allogénique de CSH représente un modèle d'alloréactivité cellulaire au cours de la reconstitution hématopoïétique. Les conséquences immunologiques induites peuvent être délétères (rejet et GvHD) ou bénéfique (GvL). Les molécules HLA impliquées dans ces réactions représentent par ailleurs les ligands spécifiques de récepteurs exprimés à la surface des cellules NK de l'immunité innée. Parmi ces récepteurs, les marqueurs KIR, très polymorphes, sont exprimés de manière clonale et contrôlent la réactivité allogénique NK. Au laboratoire, nous nous sommes intéressés à l'alloréactivité NK et à la contribution des interactions KIR/HLA en greffe allogénique de CSH. Les résultats ont révélé des combinaisons génotypes KIR donneur/receveur " à risques " sur la GvHD. Une régulation transcriptionnelle des gènes KIR en reconstitution post-greffe de CSH apparaît déterminante sur la réaction GvH. Enfin, les mécanismes en jeu dans l'alloréactivité NK semblent impliquer l'ensemble des récepteurs activateurs et inhibiteurs exprimés à la surface des cellules NK, dans un contexte HLA déterminé
Allogeneic HSCT is a good way to study cellular alloreactivity during haematopoietic reconstitution. Implied immunologic consequences can be either deleterious (reject or GvHD) or beneficial (GvL). HLA molecules are involved in those reactions and moreover, represent the specific ligands of KIR receptors expressed on NK cell in the innate immune system. Among these receptors, polymorphic KIR markers are clonally distributed to control NK allogeneic reactivity. In the laboratry, we focused on NK alloreactivity and KIR/HLA interactions in allogeneic HSCT. Results showed that some KIR genotype combinations between donor and recipient were at risk for GvH reaction. Moreover, KIR gene transcriptional regulation during post-HSCT period appeared to be relevant on GvH reaction. Last, all activating and inhibiting NK expressed receptors seemed to be involved in alloreactivity mechanisms, through a HLA-modulated repertoire

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Roques, Marion. "Etude de l'émergence hématopoïétique aortique dans l'embryon de souris : rôle de l'endogline." Paris 6, 2010. http://www.theses.fr/2010PA066516.

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Abstract:

Les Cellules Souches Hématopoïétiques (CSH) peuvent renouveler tous les types cellulaires du sang tout en s’autorenouvelant pour maintenir un contingent de CSH. Elles sont produites au cours de la vie embryonnaire, dans la région AGM pour Aorte-Gonades-mésonéphros. Elles émergent sous la forme de bourgeonnements hématopoïétiques étroitement liés à l’endothélium de l’aorte. Leur formation nécessite l’intervention de nombreux acteurs cellulaires et moléculaires. Parmi eux, la voie de signalisation TGFß/BMP joue un rôle important. Mon travail de Thèse a porté sur la phase d’émergence des CSH dans l’AGM. Afin de caractériser plus finement l’émergence des bourgeonnements aortiques d’un point de vue morphologique, j’ai mené une série d’observations au microscope électronique à balayage. Cette approche a permis de mettre en évidence une modification locale de l’endothelium. La comparaison entre le poulet et la souris a permis de révéler des différences dans la mise en place et la dynamique d’apparition des clusters. J’ai étudié l’expression de l’endogline (CD105), un récepteur accessoire de la voie TGFß/BMP, au moment de l’émergence hématopoïétique aortique et j’ai montré que cette molécule était exprimée dans l’endothélium et dans les bourgeonnements hématopoïétiques. Dans les cellules des bourgeonnements, l’intensité d’expression de CD105 est variable ce qui a permis de discriminer les progéniteurs clonogéniques engagés (CD105int) des cellules immatures (CD105high). Par ailleurs, j’ai débuté la mise au point de greffes d’organes hématopoïétiques murins sur la membrane chorio-allantoïdienne de poulet afin de comprendre les échanges cellulaires entre ces différents organes

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Bittencourt, Marcelo de Carvalho. "Approches cellulaires pour l'induction de tolérance en transplantation de cellules souches hématopoi͏̈étiques." Besançon, 2002. http://www.theses.fr/2002BESA3004.

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Abstract:

L'objectif de cette étude est le développement des stratégies de modulation de Valloréactivité en transplantation de cellules souches hématopoïétiques (CSH)„ La signalisation via Fas des cellules alloréactives activées pendant une culture mixte lymphocytaire (MLR) permettrait l'élimination par apoptose des lymphocytes alloréactifs. La modification génétique des cellules pour l'expression de FasL s'est avéré techniquement peu fructueuse. Cependant, la génération d'une lignée d'empaquetage produisant un vecteur retroviral pour FasL a résulté dans une augmentation de l'expression de Fas et d'autres marqueurs d'activation cellulaire et aussi une augmentation de la sensibilité à l'apoptose des cellules d'empaquetage après transfection. La transfection d'un gène traceur ou d'un vecteur vide est capable également d'induire le même phénomène. Ces altérations phénotypiques et fonctionnelles étaient dépendantes de la technkwe de transfert génique. 2. Effet de l'administration de leucoc es a o toti ues sur la rise de reffe: Des cellules apoptotiques administrées conjointement aux CSH ont été capables de favoriser une prise d'un greffon médullaire allogénÀue dans un modèle animal. Cet effet n'est pas spécifique: des splénocytes apoptotques issus du donneur, du receveur, d'une tierce partie et de PBMC humains apoptotiques conjointement avec la moelle osseuse augmentent la proportion de prise de greffe dans ce modèle. D'autres méthodes d'induction d'apoptose permettent également une prise de greffe après injection intraveineuse des cellules mourantes conjointement au greffon médullaire. Aucun signe clinique et histologique de GVH n'a été observé après l'administration de splénocytes apoptotiques. Une manipulation de l'apoptose est donc envisageable pour l'induction de tolérance en thérapie cellulaire et greffe d'organes
Pas de résumé en anglais

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Vannier, Jean-Pierre. "Cellules souches hématopoïetiques circulantes : réevaluation des valeurs normales et étude de leurs variations." Rouen, 1989. http://www.theses.fr/1989ROUE02TP.

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Abstract:

Il y a dans le sang circulant des cellules souches granulo-monocytaires (CFU-GM, Eo). En modifiant la méthode habituelle de culture (en utilisant du plasma du cordon humain et une combinaison de deux milieux conditionnés) nous avons trouvé un nombre élevé de CFU-GM, Eo circulantes. La moyenne, chez l'aduilte sain est de 22,4 X10 (5) cellules mises en culture (écart (1-84). Il existe une petite différence entre les hommes (23,6) et les femmes (20,4). Le recueil du gradient de Percoll est de 123/ml de sang. Un tiers des colonies sont éosinophiles. La moitié est composée de neutrophiles et/ou macrophages et 17% sont mixtes. En utilisant l'interleukine 3 nous avons trouvé des résultats similaires. Les cellules souches circulantes sont probablement moins sensibles à un dérivé du cyclophosphamide, l'Asta-Z. Après traitement avec de hautes doses de cet antimitotique, un nombre appréciable de CFU-GM, Eo réapparaît en culture en milieu liquide à court terme. Les résultats sont moins bons avec une sous-couche irradiée de cellules du stroma médullaire. Après chimiothérapie on observe une augmentaion des CFU-GM, Eo circulantes. Les cytaphérèses, alors faites, ne modifient pas ce phénomène. Les autres progéniteurs hématopoïétiques sont moins souvent augmentés.

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Giroux, Sébastien. "Analyse fonctionnelle de facteurs impliqués dans l’émergence des précurseurs hématopoïétiques de l’embryon de souris." Paris 11, 2006. http://www.theses.fr/2006PA112350.

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Rice, Alison Mary. "Caractérisation fonctionnelle des cellules souches sanguines mobilisées par chimiothérapie." Bordeaux 2, 1993. http://www.theses.fr/1993BOR28240.

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De, Lacoste de Laval Bérengère. "Rôle de la signalisation TPO dans la réparation de l'ADN des cellules souches hématopoïétiques." Phd thesis, Université René Descartes - Paris V, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00950059.

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Abstract:

A l'origine de l'hématopoïèse se trouve les cellules souches hématopoïétiques (CSH). Elles constituent un pool de cellules rares présentes dans la moelle osseuse aux niveaux de zones particulières de l'os appelées niche. Les cellules de la niche produisent des cytokines, telles que la thrombopoïétine (TPO), qui régulent les CSH en contrôlant leur quiescence et leur auto-renouvellement. Peu de choses sont connues sur les mécanismes mis en place par la CSH et son environnement pour faire face aux dommages de l'ADN, notamment induits lors de radio- ou chimio-thérapies. Durant cette étude, nous avons mis en évidence un nouveau rôle de la TPO et de son récepteur Mpl dans la réparation de l'ADN des CSH en réponse à des stress génotoxiques. Les CSH déficientes ou haplo-insuffisantes pour Mpl, ou les CSH sauvages et cultivées en absence de TPO, présentent un défaut de réparation et une instabilité génomique. En réponse à l'irradiation, la TPO potentialise l'activation de la voie NF-kB qui permet l'induction du gène précoce Iex-1. La TPO est également l'activateur majeur de la voie ERK dans les CSH. IEX-1 et pERK forment un complexe tripartite avec DNA-PK, une protéine clé de la voie Non Homologous End Joining (NHEJ). La DNA-PK est fortement activée par la TPO, ce qui augmente la fidélité et l'efficacité de la voie NHEJ et permet d'améliorer l'intégrité génomique des CSH. Par ailleurs, nous montrons qu'une simple injection de TPO ou de son agoniste Romiplostim, avant irradiation ou injection de doxorubicine, limite la mutagénèse des CSH et leur perte de fonction associée. Cet effet est spécifique de la TPO, d'autres cytokines comme le SCF et le Flt3-L, n'ont aucun effet sur la réparation. Ces résultats montrent que la TPO contrôle directement les voies de signalisation aboutissant à la réparation de l'ADN des CSH. Ils ouvrent des perspectives nouvelles pour l'utilisation des agonistes de la TPO comme adjuvant protecteur avant radio- ou chimiothérapie pour minimiser les risques de développement de leucémies aigües myéloïdes secondaires. L'expression de Mpl étant haploinsuffisante pour la fonction de réparation de l'ADN, ces résultats suggèrent que Mpl pourrait être tumeur suppresseur en réponse aux traitements chimio-ou radio-thérapeutiques.

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Traore, Yves. "Divers aspects de polymorphisme de la molécule CD34 : antigène des cellules souches hématopoïétiques humaines." Aix-Marseille 2, 1994. http://www.theses.fr/1994AIX22010.

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Abstract:

Au cours de ce travail, nous nous sommes interesses aux cellules souches hematopoietiques humaines qui expriment l'antigene cd34, et nous avons tente d'eclaircir le role fonctionnel de cette molecule. Dans la premiere phase de cette etude, nous avons caracterise deux nouveaux anticorps anti-cd34 (immu133 et immu409). L'anticorps immu133 nous a permis d'elaborer une technique de tri des cellules souches hematopoietiques par des billes magnetiques. Cette technique est applicable aussi bien sur des echantillons de moelle osseuse, de sang de cordon ombilical que de cytapherese. Nous avons montre que les cellules ainsi triees conservaient leur potentiel de proliferation et de differenciation in vitro. Dans la seconde phase, nous avons analyse le potentiel fonctionnel de huit anticorps monoclonaux anti-cd34 et tente de correler une eventuelle fonction a l'existence sur la molecule cd34 d'epitopes particuliers. Nous avons demontre que deux de ces anticorps, qbend10 et immu133 induisaient une agregation homotypique des cellules kg1a cd34+ qui sont normalement monodisperses en culture. Nous avons emis l'hypothese que les mecanismes intervenant dans cette adhesion homotypique impliquaient directement la molecule cd34. Dans ce cas, deux possibilites peuvent etre envisagees: - la molecule cd34 jour un role d'anti-adhesion ; les anticorps agiraient alors en inhibiteurs de cette fonction. - la molecule cd34 a une fonction d'adhesion qui est induite par la fixation de l'anticorps ; dans ce cas les anticorps mimeraient l'action d'un ligand naturel de la molecule. Notre travail aide a une meilleure comprehension des interactions cellulaires des evenements precoces de l'hematopoiese. L'obtention de nouveaux anticorps monoclonaux anti-cd34 a permis non seulement d'elaborer un systeme de tri de cellules souches, mais encore d'orienter la recherche de la fonction de la molecule cd34

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Campard, David. "Rôle d'une boucle autocrine impliquant l'IL-6R dans la détermination des cellules souches hématopoïétiques." Rouen, 2005. http://www.theses.fr/2005ROUES040.

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Abstract:

L'hématopoïèse est un processus complexe au cours duquel des cellules souches hématopoïétiques (CSH) pluripotentes prolifèrent et se différencient pour donner un effectif complet de cellules sanguines matures et fonctionnelles. Le maintien de la population de CSH est assuré par un mécanisme d'autorenouvellement. De nombreuses cytokines sont impliquées dans la régulation des phases précoces de l'hématopoïèse. Leur production est assurée par les cellules du microenvironnement, mais aussi par les CSH elles-mêmes. Le but de ce travail repose sur le rôle de l'IL-6 et de ses récepteurs dans la détermination des CSH. L'expression de l'IL-6Rm sur les CSH augmente suite à une stimulation de la gp130 par une molécule fusionnant l'IL-6 à l'IL-6Rs (l'Hyper-Interleukine-6-HIL-6). Cette stimulation augmente la production d'IL-6Rs uniquement dans une population restreinte de CSH résistantes au 5-FU. D'autres cytokines de la famille de l'IL-6, tels que le LIF ou l'IL-11, ne permettent pas de reproduire ces réponses. La production d'IL-6Rs est stimulée par le PMA et est inhibée par le TAPI, indiquant qu'une ADAM clive l'IL-6Rm. Des stimulations transitoires par l'HIL-6 permettent également d'augmenter la production d'IL-6Rs par clivage de l'IL-6Rm. L'activation de l'ADAM induite par la gp130 est régulée en partie par la voie PI-3K. Ces événements plaident donc pour l'existence d'une boucle autocrine basée sur l'expression des formes solubles et membranaires de l'IL-6R. La fonctionnalité de la boucle a été testée en stimulant la gp130 de CSH en culture. Cependant, aucune augmentation du nombre de progéniteurs issus de ces CSH stimulées n'a été observée. Cette observation a été corroborée par la simulation de modèles informatiques RPHF. En revanche, la fréquence des LTC-IC augmente dans des cultures à long terme de CSH exposées à l'HIL-6 en présence de cellules stromales, suggérant ainsi le rôle important du microenvironnement dans la fonctionnalité du circuit de la régulation auto-paracrine. L'effet de l'HIL-6 est inhibé par le TAPI, soulignant ainsi l'importance de la trans-signalisation dans le maintien des CSH. Une analyse du cycle cellulaire des CSH révèle que l'HIL-6 n'augmente pas l'entrée en cycle, privilégiant ainsi une action de l'HIL-6 sur la survie cellulaire plutôt que sur la prolifération
The hematopoisis is a complex process where the proliferation and the differenciation of pluripotent hematopoietic stem cells (HSCs) lead to the formation of mature and functional blood cells. The maintenance of HSCs population is sustained by a mechanism of renewal. Numerous cytokines are involved in the regulation of early phases of hematopoiesis. These cytokines are secreted by the cells of the microenvironment, and the HSCs themselves. The role of IL-6 and its receptors in the maintenance of the HSCs is studied herein. The stimulation of gp130 by the fusion molecule linking IL-6 to sIL-6R (the hyper-interleukin-6, HIL-6) enhanced the expression of mIL-6R on HSCs. This stimulation increases the production of sIL-6R only on the population of 5-FU-resistant HSCs. However, same responses were not obtained by stimulation with others IL-6 family members, such as LIF or IL-11. Production of sIL-6R is stimulated by PMA and is inhibited by TAPI, demonstrating that an ADAM is involved in shedding of mIL-6R. The production of sIL-6R by shedding of mIL-6R was also increased by transient stimulations with HIL-6. Gp-induced-activation of ADAM is partially mediated by PI-3K pathway. Thus, all these data pleading to the existence of a mIL-6R and sIL-6R based autocrine loop. The functionality of this loop has been tested in culture of gp130-stimulated HSCs. Nevertheless, there was no increase in the number of progenitor derived from stimulated HSCs. This observation has been confirmed using the simulation of informatic HFPN models. In contrast, the LTC-IC frequency increases in long-term culture of HSCs in presence of stromal cells and HIL-6, suggesting the important role of the microenvironment in the functionality of the auto-paracrine circuit of regulation. The effect of HIL-6 is inhibited by TAPI, underlining the importance of the trans-signalling in the maintenance of HSCs. The cell-cycle analysis of HSCs shown that HIL-6 has no effect in the entry in cell-cycle, suggesting preferential role of HIL-6 in the cell survival rather than in the proliferation

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Dissertations / Theses on the topic 'Cellules souches hématopoïétiques – Croissance'

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