Dissertations / Theses on the topic 'Cholestérol cellulaire'
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Chambenoit, Olivier. "ABCA1 et l'homéostasie du cholestérol cellulaire." Aix-Marseille 2, 2003. http://www.theses.fr/2003AIX22023.
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Kerdous, Rachid. "Utilisation de nanoparticules copolymériques pour le ciblage cellulaire de photosensibilisateurs : étude sur des membranes modèles et corrélation avec l’internalisation cellulaire." Paris 6, 2013. http://www.theses.fr/2013PA066391.
Abstract:
La thérapie photodynamique (PDT) représente actuellement une technique alternative à la chimiothérapie traditionnelle pour le traitement des cancers. Elle est basée sur la capacité de certaines molécules appelées photosensibilisateurs à générer des espèces oxygénées radicalaires suite à une irradiation lumineuse. La plupart de ces molécules sont connues pour leur rétention préférentielle par les tissus cancéreux, mais un certains nombre d’inconvénients limitent leur utilisation. Notamment, leur relative hydrophobie limite leur solubilité dans les milieux biologiques. De nouvelles formules de photosensibilisateurs sont en cours de développement, comme l’utilisation de nanoparticules, pour les véhiculer jusqu’aux tissus cibles, permettant de réduire leur toxicité et d’augmenter leur spécificité. Parmi celles-ci, les nanoparticules polymériques amphiphiles de PEO-b-PCL constituent de bons candidats en raison de leur biodégradabilité et de la possibilité de générer des nano-objets de tailles contrôlées. En outre, ces systèmes permettent de contrôler le relargage du photosensibilisateur véhiculé une fois dans les cellules cibles. Le but du travail présenté dans ce manuscrit se situe dans ce contexte et vise à comprendre les mécanismes impliqués dans l’internalisation cellulaire d’un photosensibilisateur, le phéo-a, seul ou par l’intermédiaire des nanoparticules. La capacité de ce photosensibilisateur à interagir avec les membranes modèles, mimant la partie lipidiques des membranes biologiques, a été étudiée, en nous attachant notamment aux effets du taux de cholestérol, qui est un composant membranaire important, gouvernant ses propriétés physiques. Nos résultats montrent qu’il implique, entre autre, une réduction importante du flip-flop du phéo-a à travers la membrane. La capacité du phéophorbide-a à endommager et perméabiliser les membranes a été ensuite évaluée. Cet effet perméabilisant du phéo-a a été comparé à celui d’une chlorine tri-carboxylique amphiphile, la chlorine e6. L’interaction du phéo-a avec les nanoparticules et son transfert à partir de ces compartiments vers les membranes ont été étudiée. Aucun transfert de la phéo-a par la phase aqueuse n’a lieu, mais le transfert nécessite une collision directe entre les nanoparticules avec les vésicules. Au niveau cellulaire, les nanoparticules ont montré une nette amélioration de la quantité de phéo-a internalisée par rapport à celle internalisée seule. En outre, les mécanismes de cette internalisation ont été mis en évidence. Avec les nanoparticules, l’incorporation du phéophorbide est bi-phasique. La première phase rapide est attribuée au transfert direct du photosensibilisateur des nanoparticules vers les membranes, au sein desquelles il se redistribue. Elle est suivie d’une seconde phase lente attribuée à l’endocytose des nanoparticulesPhotodynamic therapy (PDT) is currently an alternative technique to traditional chemotherapy for cancer treatment. It is based on the ability of certain molecules called photosensitizers to generate reactive oxygen species after light irradiation. Most of these molecules are known for their preferential retention in tumor tissues, but a number of drawbacks limit their use. Particularly, their relative hydrophobicity limits their solubility in biological media. New forms of photosensitizers are being developed, such as the use of nanoparticles to convey to the targeted tissues, to reduce toxicity and increase their specificity. Among these, the amphiphilic polymer nanoparticles PEO-b-PCL are good candidates because of their biodegradability and ability to generate controlled nano-sized objects. In addition, these systems are used to control the release of the photosensitizer once transported into target cells. The aim of the work presented in this manuscript aims to understand the mechanisms involved in the cellular internalization of a photosensitizer, the pheophorbide-a (pheo-a), alone or via nanoparticles. The interaction of this photosensitizer with model of membranes mimicking the lipidic part of the biological ones has been studied, in particular, by focusing on the effects of cholesterol, which is a major membrane component, governing its physical properties. Our results show that involves, among other mechanisms, a significant reduction of the flip-flop rate of the phéo-a through the membrane. The ability of this photosensitizer to damage and permeabilize the membranes was then evaluated in comparison to that of an amphiphilic, tri-carboxylic chlorine, the chlorin e6. The interaction of the pheo-a with nanoparticles and its transfer from these compartments to the membranes were studied. No transfer of the pheo-a via the aqueous phase takes place, but the transfer requires a direct collision between the nanoparticles with the vesicles. At the cellular level, the nanoparticles showed a marked improvement in the amount of internalized pheo-a relative to the one internalized without nanoparticles. In addition, the mechanisms of internalization have been highlighted. With nanoparticles, the incorporation of pheo-a is biphasic. The first phase is assigned to the fast direct transfer of the photosensitizer from the nanoparticles to the membranes, in which it redistributes. It is followed by a second phase, assigned to slow rating endocytosis of the nanoparticles
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Ben, Hassen Celine. "Cibler l'homéostasie du cholestérol cellulaire pour traiter le cancer du sein." Thesis, Tours, 2019. http://www.theses.fr/2019TOUR3809.
Abstract:
Une femme sur huit sera touchée dans sa vie par le cancer du sein. Les facteurs de risque peuvent être héréditaires et environnementaux. Des études antérieures ont montré que les taux de cholestérol cellulaire peuvent jouer un rôle important dans la régulation de la progression tumorale. Pour confirmer cette hypothèse, nous avons modulé le métabolisme du cholestérol dans les cellules cancéreuses mammaires humaines MCF-7 et MDA-MB-231 en utilisant des approches génétiques : augmentation de l’élimination du cholestérol par l’expression de l’apolipoprotéine A-I (apoA-I, régulant la sortie du cholestérol des cellules) ou modulation du métabolisme du cholestérol par l’expression de l’apolipoprotéine E (apoE, pouvant réguler l’entrée ou la sortie du cholestérol des cellules). Nos expériences ont été menées in vitro et in vivo. Nos résultats montrent que l’expression de l’apoA-I ou de l’apoE stimule la prolifération, la migration, l’invasion et la croissance tumorale des cellules MCF-7 via les voies de signalisation PI3K/AKT et MAPK et possiblement la cavéoline-1. En revanche, l’apoA-I et l’apoE ralentissent la prolifération et la migration des cellules MDA-MB-231One in eight women will have to face breast cancer at some point in her life. Risk factors can be hereditary or environmental. Previous studies have shown that cholesterol levels can play an important role in the regulation of tumor progression. To test this hypothesis, we modulated cholesterol metabolism in human breast cancer cell lines MCF-7 and MDA-MB-231 using a genetics approach: increasing cholesterol elimination by expressing apolipoprotein A-I (apoA-I; regulating cellular cholesterol efflux), or modulating cholesterol metabolism by expressing apolipoprotein E (apoE; regulating cellular influx and efflux of cholesterol). We performed in vitro and in vivo experiments. Our results show that expressing apoA-I or apoE stimulates proliferation, migration, invasion, and tumor growth of MCF-7 cells, via the regulation of the PI3K/AKT and MAPK signaling pathways and possibly via caveolin-1. However, apoA-I and apoE reduce proliferation and migration of MDA-MB-231 cells
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Solignat, Maxime. "Cycle de réplication du virus Chikungunya chez l'homme et l'Aedes : tropisme cellulaire et mécanisme d'entrée." Montpellier 1, 2009. http://www.theses.fr/2009MON1T007.
Abstract:
Le virus du Chykungunya (CHIKV) est un Arbovirus transmis par les moustiques, et plus particulièrement les moustiques du genre Aedes. Cet alphavirus du groupe des Semliki Forest a été identifié comme l'agent pathogène responsable de l'épidémie en 2005 et 2006 sur le territoire de La Réunion ainsi que dans l'Océan Indien. Alors que cette maladie était généralement considérée comme généralement non fatale, 256 décès ont été directement attribués au virus lors de l'épidémie à La Réunion. Bien qu'isolé en 1952, le CHIKV reste mal connu et les modifications brutales de la physiopathologie de l'infection par ce virus à La réunion sont inexpliquées à ce jour. Aucun traitement n'est disponible à l'heure actuelle. Chez les virus enveloppés, il existe différentes voies d'entrée possible dans la cellule hôte, qui sont autant de cibles pour inhiber le cycle réplicatif de ces virus. L'objectif principal de ma thèse a consisté à caractériser le mécanisme d'entrée de ce virus dans les cellules humaine [i. E. Humaines] et dans les cellules des vecteurs de la famille Aedes. Nous avons pu décrire pour la première fois le mécanisme d'entrée du CHIKV dans ces cellules cibles et pour différents isolats viraux. Ainsi, nous avons mis en évidence le rôle de l'endocytose dépendante des puits recouverts de clathrine et des endosomes dans ce mécanisme d'entrée; enfin, nous avons étudié l'influence des interactions cellulaires et moléculaires entre le CHIKV et l'endosymbionte Wolbachia sur la réplication virale. Cette bactérie intracellulaire obligatoire qui est présente dans les populations naturelles d'Aedes albopictus pourrait être impliquée dans le cycle de transmission et la pathogenèse virale du CHIKV comme il est déjà démontré pour d'autres systèmes virus-arthropodes-WolbachiaChikungunya virus (CHIKV) is a mosquitoe transmitted Arbovirus and more particulary by the Aedes mosquitoe genus. This Alphavirus which belongs to the Semliki Forest group was identified like the responsible [i. E. Responsable] agent for the epidemic disease in 2005 and 2006 on the territory of La Reunion and in the Indian Ocean. Whereas this disease was generally regarded as nonfatal, 256 deaths were directly allotted to the virus at the time of the epidemic episode in La Reunion. Although it was isolated in 1952, the CHIKV remains poorly understood and the brutal modifications of the physiopathology of the infection by this virus in La Reunion are unexplained to date. No treatment is available at the present time. Among envelopped viruses, there are various entry pathways in the host cell which are as many targets to inhibit the replicative cycle of these viruses. The main aim of my thesis consisted in characterizing the entry mechanism of CHIKV in human cells and in mosquitoe cells of the Aedes family. Thus, we described for the first time the entry mechanism of CHIKV in these target [i. E. Targets] cells and this, for various viral isolates. More particularly, we highlighted the role of the clathrin mediated endocytic pathway and the endosomes vesicles in these mechanism [i. E. Mechanismes]. Finally, we studied the influence of cellular and molecular interactions between the CHIKV and the endosymbiotic bacteria Wolbachia on viral replication. This obligatory intracellular bacteria which is present in the natural populations of Aedes albopictus could be implied in the transmission cycle and the viral pathogenesis of the CHIKV as it is already shown for other virus-arthropods-Wolbachia systems
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Autran, Delphine. "Altérations de l'efflux de cholestérol cellulaire en phase postprandiale lors des états d'insulino-résistance." Lyon 1, 2001. http://www.theses.fr/2001LYO1T245.
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Bionda, Clara. "Implications des Microdomaines Rafts de la Membrane Plasmique dans la Résistance aux Radiations Ionisantes d’un modèle cellulaire de Carcinome Epidermoïde de la Tête et du Cou." Lyon 1, 2007. http://www.theses.fr/2007LYO10347.
Abstract:
La sensibilité tumorale aux radiations ionisantes résulte de l’équilibre entre les mécanismes d’agression conduisant à la mort cellulaire et les mécanismes de réparation et de survie cellulaires. En plus des dommages radio-induits de l’ADN, les événements précoces au niveau de la membrane plasmique représentent une étape déterminante dans l’apoptose radio-induite. A partir de lignées tumorales issues de carcinomes ORL, nous avons démontré que le déclenchement de la voie de signalisation conduisant à l’apoptose radio-induite est lié à un réarrangement des microdomaines rafts dans les cellules radiosensibles SCC61. Ce réarrangement structural des rafts fait défaut dans la lignée SQ20B, ce qui pourrait en partie expliquer leur radiorésistance. La modulation pharmacologique des rafts par la cyclodextrine a permis de déclencher l’entrée en apoptose des cellules SCC61 en impliquant la voie Fas et d’activer la voie de survie EGF-R dans les cellules SQ20B et ceci en absence de tout ligandThe tumoral sensitivity to ionizing radiation results from the balance between the mechanisms of agression leading to cell death and the mechanisms of intracellular repair and survival. Apart from the radiation-induced damage of DNA, early events at the plasma membrane represent a determining phase in the radiation-induced apoptosis. In a model of HNSCC, we demonstrated the fundamental role of raft microdomains in the transduction of signaling pathways leading to radiation-induced apoptosis of radiosensitive SCC61 cells. By contrast, a defect of structural rearrangement of the rafts was observed in SQ20B cells, a result that could partly explain their radio-resistance. A pharmacological modulation of the rafts with methyl-β-cyclodextrin was carried out, leading to apoptosis of SCC61 cells involving the Fas pathway but activating the survival EGF-R pathway in SQ20B cells, both in a ligand-independent manner
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Zarubica, Ana. "Influence du transporteur ABCA1 sur le microenvironnement lipidique de la membrane plasmique." Aix-Marseille 2, 2009. http://theses.univ-amu.fr.lama.univ-amu.fr/2009AIX22025.pdf.
Abstract:
Le transporteur ABCA1 est impliqué dans le transfert des phospholipides et du cholestérol vers Apo A-I sur la membrane plasmique cellulaire. Comme ABCA1 est un transporteur des lipides, nous avons examiné son effet sur le microenvironnement lipidique de la membrane. Nous avons démontré que l'activité ATP-ase d'ABCA1 modifie sa répartition dans les radeaux lipidiques, ainsi que la répartition d’autres protéines de la membrane comme le récepteur de transferrine (TfR), la dynamique cinétique de TfR et réduit l’endocytose de TfR. Nous avons montré par des méthodes biophysiques, cationic sensors et FLIM des modifications significatives dans le feuillet membranaire, interne et externe, par l'expression d'ABCA1. Nous avons démontré aussi par FRAP un changement général de la dynamique de la membrane en présence d'ABCA1. Nous avons corrélé la modification des propriétés de la membrane via ABCA1, avec son influence sur l'activation des macrophages en interférant avec la signalisation de l’IFNγRThe ABCA1 transporter is involved in the Apo A-I/mediated removal of cellular phospholipids and cholesterol at the cell membrane. Considering that ABCA1 acts as lipid translocator we investigated the effect of the transporter on membrane lipid microenvironment. By biochemical assays, we demonstrated that the ATP-ase activity of ABCA1 modifies the partitioning in lipid rafts of the transporter itself and other membrane proteins such as the transferrin receptor (TfR), TfR dynamic kinetics and down regulates TfR-mediated endocytosis. We then assessed by biophysical methods, cationic sensors and FLIM, significant modifications of membrane attributes at the inner and outer leaflet in the presence of ABCA1. Furthermore, we evidenced overall changes in membrane dynamics in the presence of ABCA1 by FRAP. Finally, we correlate the mechanistic basis of ABCA1-dependent modulation of macrophage phenotype with the influence of ABCA1 on lipid raft dependent signaling downstream of IFNγR
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Farnier, Céline. "Voies de signalisation impliquées dans l'adaptation de la fonction adipocytaire au changement de la taille cellulaire." Paris 6, 2003. http://www.theses.fr/2003PA066113.
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Almeida, Claudia. "Réorganisation des lipides des membranes par des peptides vecteurs d'internalisation cellulaire." Thesis, Sorbonne université, 2018. http://www.theses.fr/2018SORUS061/document.
Abstract:
Les peptides vecteurs (CPP) présentent un grand intérêt pour l'internalisation de principes actifs dans les cellules. Les mécanismes permettant aux peptides de traverser la membrane restent sujets à discussion. Mieux comprendre leurs interactions avec la membrane pourrait permettre d'améliorer leur efficacité. L'organisation des lipides après interaction avec le peptide pénétratine a été étudiée par DSC et par fluorescence du Laurdan, sur des membranes modèles composées de lipides naturels. La pénétratine a induit de l'hétérogénéité dans la membrane, ce qui pourrait être un élément important pour déstabiliser la membrane durant son internalisation dans la cellule. En outre, le cholestérol est un régulateur parmi les plus importants des domaines membranaires. En raison de son affinité pour les lipides saturés, il peut former des domaines ordonnés. Grâce au cholestérol-pyrène, une sonde fluorescente, nous avons étudié les domaines liquides ordonnés (Lo) et désordonnés (Ld) de la membrane. Nous avons, par analyse statistique en composante principale, déterminé les longueurs d'onde d'émission caractéristiques des domaines Lo et Ld. Les peptides pénétratine, R9 et RW9 diminuent l'assemblage du cholestérol et RW9 augmente la fluidité de la membrane. RW9 a été le seul peptide capable de traverser des membranes (Ld) sur de vésicules lipidiques dans nos conditions expérimentales. Nous pouvons ainsi en déduire que la distribution des lipides dans la membrane est un factor important pour le passage des CPP. Notamment, l'interface entre les différents domaines semble jouer un rôle prépondérant pour l'internalisationCell penetrating peptides are promising vectors for molecular drug delivery in eukaryotic cells. Despite of their discovery 20 years ago, the mechanisms of peptide membrane crossing are still controversial. Understanding then how they modify the membrane will allow later on a more efficient internalisation into the cell. Lipid organisation after penetratin interaction was studied by DSC and Laurdan fluorescence. Penetratin was able to induce membrane heterogeneity, which could be important for membrane destabilisation during cell internalisation. Furthermore, cholesterol is one of the most important regulators of membrane domains. Due to its strong affinity with saturated lipids, cholesterol presents the ability to form “rafts” (ordered domains). By cholesterol-pyrene, which is a probe that mimics cholesterol, we studied the liquid ordered (Lo) and liquid disordered (Ld) domains of the membrane. Firstly, we determined the wavelengths that characterise each of these domains by multivariable analysis and then, we verify the peptide effect (R9, RW9 and penetratin) in the distribution of these domains. RW9 were the only CPP able to cross the membrane (Ld). We can deduce that lipid distribution in the membrane is important for the peptide internalisation and the interfaces between these domains may play an important role during this process
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Thies, Frank. "Etude de l'influence de différentes formes d'apport d'acides gras insaturés sur le métabolisme cellulaire." Dijon, 1991. http://www.theses.fr/1991DIJO5069.
Abstract:
L'influence de différentes formes d'apport d'acides gras (AG) insaturés sur le métabolisme cellulaire a été étudiée chez le rat selon deux approches différentes : 1) étude in vitro de l'influence sur la stéroïdogénèse de la nature des AG d'esters de cholesterol (EC) apportés par des lipoprotéines de haute densité (HDL) à des cellules corticosurrénaliennes de rat nouveau né en culture primaire. 2) Etude in vivo de l'apport au cerveau d'AG saturé [acide palmitique (16:0)] et insaturés [acide oléïque (18:1), linoléïque (18:2) et arachidonique (20:4)] liés à l'albumine sous forme de 2-acyl lysophosphatidylcholines (lysoPC) ou sous forme non estérifiée. Les deux techniques suivantes, synthèse d'EC et de 2-acyl-lysoPC doublement marqués et reconstitution de HDL contenant un EC bien défini, i. E. Composé d'une seule sorte d'AG (18:1 ou 18:2 ou 20:4), ont été mises au point pour réaliser nos experiences et sont donc décrites en détail. Les principaux résultats obtenus sont les suivants : 1) nous avons mis en évidence au niveau des cellules corticosurrénaliennes de rat une captation sélective des EC portés par des HDL en fonction du type d'AG, les EC contenant du 20:4 étant captés préférentiellement aux EC contenant du 18:1 ou du 18:2. La stéroïdogénèse globale des cellules est plus importante avec un EC contenant du 20:4 comparé aux autres types d'EC. De plus, la contribution des différentes voies métaboliques permettant l'utilisation du cholesterol pour la stéroïdogénèse diffère selon la nature de l'EC apporté aux cellules par les HDL. La contribution du cholesterol synthétisé de novo par les cellules est correlée négativement avec le degré d'insaturation des AG composant les EC. 2) Les 2-acyl-lysoPC représentent une source importante d'AG insaturés, notamment de 20:4, pour le cerveau en développement chez le rat. La captation des 2-acyl-lysoPC au niveau de cet organe augmente en fonction du degré d'insaturation des AG composant les lysoPC. Les AG insaturés liés à l'albumine sont captés plus efficacement par le cerveau sous leur forme estérifiée (2-acyl-lysoPC) que sous leur forme libre. En comparaison avec les autres organes étudiés (foie, cur et rein), le cerveau privilégie l'utilisation des 2-acyl-lysoPC insaturées par rapport à celle des AG insaturés correspondants circulant dans le plasma sous forme non estérifiée. Ces résultats montrent que la captation et le métabolisme des AG insaturés par différents organes sont influencés considérablement par la forme d'apport de ces AG.
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Jaspard, Béatrice. "Lipoprotéines de haute densité et efflux de cholestérol cellulaire : solement et caractérisation des pré-bêta HDL." Toulouse 3, 1997. http://www.theses.fr/1997TOU30014.
Abstract:
Les lipoproteines de haute densite (hdl) jouent un role majeur dans le transport retour du cholesterol des tissus peripheriques vers le foie. La premiere partie de ce memoire est un rappel bibliographique sur la structure et le metabolisme de ces lipoproteines (chapitre i), et en particulier des pre-beta hdl qui joueraient le role d'accepteurs precoces du cholesterol en exces des membranes cellulaires (chapitre ii). Enfin, le chapitre iii concerne les mecanismes impliques dans l'efflux du cholesterol cellulaire, premiere etape du transport retour. La partie experimentale concerne l'isolement et la caracterisation des pre-beta1 hdl du liquide folliculaire humain qui, en periode preovulatoire, ne contient que des lipoproteines dans le rang des hdl. Le rayon de stokes des pre-b1 hdl a ete estime par electrophorese en double dimension a 3,42 nm. Apres electro-elution sur gel d'agarose, ces particules ont ete isolees par chromatographie d'exclusion. Leur masse moleculaire estimee est de 61,6 kda. Leur analyse lipidique par chromatographie en phase gazeuse a revele un faible rapport cholesterol libre sur apo a-i, exprime en mole par mg d'a-i, compare aux alpha hdl (0,05 0,01 et 0,14 0,04, respectivement), et pour la premiere fois la presence de lipides apolaires (esters de cholesterol et triglycerides). Enfin, elles ont un faible taux de phosphatidylcholines compare aux alpha hdl (40% versus 76% des phospholipides totaux), et contiennent des lysophospholipides et des phospholipides acides. La capacite du liquide folliculaire a promouvoir l'efflux de cholesterol des cellules d'hepatomes de rats (fu5ah) a ete etudie et compare a l'effet de serum homologue. Les parametres d'efflux sont du meme ordre entre le liquide folliculaire et le serum, pour des concentrations equivalentes en cholesterol-hdl. De plus, nous avons montre que les hdl du liquide folliculaire sont capables d'induire un efflux de cholesterol des spermatozoides humains, ainsi qu'une hyperactivation du mouvement flagellaire, des les premieres minutes d'incubation. L'ensemble de ces donnees confirment le role preponderant des hdl comme accepteurs physiologiques du cholesterol cellulaire, pour la premiere fois a partir d'un milieu extravasculaire
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Hammami, Mohamed. "Transport cellulaire du cholestérol et régulation de la biosynthèse des hormones stéroïdes dans les cellules corticosurrénaliennes murines cultivées dans des milieux sans sérum." Dijon, 1986. http://www.theses.fr/1986DIJOS043.
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Malaval, Camille. "Régulation de la captation hépatique des HDL : la voie F1-ATPase/P2Y13 : de la caractérisation cellulaire au modèle animal." Toulouse 3, 2008. http://thesesups.ups-tlse.fr/390/.
Abstract:
La compréhension des mécanismes de la captation hépatique des Lipoprotéines de Haute Densité (HDL), dans le cadre de d'élimination du cholestérol, est au coeur de nos travaux. Une nouvelle voie a été décrite au laboratoire où l'apolipoprotéine A-I des HDL se lie à une F1-ATPase à la surface des hépatocytes et induit la production d'ADP. Cet ADP active secondairement une signalisation dépendante du récepteur nucléotidique P2Y13 et stimule in fine l'endocytose des HDL. Nous avons mis en évidence l'importance de la réorganisation du cytosquelette d'actine sous le contrôle de la GTPase RhoA et son effecteur ROCKI, en aval du récepteur P2Y13. En parallèle, nous avons démontré in vivo l'importance physiologique de cette voie dans le catabolisme des HDL et l'élimination biliaire du cholestérol qui en découle. Ainsi, le récepteur nucléotidique P2Y13 apparaît comme une nouvelle cible pharmacologique en complément aux traitements actuels de l'hypercholestérolémieHDL mediate the elimination of cholesterol thanks to their internalization by hepatocytes. We identified in hepatocytes a new pathway for HDL endocytosis as following: stimulation of an ectopic cell surface F1-ATPase by the HDL apolipoprotein A-I, induces the production of ADP which in turn activates the purinergic receptor P2Y13, triggering HDL endocytosis through unknown low affinity receptor(s). In one hand, we identified a major role of the small GTPase RhoA and its effector ROCK1 downstream P2Y13. This cell signalling stimulates the HDL endocytosis by remodelling actin cytoskeleton. In other hand, the study in mice showed the crucial role of P2Y13 in HDL catabolism and in the subsequent cholesterol biliary elimination. Taking together, these results demonstrate the importance of the receptor P2Y13 in cholesterol metabolism. Thus, P2Y13 appears as a new pharmacological target to control reverse cholesterol transport and prevent hypercholesterolemia
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Dusserre, Eric. "Métabolisme et mouvements du cholestérol dans les différents compartiments du myocyte artériel : mécanismes impliqués et influence de la dédifférenciation cellulaire." Lyon 1, 1994. http://www.theses.fr/1994LYO1T009.
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Abi, Char Joëlle. "Expression membranaire des canaux potassiques shaker Kv 1. 5 cardiaques : rôle du cholestérol et des protéïnes d'ancrage." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077236.
Abstract:
Les canaux ioniques cardiaques sont des protéines membranaires qui sont responsables de l'activité électrique du cœur. Les canaux potassiques sont constitués d'un complexe protéique comprenant des sous-unités α (porteuse du pore et du filtre de sélectivité), (3 et de nombreuses autres protéines partenaires. La localisation de ces canaux ioniques dans les domaines spécialisés de la membrane plasmique est un déterminant important de l'excitabilité cardiaque. Cette dernière est régulée par de nombreuses protéines mais aussi par l'environnement lipidique des canaux. Dans cette étude, nous avons examiné le rôle de la protéine MAGUK SAP97 et du cholestérol membranaire sur la fonction et la localisation des canaux potassiques cardiaques Kv1. 5. Dans l'oreillette humaine le courant lkur est principalement dû à l'activation des canaux Kv1. 5. Nos résultats montrent que la surexpression de la SAP97 dans les cardiomyocytes de rats néonataux entraîne une accumulation des canaux Kv1. 5 endogènes au niveau des contacts cellule-cellule. Cette redistribution des canaux s'associe à une augmentation du courant lkur. A l'aide de la technique de FRAP «Fluorescence Recovery After Photobleaching», nous montrons que la mobilité des canaux Kv1. 5 marqués par la protéine GFP est réduite par la SAP97. Dans les cellules CHO où les canaux Kv1. 5-GFP sont diffus, la SAP97 réduit leur mobilité et les organisent en agrégats (plaque-like clusters). Ces résultats montrent que la SAP97 ancre les canaux Kv1. 5 à la membrane. La déplétion du cholestérol membranaire, par application de la méthyl-ß-cyclodextrine (MCD), entraîne une augmentation du courant IKUF dans les cellules atriales de rat adultes ainsi que dans les cardiomyocytes de rats néonataux transfectés avec Kv1. 5-GFP. Les canaux Kv1. 5 sont faiblement localisés dans les cavéoles du myocarde atrial, et plus abondamment dans les espaces pauvres en cholestérol. Ils sont distribués différentiellement entre les espaces pauvres et riches en cholestérol des membranes, indiquant l'existence de différents compartiments membranaires. La déplétion en cholestérol réorganise les canaux Kv1. 5-GFP en larges clusters à la périphérie de la membrane plasmique des myocytes. Cet effet est rapide, environ 7 minutes, comme le temps nécessaire au MCD pour induire l'augmentation du courant potassique. L'ensemble de ces travaux a permis d'identifier de nouveaux mécanismes responsables de l'organisation des canaux Kv1. 5 dans la membraneIn the heart, ion channels are integral membrane proteins that are responsible for the cardiac electrical activity. Potassium channels are multi-protein complexes constituted by a subunits (the pore-forming and selectivity filter), ß-subunits, and many other partner proteins. Ion channels localization in specialized membrane domains is an important determinant for cardiac excitability. This localization depends on many proteins interactions as well as on the lipid environment of these channels. In the present study, we examined the role of the MAGUK protein SAP97 and the membrane cholesterol on the function and localisation of Kv1. 5 potassium ion channels. In human atrium, Kv1. 5 underlies the ultra rapid rectifier current Ikur. Our results show that, following SAP97 overexpression in neonatal rat cardiomyocytes, endogenous Kv1. 5 subunits are clustered at cell-cell contacts giving rise to an increase in the amplitude of Ikur- Using "Fluorescence Recovery After Photobleaching" (FRAP) technique, we show that Kv1. 5-GFP channel mobility is reduced by SAP97. In CHO cells, where Kv1. 5 channel localization is strongly diffuse, SAP97 reduces channel mobility and organise them in "plaque-like clusters". These results show that SAP97 retains Kv1. 5 in cell membrane. Application of methyl-ß-cyclodextrin (MCD), that induces membrane cholesterol depletion, causes a delayed increase in amplitude of Ikur in isolated rat atrial myocytes as well as in neonatal cardiomyocytes transfected with Kv1. 5-GFP. In atrial cryosections, Kv1. 5 channels are rarely located in caveolae but mainly found in the poor cholesterol fractions showing the existence of different membrane compartments. MCD also caused reorganization of Kv1. 5-GFP into large clusters at the membrane periphery of myocytes. The MCD effect on clusters was sizable around 7 minutes after its application, which is the time necessary to detect an MCD-increase in IKUP amplitude. This work helps to identify novel mechanisms responsible for Kv1. 5 channels organization in the membrane
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M'Zali, Hocine. "Inhibition de la phosphorylation des phosphoinositides et du phosphatidate dans les globules rouges déplétés en cholestérol : incidence sur la forme cellulaire." Paris 11, 1985. http://www.theses.fr/1985PA112316.
Abstract:
La déplétion en cholestérol membranaire (5 à 25%) de globules rouges humains (normalement discocytes) entraîne leur transformation en stomatocytes et sphérostomatocytes. Ces changements morphologiques s’accompagnent de modifications du métabolisme de certains phospholipides de la membrane. Le renouvellement des polyphosphoinositides (PPI) et de l’acide phosphatidique (PA) est étudié par incorporation de phosphate-³²p dans les cellules entières et les activités enzymatiques intervenant dans ce renouvellement sont mesurées dans les membranes isolées. Il est montré que la phosphorylation des PPI et du PA est abaissée par la déplétion en cholestérol. Par contre, leur concentration ainsi que l’activité des kinases et de la phospholipase C ne sont pas affectées. Ceci reflète une diminution du renouvellement de ces phospholipides probablement consécutive à leur délocalisation membranaire qui les rendrait moins accessibles aux enzymes. Des résultats préliminaires sur la morphologie obtenus sur des membranes isolées suggèrent que les PPI peuvent intervenir dans le contrôle de la forme du globule rouge. Il est proposé que les PPI interagissant avec la glycophorine, modulent son interaction avec la protéine 4. 1. Les interactions protéiques entre cytosquelette et membrane seraient modifiées à la suite de la réorganisation des PPI dans la membrane et pourraient être à l’origine des changements de forme observés après la déplétion en cholestérolMembrane cholesterol-depletion (5-25%) of human erythrocytes (normally discocytes) induced their conversion into stomatocytes and spherostomatocytes. These shape changes occurred together with modifications of the metabolism of some membrane phospholipids. The turnover of polyphosphoinositides (PPI) and phosphatidic acid (PA) was studied by I ³²p I –phosphate labelling in intact cells and the enzymatic activities involved in this turnover were measured in isolated membranes. It is shown that the phosphorylation of PPI and PA was decreased by cholesterol depletion. In the contrary their concentration and the activity of the kinases and phospholipase C were not affected. This reflected a decrease in the turnover of these phospholipids probably resulting from their delocalization within the membrane where they are less accessible to the enzymes/ Preliminary results obtained on the morphology of isolated membranes suggest that PPI may be involved in the control of erythrocyte shape. It is suggested that the PPI interacting with glycophorine modulate its interaction with protein 4. 1. The protein-protein interactions between cytoskeleton and membrane would be modified as a consequence of the PPI reorganization in the membrane and could be at the origin of the shape changes observed after cholesterol depletion
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El, Hafidi Mohammed. "Hydropéroxydes d'esters du cholesterol : synthèse - effets sur la prolifération cellulaire." Montpellier 2, 1993. http://www.theses.fr/1993MON20110.
Abstract:
L'oxydation photosensibilisee d'esters du cholesterol et d'acides gras (stearate, oleate, linoleate et alpha-linolenate) ainsi que des esters methyliques correspondants conduit a des esters hydroperoxydes. On obtient des melanges de mono-hydroperoxydes sur la chaine grasse: l'hydroperoxyde est en position 9 ou 10 en serie oleate; 9, 10, 12 ou 13 en serie linoleate; 9, 10, 12, 13, 15 ou 16 en serie alpha-linoleate. En serie stearate, seul se forme le 5 alpha-hydroperoxy-cholesterol. La composition de ces melanges et la structure de leurs composants, ainsi que celle de leurs homologues hydroxyles obtenus par reduction, a ete etablie par rmn, par spectrometrie de masse ou par chromatographie gazeuse couplee a la spectrometrie de masse. L'etude de l'effet de ces esters oxygenes sur la croissance de fibroblastes nrk et de cellules mcf-7 en culture a montre que certains d'entre eux stimulent la proliferation de ces cellules. C'est le cas des esters du cholesterol hydroperoxydes ou hydroxyles sur la chaine grasse ou sur le cholesterol. Les esters methyliques correspondants ont au contraire un effet inhibiteur analogue a celui bien connu des oxysterols libres. Un travail tout-a-fait preliminaire suggere que le mecanisme d'action de ces esters de cholesterol est membranaire et passe par la voie de la pkc
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Hilaire, Nathalie. "Métabolisme cellulaire des lipides neutres cytoplasmiques et myopathie à surcharge lipidique multisystémique." Toulouse 3, 1994. http://www.theses.fr/1994TOU30051.
Abstract:
La revue générale est consacrée au métabolisme des triglycérides et esters de cholestérol cellulaires d'origines exogène et endogène ainsi qu'aux divers systèmes enzymatiques impliques dans leur dégradation. Elle fait également le point sur la myopathie a surcharge lipidique multisystemique, (ou neutral lipid storage disease, nlsd) et sur la maladie de wolman, maladies génétiques présentant respectivement un blocage de la dégradation des triglycérides cytoplasmiques et lysosomiques. Les cellules de ces maladies nous servent de modèle pour les études de compartimentation métabolique. La dégradation des triglycérides et des esters de cholestérol apportes par les hdl dans les fibroblastes semble se produire dans des compartiments subcellulaires extra-lysosomiques similaires a ceux impliques dans la dégradation des triglycérides et esters de cholestérol d'origine endogène. Les triglycérides neosynthetises par la cellule ou apportes par les hdl s'accumulent dans les fibroblastes de nlsd, alors que les esters de cholestérol sont dégrades normalement (febs lett. , 1993, 328, 230-234). Les triglycérides lies aux hdl sont captes sélectivement sans internalisation des apoprotéines (biochem. J. , 1994, 297, 467-473). Il existe deux systèmes enzymatiques différents impliques dans la dégradation des triglycérides endogènes en fonction de la longueur de chaîne des acides gras incorpores. Au dessous de 10 atomes de carbone, les enzymes impliques seraient apparentes a des carboxylesterases (non déficitaire dans la nlsd). Au dessus de 10 atomes de carbone, les triglycérides seraient degrades par la lipase neutre cytoplasmique (déficitaire dans la nlsd). La lipase neutre est transférée du cytosol vers les membranes lors de la charge en acide oléique dans les cellules normales alors que dans les cellules de nlsd elle reste cytosolique. Cette translocation peut être bloquée par des inhibiteurs de la synthèse protéique ainsi que par un inhibiteur de la protéine kinase c. Enfin la dernière partie de notre travail expérimental a consiste en une thérapie génique des cellules de nlsd par transsection avec de l'ADN génomique murin puis sélection des cellules corrigées par photosensibilisation
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Al-Makdissy, Nehmann. "Sphingomyéline, un inducteur potentiel de l'insulino-résistance dans l'adipocyte : implications des gènes du métabolisme glucidiqueet lipidique." Nancy 1, 2002. http://www.theses.fr/2002NAN11324.
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Garrigues, Alexia. "Mécanismes fonctionnels de la P-glycoprotéine : reconnaissance de composés cytotoxiques hydrophobes et interaction spécifique avec la membrane." Paris 11, 2002. http://www.theses.fr/2002PA112056.
Abstract:
La P-glycoprotéine (P-gp) est un transporteur membranaire qui assure la détoxication cellulaire dans différents tissus, en expulsant hors des cellules une grande variété de molécules cytotoxiques hydrophobes. La surexpression de la P-gp dans la membrane plasmique de certaines cellules tumorales est responsable du phénotype MDR (pour " MultiDrug Résistance "). Cette résistance cellulaire due à la P-gp est une des principales causes de l'échec clinique de la chimiothérapie anticancéreuse, ce qui justifie les efforts qui ont été déployés ces dix dernières années pour analyser le fonctionnement de la P-gp. Dans le cadre de ma thèse, j'ai analysé la spécificité de reconnaissance de la P-gp, remarquable par sa capacité à transporter des molécules de différentes structures chimiques. .P-glycoprotein (P-gp) is an active plasma membrane transporter involved in cellular, detoxification in several tissues. It actively expels out of cell a number of cytotoxic molecules, all amphiphilic but chemically unrelated. When P-gp is overexpressed in some cancer cells, it is responsible for the multidrug resistance (MDR) phenotype which reduces the effectiveness of various cytotoxic drugs used in anticancer chemotherapy. In order to identify molecular properties responsible for the binding selectivity of P-gp we combined a molecular modelling approach of several substrates and an enzymatic study. We determined the molecular characteristics of two different pharmacophores in the drug binding pocket of P-gp. This new model shows that the binding on P-gp is governed by the size of the substrates and overall by the intramolecular organisation of the hydrophobic/hydrophilic domains rather than by specific chemical motifs. .
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Ameziane, Le Hir Sarah. "Propriétés d'interactions aux lipides membranaires de sous-domaines de la dystrophine : effet de l'hétérogénéité moléculaire." Rennes 1, 2012. http://www.theses.fr/2012REN1S163.
Abstract:
Les interactions entre les protéines et les lipides sont impliquées dans plusieurs processus biologiques au cours desquels leurs propriétés physicochimiques influencent leur comportement. Dans cette étude nous avons caractérisés des interactions des lipides membranaires avec des fragments du domaine central de la dystrophine humaine. Il s'agit d'une longue protéine musculaire qui joue un rôle déterminant dans la stabilité membranaire et cellulaire au cours de l'effort musculaire. Son absence ou son dysfonctionnement induisent des dystrophies musculaires. Le domaine central est constitué de répétitions hélicales et de charnières flexibles, nous avons étudié plus particulièrement les répétitions 16 à 21 (R16-21). En utilisant différents modèles membranaires et en combinant des méthodes biochimiques et biophysiques, nous avons mis en évidence le rôle de la charnière n° 3 dans l'augmentation de l'affinité des répétitions R16-21 pour les lipides anioniques, ce qui favoriserait la stabilité membranaire et les interactions avec d'autres partenaires. Nous avons montré que le comportement de ce fragment avec les lipides est sensible à la présence de cholestérol et de lipides saturés. Des délétions de R16-21 retrouvés chez des patients, induisent une diminution de la stabilité structurale et un comportement différent avec les lipides par rapport à la protéine native. En conclusion, nous montrons que l'organisation à la membrane du fragment R16-21 de la dystrophine, ou de certains dérivés présents chez des patients myopathes, est modulée par l'environnement lipidique. Les modifications structurales qui en découlent pourraient influencer leur comportement dans la cellule musculaireInteractions between protein and lipids are involved in several biological processes during which physicochemical properties of both partners influence each other behavior. We characterized here the nteractions of fragments of the central rod domain of dystrophin with membrane lipids. Dystrophin is a long muscular protein which plays an important role in the membrane and cellular stability during muscular effort. Its absence or dysfunction due to deletions causes muscular dystrophies. In particular, we studied fragment R16-21 of the central rod domain constituted by helical repeats and by flexible hinges. Using membrane models and combining biochemical and biophysical methods, we highlighted the role of hinge 3 in the increase of the affinity of R16-21 for anionic lipids, which would favor the membrane stability and the interactions with other partners. We showed that the behavior of this fragment with lipids is sensitive to the presence of cholesterol or saturated lipids. Deletions found in patients in this R16-21 fragment were shown to decrease the structural stability and to modify the behavior with lipids compared to the native protein. In conclusion, we show that the organization to the membrane of the R16-21 fragment of dystrophin, or mutated fragments, is modulated by the lipid environment and by their structure and conformation, which confer them different functions in the muscular cell
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Maurin, Lucien. "Interactions moléculaires du cholestérol dans les membranes, à l'aide d'un analogue paramagnétique (antibiotiques polyéniques et cytochrome P-450 S C C." Montpellier 2, 1990. http://www.theses.fr/1990MON20077.
Abstract:
Un nouvel analogue paramagnetique (appele cno) du cholesterol a ete synthetise avec un cycle doxyl en position 25 sur la chaine hydrophobe. Le cno presente sensiblement les memes proprietes physico chimiques que le cholesterol authentique: effets sur la transition de phase de la dimyristoyl phosphatidyl choline, orientation dans une bicouche phospholipidique, permeabilite membranaire augmentee en presence de filipine et l'amphotericine b. Il a ete aussi demontre que le cno est un bon substrat du cytochrome p450scc, une enzyme tres specifique du cholesterol. Les interactions moleculaires entre le cno et deux antibiotiques polyeniques ont ete etudiees par spectroscopie rpe. Dans des proportions stoechiometriques, la filipine rassemble le cno dans une phase presque pure. L'amphotericine b ne reagit pas fortement avec le cno jusqu'a ce que le rapport antibiotique/sterol soit tres eleve et a basse temperature. Ces conclusions ont ete etendues au cholesterol et le cno est apparu comme un bon mime de celui-ci
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Sarr, Fatima Seydou. "Modélisation du mécanisme de diffusion d'une série de statines à travers la membrane cellulaire : approche biochromatographique et thermodynamique." Besançon, 2010. http://www.theses.fr/2010BESA0018.
Abstract:
La modélisation du passage membranaire des xénobiotiques tels que les statines est une nécessité afin d'évaluer leur biodisponibilité et leur pharmacocinétique. Elle se fait grâce à trois types de phases stationnaires remplissant une colonne chromatographique : une membrane artificielle immobilisée (MAI) pour étudier la diffusion passive, une phase stationnaire Oatp2 (Organic anion transporting polypeptide 2) et des phases stationnaires membranaires cellulaires (CMC) constituées d'extraits membranaires d'hépatocytes de rat surexprimés ou non en Oatp2 pour étudier la diffusion facilitée. Ces phases permettront d'analyser et de mieux comprendre les processus physico-chimiques impliqués dans le mécanisme de diffusion des xénobiotiques. Les résultats obtenus ont montré que les interactions gouvernant l'association des statines avec les biomembranes ou les transporteurs membranaires sont de type Van der Waals, hydrogènes et électrostatiques. L'effet hydrophobe joue un rôle majeur sur cette association. Nous avons également montré que le magnésium augmente la diffusion passive des statines mais diminue par contre leur diffusion facilitée. La phase stationnaire Oatp2 modélise la diffusion des statines de manière optimale et similaire à la CMC. Cette nouvelle phase stationnaire Oatp2 plus simple à mettre au point expérimentalement, couplée à une colonne d'analyse séparative classique (type colonne C18) et à un spectre de masse (i. E. , CLHP-Oapt2/CLHP-C18/SM) devrait permettre de faire des études de type " screening " pour trouver et développer des inhibiteurs nouveaux et spécifiques pour chaque membre de la sous-famille des OatpsThe xenobiotic cell membrane passage studies such as statins is needed to assess their bioavailability and pharmacokinetics. It is done through three types of stationary phases filling a chromatographic column : an Immobilized Artificial Membrane (IAM) to study passive diffusion, an Oatp2 stationnary phase (Organic anion transporting polypeptide 2) and cell membrane stationary phases (CMSP) (i. E. Constituted with extracts membrane of rat hepatocytes Oatp2 overexpressed or not to study facilitated diffusion). These studies will analyze and better understand the physical and chemical processes involved in the xenobiotic diffusion mechanism. The results showed that the interactions governing the statin association with biological membranes or transporters are Van der Waals, hydrogen and electrostatic bonds. The hydrophobic effect plays a major role in this association. We have also shown that magnesium increases the station passive diffusion but decreases their facilitated diffusion. The Oatp2 stationary phase models the statin diffusion optimal and similar to the CMC. This new Oatp2 stationary phase easier to develop experimentally, coupled with an analytical column separate classic (type C18) and a mass spectrum (i. E. , CLHP-Oapt2/CLHP-C18/SM) should serve to make studies such as " screening " to find and develop new and specific inhibitors for each member of the Oatp subfamily
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Wolff, Jean. "Un modèle théorique des mélanges ternaires de lipides et de cholestérol." Phd thesis, Université de Strasbourg, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01068363.
Abstract:
Nous proposons un modèle théorique original pour décrire le processus de formation et la coexistence de phase dans les mélanges ternaires de phospholipides et de cholestérol. Ce modèle combine les effets de transitions de phase liquide-gel, décrits à l'aide d'un paramètre d'ordre interne, et les effets de mélange non-idéaux inspirés des modèles de Flory pour décrire l'influence du cholestérol. Notre approche thermodynamique décrit avec un réel succès la coexistence de mélanges phospholipide binaires, tel que DOPC-DPPC. Le paramètre d'ordre inspiré de l'approche de Doniach et de l'analogie avec le modèle d'Ising sous champ magnétique modélise de façon simplifiée la thermodynamique des chaînes alkyles dans la bicouche lipidique. Nous obtenons d'une part des diagrammes ternaires ressemblant aux diagrammes expérimentaux mais aussi la dépendance en température des équilibres de phases. Nous décrivons également des diagrammes pour d'autres espèces, telles que PSM, POPC ou DiphytanoylPC. Notre approche, combinant géométrie discrète et résolution des équations analytiques pour la détermination des caractéristiques des diagrammes de Gibbs est novatrice, et s'applique à une classe étendue de modèles thermodynamiques avec paramètre d'ordre. Nous cherchons ensuite à décrire des systèmes inhomogènes à l'aide d'une généralisation de Ginzburg-Landau du modèle précédent. Une application importante consiste à déterminer la tension de ligne $\tau$ et le profil d'une interface entre macrodomaines de phase liquide ordonné et désordonné. Enfin, nous étendons la théorie du mouillage de Cahn à la description de l'environnement d'une inclusion circulaire de rayon fini $R$ dans un ''océan lipidique'', à coexistence et hors coexistence. Nous discutons pour finir les effets de la proximité du point critique et ses conséquences quant aux interactions entre impuretés induites par les effets de mouillage.
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Berthier, Arnaud. "Etude des voies de signalisation cellulaire induites par les dérivés oxydés du cholestérol : rôle du calcium et des protéines pro-apoptotiques Bad et Bim." Dijon, 2004. http://www.theses.fr/2004DIJOMU08.
Abstract:
Les oxystérols jouent un rôle important dans le développement de la plaque d'athérome en partie par leurs actions pro-apoptotique et pro-inflammatoire vis à vis des monocytes/macrophages. De nombreux travaux ont démontré que l'apoptose induite par le 7-cétocholestérol et le 7béta-hydroxycholestérol empruntait la voie mitochondriale, dont les évènements post-mitochondriaux sont maintenant bien caractérisés. Cependant, les voies de signalisation conduisant à l'activation de ces phénomènes sont encore mal connues. Nos travaux ont permis d'élucider, en partie, les voies de signalisation cellualires induites par le 7-cétacholestérol et le 7béta-hydroxycholestérol, qui, dans les cellules monocytaires leucémiques humaines THP-1, conduisent à leur mort par apoptose. Ils mettent en évidence le rôle de microdomaines membranaires dans l'induction de l'influx calcique, responsable de l'activation des protéines pro-apoptotiques Bad et Bim, mais également de la voie de survie MEK-ERK.
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Ségala, Grégory. "Caractérisation des mécanismes moléculaires impliqués dans l'activité anti-cancéreuse du Tamoxifène et de la Dendrogénine A." Toulouse 3, 2012. http://thesesups.ups-tlse.fr/1694/.
Abstract:
Le tamoxifène (Tam) est l'un principaux médicament utilisé pour le traitement des cancers du sein exprimant les récepteurs des œstrogènes (ER). Des résistances au Tam limitent son utilisation thérapeutique et l'identification des mécanismes responsables de ces résistances nécessite une connaissance approfondie de la pharmacologie du Tam. L'ER est la cible la mieux connue du Tam mais d'autres cibles existent parmi lesquelles le site de liaison des anti-oestrogènes (AEBS : AntiEstrogen Binding Site). L'équipe de Marc Poirot a montré qu'AEBS est impliqué dans les effets anti-cancéreux du Tam par un mécanisme qui fait intervenir le métabolisme des stérols. Au cours de ma thèse, nous avons découvert qu'AEBS porte l'activité enzymatique cholestérol époxyde hydrolase (ChEH) qui catalyse la transformation des cholestérol-5,6-époxydes (5,6-CE) en cholestane-3,5,6-triol. Nous avons montré que le Tam induit une production de 5,6-CE dans les cellules cancéreuses mammaires et stimule leur accumulation en inhibant la ChEH. Les métabolites de 5,6-CE sont des modulateurs du récepteur nucléaire des oxystérol LXRß. Nous avons caractérisé l'implication de LXRß dans les effets différenciants et cytotoxiques du Tam et montré une dérégulation de cette voie dans une lignée cellulaire résistante au Tam. En parallèle, nous avons découvert que le 5,6-CE alpha est métabolisé dans les tissus sains en Dendrogénine A (DDA), qui est le premier alkaloïde stéroïdien découvert chez les mammifères, et qui est absente dans les tissus tumoraux ce qui suggère un lien entre le métabolisme de la DDA et l'oncogenèse. Nous avons observé que la DDA a une forte activité anti-tumorale sur des cancers du sein et sur des mélanomes métastatiques en provoquant la différenciation et la mort cellulaire, ce qui a motivé son développement pour une utilisation thérapeutique. Nous avons identifié que LXRß est une cible directe de la DDA et nous avons établi que la cytotoxicité de la DDA dépend de LXRß et fait intervenir une apoptose ainsi qu'une autophagie cytotoxique. La caractérisation des mécanismes d'action du Tam et de la DDA pourront permettre une utilisation thérapeutique optimale de ces deux molécules ainsi que le développement de nouvelles thérapies anti-cancéreuses personnaliséesTamoxifen (Tam) is one the leading drug used for the treatment of estrogen receptor (ER)-positive breast cancers. Resistances to Tam limit its therapeutic use and the identification of mechanisms involved in these resistances requires an accurate knowledge of its pharmacology. ER is the best-known target of Tam but other targets exist such as the Antiestrogen Binding Site (AEBS). Marc Poirot's team showed that AEBS is involved in the anti-cancerous effects of Tam by a mechanism that induced a perturbation in sterol metabolism. During my thesis, we discovered that the AEBS carried out the cholesterol-5,6-epoxide hydrolase (ChEH) activity which catalyzes the transformation of 5,6-epoxy-cholesterol (5,6-EC) into cholestane-3,5,6-triol. We showed that Tam induced the production of 5,6-EC in tumor cells and stimulated their accumulation through ChEH inhibition. We found that some 5,6-EC metabolites were modulators of the oxysterols nuclear receptor LXRß. We characterized the involvement of LXRß in the anticancer action of Tam and showed a deregulation of this oxysterol signaling pathway in a Tam-resistant cell line. At the same time, we discovered that one 5,6-EC was metabolized in normal tissue into Dendrogenin A (DDA), the first steroidal alkaloid discovered in mammals, but DDA was found absent in neoplastic tissues, suggesting a link between DDA metabolism and oncogenesis. We found that DDA has a strong anti-tumor potency on breast cancers and metastatic melanoma through the induction of tumor cell differentiation and death, which prompted its development for clinical applications. We demonstrated that LXRß is a direct target of DDA and established that the cytotoxicity of DDA was LXRß-dependent and involved apoptosis and cytotoxic autophagy. The characterization of the mechanisms of action of Tam and DDA will allow an optimal therapeutic use of these two molecules and also the development of new personalized anti-cancer therapies
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Scholler, Joulie Aline. "La protéine Niemann-Pick type C1a est requise pour la réception du signal Hedgehog chez Drosophila melanogaster." Nice, 2007. http://www.theses.fr/2007NICE4107.
Abstract:
Les membres de la famille des protéines Hedgehog (Hh) sont des morphogènes qui contrôlent la prolifération cellulaire et l’organisation des tissus à la fois chez les insectes et les vertébrés. Par conséquent, la dérégulation de leurs fonctions est responsable de nombreuses pathologies incluant différents types de cancers et de malformations embryonnaires. Hh active une voie de signalisation à l’aide d’un complexe de réception dans lequel le rôle de chacune des protéines est encore mal compris. C’est pourquoi, au cours de ma thèse, je me suis particulièrement intéressée à la réception du signal Hh. J’ai travaillé sur l’homologue de la protéine de Niemann-Pick C1 chez la drosophile, dNPC1a. Chez l’homme, NPC1 est l’un des gènes dont l’altération est responsable de la maladie neuro-viscérale de Niemann–Pick. J’ai pu montrer, pour la première fois, que l’inactivation de la protéine dNPC1a bloque la transduction du signal Hh. D’après la fonction connue de NPC1, et parce que Hh est modifiée de façon covalente par une molécule de cholestérol, nous pensions avoir découvert une nouvelle passerelle entre le cholestérol et la signalisation Hh. Cependant, mes résultats prouvent que dNCP1a n’est pas requise pour l’addition du cholestérol sur la protéine Hh ni n’affecte la sécrétion de Hh. En revanche, dNPC1a est requise dans les cellules réceptrices du signal Hh, et agit en amont du récepteur de Hh, Ptc. Elle potentialise la liaison de Hh à des cellules exprimant Ptc et les corécepteurs d’Hh tels que Ihog. J’ai ainsi pu montrer un effet synergétique entre dNPC1a, IHog et Ptc pour la réception d’Hh où dNPC1a et Ptc nécessiteraient Ihog pour une association maximale à Hh. L’ensemble de ces résultats met en évidence un nouveau rôle de la protéine dNPC1a au sein du complexe de réception du signal Hh. Cette étude ouvre ainsi de nouvelles voies pour une meilleure compréhension du mécanisme de réception d’HhMembers of the hedgehog (hh) gene family encode secreted proteins that control cell proliferation and patterning in both insects and vertebrates. Dysregulation of Hh signaling activity is responsible for numerous pathologies including several types of cancer and developmental malformations. The receptor complex for Hh includes many proteins, and the function of each protein is still not clearly understood. During my Thesis, I analysed further the role of the proteins involved in Hh reception. My work focused on the Drosophila homolog of the Niemann-Pick C1 gene, dNPC1a. In humans, the alteration of NPC1 gene is responsible of the neuroviserale, Niemann-Pick type C disease. NPC1 protein is required for cholesterol export from the late endosome/lysosome system, affecting, in consequence, cholesterol homeostasis. Moreover, it has been shown that this NPC1 function is conserved in Drosophila. I showed for the first time that the dNPC1a loss of function inhibits Hh signalling. As NPC1 may function in cholesterol homeostasis and because Hh is the only known molecules to be naturally covalently modified with a cholesterol moiety, we thought we had identified a new link between cholesterol homeostasis and Hh signalling. However, our results show that dNPC1a is not required for the modification of Hh by cholesterol or for Hh secretion. On the contrary, we provide evidence that dNPC1a acts in the Hh receiving cells at the same level as, or upstream of, the Hh receptor Patched (Ptc) and colocalizes with the Hh-Ptc complex in internalised vesicles. Moreover, in the presence of Ptc, dNPC1a enhances the binding of Hh protein to cells expressing another component of the Hh reception machinery, Interference Hedgehog (Ihog). Our data show a synergistic effect between dNPC1a, Ihog, and Ptc for Hh binding. Together these data indicate that dNPC1a influences Hh pathway activity by modulating Hh signal reception. During my thesis, I have identified a new role of dNPC1a within the Hh reception complex. I hope, this story will contribute to a better understanding of the mechanism of Hh reception
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André, Aurore. "Etude de l'influence de l'environnement lipidique sur la fonctionnalité et l'organisation membranaire des récepteurs mu et delta aux opioïdes." Toulouse 3, 2009. http://thesesups.ups-tlse.fr/542/.
Abstract:
Il est aujourd'hui bien connu qu'il existe des compartimentations latérales au sein même de la membrane, définissant des domaines. Une grande attention a été portée ces dernières années à des domaines membranaires particuliers, les " rafts ". Ces domaines enrichis en cholestérol et sphingolipides seraient impliqués dans certains processus de signalisation cellulaires qui nécessitent un transfert de l'information à la fois spécifique et efficace, comme c'est le cas notamment des RCPG. Dans cette étude, le rôle de l'environnement lipidique sur l'activité de deux RCPG, les récepteurs humains µ et d aux opioïdes (hMOR et hDOR) a été recherché. Des fractions enrichies en cholestérol (DRM) ont été analysées après extraction à froid en TX-100 de membranes cellulaires et la présence des récepteurs hMOR ou hDOR a été recherchée. Les données indiquent que peu de hDOR et hMOR sont retrouvés dans ces fractions à l'état basal, mais la redistribution d'une partie de ces récepteurs dans les DRM, dépendante de l'association des récepteurs aux protéines G, est observée après activation par leur ligand agoniste. Les données de pharmacologie obtenues après modulation de la teneur en cholestérol des membranes contenant ces récepteurs ont montré clairement un effet de la déplétion en cholestérol sur la fonctionnalité de hMOR et hDOR. Enfin, pour mieux cerner le rôle du cholestérol dans la distribution et l'activité des récepteurs, l'influence d'un autre stérol, l'ergostérol, a été étudié. Une modulation éventuelle de l'activité du récepteur hDOR par l'épaisseur de la membrane a été analysée en reconstituant le récepteur dans des liposomes ayant des lipides de longueur de chaînes variablesNumerous evidences show the existence of lateral heterogeneities within the plasma membranes defined as lipid domains. Among these, lipid rafts, have been extensively studied. They are characterised by an enrichment in cholesterol and sphingolipids, and are depicted as fluid plaforms that segregate membrane components involved in a particular signaling process, like signal transduction of GPCR, promoting the specificity and the efficiency of the response. Here we study the role of the lipidic environment on the activity of two GPCRs, namely human mu and delta opioid receptors (hMOR and hDOR). Cholesterol, which is a main component implicated in the formation of rafts, was here the subject of a particular interest. Membranes fractions that were enriched in cholesterol (DRM) were analysed after cold extraction by TX-100 of cellular membranes. The data we obtained show that hMOR and hDOR are found in DRM at a basal state. In contrast, when activated by an agonist, a relocalisation of a fraction of these receptors is observed in DRM and we show that this phenomenon is dependant of the association of these receptors with G-proteins. The analysis of pharmacological properties of hDOR and hMOR upon cholesterol depletion show clearly that some pool of receptors need cholesterol for function. To complete these data, we next examined whether this effect was due to direct interactions of the receptors with cholesterol or membrane thickness. To test this assumption, we have investigate the effect of ergosterol on hMOR and hDOR pharmacology and the acyl-chain length of the phospholipids on the function of the reconstituted hDOR
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Caron, Jérôme. "Hépatocytes différenciés à partir de cellules souches pluripotentes : un modèle d’études physiopathologiques et de thérapie génique et cellulaire - Application à l'hypercholestérolémie familiale de type IIA." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2017. http://www.theses.fr/2017SACLS533/document.
Abstract:
La modélisation de maladies métaboliques hépatiques et les approches de thérapie cellulaire nécessitent de disposer d’une source fiable et illimitée d’hépatocytes. Grâce à leurs propriétés spécifiques, les cellules souches pluripotentes peuvent représenter une telle source. Nous avons tout d’abord mis au point une approche originale pour différencier une lignée de cellules souches embryonnaires humaines européenne, générée en conditions GMP-compatibles, en hépatocytes fonctionnels in vitro et in vivo après transplantation dans un modèle murin d'insuffisance hépatique aiguë. Nous avons ensuite utilisé les cellules souches pluripotentes induites (iPSC) spécifiques d’un patient homozygote pour une mutation entrainant une absence de récepteur des lipoprotéines de basse densité (RLDL) afin de modéliser l'hypercholestérolémie familiale (HF) in vitro. Nous avons amélioré notre approche pour différencier ces iPSC en hépatocytes plus matures et polarisés car les hépatocytes sont les seules cellules capables de dégrader le cholestérol via la bile. Nous avons montré que ce modèle reproduit la physiopathologie de l'HF et établit la preuve de concept de la correction génétique ciblée par la technologie CRISPR/Cas au locus AAVS1 par la restauration de l’expression, inductible par les statines, et de la fonctionnalité du récepteur. Nous avons également mis en évidence que le RLDL ne semble pas impliqué dans l'entrée du virus de l'hépatite C (VHC) mais plutôt dans les étapes tardives de la morphogénèse virale. Ce modèle pourra désormais servir à l’étude physiopathologique de différents patients HF, au criblage de nouvelles drogues hypocholestérolémiantes et antivirales ainsi qu'à de nouvelles approches thérapeutiquesLiver metabolic diseases modeling and cell therapy approaches require a a reliable and well-characterized cell source. Due to their specific properties, pluripotent stem cells represent a credible alternative to primary human hepatocytes. Thus, we have defined a new approach to differentiate a European human embryonic stem cell line, generated in GMP-compatible conditions, into hepatocytes that are functional in vitro and in vivo after transplantation into a murine model of acute liver failure. We have then used induced pluripotent stem cells from a homozygous patient with a mutation leading to an absence of the low-density lipoproteins receptor (LDLR) to model familial hypercholesterolemia type IIA (FH) in vitro. As hepatocytes are the only cells able to metabolize cholesterol into bile acids, we have improved our approach to differentiate these iPSC into hepatocytes displaying cell functional organization and polarization. We have shown that our model reproduced FH physiopathology and have also restored, by the genetic targeted correction at the AAVS1 locus using CRISPR/Cas technology and subsequent hepatocyte differentiation, the LDLR expression – inducible by statins - and functionality. Moreover, we have demonstrated that the LDLR does not seem to be involved in hepatitis C virus entry or replication but rather in viral morphogenesis steps. This model will be useful to develop new cholesterol-lowering and antiviral drugs as well as new cell therapy options. Furthermore, it can be applied to similar studies for other liver metabolic disorders
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Kedjouar, Blandine. "Le site microsomal de liaison des antioestrogènes (AEBS) : participation au métabolisme du cholestérol, implication dans le contrôle de la prolifération." Toulouse 3, 2002. http://www.theses.fr/2002TOU30063.
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Roussi, Stamatiki. "Etude de la signalisation cellulaire de l'apoptose induite par le 7β-hydroxysitosterol et le 7β-hydroxycholesterol dans les cellules cancéreuses coliques humaines." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2006. https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2006/ROUSSI_Stamatiki_2006.pdf.
Abstract:
Il est reconnu que la consommation des légumes peut contribuer à la diminution de risque du développement du cancer colorectal. Les hydroxyphytostérols sont issus de végétaux et ils ont des similitudes structurales avec les oxydes du cholestérol. Des formes oxydées du cholestérol et des phytostérols sont présentes dans l’alimentation et pourraient avoir des conséquences physiopathologiques encore mal connues. Le 7-OHsitostérol (7-OHsito) et le 7-OHcholestérol (7-OHchol) sont les oxydes les plus répandus. Ce travail de thèse a consisté à comparer l'activité de ces deux molécules sur les mécanismes impliqués dans la régulation de la croissance des cellules cancéreuses coliques humaines, Caco-2. Les cellules Caco-2 ne présentent pas la même sensibilité pour les deux hydroxystérols. Nous observons 50% d'inhibition de croissance à 60 µM pour le 7-OHsito et à 30 µM pour le 7-OHchol. Ils induisent l’apoptose en perturbant les membranes mitochondriales et lysosomiales. Le 7-OHsito déclenche une apoptose caspases-dépendante alors que le 7-OHchol active une apoptose caspases-indépendante associée à une production du stress oxydatif. Les deux processus sont indépendants de l’expression des protéines Bcl-2 et Bax. Nous avons également étudié l’impact de ces molécules sur le métabolisme des polyamines qui est fortement activé au cours de la cancérogenèse colique. Les enzymes de la biosynthèse des polyamines sont inhibées alors que le catabolisme est activé par les deux hydroxystérols. Seule la perturbation du métabolisme des polyamines provoquée par le 7-OHchol pourrait être liée à l’apoptose. La perturbation du métabolisme par le 7-OHsito pourrait être associée à l’apoptose sans l’influencer. Les deux hydroxystérols inhibent la croissance des cellules Caco-2 via l'activation de voies apoptotiques différentes malgré leur similitude structurale. Les différences dans les mécanismes d’action des deux hydroxystérols pourraient être liées à leur degré d’hydrophobicitéToday, it is well recognized that consumption of fruits and vegetables may contribute to the reduction of colon carcinogenesis. The phytosterols oxides are present in plants and they present structural similarities with cholesterol oxides. Cholesterol and phytosterols oxides have unknown physiopathologic properties. The 7-hydroxysitosterol (7-OHsito) and the 7-hydroxycholesterol (7-OHchol) are the most widespread oxides. Our study was aimed to compare the biological activity of both compounds on the mechanisms involved in the regulation of human colon cancer cell death. Our results have shown that the colon cancer Caco-2 cells did not exhibit the same sensibility towards hydroxysterols. In fact, we observed a 50% growth inhibition in the presence of 7-OHsito at 60µM and 7-OHchol at 30µM. Loss of mitochondrial membrane potential and lysosomal membrane integrity were observed in the presence of both compounds. The 7-OHsito induced a caspase-dependent apoptosis whereas, the 7-OHchol induced a caspase-independent apoptosis associated with oxidative stress production. All processes were independent of Bcl-2 and Bax protein expression. We also studied the impact of both compounds on polyamine metabolism which is highly activated during colon carcinogenesis. Our data showed that two key enzymes involved in polyamine biosynthesis are inhibited, whereas polyamine catabolism was enhanced by both hydroxysterols. These data indicate that polyamine metabolic perturbations triggered only by 7-OHchol are related to apoptotic cell death. In return, polyamine metabolism perturbations induced by 7-OHsito seem to be associated to apoptosis initiation of apoptosis without affecting it directly. In conclusion, both hydroxysterols inhibit the growth of human colon cancer cells (Caco-2) via different apoptotic pathways in spite of their structural similarities. The two hydroxysterols exhibit different lipophilic properties which may explain their different biological effects
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Lecigne, David. "Conception et évaluation de nouveaux peptides internalisants." Thesis, Montpellier 1, 2011. http://www.theses.fr/2011MON13501.
Abstract:
Le peptide Tat est un des "cell penetrating peptides" (CPP) les plus utilisés pour l'internalisation cellulaire de diverses molécules cargos. La molécule chimérique (Tat-cargo) induit une réponse biologique plus efficace comparée au cargo seul. Cependant, en marquant le peptide Tat à l'iode 125, il a été déterminé que seulement moins de 1 % de la quantité initiale de peptide est internalisé. Il y a donc une opportunité d'augmenter l'efficacité de cette internalisation. L'étape cruciale du processus d'internalisation est le passage transmembranaire. Cette thèse présente l'évaluation de l'impact d'un groupement hydrophobe intégré en différentes positions au peptide Tat, afin de favoriser son interaction avec la membrane. Un acide aminé modifié chimiquement comportant un groupement cholestéryle a été développé dans ce sens. Cet aminoacide peut être intégré en toute position du peptide Tat. Différentes positions au sein du peptide Tat ont été cholestérylées et l'effet sur le taux d'internalisation a été étudié par cytométrie en flux et par comptage suite au radiomarquage des peptides à l'iode 125.L'ajout de cholestérol en position centrale du peptide Tat induit une efficacité d'internalisation supérieure d'un facteur 30 alors qu'une augmentation moindre est observée suite à l'ajout du groupement hydrophobe en positions latérales, N- ou C-terminaleThe Tat peptide is one of the most used cell penetrating peptides for internalizing various cargo molecules into cells. The chimaeric molecule thus triggers an efficient cellular biological response when compared with the cargo molecule alone. However, following labeling of the Tat peptide with radiolabeled iodine, less than 1% of the external peptide was internalized. Therefore, there is an opportunity to improve the level of CPP internalization. The ultimate step is the crossing through the plasma membrane. This thesis presents an evaluation of the impact of a hydrophobic group incorporated at different positions to Tat peptide, to promote its interaction with the membrane.A chemically modified amino acid comprising a cholesteryl group was developed in this direction. This amino acid can be inserted at any position within the Tat peptide. Different positions within the Tat peptide were cholesterylated and the effect on the internalization rate of Tat CPP was investigated by flow cytometry and by counting following the radiolabeling of peptides with iodine 125.The addition of cholesterol in the central position of the peptide Tat induces internalization efficiency than a factor of 30 while a smaller increase was observed after the addition of hydrophobic group in lateral positions, N-or C-terminus
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Syeda, Farisa. "Capacité du plasma à promouvoir l'efflux du cholestérol cellulaire en période postprandiale chez l'homme normolipidémique sous régimes contrôlés : rôle des acides gras alimentaires, des enzymes de transfert des lipides et des lipoprotéines plasmatiques." Paris 11, 2001. http://www.theses.fr/2001PA112339.
Abstract:
Les maladies cardiovasculaires représentent une des principales causes de morbidité et de mortalité dans les pays industrialisés. La nutrition peut largement influencer certaines de ces facteurs de risques. Dans le cadre d'études de mesures de prévention des maladies cardiovasculaires nous avons étudié chez les sujets sains, normalipidémiques,le rôle des acides gras alimentaires dans l'évolution des facteurs de risque plasmatiques à l'état à jeun et en période postprandiale. En parallèle, la capacité d'épuration du cholestérol cellulaire par les lipoprotéines plasmatiques a été évaluée. Les résultats de cette étude montrent que les régimes contenant des apports stables en acides gras mono et poly insaturés (mono insaturés : 11% à 16% d'AET et poly insaturés : 5% à 6% d'AET), permettent de maintenir à un niveau bénéfique,les facteurs plasmatiquesDietary lipids are able to affect fasting and postprandial lipoprotein metabolism in a significant way, thereby modifying the risk of cardiovascular disease, a major cause of morbidity and mortality. The aims of the present study were firstly to evaluate in normolipidemic healthy men, the qualitative effect of dietary fatty acids on fasting and postprandial lipid parameters, in order to define an optimal range of monounsaturated fat supply and secondly to determine the role of postprandial lipoprotein modifications in the mechanisms involved in the reverse cholesterol transport. Our results showed that in conditions of balanced and stabilized dietary fat supply comprising 11% to 16% monounsaturated, associated with 5-6% polyunsaturated fatty acids ( of total energy intake),plasma lipid parameters
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Brand, Céline. "Une nouvelle cible de TGF(bêta)1 dans le contrôle de la stéroidogenèse corticosurrénalienne : StAR (protéine régulatrice du transport intramitochondrial du cholestérol)." Université Joseph Fourier (Grenoble ; 1971-2015), 1998. http://www.theses.fr/1998GRE10137.
Abstract:
La famille des facteurs de croissance transformant (tgf) est constituee d'une trentaine de peptides dimeriques qui controlent la croissance et la differenciation de nombreux types cellulaires. Tgf1 est un regulateur autocrine de la steroidogenese qui inhibe l'expression de la steroide 17-hydroxylase (p-450c17). Au cours de ce travail, j'ai identifie une nouvelle cible de tgf1 dans la voie de biosynthese des hormones corticosteroides : star (steroidogenic acute regulatory protein), une proteine mitochondriale indispensable au transfert du cholesterol de la membrane externe a la membrane interne de la mitochondrie. Dans les cellules fasciculo-reticulees bovines, tgf1 diminue le niveau d'expression de l'arnm de star de facon dependante du temps et de la concentration. Cette regulation requiert une neosynthese proteique. L'etude comparative de la regulation par tgf1 de l'expression de star et de p-450c17 apres differents jours de culture in vitro des cellules fasciculo-reticulees bovines indique que, dans les conditions les plus proches de la physiologie, star est la cible majeure de tgf1. Le mecanisme moleculaire de regulation de l'expression de star par tgf1 a ete etudie par diverses approches experimentales. Le facteur de transcription sf-1 (steroidogenic factor-1) ne semble pas implique dans cette regulation. Par contre, smad3, une proteine cytoplasmique phosphorylee par les recepteurs de tgf1, reproduit l'inhibition de l'expression de star dans la lignee cellulaire humaine nci-h295r et semble etre indispensable a cet effet de tgf1. Il est possible que ces observations originales puissent etre generalisees a d'autres types cellulaires endocriniens (testicules, ovaire) ou une action de tgf1 sur le transport du cholesterol a ete suggeree.
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Rosignoli, Carine. "Effets des androgènes et des agonistes des récepteurs nucléaires PPARs sur la fonction de la glande sébacée in vivo." Montpellier 1, 2002. http://www.theses.fr/2002MON1T017.
Abstract:
Les glandes sebacees sont des glandes holocrines constituees de cellules epitheliales specialisees appelees sebocytes. Leur developpement est sous la dependance d'hormones et plus particulierement des androgenes. Les sebocytes sont capables de se differencier en accumulant des lipides dans leur cytoplasme jusqu'a leur eclatement conduisant a la secretion du sebum. L'accumulation du sebum est l'un des facteurs principaux responsables du developpement des lesions primaires de l'acne. Recemment, comme le recepteur aux androgenes, les recepteurs ppars ont ete decrits pour jouer un role dans la mise en place des glandes sebacees et dans la differenciation des sebocytes in vitro. Notre travail a donc consiste a caracteriser les effets des androgenes et des recepteurs ppars au niveau de l'activite de la glande sebacee in vivo en utilisant le modele de la glande sebacee de l'oreille de hamster syrien. Nos etudes ont permis de mettre en evidence que l'augmentation de la taille des glandes sebacees en reponse aux androgenes etait liee a une induction concomitante de la proliferation et de la differenciation des sebocytes. De plus, l'augmentation de la synthese des lipides sebaces par les androgenes a ete correlee a une augmentation selective de l'expression d'enzymes clefs impliquees dans le metabolisme du cholesterol et des acides gras ainsi qu'a une activation de la maturation des facteurs de transcription srebps. Le mecanisme d'action des androgenes sur la maturation des facteurs srebps reste cependant a decouvrir. Parallelement, nos etudes ont mis en evidence que seul le recepteur pparγ etait capable de reguler in vivo la proliferation ainsi que la differenciation des sebocytes, un effet potentialise par les androgenes et correle a une augmentation coordonnee de l'expression de nombreuses enzymes du metabolisme lipidique. Toutefois, l'induction de la transcription de ces enzymes n'a pas ete reliee a une regulation de la maturation des facteurs srebps par le recepteur pparγ.
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Girard, Emmanuelle. "Caractérisation de nouveaux régulateurs du transport intracellulaire du cholestérol : mise en évidence du rôle de la dynamine et des GTPases Rab7 et Rab9." Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00923162.
Abstract:
Le transport intracellulaire du cholestérol et sa distribution correcte au niveau des différentes membranes sont essentiels pour assurer de nombreuses fonctions cellulaires. Malgré l'importance de ce transport les mécanismes de sa régulation restent encore mal connus. L'objectif de cette thèse était de mieux caractériser les acteurs du transport intracellulaire du cholestérol. Dans ce contexte, nous nous sommes intéressés à deux acteurs de ce transport : la dynamine et les Rab GTPases. Dans la première partie de la thèse nous avons utilisé le dynasore, un inhibiteur pharmacologique de la dynamine pour étudier le rôle de la dynamine dans le contrôle du transport endolysosomal dans les cellules HeLa et les macrophages humains. Nous avons ainsi confirmé le rôle de la dynamine dans la sortie du compartiment endolysosomal et la régulation de l'homéostasie du cholestérol. Dans la deuxième partie de la thèse, nous avons étudié le rôle de Rab7 et de Rab9 dans le transport du cholestérol en utilisant la technique d'ARN interférence ainsi que l'expression de mutants dominant négatifs. Nous avons montré qu'en plus de son rôle classique dans les étapes tardives du transport du cholestérol, Rab7 contrôle les étapes précoces du transport endosomal. Enfin, nous avons évalué le rôle de Rab7 dans notre modèle de macrophages humains surchargés. Nous avons mis en évidence un effet limité de l'inactivation de Rab7 sur le contrôle de l'homéostasie du cholestérol mais à l'inverse un effet majeur pour l'efflux du cholestérol vers l'apo AI. En conclusion, notre étude a permis de mieux caractériser le transport vésiculaire du cholestérol et de démontrer son importance dans la régulation de l'homéostasie intracellulaire en cholestérol. Nos résultats permettent également d'établir le rôle critique de Rab7 dans le trafic des LDL au niveau des endosomes précoces.
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Le, Guyader Laurent. "Utilisation de sondes pyréniques in vivo pour caractériser l'état de phase global de la membrane plasmique de cellules eucaryotes : application à la détection de la liaison d'agonistes au récepteur "delta" opioïde murin." Toulouse 3, 2007. http://thesesups.ups-tlse.fr/53/.
Abstract:
Le développement d'outils de criblage de nouvelles molécules capables d'induire une réponse cellulaire identique à celle d'un ligand (agoniste, antagoniste. . . ) est un enjeu important pour la recherche pharmaceutique. Les principales cibles utilisées aujourd'hui sont les récepteurs trans-membranaires couplés aux protéines G (RCPG) dont l'activation déclenche une cascade de réactions intracellulaires (signalisation). L'objectif de ce travail de thèse est la détection de l'initiation de la signalisation cellulaire par spectrométrie de fluorescence pour le récepteur ??opioïde murin (mDOR) qui induit un changement conformationnel responsable d'un épaississement de sa partie transmembranaire lors de la signalisation, au niveau de la membrane plasmique de cellules eucaryotes in vivo. Ce changement est supposé générer des modifications de phase lipidique de la membrane plasmique lors de cette interaction RCPG/agoniste, avec des redistributions locales de certains lipides comme le cholestérol, conduisant à la génération d'une phase liquide-ordonnée (lo). Pour cela deux nouvelles sondes fluorescentes membranaires de la famille des Pyrènecholestérol ont été synthétisées, le 3?-hydroxy-pregn-5-ène-21-(1-méthylpyrényl)-20-one 1 et le 3?-hydroxy-pregn-5-ène-21-(1-méthylpyrényl)-20-méthylidène 2. Dans un premier temps la comparaison du comportement de ces sondes vis-à-vis du cholestérol a été analysée dans différentes membranes modèles phospholipidiques. Les données de microcalorimétrie et de RMN-2H indiquent que ces composés induisent des perturbations des lipides comparables à celle du cholestérol. Les données d'absorption, combinées à la propriété hypochromique du chromophore pyrène ont permis de mettre en évidence un comportement auto-associatif du cholestérol dépendant du degré de saturation des chaînes acyles. De plus ces sondes sont plus idéalement miscibles dans les phases lo. Dans un deuxième temps la sensibilité du spectre d'émission de fluorescence à la polarité de l'environnement a été vérifiée et mise à profit dans des membranes modèles pour discriminer les membranes en phase ld de celles en phase lo (où la polarité du coeur de la membrane est plus faible). Enfin, l'incorporation de la sonde 2 dans la membrane plasmique de cellules vivantes CHO qui sur-expriment mDOR, a permit le suivi dans le temps, par spectrofluorimétrie de la perturbation de phase induite par un agonisteThe development of tools for the screening of new receptors’ agonists is a major issue for pharmaceutical research. Currently, the main targets used are the G-protein coupled receptor of the plasma membrane which the activation trigger the signaling pathways involved in many cell functions. The goal of this thesis is the detection, using a spectrofluorometry approach in vivo, of the signaling pathway ignition by the mouse delta opioid receptor (mDOR). DOR is assumed to generate a relocalisation of some lipids (cholesterol) while agonist binding leading to the formation of a liquid-ordered phase (lo). Thus two fluorescent probes have been synthesized, which the 3beta-hydroxy-pregn-5-ene-21-(1-methylpyrenyl)-20-methylidene. Data from calorimetry and RMN-2H studies show that this probe induces the same lipid membranes disturbance than cholesterol. Absorption data of the probe allowed the assessment of a self-association process of cholesterol in model membranes, which is as a function of the acyl-chains saturation degree of phospholipids. Then the polarity sensitive property of the probe has been used to distinguish between ld and lo phases in model membranes. Finally, we incorporated the probes in CHO cells over-expressing mDOR to monitor, by fluorescence spectroscopy, the mean phase state change of the plasma membrane triggered by a mDOR agonist. This is the first step of a new screening approach
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Duclos, Sandrine. "Effets des proliférateurs de péroxysomes sur la régulation du cholestérol et de son métabolisme dans des modèles cellulaires d'origine hépatique." Dijon, 1997. http://www.theses.fr/1997DIJOS077.
Abstract:
La synthèse et le catabolisme du cholestérol impliquent, dans certaines étapes, des enzymes localisées dans les peroxysomes. L'objectif de notre travail a été de caractériser l'effet sur ce métabolisme du ciprofibrate, hypolipémiant et puissant proliférateur de peroxysomes. Dans la première partie, nous avons validé pour leur réponse péroxysomale au ciprofibrate, les lignées d'hépatome de rat FAO et MH#1c#1, et la lignée d'hépatoblastome humain HEP2. Cette réponse a été évaluée au niveau ultrastructural par une analyse de la taille, du nombre et de la forme des peroxysomes et au niveau biochimique par une étude de l'expression de l'AOX, enzyme marqueur de la prolifération des peroxysomes. Les lignées FAO et HEPG2 possédant des réponses comparables à celles in vivo chez le rat et l'homme respectivement, sont des modèles adaptés à l'étude des différences interespèces dans l'effet du ciprofibrate. La seconde partie concerne l'effet du ciprofibrate sur la synthèse des acides biliaires, dans des hépatocytes de rat cultivés en milieu riche en lipides (SVF), et en milieu appauvri en lipides (SD). Le ciprofibrate diminue la conversion de cholestérol (#1#4c) exogène en acides biliaires radiomarqués, en milieu SD seulement, mais ne modifie pas la production globale des acides biliaires, en milieu SD ou SVF. De plus, le ciprofibrate modifie l'équilibre entre la voie neutre et la voie acide de synthèse des acides biliaires, favorisant la voie neutre engagée par la 7 alpha-hydroxylase et qui produit les acides cholique et chénodésoxycholique. Le dernier volet aborde la régulation par le ciprofibrate d'une des enzymes clés de la cholestérogenèse, la farnesyl pyrophosphate (FPP) synthase, dans différents modèles cellulaires. L'activité FPP synthase est stimulée par le ciprofibrate dans les cultures d'hépatocytes de rat, ainsi que dans les lignées de rat MH#1c#1 et humaine HEPG2. La régulation s'effectue au niveau transcriptionnel et l'induction est réprimée par le 25-hydroxycholesterol.
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Buard, Isabelle. "Relevance of glial cells in cellular mechanisms underlying the Niemann-Pick type C disease." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2006. https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2006/BUARD_Isabelle_2006.pdf.
Abstract:
La maladie de Niemann-Pick type C (NPC) est une pathologie rare caractérisée par une hépatosplénomégalie progressive et une dégénérescence du système nerveux central due à des mutations dans le gène npc1. Chez les malades, les tissus montrent une accumulation intracellulaire anormale de cholestérol et de glycosphingolipides. Dans le cervelet, les cellules de Purkinje sont spécifiquement affectées, présentant une dégénérescence massive et une morphologie dendritique anormale. Il reste encore à déterminer la raison pour laquelle une déficience en NPC1, protéine qui interviendrait dans le transport intracellulaire de cholestérol, induit la neurodégénérescence. Une question importante est si les neurones meurent de façon autonome ou dû à des interactions neurone-glie défectueuses. Nous avons postulé que le cholestérol issu de la glie serait nécessaire pour la formation et le maintien des synapses et qu'une privation de NPC1 induirait une perte des synapses et ainsi, la mort neuronale. Pour tester cette hypothèse, nous avons établi des nouvelles cultures primaires de neurones cerebelleux isolés de la glie à partir de souris postnatales. Grâce à l'utilisation d'un modèle murin pour NPC, ces cultures nous ont permis de déterminer l'importance de NPC1 sous forme fonctionnelle dans les neurones et les cellules gliales pour le développement et la fonction des synapses. Afin d'étudier les synapses, nous avons enregistré l'activité synaptique dans les cellules granulaires (GCs) et de Purkinje (PCs) par la méthode du voltage imposé en configuration cellule-entière. En absence de glie, seules les GCs ont établi des connections synaptiques. Les cellules gliales ont favorisé le développement des synapses entre GCs et PCs indépendamment de la présence de NPC1 fonctionnelle dans les neurones ou dans la glie. En revanche, l'absence de NPC1 dans les GCs et/ou dans la glie a altéré dramatiquement la synaptogenèse entre les GCs. Basée sur ces résultats, nous proposons l'hypothèse suivante: l'altération, suivie par la dégénérescence, des PCs dans la maladie de NPC serait causée par un développement ou une fonction déficiente des synapses au niveau des GCsNiemann-Pick type C disease (NPC) is a rare autosomal recessive lysosomal storage disease due to mutations in the npc1 gene. NPC patients show progressive hepatosplenomegaly and central nervous system degeneration and abnormal intracellular accumulation of cholesterol and glycosphingolipids in different tissues. In the cerebellum, Purkinje cells are specifically affected showing abnormal dendritic morphology and a high rate of cell death. So far, it is unclear how a defect in NPC1, which is thought to mediate the intracellular transport of cholesterol, causes neurodegeneration. An important question is whether neurons die in a cell-autonomous manner or due to a breakdown of neuron-glia interactions. We have postulated that glia-derived cholesterol is necessary for the synapse formation and maintenance and that a defect in NPC1 causes loss of synapses and subsequently neuronal cell death. To test this hypothesis, we established new glia-free primary cultures of immunoisolated cerebellar neurons from postnatal mice. These cultures together with a mouse model of NPC allowed to determine the relevance of functional NPC1 in neurons and glial cells for synapse development and function. To study synapses, we recorded synaptic activity in granule cells (GCs) and Purkinje cells (PCs) by whole-cell patch-clamp. In the absence of glia, only GCs but not PCs formed synaptic connections. Glial cells promoted development of synapses between GCs and PCs independently from the presence of functional NPC1 in neurons or in glia. In contrast, absence of NPC1 in GCs and/or in glia impaired dramatically synaptogenesis between GCs. Based on our results, we hypothesize that the impairment and ultimately degeneration of PCs in NPC is caused by deficient synapse development or function in GCs
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Lesage, Denis. "Transfert d'acides nucléiques dans des modèles cellulaires tumoraux in vitro et in vivo par des liposomes cationiques à base de cholestérol." Paris 13, 2003. http://www.theses.fr/2003PA132003.
Abstract:
Le transfert d'acide nucléique dans les cellules est une problématique importante pour le succès des thérapies géniques. Les vecteurs synthétiques et en particulier les liposomes cationiques développés pour ces applications offrent désormais une alternative aux vecteurs viraux. Nous avons développé de nouveaux liposomes à base de dérivés cationiques du cholestérol et évalué leurs capacités à transfecter différents modèles cellulaires in vitro et in vivo. Ces liposomes originaux et en particulier ceux contenant le triéthylaminopropane carbamoyl cholestérol iodure ont montré leur efficacité en transportant jusqu'au noyau un plasmide exogène observé in situ par une technique immunogold. Ces liposomes, grâce à l'optimisation de leur rapport de charge permettent la transfection de tumeurs induites chez la souris Nude. Pour ces essais, l'interférence de l'hémoglobine avec la chimioluminescence du gène rapporteur luciférase a été corrigée par une nouvelle technique développée spécialement. Ces liposomes sont non toxiques et comparés à des formulations commerciales, ils ont une efficacité supérieure qui peut encore être augmentée par l'utilisation de la poly-L-lysine ou du polyéthylène glycol. Ces liposomes pourront être utilisés pour le transport d'acides nucléiques thérapeutiques tels que des oligonucléotides leurres. Nous avons étudié les propriétés d'une de ces molécules développée spécifiquement pour inhiber le facteur de transcription NF-kB. Dans un modèle de cellule lymphoblastoide, ce leurre reconnaît spécifiquement la sous unité p50 et induit l'apoptose. Cette molécule pourrait constituer en combinaison avec les liposomes cationiques un nouvel agent antitumoral.
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Martinez, Laurent. "Caratérisation et purification de récepteurs hépathiques aux lipoprotéines de haute densité(HDL)." Toulouse 3, 2001. http://www.theses.fr/2001TOU30071.
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Casiraghi, Marina. "Functional modulation of a G protein-coupled receptor conformational landscape in a lipid bilayer." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2016. http://www.theses.fr/2016USPCC138/document.
Abstract:
Les récepteurs couplés aux protéines G (GPCRs en anglais) représentent la famille de récepteurs intégrales de membrane plus vaste dans la majorité des cellules eucaryotes. Ils jouent un rôle clé dans la transduction de signal, ainsi que la compréhension de leur mécanisme de signalisation représente une des questions principales dans la biologie d'aujourd'hui. Dans la caractérisation du paysage énergétique de ces récepteurs à l'échelle atomique, les structures cristallographiques publiées pendant la décennie dernière par cristallographie aux rayons X représentent la percée scientifique majeure et donnent une contribution fondamentale dans la biologie structurelle de GPCRS. Ces structures représentent un point de départ précieux dans la compréhension du mécanisme de transduction de signal, en plaçant des structures dans l'ensemble conformationnel de ces récepteurs le long du processus d'activation. Pour compléter ce cadre de structures statiques qui correspondent aux états à basse l'énergie et fortement peuplés, une caractérisation de l'ensemble conformationnel et des barrières cinétiques qui sont associées est un point nécessaire et fondamentale. À ce but nous proposons une approche innovant avec la finalité d'observer le paysage conformationnel dynamique des GPCR et étudier la modulation de ces récepteurs par des ligands et des lipides, qui sont connus pour jouer un rôle clé dans la structure et les fonctions des protéines de membrane (e.g.). Un des outilles le plus approprié pour explorer les barrières cinétiques de GPCR c'est la résonance magnétique nucléaire (RMN) en solution. Pour tirer profit au mieux de cette technique, nous avons utilisé des sondes marqués 13CH3 immergées dans un environnement perdeuteré, qui constitue le marquage isotopique le plus approprié en RMN pour examiner les paysages conformationnels des protéines de grosses dimensionnes ou des complexes de protéines. Nous avons choisi Escherichia coli comme système d'expression pour sa capacité de pousser dans des conditions très hostiles comme des solutions 100%-D2O. Pour surmonter les difficultés habituellement rencontrées lors de l'expression des GPCRs, nous avons appliqué un protocole innovant qui cible l'expression de GPCRs directement aux corps d'inclusion. Ceci permet la production des bonnes quantités de protéines (jusqu’à 6 mg/litres de culture de pur 13CH3-u-2H-GPCRs). Une fois purifié, le récepteur est foldé en amphipols et transféré ensuite à une double couche lipidique appelée nanometric lipid bilayer ou nanodisc (NLB). De façon très important, les mesures pharmacologiques quantitatives indiquent que les récepteurs incorporés dans des NLBs après ce protocole sont stables et entièrement actifs dans les conditions des expériences de NMR.Les investigations par RMN conduites sur le GPCR en NLB ont donné lieu à une résolution jamais obtenue dans le domaine, grâce à la biochimie finement accordée et à la perdeuteration du récepteur. Selon les données obtenues, notre récepteur modèle, le récepteur 2 pour le leukotriene B4 (BLT2), est capable d'explorer plusieurs conformations différentes, même dans l'état pas lié aux ligands, y compris l'état actif. Ce paysage conformationnel est également modulé par des ligands et des lipides. Dans le cas spécifiques, nous avons observé que un incrément dans le contenu de stérol dans la membrane modifie la distribution des différents états conformationnels du récepteur, en favorisant l'état actif, qui indique une régulation allosteric positif du stérol sur l'activation de ce récepteur, comme confirmé aussi par les mesures de liaison du GTP à la protéine G. Cette propriété du stérol est probablement importante pour le contrôle de mécanisme de signalisation de GPCRsG protein-coupled receptors (GPCRs) are the largest family of integral membrane protein receptors present in most eukaryotic cells. They play a key role in signal transduction and understanding their signalling mechanism represents one of the main issues in biology today. In the characterization of the energy landscape of these receptors, at the atomic scale, X-ray crystal atomic structures published during the last decade represent the major breakthrough and contribution in the structural biology of GPCRs. They represent a precious starting point in the understanding of the mechanism of signal transduction by placing structures in the conformational ensemble of these receptors along the activation pathway. To complete these static snapshots that correspond to low energy and highly populated states, a characterization of the whole conformational ensemble and associated kinetic barriers is fundamental to complete the picture. To this aim we proposed an innovative approach to observe GPCRs dynamic conformational landscape and how it is modulated by ligands and lipids, that are known to play a key role in membrane protein structures and functions (e.g.). One of the most appropriate tool to explore GPCR kinetic barriers is solution state NMR. To do so, we used 13CH3 probes immersed in a perdeuterated environment, the most appropriate isotope-labelling scheme to investigate conformational landscapes of large proteins or protein complexes with this spectroscopy. We chose Escherichia coli as expression system for its ability to grow in very hostile conditions like 100%-D2O solutions. In order to overcome the usual expression issues concerning GPCRs, we applied an innovative protocol which targets the expression directly to inclusion bodies. This allows the production of high amounts of proteins (up to 6 mg/litre of culture of pure 13CH3-u-2H-GPCRs). Once purified, receptors are folded in amphipols and then transferred to nanometric lipid bilayers or nanodiscs. Importantly quantitative pharmacological measurements indicate that receptors embedded in NLBs following this protocol are stable and fully active in the conditions of the NMR experiments. NMR investigation of a GPCR in a NLB gave rise to a resolution never achieved in the field thanks to a fine tuned biochemistry and a perdeuteration of the receptor. According to our data, the prototypical receptor, the leukotriene B4 receptor (BLT2), is able to explore multiple different conformations, even in the unliganded state, including the active state. This conformational landscape is further modulated by ligands and lipids. In particular, we observed that an increment in the sterol content of the membrane modifies the distribution of the different conformational states of the receptor in favour of the active one, indicating a positive allosteric regulation of the sterol on the activation of this receptor, as confirmed by GTP-to-G protein binding measurements. This property of the sterol is likely important for the control of the signalling properties of GPCRs
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Cypriani, Benoit. "Effet de l'oestradiol et des anti-oestrogènes sur la biosynthèse de cholestérol par des lignées de cellules tumorales : relation avec la présence de récepteurs aux oestrogènes et de sites de liaison aux anti-oestrogènes." Montpellier 2, 1988. http://www.theses.fr/1988MON20198.
Abstract:
Les effets de l'stradiol (e2) et des anti-strogenes hydroxy-tamoxifene (oh-tam) et ly 117018 ont ete etudies sur la cholesterogenese de 4 lignees cellulaires. E2 stimule la cholesterogenese dans les cellules de cancer de sein mcf-7 (e2-dependantes) et non dans les cellules bt20 (e2-independantes). Si la stimulation de la cholesterogenese, qui se manifeste en 8 h, affecte aussi bien l'etape de l'enzyme clef (hmgcoa reductase) que les etapes posterieures, seule l'etape de l'enzyme clef semble etre mediee par le recepteur a l'e2. Les anti-strogenes inhibent en 15 mn la cholesterogenese des cellules mcf-7 et bt20, et ce uniquement aux etapes post-hmgcoa reductase. Sachant que oh-tam inhibe la proliferation des cellules mcf-7 et non celle des cellules bt20, nous concluons que, dans nos conditions de culture, la synthese de cholesterol n'est pas necessaire a la proliferation. Les 3 lignees (mcf-7, bt20, htc) dont la cholesterogenese s'avere sensible a l'oh-tam contiennent des sites de liaison aux anti-strogenes (aebs); la seule lignee (nrk) resistant a l'oh-tam ne contient pas d'aebs. Il pourrait donc exister un lien entre l'inhibition de la cholesterogenese par oh-tam et la presence d'aebs
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Pouvreau, Sandrine. "Régulation du couplage excitation-contraction par le cholestérol et l'oxyde nitrique dans la fibre musculaire squelettique de souris." Phd thesis, Université Claude Bernard - Lyon I, 2005. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00011998.
Abstract:
Le couplage excitation-contraction (EC) du muscle squelettique s'articule sur les interactions entre le détecteur de potentiel membranaire (récepteur des dihydropyridines, DHPR), et le canal calcique du réticulum (récepteur de la ryanodine, RyR). Le DHPR est localisé dans les tubules transverses et les cavéoles, deux structures sarcolemmales enrichies en cholestérol. De plus, les cavéoles contiennent la synthase de l'oxyde nitrique (NO). Le travail présenté apporte des éléments nouveaux concernant la modulation fonctionnelle du couplage EC par le cholestérol et le NO, à l'aide d'une approche d'électrophysiologie cellulaire combinée à des mesures de fluorescence. La teneur membranaire en cholestérol régule les fonctions de canal calcique et de détecteur de potentiel du DHPR. Le NO cible spécifiquement le RyR. À des niveaux physiologiques, il module l'activation du canal lors d'une dépolarisation ; en excès, il maintient certains RyR en configuration activée
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Gueddari, Nai͏̈ma. "Mise en évidence et expression du récepteur aux LDL dans des lignées tumorales humaines : étude de sa régulation dans la lignée d'adénocarcinome pulmonaire A549." Toulouse 3, 1993. http://www.theses.fr/1993TOU30160.
Abstract:
Des sites de liaison aux ldl ont ete mis en evidence dans les lignees tumorales humaines d'origine epitheliale a549, mcf 7, igrov 1 et ovccr. L'analyse des resultats par la methode de scatchard revele une heterogeneite dans les affinites et les capacites de fixation maximale de ces sites dans ces lignees. Cette heterogeneite est retrouvee au niveau des taux d'arnm specifique du rldl exprimes par ces lignees. Les sites de liaison aux ldl exprimes par la lignee a549 sont sujets a une regulation par retrocontrole par les sterols. Cette regulation est relativement faible par rapport a celle observee dans les fibroblastes. Le nombre de sites et le taux d'arnm specifique, plus eleves en presence de cholesterol, sont moins stimules, lors d'une deprivation en cholesterol, que dans les fibroblastes. Cependant lorsque les cellules sont aussi deprivees en cholesterol endogene (biosynthese bloquee par la compactine), la capacite de liaison et le taux d'arnm specifique sont a nouveau stimules dans les cellules a549 mais pas dans les fibroblastes. Cette stimulation est abolie en presence de ldl. Par ailleurs, l'inhibition de l'activite tyrosine kinase entraine une baisse du nombre de sites rldl associee a une disparition d'arnm specifique. Ces travaux apportent des arguments en faveur d'anomalies de fonctionnement du rldl dans les cellules a549 qui aboutissent a leur surexpression dans un milieu contenant des lipoproteines. D'autre part, ils mettent en lumiere l'importance de l'activite de l'hmgcoa reductase et le role de la voie des tyrosine kinases dans la regulation de l'expression du rldl dans ces cellules
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Mas, Emmanuel. "Transport entérocytaire des lipides : rôles de SR-BI et de MTP." Toulouse 3, 2010. http://thesesups.ups-tlse.fr/954/.
Abstract:
L'absorption intestinale des lipides fait intervenir différentes protéines. Nous nous sommes intéressés au rôle du scavenger receptor class B type I (SR-BI) et à celui de la microsomal triglyceride transfer protein (MTP). Les souris qui surexpriment SR-BI spécifiquement au niveau de l'intestin ont des taux de lipides plasmatiques qui varient en fonction du fond génétique (C57BL/6J et DBA/2J). Lors d'un croisement en retour, nous avons mis en évidence par étude de polymorphisme des régions chromosomiques influençant ces paramètres lipidiques. Deux enfants ayant une abétalipoprotéinémie sont hétérozygotes composites avec des mutations de MTP qui entraînent une délétion de l'exon 6 ou 10. Les protéines mutantes sont présentes au niveau du réticulum mais non fonctionnellesSeveral proteins are involved in intestinal lipid absorption. We studied the roles of the scavenger receptor class B type I (SR-BI) and of the microsomal triglyceride transfer protein (MTP). Plasma lipid levels of mice overexpressing SR-BI specifically in the intestine differ according to their genetic background (C57BL/6J and DBA/2J). We performed a polymorphism screening of backcrossed mice and we found quantitative trait loci associated with plasma lipid levels. We characterized 2 children with an abetalipoproteinemia. They are compound heterozygote with 2 mutations of MTP resulting in a deletion of exon 6 or 10. Mutant proteins are present at the reticulum; they lost their triglyceride transfer function
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Lakomy, Daniela. "Modulation des cellules dendritiques et macrophages : implications dans le cancer et l'athérosclérose." Phd thesis, Université de Bourgogne, 2010. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00938649.
Abstract:
Au cours de ma thèse, j'ai étudié la fonction cytotoxique des cellules dendritiques (DC) de patients cancéreux comparée à celle de sujets sains. Nous avons montré que les DC générées à partir des monocytes du sang périphérique peuvent acquérir des capacités cytotoxiques importantes après activation par des faibles doses de LPS. Le potentiel cytotoxique des DC générées à partir de patients cancéreux est comparable à celui de sujets sains. Nous avons identifié le mécanisme de cytotoxicité qui fait intervenir la production de peroxynitrite. Après avoir tué les cellules tumorales, les DC phagocytent des fragments tumoraux, surexpriment des molécules de costimulation et induisent la prolifération des lymphocytes. Un deuxième axe de recherche au cours de ma thèse a consisté en l'étude des macrophages inflammatoires et de leur implication dans l'athérosclérose. Les macrophages sécrètent la CETP (cholesteryl ester transfert protein), protéine-cible des récepteurs LXR (liver X receptor). Nous avons montré que l'expression de la CETP, en réponse aux agonistes LXR, n'est pas augmentée dans les macrophages inflammatoires. Ceci suggère que les macrophages inflammatoires ne participeraient pas à l'augmentation du pool plasmatique de CETP en cas de traitement par des agonistes LXR.
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Delaunay, Jean-Louis. "Rôle des microdomaines membranaires dans le ciblage apical de la nucléotide pyrophosphatase NPP3 dans les cellules MDCK." Phd thesis, Université Pierre et Marie Curie - Paris VI, 2007. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00429983.
Abstract:
La membrane plasmique des cellules épithéliales polarisées comporte deux domaines distincts, le domaine apical et le domaine basolatéral. Chaque domaine a une composition en lipides et en protéines déterminée, leur permettant d'assurer des fonctions spécifiques. Les mécanismes moléculaires responsables du tri et de l'adressage des protéines transmembranaires vers le pôle apical sont encore mal connus. La membrane apicale est enrichie en glycosphingolipides et en cholestérol qui forment des microdomaines appelés « rafts ». Expérimentalement, les rafts peuvent être isolés sous forme de DRM (detergent-resistant membranes) définis par leur résistance à un détergent non ionique, le Triton X-100. Il a été proposé que les rafts recrutent les protéines apicales au niveau du réseau trans-golgien et servent de plateforme pour leur adressage au pôle apical. Effectivement les protéines ancrées par le glycosylphosphatidyl-inositol sont résistantes au Triton et sont localisées en général à la membrane apicale. En revanche, la plupart des protéines transmembranaires apicales sont solubles dans le Triton, bien qu'elles soient résistantes à l'action de détergents plus doux comme le Lubrol WX. L'objectif des travaux de thèse a été d'étudier le rôle des rafts dans l'adressage apical de protéines transmembranaires et de comprendre l'effet différentiel du Triton et du Lubrol sur leur solubilisation. Les nucléotides pyrophosphatases NPP1 (basolatérale) et NPP3 (apicale) exprimées de façon stable dans les cellules MDCK ont servi de modèles. NPP3 est insoluble dans le Lubrol et partiellement insoluble dans le Triton, tandis que NPP1 est essentiellement solubilisée. L'étude de la localisation et de la sensibilité aux détergents de mutants et de chimères combinant des domaines cytoplasmiques, transmembranaires et extracellulaires de NPP3 et NPP1, a montré qu'il n'existait pas de corrélation stricte entre l'adressage apical et la résistance aux détergents. La résistance de NPP3 à la solubilisation par le Lubrol est acquise précocement au cours de sa biosynthèse, indépendamment de sa destination finale. Cette résistance dépend d'acides aminés chargés positivement situés dans la queue cytoplasmique, proches de la membrane. Afin de comprendre la sélectivité du Triton et du Lubrol dans l'extraction des protéines et des lipides membranaires, la composition lipidique des DRM obtenus après extraction par le Triton et le Lubrol a été comparée. Les DRM extraits par le Triton et le Lubrol sont enrichis en cholestérol ce qui correspond à la définition des rafts. Cependant, les DRM Triton sont appauvris en lipides du feuillet interne tandis que les DRM Lubrol sont enrichis en phosphatidyléthanolamine. Les DRM Lubrol sont également enrichis en protéines associées au feuillet interne de la membrane. En conclusion, ces travaux montrent que la résistance de la protéine apicale NPP3 à l'extraction par le Lubrol, et en partie par le Triton, est une propriété intrinsèque qui correspond probablement à une adaptation de la protéine à la composition lipidique du domaine apical, mais que cette propriété ne détermine pas son adressage polarisé. De plus, ces travaux montrent que les détergents sont des outils très intéressants pour étudier les interactions entre les protéines et les lipides membranaires, mais qu'il n'existe probablement pas de détergent capable d'isoler de façon stricte des microdomaines membranaires tels que sont définis les rafts. Nos résultats suggèrent que le feuillet interne des rafts est enrichi en phosphatidyléthanolamine et en cholestérol, qu'il est en partie solubilisé par le Triton, ce qui déstabiliserait les protéines transmembranaires et entraînerait leur extraction. Mots clés: détergent, raft, , ciblage apical, cholestérol, microdomaine membranaire, feuillet interne de la membrane, phosphatidyléthanolamine.
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Gentil, Dit Maurin Alice. "Propriétés différentielles de la VE- et de la N-cadhérine dans l'endothelium vasculaire." Phd thesis, Université Joseph Fourier (Grenoble), 2010. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00507102.
Abstract:
L'intégrité de l'endothelium vasculaire est maintenue par des structures d'adhérence jonctionelle, notamment les jonctions adhérentes, dont la VE-cadhérine est le constituant majeur. Cette cadhérine est exclusivement exprimée dans les cellules endothéliales et joue un rôle clé au cours de la formation du plexus vasculaire. Les cellules endothéliales expriment également une autre cadhérine : la N-cadhérine. Bien que possédant une forte homologie structurale avec la VE-cadhérine, celle-ci possède une localisation subcellulaire originale pour une cadhérine classique puisqu'elle est localisée de manière diffuse au niveau de la membrane. Dans le développement vasculaire, elle pourrait ainsi permettre le recrutement des cellules murales par l'endothelium conduisant à la stabilisation du vaisseau. Mon travail de thèse a été d'analyser les propriétés différentielles de ces deux cadhérines dans la cellule endothéliale ainsi que le mécanisme d'exclusion jonctionelle de la N-cadhérine. Nous avons montré que la VE- et la N-cadhérine interagissent similairement à l'- et à la -caténine mais à l'inverse, p120 caténine lie préférentiellement la VE-cadhérine. Cette propriété confère à la VE-cadhérine la capacité d'exclure la N-cadhérine de la jonction interendothéliale. D'autre part, nous avons montré qu'une petite proportion de la VE-cadhérine est enchâssée dans des microdomaines riches en cholestérol : les radeaux lipidiques, à laquelle p120 est très fortement associée. Cette fraction pourrait représenter un pool de VE-cadhérine assurant la stabilité de la jonction et le maintien de la force cohésive entre cellules endothéliales. Nous avons également montré dans un modèle de différenciation cellulaire dérivé des cellules ES murines (embryonic stem cell), que l'expression de la VE-cadhérine était nécessaire à l'expression d'autres gènes endothéliaux : PECAM, Flk-1 et Tie-1. La VE-cadhérine exercerait un contrôle transcriptionel de l'expression de ces gènes mais le mécanisme exact de régulation n'a pas pu être décrypté. L'ensemble de ce travail permet donc de montrer un autre visage de la VE-cadhérine dans la biologie de l'endothelium qui serait de réguler des protéines-clé de l'endothelium.
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Garcia-Castillo, Maria Daniela. "Mechanisms of Endosomal Membrane Translocation Leading to Antigen Cross-presentation." Thesis, Paris 11, 2014. http://www.theses.fr/2014PA11T075.
Abstract:
Dans l'introduction, diverses voies de trafic intracellulaire et endocytose seront discutées. Je familiarise le lecteur avec des protéines inactivant les ribosomes, en mettant l'accent sur la structure, l'endocytose, et le trafic intracellulaire de la toxine bactérienne Shiga toxin (STX). STx et la ricine suivent la voie rétrograde pour exercer leur effet toxique sur les cellules. Ils sont respectivement, une menace maladie infectieuse pour la santé humaine et des outils potentiels pour le bioterrorisme pour lequel aucun antidote n’existe actuellement. D'un criblage à haut débit, Retro-1 et Retro-2 avaient déjà été identifiés comme de puissants inhibiteurs de la voie rétrograde à l'interface des endosomes précoces-TGN, et Retro-2 a été démontré pour protéger les souris contre la ricine. Parmi les facteurs de trafic analysés, seule la protéine SNARE syntaxine-5 a été ré- localisée dans les cellules traitées avec Rétro - 2In the introduction, various endocytic and intracellular trafficking pathways will be discussed. I acquaint the reader with ribosome-inactivating proteins, with emphasis on the structure, endocytosis, and intracellular trafficking of the bacterial toxin Shiga toxin (STx). STx and ricin follow the retrograde route to exert their toxic effect on cells. They are respectively, an infectious disease threat to human health and potential tools for bioterrorism for which no antidote currently exists. From a high throughput screening, Retro-1 and Retro-2 had previously been identified as potent inhibitors of the retrograde route at the early endosomes-TGN interface, and Retro-2 was demonstrated to protect mice against ricin. Of the trafficking factors analyzed, only the SNARE protein syntaxin-5 was re-localized in Retro-2 treated cells. Yet, whether syntaxin-5 is the direct target of Retro-2 and whether its re-localization was directly responsible for retrograde transport inhibition remained to be established