Dissertations / Theses: 'Cytotoxicité à médiation cellulaire'

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Rouvier, Eric. "Approches d 'un mécanisme moléculaire de cytotoxicité à médiation cellulaire." Aix-Marseille 2, 1992. http://www.theses.fr/1992AIX22064.

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Abstract:

Cette these rend compte de l'exploration d'un mecanisme moleculaire de cytotoxicite a mediation cellulaire par deux approches differentes. La premiere approche a consiste a isoler des molecules presentant une distribution tissulaire aussi restreinte que possible a des cellules cytotoxiques. Cette recherche de molecules s'est faite a partir d'un sous-clone de l'hybridome cytotoxique pc60 par construction puis criblage differentiel d'une banque soustraite d'adnc. L'utilisation d'une telle approche et ses recentes evolutions techniques, les differentes etapes de construction et de criblage de la banque soustraite et les molecules obtenues sont discutees. L'une d'entre elles, ctla-8, homologue a un cadre ouvert de lecture de l'herpesvirus saimiri, est decrite plus en detail et replacee dans le contexte de genes viraux, homologues a des genes cellulaires et interferant avec le systeme immunitaire ou la mort/la survie cellulaire. La deuxieme approche a permis de montrer directement l'implication dans le systeme pc60 de fas, une molecule capable de transduire un signal de mort. Deux approches (par defaut de la molecule -dans des mutants-, ou ajout -par transfection-) ont demontre l'utilisation dans la lyse par pc60 de fas a la surface des cellules cibles. Ces resultats ont ete etendus a la composante ca#2#+-independante, specifique de l'antigene, de la lyse par des lymphocytes peritoneaux immuns. La demonstration du role de fas dans ces systemes de cytotoxicite a mediation cellulaire fournit une base moleculaire au modele de lyse par suicide induit. Une confluence des deux approches (soustraite et directe) est envisagee pour la recherche d'un ligand de fas. Enfin, l'ensemble de ces resultats est replace dans le contexte des modeles d'exocytose granulaire et de suicide induit de la cytotoxicite a mediation cellulaire

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Bret-Bennis, Lydie. "ADN extracellulaire et nucléosomes : marqueurs de cytotoxicité." Toulouse 3, 1992. http://www.theses.fr/1992TOU30135.

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Abstract:

Les phenomenes de lyses cellulaires induiraient la liberation dans le milieu extracellulaire de fragments chromatiniens. Le dosage de l'adn dans differents liquides biologiques permettrait de facon directe, peu invasive et quantitative d'apprecier l'intensite de ces phenomenes survenant in vivo. Apres administration de xenobiotiques, l'adn extracellulaire est mesure dans le sang et les urines des rongeurs (souris, cobayes) par une methode isotopique utilisant une reaction de deplacement de coupure. En parallele, lors d'etudes pilotes, la presence des lesions est verifiee par des etudes morphologiques (autoradiographies) et histologiques. Differents composes (lipopolysaccharide, bichlorure de mercure, hydroxyuree. . . ) entrainent chez la souris, l'augmentation des concentrations plasmatiques d'adn de facon dose-dependante, et les faibles doses minimales toxiques determinees soulignent la sensibilite de cette methode. Le dosage de l'adn extracellulaire permet de mettre en evidence les lesions induites, de quantifier leur intensite et de preciser leur cinetique et leur gravite en comparant ce parametre a d'autres classiquement utilises (activites enzymatiques, analyses histologiques). Le developpement d'une methode de chromatographie d'affinite utilisant les histones h#1 comme ligand de l'adn permet d'identifier par technique d'immunoempreintes et fixation de l'adn biotinyle, certaines proteines associees a l'adn circulant. L'adn plasmatique (principalement de taille de 160-200 paires de base) est associe aux histones de la core particule sous forme de mononucleosomes alteres (ubiquitinylation de l'histone h2a, multimeres constitues des histones h2a et h2b, absence probable des histones h1) et a d'autres proteines affines pour l'adn dont une proteine presentant une forte homologie avec la nucleoline. L'adn extracellulaire et les nucleosomes degrades constituent chez les rongeurs des marqueurs quantitatifs de cytotoxicite. Les phenomenes de mort cellulaire sont evalues par dosage de l'adn extracellulaire. Cette methode d'analyse toxicologique serait applicable a d'autres especes a condition de connaitre la pharmacocinetique et le catabolisme de la chromatine. Le prolongement de ces travaux serait d'etudier le role de la mort cellulaire et des fragments de degradation de la chromatine dans la physiopathologie des maladies lupiques

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Blancy, Evelyne. "Etude des interactions cis-diamminedichloroplatine (II) - épipodophyllotoxines (VP 16, VM 26) : expérimentations animales et cellulaires ; application en oncologie médicale." Toulouse 3, 1989. http://www.theses.fr/1989TOU30214.

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Abstract:

Ce travail concerne l'etude des interactions entre cis-diamminedichloroplatine (ii) et epidopophyllotoxines (etoposide et teniposide). Une premiere partie concerne des experimentations animales sur des souris bdf1 porteuses de leucemie ascitique p388 ou du carcinome pulmonaire de lewis (3ll). Si aucune activite antitumorale synergique n'a ete retrouvee sur le modele 3ll, une activite synergique a ete retrouvee sur le modele ascitique: le vm26 comme le vp16, potentialise l'activite antitumorale du cddp. Dans une deuxieme partie, l'activite cytotoxique des medicaments a ete etudiee sur deux lignees cellulaires en culture. Sur une lignee tumorale murine (3ll), une activite synergique a ete mise en evidence, principalement lorsque les cellules sont d'abord incubees avec l'epipodophyllotoxine. Sur une lignee tumorale ovarienne humaine (cal9), les interactions ont ete etudiees en utilisant le test de reduction d'un compose tetrazolium (mtt) et en appreciant l'association des medicaments pqr des isobologrammes. Seul un phenomene additif a pu etre mis en evidence, principalement lorsque les cellules sont incubees pendant 24 heures avec les deux medicaments simultanement. Dans une troisieme partie, un essai clinique de phase ii comparant la toxicite et la pharmacocinetique du vp16 selon deux protocoles d'administration (perfusion courte ou continue) a ete initie. Aucune difference significative entre les deux protocoles n'a ete mise en evidence. En conclusion, le vm26 comme le vp16, potentialise l'activite antitumorale ou cytotoxique du cddp; la maniere la plus rationnelle d'utiliser cisplatine et epipodophyllotoxines reste a preciser

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Geromin, Daniela. "La cytotoxicité à médiation cellulaire de type Natural killer et la voie membranolytique de la perforine." Paris 7, 2001. http://www.theses.fr/2001PA077256.

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Mahdi, Tarek. "Etude du rôle de p53 dans la prolifération, la différenciation et l'apoptose des cellules sanguines." Poitiers, 1995. http://www.theses.fr/1995POIT2346.

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Abstract:

Des travaux precedents avaient montre l'existence de reseaux complexes entre p53 et d'autres genes ou produits des genes. C'est ainsi que fut demontre le role antiproliferatif tres important de p53 dans la regulation de l'homeostasie de la cellule. Dans ce travail nous avons voulu analyser le role de p53 dans certaines activites biologiques. Nous avons demontre que p53 peut jouer un role: 1: dans l'apoptose qui est actuellement classee en p53-dependante et p53-independante. Nous avons demontre que le controle de p53 sur lui-meme, et son orientation vers la voie de l'apoptose ou la voie de la differenciation, est regule par le proto-oncogene mdm2. Ce travail a ete realise sur des cellules de la lignee k562, particulierement resistantes a l'induction de l'apoptose. Nous avons demontre que ces cellules peuvent subir l'apoptose d'une facon independante de p53 en utilisant la lignee k562 comme cible des cellules cytotoxiques. Nous avons egalement demontre que k562 peut aussi subir l'apoptose d'une facon dependante de p53. 2: dans la regulation de la cytotoxicite, ou nous avons demontre que les cellules effectrices (lymphocytes cd8+ et nk) perdent leur capacite d'induire l'apoptose dans les cellules cibles lorsque l'expression de p53 a ete abrogee par des oligodeoxynucleotides antisens anti-p53. 3: dans la differenciation des cellules hematopoietiques ou le taux d'expression de p53 augmente au cours de la culture cellulaire et ou l'inhibition de p53 augmente le nombre de colonies (surtout les colonies primitives). De plus nous avons demontre l'existence d'une cooperation entre p53 et rb dans cette voie

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Ho, Chen-Hsuan. "Conditions d'induction de la pathologie immune du syndrome de Griscelli dans la souris ashen déficiente en Rab27a et étude du rôle de Rab37 dans les lymphocytes cytotoxiques." Paris 5, 2007. http://www.theses.fr/2007PA05D017.

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Abstract:

Le syndrome de Griscelli se caractérise par une hypopigmentation associée dans le type 1 (SG1) à un défaut neurologique primitif résultant d'un défaut en myosine 5a, et dans le type 2 (SG2) à une dérégulation de la réponse immune résultant d'un défaut en Rab27a nécessaire à l'activité cytotoxique des lymphocytes. Notre travail a tenté de définir les conditions expérimentales permettant d'induire, dans le modèle murin ashen, la pathologie immune du SG2. L'infection par Listeria Monocytogenes du mutant ashen spontanément apparu sur le fond génétique C3H n'a pas permis de reproduire les signes du syndrome hémophagocytaire. La mutation Rab27a a alors été transférée sur les fonds génétiques C57B1/6 et Balb/c. Les conditions d'infection par le LCMV ont été récemment optimisées sur le fond C57B1/6 et ont permis d'induire les premiers signes du syndrome hémophagocytaire tel qu'observé chez les patients. Ce modèle murin permettra de tester différentes hypothèses quand aux mécanismes Griscelli syndrome is characterized by hypopigmentation associated with primitive neurological impairment resulting from myosin 5a defect in type 1 (GS1), and in type 2 (GS2) with a deregulation of the immune response resulting from defect in Rab27a, a protein required for the cytotoxic activity of lymphocytes. Our work has tried to define the experimental conditions allowing the induction, in the ashen murine model, of the immune disturbance known as hemophagocytic syndrome, which characterized GS2. Infection with Listeria Monocytogenes of the ashen mutant mice, which spontaneously occurred on the genetic background C3H, did not allow reproducing the features of the hemophagocytic syndrome. The Rab27a mutation was then transferred to the C57B1/6 and Balb/c genetic backgrounds. The experimental conditions using LCMV infection of the ashen mice on C57B1/6 background were recently settled, which allowed inducing the first signs of the hemophagocytic syndrome as observed in patients

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Terrisse, Anne-Dominique. "Modulation de l'activité des cellules tueuses naturelles par les fragments de dégradation de la chromatine." Toulouse 3, 1993. http://www.theses.fr/1993TOU30169.

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Abstract:

Les cellules tueuses naturelles sont des lymphocytes cytotoxiques intervenant dans la defense antitumorale de l'organisme et possedant une activite immunomodulatrice. Une correlation inverse a ete etablie entre l'activite cytotoxique de ces cellules et le developpement de cancers ou de lupus. Des phenomenes de mort cellulaire, responsables de la presence de fragments de chromatine dans la circulation, ont egalement ete decrits dans ces pathologies. L'existence de recepteurs pour l'adn et les nucleosomes a la surface des lymphocytes pose la question d'une relation entre la presence de fragments de chromatine dans le milieu extracellulaire et l'inhibition de l'activite tueuse naturelle. L'effet et le mecanisme d'action des fragments de degradation de la chromatine sur la cytotoxicite des cellules tueuses naturelles ont donc ete etudies. Les fragments de chromatine (adn, histones et nucleosomes) inhibent de maniere dose-dependante la cytotoxicite mediee par les cellules tueuses. L'effet inhibiteur des nucleosomes est reversible et necessite un contact direct avec les cellules. Les nucleosomes ne modifient pas durablement le potentiel cytotoxique des cellules tueuses et inhiberaient l'activite cytotoxique par interaction avec les structures membranaires des cellules. Cette etude a mis en evidence une liaison des nucleosomes aux cellules cibles tumorales, et a un moindre degre, aux lymphocytes cytotoxiques. Cette liaison est suivie d'une endocytose des nucleosomes par les cellules cibles. Les nucleosomes ne perturbent ni la reconnaissance des cellules cibles par les effecteurs, ni l'expression des molecules d'adhesion intervenant au cours de cette reconnaissance. Les nucleosomes ne modifient pas l'emission du coup lethal, responsable de la mort de la cellule cible. Une augmentation de la stabilite des conjugues effecteurs/cibles a ete mise en evidence par cytometrie de flux, en presence de nucleosomes. Ce resultat suggere que les nucleosomes pourraient inhiber le potentiel cytotoxique des cellules tueuses naturelles en diminuant leur aptitude au recyclage

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Avril, Tony. "Etude des mécanismes de résistance des cellules trophoblastiques à la cytotoxicité naturelle." Tours, 2000. http://www.theses.fr/2000TOUR4007.

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Abstract:

Pendant la grossesse, la survie du foetus dépend de l'intégrité du trophoblaste, seul tissu d'origine foetale au contact du système immunitaire maternel. Le principal objectif de ce travail a été d'étudier les mécanismes de résistance des cellules trophoblastiques, En partiuclier des cellules choriocarninolateyses (CC) (issues de la transformation maligne du trophoblaste), à la cytotoxicité naturelle (lyse nk). Dans la première partie, nous montrons que le blocage de l'interaction des molécules HLA de classe I (exprimées sur les CC) avec les récepteurs inhibiteurs CD94/NKG2 ou CD158 (exprimés sur les cellules effectrices) ne diminue pas la résistance des CC JEG-3 A la lyse nk. Ces résultats indiquent que cette résistance est essentiellement indépendante des molécules HLA de classe I, notamment d'HLA-G. Dans la deuxième partie, nous montrons : 1) Qu'en présence de PHA, les CC sont sensibles à la lyse NK ; 2) Que l'engagement des récepteurs activateurs CD16 et 2B4 exprimés par les cellules NK entraine la lyse des CC JAR dans un modèle de lyse redirigée, alors que le ligand de 2B4, la molécule CD48, n'est pas exprimé sur les CC ; 3) Que les CC sont sensibles à l'ADCC exercée par des PBL en présence d'anticorps anti-TJA (produits par les femmes de phénotype P/P qui font des avortements spontanés à répétition). Ainsi l'absence d'activation des effecteurs par les CC, due au moins en partie à l'absence d'expression de ligands des récepteurs activateurs tels que CD48, pourrait constituer un mécanisme de résistance des CC à la lyse NK. Enfin, dans la dernière partie, nous montrons que le blocage de l'interaction molécules HLA de classe I / récepteurs inhibiteurs CD94/NKG2 ou CD158 n'affecte pas la sensibilité à la lyse exercée par des PBL stimulés par l'il-2 (lyse LAK) des cellules lymphoblastoides JY et CC JEG-3, ce qui suggère que les molécules HLA de classe I régulent peu la sensibilité des cellules cibles à la lyse LAK No summary available

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Manuel, Nathalie. "Etude "in vitro" de la libération des sérine-estérases par des cellules effectrices cytotoxiques humaines au moyen d'un test enzymatique." Paris 5, 1993. http://www.theses.fr/1993PA05P042.

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Mabile, Laurence. "Lipoprotéines et athérosclérose. Oxydation et cytotoxicité des lipoprotéines. Effet protecteur des antioxydants et des acides gras : [thèse en partie soutenue sur un ensemble de travaux]." Toulouse 3, 1995. http://www.theses.fr/1995TOU30226.

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Abstract:

L'atherosclerose est une maladie multifactorielle dans laquelle les lipoprotéines de basse densité (ldl) oxydées ont un rôle prépondérant. Les ldl sont susceptibles d'être oxydées dans l'intima par les cellules de la paroi vasculaire. Les mécanismes de cette oxydation font intervenir des radicaux libres oxygènes mais la voie de production responsable de ces phénomènes reste mal connue. Divers agents d'origine endogène ou exogène (antioxydants, stéroïdes, acides gras) sont susceptibles de moduler l'oxydation et la cytotoxicite des ldl oxydées. Par ailleurs, les ldl oxydées ont des effets biologiques multiples. Elles sont captées par les macrophages, formant ainsi les cellules spumeuses, caractéristiques des lésions primaires de l'athérosclérose et ont des effets activateurs cellulaires et cytotoxiques. Le travail rapporte dans ce mémoire comprend deux parties: la première partie est une revue générale qui décrit les données récentes sur les mécanismes d'oxydation des ldl, leur cytotoxicité et les systèmes de protection contre ces phénomènes. La deuxième partie, expérimentale, rassemble les résultats obtenus sur les mécanismes d'oxydation des ldl par différents types cellulaires d'une part, et sur l'effet protecteur de certains acides gras et antioxydants sur l'oxydabilité des ldl et des chylomicrons, d'autre part. L'oxydation des ldl et la production d'ion superoxyde par les cellules endothéliales sont dépendantes de différents paramètres, en particulier de la confluence (ou prolifération) cellulaire. L'utilisation d'inhibiteurs et une méthode de destruction mitochondriale ont permis de démontrer le rôle des mitochondries dans la production du superoxyde. Les acides gras sature (palmitique) et monoinsature (oléique) diminuent l'oxydabilité et la cytotoxicite des chylomicrons 1. En revanche, les acides gras polyinsatures sont responsables de l'oxydabilité et de la toxicité des chylomicrons 1, et n'ont pas d'effet protecteur sur la cytotoxicite des ldl oxydées 2. Au niveau cellulaire, l'acide oléique protége aussi les cellules contre la cytotoxicite des ldl oxydées 2. Certains antioxydants derives de la vitamine e 3, 4, ou de stéroïdes (-estradiol) 5 sont capables d'exercer un effet protecteur a la fois en bloquant l'oxydation des ldl (et leur cytotoxicite consécutive) et en inhibant la cytotoxicite de ldl déjà oxydées (inhibition de la transduction de signaux toxiques)

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Chesné, Christophe. "Conjugués estradiol-platine : activités biologiques sur le récepteur à l'estradiol et sur des cultures de lignées cancéreuses." Nantes, 1985. http://www.theses.fr/1985NANT088P.

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Escargueil-Blanc, Isabelle. "Mort cellulaire par nécrose et/ou par apoptose induite par les lipoprotéines de basse densité oxydées dans les cellules en culture." Toulouse 3, 1995. http://www.theses.fr/1995TOU30190.

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Abstract:

Les ldl oxydees jouent un role majeur dans l'atherogenese, dans la formation des cellules spumeuses (lesions primaires ou stries graisseuses) et dans l'evolution vers des lesions plus importantes (plaque d'atherome). Des doses toxiques de ldl oxydees induisent la mort des cellules en culture, soit par necrose, soit par apoptose. La necrose se caracterise par un gonflement cellulaire, une rupture des membranes plasmiques et une lyse cellulaire entrainant le relargage du contenu intracellulaire. L'apoptose ou mort cellulaire programmee se caracterise par une condensation cytoplasmique et nucleaire, une fragmentation internucleosomale de l'adn et une fragmentation de la cellule sans alteration de permeabilite membranaire (corps apoptotiques). Nous rapportons dans ce travail que les ldl oxydees induisent une mort par necrose et/ou par apoptose en fonction du type cellulaire. La cytotoxicite est mediee par un pic calcique caracteristique (intense, soutenu et retarde dans le temps). L'egta bloque les deux types de mort cellulaire demontrant ainsi le role d'un influx calcique dans la cytotoxicite. Les cellules lymphoblastoides incubees avec des doses toxiques de ldl oxydees, meurent a la fois par necrose et par apoptose (febs lett. , 1992, 305, 155-159). Il est possible d'inhiber la necrose sans bloquer l'apoptose par des inhibiteurs de proteases, alors que les inhibiteurs d'endonucleases bloquent l'apoptose sans inhiber la necrose. Ceci suggere l'existence de deux voies calcium dependantes, l'une proteolytique aboutissant a la necrose, l'autre endonucleolytique aboutissant a l'apoptose (faseb j. , 1994, 8, 1075-1080). D'autre part, dans les cellules endotheliales, les ldl oxydees induisent une apoptose massive avec une activation d'endonucleases et de transglutaminase sans activation de proteases. Les inhibiteurs de synthese proteique inhibent l'apoptose induite par les ldl oxydees dans les cellules endotheliales. Enfin, certains antioxydants (vitamine e, trolox, flavonoides) protegent les cellules contre la toxicite (a la fois necrose et apoptose), induite par les ldl oxydees

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Bielawska, Aleksandra. "Cytotoxicité des cellules tueuses naturelles vis à vis des cellules endothéliales organospécifiques : vers une immunothérapie tumorale." Thesis, Orléans, 2009. http://www.theses.fr/2009ORLE2008/document.

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Abstract:

Plusieurs mécanismes peuvent réduire l’angiogenèse tumorale d’où les stratégies visant à bloquer les cellules endothéliales (CE). Les cellules tueuses naturelles (NK) (natural killer cells) stimulées, s’arment pour l’élimination des cellules « dangereuses ». Notre hypothèse est qu’en conditions pathologiques (tumeur), les CE, acteurs de l’angiogenèse tumorale seraient reconnues comme telles et candidates à l’attaque par les NK. Les interactions entre les NK et les CE sont abordées à l’aide de CE humaines in vitro, quant aux mécanismes moléculaires de l’adhésion des NK en conditions statiques et conditions de flux. Ceci montre que les NK activées par l’IL-2 reconnaissent et adhérent aux CE selon leur origine tissulaire. Ce mécanisme est indépendant des sélectines mais dépend soit des intégrines, soit des co-récepteurs similaires aux lectines de type C. La cytotoxicité des NK vis-à-vis des CE s’exerce par la voie perforine-granzyme. En outre, stimulées par l’IL-2, les NK induisent la translocation de Bid et libération du cytochrome C dans les CE cibles lesquelles expriment les récepteurs de “mort”, voie alternative d’apoptose. Ce modèle in vitro est validé avec des NK du sang humain. A visée in vivo, les expériences réalisées avec des CE murines et des NK de la rate de souris indiquent que l’efficacité des NK activées par l’IL-2 est directement reliée à leur adhésion, laquelle dépend de l’origine tissulaire des CE. Nous démontrons que l’IL-12 (interleukine connue pour inhiber l’angiogenèse tumorale) active les NK en synergie avec l’IL-2. Les NK reconnaissant et tuant les CE in vitro suggère l’hypothèse qu’in vivo elles inhibent l’angiogenèse tumorale There are several mechanisms by which tumor angiogenesis may be reduced. They are addressed to tumor endothelial cell (EC) to block their activation and proliferation. Among the natural protection mechanisms, natural killer (NK) cells play an important role. Stimulated NK cells may eliminate potentially “dangerous” cells. Hence, we hypothesized that ECs involved in tumor angiogenesis may be recognized as “dangerous” cells and killed by NK cells. First, the adhesive interactions between NK cells and ECs were investigated. Using human in vitro cell lines, molecular mechanisms of NK cells adhesion to ECs under static and flow in vitro conditions were examined, showing that IL-2 activated NK cells were able to adhere to ECs. The molecular mechanism was shown not to be selectin - dependent but integrin and/or C type lectin like - dependent. Subsequently, cytotoxicity of NK cells toward ECs was analyzed. Its molecular mechanism was mainly perforin-granzyme dependent. NK cells were shown to induce in target ECs Bid translocation and cytochrome c releasing. To validate in vitro cellular model most of these experiments were repeated with freshly isolated human blood NK cells. The in vivo approach necessitated that adhesion and cytotoxicity were performed using murine ECs lines and freshly isolated NK cells from murine spleen. It was found that IL-12 synergizes with IL-2 to stimulate NK cells killing activity toward ECs. The demonstration that, under specific conditions stimulated NK cells are able to kill ECs in vitro allows hypothesizing that in vivo NK cells may participate in tumor angiogenesis inhibition

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Campigna, Emmanuelle. "Biomolécules innovantes pour la thérapie des cancers." Montpellier 1, 2009. http://www.theses.fr/2009MON1T026.

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Abstract:

Les cellules Natural Killer (NK) sont des cellules du systèmes immunitaire qui ont un rôle crucial dans l'élimination des cellules transformées lors des stades précoces de la tumorigénèse. L'immunosurveillance anti-tumorale médiée par les cellules NK dépend de la balance entre les signaux activateurs et inhibiteurs résultant de l'interaction entre les ligands exprimés par les cellules tumorales et les récepteurs de surface des cellules NK. Le récepteur NKG2D est un des récepteurs activateurs constitutivement exprimé par les cellules NK. Ce récepteur lie divers lignands dont MICA (MHC-1 Chain-related protein A) et Rae1δ (Retinoic acid early transcript 1) qui sont exprimés respectivement par les cellules transformées humaines et murines. Les cellules NK expriment aussi des récepteurs s'associant à la partie Fc des anticorps (Ac) (FcƴR). Ces récepteurs sont responsables du mécanisme de cytotoxicité dépendante des Ac qui est notamment activé par les Ac monoclonaux utilisés en thérapie anti-cancéreuse. Nous avons produit les biomolécules recombinantes à l'aide de fragments d'Ac anti -tumoraux dans le but de restaurer les ligands MICA ou Rae1-δ à la surface des cellules tumorales et de façon exogène. Nous avons démontré que les cellules tumorales associées aux biomolécules sont efficacement lysées par les cellules NK. Nous avons également montré que les biomolécules humaines induisent une augmentation synergique de la lyse des cellules tumorales lorsqu'elles sont associées à des Ac thérapeutiques et en présence de cellules mononucléées du sang périphérique non activées (hPBMCs). In vivo, la biomolécule murine composée du ligand Rae1-δ a un effet inhibiteur sur la croissance tumorale de souris immunocompétentes greffées avec des cellules cancéreuses syngéniques Natural Killer (NK) are immune cells playing crucial role in the transformed cell elimination at carly stage of tumorigenesis. It is now well established that NK cells participate by their constitutive expression of Fcƴ receptor to the antibody dependant celle cytotoxicty (ADCC) phenomenom and by so to the efficacy of cancer treatment with anti-tumor naked monoclonal antibodies (mAbs). NKG2D (NK Group 2-D) is one of the other constitutive NK cells activator receptors expressed by NK cell. This receptor binds several ligands including MICA (MHC classI Chain-related protein A) in human and Rae1-δ (Retinoic acid early transcript 1) in mice. We produced recombinant biomolécules based on anti-tumor antibody fragment directed against HER2 or CEA and both murine and human NKG2D ligands with the goal to immunotarget and increase the presence of these ligands at the tumor cell membrane. In vitro, tumor cells incubated with these purified biomolecules showed positive staining for NKG2D ligands and were more efficiently lysed by NK cells. More importantly, we demonstrated that these biomolecules can act in combination with naked mAbs to generate additive cytotoxicity against tumor cells by noon activated hPBMCs. In vivo, after intravenous injection, biomolecules showed specific tumor localization. In immunocompetent mice, the murine anti-HER2-RAE1 δ biomolecule inhibited syngeneic tumor development

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Le, Phuong Mai. "Etudes chimique et biologique de trois plantes vietnamiennes : rhamnus nepalensis, trichosanthes tricuspidata, connarus paniculatus." Paris 5, 2001. http://www.theses.fr/2001PA05P613.

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Abstract:

La première plante étudiée, Rhamnus nepalensis, a révélé, dans le cadre d'une recherche systématique de cytotoxicité menée dans le Service de cultures cellulaires de l'ICSN à Gif, une activité forte sur cellules KB pour l'extrait des fruits, principalement. Des chromatographies répétées ont conduit à isoler des anthraquinones et enthrones dont certaines étaient connues, ainsi que des bianthrones nouvelles pour la plupart. L'impossibilité de déterminer la stéréochimie des carbones de jonction des deux monomères laisse planer une incertitude sur l'identification exacte de ces molécules. Une synthèse chimique par des méthodes classiques a permis d'obtenir des dimères et de les comparer aux molécules isolées de la plante, et d'effectuer une étude des relations structure-cytotoxicité. La deuxième plante, Trichsanthes tricuspidata, avait été récoltée à la suite de renseignements d'utilisation traditionnelle. Les essais préliminaires de cytotoxicité sur cellules KB, et un fractionnement bioguidé ont permis d'isoler à partir des précarpes des fruits. . . Plusieurs cucurbitacines dont deux, la tricuspidatine et la 2-0-glucosylcucurbitacine J, sont nouvelles. . .

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Constans, Joël. "Hyperlymphocytose CD8 au cours de l'infection par le virus de l'immunodéficience humaine : étude de la cohorte du groupe d'épidémiologie clinique du sida en Aquitaine." Bordeaux 2, 1991. http://www.theses.fr/1991BOR23046.

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Leroy, Elisabeth. "Etude de la signification fonctionnelle des lymphocytes t cd8+/cd57+ après greffe de moelle osseuse allogènique chez l'homme." Paris 7, 1991. http://www.theses.fr/1991PA077054.

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Abstract:

Les lymphocytes de certains receveurs d'une moelle osseuse allogènique, testés à long terme, exercent une fonction suppressive sur la production d'immunoglobulines induite in vitro par le pokeweed mitogen. Les cellules responsables de ce phénomène sont de petits lymphocytes t de forte densité, portant les marqueurs cd8 et cd57 mais non pas les marqueurs d'activation cd25 et hla-dr. Les lymphocytes t cd8, cd57 positifs sont également capables de supprimer la prolifération de lymphocytes du sang périphérique induite par le pokeweed mitogen mais non pas par les antigènes spécifiques. En fait, stimulés par le pokeweed mitogen ou la concanavalin a, ils développement en quelques jours une cytotoxicité de type lectine dépendante. Cette cytotoxicité peut être également induite en quarante huit heures après activation par l'interleukine-2 seule. La chaîne bêta du récepteur pour l'interleukine-2 exprimée seule à la surface des cellules tcd8, cd57 positives est à l'origine du signal de différenciation cytolytique, un anticorps anti-chaîne bêta bloquant la cytotoxicité tandis qu'un anticorps anti-chaîne alpha reste sans effet

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Olivier, Magali. "Etude de la fonctionnalité du suppresseur de tumeur p53 dans les cellules tumorales." Montpellier 2, 1998. http://www.theses.fr/1998MON20045.

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Mezghani-Abdelmoula, Sana. "Etude histobiochimique et électrophysiologique de la cytotoxicité de Pseudomonas fluorescens sur les neurones granulaires cérébelleux de rat." Rouen, 2004. http://www.theses.fr/2004ROUES041.

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Abstract:

Pseudomonas fluorescens est une bactérie psychrotrophe saprophyte abondante dans l'environnement. En milieu hospitalier, elle s'avère capable de s'adapter à 37ʿC et de se comporter comme un pathogène opportuniste, responsable d'infections périphériques. Certaines souches de P. Fluorescens synthétisent une cholinestérase et/ou une protéine de liaison de l'acide ?-aminobutyrique (GABA) de haute affinité, conduisant vraisemblablement à des disfonctionnements au niveau du système nerveux central (SNC). L'ensemble de ces données nous a conduit à évaluer le risque pathogène de cette espèce au niveau du SNC. Les résultats montrent que P. Fluorescens MF37 adhère de façon spécifique à la membrane cytoplasmique des neurones corticaux, des cellules gliales et des neurones granulaires du cervelet de rat. Le comportement d'adhérence de MF37 aux cellules du tissu nerveux central est assez semblable à celui de Pseudomonas aeruginosa PAO1, souche responsable d'infection au niveau du SNC. Cette adhérence s'accompagne d'importantes modifications morphologiques suggérant un engagement des cellules eucaryotes dans un processus apoptotique. L'adhérence de MF37 au niveau des neurones en grains est suivie d'une internalisation de la bactérie dans le compartiment cytoplasmique. Parallèlement notre étude montre que MF37 est capable de provoquer au niveau du neurone en grains, une synthèse rapide (3h) et optimale du monoxyde d'azote(NO). La quantité de NO libérée au bout de 24h en la présence de la bactérie est nettement plus élevée que celle obtenue en la présence de son Lipopolysaccharide (LPS)pour une même durée d'incubation. Ceci montre que la bactérie est beaucoup plus cytotoxique que son LPS seul et qu'il existe d'autres facteurs de virulence que le LPS qui contribuent à la cytotoxicité de MF37. L'utilisation de la technique du patch-clamp dans la configuration " cellule entière " a révélé qu'une incubation avec la bactérie (106 UFC/ml, 4h)ou avec son LPS seul (200ng/ml,3h) dépolarise fortement les neurones en grains. Le LPS exerce un effet inhibiteur sur les courants de la rectification retardée et transitoire de type A. Le LPS ne modifie pas la probabilité d'ouverture des canaux K+ de la rectification retardée et de type A, et les propriétés d'inactivation du courant de type A. La diminution de ces deux courants est donc probablement liée à une diminution de nombre de canaux K+ fonctionnels au niveau du neurone en grain. Ainsi, la dépolarisation provoquée par MF37 ou son LPS, essentiellement induite par une diminution des courants des fuites, est renforcée par la réduction de ces deux courants potassiques majeurs. Cette dépolarisation et l'élévation de la synthèse de NO seraient responsable de la mort du neurone en grain notamment à travers une activation prolongée du récepteur N-méthyl-D-aspartate(NMDA). En conclusion, notre étude démontre que P. Fluorescens possède une activité cytotoxique sur des neurones en culture. Ceci apporte un argument appuyant le risque infectieux de cette espèce vis-à-vis du système nerveux central.

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Ottones, Florence. "Rôle des lymphocytes T Vgamma9Vdelta2 dans l'infection par la bactérie "Brucella"." Montpellier 2, 2000. http://www.theses.fr/2000MON20129.

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Abstract:

La sous-population de cellules t v9v2, normalement minoritaire dans le sang, augmente de maniere drastique dans de nombreuses infections par des pathogenes intracellulaires, dont brucella. Le role de ces cellules dans l'immunoprotection ou dans la pathogenese des maladies induites par ces pathogenes n'est pas connu. Cette population est polyclonale et reconnait, de maniere croisee, divers antigenes non peptidiques, parmi lesquels certains sont synthetises de maniere naturelle par les pathogenes. Nous avons recherche et purifie, a partir d'extraits de brucella suis, une fraction non peptidique stimulant la proliferation des cellules t v9v2. Nous avons montre que des surnageants de monocytes autologues infectes par brucella activent egalement ces cellules. Nous avons alors etudie le role direct des cellules t v9v2 sur des monocytes infectes par brucella. Nous avons montre que les lymphocytes t v9v2 actives bloque a distance la multiplication bacterienne intracellulaire, sans entrainer la lyse des macrophages, en secretant des facteurs solubles, notamment du tnf- et de l'ifn-. Elles exercent aussi une cytotoxicite contre les monocytes infectes, dependante du contact entre les deux populations cellulaires. Les cellules t v9v2 pourraient donc jouer un role determinant en bloquant la multiplication intracellulaire des brucella et/ou en lysant leur cellule hote, les exposant ainsi aux attaques exterieures. L'etude de la reponse de ces cellules dans l'infection par brucella permettra d'envisager de nouvelles strategies vaccinales faisant intervenir des antigenes non peptidiques contre la brucellose humaine mais egalement contre d'autres infections par des pathogenes a developpement intracellulaire.

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Méré, Jocelyn. "L'exotoxine A de Pseudomonas aeruginosa : Du mécanisme d'insertion à l'amélioration de l'activité cytotoxique." Montpellier 2, 2004. http://www.theses.fr/2004MON20163.

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Paoletti, Mathieu. "Caractérisation de deux protéases chez le champignon filamenteux Podospora anserina : mise en évidence d'une relation entre l'incompatibilité végétative et la réponse aux conditions de carence nutritionnelle." Bordeaux 2, 1997. http://www.theses.fr/1997BOR28503.

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Rodien, Patrice. "Anticorps et autoimmunité thyroïdienne : rôle dans la destruction cellulaire : étude des antigènes cibles." Lyon 1, 1996. http://www.theses.fr/1996LYO1T123.

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Olivier, Stéphane. "Développement de la plateforme cellulaire EB66 dérivée de cellules souches embryonnaires de canard pour la production industrielle d’anticorps thérapeutiques à activité ADCC améliorée." Nantes, 2010. http://www.theses.fr/2010NANT33VS.

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Abstract:

Le marché des anticorps monoclonaux (Acm) présente la croissance la plus forte du secteur pharmaceutique. Mais le coût prohibitif des traitements impose le développement de molécules plus actives et moins onéreuses. Une des stratégies repose sur l’amélioration de l’activité ADCC (antibody-dependent cell cytotoxicity) permise par le contrôle de la fucosylation des Acms. Les cellules EB66, dérivées de cellules souches embryonnaires de canard, ont des atouts règlementaires et industriels uniques: elles sont génétiquement stables, immortelles et sont capables de croître à de fortes densités en milieu sans sérum. De plus, les espèces aviaires produisant naturellement des anticorps peu fucosylés, la cellule EB66 pourrait constituer une plateforme précieuse pour la production d’Acm à activité ADCC renforcée. Ce travail a consisté à établir et à optimiser les technologies requises à une production industrielle d’Acm thérapeutiques dans la cellule EB66. Un procédé de sélection de clones producteurs a été développé. L’optimisation d’un vecteur d’expression spécifique associée au développement du procédé de production ont permis d’atteindre un rendement supérieur à 1 g/L. Ces Acm ont présenté une glycosylation comparables à ceux produits en cellules de hamster CHO à l’exception d’un contenu en fucose naturellement réduit. Ce faible taux de fucose a été associé à une activité ADCC améliorée. Egalement, la capacité de fucosylation des clones producteurs semble être corrélée avec le niveau d’expression de l’alpha 1,6-fucosyltransférase. La cellule EB66 possède ainsi le potentiel pour devenir une plateforme de production industrielle d’Acm thérapeutique à forte activité cytotoxique Monoclonal antibodies (mAbs) represent the fastest growing class of pharmaceuticals. However, prohibitive therapeutic costs call to develop cheaper and more active molecules. To this end, one of the promising strategies is to enhance mAbs efficacy through an improved antibody dependent cell cytotoxicity (ADCC) correlated with mAbs fucosylation level. EB66 cell line, a duck embryonic stem cell-derived substrate, displays unique regulatory and industrial features: they are genetically stable, immortal, and reach high cell densities in serum-free medium. The fact that avian species have been described to naturally produce low-fucosylated antibodies prompted the investigation on the use of the duck EB66 cells for the production of mAbs with reduced fucose content and enhanced ADCC activity. The aim of this work was to establish and optimize technologies dedicated to the development of the EB66 cellular platform for the production of therapeutic mAbs. A selection procedure has been developed to isolate producer clones. A yield titer higher to 1 g/l has been reached thanks to the optimization of a specific expression vector associated to the development of the production process. The mAbs produced on EB66 cells display a glycosylation profile comparable with mAbs produced on the Chinese hamster ovary cells, with a naturally reduced fucose content resulting in a strongly enhanced ADCC activity. Furthermore, we observed a correlation between mAbs fucosylation and expression level of the alpha 1,6-fucosyltransferase within producer clones. The EB66 cells have therefore the potential to evolve as a novel cellular platform for the production of high potency therapeutic antibodies

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Fitoussi, Guylène. "Cytotoxicité induite par les lipoprotéines de basse densité (LDL) oxydées sur cellules en culture. Rôle du calcium : [thèse en partie soutenue sur un ensemble de travaux]." Toulouse 3, 1994. http://www.theses.fr/1994TOU30109.

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Abstract:

La première partie est une revue générale sur le rôle du calcium dans la mort cellulaire et sur le rôle des ldl oxydées dans l'atherogenese. L'homéostasie calcique intracellulaire est maintenue grace à divers agents et mécanismes cellulaires car le calcium libre cytosolique joue un rôle majeur dans la régulation des fonctions cellulaires. La dérégulation de l'homéostasie calcique intracellulaire aboutissant à une élévation soutenue de la concentration de calcium peut induire la mort cellulaire. Les molécules induisant un stress oxydatif sont à l'origine d'une accumulation calcique qui semble être la cause de leur toxicité. Les ldl oxydées sont impliquées dans le développement des étapes précoces de l'atherogenese (formation des cellules spumeuses). Elles pressentent des propriétés biologiques diverses dont une forte cytotoxicite sur les cellules en culture. Le mécanisme de toxicité des ldl oxydées est encore inconnu mais nous formulons l'hypothèse que le calcium pourrait jouer un rôle dans ce mécanisme, comme pour les agents oxydants. Nous avons démontre que les ldl oxydées induisent un pic calcique cytosolique dans les cellules endothéliales d'aorte bovine. Ce pic calcique apparaît plusieurs heures après le début du contact avec les ldl oxydées, est soutenu dans le temps (plusieurs heures), et intense. Une diminution concomitante du pH cytoplasmique est observée ainsi que le début de la cytotoxicite (febs lett. 1992, 299, 60-65). Nous avons également montre que les ldl oxydées induisent une contraction des cellules de muscle lisse qui coïncide avec le pic calcique cytosolique. Nous avons ensuite étudie l'effet cytoprotecteur de bloqueurs calciques (dihydropyridines), et de la vitamine e et dérives. La nisoldipine bloque le pic calcique et la cytotoxicite consécutive (biochem. Pharmacol. 1992, 44, 2379-2386). . .

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Fortin, Hélène. "Lepista inversa (Scop. )Patouillard (tricholomataceae) : études chimiques et évaluation de l'activité antitumorale." Rennes 1, 2002. http://www.theses.fr/2002REN10049.

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Abstract:

Suite à un criblage sur plusieurs espèces de champignons vis à vis de lignées tumorales murines et humaines, Lepista inversa a été particulièrement étudié. Sur le plan chimique l'étude de Lepista inversa a permis l'isolement d'adénosine et d'urée et l'isolement d'un composé cytotoxique, la clitocine. La fraction apolaire a permis l'analyse des composés volatils contenus dans le champignon et a mis en évidence le présence de composés chlorés. Des composés lipidique ont également été isolés et identifiés. Sur le plan biologique, après une étude de cytotoxicité in vitro, des essais anticancéreux in vivo ont été réalisés avec la clitocine sur le modèle murin.

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Carayon, Pierre. "Etude de l'interaction de la chaîne A de ricine avec la membrane cellulaire : influence de sa présentation par des anticorps monoclonaux sur son activité cytotoxique." Montpellier 1, 1992. http://www.theses.fr/1992MON13522.

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Zurbonsen, Katja. "Activité de dérivés de l'imidazo[1,2-a]pyrazine sur la prolifération et la différenciation des cellules mégacaryoblastiques humaines de la lignée Dami." Montpellier 1, 1996. http://www.theses.fr/1996MON13521.

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Schrive, Luc. "Traitement de suspensions biologiques complexes par champs électriques pulsés : Etude des mécanismes de transfert d'énergie." Montpellier 2, 2004. http://www.theses.fr/2004MON20154.

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Billecocq, Agnes. "Interaction in vitro de lipides exogènes avec la membrane externe des schistosomules de Schistosoma mansoni." Paris 7, 1985. http://www.theses.fr/1985PA077007.

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Abstract:

Les phénomènes d'immunité parasitaire ont fait l'objet de nombreux travaux. Ceux-ci ont concerné non seulement les modes de résistence de l'hôte aux parasites, mais également les processus qui permettent aux parasites d'échapper aux moyens de défense, immune ou non, de leur hôte. En ce qui concerne les mécanismes de résistance des parasites à l'attaque de l'hôt, plusieurs hypothèses ont été avancées. Dans le cas particulier de Schistosoma mansoni, Smithers et coll. Avaient évoqué un masquage des antigènes du parasite par des antigènes glycolipidiques provenant de l'hôte après avoir observé la présence de lhaptène d Forssman à la surface des parasites adultes prélevés chez la souris. Les schistosomules, formes jeunes du parasite, cultivés en présence de globules rouges, acquièrent simultanément ce glycolipide et une plus grande résistance à l'action léthale en présence de complément de certains des anticorps dirigés contre eux. Nous nous sommes proposés dans ce travail : d'analyser par des méthodes immunocytochimiques les conditions dans lesquelles divers haptènes lipidiques peuvent être acquis puis éliminés par la surface d'un parasite, de rechercher si l'acquisition de els haptènes ou des lipides de structure des membranes naturelles peuvent exercer une influence sur la résistance de ce parasite à ses anticorps léthaux en présence du complément. Notre modèle d'étude a été Schistosoma mansoni et notre modèle de présentation des lipides à ce parasite, des membrans artificielles, liposomes, ou des membranes naturelles

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Espinosa, Éric. "Activation et mode d'activation des lymphocytes T(gamma )9(delta)2 humains par les phosphoantigènes." Toulouse 3, 2002. http://www.theses.fr/2002TOU30212.

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Kazma, Ihab. "Modulation de l'alloréactivité et des fonctions des cellules dendritiques humaines par différentes populations de lymphocytes T préactivés." Thesis, Tours, 2014. http://www.theses.fr/2014TOUR3301.

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Abstract:

Notre équipe a démontré précédemment que les cellules dendritiques (DC) traitées par l’Acide Mycophénolique (DC-MPA) induisaient des lymphocytes T (LT) CD4+ régulateurs (iTreg). Dans ce travail, nous avons démontré que les iTreg supprimaient l’allocytotoxicité des LT CD8+ indépendants des LT CD4+. D’autre part, nous avons montré que des LT préactivés en conditions inflammatoires induisaient via CTLA-4 la synthèse d’IL-12 par les DC. Le blocage de CD28 dans les mêmes conditions inhibait la production d’IL-10 et d’Interferon-g mais n’affectait pas celle d’IL-12. Enfin, des LT préactivés par des DC allogéniques différenciées en présence d’IL-10 (DC-10) étaient hyporéactifs, mais de façon surprenante, étaient dénués d’activité régulatrice. Ce travail a montré pour la première fois chez l’homme la capacité des Treg induits à réguler l’allocytotoxicité des LT CD8+. Il suggère aussi que CTLA-4 exprimée par des LT préactivés orientait la réponse immunitaire vers Th1, via un ligand sur la DC, non commun avec CD28 This work has studied several aspects of the regulation of the immune response in human. Works in our laboratory have previously demonstrated that Mycophenolic Acid-Treated Dendritic Cells (MPA-DC) induced CD4+ regulatory T cells (iTreg). In this work and for the first time in human, we demonstrated that allospecific iTreg suppressed helpless CD8+ T-Cells allocytotoxicity. On the other hand, we have shown that preactivated T-Cells in inflammatory conditions induce IL-12 synthesis by DC through CTLA-4 engagement. Blockade of CD28 in this interaction inhibited the production of IL-10 and Interferon-g without affecting that of IL-12. Finally, allogeneic DC differentiated in the presence of IL-10 (DC-10) induced T cell hyporesponsiveness without any regulatory activity. This work has highlighted the ability of allospecific iTreg to regulate CD8+ T-Cells allocytotoxicity and suggested that the engagement of CTLA-4 expressed by preactivated T cells polarized the immune response towards Th1, via a ligand on DC, different from that of CD28

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Juompan, Laure. "Etude des interactions "lipoprotéines de basse densité/système immunitaire" : sur la fonction tueuse naturelle et au cours du sida." Toulouse 3, 1993. http://www.theses.fr/1993TOU30204.

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Abstract:

Un prealable a l'utilisation des lipoproteines de basse densite (ldl) et des ldl modifiees comme transporteurs de medicaments immunotropes est la connaissance de leurs interactions avec les cellules immunes. Le but de ce travail etait d'etudier: 1- les effets des ldl natives et modifiees sur la fonction natural killer (nk) qui est impliquee dans les defenses antitumorales et antivirales, 2- l'activite des recepteurs des ldl et des ldl modifiees, a la surface des lymphocytes t helper et des monocytes au cours de l'infection par le vih. 1- les ldl modifiees par acetylation et dans une moindre mesure les ldl natives, inhibent a forte concentration la fonction nk de l'homme. L'inhibition par les ldl modifiees est due a l'acetylation de la molecule d'apolipoproteine b. Elle est correlee a une endocytose des ldl modifiees par les lymphocytes cd56#+ responsables de la fonction nk. L'endocytose assuree par les lymphocytes est dependante de la concentration en lipoproteines, saturable et inhibable par les ldl acetylees et les ldl froides. Elle est environ 50 fois inferieure a l'endocytose des ldl acetylees par les monocytes. 2- l'etude de l'endocytose des ldl par les lymphocytes infectes in vitro ou preleves chez des sujets infectes par le vih montre que: -l'endocytose des ldl augmente fortement lorsque les lymphocytes t sont actives, - l'infection ne perturbe pas l'endocytose assuree par les lymphocytes t cd4#+ et t cd8#+. De la meme facon, l'endocytose des ldl modifiees par les monocytes des sujets infectes n'est pas alteree. Au contraire, elle augmente au cours de l'evolution de la maladie. Puisque les lymphocytes t actives surexpriment le recepteur des ldl et que la presence du virus vih n'abaisse pas l'efficacite de l'endocytose des ldl par les lymphocytes cd4#+ ni celle des ldl modifies par les monocytes, leur utilisation comme transporteurs de medicaments antiviraux vers ces cellules cibles du virus vih peut etre envisagee

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Winnock-Garcia-Manzano, Maria. "Caractérisation phénotypique, morphologique et fonctionnelle de la population lymphocytaire hépatique humaine." Bordeaux 2, 1993. http://www.theses.fr/1993BOR28237.

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Bekhti-Erraziqi, Khadija. "Interactions entre les phagocytes murins et les sporozoi͏̈tes d'Eimeria falciformis var. Pragensis ; étude in vitro." Montpellier 2, 1990. http://www.theses.fr/1990MON20180.

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Abstract:

L'interaction in vitro des sporozoites d'eimeria falciformis var. Pragensis et des cellules phagocytaires, macrophages et neutrophiles prelevees du peritoine des souris indemnes ou infectees, est etudiee. Une activite anticoccidienne, lyse intracellulaire des sporozoites par les macrophages, ou extracellulaire par les polymorphonucleaires neutrophiles, est demontree. Dans le systeme des macrophages, cette activite n'est observee, ni en presence du serum immun decomplemente, ni avec des macrophages appartenant a des souris vierges. Cependant, elle est obtenue avec des macrophages immuns d'une part ou normaux mais pretraites par du milieu conditionne ou certaines cytokines (rifn , gm-csf, rifn , tnf) d'autre part. Un pretraitement de ces macrophages par la chloroquine inhibe la digestion des parasites et conduit a leur accumulation dans les cellules. Des experiences d'immunoadsorption montrent que les anticorps actifs dans ce systeme sont des igg2a. Dans le systeme des neutrophiles (e/t>2/1), la lyse est observee apres 6 heures d'incubation. Elle depend de la presence des cations mg#2#+ et ca#2#+ dans le milieu. Des experiences d'inhibition de la fonction de ces cellules par la dexamethasone ou l'inhibition des mecanismes de la lyse par differents agents ont montre que l'activite anticoccidienne des pmn est reelle et qu'elle fait intervenir des anions peroxides et des secretions enzymatiques. Deux acmo c20-3 (igg2a), d14-5 (igg1) sont actifs dans les deux systemes. Ces acmo reconnaissent les memes proteines de 27-30 kda. Celles-ci seront purifiees, injectees a des animaux hotes afin de determiner leur capacite de protection contre les infections ulterieures

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Bouachour, Thomas. "Activation des cellules Natural Killer par les endocannabinoïdes Anandamide et 2-Arachidonoyl-glycérol." Phd thesis, Université d'Angers, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01003790.

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Abstract:

Les endocannabinoïdes, anandamide (AEA) et 2-arachidonoylglycérol (2-AG), appartiennent au système endocannabinoïde et sont impliqués dans la régulation de nombreux systèmes biologiques. Ils ont un rôle dans la modulation du système immunitaire et la défense anti-tumorale. Dans cette étude, nous avons montré que l'AEA et le 2-AG peuvent moduler l'activation des cellules Natural Killer CD56 + CD3- (NK) et des cellules NK92. A de faibles doses, ils potentialisent la production d'IFN γ induite par des doses suboptimales d'IL-12, d'IL-15 et d'IL-2. En outre, l'AEA et le 2-AG potentialisent la cytotoxicité des cellules NK. Des expériences de quantification des transcrits codant FasL, TRAIL, perforine et granzyme et des expériences d'inhibition indiquent que cette augmentation de la cytotoxicité est corrélée à une augmentation de l'expression de FasL, tandis que la production de granzyme, de perforine et l'expression TRAIL reste inchangées. Les effets des endocannabinoides sur les cellules NK sont inhibés en présence d'un antagoniste du récepteur endocannabinoidien de type 2 (CB2). Ces travaux in vitro on été confirmés in vivo sur un model de tumeur murine. Les cellules NK murines stimulées ex-vivo par les endocannabinoides et réinjectées en intra-tumoral, induisent un ralentissement significatif de la croissance tumorale Ces résultats montrent pour la première fois que les endocannabinoïdes AEA et 2-AG utilisées à faible dose sont impliqués dans la modulation des activités régulatrices (objectivée par la production d'IFN γ) et cytotoxiques des cellules NK.

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El, Costa Hicham. "Cellules NK utérines humaines du 1er trimestre de gestation : fonctions effectrices et leur régulation." Toulouse 3, 2009. http://thesesups.ups-tlse.fr/720/.

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Abstract:

Les cellules Natural killer (NK) humaines sont massivement recrutées au site d'implantation embryonnaire et constituent la population dominante de cellules immunitaires d'origine maternelle dans l'utérus en début de gestation. Elles possèdent un potentiel cytotoxique limité et parfaitement contrôlé (contrairement aux cellules NK du sang périphérique) évitant ainsi toute menace pour le fœtus. Le but de notre travail a été d'étudier les mécanismes moléculaires qui contrôlent la fonction cytotoxique des cellules NK utérines en début de gestation. Nous avons tout d'abord caractérisé le phénotype des cellules NK utérines au niveau de la decidua basalis (dNK) de 1er trimestre de gestation. Contrairement aux cellules NK du sang périphérique (PB-NK), les cellules dNK expriment un répertoire de récepteurs activateurs et inhibiteurs unique et très conservé chez tous les individus. Nous avons ensuite étudié l'implication de différents récepteurs activateurs et inhibiteurs dans la régulation des fonctions effectrices des cellules dNK. Nous avons ainsi mis en évidence que le potentiel cytotoxique des cellules dNK était médié par l'engagement spécifique du récepteur activateur NKp46, et à un niveau moins élevé, des récepteurs activateurs NKG2C et CD2 alors que le récepteur NKp30 n'est pas impliqué. Ce potentiel cytotoxique est contrôlé négativement par le co-engagement du récepteur inhibiteur NKG2A dont le ligand physiologique est HLA-E (exprimé par le trophoblaste d'origine fœtale). Nous avons également décelé un fort potentiel de sécrétion de cytokines/chimiokines des cellules dNK (IFN-gamma, TNF-a, MIP-1a, MIP-1ß, GM-CSF) lorsque le récepteur activateur NKp30 est engagé, alors que l'engagement du récepteur NKp46 est sans effet. . In early h, decidual NK s (dNK) are abundant and considered as cytokine producers but poorly cytotoxic despite their cytolytic granule content, suggesting a negative control of this latter effector function. Decidual NK cells express a large panel of activating and inhibitory receptors. However, little is known about the contribution of the different receptors expressed by dNK cells, to the cytotoxic function. The purpose of our study was to investigate the implication of activating and inhibitory receptors in the effector function of dNK cells and to investigate how these functions are regulated. We first found that freshly isolated dNK, in contrast to peripheral blood NK cells, exhibit a unique repertoire of activating and inhibitory receptors, identical among all the donors tested. We then demonstrated that in freshly isolated dNK, mAb-specific engagement of NKp46- and to a lesser extent NKG2C-, but not NKp30-activating receptors induced intracellular calcium mobilization, perforin polarization, granule exocytosis and efficient target cell lysis. NKp46-mediated cytotoxicity is co-activated by CD2 but dramatically blocked by NKG2A (inhibitory receptor) co-engagement, indicating that the dNK cytotoxic potential could be tightly controlled in vivo. Such NKG2A-mediated inhibition might be critical for the outcome of pregnancy. Finally, we found that in dNK, mAb-specific engagement of NKp30, but not NKp46, triggered the production of proinflammatory molecules (such as IFNgamma. . . ). We hypothesized that during pregnancy complications (viral infection), NKG2A-mediated inhibition could be prevented, and thus dNK cells could participate to the elimination of viral infected cells. We indeed found that dNK cells in contact with hCMV-infected fibroblasts proliferate, polarize their cytolytic granules to the immune synapse and kill infected target cells

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Tanneau-Salvadori, Françoise. "Caracterisation des effecteurs cytotoxiques chez des sujets seropositifs pour le virus de l'immunodeficience humaine (v. I. H. )." Paris 5, 1991. http://www.theses.fr/1991PA05S013.

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Abstract:

Le virus de l'immunodeficience humaine (vih), agent etiologique du syndrome d'immunodeficience acquise (sida), a un tropisme selectif pour les lymphocytes t#4 et d'autres cellules immunocompetentes. L'important deficit immunitaire de l'hote infecte n'est sans doute pas du au seul effet direct du virus, et un phenomene immunopathologique pourrait y contribuer : nous avons recherche chez 60 sujets seropositifs la presence d'effecteurs cytotoxiques specifiques du vih, et analyse leurs antigenes-cibles que la nature des cellules en cause. Des effecteurs cytotoxiques primaires ont ete mis en evidence chez la plupart des sujets de cette etude, dans un systeme experimental utilisant comme cellules-cibles antologues des lignees b derivees pour chaque sujet par immortalisation par le virus d'epstein-barr, et infectees par des virus recombinants de la vaccine pour exprimer differents antigenes du vih. Des tests classiques de cytotoxicite au chrome 51 nous ont permis de montrer que les 3 proteines virales de structure (enveloppe, core, transcriptase inverse), ainsi que des proteines de regulation (nef et rev) peuvent etre cibles d'effecteurs cytotoxiques primaires. Ceux-ci sont de 2 types : des lymphocytes t cytotoxiques classiques (ctl), cd#8#+ et restreints par le cmh, contre les proteines de core, la transcriptase inverse, et la proteine nef, et des effecteurs non t de cytotoxicite dependante d'anticorps (adcc) contre l'enveloppe. Il existe cependant des ctl contre l'enveloppe, que nous avons mis en evidence a l'aide d'une construction vaccinale de l'enveloppe sans peptide-signal qui ne permet pas son expression a la surface cellulaire, et donc pas la reconnaissance de type adcc. Le role eventuellement protecteur et/ou negatif pour l'hote de ces differents effecteurs cytotoxiques est discute.

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Tabiasco, Julie. "Cytoxicité et transfert synaptique médié par les cellules NK." Toulouse 3, 2002. http://www.theses.fr/2002TOU30206.

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Masson, d'Autume Adèle de. "Lymphocytes B régulateurs dans la GVH chronique humaine et rôle de la myosine 18A dans la cytotoxicité des lymphocytes NK." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2016. http://www.theses.fr/2016USPCC177/document.

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Abstract:

L’allogreffe de cellules souches hématopoïétiques allogéniques (HSCT, hematopoietic stem cell transplantation) reste le seul traitement curatif pour de nombreux patients atteints d’hémopathies malignes. Dans près d’un cas sur deux, l’allogreffe se complique de réaction chronique du greffon contre l'hôte (GVH (graft-versus-host) chronique). Les lymphocytes B régulateurs sont une population de lymphocytes B sécrétant de l’interleukine (IL)-10 et capables d’inhiber les réactions inflammatoires. Nous avons montré que chez l’homme atteint de GVH chronique active, la fréquence des lymphocytes B régulateurs est diminuée dans le sang périphérique. Les lymphocytes B régulateurs sont principalement enrichis dans la population B de phénotype mémoire et plasmablastique. Une augmentation de la fréquence des plasmablastes et une diminution du nombre de lymphocytes B de phénotype mémoire chez les patients allogreffés atteints de GVH chronique active suggèrent des altérations de la différenciation terminale des lymphocytes B. Nos travaux ont également porté sur les lymphocytes NK qui ont un rôle cytotoxique. Nous avons identifié l’un des récepteurs de surface des lymphocytes NK, CD245, comme étant la myosine 18A. La myosine 18A est impliquée dans l’organisation du cytosquelette et constitue un récepteur du surfactant A. Nous avons montre qu’il s’agissait d’un récepteur co-activateur de la cytotoxicité NK et que cette augmentation de cytotoxicité pourrait être liée à la stimulation de l’expression de la molécule de stimulation CD137 (4-1BB) à la surface du lymphocyte NK. Ces résultats suggèrent un potentiel rôle thérapeutique de l’utilisation d’anticorps agonistes spécifiques de CD245 Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) remains the only curative treatment for many patients with haematological malignancies. In almost half of the cases, it is complicated by chronic graft-versus-host disease (cGVHD). Regulatory B cells are a population of B cells secreting interleukin (IL)-10 that can inhibit the immune responses. We have shown that in patients with active cGVHD, the frequency of regulatory B cells is decreased in the peripheral blood. Regulatory B cells are enriched in the memory B cell and plasmablast B cell pools. Increased plasmablasts frequencies and decreased memory B cells frequencies were found in patients with active cGVHD, suggesting alterations in the terminal differentiation of B cells. Our work also focused on NK cells that have a cytotoxic role. We identified one surface receptor of NK cells, CD245, as myosin 18A. Myosin 18A is involved in the organization of the cytoskeleton and is a receptor of the surfactant A. We have shown that myosin 18A was a coactivating receptor of the NK cytotoxicity and that this increase in cytotoxicity could be linked to the stimulation of the expression of CD137 (4-1BB) on the surface of the NK lymphocyte. These results suggest a potential therapeutic role of the use of specific CD245 agonist antibodies

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Awad, Ali. "Les cellules Natural Killer (NK) dans l’allergie : effet de la chimiokine CCL18 sur les cellules NK humaines et rôle des cellules NK sur les éosinophiles." Thesis, Lille 2, 2014. http://www.theses.fr/2014LIL2S002/document.

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Abstract:

Les maladies allergiques sont en constante augmentation tant en prévalence qu’en gravité. Les éosinophiles sont fortement impliqués dans le dommage et le dysfonctionnement tissulaire et participent à l’entretien de l’inflammation allergique. Différentes cellules de l’immunité innée sont impliquées dans le contrôle de la réaction allergique. Parmi elles, les cellules NK, connues essentiellement pour leurs fonctions anti-tumorales et anti-microbiennes, pourraient réguler différents aspects de la réaction. Dans le sang périphérique de patients asthmatiques, les cellules NK présentent des capacités cytotoxiques accrues, ainsi qu’une prédominance de cellules NK2 comparativement à la prédominance de cellules NK1 chez les sujets non allergiques. Chez des patients atteints de dermatite atopique, le nombre et la cytotoxicité des cellules NK périphériques sont diminués, ainsi que leur capacité à produire de l’IFN-g. De plus, le dialogue entre les cellules NK et les cellules dendritiques est moins efficace chez le sujet asthmatique, menant ainsi à une capacité réduite de production d’IFN-g par les cellules NK. Dans des modèles murins d’inflammation pulmonaire, la déplétion en cellules NK par l’anti-NK1.1 ou l’anti-ASGM1 avant l’immunisation inhibe l’éosinophilie pulmonaire, l’infiltrat des LT CD3+ et l’augmentation des taux d’IL-4, IL-5 et IL-12 dans le LBA. Néanmoins, la déplétion avec l’anti-ASGM1 après l’établissement de l’inflammation éosinophilique retarde sa résolution, suggérant un rôle double des cellules NK dans l’inflammation allergique. Le recrutement et la fonction des cellules NK humaines dans l’allergie par le biais de l’analyse in vitro du rôle de CCL18 sur les cellules NK a été analysé. Cette chimiokine est préférentiellement produite au niveau du poumon et possède une double fonction dans la pathologie allergique puisqu’elle recrute les LTh2, mais également les LT reg et génère des DCs tolérogènes capables d’induire des LT reg, uniquement chez des donneurs non allergiques. Nous avons évalué la réponse des cellules NK de sujets allergiques vis-à-vis de CCL18 et l’avons comparée à celle de cellules NK provenant de sujets non allergiques. Nos travaux ont montré que CCL18 attire in vitro les cellules NK de sujets non allergiques et induit leur cytotoxicité, de façon dépendante des protéines G. Par contre, les cellules NK de sujets allergiques ne répondent pas au CCL18. La deuxième partie du travail s’est basée sur l’hypothèse d’un dialogue entre les cellules NK et les éosinophiles qui modifierait leurs fonctions respectives. Des cellules NK et des éosinophiles autologues ont été cocultivés pendant 3 et 12h, à différents ratios. Nous avons montré que les cellules NK activent directement les éosinophiles comme en témoignent l’augmentation de la libération de l’ECP, l’EDN, et de l’expression du CD63, du CD69 et la diminution de l’expression du CD62L sur les éosinophiles. De plus, les cellules NK induisent l’apoptose et la mortalité des éosinophiles dès la première heure de coculture. Cependant l’apoptose et la mortalité des cellules NK ne sont pas modifiées. La fixation des cellules NK empêche presque totalement l’activation et l’apoptose des éosinophiles, suggérant l’implication de molécules de surface et peut être de facteurs solubles. Les interactions entre molécules de surface restent à déterminer, et l’IFN-g et le TGF-β ne sont pas impliqués. Cependant, les voies de signalisation p38MAPkinase, ERK, JNK et PI3kinase interviennent dans l’activation des éosinophiles. La voie mitochondriale et ROS sont impliquées dans l’apoptose des éosinophiles induite par les cellules NK.En résumé, ces travaux ont permis de montrer que les cellules NK de sujets allergiques présentent un dysfonctionnement dans la réponse vis-à-vis de CCL18 comparativement aux sujets non-allergiques. De plus, nos résultats suggèrent que les cellules NK pourraient réguler l’inflammation à éosinophiles en induisant leur activation et/ou leur apoptose Allergic diseases are steadily increasing both in prevalence and severity. Known physiopathological mechanisms involve the induction of a Th2 response by dendritic cells, leading to IgE production and inflammation, in particular linked to the recruitment of eosinophils. Eosinophils are heavily involved in injury and tissue dysfunction and contribute to the maintenance of inflammation. Different cells of innate immunity were shown to be involved in the control of allergic reaction. Among them, (NK) cells, primarily known for their anti-tumor and anti-microbial functions, may regulate different aspects of allergic reaction as suggested by studies in humans or mice. In the peripheral blood of patients with asthma, NK cells exhibit increased cytotoxic capacity, and a predominance of NK2 cells compared to the prevalence of NK1 cells in non-allergic subjects. In patients with atopic dermatitis, the number and cytotoxicity of peripheral NK cells are reduced, as well as their ability to produce IFN-g. Moreover, the dialogue between NK cells and dendritic cells is less effective in asthmatic patients, leading to a reduced capacity of IFN-g production by NK cells. In murine models of pulmonary inflammation, depletion of NK cells by anti-NK1.1 or anti-ASGM1 before immunization inhibits pulmonary eosinophilia, the infiltration of CD3+ T cells and increased levels of IL-4, IL-5 and IL-12 in the bronchoalveolar lavage. However, depletion with anti-ASGM1 after the establishment of eosinophilic inflammation delays its resolution, suggesting a dual role of NK cells in allergic inflammation.We studied the recruitment and function of human NK cells in allergy through in vitro analysis of the role of CCL18 on NK cells. This chemokine is preferentially produced in the lungs and has a dual role in allergic diseases since it recruits Th2 cells but also regulatory T cells and generates tolerogenic DCs capable of inducing regulatory T cells only from non-allergic donors. We evaluated the response of NK cells in allergic subjects towards CCL18 and compared it to that of NK cells from non-allergic donors. We showed that CCL18 attracts NK cells from non-allergic subjects and induces their cytotoxicity in a G protein dependent pathway. However, NK cells from allergic subjects did not respond to CCL18. This chemokine has no effect on the proliferation of NK cells, but may negatively regulate IFN-g production.The second part of the thesis is based on the hypothesis of a dialogue between NK cells and eosinophils which would modify their respective functions. NK cells and autologous eosinophils were cocultured during 3 and 12 hours, at different ratios. We showed that NK cells directly activate eosinophils as evidenced by the increased release of ECP, eosinophil derived neurotoxin EDN, and the expression of CD63, CD69, and reduced expression of CD62L on living eosinophils. In addition, coculture with NK cells induced apoptosis and mortality of eosinophils in the first hours of coculture. However, apoptosis and death of NK cells were not changed. Fixation of NK cells prevented almost completely the activation and apoptosis of eosinophils, suggesting the involvement of surface molecules, however soluble factors cannot be excluded. These interactions require cell contact, but the molecules involved remain to be determined. Concerning soluble factors, IFN-g and TGF-β are not involved in these mechanisms. However, the signaling pathways p38MAPkinase, ERK, JNK and PI3-kinase are involved in eosinophils activation. Concerning eosinophil apoptosis induced by NK cells, the mitochondrial pathway is more involved than the caspase pathway.In summary, our studies show that NK cells from allergic patients exhibit a defect in their response towards CCL18 compared to non-allergic subjects. In addition, these results suggest that NK cells may regulate eosinophilic inflammation by inducing their activation and / or apoptosis

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Burgess, Agathe. "Fonction et interactions de la protéine lyst, responsable du syndrome de Chediak Higashi." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T004.

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Abstract:

Le syndrome de Chediak-Higashi (CHS) est une maladie rare, de transmission autosomale récessive, qui associe un albinisme partiel et une pathologie immunitaire sévère, associée notamment à une activité cytotoxique des lymphocytes T déficiente. L’apparition d’une activation exagérée et incontrôlée des lymphocytes et des macrophages, connue sous le nom de « phase accélérée » de la maladie, détermine le pronostique vital du patient. La caractéristique la plus remarquable de cette maladie est la présence de granules cytoplasmiques géants dans la plupart des types cellulaires. Le gène responsable, identifié en 1996, code pour la protéine cytosolique LYST (pour Lysosomal Trafficking Regulator), à laquelle on attribue de manière générale un rôle dans la régulation du trafic vésiculaire, mais dont la compréhension moléculaire reste encore à ce jour très limitée. L’objectif des présents travaux doctoraux est de chercher à mieux appréhender le rôle de la protéine LYST, causative du syndrome de Chediak Higashi, dans la cellule et d’identifier de nouveaux partenaires de cette protéine. Dans ce but, deux axes principaux de recherche ont été développés. Le premier axe intéresse l’analyse structurale de la protéine. LYST est une protéine cytosolique de 425 kDa et appartient à la famille BEACH (Beige and Chediak Higashi), qui comprend un éventail de protéines de taille importante ayant en commun la même architecture C-terminale (un domaine homologue à la pleckstrine PH, suivi d’un domaine BEACH et enfin de motifs WD40 répétés). De manière surprenante, la connaissance de la séquence de LYST a peu apporté à la compréhension de la fonction de cette protéine. Les 2/3 N-terminaux de LYST forment une séquence orpheline, sans motifs canoniques reconnaissables qui permettraient de lui attribuer une fonction propre. Afin de progresser dans la caractérisation fonctionnelle de cette protéine, une étude structurale fine réalisée avec le groupe de Jean-Paul Mornon et d’Isabelle Callebaut (IMPMC, CNRS UMR 7590) nous a permis d’identifier un nouveau domaine lectine au sein de LYST qui ouvre de nouvelles perspectives quant au rôle de cette protéine dans la cellule. D'autre part, la recherche de mutations faux-sens chez des patients présentant une forme modérée du syndrome nous a permis de désigner plusieurs résidus fonctionnellement importants. Le second axe de recherche vise à caractériser plus directement les conséquences d’un défaut de LYST dans le trafic vésiculaire intracellulaire. Nous avons questionné la nature de la granulation géante présente dans les cellules cytotoxiques de patients CHS ; ce compartiment contient la perforine (protéine lytique spécifique des granules cytotoxiques), exprime la molécule LAMP (caractéristique des endosomes tardifs et des lysosomes) et sa génération semble intervenir au point terminal de la voie d’endocytose. De plus, nous mettons en évidence dans ces lymphocytes une fusion anormale de compartiments endosomaux impliqués dans la formation des « vésicules d’exocytoses », nécessaires à la maturation terminale des granules cytotoxiques. L’étude de certaines voies du trafic vésiculaire intracellulaire impliquant le réseau endosomal nous a permis de montrer une perturbation de la voie de dégradation des protéines ubiquitinilées médiée par les ESCRTs (Endosomal Sorting Complex Required for Transport) dans les fibroblastes de patients CHS. L’importance physiologique de cette voie des ESCRTs et son implication dans divers processus cellulaires commencent tout juste à être cernées. Nos résultats favorisent un rôle primaire de LYST dans la biogénèse du compartiment endosomal qui affecte la maturation terminale des lysosomes sécrétoires The Chediak Higashi syndrome (CHS) is an autosomic recessive disorder, which associates partial albinism with severe immune dysfunctions including a defective cytotoxic activity of T lymphocytes and NK cells. The occurrence of an uncontrolled activation of lymphocytes and macrophages, known as « accelerated phase » of the disease, determines the vital prognosis of the patient. The hallmark of this disease is the presence of giant cytoplasmic granules or organelles in most cell types. The mutant gene, identified in 1996, codes for the cytosolic LYST protein (for Lysosomal Trafficking Regulator), which is defined as a vesicle-trafficking regulatory protein, but whose precise function remains unknown. The main goal of this doctoral work was to try to better understand the role of the LYST protein, responsible for the Chediak Higashi syndrome, in the cell and to identify new partners of this protein. In this purpose, two main research aims have been developped. The first aim is based on the structural analysis of the protein. LYST is a 425kDa cytosolic protein and belongs to the BEACH family (Beige and Chediak Higashi) which is composed of various large-sized proteins sharing the three same C-terminal domains (a pleckstrine homologous PH domain, followed by the BEACH domain and finally by WD40 repeats). Noticeably, the knowledge of the sequence of LYST was relatively unrevealing. Indeed, its N-terminal 2/3 part forms an orphan sequence within which no canonical motifs with assigned function could be found. To progress in the functionnal characterization of LYST, a fine structural study was performed with the group of Isabelle Callebaut and Jean-Paul Mornon (IMPMC, CNRS UMR 7590) which lead us to the identification of a new concanavalin-A lectin domain in the LYST protein. This data helps opening new perspectives regarding the potential role of LYST in the cellular machinery. On the other hand, the search for missense mutations in patients expressing a mild form of the disease allowed us to point out some functionnally critical residues of the protein. The second aim of our research has tried to better characterize the consequences of a LYST defect in the intracellular vesicular trafficking. We questionned the nature of the giant granulation in CHS cytotoxic cells ; this compartment contains the store of perforin (the lytic protein specific of cytotoxic granules), carries the LAMP molecule (characteristic for late endosomes and lysosomes) and its generation seems to occur at the very end point of the endocytosis pathway. Moreover, we highlighted in these lymphocytes an abnormal fusion of endosomal compartments involved in the formation of the « exocytic vesicles », which are necessary to the terminal maturation of cytotoxic granules. The study of three main intracellular vesicular trafficking pathways involving the endosomal network has allowed us to show an impairment of the degradative ESCRT-mediated pathway (Endosomal Sorting Complex Required for Transport) in CHS patient fibroblasts. The physiological importance of this pathway and its involvment in various cellular processes just begins to be figured out. Our results support a primary role of LYST in endosomal biogenesis which affects the terminal maturation of secretory lysosomes

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Dutertre, Charles-Antoine. "De l'importance de la caractérisation des différentes isoformes de RFC gamma des cellules NK pour l'optimisation fonctionnelle des anticorps monoclonaux à usage thérapeutique." Paris 7, 2008. http://www.theses.fr/2008PA077132.

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Abstract:

De gros efforts ont été faits pour optimiser les propriétés cytotoxiques des anticorps monoclonaux (AcM) à usage thérapeutique, en particulier leur capacité d'engagement du RFcγIIIA (CD16) activateur exprimé à la surface des cellules NK capables d'induire une cytotoxicité cellulaire dépendante d'anticorps (ADCC). La première partie de nos travaux a visé à déterminer l'expression de RFcγll par les cellules NK, ainsi que leur rôle dans le contrôle de l'ADCC, et nous a permis de mettre en évidence une nouvelle sous-population de cellules NK CD56dim/CD3ˉ/NKp46⁺/RFcγlllAbright/RFcγllbright exprimant fortement le RFcγllB inhibiteur. Nous avons montré que les cellules NK RFcγllBbright, détectée chez tous les donneurs sains, présentent un profil d'expression de récepteurs NK (NKR) différent de celui des cellules NK RFcγll'°/ˉ(exprimant majoritairement le RFcγIIC activateur), ainsi qu'une dégranulation réduite au cours de leur activation RFcγ-dépendante. La seconde partie de nos travaux a permis de démontrer qu'un AcM anti-CD20 développé par le Laboratoire français du Fractionnement et des Biotechnologies, l'EMAB-6, présente in vitro une activité cytotoxique contre les cellules de leucémie lymphoïde chronique B (LLC-B) beaucoup plus élevée que celle du rituximab, grâce a sa capacité de fixation au RFcγlllA beaucoup plus importante que le rituximab. Nos études ont permis de confirmer qu'un faible taux de fucosylation de l'AcM EMAB-6 était responsable de cette propriété et qu'un meilleur engagement du RFcylllA donne un avantage cytotoxique d'autant plus important à cet AcM par rapport au rituximab que la densité de molécules CD20 à la surface des cellules cibles était plus faible Important efforts have been devoted to the optimization of cytotoxic therapeutic monoclonal antibodies (mAb), in particular to the improvement of their capacity to engage the activating RFcγIIIA (CD16) expressed on NK cells that are capable of antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC). In the present work, we examined the expression of FcγRIl by human NK cells, as well as their role in the control of ADCC, which made it possible to define a novel NK cell subpopulation, CD56dim/CD3ˉ/NKp46⁺/RFcγlllAbright/RFcγllbright that strongly expresses inhibitory FcyRIlB. We showed that FcYRMBbright NK cells, detected in all the donors tested, exhibit an expression profile of NK cell receptors (NKR) different from that of NK RFcγll'°/ˉ cells (that predominantly express the activating FcγRIIC), as well as a reduced degranulation following FcγR-dependent activation. The second part of our work allowed the demonstration that an anti-CD20 EMAB-6 antibody developed by the Laboratoire français du Fractionnement et des Biotechnologies, presents a much higher cytotoxic activity against B cell chronic lymphocytic leukemia (B-CLL) cells in vitro than rituximab, a marketed anti-CD20 therapeutic mAb. This increased activity was linked to a much higher binding capacity to FcyRIIIA as compared to its non-optimized counterpart or to rituximab. Our studies also confirmed that the low fucose level of the EMAB-6 mAb is essential to its increased FcγRIIIA binding and efficacy. Finally, the better cytotoxic activity of this antibody as compared to rituximab was found even increased when the density of CD20 on target cells was lower

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Mahmoud, Wael. "Déviation de la réponse immune à visée d'immuno-intervention à l'aide de proteines recombinantes hétérofonctionnelles." Reims, 2008. http://theses.univ-reims.fr/exl-doc/GED00001024.pdf.

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Abstract:

Certaines thérapies faisant appel à des anticorps sont confrontées aux problèmes de risques pathogènes transmissibles ou d’inefficacité. Les anticorps polyclonaux anti-Rhésus D humains utilisés dans la prévention de l’allo-immunisation fœto-maternelle (AIFM) RhD, présentent parfois un risque infectieux, d’allergie ou d’hypersensibilité. Les anticorps anti-tumoraux ont montré peu d’efficacité à cause de la faible immunogénicité des cellules cancéreuses et la sur expression des protéines régulatrices du complément. L’efficacité du système immunitaire peut être améliorée en augmentant l’immunogénicité des cellules cibles. Nous proposons un nouveau concept qui vise à augmenter le recouvrement des cellules cibles par des anticorps grâce à la déviation des immunoglobulines post-vaccinales antitétaniques attirées sur une grappe d’antigènes tétaniques. Une telle amplification devrait permettre la destruction des cellules par les systèmes effecteurs de l’immunité humorale (CDC) et / ou cellulaire (ADCC). L’outil de ciblage et destruction des cellules est basé sur des protéines recombinantes bifonctionnelles. Ces molécules présentent deux entités : une fonction de ciblage par un anticorps dirigé contre un antigène de surface spécifique de la cellule cible (anti-Glycophorine A (GPA), anti-RhD ou anti-antigène carcino-embryonnaire (ACE)) et une entité immunogène d’antigènes tétaniques. L’assemblage des deux entités est assuré par le système multimérisant de la C4 Binding Protein (C4BP). Nous avons réussi à montrer dans un premier temps la faisabilité du concept de ciblage et destruction des cellules par déviation de la réponse immune vaccinale sur un modèle de GR à forte densité antigénique. Nous avons par la suite validé in vitro ce concept sur GR RhD dans la perspective de la prévention de l’AIFM RhD à l’aide d’hétéromultimères ciblant l’antigène RhD. Finalement, l’application de notre concept par ciblage de l’ACE a permis la destruction des cellules cancéreuses dans un modèle d’inhibition de développent tumoral chez les souris nude.

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Carré, Thibault. "Analyse des bases moléculaires de la résistance tumorale à la cytotoxicité spécifique et naturelle dans le contexte microenvironnemental." Thesis, Paris 11, 2012. http://www.theses.fr/2012PA11T057.

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Au cours de la réponse immunitaire antitumorale, l’instabilité génétique des tumeurs combinée à la pression de sélection du système immunitaire peut conduire, via l’immunoediting, à l’émergence de variants tumoraux résistants à la lyse par les effecteurs cytotoxiques. Une meilleure compréhension de ces mécanismes potentiellement impliqués dans la susceptibilité tumorale à la lyse naturelle et/ou spécifique pourrait permettre le développement de stratégies d’immunothérapie intégratives plus efficaces. Dans ce cadre nous avons étudié un modèle de résistance à la lyse spécifique impliquant un remaniement du cytosquelette d’actine (i). Nous avons pu mettre en évidence que l’inhibition conjointe de protéines interagissant avec l’actine (caldesmone, ézrine, radixine et moésine) générait une réduction de la susceptibilité des cellules tumorales à la lyse par les lymphocytes T cytotoxiques (CTLs). Parallèlement, nous avons identifié les microARNs différentiellement exprimés entre le variant résistant et la lignée parentale et étudié leur implication dans la susceptibilité tumorale à la lyse par les CTLs. Dans le but de déterminer le rôle d’une pression de sélection par les cellules tueuses naturelles (NK pour Natural Killer), de l’immunité innée, sur les cellules tumorales et l’émergence de variants résistants, nous avons aussi établi un modèle de coculture continue de cellules tumorales de mélanomes avec des cellules NK (ii). Les cellules tumorales obtenues sont résistantes à la lyse NK (mais toujours sensibles à la lyse spécifique par un clone lymphocytaire T cytotoxique) et établissent moins de contact et de synapse immunologique avec les cellules NK que la lignée parentale. L’analyse transcriptomique a révélé la baisse d'expression de B7-H6 (ligand d'un récepteur activateur des cellules NK) qui contribue partiellement au phénomène de résistance. De nombreux gènes impliqués dans les phénomènes de migration/invasion/adhérence sont également modulés et certaines propriétés cellulaires (croissance en milieu semi-solide, adhérence, migration) semblent refléter l’acquisition d’une agressivité tumorale accrue suite à la coculture. Nous avons finalement analysé l’impact sur la réponse antitumorale de la connexine-43, impliquée dans la formation des jonctions communicantes (GJ pour Gap Junction) (iii). Nous avons montré que sa présence à la synapse entre cellules tumorales et CTL n'exerce aucun impact sur la susceptibilité à la lyse. Néanmoins, les GJs sont impliquées dans l’émergence par stimulation antigénique de lymphocyte T CD8+ spécifique hautement réactif During antitumor immune response, cancer cells genetic instability combined with immune system selective pressure may drive to the emergence of tumor variant resistant to lysis by cytotoxic effector cells through a phenomenon called immunoediting. A better understanding of those mechanisms putatively involved in tumor susceptibility to natural and/or specific lysis would enable new integrative and more effective immunotherapeutic strategies. In this context, we studied a model of resistance to specific lysis linked to actin cytoskeleton remodeling (i). We showed that combined inhibition of actin interacting protein (caldesmone, ezrin, radixin and moesin) reduced tumor cells susceptibility to cytotoxic T lymphocytes (CTLs) lysis. Moreover, we identified microRNAs differentially expressed between parental cell line and resistant variant and are currently studying their impact on tumor susceptibility to CTLs lysis. In order to depict the role of innate immunity Natural Killer (NK) cells selective pressure, on tumor cells and on the emergence of resistant variants, we also established a maintained coculture model of melanoma cells with NK cells (ii). Selected cells obtained were resistant to NK cells-mediated lysis (but still susceptible to CTLs-mediated specific lysis) and formed less contact and immune synapse with NK cells than parental cell line. Transcriptomic analysis revealed the reduced expression of B7-H6 (ligand of an NK cells activating receptor) partially contributing to the resistance phenotype. The expression of several genes involved in migration/invasion/adhesion is also modulated and some cell characteristics (cell growth in semi-solid medium, adhesion, migration) tend to reflect the acquisition through coculture of an increased aggressiveness. Finally, we evaluated the impact of connexin-43 (Cx43), involved in the establishment of Gap Junctions (GJs), on antitumor response (iii). We showed that despite localization at the immune synapse between tumor target cell and CTL, Cx43 and GJs do not modulate susceptibility to CTL-mediated specific lysis. Nevertheless, GJs contribute to the emergence of highly reactive specific CD8+ T lymphocytes following antigen stimulation

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Nicoletti, Simon. "Natural Killer Cells and Pre-B Acute Lymphoblastic Leukemia : Evidence for an Unconventional Cytotoxicity Pathway." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2017. http://www.theses.fr/2017SACLS383.

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Les cellules Natural Killer (NK) représentent une population de cellules innées lymphoïdes aux fonctions anti-infectieuses et antitumorales. Les leucémies aiguës lymphoblastiques pré-B (LAL pré-B) constituent le cancer de l’enfant le plus fréquent et ont été décrites comme résistantes à la cytotoxicité médiée par les NK bien que les bases moléculaires demeurent inconnues.L’objectif de ces travaux a été de caractériser cette résistance. En développant un essai de cytotoxicité par cytométrie en flux et en utilisant des cellules effectrices activées in vitro, nous avons établi la sensibilité retardée des LAL pré-B à la cytotoxicité NK : initialement résistantes après 4h d’incubation, elles sont fortement tuées après 25h.Cette cytotoxicité est contact-dépendante mais ni la voie de l’exocytose des granules cytotoxiques ni celle des récepteurs de mort n’y contribuent. La mort cellulaire des cibles est de profil apoptotique mais indépendante des caspases ; la signalisation mitochondriale l’amplifie partiellement. Interférer avec les dérivés de l’oxygène par un antioxydant diminue la cytotoxicité. Nous montrons que les cellules NK de patients atteints de granulomatose septique chronique liée à l’X présentent un défaut de cette nouvelle cytotoxicité. Nous démontrons l’expression par les NK des composants clefs d’une NADPH oxydase distincte du complexe utilisé par les phagocytes. Nos travaux établissent l’existence d’une voie de cytotoxicité non conventionnelle et en définissent les principaux prérequis moléculaires Natural Killer (NK) cells are innate lymphoid cells with anti-infectious and anti-tumoral activities. Among neoplasia, pre-B acute lymphoblastic leukemias (pre-B ALL) represent the most common form of cancer in childhood and were shown to be resistant to NK cell mediated cytotoxicity although the mechanisms explaining this phenomenon are incompletely understood.In the present work, we investigated the relative immune resistance of pediatric pre-B ALL targets to activated NK cells. We developed a flow cytometry based cytotoxicity assay to assess the NK activity and the involvement of long term cytotoxic pathways. Although pre-B ALL blasts were strongly resistant at 4h, we found a considerable delayed NK killing at 25h.Further investigations revealed that cell contact was mandatory for efficient killing but also that neither the granule exocytosis nor the death receptor pathway were involved. Target cell death was caspase independent but mitochondria signaling amplified it. We then showed that NK cells from patients with X-linked chronic granulomatous disease could not kill efficiently ALL blasts and that NK cells expressed key components of a NADPH oxidase complex that was distinct from the phagocyte type. Our work reveals an uncharacterized effector pathway among cytotoxic lymphocytes and establishes key molecular requirements for this unconventional pathway

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Minois, Pauline. "Synthèse de mono et diphosphines dérivées d'amino acides ou de peptides, appliquées en chimie de coordination et pour le greffage de fullerène C60." Thesis, Dijon, 2013. http://www.theses.fr/2013DIJOS079/document.

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La synthèse de phosphines secondaires borane dérivées d’aminoacides ou de dipeptides, et leur application pour la préparation de ligands ou le greffage du fullerène, est décrite. Elle se fait sans racémisation avec des rendements atteignant 98%, par alkylation de phosphines borane primaires avec un dérivé γ-iodo aminoacide, dans les conditions de transfert de phase. Les diphosphines tertiaires dérivées d’aminoacides, obtenues après une seconde alkylation avec des rendements atteignant 70%, sont parmi les premiers exemples de diphosphines greffées par une liaison P-C sur la chaine latérale d’un aminoacide. Les mono et diphosphines dérivées d’aminoacides ont été testées en catalyse d’allylation ou d’hydrogénation asymétriques catalysées par des complexes de palladium ou de rhodium. D’un autre côté, un complexe de cis platine a été préparé à partir d'une diphosphine dérivée d'un aminoester. Ses propriétés cytotoxiques ont été testées sur des lignées cellulaires ovariennes cancéreuses A2780. Dans une seconde partie les phosphines secondaires borane d’aminoacides et de peptides ont été utilisées pour le greffage du fullerène, par hydrophosphination en transfert de phase. L’étude électrochimique du dérivé fullerène d’aminoester de benzyle, a permis d’établir que ce composé se décomposait par électrolyse, avec coupure de la liaison P-C, pour libérer le fullerène et la phosphine secondaire borane aminoester. Ces travaux ouvrent de nouvelles perspectives pour la chimie des dérivés phosphines ou fullerène d'aminoacides et de peptides The synthesis of secondary phosphine borane amino acids or dipeptides and their applications for the preparation of chiral ligands or for the grafting of fullerene, is described. These compounds were synthesized in good yield (up to 98%) without racemization. The principle of the synthesis is based on the alkylation of primary phosphine borane with a γ-iodo amino acid using phase transfer conditions. Tertiary diphosphine amino acids are obtained with 70% yield after a second alkylation. These compounds are one of the first examples of diphosphine grafted with a P-C bond on the side chain of amino acid. First of all, mono and diphosphine amino acid derivatives were used in asymmetric allylic substitution with palladium precursor or in asymmetric hydrogenation with rhodium precursor. In another hand, a cis platinum complex was synthesized with 60% yield from the diphosphine amino acid derivative. The cytotoxic properties of this complex were tested against human ovarian carcinogenic cell lines A2780. In the second part, the secondary phosphine borane amino acids and peptides have been used for grafting fullerene C60 by hydrophosphination using phase transfer conditions. The electrochemical study of the fullerene amino benzyl ester derivative has shown the cleavage of the P-C60 bond by electrolysis, affording the free fullerene and the secondary phosphine borane amino ester moiety. This work opens new perspectives for the chemistry of fullerene and phosphine derivatives of amino acids and peptides

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Germaud, Nathalie. "Polymorphisme du gène NCR3/NKp30 et variabilité de la fonction des cellules Natural Killer humaines." Phd thesis, Université René Descartes - Paris V, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00789417.

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Abstract:

Les cellules Natural Killer (NK) sont non, seulement de précieux effecteurs cytotoxiques de la réponse immunitaire innée dirigée contre les tumeurs et les infections, mais aussi d'importants immunorégulateurs. Leur activation dépend d'une balance complexe entre des signaux émanant de multiples récepteurs, tantôt inhibiteurs, tantôt activateurs. Parmi les récepteurs activateurs, NCR3 représente un acteur important de la lyse tumorale et de l'interaction avec les cellules dendritiques. Dans le but de caractériser la variabilité interindividuelle de la réponse NK et d'établir une référence pour des études ultérieures dans un contexte pathologique, nous avons examiné, dans un échantillon de 43 donneurs sains, les corrélations entre la variabilité fonctionnelle des cellules NK en réponse à la stimulation de leur récepteur NKp30 et le niveau d'expression des transcrits de NCR3 ainsi que celui de la protéine correspondante, au regard du polymorphisme génomique. Nous avons mis en évidence une étroite corrélation entre l'expression membranaire de NKp30 et NKp46 et la fonction cytotoxique NK, mais pas avec la sécrétion de cytokines. Nous avons retrouvé l'effet déjà connu du variant rs986475 sur l'expression de l'un des transcrits alternatifs de NCR3, T3. Nous avons également identifié un autre variant, rs11575836, influençant le niveau de transcrits T1, en relation avec la cytotoxicité induite par la signalisation NKp30. Cette étude pointe le doigt sur la spécificité des voies de signalisation des fonctions NK et le réseau complexe de gènes impliqués dans leur régulation. Nous avons par ailleurs évalué la variabilité génétique de NCR3 dans la myasthénie auto-immune où les cellules NK pourraient jouer un rôle. Le re-séquençage du gène NCR3 n'a pas révélé d'association avec un polymorphisme commun mais a permis d'identifier deux mutations rares, " faux-sens ", retrouvées uniquement chez des patients myasthéniques. L'une d'elle, L19R, est non-conservative et représente un candidat particulièrement intéressant à examiner en détail du fait de sa localisation dans une région très conservée dans la phylogénie. Même si de nombreux points restent à élucider, ces résultats indiquent qu'il devrait être possible de relier de façon globale et intégrative le polymorphisme de l'ADN, ainsi que l'expression des transcrits et des protéines, à la réponse fonctionnelle des cellules NK

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Busquet, Magali. "Synthèse et évaluation biologique de conjugués dolastine 15-oestradiol pour le ciblage de cellules cancéreuses." Montpellier 2, 1998. http://www.theses.fr/1998MON20018.

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Abstract:

Les dolastatines 10 et 15 sont de puissants agents antimitotiques naturels, qui suscitent actuellement de nombreuses etudes, tant sur le plan des relations structure-activite que sur celui de l'elucidation de leur pharmacologie. L'objet de ce travail consiste en l'etude de l'amelioration de la biodisponibilite de la dolastatine 15, en synthetisant des conjugues associant cette molecule a une hormone steroidienne, l'stradiol. Cette approche de ciblage, repose sur le fait que certaines tumeurs sont strogeno-dependantes. Plusieurs types de constructions ont ete realises en faisant varier les positions de greffage sur les deux entites ainsi que la nature du bras espaceur. Les capacites de ciblage de ces molecules ont ete evaluees en mesurant, d'une part leur liaison aux recepteurs de l'stradiol, et d'autre part, leur cytotoxicite sur des lignees cellulaires exprimant ou non ces recepteurs.

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Qiu, Shihong. "Synthèse et caractérisations de nanoparticules d’or pour la vectorisation de principes actifs anticancéreux." Thesis, Limoges, 2016. http://www.theses.fr/2016LIMO0021/document.

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Abstract:

Augmenter l’activité cytotoxique d’un principe actif, tout en diminuant les effets secondaires pendant le traitement anticancéreux est l’un des plus grands sujets médicaux d’aujourd’hui. Dans ce travail, deux principes actifs, la tanshinone IIA et l’α-mangostine, qui possèdent une forte activité anticancéreuse, ont été extrait à partir de produit naturels. Afin d’améliorer leur solubilité dans les milieux biologiques, nous avons réalisé une série de synthèses pour élaborer un nouveau système de vectorisation. Ce système consiste à utiliser les nanoparticules d’or comme véhicule et qui vont se concentrer spécifiquement dans le tissu tumoral par l’effet EPR. Ce ciblage passif évite de toucher les cellules saines par le principe actif, et diminue ainsi les effets secondaires. Ces complexes synthétisés sont constitués d’un cœur d’or recouvert de PEI sur laquelle sont fixées des cyclodextrines capable d’encapsuler les principes actifs. Ils ont été caractérisés par IR, UV-Visible, ATG, MET, DLS et Potentiel zêta. Des évaluations biologiques « in vitro » sont réalisées sur deux lignées de cancer prostatique PC-3, DU-145 et deux lignées de cancer colorectal HT29, HCT116. Les résultats montrent une augmentation de la cytotoxicité lorsque les produits sont fixés sur les nanoparticules. Le même système est utilisé pour vectoriser un photosensibilisateur issu de chlorophylle a. La chlorine ainsi obtenue a été fixée sur la PEI1200 à la surface des nanoparticules d’or sphériques (ou triangulaires). Les caractérisations par IR, UV-Visible, MET, DLS et potentiel zêta sont réalisés sur ce complexe. Les tests biologiques pour l’application en PDT réalisés sur les cellules HT29, montrent une amélioration de l’effet photocytotoxique lorsque les nanoparticules sont utilisées comme vecteur Today, in the anti-cancerous treatment, the increase of the cytotoxic activity of natural active compounds and the decrease of side-effects during the treatment remain one of the greatest medical problems. In this work, two natural active compounds, which have great interest in anticancer-applications, are extracted from plants. To increase their water-solubility, a new drug delivery nanovector based on gold nanoparticles has been synthesized with several steps. The nano-drug-delivery-vector, between 30 and 200 nm, can be concentrated to the tumor tissue only, by EPR effect. The nanovector is built on a core of gold nanoparticles covered by PEI, bearing anchored cyclodextrin, in which the drug is encapsulated. Accidental killing of healthy cells by the drug is avoided by this way. The system is characterized by IR, UV-Visible, GTA, TEM, DLS and zeta potential. “in vitro” tests are realized on two prostate cancer cell-lines PC-3, DU-145 and two colon cancer lines HT29, HCT116. The results show an improvement of the activity of the natural compound by using gold nanovector. The same system is used to deliver a photosensitizer. A chlorin obtained from chlorophyll a is fixed onto the surface of spherical or triangular nanoparticles. The same characterizations are used as the former delivery nanosystem. Their photocytotoxic effet is tested on HT29 cancer line. An improvement of the activity by using nanoparticles is also observed

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Dissertations / Theses on the topic 'Cytotoxicité à médiation cellulaire'

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