Dissertations / Theses: 'Dekkera'

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Leite, Fernanda Cristina Bezerra. "Fisiologia molecular da levedura Dekkera bruxellensis." Universidade Federal de Pernambuco, 2012. https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/12648.

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Abstract:

Submitted by Chaylane Marques (chaylane.marques@ufpe.br) on 2015-03-13T19:43:51Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Leite(2012)_Tese Doutorado.pdf: 1676156 bytes, checksum: a0b7f1a26ca74955f4df21cc6a466fe0 (MD5)
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FACEPE
A levedura Dekkera bruxellensis tem sido identificada como principal contaminante do processo industrial de produção de álcool combustível e em vinícolas, mas estudos recentes mostraram que linhagens desta espécie podem apresentar rendimentos em etanol comparáveis aos mostrados por Saccharomyces cerevisiae, o principal microrganismo fermentador. Apesar de ter se mostrado um microrganismo bastante atrativo para aplicações industriais, poucos trabalhos têm sido dedicados ao estudo de sua fisiologia. Este trabalho teve por objetivo descrever a fisiologia da linhagem industrial da levedura D. bruxellensis GDB 248 quanto ao seu metabolismo de açúcares e o efeito repressor que a glicose exerce sobre o metabolismo do carbono. Foram realizados cultivos em frascos em diferentes fontes de carbono e em quimiostatos limitados em glicose ou sacarose. Nos experimentos em frascos com hexoses ou dissacarídeos, valores para taxas de crescimento e rendimentos em etanol e acetato foram calculados e nenhuma formação de piruvato, succinato ou glicerol foi observada. A análise elementar da biomassa de D. bruxellensis resultou na composição elementar CH1.754O0.583N0.149e o grau de redução (Nox) para esta biomassa se mostrou muito próximo ao descrito para a biomassa de S. cerevisiae. Nos experimentos em regime de quimiostato, o metabolismo desta levedura foi completamente respiratório e todo o açúcar consumido (glicose ou sacarose) foi convertido em apenas biomassa atingindo rendimento cerca de 25% maior que o observado para S. cerevisiae. Além disso, pulsos de glicose foram aplicados aos quimiostatos limitados em glicose ou sacarose e os resultados mostraram que as células de D. bruxellensis apresentam o efeito Crabtree observado pela rápida produção de etanol, mesmo em presença de oxigênio. No pulso de glicose aplicado ao quimiostato limitado em sacarose, foi observado o acúmulo de sacarose no reator, indicando a presença de mecanismo de repressão catabólica por glicose nestas células. Para avaliar o efeito repressor da glicose, a expressão relativa do gene DbFBP1 foi analisada por PCR em tempo real e foi observado que este gene está sujeito a uma forte regulação repressora exercida pela proteína quinase A em resposta a disponibilidade de glicose. Os dados deste trabalho possibilitaram uma melhor compreensão acerca da capacidade de conversão de diferentes açúcares a etanol, apesar da tendência ao metabolismo respiratório apresentado pelas células de D. bruxellensis e ainda foram gerados os primeiros dados a cerca do efeito repressor da glicose sobre o metabolismo destas fontes de carbono. Por fim, diante da escassez de dados genômicos para esta espécie, foi realizado um estudo para validar genes de referência para normalização de dados de ensaios de expressão gênica por PCR em tempo real. Os resultados mostraram que os genes DbEFA1, DbEFB1 e DbYNA1 são suficientemente estáveis para esta aplicação e que o método geNorm é, de fato, o mais adequado para esta análise.

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CAJUEIRO, Danielli Batista Bezerra. "Repressão pelo Metabólito de Nitrogênio em Dekkera bruxellensis." Universidade Federal de Pernambuco, 2015. https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/18314.

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Abstract:

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-02-14T12:46:20Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação_Danielli Batista Bezerra Cajueiro.pdf: 1520169 bytes, checksum: 01f947c81a685b7a391d5c6dbfcf83bd (MD5)
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CAPES
As fontes de nitrogênio do meio são classificadas como preferenciais e nãopreferenciais, de maneira que as primeiras inibem a expressão dos genes responsáveis pela metabolização das segundas por um mecanismo chamado de Repressão Catabólica do Nitrogênio (Nitrogen Catabolic Repression - NCR). No presente estudo avaliamos o padrão de regulação dos genes do metabolismo central do nitrogênio na levedura Dekkera bruxellensis. Foram definidos quatro grupos de fontes de nitrogênio baseados no crescimento celular. Em seguida, o padrão de expressão dos genes do metabolismo central do nitrogênio mostrou que fenilalanina, embora do grupo quatro, é o maior indutor das permeases Gap1p e Put4p, resultando em sua elevada taxa de consumo. Já a histidina, indutora da permease Put4p, promove maior indução dos genes que codificam as enzimas de assimilação de amônia. Quando o mecanismo NCR é inibido pela presença de metionina sulfoximina no meio, ocorre a desrrepressão dos genes que codificam as permeases. E finalmente, os resultados mostram que nitrato, definido no grupo dois induz o mecanismo de sinalização intracelular de regulação gênica semelhante ao que se observa quando as células estão no estado de privação de nitrogênio no meio. Isto complementa os estudos anteriores nos quais mostramos que a assimilação de nitrato altera o estado fisiológico da célula para respiração mesmo na presença de alta concentração de glicose no meio.
The nitrogen sources in the medium are classified as preferential or non-preferrential, so that the first inhibit expression of genes responsible for metabolism of the latter by a mechanism called Nitrogen Catabolic Repression (NCR). In the present study we evaluated the pattern of gene regulation of the central nitrogen metabolism in yeast Dekkera bruxellensis. It was defined four groups of nitrogen sources based on cell growth. Then, the expression pattern of the central nitrogen metabolism genes showed that phenylalanine, though belonging to group four, is the biggest inducer of genes of permeases Gap1p Put4p, resulting in its high consumption rate. Moreover, histidine induces the gene encoding permease Put4p and promoted the highest induction of the genes encoding the enzymes of ammonia assimilation. When the NCR mechanism was inhibited by the presence of methionine sulfoximine in the medium there was derepression of the genes encoding for permeases. Finally, the results showed that nitrate, defined in the group two, induced the intracellular signaling pathway gene regulation similar to that seen when cells are in a state of nitrogen deprivation in the middle. This complements our previous studies that showed that the nitrate assimilation alter the physiological state of the cell to respiration even in presence of high glucose concentration in medium.

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ALECRIM, Felipe Moraes. "Análise filogenética do COX2 da levedura Dekkera Bruxuellensis." Universidade Federal de Pernambuco, 2009. https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/6821.

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Abstract:

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:07:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo784_1.pdf: 705508 bytes, checksum: 5725b57a45fd7f33f57457930ae04f35 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
A levedura Dekkera bruxellensis, teleomorfo de Brettanomyces bruxellensis, é a maior contaminante nas destilarias que utilizam caldo de cana no mundo, provocando a diminuição da produtividade de etanol e, conseqüentemente, ocasionando prejuízos à indústria. A despeito de sua importância, poucos estudos genéticos estão publicados na literatura científica. Os trabalhos recentes do nosso grupo mostram que esta levedura apresenta uma grande adaptabilidade ao processo industrial e propomos uma análise genômica ampla para identificar os fatores responsáveis por esta característica. No presente trabalho, avaliamos o polimorfismo do gene COX2 que codifica a enzima citocromo oxidase II. Os resultados mostraram uma inesperada maior similaridade entre as seqüências do gene COX2 de isolados industriais de D. bruxellensis com seu ortólogo em D. custersii do que com a seqüência de COX2 da linhagem tipo de D. bruxellensis depositada no GenBank. Além disso, iniciamos a análise in silico comparada do genoma mitocondrial das leveduras ascomicota que possuem genoma mitocondrial seqüenciado e depositado GenBank. Com isso foi possível a construção de um mapa físico do genoma mitocondrial deste clado. Seis espécies apresentando similaridade genômica nuclear com D. bruxellensis foram submetidos a alinhamentos múltiplos através do programa computacional Mega v. 4.0. A ordem gênica foi definida como L-rRNA COII COIII S-rRNA COI ATPase 8 ATPase 6 Cyt b ATPase 9 Var 1, baseado no genoma de Saccharomyces cereviseae. Os programas CODEHOP e Codon Usage foram usados com a finalidade de refinar o desenho de primers degenerados a fim de se amplificar os genes ortólogos de D. bruxellensis. Os alinhamentos se mostraram representativos para construção dos primers, uma vez que foi observada uma alta variabilidade entre as seqüências gênicas sintênicas dos genes estruturais anteriormente citados. Estes dados proporcionam a base para futuras análises da genética e da evolução da população de D. bruxellensis, que servirá de base para o estabelecimento de correlações entre a variabilidade e genética e as capacidades fisiológicas de diferentes cepas industriais de D. bruxellensis em busca de melhor entendimento desse ―fitness competitivo‖ desta levedura no ambiente industrial

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Oelofse, Adriaan. "Investigating the role of Brettanomyces and Dekkera during winemaking." Thesis, Link to the online version, 2008. http://hdl.handle.net/10019/1975.

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SILVA, Gilberto Henrique Teles Gomes da. "Análise do metabolismo respiro-fermentativo do acetaldeído na levedura Dekkera bruxellensis." Universidade Federal de Pernambuco, 2017. https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/26057.

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Abstract:

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-08-23T22:02:17Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Gilberto Henrique Teles Gomes Da Silva.pdf: 1461753 bytes, checksum: c17c5c29241b95c71a94f9ae937992f6 (MD5)
Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-30T19:09:20Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Gilberto Henrique Teles Gomes Da Silva.pdf: 1461753 bytes, checksum: c17c5c29241b95c71a94f9ae937992f6 (MD5)
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CAPES
A levedura Dekkera bruxellensis é um micro-organismo muito adaptado aos processos de fermenta-ção alcoólica industrial, sendo encontrada em indústrias que realizam a produção de cerveja, vinho e etanol combustível. Na maioria desses processos, incluindo a produção de bioetanol, D. bruxel-lensis é considerada uma levedura contaminante, pois compete com Saccharomyces cerevisiae pe-los substratos industriais, ocasionando redução no rendimento e produtividade etanólica. Apesar disso, D. bruxellensis é capaz de produzir etanol, mesmo que em menor produtividade e, assim, apresenta potencial de uso industrial. Um dos problemas associados à baixa produtividade deve estar relacionado com o elevado fluxo metabólico para a produção de acetato citosólico a partir do acetaldeído, que desvia o carbono que seria utilizado para produção de etanol. Nesse contexto, o presente trabalho teve como objetivo estudar o metabolismo do acetaldeído como ponto de ramifi-cação no metabolismo fermentativo de D. bruxellensis. Para isso, a atividade da enzima aceltaldeído desidrogenase (AldH) foi bioquimicamente inibida pelo uso do composto disulfiram (DSF) em dife-rentes formulações do meio de cultivo. Os dados mostraram que D. bruxellensis é mais resistente ao DSF do que S. cerevisiae, sendo a concentração de 100 µM inibitória para ambas as leveduras. A adição de acetato ao meio contendo glicose promoveu pequeno, porem significativo aumento no crescimento de S. cerevisiae, sendo moderadamente tóxico para D. bruxellensis. Juntamente com os dados de crescimento em galactose e glicerol, isso mostra que D. bruxellensis é capaz de exportar acetato da mitocôndria para o citoplasma na ausência de AldH. A adição dos agentes antioxidantes glutationa e N-acetilcisteína bloqueou completamente o efeito tóxico da adição de DSF, mostrando que o acúmulo de acetaldeído induz estresse oxidativo nas leveduras. Quando utilizado nos ensaios de fermentação, DSF promoveu aumento inicial do fluxo glicolítico com consequente aumento na produção de etanol e, paradoxalmente, de acetato.
Dekkera bruxellensis is a microorganism highly related to industrial fermentation processes, especially in brewing, winemaking and fuel ethanol industries. In most of these processes, including the production of bioethanol, D.bruxellensis is considered a contaminant yeast, since it competes with Saccharomyces cerevisiae for the industrial substrates, resulting in low ethanol yield and pro-ductivity. Nevertheless, D. bruxellensis is able to produce ethanol, showing potencial for industrial use. One of the problems associated with low productivity must be related to the high metabolic flux towards the production of cytosolic acetate from acetaldehyde, which deviates the carbon from ethanol fermentation. In this context, the present study aimed to study the metabolism of acetalde-hyde as a branch point in the fermentative metabolism of D. bruxellensis. Therefore, the activity of the enzyme aceltaldehyde dehydrogenase (AldH) was biochemically inhibited by the use of disul-firam compound (DSF) in different formulations of the culture medium. The data showed that D. bruxellensis is more resistant to DSF than S. cerevisiae, with a inhibitory concentration of 100 μM for both yeasts. Addition of acetate to the medium containing glucose promoted a small but signifi-cant increase in S. cerevisiae growth, being somewhat toxic to D. bruxellensis. Together with the growth data on galactose and glycerol, this shows that D. bruxellensis is able to export acetate from the mitochondria to the cytoplasm in the absence of AldH. The addition of the antioxidant agents glutathione and N-acetylcysteine completely blocked the toxic effect of the addition of DSF, show-ing that the accumulation of acetaldehyde induces oxidative stress in the yeast. When used in the fermentation tests, DSF promoted initial increase in glycolytic flow with a consequent increase in the production of ethanol and, paradoxically, of acetate.

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Madeira, Inês Gomes Forte. "A susceptibilidade de vinhos elementares ao crescimento da levedura Dekkera bruxellensis." Master's thesis, ISA/UTL, 2011. http://hdl.handle.net/10400.5/3994.

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Abstract:

Mestrado em Viticultura e Enologia - Instituto Superior de Agronomia / Faculdade de Ciências. Universidade do Porto
The goal of this work was to understand the diverse susceptibility of several red wines to the increase and production of phenols by yeast Dekkera bruxellensis ISA 1791. In first place was to evaluate the concentration effect of tannins on the growth, observing a lost of viability increased with enlargement of you concentration, without, however lead to complete cell death. To evaluate the answer of growth and production of 4-etylphenol in wines of elementary grape varieties were used red wines (Touriga Nacional, Syrah, Cabernet Sauvignon and Baga) from different regions (Alentejo, Ribatejo, Bairrada). In case of elementary wines, did not verified growth nor production of 4-etylphenol because of the cell death in less than 24 hours. However, when the values of ethanol were corrected (12%v/v), pH (3.50), total acidity (7 g/l), tannins (IPT 80) and in the absence of free sulphur dioxide was registered an increase of cellular growth as a reply to that same cellular growth in all samples. It was observed one production of 4-etylphenol as reply to that same cellular growth, with income which vary between 140 μg/log CFU in Baga variety and 978 μg/log CFU in Syrah variety in Alentejo.

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Ávila, Larissa Dias de. "Estudo de Brettanomyces/Dekkera e etil-fenóis em vinhos tintos brasileiros." reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS, 2010. http://hdl.handle.net/10183/37905.

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Abstract:

A levedura Brettanomyces/Dekkera pode causar alterações importantes em vinhos tintos, com a formação de etil-fenóis, compostos de aromas desagradáveis. Este estudo teve como objetivo determinar a presença dessa levedura e de etil-fenóis em vinhos tintos comerciais e durante a vinificação em escala industrial, além de observar sua possível inibição pelo ácido sórbico. Brettanomyces/Dekkera foi quantificada em meio seletivo, e etil-fenóis, por cromatografia gasosa. SO2 livre e total, álcool, extrato seco total, açúcares residuais, acidez total e volátil e pH também foram determinados. O crescimento durante a vinificação foi acompanhado usando diferentes meios seletivos. Dekkera bruxellensis (NRRL Y – 12961) e leveduras isoladas de vinhos brasileiros foram cultivadas em meio sintético e vinho, contendo ácido sórbico entre 0 e 250 mg/L. Das 126 amostras de vinhos comerciais, 26,98% apresentaram Brettanomyces/Dekkera, e 46,03%, etil-fenóis acima do limiar de 426 μg/L, com SO2 e álcool mostrando-se como fatores limitantes. A passagem dos vinhos por barricas e as variedades de uva não influenciaram os níveis de contaminação e de etil-fenóis. Durante a vinificação, Brettanomyces/Dekkera foi detectada a partir do mosto. A baixa população não foi suficiente para formar etil-fenóis durante cinco meses após o esmagamento. Os meios não foram completamente seletivos, especialmente para uvas e mostos. O ácido sórbico inibiu a cepa de Dekkera bruxellensis (NRRL Y – 12961), especialmente para concentrações acima de 150 mg/L, sendo variável o grau de inibição para os isolados.
The yeast Brettanomyces/Dekkera can cause significant spoilage in red wines, with the production of ethylphenols, compounds of unpleasant odors. This study aimed at determining the presence of this yeast and ethylphenols in commercial red wines during vinification in industrial scale and to observe its possible inhibition by sorbic acid. Brettanomyces/Dekkera was quantified on selective medium, while ethyphenols were quantified by gas chromatography. Free and total SO2, alcohol, total dry extract, residual sugar, total and volatile acidity, and pH were also determined. The growth during winemaking was followed using different selective media. Dekkera bruxellensis (NRRL Y – 12961) and Brazilian wines yeasts were grown in synthetic medium and in wine, containing sorbic acid between 0 and 250 mg/L. Brettanomyces/Dekkera was present in 26.98% of the 126 samples of commercial wines. The ethylphenols were above of the 426 μg/L threshold in 46.03% of the samples. SO2 and alcohol were limiting factors. The stage in barrels and the varieties did not affect the levels of contamination and ethylphenols. During winemaking, Brettanomyces/Dekkera was detected from the must. The low population was not enough to produce ethylphenols in five months after crushing. The media were not completely selective, especially for grapes and musts. Sorbic acid inhibited the strains of Dekkera bruxellensis (NRRL Y – 12961), especially at concentrations above 150 mg/L, with variable degree of inhibition for the isolates.

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LIBERAL, Anna Theresa de Souza. "Análise da constituição genética de linhagens industriais da levedura Dekkera bruxellensis." Universidade Federal de Pernambuco, 2010. https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/6108.

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Abstract:

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:02:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo767_1.pdf: 2982127 bytes, checksum: ec4ba15e127a34669d0fe0a656f86bc3 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010
A levedura Dekkera bruxellensis vem se mostrando um importante microrganismo industrial, não apenas por causar eventos de contaminação em diversos processos fermentativos como também pela alta adaptação a esses processos. Este trabalho teve como objetivo principal identificar características genéticas básicas como composição genômica e cariotípica de linhagens industriais da levedura Dekkera bruxellensis a partir do uso de técnicas moleculares. Nesse trabalho, conseguimos visualizar o número e tamanho dos cromossomos das linhagens industriais de álcool combustível através da técnica de PFGE. Identificamos e analisamos estruturalmente os genes envolvidos na via do metabolismo central fermentativo através de busca no genoma seqüenciado, depositado no Banco de Dados do Projeto Dekkera bruxellensis. Analisamos a constituição genética e o status filogenético da D. bruxellensis em relação ao grupo ascomiceto através da análise dos genes piruvato descarboxilase (PDC) e álcool desidrogenase (ADH). Além disso, realizamos experimentos de expressão gênica por PCR em Tempo Real com os genes dbARO10 e dbADH em diversos meios com diferentes fontes de Carbono e Nitrogênio, verificando a resposta dessa levedura e analisando sua atividade enzimática para a fenilpiruvato descarboxilase e a álcool desidrogenase. Este foi um trabalho prospectivo, que fornece um painel inicial sobre a constituição genética desta levedura. Entretanto, algumas perguntas foram respondidas a partir dos resultados obtidos. Nos nossos trabalhos anteriores foi verificada a presença de dois padrões distintos de fingerprinting dos isolados de fermentação alcoólica. Esta variação de perfis refletiu-se nas variações cromossômicas, tanto em número quanto em tamanho. Pelas análises filogenéticas foi possível também, posicionar a D. bruxellensis dentro do grupo dos ascomicetos para os genes estudados

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PEREIRA, Luciana Filgueira. "Fisiologia da levedura Dekkera bruxellensis durante a fermentação com substratos industriais." Universidade Federal de Pernambuco, 2013. https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/13410.

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Abstract:

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-04-17T15:22:13Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Luciana Pereira.compressed.pdf: 4618352 bytes, checksum: dfc01e0d1bf57db6a0daaa7da4bafdf1 (MD5)
Made available in DSpace on 2015-04-17T15:22:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Luciana Pereira.compressed.pdf: 4618352 bytes, checksum: dfc01e0d1bf57db6a0daaa7da4bafdf1 (MD5) Previous issue date: 2013
FACEPE
A levedura Dekkera bruxellensis tem sido conhecida por sua adaptação aos processos fermentativos industriais, tendo chegado a situações que suplanta a levedura do processo Saccharomyces cerevisiae possuindo rendimentos equivalentes. Apesar de possuir grande adaptabilidade ao ambiente industrial, ainda são escassos trabalhos que se dediquem ao estudo de suas características fisiológicas e bioquímicas e que expliquem seu sucesso adaptativo. Este trabalho teve por objetivo descrever o metabolismo fermentativo da levedura GDB 248 em situações que simulem os processos fermentativos industriais na produção do álcool combustível bem como, sua tolerância aos diferentes fatores de estresse presentes no ambiente industrial. Foram realizadas fermentações com reciclo celular em meios sintético e caldo de cana. Os resultados mostraram que as células de D. bruxellensis possuem baixa eficiência no consumo da sacarose (consumo máximo 30%), maior tendência de conversão de açúcar em biomassa, mas exibem rendimentos em etanol próximos ao de S. cerevisiae. Os experimentos de tolerância aos fatores de estresse adicionados nas fermentações mostraram que D. bruxellensis possui, quando comparada a S. cerevisiae, tanto tolerância similar ao etanol quanto sensibilidade a ácidos orgânicos (acético e lático). Não foi detectada a produção de acido acético nas culturas de D. bruxellensis, tendo em ácido lático produção similar a S. cerevisiae. Para avaliar a tolerância de D. bruxellensis ao estresse, foram realizadas curvas de sobrevivência celular na presença dos agentes de estresse: H2O2, etanol, KCl, e após um choque térmico, relacionando o envolvimento de três proteínas de choque térmico no padrão transcricional desta resposta. Em conjunto, os resultados mostraram que as células de D. bruxellensis foram mais sensíveis aos fatores de estresse testados, quando comparados a S. cerevisaie, apesar de exibir tolerância similar ao etanol. Os genes HSP22, HSP24 e HSP82 são apenas responsivos ao choque térmico, mas suas proteínas não conferem tolerância às células. Por fim, para avaliar o comportamento desta levedura em outro substrato, frequentemente utilizado em destilarias no Brasil, e assim, compararmos o melhor desempenho desta espécie realizamos fermentações com reciclo em melaço e, desta vez, determinamos o conteúdo intracelular de trealose e glicogênio. No melaço, D. bruxellensis mostrou comportamento similar quanto à assimilação de sacarose, tendo tendência ao desvio do açúcar para biomassa e rendimento final em etanol equivalente ao produzido pelas células de S. cerevisiae. Mas, neste substrato, foi detectado a produção de ácido acético por esta levedura em quantidades superiores ao detectado nas culturas com S. cerevisiae. Quanto ao conteúdo intracelular dos carboidratos de reserva, só foi possível a detecção de glicogênio em quantidades inferiores a S. cerevisiae, pois nenhuma produção de trealose foi detectada em nossos ensaios.

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SILVA, Teresa Cristina Domingos da. "Ecologia da levedura Dekkera bruxellensis no ambientação da fermentação alcoólica industrial." Programa de Pos Graduacao em Biologia de Fungos, 2015. https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/14055.

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Abstract:

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2015-05-26T14:43:18Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertaçao Teresa.pdf: 858798 bytes, checksum: 366102ad9a523ad884dd83fab7fbdde1 (MD5)
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CNPq
A levedura Dekkera bruxellensis foi identificada como principal contaminante dos processos de fermentação alcoólica em destilaria de vários países, com destaque para as encontradas no nordeste brasileiro. A presença dessas leveduras pode resultar em uma diminuição na produtividade do etanol combustível, causando grande prejuízo econômico. Atualmente, vários estudos estão sendo realizados para um melhor entendimento sobre a fisiologia dessa espécie e pouco se sabe sobre como essa levedura contaminante se instala no processo industrial. Assim, esse trabalho se propõe a investigar os possíveis pontos de surgimento desta levedura em destilarias do estado da Paraíba, no Nordeste Brasileiro, a partir de amostras coletadas da água de lavagem da cana-de-açúcar, do caldo misto da fermentação e da vinhaça, um resíduo industrial. As leveduras foram isoladas usando meios seletivos com WLN e YNB-Nit e posteriormente identificadas a partir de sequenciamento de DNA. Foram isoladas 157 espécimes de D. bruxellensis. Estes isolados estavam presentes nos três pontos de coletas em ambas as destilarias, mas com diferentes percentuais de distribuição. Na destilaria A o surgimento das leveduras foi ditribuido em 33.9% nas amostras de caldo misto, 13,1% nas de água e 53% nas de vinhaça. Na destilaria B as percentagens foram 19,8% para caldo misto, 33,4% para água de lavagem e 46,8 para vinhaça Este estudo mostra que a levedura D. bruxellensis está presente em todas as amostras analisadas e em quantidade significantes, sendo o nitrato presente nessas amostras o possível responsável poe essa presença. Entretanto, mais estudos acerca da presença de nitrato e a presença da levedura nessas amostras são necessários para confirmar a adaptação de D. bruxellensis em diferentes nichos ecológicos.
The Yeast Dekkera bruxellensis was identified as the main contaminant of fermentation processes in distillery many countries, especially those found in northeastern Brazil. The presence of these yeasts can result in a decrease in fuel ethanol productivity, causing great economic damage. Currently, several studies are being conducted to a better understanding of the physiology of this species and little is known about how this contaminant yeast settles in the industrial process. Thus, this study aims to investigate the possible points of emergence of this yeast in distilleries in the state of Paraíba, in Northeastern Brazil, from samples collected wash sugarcane water, the mixed fermentation broth and vinasse , an industrial residue. The yeasts were isolated using selective media with WLN and YNB-Nit and later identified from DNA sequencing. They were isolated 157 specimens of D. bruxellensis. These isolates were present in the three collection points in both distilleries, but with different percentage distribution. The distillery in the emergence of yeast was ditribuido at 33.9% in mixed juice samples, 13.1% water and 53% in the vinasse. In distillery percentages were 19.8% for mixed juice, 33.4% for wash water and 46.8 for vinasse This study shows that the yeast D. bruxellensis is present in all samples and in significant quantity, and the nitrate present in these samples the possible responsible poe this presence. However, more studies about the presence of nitrate and the presence of yeast in these samples are needed to confirm the adaptation of D. bruxellensis in different ecological niches.

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TORRES, Rochane Regina Neves Baptista. "Análise do gene codificante da enzima Beta-Glucosidase na Levedura Dekkera bruxellensis." Universidade Federal de Pernambuco, 2012. https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/18526.

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Abstract:

Submitted by Caroline Falcao (caroline.rfalcao@ufpe.br) on 2017-04-10T16:51:06Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-Dissertação-RochaneTorres.pdf: 692913 bytes, checksum: 7cd4864091015b6ca287e445f2eb5c7a (MD5)
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O bagaço da cana-de-açúcar é constituído por celulose, hemicelulose e lignina. A celulose, quando hidrolisada, é transformada em celobiose que por sua vez pode ser hidrolisada em duas moléculas de glicose. A enzima ß-glucosidase é a proteína responsável pela hidrolise de celobiose em glicose. Entretanto, o bagaço é, na maioria das vezes, queimado para a produção de energia elétrica para ser utilizada no processo industrial não sendo utilizado para a produção de etanol. Por ter um crescimento mais rápido do que a levedura Saccharomyces cerevisiae em condições industriais de fermentação alcoólica apresentando uma maior resistências a altas concentrações de etanol, altas temperaturas e baixo pH têm feito da Dekkera bruxellensis alvo de pesquisas e melhoramentos genéticos. O presente trabalho teve como objetivo identificar e analisar in silico o gene codificante da ß-glucosidase no genoma da levedura D. bruxellensis através das ferramentas de bioinformática. Os resultados mostraram que a partir do alinhamento BLASTp, uma seqüência curta da levedura D. bruxellensis apresentou similaridade com seqüências codificantes para a enzima ß-glucosidase de espécies da divisão ascomiceto. A seqüência da espécie Kluyveromyces marxianus obteve o maior percentual de similaridade com a seqüência de D. bruxellensis. Foram identificados no alinhamento múltiplo, através de conhecimento prévio da literatura, os resíduos do sitio ativo da enzima ß-glucosidase presentes na seqüência de D. bruxellensis mostrando ser sítios bastante conservados.
Bagasse of cane sugar is composed of cellulose, hemicellulose and lignin. Cellulose, when hydrolyzed, is transformed into cellobiose which can be hydrolyzed to two glucose molecules. The enzyme ß-glucosidase is the protein responsible for the hydrolysis of cellobiose to glucose. However, the bagasse is, in most cases, burned to produce electricity to be used in the industrial process and it is not used for ethanol production. Due to have a faster growth than Saccharomyces cerevisiae yeast in industrial fermentation conditions and presenting a greater resistance to high concentrations of ethanol, low pH and high temperatures have made the Dekkera bruxellensis subject of research and genetic manipulations. This study aimed to identify and analyze in silico gene encoding ß-glucosidase in the D. bruxellensis yeast genome through the computational tools of bioinformatics. The results showed that in the blastp alignment, a short sequence of D. bruxellensis yeast showed similarity with sequences coding for the ß-glucosidase enzyme in the ascomycete division species. The Kluyveromyces marxianus sequence had the highest percentage in similarity with D. bruxellensis sequence. The multiple alignment tool was able to identify, using prior knowledge of the literature, the active site residues of the ß-glucosidase enzyme in the sequence of D. bruxellensis. Sites showed to be very conserved.

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Meneghin, Maria Cristina. "Caracterização e comportamento fermentativo de linhagens de Dekkera contaminantes da fermentação alcoólica." Universidade de São Paulo, 2008. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11141/tde-31032008-170252/.

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Abstract:

As leveduras Dekkera/Brettanomyces estão envolvidas na deterioração de vinhos após o término das fermentações alcoólicas e maloláticas, tendo se apresentado como agente contaminante de processos contínuos de produção de etanol industrial. São caracterizadas pela morfologia celular típica (células alongadas e ogivais), alta produção de ácido e crescimento lento, porém de difícil identificação. Embora muitos trabalhos já tenham sido publicados acerca do seu papel na fermentação do vinho, pouco se conhece sobre o seu comportamento no processo de fermentação para produção de álcool combustível. Desta forma, este trabalho objetivou selecionar, identificar e caracterizar linhagens de Dekkera e Brettanomyces isoladas de processos fermentativos, através de testes de taxonomia clássica, moleculares (PCR e sequenciamento) e de biotipagem através do sistema killer, visando a avaliação de fermentações mistas de Saccharomyces cerevisiae e Dekkera bruxellensis, a última em níveis de contaminação variando de 101 a 103 células/mL, em meio de caldo de cana, em processo de fermentação em batelada com reciclo celular (14 ciclos de 12 horas) para produção de etanol. Os testes morfológicos e fisiológicos/bioquímicos de oito linhagens selecionadas pela alta produtividade de ácido a partir da glicose e morfologia celular característica, apontaram os gêneros Dekkera ou Brettanomyces, sem possibilidade de identificação em nível de espécie devido à ambigüidade dos resultados dos testes fisiológicos. O sequenciamento da região ITS (Internal transcribed spacer) do DNA ribossomal confirmou somente três linhagens como Dekkera bruxellensis, sendo as demais predominantemente pertencentes à espécie Pichia guillermondii. O tamanho da região ITS, incluindo o gene 5,8S, variou de 400 500 pb entre as três linhagens. A utilização do sistema killer como método de biotipagem para leveduras Dekkera mostrou-se inviável devido ao fenótipo predominantemente neutro apresentado pelas linhagens. Somente a levedura killer CCA510 (Kluyveromyces marxianus) apresentou atividade inibitória contra as três linhagens de D. bruxellensis. Os ensaios fermentativos realizados com a linhagem de D. bruxellensis (CCA059) em fermentações puras e mistas com S. cerevisiae (CCA193, PE-02), mostraram que a levedura contaminante foi capaz de crescer em meio de caldo de cana, independentemente do tamanho do seu inóculo inicial (101 a 103 células/mL), impactando negativamente a fermentação etanólica, causando a diminuição da viabilidade de S. cerevisiae, diminuindo o pH do meio, decréscimo na produção de etanol e eficiência fermentativa, possivelmente devido à produção de ácido acético a partir do ART do meio de fermentação. Extrapolando-se os resultados obtidos em escala de laboratório para a escala industrial de uma destilaria de médio porte, a contaminação por Dekkera bruxellensis acarretaria uma perda de 6 milhões a 15 milhões de litros de álcool na safra, que deixariam de ser produzidos, dependendo do nível de contaminação.
Dekkera/Brettanomyces yeasts are found to be either contaminants in wine after completion of alcoholic and malolactic fermentations and in continuous fermentations for fuel alcohol production. They are characterized by typical cell morphology (elongated and ogival cells), high acid production and slow growth, however not easily identified. Although their role in wine fermentations is well-defined, a little is known about their behavior during fermentation for ethanol production. This work aimed the screening, identification and characterization of Dekkera and Brettanomyces strains isolated from fermentative processes, through classical taxonomic tests, molecular analysis (PCR and DNA sequencing) and biotyping by killer system. Following fermentation essays were carried out to evaluate mixed fermentations of Saccharomyces cerevisiae and Dekkera bruxellensis, the last one in contamination levels varying from 101 to 103 cells/mL, in sugar cane medium, using batch fermentation process with cell recycle (fourteen 12-hour cycles) for fuel ethanol production. Morphological and physiological/biochemical tests involving eight strains selected for their high acid production from glucose and typical cell morphology, pointed out to the genera Dekkera or Brettanomyces, without possibility of species identification due to the variability and ambiguity of physiological tests. DNA sequencing of the ITS (Internal transcribed spacer) region belonging to ribosomal DNA confirmed only three strains as Dekkera bruxellensis, the others were predominantly Pichia guilliermondii. The ITS region, including the 5,8S gene, varied from 400 to 500 bp among the three strains. The use of killer system as a biotyping method for Dekkera strains might not be applied because the strains were predominantly neutral to killer toxins. Only the killer strain CCA510 (Kluyveromyces marxianus) showed to have inhibitory activity against the strains of D. bruxellensis. The fermentative essays using a strain of D. bruxellensis (CCA059) in mixed and pure fermentations with S. cerevisiae (CCA193, PE-02), have shown that the contaminant yeast was able to grown in sugar cane juice, regardless of the initial inoculum size ((101 to 103 cells/mL), impairing the bioethanol fermentation, causing diminished S. cerevisiae viability, pH decrease, lower ethanol production and fermentative efficiency, mainly due to the acetic acid production from reducing sugar present in fermentation medium. Extrapolation of the results obtained in laboratory scale to industrial scale in a medium-sized distillery, have revealed that contamination by Dekkera bruxellensis would result in a alcohol loss of 6 millions to 15 millions of liters, which would not be produced, depending on the contamination level.

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Torres, Rochane Regina Neves Baptista. "Análise do gene codificante da enzima Beta-Glucosidase na Levedura Dekkera bruxellensis." Universidade Federal de Pernambuco, 2012. https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/12426.

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Abstract:

Submitted by Luiz Felipe Barbosa (luiz.fbabreu2@ufpe.br) on 2015-03-13T13:17:33Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Biblioteca.pdf: 708752 bytes, checksum: df7cba1e43069bfc51896d1a153c8993 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5)
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O bagaço da cana-de-açúcar é constituído por celulose, hemicelulose e lignina. A celulose, quando hidrolisada, é transformada em celobiose que por sua vez pode ser hidrolisada em duas moléculas de glicose. A enzima ß-glucosidase é a proteína responsável pela hidrolise de celobiose em glicose. Entretanto, o bagaço é, na maioria das vezes, queimado para a produção de energia elétrica para ser utilizada no processo industrial não sendo utilizado para a produção de etanol. Por ter um crescimento mais rápido do que a levedura Saccharomyces cerevisiae em condições industriais de fermentação alcoólica apresentando uma maior resistências a altas concentrações de etanol, altas temperaturas e baixo pH têm feito da Dekkera bruxellensis alvo de pesquisas e melhoramentos genéticos. O presente trabalho teve como objetivo identificar e analisar in silico o gene codificante da ß-glucosidase no genoma da levedura D. bruxellensis através das ferramentas de bioinformática. Os resultados mostraram que a partir do alinhamento BLASTp, uma seqüência curta da levedura D. bruxellensis apresentou similaridade com seqüências codificantes para a enzima ß-glucosidase de espécies da divisão ascomiceto. A seqüência da espécie Kluyveromyces marxianus obteve o maior percentual de similaridade com a seqüência de D. bruxellensis. Foram identificados no alinhamento múltiplo, através de conhecimento prévio da literatura, os resíduos do sitio ativo da enzima ß-glucosidase presentes na seqüência de D. bruxellensis mostrando ser sítios bastante conservados

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Galafassi, S. "Bioethanol production from renewable sources using yeasts of the Dekkera/Brettanomyces group." Doctoral thesis, Università degli Studi di Milano, 2009. http://hdl.handle.net/2434/64132.

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Grbin, Paul R. "Physiology and metabolism of Dekkera/Brettanomyces yeast in relation to mousy taint production." Adelaide, 1998. http://hdl.handle.net/2440/21644.

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Abstract:

Title page, contents and abstract only. The complete thesis in print form is available from the University Library.
Thesis (Ph.D.)--University of Adelaide, Dept. of Horticulture, Viticulture, and Oenology, 1998

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SILVA, Jackeline Maria da. "Diversidade da assimilação de fontes de carbono em isolados industriais de Dekkera bruxellensis." Universidade Federal de Pernambuco, 2017. https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/25944.

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Abstract:

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-08-20T20:19:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Jackeline Maria da Silva.pdf: 1830070 bytes, checksum: cd38a877523b6502d8430c98e1cfa370 (MD5)
Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-28T18:23:45Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Jackeline Maria da Silva.pdf: 1830070 bytes, checksum: cd38a877523b6502d8430c98e1cfa370 (MD5)
Made available in DSpace on 2018-08-28T18:23:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Jackeline Maria da Silva.pdf: 1830070 bytes, checksum: cd38a877523b6502d8430c98e1cfa370 (MD5) Previous issue date: 2017-02-23
FACEPE
Dekkera bruxellensis pertence à família Saccharomycetaceae e é considerado um parente distante de Saccharomyces cerevisiae. Esta levedura, principalmente na sua forma anamorfa Brettanomyces bruxellensis, é um importante contaminante da produção de vinho. O objetivo deste estudo foi comparar a fisiologia de linhagens da levedura Dekkera bruxellensis isoladas da produção de vinho e de álcool combustível quanto ao metabolismo de diferentes açúcares potencialmente utilizados como substrato industrial. Para isso, 30 isolados de Dekkera bruxellensis foram avaliados quanto à habilidade de assimilação respiratória e fermentativa de monossacarídeos e dissacarídeos, a diversidade fenotípica relacionada à repressão catabólica pela glicose, e a assimilação de diferentes açúcares, tais como glicose, sacarose e celobiose sob condição anaeróbica. Diferenças entre os perfis de assimilação respiratória foram observadas para cada isolado. As mais altas velocidades de crescimento foram encontradas em meio com glicose, frutose e sacarose 0,32 h⁻¹, 0,30 h⁻¹ e 0,30 h⁻¹, respectivamente, em aerobiose pelos isolados de destilaria. Em maltose e galactose, as maiores taxas de crescimento foram respectivamente, 0,21 h⁻¹ e 0,27 h⁻¹, alcançadas por isolados de destilaria e de vinícola, e em celobiose e lactose, as maiores taxas foram respectivamente, 0,20 h⁻¹e 0,15 h⁻¹, alcançados pelos isolados de destilaria. A presença do repressor catabólico 2-deoxiglicose no meio com galactose e maltose inibiu o crescimento de todos os isolados de vinho, diferentemente de alguns isolados de etanol que apresentaram resistência a este composto. A adição de Antimicina A nos meios de cultura alterou o crescimento apenas dos isolados de vinícola. Em anaerobiose estrita, os isolados de destilaria alcançaram velocidades de crescimento iguais a 0,44 h⁻¹; 0,40 h⁻¹e 0,26 h⁻¹ em glicose, sacarose e celobiose, respectivamente. A capacidade de assimilação de diferentes açúcares pelos isolados de D. bruxellensis frente às diversas condições testadas mostram a diversidade fenotípica encontrada dentro desta espécie. Além disso, os dados podem colaborar para explicação da capacidade adaptativa dessa espécie em diferentes ambientes industriais cujas fontes alternativas de carbono estejam presentes. Do ponto de vista biotecnológico, estudos com isolados de D. bruxellensis podem ser voltados para a produção de etanol de segunda geração, cujo um dos substratos é a celobiose, açúcar dos quais linhagens selvagens de S. cerevisiae não são capazes de assimilar.
Dekkera bruxellensis belongs to the family Saccharomycetaceae and is considered a distant relative of Saccharomyces cerevisiae. This yeast, mainly in its anamorphic form Brettanomyces bruxellensis, is an important contaminant of wine production. The aim of this study was to compare the physiology of strains Dekkera bruxellensis yeast isolated from wine production and ethanol on the metabolism of different sugars potentially used as industrial substrate. To this, 30 isolates of Dekkera bruxellensis were assessed for fermentative and respiratory assimilation ability monosaccharides and disaccharides, phenotypic diversity related to catabolite repression by glucose and the assimilation of different sugars, such as glucose, sucrose and cellobiose under anaerobic conditions. Differences between the profiles of respiratory assimilation were observed for each isolate. The highest growth rates were found in glucose, fructose and sucrose 0.32 h⁻¹, 0.30 h⁻¹and 0.30 h⁻¹, respectively, in aerobiosis by distillery isolates. In maltose and galactose, the highest growth rates were respectively 0.21 h⁻¹ and 0.27 h ⁻¹, reached by distillery and wine isolates, and in cellobiose and lactose, the highest rates were 0, 20 h⁻¹ and 0.15 h⁻¹, reached by distillery isolates. The presence of the 2-deoxyglucose catabolic repressor in the medium with galactose and maltose inhibited the growth of all the wine isolates, unlike some ethanol isolates were resistant to this compound. The addition of Antimycin A in the culture media altered the growth of only the wine isolates. In strict anaerobiosis the isolates of distillery reached growth rates equal to 0.44 h ⁻¹; 0.40 h ⁻¹ and 0.26 h ⁻¹ in glucose, sucrose and cellobiose, respectively. The capacity of assimilation of different sugars by D. bruxellensis isolates against the different conditions tested shows the phenotypic diversity found within this species. Moreover, the data can corroborate to explain the adaptive capacity of this species in different industrial environments whose alternative carbon sources are present. In biotechnological point of view, studies with isolated D. bruxellensis may be facing a second-generation ethanol, which one of the substrates is a cellobiose, sugar from which wild strains of S. cerevisiae are not able to assimilate

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Bassi, Ana Paula Guarnieri. "Tolerância ao estresse e características fermentativas de leveduras Dekkera bruxellensis isoladas da fermentação alcoólica." Universidade de São Paulo, 2011. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11141/tde-22112011-082855/.

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Abstract:

A espécie Dekkera bruxellensis tem sido detectada como a principal levedura contaminante em diversos processos fermentativos, dentre eles o de produção de etanol combustível, apresentando uma surpreendente capacidade de crescimento e adaptação naqueles substratos. No entanto, pouco se conhece sobre suas características de crescimento em condições de estresse e comportamento fermentativo. Desta forma, este trabalho objetivou avaliar a tolerância ao estresse e as características fermentativas exibidas por três linhagens de D. bruxellensis isoladas da fermentação alcoólica, além do efeito da contaminação em mosto de caldo de cana sobre os parâmetros fermentativos, buscando informações que possam contribuir para o manejo da fermentação alcoólica quando contaminada com esta levedura. Foram realizados testes de caracterização em meio YEPD sólido e líquido em condições estressantes para as três linhagens de D. bruxellensis e uma linhagem de S. cerevisiae (PE-02). O efeito do tratamento ácido associado ao etanol sobre a viabilidade das quatro linhagens em situação de agitação e sem agitação foi também avaliado. Em seguida, testes fermentativos em meio sintético (sem reciclo celular) e em meio de caldo de cana (com reciclo celular e utilizando-se ou não tratamento ácido) foram conduzidos para verificar as características fermentativas das linhagens de D. bruxellensis em comparação com S. cerevisiae, simulando-se uma contaminação por 103 células/mL da linhagem CCA155 em meio de caldo de cana. As três linhagens de D. bruxellensis apresentaram crescimento invasivo em meio YEPD sólido, possivelmente um mecanismo de sobrevivência da levedura em condições estressantes. Observou-se uma variação na resposta das linhagens às situações de estresse (baixo pH e alta concentração de etanol). Em condições não estressantes, a linhagem PE-02 apresentou melhor desenvolvimento, no entanto, em situações de estresse de pH, concentrações de açúcar e etanol, as linhagens de D. bruxellensis desenvolveram-se melhor. O controle eficiente do crescimento destas leveduras poderia ser obtido com um tratamento combinado de baixo pH (1,5) e etanol (9%), porém houve também prejuízo significativo à levedura S. cerevisiae, embora em menor extensão. Em sistema de batelada sem reciclo celular em meio sintético, verificou-se que a agitação influenciou significativamente a produção de etanol e ácidos por D. bruxellensis. O teor alcoólico foi maior quando se utilizou glicose como fonte de carbono ao invés de sacarose. Em sistema de batelada com reciclo celular em meio de caldo de cana, foram obtidos melhores resultados quanto à produção de etanol, menor teor de açúcar redutor total residual e maior eficiência fermentativa quando se utilizou o tratamento ácido do fermento (pH 1,5), assim como melhor controle do crescimento da linhagem CCA155 quando em cultura mista com S. cerevisiae (PE-02). O tratamento ácido utilizado teve efeito não só sobre o crescimento da levedura contaminante, mas também beneficiou a levedura do processo, resultando assim na minimização do efeito da contaminante sobre a fermentação conduzida em meio de caldo de cana sob dez ciclos fermentativos de 12 horas.
The species Dekkera bruxellensis has been considered as the main contaminant yeast in several fermentative processes, including the fuel alcohol production, showing a surprising growth capacity and adaptation in those substrates. However, a little is known about their growth characteristics in stressing conditions and fermentative profile. In this context, this work aimed to evaluate the stress tolerance and fermentative characteristics exhibited by three strains of D. bruxellensis isolated from the alcoholic fermentation, besides the effect of the contamination in sugar cane juice over the fermentative parameters, searching for information that could contribute to the management of the alcoholic fermentation when the medium is contaminated with this yeast. Characterization tests in YEPD medium (solid and liquid) under stressing conditions for the D. bruxellensis and S. cerevisiae (PE-02) strains were carried out. The effect of the acid treatment associated with ethanol over the cell viability of the four strains in shaken and non-shaken flasks was also evaluated. Following, fermentative tests in synthetic medium (without cell recycle) and in sugar cane juice (with cell recycle and with/without acid treatment) were carried out to verify the fermentative characteristics of the strains of D. bruxellensis comparing to S. cerevisiae, simulating a contamination by 103 cells/mL of the strain CCA155 in sugar cane juice. All the strains of D. bruxellensis showed invasiveness in YEPD agar medium, probably a survival mechanism in stressful conditions. A variation in the response of the strains to the stressing conditions (low pH and high ethanol concentration) was observed. In nonstressing situations, the strain PE-02 showed better growth; however, in stressing conditions of pH, ethanol and sugar concentrations, the strains of D. bruxellensis had better growth performance. The effective control of their growth could be obtained with a combined treatment of low pH (1.5) and ethanol (9%), however, a significant harmful effect to the S. cerevisiae strain was also verified, but in a lower extension. In batch system without cell recycle in synthetic medium, it was verified the influence of agitation over the ethanol and acid production by D. bruxellensis. The alcohol content was significantly higher when glucose was utilized instead of sucrose. In batch system with cell recycle in sugar cane juice, the best results for ethanol production, lower residual total reducing sugar and higher fermentative efficiency were obtained with the acid treatment of the ferment at pH 1.5, as well as a better growth control of the strain CCA155, in mixed culture with S. cerevisiae (PE-02). The acid treatment utilized in this work had effect not only over the growth of the contaminant yeast, but also benefited the yeast S. cerevisiae, resulting in the minimization of the effect of the contaminant over the fermentation developed in sugar cane juice medium in 12-hour ten fermentative cycles.

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PITA, Will de Barros. "Análise da expressão dos genes relacionados à assimilação do nitrato na levedura Dekkera Bruxellensis." Universidade Federal de Pernambuco, 2009. https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/6106.

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Abstract:

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:02:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3634_1.pdf: 1182297 bytes, checksum: 555f62e24f992ab833cb18ef506968ae (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico
A levedura Dekkera bruxellensis foi identificada como principal contaminante dos processos de fermentação alcoólica em destilarias do Brasil, do Canadá e dos EUA. Contagens elevadas desta levedura podem resultar em diminuição da produtividade etanólica, com conseqüente prejuízo econômico. Recentemente, esta levedura teve seu genoma parcialmente seqüenciado e foram identificadas seqüências correspondentes a genes do metabolismo do nitrato. A presença de tais genes indica que D. bruxellensis possa usufruir deste composto como fonte de nitrogênio, ao contrário de Saccharomyces cerevisiae, durante o processo fermentativo. Como estas leveduras competem no ambiente industrial, a presença de nitrato poderia ser um fator diferencial na adaptação de D. bruxellensis, visto que esta fonte pode estar presente no caldo de cana proveniente do processo de adubação da cana de açúcar. Assim, os objetivos deste trabalho foram analisar o perfil de expressão dos genes da via metabólica do nitrato de D. bruxellensis em meios laboratoriais e verificar se esta levedura expressa estes genes em caldo de cana industrial utilizando a técnica de PCR quantitativa (qPCR). As células de D. bruxellensis foram cultivadas em meios sintéticos contendo glicose como fonte de carbono na presença de amônia, de nitrato ou ambas as fontes. As células foram coletadas em pontos específicos para extração do RNA, síntese de cDNA e analise por qPCR utilizando o método 2-ΔΔCt para quantificação da expressão gênica. Como controle endógeno foi empregado o gene EFA1. Todos os quatro genes estudados apresentaram indução de sua expressão na presença de nitrato e foram sujeitos à repressão catabólica do nitrogênio quando a amônia estava presente no meio. Adicionalmente, a presença e o consumo de nitrato no caldo de cana foram investigados. Neste substrato, os genes apresentaram perfil de expressão diferente do observado nos meios YNB. O nitrato foi detectado no caldo de cana e seu consumo ao longo do tempo foi determinado. Este estudo comprova que os genes da assimilação do nitrato em D. bruxellensis são induzidos em presença deste composto e reprimidos na presença de amônia. As células de D. bruxellensis expressaram estes genes no caldo de cana. Entretanto, maiores estudos acerca da regulação da expressão dos genes desta via metabólica ainda são necessários para correlacionar esta expressão com a adaptação de D. bruxellensis no meio de fermentação alcoólica

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Bernardi, Taís Letícia. "Desenvolvimento de metodologia molecular para detecção de leveduras dos gêneros Brettanomyces e Dekkera em vinhos tintos finos." reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS, 2011. http://hdl.handle.net/10183/142784.

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Abstract:

O vinho é a bebida obtida por meio da fermentação alcoólica do mosto simples de uva sã, fresca e madura. Durante o processo fermentativo, realizado por leveduras Saccharomyces cerevisiae, ocorre uma sucessão de microrganismos. Espécies pertencentes aos gêneros Brettanomyces e Dekkera permanecem no produto final podendo influenciar de forma negativa ao produzirem compostos fenólicos voláteis. Estas leveduras apresentam como uma de suas características a lenta taxa de crescimento. Com isto, este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de meio de cultivo para isolamento e detecção destas leveduras e de metodologia molecular para detecção independente de cultivo. O meio de cultivo desenvolvido permitiu o isolamento e também a diferenciação de leveduras dos gêneros Brettanomyces e Dekkera das demais leveduras comumente encontradas em vinho. Uma metodologia molecular, baseada em PCR convencional, foi desenvolvida para a detecção dos gêneros em vinhos. Inicialmente foram construídos dois pares de oligonucleotídeos. Um par universal para leveduras e outro específico para D. bruxellensis. O primeiro par apresentou ampla aplicabilidade na avaliação da efetividade de diferentes processos de extração de DNA e na detecção de compostos inibidores presentes em amostras de vinho. A utilização de ambos os pares permitiu o desenvolvimento de um protocolo de extração e amplificação de DNA diretamente de amostras de vinho, facilitando a identificação de leveduras D. bruxellensis e permitindo a tomada de decisão em tempo hábil de evitar perdas econômicas.
The wine is a beverage obtained by alcoholic fermentation of simple must of healthy, fresh and mature grape. During the fermentation process, carried out by Saccharomyces cerevisiae yeasts, these is a succession of microorganisms. Species belonging to the genera Brettanomyces and Dekkera remain in the final product can influence negatively by producing volatile phenolic compounds. These yeasts present as one the features of the slow rate of growth. This work aimed at the development of culture media for isolation and detection of these strains and molecular methods for detection of independent culture. The medium developed also allowed the isolation and differentiation of yeasts of the genera Brettanomyces and Dekkera yeasts from other commonly found in wine. A molecular approach, based on conventional PCR, was developed for the detection of genera in wines. Initially we constructed two sets of primers. A universal pair for yeast and other specific for D. bruxellensis. The first pair showed a broad applicability in evaluating the effectiveness of various procedures for DNA extraction and detection of inhibitory compounds present in wine samples. The use of both pairs allowed development of a protocol for extracting and amplifying DNA directly from wine samples, facilitating the identification of yeasts D. bruxellensis and allowing the decision-making in a timely manner to avoid economic losses.

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LIBERAL, Anna Theresa de Souza. "Identificação molecular da levedura Dekkera bruxellensis como principal contaminante do processo de fermentação alcoólica industrial." Universidade Federal de Pernambuco, 2006. https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/6505.

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Abstract:

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:05:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6279_1.pdf: 1159943 bytes, checksum: 304759a6d6ef6a75356a5eeee65e876b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006
As indústrias de álcool combustível realizam a fermentação a partir de um processo aberto e não asséptico permitindo que leveduras de baixo rendimento fermentativo se instalem no processo. Identificar e caracterizar a principal espécie de levedura contaminante detectada em usinas de álcool combustível na região Nordeste do Brasil utilizando métodos moleculares foi, portanto o objetivo deste trabalho. O isolado não-Saccharomyces cerevisiae mais freqüente foi identificado por provas bioquímicas e por seqüênciamento de DNA como pertencente à espécie Dekkera bruxellensis, e diversas linhagens genéticas puderam ser discriminadas entre os isolados. O estudo da dinâmica da população de leveduras mostrou a alta adaptabilidade de D. bruxellensis às condições industriais, causando episódios de contaminação recorrentes e severos. Contaminações severas do processo de fermentação industrial por leveduras Dekkera têm um impacto negativo no rendimento global das destilarias, explicado neste trabalho pela menor produtividade volumétrica desta levedura. A partir do exposto, a rápida detecção de D. bruxellensis em mosto industrial poderá evitar problemas operacionais nas usinas de álcool combustível

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Moktaduzzaman, M. "DEKKERA BRUXELLENSIS: STUDIES ON CARBON AND NITROGEN SOURCES METABOLISM AND ITS RESPONSE TO ACETIC ACID STRESS." Doctoral thesis, Università degli Studi di Milano, 2014. http://hdl.handle.net/2434/244313.

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Abstract:

The lineages of Dekkera bruxellensis and Saccharomyces cerevisiae separated approximately 200 million years ago, but they share several industrially relevant traits, such as the ability to produce ethanol under aerobic conditions (Crabtree effect), high tolerance towards ethanol and acid, and ability to grow without oxygen. Beside a huge adaptability, D. bruxellensis exhibits a broader spectrum of consumable carbon and nitrogen sources in comparison to S. cerevisiae. This yeast is famous as a spoilage yeast in food and beverage industries and contaminates ethanol production process. Despite its economic importance and physiological interest, D. bruxellensis has not been well studied yet in detail. To characterize its carbon metabolism and regulation, we investigated how galactose is used as carbon source by this yeast. Here we show that in D. bruxellensis under aerobic conditions and on ammonium-based media galactose is a not-fermentable carbon source, in contrast to S. cerevisiae which can ferment also this sugar. The expression of genes involved in different metabolic pathways was also analysed. We report that genes involved in galactose utilization, respiratory metabolism, TCA cycle, glyoxylate cycle and gluconeogenesis are repressed in glucose-based media. These results indicate that in D. bruxellensis glucose repression operates similarly to what occurs in S. cerevisiae. In contrast to Saccharomyces cerevisiae, D. bruxellensis can use nitrate as sole nitrogen source. Our experiments showed that in D. bruxellensis, utilization of nitrate determines a different pattern of fermentation products. Acetic acid, instead of ethanol, became in fact the main product of glucose metabolism under aerobic conditions. We have also demonstrated that under anaerobic conditions, nitrate assimilation abolishes the ‘‘Custers effect’’, in this way improving its fermentative metabolism. Acetic acid, due to its toxic effects, is used in food industry as a preservative against microbial spoilage. We investigated how this yeast responds when exposed to acetic acid. A detailed analysis of acetic acid metabolism was performed on three strains which exhibited a different resistance. Our studies show that D. bruxellensis behaves, from a metabolic point of view, more similarly to S. cerevisiae, being unable to metabolize acetic acid in presence of glucose. The presence of acetic acid affected the growth, causing a reduction of growth rate, glucose consumption rate, ethanol production rate as well as biomass and ethanol yield. Interestingly, the cells continued to produce acetic acid.

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Tiukova, Ievgeniia A., Mats E. Petterson, Christian Tellgren-Roth, Ignas Bunikis, Thomas Eberhard, Olga Vinnere Pettersson, and Volkmar Passoth. "Transcriptome of the Alternative Ethanol Production Strain Dekkera bruxellensis CBS 11270 in Sugar Limited, Low Oxygen Cultivation." Uppsala universitet, Institutionen för immunologi, genetik och patologi, 2013. http://urn.kb.se/resolve?urn=urn:nbn:se:uu:diva-200117.

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Abstract:

Dekkera bruxellensis can outcompete Saccharomyces cerevisiae in environments with low sugar concentrations. It is usually regarded as a spoilage yeast but has lately been identified as an alternative ethanol production organism. In this study, global gene expression in the industrial isolate D. bruxellensis CBS 11270 under oxygen and glucose limitation was investigated by whole transcriptome sequencing using the AB SOLiD technology. Among other observations, we noted expression of respiratory complex I NADH-ubiquinone reductase although D. bruxellensis is a Crabtree positive yeast. The observed higher expression of NADH-generating enzymes compared to NAD(+)-generating enzymes might be the reason for the previously observed NADH imbalance and resulting Custer effect in D. bruxellensis. Low expression of genes involved in glycerol production is probably the molecular basis for high efficiency of D. bruxellensis metabolism under nutrient limitation. No D. bruxellensis homologs to the genes involved in the final reactions of glycerol biosynthesis were detected. A high number of expressed sugar transporter genes is consistent with the hypothesis that the competitiveness of D. bruxellensis is due to a higher affinity for the limiting substrate.

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Codato, Carolina Brito. "Produção de etanol de 2ª geração por Dekkera bruxellensis a partir de hidrolisado de bagaço de cana-deaçúcar." Universidade Federal de São Carlos, 2013. https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/19.

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Abstract:

Made available in DSpace on 2016-06-02T18:55:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 5512.pdf: 1675884 bytes, checksum: 47d8b8c6a94d1de848c43c964a5f3257 (MD5) Previous issue date: 2013-08-13
Financiadora de Estudos e Projetos
Bioethanol is an alternative low cost fuel, which is conventionally obtained in Brazil from the fermentation of sugarcane juice, molasses, or a mixture of these. However, alternatively, ethanol could be obtained from lignocellulosic materials, wastes or agroindustrial byproducts composed of cellulose, hemicellulose and lignin, such as sugarcane bagasse. For each ton of cane processed, 250 kg of bagasse are obtained on average, which is usually burned for power generation industry. The microbial cultivation using these materials depend on the availability of substrates, accordingly, acid hydrolysis has been considered one of the most widely used process for the depolymerization of the hemicellulose fraction of lignocellulosic materials, due to their low cost and high efficiency. However, under conditions of high temperature and pressure, glucose and xylose released are degraded to 5- hydroxymethylfurfural (HMF) and furfural, respectively. These compounds are characterized by inhibiting the yeast used in the fermentation step, which influences the microbial metabolism and the conversion of hexoses and pentoses obtained in ethanol. In this context, the aim of this work was to evaluate the ability of a yeast strain, from the species Dekkera bruxellensis (CCA155) in producing ethanol from sugarcane bagasse hydrolysates, since it has shown to be a yeast tolerant to adverse conditions found in industrial fermentation processes. The results indicated that D. bruxellensis was capable of producing ethanol in a synthetic medium containing xylose or arabinose, and xylose or glucose as sole carbon sources, and when grown in concentrations of 50 or 100% sugarcane bagasse hydrolyzate, maximum specific speeds growth was similar, about 0.009 h-1, with cell productivity of about 0.035 gL-1h-1. In the bioreactor tests, the yeast displayed low specific growth rate during the first five days, 0.003 h-1, caused by a slow consumption of glucose. But in a second phase of growth, with a lower rate 0.001 h-1, there was an increase in xylose consumption, a period in that an increase in ethanol concentration with maximum yield of approximately 3.25 mg/L.h was observed. Therefore even with lower growth when compared to yeast fermentation conventionally used in ethanol industries, these results suggest the feasibility of the cultivation of D. bruxellensis in hydrolysates of sugarcane bagasse.
O bioetanol é um combustível alternativo, de baixo custo o qual convencionalmente é obtido no Brasil a partir da fermentação de caldo de cana-de-açúcar, melaço ou a mistura destes. Entretanto, alternativamente, o etanol poderia ser obtido a partir de materiais lignocelulósicos, resíduos ou subprodutos agroindustriais compostos por celulose, hemicelulose e lignina, tais como o bagaço de cana-de-açúcar. Para cada tonelada de cana processada, são obtidos, em média, 250 kg de bagaço, o qual é geralmente queimado para geração de energia na indústria. Os cultivos microbianos a partir destas matérias-primas dependem da disponibilização dos substratos, nesse sentido, a hidrólise ácida tem sido referida como um dos processos mais utilizados para a despolimerização da fração hemicelulósica dos materiais lignocelulósicos, devido ao seu baixo custo e alta eficiência. No entanto, em condições de alta pressão e temperatura, glicose e xilose liberadas são degradadas a 5-hidroximetilfurfural (HMF) e furfural, respectivamente. Estes compostos são caracterizados por inibirem as leveduras utilizadas na etapa de fermentação, o que influencia o metabolismo microbiano e a conversão das hexoses e pentoses obtidas em etanol. Neste contexto, o trabalho consistiu em avaliar a capacidade de uma linhagem da levedura Dekkera bruxellensis em produzir etanol a partir de pré-hidrolisados de bagaço de cana-de-açúcar, já que a mesma tem mostrado ser uma levedura tolerante a condições adversas encontradas em processos fermentativos industriais. Os resultados indicaram que D. bruxellensis foi capaz de produzir etanol em meio sintético contendo xilose ou arabinose, ou ainda xilose e glicose como únicas fontes de carbono, e quando cultivadas em concentrações de 50 ou 100% de pré-hidrolisado de bagaço de cana-de-açúcar, as velocidades específicas de crescimento máximas foram semelhantes, em torno de 0,009 h-1, com produtividade celular de aproximadamente 0,035 g.L-1 h-1. Os ensaios em biorreator demonstraram baixas velocidades específicas de crescimento nos primeiros cinco dias, 0,003 h-1, ocasionado por um lento consumo de glicose. Porém em uma segunda fase de crescimento, com velocidade específica menor 0,001 h-1, ocorreu um aumento no consumo de xilose, período que também se observou aumento na concentração de etanol com produtividade máxima de aproximadamente 3,25 mg/L.h. Portanto apesar de crescimento inferior quando comparado às leveduras convencionalmente usadas na fermentação etanólica industrial, estes resultados sugerem a viabilidade de cultivo da D. bruxellensis CCA155 em pré-hidrolisados de bagaço de cana-de-açúcar.

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Pita, Will de Barros. "Estudo do metabolismo e influência de fontes de nitrogênio na fisiologia e expressão gênica da levedura Dekkera Bruxellensis." Universidade Federal de Pernambuco, 2012. https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/12753.

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Abstract:

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-04-08T14:48:36Z No. of bitstreams: 2 Tese de Doutorado_Will de Barros Pita_CCB_2012.pdf: 2965963 bytes, checksum: babbeaf0d359662414391200c3f5a596 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5)
Made available in DSpace on 2015-04-08T14:48:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese de Doutorado_Will de Barros Pita_CCB_2012.pdf: 2965963 bytes, checksum: babbeaf0d359662414391200c3f5a596 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012
CNPq; CAPES; FACEPE
A levedura Dekkera bruxellensis é consistentemente associada a contaminações de processos de fermentação alcoólica industrial. Na produção de vinhos, esta levedura é responsável pela produção de aromas indesejáveis, enquanto que na produção de etanol combustível, D. bruxellensis compete com Saccharomyces cerevisiae pelo substrato industrial. Apesar de compartilhar alguns fenótipos com S. cerevisiae, D. bruxellensis apresenta características peculiares, como por exemplo, a capacidade de utilizar nitrato como única fonte de nitrogênio. No ambiente industrial, as quantidades de açúcares são elevadas e, nesses casos, o fator limitante do crescimento é geralmente a disponibilidade de nitrogênio, um nutriente essencial para todas as formas de vida. O objetivo do presente trabalho foi investigar o metabolismo de diferentes fontes de nitrogênio e determinar a influência da natureza e da concentração destas fontes na fisiologia e expressão gênica de D. bruxellensis, em busca de potenciais fatores positivos de adaptação para esta levedura. Os resultados mostraram que a assimilação de nitrato pode favorecer D. bruxellensis no ambiente industrial, pois fornece o nitrogênio necessário para manter o crescimento desta levedura mesmo após a depleção da amônia no caldo de cana. Adicionalmente, a escassez de nitrogênio diminui a taxa de crescimento, consumo de açúcares e produção de etanol em D. bruxellensis. No entanto, a limitação de carbono é ainda mais drástica para o metabolismo celular, ocasionando redução significativa dos principais parâmetros fisiológicos. Com relação à assimilação de fontes de nitrogênio, as enzimas glutamato desidrogenase e glutamato sintase podem trocar de papéis como principal via de biossíntese de glutamato e que genes codificantes de permeases de nitrogênio estão sob rígido controle transcricional. Além disso, D. bruxellensis apresenta preferência pela utilização do metabolismo respiratório em detrimento da fermentação em condições limitantes de crescimento. Finalmente, um novo grupo de genes de referência para ensaios de expressão gênica em D. bruxellensis foi estabelecido. A partir dos resultados gerados no presente trabalho, é possível entender as repostas metabólicas de D. bruxellensis em diferentes fontes de nitrogênio, o que pode auxiliar na identificação de novos fatores de adaptação para esta levedura, que permitem o seu estabelecimento e manutenção no ambiente indutrial.

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Keskin, Mehmet Yigit. "Studies on the incidence of Dekkera bruxellensis in Turkish wines and effect of low temperatures on 4-ethylphenol production." Master's thesis, ISA/UL, 2012. http://hdl.handle.net/10400.5/8596.

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Abstract:

Mestrado Vinifera EuroMaster - Instituto Superior de Agronomia
Brettanomyces/Dekkera bruxellensis has the ability to produce significant amounts of 4-ethylphenol (4-EP) and cause important organoleptic defects in affected wines. In this work we investigated the incidence of B. bruxellensis and of 4-ethylphenol in Turkish red wines randomly collected at winery facilities. Among 40 samples, this species was only recovered from one sample aged in oak barrels. In 4 samples, culturable population was not found but the 4-EP concentration indicated previous Dekkera bruxellensis activity. Thus, following potential Brettanomyces-sourced aroma impacts in wine using 4-Ethylphenol and 4-Ethylguaiacol concentrations as proxies should only be considered reliable at analyte levels >100 μg/l (Rayne and Eggers, 2007). Furthermore, we studied the influence of storage temperature on the production of 4-EP by wild of D. bruxellensis in 3 different Portuguese red wines. Temperatures of 10 ºC and 15ºC were not effective in preventive the increase of 4-EP over 600 μg/l during 90 days. At 3 ºC one sample showed similar 4-EP increase while in two other samples its concentration was kept unchanged. Production of 4-EP at 3ºC and 10ºC was confirmed when the strain TR 26 was incubated in red wine for 49 days. However, the total amount of 4-EP produced was below 150 μg/l while at 15ºC and 20ºC the values reached 1600 μg/l. Therefore, the effect of low temperatures acts by delaying microbial growth which results in lower concentrations of 4-EP but once temperature increases 4-EP production is readily stimulated

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Valdetara, F. "STUDY OF THE VOLATILE PHENOL METABOLISM AND ROLE OF SO2 AS STRESS AGENT IN BRETTANOMYCES/DEKKERA BRUXELLENSIS UNDER WINE CONDITIONS." Doctoral thesis, Università degli Studi di Milano, 2017. http://hdl.handle.net/2434/541053.

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Abstract:

Biological spoilage of wine arises from yeasts and bacteria metabolic activity. Brettanomyces/Dekkera bruxellensis, one of the main contaminating yeast, is able to produce unpleasant compounds, such as vinyl and ethyl phenols (VPs). These off-flavors define the so called “Brett” character. Two enzymes, the cinnamate decarboxylase (CD) and the vinylphenol reductase (VPR), are involved in the spoilage activity. Sulphur dioxide (SO2) is the most common additive used to prevent and/or control microbial contamination in many foods, but decreasing its use is advisable both for limiting the detrimental cumulative effects on human health and improving the sustainability in winemaking. The first aim of this study was to provide a certain identification of the VPR enzyme, by cloning the gene in a species not producing ethyl phenols, such as Saccharomyces cerevisiae. The role of this enzyme in the conversion of 4-vinyl guaiacol into 4-ethyl guaiacol was proven by the expression, of a biologically active form of the heterologous protein. A VPR specific activity of 9 ± 0.6 mU/mg is found in crude extracts of transformed clones of S. cerevisiae. A his-tag purification approach allowed to confirm the results in activity trials carried out in the enriched fraction of the protein purified from recombinant cells of S. cerevisiae; in particular, a VPR specific activity of 1.83 ± 0.03 U/mg at pH 6.0 is measured. Furthermore, the strain-dependent character of the species regarding the VP production was investigated at sequence level in 17 different D. bruxellensis strains. Since the observed polymorphism (2.3%) and the allelic heterozygosity state of the gene do not correlate with the different release in off-flavors, this could indicate that transcriptional/post-translational mechanisms might affect the final production. In addition, the expression of the two genes involved in VP production was investigated as a three-factor variation response using a Response Surface Methodology approach. As first, a proper house-keeping-gene was identified to allow the analysis of different SO2, pH and ethanol concentrations on VP production under oenological conditions. While statistical irrelevance as far SO2 lead this to not be commented as main factor affecting CD expression, the linear interaction with pH and ethanol concurr to define a significant effect (p < 0.05) on it. Considering the permissive growth condition (0 mg/L mol.SO2, pH 4.5 and 5% v/v EtOH), CD is generally downregulated. The combination of factor levels maximizing (0.83 fold-change) CD expression is: 0.25 mg/L mol. SO2, pH 4.5 and 12.5% v/v EtOH. Contrariwise, VPR expression does not seem to be influenced by any main factor nor by their interactions, but its expression is maximized (1.80 fold-change) at the same conditions calculated for CD gene. Finally, the study of the genetic mechanisms involved in the SO2 stress response of two B./D. bruxellensis strains (AWRI1499 and CBS2499) was carried out. In particular, a RNA-Seq based approach was applied on cells grew in a wine-model environment. Results confirm the ability of the species of growing in such severe conditions and suggest that the environmental adaptation observed might be due to a detoxification activity that include the sulphur metabolic process. Indeed, this metabolic strategy has been observed to be one of the main mechanisms of resistance to sulphur dioxide stress in S. cerevisiae. A relative up-regulation of genes involved in the last step of the Sequence of Reduction of Sulfate (SRS) and a high up-regulation of SSU1 gene (up to 4-fold and 47-fold in the CBS2499 and AWRI1499 strains, respectively), encoding a plasmamembrane sulfite pump, are observed.

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Bassi, Ana Paula Guarnieri. "Avaliação da contaminação conjunta de Dekkera bruxellensis e Lactobacillus fermentum sobre a fermentação alcoólica: efeito do substrato e formas de controle." Universidade de São Paulo, 2016. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11141/tde-07062016-143219/.

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Abstract:

As contaminações por leveduras selvagens e por bactérias no processo de produção de etanol combustível no Brasil causam prejuízos ao rendimento fermentativo e aumento de custos pelo uso de biocidas. No entanto, poucos estudos tem focado no efeito das contaminações conjuntas de leveduras selvagens e bactérias e as possíveis interações entre os micro-organismos, especialmente em função dos diferentes substratos de fermentação e das formas de controle. Este trabalho teve por objetivos verificar o efeito do substrato (caldo de cana e melaço) sobre o desenvolvimento das contaminações pela levedura da espécie Dekkera bruxellensis e pela bactéria Lactobacillus fermentum, em co-culturas com Saccharomyces cerevisiae (linhagem industrial PE-2) e possíveis formas de controle do crescimento dos contaminantes (pelo uso de metabissulfito de potássio e adição de etanol ao tratamento ácido) sem afetar a levedura do processo. Os testes foram realizados em condições de crescimento (substrato com 4 °Brix, culturas agitadas) e fermentação com reciclo celular (substrato com 16 °Brix, culturas estáticas). Houve interação entre as leveduras e a bactéria quando crescidas em caldo de cana 4 °Brix. A levedura industrial não foi afetada pela presença dos micro-organismos contaminantes, no entanto, para D. bruxellensis a presença de L. fermentum interferiu positivamente no crescimento, com aumento no número de UFC, e consequentemente inibição do crescimento da bactéria. Em melaço, houve um estímulo ao crescimento de L. fermentum quando em co-cultura com S. cerevisiae. Houve influência das contaminações sobre os parâmetros avaliados no experimento (pH, açúcar redutor total, etanol, glicerol e crescimento das células) e a contaminação conjunta de L. fermentum e D. bruxellensis potencializou o efeito das contaminações pelos micro-organismos isoladamente, tanto em caldo quanto em melaço. A adição de 13% de etanol à solução de ácido sulfúrico pH 2,0 no tratamento celular resultou em uma diminuição significativa no número de UFC de D. bruxellensis (entre 90-99%). A levedura PE-2 foi pouco afetada pelo tratamento proposto. A bactéria L. fermentum teve seu crescimento afetado em todas as combinações testadas. Como os experimentos foram feitos em co-culturas, verificouse que pode haver influência de um micro-organismo sobre a viabilidade do outro, dependendo da reação ao tratamento ácido-etanol. O metabissulfito de potássio (MBP), no intervalo entre 200-400 mg/L, foi eficaz para controlar o crescimento de D. bruxellensis dependendo do meio de cultura e linhagem. Quando adicionado (250 mg/L) à solução ácida (pH 2,0) no tratamento celular, um efeito significativo foi observado nas culturas mistas, pois ocorreu a inativação do SO2 pela S. cerevisiae e uma provável proteção das células de D. bruxellensis, não sendo essa levedura prejudicada pelo MBP. A resposta fisiológica de S. cerevisiae na presença de MBP pode explicar a diminuição significativa na produção de etanol. Quando o MBP foi adicionado ao meio de fermentação, resultou no controle da D. bruxellensis mas não em sua morte, com efeito menos intensivo sobre a eficiência fermentativa. Em cocultura com a adição de MBP, a eficiência fermentativa foi significativamente menor do que na ausência de MBP.
The contaminations by wild yeasts and bacteria are harmful to the fermentative process for fuel ethanol production in Brazil due to the decrease in ethanol yield and increase in the industrial costs by the use of biocides. However, a few studies have been focused in the effects of simultaneous contaminations of wild yeasts and bacteria and the possible interactions among the microorganisms, especially concerning different fermentation substrates and forms of growth control. This work aimed to verify the effect of the substrate (sugar cane juice and molasses) on the development of contaminations by Dekkera bruxellensis yeast and Lactobacillus fermentum bacteria, in co-cultures with Saccharomyces cerevisiae (industrial strain PE-2) and possible forms of growth control of the contaminants (using potassium metabisulphite and addition of ethanol to the acid treatment) without affecting the starter yeast. Tests were carried out in growing conditions (substrate with 4 °Brix, shaken cultures) and cell-recycled fermentation (substrate with 16 °Brix, static cultures). There was interaction among the yeasts and the bacteria when growing in sugarcane juice 4 °Brix. The industrial yeast strain was not affected by the presence of the contaminant microorganisms, however, for D. bruxellensis, the presence of L. fermentum influenced positively the growth, increasing the number of CFU and consequently inhibiting the bacterial growth. In molasses, there was an increase in the growth of L. fermentum when in co-culture with S. cerevisiae. The contaminations influenced the fermentative parameters (pH, total reducing sugars, ethanol, glycerol and cell growth) and the simultaneous contamination by L. fermentum and D. bruxellensis potentiated the effect of the contaminations isolately, both in sugarcane juice as in molasses. The combined effect of pH 2.0 + 13% ethanol in the cell treatment resulted in a significant decrease (90-99%) in the CFU number of D. bruxellensis. The industrial yeast PE-2 was a little affected by the treatment. The growth of the bacteria L. fermentum was affected in all the combinations tested. As the experiments were performed with co-cultures, an influence of a microorganism over the viability of another was observed, depending of the reaction to the treatment. The potassium metabisulphite (PMB), in the range of 200-400 mg/L, was effective to control the growth of D. bruxellensis depending on the culture medium and strain. When added (250 mg/L) to the acidic solution (pH 2.0), a significant effect was observed in mixed cultures, because the inactivation of SO2 by S. cerevisiae most likely protected D. bruxellensis from being damaged by PMB. The physiological response of S. cerevisiae to the presence of PMB may explain the significant decrease in alcohol production. When added to the fermentation medium, PMB resulted in the control but not the death of D. bruxellensis, with less intensive effect on the fermentative efficiency. In co-culture with the addition of PMB, the fermentative efficiency was significantly lower than in the absence of PMB.

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DI, TORO MARIA ROSARIA. "Biodiversity of Dekkera/Brettanomyces in Apulian wines: isolation, characterization of representative biotypes and assessment of control strategies based on biotechnological resources management." Doctoral thesis, Università di Foggia, 2015. http://hdl.handle.net/11369/337553.

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Abstract:

ABSTRACT BACKGROUND Among all the possible microbial contaminations of wine, development of Brettanomyces bruxellensis yeast is the most dreaded by winemakers. Indeed, growth of yeasts belonging to Dekkera/Brettanomyces during wine manufacturing, can seriously affect the quality of the final product, especially during aging. Spoilage yeasts of the genus Brettanomyces or its teleomorph Dekkera are well adapted to survive during the winemaking process, due to their ethanol tolerance and relative resistance to the normal concentrations of sulphur dioxide found in wine. To prevent the development of this yeast in wine, it is important to know the biodiversity of Brettanomyces bruxellensis. A more detailed study of these aspects could help winemakers to learn more about this yeast and to implement preventive and fighting measures to try to reduce the economic losses caused by B. bruxellensis. AIM OF THE STUDY The specific objectives of this work were to isolate Brettanomyces strains from several wineries located in Puglia and to characterize representative biotypes, in order to evaluate control strategies based on biotechnological resources management. MATERIAL and METHODS Yeasts of the genus Brettanomyces were selected in tank, barrel and fermenting must of several Apulian wines. The yeast strains were identified and genetically characterized using restriction pattern analysis of the internal transcribed spacer region (5.8S-ITS), species-specific primers and restriction analysis. Biodiversity of selected B. bruxellensis strains was studied with Sau-PCR. Potential spoilage and VBNC behavior of different biotype were studied with gas chromatograph and flow cytometry. The cells of Brettanomyces were quantified in wine with Real Time PCR. To reduce the volatile phenols in wine and the growth of Brettanomyces bruxellensis different preparations of yeast cell wall and chitosan, respectively, were used.

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Vigentini, I. "MOLECULAR CHARACTERIZATION, STRESS RESPONSES AND SPECIFIC ENZYMATIC ACTIVITIES OF DEKKERA/BRETTANOMYCES BRUXELLENSIS WINE STRAINS: STRATEGIES OF ANALYSIS AND CONTROL IN THE OENOLOGICAL FIELD." Doctoral thesis, Università degli Studi di Milano, 2012. http://hdl.handle.net/2434/169032.

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Abstract:

Among yeasts responsible for wine spoilage, Dekkera/Brettanomyces bruxellensis is the species on which the scientific community has the highest interest. This fact is documented by an increasing in the international publications and by the beginning of the genome sequencing. Recently, it has been traced the evolutional D. bruxellensis lineage by the analysis of promoter sequences, which separated from the Saccharomyces yeasts more than 200 mya. Spoilage caused by D./B. bruxellensis is mainly due to the following issues:  this species remains viable and active in beverages preserved by extreme abiotic stress (anaerobiosis, up to 12-13% ethanol (v/v), minimal amounts of fermentable sugars);  the adopted treatments (sulphiting, membrane filtration, transfer of wine to sanitized barrels) are not always effective.  the off-flavours produced by Brettanomyces include volatile phenols characterised by disagreeable odours. The aim of this thesis was to develop strategies in order to analyse and control the wine spoilage linked to D./B. bruxellensis species. As concern the first issue, spoilage microbial analysis, the present PhD thesis describes: i) the development of new methods for D./B. bruxellensis molecular typing; ii) the phenotypic biodiversity of D./B. bruxellensis species. The topics on the microbial spoilage control were: iii) D./B. bruxellensis response to stress conditions. i) Studies on the natural distribution of D./B. bruxellensis have shown an existing high intraspecies polymorphism degree which is probably due to a fusion event among genomes or to the lacking of a sexual state. Moreover, since D./B. bruxellensis has been mainly associated to fermented beverages that represent mutagenic environments determining the frequent genome rearrangement of D./B. bruxellensis. Genetic variations are usually accumulated with a higher frequency in DNA regions that are not linked to any gene function respect to the coding regions such as introns. Thus, they are considered good indicators in evolutional studies; in S. cerevisiae, the lariat branch point TACTAAC and the 5’ splice site GTATGT (5’ss) are conserved sequences that were used to build primers for the Intron Splice Site amplification analysis (ISS-PCR) described for inter- and intraspecific characterisation of S. cerevisiae. The main goals of this first topic was to develop new methods for D./B. bruxellensis molecular typing. The setting up of a multiplex PCR protocol throughout the use of modified oligonucleotides that targeted 5’ss -GTAAGT- has confirmed a high polymorphism among D. bruxellensis genomes. Thus, a further optimisation of the primers, a simple capillary electrophoresis protocol that can accurately separates the amplified fragments and clear rules for the ISS profiles elaboration were applied. The results points out that the genetic signatures obtained exploiting the ISS as molecular targets are able to show genetic differences that, up to now, only other laborious technique can put in evidence (Karyotyping, PFGE-RFLP, AFLP). The proposed protocol has proved to be reliable and robust. Moreover, considering that a positive correlation between the extent of non-protein-coding DNA and the eukaryotic complexity degree has been observed, the ISS fingerprinting can represents a useful tool to analyse the evolution rate of a yeast species. ii) D./B. bruxellensis yeasts have evolved numerous developmental options in order to adapt and survive the changing status of the environment. Independent studies showed that distinct genetic groups of D./B. bruxellensis can have different physiological characteristics and strong differences in their ability to produce 4-ethylphenols. The main goal of second topic was to characterise D./B. bruxellensis from a phenotipic point of view. In particular, the physiological diversity within D./B. bruxellensis strains was investigated studying the growth and the production of volatile phenols and biogenic amines under a wine model condition. Moreover, the carbon compounds assimilation, H2S production, and vinylphenol reductase (VPR) activity were also analysed. The potential hazard of spoilage when D./B. bruxellensis grows in oenological conditions was confirmed since most of the analysed strains were able to produce volatile phenols or showed a detectable VPR specific activity. Actually metabolic traits, as growth rate and off-flavour production, proved to be related and strain-dependent suggesting that an early detection and identification of “fast-growing yeasts” and “fast volatile phenols producers” could be essential to introduce adequate corrective measures. The experiments on carbon assimilation revealed that about 30% of the analysed yeasts has a own pattern in the utilization of carbonious sources. Three different ranges of VPR activity and H2S production were used to assign the physiological profiles. Combining the results from the three phenotypic experiments, about 70% of the CBS collection can be discriminated at strain level. The present work suggested that the chromosomal rearrangement occurred in this species has generated strains with a high physiological polymorphic state. iii) A goal of the wine industry is to reduce the risk of wine being spoiled by microbial activity. The main aim of the third topic of this research was to study the response to stress conditions in D./B. bruxellensis due to the yeast exposition to an electric current treatment and exogenous SO2. Results indicated that a similar effect occurred on cells after the current treatment in comparison to the SO2 exposition; both treatments resulted in a reduced microbial cell survival in the studied red wine. The kinetics of volatile phenol accumulation confirmed that, the use of an electric field could be adequate to hinder the yeast spoilage. As concern the latter issue, the SO2 resistance, a metabolomic study on the effect of the SO2 addiction to D./B. bruxellensis cultures was carried out too. Results displayed that among the metabolic pathways resulted to be affected by exogenous sulphite concentration, aminoacid metabolisms seem to be involved in the SO2 tolerance. Unlike what was observed in S. cerevisiae, neither adenine nor methionine modified the toxicity level of SO2 under laboratory conditions. The ethanol concentration seems to increase the sensitivity to sulphite suggesting that a membrane system, such as the sulphite efflux pump of S. cerevisiae, could be present in this species. In conclusion, the main research products of this PhD thesis were:  a new PCR protocol to typing D./B. bruxellensis that uses specific primers for this yeast species, and a precise and reliable fragment separation protocol by capillary electrophoresis. Actually, this method shows a high reproducibility (94%), it is rapid in comparison to other techniques that in the past allowed a discrimination at strain level of D./B. bruxellensis isolates (Karyotyping, RFLP-PFGE, AFLP, etc.), and it represents a useful tool to monitor the yeast evolution rate;  the collection of D./B. bruxellensis phenotypic features that never have been used to evaluate the biodiversity degree in this species, such as the VPR specific activity, H2S production, and the assimilation of carbon compounds different from ones found in wine. The compilation of a database collecting both genetic and phenotypic traits of different D./B. bruxellensis strains is the future perspective to offer an efficient way to counteract this spoilage yeast;  a new technology to reduce the survival of D. bruxellensis in wine using a low electric current (LEC) treatment.  the understanding of some metabolic mechanisms involved in the SO2 response in D./B. bruxellensis. This step will allow the following upgrade toward the study of molecular mechanisms, and metabolic pathways that this yeast can activate to protect itself against the exposure to high concentration of exogenous sulphur dioxide.

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Reis, Alexandre Libanio Silva. "Perfil fermentativo de uma linhagem de Dekkera bruxellensis van der Walt (1964) a partir de hidrolisados lignocelulósicos e suas implicações na produção de etanol de segunda geração." reponame:Repositório Institucional da UFPE, 2014. https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/13920.

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Abstract:

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2015-05-14T12:49:33Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Reis ALS 2014 Tese.pdf: 4888258 bytes, checksum: 3f44c77658c5a103d9a2eb81eda3f642 (MD5)
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CNPq
Os maiores produtores de etanol no mundo são os Estados Unidos, a partir do amido de milho, e o Brasil, a partir da sacarose da cana-de-açúcar. Nos últimos anos, o Brasil não aumentou apreciavelmente a sua produção, enquanto que, por outro lado, a indústria de etanol nos Estados Unidos vem sofrendo uma grande expansão, em torno de 1 milhão m3/ano, com planejamento para produção de 40 milhões de m3 de etanol em 2025. Em atendimento a uma demanda que cresce significativamente em função do reconhecimento mundial dos benefícios do etanol como combustível, os Estados Unidos e o Brasil, assim como diversos outros países, entraram em uma corrida, que tende a se acirrar, para o desenvolvimento de tecnologias de produção de etanol a partir de materiais lignocelulósicos. Dekkera bruxellensis é uma levedura que é usualmente reconhecida como um organismo contaminante. A espécie, como todas as leveduras consideradas não-Saccharomyces, apresenta graus variados de mecanismos catalíticos de suas glicosidades e poucos estudos têm investigado o desempenho das enzimas produzidas por esses microrganismos. A presente Tese teve como objetivo principal observar e interpretar os parâmetros cinéticos e as características bioquímicas de β-glicosidase(s) e produzida(s) por D. bruxellensis, linhagem GDB 248 e relacionar esses parâmetros com o perfil fermentativo da mesma frente à conversão da celobiose, proveniente de meios sintéticos e de hidrolisados de bagaços de cana-de-açúcar e sorgo sacarino, em bioetanol, incluindo a ultra análise morfológica dessas biomassas lignocelulósicas, avaliando a eficiência do pré-tratamento utilizando peróxido de hidrogênio em meio alcalino e seus respectivos rendimentos em produtividade volumétrica e eficiência de fermentação da glicose e xilose em etanol. Para o primeiro trabalho “Fermentação da celobiose em condições de aerobiose restrita e a caracterização de uma celobiase a partir de uma linhagem industrial de Dekkera/Brettanomyces bruxellensis” foi confirmada a atividade celobiásica (β-glicosidase) em extratos semi-purificados caracterizando-a como uma enzima candidato. Foi demonstrado que a linhagem GDB 248 apresentou capacidade de produzir uma concentração de ácido acético maior que o etanol e glicerol, o que confirma a ausência de efeito Custer com esta estirpe em condições de aerobiose restrita. E no segundo trabalho “Produção de etanol de segunda geração a partir de bagaço de cana-de-açúcar e sorgo sacarino por uma linhagem industrial de Dekkera/Brettanomyces bruxellensis” foi possível obter altas eficiências de hidrólise enzimática utilizando apenas preparações comerciais de celulases, sem complementação com β-glicosidades, o que pode diminuir os custos de processo de hidrólise.

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Gasper, Julia. "The Protestant plays of Thomas Dekker." Thesis, University of Oxford, 1987. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.279406.

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Li, Chi-fang Sophia. "Thomas Dekker and Chaucerian re-imaginings." Thesis, University of Warwick, 2008. http://wrap.warwick.ac.uk/1091/.

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Abstract:

This study aims to offer a new literary biography of Thomas Dekker (c. 1572-1632) and demonstrates the ways in which he refashions his principal source, Geoffrey Chaucer. The first chapter considers Dekker in both literary and theatre histories, situating him amongst his collaborators: Anthony Munday, Henry Chettle, Michael Drayton, Thomas Middleton, and John Webster. This chapter also aims to re-evaluate Dekker’s achievement in history, starting from Dekker’s presence in Henslowe’s Diary, his ‘part’ in the War of the Theatres, his theatre writing, followed by his observations of London written during the plague years, his imprisonment, and his posthumous historical reception. The second chapter investigates how Dekker uses Chaucer, whose ‘book’, I argue, is a common theatrical source book that offers the playwrights quick access to stories and plots. To provide evidence of Dekker’s readership of Chaucer, I trace the early modern editions of Chaucer available in Dekker’s time and survey Dekker’s reading of Chaucer from his early career to his late years. The final three chapters concentrate on Dekker’s uniquely creative refashioning of Chaucer in theatrical terms. Chapter Three examines how Dekker turns Chaucer’s serious Clerk’s Tale, a ‘text of loss’, into a comic parody, re-titled as The Pleasant Comedy of Patient Grissil. Chapter Four investigates Chaucer’s legacy of the festive and the carnival, whose ideas of ‘game’ and ‘play’ in The Canterbury Tales directly influence Dekker’s Westward Ho and Northward Ho, wherein I call the Ho plays Dekker’s ‘game’ plays. Chapter Five demonstrates the ways in which Dekker transforms the tropes of Chaucer’s Loathly Lady in The Wife of Bath’s Tale into performative metaphors in The Roaring Girl, a fantasy satire. This is the first attempt to discuss and study, in full, Dekker’s texts alongside their source. Through Dekker’s Chaucerian re-imaginings, we see the playwright’s three-dimensional transformation of his source and the ways he visualises his performances.

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Morgado, Filipa Patrícia da Silva. "Fenóis voláteis em vinhos tintos." Master's thesis, Universidade de Évora, 2009. http://hdl.handle.net/10174/18628.

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Abstract:

As leveduras Dekkera/Brettanomyces são responsáveis pela formação de fenóis voláteis em vinhos tintos, tornando-se numa grande preocupação para a produção enológica a nível mundial, devido à dificuldade em controlá-las. Os fenóis voláteis são responsáveis por aromas desagradáveis nos vinhos tintos, diminuindo a sua qualidade e resultando em grandes perdas económicas. Este trabalho teve como principal objectivo estudar um método de preparação de amostra e um método cromatográfico para analisar e quantificar os principais fenóis voláteis (4-etilfenol, 4-etilguaiacol, 4-etilcatecol, 4-vinilfenol e o 4-vinilguaiacol), em meio sintético e em vinhos tintos comerciais. A preparação de amostras foi efectuada através do método de extracção líquido-líquido e a separação dos compostos foi efectuada por cromatografia gasosa com detector de ionização de chama (GC-FID). Os resultados obtidos permitem concluir que é possível detectar e quantificar os fenóis voláteis com este método, incluindo o 4-etilcatecol. O 4-etilfenol foi o composto mais abundante nos vinhos tintos comerciais estudados. ABSTRACT: The yeasts Dekkera I Brettanomyces are responsible for the formation of volatile phenols in red wine, becoming a major concern for the enological production worldwide because of the difficulty in controlling them. The volatile phenols are responsible for unpleasant aromas in red wines, reducing its quality and resulting in great economic lasses. The main objective of this work was to study a sample preparation and a chromatographic method to analyze main volatile phenols (4-ethylphenol, 4-ethylguaiacol, 4-ethylcatechol, 4-vinylphenol and 4-vinylguaiacol) in synthetic wine and red wines. Sample preparation was done by liquid-liquid extraction and compounds separation was achieved by gas chromatography with flame ionization detector (GC FID) Results showed that it is possible to detect and quantified volatile phenols with the methodology proposed, including 4-ethylcatechol. 4-ethylphenol was the main compound found in commercial red wines.

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Dekker, Vincent [Verfasser], and Nadja [Akademischer Betreuer] Dwenger. "Efficiency of selected fiscal policy instruments / Vincent Dekker ; Betreuer: Nadja Dwenger." Hohenheim : Kommunikations-, Informations- und Medienzentrum der Universität Hohenheim, 2017. http://d-nb.info/1140525697/34.

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Tobbal, Khelifa. "Sur le comportement asymptotique de l'estimateur de dekkers, einmahl et de haan." Paris 6, 1995. http://www.theses.fr/1995PA066740.

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Abstract:

Apres le chapitre introduction, nous montrons dans le second chapitre la convergence presque sure de l'estimateur de dekkers, einmahl et de haan vers l'index de pareto sous des conditions plus generales que celles introduites par dekkers, einmahl et de haan dans leur article en 1989. Dans le troisieme et le quatrieme chapitres, nous presentons une loi fonctionnelle du logarithme itere pour l'estimateur de l'index de queue de dekkers, einmahl et de haan pour un echantillon issu d'une loi de type-pareto sous deux conditions differentes

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Vium, August Skjævesland. "Oppførsel til platefelt med tverrstivere - Oseberg Sør dekker : Plateknekking på aluminiumsdekke med tverrgående stivere." Thesis, Norges teknisk-naturvitenskapelige universitet, Institutt for bygg, anlegg og transport, 2013. http://urn.kb.se/resolve?urn=urn:nbn:no:ntnu:diva-22727.

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Abstract:

Det er tidligere ved Institutt for konstruksjonsteknikk gjort en eksperimentell og numerisk undersøkelser av en gulvkonstruksjon i aluminium. Denne type gulvkonstruksjoner utgjorde etasjeskiller i en boligmodul ved en plattform i Oseberg Sør-feltet. Dekkene var laget av ekstruderte aluminiumsprofiler med trapesformede stivere, lagt på tvers og integrert i stegene til store I-bjelker i aluminium. Laster på gulvkonstruksjonen fører til bøyemoment som fordeler seg som trykk i dekket og de øvre bjelkestegene og strekk i resten av bjelkene. Med de tidligere undersøkelsene på Oseberg Sør-dekkene som utgangspunkt, ble det i denne oppgaven utført inngående beregninger for slike gulvkonstruksjoner. Det viste seg å være lite regleverk tilgjengelig for dimensjonering av avstivede plater utsatt for aksialkraft på tvers av stiverne. DNV-RP-C201 gir en anbefaling for dimensjonerende momentkapasitet for gulvsystem bestående av avstivede plater lagt på bjelker. Disse regnereglene var imidlertid konservative, og resultatene underdimensjonerte dekket i stor grad. Ved hjelp av Abaqus ble det utført numeriske analyser på et utsnitt av dekket fra Oseberg Sør-feltet. Elementmodellen bestod av fem dekkeprofiler og ble utsatt for en uniform forskyvning på tvers av stiverne. Et parameterstudie av modellen viste at dekkets initielle formfeil og elementstørrelse på tvers av plateprofilene hadde størst innvirkning på responsen til dekket. Ved små initielle formfeil var de numeriske analysene følsomme for hvor stort det maksimale tidsinkrementet var. For å beregne maksimallast på gulvet ble det antatt at den totale kapasiteten til gulvkonstruksjonen ville være utnyttet når dekket kollapset. Resultatene underdimensjonerte maksimallasten på gulvet noe.I modellen av dekkeutsnittet ble ikke grensebetingelser og kontinuiteten til gulvkonstruksjonen fra det eksperimentelle undersøkelsene gjenskapt på en god måte. Det ble derfor utført numeriske analyser av en utvidet elementmodell hvor hele gulvkonstruksjonen ble modellert. Dette var fordelaktig ettersom deformasjoner og respons til modellen var direkte sammenlignbart med dataene hentet fra den eksperimentelle undersøkelsen. De beste resultatene, med tanke på maksimallast og hvilken forskyvning den ble oppnådd ved, var også oppnådd i den utvidede modellen. Analysetiden var imidlertid høy. Spenningsfordeling i dekket og deformasjonen til den utvidede modellen viste at maksimallasten på gulvkonstruksjonen ble oppnådd etter at dekket kollapset.

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Jarrett, Joseph Christopher. "Mathematics and Late Elizabethan drama, 1587-1603." Thesis, University of Cambridge, 2017. https://www.repository.cam.ac.uk/handle/1810/270195.

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Abstract:

This dissertation considers the influence that sixteenth- and early seventeenth-century mathematical thinking exerted on popular drama in the final sixteen years of Elizabeth I’s reign. It concentrates upon six plays by five dramatists, and attempts to analyse how the terms, concepts, and implications of contemporary mathematics impacted upon their vocabularies, forms, and aesthetic and dramaturgical effects and affects. Chapter 1 is an introductory chapter, which sets out the scope of the whole project. It locates the dissertation in its critical and scholarly context, and provides a history of the technical and conceptual overlap between the mathematical and literary arts, before traversing the body of intellectual-historical information necessary to situate contextually the ensuing five chapters. This includes a survey of mathematical practice and pedagogy in Elizabethan England. Chapter 2, ‘Algebra and the Art of War’, considers the role of algebra in Marlowe’s Tamburlaine plays. It explores the function of algebraic concepts in early modern military theory, and argues that Marlowe utilised the overlap he found between the two disciplines to create a unique theatrical spectacle. Marlowe’s ‘algebraic stage’, I suggest, enabled its audiences to perceive the enormous scope and aesthetic beauty of warfare within the practical and spatial limitations of the Elizabethan playhouse. Chapter 3, ‘Magic, and the Mathematic Rules’, explores the distinction between magic and mathematics presented in Greene’s Friar Bacon and Friar Bungay. It considers early modern debates surrounding what magic is, and how it was often confused and/or conflated with mathematical skill. It argues that Greene utilised the set of difficult, ambiguous distinctions that arose from such debates for their dramatic potential, because they lay also at the heart of similar anxieties surrounding theatrical spectacles. Chapter 4, ‘Circular Geometries’, considers the circular poetics effected in Dekker’s Old Fortunatus. It contends that Dekker found an epistemological role for drama by having Old Fortunatus acknowledge a set of geometrical affiliations which it proceeds to inscribe itself into. The circular entities which permeate its form and content are as disparate as geometric points, the Ptolemaic cosmos, and the architecture of the Elizabethan playhouses, and yet, Old Fortunatus unifies these entities to praise God and the monarchy. Chapter 5, ‘Infinities and Infinitesimals’, considers how the infinitely large and infinitely small permeate the language and structure of Shakespeare’s Hamlet. It argues that the play is embroiled with the mathematical implications of Copernican cosmography and its Brunian atomistic extension, and offers a linkage between the social circles of Shakespeare and Thomas Harriot. Hamlet, it suggests, courts such ideas at the cutting-edge of contemporary science in order to complicate the ontological context within which Hamlet’s revenge act must take place. Chapter 6, ‘Quantifying Death, Calculating Revenge’, proposes that the quantification of death, and the concomitant calculation of an appropriate revenge, are made an explicit component of Chettle’s Tragedy of Hoffman. It suggests that Chettle enters two distinctly mathematical models of revenge into productive counterpoint in the play in order to interrogate the ethics of revenge, and to dramatise attempts at quantifying the parameters of equality and excess, parity and profit.

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Dekkers, Ellen Sandra Verfasser], Leif [Akademischer Betreuer] Kobbelt, and David [Akademischer Betreuer] [Bommes. "Feature-aware and feature-driven editing of 3D surface meshes / Ellen Sandra Dekkers ; Leif Kobbelt, David Bommes." Aachen : Universitätsbibliothek der RWTH Aachen, 2020. http://d-nb.info/1227992823/34.

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Dekkers, Ellen [Verfasser], Leif Akademischer Betreuer] Kobbelt, and David [Akademischer Betreuer] [Bommes. "Feature-aware and feature-driven editing of 3D surface meshes / Ellen Sandra Dekkers ; Leif Kobbelt, David Bommes." Aachen : Universitätsbibliothek der RWTH Aachen, 2020. http://d-nb.info/1227992823/34.

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Elaskary, Mohamed. "The image of Moors in the writings of four Elizabethan dramatists : Peele, Dekker, Heywood and Shakespeare." Thesis, University of Exeter, 2008. http://hdl.handle.net/10036/48033.

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Abstract:

The word ‘Moor’ is a loose term that was used in Medieval and Renaissance England to refer to the ‘Moors’, ‘blackmoors’, ‘Negroes’, ‘Indians’, ‘Mahometans’ or ‘Muslims’. All these terms were more often than not used interchangeably. This study is concerned with the Moor from North Africa. This study is divided chronologically into two phases. The first part deals with the plays that were written during the reign of Queen Elizabeth I while the second part examines the plays that were written during (and after) the rule of King James I. Queen Elizabeth I and King James I had opposite points of view when it came to the relationship between England and the Muslim world. Thus, while Queen Elizabeth was in closer alliance with the Moors and the Turks than the Spaniards and the French, King James I chose, only after a few months of being enthroned as the King of the English monarchy, to befriend the Spaniards rather than the Moors and the Turks. The plays discussed in this thesis will be viewed against the opposite policies adopted by Elizabeth I and James I concerning the relationship between England and the Muslim world. The idea of poetic verisimilitude will be given due importance throughout this study. In other words, I propose to answer the question: did the authors discussed in this thesis manage to represent their Moorish characters in an efficient and objective way or not? Warner G. Rice, Mohammed Fuad Sha’ban, Thoraya Obaid, Anthony Gerald Barthelemy and Gerry Brotton had written PhD dissertations on the image of Moors, Turks, or Persians, in English drama. This study, however, will focus on the image of North African Moors in Elizabethan drama. What I intend to do in this thesis is to relate each of the plays discussed to a context (political, historical, or religious) of its time. My argument here is that the tone and the motive behind writing all these plays was always political. For example, George Peele’s The Battle of Alcazar will be related to the historical and political givens of the 1580s, i.e., the familial strife for the throne of Marrakesh in Morocco, the Portuguese intervention in this Moorish-Moorish conflict and the friendly Moroccan-English relations. Thomas Dekker’s Lust’s Dominion will be viewed in the light of the Reconquista wars and the expulsion of the Moors from the Iberian Peninsula. Thomas Heywood’s The Fair Maid of the West will be seen in relation to the theme of conversion and Moorish piracy that were so vigorous in the 16th and 17th century. William Shakespeare’s Othello is unique and it represents what may be ranked as the earliest insights regarding the idea of tolerating the Moors and foreigners into Europe. The contribution this study aims to offer to the western reader is that it involves scrutinizing Arabic texts and contexts whenever available. Thus, Arabic sources concerning the historical accounts of the battle al-Kasr el-Kebir (the battle of Alcazar); the expulsion of Moors from Spain or Moorish and Turkish piracy are to be invoked. In the same vein, the reception of these plays in the Arab world is to be reviewed at the end of each chapter.

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Green, Shawna Jo. "Outwitting and out working: female representation in Thomas Dekker's The Shoemaker's Holiday." The Ohio State University, 2003. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc_num=osu1399884845.

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Dekkers, Christin [Verfasser], and Bernd [Gutachter] Turowski. "Anwendung und Validierung der biochemisch - sensitiven MRT - Sequenzen dGEMRIC und T2* - mapping im Schultergelenk / Christin Dekkers ; Gutachter: Bernd Turowski." Düsseldorf : Universitäts- und Landesbibliothek der Heinrich-Heine-Universität Düsseldorf, 2017. http://d-nb.info/1132248469/34.

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Johansson, Joakim. "Acquiring low-frequency English vocabulary by contextual guessing amongst Swedish learners of English playing The Infectious Madness of Doctor Dekker." Thesis, Linnéuniversitetet, Institutionen för språk (SPR), 2019. http://urn.kb.se/resolve?urn=urn:nbn:se:lnu:diva-89390.

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Abstract:

Video and computer game users are frequently stated as possessing a higher proficiency in English. In this study, 3 Swedish upper secondary school students from different programs played The Infectious Madness of Doctor Dekker, a lovecraftian murder mystery game. The aim was to examine the possible effects on their English vocabulary acquisition through their ability of assuming words' meaning from the context presented by the game. The words used in the study were low-frequency words which were gathered from the game and then cross-referenced with the Corpus of Contemporary American English(COCA). The 80 least frequent words were selected. Participants were tasked with translating, explaining or using the words in sentences after completing a game chapter. The study found that the game had in general had a positive effect on the participants’ vocabulary store. However, the test scores varied greatly between participants; 1 participant acquired 1 word while another participant acquired 18. This, combined with the small sample size, meant it was difficult to say definitively how effective the game had been at expanding the participants' vocabulary store.

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Kong, Moreno Maynard J. "Principles of colloid and surface chemistry. Paul C. Hiemenz y Raj Rajagopalan. Marcel Dekker, Inc. 3th edición. Nueva York, 1997. 650 págs." Revista de Química, 2013. http://repositorio.pucp.edu.pe/index/handle/123456789/101337.

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Just, Janna [Verfasser], Tilo von [Akademischer Betreuer] Dobeneck, and Mark J. [Akademischer Betreuer] Dekkers. "Paleoenvironmental signatures of aeolian and fluvial sedimentary end-members off NW Africa / Janna Just. Gutachter: Tilo von Dobeneck ; Mark J. Dekkers. Betreuer: Tilo von Dobeneck." Bremen : Staats- und Universitätsbibliothek Bremen, 2012. http://d-nb.info/107199316X/34.

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Hann, Yvonne D. "Money talks : economics, discourse and identity in three Renaissance comedies /." Thesis, National Library of Canada = Bibliothèque nationale du Canada, 1998. http://www.collectionscanada.ca/obj/s4/f2/dsk2/tape15/PQDD_0004/MQ36130.pdf.

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Kennedy, Colleen Elizabeth. "Comparisons Are Odorous: The Early Modern English Olfactory and Literary Imagination." The Ohio State University, 2015. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc_num=osu1437648106.

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Manvich, Jennifer Harley. "Hearing Margery Eyre: Devising Strategies to Overcome Central 'Auditory Processing Deficit in Rehearsal and Performance of Thomas Dekker's The Shoemaker's Holiday." The Ohio State University, 2002. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc_num=osu1392816405.

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Meier, Jeremy. "Discovery and Disguise: An Analysis of the Rehearsal and Performance for the Character of Roland Lacy in Thomas Dekker's Play, The Shoemaker's Holiday." The Ohio State University, 2002. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc_num=osu1392916790.

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Hasler, Rebecca Louise. "Profitability and play in urban satirical pamphlets, 1575-1625." Thesis, University of St Andrews, 2018. http://hdl.handle.net/10023/12277.

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Abstract:

This thesis reconstructs the genre of urban satirical pamphleteering. It contends that the pamphlets of Robert Greene, Thomas Nashe, Thomas Dekker, Thomas Middleton, and Barnaby Rich are stylistically and generically akin. Writing in a relatively undefined form, these pamphleteers share an interest in describing contemporary London, and employ an experimental style characterised by its satirical energy. In addition, they negotiate a series of tensions between profitability and play. In the early modern period, ‘profit' was variously conceived as financial, moral, or rooted in public service. Pamphleteers attempted to reconcile these senses of profitability. At the same time, they produced playful works that are self-consciously mocking, that incorporate alternative perspectives, and that are generically hybrid. To varying degrees, urban satirical pamphlets can be defined in relation to the concepts of profitability and play. Chapter One introduces the concept of moral profitability through an examination of Elizabethan moralistic pamphlets. In particular, it analyses the anxious response to profitability contained in Philip Stubbes's Anatomie of Abuses (1583). Chapter Two argues that Greene disrupted appeals to totalising profitability, and instead demonstrated the alternative potential of play. Chapter Three examines Nashe's notoriously evasive pamphlets, contending that he embraced play in response to the potential profitlessness of pamphleteering. Chapter Four argues that although Dekker and Middleton rejected absolutist notions of profitability, their pamphlets redirect stylistic play towards compassionate social commentary. Finally, Chapter Five explores Rich's relocation of moralistic conventions in pamphlets that are presented as both honest and mocking. Taken as a whole, this thesis re-evaluates the style and genre of urban satirical pamphleteering. It reveals that this frequently overlooked literary form was deeply invested in defining and critiquing the purpose of literature.

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Dissertations / Theses on the topic 'Dekkera'

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