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1
Püschel, Franziska. "Cell death and cytokine-mediated inflammatory responses to glucose deprivation in cancer cells." Doctoral thesis, Universitat de Barcelona, 2019. http://hdl.handle.net/10803/667909.
Full textAbstract:
Metabolic alterations in cancer cells are primarily caused by oncogenic mutations and cancer cells are more dependent on glucose compared to non-transformed tissue. Targeting the cancer metabolism opens up a new strategy for anti-cancer therapy. In order to make drugs more efficient and applicable in the clinic, it is necessary to fully investigate the cancer cell metabolism, especially of how cancer cells die upon glucose deprivation and more importantly, the consequences on the surrounding tissue when modifying or interfering with the metabolism.
The unfolded protein response (UPR) is an intracellular stress response which is induced upon glucose deprivation. The activation of the three branches of the UPR facilitates pro-survival responses, however, chronic exposure to intra- or extracellular stress results in a switch towards a pro-death UPR response. The UPR is also described to be involved in pro-inflammatory responses due to the induction of cytokines and chemokines in several cell lines. Therefore, the release of cytokines upon glucose deprivation could facilitate the infiltration or exclusion of immune cells.
We hypothesized that cancer cells die in an UPR dependent manner and that cancer cells release inflammatory cytokines upon glucose deprivation, which promote the infiltration of immune cells.
We found that HeLa cells exposed to glucose deprivation, died in a TRAIL receptor 1 (DR4) and 2 (DR5) dependent manner, which was mediated by the activation transcription factor 4 (ATF4).
Furthermore, we found the release of pro-tumorigenic cytokines such as interleukin-8 (IL-8), interleukin-6 (IL-6) and the leukemia inhibitory factor (LIF) from glucose deprived cancer cells as well as upon treatment with anti-metabolic drugs. We found that IL 6 and IL-8 but not LIF were regulated by ATF4 and p65 upon glucose deprivation. Moreover, the conditioned media of glucose deprived A549 promoted the migration of macrophage-like THP-1 cells as well as primary B cells and neutrophils isolated from human blood.
These findings are important, since interfering with the cancer metabolism by using anti metabolic drugs could suppress the anti-tumorigenic effect of these drugs by promote pro-tumorigenic responses.
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Masgrau, Fortuny Aina 1986. "The Cytokinetic inhibitors Boi1 and Boi2 are required for activation of the exocyst complex by Rho GTPases." Doctoral thesis, Universitat Pompeu Fabra, 2014. http://hdl.handle.net/10803/318168.
Full textAbstract:
Cell growth and division requires delivery of new membrane and remodelling factors to
the cell surface. In budding yeast, this involves actin-dependent transport of secretory
vesicles to sites of growth, followed by vesicle fusion to the plasma membrane. Rho-type
GTPases regulate actin polarization and vesicle fusion, but how they signal to diverse
effectors controlling these separate processes is not well understood. Here, we show that
the cortical proteins Boi1 and Boi2 work together with Rho GTPase signalling to
regulate the exocyst, a complex that mediates the tethering of secretory vesicles to the
plasma membrane. Cells lacking both Boi proteins show normal actin polarity but are
defective in bud emergence, bud growth, and fusion of Bgl2-containing vesicles to the
plasma membrane. A gain-of-function version of Exo70, a component of the exocyst
and effector of Cdc42 and Rho3, restores growth of boi1 boi2 mutant cells. Furthermore,
hyperactivation of Rho-GTPase signalling rescues boi defects, suggesting that the
essential function of Boi proteins is to mediate Rho-dependent activation of the exocyst
during cell growth. Finally, we find that Boi1 and Boi2-dependent inhibition of
abscission in cells with chromatin bridges, via their function in the NoCut checkpoint, is
bypassed by expression of gain-of-function EXO70, suggesting the NoCut pathway also
involves regulation of the exocyst.<br>Tant el creixement com la divisió cel·lular requereix el transport de membrana i altres
factors a la superfície cel·lular. En cèl·lules de S. cerevisiae, aquests processos necessiten el
transport de vesícules de secreció a través dels cables d’actina fins a les zones de
creixement actiu, on es fusionen. Les Rho GTPases regulen la polarització de l’actina i la
fusió de vesícules, però es desconeix com les GTPases senyalitzen els diversos efectors i
com regulen els dos tipus de funcions.
En aquest estudi, demostrem que les proteines Boi1 i Boi2 treballen conjuntament amb
la senyalització de les Rho GTPases, per tal de regular la funció del complexe “exocyst”
que media els contactes inicials entre vesícules de secreció i la membrana plasmàtica.
Cèl·lules sense Boi1/2 tenen el citoesquelet d’actina polaritzat, però la cèl·lula filla no pot
emergir ni créixer. Un al·lel d’Exo70, una subunitat de l’”exocyst”, que és efector de les
GTPases Rho3 i Cdc42, restaura el creixement de cel·lules defectuoses en la funció de
Boi1/2. A més a més, l’hiperactivació de GTPases rescata defectes dels mutants de
Boi1/2, suggerint que la funció essencial de Boi1 i Boi2 és promoure l’activació de
l’”exocyst”, depenent de Rho, durant el creixement cel·lular.
Finalment, hem demostrat que la inibició de la divisió cel·lular que controlen via NoCut
els efectors Boi1/2 en cèl·lules amb defectes en la segregació de cromosomes, es rescata
amb l’al·lel d’Exo70 descrit anteriorment. Aquestes observacions suggereixen que NoCut
podria funcionar també a través de la regulació de l’”exocyst”.
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Casas, Rodríguez Rosa Mª. "Efecto anti-inflamatorio e inmunomodulador de una intervención con dieta mediterránea sobre los marcadores de inflamación de la pared vascular y de la placa inestable. Estudio PREDIMED." Doctoral thesis, Universitat de Barcelona, 2016. http://hdl.handle.net/10803/398894.
Full textAbstract:
El término arterosclerosis hace referencia a un conjunto de trastornos de las arterias caracterizados por el engrosamiento y endurecimiento de la pared arterial. Y es el resultado de dos fenómenos íntimamente relacionados: la ateromatosis, que es la acumulación lipídica focal intra y extracelular, con formación de células espumosas y reacción inflamatoria, y la esclerosis, endurecimiento cicatrizal de la pared arterial. Ross y cols. integraron ambas teorías al considerar la aterosclerosis como un proceso de respuesta inflamatorio a una agresión endotelial. Es un proceso de evolución lenta, que se inicia en edades muy tempranas (nacimiento y niñez) y es a partir de los 50 años, cuando progresa de manera más rápida, severa e intensa, dando lugar a la Enfermedad Cardiovascular (ECV) que afecta a todos los órganos pero especialmente corazón (cardiopatía isquémica), cerebro (ictus) y extremidades inferiores (vasculopatía periférica), etc.
A pesar del descenso del casi 50% en la incidencia de ECV en las últimas tres décadas, continua siendo la causa más frecuente de muerte en el mundo. Los países occidentales, incluidos los Estados Unidos y Europa (norte y este), continúan teniendo una tasa absoluta de morbilidad y mortalidad cardiovascular inaceptablemente alta, del
35% y adquiere características de epidemia encubierta en países en vías de desarrollo. De acuerdo con las previsiones de la Organización Mundial de la Salud, la ECV continuarán siendo la principal causa de muerte en el año 2030. Sin embargo, algunas áreas del mundo, como los países mediterráneos o Japón, muestran una incidencia menor de ECV que países del norte y este de Europa o EEUU. Descartada la causa genética, estas diferencias podrían explicarse por unos hábitos de vida más saludables como la dieta y la actividad física.
En este sentido, actualmente, existe suficiente evidencia científica que demuestra el papel protector de la Dieta Mediterránea (DietMed) en la prevención de la ECV a través de diversos mecanismos como un mejor control de los factores clásicos de riesgo cardiovascular (FRC) (DM, HTA, sobrepeso, etc.). Más concretamente se ha descrito que la DietMed también ejerce un papel anti-inflamatorio, inmunomodulador y antioxidante que retrasaría la progresión de la ECV. Quedan sin embargo incógnitas que resolver como la duración del efecto anti-inflamatorio e inmunomodulador de la DietMed y en qué etapas de la formación de la placa actúa. Tampoco se conocen otros aspectos como el papel de las adipocitocinas o de alimentos específicos de la DietMed en este efecto inmunomodulador. Esta tesis doctoral pretende resolver estas incógnitas.<br>Atherosclerosis refers to a group of disorders of the arteries characterized by thickening and hardening of the arterial wall. And is the result of two closely related phenomena: the atheroma, which is the lipid accumulation focal intra- and extracellular, with formation of foam cells and inflammatory reaction, and sclerosis, cicatricial hardening of the arterial wall. Ross et al, considering both theories integrated atherosclerosis as an inflammatory response process to endothelial aggression. It is a process of slow evolution, which starts at a very early age (birth and childhood) and is from age 50, when progressing faster, severe and intense, resulting in Cardiovascular (CVD) disease affecting all organs but especially heart (ischemic heart disease), brain (stroke) and lower limbs (peripheral vascular disease), etc.
Despite the nearly 50% decline in the incidence of CVD in the last three decades, it remains the most common cause of death in the world. Western countries, including the United States and Europe (north and east), continue to have an unacceptably high absolute rate of cardiovascular morbidity and mortality, the 35% and acquires characteristics of covert epidemic in developing countries.
Nowadays, there is sufficient scientific evidence demonstrating the protective role of the Mediterranean Diet (MedDiet) in the prevention of CVD through various mechanisms such as better control of classical cardiovascular risk factors (CRF) (Diabetes, hypertension, overweight, etc. ). More specifically described that also exerts an antioxidant MedDiet anti-inflammatory role, immunomodulatory and delaying the progression of CVD. However unknowns are solved as duration and immunomodulatory anti-inflammatory effect of MedDiet and what stages of plaque formation acts. Nor other aspects such as the role of adipocytokines or specific foods MedDiet in this immunomodulatory effect known. This thesis aims to solve these questions.
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Rey, Torrente Amanda. "Factores predictores clínicos y biológicos de severidad en la toxoplasmosis ocular." Doctoral thesis, Universitat de Barcelona, 2013. http://hdl.handle.net/10803/132807.
Full textAbstract:
Introducción:
La toxoplasmosis ocular es la causa más frecuente de uveítis posterior en nuestro medio, y puede conllevar a la pérdida irreversible de la agudeza visual. En la actualidad, se desconocen cuáles son los factores predictores de severidad de la enfermedad ocular.
Hipótesis:
El origen étnico-geográfico, la edad de infección, el perfil de citoquinas plasmáticas y el genotipo del parásito son predictores pronósticos en pacientes afectos de toxoplasmosis ocular.
Objetivos:
Caracterizar la uveítis asociada a toxoplasmosis ocular de nuestra población e identificar factores demográficos, clínicos y analíticos predictores de pronóstico visual pobre y complicaciones oculares.
Diseño:
Estudio de pacientes afectos de toxoplasmosis ocular activa diagnosticados en la Unidad de Uveítis del Hospital Clínic de Barcelona desde enero del 2005 a junio del 2012 con un seguimiento de 12 meses. Se realizó una anamnesis y exploración oftalmológica completa. Asimismo, se realizó la extracción de muestras de sangre periférica de 51 pacientes para determinar el perfil de 9 citoquinas mediante ELISA multiplex en la plataforma Luminex y para detectar el Toxoplasma gondii mediante PCR semi-anidada del gen B1 del parásito.
Sujetos de estudio:
Se incluyeron en el estudio 113 pacientes inmunocompetentes con diagnóstico clínico y serológico de toxoplasmosis ocular activa.
Resultados:
-Los pacientes inmigrantes, edad ≥50 años, y la presencia de foco activo periférico se asociaron con una mayor tasa de inflamación intraocular severa. La agudeza visual inicial ≤ 0,1, edad ≥50 años o foco activo macular fueron factores predictores de pronóstico visual pobre. La agudeza visual inicial ≤ 0,1 y la vitreítis ≥2+ fueron predictores de necesidad de cirugía ocular.
-No se pudo detectar T. gondii en sangre periférica de los pacientes con toxoplasmosis ocular activa o inactiva, sugiriendo que, o bien nuestra técnica no es suficientemente sensible, o bien el parásito se encuentra fundamentalmente en el ojo durante el episodio de toxoplasmosis ocular.
-Los pacientes con toxoplasmosis ocular activa presentaron unos niveles plasmáticos de MCP-1/CCL2 inferiores a los de los pacientes controles o con toxoplasmosis ocular inactiva. Por otro lado, se observaron niveles significativamente elevados de TNF-a y G-CSF en el grupo de los pacientes con toxoplasmosis con pronóstico visual pobre.
Conclusión:
En conclusión, mediante los resultados obtenidos de este estudio se pretende establecer unos perfiles de riesgo para la severidad de la afectación ocular. Por otra parte, la identificación de determinados perfiles específicos de citoquinas en respuesta a la retinocoroiditis toxoplásmica nos podría proporcionar una guía muy útil para la investigación de futuras dianas terapéuticas.<br>Introduction:
Ocular toxoplasmosis is a common cause of infectious retinochoroiditis worldwide, and can lead to visual impairment.
Purpose:
To identify the clinical and biological prognostic factors in ocular toxoplasmosis.
Methods:
The medical records of 113 consecutive patients with active ocular toxoplasmosis admitted from a single referral center for uveitis in Barcelona (Spain) were analyzed between January 2005 and June 2012 with a 12th-month follow-up.Predictions for whether patients would achieve a final BCVA ≤ 20/200, develop ocular complications or require ocular surgery were made.
In addition, blood was collected in 51 patients with active or inactive ocular toxoplasmosis and in 25 patients with an age-matched and sex-matched healthy control group. Using a multiplex assay, the serum concentration of 9 cytokines was determined.Cytokine profiles were also correlated with disease activity, severity and visual outcome.Hemi-nested PCR in order to detect the B1 gene of Toxoplasma gondii was performed.
Results:
-A South American origin, aged ≥ 50 years, and peripheral active lesions were associated with intraocular inflammation severity. Active macular lesions, initial BCVA≤20/200 and advanced age were predictors for final BCVA≤20/200, whereas female gender and initial BCVA≤20/200 were predictors for ocular complications. Moreover, a BCVA≤20/200 and a vitreous cell score of ≥2+ were predictors of an eventual need for ocular surgery.
-Using the hemi-nested PCR, the B1 gene of Toxoplasma gondii was not detected in blood samples.
-Levels of CCL2 were significantly reduced in patients with active ocular toxoplasmosis compared to the control group. Moreover, CCL2 levels were significantly lower during active ocular toxoplasmosis compared to inactive disease. GCSF and TNFα were elevated in patients with toxoplasmosis with poor visual outcome. No significant correlations were found with specific cytokine profiles and disease severity.
Conclusion:
The determination of disease characteristics that can serve as predictors for poor visual prognosis, ocular complications and the need for intraocular surgery will allow physicians to consider a close follow-up of these patients for the early detection and treatment of complications secondary to toxoplasmosis. Moreover, serum cytokine profiling may contribute to the understanding of the physiopathology processes underlying retinal damage in ocular toxoplasmosis and provide tools for new treatment targets.
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Planas, Rigol Ester. "Endothelial and myointimal cell functions related to vascular inflammation and remodeling in Giant-Cell Arteritis: Contribution of interleukin-23p19, interleukin-35 and endothelin-1." Doctoral thesis, Universitat de Barcelona, 2016. http://hdl.handle.net/10803/401863.
Full textAbstract:
Giant cell arteritis (GCA) is vascular inflammatory disease frequently involving large and medium sized arteries. GCA pathogenesis is not completely characterized, although there is a well accepted general model based on the observation of the histopathology and supported by immunopathology studies. According to this model, CD4+T cells subsets (mainly Th1 and Th17) and macrophages are essential to orchestrate the amplification of pro-inflammatory cascades leading to chronic inflammation of the vessel wall. The main sites of entry of infiltrating leukocytes are the activated endothelial cells (EC) from the adventitial vasa vasorum. Importantly, the secretion of proteases by macrophages among others, promotes elastic lamina degradation and migration of leukocytes to the inner artery layers. Vascular smooth muscle cells (VSMC) have also an important role in GCA pathogenesis since, in this scenario; they acquire a pro-inflammatory phenotype by overexpressing adhesion molecules and pro-inflammatory cytokines, contributing to the persistence of inflammation. Inflammatory cell products, as well as vascular injury, trigger a vascular remodelling process which leads to the development of intimal hyperplasia and vascular lumen occlusion. VSMC acquisition of proliferative and migratory phenotype may contribute to vascular remodeling. Further investigation of molecules involved in GCA pathogenesis is needed in order to find new strategies to improve the current GCA treatment (glucocorticoids) since 50% of the patients relapse and 40% suffer form early (visual loss or stroke) or late (aortic aneurysm) complications derived from maladaptive vascular remodeling. For this reason, the aim of this doctoral thesis was to contribute knowledge to these GCA challenges by investigating new roles of two important molecules involved in the persistence of inflammation (IL-23p19 and IL-35) as well as a new role of endothelin 1 (ET-1) in GCA vascular remodeling.
The IL-12 superfamily of cytokines is composed by four heterodimeric cytokines: IL-12 (p40 + p19), IL-23 (p40 ad p19), IL-27 (p28 and Ebi3) and IL-35 (Ebi3 and p35). Regarding to these cytokines, we have demonstrated a dichotomy in the expression of p19 and p40 subunits suggesting a role for p19 independent from p40 heterodimerization. We observed that p19 but not p40 was induced by a pro-
inflammatory context in EC from the adventitial vasa vasorum of GCA specimens. Moreover, p19 was not secreted by stable p19-expressing EC suggesting an intracellular role. Our studies showed that p19 contributed to leukocyte attachment and transmigration by promoting overexpression of adhesion molecules ICAM-1 and VCAM-1. We also demonstrated that these effects were triggered by intracellular p19 binding to gp130 receptor, subsequently promoting phoshporylation and nuclear translocation of STAT3.
IL-35 cytokine was also investigated as a consequence of the previous observation that p35 (but not p40) was constitutively expressed by VSMC of GCA specimens. This dichotomy suggested that p35 may have and independent role from that derived from p40 heterodimerization or that p35 may have another partner to form a cytokine different from IL-12. Our results demonstrated that p35 dimerizes with Ebi3 subunit in order to form IL-35 in GCA specimens. Interestingly, we found that IL-35 was mainly produced by leukocytes and VSMC in the adventitial/media junctions of GCA lesions. In order to mimic this context, we used co-cultures of temporal artery-derived primary VSMC together with leukocytes which demonstrated that IL-35 expression in VSMC was increased by pro-inflammatory cytokines IL-1β, TNFα and IFNg. In addition, we have demonstrated a new role for this cytokine in VSMC. IL-35 interacts with gp130 in order to promote pro-inflammatory phenotype of VSMC. This is an important observation since, until present; IL-35 has been described as an anti-inflammatory cytokine involved in regulatory T cell (Treg) differentiation.
We previously reported that endothelin-1 (ET-1) and its receptors ETAR and ETBR are over-expressed in GCA lesions and GCA patients with ischemic complications have increased serum concentrations of ET-1. Although it has been observed that ET-1 may contribute to myofibroblast differentiation of fibroblasts, a crucial step in lung and skin fibrogenic diseases, the most investigated function of ET-1 in VSMC has been vascular tone regulation. In this thesis, we have demonstrated that ET-1 may contribute to vascular occlusion, by promoting the migration of VSMC through activation of the focal adhesion kinase (FAK)/Src and PI3K axis. In GCA lesions ET-1 was mainly produced by inflammatory cells and the interaction with PBMC increased ET-1 receptor expression by VSMC. ET-1 stimulated VSMC migration by inducing focal adhesion kinase (FAK) phosphorylation at Y397 permitting association with p85 subunit of PI3Kinase which co-localized with FAK at the cell protrusions of
migrating cells. Accordingly, inhibition of both FAK and PI3K abrogated ET-1 induced migration. Consistently, blockade of ETAR and ETBR with BQ123 and BQ788 antagonists inhibited ET-1 induced VSMC migration and VSMC outgrowth from cultured GCA-arteries.<br>L’arteritis de cèl·lules gegants (ACG) és una malaltia inflamatòria crònica d’etiologia desconeguda que majoritàriament afecta les arteries de mitjà i gran calibre, entre elles l’artèria temporal. El tractament actual de l’ACG són els glucocorticoides tot i que el 50 % dels pacients recauen.
Els mecanismes implicats en l’ACG s’han anat caracteritzant a partir d’observacions histopatològiques de l’artèria temporal així com a partir d’estudis immunopatològics. S’observa un clar infiltrat inflamatori format majoritàriament per limfòcits CD4+T i macròfags que van migrant des de l’adventícia fins a la íntima. La porta d’entrada d’aquest infiltrat es creu que podrien ser els petits vasos adventicials (vasa vasorum) que en condicions normals nodreixen l’artèria i, en canvi, en condicions patològiques s’observa una clara activació de les cèl·lules endotelials que els composen. Les cèl·lules infiltrants secreten citoquines i quimiocines encarregades de reclutar constantment més leucòcits donant lloc a la persistència de la inflamació en el teixit arterial. A més, aquestes cèl·lules també interaccionen amb altres components de la paret arterial com les cèl·lules muscular llises (VSMC) que també adquireixen un fenotip pro-inflamatori.
Per altra banda, en l’ACG també s’observa un important remodelat vascular patològic, majoritàriament degut al trencament de les làmines elàstiques de l’artèria i la migració cap a la llum vascular tant de l’infiltrat inflamatori com de les VSMC que adquireixen un fenotip més proliferatiu, migratori i productor de matriu extracel·lular que ajudarà a crear la hiperplàsia de la íntima, originant l’oclusió vascular.
Tenint en compte aquest context, en aquesta tesi doctoral s’han estudiat dues molècules implicades en la persistència de la inflamació. Per una banda, l’estudi de la subunitat p19 de la IL-23. En condicions pro-inflamatòries aquesta molècula podria actuar independentment de la dimerització amb la p40 per formar la IL-23 i podria intervenir desde el compartiment intracel.lular a traves d’una interacció directa amb gp130, en l’activació de les cèl·lules endotelials que formen el vasa vasorum adventicial, ajudant així al reclutament leucocitari. Per altra banda, l’estudi de la IL-35, expressada per les VSMC i els leucòcits infiltrants i no només per les cèl·lules T reguladores com s’havia descrit anteriorment. Hem observat i descrit per primera vegada, que la IL-35 també estaria involucrada en la persistència de la inflamació de l’ACG, induint un fenotip pro-inflamatori en les VSMC.
Pel que fa al remodelat vascular, hem estudiat l’endotelina (ET-1), que a través dels seus dos receptors (ETAR i ETBR) provocaria una inducció de la migració de les VSMC, tenint un rol essencial en la creació de la hiperplàsia de la íntima i la oclusió vascular.
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Bancells, Bau Cristina. "Propietats aterogèniques de l'LDL electronegativa: inducció de l'expressió de citoquines, activitats enzimàtiques associades i unió a proteoglicans." Doctoral thesis, Universitat Autònoma de Barcelona, 2009. http://hdl.handle.net/10803/3604.
Full textAbstract:
L'LDL electronegativa (LDL(-)) és una fracció modificada d'LDL present a la circulació. Hi ha varies evidències que suggereixen el seu paper aterogènic ja que es troba augmentada en patologies d'alt risc cardiovascular, com en la hipercolesterolèmia familiar o en la diabetis mellitus. A més, presenta propietats inflamatòries, una major susceptibilitat a l'agregació i afinitat disminuïda pel receptor d'LDL. En la present tesi s'han estudiat algunes propietats aterogèniques d'aquesta partícula modificada, en concret s'han avaluat els següents aspectes:<br/>1) Propietats inflamatòries. L'LDL(-) va induir una major expressió de citoquines (IL-6), quimioquines (IL-8, MCP-1 i GRO) i factors de creixement (GM-CSF) en cèl·lules endotelials de vena i d'artèria, i monòcits i limfòcits. La resposta de les cèl·lules endotelials arterials va ser major a nivell de producció total de citoquines i, a més, també van alliberar PDGF-B. No obstant, els monòcits i limfòcits, en resposta a l'LDL(-) també van expressar la citoquina anti-inflamatòria IL-10 la qual va disminuir la secreció de les altres citoquines pro-inflamatòries, modulant la resposta inflamatòria.<br/>2) Activitat fosfolipolítica tipus fosfolipasa C associada. S'han descrit noves activitats enzimàtiques presents en l'LDL(-) que degraden eficientment fosfolípids amb colina. S'ha relacionat aquesta activitat fosfolipolítica amb la major susceptibilitat a l'agregació de l'LDL(-). Es desconeix l'origen d'aquesta activitat enzimàtica, tot i que s'ha descartat que sigui deguda al contingut augmentat en apoE, apoC-III o PAF-AH, i s'ha suggerit que en podria ser responsable una proteïna encara no identificada o la pròpia apoB-100.<br/>3) Unió a proteoglicans de la matriu extracel·lular. Una subfracció de partícules d'LDL(-) van presentar una major unió a proteoglicans aïllats d'artèria humana. Aquesta subfracció de partícules estaven més agregades i tenien una elevada activitat fosfolipolítica. Fets que es van relacionar i, en conseqüència, es va hipotetitzar que la major activitat fosfolipolítica podria provocar l'agregació de les partícules i, al mateix temps, que aquestes s'unissin amb major afinitat als proteoglicans.<br/>En conclusió, l'LDL(-) sembla una partícula potencialment aterogènica degut a que té la capacitat d'induir l'alliberament de molècules inflamatòries en diferents tipus cel·lulars, i presenta una major agregació i afinitat pels proteoglicans, fent-la propensa a la retenció subendotelial.<br>Electronegative LDL (LDL(-)) is a modified fraction of LDL present in circulation. Growing evidence suggests an atherogenic role. LDL(-) proportion is increased in diseases with high cardiovascular risk, as familial hypercholesterolemia or diabetes mellitus. Furthermore, it presents inflammatory properties, high susceptibility to aggregation and decreased LDL receptor affinity. In the current thesis some atherogenic properties of this modified particle have been studied, specifically, the following points have been evaluated:<br/>1) Inflammatory properties. LDL(-) induced increased expression of cytokines (IL-6), chemokines (IL-8, MCP-1 and GRO) and grown factors (GM-CSF) on venous and arterial endothelial cells, monocytes and lymphocytes. Arterial endothelial cells produced a high amount of cytokines and, moreover, they also stimulated PDGF-B. On the other hand, monocytes and lymphocytes also expressed the anti-inflammatory cytokine IL-10, who decreased the secretion of the other pro-inflammatory cytokines, thereby counteracting the inflammatory response.<br/>2) Phospholipase C-like phospholipolytic activity associated to LDL(-). Novel enzymatic activities present on LDL(-) that hydrolyze choline-containing phospholipids have been described. These activities have been involved in increased susceptibility to aggregation. A role for apoE, apoC-III and PAF-AH has been ruled out and our results suggest that apoB-100 could be involved. However, the exact origin remains unknown.<br/>3) Binding to proteoglycans from the extracellular matrix. A subfraction of LDL(-) presented increased binding to proteoglycans isolated from human artery. This subfraction has increased aggregation and phospholipolytic activity. Both properties are related, suggesting that phospholipolytic activity promotes aggregation and favours binding to proteoglycans.<br/>In summary, LDL(-) is a potentially atherogenic particle since promotes inflammatory molecules release in several cell types and its increased aggregation and binding to proteoglycans suggests increased subendothelial retention.
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Affò, Silvia. "Cytokines and Cytokine-Receptors in the Pathogenesis of Alcoholic Hepatitis." Doctoral thesis, Universitat de Barcelona, 2014. http://hdl.handle.net/10803/145435.
Full textAbstract:
By performing a translational study we identified a specific pattern of genes differentially regulated in patients with severe alcoholic hepatitis (AH). A functional analysis of the gene expression profile showed several pathways deregulated in AH, including cytokines- cytokine receptor interaction. Within cytokine-cytokine receptor interaction pathway, Fn14 has been identified as the only receptor belonging to TNF superfamily to be exclusively up-regulated in patients with AH, and its expression has been shown to be associated with severity of the disease and mortality. We observed that Fn14 is upregulated in experimental models of progenitor cell expansion and co-expressed with Ep-CAM in livers of patients with AH, suggesting that Fn14 may regulate ductular reaction expansion. Moreover, we showed that Fn14 hepatic expression is regulated by ethanol and pro-fibrogenic factors, suggesting that alcohol abuse together with fibrogenic mediators may be directly responsible for the induction of Fn14 expression in ALD.
Furthermore, transcriptome analysis identified CCL20 as the most up-regulated cytokine in the liver of patients with AH. Hepatic expression and serum levels of CCL20 have been found elevated in patients with AH and have been showed to be associated with key clinical features of the disease such as fibrosis, endotoxemia and short-term mortality. These data suggest that besides playing a role in AH pathogenesis, CCL20 may also be considered as a potential non-invasive biomarker. We found that CCL20 hepatic expression is up-regulated in acute, chronic and acute-on chronic experimental model of liver injury induced by carbon tetrachloride (CCl4) and lipopolysaccharide (LPS) and their combination, respectively. Macrophages and hepatic stellate cells have been identified as the main CCL20 producing cell types in experimental models of acute-on-chronic liver injury. Moreover, we have showed that CCL20 exerts pro-fibrogenic and pro-inflammatory and effects on primary human hepatic stellate cells and on macrophages, suggesting that CCL20 may participate in both hepatic fibrosis and inflammation
during liver disease in an autocrine and paracrine manner. Finally, we have found that CCL20 mediates LPS-induced liver injury by promoting hepatocellular apoptosis, expression of pro-inflammatory and pro-fibrogenic mediators and by enhancing macrophages and neutrophils infiltrate recruitment.
In conclusion, during this thesis we performed two studies leading to the identification of new potential targets for therapy in AH. The identification of Fn14 and CCL20 as new potential targets for therapy in AH and their correlations with key hallmarks of the disease such as ethanol consumption, fibrosis, progenitor cells expansion and endotoxemia underline the complexity of this disease and the crosstalk between many mediators that occurs in AH.
The data presented in this thesis suggest that cytokines and cytokine-receptor pathway could represent a new potential target for therapy in ALD; and also provide new important insights and a useful resource for the study of the pathogenesis of this disease.<br>El consumo de alcohol es una de las causas más importantes de mortalidad que pueden prevenirse en nuestro país. La hepatitis alcohólica (HA) se caracteriza por un proceso de inflamación hepática (fundamentalmente por infiltración de células polimorfonucleares), esteatosis masiva hepática, fibrosis pericelular y daño hepatocelular. En la actualidad no existen tratamientos efectivos para el tratamiento de la HA y por esta razón, existe una clara necesidad de identificar nuevas dianas terapéuticas para tratar a estos pacientes en los diferentes estadios de la enfermedad (esteatosis, inflamación y/o fibrogénesis).
El objetivo principal de esta tesis fue investigar nuevas dianas terapéuticas para el tratamiento de la HA. Para alcanzar dicho objetivo, realizamos estudios traslacionales que permitieran identificar marcadores biológicos alterados en muestras humanas procedentes de hígados de pacientes con HA para estudiar la función que tienen en el desarrollo de la enfermedad in vitro e in vivo en modelos animales de diferentes tipos de daño hepático y valorar si podrían considerarse como dianas terapéuticas.
Mediante la performación de nuestros estudios, identificamos a la vía de citoquinas-receptores de citoquinas como una de las vías con el mayor número de genes diferentemente regulados en pacientes con HA con respecto a controles sanos. Estudios en muestras humanas y en modelos animales de daño hepático nos permitieron identificar al receptor de citoquinas Fn14 y a la citoquina CCL20 como importantes mediadores de la HA, correlacionados tanto con aspectos clínicos característicos así como con la gravedad de la enfermedad. La vía de citoquinas y receptores de citoquinas y, de manera específica Fn14 y CCL20 han sido identificados como novedosos mediadores implicados en la patogénesis de la HA y por lo tanto como potenciales dianas terapéuticas. Por lo tanto, gracias a la identificación de un patrón de los genes diferentemente regulados en la HA, nuestros datos proporcionan importantes resultados novedosos para el estudio de la patogénesis de la HA.
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Zhong, Hu Ta Ying. "Patrón de expresión de citoquinas y quimioquinas de células presentadoras de antígeno murinas en respuesta a estimulación in vitro con hemocianinas de moluscos." Tesis, Universidad de Chile, 2013. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/138352.
Full textAbstract:
Magíster en Bioquímica Área de Especialización en Bioquímica de Proteínas y Biotecnología y optar al título de Bioquímico<br>Las hemocianinas de moluscos son enormes glicoproteínas que al ser inoculadas en mamíferos, generan una potente respuesta inmune del tipo Th1, caracterizada por la secreción de IFN-y. Es así que se han usado como carrier en el desarrollo de anticuerpos contra haptenos, como carrier/adyuvante en vacunas terapéuticas contra patógenos y cáncer y además, como inmunoestimulante no específico en la inmunoterapia del carcinoma superficial de vejiga. Sin embargo, los mecanismos inmunológicos involucrados en las etapas tempranas de la respuesta inmune anti-hemocianina, conducentes a sus notables propiedades inmunoestimulantes, son muy poco conocidos. Es así que ha sido escasamente abordado su efecto sobre las redes de comunicación coordinadas por citoquinas, las proteínas que median las interacciones entre las células del sistema inmune. Esta información, ampliará no solo el conocimiento básico para comprender los efectos inmunoestimulantes de las hemocianinas en mamíferos, sino que también contribuirá a nuevas aplicaciones.
En esta tesis se propuso estudiar el efecto de tres hemocianinas sobre macrófagos peritoneales murinos, como modelo para entender la respuesta inmune innata que inducen en dichas células presentadoras de antígeno. Específicamente, se estudiaron la hemocianina clásica, originaria de California y conocida como KLH, obtenida de Megathura crenulata y dos descubiertas más recientemente que corresponde a CCH de Concholepas concholepas y FLH de Fissurella latimarginata, especies que habitan las costas de nuestro país. Se propuso que las hemocianinas al ser incorporadas por las células presentadoras de antígenos, inducen la expresión de citoquinas proinflamatorias, un evento fundamental para dar el inicio a una respuesta inmune. Para demostrarlo, cultivos in vitro de macrófagos peritoneales murinos, previamente caracterizados morfológicamente, fenotípicamente (F4/80+) y funcionalmente, fueron incubados con las distintas hemocianinas en concentraciones de hasta 1 mg/ml; LPS y medio de cultivo fueron usados como control positivo y negativo, respectivamente. Posteriormente, se estudió la correlación entre los niveles de mRNA y los niveles de proteína de un panel de citoquinas y quimioquinas proinflamatorias mediante dos tipos de PCR y ELISA, respectivamente.
Los principales resultados demuestran que: 1. Las hemocianinas fueron fagocitadas por los macrófagos peritoneales cultivados in vitro. Sin embargo, FLH y KLH estimularon más tempranamente que CCH el aumento en la expresión de quimioquinas claves en la extravasación de leucocitos, tales como MIP-1α (CCL-3), KC (CXCL-1) y LIX (CXCL-5), las cuales son indicativas de un proceso inflamatorio agudo. 2. Las hemocianinas estimularon la expresión de IL-6, IL-12p40 y TNF-α en distintos tiempos e intensidades, como indican los resultados de RT-qPCR y ELISA, sugiriendo la inducción de mecanismos de señalización diferentes, cuya explicación es atribuible a las diferencias estructurales que presentan las hemocianinas entre ellas y especialmente, en aquellas que dicen relación con su composición de oligosacáridos. 3. Las hemocianinas muestran la inducción de un perfil inmunológico Th1 marcado, al mantener reguladas a la baja citoquinas claves de la respuesta Th2, como son IL-4, IL-5, IL-13, TGF-ß2. Finalmente, los resultados presentados en esta tesis permiten concluir que los macrófagos también participan en los mecanismos inmunológicos tempranos que acompañan el reconocimiento de las hemocianinas, induciendo un ambiente proinflamatorio que puede explicar sus notables propiedades inmunomoduladoras en los mamíferos<br>Molluskan hemocyanins are huge glycoproteinscapable of induce a potent Th1-dominant immune response, characterized by the secretion of IFN-y, when are inoculated in mammals. By this reason, they have been used as a carrier protein in the development of antibodies against pathogens and cancers and also, as non-specific immunostimulant in the immunotherapy of superficial bladder cancer. However, the immunological mechanisms involved in the early phases of the anti-hemocyanin immune response, that leads to its remarkable immunostimulatoryt effects, are scarcely known. Thus, it has been poorly addressed their effects on the communication network coordinated by cytokines, the proteins which mediate interactions between cells from the immune system. This information will allow expand the basic comprehension to understand its immunostimulatory effects, but also will contribute to new applications.
In this thesis, we proposed to examine the effects of three hemocyanins on murine peritoneal macrophages, as a model for understanding the earliest immune responses induced by these antigen presenting cells (APC). Specifically, we studied the classical hemocyanin, native from California and obtained from Megathura crenulata, known as KLH and two recently discovered hemocyanins, CCH collected from Concholepas concholepas and FLH from Fissurella latimarginata, both species natives of our coasts. It was proposed that once hemocyanins are incorporated by APC, would induce the expression of proinflammatory cytokines, a key event in the initiation of an immune response. To demostrate this, in vitro cultures of murine peritoneal macrophages, previously characterized morphologically, phenotypically (F4/80+) and functionally, were incubated with hemocyanins in concentrations up to 1 mg/ml for different times; as positive and negative control, LPS and culture médium were used, respectively. Subsequently, we studied the correlation between mRNA and protein levels from a panel of proinflammatory cytokines and chemokines using two types of PCR and ELISA, respectively.
The main results show that: 1. Hemocyanins were endocyted by peritoneal macrophages cultured in vitro, but only FLH and KLH and not CCH can induced an increased in the expression of key chemokines related to leukocyte extravasation, such as MIP-1α (CCL-3), KC (CXCL-1) and LIX (CXCL-5), wich are indicative of an acute inflammatory process. 2. Hemocyanins simulated the expression of IL-6, IL-12p40and TNF-α at different times and intensities, as indicated by the results of RT-qPCR and ELISA, suggesting different signaling pathways of induction, which can be explained by strutural differences between them, and specially those concerns to their oligosaccharides composition. 3. Hemocyanins showed induction of a Th1-dominant immune profile, maintaining downregulated key Th2 cytokines such as IL-4, IL-5, IL-13 and TGF-ß2. Finally, the results presented in this thesis, allow to conclude that macrophages are involved in the early phases of immunes recognition of hemocyanins, inducing a proinflammatory milieu that may explain its enhanced immunomodulatory properties in mammals<br>Fondecyt, Biosonda, Fucited
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Aguilar, Vera Nelson. "Perfil de citoquinas TH1 y TH2 de subpoblaciones linfocitarias en la primoinfección respiratoria aguda baja por virus respiratorio sincicial." Tesis, Universidad de Chile, 2008. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/152486.
Full textAbstract:
Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario<br>RESÚMEN
Introducción. El virus respiratorio sincicial (VRS) es el principal agente de infección
respiratoria aguda infantil a nivel mundial y nacional. Diversos estudios han asociado
patologías previas como factores asociados a la gravedad del cuadro; sin embargo, algunos
niños sanos también se enferman gravemente mientras que otros cursan con una enfermedad
leve. Ciertos genotipos de VRS han sido asociados con cuadros más graves mientras que otros
estudios no encuentran ninguna asociación en particular. Por otro lado la respuesta inmune
del hospedero parece ser el factor más relevante en la evolución clínica de los lactantes,
según estudios en modelos animales y otros estudios in vitro; pero existen muy poco estudios
in vivo en los pacientes afectados. Este trabajo plantea como hipótesis que la gravedad de la
primoinfección por VRS en lactantes menores de 1 año se asocia a un perfil de respuesta
inmune celular Th1 disminuida y no al genotipo viral.
Objetivos. Caracterizar el perfil de la respuesta inmune celular en lactantes hospitalizados
por primoinfección respiratoria aguda baja por VRS adquirida en la comunidad en relación a la
gravedad de la enfermedad y detectar genotipos virales involucrados.
Material y métodos. Se estudiaron 83 lactantes sanos con primoinfección por VRS durante
los brotes de invierno de los años 2005 y 2006, los cuales fueron clasificados según su
evolución en pacientes graves o leves. Se efectuaron técnicas de inmunotipificación a través
de citometría de flujo para cuantificar las subpoblaciones linfocitarias y se midieron algunos
marcadores de activación de linfocitos T (LT) y natural killer. También se cuantificaron los
niveles de citoquinas de la respuesta de tipo Th1 y Th2 a través de la técnica de ELISA. Las
cepas de VRS fueron genotipificadas mediante PCR y análisis filogenéticos del gen G.
Resultados. La inmunotipificación demostró una disminución de la población de LT en el
grupo de pacientes graves con respecto a lactantes leves y controles sanos. Esta disminución
fue manifiesta especialmente en la subpoblación de linfocitos T citotóxicos/supresores (LTc/s).
TambienTambién estuvieron disminuidos en el grupo grave los marcadores de linfocitos de
memoria CD45RO, el marcador de activación de LT CD25 y el antígeno CD94 en la población
natural killer que se asocia al sistema MHC clase I. Los niveles de citoquinas fueron en
general bajos, excepto los niveles de IL-6 que fueron mayores en lactantes graves y los
niveles de IL-8 mayores en pacientes con VRS con respecto a los controles sanos. Los
genotipos del grupo B fueron más prevalentes en el 2005, especialmente del genotipo BA
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(76,6%) y del grupo A durante el 2006, especialmente el GA2 (77,2%). Sin embargo, no
hubo asociación de algún genotipo viral con cuadros clínicos de mayor gravedad.
Conclusión: La gravedad del cuadro clínico en la infección por VRS se asocia a una respuesta
inmune celular deficiente con un perfil de citoquinas Th1 disminuido y no al genotipo viral.<br>ABSTRACT
Introduction. The respiratory sincicial virus (RSV) is the principal agent of acute infantile
respiratory infection on a global and national scale. Several studies have associated
previous pathologies as factors associated with the gravity of the clinical disease;
nevertheless, some healthy children also fall seriously ill whereas others have a slight
illness. Certain genotypes of RSV have been associated with more serious clinical disease
whereas other studies do not find any connection in particular. On the other hand the
immune response of the host seems to be the most important factor in the clinical
evolution of the infants, according to studies in animal models and other studies in vitro;
but there are very few studies in vivo in the affected patients. This work raises as
hypothesis that the gravity of the primoinfection for RSV in infants younger than 1-yearold
is related to a profile of diminished Th1 cellular immune response and not to the viral
genotype.
Objectives. To characterize the profile of the cellular immune response in infants
hospitalized for low acute respiratory primoinfection by RSV acquired in the community in
relation to the gravity of the illness and to detect viral genotypes involved.
Material and methods. 83 healthy infants with primoinfection by RSV were studied
during the winter sprouts of the years 2005 and 2006, which were classified according to
their evolution under severe or mild patients. Techniques of immune typification were
carried out through flow cytometry to quantify the subpopulations of lymphocytes and
some markers of activation of lymphocytes T (LT) and natural killers were measured. Also
the levels of cytokines of the response of type Th1 and Th2 were quantified through the
ELISA technique. The straines of RSV were genotyped by means of PCR and phylogenetics
analysis of the gene G.
Results. The immune typification demonstrated a decrease of the LT population in the
group of severe patients in comparisson to mild infants and healthy control. This decrease
was clear especially in the subpopulation of lymphocytes T cytotoxics/supresors (LTc/s).
The markers of lymphocytes of memory CD45RO, the activation marker of LT CD25 and
the antigen CD94 in the population of natural killer that is associated to the system MHC
class I were also diminished in the severe group. The levels of cytokines were generally
low, except the levels of IL-6 that were higher in severe infants and the levels of IL-8
higher in patients with RSV with regard to the healthy control. The genotypes of the group
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B were more prevalents in 2005, especially of the genotype BA (76,6 %) and of the group
A during the year 2006, especially the GA2 (77,2 %). Nevertheless, there was no
association of any viral genotype with clinical disease of major gravity.
Conclusion: The gravity of the clinical disease in the infection by RSV is associated to an
deficient cellular immune response with a diminished profile of cytokines Th1 and not to
the viral genotype.
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Reyes, Mandujano Ivonne Fanny. "Asociación del polimorfismo genético de las IL-1A C(889)T Y IL-1B C(+3953/4)T en un grupo de adultos con periodontitis crónica." Master's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2015. https://hdl.handle.net/20.500.12672/4633.
Full textAbstract:
La periodontitis crónica es la causa más común de pérdida de dientes en el mundo y muchos factores de riesgo tales como las infecciones, la respuesta inflamatoria, la higiene oral, la edad, los hábitos de fumar y las características genéticas individuales están involucrados en el desarrollo de esta enfermedad. La identificación de los factores genéticos que condicionan la inflamación oral puede ayudarnos a comprender la predisposición a desarrollar periodontitis. Las interleuquinas, en especial la IL-1, tienen mucha importancia en la evolución de la enfermedad periodontal, debido a que son proteínas solubles que median interacciones complejas entre los linfocitos, las células inflamatorias y otros elementos celulares del tejido conectivo. Por tal motivo, el propósito de este estudio fue determinar la asociación de los polimorfismos genéticos de la IL-1A C(-889)T, IL-1B C(+3953/4)T, con la periodontitis crónica en un grupo de peruanos. Para ello se reclutaron 94 personas con periodontitis crónica y 96 personas periodontalmente sanas, a quienes se les extrajo una muestra de sangre para obtener el ADN y realizar la genotipificación de la IL-1A e IL-1B, con la técnica de PCR-RFLP. Los datos fueron analizados con el test de 2, 2de tendencia lineal y regresión logística, con un 95% de intervalo de confianza. Los resultados muestran una asociación estadísticamente significativa entre el genotipo positivo de la IL-1B y el genotipo compuesto positivo, con la periodontitis crónica. Palabras clave: Interleuquinas, Citoquinas, Periodontitis Crónica, Polimorfismo
Genético, PCR- RFLP.<br>--- Chronic periodontitis is the most common cause of tooth loss in the world and many risk factors such as infections, inflammatory response, oral hygiene, age, smoking habits and individual genetic characteristics are involved in the development of this disease. The identification of genetic factors that influence oral inflammation may help us understand the predisposition to developing periodontitis. Interleukins, in particular IL-1, are very important in the development of periodontal disease because they are soluble proteins that mediate complex interactions among cells, inflammatory cells and other cellular elements of connective tissue. Therefore the purpose of this study was to determine the association of genetic polymorphisms of the IL-1A C (-889) T, IL-1B C (+3953/4) T, with chronic periodontitis in a group of Peruvians. For this purpose, 94 people with chronic periodontitis and 96 periodontally healthy people were recruits and blood for DNA and perform genotyping of IL-1A and IL-1B, with the PCR-RFLP was extracted to them. Data were analyzed with the test 2, 2 of linear trend and logistic regression with 95% confidence interval. The results show a statistically significant association between positive genotype of the IL-1B and the positive composite genotype with chronic periodontitis. Keywords: Interleukins, cytokines, Chronic Periodontitis, Genetic Polymorphism,
PCR-RFLP.<br>Tesis
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Burga, Cisterna Cesar Abel. "Expresión de citoquinas de la respuesta Th2 en mucosa intestinal de crías de alpaca." Master's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2016. https://hdl.handle.net/20.500.12672/5211.
Full textAbstract:
Evalúa la expresión génica de las citoquinas IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, TGF- y el factor transcripcional GATA3 en la mucosa intestinal de crías de alpacas clínicamente sanas de 2 a 47 días de edad. Para lo cual se formaron grupos etarios conformados por alpacas de 2 a 8 días (grupo 1), 10 a 21 días (grupo 2) y 26 a 47 días de edad (grupo 3) sin importar sexo, raza y desprovistos de signos clínicos de enfermedad. Se tomó la porción media del yeyuno de cada animal de las cuales se extrajeron el ARN total y se realizó la técnica RT-PCR en tiempo real con cebadores específicos para los genes en estudio. La expresión de genes fue determinado por el método comparativo 2-ΔΔ Ct usando como gen endógeno a Gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) y como calibrador fetos de 11 meses. La expresión de los genes de las citoquinas y el factor de transcripción se caracterizó por un temprano incremento de la expresión en todos los genes en evaluación en los animales de 2 a 8 días de edad y una mayor expresión en los animales de 10 a 21 días, asociándose al desarrollo del sistema inmune y a una respuesta estimulada por la colonización de microorganismos del ambiente. En los animales de 26 a 47 días de edad la expresión de los genes de IL-4, IL-5 y GATA3 se vio reducida ligeramente y la expresión de los genes de IL-10 y TGF-β siguió incrementándose; ambas respuestas inmunes estarían asociadas a un proceso de adaptación y regulación frente a los microorganismos saprófitos y antígenos alimenticios. Sin embargo, IL-6 sigue aumentando su expresión en los animales de 26 a 47 días de edad, asociándose a una respuesta inflamatoria contra patógenos del ambiente. El análisis histopatológico mostró un aumento de individuos con presencia de leve enteritis catarral aguda difusa al aumentar la edad, alcanzando un 84% (5/6) en los animales de 26 a 47 días de edad, asociado a la presencia de patógenos como Cryptosporidium spp y Eimeria spp encontrados en este análisis, influyendo en la expresión de los genes de las citoquinas en estudio.<br>Tesis
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Ulsamer, Riera Arnau. "Regulació d'Osterix, un gen clau per a la diferenciació osteoblàstica induïda per BMP-2." Doctoral thesis, Universitat de Barcelona, 2009. http://hdl.handle.net/10803/1164.
Full textAbstract:
L'osteogènesi és un procés del desenvolupament dels vertebrats controlat per molècules senyalitzadores que proporcionen a les cèl·lules mesenquimals la informació necessària per a diferenciar al llinatge osteogènic.<br/><br/>D´entre aquestes, les citoquines de la família BMP (Bone Morphogenetic Protein) estan implicades en nombrosos aspectes del desenvolupament sent especialment importants en el desenvolupament de l'os. La unió d'aquestes BMPs als seus receptors inicia diferents vies de transducció de senyal que es classifiquen com a dependents o independents de Smads. <br/><br/>S'ha comprovat en cultius cel·lulars com les BMP estimulen l'expressió de factors de transcripció específics d'osteoblasts com són Runx2 i Osterix, així com marcadors de la diferenciació osteoblàstica com la Fosfatasa Alcalina, el Col·lagen tipus I o l'Osteocalcina.<br/><br/>Els objectius que ens vam platejar foren:<br/><br/>- Identificació de les vies de transducció de senyals induïdes per BMP-2 i<br/>altres mecanismes moleculars involucrats en l'activació d'Osterix.<br/><br/>a) Anàlisi de la regió promotora d'osterix i identificació de les regions de resposta a BMP-2.<br/>b) Identificació dels factors de transcripció que s'uneixen a aquestes regions i estudi de la seva regulació en resposta a BMP-2.<br/><br/>-Establiment de clons estables induïbles que ens permetin estudiar in vivo la regulació transcripcional d'Osterix.<br/><br/>-Estudi d'altres gens modulats transcripcionalment per BMP-2 i la seva implicació en l'osteogènesi.<br/><br/>El primer pas de la recerca fou aïllar dues seqüències del promotor d'osterix que es troben molt conservades entre humans i ratolins i clonar-les en un vector pGL2 que codifica per un gen reporter luciferasa. Mitjançant la transfecció i la deleció d'aquestes construccions vam observar una seqüència de 55 parells de bases a la regió més proximal que és la responsable de la resposta a BMP-2.<br/><br/>Mitjançant mutagènesi vam identificar una seqüència homeobox palindròmica (TAATTA) que és la responsable de la inducció d'osterix per BMP-2. La proteïna Dlx5, un factor de transcripció involucrat en l'osteogènesi, és capaç d'unir-se i activar el promotor d'osterix en aquesta seqüència. Aquesta observació es complementà amb estudis del patró d'expressió temporal d'aquests gens en que es comprovà que l'activació de Dlx5 per BMP-2 precedeix temporalment a la d'Osterix. <br/><br/>Mitjançant experiments de sobreexpressió i silenciació en cèl·lules C2C12 descrivim que Dlx5 és imprescindible per a l'expressió d'Osterix en resposta a BMP-2. No obstant, els experiments de sobreexpressió també indicaven que la BMP-2 té un efecte additiu a Dlx5 que ens permeté deduir que algun altre mecanisme havia d'estar implicat en l'activació d'Osterix per BMP-2.<br/><br/>Descartada una possible interacció de Dlx5 amb les proteïnes Smad, vam investigar les vies independents de Smads i observàrem que la proteïna p38-MAPK, que també és activada en resposta a BMP-2, és important per a l'activació d'Osterix induïda per BMP-2. Usant una variant constitutivament activa de MKK6, capaç d'activar p38, i SB203580, que és un inhibidor específic d'aquesta via, vam confirmar la fosforilació de Dlx5 per acció de p38 i que aquesta és funcional. <br/><br/>Per tal de confirmar aquestes observacions sobre el promotor del gen osterix endogen, es realitzaren experiments d'immunoprecipitació de cromatina (ChIP) que confirmaren la unió de Dlx5 al promotor d'osterix in vivo que s´incrementa en presència de MKK6 constitutivament activa. També vam observar l'acetilació de la histona H3 en presència de Dlx5 i el paper sinèrgic de l'activitat histona actetil-transferasa de la proteïna p300.<br/><br/>Així doncs, descrivim que Dlx5 integra les vies dependents i independents de Smad en la regulació d'Osterix. A més d'aquests resultats, s'ha estudiat el paper de Msx2 i p53 en la repressió de l'expressió d'Osterix i s'ha identificat un nou gen reprimit per BMP-2 que sembla estar implicat en la regulació del patró d'expressió d'aquest gen.<br><i>Commitment of mesenchymal cells to the osteoblast phenotype is controlled by a specific set of transcription factors activated by signals and regulatory pathways. Among them, Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP-2) signalling has been shown to be involved in bone formation.<br/><br/>Binding of BMP-2 to its type I and type II receptors induces both Smad dependent and Smad independent signal transduction pathways. BMPs are able to induce osteogenic factors like Runx2 or Osterix, as well as bone phenotype markers such are Alkaline Phosphatase, Collagen or Osteocalcin.<br/><br/>The main objectives for this thesis are:<br/><br/>-Identification of the signal transduction pathways induced by BMP-2 and other molecular mechanisms involved in Osterix activation.<br/>a) Analysis of the osterix promoter region and identification of the BMP-2 responsive regions.<br/>b) Identification of the transcription factors that binds to these regions and study of its regulation by BMP-2. <br/><br/>-To obtain stable inducible clones which allow us to study the Osterix transcriptional activity in vivo.<br/><br/>-To study other BMP-2 modulated genes and its possible role in the osteogenesis.<br/><br/>Our results demonstrate that induction of Dlx5 by BMP-2 mediates Osterix transcriptional activation. First, BMP-2 induction of Dlx5 precedes the induction of Osterix. Second, Dlx5 binds to the BMP-responsive sequences that we indentified in the Osterix promoter. Third, Dlx5 overexpression and knock-down assays demonstrate its role in activating Osterix expression in response to BMP-2.<br/><br/>Furthermore, we show that Dlx5 is a novel substrate for p38-MAPK in vitro and in vivo and that phosphorylated Dlx5 increases the transactivation potential of Dlx5. Thus, BMP activates expression of Osterix through the induction of Dlx5 and its further transcriptional activation by p38-mediated phosphorylation.<br/><br/>In addition, we studied the repressive role of Msx2 and p53 in the Osterix promoter, and indentified a possible new gene involved in the regulation of the Osterix's expression pattern. </I>
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Jiménez, Altayó Francesc. "Mecanismos implicados en los cambios estructurales, mecánicos y funcionales asociados a procesos inflamatorios de arterias cerebrales y mesentéricas de resistencia de rata." Doctoral thesis, Universitat Autònoma de Barcelona, 2006. http://hdl.handle.net/10803/5387.
Full textAbstract:
El objetivo de esta tesis ha sido estudiar y analizar las modificaciones estructurales, mecánicas y funcionales que se producen en un proceso inflamatorio en general y en concreto en un episodio de isquemia cerebral.<br/>El trabajo realizado se compone de dos partes: i) estudio del efecto de un proceso de isquemia-reperfusión sobre las propiedades estructurales, mecánicas y miogénicas en la arteria cerebral media de rata. ii) estudio mediante un modelo "in vitro" de inflamación que consiste en la incubación de las arterias en medio de cultivo con una de las citoquinas (IL-1ß) que se sobrexpresan después de un período de isquemia-reperfusión, sobre las propiedades estructurales, mecánicas y funcionales de la arteria mesentérica de resistencia de rata.<br/>El proceso de isquemia (90 minutos)-reperfusión (24 horas) produjo los siguientes cambios en la arteria cerebral media: 1) disminución importante del tono miogénico acompañado por un aumento en la producción de aniones superóxido 2) incremento en el tamaño de la pared vascular debido al aumento en el número de células adventicias 3) aumento en el tamaño de las fenestras de la lámina elástica interna, hecho que podría asociarse al aumento en la elasticidad intrínseca observado en estas arterias 4) disminución del estrés de la pared como consecuencia del aumento en el tamaño de la misma 5) este proceso también modificó aunque con menor intensidad, algunos de los parámetros estructurales analizados en arterias del lado contralateral . Estos cambios, se deban probablemente a alteraciones sistémicas consecuencia de la isquemia focal.<br/>La incubación de las arterias mesentéricas de resistencia en medio de cultivo con IL-1ß durante 14 horas: 1) no modificó ni la estructura ni la mecánica de la pared arterial 2) empeoró las relajaciones dependientes de óxido nítrico sin afectar a la capacidad vasorelajadora general del vaso. El empeoramiento de la relajación parece ser debido, al menos en parte, a una disminución en la biodisponibilidad del óxido nítrico 3) aumentó la producción de anión superóxido en la pared vascular que parecería estar sintetizado principalmente por la xantina oxidasa. Los aniones superóxido producidos por acción de la xantina oxidasa serían los principales responsables de la disminución en la biodisponibilidad del óxido nítrico, que a su vez sería el responsable de la disminución de las respuestas relajantes mediadas por óxido nítrico.<br/>Estos resultados indicarían que la arteria cerebral media sufre una serie de cambios provocados por el proceso de isquemia-reperfusión que permitirían a estas arterias adaptarse a los cambios en el flujo sanguíneo necesarios para reducir el daño neuronal, mejorando la irrigación del cerebro después de un episodio de isquemia-reperfusión. El efecto de las citoquinas durante este período podría también afectar a las respuestas funcionales de las arterias debido al aumento en la producción de anión superóxido observado en esta patología. Las aportaciones de estos estudios podrían en un futuro abrir líneas de investigación que podrían contribuir al diseño de nuevos fármacos con capacidad para prevenir episodios de isquemia cerebral.<br>The aim of the present study has been to analyse the structural, mechanical and functional alterations that take place in an inflammatory process as cerebral ischaemia.<br/>Our results are divided in two parts: i) a study of the effect of ischaemia-reperfusion on structural, mechanical and myogenic properties of rat middle cerebral artery and ii) to analyze, using an in vitro model of inflammation, the effect of incubation with IL-1ß, one of several cytokines that is overexpressed after a period of ischemia-reperfusion, on structural mechanical and functional properties of rat mesenteric resistance arteries. <br/>The occlusion of the right middle cerebral artery (90 minuts) following 24 hours of reperfusion produced: 1) a decrease of myogenic tone together with an increase in superoxide anion production 2) an enlargement of the vascular wall due to the increase in the total number of adventitial cells 3) an enlargement of fenestrae area of the internal elastic lamina that was associated with the increase on intrinsic elasticity observed in these arteries 4) a diminished wall stress as a result of the increase in the wall thickness 5) ischaemia-reperfusion also modified although to a lesser degree, some of the structural parameters in arteries from the contralateral side of ischemia. These changes observed in the contralateral side could likely be associated to systemic alterations produced as a consequence of focal ischaemia. <br/>Fourteen hours incubation of mesenteric resistance arteries in culture medium with IL-1ß: 1) did not modify either the structure or the mechanics of the arterial wall; 2) impaired nitric oxide dependent relaxation without affecting the vasodilatation capacity of the arteries. The impairment of nitric oxide induced relaxation by IL-1ß could be due to a decrease on nitric oxide availability; 3) increased superoxide anion production in the vascular wall that seems to be mainly synthesized by xanthine oxidase. The superoxide anion produced by xanthine oxidase would play a role in decreasing nitric oxide availability, which in turn would diminish vasodilatation mediated by nitric oxide. <br/>These results suggest that the middle cerebral artery undergoes multiple changes caused by ischaemia-reperfusion that will allow these arteries to adapt to the blood flow alterations needed to reduce the neural damage, improving brain blood flow. Cytokines could affect functional responses of the arteries due to the increase in superoxide anion production observed in this pathology. In the future, this study could open new research that could contribute to the design of new drugs with potential interest to prevent cerebral ischaemia episodes.
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Gallardo, Vigo Eduard. "Aspectes immunopatogènics de les miopaties inflamatòries." Doctoral thesis, Universitat Autònoma de Barcelona, 2002. http://hdl.handle.net/10803/4388.
Full textAbstract:
Les miopaties inflamatòries (MI) es defineixen com a malalties musculars amb presència d'infiltrats inflamatoris a la biòpsia muscular. Hem estudiat la miositis per cossos d'inclusió (MCI), la dermatomiositis (DM) i les disferlinopaties (DISF) perque hem aconseguit sèries de malalts llargues clínicament ben definides. En el primer treball es va estudiar la freqüènica i possible rellevància immunopatogènica de banda monoclonal (BM) en malalts amb MCI. Per això vàrem estudiar el sèrum de 70 malalts amb MCI i 80 controls. Es van analitzar per immunofixació, immunohistoquímica (IH), ANAs, immunoprecipitació (IP) d'ARNs i Western-Blot (WB). Un 22.8% de malalts amb MCI presentaren banda monoclonal. Els ANAs i la IP de ARNs no foren significatius. Alguns sèrums reconeixien mionuclis per IH. El WB va revelar reactivitat contra diversos antígens musculars amb més freqüència a la MCI i BM. Concluim que la MCI, sense tenir en compte l' edat, s'associa més freqüentment a BM, que sovint reconeix antígens musculars, especialment mionuclis, suggerint una desregulació immunològica. En el segon i tercer treballs es va estudiar el paper dels factors de transcripció STAT, i especialment STAT1 en la patogènia de la de DM. Es varen estudiar biòpsies de DM, polimiositis (PM), músculs isquèmics i controls, així com cultius primaris de múscul esquelètic (CPME) humà estimulats amb diferents citoquines/factors de creixement. La anàlisi es va realitzar mitjançant IH, WB i RT-PCR semiquantitativa. Es va observar un augment d'expressió de STAT1 en les fibres perifasciculars (FP) a la DM i no a la resta de biòpsies estudiades on només hi havia expressió als infiltrats inflamatoris. En els CPME només l' IFN-g i no altres citoquines/factors de creixement estudiats augmentava la expressió de STAT1. A més es va observar una expressió incrementada de catepsines B i L a les FP i no en les altres miopaties estudiades. Els nivells de Bclx-l també estaven augmentats i els de Fas es manteniren a nivells basals. La fludarabina bloquejava els efectes del IFN-g. Concluim d'aquests treballs que l'expressió augmentada de catepsines a les FP a la DM pot contribuir a la seva patogènia junt amb un fenòmen d'isquèmia, que el model de CPME pot ser d'utilitat en l'estudi del paper de les citoquines a les MI i que la fludarabina pot ésser d'utilitat en el tractament de malalts amb DM resistents a altres tractaments. En el darrer treball es va caracteritzar la inflamació en malalts amb DISF, un tipus de distròfia muscular lligada a un gen (disferlina) descrit molt recentment, i es va observar un predomini de macròfags amb un nombre reduït de limfòcits T CD8+ amb una absència d'expressió de complex d'histocompatibilitat de classe I (MHC-I). Concluim que en malalts joves amb debilitat de cintures esporàdica, CK molt aixecades, fibres necròtiques, infiltrats endomisials i/o perivasculars, sense augment de MHC-I a la biòpsia muscular, s'ha de plantejar un diagnòstic de DISF ja que en les fases inicials de la malaltia els signes de distròfia muscular poden ser molt lleus.<br>Las miopatías inflamatorias (MI) se definen como enfermedades musculares con presencia de infiltrados inflamatorios en la biopsia muscular. Hemos estudiado la miositis por cuerpos de inclusión (MCI), la dermatomiositis (DM) y las disferlinopatías (DISF) porque hemos conseguido series de enfermos amplias clínicamente bien definidas. En el primer trabajo se estudió la frecuencia y posible relevancia inmunopatogénica de banda monoclonal (BM) en enfermos con MCI. Para ello estudiamos el suero de 70 enfermos con MCI y 80 controles. Se analizaron mediante inmunofijación, inmunohistoquímica (IH), ANAs, inmunoprecipitación (IP) de ARNs y Western-Blot (WB). Un 22.8% de enfermos con MCI presentaron banda monoclonal. Los ANAs y la IP de ARNs no fueron significativos. Algunos sueros reconocían mionúcleos por IH. El WB reveló reactividad contra diversos antígenos musculares con más frecuencia en la MCI y BM. Concluimos que la MCI, sin tener en cuenta la edad, se asocia con más frecuencia a BM, que a menudo reconoce antígenos musculares, especialmente mionúcleos, sugiriendo una desregulación inmunológica. En el segundo i tercer trabajos se estudió el papel de los factores de transcripción STAT, y especialmente STAT1 en la patogenia de la DM. Se estudiaron biopsias de DM, polimiositis (PM), músculos isquémicos y controles, así como cultivos primarios de músculo esquelètico (CPME) humano estimulados con distintas citoquinas/factores de crecimiento. El análisis se realizó mediante IH, WB y RT-PCR semicuantitativa. Se observó un aumento de expresión de STAT1 en las fibras perifasciculares (FP) en la DM y no en el resto de biopsias estudiadas donde sólo había expresión en los infiltrados inflamatorios. En los CPME sólo IFN-g y no otras citoquinas/factores de crecimiento estudidos aumentaba la expresión de STAT1. Además se observó una expresión aumentada de catepsinas B y L en las FP y no en las otras miopatías estudiadas. Los niveles de Bclx-l también estaban aumentados y los de Fas se mantuvieron a niveles basales. La fludarabina bloqueaba los efectos del IFN-g. Concluimos de estos trabajos que la expresión aumentada de catepsinas en las FP en la DM puede contribuir a su patogenia junto con un fenómeno de isquemia, que el modelo de CPME puede ser de utildad en elestudio del papel de las citoquinas en las MI y que la fludarabina puede ser de utilidad en el tratamiento de enfermos con DM resistentes a otros tratamientos. En el último trabajo se caracteritzó la inflamación en enfermos con DISF, un tipo de distrofia muscular ligada a un gen (disferlina) descrito muy recientemente, y se observó un predominio de macrófagos con un número reducido de linfocitos T CD8+ con una ausencia de expresión de complejo de histocompatibilidad de clase I (MHC-I). Concluimos que en enfermos jóvenes con debilidad de cinturas esporádica, CK muy elevadas, fibras necróticas, infiltrados endomisiales y/o perivasculares, sin aumento de MHC-I en la biopsia muscular, se ha de plantear un diagnóstico de DISF ya que en las fases iniciales de la enfermedad los signos de distrofia muscular pueden ser muy leves.<br>The inflammatory myopathies (MI) can be defined as muscular diseases that show inflammatory infiltrates in the muscle biopsy. We have studied inclusion bosy myositis (IBM), dermatomyositis (DM) and disferlinopathies (DYSF) because we have gathered long series of patients clinically well-defined. In the first paper we studied the frequency and possible immunopathologic relevance of monoclonal gammopathy (MG) in patients with IBM. We studied sera of 70 patients with IBM and 80 controls. We performed immunofixation, immunohistochemistry (IH), ANAs, RNA immunoprecipitation (IP) and Western-Blot (WB). 22.8% of IBM patientspresented MG. ANAs and RNA IP were not significant Some sera recognized myonuclei in the IH. WB showed reactivity against several muscle antigens, more frequently in IBM with MG. We conclude that IBM, regardless of age, is frequently associated with MG, that often recognizes muscle antigens, specially myonuclei, suggesting and immunologic disregulation in these patients. In the second and third papers we studied the role of transcription factors STAT, specially STAT1 in the pathogenesis of DM. We studied both, muscle biopsies of DM, polymyositis (PM), ischemic muscles and controls, and human skeletal muscle primary cultures (SMPC) stimulated with diferent cytokines/growth factors. We performed IH, WB and semiquantitative RT-PCR . We observed an increased expression of STAT1in perifascicular muscle fibers (PF) in DM and not in the other biopsies studied, where only inflammatory infiltrates were positive. In the SMPC only IFN-g and not other cytokines/growth factors studied was able to upregulate the expression of STAT1. Furthermore, an increased expression of cathepsins B and L was observed at the PF in DM and not in the other biopsies studied. Bclx-l levels were also raised whereas Fas expression remained unchanged. Fludarabine blocked IFN-g effects. We conclude from this work that increased expression of cathepsins at the PF in DM may contribute to its pathology together with the ischemia, SMPC can be useful to study the role of cytokines in IM and that fludarabine may be useful in the treatment of patients with DM who are resistant to other therapies. In the last paper we characterized inflammation in patients with DYSF, a type of muscle dystrophy linked to a gene (dysferlin) recently described, and we observed an increased number of macrophages, a reduced number of T CD8+ lymphocytes together with a lack of histocompatibility complex class-I (MHC-I) expression. We conclude that in young patients with sporadic limb girdle weakness, high CK levels, necrotic fibers, endomysial and/or perivascular infiltrates, without raised expression of MHC-I, a diagnosis of DYSF should be considered, specially at the initial stages of the disease when the dystrophic features may be very benign.
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Cuesta, Matarredona Eduard. "Dianes de la Fructosa 1,6-Bisfosfat en la prevenció de l'hepatitis induïda per galactosamina en fetge de rata." Doctoral thesis, Universitat de Barcelona, 2006. http://hdl.handle.net/10803/1151.
Full textAbstract:
OBJETIVO: Fructosa 1,6-bisfosfat (F1,6BP) protege los órganos contra gran número de procesos que provocan inflamación. Hipotetizamos que el efecto primario de la F1,6BP es el de prevenir la activación de los macrófagos y la secreción de citoquinas. Nuestra intención fue determinar las dianas tisulares y celulares de este azucar bifosforilado e investigar en profundidad su mecanismo de acción. <br/><br/>INTERVENCIONES: La acción protectora de F1,6BP fue analizada en ratas Sprague-Dawley (de entre 200 y 250 gramos de peso corporal) a las cuales se les había inducido hepatitis mediante la inyección de galactosamina (GalN). Los efectos in vivo de la F1,6BP fueron evaluados mediante la determinación de la actividad transaminasa en plasma, la determinación de endotoxinas en plasma y la determinación del factor necrótico de tumoración alfa (TNF-alfa) en plasma y en hígado total en ratas tratadas con GalN. Las dianas de la F1,6BP para reducir la respuesta de los macrófagos al lipopolisacárido (LPS) fueron determinadas mediante el estudio de la correlación entre los cambios en la producción de TNF-alfa y los flujos de potasio a través de la membrana celular en cultivos primarios de células de Kupffer.<br/><br/>DETERMINACIONES Y PRINCIPALES RESULTADOS : Los resultados obtenidos in vivo indican que el tratamiento con F1,6BP previene el daño causado por la administración de GalN en células del parénquima hepático. Esta protección se ha asociado principalmente a la reducción en la respuesta inflamatoria. F1,6BP previene la endotoxemia inducida por GalN en rata y ésta correlaciona con la inhibición de la secreción de histamina por parte de los mastocitos peritoneales, evento que precede al incremento de endotoxinas en plasma y de la producción hepática de TNF-alfa. Por otro lado, el tratamiento con F1,6BP reduce la sensibilidad de los macrófagos al LPS, cosa que provoca un descenso en la producción de TNF-alfa. Los resultados in vitro muestran que la F1,6BP inhibe la respuesta y la secreción de TNF-alfa por parte de las células de Kupffer a las que se ha administrado LPS. La F1,6BP previene estos efectos mediante la inhibición de la activación de los canales de potasio por LPS en este modelo celular.<br/><br/>CONCLUSIONES: El efecto modulador de los canales de potasio en la adición exógena de F1,6BP explica sus efectos como antihistamínico y antiinflamatorio, cosa que incrementa enormemente el interés terapéutico de este compuesto bifosforilado.
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Araya, Araneda Paloma Alexandra. "Influencia del género en la expresión de citoquinas y perfiles microbiológicos en individuos con periodontitis." Tesis, Universidad de Chile, 2013. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/117135.
Full textAbstract:
Trabajo de Investigación
Requisito para optar al Título de
Cirujano Dentista<br>No autorizada por el autor para ser publicada a texto completo en el portal de tesis electrónica<br>La Periodontitis es una patología infecciosa de naturaleza inflamatoria asociada a
la colonización de un biofilm patogénico, donde los agentes etiológicos principales
son Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa), Porphyromonas gingivalis (Pg)
y Tannerella forsythia (Tf), que actúan como estímulo desencadenando eventos
donde están implicados mediadores inflamatorios como Interleuquina (IL)-6, IL-10,
IL-17 y TGF-β1. Estudios reconocen la existencia de indicadores de riesgo que
modularían la susceptibilidad del hospedero a desarrollar periodontitis, estando
entre estos el género. El objetivo de este estudio fue comparar, según el género,
los parámetros clínicos periodontales, expresión de citoquinas y
periodontopatógenos, en pacientes con periodontitis.
Se realizó un análisis secundario de registros del proyecto FONDECYT
Nº1090046, construyendo una data con los pacientes con diagnóstico de
periodontitis y antecedentes en: parámetros clínicos (profundidad al sondaje (PS),
nivel de inserción clínica (NIC), sangrado al sondaje (SS)), niveles de citoquinas
(IL-6, IL-10, IL-17, TGF-β1) o prevalencia/proporción del total de Pg, Aa y Tf. Los
datos se compararon utilizando T-test, Chi² y U de Mann-Whitney, con
p-value< 0,05.
De un n total= 59, las mujeres (n= 39) presentaron mayor PS y SS que los
hombres (3,3 mm vs 3,2 mm; 58,6% vs 55,1%), sin embargo, los hombres
presentaron mayor NIC que las mujeres (4,1 mm vs 3,8 mm). Los niveles de
citoquinas, en pg/ml, para el género femenino, fueron mayores en IL-6, IL-10 y
TGF-β1 en comparación al género masculino (9,45 vs 5,79; 66,39 vs 56,89; 13,25
vs 6,51), sin embargo, los hombres tuvieron mayores niveles de IL-17 que las
mujeres (143,77 vs 125,97). Por otro lado, las mujeres al ser comparadas con los
hombres presentaron mayor prevalencia de Pg, Aa y Tf (89,5% vs 85%; 23,7% vs
10%; 26,3% vs 20%), mientras que para la media de la proporción de UFC/ml con
respecto al recuento total, el género femenino tuvo mayores proporciones de Pg y
Aa con respecto al género masculino (51,6% vs 28,9%; 5,2% vs 1%), sin embargo,
los hombres presentaron mayores niveles de Tf con respecto a las mujeres (1,8%
2
vs 6,3%). Sólo la diferencia en la media de la proporción (con respecto a la
microbiota total cultivable) de Pg, fue estadísticamente significativa
(p-value= 0,0095), siendo mayor en mujeres.
En estos pacientes no se encontraron diferencias significativas, según género, en
los parámetros clínicos, expresión de citoquinas y perfiles microbiológicos. Sólo la
proporción de Pg, en relación a la microbiota total cultivable, fue mayor y
estadísticamente significativa en mujeres. Sin embargo, destaca la mayor
severidad y mayores niveles de IL-17 en el género masculino comparado al femenino.
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ArayaAaraneda, Paloma Alexandra. "Influencia del género en la expresión de citoquinas y perfiles microbiológicos en individuos con periodontitis." Tesis, Universidad de Chile, 2013. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/117149.
Full textAbstract:
Trabajo de Investigación
Requisito para optar al Título de
Cirujano Dentista<br>Autor no autoriza el acceso a texto completo de su tesis en el Portal de Tesis Electrónicas<br>La Periodontitis es una patología infecciosa de naturaleza inflamatoria asociada a
la colonización de un biofilm patogénico, donde los agentes etiológicos principales
son Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa), Porphyromonas gingivalis (Pg)
y Tannerella forsythia (Tf), que actúan como estímulo desencadenando eventos
donde están implicados mediadores inflamatorios como Interleuquina (IL)-6, IL-10,
IL-17 y TGF-β1. Estudios reconocen la existencia de indicadores de riesgo que
modularían la susceptibilidad del hospedero a desarrollar periodontitis, estando
entre estos el género. El objetivo de este estudio fue comparar, según el género,
los parámetros clínicos periodontales, expresión de citoquinas y
periodontopatógenos, en pacientes con periodontitis.
Se realizó un análisis secundario de registros del proyecto FONDECYT
Nº1090046, construyendo una data con los pacientes con diagnóstico de
periodontitis y antecedentes en: parámetros clínicos (profundidad al sondaje (PS),
nivel de inserción clínica (NIC), sangrado al sondaje (SS)), niveles de citoquinas
(IL-6, IL-10, IL-17, TGF-β1) o prevalencia/proporción del total de Pg, Aa y Tf. Los
datos se compararon utilizando T-test, Chi² y U de Mann-Whitney, con
p-value< 0,05.
De un n total= 59, las mujeres (n= 39) presentaron mayor PS y SS que los
hombres (3,3 mm vs 3,2 mm; 58,6% vs 55,1%), sin embargo, los hombres
presentaron mayor NIC que las mujeres (4,1 mm vs 3,8 mm). Los niveles de
citoquinas, en pg/ml, para el género femenino, fueron mayores en IL-6, IL-10 y
TGF-β1 en comparación al género masculino (9,45 vs 5,79; 66,39 vs 56,89; 13,25
vs 6,51), sin embargo, los hombres tuvieron mayores niveles de IL-17 que las
mujeres (143,77 vs 125,97). Por otro lado, las mujeres al ser comparadas con los
hombres presentaron mayor prevalencia de Pg, Aa y Tf (89,5% vs 85%; 23,7% vs
10%; 26,3% vs 20%), mientras que para la media de la proporción de UFC/ml con
respecto al recuento total, el género femenino tuvo mayores proporciones de Pg y
Aa con respecto al género masculino (51,6% vs 28,9%; 5,2% vs 1%), sin embargo,
los hombres presentaron mayores niveles de Tf con respecto a las mujeres (1,8%
2
vs 6,3%). Sólo la diferencia en la media de la proporción (con respecto a la
microbiota total cultivable) de Pg, fue estadísticamente significativa
(p-value= 0,0095), siendo mayor en mujeres.
En estos pacientes no se encontraron diferencias significativas, según género, en
los parámetros clínicos, expresión de citoquinas y perfiles microbiológicos. Sólo la
proporción de Pg, en relación a la microbiota total cultivable, fue mayor y
estadísticamente significativa en mujeres. Sin embargo, destaca la mayor
severidad y mayores niveles de IL-17 en el género masculino comparado al
femenino.
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Quintana, Romero Albert. "Implicación de las citoquinas TNF-α E IL-6 y de las metalotioneínas en la neuroinflamación desencadenada por lesión cerebral." Doctoral thesis, Universitat Autònoma de Barcelona, 2007. http://hdl.handle.net/10803/3797.
Full textAbstract:
La respuesta frente a lesiones traumáticas está orquestada por las citoquinas, grupo heterogéneo de proteínas de bajo peso molecular implicadas en la señalización intercelular, tales como la interleuquina-6 (IL-6) o el factor de necrosis tumoral alfa (TNF)-α. Pese a que estos dos factores fueron originalmente descritos como inductores y mediadores de la vertiente pro-apoptótica de la respuesta inflamatoria también se han observado implicaciones beneficiosas de estas citoquinas en la recuperación y supervivencia del parénquima nervioso frente a agresiones de diversa naturaleza. Entre los factores neuroprotectores inducidos por la IL-6 en respuesta a lesión se encuentran las metalotioneínas (MTs), proteínas de bajo peso molecular y ricas en cisteínas con un claro papel antioxidante, antiapoptótico y neurotrófico, pudiendo mediar en parte las acciones beneficiosas de esta citoquina, sugiriéndose por tanto un potencial uso terapéutico de estas proteínas.<br/>Mediante el uso de animales modificados genéticamente hemos aportado resultados sobre el papel que tanto la IL-6, como el TNF-α o las metalotioneínas pueden tener en procesos patológicos y/o daño en el sistema nervioso central, habiéndose usado ratones que sobreexpresan IL-6 específicamente a cerebro (ratones GFAP-IL6), ratones con una deleción en el gen de la IL-6 (ratones IL6KO) , ratones con deleciones bien del receptor 1 o del receptor 2 del TNF-α (ratones TNFR1KO y TNFR2KO respectivamente) y ratones con deleción en los genes de la metalotioneína 1 y 2 (MTKO) con o sin tratamiento exógeno de MTs nativas y recombinantes. Estos ratones han sido sometidos a un proceso lesivo como la criolesión, consistente en la aplicación de un pellet de nieve carbónica durante 30 segundos en el cráneo del animal.<br/>Se ha analizado neurohistológicamente los diferentes animales mediante técnicas immunohistoquímicas así como la expresión génica de diferentes marcadores de apoptosis, supervivencia y de reposta inflamatòria mediante técnicas de biología molecular tales como la hibridación in situ, microarrays y Ribonuclease Protection Assay (RPA). También hemos evaluado el estado funcional de los animales mediante técnicas conductuales como el elevated plus maze (EPM), el holeboard (HB) o el horizontal ladder beam (HLB). <br/>Los resultados obtenidos permiten concluir que si bien la sobreexpresión de IL-6 de manera crónica es perjudicial, estos animales presentan una reducida muerte celular y menor estrés oxidativo, sugiriendo la participación de esta citoquina en procesos de supervivencia, seguramente mediante la inducción de la síntesis de factores antioxidantes y antiapoptóticos. Los animales IL6KO presentan una reducida respuesta inflamatoria pero un incremento en los niveles de marcadores de estrés oxidativo y, probablemente por este motivo, un incremento en la muerto celular apoptótica tras la criolesión. En este sentido, los animales MTKO presentan un fenotipo muy similar tras lesión, mientras que la administración exógena de MTs revierte estos efectos, independientemente de la homologia con la especie de la cual se ha obtenido la MT, sugiriendo una acción independiente de receptor y abriendo posibles usos terapéuticos de las MTs.<br/>La deficiencia en la señalización del TNF-α, ya sea por el receptor 1 o 2 comporta una disminución del daño a nivel molecular, observándose una disminución tanto de genes implicados en la respuesta celular a lesiones, como de marcadores pro-inflamatorios y una menor activación de vías apoptóticas. Este menor daño se correlaciona con un menor daño a nivel funcional. A nivel conductual tanto los animales TNFR1KO como los TNFR2KO presentan una mayor actividad exploratoria respecto sus controles.<br/>Estos resultados aportan nuevas pruebas de la importancia del TNF-α y la IL-6 en procesos inflamatorios, y su papel dual, siendo mediadores tanto de procesos pro-apoptóticos como de supervivencia (mediados, en parte, por las MTs) dependiendo del nivel de expresión y, muy probablemente, de la célula en la cual está actuando.<br>Inflammatory response alter traumatic brain injury is orchestrated by cytokines, a complex group of proteins implicated in intercellular signalling, such as interleukin (IL)-6 or tumoral necrosis factor (TNF)-α. Although these two factors were originally described to mediate the pro-apoptotic responses of inflammation, they have recently been described to exert beneficial actions in both the cell survival and tissue recovery after injury. Among the factors induced by IL-6 one can find metallothioneins (MTs), low-weight, cysteine-rich proteins with antioxidant, antiapoptotic and neuroprotective actions; which could mediate, at least in part, the beneficial actions of IL-6.<br/>The use of genetically modified mice has allowed us to gain insight in the role of IL-6, TNF-α and MTs in the pathophysiology of the central nervous system. We have used animals lacking the IL-6 gene (IL6KO), mice overexpressing IL-6 in the brain (GFAP-IL6 mice), mice lacking either TNF-α receptor 1 or receptor 2 (TNFR1KO and TNFR2KO) and animals lacking MT-I and MT-II (MTKO mice) treated with saline solution or with exogenous MTs. All of these mice were subjected to a focal freeze injury such as cryolesion, placing a dry ice pellet for 30 seconds on the parietal bone.<br/>The neurohistological status of these animals was assessed by means of immunohistochemistry. Gene expression of several apoptotis, survival and inflammatory response markers was assessed by in situ hybridization, microarray and ribonuclease protection assay (RPA). The functional status of these mice was also assessed by behavioural tests, namely elevated plus maze (EPM), hole board (HB) and horizontal ladder beam (HLB).<br/>Our present results show that although chronic IL-6 expression is detrimental, GFAP-IL6 mice show reduced cell death and lower oxidative stress, suggesting a role for IL-6 in survival, which may be mediated by inducing antioxidant and antiapoptotic factors. IL6KO animals, on the other hand, show a decreased inflammatory response but an increase in cell death after lesion. In this regard, MTKO mice present a similar phenotype after injury which can be reverted by exogenous MT administration, an effect which does not depend on the homology of the different MT isoforms and mice, suggesting a receptor-independent action, opening a possible therapeutic use for MTs.<br/>Deficiency in TNF-α signalling, by lack of either receptor 1 or 2, involves a reduction in the tissue damage, with a reduction in genes involved in cellular response to lesion altogether with reduced pro-inflammatory markers and lower activation of pro-apoptotic pathways. This reduced damage correlates with a better functional response. Behaviourally, both TNFR1KO and TNFR2KO mice show an increased exploratory activity compared to the control mice.<br/>In conclusion, our results give new insights in the importance of TNF-α and IL-6 in inflammatory processes, and their dual role, being mediators both of pro-apoptotic and survival responses, being the alter in part mediated by MTs. This dual response may depend on the level of expression and, very likely, on the cell where it is acting.
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Lagos, Alfaro Carolina Andrea. "Efecto de citoquinas pro-inflamatorias sobre el estado de metilación global del DNA y de regiones promotoras de genes de la vía IRE1 en pacientes con síndrome de Sjögren." Tesis, Universidad de Chile, 2017. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/145233.
Full textAbstract:
Magister en biomedicina celular y molecular<br>El síndrome de Sjögren (SS) es una enfermedad autoinmune, inflamatoria, crónica y sistémica, de etiología desconocida y afecta principalmente a glándulas salivales y lagrimales. Se ha estudiado la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR= del inglés Unfolded protein response) en glándulas salivales labiales (GSL) de pacientes SS, evidenciando diferencias en la expresión de componentes de la vía de señalización IRE1α (Inositol-requiring enzyme 1a). En esta tesis se evaluó si los cambios de expresión de proteínas involucradas en la vía IRE1α podría deberse a cambios epigenéticos. En este contexto, se realizó el análisis de metilación global del DNA y de las regiones promotoras de genes de la vía IRE1α en GSL de pacientes SS y controles. También se estudió el efecto de citoquinas pro-inflamatorias, sobre el estado de metilación de promotores de genes de la vía IRE1α en cultivos de células de glándula submandibular humana (HSG). La metilación de los promotores se evaluó mediante PCR sensible a metilación o análisis de disociación de alta resolución sensible a metilación y la metilación global se determinó mediante inmunofluorescencia. Los resultados obtenidos mostraron un aumento significativo en la metilación de los promotores de los genes IRE1α, XBP-1 (del inglés X box-binding protein-1) y GRP78 (del inglés Glucose-Regulated Protein, 78kDa) en GSL de pacientes SS. Se observó una correlación positiva significativa del estado de metilación de los promotores mencionados con los niveles de citoquinas pro-inflamatorias (TNF-α e IFN-γ) presentes en las GSL. La metilación global del DNA en cortes de GSL de pacientes SS mostró una disminución significativa comparada con los individuos controles. La metilación global del DNA se relacionó negativamente con el score de foco. La hipometilación global del DNA de GSL de pacientes SS podría explicar la sobre-expresión de ciertos genes, como se ha demostrado en otras enfermedades autoinmunes, como LES. En células HSG tratadas con TNF-α o IFN-γ (10 ng/mL) se evidenció un aumento en el índice de metilación del promotor de GRP78 luego de 24 hrs de tratamiento, mientras que para el promotor de IRE1α se encontró un aumento en el estado de metilación luego de 48 hrs de estimulación con TNF-α (1 ng/mL). El aumento de la metilación en los promotores de los genes de IRE1α, XBP-1 y GRP78 podría explicar, en parte, los niveles disminuidos de sus respectivos mRNAs en las GSL de pacientes SS. Los análisis de correlación sugieren que las citoquinas podrían regular el estado de metilación de los tres promotores estudiados en GSL de pacientes SS. Más aún, los estudios in vitro muestran que las citoquinas pro-inflamatorias (TNF-α e IFN-γ) aumentan los niveles de metilación en los promotores de IRE1α y GRP78, resultados que validan los análisis de correlación entre los niveles de mRNAs de estas citoquinas y los índices de metilación de los promotores respectivos en GSL de pacientes SS.
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Ponce, Ibáñez Claudio Miguel. "Análisis comparativo de genes modulados por citoquinina en frutos de Prunus avium y Prunus persica post-lignificación." Tesis, Universidad de Chile, 2018. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/152817.
Full textAbstract:
Seminario de Título entregado a la Universidad de Chile en cumplimiento parcial de los requisitos para optar al Título de Ingeniero en Biotecnología Molecular.<br>El cerezo (Prunus avium) y el durazno (Prunus persica) corresponden a cultivos de
exportación de alta rentabilidad para Chile. Dentro de los diversos factores comerciales
asociados al fruto, se encuentran parámetros fisiológicos como el tamaño del fruto, sólidos
solubles y tiempo de maduración, algunos de los cuales se conocen como índices de
maduración. Estos, son regulados en diversas especies por reguladores del crecimiento de
plantas, entre los cuáles se encuentra citoquinina, una fitohormona involucrada en los
procesos de división y diferenciación celular. Con el objetivo de estudiar los factores
moleculares de cereza y durazno involucrados en la respuesta a citoquinina, en este trabajo
se realizaron análisis cuyo objetivo es determinar si en frutos de cereza y durazno los “Top
25 de genes inducidos por citoquinina”, que son fuertemente inducidos por citoquinina en
la planta modelo Arabidopsis, mantienen este patrón de expresión frente al tratamiento
exógeno de citoquinina.
Mediante BLAST bidireccionales, se identificaron 12 y 13 posibles ortólogos de este
conjunto de genes en el genoma de Prunus avium y Prunus persica respectivamente,
donde 11 de ellos se comparten entre ambas especies. De estos 11 posibles genes ortólogos
analizados en la plataforma INTERPROSCAN, todos presentaron los dominios proteicos
característicos de las proteínas codificadas por estos genes de Arabidopsis. Además,
análisis a nivel genómico de estos posibles ortólogos mostraron que, algunos de estos
genes conservan su estructura genómica, mientras que otros divergen entre las especies.
Dentro del mismo análisis, se observó que todos los 11 genes presentan elementos en cis
de respuesta a citoquinina a lo largo de sus loci. Adicionalmente, algunos presentanelementos en cis de respuesta a giberelina y ácido abscísico, sugiriendo que podrían estar
regulados por más de una fitohormona. De estos 11 genes, la localización genética de
cinco de ellos se encuentra dentro de algún QTL previamente descrito y localizado en el
mapa TxE, mientras que tres de ellos están dentro de un QTL de Ripening, sugiriendo que
estos genes podrían estar relacionados con este proceso. Los niveles de transcrito de siete
de estos posibles ortólogos fueron medidos mediante RT-qPCR, mostrando que la
expresión es inducida por la aplicación exógena de citoquinina en cereza y durazno, y lo
hacen en una manera especie específica.
Los resultados sugieren que estos genes estarían bajo los mecanismos moleculares por los
cuáles la fitohormona citoquinina ejerce su regulación.<br>In Chile, Sweet cherry (Prunus avium) and Peach (Prunus persica) are high yield export
crops. Among the diverse commercial factors associated with these fruits, physiological
parameters such as fruit size, soluble solids and the ripening time, some of which are
known as indicators for the ripening. These have been described to be regulated in various
species by plant growth regulators such as cytokinin. With the aim of studying the
molecular factors associated with cytokinin response of sweet cherry and peach, the
present study focused on performing analyses to identify if the “Top 25 cytokinin induced
genes”, which are strongly modulated by the phytohormones cytokinin in the model plant
Arabidopsis thaliana, are conserved in sweet cherry and peach fruits.
Using a bidirectional BLAST, 12 and 13, putative orthologous of this set of genes were
identified in the Prunus avium and Prunus persica genomes, respectively, 11 of which are
conserved between both species. Of these 11 putative orthologous genes analyzed in the
INTERPROSCAN platform, they all presented the protein domains characteristic of the
proteins encoded by Arabidopsis genes. Additionally, analysis of these putative
orthologous at the genomic level revealed that, some of these genes are conserved in the
genomic structure, while others diverge between the species. Within the same analysis,
these 11 genes have cis-regulatory elements to cytokinin throughout their loci.
Additionally, some have gibberellin and abscisic acid responsive cis-regulatory elements,
suggesting that they could be regulated by more than one phytohormone. Of these 11
genes, five of them are located in a QTL previously described and positioned on the TxE
map, while three of them are in a Ripening QTL, suggesting that these genes could be related to the ripening process. The transcript levels of seven of these putative orthologous
were measured by RT-qPCR, showing that the expression is induced by exogenous
application of cytokinin in sweet cherry and peach, and they do so in a species-specific
manner.
The results suggest that these genes are candidate genes possibly responsible for the
underlying molecular mechanisms by which the phytohormone cytokinin exerts its
regulation.<br>Los recursos materiales y el financiamiento fueron proporcionados por el Laboratorio de Genética Molecular Vegetal del Instituto de Nutrición y Tecnología en Alimentos (INTA) bajo el Proyecto FONDECYT #1171016 y bajo el Proyecto ENLACE, VID Universidad de Chile ENL006/2016.
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Pardo, Sánchez José. "Estudio de genes KIR y HLA-C y de polimorfismos de citoquinas en pacientes con psoriasis." Doctoral thesis, Universidad de Murcia, 2015. http://hdl.handle.net/10803/301285.
Full textAbstract:
La psoriasis es una enfermedad de curso crónico caracterizada por la presencia de lesiones cutáneas eritemato-escamosas, y constituye uno de los procesos dermatológicos más frecuentes. Su curso clínico es dinámico e impredecible, y en algunos casos el impacto emocional y físico en el paciente que la sufre puede ser muy importante. Su inmunopatología se basa en mecanismos complejos, donde intervienen tanto una respuesta inmunitaria adaptativa, mediada fundamentalmente por células TH17, como innata, con la participación de elementos como el TNF-α o los receptores KIR (del inglés, Killer Immunoglobulin-like Receptors). Estos receptores son expresados fundamentalmente por las células NK, y su función principal es la de inhibir la actividad citotóxica de estas células tras su unión con ligandos como HLA-C. Igualmente, se sabe que el alelo HLA-C*06 es el principal determinante genético en la psoriasis, aunque los estudios en relación con el mismo realizados en nuestro país son escasos. Existe un número creciente de observaciones que demuestran que determinados genotipos receptor-ligando KIR/HLA-C modulan la acción de las células del sistema inmunitario innato a favor de interacciones activadoras que predispondrían a enfermedades autoinmunitarias como la psoriasis. Así, con el fin de realizar una descripción inmunológica de nuestros pacientes y de valorar la participación del sistema inmunitario innato en la enfermedad, en este trabajo se realizó el tipaje de los alelos HLA-C y de los genes KIR mediante técnicas de reacción en cadena de la polimerasa (PCR), tanto en pacientes con psoriasis como en controles sanos. Además, mediante tipajes de alta resolución se determinaron los polimorfismos tipo SNP de genes que codifican citoquinas proinflamatorias involucradas en la formación de la placa psoriásica (TNF-, IL-6, INF- e IL-23). Los resultados obtenidos en este trabajo confirmaron que el alelo HLA-C*06 constituía un factor de riesgo, especialmente para la psoriasis de debut precoz o tipo I, mientras que el alelo HLA-C*07 era sugestivo de protección. Con respecto a los genes KIR, los individuos que carecían de KIR2DL1, los KIR2DL2/L2 homocigotos y los portadores de KIR2DL5 mostraban una mayor predisposición a padecer psoriasis. El gen KIR2DL5 parecía actuar de manera sinérgica con HLA-C*06 sobre la susceptibilidad a padecer la enfermedad. Además, la presencia de KIR2DS2 y KIR2DS3 en el genoma del paciente constituía un factor de riesgo más específico para la artropatía psoriásica. El estudio de la combinación de los pares receptor-ligando KIR/HLA-C reveló que la presencia simultánea del alotipo HLA-C1 no modificaba el efecto de susceptibilidad a la psoriasis observado en los individuos KIR2DL2/L2 homocigotos. Sin embargo, en los pacientes KIR2DL2/L3 heterocigotos la presencia del ligando C1 ejercía un efecto protector frente a esta enfermedad, que era además dependiente de la dosis de este ligando e independiente de la presencia del alelo HLA-C*06. Además, la combinación de KIR2DS1/ligando C2 se asociaba específicamente a la psoriasis tipo I. El estudio de los polimorfismos de citoquinas mostró que los SNPs TNF -238G>A, IL6 -174G>C e INFG +874T>A determinaban una mayor susceptibilidad a la psoriasis, especialmente la tipo I. Sin embargo, en el caso del gen TNF el efecto del alelo A podía ser subsidiario de un desequilibrio de unión con HLA-C*06. Llamaba la atención que la asociación de este alelo con la psoriasis se observaba en varones pero no en mujeres. Además, el polimorfismo IL12B -1188A>C se asociaba con un efecto protector modesto. En definitiva, los hallazgos encontrados contribuyen a confirmar el papel del par KIR/HLA-C y de algunas citoquinas como el TNF-α en la patogenia de la psoriasis, y hablan a favor de la importancia de la inmunidad innata en esta enfermedad.<br>Psoriasis is a chronic disease characterized by the presence of erythematous and scaling skin lesions, and it is one of the most frequent dermatologic process. Its clinical course is dynamic and unpredictable, and in some cases the emotional and physical impact in patients can be very important. Its immunopathology is based on complex mechanisms, where either an adaptive immune response, mediated fundamentally by TH17 cells, and an innate immune response, with the participation of elements such TNF-α or Killer Immunoglobulin-like Receptors (KIR), are involved. These receptors are mainly expressed by NK cells, and their principal task is to inhibit these cells cytotoxic activity after their binding to ligands such as HLA-C molecules. Equally, it is known that HLA-C*06 allele is the main genetic factor in psoriasis, however studies related to this allele are hardly to be found in our country. There is a growing number of studies which demonstrate that certain KIR/HLA-C receptor-ligand genotypes modulate the action of cells from the innate immune system supporting activating interactions which would predispose to autoimmune diseases such as psoriasis. Thus, with the aim of performing an immunologic description of our patients and evaluating the participation of the innate immune system in the disease, in this study was carried out the genotyping of HLA-C alleles and KIR genes by means of polymerase chain reaction techniques, both in patients with psoriasis and in healthy controls. Besides, genotype of SNP polymorphisms of genes which codify pro-inflammatory cytokines involved in the formation of psoriatic plaques (TNF-α, IL-6, INF-γ and IL-23) were identified by high resolution techniques. The results of this study confirmed that HLA-C*06 allele is a risk factor, specially for patients with early onset psoriasis, type I, while HLA-C*07 allele suggested protection against the disease. Regarding KIR genes, individuals who lacked KIR2DL1, KIR2DL2 homozygotes and KIR2DL5 carriers, showed a higher predisposition to suffer from psoriasis. KIR2DL5 gene appeared to act synergistically with HLA-C*06 on the susceptibility to suffer from this disease. In addition, presence of KIR2DS2 and KIR2DS3 in patient’s genome constituted a more specific risk factor for psoriatic arthropathy. The study of the combination of KIR/HLA-C receptor-ligand pairs revealed that simultaneous presence of HLA-C1 allotype did not modify the susceptibility to suffer from psoriasis observed in KIR2DL2/L2 homozygotes individuals. However, in KIR2DL2/L3 heterozygotes patients, the presence of C1 ligand had a protective effect against the disease, which in addition was dependent on the dose ligand, and independent from the presence of HLA-C*06 allele. Moreover, the combination of KIR2DS1/C2-ligand was associated specifically to type I psoriasis. The study of cytokine polymorphisms illustrated that SNPs TNF -238G>A, IL6 -174G>C and INFG +874T>A determined a higher susceptibility to psoriasis, specially type I psoriasis. However, in the case of TNF gene, the effect of the A allele could be subsidiary of a linkage disequilibrium with HLA-C*06. It was very remarkable that the association of this allele with psoriasis was present in men, but not so in women. Likewise, the IL12B -1188A>C polymorphism was associated to a modest protective effect. In conclusion, the findings of this study contribute to confirm the role of KIR/HLA-C pair and of certain cytokines such as TNF-α in the pathogenesis of psoriasis, and give us insightful hints of the importance of innate immunity in this disease.
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Mendes, Braz Mariana. "El soporte nutricional y las adipocitoquinas en parcial hepatectomía con oclusión vascular." Doctoral thesis, Universitat de Barcelona, 2014. http://hdl.handle.net/10803/275945.
Full textAbstract:
La esteatosis hepática es un factor de riesgo en PH bajo I/R, situación quirúrgica normalmente aplicada en la práctica clínica para reducir el sangrado asociado a las resecciones hepáticas. Teniendo en cuenta tal problemática clínica, se ha planteado en la presente tesis investigar si la administración de glucosa o una emulsión lipídica podrían proteger a los hígados esteatósicos y no esteatósicos frente al daño y fallo en la regeneración hepática en un modelo experimental de PH bajo I/R; investigar la relevancia del tejido adiposo periférico en la regeneración del hígado tras la cirugía; analizar si la modulación farmacológica de la acción de la resistina y visfatina podrían reducir el daño y mejorar la regeneración en hígados esteatósicos y no esteatósicos sometidos a la PH bajo I/R.
En hígados no esteatósicos, tanto el tratamiento con lípidos como con glucosa ofreció la misma protección frente al daño y el fallo en la regeneración y el contenido de ATP. El tejido adiposo no influencio la regeneración del hígado no esteatósico. En la presencia de esteatosis hepática, solo el tratamiento con lípidos protegió frente a la lesión y fallo en la regeneración. Tales efectos beneficiosos cursaron mediante la inducción del ciclo celular, mantenimiento de los niveles de ATP y aumento en la tasa de S-1-P/CER y niveles de fosfolípidos. El tejido adiposo fue esencial para la regeneración del hígado esteatósico pero no se utilizó como fuente de energía.
Ni la resistina ni la visfatina están implicadas en la lesión y regeneración en hígados no esteatósicos sometidos a PH bajo oclusión vascular. Sin embargo, tras la cirugía hepática de los animales obesos, se observó un aumento de los niveles de resistina en el hígado esteatósico y en el plasma, sin cambios de esta adipocitoquina en el tejido adiposo. En tales condiciones se observó una reducción en la expresión de visfatina en el hígado esteatósico y niveles elevados de visfatina en el plasma y en el tejido adiposo. Nuestros resultados indicaron que la resistina endógena mantiene bajos los niveles de visfatina en el hígado porque inhibe la receptación de visfatina desde la circulación sistémica al hígado, regulando así los efectos perjudiciales de esta adipocitoquina en la lesión y regeneración. De hecho, la administración de anticuerpos anti-resistina aumento la acumulación hepática de visfatina derivada de los adipocitos, lo que agravo el daño hepático y el fallo regenerativo en hígados esteatósicos. El tratamiento con anticuerpos anti-visfatina protegió el hígado esteatósico y similares resultados se obtuvieron cuando se inhibieron simultáneamente la resistina y la visfatina.
En conclusión, en condiciones de PH bajo I/R, el tratamiento con lípidos en el hígado no esteatósico proporciono la misma protección que la glucosa, mientras que es preferible el tratamiento con lípidos para reducir los efectos perjudiciales de la cirugía hepática en presencia de esteatosis. La inhibición de la acción de la visfatina es crucial para proteger los hígados esteatósicos en condiciones de PH bajo I/R porque la visfatina puede funcionar como un enzima encargado de la biosíntesis de NAD.<br>Steatosis is a risk factor in partial hepatectomy (PH) under ischaemiareperfusion (I/R), which is commonly applied in clinical practice to reduce bleeding. Given this clinical problem has been raised in this thesis to investigate whether the administration of either glucose or a lipid emulsion could protect steatotic and nonsteatotic livers against damage and regenerative failure in an experimental model of PH under I/R. The relevance of peripheral adipose tissue in liver regeneration following surgery is studied. This study examined whether the regulation of resistin and visfatin could reduce damage and improve regeneration in both steatotic and non-steatotic livers undergoing partial hepatectomy under ischemia-reperfusion, a procedure commonly applied in clinical practice to reduce bleeding.
In non-steatotic livers, treatment with lipids or glucose provided the same protection against damage, regeneration failure and ATP drop. Adipose tissue was not required to regenerate non-steatotic livers. In the presence of hepatic steatosis, lipid treatment, but not glucose, protected against damage and regenerative failure by induction of cell cycle, maintenance of ATP levels and elevation of sphingosine-1-phosphate/ceramide ratio and phospholipid levels. Peripheral adipose tissue was required for regenerating the steatotic liver but it was not used as an energy source.
No evident role for the resistin and visfatina was observed in non-steatotic livers. However, obese animals undergoing liver surgery showed increased resistin in liver and plasma, without changes in adipose tissue, together with visfatin downregulation in liver and increment in plasma and adipose tissue. Endogenous resistin maintains low levels of visfatin in the liver by blocking its hepatic uptake from the circulation, thus regulating the visfatin detrimental effects on hepatic damage and regenerative failure. Indeed, the administration of anti-resistin antibodies increased hepatic accumulation of adipocyte-derived visfatin, exacerbating damage and regenerative failure. Interestingly, treatment with anti-visfatin antibodies protected steatotic livers, and similar results were obtained with the concomitant inhibition of resistin and visfatin. Thus, when visfatin was inhibited, the injurious effects of antiresistin antibodies disappeared. Herein we show that upregulation of visfatin increased NAD levels in the remnant steatotic liver, whereas visfatin inhibition decreased them. These later observations suggest that visfatin may favour synthesis of NAD instead of DNA and induces alterations in amino acid metabolism-urea cycle and NO production, overall negatively affecting liver viability.
In conclusion, lipid treatment in non-steatotic livers provides the same protection as that afforded by glucose in conditions of PH under I/R, whereas the treatment with lipids is preferable to reduce the injurious effects of liver surgery in the presence of steatosis. Inhibiting action visfatin is crucial to protect steatotic livers in low pH conditions I/R because visfatin can function as an enzyme responsible for the biosynthesis of NAD.
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Murga, Arapa Gustavo Augusto. "Expresión y cuantificación de RORγt e IL-17 en mucosa intestinal de crías de alpacas (Vicugna pacos)". Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2017. https://hdl.handle.net/20.500.12672/7355.
Full textAbstract:
Caracteriza la expresión de RORγt e IL-17, el regulador maestro y la citoquina clave, en el proceso de diferenciación celular del linaje de células TH17 así como de la regulación de la homeostasis intestinal frente al desafío de agentes patógenos, en mucosa intestinal del yeyuno de 17 crías de alpaca recién nacidas a 47 días de edad provenientes del distrito de Maranganí, Cusco. Se extrae el ARN total de las muestras y se procede a la transcripción reversa para obtener las cadenas complementarias de ADN (ADNc). Posteriormente se realiza la técnica de PCR convencional y PCR-RT tiempo real para evaluar la expresión de ARNm de IL-17 y RORγt mediante la técnica de cuantificación relativa según el método 2-ΔΔCt empleando el gen GAPDH como gen interno y en relación a animales calibradores recién nacidos que no han consumido calostro. Se detecta la expresión de IL-17 y RORγt desde el nacimiento hasta los 45 días evaluados, siendo mayor la expresión de IL17 en comparación con el factor transcripcional RORγt. Se observa una cinética ascendente y gradual de ambos, que alcanzó su máxima expresión entre la tercera y quinta semana de edad. De los resultados se concluye que en la mucosa intestinal de las crías de alpacas se expresan los genes que dirigen la respuesta inflamatoria y que estas se incrementan con la edad.<br>Tesis
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Carvajal, Garcés Patricia Alejandra. "Efecto de citoquinas pro-inflamatorias sobre la metilación del DNA de los promotores de genes de la respuesta a proteínas mal plegadas en glándulas salivales de pacientes con Síndrome de Sjögren." Tesis, Universidad de Chile, 2017. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/168547.
Full textAbstract:
Grado de magíster en biomedicina celular y molecular<br>síndrome de Sjögren (SS) es una exocrinopatía autoinmune crónica, inflamatoria y sistémica que afecta principalmente a las glándulas salivales (GS) y lagrimales. Resultados de nuestro laboratorio demuestran que las células acinares de las GS de pacientes SS presentan estrés de retículo endoplásmico (RER) y un aumento en la expresión del sensor ATF6α y del factor de transcripción ATF4 de la vía PERK de la respuesta a proteínas mal plegadas. También, se ha determinado niveles variables de transcrito de la chaperona calreticulina (CALR). Considerando el rol relevante que se le ha atribuido a la epigenética en la patogénesis de otras enfermedades autoinmunes surge la pregunta: ¿Es posible que la expresión diferencial de ATF4, ATF6α y CALR en GS de pacientes SS pueda estar regulada por mecanismos epigenéticos, tal como la metilación del DNA? Para determinarlo se evaluó el porcentaje de metilación del DNA de los respectivos promotores utilizando MS-HRM y los resultados se correlacionaron con los datos clínicos de los pacientes SS.
Interesantemente, las GS de pacientes SS han mostrado que las células epiteliales contribuyen con el ambiente inflamatorio al sobreexpresar citoquinas pro-inflamatorias como TNF-α e IFN-. En esta tesis se determinó el efecto de IFN- y TNF-α en la metilación de los promotores de los genes de interés en acinos 3D. Con el propósito de averiguar si los cambios observados se relacionaron con las enzimas metilasas y desmetilasas, es que se determinaron los niveles de transcrito de DNMT1, DNMT3A y TET2.
Los resultados obtenidos en GS labiales de pacientes SS comparado con controles mostraron:
1. un aumento significativo en la metilación del DNA para el promotor del gen de ATF4 que se correlacionó positivamente con los niveles de transcritos de TNF-α e IFN-, 2. una disminución de la metilación del promotor del gen de ATF6α que se correlacionó negativamente con los niveles de los transcritos de las citoquinas evaluadas, y 3. no se encontraron cambios en la metilación del promotor de CALR. Paralelamente, se determinó que el porcentaje de metilación del promotor de ATF6α correlacionó negativamente con los autoanticuerpos ANA. Sin embargo, es complejo establecer cuáles son los blancos antigénicos que dan cuenta de esta correlación. Asimismo, las correlaciones clínicas obtenidas validan la muestra de pacientes utilizada en este estudio, mostrando que la inflamación se asocia al daño glandular y consecuentemente a la alteración de la función de las GS. En los acinos 3D estimulados por 24 h con TNF-α o IFN- (1 y 10 ng/mL) se corroboró lo observado en GSL de pacientes SS, evidenciando un aumento del porcentaje de metilación del promotor del gen de ATF4, una disminución del promotor del gen de ATF6α y no cambios en CALR. Por otra parte, la metilación del promotor de los genes de ATF4 y de ATF6α correlacionó negativamente con los niveles de transcritos respectivos. Paralelamente, los niveles de transcritos de DNA-metiltransferasas (DNMT1, DNMT3A) y la desmetilasa TET2 aumentaron significativamente en acinos 3D estimulados con citoquinas. Este aumento en los niveles de transcritos explicaría, en parte, la metilación diferencial del promotor de ATF4 y de ATF6α bajo las condiciones de estudio.
Por lo tanto, las citoquinas proinflamatorias promueven cambios en la metilación del DNA de los promotores de los genes estudiados. Además, los niveles de transcritos de metilasas y desmetilasa se podrían incidir en la metilación diferencial de los promotores de ATF4 y ATF6α bajo las condiciones del estudio.
En conclusión, las citoquinas pro-inflamatorias promueven cambios en la metilación del DNA de los promotores génicos ATF4 y ATF6α y, estos cambios en la metilación de los promotores podrían contribuir a la regulación de la UPR en las GSL de pacientes con SS.<br>Sjögren's syndrome (SS) is a chronic, autoimmune, inflammatory and systemic exocrinopathy that mainly affects salivary glands (SG) and lacrimal glands. Results from our laboratory demonstrate that SG acinar cells from SS patients show stress in the endoplasmic reticulum and an increased expression of ATF6α sensor and ATF4 transcription factor, member of the PERK pathway of the unfolded protein response. Also, SS patients showed variable levels calreticulin transcript levels (CALR). Considering the relevant role attributed to epigenetics in the pathogenesis of autoimmune diseases, the question arises: Is it possible that the differential expression of ATF4, ATF6α and CALR in SG from SS-patients could be regulated by epigenetic mechanisms, such as DNA methylation? The percentage of DNA methylation of the ATF4, ATF6α and CALR gene promoters were evaluated using methylation-sensitive high resolution melting (MS-HRM). Results were correlated with the clinical data of SS patients.
Interestingly, SG from SS-patients has shown that epithelial cells contribute to the inflammatory environment by overexpressing relevant pro-inflammatory cytokines such as TNF-α and IFN-γ. In this thesis we determined the effect of IFN-γ and TNF-α on methylation of promoters of the genes of interest in 3D acini. To determine if the observed changes were related to the levels of methylase and demethylase enzymes, transcript levels of DNMT1, DNMT3A and TET2 were determined.
The results obtained in labial SG (LSG) of SS patients compared with controls showed: 1. a significant increase of DNA methylation in ATF4 gene promoter that positively correlated with TNF -α and IFN-γ transcript levels, 2. a significant decrease in DNA methylation in ATF6α gene promoter that negatively correlated with TNF-α and IFN-γ transcript levels, 3. no changes were found in the methylation of the CALR promoter. The methylation of the ATF6α promoter correlated negatively with ANA antibodies levels. However, it is complex to establish the antigenic targets that account for this correlation. Aditionally, the clinical correlations obtained validate the set of patients used in this study showing that the inflammation is associated with the glandular damage and consequently to the alteration of the GS function. Results observed in LSG of SS patients were confirmed in 3D acini stimulated with TNF-α or IFN-γ (1 and 10 ng/mL) for 24 h, showing an increase in the methylation percentage of the ATF4 gene promoter, a decrease of the ATF6α gene promoter and no changes in CALR. On the other hand, promoter methylation of the ATF4 and ATF6α genes negatively correlated with their respective transcript levels. In parallel, levels of DNA-methyltransferase transcripts (DNMT1, DNMT3A) and TET2 desmethylase increased significantly in cytokine-stimulated 3D acini. These results could partly explain the differential methylation of the ATF4 promoter and ATF6α under the present experimental conditions.
Therefore, proinflammatory cytokines promote changes of promoter DNA methylation of the studied genes. Comparatively, levels of methylase and desmethylase transcripts could influence the differential methylation of ATF4 and ATF6α promoters under conditions studied.
In conclusion, proinflammatory cytokines promote changes in the methylation of ATF4 and ATF6α promoters and these changes in DNA methylation would contribute to the regulation of UPR in the LSG of patients with SS.
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Sepúlveda, Orellana Sofía Valentina. "Efecto de una suspensión intramamaria de células troncales mesenquimáticas (MSC) sobre la expresión de citoquinas proinflamatorias en vaquillas Holstein." Tesis, Universidad de Chile, 2019. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/171553.
Full textAbstract:
Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario<br>Las células troncales mesenquimáticas (MSC, del inglés Mesenchymal Stem Cells o Mesenchymal Stromal Cells) son células estromales multipotentes que están presentes en todos los tejidos fetales y adultos. Cuentan con propiedades inmunomoduladoras, angiogénicas y antibacterianas que las hacen una potencial herramienta terapéutica para el tratamiento de diversas patologías. Su utilización para el tratamiento de enfermedades que afectan a equinos y caninos ha sido ampliamente reportada, sin embargo, existen escasos estudios sobre su potencial uso terapéutico en la especie bovina. Esto a pesar de que existen numerosas patologías que afectan la eficiencia productiva en esta especie las cuales podrían ser tratadas mediante el uso de MSC, como es el caso de la mastitis. El objetivo del presente estudio fue evaluar la seguridad de una potencial terapia de MSC para el tratamiento de la mastitis, mediante la determinación del efecto de la administración intramamaria de dos dosis de MSC alogénicas derivadas de tejido adiposo fetal bovino, sobre variables fisiológicas incluyendo perfil bioquímico sanguíneo y la expresión de citoquinas proinflamatorias en linfocitos de sangre periférica (PBL) bovinos. Vaquillas Holstein (N=6) clínicamente sanas pertenecientes a una lechería comercial fueron seleccionadas e inoculadas los días 0 y 10 con una suspensión de 2,5 x 107 de MSC suspendidas en 3 mL de Ringer Lactato en dos cuartos mamarios seleccionados al azar. Los dos cuartos mamarios restantes fueron inoculados con 3 mL de Ringer Lactato como control. El efecto de la inoculación de MSC fue evaluado sobre constantes fisiológicas y variables clínicas de la ubre. Cada cinco días se colectaron muestras de sangre para análisis de perfil bioquímico, determinación de fibrinógeno y aislamiento de PBL. La expresión de citoquinas proinflamatorias y quimioquinas asociadas a rechazo inmune IL-2, IFN-ɣ, TNF-ɑ, CCL-2, CCL-5 y CXCL3 fue cuantificada mediante PCR cuantitativo (Q-PCR) en PBL. No se evidenciaron cambios en constantes fisiológicas ni en las variables evaluadas en la glándula mamaria con la excepción de secreción láctea en una de las vaquillas. Los valores de termografía de los cuartos mamarios estuvieron bajo el intervalo referencial esperado y no hubo diferencia (P>0,05) entre los cuartos inoculados con MSC y los inoculados con PBS. Los niveles sanguíneos de variables del perfil bioquímico y de la expresión de mRNA de citoquinas proinflamatorias no fueron distintos (P>0,05) durante los días de estudio. Los análisis realizados indican que la administración
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intramamaria de dos dosis de MSC en vaquillas Holstein no generó cambios en las variables analizadas. Adicionalmente, los resultados indican que una potencial terapia para la mastitis bovina utilizando MSC podría ser segura, sin embargo, es necesario evaluar su efectividad en vacas con mastitis<br>Mesenchymal stem cells (MSC) are multipotent stromal cells that are present in all fetal and adult tissues. MSC possess immunomodulatory, angiogenic and antibacterial properties which make them a potential tool for the treatment of diverse pathologies. The use of MSC for the treatment of pathologies affecting equines and canine has been widely reported, however; few studies have described the therapeutic potential of MSC in the bovine specie. There are numerous pathologies that affect the productive efficiency of cattle, such as mastitis, which may be treated with MSC. The aim of the present study, was to evaluate the safety of a potential MSC therapy for the treatment of mastitis by determination of the effect of the intramammary administration of two doses of allogeneic MSCs derived from fetal bovine adipose tissue on physiological variables including clinical features, biochemical profile and the expression of proinflammatory cytokines in bovine peripheral blood lymphocytes (PBL). Clinically healthy Holstein heifers (N=6) from a commercial dairy farm were selected and inoculated on days 0 and 10 with a suspension of 2,5 x 107 MSC suspended in 3 mL of Ringer Lactate in two mammary quarters randomly selected. The remaining two mammary quarters were inoculated with 3 mL of Ringer Lactate as control. The effect of MSC was evaluated on physiological constants and clinical variables of the udder. Blood samples were collected every five days for analysis of biochemical profile, determination of fibrinogen and isolation of PBL. The expression of proinflammatory cytokines and chemokines associated with immune rejection IL-2, IFN-γ, TNF-γ, CCL-2, CCL-5 and CXCL3 was determined by quantitative PCR (Q-PCR) in PBL. There were no changes in physiological constants or in the udder with the exception of milk secretion in one of the heifers, the thermography values of quarters were below the expected referential interval and there was no difference (P>0.05) between the quarters inoculated with MSC compared to
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those inoculated with PBS. The levels of the biochemical profile and mRNA of proinflammatory cytokines were not different (P>0.05) during the study. The analyzes indicate that the intramammary administration of two doses of MSC in Holstein heifers did not generate changes in the variables analyzed. Data generated in the present study indicated that a potential therapy for bovine mastitis based on MSC is safe; however, the effectiveness of this therapy require further evaluation in cows with mastitis<br>FONDEF IDeA ID15I10129
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Hinostroza, Solano Rocío Luz. "Expresión de citoquinas pro inflamatorias de leucocitos de alpaca (Vicugna pacos) inducidos por el extracto de macroquistes de Sarcocystisaucheniae." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2012. https://hdl.handle.net/20.500.12672/1526.
Full textAbstract:
El objetivo principal del trabajo fue determinar la expresión de distintas citoquinas proinflamatorias por los leucocitos circulantes de alpaca, al enfrentamiento antigénico de extracto de macroquistes de Sarcocystisaucheniae a diversas dosis y tiempos de exposición. Los leucocitos en una concentración de 500 000 cel/ml fueron expuestos a concentraciones de 0.5, 1, 50, 500 y 1000 ng de extracto de macroquistes de Sarcocystisaucheniae e incubados en placas de cultivo por 1, 12 y 24 horas. Posteriormente se extrajo los ARN mensajeros (ARNm) totales de cada tratamiento utilizando Trizol, que se utilizaron para realizar la RT-PCR tiempo real empleando cebadores específicos de Interleuquinas (ILs): IL-1α y β, IL-6 y TNFα. Finalmente, se observó que los niveles de ARNm de IL 1α y TNFα generados a la hora eran detectables y comparativamente elevados con respecto al calibrador (leucocitos no expuestos a extracto).La IL 1β se encontró incrementada en la concentración de 1 ng/ml a 24 horas, mostrandouna cinética de expresión negativa en comparación con el control no tratado. IL-6 no se evidenció mediante RT-PCR tiempo real. Además se realizó la observación de viabilidad leucocitaria a los tiempos de 1, 12 y 24 horas permitiendo corroborar el efecto tóxico del extracto de macroquistes de S. aucheniae a altas concentraciones. Se concluye que el extracto de Sarcocystisaucheniae induce una respuesta inflamatoria tóxica sobre los leucocitos de alpaca con expresión de las interleuquinas detectadas.
Palabras clave:Sarcocystisaucheniae,Interleuquinas, pro inflamatorias, alpaca<br>--- The main aim of this research was to determine the expression of several leukocytes proinflammatory cytokines from alpaca to the antigenic confrontation of Sarcocystisaucheniaemacrocysts extracts at various doses and different exposure times. Leukocytes in a concentration of 500 000 cells / ml were exposed to concentrations of 0.5, 1, 50, 500 and 1000 ng of Sarcocystisaucheniaemacrocysts extracts and were incubated in culture dishes for 1, 12 and 24 hours. The total messenger RNA (mRNA) were extracted for each treatment using Trizol, which were used to perform real-time RT-PCR using specific primers for interleukins (ILs), IL-1α and β, IL-6 and TNF-α. It was observed that the generated mRNAlevelsof IL-1α and TNF-α in the first hour were detectable and higher in comparison to the calibrator (leukocytes were not exposed to extract). IL-1β was found increased in a concentration of 1 ng / ml at 24 hours, what it means that there is a negative kinetic expression compared with the untreated control group. IL-6 was not evidenced by RT-PCR real time. In addition, the observation about the leukocytes viability times at 1, 12 and 24 hours corroborated the toxic effect of the macrocysts extract of S. aucheniae at high concentrations. It is concluded that the extract of Sarcocystisaucheniae induces an inflammatory response with expression of detected interleukins.
Keywords: Sarcocystisaucheniae, interleukins, pro-inflammatory, alpaca<br>Tesis
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Rios, Matos Dora Luisa. "Producción de citoquinas de respuesta inmune celular en ratones inmunizados y tratados con fucoidan de Lessonia trabeculata (Phaeophyceae, laminariales)." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2020. https://hdl.handle.net/20.500.12672/11736.
Full textAbstract:
El fucoidan es un polisacárido extraído de algas pardas y ha sido ampliamente
estudiado por sus propiedades anticoagulantes, antivirales, antiinflamatorias,
antioxidantes, antitumorales, antiangiogénicas e inmunomoduladoras, que varían de
acuerdo a la especie. Lessonia trabeculata es un alga parda del litoral peruano que se
emplea en la industria alimentaria; sin embargo, tiene otros usos potenciales que
deben ser investigados. El desarrollo de nuevos productos con actividad biológica a
partir de estas algas requiere de evaluaciones in vitro e in vivo. El objetivo fue evaluar
la producción de citoquinas de respuesta inmune celular: TNF-α, TNF-β, IFN-γ e IL-2,
la producción de especies reactivas de oxígeno (ERO) y óxido nítrico (NO) en ratones
inmunizados con glóbulos rojos de carnero (GRC) y tratados con diferentes
concentraciones del extracto liofilizado rico en fucoidan de Lessonia trabeculata,
empleándose como control fucoidan de Fucus vesiculosus. Los ratones fueron
tratados durante 14 días por vía oral, para evaluar la respuesta inmune primaria (RIP),
y durante 28 días, para la respuesta inmune secundaria (RIS). Las ERO se evaluaron
mediante el ensayo de reducción de nitroazul de tetrazolio, y el NO por la reacción de
Griess. La expresión génica y la presencia de citoquinas séricas se determinaron
mediante PCR convencional y ELISA de tipo sándwich, respectivamente. Los
resultados obtenidos demuestran que el extracto liofilizado rico en fucoidan de
Lessonia trabeculata no influye en la producción de ERO ni NO, incrementa la
expresión de TNF-α y la concentración en suero de TNF-α, IFN-γ e IL-2 e inhibe la
expresión de TNF-β en RIP, promueve la expresión de TNF-β e IL-2, inhibe la
expresión de TNF-α y reduce la concentración en suero de IL-2 en RIS. Se concluye
que el extracto liofilizado rico en fucoidan de Lessonia trabeculata estimula la
inmunidad celular en la respuesta primaria y secundaria, sin embargo, es necesario
complementar estos resultados con posteriores investigaciones.<br>Perú. Ministerio de la Producción. Programa Nacional de Innovación para la Competitividad y Productividad (Innóvate Perú)<br>Universidad Nacional Mayor de San Marcos (Lima). Vicerrectorado de Investigación y Posgrado<br>Tesis
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Ren, Ping. "Control of cytokinesis by the mitotic cyclin dependent kinase M-Cdk1." Doctoral thesis, Universitat Autònoma de Barcelona, 2017. http://hdl.handle.net/10803/458616.
Full textAbstract:
La citocinesi és el darrer procés regulat del cicle de divisió cel·lular mitòtica eucariota.
Les cèl·lules entren en citocinesi un cop la segregació dels cromosomes s’ha
completat satisfactòriament. Durant la citocinesi les cèl·lules es separen físicament,
donant lloc a dues cèl·lules filles. Els defectes en el control de la citocinesi donen lloc
a aneuploïdies i inestabilitat genòmica. Un controlador clau de la citocinesi és
l’activitat Quinasa Dependent de Ciclina (M-Cdk1). El nostre projecte deriva de la
correlació observada entre l’entrada en citocinesi i l’eliminació de l’activitat M-Cdk1.
Complementària a aquesta observació, l’expressió d’un al·lel hiper-estable de la
ciclina mitòtica Clb2 bloca la citocinesi. Per tant, la mateixa activitat que empeny les
cèl·lules a entrar en mitosi i que hi promou l’anafase, impedeix que la citocinesi pugui
iniciar-se prematurament. Aquestes observacions suggereixen que una o més
proteïnes, essencials per disparar la citocinesi, són inhibides per fosforilació per MCdk1.
La identitat d’aquest/s substrat/s crític/s és desconeguda. Per tant, l’objectiu
d’aquesta tesi ha estat el d’avançar en la comprensió de com l’activitat M-Cdk1 evita
la citocinesi prematura durant l’anafase, a l’organisme eucariota model
Saccharomyces cerevisiae. El treball realitzat revela que, en presència dominant
d’activitat M-Cdk1 elevada, la Xarxa de Sortida de Mitosi (Mitotic Exit Network,
MEN) està, contra tot pronòstic, parcialment activada en presència d’activitat M-Cdk1
elevada i dominant, i és la responsable de l’alliberament de la fosfatasa Cdc14 al
citoplasma en aquestes condicions.<br>Cytokinesis is the final regulated process in the eukaryotic mitotic cell division cycle.
Cells enter cytokinesis once that chromosome segregation is satisfactorily completed.
During cytokinesis cells physically separate, giving place to two daughter cells.
Defects in the control of cytokinesis result in aneuploidies and genomic instability. A
key controller of cytokinesis is the mitotic Cdk1 (M-Cdk1) activity. Our project
derives from the observed correlation between the onset of cytokinesis and the
termination of M-Cdk1 activity. Complementary to such observation, expression of a
hyperstable allele of the mitotic cyclin Clb2, blocks cytokinesis. Thus, the very same
activity that pushes cells into mitosis and promotes mitotic entry and anaphase, blocks
the occurrence of premature cytokinesis. These observations suggest that one or more
proteins, essential to trigger cytokinesis, are inhibited by M-Cdk1 phosphorylation.
The identity of such critical M-Cdk1 substrate/s is unknown. Therefore, the goal of
this thesis is to gain insight on how M-Cdk1 prevents premature cytokinesis during
anaphase in the model eukaryotic organism Saccharomyces cerevisiae. The thesis
work reveals that the Mitotic Exit Network is unexpectedly partially activated in the
presence of prevailing high M-Cdk1 activity, and drives the release of the Cdc14
phosphatase to the cytoplasm under such conditions.
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Orús, Puigvert Josefina. "Bases moleculars de la miocardiopatia dilatada idiopàtica. Expressió de la sintasa induible de l'òxid nítric i possible paper de les citoquines en aquesta expressió." Doctoral thesis, Universitat de Barcelona, 2003. http://hdl.handle.net/10803/2166.
Full textAbstract:
La hipòtesi general de l'estudi que es porta a terme en aquesta tesi és que en la Miocardiopatia Dilatada Idiopàtica (MCDI) la presència de la sintasa induible de l'òxid nítric (ENS II) a nivell del miòcit pot estar condicionada per la presència de citoquines alliberades durant un procés inflamatori. L'augment d'òxid nítric (NO) secundari a l'ENS II afectaria negativament la contractilitat miocàrdica. Si aquesta hipòtesi és certa, les citoquines s'haurien d'expressar i estar elevades en les fases més inicials de la malaltia. D'altra banda, el mecanisme d'actuació de l'òxid nítric, per a produir disfunció miocàrdica, podria ser la interacció entre el NO i els enzims de la cadena respiratòria mitocondrial. <br/><br/>Conclusions: <br/><br/>· En el miocardi dels pacients amb *MCDI en classe funcional IV, l'ENS II s'expressa de manera constant. Aquest fenomen rarament es produeix en cors dilatats d'altres etiologies i mai en el miocardi sa. <br/><br/><br/>· Aquesta troballa sembla indicar que l'ENS II pot tenir un paper específic en la patogenia de la disfunció contràctic en pacients amb MCDI. <br/><br/>· Els pacients amb MCDI tenen uns nivells de nitrats-nitrits (NOx) molt superiors als nivells de normalitat del nostre laboratori, mentre que els nivells de NOx en els pacients amb cardiopatía isquèmica i en els controls eren normals. Aquest resultat reforça la primera conclusió i dóna suport el fet que l'ENS II expressada a l'excés sigui la causant de l'increment de producció de NOx<br/> <br/>· Els nivells de citoquines en sèrum augmenten de forma significativa en pacients amb insuficiència cardíaca si es compara amb els controls, i els seus valors augmenten a mesura que empitjora la seva classe funcional de la New York Heart Association (NYHA). Cal destacar que no hi ha diferències en el patró de citoquines segons l'etiologia de la Insuficiència Cardíaca (ICC).<br/> <br/>· En pacients amb MCDI, es van associar nivells patològics de Interlenquina-6 (IL-6) a una fracció d'ejecció més baixa, més incidència de classe funcional III-IV i pitjor pronòstic. <br/><br/>· Els nivells de IL-6 elevats en sèrum poden contribuir a la lesió miocàrdica crònica (independent de l'activació del sistema renina-angiotensina) i tenir un paper important en la progressió de la malaltia. <br/><br/>· La IL-6 en sèrum es va identificar durant el seguiment com el predictor independent més important de nous episodis de ICC, éxitus o necessitat de transplantament cardiac. És millor predictor que les neuroferomones plasmàtiques o la funció ventricular esquerra. Per tant, la IL-6 és un predictor important de mal pronòstic.<br/> <br/><br/>· Aquest estudi també demostra que encara que els nivells de Factor de Necrosi Tumoral-α (TNF-α), receptors I i II del TNF-α, Interlenquina-1β i el Receptor soluble de la interlenquina-2 s'associen a més morbiditat durant el seguiment, aquests eren predictores menys importants de mal pronòstic que la IL-6 <br/><br/>· Al mateix temps, els receptors solubles del TNF-α eren millors predictores d'incidents que el mateix TNF-α. <br/><br/>· S'ha trobat una disminució de l'activitat del complex III de la cadena respiratòria mitocondrial tant en pacients amb MCDI com en pacients amb cardiopatia isquèmica en fase dilatada. El fet de trobar-ho en diferents etiologies de ICC dóna suport la hipòtesi que es tracta d'un fenomen secundari i no d'una malaltia primària de la mitocondria en la majoria de pacients amb MCDI. La hipòtesi general de l'estudi que es porta a terme en aquesta tesi és que en la Miocardiopatia Dilatada Idiopàtica (MCDI) la presència de la sintasa induible de l'òxid nítric (ENS II) a nivell del miocit pot estar condicionada per la presència de citoquines alliberades durant un procés inflamatori. L'augment d'òxid nítric (NO) secundari a l'ENS II afectaria negativament la contractilitat miocàrdica.. Si aquesta hipòtesi és certa, les citoquines deurien expressar-se i estar elevades en les fases més inicials de la malaltia. D'altra banda, el mecanisme d'actuació de l'òxid nítric, per a produir disfunció miocàrdica, podria ser la interacció entre el NO i els enzims de la cadena respiratòria mitocondrial.<br/> <br/>Conclusions: <br/><br/>· En el miocardi dels pacients amb MCDI en classe funcional IV, l'ENS II s'expressa de manera constant. Aquest fenomen rarament es produeix en cors dilatats d'altres etiologies i mai en el miocardi sa.<br/> <br/>· Aquesta troballa sembla indicar que l'ENS II pot tenir un paper específic en la patogenia de la disfunció contràctil en pacients amb MCDI. <br/><br/>· Els pacients amb MCDI tenen uns nivells de nitrats-nitrits (NOx) molt superiors als nivells de normalitat del nostre laboratori, mentre que els nivells de NOx en els pacients amb cardiopatia isquèmica i en els controls eren normals. Aquest resultat reforça la primera conclusió i dóna suport el fet que l'ENS II expressada a l'excés sigui la causant de l'increment de producció de NOx.<br/> <br/>· Els nivells de citoquines en sèrum augmenten de forma significativa en pacients amb insuficiència cardíaca si es compara amb els controls, i els seus valors augmenten a mesura que empitjora la seva classe funcional de la New York Heart Association (NYHA). Cal destacar que no hi ha diferències en el patró de citoquines segons l'etiologia de la Insuficiencia Cardiaca (ICC). <br/><br/>· En pacients amb MCDI, nivells patològics de Interlenquina-6 (*IL-6) es van associar a una fracció d'ejecció més baixa, més incidència de classe funcional III-IV i pitjor pronòstic. <br/><br/>· Els nivells de IL-6 elevats en sèrum poden contribuir a la lesió miocàrdica crònica (independent de l'activació del sistema renina-angiotensina) i tenir un paper important en la progressió de la malaltia. <br/><br/><br/>· La IL-6 en sèrum es va identificar durant el seguiment com el predictor independent més important de nous episodis de ICC, éxitus o necessitat de transplantament cardiac. És un millor predictor que les neuroferomones plasmàtiques o la funció ventricular esquerra. Per tant, la IL-6 és un predictor important de mal pronòstic. <br/><br/>· Aquest estudi també demostra que encara que els nivells de Factor de Necrosi Tumoral-α (*TNF-α), receptors I i II del TNF-α, Interlenquina-1β i el Receptor soluble de la interlenquina-2 s'associen a més morbiditat durant el seguiment. Aquests eren predictores menys importants de mal pronòstic que la IL-6. <br/> <br/>· Al mateix temps, els receptors solubles del TNF-α eren millors predictors d'incidents que el mateix TNF-α.<br/><br/>· S'ha trobat una disminució de l'activitat del complex III de la cadena respiratòria mitocondrial tant en pacients amb MCDI com en pacients amb cardiopatia isquèmica en fase dilatada. El fet de trobar-ho en diferents etiologies de ICC dóna suport la hipòtesi que es tracta d'un fenomen secundari i no d'una malaltia primària de la mitocondria en la majoria de pacients amb MCDI.
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Chiok, Casimiro Kim Lam Roxana. "Expresión de Citoquinas de la respuesta TH1 (Ifnγ e Il2) y TH2 (Il4 e Il10) en mucosa intestinal de crías de alpaca (Vicugna Pacos) sanas y con Enteropatía". Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2012. https://hdl.handle.net/20.500.12672/978.
Full textAbstract:
El objetivo del estudio fue caracterizar la expresión de citoquinas características de la respuesta inmune adaptativa celular (Th1) y humoral (Th2) en mucosa intestinal de crías de alpaca sanas y enfermas con enteropatía de cero a 45 días de edad. Se evaluó la expresión de ARNm de IFNγ e IL2 (Th1) junto a IL4 e IL10 (Th2) a través de RT-PCR Tiempo Real y cuantificación relativa según el método 2-ΔΔCt empleando el gen GAPDH como gen interno y en relación a animales calibradores recién nacidos que no han consumido calostro. Se encontró que la expresión de estas citoquinas es detectable a partir del nacimiento y que poseen una cinética ascendente y gradual que alcanza su máxima expresión entre la tercera y quinta semanas de edad en todas las citoquinas evaluadas en el grupo de animales sanos. Asimismo, se encontró pobre expresión de IL2 y una aparente polarización de la respuesta Th1 a través de expresión de IFNγ por encima del resto de citoquinas. Existió diferencia estadística significativa en las comparaciones hechas de acuerdo a grupo sanitarios y edad, así como correlación positiva entre edad y expresión de citoquinas, soportando la observación de la cinética ascendente y el establecimiento de esta cinética como patrón de expresión en los animales sanos. En los animales enfermos, se observó expresión aumentada de todas las citoquinas con respecto a los animales sanos y calibradores, particularmente en el caso de IFNγ e IL4, las que se regulan mutuamente y polarizan la respuesta inmune. No se halló un patrón específico ni correlación entre edad y expresión de citoquinas en este grupo.
-- Palabras clave: crías de alpaca, mucosa intestinal, Th1, Th2, ARNm, RT-PCR Tiempo Real, cuantificación relativa.<br>-- The aim of this study was to characterize expression of cytokines belonging to the immune cellular (Th1) and humoral (Th2) adaptative responses in intestinal mucosa tissue from healthy and from sick newborn alpacas showing clinical signs of enteropathy, ages ranging from zero to 45 days. We assessed expression of mRNA levels of IFNγ and IL2 (Th1) along with IL4 and IL10 (Th2) by means of Real Time RT-PCR and relative quantization according to the 2-ΔΔCt method using the GAPDH gene as internal control and in relation to newborn animals which had not consumed any colostrum right after birth (calibrators). We found that expression of all these cytokines is detectable at the time of birth and it varies according to a gradual ascendant kinetics reaching its maximum expression between the third and fourth weeks of age in healthy animals. Also, IL2 is expressed poorly in this tissue while there is an apparent polarization towards Th1 responses, mainly due to high expression of IFNγ which levels are always higher than the rest of cytokines. There was significant statistic difference when health status and age were compared, also positive correlation between age and levels of expression, supporting our observations regarding gradual ascendant kinetics as a pattern of cytokine expression in healthy animals. Enteropathic animals showed very elevated levels of cytokine expression when compared to healthy animals and calibrators, particularly in the case of IFNγ and IL4, which in turn regulate each other and polarize immune responses towards Th1 and Th2, respectively. We could not find any specific expression pattern or positive correlation between age and cytokine expression in this group of animals.
-- Key words: newborn alpaca, intestinal mucosa, Th1, Th2, mRNA, Real Time RT-PCR, relative quantization.<br>Tesis
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Chovar, Vera Ornella. "Rol del receptor 3 de dopamina en la respuesta citotóxica generada en linfocitos T CD8+." Tesis, Universidad de Chile, 2018. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/170210.
Full textAbstract:
Seminario de Título entregado a la Universidad de Chile en cumplimiento parcial de los requisitos para optar al Grado de Magister en Ciencias Biológicas.<br>El sistema nervioso y el sistema inmune se encuentran íntimamente relacionados comunicándose bidireccionalmente mediante citoquinas, neuropéptidos y neurotransmisores, como la dopamina. Este neurotransmisor ejerce su efecto a través de cinco receptores dopaminérgicos que poseen diferentes grados de afinidad, contando con la mayor afinidad el receptor 3 (D3R). Su presencia se ha reportado en diferentes células del sistema inmune. La estimulación del D3R promueve la producción de IFN-γ en linfocitos T CD4+, favoreciendo su diferenciación a un perfil Th1. Sin embargo, el rol de este receptor en los linfocitos T CD8+ aún no se ha estudiado a cabalidad.
En esta tesis se estudió la incidencia del D3R en la formación del perfil citotóxico en linfocitos T CD8+, que poseen un TCR transgénico específico para el péptido OVA(257-264) alojado sobre el MHC de clase I H2-Kb (linfocitos OT-I). La diferenciación in vitro muestra que la carencia del D3R en linfocitos OT-I (OT-I D3RKO) resulta en una reducción significativa en la producción de IFN-γ, TNF-α, IL-2 y en la expresión de CD25 (cadena α del receptor de IL-2) en respuesta a la estimulación con péptido OVA(257-264). Estas deficiencias se revierten al añadir IL-2 exógena a los cultivos, sugiriendo que el mecanismo de acción por el cual el D3R favorece la diferenciación hacia un fenotipo efector productor de IFN-γ y TNF- α ocurre a través de la producción de IL-2. Concordante con lo anterior, se observó que la expresión del D3R en linfocitos OT-I promueve la expansión clonal y la protección antitumoral frente a melanoma.
En conjunto los resultados obtenidos en linfocitos T CD8+ sugieren que el D3R promueve la formación de un perfil citotóxico, induciendo la producción de IFN-γ y favoreciendo una alta tasa de expansión clonal, lo que conlleva a una mayor sobrevida frente a un desafío tumoral.<br>The nervous system and the immune system are intimately related, communicating bi-directionally through cytokines, neuropeptides and neurotransmitters. Dopamine is a neurotransmitter that exerts its effect through five dopaminergic receptors which display different degrees of affinity. The D3R, which display the highest affinity for dopamine, has been found expressed in CD4+ T cells, where its stimulation promotes high production of IFN-γ, favoring the acquisition of the Th1 profile. However, the role of this receptor in CD8+ T lymphocytes has not yet been fully studied.
In this thesis the role of D3R in the acquisition of the cytotoxic profile by CD8+ T lymphocytes was studied. For this purpose, in this thesis CD8+ T-cells bearing a transgenic TCR specific for the recognition of the OVA peptide(257-264) over the class I MHC H2-Kb (OT-I lymphocytes) were used. In vitro differentiation experiments show that lack of D3R in OT-I lymphocytes (OT-I D3RKO) results in a significant reduction in the production of IFN-γ, TNF-α and on the expression of CD25 (α chain of the IL-2 receptor) in response to the stimulation with OVA peptide(257-264). These effects were reversed by adding exogenous IL-2 into the cultures, suggesting a mechanism by which D3R favors the differentiation towards an effector phenotype through the production of IL-2. In vivo experiments show that D3R expressed on OT-I lymphocytes favors a higher clonal expansion and thereby an stronger protection against melanoma tumors.
The results obtained suggest that D3R promotes the formation of a more efficient cytotoxic profile capable of producing higher percentages of IFN-γ and higher rates of clonal expansion, which leads to greater survival in the face of a tumor challenge.<br>Junio 2020
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Martínez, Escribano Jorge Antonio. "Estudio del fenotipo de células mononucleares en sangre periférica de pacientes con melanoma. Análisis de los niveles sericos y polimorfismo de citoquinas." Universitat de València, 2001. http://www.tesisenxarxa.net.
Full text
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Tambillo, Gutiérrez Luis Angel. "Evaluación in vitro de la respuesta leucocitaria de alpacas (Vicugna pacos) en presencia de antígenos clostridiales." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2012. https://hdl.handle.net/20.500.12672/15546.
Full textAbstract:
Publicación a texto completo no autorizada por el autor<br>El documento digital no refiere asesor<br>Evalúa la expresión de citoquinas proinflamatorias de los
leucocitos circulantes de alpaca al enfrentarlos a extracto total del C. perfringens y sus toxinas,
usando la técnica RT-PCR tiempo real. Se colectó sangre entera de la vena yugular de 10
animales: 5 alpacas hembras y 5 alpacas machos adultos. Los leucocitos fueron separados
utilizando cloruro de amonio para lisar los eritrocitos seguidos de centrifugación. Los leucocitos
aislados fueron cultivados a una concentración de 500 000 leucocitos /ml de medio MEM
(Minimal Essencial Medium) en placas de cultivo de 12 pocillos y enfrentadas a extracto total
de C. perfringens cultivados en caldo thioglicolato a concentraciones de 400µg/ml, 80µg/ml,
16µg/ml, 0.8µg/ml y 0.2µg/ml, para luego cuantificar la expresión de las citocinas TNFα, IL-1α,
IL1β e IL-6 mediante la RT- PCR. Los resultados obtenidos demostraron que dosis bajas de
extractos clostridiales (0.2 a 0.8 µg) son capaces de inducir expresiones de TNFα, IL-1α e IL1β
desde las 12 a 24 horas de incubación, a diferencia de dosis altas en donde no sobrepasan la
expresión de las citoquinas en leucocitos no estimulados (control). No se evidencia producción
considerable de IL-6 hasta las 24 horas post exposición a extracto completo de C. perfringens.
Estos resultados indican que el C. perfringens y sus toxinas a dosis bajas inducen la activación
de los leucocitos circulatorios de alpacas produciendo la secreción de citoquinas
proinflamatorias.<br>Tesis
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Hernández, Caldera Arnoldo Alejandro. "Efectos de la estimulación de fibroblastos de ligamento periodontal humano con IL-6 sobre la síntesis de proteína C reactiva (PCR) y citoquinas proinflamatorias." Tesis, Universidad de Chile, 2015. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/148881.
Full textAbstract:
Tesis Magister en Ciencias Odontológicas con Mención en Periodontologia<br>Las enfermedades inflamatorias que afectan al periodonto producto de la
infección por microorganismos de la microbiota oral determinan la liberación de
una serie de productos bacterianos y mediadores inflamatorios a la circulación
general. Entre estos IL-6 cumple un rol fundamental en la destrucción local de
los tejidos periodontales y en el aumento del status inflamatorio sistémico por
inducción en la síntesis de PCR a nivel hepático. Esta última corresponde a una
proteína de fase aguda y su concentración en el plasma sanguíneo depende de
la inflamación, infección y daño tisular que pudiese afectar diversos órganos y
tejidos. Se le considera como una llave biológica entre los hábitos de salud y la
morbilidad y mortalidad, fundamentalmente relacionada con el daño
cardiovascular.
En este estudio, se cultivaron FLP humanos los que fueron estimulados
con IL-6, IL-6RS y anti IL-6R a distintos tiempos y concentraciones. Se
cuantificó la expresión y secreción de PCR y de las citoquinas IL-1β, IL-12, IL18,
TNF-α, IFN-γ, IL-17, IL-21, IL-23, IL-4, IL-5, IL-10 y TGF-β1. Además se
identificó las vías de señalización involucradas en el estímulo de IL-6 en los
cultivos de FLP.
Se detectaron mayores niveles de expresión y secreción de PCR ante el
estímulo de IL-6 en comparación con el grupo control no inducido y este efecto
se vio potenciado con el coestímulo de IL-6 / IL-6RS. Las citoquinas asociadas
al perfil Th1 (IL-1β, IL-12, IL-18, TNF-α, IFN-γ), Th17 (IL-21 e IL-23) y Treg (IL10
y TGF-β1) presentaron mayores niveles de expresión en relación con los
grupos controles. Del mismo modo la secreción de las citoquinas más
representativas del perfil linfocitario Th1 (IL-1β, TNF-α), Th17 (IL-23) y Treg
(TGF-β1) fueron significativamente mayores en comparación con los grupos
controles. La vía de señalización ERK 1/2, STAT-3, JNK y p38, no se modificó
de forma significativa frente al estímulo de IL-6 / IL-6RS y anti IL-6R.
Los resultados sugieren que el periodonto constituiría un sitio
extrahepático de expresión y secreción de PCR. El estímulo inflamatorio local
producido durante la enfermedad periodontal determinaría un aumento en la
expresión y secreción de PCR y de las citoquinas asociadas a un perfil
osteodestructivo (Th1 y Th17), aumentando con ello el status inflamatorio local
y sistémico. Este estudio corroboró el mecanismo de acción del eje IL-6 –PCR
en los tejidos periodontales.
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Garcia, Recio Susana. "Cooperación oncogénica entre la citoquina pro-inflamatoria SP y el receptor tirosina quinasa ErbB-2/HER2." Doctoral thesis, Universitat de Barcelona, 2012. http://hdl.handle.net/10803/126031.
Full textAbstract:
INTRODUCCIÓN: La inflamación es un sello distintivo del cáncer. La inflamación crónica está fuertemente relacionada con el desarrollo y la progresión tumoral y suministra al tumor múltiples citoquinas proinflamatorias que pueden modular la señalización de la célula tumoral. Este es el caso de la Sustancia P (SP), una citoquina pro-inflamatoria/neuropéptido presente en el microambiente tumoral perteneciente a la familia de las taquiquininas y que señaliza principalmente a través de su receptor de mayor afinidad, el receptor NK-1 (NK-1R). NK-1 es un receptor acoplado a proteínas G (GPCR). La diversidad funcional de los GPCRs reside en que, además de activar sus propias rutas de señalización, transactivan otros receptores (como es el caso de los receptores de la famíla ERBB) y generan así una amplia diversidad de mecanismos de transducción de señales. Los miembros de la familia ERBB, incluyendo EGFR, HER2, HER3 y HER4, son receptores con actividad tirosina quinasa (RTK) y las redes de señalización desencadenadas a través de ellos desempeñan un papel fundamental en la iniciación y progresión del tumor. En particular, HER2 está sobreexpresado en aproximadamente el 25 % de las pacientes con CM y se asocia a un peor pronóstico y bajas tasas de supervivencia. Esta tesis doctoral ha tratado de investigar principalmente qué papel juega el neuropéptido/mediador proinflamatorio SP en la transmodulación del sistema ERBB en CM.
OBJETIVOS: Dada la importancia entre la señalización de la SP y la activación basal de los RTK, nuestro objetivo fue investigar como esta citoquina proinflamatoria podía contribuir en la transmodulación persistente de los receptores ERBB, EGFR y HER2, y de qué forma esto podía influir en un incremento de la malignidad y en la resistencia terapéutica del CM.
RESULTADOS: En un análisis de 320 mujeres con CM, se detectó la expresión del receptor NK-1 y SP en un 94% y 52%, respectivamente, y sus niveles de expresión estaban correlacionados con el subtipo HER2+. Además, la expresión de SP y NK-1R estaba asociada positivamente a factores relacionados con un peor pronóstico. Mediante inmunofluorescencia indirecta multicor se analizaron 19 tumores primarios de mama, y a través de varios experimentos in vitro e in vivo, se detectó que la SP activaba la proteína HER2, con consecuencias importantes no sólo para el crecimiento y el desarrollo tumoral, sino también para la respuesta a terapias dirigidas contra el receptor HER2. Además, se identificaron algunos de los mecanismos responsables, mediante los cuales la SP y el receptor NK-1 transactivaban el receptor HER2. Se observó que mecanismos dependientes de la proteína Src y enzimas como las metaloproteasas podían ser las responsables del vínculo entre ambos receptores. Además se pudo valorar como esta transactivación aumentaba la señalización de HER2 en células humanas de CM y como, por el contrario, la inhibición del receptor NK-1 disminuía su activación. Los resultados observados hasta el momento, sugerían que el estado basal de activación de HER2 dependía en parte de la señalización autocrina/paracrina mediada por SP y el receptor NK-1. Por otra parte, el tratamiento con un antagonista del receptor NK-1 L-733, 060, reducía el crecimiento del tumor en ratones SCID xenoinjertados con células de CM EGFR+ o HER2+. Además de los resultados ya mencionados, se observó que una exposición continua a la SP, mimetizando una situación de inflamación crónica, aumentaba significativamente la resistencia de las células de CM a terapias anti-HER2, y que estos fármacos tratados junto a inhibidores de la actividad del receptor NK-1 presentaban un efecto sinérgico, aumentando así, su valor terapéutico.
CONCLUSIÓN: En este trabajo, hemos identificado una nueva red de señalización aberrante en CM basada en la cooperación oncogénica entre el sistema taquiquinérgico y la señalización de HER2/EGFR, sugiriendo que para lograr una respuesta terapéutica completa con tratamientos dirigidos contra receptores con actividad tirosina quinasa, como HER2, ambos mecanismos, el de activación directa del receptor y el de transactivación deberían de ser bloqueados.<br>INTRODUCTION: Inflammation is a hallmark of cancer. Chronic inflammation is tightly related to tumor development and progression and supplies the tumor with a milieu of proinflammatory cytokines that can modulate the inflammation-related tumor cell signaling. The vast majority of proinflammatory cytokines induce signal transduction through different families of heterologous G-protein–coupled receptors (GPCRs). Moreover, ERBB receptors transmodulation by GPCRs generates functional diversity in signal transduction. Tachykinins are neuropeptides and proinflammatory cytokines that promote cell survival and cancer progression by activating several GPCRs. In this work, we found that the pain-associated tachykinin Substance P (SP) through NK-1R signaling contributes to persistent transmodulation of the ERBB receptors, EGFR and HER2, in breast cancer (BC), acting to enhance malignancy and therapeutic resistance.OBJECTIVE: Given the relevance of SP signaling on RTKs basal activation, we aim to investigate if the pain-associated tachykinin SP contributes to persistent transmodulation of the ERBB receptors, EGFR and HER2, in BC, acting to enhance malignancy and therapeutic resistance. RESULTS: SP and its high-affinity receptor NK-1R were highly expressed in HER2+ primary breast tumors (relative to the luminal and triple-negative subtypes) and were overall correlated with poor prognosis factors. In BC cell lines and primary cultures derived from BC samples, we found that SP could activate HER2. Conversely, RNA interference-mediated attenuation of NK-1R, or its chemical inhibition, or suppression of overall GPCR-mediated signaling, all strongly decreased steady-state expression of EGFR and HER2. Moreover, the treatment with NK-1R antagonist L-733,060, reduced tumour growth only in SCID mice harboring HER2+ or EGFR+ tumour cells. Finally, we found that a chronic exposure to SP in vitro for over 5 months significantly increased BC cell resistance to anti-ERBB therapies, and the combination of the NK-1R antagonist L-733,060 with anti-HER2 therapies synergistically inhibits the proliferation of BC cells increasing their therapeutic effect.CONCLUSION: In this work, we identified a new aberrant signaling network in BC founded by the oncogenic co-operation between the tachykinergic system and HER2/EGFR signaling, and we demonstrated that it could be exploited for the development of new therapeutic strategies based on the dual inhibition of activation and transactivation mechanisms.
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Arone, Farfán Ricardo, and Farfán Ricardo Arone. "Expresión de citoquinas proinflamatorias por monocitos humanos infectados con dos especies de Leishmania en presencia de lectinas hemaglutinantes del ecotipo patón grande de Lupinus mutabilis sweet (Tarwi)." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2017. http://cybertesis.unmsm.edu.pe/handle/cybertesis/6867.
Full textAbstract:
Publicación a texto completo no autorizada por el autor<br>Determina el efecto de las lectinas hemaglutinantes de Lupinus mutabilis (tarwi) en la activación y expresión de citoquinas proinflamatorias en monocitos humanos infectados con Leishmania peruviana y Leishmania braziliensis. Se procedió a purificar las lectinas del extracto de semillas de L. mutabilis mediante dos métodos cromatográficos: exclusión molecular seguido de intercambio aniónico. Para el aislamiento de monocitos humanos de sangre periférica se diseñó y aplicó un método de separación seriada empleando dos polímeros de distintas densidades. El cultivo de monocitos fue tratado con diferentes dosis de fracción de lectinas hemaglutinantes (FrPG) obtenidas por cromatografía de exclusión molecular y lectina purificada (LP) obtenida por cromatografía de intercambio aniónico. Se evaluó la viabilidad celular, producción de anión superóxido y liberación de óxido nítrico. Las concentraciones óptimas de FrPG y LP fueron probadas en cultivos de monocitos humanos infectados con L. peruviana y L. braziliensis, en los que se evaluó la expresión de citoquinas proinflamatorias. Las concentraciones de 50, 75 µg/ml de FrPG y 20 µg/ml de LP produjeron el incremento significativo de la producción de anión superóxido en cultivo de monocitos no infectados. La producción de anión superóxido en monocitos previamente tratados e infectados con L. peruviana fue significativa con 75 µg/ml de FrPG y 20 µg/ml de LP, mientras que en monocitos infectados con L. braziliensis solo se presentó con 20 µg/ml de LP. No se produjo liberación de óxido nítrico en ninguna de las concentraciones de FrPG y LP en los cultivos de monocitos no infectados o infectados con las especies de Leishmania evaluadas. Se incrementó la expresión génica de mRNA para IL-1α y TNF-α solo en los cultivos de monocitos infectados con L. peruviana en presencia de LP a 20 µg/ml. Se concluye que el tratamiento con lectina purificada de tarwi induce la producción de anión superóxido en monocitos no infectados e infectados con L. peruviana y L. braziliensis y favorecen el incremento de la expresión de citoquinas proinflamatorias solo en monocitos infectados con L. peruviana.<br>Universidad Nacional Mayor de San Marcos (Lima). Vicerrectorado de Investigación y Posgrado<br>Tesis
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Leyton, Rossi Rodrigo Alonso. "Expresión heteróloga de la proteína IFN-I del sistema inmune de Salmo salar en Bacillus megaterium." Tesis, Universidad de Chile, 2017. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/170084.
Full textAbstract:
Memoria para optar al título de Bioquímico<br>La industria acuícola de salmónidos, como la del salmón del Atlántico o de la trucha arcoíris, constituye una de las principales actividades económicas de Chile. Sin embargo, en su puesta en marcha enfrenta desafíos técnicos y ambientales, incluyendo la aparición de enfermedades que se transmiten rápidamente dentro de las poblaciones de cultivo. La segunda causa de pérdidas por patología infecciosa es la Necrosis Pancreática Infecciosa, causada por el virus IPNv. Se ha descrito que la citoquina IFN-I induce una potente actividad antiviral contra IPNv.
Para este trabajo de investigación, se propuso clonar IFN-I de la especie Salmo salar en Bacillus megaterium, una bacteria inocua capaz de producir grandes cantidades de proteína y que ha sido utilizada exitosamente en la industria biotecnológica. Para lo anterior, se diseñó un método de clonación clásico y se logró exitosamente la transformación de Escherichia coli con el vector de B. megaterium pSSBm110 con el gen de IFN-I como inserto (pSSBm110:IFN-I). Se probaron luego dos métodos de transformación para B. megaterium, uno de electroporación que no dio resultados cuantificables y otro de creación de protoplastos libres de pared capaces de absorber ADN exógeno. Sin embargo, a pesar de lograr la transformación y la clonación exitosa del vector pSSBm110:IFN-I en B. megaterium, no se logró la detección de la expresión de IFN-I recombinante, por lo cual serán necesarios nuevos intentos para lograr su uso como sistema de expresión para esta citoquina<br>The salmonid aquaculture industry, such as the Atlantic salmon or the rainbow trout aquaculture, is one of the Chile’s main economic activities. However, this industry faces technical and environmental challenges, including the emergence of diseases which spread quickly through the fish populations. The infectious pancreatic necrosis, which is caused by the IPNv virus, is the second cause of fish losses related to an infectious disease. It has been described that the cytokine IFN-I induces a powerful antiviral response against IPNv.
In this research, we proposed the cloning of IFN-I from Salmo salar in the harmless bacterium Bacillus megaterium, a species of high-yielding protein production, successfully used in the biotechnology industry. For this, a classic cloning method was used, obtaining transformed Escherichia coli cells with the B. megaterium pSSBm110 vector, and the IFN-I insert (pSSBm110:IFN-I). Then, two B. megaterium transformation methods were tested. The first one, an electroporation method, which did not offer quantifiable results. The second one, a method based on protoplast cells generation where foreign DNA was absorbed. Even though the transformation and cloning in B. megaterium were both successful, and verified through sequencing, the expression of the recombinant peptide was not detectable. Thus, new attempts will be necessary to use this expression system for this cytokine<br>FIA PYT-2012-0056
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Toro, Reyes Myriam Beatriz. "Efecto de distintas técnicas de aplicación de Tidiazuron sobre el tamaño de la baya en uva de mesa variedad Thomson Seedless." Tesis, Universidad de Chile, 2012. http://www.repositorio.uchile.cl/handle/2250/111137.
Full textAbstract:
Memoria para optar al título profesional de Ingeniera Agrónoma. Mención Fruticultura<br>Con el objetivo de evaluar cómo afectan distintas técnicas de aplicación del regulador de
crecimiento Tidiazurón (TDZ) sobre el crecimiento de bayas, se realizó un ensayo en un
parronal de la variedad Thompson Seedless, ubicado en la localidad de La Arena, Región
de Atacama.
La aplicación se efectuó en bayas de 6 mm y los tratamientos consistieron en 1,67 mg•L-1
de TDZ aplicado mediante atomizador hidroneumático; 1,67 mg•L-1 de TDZ aplicado por
bomba de espalda; 1,67 mg•L-1 de TDZ aplicado por inmersión; 0,84 mg•L-1 de TDZ
aplicado por inmersión; y un tratamiento sin aplicación de TDZ (control).
Al momento de la cosecha, definida por un contenido de sólidos solubles de 16,5°Brix, se
evaluó el tamaño y peso de bayas, peso de racimo, color de racimo, desgrane de bayas,
sólidos solubles y calidad de raquis.
No hubo diferencias en el peso, diámetro ecuatorial y polar de bayas en cuanto a las formas
de aplicación.
Las bayas tratadas con TDZ con la concentración completa presentaron mayor peso y
diámetro polar que el control sin aplicación. En el diámetro ecuatorial, la inmersión fue el
único tratamiento que mostró un aumento respecto al control.
La aplicación mediante inmersión con la mitad de la concentración no fue suficiente y
presentó el mismo tamaño que los racimos no aplicados.
El TDZ redujo los racimos color ámbar y aumentó los de color verde. Además, generó un
atraso en la fecha de cosecha como también una disminución de los sólidos solubles.
De acuerdo a este ensayo, las formas de aplicación de TDZ no determinan diferencias en el
tamaño y peso de baya.<br>In order to assess how different Thidiazuron (TDZ) growth regulator application techniques
affect berry growth, a trial was carried out in a cv. Thompson Seedless vineyard, located in
La Arena, Atacama Region, Chile.
The application was done at 6 mm berry diameter and treatments consisted in 1,67 ppm of
TDZ applied atomizer sprayer; 1,67 ppm of TDZ applied by manual sprayer; 1,67 ppm of
TDZ applied by immersion; 0,84 ppm of TDZ applied by immersion; and a treatment
without application of TDZ (control).
At harvest, determined by cluster reaching 16° Brix soluble solids berry size and weight
were evaluated. Other parameters were also assessed like cluster weight, color, berry drop
and soluble solids, besides rachis quality.
There were no differences in berry size regarding method of application.
The treated berries showed more weight and polar diameter than those of control treatment
without application. In relation at equatorial diameter, immersion was the only treatment
showing a significant difference with control. The immersion application with half
concentration was not enough and showed the same size than control clusters no
application.
TDZ reduced number of amber color clusters, and produced a delay harvest date on
additionally soluble solids decrease was observed. Berry weight increased with TDZ
application, confirming that applications were effective.
According to this trial, the application method do not determine differences on berry size.
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Vizmanos, Lamotte Gerardo. "Tipificación del fenotipo inflamatorio en el asma bronquial en niños de 7 a 14 años, mediante recuento celular y determinación de citoquinas en esputo inducido." Doctoral thesis, Universitat Autònoma de Barcelona, 2010. http://hdl.handle.net/10803/32135.
Full textAbstract:
Introducción:
La inducción de esputo es una técnica escasamente invasora para el estudio y la monitorización de la inflamación de la vía aérea.
Objetivos:
El objetivo principal del estudio fue comparar el perfil celular y los niveles de citoquinas Th1 y Th2 en esputo inducido entre niños asmáticos atópicos, asmáticos no atópicos y sanos.
Métodos:
La inducción de esputo fue realizada mediante inhalación de suero salino hipertónico a concentraciones crecientes (3%, 4% y 5%). Se determinó la fracción exhalada de óxido nítrico en los pacientes asmáticos y se midió la FEV1 al inicio y después de cada período de inhalación para garantizar la seguridad de los niños.
El procesado del esputo se hizo siguiendo el método de Pizzichini y cols. Se separó el esputo de la saliva y se añadió un volumen de solución de ditiotreitol igual a 4 veces el peso del esputo. Se agitó la mezcla y después de colocarla en banco mecedor durante 10 minutos se añadieron 4 volúmenes de PBS de Dulbecco. La suspensión resultante se filtró a través de una gasa de nylon de 48 micras, centrifugándose a continuación durante 10 minutos a 2.500 rpm para obtener un pellet (sedimento) celular donde se determinaron el recuento celular total y la viabilidad celular y un sobrenadante que se guardó a -80ºC para la determinación de citoquinas. Se consideró una buena muestra si la viabilidad celular era > 60% y la contaminación por células escamosas < 20%. Mediante citocentrífuga se obtuvieron las preparaciones y tras tinción de May-Grünwald-Giemsa se realizó el recuento celular diferencial con microscopio óptico. Los niveles de IFN-gamma, IL-2, IL-10, IL-8, IL-6, IL-4, IL-5, IL-1beta, TNF-alfa, e IL-12p70 en el sobrenadante se determinaron mediante citometría de flujo (Bender Medsystem, USA).
El análisis estadístico se realizó con el programa SPSS15.0. Se aplicaron los siguientes tests paramétricos o no paramétricos según los grupos seguían o no una distribución normal (prueba de normalidad de Kolmogorow-Smirnov), y según fuera apropiado: t de Student para datos no apareados, análisis de la varianza de una vía, test no paramétricos de la U de Mann-Witney, y de Kruskal-Wallis, Chi-cuadrado, prueba exacta de Fisher y correlación lineal de Pearson. Se consideraron significativos valores de p < 0,05. Los resultados se expresaron como media y desviación estándar (DE) o mediana y rango intercuartílico.
Resultados:
Se realizó inducción de esputo a 77 niños asmáticos (52 varones) y a 31 sanos (17 varones) de 7 a 15 años. Entre los asmáticos, 51 no recibían tratamiento y 26 recibían corticoides inhalados. Diecisiete pacientes presentaban un asma no atópica y 60 asma atópica. Se obtuvieron 64 muestras en los asmáticos (83,1% de las inducciones) y 24 muestras en los niños sanos (77,4%) de las que 49 y 18 adecuadas respectivamente.
La mediana de eosinófilos en esputo inducido de los asmáticos atópicos (1,5%) fue mayor que en los no atópicos (0%) (p=0,02) y que en los niños sanos (0%) (p=0,003). Las citoquinas Th2 (IL-4 e IL-5) y Th1 (IFNgamma, IL-2 e IL-12p70) fueron superiores en los asmáticos atópicos que en los sanos y en los asmáticos no atópicos (p<0,0001). La IL-8 fue mayor en los niños asmáticos (atópicos y no atópicos) que en los controles (p<0,0001). La IL-10 fue mayor en los controles que en los asmáticos atópicos (p=0,03). No existieron diferencias en el resto de citoquinas (IL-6, IL-1beta y TNF-alfa).
Conclusiones:
El perfil inflamatorio de los niños asmáticos muestra un aumento en las citoquinas proinflamatorias en el esputo inducido respecto a los niños sanos. Existen diferencias en el perfil de citoquinas en esputo inducido entre los niños asmáticos atópicos y no atópicos.<br>Introduction:
Sputum induction is a semi-invasive technique for the study and monitorization of airway inflammation.
Objectives:
The aim of the present study was to compare the cellular profile and the Th1 and Th2 cytokine levels in induced sputum between atopic asthmatic, non atopic asthmatic and healthy children.
Methods:
Sputum induction was performed by inhalation of a hypertonic saline solution at increasing concentrations (3%, 4% and 5%). Fractional exhaled nitric oxide was determinate in asthmatic patients and FEV1 was measured at the start and after each period of inhalation to ensure children’s safety.
Sputum examination was performed as described by Pizzichini et al. Sputum was separated from contaminating saliva and a weighed aliquot was dispersed with four volumes of freshly prepared dithiothreitol solution. The mixture was vortexed, and after being rocked for 10 minutes, 4 volumes of Dulbecco’s PBS was added. The suspension was then filtered through 48-µm nylon gauze and centrifuged at 2500 rpm for 10 minutes. This resulted in the formation of a cell pellet and supernatant solution. The supernatant was stored at -80º C for analysis of cytokines. Total cell count and cell viability was determined in the cell pellet. We considered good sample if there was cell viability ≥ 60% and contamination by squamous cells < 20%. Cytospin cell preparations were made using a cytocentrifuge and slides were stained with May-Grünwald-Giemsa to determine the differential cell count using optic microscopy. In sputum sample supernatants IFN-γ, IL-2, IL-10, IL-8, IL-6, IL-4, IL-5, IL-1β, TNF-α, and IL-12p70 levels were determined by flow cytometry (Bender Medsystem, USA).
Statistical analyse was performed with SPSS® 15.0 program. Parametric and non-parametric tests were applied according to normal distribution (Kolmogorov-Smirnov test): Student’s t-test for independent samples, ANOVA, Mann-Whitney U test and Kruskal-Wallis as non-parametric tests, Chi-square test and Pearson’s correlation. Values of p < 0.05 were considered significant. Results are expressed as mean and standard deviation (SD) or median and interquartile range.
Results:
Sputum induction was performed in 77 asthmatic children (52 boys) and in 31 healthy children (17 boys) from 7 to 15 years old. Fifty one of asthmatic children were with no treatment and 26 were receiving inhaled corticosteroids. Seventeen patients had non atopic asthma and 60 had atopic asthma. We obtained 64 samples in patients (83.1% of inductions) and 24 samples in healthy children (77.4%). We considered 49 and 18 good samples respectively.
Median eosinophil count in atopic asthma (1.5%) was higher than in nonatopic asthma (0%) (p=0.02) or healthy children (0%) (p=0.003). Th2 cytokines (IL-4 and IL-5) and Th1 cytokines (IFNγ, IL-2 and IL-12p70) were higher in atopic asthmatic children than in healthy and non atopic asthmatic children (p<0,0001). IL-8 was higher in asthmatic children (atopic and non atopic) than controls (p<0,0001). IL-10 was higher in controls than atopic asthmatic children (p=0,03). There were no differences in the other cytokines (IL-6, IL-1β and TNF-α).
Conclusions:
The inflammatory profil of asthmatic children shows an increase in proinflammatory cytokines in induced sputum respect to healthy children. There are differences in cytokine profile of induced sputum in atopic and non atopic asthmatic children.
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Alvarez, Salazar Evelyn Katy. "Producción de mRNA para citoquinas hematopoyéticas (IL-3, GM-CSF e IL-7) en ratones inmunosuprimidos tratados con extracto acuoso de Lepidium meyenii walpers (maca)." Master's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2013. https://hdl.handle.net/20.500.12672/14199.
Full textAbstract:
Publicación a texto completo no autorizada por el autor<br>Determina las propiedades antitumorales e inmunomoduladoras del Lepidium meyenni (maca), que lo convierten en un excelente candidato para investigar su actividad hematopoyética. Se trataron ratones Balb/c a dosis de 200 mg/kg de extracto acuoso (EAc) de maca amarilla por vía oral durante 2 meses previo a la inmunosupresión (IS) con ciclofosfamida (CF), y se evaluó la producción de mRNA para las citoquinas hematopoyeticas: interleuquina 3 (IL-3), factor estimulador de colonias de granulocitos y monocitos (GM-CSF) e interleuquina 7 (IL-7) en el bazo y la médula ósea, tanto en los ratones tratados como en sus controles. Se realizaron cultivos de células mononucleares de médula ósea y se evaluó el efecto del EAc sobre la proliferación celular y producción de mRNA para las 3 citoquinas hematopoyéticas. La administración de EAc en ratones IS, incrementó (p<0.05) la producción de mRNA para las tres citoquinas en el bazo y de IL-7 en la médula ósea, dos días después de la IS; e IL-3 y GM-CSF en la médula ósea 5 días post-IS, al compararlos con los grupos no tratados con el extracto. En cultivos de médula ósea, el EAc en la dosis de 100 µg/ml, estimuló (p<0.05) la proliferación celular y la producción de mRNA para IL-7. Además, los ratones IS y tratados con EAc mostraron mayor recuento de células de médula ósea, sangre periférica, unidades formadoras de colonias endógenas en el bazo (CFU-S) y respuesta proliferativa a mitógenos de los linfocitos, cinco días después de la IS. El EAc de maca estimula la producción de mRNA para las tres citoquinas hematopoyéticas. La administración de EAc a ratones inmunocomprometidos puede revertir los efectos supresores de la ciclofosfamida.<br>Consejo Nacional de Ciencia, Tecnología e Innovación Tecnológica<br>Tesis
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Herrera, Rosalino Antonio. "Detección de citoquinas inductora y efectora para la diferenciación y función de linfocitos colaboradores 17 (Th17) en mucosa intestinal de crías de alpaca (Vicugna pacos)." Master's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2012. https://hdl.handle.net/20.500.12672/15947.
Full textAbstract:
El documento digital no refiere asesor<br>Publicación a texto completo no autorizada por el autor<br>Determina y compara los niveles relativos de ARN mensajero (ARNm) de citoquinas que estimulan y efectúan respuesta tipo Th17 en mucosa intestinal de crías de alpaca (Vicugna pacos) sanas y enfermas con enteropatías de uno hasta los 45 días de edad. Se muestrearon 66 animales: 35 sanos y 31 enfermos, se tomaron dos cm. de porción media del yeyuno. Una parte de las muestras fueron conservadas a -196°C; y la otra fue embebida en formaldehído tamponado 10%. Se realizó extracción del ARN total de las muestras conservadas a -196°C; y posteriormente se sintetizó ADN complementario (ADNc). Se diseñaron oligonucleótidos a partir de secuencias de bovino (Bos taurus) para determinar expresión del factor de crecimiento transformante-β (TGF-β) e interleuquina 17 (IL-17). Se realizó medición de expresión relativa del ARNm de ambas citoquinas mediante RT-PCR tiempo real. Los valores de expresión fueron normalizados con ARNm del gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH); y los cálculos de expresión relativa se realizaron mediante el método 2-∆∆Ct. Se obtuvieron cortes histológicos de las muestras de animales enfermos para realizar el diagnóstico histológico con tinción Hematoxilina y Eosina (H: E). Los resultados mostraron que RT-PCR tiempo real mide específicamente la expresión del TGF-β e IL-17 en mucosa intestinal de crías de alpaca a partir de un día de edad. Además, durante una enteritis aguda, la producción de ARNm de IL-17 es estimulada como otro mecanismo del sistema inmune contra microorganismos patógenos como bacterias y parásitos, alcanzando niveles de expresión de hasta 1295.05 ± 161.42 veces lo observado al primer día de edad, existiendo diferencia estadística entre crías de alpacas sanas y enfermas con enteropatía (p<0.05). Se determinó que la enteritis necrótica difusa aguda asociada a bacterias presentaba los mayores niveles de expresión de IL-17. Por lo tanto, se concluye que existe respuesta tipo Th17 en mucosa intestinal de crías de alpaca sanas y enfermas con enteropatía de uno a 45 días de edad.
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Torres, Gonzales Dina. "Detección y cuantificación de la expresión transcripcional para tres receptores tipo toll y dos citoquinas proinflamatorias en cultivos de macrófagos murinos infectados con Leishmania braziliensis nativa." Master's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2019. https://hdl.handle.net/20.500.12672/11200.
Full textAbstract:
Menciona que Leishmania braziliensis es un protozoario causante de la leishmaniasis o uta, enfermedad endémica crónica de baja patogenicidad, alta morbilidad, metaxénica y zoonótica que compromete piel, mucosas y vísceras. Es transmitida por un díptero del género Lutzomyia, afecta alrededor de 12 millones de personas alrededor del mundo y a 12 departamentos en el Perú. Leishmania braziliensis tiene patrones moleculares de membrana asociadas a patógenos que son reconocidos por los receptores tipo toll (TLR) presentes en el hospedero, tanto en la superficie celular como a nivel intracelular. Los TLRs están conformados por una familia de 23 tipos que van a reconocer ligandos presentes en patógenos en común. Cuando se da la unión del ligando con un TLR desencadenará una secuencia de señales activando la expresión de moléculas coestimuladoras y citoquinas promoviendo una inflamación y activando la respuesta adaptativa. El presente trabajo tiene como objetivos caracterizar a la cepa C234 de Leishmania braziliensis mediante secuenciamiento y detectar y cuantificar los niveles de expresión de mRNA de los genes TLR-3, TLR-4 y TLR-9 y de las citoquinas IL-12 y TNF-α en macrófagos murinos enfrentados a la cepa C234 de Leishmania braziliensis, endémica del Perú. Se infectó macrófagos peritoneales de ratones Balb/c con promastigotes de Leishmania braziliensis y se cultivaron por 24 horas, se midió los niveles de óxido nítrico (ON), se extrajo mRNA de los macrófagos y se detectó y cuantificó los niveles de expresión en los genes de TLR-3, TLR- 4 y TLR-9, y de las citoquinas proinflamatorias IL-12 y TNF-α, a través de la técnica de retrotranscripción mediante la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real (RT-qPCR). Los resultados indicaron que el estudio filogenético de la cepa C234 mostró alta homología (96%) para Leishmania braziliensis. Además, los macrófagos infectados con Leishmania braziliensis presentaron mayor producción de ON sólo en las primeras horas de infección, descendiendo a las 24 y 48 horas; y se detectó expresión de mRNA para los genes TLR-3, TLR-4 y TLR-9 y de las citoquinas IL-12 y TNF-α. Se concluye que la cepa nativa C234 pertenece a la especie Leishmania braziliensis y que la disminución de la producción de ON está relacionada al mayor tiempo de infección y bajos niveles de expresión del gen TLR-4, así mismo, el incremento del nivel de expresión de mRNA de los genes TLR-3 y TLR-9 podrían estar implicados en la activación de la expresión génica de la citoquina IL-12 en macrófagos peritoneales murinos infectados con Leishmania braziliensis.<br>Tesis
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Santa, Bárbara Ruiz Paula. "Early signals in Drosophila imaginal disc regeneration : from ROS to Cytokines = Señales tempranas en la regeneración de discos imaginales de Drosophila : desde las ROS hasta las Citoquinas." Doctoral thesis, Universitat de Barcelona, 2017. http://hdl.handle.net/10803/471539.
Full textAbstract:
Countless environmental aggressors could damage the integrity of tissues and organs. In humans, the limited regenerative ability prevents often the recovery of injured tissues, but this is not the case of the fruit fly Drosophila melanogaster.
Drosophila imaginal discs are larval tissues that can regenerate after fragmentation or massive cell death. That is the reason why in our laboratory, we focused toward the understanding of the genetic basis of imaginal disc repair.
We concentrated on the initiation of regeneration, and we found that one of the earliest responses to damage consist in the production of Reactive Oxygen Species (ROS), which propagate from the dying to the nearby living cells, which will drive tissue repair. We revealed that the burst of ROS is essential, because the reduction of those molecules impairs repair. Within the cells, the protein Ask1 (Apoptotic signal-regulating kinase 1) sense ROS and activates both Jun kinase (JNK) and p38 signalling pathways, which are critical for regenerative growth. Although Ask1 was previously associated to apoptosis, we unravelled a novel function related to survival and proliferation. Ask1 inhibition reduces life span after oxidative stress, as well as regenerative ability after cell death. To assume this function, Insulin signalling must attenuate Ask1 activity in living cells. Simultaneously with Ask1, the TNF/Egr signalling acts upstream of JNK after damage, indicating an accurate control of this pathway to promote repair. Finally, we described that both JNK and p38 pathways are necessaries for the transcriptional activation of the cytokines Unpaired, which will promote JAK/STAT signalling to drive regenerative growth and recover the missing tissue.
Altogether, we demonstrated a new stress-responsive module composed by many signalling pathways conserved through evolution. Hopefully, in the near future, those findings will help scientists to improve wound healing and regeneration in human tissues and organs.<br>Los humanos no somos capaces de superar muchas adversidades que pueden dañar nuestra integridad celular, ya que nuestra capacidad regenerativa es realmente limitada. Sin embargo, en el reino animal hay una gran variedad de organismos que sí son capaces de regenerar estructuras completas, y este es el caso de la mosca de la fruta Drosophila melanogaster.
Los discos imaginales de Drosophila pueden dar lugar a estructuras adultas perfectas, aunque hayan sido fragmentados o sometidos a una gran muerte celular. Es por eso, que en nuestro laboratorio nos hemos focalizado en entender las increíbles habilidades regenerativas de este tejido epitelial, y así poder mejorar en un futuro la respuesta humana en el mismo proceso.
En concreto, decidimos estudiar el inicio del proceso regenerativo, y descubrimos que, al menos, una de las primeras respuestas del tejido dañado es producir una gran cantidad de Especies Reactivas de Oxígeno (ROS), que se propagan desde las células que están muriendo hacia el tejido vivo, responsable de regenerar. Comprobamos que esta explosión de ROS es necesaria para la reparación tisular, ya que su ausencia impide la recuperación total después del daño. Vimos que esto se debía a que las ROS son capaces de activar dos vías de señalización esenciales para el crecimiento regenerativo, que son la vía de la Jun kinasa (JNK) y la vía de la p38. Esto es gracias a la proteína Ask1 (kinasa que regula la respuesta apoptótica 1), que detecta oxidación tisular y activa ambas. Aunque Ask1 fue descrita previamente como una proteína asociada a muerte celular, nosotros descubrimos una nueva función relacionada con supervivencia, ya que la ausencia de Ask1 provoca una menor esperanza de vida en moscas adultas tratadas con agentes oxidativos, así como una menor capacidad regenerativa de los discos imaginales. Para llevar a cabo esta función, es necesario que la vía de la Insulina atenúe la activación de Ask1 en el tejido vivo. Además de Ask1, comprobamos que la vía de la JNK necesita del factor de necrosis tumoral TNF/Eiger para ser activada, lo que revela un control exhaustivo de esta vía durante la regeneración. Para finalizar, describimos que tanto la vía de la JNK como de la p38 son necesarias para la activación transcripcional de las citoquinas Unpaired, que activan la vía de JAK/STAT y estimulan el crecimiento regenerativo para recomponer el tejido dañado.
En conjunto, hemos descrito un módulo de respuesta a estrés que se desencadena después de un daño celular. Este módulo se activa con ROS, que es detectado por Ask1 para activar las vías de p38 y JNK, que desencadenan la respuesta transcripcional de las citoquinas upd y la vía de JAK/STAT. La respuesta de este módulo puede variar en función del TNF/Eiger y de la vía de la insulina, demostrando una vez más la conservación de vías de señalización entre mamíferos y organismos inferiores.
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Arone, Farfán Ricardo. "Expresión de citoquinas proinflamatorias por monocitos humanos infectados con dos especies de Leishmania en presencia de lectinas hemaglutinantes del ecotipo patón grande de Lupinus mutabilis sweet (Tarwi)." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2017. https://hdl.handle.net/20.500.12672/6867.
Full textAbstract:
Publicación a texto completo no autorizada por el autor<br>Determina el efecto de las lectinas hemaglutinantes de Lupinus mutabilis (tarwi) en la activación y expresión de citoquinas proinflamatorias en monocitos humanos infectados con Leishmania peruviana y Leishmania braziliensis. Se procedió a purificar las lectinas del extracto de semillas de L. mutabilis mediante dos métodos cromatográficos: exclusión molecular seguido de intercambio aniónico. Para el aislamiento de monocitos humanos de sangre periférica se diseñó y aplicó un método de separación seriada empleando dos polímeros de distintas densidades. El cultivo de monocitos fue tratado con diferentes dosis de fracción de lectinas hemaglutinantes (FrPG) obtenidas por cromatografía de exclusión molecular y lectina purificada (LP) obtenida por cromatografía de intercambio aniónico. Se evaluó la viabilidad celular, producción de anión superóxido y liberación de óxido nítrico. Las concentraciones óptimas de FrPG y LP fueron probadas en cultivos de monocitos humanos infectados con L. peruviana y L. braziliensis, en los que se evaluó la expresión de citoquinas proinflamatorias. Las concentraciones de 50, 75 µg/ml de FrPG y 20 µg/ml de LP produjeron el incremento significativo de la producción de anión superóxido en cultivo de monocitos no infectados. La producción de anión superóxido en monocitos previamente tratados e infectados con L. peruviana fue significativa con 75 µg/ml de FrPG y 20 µg/ml de LP, mientras que en monocitos infectados con L. braziliensis solo se presentó con 20 µg/ml de LP. No se produjo liberación de óxido nítrico en ninguna de las concentraciones de FrPG y LP en los cultivos de monocitos no infectados o infectados con las especies de Leishmania evaluadas. Se incrementó la expresión génica de mRNA para IL-1α y TNF-α solo en los cultivos de monocitos infectados con L. peruviana en presencia de LP a 20 µg/ml. Se concluye que el tratamiento con lectina purificada de tarwi induce la producción de anión superóxido en monocitos no infectados e infectados con L. peruviana y L. braziliensis y favorecen el incremento de la expresión de citoquinas proinflamatorias solo en monocitos infectados con L. peruviana.<br>Universidad Nacional Mayor de San Marcos (Lima). Vicerrectorado de Investigación y Posgrado<br>Tesis
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Huayhua, Rodriguez Julio Kevin. "Evaluación in vitro del efecto inmunomodulador del extracto metanólico del ecotipo morado de Lepidium meyenii, Walpers sobre la expresión génica y secreción de TNF-α por células mononucleares de sangre periférica humana". Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2018. https://hdl.handle.net/20.500.12672/9693.
Full textAbstract:
Lepidium meyenii, Walpers, conocido mundialmente como “maca”, es un tubérculo nativo de los Andes del Perú, que vive en regiones a más de 4000 msnm. Es reconocida mundialmente y ha sido objeto de numerosos estudios por muchas propiedades terapeúticas, afrosidiacas, entre otras que se le atribuyen; siendo alguna de estas ya verificadas científicamente. Su participación como inmunomodulador también ha sido estudiada, llegándose a encontrar efectos protectores, anticancerígenos; sin embargo, aún existe controversia sobre su participación en procesos inflamatorios. Es por eso que el objetivo de la presente investigación fue verificar su efecto sobre la producción de mRNA y secreción de TNF-α, una citoquina clave en los procesos inflamatorios, además de otros intermediarios como óxido nítrico (NO) y anión superóxido en células mononucleares de sangre periférica humana. Para esto se preparó un extracto metanólico (EM), partiendo de harina de hipocótilo deshidratado del ecotipo morado de maca. Se realizaron pruebas de viabilidad, a través de la reducción del MTT. El óxido nítrico fue medido utilizando la reacción de Peter Griess, mientras que el “estallido respiratorio” fue cuantificado a partir de la reducción del nitroblue tetrazolio (NBT). La expresión génica y secreción de TNF-α fueron evaluadas por un análisis cualicuantitativo a partir de PCR convencional, y ELISA tipo sándwich, respectivamente. Los resultados mostraron que el EM no afectó la viabilidad celular, ni estimuló significativamente la producción del anión superóxido. Sin embargo, se demostró un aumento dosis-dependiente de la producción de NO y TNF-α. Los hallazgos sugieren que los metabolitos secundarios que contiene el EM estimulan la respuesta inmune innata celular, siendo necesarias futuras investigaciones que complementen estos hallazgos.<br>Tesis
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Daudt, Liane Esteves, and Franco Locatelli. "Estimulação ex vivo de linfócitos T citotóxicos humanos para imunoterapia de neoplasias hematológicas em crianças : análise da subpopulação de memória e papel das citoquinas de cadeia gama comum." reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS, 2007. http://hdl.handle.net/10183/10606.
Full text
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Torres, Torres Marisa. "Estudio de ligandos del receptor NKG2D de activación de células natural killer y de las citoquinas IL-10 e IL-12 en endometrio eutópico de mujeres con endometriosis." Tesis, Universidad de Chile, 2015. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/151583.
Full textAbstract:
Grado de magíster en ciencias biológicas, mención inmunología<br>La endometriosis es una enfermedad inflamatoria benigna que se caracteriza por la presencia y crecimiento de tejido endometrial fuera de la cavidad uterina (ectópico), cuya etiología y fisiopatología permanece aún sin aclarar. Se ha demostrado que el endometrio eutópico de mujeres con endometriosis exhibe alteraciones moleculares, indicando que el defecto primario se encontraría en este tejido. Por otro lado, la desregulación del sistema inmune permite que las células endometriales que han llegado a la cavidad pélvica escapen de la vigilancia inmune, se implanten y proliferen, lo que favorece la formación de las lesiones ectópicas endometriales. Las células Natural Killer (NK) son linfocitos que participan en la inmunovigilancia y poseen un receptor de activación denominado NKG2D, el cual interactúa con diferentes ligandos (NKG2DL) expresados por células bajo estrés celular. Las interleuquinas (IL)-10 e IL-12 juegan un rol importante en la función inmunoreguladora, la cual involucra a macrófagos, linfocitos T y NK. Los niveles de NKG2DL, IL-10 e IL-12 en células endometriales del endometrio eutópico de mujeres con endometriosis no han sido estudiados hasta la fecha. Por lo tanto, en este trabajo, propusimos la siguiente hipótesis: “Durante el ciclo menstrual, en el endometrio eutópico de mujeres con endometriosis, los niveles de los ligandos del receptor NKG2D, activadores de las células Natural Killer (NK), se encuentran disminuidos, así como las citoquinas IL-10 e IL-12, lo que contribuye a la alterada respuesta inmunológica descrita en esta patología”. Para ello, se caracterizaron los niveles transcripcionales y la presencia de los ligandos MICA, MICB, ULBP-1, ULBP-2 y ULBP-3 y de IL-10 e IL-12 en el endometrio eutópico de mujeres con y sin endometriosis durante el
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ciclo menstrual, así como se evaluó el efecto del estradiol y prostaglandina E2 en células endometriales aisladas de pacientes y controles, simulando el microambiente estrogénico e inflamatorio descrito en el endometrio de las pacientes con endometriosis. Se evaluaron los niveles de mRNA por RT-PCR y los niveles proteicos por inmunohistoquímica (IHQ) y citometría de flujo. Se detectó la expresión de todos los NKG2DL estudiados, tanto al nivel de mRNA como proteico, en ambos grupos de endometrios durante el ciclo menstrual, encontrándose que los niveles de MICA aumentaron en la fase secretora media y tardía en el grupo control, pero su expresión no presentó diferencia significativa durante el ciclo menstrual de las pacientes. En contraste, la expresión de MICB aumentó en la fase secretora inicial, disminuyendo fuertemente al final del ciclo en las mujeres con endometriosis. Los niveles de mRNA de ULBP-3 fueron significativamente mayores en el endometrio eutópico de las pacientes comparado al grupo control durante la fase secretora media, mientras que los niveles de ULBP-2 aumentaron gradualmente hacia las etapas finales del ciclo menstrual en ambos grupos, y los niveles de ULBP-1 no se modificaron durante el ciclo menstrual. Muy bajos niveles de mRNA de IL-12p40 fueron detectados en el endometrio control durante el ciclo menstrual, a diferencia del endometrio de fase secretora media de endometriosis, cuyos niveles fueron significativamente mayores que el grupo control. Por el contrario, la proteína IL-12 fue localizada en forma focal, aumentando su presencia solamente en el endometrio control secretor tardío. En forma similar, los niveles de la proteína IL-10 aumentaron significativamente en el compartimiento estromal control de la fase secretora tardía, y disminuyó en endometriosis en comparación al grupo control. En células
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epiteliales aisladas de ambos grupos, se detectaron, al nivel proteico y transcripcional, los NKG2DL estudiados, encontrándose disminuidos en endometriosis comparados al grupo control. La presencia de estradiol y/o prostaglandina no modificó el nivel de mRNA de ningún ligando estudiado. En síntesis, hemos caracterizado, por primera vez, la expresión de los NKG2DL MICA, MICB, ULBP-1, ULBP-2 y ULBP-3 en el endometrio normal y patológico durante el ciclo menstrual. El aumento sostenido de los niveles de MICA y ULBP-2 hacia la fase secretora tardía sugiere una mayor activación de células NK en el tejido pre-menstrual normal que coincide con una reducida expresión de MICB en endometriosis. Por otro lado, la expresión diferencial de ULBP-3 e IL-12 en los endometrios secretores de endometriosis, además de la fuerte disminución en la expresión de IL-10 en la fase secretora tardía, podrían estar favoreciendo la implantación ectópica de los debris endometriales que arriban a la cavidad pélvica. Estos resultados sugieren que los ligandos del receptor NKG2D, principalmente MICA y ULBP-2, como también IL-10 e IL-12, jugarían un papel importante en las etapas finales del ciclo menstrual, período en que el endometrio experimenta una exhaustiva remodelación, preparándose para la acogida embrionaria o, en su defecto, para su eliminación a través de la menstruación. Las diferencias observadas en el endometrio de mujeres con endometriosis podrían explicar, al menos en parte, la infertilidad, como también la capacidad del tejido menstrual de escapar a la inmunovigilancia, como ha sido descrito en estas pacientes.<br>Endometriosis is a benign inflammatory disease characterized by the presence and growth of endometrial tissue outside the uterus (ectopic), whose etiology and pathophysiology still remains unclear. It has been shown that the eutopic endometrium of women with endometriosis exhibits molecular alterations, indicating that the primary defect would be present in this tissue. On the other hand, deregulation of the immune system allows the endometrial cells that have reached the pelvic cavity to escape immune surveillance, which favors their implantation and proliferation, resulting in ectopic endometrial lesions. Natural Killer (NK) cells are innate lymphocytes that participate in immune surveillance. They express the activating receptor NKG2D, which interacts with different ligands (NKG2DL) on nucleated cells under cell stress. Interleukin (IL)-10 and IL-12 play a role in the immune regulatory function involving macrophages, T lymphocytes and NK cells. To date, the levels of NKG2DL, IL-10 and IL-12 on endometrial cells of the eutopic endometrium of women with endometriosis have not been described. Therefore, here we proposed the following hypothesis: "During the menstrual cycle, in the eutopic endometrium of women with endometriosis, the ligands of the NKG2D receptor, which activate natural killer (NK) cells, are decreased, as well as the cytokines IL-12 and IL-10, which contribute to the altered immune response described in this pathology". For this purpose, the transcriptional levels and the presence of MICA, MICB, ULBP-1, ULBP-2 and ULBP-3 ligands and IL-10 and IL-12 were characterized in the eutopic endometrium of women with and without endometriosis during the menstrual cycle. We also evaluated the effect of estradiol and prostaglandin E2 in isolated endometrial cells from patients and controls, simulating the estrogenic and inflammatory microenvironment described in the endometrium of patients with endometriosis. The mRNA levels were evaluated by RT-PCR and the presence of proteins was assessed by immunohistochemistry (IHC) and flow cytometry. Both, mRNA and protein of all NKG2DL studied were detected in both groups of endometria during the menstrual cycle. MICA levels increased in the mid and the late secretory phases only in the endometrium of control individuals, although its expression did not show significant difference during all phases of the menstrual cycle in patients with endometriosis. In contrast, MICB expression increased in the early secretory phase and fell sharply in the late secretory phase only in the endometrium of women with endometriosis. The mRNA levels of ULBP-3 were significantly higher in the eutopic endometrium from patients compared to controls during the mid-secretory phase. In addition the mRNA levels of ULBP-2 gradually increased towards the end of the menstrual cycle, while ULBP-1 did not change during the menstrual cycle in both groups of individuals. Very low levels of IL-12p40 mRNA were detected in the control endometrium during the menstrual cycle, which differed from the mid secretory phase in the endometrium of women with endometriosis, which presented significantly higher IL-12p40 messenger levels than the control group. In contrast, IL-12 protein levels were focally localized in the endometrial tissue, and its expression increased significantly only in the late secretory control endometrium. Similarly, the IL-10 protein increased significantly in the late secretory phase in the control stromal and epithelial compartments, whereas its levels reduced significantly in endometriosis compared to the control group in the same menstrual cycle phase and tissue compartments. IL-10 mRNA levels were not detected in any endometrium. We detected the expression of all NKG2DL studied both, at the mRNA and protein levels, in epithelial cells isolated from the endometrium
of both groups However, the transcripts and protein levels of these ligands were decreased in endometriosis compared to the control group. The presence of estradiol and/or prostaglandin did not affect the level of mRNA of any ligand studied. In summary, we have characterized, for the first time, the expression of the NKG2DL MICA, MICB, ULBP-1, ULBP-2 and ULBP-3 in normal and pathological endometrium during the menstrual cycle. The sustained increase in MICA and ULBP-2 expression towards the late secretory phase suggests a greater activation of NK cells in the healthy premenstrual tissue, which coincides with a reduced expression of MICB in endometriosis. On the other hand, the differential expression of ULBP-3 and IL-12 observed in the secretory endometrium of women with endometriosis, in addition to the sharp decline in IL-10 expression observed in the late secretory phase in these patients, may favor the ectopic implantation of endometrial debris that reach the pelvic cavity. These results suggest that NKG2D receptor ligands, mainly MICA and ULBP-2, as well as IL-10 and IL-12 play an important role in the final stages of the menstrual cycle, during which the endometrium undergoes extensive remodeling preparing for embryo implantation or otherwise for disposal through menstruation. The results obtained herein in relation to the endometrium of women with endometriosis may partially explain infertility, as well as the ability of the menstrual tissue to escape immune surveillance, as described in these patients.
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More, Bayona Juan Anderson. "Efecto de antígenos clostridiales con ácido retinoico sobre la expresión de citoquinas de la respuesta inmune humoral y celular de la mucosa intestinal de crías de alpacas (Vicugna pacos)." Master's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2013. https://hdl.handle.net/20.500.12672/12516.
Full textAbstract:
Publicación a texto completo no autorizada por el autor<br>Determina los niveles de expresión de las principales citoquinas de la respuesta inmune humoral y celular, realizando un análisis in vitro, que consistió en la inoculación de la ácido retinoico y antígenos de Clostridium perfringens, sobre leucocitos de alpaca; y un análisis in vivo, a través de la administración de la combinación a crías de alpacas. En el análisis in vitro, se realizaron evaluaciones a diferentes concentraciones de antígenos clostridiales y ácido retinoico. Para el estudio in vivo se administró el inóculo a una concentración de 0.25mg/Kg de antígeno clostridial (AgCP) y 0.067mM/Kg de ácido retinoico (ATRA) a doble dosis, a alpacas agrupadas en grupo 1, individuos de 1 día; y grupo 2, individuos de 7-14 días, considerando además animales que no recibieron el tratamiento. Los leucocitos inoculados y muestras de intestino de los individuos tratados y sus controles no tratados fueron procesados y analizados mediante cuantificación relativa por RT-PCR tiempo real. En las pruebas in vitro, se encontró un incremento creciente de la expresión de Interferón gamma (IFN-γ) e Interleucina 2 (IL-2) hasta la concentración de 100pg AgCP y 25mUI ATRA. No encontrándose expresión a 10pg AgCP y 250mUI ATRA. Para factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α) la expresión fue creciente hasta 10 pg de AgCP y 250mUI ATRA. Para la expresión de interleucina 10 (IL-10), ésta fue máxima a la concentración de 10ng de AgCP y 2.5 mUI de ATRA. El análisis in vivo, mostró una mayor expresión de IFN-gamma (p<0.013), IL-2 (p<0.027) y TNF-alfa (p<0.007), diferencia soportada por los individuos del grupo 2. Además, no se observó diferencia significativa para IL-4 e IL-10. Los resultados muestran efectividad en la estimulación de la respuesta inmune celular más no humoral. Se espera mejorar la respuesta inmune humoral, y así el tratamiento puede convertirse en un futuro cercano, en una alternativa para el control de la enterotoxemia en alpacas.<br>Fondo Nacional de Ciencia y Tecnología<br>Fondo Nacional de Ciencia y Tecnología
Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología<br>Tesis
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Elugo, Guevara Christian. "Modulación de la expresión transcripcional de citoquinas de respuesta inmune innata y adaptativa en células mononucleares de sangre periférica humana tratadas con fucoidan de Lessonia trabeculata Villouta & Santelices 1986." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2019. https://hdl.handle.net/20.500.12672/10698.
Full textAbstract:
Evalúa la expresión transcripcional de citoquinas moduladoras de la respuesta inmune innata y adaptativa en células mononucleares humanas (PBMC) tratadas con fucoidan del alga parda Lessonia trabeculata. El fucoidan de Lessonia trabeculata fue proporcionado por la empresa PSW S.A y caracterizado fitoquímicamente por el Laboratorio de Bioquímica y Biología Molecular de la Universidad Nacional Agraria La Molina. Las PBMC se trataron con diferentes concentraciones de fucoidan de Lessonia trabeculata (FLt, 80.84% pureza) y como controles se emplearon fucoidan de Fucus vesiculosus (FFv, 95% pureza) y lipopolisacárido de E. coli. La citotoxicidad se evaluó mediante el ensayo de reducción metabólica del bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-ilo)-2,5-difeniltetrazol (MTT). Para evaluar la expresión transcripcional de las citoquinas de la inmunidad innata: IL-8, IL-12 (p35 y p40) y TGF- y las citoquinas de inmunidad adaptativa; IL-2 e IL-10 se empleó la reacción en cadena de la polimerasa convencional (PCR convencional). El tratamiento de cultivos de PBMC a las concentraciones de 10 y 100 μg/ml de FLt y FFv no ocasionó efecto citotóxico; por el contrario, FLt a 100 μg/ml incrementó significativamente el porcentaje de viabilidad celular respecto al control sin fucoidan (p<0.05). Respecto a la expresión transcripcional, el tratamiento con FLt a 10 y 100 μg/ml incrementó el ARNm IL-10 (p<0.0001) y ARNm IL-12p40 (p<0.05) respectivamente en relación al control sin fucoidan. Se concluye que el fucoidan de L. trabeculata a 10 y 100 μg/ml modula la expresión transcripcional de IL-12 de inmunidad innata e IL-10 de inmunidad adaptativa.<br>Universidad Nacional Mayor de San Marcos (Lima). Vicerrectorado de Investigación y Posgrado<br>Tesis
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Martínez, Muriana Anna. "Modulation of the inflammatory response in amyotrophic lateral sclerosis." Doctoral thesis, Universitat Autònoma de Barcelona, 2018. http://hdl.handle.net/10803/664221.
Full textAbstract:
L’esclerosi lateral amiotròfica (ELA) és una malaltia neurodegenerativa que causa la paràlisi i la mort dels pacients arrel de la pèrdua de les motoneurones de la medul·la espinal i el cervell. Malauradament, els únics tractaments actuals que hi ha són pal·liatius i no endarrereixen la progressió de la malaltia.
Una de les característiques de l’ELA és l’activació aberrant del sistema immunològic: (i) activació de les cèl·lules glials (microglia i astròcits) a nivell del sistema nerviós central i (ii) infiltració dels leucòcits, principalment macròfags, al sistema nerviós perifèric. La resposta inflamatòria és un procés fisiològic que s’encarrega de l’eliminació de detritus cel·lulars així com de l’activació de processos de reparació tissular en teixits que han patit un dany o infecció. No obstant, les cèl·lules immunològiques també poden secretar mediadors citotòxics que causen danys i fins i tot la mort de les cèl·lules circumdants. La regulació d’aquests processos però, es deu a la presencia de diverses molècules que es troben en el teixit afectat. En l’ELA, diversos estudis han demostrat que aquesta resposta inflamatòria no té un rol protector, sinó deleteri.
Basant-nos en aquestes evidències, en la present tesi doctoral vam avaluar si la modulació de la resposta inflamatòria podia millorar la progressió de la malaltia. En concret, ens vam centrar en l’estudi de tres dianes inflamatòries: (i) el receptor del factor estimulador de colònies tipus 1; (ii) la citocina anti-inflamatòria, interleuquina-37; (iii) el lípid immunoresolutor, Maresina-1. En aquest treball, mostrem que la modulació de la resposta inflamatòria per les tres vies confereix neuroprotecció i endarrereix el curs clínic de l’ELA.<br>Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disease that causes progressive paralysis and death to patients due to the degeneration of motor neurons in the spinal cord and the brain. At present, therapy is mainly symptomatic and fails to halt disease progression.
A common feature of ALS, and other neurological disorders, is the occurrence of an inflammatory reaction consisting of activated glial cells (microglia and astrocytes) within the central nervous system, and leukocytes, mainly macrophages, in the peripheral nerves. The inflammatory response is a physiological process with very precise control and plays an essential role in the removal of cell debris and the activation of repair processes in infected or injured tissues. However, immune cells also secrete cytotoxic mediators that exert damage in healthy neighboring cells and even lead to cell death. This dual sword edge of immune cells likely depends on regulatory mediators that are present in the milieu. However, in ALS, as well as, in other neurological conditions inflammatory response is believed to trigger greater hazardous than protective actions.
Based on these evidences, in the present thesis we aimed at assessing whether modulation of key aspects of inflammation could ameliorate the clinical course of ALS disease. In particular, we have focused our interest in three main targets: (i) the proinflammatory colony stimulating factor 1 receptor; (ii) the anti-inflammatory cytokine, interleukin-37; (iii) the immunoresolvent agent, Maresin-1. We provide novel data demonstrating that these approaches confer neuroprotection against the clinical course of ALS disease.