Dissertations / Theses: 'Cornée – Cultures et milieux de culture'

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Le, Bel Gaëtan. "Impact d'une couche nourricière humaine et du temps post-mortem sur la culture de cellules cornéennes humaines." Doctoral thesis, Université Laval, 2020. http://hdl.handle.net/20.500.11794/70367.

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Abstract:

En raison de la pénurie mondiale de cornées de donneurs utilisées pour traiter les pathologies cornéennes, des alternatives visant à restaurer les déficiences visuelles, comme la production de tissus cornéens humains par génie tissulaire, sont envisagées. Pour traiter les dommages affectant plus précisément l'épithélium cornéen, comme la déficience en cellules souches limbiques (DCSL), l'équivalent cornéen doit avoir un épithélium capable d'auto-renouvellement permettant la bonne cicatrisation de la cornée après la greffe. Pour cultiver des cellules épithéliales de cornées humaines (CECH) in vitro, l'utilisation d'une couche nourricière est nécessaire afin de maintenir la sous-population de cellules souches cornéennes essentielle à la bonne prolifération de ces cellules. Les conditions de culture doivent donc permettre le maintien du phénotype souche de ces cellules, tout en favorisant leur prolifération et en évitant leur différenciation terminale. Cependant, d'autres paramètres comme l'intervalle post-mortem du tissu cornéen à partir duquel sont extraites les CECH cultivées, peuvent influencer la réussite de la culture. La caractérisation des cultures de CECH est importante afin d'optimiser la réussite de la greffe. Les travaux présentés dans cette thèse ont permis de démontrer que la co-culture de CECH avec une couche nourricière murine a entraîné une augmentation significative de l'expression et de la liaison à l'ADN de NFI. Cela est causé par une forte expression de l'isoformes NFI-B présentant une stabilité accrue engendrée par une hyper-glycosylation. Le maintien de l'isoforme NFI-B au cours des passages a été corrélé avec une entrée en différenciation plus rapide des CECH en culture. Ces travaux ont également montré que l'effet de cette couche nourricière murine sur les niveaux d'expression et la capacité de liaison à l'ADN des facteurs de transcription Sp1 et NFI a pu être confirmé dans un autre type cellulaire. En effet, la co-culture de cellules endothéliales cornéennes humaines avec la couche nourricière murine a également causé une augmentation significative de l'expression et de la liaison à l'ADN de NFI. Dans cette étude, cela était associé à une amélioration de la morphologie des cellules endothéliales cornéennes humaines. Ces travaux ont aussi montré que l'intervalle post-mortem influençait de manière négative la prolifération des CECH et le maintien des cellules souches lors des cultures en monocouche. De même, lorsque les mêmes populations cellulaires ont été utilisées pour reconstruire une cornée humaine par génie tissulaire, la capacité de cicatrisation des épithéliums cornéens reconstruits a diminué avec l'augmentation de l'intervalle post mortem. L'étude du transcriptome de ces populations cellulaires par biopuce à ADN, a également révélé que l'intervalle post-mortem avait un impact sur le profil transcriptomique pour les cellules cultivées en monocouche. Il a aussi été montré qu'un greffon reconstruit à partir des CECH co-cultivées avec une couche nourricière humaine a permis de cicatriser la surface cornéenne d'un œil atteint de DCSL. Ces différents résultats mettent en lumière que l'utilisation d'une couche nourricière humaine pour la culture des CECH, associée à un intervalle post-mortem court des tissus dont elles sont issues, est à privilégier pour favoriser une bonne prolifération in vitro des CECH cultivées en monocouche.
Because of the worldwide shortage of graftable corneas used to treat corneal pathlogies, alternatives to restore visual impairments, such as the production of a human cornea tissues by tissue engineering, have been considered. To treat injuries affecting the corneal epithelium, such as limbal stem cell deficiency (LSCD), the corneal equivalent must have an epithelium able to self-renewal allowing healing of the patient's corneal epithelium after the transplantation. To culture human corneal epithelial cells (HCECs) in vitro, the use of a feeder layer is necessary so as to maintain the subpopulation of corneal stem cells, which is essential for the proper proliferation of these cells. Therefore, the culture conditions must allow the maintenance of the stem phenotype of these cells, while promoting their proliferation and delaying their terminal differentiation. Other parameters, such as the post-mortem interval of the corneal tissue from which the cultured HCECs are derived, can influence the success of the culture. It is therefore important to characterize the cultures of HCECs in order to optimize the success of a transplant, namely, when these cells are transplanted in order to regenerate the injured corneal epithelium of a patient. The work presented in this thesis demonstrates that the co-culture of HCECs with a murine feeder layer resulted in a significant increase in the expression and the binding to DNA of NFI. This was shown to be caused by strong expression of the NFI-B isoform with increased stability due to hyper-glycosylation. The preservation of the NFI-B isoform with cellular passages was correlated with a faster differentiation of the HCECs in culture. This work also shows that the effect of this murine feeder layer on the expression levels and the DNA binding capacity of the transcription factors Sp1 and NFI was confirmed in another cell type. Indeed, the co-culture of human corneal endothelial cells with the murine feeder layer also caused a significant increase in the expression and binding to DNA of NFI. In this study, this was associated with an improvement in the morphology of human corneal endothelial cells. This work also showed that post-mortem interval could have a negative influence on the proliferation of HCECs and on the maintenance of stem cells during monolayer cultures. When the same cell populations were used to reconstruct a human cornea with tissue engineering, the healing capacity of the reconstructed corneal epithelia was decreased by the increase in post-mortem interval. This was notably validated by a study of the transcriptome of these cell populations by DNA microarray. It has also been shown that a graft reconstructed with HCECs co-cultivated with human feeder layer has enabled to heal the corneal surface an eye with LSCD. These different results highlight that the use of a human feeder layer for culture, associated with a short post-mortem interval of the donor tissues, is to be favoured in order to promote a good in vitro proliferation of HCECs cultivated in monolayer.

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Uwamaliya, Jeanne d'Arc. "Reconstruction d'une cornée humaine par la méthode d'autoassemblage à partir des trois types de cellules." Master's thesis, Université Laval, 2009. http://hdl.handle.net/20.500.11794/21141.

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Abstract:

La reconstruction de la cornée in vitro fait l'objet de plusieurs études depuis quelques années. Cependant, la majorité des travaux utilisent des biomatériaux et des cellules animales ou humaines immortalisées. De plus, plusieurs des cornées ne sont que partiellement reconstruites, c'est-à-dire quelles ne possèdent qu'une ou deux des trois populations de cellules qui composent normalement une cornée. Un modèle de cornée reconstruite ressemblant davantage à une cornée native pourrait être très utile pour des études in vitro comme des tests pharmacologiques et toxicologiques. De plus, ces cornées reconstruites pourraient être utilisées comme tissu de remplacement in vivo. Pour ces raisons, une cornée complète, reconstruite par la méthode d'autoassemblage, a été produite en utilisant des cellules humaines non transformées et ce, sans ajout de matériel exogène. Les cornées reconstruites par cette méthode ont une structure histologique similaire à celle d'une cornée humaine native. L'épithélium pluristratifié et bien différencié possède des cellules basales et suprabasales clairement définies. Les kératines épithéliales sont correctement exprimées. L'endothélium, disposé en monocouche, exprime la protéine de transport Na+/K+-ATPase. Les composants des membranes basilaires ont également été identifiés à la jonction entre l'épithélium et le stroma des cornées reconstruites en laboratoire.

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Gain, Philippe. "Etude de l'apoptose de la cellule endothéliale cornéenne humaine en vue de l'amélioration de la qualité des techniques de conservation des greffons." Saint-Etienne, 2001. http://www.theses.fr/2001STET003T.

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Abstract:

La conservationdes cornées humaines en organoculture s'accompagne d'une mortalité cellulaire endothéliale obligatoire. Les mécanismes de cette mort cellulaire endothéliale lors de la conservation des greffons et ont pour objectifs l'amélioration des techniques de conservation et le développement de nouveaux outils d'évaluation de nos pratiques de laboratoire. Le but final de nos travaux est de : -préciser les facteurs influençant la mortalité cellulaire par apoptose au cours de la conservation afin de formuler le cas échéant des recommandations de bonne pratique de conservation. -créer de nouveaux outils de contrôle de qualité destinés à l'évaluation des pratiques de conservation et la fabrication de nouveaux milieux de conservation. -mettre au point de nouvelles formules de milieux de conservation des cornées. Ce point est fondamental d'autant que les milieux actuels destinés à l'organoculture contiennent tous du sérum de veau foetal et n'ont aucun statut, ni médicament, ni dispositif médical, vis à vis du législateur. La fabrication de milieux sans sérum mais contenant des agents protecteurs vis à vis de l'apoptose devient une priorité. . .

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Deb-Joardar, Nilanjana. "Contribution à l'amélioration du contrôle de qualité des cornées conservées en organoculture." Saint-Etienne, 2006. http://www.theses.fr/2006STET005T.

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Abstract:

Durant tout le processus de greffe de cornée, il est indispensable d’assurer la sécurité et la qualité du greffon. La sécurité concerne la détection des pathologies transmissibles qu’il s’agisse d’agents microbiologiques ou de cellules malignes. La qualité implique d’apporter au receveur un capital cellulaire, évalué par la mesure de la densité cellulaire endothéliale (DCE) et la morphométrie, suffisant pour une survie prolongée après greffe. Dans cette thèse, nous avons étudié plusieurs aspects, mal explorés jusque là, de ces deux domaines. Nous avons tout d’abord évalué ex vivo la possibilité de transmission de cellules malignes métastatiques lors de la conservation du greffon en organoculture. Puis nous nous sommes focalisés sur l’évaluation de la qualité endothéliale chez les sujets sains et au cours de la conservation. Nous avons ainsi déterminé la concordance, premièrement, entre les mesures effectuées avec deux microscopes spéculaires et, deuxièmement, entre les mesures de DCE en microscopie optique ex vivo et spéculaire in vivo pour tenir compte des écarts inhérents à l’utilisation des deux techniques dans la mesure de la perte cellulaire post-greffe. En Europe, la DCE est encore souvent mesurée par comptage manuel, source d’erreurs graves. Nous avons donc développé et validé une lame comportant des mosaïques lithogravées, mimant des endothéliums cornéens de caractéristiques connues, afin de faciliter le contrôle de qualité des méthodes de comptage. Le recours à l’analyse d’image est en plein essor en Europe sous notre impulsion, d’où l’intérêt de validation d’un analyseur, objet de la dernière partie de notre travail.

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Carrier, Patrick. "Reconstruction in vitro de cornées humaines par génie tissulaire : étude de la variabilité des cellules épithéliales de cornées humaines en culture primaire, de la réépithélialisation cornéenne et du rôle des fibroblastes dans la différenciation et la stratification des cellules épithéliales." Thesis, Université Laval, 2006. http://www.theses.ulaval.ca/2006/23717/23717.pdf.

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Giroux-Talbot, Mariève. "Étude de la guérison d'une déficience en cellules souches dans la cornée de lapin à l'aide de cellules épithéliales cultivées sur un gel de fibrine." Thesis, Université Laval, 2004. http://www.theses.ulaval.ca/2004/21682/21682.pdf.

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Abstract:

Une déficience en cellules souches épithéliales mène à une conjonctivalisation progressive de la cornée se traduisant par une perte de vision. Nous nous sommes attardés à l’étude de la régénération de l’épithélium cornéen initiée par une greffe de cellules épithéliales de cornée de lapin (CECL) cultivées sur un gel de fibrine. À confluence des cellules, le gel est greffé de façon autologue sur une cornée de lapin déficiente en cellules souches et la guérison est observée par rapport à un contrôle non greffé. À différents temps, les cornées sont prélevées et utilisées pour une analyse histologique ou par immunomarquage. Nos résultats démontrent qu’en seulement deux semaines, nous pouvons préparer un greffon d’épithélium cornéen autologue qui est sans risque de rejet. Après un mois, les lapins ayant reçu une greffe montrent un phénotype cornéen normal comparé aux témoins non-greffés. Ces résultats indiquent que la greffe de CECL autologues permet d’aider à la guérison d’un déficit en cellules souches.
Inscrite au Tableau d'honneur de la Faculté des études supérieures

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Beaulieu, Leclerc Véronique. "Optimisation des conditions de culture des cellules endothéliales cornéennes humaines par l'utilisation du facteur de croissance transformant β-1 (TGF-β1) dans une culture à deux phases." Master's thesis, Université Laval, 2017. http://hdl.handle.net/20.500.11794/27584.

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Abstract:

Contexte: Les cellules endothéliales cornéennes humaines (CECH) peuvent adopter un phénotype fibroblastique en culture, les rendant inutilisables en génie tissulaire de la cornée. Le facteur de croissance transformant β (TGF-β) serait impliqué dans ce phénomène, mais il est aussi connu pour maintenir les CECH en état de quiescence in vivo. Objectifs: Comparer l’effet du TGF-β1 sur le phénotype des CECH lors des phases de prolifération ou de maturation des cultures et optimiser les conditions de culture des CECH. Méthodes: Des CECH ont été cultivées en présence ou non de TGF-β1 et de facteur de croissance épidermal (EGF) dans une culture à deux phases. La morphologie, l’expression de marqueurs de fonctionnalité, la résistance trans-endothéliale et la perméabilité des cultures ont été analysées à l’approche de la confluence (phase de prolifération) et suivant la phase de maturation post-confluence. Résultats: L’ajout de TGF-β1 lors de la prolifération a généré des CECH fibroblastiques et la perte des marqueurs de jonctions cellulaires, indépendamment de la présence d’EGF. En phase de maturation, les CECH présentaient un phénotype endothélial et des jonctions cellulaires fonctionnelles. Elles avaient une forte résistance trans-endothéliale et une faible perméabilité. Les résultats démontrent que le TGF-β1 favorise la formation d’une barrière endothéliale semi-perméable lors de la maturation des cultures de CECH, se rapprochant ainsi de l’état physiologique des CECH in vivo.
Background: Human corneal endothelial cells (HCEC) easily become fibroblastic when cultured, rendering them unsuitable for tissue engineering of the cornea. Transforming growth factor β (TGF-β) could be a key factor in this phenomenon; however, it is also known to maintain the endothelium in a quiescent state in vivo. Purpose: To compare the effects of TGF-β1 on HCEC’s phenotype during either the proliferation or the maturation phase of the cultures and optimize culture conditions for HCECs. Morphology, functionality markers, trans-endothelial resistance and permeability of the cultures were analyzed at confluency (proliferation phase) and after the post-confluence maturation phase. Results: Adding TGF-β1 during proliferation produced fibroblastic HCECs and loss of the cell junction’s markers, independently from the presence of EGF. On contrast, during the maturation phase, HCECs had an endothelial phenotype and functional cell junctions. They produced a high trans-endothelial resistance and a low permeability. Overall, results show that TGF-β1 promotes formation of a typical leaky endothelial barrier during the maturation phase of cultured HCECs, thus approaching the physiological properties of in vivo HCECs.

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Audet, Caroline. "Optimisation des conditions de culture des cellules endothéliales cornéennes félines pour la reconstruction d'un endothélium cornéen autologue." Thesis, Université Laval, 2010. http://www.theses.ulaval.ca/2010/27172/27172.pdf.

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Abstract:

Les cellules endothéliales cornéennes constituent un tissu à la fois extrêmement particulier et d’une importance singulière. En effet, celui-ci est pourvu d’une capacité régénératrice pratiquement nulle, mais son intégrité est essentielle à la transparence cornéenne et donc à la vision. Par contre, l’endothélium cornéen fait défaut dans diverses pathologies telles que la dystrophie de Fuch et la kératopathie bulleuse du pseudophaque. La méthode traditionnelle pour le remplacement d’un endothélium cornéen pathologique est la greffe de cornée pleine épaisseur. Par contre, la greffe lamellaire postérieure est une alternative chirurgicale en plein essor, très intéressante, puisqu’elle permet de remplacer seulement la portion malade de la cornée. Cette technique chirurgicale a ouvert la porte à une nouvelle possibilité au niveau du génie tissulaire. En effet, il est maintenant envisageable de greffer un endothélium produit en laboratoire. Un défi supplémentaire, que s’est imposé notre équipe, est de reconstruire non seulement un endothélium complet, mais d’en reconstruire un qui serait également autologue, l’immunogénicité jouant un rôle non négligeable lors d’échec de greffes. Mon rôle dans ce projet était donc d’évaluer la faisabilité de reconstruire par génie tissulaire un endothélium cornéen autologue pour notre modèle animal, et ce, à des fins de greffes. D’abord en optimisant les conditions de culture afin de permettre la croissance des cellules endothéliales cornéennes animales. Puis en reconstruisant in vitro un endothélium à partir d’une biopsie cornéenne de taille minimale. Un endothélium sain similaire au tissu natif a ainsi été reconstruit.

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Roy, Olivier. "Optimisation des conditions de culture de l'endothélium cornéen humain : effets de la pression hydrostatique et de l'antagonisme de la transition endothélio-mésenchymateuse sur la fonctionnalité des cellules endothéliales cornéennes humaines in vitro." Master's thesis, Université Laval, 2014. http://hdl.handle.net/20.500.11794/25626.

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Abstract:

Contexte : En culture, les cellules endothéliales cornéennes humaines (CECH) adoptent fréquemment une morphologie fibroblastique [transition endothélio-mésenchymateuse (TEM)], les rendant inutilisables en génie tissulaire en raison de l’incapacité fonctionnelle associée. Objectifs : En accord avec les précédents travaux provenant de notre laboratoire et la littérature scientifique, nous avons séparément étudié les effets de la culture sous pression hydrostatique physiologique (18 mmHg) et de l’antagonisme de la TEM sur la fonctionnalité des CECH. Méthodes : D’une part, l’ensemencement des CECH sur stromas décellularisés et la culture en chambre antérieure artificielle ont permis de soumettre les CECH à une pression hydrostatique. D’autre part, les agents présumés antagonistes de la TEM suivants ont été étudiés : le SB431542, la dexaméthasone et BMP-7. Résultats : La pression hydrostatique physiologique et l’antagonisme de la TEM par le SB431542 et la dexaméthasone sont des moyens efficaces pour maintenir et améliorer la fonctionnalité des CECH in vitro.
Background: Cultured human corneal endothelial cells (HCEC) often adopt a fibroblastic-like morphology [endothelial-mesenchymal transition (EMT)], making them unusable in tissue engineering due to the associated loss of function. Purpose: In agreement with previous work from our laboratory and scientific literature, we separately investigated the effects of culture under physiological hydrostatic pressure (18 mmHg) and the antagonism of EMT on HCEC functionality. Methods: First, seeding HCEC on decellularized corneal stromas and culture in an artificial anterior chamber allowed to submit HCEC to hydrostatic pressure. Second, the following putative EMT antagonists agents were studied: SB431542, dexamethasone and BMP-7. Results: Physiological hydrostatic pressure and EMT antagonism by SB431542 and dexamethasone are effective ways to maintain and improve HCEC functionality in vitro.

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Maury, Florence. "Étude des conditions de culture in vitro des tissus cornéens et application à l'évaluation de biomatériaux ophtalmiques." Compiègne, 1991. http://www.theses.fr/1991COMPD413.

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Abstract:

Notre but a consisté à adapter un modèle de culture organotypique au domaine de l'ophtalmologie afin d'évaluer d'une manière simple et reproductible la cytocompatibilité de biomatériaux destinés à la chirurgie oculaire. Ce test repose sur une mesure quantitative et reproductible de quatre propriétés impliquées à l'interface tissu/matériau : migration, multiplication, adhésion et viabilité cellulaires. Le choix et l'optimisation des paramètres de cette culture de tissus cornéens ont fait l'objet de la première partie. Puis, la validation du modèle a exigé la vérification de la nature des voiles tissulaires : utilisation de techniques biochimiques et immunologiques; la deuxième partie nous a permis de vérifier la sensibilité du modèle en l'appliquant à la présélection de matériaux ophtalmiques. Puis la troisième partie fut consacrée à la recherche et la sélection d'une lentille de polymère implantable dans les lames cornéennes d'après les caractéristiques requises pour un tel implant. Nous avons obtenu des informations intéressantes concernant certains phénomènes intervenant à l'interface tissu/matériau : formation de sites d'attachement particuliers comme des structures jonctionnelles caractéristiques de l'épithélium cornéen : les hémidesmosomes. Outre une comparaison indispensable avec des résultats d'expérimentations in vivo, nous envisageons d'étudier l'influence de diverses modifications physico-chimiques d'un matériau ou de l'incorporation de substances dans le milieu sur le développement et l'adhésion cellulaires.

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Ha, Thi Binh Minh. "Contributions à l'étude des méthodes de production de masse des cellules endothéliales cornéennes humaines." Thesis, Saint-Etienne, 2014. http://www.theses.fr/2014STET001T/document.

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Abstract:

La bioingénierie de greffons endothéliaux cornéens est une des solutions réalistes en cours de développement dans quelques laboratoires pour palier au grand déséquilibre entre pénurie mondiale de dons de cornée et besoins immenses et croissant des populations. Cette véritable médecine régénérative consistera à injecter des cellules endothéliales (CEs) dans la chambre antérieure aux stades précoces des dystrophies endothéliales et, pour les stades avancées des pathologies endothéliales, à reconstruire in vitro des greffons endothéliaux composés d'un support transparent et biocompatible colonisé par une monocouche des CEs. Dans les 2 cas, la première étape obligatoire est la production de masse de CEs ou de "CE-like". Dans ce travail, nous avons exploré les différentes possibilités pour obtenir suffisamment de CEs fonctionnelles pour envisager des applications cliniques : 1- L'expansion de CEs natives prélevées sur des cornées de donneurs, ou culture primaire, se heurtent aux capacités prolifératives limitées des CEs in vitro. Un des prérequis étant la compréhension des mécanismes d'arrêt de la prolifération des CEs humaines, nous avons fait la synthèse bibliographique des connaissances sur leur cycle cellulaire et leur sénescence, et présentons 2 articles originaux: le premier utilise un microarray spécifique de 112 gènes de contrôle du cycle cellulaire pour comparer les profils transcriptionnels des CEs de 6 modèles biologiques comportant théoriquement un stimulus prolifératif croissant: in vivo, post mortem, organoculture, culture primaire confluente, culture primaire non confluente et lignée immortalisée. Nous identifions de nombreux acteurs impliqués dans l'arrêt du cycle, en particulier ceux impliquant une réponse à des dommages oxydatifs de l'ADN. Le second article explore les capacités prolifératives résiduelles des CEs de donneurs âgés de plus de 50 ans, sont les plus nombreux en Europe et donc les pourvoyeurs habituels de CEs pour la bioingénierie. Nous montrons qu'une optimisation des techniques de culture permet d'obtenir in vitro une mosaïque endothéliale de 2000 cellules/mm2. Enfin, un troisième article montre qu'un stimulus physique inattendu constitué d'un train d'impulsion électrique permet d'obtenir un très grand nombre de figures mitotiques mais uniquement dans des zones de faible DCE, démontrant encore une fois l'importance majeur de l'inhibition de contact dans l'arrêt prolifératif. 2- La sélection et l'expansion, par culture en sphère, des progéniteurs endothéliaux de la périphérie endothéliale pourrait être un moyen de contourner la sénescence de la majorité des CEs. La synthèse bibliographique montre que la plupart des travaux publiés émanent d'une seule équipe japonaise. Dans notre second article, nous avons montré l'existence de rares "label-retaining cells" dans les cornées de donneurs âgés, qui pourraient correspondre à ces progénieteurs. Nous avons aussi montré qu'il était possible d'obtenir des sphères avec ces donneurs. 3- La différenciation de cellules souches embryonnaires, mésenchymateuses ou des cellules pluripotentes induites est enfin la troisième voie qui pourrait permettre de produire des CEs en grand nombre. La méthode d'induction de la différenciation pourrait reproduire le schéma physiologique et désormais bien caractérisé de formation de l'endothélium à partir du mésenchyme périoculaire dérivé de la crête neurale et que nous rappelons au début de notre mémoire bibliographique. Nous rappelons également les méthodes utilisables pour caractériser les cellules obtenues: vérification de leur identité par immunomarquage d'un panel de protéines caractéristique (en absence de marqueur unique spécifique) et vérification de leur fonctionnalité par mesures de leurs capacités de pompage ionique, au minimum de façon indirecte sur chambre d'électrophysiologie de type Ussing, au mieux de façon directe en quantifiant la déturgescence d'une cornée humaine conservée dans le bioréacteur breveté du BiiGC
Corneal endothelial engineering is becoming a more and more realistic solution to restore vision from corneal edema. This method focus to regenerate corneal endothelium by direct injection of corneal endothelial cells (ECs) into patient anterior chamber at the early stage of endothelial dystrophies, or by grafting a transparent biocompatible material covered by a monolayer of ECs. These two techniques require both in vitro isolation and amplification of ECs or endothelial-like cells. In this thesis, different strategies to obtain a high quantity of functional ECs for clinical application are explored: 1- Due to the limit proliferative capacity of EC, the first strategy consists to analyze mechanisms implicated EC cell cycle arrest and then to optimize protocol for native EC isolation or for cell proliferation activation ex vivo. This is summarized in three publications. The first publication describes the cell cycle regulation by comparing transcriptional expression of 112 genes in 6 biological models of EC with different proliferative profile: in vivo, postmortem, organ-culture, confluent primary culture, non confluent primary culture and immortalized cell line. , The key molecular actors identified using the combining microarray analysis and gene ontology methods are consistent with previous findings about oxidative DNA damage mechanism. The second publication characterizes EC differentiation process and its impact on EC proliferative capacity in old donor corneas. Analyses of differentiation/progenitor markers and of proliferative capacity underline the differentiation process of EC from the centre to the peripheral corneal endothelium. Thereby, an optimized culture protocol was developed, allowing the formation of high-density monolayer (> 2000 cells/mm2) with stable endothelial morphology. We proved the possibility to make profit from a majority of old-donor cornea grafts invalidated for penetrating graft In the third publication, the activation of endothelial cell cycle by electric pulses directly in corneal graft was characterized. We confirm the activation of endothelial cell cycle at different phases but also the damage of tissue during electroporation. 2- Second strategy consists of the amplification of ECs from potential EC progenitors. Using sphere forming culture and a new method to detect slow-cycling cells, we demonstrate the existence of "young" ECs population with higher proliferative capacity in corneal periphery. The isolation of ECs by sphere formation is one possible step for ECs selection in vitro. 3- The differentiation of embryonic stem cells, mesenchymal stem cells or induced pluripotent stem cells into corneal endothelial cells is the third approach considered by our laboratory. The manipulation of stem cells differentiation would be based on the molecular mechanisms implicated in the formation of corneal endothelium from periocular mesenchymal cells described in the first part of the bibliography. Finally, in order to validate the quality of endothelial cell mass obtained, we revisited recent methods for the evaluation of corneal endothelial identity (immunolocalisation of specific markers), for the measurement of pump activity of cell monolayer (Ussing chamber, perfusion chamber) or directly in deswelled cornea using the bioreactor patented by the BiiGC laboratory

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Garcin, Thibaud. "Contribution à l'évolution d'un bioréacteur destiné à la recherche préclinique cornéenne et la conservation des greffons." Thesis, Lyon, 2019. http://www.theses.fr/2019LYSES055.

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Abstract:

La greffe de cornée a connu plusieurs évolutions, du cadre législatif de l’activité de prélèvement, aux indications et techniques chirurgicales. L’historique allogreffe fraîche a laissé place à l’eye banking permettant des contrôles qualité et sécurité pendant la conservation des greffons. L’hypothermie à 4°C ou l’organoculture, deux mondes de conservation passive diamétralement opposés, co-habitent depuis presque 50 ans, sans pouvoir apporter de solution optimale pour les patients. Dans un contexte de besoins croissants en greffons et d’une pénurie globale déjà importante, le laboratoire BiiGC a proposé un concept innovant : une conservation active grâce à un bioréacteur cornéen.Notre travail de thèse a différents objectifs : 1/ présenter l’état de l’art de la chaîne de la greffe de cornée ; 2/ décrire notre contribution à l’évolution de ce bioréacteur, comparé au gold standard l’organoculture, d’abord sur 1 mois puis sur 3 mois, démontrant sur une large série de cornées humaines, l’ apport majeur du dispositif pour l’eye banking : plus de greffons disponibles et de meilleure qualité, une souplesse logistique plus importante pour les banques de cornées. L’industrialisation du bioréacteur prend donc tout son sens. Le bioréacteur préservant un état cornéen quasi in vivo jusqu’à 3 mois, ouvre le champ des possibles en utilisation préclinique ; 3/ rapporter l’activité nouvelle et spécifique réalisée par les coordonnateurs, avec un double rôle majeur pour l’activité de greffe et la recherche préclinique grâce aux dons ciblés, permettant des expérimentations avec des cornées fraîches comparables à celles greffées
Corneal transplantation has undergone several changes, from the legislative framework of the retrieval activity to the indications & the surgical techniques. The historic fresh allograft has given way to eye banking which allows quality and safety controls during the storage of corneal grafts. Hypothermia at 4°C or organoculture, two diametrically opposed passive conservation worlds, have coexisted for almost 50 years, without being able to provide an optimal solution for patients. In a context of growing graft needs and an already significant global shortage, the BiiGC laboratory proposed a breakthrough : an active storage thanks to a corneal bioreactor.Our thesis work has different aims : 1/ to present the state of the art of the corneal transplant chain ; 2/ to describe our contribution to the evolution of this bioreactor or active storage machine, compared to the gold standard organoculture, over 1 month then over 3 months, demonstrating on a large preclinical series of human corneal pairs the major contribution of the bioreactor to eye banking: more grafts available, better tissue quality and greater logistical flexibility for the eyebanks. The industrialization of our device thus makes sense. The bioreactor maintining a corneal state in vivo-like for up to 3 months, opens the field of possibilities for preclinical use ; 3/ to report the new and specific activity carried out by the coordinators, with a major dual role for the transplant activity, and the preclinical research thanks to targeted donation allowing experiments with fresh corneas comparable to those transplanted

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Jouishomme, Hervé. "Culture de lymphocytes et de monocytes humains en milieu défini." Lyon 1, 1990. http://www.theses.fr/1990LYO1T091.

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Robert, Fabienne. "Aspects ultrastructuraux et neurochimiques des astrocytes et des neurones en culture : influence des antibiotiques." Orléans, 2003. http://www.theses.fr/2003ORLE2034.

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Abstract:

Les cultures d'astrocytes et de neurones sont des modèles couramment utilisés pour l'étude des fonctions du système nerveux central. Le but du présent travail est la recherche de l'influence des conditions de culture sur les astrocytes et les neurones. L'étude ultrastructurale montre la présence de mitochondries difformes et de vésicules multilamellaires dans les cellules. Les antibiotiques utilisés en culture renforcent la présence des vésicules multilamellaires. L'utilisation de traceurs du système endolysosomal montre que ces vésicules sont d'origine lysosomale. Les antibiotiques modifient l'activité de plusieurs fonctions astrocytaires et altèrent l'intégrité membranaire. Par une étude de l'apoptose, nous observons que les antibiotiques ont un effet délétère sur les astrocytes et les neurones. Ces résultats montrent que la culture perturbe le système lysosomal des cellules étudiées. Les antibiotiques amplifient ces modifications et altèrent certaines fonctions cellulaires.

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Saleil, Véronique. "Développement "in vitro" des apex isolés à partir de deux espèces d'igname, Dioscorea alata et Dioscorea trifida." Montpellier 2, 1986. http://www.theses.fr/1986MON20091.

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El, Kouhen Rachid. "Colicine N et porine OmpF, un dialogue dynamique." Aix-Marseille 1, 1995. http://www.theses.fr/1995AIX11035.

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Abstract:

La colicine n, bacteriocine produite par e. Coli, est active sur des souches apparentees. Son mode d'action comprend trois etapes: (i) fixation sur la porine ompf a la surface bacterienne, (ii) utilisation de cette meme porine et des proteines tolaq pour traverser la membrane externe (iii) formation de pores voltage-dependant dans la membrane interne. La colicine n (42kda) est organisee en domaines structuraux, chacun etant associe a une etape du mode d'action. Le domaine central r (67-182) est responsable de la fixation sur ompf. Le domaine n-terminal t, est implique dans la translocation a travers la membrane externe ; il peut etre subdivise en deux sous-domaines t1 et t2. Le site recepteur de la colicine n est conserve sur le trimere ompf purifie. L'interaction colicine n-ompf depend de la presence du domaine r. Le trimere purifie est capable de proteger les cellules sensibles contre l'action des colicines a et n. Le niveau de protection depend de l'etat conformationnel de la porine. Cette association recepteur-ligand a la surface bacterienne est visualisee en microscopie electronique. La cinetique de fixation de la colicine n est tres rapide. L'etude de la translocation montre l'existence de deux populations de colicine n: une, correspondant aux colicines internalisees et une autre, accessible a la surface cellulaire, degradee par les differentes enzymes. 10(#1) secondes est le temps qui separe l'addition de la colicine n et de la formation du pore au niveau de la membrane interne. La vitesse maximale d'efflux de k#+ intracellulaire est obtenue a une multiplicite de 300-400: correspond aux colicines protegees

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Le, Marrec-Croq Françoise. "Etablissement de cultures primaires de cellules de bivalves marins." Brest, 1995. http://www.theses.fr/1995BRES2031.

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Abstract:

Notre etude se situe dans le cadre d'un programme de recherches mene en partenariat dans le but de mettre au point des cultures cellulaires chez les bivalves marins. Les travaux ont eu pour objectif l'etablissement de cultures primaires de cellules fonctionnelles de coquille st-jacques pecten maximus et d'huitre crassostrea gigas. Ils ont necessite la selection et l'optimisation d'un protocole de dissociation cellulaire et la mise en place d'un procede de decontamination microbienne de certains tissus pour eviter la presence de microorganismes parmi les suspensions cellulaires (branchies notamment). Les essais ont ete realises a partir de cur et de branchies de coquille st-jacques et a partir d'embryons d'huitre. La technique d'isolement des cellules a par la suite ete validee par les resultats des cultures realisees dans un milieu de base que nous avons defini. Certaines cellules adherent en effet systematiquement au support apres deux ou trois jours de culture. Deux types cellulaires sont differenciables, des cellules de type epithelial, peu nombreuses, et des cellules fibroblastiques, largement majoritaires. Les cellules fusiformes adherentes en culture, de type fibroblaste, ont ete caracterisees, dans le cas du cur, par microscopie electronique (presence de myofibrilles) et immunomarquage (reaction positive a l'anti-myosine et anti- tropomyosine) comme etant des myocytes. Cette conclusion est d'ailleurs corroboree par le fait qu'apres environ une semaine de culture, lorsque les cellules sont quasiment confluentes, elles reconstituent des formations plurinucleees de type myotubes qui se contractent spontanement in vitro. Les resultats des cultures, reproductibles dans le cas du cur de coquille st-jacques restent plus variables dans le cas des branchies et des cellules embryonnaires. Ces donnees nous ont donc conduit peu a peu a selectionner les cellules de cur pour les experimentations ulterieures. Diverses techniques analytiques (histoautoradiographie, comptage en scintillation, electrophorese et autoradiographie d'electrophorese, chromatographie sur couche mince et autoradiographie de chromatographie sur couche mince), mises en uvre a differents temps de culture, apres incubation des cellules en presence de precurseurs marques ont montre que les cellules de cur en culture dans le milieu de base neosynthetisent des proteines, de l'adn et des lipides pendant au moins 20 jours (c'est aussi le cas des branchies). Ces activites de biosynthese peuvent d'ailleurs etre stimulees par addition au milieu de base de certains facteurs d'origine marine notamment et des lipides en particulier ce qui prouve que le milieu de culture peut etre encore ameliore. Un protocole de cryopreservation des cellules de cur a pu etre mis au point, permettant d'obtenir des cultures a partir des cellules decongelees. L'activite de biosynthese de ces cellules en culture, evaluee apres sept jours, apparait equivalente, au moins, a celle des cellules temoins non congelees et le profil des proteines et des lipides neosynthetises par les cellules en culture apres congelation-decongelation est comparable a celui obtenu pour les cellules fraiches. De plus, comme pour les cellules non congelees, une differenciation terminale des myoblastes en myotubes est observee en culture. A titre preliminaire, pour une etude de faisabilite, ces modeles experimentaux ont aussi ete utilises comme bioessais pour des tests de cytotoxicite aigue (effet de sels de metaux lourds) et de genotoxicite (effet d'un produit mutagene de reference, l'aflatoxine b1), l'objectif etant de pouvoir proposer a terme, des biotests et biomarqueurs d'effets cytotoxique et genotoxique de xenobiotiques presents dans le milieu marin, completant ainsi la panoplie des tests deja disponibles pour la surveillance de la qualite de l'eau de mer (algues, bacteries, embryons). En conclusion, les donnees acquises au cours de ce travail et les techniques analytiques mises au point ont permis pour la premiere fois: - d'etablir des cultures primaires de cellules de cur de coquille st-jacques dont l'activite de biosynthese a ete verifiee avec rigueur au cours du temps par l'etude de certaines fonctions du metabolisme de base (en l'absence de biomarqueurs specifiques connus), - de congeler des cellules de cur de coquille st-jacques permettant, apres decongelation, d'obtenir des cultures dont l'activite de biosynthese in vitro est conservee. Ces resultats, qui ouvrent sur de larges perspectives vont, en outre, faciliter la mise en place de nouveaux modeles cellulaires chez des invertebres marins

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Esclatine, Audrey. "Interactions du cytomegalovirus humain avec des cellules épithéliales intestinales en culture." Paris 11, 2001. http://www.theses.fr/2001PA114814.

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Massart, Catherine. "Culture de thyrocytes humains en monocouches et en follicules : Aspects fondamentaux et appliqués." Rennes 1, 1988. http://www.theses.fr/1988REN1B003.

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Chabert, Philippe. "Production d'anticorps monoclonaux par culture cellulaire : applications industrielles." Lyon 1, 1989. http://www.theses.fr/1989LYO10128.

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Abstract:

Nous avons développé deux techniques de production d'anticorps monoclonaux par culture cellulaire : une technique de culture en supension en fermenteur et une technique de culture sur fibres creuses. L'étude de la production d'anticorps monoclonaux en fermenteur a conduit au développement d'un système ouvert faisant appel à la perfusion de milieu frais en continu grâce à un module de microfiltration en ligne permettant la séparation cellules - milieu de culture tout au long de la culture. Ce système autorise des productions de 1 à 2 grammes d'anticorps monoclonaux par mois sous des volumes de lot de 10 à 20 litres. La culture cellulaire sur fibres creuses repose sur une compartimentation entre les cellules et le milieu de culture circulant, simulant les conditions d'alimentation en nutriments et en gaz observés "in vivo". Le système, grâce à une double circulation de milieu de part et d'autre des fibres, permet des productions selon le clone, de 7 à 15 grammes d'anticorps par mois pour des volumes de récolte de 2 à 5 litres. Le développement de ces deux procédés de production a nécessité la mise au point de milieux de culture définis pour la croissnce et la sécrétion. Ces deux techniques permettent d'obtenir des immunoglobulines ayant les mêmes caractéristiques et au moins les mêmes potentialités que les anticorps produits sur animal

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Djigo, Aïcha Dede. "Caractérisation de substituts choroïdiens reconstruits par génie tissulaire." Master's thesis, Université Laval, 2017. http://hdl.handle.net/20.500.11794/28145.

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Abstract:

Tableau d'honneur de la Faculté des études supérieures et postdoctorales, 2017-2018
La choroïde est une couche richement vascularisée assurant la nutrition des photorécepteurs. Les échanges avec ces derniers sont contrôlés par l’épithélium pigmentaire rétinien (EPR), la couche externe de la rétine reposant sur la choroïde. La perte de l’intégrité de l’étroite interaction entre l’EPR et la choroïde est à l’origine de la dégénérescence maculaire liée à l’âge (DMLA), l’une des principales causes de cécité dans le monde. C’est une maladie complexe qui implique autant des facteurs de risque génétiques qu’environnementaux. Dans cette étude, nous avons reconstruit un stroma choroïdien par génie tissulaire qui servirait à étudier les interactions cellules choroïdiennes - cellules choroïdiennes et/ou cellules choroïdiennes - cellules de l’EPR. Il pourrait aussi servir comme tissu de remplacement lors d’une greffe, un traitement prometteur pour la DMLA. Nous avons d’abord isolé l’EPR et les cellules choroïdiennes à partir de globes de donneurs décédés. Puis, en utilisant la méthode d’auto-assemblage du génie tissulaire, les fibroblastes de la choroïde ont déposé des fibrilles de collagène pour former un feuillet de matrice extracellulaire dont la composition et les propriétés biomécaniques ont ensuite été caractérisées. Les analyses par spectrométrie de masse, immunomarquages, microscopie électronique à balayage et colorations histologiques ont démontré que la composition matricielle des stromas choroïdiens reconstruits (SCR) était semblable au tissu natif. Leurs propriétés biomécaniques ressemblaient également à celles de la choroïde native selon les mesures comparatives d’élasticité, de déformation et de résistance à la traction. Nous avons finalement ensemencé de l’EPR, des cellules endothéliales et des mélanocytes choroïdiens sur/dans les SCR. Ces cellules se sont bien intégrées sur ces derniers et ont adopté une morphologie et un aspect histologique retrouvés in vivo. Nos substituts choroïdiens miment donc les propriétés structurales du microenvironnement dans lequel résident les cellules choroïdiennes de même que plusieurs de ses caractéristiques fonctionnelles.
The choroid is a richly vascularized layer supplying oxygen and nutrients to the photoreceptors. The exchanges are regulated by the retinal pigment epithelium (RPE), the outermost layer of the retina that lies between the neural retina and the choroid. The loss of the normal interaction between the RPE and the choroid is central to the development of age-related macular degeneration (AMD), one of the leading causes of blindness worldwide. AMD is a complex disease involving both genetic and environmental risk factors. In this study, we have engineered a choroidal substitute which could be used in order to study choroidal cells - choroidal cells and/or choroidal cells - RPE interactions as well as serve as replacement tissues in a graft, a promising treatment for AMD. We first isolated RPE and choroidal cells from deceased donor eyes. Then, using the self-assembly approach of tissue engineering, choroidal fibroblasts accumulated collagen fibrils that produced sheets of extracellular matrix whose composition and biomechanical properties were characterized next. Several analyses, such as mass spectrometry, immunostainings, scanning electron microscopy and histological stainings, revealed that the extracellular matrix composition of the tissue-engineered (TE) choroidal stromas was similar to the native tissue. Furthermore, their biomechanical properties were akin to those of the native choroid according to the comparative measurements of elasticity, strain and ultimate tensile strength. Finally, RPE, endothelial cells and choroidal melanocytes were seeded onto the TE choroidal stromas. The cells repopulated the stroma and adopted a morphology and a histological appearance similar to in vivo. Our choroidal substitutes thus recaptured the structural properties of the microenvironment in which choroidal cells reside as well as several of its functional characteristics.

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Baut, François. "Caractérisation de milieux cellulaires par fluorescence." Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 1992. http://www.theses.fr/1992INPL117N.

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Abstract:

En milieu industriel, la rentabilité d'un procédé fermentaire rend indispensable la maitrise rigoureuse du procédé, laquelle passe par la connaissance de la souche en fermentation, d'ou l'intérêt de développer des capteurs d'information cellulaire et/ou fermentaire. Ainsi nous avons, d'une part utilisé ces techniques fluorimétriques pour suivre la fermentation acétonobutylique et nous avons pu caractériser la phase acide de cette fermentation par la fluorescence du nadh contenu dans les bactéries et la phase solvant par l'anisotropie de fluorescence du Dph incubé dans les membranes bactériennes et, d'autre part développé des montages expérimentaux originaux destinés à mesurer l'impact des forces de cisaillement auxquelles sont soumises les cellules en fermentation, par mesure de l'anisotropie de fluorescence de sondes susceptibles de rendre compte de leur environnement moléculaire

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Boucher, Éric. "Effets d'un dextran substitué sur la production de feuillets dermiques et du gel de fibrine sur la qualité des feuillets d'épidermes cultivés." Thesis, Université Laval, 2005. http://www.theses.ulaval.ca/2005/22531/22531.pdf.

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Abstract:

L’utilisation de la dispase pour détacher les feuillets épidermiques est une étape pouvant être améliorée pour faciliter leurs transferts sur les plaies des grands brûlés. La culture sur colle de fibrine élimine cette étape. Les analyses histologiques et immunohistochimiques n’ont révélé aucune différence importante entre ces deux types de feuillets épidermiques. Le gel de fibrine est donc un substrat adéquat pour la production de feuillets épidermiques greffables. Les équivalents cutanés complets complèteraient le traitement des grands brûlés. Toutefois, la production de feuillets dermiques est limitée par leur temps de production. Étant donné que le RGTA accélère la réparation de plusieurs tissus in vivo, l’effet du RGTA sur la production de feuillets dermiques fut testé. Des examens physiques et histologiques ont montré que le RGTA26 rendait les feuillets fragiles. Les ELISAs et les zymogrammes ont montré une modulation de la production collagénique et des MMPs. L’utilisation du RGTA pour produire les feuillets dermiques n’apparaît pas justifié.

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Fossoyeux-Comte, Emmanuelle. "Culture de preadipocytes : méthodologie et intérêt." Bordeaux 2, 1988. http://www.theses.fr/1988BOR2P112.

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Mateos, Diaz Juan Carlos. "Nouveaux outils pour la biocatalyse : criblage, purification et caractérisation de lipases issues de champignons thermophiles." Aix-Marseille 2, 2005. http://theses.univ-amu.fr.lama.univ-amu.fr/NNT.pdf.

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Hu, Jie. "Culture cellulaire sur des motifs micro et nanoscopiques préparés les méthodes lithographiques et non lithographiques." Paris 6, 2011. http://www.theses.fr/2011PA066315.

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Abstract:

Comprendre la culture cellulaire sur des substrats avec des motifs topographiques est importante pour la biologie fondamentale et l’ingénierie tissulaire ainsi que la conception et la réalisation des dispositifs biomédicaux avancés. Ce travail de thèse a été développé basé sur l'observation systématique de culture cellulaire sur une grande variété de motifs micro- et nanoscopiques préparés par les techniques tant lithographiques que non-lithographiques, en incluant la photolithographie UV par contact, la lithographie molle par nano-impression, le moulage à chaud, oxydationanodique d’aluminium et électrodéposition sélective avec moule. Nos résultats montrent que les cellules croisent de préférence dans les zones de nanostructures gravées à cause de l'amélioration de l’échange de médium de culture. Une augmentation de taux de prolifération a été aussi observée avec la diminution de taille de pores lorsque les cellules sont cultivées sur une membrane poreuse fabriquée par l'oxydation anodique d’aluminium. Les cellules cultivées sur les matrices de micro-piliers ont montré des dépendances claires à la largeur et hauteur de piliers, ainsi que la périodicité de la matrice. En outre, une distribution anisotropique de forces d'adhésion a été observée lorsque les cellules sont cultivées sur des matrices de piliers obliques. Enfin, les cellules peuvent être cultivées sur nano-piliers ou tubes métallique à haute densité, qui pourrait être utile pour la caractérisation électrique et électrochimique de cellules àhaute sensibilité

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Bouhout, Sara. "Reconstruction d'un modèle vésical par génie tissulaire et caractérisation." Doctoral thesis, Université Laval, 2015. http://hdl.handle.net/20.500.11794/28390.

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Abstract:

Le système urinaire a pour objectif l’élimination des produits du catabolisme sous forme d’urine. Cette fonction permet au sang d’être épuré en permanence et de maintenir ainsi l’équilibre de la composition sanguine (homéostasie). Plus précisément, la vessie est un réservoir extensible et étanche, responsable de l’emmagasinage de l’urine à basse pression, avant qu’elle soit évacuée hors de l’organisme. Diverses pathologies peuvent compromettre ces propriétés et endommager gravement le haut appareil urinaire. La confection d’une néovessie est alors essentielle pour assurer une collecte à basse pression de l’urine. La reconstruction vésicale par les techniques de chirurgie est associée à des complications cliniques significatives, causées principalement par l’absence de protection contre l’urine, normalement assurée par un épithélium hautement spécialisé : l’urothélium. Contrairement aux débuts de l’ingénierie tissulaire, pendant lesquels l’organisation cellulaire et moléculaire étaient relativement négligées, celles-ci sont aujourd’hui fortement prises en compte. C’est pourquoi cette technique fait appel à diverses matrices et aux cellules de l’hôte pour reproduire un substitut aussi conforme que possible au tissu natif. Toutefois, à ce jour, aucun modèle de substitution n’a été en mesure de pallier aux limites précédemment documentées. La complexité du remplacement vésical motive donc notre équipe à rechercher un substitut alternatif plus adapté cliniquement. L’objectif de ce projet de recherche était la mise au point de nouvelles méthodes pour parvenir à l’élaboration d’un substitut vésical comparable à la muqueuse d’une vessie native, puis la caractérisation de notre modèle aussi bien au plan structural que fonctionnel. Á partir de tissu porcin, plusieurs types cellulaires composant la paroi vésicale sont extraits simultanément puis caractérisés in vitro. Les cellules mésenchymateuses et urothéliales évoluent alors dans une culture tridimensionnelle pour former par génie tissulaire un tissu manipulable. La caractérisation de notre modèle vésical légitimise cette méthode qui semble très prometteuse pour répondre aux besoins dans le domaine
The purpose of the urinary tract is to ensure the evacuation of catabolic products in urine form. This function permits to preserve the equilibrium and consistency of the blood components (homeostasis). More precisely, the bladder is a watertight and compliant reservoir in charge of urine storage at low pressure, before its evacuation out of the organism. The bladder is subject to various pathologies, which could compromise its specific properties and damage the upper urinary tract. Therefore, the elaboration of a new reservoir is essential to collect the urine at low pressure. Surgical reconstruction is associated to significant complications, principally due to the lack of protection against urine, physiologically ensured by the highly specialized uro-eptithelium. Contrarily to the beginning of tissue engineering, cellular and molecular organizations are strongly considered nowadays. It is the reason why this discipline needs different matrices and host cells to reproduce a substitute conform to the original organ. But to date, no bioengineered models were able to completely overcome the limitations previously reported. The complexity of the vesical replacement remained a major challenge that led our team to research a more efficient bladder substitute. This project describes the approaches elaborated to achieve a vesical substitute comparable to the bladder mucosa. In addition, the structural and functional properties of our in vitro reconstructed models will be characterized with the use of different techniques. Based on our previous studies, several cellular types were isolated from the bladder wall, and then characterized in vitro. Using specific techniques of tissue-engineering, bladder mesenchymal and urothelial cells evolve in a three-dimensional culture to produce a tissue easy to handle. The maturation degree of our reconstructed models reached satisfactory characteristics to meet the need in the bladder regenerative field, and could led to better post-surgical results.

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Steward, Nicolas. "Physiologie, cinétique et modélisation de cultures de cellules végétales en suspension : comparaison de cultures discontinues et continues : influences de l'environnement sur l'activité cellulaire." Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 1998. http://www.theses.fr/1998INPL026N.

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Abstract:

La présente thèse a pour objectif d'améliorer les connaissances sur la production de biomasse par la culture de cellules végétales en suspension, en prenant une souche modèle de luzerne (Medicago sativa). En premier lieu sont comparés des modes de culture discontinus et continus par leurs productivités en biomasse brute et leurs coûts industriels. Une seconde approche évalue l'impact de différents milieux de culture sur les paramètres cinétiques comme la croissance, le décès et la consommation des substrats. Pour cela est effectué un suivi des milieux intra- et extra-cellulaires, ainsi que la viabilité de la biomasse. Ensuite, une nouvelle méthode basée sur la teneur en estérases de la biomasse est exposée pour déterminer sa viabilité avec d'avantage de rapidité et de précision. La mesure de cette activité enzymatique libérée dans le milieu de culture permet un suivi précis des cinétiques de croissance, de décès et de lyse cellulaire. Les informations recueillies sur le comportement cinétique de la souche sont structurées sous la forme de deux modélisations mathématiques. La première décrit les évolutions extracellulaires, la viabilité de la biomasse et les phénomènes de lyse. La seconde améliore les prédictions du modèle précédent par l'adjonction des évolutions de la composition ionique intracellulaire. Celle-ci résulte d'une entrée des nutriments par diffusion, du catabolisme et de phénomènes d'équilibration avec le milieu de culture quand les cellules décèdent.

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Zaïbi, Mohamed Sghaïer. "Régulation de la sécrétion de protéines dans des cultures de cellules hépatiques de rat : effets de l'insuline et de la metformine sur celle de l'albumine, et de l'insuline et la dexaméthasone sur celle d'une protéine recombinante, l'hGH." Dijon, 1993. http://www.theses.fr/1993DIJOS070.

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Abstract:

L'insuline stimule la sécrétion de l'albumine dans les cultures épithéliales de foie de rat nouveau-nés dans des milieux sans sérum (sfm) ou de protéines vectrices. L'association de la metformine (n,n-dimethylbiguanide), n'entraine aucun effet de potentialisation de l'action hormonale sur cette sécrétion. Dans les cultures primaires d'hépatocytes de rat adulte, l'administration de la metformine améliore le taux d'induction de la sécrétion d'albumine par l'insuline d'environ 30%. Sans insuline la metformine n'a aucun effet. L'administration de la metformine pendant 15 j chez le rat (50 mg/kg/j) améliore la viabilité et le nombre d'hépatocytes par foie perfuse et augmente le taux de sécrétion basale de l'albumine et l'induction par l'insuline. Que ce soit in vitro ou in vivo, l'effet de la metformine est coordonne a l'insuline et l'igf-1 mais non dans le cas de la l-thyroxine. La lignée de fibroblastes fzt résulte de la transfection de cellules obtenue par perfusion du foie du rat et maintenues en une monocouche soumise a une agitation réciproque du milieu contenant des liposomes encapsulant les plasmides pEJ et p17hGHneo. Transformée par le ras (pEJ), la lignée prolifère et produit de l'hGH dans le sfm. Cultivées sur microsupports, les cellules secrètent 11 g d'hGH par 10#6 cellules/24 h, après un choc thermique de 3 h a 43c du fait de l'hybridation du gène hGH au promoteur de choc thermique hsp70 (environ 3,7% en poids de protéines cellulaires). La sécrétion d'hGH est négativement modulée par l'insuline et positivement par la dexamethasone

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Gusdinar, Tutus. "Mise au point et validation pharmacologique d'une culture primaire de cellules de la muqueuse gastrique." Montpellier 1, 1990. http://www.theses.fr/1990MON13510.

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Waffo, Teguo Pierre. "Production de polyphénols du vin par culture de cellules de vitis vinifera : étude structurale et activités biologiques in vitro." Bordeaux 2, 1998. http://www.theses.fr/1998BOR2B005.

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Vallaeys, Tatiana. "Isolement d'une communauté microbienne dégradant l'acide 2,4-dichlorophénoxyacétique à partir d'un sol de Dijon : caractérisations cinétique et génétique des souches impliquées." Lille 1, 1992. http://www.theses.fr/1992LIL10080.

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Abstract:

Une communauté microbienne dégradant l'acide 2,4-dichlorophénoxyacétique a été isolée du sol de Dijon dans un chémostat alimenté par un milieu comprenant du 2,4-D comme seule source de carbone. La dégradation du 2,4-D dans le chémostat était essentiellement due au métabolisme de la molécule par la souche d'Alcaligenes paradoxus TV1. L'utilisation de 2,4-D marqué au carbone 14 a permis de montrer que la présence des trois autres souches de la communauté permettait d'accroître la vitesse de dégradation du 2,4-D par A. Paradoxus. L'apport d'une autre source carbonée à une culture pure d'A. Paradoxus avait le même effet, ce qui suggère que des relations trophiques existent entre les différentes souches. Un plasmide pTV1 d'environ 200 kb a été mis en évidence chez A. Paradoxus TV1. Des fragments de ce plasmide présentaient des homologies avec les gènes de dégradation du 2,4-D portés par le plasmide d'A. Eutrophus JMP134. Le fragment EcoRI «H» de 11,5 kb de pTV1 responsable de l'homologie entre ces deux plasmides a été cloné dans le vecteur pHG327 pour former le plasmide pTV2. La souche JM107 d'E. Coli transformée par ce plasmide n'a présenté aucune activité de dégradation vis-à-vis du 2,4-D. Ce fragment a alors été introduit dans le cosmide à large spectre d'hôte pLAFR3 pour former le plasmide pTV3. Une conjugaison réalisée entre la souche E. Coli JM107 transformée par pTV3 et la souche guérie JMP222 d'A. Eutrophus dépourvue d'activité dégradante a permis de sélectionner une souche d'A. Eutrophus porteuse du plasmide pTV3 pour laquelle la capacité à dégrader le 2,4-D avait été restaurée. Le fragment cloné à partir de pTV1 a alors été utilisé comme sonde pour rechercher l'existence d'homologie avec des souches dégradant le 2,4-D d'origines éloignées (Grande-Bretagne, France, Indonésie, Australie). Une homologie a été mise en évidence entre l'ensemble de ces souches

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Oturan, Nihal. "Interactions de cellules Rinm5f avec des polymères biofonctionnels dérivés du sephadex." Paris 13, 1990. http://www.theses.fr/1990PA132021.

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Abstract:

L'étude de la culture des cellules Rinm5f sur des dérivés du sephadex a été réalisée de trois points de vue essentiels: 1) la croissance; 2) la morphologie; 3) la fonctionnalité (l'insulino-sécrétion). Nous avons mis en évidence une relation entre la stimulation de la sécrétion d'insuline et la composition chimique du polymère sur lequel la culture des cellules rinm5f a été effectuée. La composition chimique du polymère a aussi une grande influence sur l'attachement et l'etalement des cellules

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Jean, Jessica. "Applications dermopharmaceutiques : développement d'un modèle de substituts cutanés psoriasiques par génie tissulaire." Doctoral thesis, Université Laval, 2010. http://hdl.handle.net/20.500.11794/22724.

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Abstract:

Tableau d’honneur de la Faculté des études supérieures et postdoctorales, 2010-2011
La méthode d'auto-assemblage permet la production de substituts cutanés sans matériel exogène. L'objectif principal de notre travail a été de modifier cette méthode originale afin de produire un nouveau modèle de substituts cutanés pathologiques fabriqués à partir de cellules psoriasiques. Dans un premier temps, des substituts sains ont été cultivés en présence et en absence de sérum de veau foetal dans le but d'optimiser les conditions de culture. Puis, des analyses histologiques, immunohistochimiques, de perméabilité et des propriétés physico-chimiques ont été réalisées. Les résultats obtenus ont permis de conclure que le retrait du sérum à partir de la culture à l'interface air-liquide ne cause aucun problème majeur au niveau de la différenciation épidermique, de la jonction dermo-épidermique, du derme et de la perméabilité des substituts. De plus, des analyses par spectroscopic infrarouge à transformée de Fourier ont permis d'observer que le retrait du sérum améliore même l'organisation lipidique pour trois des cinq populations cellulaires testées. Parallèlement à cette étude, des substituts psoriasiques ont été produits à partir de cellules psoriasiques dans le but de vérifier si ces derniers allaient permettre la conservation de ce phénotype en culture. Des analyses histologiques et immunohistochimiques ont été effectuées et ont permis d'observer que le phénotype psoriasique (hyperprolifération et différenciation anormale des kératinocytes) est en partie conservé dans les substituts pathologiques. De plus, lors d'un traitement à l'acide rétinoïque, ceux-ci réagissent de façon similaire à ce qui est observé dans les peaux psoriasiques in vivo. Finalement, des substituts produits à partir de cellules non lésionnelles ont été reconstruits pour vérifier s'il existait une différence entre les cellules lésionnelles et non lésionnelles d'un même patient. Les résultats ont permis d'observer que les cellules non lésionnelles ne sont pas totalement «normales» et qu'elles conservent en partie les caractéristiques du psoriasis. En conclusion, ce nouveau modèle de substituts cutanés pathologiques pourrait devenir un puissant outil dermopharmaceutique permettant de tester de nouveaux traitements pour vaincre le psoriasis.

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Fabien, Nicole. "Cellules réticulo-épithéliales thymiques en culture : ultrastructure, marqueurs, hormones thymiques." Lyon 1, 1989. http://www.theses.fr/1989LYO1T023.

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Gauthier, Lydia. "Effets du sérum lors de la culture de substituts cutanés sains et psoriasiques." Thesis, Université Laval, 2010. http://www.theses.ulaval.ca/2010/27350/27350.pdf.

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Millecamps, Jean-Luc. "Sélection de chicorées "cichorium intybus l. Var Witloof" résistantes aux sulfonylurées par cultures cellulaires." Lille 1, 1989. http://www.theses.fr/1989LIL10030.

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Abstract:

A partir de diverses suspensions cellulaires de Cichorium intybus l. Var. Witllof n'ayant pas subi de traitement mutagène, nous avons isolé, en utilisant la variabilité induite par les cultures in vitro, plusieurs souches de cellules résistantes au chlorsulfuron (matière active d'un herbicide de la famille des sulfonylurees). (. . . )

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Postec, Anne. "Diversité de populations microbiennes thermophiles d'une cheminée hydrothermale océanique : cultures d'enrichissement en bioréacteur et isolement d'espèces nouvelles." Aix-Marseille 1, 2005. http://www.theses.fr/2005AIX11049.

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Abstract:

Dans le cadre de l'exploration de la diversité microbienne des sources hydrothermales océaniques profondes, les techniques moléculaires basées sur l'analyse du gène codant pour l'ARN ribosomique 16S ont permis la mise en évidence d'une grande diversité archéenne et bactérienne. Cependant, la diversité des micro-organismes hydrothermaux cultivés à ce jour reste bien inférieure à celle décrite par l'approche moléculaire. Des méthodes innovantes doivent alors être mises en oeuvre pour cultiver de nouveaux micro-organismes, et ainsi déterminer leurs caractéristiques métaboliques et leur rôle potentiel dans l'écosystème. Tel était l'objectif de ce travail : un bioréacteur gas-lift a été utilisé pour réaliser des cultures d'enrichissement en continu, pendant 50 jours, dans des conditions de thermophilie (60°C) et d'hyperthermophilie (90°). Un échantillon de cheminée (site Rainbow, ride medio-atlantique) a servi d'inoculum et a fait l'objet d'une analyse directe de la diversité moléculaire. La diversité des communautés microbiennes enrichies en bioréacteur a été analysée par DGGE, clonage, séquençage et hybridation. La diversité des micro-organismes cultivés en continu en bioréacteur s'est avérée plus grande que celle obtenue par culture classique en flacon (batch). Au sein du bioréacteur, une dynamique de la structure de la population a pu être mise en évidence. Des micro-organismes appartenant a priori à des espèces thermophiles modérées ont été détectés à 90 °C, et des autotrophes ont été obtenus en co-culture avec des hétérotrophes à 60°C. Des échanges de métabolites peuvent expliquer ce dernier résultat. Plusieurs espèces nouvelles, détectées au préalable de façon moléculaire, ont pu être isolées à partir des cultures d'enrichissement en bioréacteur. Une nouvelle espèce de l'ordre des Thermotogales, Marinitoga hydrogenitolerans, a notamment été décrite

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Hirel, Béatrice. "Kératinocytes humains adultes en culture : expression et modulation des marqueurs de différenciation et des enzymes de biotransformation des xénobiotiques." Rennes 1, 1994. http://www.theses.fr/1994REN1B026.

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Weber, Jean. "Etude des interactions symbiotiques entre Acacia mangium et ses partenaires fixateurs d'azote et mycorhiziens en culture aéroponique et autres systèmes." Nancy 1, 2004. http://www.theses.fr/2004NAN10185.

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Abstract:

L'objectif était l'obtention de plants d'Acacia mangium nodulés et mycorhizés en culture aéroponique. Le collage d'inoculum endomycorhizien sur les racines permit d'obtenir des plants fortement mycorhizés. Les taux de nodulation, d'endomycorhization et de P foliaire ont été optimisés par un contrôle des apports en N et P. Contrairement à la culture en sol, l'endomycorhization ne stimula pas la nodulation en culture aéroponique. Les taux de mycorhization furent réduits lors de la co-inoculation avec Bradyrhizobium. Le gain de croissance des plants endomycorhizés se révéla ne pas être uniquement lié à une meilleure nutrition en P. Thelephora ramarioides a été isolé et décrit comme un associé mycorhizien d'A. Mangium. Cette association augmenta les taux d'N et de P racinaire en pots. T. Ramarioides ne forma pas de mycorhizes en culture aéroponique. En pots, son développement fut inhibé en présence de G. Intraradices. Des essais de transfert au champ confirmèrent la possibilité d'utiliser la culture en aéroponie comme moyen de production
The objective was to obtain Acacia mangium saplings associated with mycorrhizal and nitrogen-fixing partners in aeroponic culture. A new method for sticking AM inoculum on the root yielded high mycorrhization rates. Controlled N and P nutrition achieved optimal rates of nodulation, AM inoculation and P content in plants in the aeroponics. Contrary to soil culture, mycorrhization did not stimulate nodulation in the aeroponics. Previous nodulation limited endomycorrhizal development. Growth benefits of endomycorhization involved mechanisms that were not only linked to P nutrition. Thelephora ramarioides, a fungus associated to A. Mangium was isolated and described as ectomycorrhizal. T. Ramarioides improved P and N uptake within the root system in pot culture. T. Ramarioides did not associate with A. Mangium in the aeroponics and was out-competed by G. Intraradices in pot culture. Plantation trials of bare-root saplings confirmed the feasibility of using aeroponically grown saplings for field plantations

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Ait-Abdelkader, Nadra. "Caractérisation des enzymes saccharolytiques de Zymomonas mobilis et de mutants déficients dans le métabolisme du glucose et du fructose." Aix-Marseille 1, 1993. http://www.theses.fr/1993AIX11048.

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Abstract:

L'etude physiologique de la bacterie zymomonas mobilis cultivee en presence de glucose, de fructose ou de saccharose a permis de mettre en evidence trois enzymes saccharolytiques. Ces enzymes sont visualisees apres electrophorese des proteines sur gel de polyacrylamide dans des conditions non denaturantes. Deux de ces enzymes sont extracellulaires (les saccharases b et c), la troisieme est intracellulaire (saccharase a). De plus, la saccharase b presente une activite levane saccharase. Le role de ces trois enzymes dans la croissance de z. Mobilis a pu etre elucide grace a l'isolement d'un mutant incapable de pousser sur un milieu ne contenant que du saccharose comme seule source de carbone. Cette deficience est liee a la perte des activites des saccharases b et c, la saccharase a etant par contre presente chez le mutant. Ces resultats montrent que les saccharases b et c ou l'une d'entre elles sont necessaires a la croissance sur un milieu contenant du saccharose. La deuxieme partie de la these a consiste a mettre au point une methode d'enrichissement dans le but d'obtenir des mutants deficients dans l'utilisation du glucose et du fructose

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Eustache, Isabelle. "Le développement morphologique et fonctionnel des motoneurones craniens d'embryons de rat en culture organotypique avec co-culture musculaire : interactions morphologiques et fonctionnelles." Aix-Marseille 3, 1995. http://www.theses.fr/1995AIX30084.

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Abstract:

Dans des cultures organotypiques de tranches de tronc cerebral d'embryon de rat co-cultivees avec un fragment musculaire, les motoneurones survivent, se differencient et deviennent fonctionnels en controlant la contraction de fibres musculaires neoformees. Les motoneurones sont inseres dans un reseau synaptique et developpent des proprietes intrinseques specifiques. La presence d'influences trophiques reciproques, exercees par les motoneurones sur la differentiation des fibres musculaires, et par le tissu musculaire sur la differentiation morphologique des motoneurones est demontree. Le role des afferences synaptiques et de la cible musculaire dans la mise en place de la morphologie et de la fonction du motoneurone est discute

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Mignot, Gérard. "Culture de la lignée cellulaire Vero dans des milieux synthétiques et chimiquement définis : application à la culture sur microsupports en biogénérateurs." Dijon, 1988. http://www.theses.fr/1988DIJOS035.

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Chateau, Yannick. "Co-culture compartimentée de cellules épidermiques et cellules nerveuses : modèle d'étude des interactions neuro-cutanées." Brest, 2005. http://www.theses.fr/2005BRES3108.

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Abstract:

Le traitement de l’information sensorielle suite à un stimulus externe a comme point de départ l’activité d’une population variée de récepteurs cutanés et sous-cutanés. Les corps cellulaires de ces récepteurs se situent dans les ganglions des racines dorsales (GRD). Ils sont reliés à la moelle épinière (ME) par des neurites. Le challenge pour réaliser un modèle d’étude in vitro des interactions neuro-cutanées réside dans la reproduction de la suite physiologique (peau, neurones des GRD, neurones sensitifs de la ME) et dans la formation de connexions entre cellules épidermiques et neurites des neurones pseudo unipolaires en L. Ce modèle doit intégrer dans un même espace l’ensemble de ces constituants et permettre la mise en place de connexions entre cellules nerveuses et cellules épidermiques ce qui n’a pas encore été réalisé avec les “peaux reconstruites”. Nous avons développé un modèle, intégrant cellules nerveuses (neurones en T, cellules de la ME et cellules gliales) et cellules épidermique (kératinocytes, mélanocytes et cellules de Merkel CM). Les résultats obtenus sont une croissance spécifiquement orientée des neurites, des connexions, des terminaisons nerveuses avec les kératinocytes d’une part et les CM d’autre part. Cette co-culture permet la survie des CM et l’enregistrement d’une activité des neurones en T. L’originalité de ce modèle est donc de proposer in vitro une co-culture de cellules nerveuses et de cellules épidermiques permettant leurs connexions. Ces résultats ouvrent de larges perspectives qui proposent, pour la recherche fondamentale comme pour la recherche appliquée en dermatologie, une alternative à l’expérimentation animale
The skin through its innervation is the support of the fifth sense : the touch. Exogenous stimuli are recognized at the nerve endings which represent avaried population of cutaneous receptors. Cellular bodies of those nerve endings are located in dorsal root ganglion (DRG) and connected at spinal cord by neurites The principal challenge to carry out a model for in vitro studies of the neuro-cutaneous interactions lies in the reproduction orme physiological continuation previously described (skin, neurons 0f the DRG, sensitive neurons of the spinal cord) and in the reconstruction of connections between epidermal cells and neurites of the pseudo-unipolar sensory neurons. This model must integrate in the same space all these components and allow the instatlation of connections between nervous cells and epidermal cells. This feature was not realised before with other “skin equivalent”. We have performed a model, integrating nervous cells (pseudo-unipolar sensory neurons, cells of the spinal cord and glial cells) and epidermal cells (keratinocytes, melanocytes and Merkel cells). We obtained a specifically directed growth of neurites, connections, synapse-like formation with both keratinocytes and Merkel cells. This co-culture allowed the survival of Merkel cells and the recording of an activity of the pseudo-unipolar sensory neurons. The originality of this model is thus to propose an in vitro co-culture of nervous oeIls md epidermal cells allowing their connections. These results open large perspectives from fundamental research to applied research in dermatology, as an alternative to the animal experimentation

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Ouali, Tarak. "Culture d'Escherichia coli B et de Bacillus subtils en forte concentration cellulaire." Compiègne, 1986. http://www.theses.fr/1986COMPI238.

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Abstract:

Dans la littérature, les stratégies essentielles suivies pour l’obtention d’une forte densité cellulaire sont les cultures avec addition adéquate de nutriments, y compris l’oxygène, les cultures avec ajout de substrat en fonction d’une valeur constante d’oxygène dissous, l’utilisation de l’oxygène pur avec contrôle de l’oxygène dissous, la dialyse et le recyclage cellulaire. Cependant, les contraintes observées sont : 1) le maintien d’un oxygène dissous (O. D) constant et la toxicité liée à l’utilisation de l’oxygène pur, 2) l’accumulation de métabolites inhibiteurs de la croissance, 3) l’inhibition due à des fortes pressions en CO2. Notre démarche est basée sur la réduction de la production de métabolites (acide acétique), vu qu’ils sont formés même en présence d’un excès d’oxygène, par le contrôle du taux de croissance spécifique « relatif » d’Escherichia coli par la réduction de la concentration de l’extrait de levure et le contrôle d’ajout du glucose à la fin de la culture. La production de métabolites est alors maintenue à un niveau faible et la croissance est prolongée jusqu'à 125 g/l poids sec. Cette biomasse correspond à 51-53 % de la biomasse théorique maximale. Cependant ceci ne peut être généralisé à toutes les espèces bactériennes. En effet, Bacillus subtilis croît en produisant une quantité très importante de métabolites, le rapport acétoïne /biomasse est constant ; par conséquent, la production de métabolites ne peut être contrôlée à des valeurs faibles à fortes biomasses. La biomasse maximale obtenue est de l’ordre de 60 g/l poids sec, des concentrations importantes d’acétoïne et de CO2, à la fin de la culture, sont observées.

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Fritayre, Pascale. "Culture de cellules atriales de coquille Saint-Jacques, Pecten maximus : valeur et limites du modèle. Applications en toxicologie." Brest, 2004. http://www.theses.fr/2004BRES2015.

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Abstract:

Des cultures primaires de cellules atriales de coquilles St Jacques Pecten Maximus ont été établies au cours de ce travail. Ces cultures peuvent être obtenues à partir de cellules inoculées dès l'isolement ou après cryopréservation. Une monocouche cellulaire est observée après une semaine de culture. L'utilisation de facteurs matriciels d'origine marine permet de réduire ce temps en facilitant l'adhésion. Différentes méthodes analytiques appliquées aux cultures asynchrones ou à des cellules synchronisés en transition G1/S selon une méthodologie adaptée de la littérature, montrent qu'environ 15 % de cellules inoculées sont aptes à se diviser. La croissance peut être stimulée par addition de certains compléments au milieu sans toutefois permettre l'obtention d'un lignée. Parmi les cellules adhérentes, les cardiomyocytes, que nous avons caractérisés immunocytochimiquement et electrophysiologiquement (récepteurs de type B-adrénergique et cholinergiques de type muscarinique), sont spontanément contractiles in vitro dès huit jours et le restent durant un mois. Ces cellules s'avèrent intéressantes pour étudier la toxicité de xénobiotiques en utilisant en particulier le Patch-clamp comme méthode analytique. Un deuxième type de cellules adhérentes, qui présentent des analogies structurales avec les cellules des glandes péricardiques dont la littérature signale le rôle dans la détoxication, semble intervenir dans les processus de biotransformation de phase de type I et II. Une stimulation de certaines activités enzymatiques par des inducteurs de référence et par certains contaminants du milieu marin a en effet été notée. L'ensemble de ces résultats ouvre des perspectives d'utilisation du bioessai mis en place tant au plan fondamental qu'appliqué
In this study, atrial cells primary cuture of the scallop, Pecten maximus was established. A monolayer culture can already be observed one week following the initial plating of either fresh or cryopreserved cells. Cell attachment was improved and was obtained faster when the cells were plated on marine substrate. Combined analytical techniques, tested in asynchronous cells and synchronised cells in transition G1/S, showed that about 15 % of plated cells are able to proliferate. The growth can be stimulated by supplementation of the medium with various factors but no permanent cell line have been obtained. Among adherent cells, the cardiomyocytes, characterized by both immunocytochemical and electrophysiological features (beta-adrenergic and muscarinic receptors), were able to spontaneously contract in vitro by using especially patch-clamp technique. One another kind of adherent cells, having structural similitaries with pericardial gland cells described to be important in the dexintoxication function, seems to be involved in biotransformation activities of phase I and II. Indeed, we have actually been able to stimulate these enzymatic activities by reference inductors and by some marine contaminants. Taken together, our cellular model demonstrate its potential for fundamental and applied bioessay research studies

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Fregard, Florence. "Rôle des interactions hydrophobes et électrostatiques dans l'adhésion de bactéries méthanogènes aux matériaux de faible énergie de surface." Lille 1, 1991. http://www.theses.fr/1991LIL10047.

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Abstract:

L'adhésion bactérienne aux surfaces inertes représente le paramètre déterminant qui gouverne à la fois la vitesse de démarrage et les performances finales des digesteurs de méthanisation. Ce travail constitue une étude des mécanismes impliqués dans l'adhésion initiale de bactéries méthanogènes, ou autres anaérobies, aux matériaux plastiques. Dans cette optique, nous avons caractérisé les propriétés des surfaces bactériennes et polymériques en terme de charge, d'hydrophobicité et de composition chimique à l'aide de méthodologies originales. Nous avons montré que les bactéries méthanogènes filamenteuses, de nature hydrophile, adhéraient 3 a 4 fois moins à l'ensemble des supports que les autres bactéries anaérobies et, dans tous les cas, nous avons observé une adhésion maximale au pvc. Nos essais ont montre l'intervention de l'hydrophobicité et de la charge des surfaces dans la colonisation initiale. Cependant, nos travaux sur supports de faible énergie de surface répondent à la théorie D. L. V. O. Des interactions à longue distance, les bactéries absorbant réversiblement dans le minimum secondaire alors qu'elles adhèrent de façon plus homogène et plus ferme aux supports hydrophiles et aux surfaces traitées par des cations trivalents, à des distances de séparation inférieures. Nous avons par ailleurs observé l'importance de polymères de surface, tels que le lipopolysaccharide ou l'acide lipotéichoide qui interviennent indirectement dans l'adhesion par l'intermédiaire de leurs propriétés de surface. Enfin, nous avons montré qu'il existait une compétition pour l'attachement qui varie en fonction des populations en présence et que la séquence de présentation des bactéries au support intervenait souvent dans l'adhésion subséquente

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Carbonell, Delphine. "Étude de la détoxication des milieux de culture cellulaire : application à l'élimination de l'ammoniaque." Nancy 1, 1992. http://www.theses.fr/1992NAN10171.

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Abstract:

Actuellement, la production industrielle de molécules biologiques à haute valeur ajoutée est essentiellement assurée par des cellules animales cultivées in vitro, en mode batch ou fed batch. La productivité des cultures est cependant limitée par la mort rapide des cellules, généralement attribuée à l'épuisement de nutriments et/ou a l'accumulation de métabolites toxiques. L'ammoniaque représente un des principaux composes incrimines dans la toxicité des cultures. Cinq procédés de détoxication, destines à l'éliminer en continu et stérilement des milieux, sont expérimentés: deux procédés biologiques, reposant sur la mise en œuvre d'une réaction catalysée par une enzyme, la glutamate déshydrogénase ou la glutamine synthétase, trois procédés physico-chimiques, représentés par le stripping, l'utilisation de clinoptilolite et l'application de membranes hydrophobes microporeuses. L'examen des résultats obtenus a conduit au développement des deux systèmes les plus performants, bases l'un sur l'élimination des ions ammonium par échange d'ions sur clinoptilolite, l'autre sur l'extraction de l'ammoniac à travers des membranes hydrophobes microporeuses. Leurs paramètres de fonctionnement ont été déterminés de manière à pouvoir maintenir la concentration extracellulaire de l'ammoniaque inferieure à 1 mm. Le couplage de ces deux systèmes de détoxication à des cultures d'hybridomes a permis le maintien de la concentration extracellulaire de l'ammoniaque à des faibles valeurs

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Culard, Jean-François. "Etude des annexines de l'épiderme humain normal et reconstruit in vitro." Montpellier 1, 1992. http://www.theses.fr/1992MON11160.

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Wang, Li. "Régulation de microenvironnement cellulaire par dispositifs microfluidiques et microstructuration de substrats." Paris 6, 2011. http://www.theses.fr/2011PA066189.

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Abstract:

En utilisant les techniques de microfabrication et des dispositifs microfluidiques, nous avons étudié les problèmes liés à la régulation microenvironnementale des cellules en culture. D’une part, plusieurs nouveaux types de dispositifs ont été proposés afin d’obtenir une perfusion à zéro- ou à multi-contrainte de cisaillement microfluidique. Ces dispositifs ont été utilisés soit pour une démonstration de culture à cellules uniques soit pour une analyse de morphologie, expression de gènes, ou toxicité des cellules endothéliales sous multi-contrainte de cisaillement. D’une autre part, les techniques de photolithographie conventionnelle et de micro-contact printing ont été utilisées pour la création de micro-clusters de cardiomyocytes sur une surface ou sur un réseau de multi-électrodes, permettant des mesures optiques ou électriques des excitations ou battements des réseaux de cellules cardiaques. En plus, l'intégration d’une matrice cellulaire à cellule unique dans un dispositif microfluidique a été démontrée pour créer des conditions spécifiques et favorables à la formation de réseaux cellulaires. Finalement, les problèmes de dynamique de population, d’activité de biosynthèse, et de variabilité de phénotype des levures ont été traités en utilisant les techniques de saisir des cellules uniques et de criblage à haut débit

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Dissertations / Theses on the topic 'Cornée – Cultures et milieux de culture'

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