Academic literature on the topic 'Chromatographie colonne'

<p style="text-align: justify;">La méthode d'analyse des acides aminés du vin par chromatographie gaz-liquide mise au point en 1979 par LHUGUENOT reste intéressante, bien que la tendance actuelle soit l'utilisation de la chromatographie liquide haute performance (SANDERS,1985; TRICARD, 1986). Cette technique également rapide est toutefois coûteuse.</p><p style="text-align: justify;">Il nous a semblé opportun d'améliorer la méthode LHUGUENOT, en mettant à profit les développements récents en chromatographie gaz-liquide.</p>

<p style="text-align: justify;">Nous nous sommes intéressés à certaines nuances aromatiques caractéristiques des vins de Sauvignon. En utilisant le couplage de la chromatographie en phase gazeuse à la détection odométrique en sortie de colonne, nous avons mis en évidence dans des extraits de vins de Sauvignon une zone odorante rappellant le buis et le bourgeon de cassis. Une méthode, basée sur la mesure de la durée de perception de cette odeur caractéristique au cours de l'analyse odométrique, permet d'apprécier son intensité dans les vins. Nous démontrons ainsi le rôle de la souche de levure qui réalise la fermentation alcoolique sur l'intensité de l'arôme variétal des vins de Sauvignon.</p>

Le long de la côte méditerranéenne française du Golfe du Lion, l'étang de Thau présente des caractères assez particuliers. Il est parfois soumis à des conditions anoxiques appelées "malaigues" qui résultent de l'accumulation de matières organiques durant la période chaude liée au développement des macrophytes. Ces dépôts organiques associés aux biomasses résultant des activités conchylicoles et aux apports extérieurs contribuent en cours d'année aux échanges biogéochimiques entre la colonne d'eau et les dépôts. Dans ce même milieu, l'analyse de la distribution et de la nature de la matière organique par des méthodes fines comme la chromatographie liquide haute performance ou la pyrolyse a permis de préciser son origine et son évolution dans la colonne d'eau et les dépôts. Durant les quatre saisons, les particularités de la matière organique ont donc été analysées en terme d'accumulation, de dégradation et de conservation. L'été constitue une période de production et de dégradation. L'automne est principalement caractérisé par des processus dégradatifs et des apports terrigènes (composés phénoliques). L'hiver correspond à une période de relative stabilité de la matière organique consécutive aux conditions froides. Le printemps enfin représente une période de reprise de l'activité biologique produisant une matière organique fraîche riche en sucres. Sous les tables conchylicoles on observe un accroissement de la matière organique dans la colonne d'eau et les dépôts. Mais les processus actifs de dégradation réduisent considérablement la quantité de matière organique déposée. Les résultats de ces mécanismes varient selon les stations sous table et hors table. Dans les dépôts les résultats de la dégradation dans la colonne d'eau amènent à une décroissance des composés biodégradables et à un accroissemenet des composés résistants comme les phénols et les hydrocarbures aromatiques. Ces processus de minéralisation s'accroissent vers la profondeur dans les dépôts au profit du pôle aromatique. Les relations entre les nutriments et la matière organique qui constitue à la fois leur source et leur puits se marquent bien sous les tables conchylicoles où les sels nutritifs s'accumulent en surface.

Des antigènes solubles obtenus à partir des endozoites de cultures de Besnoitia besnoiti ont été identifiés après leur purification partielle par chromatographie par affinité. Un éluat spécifique obtenu à partir de cette méthode sur une colonne à laquelle avaient été fixés des anticorps provenant du sérum d'une vache naturellement infectée, a montré 7 bandes de polypeptides par électrophorèse (SDS-PAGE). Cinq bandes ont été observées dans l'éluat à partir d'un immuno-adsorbant auquel avaient été couplés des anticorps provenant d'un veau expérimentalement infecté. Les antigènes de l'éluat ont donné une réaction dans le test ELISA. La réactivité des antigènes séparés par électrophorèse avec des sérums bovins inoculés avec les endozoites, et des sérums provenant de cas de besnoitiose contractée sur le terrain, a été étudiée par immunotransfert selon la technique de WESTERN.

<p style="text-align: justify;">Les travaux dans lesquels la Chromatographie Liquide Haute Performance (CLHP) a été appliquée à l'analyse des acides organiques des vins sont répertoriés. Une méthode de CLHP en phase inverse, avec détection en UV à 214 nm est étudiée. En raison de la complexité de la composition du vin, il faut purifier les échantillons en les décolorant au charbon avant le passage à travers une colonne échangeuse d'anions. Les résultats obtenus par cette méthode pour les acides tartrique, malique et lactique sont plus proches de ceux des méthodes enzymatiques que de ceux que l'on obtient par les méthodes usuelles de l'OlV.</p><p style="text-align: justify;">La teneur en acides tartrique, malique, lactique et acétique de 72 vins blancs, 63 vins rouges et 43 vins rosés provenant de cépages espagnols est rapportée.</p><p style="text-align: justify;">+++</p><p style="text-align: justify;">The works in which the HPLC has been applicated to the analysis of the organic acids of wines are given. A method of HPLC in inverse phase, with detection in UV at 214 nm is studied. In reason of the complexity of the wine composition samples must be purified. For tartaric, malic, lactic acids the results got by HPLC and enzymatic method are little different contrary to OIV usual methods.</p><p style="text-align: justify;">The content in tartaric, malic, lactic and acetic acids of 72 white wines, 63 red wines and 43 rose wines issue trom Spanish variety is related.</p>

La D-bêta-hydroxybutyrate déshydrogénase (BDH) est une protéine membranaire mitochondriale. Elle est située sur la face interne de la membrane interne, fortement liée à la membrane. C'est une oxydoréductase à NAD+ (H). Elle intervient dans le métabolisme des corps cétoniques en catalysant la transformation du D-bêta-hydroxybutyrate et de l'acétoacétate. Une nouvelle technique a été mise au point pour extraire et purifier cette enzyme à partir de mitochondries de foie de chamelon. Elle consiste en une chromatographie sur colonne en deux étapes : la première sur matrice échangeuse d'ions (DEAE-sephacel) la seconde sur matrice hydrophobe (phényl Sépharose CL 4B). Les résultats obtenus ont montré que la BDH délipidée est inactive ; elle ne retrouve son activité qu'en présence de phospholipides contenant des lécithines. La BDH a été reconnue par un anticorps polyclonal anti BDH mitochondriale de foie de rat. La masse moléculaire de l'enzyme a été estimée à 70 000, par électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de sulfate de dodécyl de sodium. La masse moléculaire et les conditions optimales de réactivation de la BDH sont différentes par rapport à celles déjà obtenues chez d'autres espèces.

Abstract A liquid chromatographic method with fluorescence detection was developed for the determination of cinnamyl anthranilate in perfumes and other fragrance compositions. The method was evaluated by conducting recovery studies of 10 different commercial fragrance compositions to which cinnamyl anthranilate had been added at levels of 0.1, 0.5, and 1.0 mg/mL. Recoveries ranged from 91 to 103% with a mean of 97% and a standard deviation of ±3.3%.

L'ultrafiltration et la chromatographie d'exclusion stérique haute performance sont utilisées pour la séparation et la caractérisation des composés organiques présents dans les lixiviats de centres d'enfouissement technique de déchets ménagers. Le fractionnement de la matière organique est obtenu sur des colonnes type TSK PW, en élution eau pH 4 et eau-méthanol. La spectroscopie en UV-visible et en fluorescence, un détecteur évaporatif à diffusion de lumière sont utilisés pour la caractérisation des fractions. Cette méthode rapide de séparation associée à une multidétection permet une mise en évidence, dans les fractions issues de l'ultrafiltration, de composés organiques caractéristiques. Dans la fraction de poids moléculaires inférieurs à 1000 Daltons, trois familles sont détectées. Les substances humiques et les protéines sont les principaux groupes présents dans la fraction de poids moléculaires supérieurs à 10000 Daltons.

Etude critique des differents types de reacteurs post-colonne utilises. Detection de nanomoles de sucres par exploitation du deplacement bathochrome provoque par la formation de complexe entre le sucre et le reactif cuprammonique. Application a la chicoree, aux parois de staphylocoques et aux maltooligosaccharides

La chromatographie de partage centrifuge (CPC) est un procédé de séparation liquide-liquide sans support solide utilisant deux phases liquides non miscibles composé de deux ou plusieurs solvants. La colonne de CPC consiste en une succession de volumes (ou cellules) reliés en eux par des canaux. La phase stationnaire liquide est maintenue à l'intérieur des cellules sous l'action d'un champ d'accélération centrifuge. La seconde phase dite mobile est pompée à travers. Le processus chromatographique intervient dans chaque cellule lors de la mise en contact des deux phases. Notre collaboration avec un équipementier (Rousselet-Robatel) a pour but de rationaliser le choix du design et des dimensions de la cellule et d'optimiser le nombre de cellules composant la colonne. Notre étude traite d'abord de l'hydrodynamique des phases dans les cellules. Les observations réalisées via un rotor transparent et une chaine d'acquisition stroboscopique permettent de déterminer l'influence des grandeurs caractéristiques de la cellule sur l'écoulement et de prédire la transition d'un régime d'écoulement film vers un spray. Dans un second temps, une étude des performances chromatographiques de différents appareils est réalisée et permet d'établir des règles de dimensionnement de la cellule et de la colonne, ainsi que de mettre en place une méthodologie de changement d'échelle. La dernière partie de ce mémoire traite d'une problèmatique lié à l'industrialisation de la technique et abouti à la mise en place d'un protocole de nettoyage en place de la CPC et à sa validation
Centrifugal partition chromatography (CPC) is a support free liquid-liquid separation process, which works with two immiscible liquid phases made by mixing two or more solvents. A CPC column consists in a series of small volumes (cells), connected by ducts. The stationary liquid phase is kept in the celles thanks to the centrifugal acceleration. The mobile phase is pumped through it. The chromatographic process occurs in each cell when the two phases are in contact. Our partnership with an apparatus manufacturer (Rousselet-Robatel) aim to rationalize the choice of the cell's design and dimensions and to optimize the column length (number of cells). Our study firstly relates of the phases hydrodynamics. The visualizations realized thank to a transparent rotor and a stroboscopic acquisition system allow to determinate the influence of cell's characteristic dimensions on the flow pattern and to predict the transistion between an oscillating sheet and a spray. In a second time, a study of chromatographic performances on several apparatus is realized. With these results, we establish sizing rules for the cell and the column. It allows us to take in place a scale-up methodology. The last part of this work treats industrialization problematic of the CPC and leads to the realization of a cleaning in place protocol of the apparatus and its validation

L'industrie biopharmaceutique voit la plupart des thérapies basées sur les anticorps monoclonaux passer du statut de blockbuster à un marché de niche et personnalisé, dans un monde globalisé. Pour poursuivre le développement de nouveaux médicaments, les installations de production existantes et futures doivent accroître leur flexibilité et leur productivité. La chromatographie multi-colonne est l'un des outils potentiels pour y parvenir, comme elle l’a été au cours des dernières décennies pour la pétrochimie et l'industrie alimentaire. En parallèle, l'étape de capture protéine A reste incontournable pour toutes les lignes industrielles de purification grâce à sa spécificité et sa capacité à atteindre facilement un haut niveau de pureté en une seule étape. Ce travail de recherche est une évaluation des procédés de chromatographie multi-colonnes combinés à l'étape de capture protéine A pour augmenter la productivité et l'applicabilité des plateformes de purification actuelles aux activités de production clinique et commerciale. Dans chaque partie du travail, la technologie des colonnes de chromatographie pré-packées a été évalué en tant que facilitateur de procédé multi-colonnes, libérant les équipes opérationnelles des activités de package et des infrastructures associées. Un premier chapitre décrit la traditionnelle revue de la littérature et l'état actuel des connaissances dans le domaine concerné, ainsi qu'une description théorique de la chromatographie en général, et des processus multi-colonnes en particulier. Dans un deuxième chapitre, plusieurs résines protéine A récentes, disponibles sur le marché, ont été comparées dans le cadre de deux procédés multi-colonnes –la chromatographie séquentielle sur plusieurs colonnes (SMCC) et le procédé par Batch Parallèle– et comparées à un procédé traditionnel mono-colonne. Sur la base d'un logiciel de simulation et d'optimisation, les deux processus proposés ont été comparés en termes de gains et de performances. Des recommandations sur la résine et le type de procédé à choisir ont été proposées. Dans un troisième chapitre, l'impact des procédés multi-colonnes sur la qualité et la pureté résultante a été abordé par plusieurs séries d'expériences. L'impact de l'organisation séquentielle d'un processus SMCC a été évalué. L'impact du temps de séjour sur les étapes de lavage et d'élution a également été évalué, afin d'accélérer potentiellement l'étape de capture. Troisièmement, l'impact de la saturation de la résine sur la conception de l'étape de lavage a été évalué. Finalement, des études de cycling ont été réalisées pour détecter si les différents processus multi-colonnes avaient un impact différent sur la durée de vie et les performances de la résine. Dans un quatrième chapitre, un outil de calcul simplifié a été conçu pour proposer un dimensionnement simple des procédés multi-colonnes, tenant mieux compte des contraintes de production de Merck. Cet outil a été utilisé pour évaluer la performance des procédés Batch Parallèle pour deux études de cas. Enfin, dans un chapitre plus exploratoire, l'outil simplifié développé précédemment a été adapté pour évaluer la faisabilité et les contraintes principales des étapes de capture en continu, caractérisées soit par une étape de chargement continu, soit par une étape d'élution continue
The biopharma industry sees most of the therapeutics based on monoclonal antibodies shifting from the blockbuster status to a niche and personalized market, in a globalized world. To continue the development of new drugs, existing and future production facilities have to increase in flexibility and productivity. Multi-column chromatography is one of the potential tools to make that happen, as the technology did in the last decades for the petro and for the food industries. In parallel, the protein A capture step remains a must for all purification trains of the industrial manufacturing capacities due to its specificity and capability to easily reach a high level of purity in a single step. This research work is an evaluation of the multi-column chromatography processes combined with the protein A capture step to increase the productivity and the applicability of current purification platforms for clinical and commercial manufacturing activities. In every part of the work, prepacked chromatography columns have been evaluated as an enabler of multi-column processes, freeing the operational teams from the packing activities burden and associated infrastructures. A first chapter describes the traditional literature review and current state-of-the-art in the relevant field, together with a theoretical description of chromatography in general, and multi-column processes in particular. In a second chapter, several recent, commercially-available protein A resins have been compared when involved in 2 multi-column processes: the Sequential Multi-Column Chromatography (SMCC) process and the Parallel Batch process, and compared to a traditional mono-column process. Based on a simulation and optimization software, both processes proposed have been compared in terms of gains and performance. Recommendations on the resin and the type of process to be selected have been proposed. In a third chapter, the impact of multi-column processes on the resulting quality and purity has been addressed through several sets of experiments. The impact of the sequential organization of an SMCC process has been evaluated. The impact of the residence time on the washing and the elution steps has also been evaluated, in order to potentially speed-up the capture step. Third, the impact of the resin saturation on the design of the washing step has been assessed. Eventually, cycling studies have been performed to detect if the different multi-column processes were impacting differently the resin’s lifetime and performance. In a fourth chapter, a simplified calculation tool has been designed to propose simple sizing of multi-column processes, accounting more accurately for Merck’s production constraints. This tool has been used to evaluate the performance of Parallel Batch processes for 2 case-studies. Eventually, in a more exploratory chapter, the simplified tool previously developed has been adapted to evaluate the feasibility and the primary constraints of continuous capture steps, characterized by either a continuous loading step or a continuous elution step

La Chromatographie Liquide Préparative est devenue une technique de choix pour la purification de mélanges plus ou moins complexes. Elle est particulièrement utilisée, y compris à l'échelle industrielle, dans le domaine pharmaceutique. Pourtant, certains problèmes de fond sont encore peu ou mal maîtrisés. Ainsi, si la structure des colonnes chromatographiques est bien connue, leur remplissage reste encore par bien des égards un art, nécessitant expérience et savoir faire. Par ailleurs, la solubilité de l'échantillon est bien souvent un facteur limitant sur le plan économique. Enfin, le couplage CPL-SM à l'échelle préparative souffre d'un manque de souplesse et offre peu de performances. Nous nous sommes attachés à apporter des solutions à ces différents problèmes en étudiant un mode de remplissage par sédimentation assistée non décrit dans la littérature. Nous proposons de pallier au manque de solubilité des échantillons en utilisant la préconcentration en tête de colonne et avons développé un nouveau mode de couplage ± actif α CPL-SM mieux adapté aux contraintes de la chromatographie préparative. L'ensemble de ces techniques peut permettre de mettre en œuvre la purification d'un mélange complexe sur un dispositif multicolonnes économiquement plus performant qu'une colonne unique de dimensions équivalentes.

Le présent travail est consacré à l'optimisation des conditions d'analyse des psoralènes par chromatographie en phase gazeuse sur colonne capillaire et à l'application de la méthode au dosage de différentes formulations pharmaceutiques. Dans la première partie de ce mémoire, quelques points théoriques essentiels de la chromatographie sont rappelés, plusieurs méthodes du dosage des psoralènes rapportées dans la littérature sont étudiées en comparant leurs avantages et inconvénients. La deuxième partie concerne l'optimisation des conditions du dosage des psoralènes. Après une étude d'influences du débit de gaz vecteur et de la température de la colonne sur les différents paramètres de la séparation, on déduit les conditions suivantes : une colonne DB-1 (15m x 0,53mm), une programmation de température de 180°C pendant une minute, puis 10°C/min. Jusqu'à 240°C et un débit du gaz vecteur de 1,75 ml. Min-1. L'antipyrine est utilisé comme étalon interne dans ce dosage. La procédure de validation de la méthode analytique proposé dans la troisième partie comporte la linéarité, la limite de détection, la reproductivité, la spécificité et la stabilité des produits, ainsi que le rendement d'extraction permettant d'accèder à différentes formulations pharmaceutiques des psoralènes. Lors de la validation d'une gamme de dosage des psoralènes, la méthode s'avère précise, sensible et fiable. La concentration minimum d"tectée est 10-9g/ml, le coefficient de corrélation est de r=0,999 et la déviation standard relative est de 4,79% maximum. Le dosage de quatree préparations pharmaceutiques des psoralènes a été réalisé, en application de la méthode proposé et constitue la quatrième partie de ce mémoire.

Ce travail concerne la mise au point d'un procédé de purification d'une enzyme, la pénicilline acylase, par chromatographie. Nous avons établi un schéma de purification en trois étapes qui comporte une prépurification du mélange protéique brut et deux étapes chromatographiques: la première, sur support anionique faible, permet d'éliminer par adsorption plus de 90% des protéines contaminantes alors que l'enzyme passe sans se fixer. La deuxième sur support d'hydroxyapatite, termine la purification de l'enzyme, éluée sélectivement. Une étude chromatographique frontale des courbes de percée permet de séparer les mélanges initiaux en trois grandes catégories protéiques, de comportements différents vis-à-vis des supports. Pour dimensionner et optimiser la séparation chromatographique sur gel d'hydroxyapatite, nous avons réalise une étude thermodynamique de l'adsorption de la pénicilline acylase et de deux autres protéines (albumine et hémoglobine bovines). Les isothermes sont bien modélisées par des équations de Langmuir et bi-Langmuir. Une rapide étude cinétique nous permet d'apprécier les résistances au transfert de matière rencontrées par ces protéines. Ces données servent à la simulation de leur adsorption dynamique en colonne séparément et en mélanges, à l'aide d'un modèle incluant entre autre une diffusion homogène dans le grain. Les expériences monoconstituant ont mis en évidence une limitation au transfert intraparticulaire, qui semble moins grande dans le cas des mélanges binaires; cela met en évidence la variation du coefficient de diffusion avec la composition et la dénaturation protéique

Rappel des principes generaux de la photochimie et des parametres experimentaux permettant l'optimisation de la reaction et du reacteur photochimique. Elaboration d'un nouveau type de colonne remplie. Etude des phenomenes de dispersion de solute dans les reacteurs tubulaires enroules. Couplage du reacteur photochimique et de la colonne de faible diametre

Platelet (plt) factor 4 (PF4) is an alpha granule protein which can modulate T lymphocyte function. T cells may help regulate megakaryocytopoiesis. Therefore, we hypothesized that T cell-PF4 interactions might play a role in autoregulating marrow megakaryocyte (MEG) production. To test this idea, we studied MEG colony formation in plasma clot cultures containing human serum derived solely from pit poor normal AB plasma, enriched hematopoietic progenitor cells (HPC), autologous T cells, and exogenous PF4. Highly purified PF4 (single band on SDS gel) was prepared from outdated human pits by a combination of heparin-agarose, Sephacryl G-200, and Sephadex G-50 column chromatography. HPC were prepared by depleting normal light density marrow mononuclear cells of adherent monocytes, and T cells. T cells were further fractionated into helper (Leu 3+) and suppressor (Leu 2+) subtypes by solid phase immunoabsorption ("panning"). MEG colonies were enumerated by indirect immunofluorescence with an anti-human platelet glycoprotein antiserum. HPC(5×105/ml) were co-cultured with Leu 3+, or Leu 2+ T cells at target;T cell ratios of 2:1 (n=3; n=4 respectively) and l:l(n=4; n=4 respectively) in the presence of 2.5 μg/ml PF4. Under these growth conditions, MEG colony formation was unchanged (p>0.5) when compared to colonies formed by HPC in the absence of PF4. When the above experiments were repeated (n=2-3/condition) at a higher PF4 concentration [25 μg/ml], MEG colony formation was markedly (>60%) inhibited. To determine if PF4 directly inhibited MEG or erythroid progenitor cell growth (CFU-Meg; CFU-E) in vitro, HPC were cloned in PF4 (25μg/ml) without added T cells. Mean ± SEM of MEG and CFU-E derived colonies formed without vs. with PF4 was as follows:These results suggest that: 1) PF4 may be a non-T cell dependent, lineage specific inhibitor of CFU-MEG, and 2) PF4 may play a role in autoregulating human megakaryocytopoiesis.