Academic literature on the topic 'Cytotoxicité cellulaire dépendant des anticorps'

La forte expression de la molécule CD38 par les cellules plasmocytaires ainsi que son rôle biologique dans la régulation de l’adhérence et la migration cellulaire, avec des fonctions de signalisation, a conduit au développement d’anticorps spécifiques pour le traitement de patients atteints de myélome multiple (MM). Ces anticorps induisent en effet la mort des cellules de myélome multiple par des mécanismes de lyse cellulaire dépendante du complément (CDC), de cytotoxicité cellulaire dépendante des anticorps (ADCC), de phagocytose cellulaire dépendant des anticorps (ADCP), mais aussi par des mécanismes directs d’induction de mort cellulaire. Ils ont de plus des effets immunomodulateurs liés à l’élimination de cellules immunitaires immunosuppressives qui expriment également CD38. Bien qu’ayant des actions variables par rapport à ce registre d’activité si on les compare entre eux, les anticorps anti-CD38 ont démontré une activité clinique significative, seuls ou en combinaison avec diverses molécules, chez les patients atteints de MM. Ils contribueront sans aucun doute à des progrès majeurs pour la prise en charge thérapeutique des patients atteints de MM.

Le marché des anticorps monoclonaux (Acm) présente la croissance la plus forte du secteur pharmaceutique. Mais le coût prohibitif des traitements impose le développement de molécules plus actives et moins onéreuses. Une des stratégies repose sur l’amélioration de l’activité ADCC (antibody-dependent cell cytotoxicity) permise par le contrôle de la fucosylation des Acms. Les cellules EB66, dérivées de cellules souches embryonnaires de canard, ont des atouts règlementaires et industriels uniques: elles sont génétiquement stables, immortelles et sont capables de croître à de fortes densités en milieu sans sérum. De plus, les espèces aviaires produisant naturellement des anticorps peu fucosylés, la cellule EB66 pourrait constituer une plateforme précieuse pour la production d’Acm à activité ADCC renforcée. Ce travail a consisté à établir et à optimiser les technologies requises à une production industrielle d’Acm thérapeutiques dans la cellule EB66. Un procédé de sélection de clones producteurs a été développé. L’optimisation d’un vecteur d’expression spécifique associée au développement du procédé de production ont permis d’atteindre un rendement supérieur à 1 g/L. Ces Acm ont présenté une glycosylation comparables à ceux produits en cellules de hamster CHO à l’exception d’un contenu en fucose naturellement réduit. Ce faible taux de fucose a été associé à une activité ADCC améliorée. Egalement, la capacité de fucosylation des clones producteurs semble être corrélée avec le niveau d’expression de l’alpha 1,6-fucosyltransférase. La cellule EB66 possède ainsi le potentiel pour devenir une plateforme de production industrielle d’Acm thérapeutique à forte activité cytotoxique
Monoclonal antibodies (mAbs) represent the fastest growing class of pharmaceuticals. However, prohibitive therapeutic costs call to develop cheaper and more active molecules. To this end, one of the promising strategies is to enhance mAbs efficacy through an improved antibody dependent cell cytotoxicity (ADCC) correlated with mAbs fucosylation level. EB66 cell line, a duck embryonic stem cell-derived substrate, displays unique regulatory and industrial features: they are genetically stable, immortal, and reach high cell densities in serum-free medium. The fact that avian species have been described to naturally produce low-fucosylated antibodies prompted the investigation on the use of the duck EB66 cells for the production of mAbs with reduced fucose content and enhanced ADCC activity. The aim of this work was to establish and optimize technologies dedicated to the development of the EB66 cellular platform for the production of therapeutic mAbs. A selection procedure has been developed to isolate producer clones. A yield titer higher to 1 g/l has been reached thanks to the optimization of a specific expression vector associated to the development of the production process. The mAbs produced on EB66 cells display a glycosylation profile comparable with mAbs produced on the Chinese hamster ovary cells, with a naturally reduced fucose content resulting in a strongly enhanced ADCC activity. Furthermore, we observed a correlation between mAbs fucosylation and expression level of the alpha 1,6-fucosyltransferase within producer clones. The EB66 cells have therefore the potential to evolve as a novel cellular platform for the production of high potency therapeutic antibodies

Le médulloblastome (MB) est l'une des tumeurs cérébrales pédiatriques les plus répandues. Malgré l'amélioration de la survie des patients grâce aux stratégies thérapeutiques actuelles, la qualité de vie de ceux-ci reste médiocre en raison des séquelles et du risque de rechute. L'immunothérapie pourrait être une alternative envisagée, ou un complément aux traitements standards actuels, et plus spécifiquement une immunothérapie à base de cellules Natural Killer (NK). À ce jour, les mécanismes de cytotoxicité des cellules NK dirigée contre les cellules de MB n'ont pas été décrits avec précision. De plus, à l'instar de nombreux cancers, les cellules de certains sous-types de MB expriment un ou des récepteurs de la famille des HER (Human Epidermal Growth factor Receptor), dont la surexpression peut constituer un facteur de mauvais pronostic, mais aussi une cible thérapeutique potentielle. Notre hypothèse est que les cellules NK, combinées avec un anticorps anti-HER, pourraient exercer un mécanisme de cytotoxicité dépendant des anticorps (ADCC) envers cette tumeur et ainsi avoir un effet anti-tumoral renforcé.Chaque étape de la cytotoxicité des cellules NK contre trois lignées cellulaires représentatives de MB (DAOY, D283, D341) a été explorée dans différents modèles de co-culture in vitro : la conjugaison, la dégranulation de granzymes B, la lyse des cellules cibles, ains que la sécrétion de chemokines et chimiokines. Le potentiel de lyse des cellules DAOY a ensuite été confirmé dans un modèle de co-culture sphéroïde 3D, avant d'être évalué dans un modèle murin de xénogreffe de MB humain. Dans la seconde partie de ce travail, nous avons procédé à l'évaluation de la réponse anti-tumorale des cellules NK contre les cellules de la lignée DAOY en combinaison avec le trastuzumab (IgG1 anti-HER-2) en procédant à l'armement préalable des cellules NK par fixation de la fraction constante d'anticorps sur le récepteur CD16. Le bénéfice de l'addition de cet anticorps anti-HER-2 sur le potentiel cytotoxique des cellules NK a été évalué dans les mêmes modèles in vitro et in vivo que précédemment décrits.Les résultats de notre étude montrent que les cellules NK possèdent une activité cytotoxique in vitro et in vivo contre les cellules MB, bien que le profil de cette activité anti-tumorale varie selon la lignée de MB ciblée. De plus, l'armement des cellules NK avec un anticorps anti-HER2 entraîne une augmentation modérée du pouvoir anti-tumoral de ces cellules contre la lignée DAOY, et nécessite d'être exploré plus finement. Dans leur ensemble, nos résultats confirment l'intérêt de pousser jusqu'en clinique le développement d'immunothérapies NK combinées avec un anticorps monoclonal anti-HER-2 dans l'indication du MB, tout en gardant à l'esprit les nouvelles stratégies actuelles (engageurs immunitaires, CAR-NK) permettant d'offrir de nouveaux axes d'optimisation du potentiel anti-tumoral natif des cellules NK
Medulloblastoma (MB) is one of the most common pediatric brain tumors. Although current therapeutic strategies have improved patient survival, quality of life remains poor due to sequelae and the risk of relapse. Immunotherapy could be a possible alternative or complement to current standard treatments, and more specifically immunotherapy based on Natural Killer (NK) cells. To date, the mechanisms of NK cell cytotoxicity against MB cells have not been precisely described. In addition, as with many cancers, the cells of certain subtypes of MB express one or more receptors of the HER (Human Epidermal Growth factor Receptor) family, overexpression of which may constitute a poor prognostic factor, but also a potential therapeutic target. Our hypothesis is that NK cells, combined with an anti-HER antibody, could exert an antibody-dependent cytotoxicity (ADCC) mechanism against this tumor and thus have an enhanced anti-tumor effect.Each step in the cytotoxicity of NK cells against three representative MB cell lines (DAOY, D283, D341) was explored in different in vitro co-culture models : conjugation, granzyme B degranulation, target cell lysis, and chemokine and chemokine secretion. The lysis potential of DAOY cells was then confirmed in a 3D spheroid co-culture model, before being evaluated in a mouse model of human MB xenograft. In the second part of this work, we assessed the anti-tumor response of NK cells against DAOY cells in combination with trastuzumab (anti-HER-2 IgG1) by pre-arming NK cells by binding the antibody constant fraction to the CD16 receptor. The benefit of the addition of this anti-HER-2 antibody on the cytotoxic potential of NK cells was evaluated in the same in vitro and in vivo models as previously described.The results of our study show that NK cells possess cytotoxic activity in vitro and in vivo against MB cells, although the profile of this anti-tumor activity varies according to the MB lineage targeted. Furthermore, arming NK cells with an anti-HER2 antibody results in a moderate increase in the anti-tumor potency of these cells against the DAOY lineage, and requires further investigation. Taken as a whole, our results confirm the value of taking the development of NK immunotherapies combined with an anti-HER-2 monoclonal antibody into the clinic in MB, while bearing in mind the new strategies currently available (immune enhancers, CAR-NK) which offer new ways of optimizing the native anti-tumor potential of NK cells

Le virus de l'immunodeficience humaine (vih), agent etiologique du syndrome d'immunodeficience acquise (sida), a un tropisme selectif pour les lymphocytes t#4 et d'autres cellules immunocompetentes. L'important deficit immunitaire de l'hote infecte n'est sans doute pas du au seul effet direct du virus, et un phenomene immunopathologique pourrait y contribuer : nous avons recherche chez 60 sujets seropositifs la presence d'effecteurs cytotoxiques specifiques du vih, et analyse leurs antigenes-cibles que la nature des cellules en cause. Des effecteurs cytotoxiques primaires ont ete mis en evidence chez la plupart des sujets de cette etude, dans un systeme experimental utilisant comme cellules-cibles antologues des lignees b derivees pour chaque sujet par immortalisation par le virus d'epstein-barr, et infectees par des virus recombinants de la vaccine pour exprimer differents antigenes du vih. Des tests classiques de cytotoxicite au chrome 51 nous ont permis de montrer que les 3 proteines virales de structure (enveloppe, core, transcriptase inverse), ainsi que des proteines de regulation (nef et rev) peuvent etre cibles d'effecteurs cytotoxiques primaires. Ceux-ci sont de 2 types : des lymphocytes t cytotoxiques classiques (ctl), cd#8#+ et restreints par le cmh, contre les proteines de core, la transcriptase inverse, et la proteine nef, et des effecteurs non t de cytotoxicite dependante d'anticorps (adcc) contre l'enveloppe. Il existe cependant des ctl contre l'enveloppe, que nous avons mis en evidence a l'aide d'une construction vaccinale de l'enveloppe sans peptide-signal qui ne permet pas son expression a la surface cellulaire, et donc pas la reconnaissance de type adcc. Le role eventuellement protecteur et/ou negatif pour l'hote de ces differents effecteurs cytotoxiques est discute.

De gros efforts ont été faits pour optimiser les propriétés cytotoxiques des anticorps monoclonaux (AcM) à usage thérapeutique, en particulier leur capacité d'engagement du RFcγIIIA (CD16) activateur exprimé à la surface des cellules NK capables d'induire une cytotoxicité cellulaire dépendante d'anticorps (ADCC). La première partie de nos travaux a visé à déterminer l'expression de RFcγll par les cellules NK, ainsi que leur rôle dans le contrôle de l'ADCC, et nous a permis de mettre en évidence une nouvelle sous-population de cellules NK CD56dim/CD3ˉ/NKp46⁺/RFcγlllAbright/RFcγllbright exprimant fortement le RFcγllB inhibiteur. Nous avons montré que les cellules NK RFcγllBbright, détectée chez tous les donneurs sains, présentent un profil d'expression de récepteurs NK (NKR) différent de celui des cellules NK RFcγll'°/ˉ(exprimant majoritairement le RFcγIIC activateur), ainsi qu'une dégranulation réduite au cours de leur activation RFcγ-dépendante. La seconde partie de nos travaux a permis de démontrer qu'un AcM anti-CD20 développé par le Laboratoire français du Fractionnement et des Biotechnologies, l'EMAB-6, présente in vitro une activité cytotoxique contre les cellules de leucémie lymphoïde chronique B (LLC-B) beaucoup plus élevée que celle du rituximab, grâce a sa capacité de fixation au RFcγlllA beaucoup plus importante que le rituximab. Nos études ont permis de confirmer qu'un faible taux de fucosylation de l'AcM EMAB-6 était responsable de cette propriété et qu'un meilleur engagement du RFcylllA donne un avantage cytotoxique d'autant plus important à cet AcM par rapport au rituximab que la densité de molécules CD20 à la surface des cellules cibles était plus faible
Important efforts have been devoted to the optimization of cytotoxic therapeutic monoclonal antibodies (mAb), in particular to the improvement of their capacity to engage the activating RFcγIIIA (CD16) expressed on NK cells that are capable of antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC). In the present work, we examined the expression of FcγRIl by human NK cells, as well as their role in the control of ADCC, which made it possible to define a novel NK cell subpopulation, CD56dim/CD3ˉ/NKp46⁺/RFcγlllAbright/RFcγllbright that strongly expresses inhibitory FcyRIlB. We showed that FcYRMBbright NK cells, detected in all the donors tested, exhibit an expression profile of NK cell receptors (NKR) different from that of NK RFcγll'°/ˉ cells (that predominantly express the activating FcγRIIC), as well as a reduced degranulation following FcγR-dependent activation. The second part of our work allowed the demonstration that an anti-CD20 EMAB-6 antibody developed by the Laboratoire français du Fractionnement et des Biotechnologies, presents a much higher cytotoxic activity against B cell chronic lymphocytic leukemia (B-CLL) cells in vitro than rituximab, a marketed anti-CD20 therapeutic mAb. This increased activity was linked to a much higher binding capacity to FcyRIIIA as compared to its non-optimized counterpart or to rituximab. Our studies also confirmed that the low fucose level of the EMAB-6 mAb is essential to its increased FcγRIIIA binding and efficacy. Finally, the better cytotoxic activity of this antibody as compared to rituximab was found even increased when the density of CD20 on target cells was lower

Les cellules NK sont capables d’ADCC (Antibody Dependent Cytotoxicity) suite à l’engagement durécepteur Fc!RIIIa/CD16a, et de fonctions effectrices directes antivirales et anti-tumorales: c’est la«cytotoxicité naturelle ». Ainsi activées elles peuvent également répondre en produisant des cytokines, commel’IFN-!. La dégranulation et la synthèse d’IFN-! par les cellules NK observées après engagement du récepteurCD16a, dont l’expression est indépendante du polymorphisme V158F, ont été largement supérieures à cellesobtenues avec les autres récepteurs activateurs. Son engagement par les AcMor thérapeutiques a produit desréponses fonctionnelles variables selon l’AcMor, et selon les donneurs de cellules. La perte d’expression duCD16a membranaire s’est révélé être un marqueur sensible de l’activation des cellules NK, même quand cedernier n’était pas engagé. Enfin, l’emploi de d’inhibiteur d’ADAM17 (TMI-2 et TIMP3) a permis d’observerle maintien de l’expression du CD16a après activation cellulaire sans augmenter les réponses fonctionnelles.Ce travail souligne la place centrale de l’engagement du CD16a dans l’activation NK
NK cell can trigger ADCC (Antibody Dependent Cytotoxicity) through the engagement of theFc!RIIIa/CD16a receptor, and « Natural Cytotoxicity » after integration of cellular signals coming from theiractivating and inhibitory receptors. Moreover, activated NK cells produce cytokines such as IFN-!.Engagement by monoclonal antibodies (mAb) of CD16a was strongly more efficient than that of any otheractivating receptor to induce degranulation and IFN-! synthesis. Functional responses depend on thetherapeutic mAb used to engage CD16a and on the donor of NK cells. CD16a down-modulation was a verysensitive marker of NK cell activation, whatever the mean of activation. It was inhibited in the presence ofTMI-2 and TIMP3 (ADAM17 inhibitors), whereas CD16-dependent functional responses were not increased.This work highlighted the major role of the CD16a receptor in the activation of NK cells

Le lymphome folliculaire (FL) est une néoplasie B caractérisée par une prolifération monoclonale des lymphocytes B dans les ganglions. Les lymphocytes T γδ se situent à la frontière de l'immunité innée et adaptative, ces cellules effectrices anti-infectieuses et anticancéreuses peuvent être expandues in vitro et lyser efficacement une large variété de cellules tumorales. La fréquence et la distribution des lymphocytes T γδ ont été comparées dans les ganglions de patients atteints de lymphome folliculaire (FL-LN) ou d'adénites inflammatoires non tumorales (I-LN). Ces lymphocytes sont peu abondants dans les FL-LN comparés aux I-LN, ils expriment le CCR7 (récepteur des chimiokines CCL19 et CCL21), dans les ganglions lymphatiques et ne l'expriment pas dans le sang périphérique. En revanche, CXCR4 (récepteur de CXCL12) est exprimé de façon similaire dans le ganglion et dans le sang périphérique. La faible abondance des cellules T γδ dans les FL-LN peut s'expliquer en partie par un problème de migration dû à l'absence d'expression de la chimiokine CCL19 dans les hautes veinules endothéliales (HEV) et les vaisseaux lymphatiques (LV) des FL-LN. Les chimiokines CCL21 et CXCL12 sont similairement exprimées dans les FL-LN et I-LN. Nos travaux ont montré qu'en présence d'IL-2 et de phosphostim, les cellules T γδ issues du sang périphérique de patients atteints de FL ont la même capacité d'expansion in vitro, que celles issues de donneurs sains. De même, elles sont capables de lyser efficacement les cellules primaires de FL. Les lymphocytes T γδ du sang périphérique (T γ9δ2) expandus expriment le récepteur CD16. Cette observation ouvre la possibilité d'utiliser les lymphocytes T γ9δ2 combinés aux anticorps monoclonaux (Acm) anti-CD20 afin d'augmenter leur cytotoxicité à médiation cellulaire dépendante des anticorps (ADCC) vis-à-vis de cellules tumorales FL CD20+. L'activité cytotoxique des lymphocytes T γδ contre les cellules tumorales FL a été évaluée in vitro, en présence de trois Acm anti-CD20 : le chimérique Rituximab, l'humanisé Humax et l'afucosylé GA101. Ces Ac et en particulier le GA101 augmentent les fonctions des lymphocytes T γ9δ2 : la lyse ADCC, le relargage perforine/granzyme et la sécrétion d'IFNγ contre les cellules tumorales FL. L'utilisation des cellules T γ9δ2 CD16+ amplifiées ex vivo, en combinaison avec le GA101, pourrait fortement potentialiser les résultats cliniques des patients FL. Ces lymphocytes T γδ sont donc une source attractive pour l'immunothérapie adoptive à condition qu'ils puissent migrer vers le site tumoral
γδ T-lymphocytes can be expanded and kill efficiently a variety of tumor cells in vitro. Their frequency and distribution were compared in tumor lymph nodes of patients with follicular lymphoma (FL-LN) and patients with inflammatory adenitis (I-LN). γδ T-lymphocytes were less abundant in FL-LN than in I-LN and were localized in the perifollicular zone outside the tumor follicles. Perifollicular γδ T-lymphocytes expressed CCR7 (receptor for the CCL19 and CCL21 chemokines), in contrast to peripheral blood γδ T-lymphocytes and both perifollicular and peripheral blood γδ T-lymphocytes expressed CXCR4 (receptor for CXCL12). The very low number of perifollicular γδ T-lymphocytes in FL-LN could be explained in part by migratory problems due to absence of CCL19 expression in FL-LN compared to I-LN. Conversely, CCL21 and CXCL12 were similarly expressed in both FL-LN and I-LN. CCL19 and CCL21 were expressed in high endothelial venules (HEV) and lymphatic vessels (LV), whereas CXCL12 was expressed by stromal cells surrounding HEV and LV. Peripheral γδ T-lymphocytes (Vγ9Vδ2 T) from patients with FL, expanded with Phosphostim and IL-2 in vitro, had the same expansion capacity as those from healthy individuals and expressed CD16, which raises the possibility that Vγ9Vδ2 T cells could be used in combination with tumor targeting monoclonal antibodies (mAbs) to increase mAb-induced antitumor cytotoxicity through antibody dependent cellular cytotoxicity (ADCC). Cytotoxic activity against CD20+ B follicular lymphoma (FL) cells was assessed in the presence of anti-CD20 mAbs, including Rituximab, Humax or the afucolystated GA101 in vitro. The 3 anti-CD20 mAbs increased the cytotoxicity of Vγ9Vδ2 T cells against CD20+ targets, the highest increase being observed with the afucosylated humanised GA101 mAb. The increased cytoxicity was associated with increased secretion of granzyme, perforin and IFNγ. These data emphasize that a combination therapy involving ex vivo expanded CD16+Vγ9Vδ2 T cells and afucosylated GA101 mAb may enhance the clinical outcome for FL patients treated with mAb therapy. Thus, γδ T-lymphocytes can be an attractive source for adoptive immunotherapy in patients with follicular lymphoma, providing they may home in tumor lymph nodes