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Dissertations / Theses on the topic 'Complexe du pyruvate déshydrogénase'
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Rouleau, Caroline. "Implications du pyruvate dans le métabolisme de lignées astrocytaires spinales spontanément transformées." Montpellier 1, 2006. http://www.theses.fr/2006MON1T029.
Full textAbstract:
L'objectif de ce travail est d'explorer en détail le métabolisme de lignées astrocytaires dérivant de la moelle épinière d'embryons de rat. La respiration mitochondriale, certains paramètres de la glycolyse et l'activité de l'oncogène Akt sont étudiés dans les lignées en passages précoces (EP) et dans les lignées en passages tardifs (LP), qui se sont spontanément transformées après avoir été maintenues pendant plus de 35 passages dans le milieu de culture ne contenant pas de pyruvate. Dans les LP, en comparaison avec les EP, il existe une diminution de la glycolyse, une réduction du nombre de mitochondries par cellule et un déficit de la respiration portant sur les complexes I et II+III de la chaîne respiratoire mitochondriale. Le traitement des LP par le pyruvate, pendant 20 passages supplémentaires, ne modifie pas l'état de transformation des cellules. Alors que ce traitement rétablit la glycolyse, aucun effet bénéfique n'est constaté sur le déficit respiratoire. Le traitement des EP par du pyruvate, jusqu'à ce qu'elles soient par définition en passages tardifs, prévient la transformation spontanée. Alors que les EP traitées par le pyruvate ont un déficit modéré de la respiration, elles renferment 2 fois plus de mitochondries par cellule que les EP non traitées. L'augmentation du nombre de mitochondries compense le déficit modéré de la respiration afin de maintenir les capacités d'oxydation dans ces lignées tardives qui ne sont pas transformées. Dans l'ensemble des lignées, l'activité de l'oncogène Akt varie dans le même sens que la glycolyse et que la respiration et est directement stimulée par le pyruvate dans les lignées traitées. En conclusion, ce travail ouvre de nouvelles perspectives quant à la compréhension des mécanismes possiblement associés à la transformation astrocytaire et met en évidence de nouvelles voies thérapeutiques potentielles afin d'améliorer le contrôle des proliférations astrocytaires.
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Bessam, Hassiba. "Purification de la pyruvate déshydrogénase et de la 2-oxoglutarate déshydrogénase des mitochondries de Neurospora Crassa ; étude enzymatique de ces complexes et de leurs protéines constitutives." Rouen, 1988. http://www.theses.fr/1988ROUES016.
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Burthier, Jean Michel. "Les déficits en pyruvate déshydrogénase." Paris 5, 1990. http://www.theses.fr/1990PA05P176.
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Pieulle, Laetitia. "Etudes structurale et fonctionnelle de la pyruvate : ferrédoxine oxydo-réductase et de certains transporteurs d'électrons chez Desulfovibrio africanus." Aix-Marseille 1, 1996. http://www.theses.fr/1996AIX11029.
Full textAbstract:
Chez les organismes anaerobies stricts et quelques microorganismes aerobies, la decarboxylation oxydative du pyruvate en acetyl-coa et co#2 est catalysee par la pyruvate: ferredoxine/flavodoxine oxydoreductase (por). Jusqu'a present, cet enzyme a ete isole a partir de quelques microorganismes appartenant a des regnes tres differents allant des archae jusqu'aux protozoaires. Chez les bacteries anaerobies strictes telles que les bacteries sulfato-reductrices (bsr), la por joue un role majeur car elle est impliquee dans la reaction phosphoroclastique qui permet a ces microorganismes de se procurer de l'energie par phosphorylation au niveau du substrat. Nous avons purifie et caracterise la por d'une bsr desulfovibrio africanus. Contrairement aux por des autres organismes anaerobies, la por de d. Africanus est stable vis a vis de l'oxygene au cours de la purification en conditions aerobies. L'enzyme est un homodimere de 270 kda qui possede une molecule de thiamine pyrophosphate (tpp) par sous-unite enzymatique. La por possede egalement comme cofacteur trois centres 4fe-4s par sous-unite dont les potentiels de demi-reduction sont: -390, -515 et -540 mv. Nous avons mis en evidence l'existence de trois etats d'activite de la por de d. Africanus: un etat desactive que l'on observe en purifiant l'enzyme en presence d'oxygene et qui possede une activite specifique de 14 u/mg, un etat actif que l'on obtient en incubant l'enzyme en presence de reducteurs de ponts disulfures tels que le dithioerythreitol ou la thioredoxine, dont l'activite specifique est de 70 u/mg et enfin, un etat inactif irreversible qui est obtenu lorsque l'etat actif de l'enzyme est mis en presence d'oxygene. L'etude du mecanisme reactionnel de l'enzyme par spectroscopie rpe a montre qu'un radical libre etait forme au cours du processus catalytique. Ce radical libre est un intermediaire reactionnel entre le pyruvate et l'acetyl-coa. Les deux electrons produits au cours du processus catalytique seraient ensuite transferres a la ferredoxine i ou ii de d. Africanus. En effet, l'etude de la specificite de la por vis a vis des transporteurs naturels d'electrons a montre que l'activite maximum est detectee en presence de ces deux ferredoxines. De plus, cette etude nous a conduit a purifier et caracteriser trois cytochromes de type c de desulfovibrio africanus. La determination de la structure primaire de la por de d. Africanus a permis de montrer que cet enzyme possede au moins deux domaines fonctionnels situes dans la partie c-terminal de la proteine. Un premier domaine comprend huit residus de cysteines organises en motif caracteristique de l'attachement de deux centres 4fe-4s de type ferredoxine. Ce domaine serait donc implique dans la chelation de deux des trois centres fe-s caracterises biochimiquement. Le troisieme centre serait chelate par quatre cysteines organisees en cluster atypique et situees egalement du cote c-terminal de la proteine. Le deuxieme domaine possede un tripeptide gdg retrouve dans la majorite des decarboxylases et serait donc implique dans l'association du tpp a l'enzyme. Des etudes de cristallisation de la por ont permis l'obtention de cristaux qui diffractent aux rayons x a 3,4 a de resolution. La resolution de la structure tridimensionnelle de cet enzyme est actuellement en cours
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Delaunay, Stéphane. "Étude et modification du métabolisme central de Corynebacterium glutamicum, productrice de glutamate." Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 1999. http://www.theses.fr/1999INPL061N.
Full textAbstract:
L'objectif général de ce travail est l'étude du métabolisme central et plus particulièrement des voies anaplérotiques chez corynebacterium glutamicum lors de la fermentation glutamique. Au cours du procédé utilisé, l'excrétion du glutamate chez C. Glutamicum 2262 est induite par une élévation de la température du milieu de culture de 33°C à 39°C. Ce traitement, en provoquant une orientation du métabolisme vers l'excrétion de glutamate au détriment de la croissance, permet la production de 85 g/l de glutamate en 24 h. Afin d'acquérir le maximum de connaissances concernant deux enzymes anaplérotiques, la phosphoénolpyruvate carboxylase (PEPc) et la pyruvate carboxylase (Pc), une étude de leur régulation in vitro ainsi qu'une modification de leur activité au cours de la fermentation glutamique ont été réalisées. Les mesures in vitro ont montré que le glutamate est un inhibiteur de l'activité PEPc et, grâce à la mise au point d'une nouvelle méthode de dosage de l'activité Pc, qu'il n'a aucune action sur cette dernière activité enzymatique. Afin de préciser le rôle de ces deux enzymes au cours de la fermentation glutamique, l'activité PEPc a été amplifiée par modification génétique de la souche de C. Glutamicum utilisée alors que l'activité Pc a pu être éliminée par la limitation du milieu de culture en biotine. Les résultats obtenus suggèrent que la Pc est l'enzyme anaplérotique majoritaire pendant la phase de production de glutamate. La PEPc ne pourrait intervenir que pendant les toutes premières heures suivant l'induction de l'excrétion du glutamate.
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Boulahya-Brihmouche, Kenza Amel. "Importance de l'enveloppe cellulaire dans la régulation de la production de glutamate par Corynebacterium glutamicum 2262 au cours d'un procédé thermo-induit." Thesis, Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 2010. http://www.theses.fr/2010INPL063N/document.
Full textAbstract:
Lors de ce travail, une étude comparative entre trois souches de C. glutamicum a été réalisée. Celles-ci sont C. glutamicum 2262, une souche surproductrice de glutamate suite à l’élévation de température du milieu de culture de 33 à 39°C, C. glutamicum 2262 NP un variant incapable d’excréter du glutamate dans ces mêmes conditions et C. glutamicum 2262 ∆pks13 un mutant dépourvu de bicouche mycolique externe. Un modèle métabolique original reprenant les différentes modifications physiologiques aboutissant à l’excrétion du glutamate au cours du procédé thermo-induit a été établi. La bicouche mycolique joue un rôle primordial puisque son absence affecte sévèrement la production du glutamate. Dans un premier temps, l’élévation de température serait ressentie au niveau de cette bicouche. Ce ressenti, visualisé par l’accumulation de protéines caractéristiques d’un stress thermique, est nécessaire pour que la bactérie soit en capacité de surproduire le glutamate. Par la suite, la production de glutamate est régulée au niveau de l’α-cétoglutarate déshydrogénase (ODH) grâce à la phosphoprotéine OdhI. Suite au changement de température, celle-ci est déphosphorylée ce qui lui permet d’interagir avec ODH et de provoquer l’inhibition de cette dernière. Ceci se traduit par la redirection sur flux carboné vers la synthèse du glutamate. Aucun de ces évènements n’est observé chez C. glutamicum 2262 ∆pks13. Par ailleurs, l’élévation de température induit une modification de la composition de l’enveloppe cellulaire qui semble intervenir dans le processus physiologique aboutissant à l’excrétion du glutamate puisque très peu de changements sont observés chez C. glutamicum 2262 NPDuring this work, a comparative study between three strains of Corynebacterium glutamicum was carried out. These strains were C. glutamicum 2262 which overproduces glutamate after an increase in the culture temperature from 33 to 39°C, C. glutamicum 2262 NP which is unable to produce glutamate in the same culture conditions and C. glutamicum 2262 ∆pks13 devoid of outer corynomycolic acid bilayer. An original metabolic model describing the successive physiological modifications responsible for the glutamate excretion during the temperature-triggered process was established. The presence of the corynomycolic acid bilayer appeared to be necessary since its lack affected dramatically the glutamate production. The temperature increase would be first sensed at the level of the external corynomycolic acid layer. This sensing was visualised through the accumulation of thermal stress proteins. In C. glutamicum 2262 ∆pks13, the synthesis of these proteins was not induced. The glutamate production is regulated at the oxoglutarate dehydrogenase (ODH) level by the phosphoprotein OdhI. A consequence of the temperature increase was the dephosphorylation of this regulatory protein and its interaction with ODH, provoking its inhibition. The carbon flux was then reoriented toward the glutamate synthesis. In C. glutamicum 2262 ∆pks13, no dephosphorylation of OdhI and no change in the ODH activity were not determined. The thermal stress also induced a change in the composition of the corynomycolic acid layer which was correlated with the ability of C. glutamicum 2262 to overproduce glutamate. In C. glutamicum 2262 NP, the composition of the corynomycolic acid layer remained unchanged
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Baggetto, Loris Gilbert. "Déviations métaboliques et génomiques mitochondriales dans les cellules tumorales glycolytiques AS30-D et Ehrlich : voie de l'acétoïne." Lyon 1, 1991. http://www.theses.fr/1991LYO10014.
Full textAbstract:
Le pyruvate est rapidement decarboxyle par les mitochondries des tumeurs d'ehrlich pour former de l'acetoine qui, si ajoutee aux mitochondries, est rapidement utilisee pour former de petites quantites d'ethanol et de citrate. Elle a aussi ete detectee dans les mitochondries as 30-d mais pas dans celles du foie de rat controle. Elle resulte de la condensation d'acetaldehyde active et d'acetaldehyde par le complexe pyruvate deshydrogenase tumoral (pdh). Elle controle le metabolisme du pyruvate par l'inhibition competitive du complexe pdh, ainsi que l'oxydation du succinate qu'elle inhibe. La forte accumulation de cholesterol dans les membranes mitochondriales entraine une diminution de la fuite passive des protons. Cette derniere, avec la presence insolite d'isozymes de la creatine kinase et la presence d'une hexokinase liee a la membrane externe de la mitochondrie alimentant la glycolyse a partir d'atp mitochondrial, contribuent a distribuer efficacement les molecules energetiques pour les besoins cellulaires comme la division. Une anomalie de la restriction de l'adn mitochondrial as 30-d accompagne ce metabolisme deviant: un des deux sites de restriction par l'enzyme xba i a disparu. Les molecules normales et mutees coexistent avec une heteroplasmie d'environ 50%
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Vidal, Hubert. "Contrôle par le peptide intestinal vasoactif du métabolisme du glucose dans les entérocytes isolés." Lyon 1, 1988. http://www.theses.fr/1988LYO10072.
Full textAbstract:
Role probable de la pyruvate deshydrogenase au cours de l'inhibition de l'oxydation du glucose dans les enterocytes isoles de rat. Oxydation des acides gras a longue chaine. Tous les effets du vip peuvent etre supprimes par l'adrenaline qui bloque la stimulation par le vip de la production d'amp cyclique
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Rana, Nosheen. "Ingénierie métabolique chez Enterococcus faecalis : intérêt biotechnologique et incidences sur la virulence : Thèse soutenue sur un ensemble de travaux." Caen, 2012. http://www.theses.fr/2012CAEN2075.
Full textAbstract:
Enterococcus faecalis est une bactérie lactique qui fermente le lactose et qui a la propriété de se développer dans différentes conditions de stress. Chez E. Faecalis deux gènes de lactate déshydrogénase (ldh1 et ldh2) sont présents et le métabolisme conduit principalement à la production de lactate. Lorsque les deux gènes ldh sont interrompus, le rendement en éthanol est amélioré (Yp/s : 0,11 g/g) mais reste insuffisant dans l’optique du développement d’un procédé industriel. Les gènes pdc, codant pour l'enzyme pyruvate décarboxylase, de deux bactéries à Gram positif - Sarcina ventriculi (pdcSv) et Clostridium acetobutylicum (pdcCa) - ont été insérés chez le mutant Δldh2 d'E. Faecalis sous le contrôle du promoteur du gène ldh1. En utilisant le lactose comme substrat, des rendements en éthanol de 0,19 g/g avec pdcSv et 0,18 g/g avec pdcCa ont été obtenus. Le gène pdcCa a également été exprimé chez le double mutant ldh en utilisant un plasmide d’expression et un haut niveau d’expression et d’activité de l'enzyme PDC a permis d’obtenir un rendement en éthanol de 0,46 g/g. E. Faecalis génétiquement modifiée pourrait être utilisée pour la production d'éthanol à partir du lactosérum sous-produit de l'industrie laitière. Les analyses transcriptionnelles ont montré qu’en l'absence d'enzymes LDH, le pyruvate est redistribué vers différentes voies cataboliques en fonction de l'affinité des enzymes afin de maintenir l'équilibre d'oxydo-réduction. Les mutants ldh sont généralement moins résistants à différents stress et moins capables de colonisation tissulaire que la souche sauvage. Cela montre que l'enzyme LDH joue un rôle majeur dans la survie et la virulence d’E. FaecalisEnterococcus faecalis is a lactic acid bacterium that can metabolize lactose and has the ability to withstand many environmental stresses. E. Faecalis harbours two genes of lactate dehydrogenase (ldh1 and ldh2) and the metabolism leads mainly to the production of lactate. When both ldh genes were deleted the ethanol yield was increased (Yp/s : 0. 11g/g). The pyruvate decarboxylase genes (pdc) , from two Gram positive bacteria - Sarcina ventriculi (pdcSv) and Clostridium acetobutylicum (pdcCa) - were inserted under the control of the ldh1 promoter in the ∆ldh2 mutant strain. Using lactose as substrate, ethanol yield were 0. 19 g/g and 0. 18 g/g, with pdcSv and pdcCa respectively. The pdcCa was also expressed in the ldh double mutant using an expression plasmid carrying a promotor inducible with nisin leading to an ethanol yield of 0. 46 g/g. Therefore, genetically engineered E. Faecalis could be used for ethanol production from dairy wastes rich in lactose. Transcriptional analysis showed that in the absence of LDH enzymes, pyruvate is distributed through different metabolic pathways, depending on the affinity of the enzymes for pyruvate, in order to maintain the redox balance. Therefore, a differential expression of the genes involved in pyruvate metabolism was observed. In addition, the ldh mutants were found to be generally more sensitive to different stresses than the wild type strain and also less capable of colonizing cells host. This shows that the enzyme ldh has a main role in the survival of E. Faecalis under stressed conditions and that it is essential for virulence
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Fati, Mostafa. "Développement d'un contrôle en enzymologie érythrocytaire : application à la glucose-6-phosphate déshydrogénase et la pyruvate kinase." Nancy 1, 1991. http://docnum.univ-lorraine.fr/public/SCD_T_1991_0439_FATI.pdf.
Full textAbstract:
Le diagnostic des érythroenzymopathies est fondé sur la mise en évidence de la baisse d'activité de l'enzyme dans les hématies. Cette mesure est délicate pour les raisons suivantes : préparation et conservation des réactifs, précision de la température et du pH, stabilité de l'enzyme au cours du temps. L'inexistence de solutions de contrôle adaptées à l'enzymologie érythrocytaire constitue un handicap qui oblige à recourir à un hémolysat préparé le même jour à partir d'un sujet témoin. L'objectif de ce travail est de préparer un matériel de contrôle destiné aux laboratoires d'analyses médicales pour déterminer des activités enzymatiques et dépister sans erreur les déficits enzymatiques érythrocytaires les plus fréquents, notamment ceux de la glucose-6-phosphate déshydrogénase (G6PD) et de la pyruvate kinase (PK). Le travail est divisé en deux parties : une première partie, exclusivement bibliographique, comprend un rappel des caractéristiques d'une solution de contrôle enzymatique, une revue des méthodes de stabilisation des enzymes suivie de l'étude des propriétés structurales et catalytiques de G6PD et PK érythrocytaires et de leur exploration biologique. La seconde partie rassemble nos travaux experimentaux permettant de préparer une solution de contrôle à partir d'un hémolysat humain où les deux enzymes endogènes sont stabilisées par l'apport de différents protecteurs. A partir de l'ensemble de nos résultats nous pouvons proposer les modalités permettant d'obtenir des solutions de contrôle possédant des activités G6PD et PK stables, un comportement et une commutabilité trés proches de celles des échantillons des patients : -solution de contrôle liquide prête à l'emploi : hémolysat additionné de TMAO 1 mol/l, de NADP+ 0,5 mmol/l, de PEP 0,5 mmol/l et de glutathion réduit 0,1 mmol/l ; -solution de contrôle lyophilisée : hémolysat additionné de saccharose 10%, (ou tréhalose 10% ou raffinose 10%), NADP+ 0,5 mmol/l, PEP 0,5 mmol/l, N-acétylcystéine 0,25 mmol/l et d'azide de sodium 0,01% (p/v).
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Seyran, Sevde Berfin. "Metabolic functions of the multifunctional protein E4F1 in skin homeostasis." Thesis, Montpellier, 2017. http://www.theses.fr/2017MONTT024/document.
Full textAbstract:
L’étude des réseaux protéiques perturbés au cours de l’infection par les petits virus oncogéniques amena, vers la fin des années 80, à la découverte de nombreux régulateurs clés de la division et de la survie cellulaire. Parmi ceux-ci, la protéine E4F1 fût initialement identifiée comme une cible de l’oncoprotéine virale E1A. Originellement identifié comme un facteur de transcription, E4F1 est également une ubiquitine-E3 ligase atypique pour d'autres facteurs de transcription tel que le suppresseur de tumeurs p53. Au travers de ses multiples activités, E4F1 est nécessaire à la prolifération des cellules somatiques et souches, et à la survie des cellules cancéreuses. De plus, les travaux de différents laboratoires dont le mien suggèrent qu’E4F1 se situe au carrefour de plusieurs voies de signalisation qui sont fréquemment altérées au cours de l’oncogenèse, et notamment la voie impliquant le suppresseur de tumeurs p53. Afin d’étudier les fonctions physiologiques in vivo d’E4f1, mon laboratoire d’accueil a développé plusieurs modèles de souris génétiquement modifiées. La caractérisation de ces modèles a permis de mettre en évidence un rôle majeur d'E4F1 dans l'homéostasie de la peau. Plus précisément, E4F1 régule le pool de cellules souches de l'épiderme au travers de son rôle dans une voie de signalisation qui implique la protéine p53 et deux de ces régulateurs en amont: Arf et Bmi1. Cependant, il semble que les effets d'E4F1 dans le contrôle du maintien des cellules souches s'étendent au delà de son rôle sur cette voie de signalisation. En effet, j'ai récemment pu démontrer qu'E4F1, au travers de ces fonctions transcriptionnelles, régule directement l'expression d'un sous-groupe de gènes impliqués dans la régulation de l'activité de la pyruvate déshydrogénase (PDH). La PDH est un complexe multimérique situé dans la mitochondrie qui catalyse la décarboxylation du pyruvate (le produit final de la glycolyse) en acétyl coenzyme A (AcCoA), liant ainsi le métabolisme du pyruvate au cycle de Krebs. J’ai pu montrer que l’inactivation d’E4f1 spécifiquement dans l'épiderme conduisait à une diminution importante de l’activité de PDH et à une reprogrammation métabolique de ces cellules. Cette reprogrammation a pour conséquence d'altérer le micro-environnement des cellules souches qui conduit à leur détachement de leur niche et aboutit in fine à une absence du renouvellement de l'épiderme. Cette partie de mes travaux a donc permis d'illustrer pour la première fois l'importance du métabolisme du pyruvate dans l'homéostasie des cellules souches de la peau. Sur la base de ces résultats, je poursuis l'analyse des fonctions d’E4f1 dans l'homéostasie de la peau en étudiant son rôle dans d'autres types cellulaires tels que les mélanocytesThe multifunctional protein E4F1 is an essential regulator of normal skin homeostasis. During my Phd, I demonstrated that E4f1 inactivation in adult skin results in stem cell autonomous defects causing exhaustion of the epidermal stem cell (ESC) pool. At the molecular level, I identified E4F1 as a new regulator of the pyruvate dehydrogenase complex (PDC) in keratinocytes, an essential mitochondrial complex that converts pyruvate into Acetyl-CoEnzyme A. Using genetically engineered mouse models, I showed that E4F1-mediated control of PDH activity is required to maintain normal skin homeostasis. Consistently, E4F1 deficiency in basal keratinocytes resulted in deregulated expression of dihydrolipoamide acetlytransferase (Dlat), a gene encoding the E2 subunit of the PDC, and impaired PDH activity. The metabolic reprogramming of E4f1 KO keratinocytes associated with the redirection of the glycolytic flux towards lactate production and increased lactate secretion in their microenvironment, leading to enhanced activity of extra-cellular-matrix remodelling proteases Finally, these defects ended in alterations of the basement membrane, ESC mislocalization and the exhaustion of the ESC pool. In the second part of my thesis, I have evaluated the role of E4F1-mediated control of the PDC in melanocytes and showed that the metabolic activities of E4F1 are important for melanocyte function. Consistently, mice with E4f1-deficient melanocytes exhibited hair graying and skin pigmentation defects. Altogether, my data demonstrate the importance of E4f1-mediated control of pyruvate metabolism for normal skin homeostasis
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Miné, Manuèle. "Investigations biochimiques et moléculaires des déficits en pyruvate déshydrogénase et étude d'une mutation intronique impliquant le facteur d'épissage SC35." Paris 5, 2004. http://www.theses.fr/2004PA05P640.
Full textAbstract:
Les déficits en pyruvate désydrogénase (PDH) constituent une des premières causes d'hyperlactatémie primaire chez les enfants atteints de maladies neurologiques mitochondriales. Un blocage de cette enzyme entraîne une élévation parallèle de la lactatémie et de la pyruvicémie (et du lactate et pyruvate dans le liquide céphalo-rachidien), avec un rapport lactate/pyruvate normal. Ces dosages simples sont le point de départ biologique de la recherche de déficit en PDH pour tous les patients et la majorité des patientes. Nous présentons dans la première partie de ce travail les résultats obtenus au laboratoire pour une cohorte de 30 patients. Dix-huit d'entre eux présentaient un anomalie au niveau du gène PDHA1(Xp22. 1-Xp22. 2), quatre au niveau du gène PDHX (11p13). Pour un patient, nous avons diagnostiqué un déficit en E3 (7p31. 1-7q32), sous-unité commune à trois déshydrogénases mitochondriales dont la PDH. Pour sept patients, nous n'avons pas identifié d'anomalie moléculaire malgré des signes clinico-biologiques trés évocateurs. Ces données sont discutées et comparées à celles de la littérature. Une proposition de conduite à tenir pour le diagnostic, en fonction des nouveaux outils d'analyse enzymatique et moléculaire que nous avons développés. Sera développée à la fin du document. Dans la seconde partie, nous détaillons les investigations moléculaires plus approfondies des déficits en PDH. Nous présentons la mise en place d'outils préliminaires qui permettront l'étude de la fonctionnalité des nouvelles mutations faux-sens chez S. Cerevisiae. Nous revenons en détail sur la détection de deux délétions intragéniques (sur les gènes PDHA1 et PDH X), sur l'étude d'un mosaïcisme somatique chez un garçon présentant une mutation au niveau du gène PDHA1 et sur deux mutations entraînant une dégradation de l'ARNm par le mécanisme de "Nonsense mRNA mediated Decay" (gènes PDHA1 et E3BP). Nous terminons par un récapitulatif des anomalies d'épissage. Dans la dernière partie, nous étudions le mécanisme moléculaire d'une mutation ponctuelle intronique sur la séquence du gène PGHA1, conduisant à une rétention partielle d'un intron au niveau de l'ARNm. Nous montrons par épissage in vitro que cette mutation intronique (IVS7+26G>A)entraîne l'utilisation d'un site cryptique d'épissage, "GT" en position 46 et 47 de l'intron 7. Ainsi que l'avait prédit le programme "ESE finder", nous montrons par UV-crosslinking que la protéine SC35, facteur d'épissage de la famille des protéines SR, se fixe avec une plus grande affinité sur la séquence intronique mutée G>A (ESE), entraînant ainsi une utilisation préférentielle du site donneur cryptique. Nous montrons enfin, qu'une déplétion en SC35 (obtenue par l'utilisation de SiRNA) sur les fibroblastes du patient entraîne une disparition de l'ARNm anormalement épissé. Ce travail démontre l'implication de l'interaction SC35/ESE et le rôle des séquences introniques en pathologie humaine. De plus, il ouvre de nombreuses voies de recherche au niveau de la thérapie des anomalies d'épissage.
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Joët, Thierry. "Implications d'un complexe Nad(p)h déshydrogénase et d'une oxydase terminale chloroplastiques dans la photosynthèse et la chlororespiration." Montpellier 2, 2001. http://www.theses.fr/2001MON20126.
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Mennetrier, Sophie. "Place du dichloroacétate de sodium dans le traitement de l'acidose lactique." Paris 5, 1996. http://www.theses.fr/1996PA05P170.
Full text
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Blouin, Jean-Marc. "Réversion métabolique et conséquences sur la physiopathologie du tissu adipeux et du côlon: rôle de la phosphoénolpyruvate carboxykinase cytosolique et des pyruvate déshydrogénase kinases." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T034.
Full textAbstract:
Le diabète de type 2 (DT2) et certains cancers sont caractérisés par des dérégulations métaboliques. Nous avons étudié l'expression d'enzymes du métabolisme glucido-lipidique, la phosphoénolpyruvate carboxykinase cytosolique (PEPCK-C) et les pyruvate déshydrogénase kinases (PDK). Dans le cadre du DT2 nous avons montré que par leurs effets sur la PEPCK-C et les PDK, les thiazolidinediones activent la glycéronéogenèse du tissu adipeux (TA), une voie métabolique qui participe à leur effet hypolipidémiant bénéfique en augmentant la réestérification des acides gras issus de la lipolyse des triglycérides du TA. Dans la seconde partie nous avons montré que le butyrate par ses effets sur les PDK modifie le métabolisme de la glutamine dans des cellules tumorales coliques. La glutamine étant un substrat essentiel des ces cellules, nous présentons ici une des voies potentielles par lesquelles le butyrate induit une réversion du métabolisme anormal des cellules tumorales coliquesType 2 diabetes (T2D) and certain cancers are characterized by metabolic dysregulations. We studied the expression of enzymes involved in carbohydrate and lipid metabolism, namely cytosolic phosphoenolpyruvate carboxykinase (PEPCK-C) and the pyruvate dehydrogenase kinases (PDK). For T2D, we showed that thiazolidinediones (TZD), trough their induction of expression of PEPCK-C and PDK4, activate glyceroneogenesis in adipose tissue (AT). The stimulation of this metabolic pathway contributes to the beneficial lipid-lowering effect of TZD by increasing re-esterification of lipolytic fatty acids in adipocytes. In the second part of our studies we have shown that butyrate, through its inductive action on PDK modifies glutamine metabolism in colonic tumor cells. Glutamine is a major substrate of these cells. We present herein one of the potential pathways by which butyrate induces reversion of the abnormal metabolism of colonic tumor cells
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Nancib, Nabil. "Cinétiques et modélisations concernant la mise en œuvre sur milieu complexe d'une Escherichia coli recombinée productrice de glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase." Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 1992. http://www.theses.fr/1992INPL040N.
Full textAbstract:
Ce travail concerne la mise en œuvre de la souche recombinée d'e. Coli c600 galk (GAPDH). Cette souche produit des quantités importantes de la protéine recombinante. Une étude du comportement de la souche sur milieu complexe a été faite. Les acides aminés d'auxotrophie permettent de stabiliser la protéine produite. L'extrait de levure permet l'utilisation de l'acétate, la peptone, la stabilisation de la GAPDH. Nous avons étudié l'influence du taux de dilution sur la stabilité plasmidique et sur l'activité enzymatique de la GAPDH en culture continue sur milieu complexe non sélectif. Les résultats ont montré que la fraction de cellules contenant les plasmides décroit avec le taux de dilution. Ces résultats montrent que l'activité enzymatique de la GAPDH est dépendante du taux de dilution, ce qui est différent des observations faites dans d'autres études. Une méthode originale d'estimation des deux principaux paramètres du modèle d'imanaka et aiba, modèle permettant de caractériser l'instabilité de souches recombinées est proposée. La valeur de ces paramètres a été déterminée en utilisant la forme dérivée du modèle précité combine à un filtrage et un lissage numériques. Des modèles spécifiques ont été construits. Celui décrivant l'évolution de la probabilité de perte de plasmide en fonction du taux de croissance spécifique repose sur l'analogie entre la variation du nombre de copies de plasmide et la probabilité de perte observée. Enfin, un modèle mathématique permettant de simuler le procédé en discontinu sur une gamme de concentrations initiales en glucose est propose. Il permet également de modéliser correctement, les consommations du glucose, de l'acide acétique ainsi que la production de la biomasse et de l'enzyme
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Faucher, Frédérick. "Identification des facteurs moléculaires responsables de l'activité particulière de la 17α-hydroxystéroïde déshydrogénase de souris et de la 5β-réductase humaine et étude structurale du domaine de liaison du ligand du récepteur humain des androgènes en complexe avec le EM5744." Doctoral thesis, Université Laval, 2008. http://hdl.handle.net/20.500.11794/20130.
Full textAbstract:
Les hormones stéroïdiennes sont synthétisées à partir du cholestérol par l'action successive de plusieurs enzymes, dont les hydroxystéroïdes déshydrogénases de la superfamille des aldo-ceto réductases (AKRs). Le message véhiculé par les hormones peut ensuite être interprété par les cellules qui expriment les récepteurs capables de les reconnaître et les lier spécifiquement. Une nouvelle AKR, la 17a-HSD de souris (ml7oc- HSD), a récemment été caractérisée et est actuellement l'unique enzyme connue capable de réduire stéréospécifiquement l'androstenedione (A4) en épi-testostérone, le 17oc-épimère de la testostérone. Les autres AKRs humaines dont l'activité permet de réduire la fonction cétone en position 17 du A4, notamment les h20a-HSD, h3oc-HSD3 et hl7p-HSD5, forment de la testostérone, le 17P-épimère. La comparaison structurale de ces enzymes très homologues a permis d'identifier les déterminants moléculaires responsables de leur 17a/17P-stéréospécificité, dont le résidu alanine en position 24, chez la ml7a-HSD. Nous avons également montré que ce résidu était aussi impliqué dans le maintien du NADPH par l'enzyme. Nous avions aussi de l'intérêt pour une autre enzyme de la superfamille des AKRs, la 5P-réductase humaine, qui est la seule connue à ce jour pouvant réduire la double liaison des A4-3-céto-stéroïdes afin de les transformer en leur composé 5P-réduit correspondant. Bien que les stéroïdes 5P~réduits jouent un rôle très important dans plusieurs processus physiologiques, aucune étude n'avait encore permis la caractérisation cinétique et structurale de cette enzyme. La structure cristallographique de la h5préductase a précisé le rôle des résidus formant son site actif ainsi que son mécanisme catalytique. Un site alternatif de liaison du stéroïde responsable du phénomène d'inhibition par le substrat observé pour cette enzyme a aussi été caractérisé. Enfin, cette thèse décrit la structure cristallographique du récepteur humain des androgènes (hAR) en complexe avec le EM5744, une molécule synthétique spécifiquement dessinée pour bloquer le fonctionnement normal de ce récepteur. Nos travaux ont montré pourquoi la longue chaîne du EM5744, malgré l'encombrement structural qu'elle génère au coeur même du récepteur, ne suffit pas à altérer les fonctions du hAR. En s'appuyant sur nos résultats, la structure de cette molécule pourra être modifiée jusqu'à ce qu'elle possède les propriétés désirées.
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Vita, Nicolas. "Protection contre le stress oxydant de la pyruvate : ferrédoxine oxydoréductase des Desulfovibrio, une enzyme cIef du métabolisme anaérobie." Aix-Marseille 1, 2009. http://www.theses.fr/2009AIX11079.
Full textAbstract:
La Pyruvate: Ferrédoxine oxydoréductase (PFOR) est une enzyme clef des métabolismes anaérobies qui catalyse l'oxydation réversible du pyruvate en acétyl-coenzymeA et CO2. Généralement, cette enzyme présente une grande sensibilité à l'oxygène induite par la présence de centres [4Fe-4S]2+/1+ dans la protéine. La caractérisation extensive de la PFOR de Desulfovibrio africanus (Da) a révélé une stabilité inédite de cette protéine en présence d'air. Mon travail a permis de spécifier le mécanisme de protection de la PFOR de Da à l'aide d'une étude de mutagenèse dirigée associée à des expériences in vivo. Le mécanisme est dépendant d'un « switch rédox » de deux cystéines qui permettrait de positionner une méthionine dans l'environnement immédiat d'un centre [4Fe-4S] afin de le protéger des dommages oxydatifs. Les analyses in vivo ont démontré que, dans les cellules, la PFOR de plusieurs Desulfovibrio, est efficacement protégée contre un stress oxydant. De plus, la forme stable mais inactive de l'enzyme qui est formée au cours de l'oxydation peut être réactivée par un retour en conditions réductrices. Cette réactivation correspond au clivage du pont di sulfure présent dans l'enzyme oxydée. Afin de caractériser les partenaires moléculaires catalysant, in vivo, ce clivage, nous nous sommes intéressés aux systèmes thiol-rédox des Desulfovibrio. Dans ce contexte, nous avons initié l'étude des thiorédoxines et des thiorédoxine réductases de Desulfovibrio vulgaris Hildenborough (DvH). En parallèle, nous avons étudié le rôle physiologique de la PFOR chez DvH, en mettant en œuvre une stratégie de délétion du gène porR. A l'heure actuelle, nous n'avons pas obtenu le mutantporK. Cependant nous avons démontré que ce gène appartenait à. Un opéron codant pour plusieurs protéines reliées fonctionnellement. Ainsi, la PFOR ferait parti d'un super-complexe impliqué dans l'oxydation du substrat énergétique et la production d'ATPThe Pyruvate-Ferredoxin Oxidoreductase (PFOR) is a key enzyme of anaerobic metabolisms that catalyses the reversible oxidation of pyruvate in acetyl-coenzymeA and CO2. Usually, this enzyme is highly sensitive to oxygen, because of the presence of iron- sul fur clusters. However, extensive studies of Desulfovibrio africanus (Da) PFOR pointed out a surprising stability of this protein when exposed to air. My PhD work wanted to get a better understanding of the protective mechanism of Da PFOR, using a directed-mutagenesis. Approach coupled to in vivo assays. We characterized a redox switch mechanism involving two cysteines that would direct the positioning of a methionine near one of the iron-sulfur clusters, thus protecting it from oxidative damages. In vivo analysis showed that PFORs from several Desulfovibrio species, are efficiently protected against oxidative stress. This redox-switch leads to a stable but inactive form of the enzyme under oxidative conditions that can be reactivated, in vivo, when conditions are shifted back to reducing ones. This reactivation requires the reduction of the disulfide bond of the oxidized enzyme. In order to identify the molecular partners that catalyse this reduction in vivo, we have started to study the thioredoxins and thioredoxin reductases of Desulfovibrio vulgaris Hildenborough (DvH). We also studied the PFOR physiological role in DvH, using a gene deletion approach , although until now, we haven't been able to obtain the porK mutant. But we have shown that this gene belongs to an operon coding for several proteins functionally linked. Therefore, the PFOR might be part of a supra-complex involved in the oxidation orthe energetic substrate and ATP production
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Xu, Zu-Feng. "Modulation du comportement catalytique d'enzymes par des additifs hydrosolubles de type polyol et sucre." Compiègne, 1989. http://www.theses.fr/1989COMPD202.
Full textAbstract:
La stabilité, l'activité et la spécificité catalytique d'enzymes sont étudiées dans des milieux visqueux, à basse activité de l'eau, en présence d'additifs hydrosolubles (cosolvants) de type polyol et sucre à forte concentration. Dans ce genre de milieu non conventionnel, le microenvironnement aqueux des enzymes (activité de l'eau; l'hydrophobicité, la constante diélectrique, la tension superficielle et la structure du solvant, etc. ) sont perturbées; et le comportement catalytique d'enzymes (ex. La sélectivité catalytique) est modulé. Nous avons mis en évidence l'impact de ses modifications sur la conformation d'enzyme au centre actif lors de l'étape de vitesse limitée de la réaction à travers le changement du coefficient de Hill (nHill) d'une enzyme allostérique. Nous avons montré aussi le phénomène de « mémoire d'enzyme » : l'impact d'additifs sur le lysozyme peut persister pendant un certain temps après que l'enzyme soit extraite de la solution contenant des additifs. Enfin, deux nouvelles conceptions, pseudo-activateur allostérique et pseudo-inhibiteur non compétitif sont proposées pour qualifier le rôle de sorbitol dans la réaction de la pyruvate kinase.
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JOET, THIERRY. "IMPLICATIONS D'UN COMPLEXE NAD(P)H DESHYDROGENASE ET D'UNE OXYDASE TERMINALE CHLOROPLASTIQUES DANS LA PHOTOSYNTHESE ET LA CHLORORESPIRATION." Phd thesis, Université Montpellier II - Sciences et Techniques du Languedoc, 2001. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00009113.
Full textAbstract:
Chez les plantes supérieures, les membranes thylacoïdiennes des chloroplastes contiennent des protéines de type respiratoire, un complexe NADH déshydrogénase (Ndh) homologue au complexe I bactérien et une oxydase (PTOX) homologue à l'oxydase alternative des mitochondries. Dans le but d'élucider la fonction du complexe Ndh, le gène chloroplastique ndhB a été inactivé par transformation chloroplastique du tabac. Chez les plantes transplastomiques obtenues, des mesures de fluorescence de la chlorophylle ont permis de démontrer que ce complexe est impliqué dans la réduction non photochimique du pool de plastoquinones (PQ). Chez les mutants dépourvus de complexe Ndh, un retard de croissance ainsi qu'une altération des capacités photosynthétiques ont été observés dans des conditions où la photorespiration est stimulée par une limitation de la disponibilité en CO2 (par exemple un déficit hydrique modéré). En étudiant les effets de l'antimycine A, un inhibiteur du transfert cyclique des électrons autour du PS I, sur l'activité photosynthétique de ces plantes, nous avons conclu que le complexe Ndh est impliqué dans une voie de transfert cyclique et participe à la fourniture en ATP nécessaire à la fixation de CO2 quand la demande est forte. Afin de déterminer le rôle de PTOX, nous avons généré des plantes de tabac surexprimant cette protéine. Des mesures de fluorescence de la chlorophylle nous ont permis de démontrer l'implication de PTOX dans l'oxydation non photochimique du pool de PQ. Nous avons conclu que le complexe Ndh et PTOX, tous deux localisés dans les thylacoïdes lamellaires, constituent avec le pool de plastoquinones les éléments d'une chaîne de transfert d'électrons de type chlororespiratoire. Nous avons proposé un mécanisme par lequel l'activité du transfert cyclique des électrons autour du PS I serait régulée par l'activité de la chlororespiration, à travers un contrôle fin du niveau rédox de certains transporteurs de la chaîne de transfert d'électrons.
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Gayet, Jean-Charles. "Mise au point d'une électrode et d'une optrode enzymatique pour la détection de métaux lourds : application au dosage d'ions mercuriques par un capteur à pyruvate oxydase immobilisée." Compiègne, 1992. http://www.theses.fr/1992COMPD468.
Full textAbstract:
La présence de métaux lourds, et du mercure en particulier, est un facteur important de la pollution des eaux. Leur détection et leur dosage nécessitent des techniques et des compétences qui se prêtent mal à l'analyse de terrain. Nous avons développé un biocapteur sensible au mercure en immobilisant la pyruvate oxydase de P. Species sur un transducteur optique. Nous avons étudié la cinétique d'inhibition de l'enzyme en solution par le mercure et proposé un schéma simplifié du mode d'action de cet inhibiteur. Nous avons mis au point une nouvelle technique d'immobilisation sur membrane d'affinité et défini les conditions optimales de l'immobilisation, ainsi que les paramètres intervenant sur la sensibilité des films d'enzyme immobilisée au mercure. Le biocapteur final est constitué d'un film de pyruvate oxydase couplé à un fluorophore sensible à l'oxygène. Plusieurs familles de fluorophores ont été testées et de nouveaux composes synthétisés. Nous avons étudié les caractéristiques spectroscopiques des composés finalement retenus (phtalocyanines de zinc) soumis à différents procédés de mise en œuvre, et conçu un appareillage opto-électronique permettant d'obtenir une optrode enzymatique portable et automatisée pour le dosage du mercure.
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Marc, Jillian. "Modulation par approches microbiologique et génétique de la synthèse d'acide acétique lors de la production d'éthanol sous métabolisme oxydo-réductif chez Saccharomyces cerevisiae." Thesis, Toulouse, INSA, 2013. http://www.theses.fr/2013ISAT0051.
Full textAbstract:
L’objectif de ces travaux de thèse était de rechercher un potentiel effet inhibiteur de l’acide acétique endogène sur le métabolisme oxydo réductif de Saccharomyces cerevisiae, afin d’évaluer la pertinence d’une stratégie d’amélioration des capacités de production d’éthanol par la modulation de la synthèse de cet acide. Ces travaux devaient également permettre d’approfondir la compréhension des principaux facteurs commandant la synthèse de l’acide acétique et plus largement des acides organiques. La stratégie de modulation de la synthèse d’acide acétique mise en place reposait sur des approches microbiologique et génétique, consistant en l’ajout d’acide oléique et / ou de carnitine dans le milieu de culture ainsi que la surexpression du gène CIT2 ou la suppression du gène ALD6.Cette démarche a permis de montrer que, contrairement à la version exogène, l’acide acétique endogène ne présentait pas d’effet inhibiteur du métabolisme oxydo réductif de Saccharomyces cerevisiae ou qu’il était négligeable par rapport au stress éthanol. En outre, la modulation de la production de cet acide ne semble pas être une stratégie envisageable en vue de l’amélioration des capacités de production d’éthanol de cette levure, bien qu’une corrélation ait été observée entre les titres finaux de ces deux molécules.En outre, il a été montré que l’isoforme 6 de l’acétaldéhyde déshydrogénase (Ald6p) était essentiel pour assurer la croissance cellulaire normale ainsi que les mécanismes de résistance au stress éthanol dans ces conditions de culture. Plus largement, l’interrelation entre les différents isoformes ne paraissait pas aussi flexible qu’en anaérobiose. Saccharomyces cerevisiae semblait également présenter un métabolisme flexible en réponse à une modulation de la synthèse d’acide acétique. La voie des pentoses phosphates serait ainsi capable de prendre le relais de l’Ald6p pour assurer la régénération du NADPH cytosolique, bien que le flux à travers cette voie semble avoir été limité par le ratio NADP+ / NADPH. Enfin, les cellules paraissaient capables de réguler la synthèse de l’acétyl coA à partir d’acide acétique en réaction à une évolution des besoins anaboliques lors de la fin de la phase de croissance. Elles seraient toutefois incapables de pallier le manque d’acétyl coA suite à la suppression du gène ALD6. La modulation de la synthèse des acides pyruvique et succinique a également fait l’objet de discussionsThe aim of this work was to investigate a potential inhibitory effect of endogenous acetic acid on the oxido-reductive metabolism of Saccharomyces cerevisiae, to assess the relevance of a strategy based of the modulation of the synthesis of this acid, to improve ethanol production capacities. This work should also help to broaden the understanding of the main factors controlling the synthesis of acetic acid, and more generally organic acids. The strategy to modulate the synthesis of acetic acid was based on microbiological and genetic approaches, consisting in the addition of oleic acid and / or carnitine in the medium as well as the overexpression of the gene CIT2 or the deletion of the gene ALD6.This approach has shown that, contrary to exogenous version, endogenous acetic acid did not induce inhibitory effects on the oxido-reductive metabolism of Saccharomyces cerevisiae, or was negligible compared to stress caused by ethanol. Moreover, the modulation of the synthesis of this acid appear to be not an attractive strategy to improve ethanol production capacities of the yeast, although a correlation was observed between the end-culture titer of these two molecules.In addition, it has been shown that the isoform 6 of acetaldehyde dehydrogenase (Ald6p) was essential to ensure regular growth and mechanisms of ethanol stress resistance under these conditions of culture. More broadly, the interrelation between the different isoforms did not seem as flexible as under anaerobic conditions. Saccharomyces cerevisiae also seemed to have a flexible metabolism in response to a modulation of the synthesis of acetic acid. The pentose-phosphate way would be able to take over from Ald6p for regeneration of cytosolic NADPH, although the ratio NADP+ / NADPH seemed to lessen the flux through this pathway. Finally, the cells appeared to be able to regulate the synthesis of acetyl-CoA from acetic acid in response to changing in anabolic needs at the end of the growth phase. However, yeasts would be unable to overcome the lack of acetyl-CoA following the suppression of the gene ALD6. The modulation of the synthesis of pyruvic and succinic acids has also been discussed
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Mouaffak, Toumi Nassima. "Mécanisme du transport du pyruvate dans les cellules du muscle squelettique L6 : Etude cinétique du caractère allostérique ou multisite associé aux isoformes fonctionnelles des transporteurs des monocarboxylates : analogies et différences avec le transport du L-lactate." Paris 5, 1998. http://www.theses.fr/1998PA05S033.
Full textAbstract:
La caractérisation du transport des monocarboxylates (pyruvate et lactate) par les cellules musculaires de la lignée L6, est réalisée à deux stades de différenciation cellulaire : myoblaste et myotube en absence et en présence des inhibiteurs spécifiques. Les résultats obtenus permettent de mettre en évidence, au stade myoblaste, un mécanisme diffusionnel non saturable indépendant des inhibiteurs appliqués. Dans les myotubes, l'apparition d'un système de transport des monocarboxylates saturable semble en étroite relation avec l'activté des créatines-kinases qui survient lors de la différenciation de la lignée L6. La fonctionnalité du système de transport dans les myotubes L6 peut être considérée comme un marqueur de la différenciation cellulaire. . . .
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Cocaign-Bousquet, Muriel. "Croissance de Corynebacterium glutamicum sur divers substrats et répartition des flux dans les voies du métabolisme central." Toulouse, INSA, 1992. http://www.theses.fr/1992ISAT0032.
Full textAbstract:
L'etude physiologique d'une souche sauvage de corynebacterium glutamicum a ete realisee pour tenter de mieux comprendre son metabolisme. Une etude cinetique de la croissance de la souche a d'abord ete effectuee en batch sur divers substrats et melanges. Le cometabolisme systematique des deux sources de carbone presentes a montre l'absence des mecanismes de repression cataboliques que l'on rencontre habituellement. Les principales etapes qui limitent la croissance ont pu etre localisees dans le metabolisme et un probleme au niveau de la pyruvate deshydrogenase se caracterisant par l'excretion de pyruvate dans certaines conditions de culture a ete mise en evidence. Un suivi de toutes les enzymes arrivant ou partant du pyruvate est ensuite realise en culture continue, et une comparaison est etablie entre les profils d'activites et ceux des flux correspondant, determines a partir des donnees cinetiques de la fermentation. Ceci a permis de confirmer que le pyruvate deshydrogenase joue un role majeur dans le metabolisme central et que sa vitesse de synthese est limitante. Diverses reorientations d flux de carbone dans le metabolisme central ont aussi ete decelees: flux maximal par rapport au q#g#l#u#c dans la voie des pentoses, succession d'enzymes anaplerotiques de la pep carboxylase a une pyruvate carboxylase (enzyme malique ou oaa decarboxylase), presence d'un cycle de krebs modifie dans lequel le flux de malate est devie par le pyruvate, via l'enzyme malique, puis revient au niveau de l'oaa. Ces modifications metaboliques sont conditionnees par l'absence presumee de transhydrogenase dans la souche et sont destinees a la production de nadph par voie directe en quantite suffisante pour l'anabolisme
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Faucher, Frédérick. "Identification des facteurs moléculaires responsables de l'activité particulière de la 17alpha-hydroxystéroïde déshydrogénase de souris et de la 5bêta-réductase humaine et étude structurale du domaine de liaison du ligand du récepteur humain des androgènes en complexe avec le EM5744." Thesis, Université Laval, 2008. http://www.theses.ulaval.ca/2008/25523/25523.pdf.
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Li, Ang. "New oxamate-based architectures and their properties." Thesis, Sorbonne université, 2019. http://www.theses.fr/2019SORUS205.
Full textAbstract:
La famille des ligands oxamate N-aromatiques est considérée comme idéale pour l’obtention de structures de dimensionnalité et propriétés magnétiques contrôlées. Au cours de ces travaux de thèse, nous avons incorporé au ligand phenyloxamate des groupes coordinants additionnels (hydroxyde et carboxylique), afin d’obtenir de nouveaux polymères de coordination magnétiques aux structures originales. Les études de la réactivité de ces ligands hétérotopiques ont été menées en solution et en conditions solvothermales, vis-à-vis de différents ions métalliques de transitions (CuII, CoII, NiII, MnII). En solution, de nombreuses architectures ont pu être isolées, comme des métalloligands à base de CuII, un complexe à valence mixte de cobalt, et une chaîne hélicoïdale de CuII. Des chaînes bi- et tri-métalliques, un composé hétérométallique 2D et trois polymères de coordination 3D ont été obtenus par voie solvothermale, une technique rarement utilisée dans la chimie des ligand oxamate. Les propriétés thermiques et magnétiques ont été étudiées, une transition de phase, un comportement de molécule aimant et un phénomène d’ordre magnétique ont notamment pu être observés, confirmant le potentiel de notre approcheThe family of N-substituted aromatic oxamate ligands is considered as ideal for obtaining structures of predictable dimensionality and magnetic properties. During this PhD, we have introduced additional coordinating groups (hydroxyl and carboxylic acid) on the phenyloxamate ligand, in order to obtain novel magnetic coordination polymers with original architectures. Reactivity studies for these heterotopic ligands have been performed in both bench and solvothermal conditions, towards different metal ions (CuII, CoII, NiII, MnII). On the bench, various architectures have been isolated, including Cu-based metalloligands, a mix-valence Co-based complex, and a 1D Cu-based helix. Bi- and tri-metallic chains, a 2D heterometallic compound and three 3D coordination polymers have been obtained solvothermally, a technique seldom used in oxamate chemistry. Thermal and magnetic properties were studied, temperature dependent SC to SC transition, single-ion magnet behavior or magnetic ordering were observed, supporting the potential of our approach
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ADAMI, PASCALE. "Approche immunologique de l'etude de deux proteines de la mitochondrie : 1. etude de la topologie et des relations structure-fonction de la d-3-hydroxybutyrate deshydrogenase a l'aide d'anticorps monoclonaux. 2. identification de certaines sous-unites du complexe pyruvate deshydrogenase comme antigenes de la cirrhose biliaire primitive." Besançon, 1991. http://www.theses.fr/1991BESA2013.
Full textAbstract:
1. La d-3-hydroxybutyrate deshydrogenase (bdh) est une enzyme specifiquement activable par la phosphatidylcholine (pc). Par western blot, dot blot, immunoprecipitation, test elisa en competition, et coupures proteolytiques, nous avons teste la specificite de 7 anticorps monoclonaux (mac) pour la bdh, la reactivite croisee des mac pour l'enzyme des 2 especes rat et buf; nous avons determine le type d'epitope (sequentiel ou conformationnel) et localise certains dans la sequence primaire (dont un a l'extremite c-terminale), et par rapport a la surface ou a l'interieur de la proteine native. Nous avons montre que pc dans l'environnement phospholipidique de la bdh modifie le profil proteolytique de l'enzyme et notamment protege l'extremite c-terminale. Celle-ci semble etre indispensable a l'insertion de l'apoenzyme dans la bicouche mais non indispensable a la stabilite du complexe bdh-phospholipides preforme avant coupure. 2. Nous avons identifie, par western blot sur 34 serums, les differents antigenes mitochondriaux de la cirrhose biliaire primitive, maladie autoimmune caracterisee par des auto-anticorps anti-mitochondries. La reactivite des ac auto-immuns sur les sous-unites du complexe multienzymatique pyruvate deshydrogenase purifie a montre que 3 de ses sous-unites sont antigenes. Aucune correlation n'a pu etre trouvee entre les differents profils reconnus par les serums et le sexe des patients, les classes et les sous-classes des ac, l'existence ou non d'un traitement particulier, la greffe d'un foie sain
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Turcot, Jonathan. "Effets de mutations dans le gène ldhA et dans la protéine FhlA ainsi que de la limitation en glucose ou en soufre sur la production d'hydrogène chez Escherichia coli." Thèse, 2005. http://hdl.handle.net/1866/15141.
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"Identification des facteurs moléculaires responsables de l'activité particulière de la 17alpha-hydroxystéroïde déshydrogénase de souris et de la 5bêta-réductase humaine et étude structurale du domaine de liaison du ligand du récepteur humain des androgènes en complexe avec le EM5744." Thesis, Université Laval, 2008. http://www.theses.ulaval.ca/2008/25523/25523.pdf.
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