Academic literature on the topic 'Coagulation – Inhibiteurs'

La régulation des processus hémostatiques par le système de la Protéine C est essentielle comme l'illustre le purpura fulminans qui accompagne le déficit sévère en PC dans la période néonatale. Dans les années 90, la mise en évidence de la mutation FV Leiden qui engendre une résistance à la PC activée a généré la conception d'anomalie de l'hémostase par gain de fonction, associée à une fréquence élevée et à un risque thrombotique modéré. Dans ce travail, nous avons constitué, dès 1994, une cohorte multicentrique pour caractériser et évaluer le risque thrombotique associé à la présence du FV Leiden homozygote. Le risque thrombotique veineux est modérément augmenté chez les homozygotes par rapport aux hétérozygotes. Nous avons analysé l'impact des facteurs déclenchants plus spécifiques à la femme et enfin l'impact du groupe sanguin et de polymorphismes génétiques d'autres protéines de l'hémostase. Par ailleurs, le foie joue un rôle fondamental dans la synthèse des protéines de l'hémostase et dans le métabolisme des stéroïdes sexuels, faisant des cultures primaires hépatocytaires un modèle d'étude de la synthèse et de la régulation de l'hémostase intéressant. Dans le surnageant de cultures hépatocytaires, nous avons mis en évidence la sécrétion à long terme des principales protéines de l'hémostase fonctionnelles (FII, FV, FVII, fibrinogène, antithrombine). Nous avons montré la présence de FVIII dans le surnageant uniquement en présence de facteur Willebrand ajouté au milieu de culture. Nous avons démontré l'influence de la vitamine K sur les taux de protéines vitamine K dépendantes. En présence de stéroïdes sexuels, les taux de protéine S et de FVII sont inversement modifiés. En conclusion, ce travail participe à une meilleure description du phénotype clinique associé à la mutation FV Leiden homozygote. Il amorce un travail sur les mécanismes de synthèse et de régulation des protéines de l'hémostase au niveau hépatique, avec un intérêt particulier pour l'impact des facteurs déclenchants hormonaux chez la femme.

L’angiogénèse tumorale correspond à la formation de nouveaux vaisseaux sanguins afin d’alimenter la tumeur et d’amplifier son développement. Cette étape constitue un facteur pronostique défavorable pour les patients et son inhibition représente un fort intérêt thérapeutique. Parmi les acteurs participant à l’angiogénèse tumorale, on retrouve l’enzyme de dégradation héparanase au sein du microenvironnement tumoral de nombreux cancers. Ces travaux de thèse ont pour objectif de développer des inhibiteurs spécifiques de l’héparanase à partir de polysaccharides sulfatés pour le traitement de l’angiogénèse tumorale. La première partie de ces travaux a été consacrée à l’élaboration de polysaccharides sulfatés de bas poids moléculaires issus de sources animales (Héparine, Chrondroïtine sulfate), algales (Fucoïdanes, Carraghénane-λ-ι-κ) ou bactérienne (Dextran sulfate). Nous avons utilisé pour cela un procédé de dépolymérisation radicalaire assisté par ultrasons, développé en 2013 au laboratoire, que nous avons associé à un procédé de modification chimique appelé glycol-split. Les composés produits ont été évalués pour leurs activités d’inhibition de l’héparanase et de la coagulation sanguine. Ce criblage a notamment permis l’identification d’un dérivé de bas poids moléculaire issu de Carraghénane-λ possédant une forte inhibition de l’héparanase pour une faible inhibition de la coagulation. La deuxième partie de ces travaux s’est ensuite concentrée sur l’évaluation du potentiel anti-angiogénique des inhibiteurs de l’héparanase. Dans ce but, nous avons dans un premier temps évalué le rôle de l’hypoxie et/ou le manque de nutriments sur la production d’héparanase par des cellules de cancers mammaires. Dans ces conditions de stress, nous avons observé que la lignée MCF-7 excrétait une forte quantité d’héparanase. L’analyse en Matrigel 3D du réseau angiogénique formé par des cellules microvasculaires HskMEC, en présence du surnageant de MCF-7 riche en héparanase, a montré une forte stimulation de l’angiogénèse. Les mêmes tests réalisés en présence des inhibiteurs de l’héparanase ont montré une inhibition de l’angiogénèse qui semblait corrélée avec l’inhibition de l’héparanase
Tumor angiogenesis is defined by the spouting of new blood vessels from preexisting ones in order to sustain and amplify the tumor development. This crucial step is associated with poor prognosis for patients and it’s inhibition is therefore considered as a primising way to treat cancer. Among several actors participating in the angiogenesis process, the degradative enzyme heparanase is active in the tumor microenvironment of many cancers. The work presented in this thesis aim to develop specific heparanase inhibitors using sulfated polysaccharides for the treatment of tumor angiogenesis. The first part of this work is dedicated to the conception of low molecular weights sulfated polysaccharides obtainable from animal source (Héparine, Chondroïtine sulfate), algal source (Fucoidan, Carrageenan-λ-ι-κ) and bacterial source (dextran sulfate). To do so, we used a depolymeriation process based on free radicals associated to ultrasonic waves developed in 2013 in the laboratory. This depolymerization method was then coupled with a chemical process called glycol-split. The produced compounds were evaluated for their capacity to inhibit heparanase and blood coagulation. This screening phase lead to the identification of a low molecular weight compound produced from λ-carrageenan endowed with a strong heparanase inhibition power and a low impact on the blood coagulation. The second part of this work was then focused on the evaluation of the anti-angiogenic properties of our best heparanase inhibitors. To do so, we first evaluated the role of hypoxia and lack of nutrients on the heparanase production from breast cancer cell lines. In these higly stressful conditions, we observed that the MCF-7 cell line secreted a huge amount of heparanase. 3D Matrigel angiogenesis network formation using Hsk-MEC microvascular cells in the presence of MCF-7 heparanase rich supernatant showed a strong angiogenesis stimulation. Same tests realized in the presence of heparanase inhibitors showed an angiogenesis inhibition power that seemed correlated with heparanase inhibition

L’apparition d’une réponse immunitaire contre le Facteur VIII (FVIII) de la coagulation est une complication majeur qui survient chez 30% des hémophile A sévères. Bien que des avancées importantes aient abouti au développement de nouvelles molécules de FVIII thérapeutiques, les mécanismes conduisant à l’apparition d’une réponse immunitaire anti-FVIII restent non élucidés. Des facteurs de risques génétiques et environnementaux ont été identifiés ou suggérés, mais une compréhension complète des processus immunologiques permettant l’initiation de cette réponse au dépend de l’induction de tolérance immune chez 30% des patients restent incomprise. Ma thèse porte sur les aspects fonctionnels et structurels du FVIII et leur rôle dans l’initiation de la réponse immunitaire anti-FVIII chez le modèle murin hémophile A. Le premier rôle du FVIII est sa participation à la cascade de la coagulation, et donc la première partie de ma thèse adresse le rôle du processus de coagulation dans l’initiation de la réponse immunitaire anti-FVIII. La seconde partie de ma thèse se concentre sur l’importance des résidus du domaine C2 impliqué dans la liaison aux phospholipides dans l’endocytose et la présentation du FVIII par les cellules présentatrices de l’antigène in vitro et discute de leur relevance in vivo
Immunogenicity of Factor VIII (FVIII) is a major hurdle that affects about 30% of severe hemophilia A patients. Though a significant advancement has been accomplished in the development of newer FVIII molecules, the factors that drive FVIII immune responses remain elusive. Many genetic and environmental risk factors have been identified or suggested but a complete understanding of the immunological basis for the antibody formation and the mechanism(s) behind tolerance induction, in the 30% of the patients that never develop anti-FVIII antibodies, are not understood. My thesis involves overlapping aspects important for initiation of an anti-FVIII immune response in a mouse model of hemophilia A. The primary role of FVIII is its participation in coagulation-associated events and thus, the first part of my thesis addresses whether coagulation events per se are implicated in the initiation of anti-FVIII immune responses. The second part of my thesis focuses on the importance of the membrane binding residues within the C2 domain of FVIII in antigen uptake and presentation by antigen presenting cells in vitro and discusses its relevance in vivo

Trois cofacteurs interviennent dans le système anticoagulant naturel de la protéine C (PC) : la thrombomoduline (TM), le récepteur des cellules endothéliales à la PC (EPCR) et la protéine S (PS). Les deux premiers jouent un rôle dans la première étape du système, en permettant au zymogène qu'est la PC d'être activé en PC activée (PCa), tandis que la PS exerce son rôle de cofacteur en augmentant la vitesse de protéolyse des facteurs Va et VIIIa de la coagulation par la PCa, protéolyse qui limite la génération de thrombine. Si l'effet cofacteur de la TM est clair (elle accélère la réaction d'activation de la PC en PCa d'un facteur 20000), ceux de la PS et de l'EPCR sont en revanche atypiques, puisque les facteurs d'accélération qu'ils confèrent aux réactions enzymatiques ne sont que de 5 et 20, respectivement. Pourtant, l'importance physiologique de la PS est indéniable au regard de la sévérité de l'expression clinique du déficit homozygote en cette protéine. C'est cette discordance entre la sévérité de l'expression clinique du déficit et ce qu'on connaît des fonctions de la PS qui a motivé la première partie de notre étude. Nous nous sommes focalisée sur un domaine de la PS dont les fonctions étaient peu connues et qui en constitue une particularité structurale puisqu'il n'est présent dans aucune autre protéine de la coagulation. Ce domaine, homologue à la Sex hormone binding globulin (domaine SHBG), a été exprimé en système eucaryote, seul (rSHBG) ou avec son domaine adjacent dans la protéine naturelle (rEGF4-SHBG). Les deux modules recombinants ont été purifiés, caractérisés biochimiquement ; nous avons montré qu'ils adoptent une conformation identique à celle de la PS native, possèdent leur propre autonomie de repliement, que le domaine SHBG est seul responsable de la liaison de la PS à la C4b-binding protein, et contient un site de liaison au Ca2+, ce qui n'avait jamais été démontré de façon directe auparavant. Par contre, ce domaine est dépourvu en lui-même d'activité cofacteur pour la PCa, mais contribuerait à l'activité de la PS en maintenant ses autres domaines dans une conformation permettant une interaction optimale avec la PCa. Dans la seconde partie de notre travail, nous nous sommes attachée à rechercher des anomalies génétiques de l'EPCR. La découverte de telles anomalies associées à un risque de thrombose serait un argument fort en faveur de l'importance physiologique de l'EPCR dans la régulation de la coagulation humaine. Ce risque de thrombose peut être lié soit à une diminution de l'expression de l'EPCR membranaire ou à l'inverse, à une augmentation de la forme plasmatique soluble de ce récepteur (EPCRs) qui inhibe la PC et la PCa. Des taux élevés d'EPCRs ont été décrits chez environ 20% des sujets de la population générale sans qu'origine et conséquences cliniques n'aient été identifiées. En dosant l'EPCRs chez 100 sujets sains, nous avons retrouvé cette proportion de sujets ayant un taux élevé d'ERCRs et constaté une stabilité temporelle de ces taux, ce qui était en faveur d'un contrôle génétique. .
Three cofactors participate to protein C (PC) anticoagulant pathway, the thrombomodulin (TM), the endothelial protein C receptor (EPCR) and the protein S (PS). TM and EPCR are involved in the first step of the pathway by accelerating the PC activation step, whereas PS increases factors Va and VIIIa inactivation by activated PC (aPC), thereby inhibits further thrombin generation. If TM plays an unequivocal role by increasing by 20000 fold the PC activation into aPC, the role of PS and EPCR are more elusive since enzymatic reactions they favorize are increased by 20 or 5 fold, respectively. Nevertheless, the severe thrombotic disease observed in patients with homozygous protein S deficiency highlights the key role of PS in maintaining blood fluidity. Then, the mechanism by which PS inhibits coagulation in vitro remained to be elucidated, and this motivated the first part of our study. We focussed our work on the PS C-terminal domain, which is a sex hormone binding globulin (SHBG)-like domain which replaces the serine protease domain found in other vitamin K dependent plasma proteins, the functions of which are unclear. We expressed the PS SHBG-like domain alone or together with its adjacent domain EGF4. These both recombinant modules were purified and their biochemical features revealed that they adopted the conformation of native PS, indicating that PS SHBG-like region is an independent folding unit. We also obtained the first evidence that the SHBG-like domain alone is sufficient to support the interaction with C4b-binding protein, and contains one Calcium binding site. However, neither recombinant module exhibited aPC cofactor activity in a clotting assay, suggesting that the PS SHBG-like domain must be part of the intact molecule for it to contribute to aPC activity, possibly by constraining the different domains in a conformation that permits optimal interaction with aPC. .