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Dissertations / Theses on the topic 'Déterminisme génétique – Dissertations universitaires comme sujet'
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Saudemont, Alexandra. "Origine évolutive des plans d'organisation chez les bilatériens : étude du déterminisme génétique de la subdivision du mésoderme chez l'annelide platynereis dumerilii." Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077209.
Full textAbstract:
Notre vision de la phylogénie des métazoaires a été profondément modifiée depuis une dizaine d'années : les espèces modèles actuelles en biologie du développement constituent un échantillonnage très imparfait des animaux, avec un manque notable de modèles chez les Lophotrochozoaires. Or un bon échantillonnage des espèces est crucial pour traiter toute question évolutive, telle que l'origine des plans d'organisation. Une façon d'aborder cette question est de s'intéresser aux aspects du développement animal dont résultent les plans d'organisation, comme par exemple la subdivision du mésoderme en territoires distincts à l'origine des différents organes issus de ce feuillet embryonnaire. Cette thèse présente l'étude du déterminisme génétique de la subdivision du mésoderme chez un modèle Lophotrochozoaire, l'annélide polychète Platynereis dumerilii. Chez la drosophile, les gènes du complexe NK sont connus pour leur implication dans la subdivision du mésoderme, tandis que chez les vertébrés, la situation est moins claire. Une analyse phylogénétique systématique de cette famille de facteur de transcription à homéodomaine a permis de montrer que sa diversification a eu lieu avant la séparation des lignées des Cnidaires et des Bilatériens. L'étude de ces gènes chez un annélide suggère que leurs fonctions étaient diverses et nombreuses chez le dernier ancêtre commun des Bilatériens, Urbilateria. Ils auraient été impliqués non seulement dans la subdivision du mésoderme, mais aussi, pour certains, dans l'ontogenèse du système nerveux ou le développement du pharynx. Ces résultats soutiennent l'idée d'un ancêtre Urbilateria plus complexe qu'on ne l'imaginait traditionnellement<br>Our vision of metazoan phylogeny was deeply modified since ten years: the current model species in developmental biology constitute a very imperfect sampling of animals, with a notable lack of models within Lophotrochozoans. However, a good sampling of the species is crucial to deal with any evolutionary question, such as the origin of body plans. A way of tackling this question is to study the aspects of the animal development from which body plans result, such as for example mesoderm subdivision in distinct territories that will give rise to the various mesodermal organs. This thesis presents the study of the genetic determinism of mesoderm subdivision in a Lophotrochozoan model, the polychaete annelid Platynereis dumerilii. In Drosophila, the NK complex genes are known for their implication in mesoderm subdivision, while the situation is less clear in the vertebrates. A systematic phylogenetic analysis of this family of homeodomain transcription factors showed that its diversification took place before the separation of the lines of Cnidarians and Bilaterians. The study of these genes in an annelid suggests that their functions were various and numerous in the last common ancestor of Bilaterians, Urbilateria. They would have been implied not only in mesoderm subdivision, but also, for some, in the ontogenesis of the nervous System or pharynx development. These results support the idea of an Urbilateria ancestor more complex than it traditionally was imagined
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Beau, Jacques. "Etude des correlats genetiques du rythme de l'activite chez la souris consanguine." Paris 5, 1987. http://www.theses.fr/1987PA05S013.
Full text
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Roubertoux, Pierre L. "Analyse genetique et comportements sociaux." Paris 5, 1985. http://www.theses.fr/1985PA05S002.
Full textAbstract:
Les methodes de la genetique ont ete appliquees a 3 groupes de conduites : comportement de reproduction du male chez un poisson poecilia reticulata. Comportement d'attaque entre males chez la souris consanguine. Inter relations mere-nouveau ne chez la souris
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Achour, Ikbel. "Immunoglobulines homodimériques et conventionnelles des camélidés : génétique et évolution." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077171.
Full textAbstract:
Les camélidés ont la particularité de produire, outre des IgG conventionnelles, des IgG formées de chaînes lourdes dépourvues de chaînes légères appelées IgG homodimériques. Ces dernières sont caractérisées par des régions variables et constantes VHH et CnH qui diffèrent des régions conventionnelles VH et CH. Bien que l'étude des propriétés structurales des IgG homodimériques ait été bien documentée, les bases génétiques impliquées dans leur émergence, lors du processus de maturation des lymphocytes B, sont restées insaisissables. Nous avons montré que tous les segments géniques nécessaires à la génération des chaînes lourdes des Igs homodimériques et tétramériques d'alpaga sont présents dans la même région génomique, constituant ainsi un seul locus IgH. La structure en « translocon », Vn-Dn-Jn-Cn, retrouvée tout au long de l'évolution des loci IgH des tétrapodes, est maintenue au locus IgH chez l'alpaga et très certainement chez tous les camélidés. Malgré la conservation globale de cette structure, l'organisation en mosaïque des segments variables, VHH et VH, et des gènes constants, CnH et CH, révèle un nouveau type de locus IgH en « translocon ». Celui-ci rend compte de son unicité et des Igs qui en résultent. Les données transcriptionnelles suggèrent que lors de leur développement, les lymphocytes B exprimant des IgG homodimériques passent par une étape préalable d'expression d'IgM, tout comme les lymphocytes exprimant des IgG tétramériques. Néanmoins, l'organisation particulière du locus IgH chez les camélidés impliquerait une régulation des étapes de réarrangement VDJ qui déterminent l'expression de l'une ou l'autre des Igs, tétramérique ou homodimérique<br>In addition to producing conventional tetrameric IgGs, camelids have the particularity of producing ; functional homodimeric IgG type that lacks light chains, and is therefore made up of two identice heavy chains. This non-conventional IgG type is characterized by variable and constant regions referred to as VHH and CHH respectively, and which differ from conventional VH and CH counterpart Although structural properties of homodimeric IgGs have been well investigated, the genetic basis involved in their generation are still largely unknown. We showed that a single IgH locus in alpaca (Lama pacos) chromosome 4 contains ail genetic elements required for the generation of the two types of Igs. The alpaca IgH locus is composed of a V-region that contains both VHH and VH gem segments, followed by a unique DH-JH cluster and C-region genes, which include both CHH and C genes. Although this general gene organization greatly resembles that of other typical mammalian Vn-Dn-Jn-Cn translocon IgH loci, the intermixed gene organization within the alpaca V and C region reveals a new type of translocon IgH locus. Transcript analyses of expressed homodimeric and tetrameric IgGs showed similar levels of mutation and that of IgMs revealed the existence of VHH Cm transcripts, strongly suggesting that cells bearing homodimeric IgGs develop from lgM+ cells The gene organization of the camelid IgH locus implies a striking regulation of stepwise gene arrangements to enable expression of either tetrameric or homodimeric Ig in B lymphocytes
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Bidet, Philippe. "Caractérisation génétique d'un sous-groupe hautement virulent de Escherichia coli responsable de pathologies extra-intestinales." Paris 5, 2007. http://www.theses.fr/2007PA05T020.
Full textAbstract:
La caractérisation par DNA-array du sous-groupe hautement virulent de E. Coli responsable de pathologies invasives, défini par le ribotype B2i et le « Séquence-Type » 29 (EcMLST), nous a permis de mettre au point une PCR de détection spécifique. En combinant le sérotypage au MLST nous avons pu distinguer, au sein de ce sous-groupe, trois « séquence-O-types » associés, chez les enfants de moins de 3 mois, aux urosepsis (STc29°2), aux méningites (STc29018) ou à ces deux syndromes (STc29°45). La souche S88, représentative du clone STc29 émergeant en France, a été séquencée dans le cadre du projet Coliscope. Nous avons montré que deux attributs de cette souche, un nouvel antigène O et un plasmide ColV proche de ceux des souches pathogènes aviaires, sont indispensables pour sa virulence dans un modèle animal de méningite. La compréhension de l'origine de ce clone sera facilitée grâce aux outils moléculaires que nous avons développés<br>Using DNA-array method, we developed a PCR able to detect the highly virulent E. Coli subgroup characterized by ribotype B2i and Sequence-Type 29 (EcMLST). Combining MLST and serotyping, we were able to distinguish among E. Coli strains belonging to this subgroup and causing invasive diseases in infants, three «sequence-O-types» associated with urosepsis (STc2902), meningitis (STc29018) or both syndromes (STc29O4S). Strain S88, representative of the STC29045 emerging clone in France has been sequenced in the Coliscope project. We found that two different traits of this strain, a new O antigen and a ColV plasmid close to those of avian pathogenic strains, are essential for its virulence in a neonatal meningitis rat model. Unraveling the origin of this clone will be aided by the molecular tools we have developed
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Kebir, Oussama. "Épigénétique & psychose : Étude génétique des enzymes de la machinerie de régulation épigénétique." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T019.
Full textAbstract:
Des facteurs génétiques et d’environnement sont impliqués dans l’étiopathogénie de la schizophrénie avec un modèle d’interaction. Le substratum biologique de cette interaction est inconnu mais pourrait être expliqué par un modèle épigénétique. Dans la première partie de ce travail, nous avons choisi d’examiner en détail, à travers une revue critique des données de la littérature, le facteur environnemental qu’est l’exposition prénatale au diethylstilbestrol, un oestrogène de synthèse considéré comme perturbateur endocrinien mais aussi perturbateur de la régulation épigénétique particulièrement la méthylation de l’ADN. Bien que les données épidémiologiques ne permettent pas d’incriminer ou d’exclure l’exposition prénatale au diethylstilbestrol comme facteur augmentant le risque des troubles psychiatriques, plusieurs arguments sont en faveur de cette hypothèse. Dans la deuxième partie de ce travail, nous avons testé l’hypothèse des polymorphismes génétiques des enzymes de la machinerie de régulation épigénétique comme facteur de vulnérabilité génétique pour la schizophrénie. Une étude d’association familiale (325 trios) a été réalisée intéressant 10 gènes codant pour les HDACs. Les marqueurs de type SNP (n = 551) ont été extraits par la méthode de tagSNP. Les analyses statistiques ont identifié 10 SNPs associés avec la schizophrénie avec un seuil de signification inférieur à 0. 01. Ils sont situés sur HDAC3, HDAC9, HDAC10 et HDAC11. Une interaction épistatique a été identifiée entre HDAC3, HDAC9 et HDAC10. Bien que cette étude est exploratoire et sans correction pour les tests multiples, nos résultats confortent des données en faveur de l’implication de ces gènes avec des troubles neurodéveloppementaux<br>Genetic factors and environment are involved in the etiopathogeny of schizophrenia with an interaction model. The biological substratum of this interaction is unknown but could be explained by an epigenetic model. In the first part of this work, we chose to examine in detail, through a critical review of the literature data, the environmental factor of prenatal exposure to diethylstilbestrol, a synthetic estrogen considered as endocrine disruptor which also perturbs epigenetic regulation particularly DNA methylation. Although epidemiological data do not incriminate or exclude prenatal exposure to diethylstilbestrol as a factor increasing the risk of psychiatric disorders, there are several arguments in favor of this hypothesis. In the second part of this work, we tested the hypothesis of genetic polymorphisms of enzymes of the machinery of epigenetic regulation as a genetic vulnerability factor for schizophrenia. A family-based association study (325 trios) was conducted involving 10 genes encoding HDACs. SNP markers (n = 551) were extracted by the method of tagSNP. Statistical analysis identified 10 SNPs associated with schizophrenia with a threshold significance less than 0. 01. They are located on HDAC3, HDAC9, HDAC10, and HDAC11. An epistatic interaction was identified between HDAC3, HDAC9 and HDAC10. Although this study is exploratory and without correction for multiple testing, our results support data for the involvement of these genes with neurodevelopmental disorders
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Ragusa, Angela. "Variabilité génétique des thalassémies en Sicile : étude moléculaire approfondie des formes surexprimant l'hémoglobine foetale." Paris 5, 1989. http://www.theses.fr/1989PA05S005.
Full textAbstract:
Les Thalassémies constituent un ensemble exceptionnel de modèles permettant d'étudier la régulation de la synthèse de l'hémoglobine. Cette maladie autosomique récessive se caractérise en Sicile par une haute fréquence et une grande variabilité génétique. La détermination des haplotypes de restriction du complexe (3 a été utilisée comme première étape de criblage. Une approche plus sophistiquée par P. C. R. A confirmé les deux propriétés susdites. Une étude moléculaire approfondie a été faite sur deux formes de p thalassémie associées à une surexpression d'hémglobine foetale. La séquence des régions régulatrices des gènes Gy et Ay, promoteurs et enhancer, n'a jusqu'à présent révélé aucune anomalie expliquant ce phénotype particulier. Chez un sujet homozygote pour une (3° thalassémie et porteur du phénotype PHHF, trois variations de séquence ont été retrouvées dans la région enhancer en 3' du gène Ay L'exploration de ces trois mutations chez de nombreux sujets d'ethnies et de génotypes variés a démontré qu'elles ne sont pas responsables du phénotype PHHF, mais sont polymorphes dans les différentes populations, et se trouvent en liaison avec un polymorphisme Pvu II, situé à 1,5 kb plus en 3', déterminant ainsi deux configurations, et deux seulement, lesquelles divisent les haplotypes du complexe p en deux groupes fondamentaux. La configuration. . . T. . . C. . . A. . . Pvu II- semble plus régulièrement liée à une expression basse d'Hb F de type adulte (Ay), alors que la configuration. . . C. . . A. . . G. . . Pvu II+ se retrouve aussi bien avec une expression basse qu'avec une expression élevée d'Hb F de type foetal (Gy).
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Rabès, Jean-Pierre. "L' hypercholestérolémie familiale : de l'athérosclérose à l'hétérogénéité génétique." Paris 5, 1998. http://www.theses.fr/1998PA05CD02.
Full textAbstract:
L'athérosclérose est une maladie inflammatoire et multifactorielle de l'intima des artères de gros et moyen calibre, caractérisée par une accumulation de cholestérol provenant des lipoprotéines de faible densité ou LDL (Low - Density Lipoprotein). La facteur de risque majeur que représente l'élévation du taux plasmatique des LDL est parfois transmis selon un mode autosomique dominant définissant l'hypercholestérolémie familiale dominante (HCFD). Deux gènes dont les mutations sont associées à l'HCFD ont été caractérisés : le gène LDLR qui code pour le récepteur LDL et le gène APOB qui code pour son ligand, l'apolipoprotéine B-100. Notre objectif était le dénombrement et l'étude des différents gènes impliqués dans l'HCFD par une approche combinant des outils moléculaires, génétiques et informatiques. Par cartographie génétique dans deux familles présentant une HCFD non liée aux gènes LDLR et APOB, nous avons localisé un troisième locus (FH3 pour Familial Hypercholesterolemia 3) à l'origine de l'hypercholestérolémie dans l'une de ces familles. Nous avons aussi détecté l'existence d'un gène FH4 dans la deuxième famille. L'ensemble de ces travaux montre un niveau d'hétérogénéité génétique plus important que celui reconnu jusqu'alors pour l'HCFD. Pour la maladie du gène LDLR, nous avons créé une base de données réunissant l'ensemble des informations cliniques et biologiques associées aux 350 mutations ponctuelles et petites insertions / délétions (< 100 paires de base) décrites à ce jour dans sa séquence codante. L'analyse des données moléculaires de la base révèle 64% de mutations faux - sens et 19% de mutations non-sens, dont seulement 20% affectent un dinucléotide CpG. De plus, même si ces remaniements sont répartis sur toute la longueur de la séquence codante, ils touchent préférentiellement les exons 4 et 9. Pour le gène APOB, nous avons mesuré l'impact clinique des mutations R3500Q et R3531C dans la population française. Leur prévalence s'est avérée relativement faible (0,4%) chez les sujets souffrant d'athérosclérose coronarienne et leur contribution à l'HCFD bien inférieure à celle des mutations du gène LDLR. Les mutations R3531C sont moins fréquentes que les mutations R3500Q et associées à une hypercholestérolémie moins sévère en moyenne. Une grande variabilité phénotypique caractérise ces deux mutations.
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Sarzi, Emmanuelle. "Caractérisation génétique et phénotypique des déplétions de l'ADN mitochondrial." Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05T048.
Full textAbstract:
Les maladies mitochondriales forment le groupe le plus courant d'anomalies congénitales du métabolisme. Ces maladies représentent actuellement plus de 17% des consultations régulières de notre service de génétique médicale. Les déficits multiples de la chaîne respiratoire mitochondriale sont à l'origine d'un grand nombre de maladies mitochondriales. Ils se caractérisent par des atteintes multi-viscérales responsables la plupart du temps d'un décès précoce dans les premières années de vie des patients atteints par ce type de pathologie. Depuis une quinzaine d'années, notre laboratoire a recruté un très grand nombre de patients présentant un déficit multiple de la chaîne respiratoire (CR). En 2001, il a été mis en évidence qu'un tout nouveau type d'anomalie touchant l'ADN mitochondrial (ADNmt) pouvait être à l'origine de ces déficits multiples. Ces anomalies sont des modifications quantitatives de l'ADNmt connues sous le nom de déplétions de l'ADNmt. Le recrutement important de cas de déficits multiples et le faible rendement de diagnostic moléculaire établi nous a incité à considérer les déplétions de l'ADNmt comme origine potentielle de déficits multiples de la chaîne respiratoire. Le travail de recherche présenté dans ce manuscrit a eu pour objectif tout d'abord d'estimer l'incidence des déplétions de l'ADNmt dans notre cohorte de patients atteints de déficit multiple de la CR. Nous nous sommes ensuite attachés à définir les atteintes cliniques associées à ces déplétions de l'ADNmt. Enfin, l'étude des gènes connus de déplétion de l'ADNmt DGUOK, POLG1 et TK2 nous a permis de mieux caractériser ces patients. Par la suite, l'étude par cartographie génétique de nos familles consanguines avec déplétions de l'ADNmt et de mutation actuellement inconnue, nous a conduit à la première identification de mutations récessives dans le gène PEO1 responsables d'un syndrome hépatocérébral de déplétion de l'ADNmt. La dernière partie de ce manuscrit rapporte l'étude en cours de cartographie génétique et de séquençage de gènes candidats pour une famille consanguine présentant un autre type de syndrome hépatocérébral associé à un déficit multiple de la chaîne respiratoire. L'ensemble de ce travail a permis à notre laboratoire d'acquérir de meilleures connaissances de l'origine génétique des déficits multiples de la chaîne respiratoire associés à une déplétion de l'ADNmt et d'améliorer ainsi le conseil génétique d'une partie des maladies mitochondriales<br>Mitochondrial diseases are a common group of metabolism pathologies. Nowadays, they represent more than 17% of our clinical consultations. Multiple respiratory chain deficiency account for an important number of mitochondrial disease and are characterised by a multi-systemic organ involvement leading to early death. Since these last 15 years, we have recruited a large number of patients with multiple respiratory chain deficiency. In 2001, it has been shown that a mtDNA quantitative anomaly was at the origin of this defect also named mtDNA depletions. The large number of patients with multiple respiratory chain deficiency and the weak yield of molecular diagnosis prompt us to consider mtDNA depletion as a cause of multiple respiratory chain deficiency. The aim of this work was firstly to estimate the incidence of mtDNA depletion in our series of multiple respiratory chain cases. Then, we characterised the genetic and phenotypic features of mtDNA depletions. Finaly, the study of one family among our consanguineous and/or multiplex patients allowed us to identify a new gene responsible for mtDNA depletions associated with a hepatocerebral failure. This gene also named PEO1 encodes for the mitochondrial Twinkle helicase which has been ever known to cause adult onset PEO in a dominant transmission. Finally, we have studied another consanguineous family with multiple respiratory chain deficiency and hepatic failure. This work allowed us to improve the genetic counselling in our laboratory especially for all patients with multiple respiratory chain deficiency associated with a mtDNA depletion
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Bourdon, Alice. "Ribonucléotide réductase et synthèse de l'ADN mitochondrial." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T006.
Full textAbstract:
Les déplétions de l'ADN mitochondrial (ADNmt) sont caractérisées par une diminution de la quantité de molécules d'ADNmt et sont une cause importante des déficits de la chaîne respiratoire. Les travaux présentés dans cette thèse ont permis d'identifier un nouveau gène nucléaire de déplétion de l'ADNmt associée à une encéphalomyopathie sévère conduisant au décès dans les premiers mois de vie. Ce gène code pour une petite sous-unité de la ribonucléotide réductase p53R2 induite par le facteur suppresseur de tumeurs p53. La ribonucléotide réductase catalyse la réduction des nucléotides en leurs désoxynucléotides correspondants, ce qui constitue l'étape limitante dans la synthèse de l'ADN. La deuxième partie de ce travail a porté plus précisément sur le rôle de p53R2 dans la réplication de l'ADNmt en abordant les questions de sa localisation subcellulaire ainsi que de la régulation des sous-unités de la ribonucléotide réductase au cours du développement, chez la souris, dans différents tissus<br>Mitochondrial DNA (mtDNA) depletions are characterized by a decreased number of mtDNA molecules and constitute a major cause of respiratory chain deficiency. This work allowed us to identify a new nuclear gene of mtDNA depletion associated with a severe encephalomyopathy leading to death in the first months of age. This gene encodes a small ribonucleotide reductase (RNR) subunit p53R2 which is a target of the transcription factor p53. RNR catalyses the reduction of the nucleotides into their corresponding desoxyribonucleotides, which is the rate limiting step for DNA synthesis. The second part of this work focuses on the role of p53R2 in mtDNA replication studying its subcellular localization and the expression of the subunits of RNR in several mouse tissues during development
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Nora, Tamara. "La diversité génétique et phénotypique des populations virales issues de patients infectés par VIH - 1." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077187.
Full textAbstract:
Au cours de mon travail de thèse, nous avons développé une méthode originale d'étude de la diversité génétique du VIH. Cette méthode est fondée sur l'isolement de virus clonaux issus d'événements d'infection uniques à partir du plasma de patients infectés. L'analyse des séquences génomiques issues des virus clonaux nous a permis de quantifier in vivo un taux de recombinaison élevé chez les six patients étudiés, de démontrer le rôle de la recombinaison dans l'échappement du VIH aux traitements antirétroviraux, via un rôle dans la génération et la préservation de la diversité génétique du VIH. Nous avons aussi étudié les propriétés fonctionnelles des protéines Env provenant de virus clonaux isolés chez cinq patients. L'étude d'Env distinctes issues d'un même patient a révélée une extraordinaire diversité fonctionnelle, même parmi les virus utilisant le même co-récepteur. Cette diversité fonctionnelle se traduit par un large spectre d'infectivités sur un type cellulaire donné, des différences dans leur capacité relative à infecter différentes cellules cibles et des différences de sensibilités à certains inhibiteurs d'entrée. Aucune corrélation entre l'infectivité de ces virus clonaux et la sensibilité aux inhibiteurs d'entrée n'est observée, ce qui indique que ces propriétés fonctionnelles peuvent être, dans une certaine mesure, dissociées<br>During my thesis, we developed a new technique for study the genetic diversity of HIV. This method is based on the isolation of infectious clonal viruses directly resulting from single plasma-derived infections events. A comparison of the genomic sequences of clonal viruses from six patients demonstrated strong evidence for extensive recombinaison in vivo, showed that recombination could increase the diversity of drug resistant genotypes and reveals that recombination contributes to the generation and preservation of the HIV-1 diversity. The isolation of clonal viral populations from five different patients permits to evaluate the phenotypic properties of Env proteins exprimed by clonal viruses. Even when comparaisons were restricted to viruses from a same patient with similar tropism, genetically diverses Env proteins exhibited a remarkable fonctionnal diversity, included a wide range of infectivities for a given target cell, differences in their relative ability to infect different target cells and differences in sensibility to inhibition by some entry inhibitors. No correlation was observed between viral infectivity and inhibition by entry inhibitors, indicating that theses properties can be dissociated
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Dossou, Yovo Omer Placide. "Recherche de gènes modificateurs de l'expression clinique de la drepanocytose." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077186.
Full textAbstract:
L'expression clinique de la drépanocytose est très variable et est modulée par des facteurs environnementaux et génétiques liés au locus α et/ou β globine. Cependant, d'autres facteurs génétiques modulateurs non liés aux loci globine sont mis en cause. Nous avons recherché l'existence d'une corrélation entre les polymorphismes de gènes candidats tels que : MBL2, RANTES, VCAM-1 et ET-1, et l'apparition des deux principales complications à savoir les crises vaso occlusives et les infections dans 2 populations : i) la population générale béninoise (adultes et enfants), ii) une cohorte d'enfants drépanocytaires homozygotes SS. Nous montrons : a) une sur-représentation du variant p. G57E du gène MBL2 à l'état hétérozygote chez les adultes non drépanocytaires versus les nouveaux nés contrôles (fréquence allélique, 30. 2% contre 25%, respectivement, p=0. 01). Ceci corrobore l'hypothèse d'un avantage sélectif conféré par ce variant en association avec un taux plasmatique abaissé de la protéine MBL ; b) un effet protecteur du variant g. Ln1. 1T>C de l'intron 1 du gène RANTES contre la susceptibilité aux infections chez les enfants SS. Il s'agit de la première étude mettant en évidence une association entre un variant de ce gène, codant pour une chimiokine pro inflammatoire et une atténuation d'une des complications de la drépanocytose. La mise en évidence de RANTES comme gène modulateur, contribue à améliorer la compréhension de la variabilité de l'expression clinique de la maladie. L'identification des patients susceptibles de développer des complications infectieuses permettrait de leur faire bénéficier d'une prise en charge préventive plus adaptée et plus ciblée<br>Clinical expression of sickle cell disease is quite variable. Interplay of both environmental and genetic factors, linked and unlinked to the globin loci (α and β clusters), indeed contribute to such variability. We focus our attention on the potential contribution of genetic modifiers unlinked to the two globin loci viz MBL2, RANTES, VCAM-1 and ET-1 to two major complications of sickle cell disease namely vaso occlusive crisis and susceptibility to severe infections in two population groups; an unselected benin general population and a clinically followed cohort of sickle cell children. We demonstrated a) an over representation of low MBL2 expressor p. G57E allele at heterozygote state in non sickle cell adults as compared to new born controls (30,2% versus 25% p=0. 01) suggesting a selective advantage ; b) protection against susceptibility to infections in sickle cell children by the variant g. Lnl. 1T>C allele of RANTES, highlighting, for the first time, an association between a pro inflammatory cytokine polymorphism and attenuation of one of the major complication of sickle cell disease. This surrogate marker may find clinical application in targeting susceptible patients eligible for efficacious anti infectious measures
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Houari-Barat, Mouna. "Approches génétiques de l'obésité chez l'homme : étude de trois régions chromosomiques liées à l'obésité et à des phénotypes associés." Paris 5, 2002. http://www.theses.fr/2002PA05CD11.
Full textAbstract:
La prévalence de l'obésité commune est en très forte progression , et concerne 9. 6% des adultes en France. L'obésité est une maladie génétique définie par une adiposité excessive, majoritairement déterminée par l'hérédité. Cela est attesté par des données épidemio-génétiques, par l'existence d'obésités dues à des mutations monogéniques ainsi que par les récentes localisations de gènes de susceptibilité aux obésités commune multifactorielles. Au cours de mon expérience doctorale, j'ai participé à l'identification des gènes de prédisposition à l'obésité commune chez l'homme par une approche " génome-entier ". Le criblage du génome des membres de 158 familles caucasiennes françaises, comportant plusieurs membres atteints (IMC>27kg/mø), à l'aide de 380 marqueurs microsatellites, a conduit à l'identification d'un locus majeur lié à l'obésité situé en 10p et de trois QTL (Quantitative Trait Locus) situés en 2p21, 5cen-q et 15q22 liés au taux de leptine. L'étude du gène POMC au locus 2p21 n'a pas révélé de variants contribuant à l'obésité dans notre population. Le locus 15q22 contient le gène LIPC, codant pour la lipase hépatique. L'allèle +644G situé dans l'exon 5, est associé à l'obésité dans un contexte familial et cas-témoins (p=0. 03 and 0. 0003, respectivement). L'allèle -557T présente aussi une légère association familiale avec l'obésité (p=0. 02). Cette approche nous a conduit à la caractérisation de deux gènes candidats au locus 5cen-q comportant des variants associés à l'obésité. Les variants du promotteur de CART feront l'objet d'une analyse fonctionnelle afin d'évaluer l'effet de ces variants sur la transcription du gène.
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Saint-Martin, Cécile. "Les formes familiales d'épilepsie généralisée idiopathique : étude des gènes CLCN2 et SCN1A et recherche d'un nouveau gène sur le chromosome 2." Paris 5, 2007. http://www.theses.fr/2007PA05T041.
Full textAbstract:
Les épilepsies généralisées idiopathiques (EGI) présentent une composante génétique importante, avec en particulier l'intervention des gènes SCN1A, codant pour le canal sodium Navl. L, et CLCN2, codant pour un canal chlore également dépendant du voltage. Des cribles de SCN1A et CLCN2 dans de larges populations d'EGI nous ont permis d'identifier de nouvelles mutations de CLCN2 altérant les propriétés électrophysiologiques du canal et de montrer que le phénotype associé à certaines mutations de SCN1A est extrêmement variable. Dans une seconde partie, nous avons étudié par cartographie génétique deux grandes familles avec un syndrome associant épilepsie généralisée et myoclonies d'origine corticale. Pour la première, nous avons pu réduire une région décrite en 2pll. L-ql2. 2, et exclure cinq gènes candidats. La seconde famille excluant les deux loci connus confirme l'hypothèse d'hétérogénéité génétique pour ce syndrome. L'ensemble de ce projet a permis d'avancer dans la compréhension des mécanismes associés aux mutations de gènes connus, CLCN2 et SCN1A et dans l'étude génétique d'un nouveau syndrome épileptique<br>Idiopathic Generalized Epilepsies (IGE) are assumed to be mainly of genetic origin particularly with considering the importance of the SCN1A gene, encoding the sodium channel Navl. L, and CLCN2 encoding another voltage gated channel, specific to chloride. Screening of SCN1A and CLCN2 in large IGE populations allowed us to identify new CLCN2 mutations altering the electrophysiological properties of the chloride channel and to demonstrate that the phenotype associated to certain SCN1A mutations is highly variable. In a second part, a genome scan analysis was performed on two large families displaying generalized epilepsy and cortical myoclonies. The first family allowed the refinement of a previously described locus in 2pll. L-ql2. 2, and the exclusion of five candidate genes. The second family excluding both the identified loci confirms the hypothesis of genetic heterogeneity for this syndrome. Altogether this project is a step forward in the understanding of the mechanisms associated to mutations of known genes, CLCN2 and SCN1A, and in the genetic investigation of a novel epileptic syndrome
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Wipff, Julien. "Implication de la fibrilline-1 et bases génétiques de la sclérodermie systémique." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T037.
Full textAbstract:
Des donnees recentes montrant des anomalies de la Fibrilline-1 (FBN-1) et du TGFbeta font penser que la sclerodermie systemique (ScS) cette maladie pourrait appartenir au groupe des fibrillinopathies. L'etude cas-temoins du gene FBN1 a partir d'une cohorte de patients ScS Caucasiens Europeens n'a pas montre d'association. Par ailleurs, on a observe une diminution, in vivo, du reseau microfibrillaire dermique des patients ScS sans anomalie des fibroblastes dermiques. Les resultats de 1'etude de 1'Endogline (ENG), un recepteur du TGFbeta, ont souligne son interet dans la ScS. Le sequencage de ce gene ainsi que des recepteurs ALK1, TGFBR2 et BMPR2 n'a pas permis de detecter de mutations mais de suggerer 1'interet de tester certains variants. Les principaux resultats d'une strategic gene candidat (HIFJA, ACE, SLC6A4, TPH1, KCNA5, PTPN22, IRF5, STAT4) ont montre une association forte entre IRF5, STAT4 et la ScS, en particulier avec son phenotype fibrotique<br>Recent evidences suggested that Systemic sclerosis (SSc) could belong to fibrillinopathies because of Fibrillin-1 (FBN-1) and TGFbeta abnormalities inECM. First FBN-1 assessment, performed with a case-control study, did not detect association between FBN1 gene polymorphic markers and SSc. Then, we show a decrease of tissular FBN-1 microfibrillar network observed in the dermis of SSc patients but absence of in vitro alteration of synthesis, secretion and organization of microfibril network by fibroblasts. For TGFbeta pathway, subsequent analyses evaluate TGFbeta receptors with i) the study of Endoglin by case-control study and biochemical dosages it) sequencing of four TGFbeta receptors (ENG, ALK1, TGFBR2 and BMPR2). The most interesting results of the candidate gene strategy (HIFJA, ACE, SLC6A4, TPH1, KCNA5, PTPN22, IRF5, STAT4) were found for IRF5 and STAT4 genes which are associated with SSc and in particular with its fibrotic phenotype
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Laklou, Hassane. "Approche génétique des troubles de l'humeur et de la schizophrènie (étude de différents Loci candidats)." Paris 5, 1992. http://www.theses.fr/1992PA05S024.
Full text
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Lapoumeroulie, Claudine. "Polymorphisme des beta thalassemies en algerie : caracterisation structurale et fonctionnelle d'une mutation nouvelle." Paris 5, 1988. http://www.theses.fr/1988PA05S005.
Full textAbstract:
L'importance medicale des thalassemies fait que ces maladies hereditaires ont ete etudiees tant sur le plan phenotypique que genotypique. Elles ont fourni un ensemble exceptionnel de modeles permettant d'etudier la regulation de la synthese de l'hemoglobine. Elles permettent encore d'eclairer certaines questions non resolues concernant la specificite tissulaire ou les etapes du developpement. Les divers genes thalassemiques sont etroitement lies a des haplotypes des restriction varies de la totalite du locus beta. C'est celle liaison que nous avons utilisee comme premiere etape pour cribler une population arabo-berbere algerienne. Nous avons ainsi retrouve certains des haplotypes decrits par orkin en 1982 chez des thalassemiques mediterraneens, mais sutout, cette etude a permis de mettre en evidence 4 haplotypes nouveaux que nous avons designes arbitrairement a, b, c et d. Nos resultats ont largement contribue a la demonstration de la valeur des haplotypes comme marqueurs de la variabilite genetique d'expression clinique des hemoglobinopathies. Un de ces haplotypes nouveaux, l'haplotype c, decouvert sous une forme homozygote a plus particulierement retenu notre attention. Nous avons clone le gene beta thalassemique correspondant afin de pouvoir en etudier la sequence nucleotidique. De fait, celui-ci s'est avere etre porteur d'une mutation nouvelle: une transition g-a au nt 5 de l'ivs1. L'expression transitoire en vecteur heterologue de ce gene a montre que cette substitution situee dans le site donneur d'epissage affectait celui-ci et activait l'un des trois sites cryptiques localises a proximite de la jonction exon 1/intron 1. Au cours de ce travail, nous avons donc etudie largement les polymorphismes de restriction d'une population thalassemique donnee et demontre que ceux-ci pouvaient etre des marqueurs de terrain genetique. De plus, la caracterisation fonctionnelle d'une mutation thalassemique nouvelle a permis d'apporter des elements supplementaires intervenant dans les mecanismes d'epissage des transcrits primaires.
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Gressier, Florence. "Pharmacogénétique de la réponse aux antidépresseurs en conditions réelles de prescription." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T022.
Full textAbstract:
La réponse aux antidépresseurs (AD) dans l’épisode dépressif majeur (EDM) varie selon les individus, suggérant l’implication de polymorphismes génétiques pharmacodynamiques et/ou pharmacocinétiques. Deux études prospectives et naturalistes ont été réalisées chez des patients caucasiens présentant un EDM et nécessitant un traitement AD. Dans la première étude d’une durée de 4 semaines sur 120 sujets, les polymorphismes 5-HTTLPR, C825T du GNB3, C3435T de l’ABCB1 de la P-glycoprotéine et du CYP2D6 ont été étudiés. Dans la deuxième, d’une durée de 6 mois, une analyse intermédiaire portant sur 397 sujets unipolaires a été réalisée pour le C825T du GNB3 et le Val66Met du BDNF. Tous les AD commercialisés ont été étudiés. Seuls sont impliqués dans l’efficacité des AD, les polymorphismes du 5-HTTLPR et du CYP2D6. Les femmes SS du 5-HTTLPR ont une moindre réponse aux AD par rapport aux femmes LL/LS, la TSH pouvant jouer un rôle dans cette association. Les métaboliseurs ultra-rapides du CYP2D6 traités par imipraminiques nécessitent des posologies plus élevées. Les polymorphismes C825T du GNB3, C3435T de l’ABCB1 et Val66Met du BDNF ne semblent pas impliqués dans l’efficacité des AD. En termes de tolérance, les sujets TT du C825T développent davantage d’hypertension artérielle. Pour améliorer la prise en charge thérapeutique des EDM, en adaptant le traitement AD à chaque patient, nous suggérons la réalisation des tests génétiques suivants en routine chez les patients non répondeurs à un premier traitement AD : le 5-HTTLPR chez les femmes, le CYP2D6 chez les patients traités par imipraminiques, le C825T chez les sujets présentant des facteurs de risque cardiovasculaire<br>There is substantial interindividual variation in response to antidepressants. Pharmacodynamic and pharmacokinetic gene polymorphisms could, at least in part, explain these differences. Two prospective and naturalistic studies have been conducted in depressed Caucasian patients undergoing an antidepressant treatment. The first one is a 4-week study including 120 inpatients in which the 5-HTTLPR, G-protein beta3 subunit C825T, ABCB1 C3435T and CYP2D6 polymorphisms were analysed. The second one is a 6-month study in which an intermediate analysis on 397 unipolar patients was performed with the GNB3 C825T and BDNF Val66Met polymorphisms. All antidepressants were studied in naturalistic conditions. Only the 5-HTTLPR and CYP2D6 polymorphisms were associated with antidepressant efficacy. As compared to LL/LS, the SS genotype of the 5-HTTLPR was associated with lower antidepressant efficacy in depressed women and TSH may mediate this association. CYP2D6 ultrarapid metabolisers treated by imipraminics required higher doses. In terms of tolerance, as compared to CC/CT, the TT genotype of the GNB3 C825T developed more hypertension at 6 months. To improve the therapeutic outcome of major depression, adapting the antidepressant for each patient, we suggest the implementation in routine of genetic tests in patients unresponsive to a first antidepressant treatment: 5-HTTLPR in women, CYP2D6 in patients treated by imipraminics, C825T in subjects with cardiovascular risk factors
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Hudry, Eloïse. "Cholestérol et maladie d'Alzhiemer : le rôle de la cholestérol 24-hydroxylase." Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05T032.
Full textAbstract:
La maladie d'Alzheimer (MA) se caractérise par la présence d'agrégats de peptides amyloïdes β (Aβ) issus du clivage de la protéine APP par les β- et y-secrétases. Plusieurs études ont mis en évidence des connexions entre la MA et le métabolisme lipidique. Dans le cerveau, l'excès de cholestérol est exporté via sa conversion en 24S-hydroxycholestérol, une étape contrôlée par la cholestérol 24S-hydroxylase. Nous avons étudié les conséquences de la modulation de l'activité de la cholestérol-24-hydroxylase sur les manifestations de la pathologie dans le modèle murin APP23. Nos résultats suggèrent que la surexpression de la cholestérol 24-hydroxylase, via une approche de transfert intracérébral de gène, présente un intérêt thérapeutique dans le cadre de la MA. En revanche, son inhibition est toxique et augmente la production des peptides Aβ. La modulation de l'activité de la cholestérol 24-hydroxylase pourrait donc jouer un rôle, bénéfique ou délétère, sur la maladie d'Alzheimer<br>Alzheimer disease (AD) is characterized by the presence of extracellular amyloid β (Aβ) deposits. Aβ peptides are produced through the successive cleavage of APP by β- and y-secretases. Several studies have demonstrated a clear link between AD and lipid metabolism. In the brain, cholesterol in excess can only be exported as 24S-hydroxycholesterol, this conversion being controlled by the cholesterol 24-hydroxylase. We studied the effects of the modulations of the cholesterol 24-hydroxylase activity in the APP23 mice, an AD mouse model. Our results suggest that the overexpression of the cholesterol 24-hydroxylase (though intracerebral gene transfer) may be a valuable therapeutic strategy for AD. On the contrary, its inhibition seems toxic and increases the production of Aβ peptides. A change of cholesterol 24-hydroxylase activity is therefore able to play a beneficial or noxious role on AEX
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Dakouane, Giudicelli Mbarka. "Influence du vieillissement sur la spermatogenèse : évaluation histologique et génétique." Paris 5, 2006. http://www.theses.fr/2006PA05N18S.
Full textAbstract:
La question de la paternité à un âge avancé se pose de plus en plus souvent. Elle souligne l’intérêt qu’il y a à étudier l’influence du vieillissement sur la conservation de la spermatogenèse, les accidents génétiques et la fragmentation de l’ADN des spermatozoïdes. Patients et méthodes. – Nous avons pratiqué une analyse histologique et cytogénétique moléculaire (chromosomes X, Y et 18) chez 36 hommes âgés de 61 à 102 ans et chez dix sujets jeunes âgés de 29 à 40 ans. L’analyse de l’apoptose (fragmentation nucléaire évaluée par la technique TUNEL) a été réalisée sur 212 sujets âgés de 25 à 70 ans. Résultats. – Des altérations de l’histologie testiculaire ont été observées chez les sujets âgés, en particulier un épaississement de la membrane propre des tubes séminifères ainsi qu’une diminution du nombre de cellules germinales et somatiques testiculaires avec l’âge.<br>The increase of frequency ofAssisted Reproductive Techniques (ART) for elder men raises the question of the genetic risk for the offspring. Our aim was to evaluate the influence of ageing on the testicular histology, the aneuploidy rate in testis postmeiotic cells and the DNA fragmentation in sperm. Patients and methods. – We performed a histomorphometric study of 36 men aged from 61 to 102 years and 10 young men from 29 to 40 years. The aneuploidy rate was evaluated by fluorescent in situ hybridation (FISH X,Y, 18) and DNA fragmentation in spermatozoa was evaluated by TUNEL. Histomorphometry showed various alterations of testicular histology with age including thickening of the basal membrane when spermatogenesis.
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Marduel, Marie. "Génétique de l’hypercholestérolémie familiale, de l’analyse des mutations fréquentes à l’identification d’un gène impliqué dans des formes rares." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05T046.
Full textAbstract:
L’hypercholestérolémie est un risque majeur d’athérosclérose et de maladies cardiovasculaires graves. Elle a souvent des causes multifactorielles, mais il existe aussi des formes monogéniques, comme l’Hypercholestérolémie Familiale (HCF), caractérisée par une hyperLDLémie isolée. L'HCF est une maladie fréquente qui n’est que partiellement élucidée sur le plan génétique. Trois gènes majeurs sont connus : LDLR (récepteur des lipoprotéines LDL), APOB (apolipoprotéine B, constituant des LDL et ligand de leur récepteur) et PCSK9 (enzyme régulant la quantité de récepteurs des LDL à la surface cellulaire). Notre équipe a localisé un 4ème gène majeur, HCHOLA4, et montré une hétérogénéité génétique encore plus grande. L’objectif était de procéder à l’analyse des mutations responsables d’HCF dans la population française et d’identifier un nouveau gène majeur. Nous avons décrit la répartition et la nature des mutations LDLR, APOB, PSCK9 et « autres » dans une cohorte de 1358 proposants, et montré une certaine spécificité française avec 45% des événements encore jamais rapportés. Leur causalité a été évaluée par des analyses in silico et/ou par étude de coségrégation. De plus, nous avons mis en évidence un gradient de sévérité entre ces différentes formes. Nous avons par ailleurs localisé un cinquième gène responsable d’HCF en 19q13. 31 et détecté plusieurs mutations dans l’APOE, qui n’ont pas été retrouvées dans une large série de témoins. Leurs effets ont été étudiés par des approches génétiques, d’analyses in silico et/ou in vivo. Ce travail a permis de décrire plus précisément l’HCF et de montrer que certaines mutations de l’APOE pouvaient être à l’origine d’une nouvelle forme d’HCF<br>Hypercholesterolomia is a major risk factor for atherosclerosis and serious cardiovascular weaknesses. It often is caused by more than one factor, but there exist monogenic forms, like Autosomal Dominant Hypercholesterolemia (ADH), that are caracterised by high levels of plasmatic LDL cholesterol. ADH is a frequent disease, but its molecular bases are not fully understood. Three major genes had been identified so far : LDLR (LDL receptor), APOB (apolipoprotein B, constituent of LDL accepted by their receptors) and PCSK9 (an enzyme regulating the quantity of receptors at the surface of their cell). Our team had recently identified a 4th major gene, HCHOLA4, and showed that the disease was genetically more heterogenous. The objective of the present work was to analyse mutations responsible of ADH in the French population, and search another major gene. We have analysed the distribution and the nature of the mutations LDLR, APOB, PSCK9 and “others” in 1358 French probands and shown a specific spectrum of mutations in the French population : 45% of the events had not been reported before. Their causal effect has been assessed by in silico analyses and/or by cosegretation studies. Moreover, we showed a gradient of severity between different ADH causing gene. We have also localised a 5th gene responsible of ADH, in 19q13. 31, and detected several mutations in the APOE gene that have not been traced in a normocholesterolemic control population. Effects of the mutations have been gauged by genetic approach and in silico and in vivo analysis. This work has thus been able to describe ADH more precisely, and show that some mutations of APOE might be the cause for a new type of ADH
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Medjahed, Halima. "Développement d'outils génétiques pour étudier la virulence de Mycobacterium abscessus." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077077.
Full textAbstract:
Mycobacîerium abscessus est un pathogène émergent responsable d'infections respiratoires sévères chez les patients atteints de la mucoviscidose. Cette espèce est également responsable d'infections extra-pulmonaires, notamment en cas de transplantation, et se caractérise par une faible susceptibilité aux antibiotiques. Le génome de cette mycobactérie a été séquence et des puces à ADN ont été développées. Des études effectuées sur des variants naturels lisses et rugueux montrent que les isolats rugueux sont hypervirulents. Ces isolats ne produisent pas de glycopeptidolipides (GPL), un métabolite lipidique de surface. On peut donc se demander si l'absence de ce lipide est responsable de cette hypervirulence. La première partie de ma thèse a été de développer des outils génétiques adaptés à M. Abscessus. En utilisant le système dit de « recombineering », nous avons construit une souche mutante caractérisée par sa faible production des GPL (AmmpL4b). Afin de prouver le rôle de ce gène dans un phénotype donné, nous avons aussi adapté un système de complémentation à M. Abscessus en testant des plasmides réplicatifs et intégratifs ayant démontré leur efficacité chez d'autres espèces. Dans ce travail, nous avons montré que la production des GPL engendre des modifications de surface de la cellule comme la mobilité par glissement. La virulence des souches (sauvage, mutante et complémentée) a été évaluée in vitro dans des modèles cellulaires et in vivo dans des modèles murins. Ces tests de virulence montrent que ce n'est pas que l'absence des GPL qui est impliquée dans la virulence de M abscessus. Nous privilégions à l'heure actuelle l'hypothèse qu'un autre facteur intervient directement ou indirectement dans cette virulence. Dans le futur, la caractérisation de la virulence de cet organisme ouvra la voie au développement de nouvelles drogues ou vaccins contre ce pathogène émergent<br>Mycobacterium abscessus is a rapidly growing mycobacterial species that can be involved in pulmonary and disseminated infections in immunosuppressed or young cystic fibrosis patients. It is an emerging pathogen and has attracted recent attention due to the numerous cases of infection; furthermore, genomic tools have been developed for this species. Nevertheless, the study of this species has until now been limited to spontaneous variants. We have compared three different mutagenesis Systems : the ts-sacB, the phage, and the recombineering Systems, and show that there are important differences in their efficiency for the construction of allelic-exchange mutants. We show, using the mmpL4b gene of the glycopeptidolipid pathway as a target, that allelic-exchange mutants can be constructed with a reasonable efficiency ( 7%) using the recombineering System. Studies on this species were limited so far to natural spontaneous variants. These studies have nevertheless showed that the Rough variants of M abscessus which are characterized by a low production of glycopeptidolipids are hypervirulent in human and also in in vivo models. Interestingly, these highly virulent isolates strongly induce TNF-α secretion by macrophages. However, the mechanism of the higher virulence process is currently unknown. The mutant constructed in this study, which is low glycopeptidolipids producer, is unable to slide and it loss the ability to form biofilms. These confirm the role of glycopeptidolipids in the modification of cell surface. Using in vivo model the virulence of this mutant has been tested. This study shows that other factor is involved with the lack glycopeptidolipids in the virulence of M abscessus. The study of the mechanism of the virulence of M abscessus is a pre-requisite to develop new drugs or vaccine candidates against this emerging pathogen
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Fajac, Isabelle. "Transfert de gènes dans les cellules épithéliales des voies aériennes à l'aide de dérives de polylysine : application à la mucoviscidose." Paris 5, 2000. http://www.theses.fr/2000PA05CD12.
Full textAbstract:
La mucoviscidose est une maladie autosomique récessive qui pourrait bénéficier d'un traitement par thérapie génique. Dans ce travail, nous avons étudié le transfert de gènes dans les cellules épithéliales des voies aériennes à l'aide de dérivés de polylysine, les polylysines glycosylées ou histidylées. La polylysine est une chaîne polycationique qui permet la formation avec l'ADN plasmidique d'un complexe éléctrostatique transitoirement stable. Les polylysines glycosylées sont formées de polylysine partiellement substituée par des résidus osidiques. Ces résidus permettent un ciblage cellulaire car ils sont reconnus par des récepteurs menbranaires affines d'osides, ls lectines. Un fois entrés dans les cellules, les complexes plasmide/dérivé de polylysine doivent s'échapper des vésicules d'endocytose afin de pouvoir atteindre le noyau de la cellule à traiter. Des agents endosomolytiques comme la chloroquine sont utilisés. Une polylysine substituée par des résidus histidyles qui déstabilisent par eux-même les membranes des endosomes a également été étudiée. Nous avons montré que parmi les différents dérivés de la polylysine, la polylysine lactosylée, la polylysine glucosylée et la polylysine histidylée permettent le transfert de gènes raporteurs et du gène CFTR le plus efficace dans des lignées de cellules épithéliales et séreuses des voies aériennes de phénotype normal et avec mutation homozygote ?F508 du gène CFTR et dans des celules en culture primaire. Le transfert de gènes à l'aide de ces dérivés de polylysine s'effectue sans toxicité cellulaire et est aussi ou plus efficace que le transfert de gènes obtenu avec d'autres vecteurs synthétiques commercialisés (polyéthylénéimine et lipides cationiques). Les mécanismes cellulaires du transfert de gènes ont été abordés en étudiant les relations entre endocytose médiée par un recepteur et efficacité de transfert de gènes.
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Girard, Muriel. "Etude des facteurs de prédisposition génétique de destruction des voies biliaires en période néonatale." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T018.
Full textAbstract:
Seules deux pathologies entraînent une destruction des voies biliaires en période néonatale : l’atrésie des voies biliaires et la cholangite sclérosante néonatale. Leur mécanisme physiopathologique est mal connu. Nous avons souhaité étudier la prédisposition génétique à ces maladies afin de mettre en évidence de nouveaux acteurs du développement biliaire. Nous avons porté une attention particulière au rôle potentiel de gènes non-codants que sont les microARNs dans ces pathologies biliaires, en tant que gène candidat ou modificateur. L’atrésie des voies biliaires représente 70% des indications de transplantation hépatique chez l’enfant. Cependant, son étiologie n’est pas connue. Son incidence étant la plus importante chez les Polynésiens, nous avons choisi d’étudier cette population comme modèle nous permettant de tester l’existence de facteurs de prédisposition. Pour cela, nous avons bénéficié d’une cohorte exhaustive des patients de Polynésie française atteints d’atrésie des voies biliaires de 1979 à 2009. Nous avons pu établir qu’il existait une saisonnalité des naissances d’atrésie des voies biliaires qui suggère l’influence de facteurs environnementaux. Parallèlement, nous avons montré que la population Polynésienne étudiée est génétiquement homogène et peu mélangée, et qu’elle se distingue des autres populations. Nous avons pu également montrer que l’origine ethnique des patients influence l’incidence de la maladie et la présentation clinique de la maladie Enfin, nous avons réalisé le génotypage de 24 patients Polynésiens et de leurs parents par puce pan-génomique de 250k. L’analyse de liaison ne nous ayant pas permis de mettre en évidence de gène(s), nous avons testé le déséquilibre de liaison sur l’ensemble de nos trios. Par ajustement pour tests multiples, 58 SNPs présentaient une association suggestive à l’atrésie des voies biliaires, mettant en évidence 11 gènes, dont 9 impliqués dans une même voie de signalisation compatible avec la destruction des cholangiocytes. Ces résultats nous incitent à considérer l’atrésie des voies biliaires comme une maladie complexe dont l’incidence serait influencée par l’origine ethnique des individus. La cholangite sclérosante néonatale est une pathologie extrêmement rare, dont la présentation clinique peut être associée à une ichtyose. Le gène Claudine 1 est impliqué chez certains patients atteints de cette maladie présentant une ichtyose. Dans ce contexte, nous avons pu identifier une mutation identique chez 4 patients issus d’une même famille Marocaine, confirmant ainsi l’implication du gène Claudine 1 dans cette forme phénotypique de la maladie. Parallèlement, nous n’avons trouvé aucune mutation de ce gène chez les patients atteints de cholangite sclérosante néonatale qui ne présentaient pas d’ichtyose. Du fait de la récurrence de la maladie dans les fratries, nous avons fait l’hypothèse d’une transmission autosomique récessive pour les formes sans ichtyose. Nous avons bénéficié d’une famille consanguine de cholangite sclérosante sans ichtyose, et par analyse de liaison, nous avons pu identifier deux grandes régions d’homozygotie au niveau des chromosomes 17q12-q21. 33 et 3q13. 12-q13. 13 contenant un grand nombre de gènes candidats potentiels. Par ce travail, complété par un séquençage d’exome en cours, nous espérons identifier un (ou des) gène(s) impliqué(s) dans les cholangites sclérosantes sans ichtyose. Enfin, après une étude bibliographique nous permettant de clarifier les niveaux d’implication du microARN miR-122 dans le foie, nous avons exploré l’implication des microARNs dans différentes cholestases. Par séquençage d’un gène de microARN situé dans une région d’intérêt, nous avons exclu l’implication de mir-3924 dans l’atrésie des voies biliaires. De plus, nous avons génotypé différents polymorphismes situés dans des gènes candidats de cholestases, au niveau de sites de ciblage prédits de microARN. Ayant identifié un génotype identique chez les patients, une analyse de la fréquence allélique dans une population contrôle est en cours. Ces éléments ouvrent ainsi la possibilité d’explorations des microARNs et leur participation dans les pathologies biliaires<br>We study the genetic predisposition to the Biliary Atresia (BA) and Neonatal Sclerosing Cholangitis (NSC) to identify new molecular actors of the biliary development. BA represents 70% of the of liver transplantation indication in children. BA incidence is the highest in Polynesians. In this population, we found births seasonality, indicating an environmental effect and demonstrate that incidence of the disease to the ethnic origin of the patients. By a pan-genomic genotyping of the cohort we found suggestive association with 58 SNPs delineating - coding genes implicated into a unique metabolic pathway that fits for the cholangipcytes destruction. NSC is a rare disease sometimes associated with ichtyosis. In the ichtyosis form of the disease, we (i) confirmed the Claudin-1 gene involvment, (ii) suggest a founder effect of the first exon mutation of Claudin-1 gene in the Moroccan population and (iii) suggest a modifying independant locus that could account of the intra-familial variability of the biliary desease. In the desease without ichtyosis, we demonstrated the absence of Claudin-1 gene mutation and we found two predisposition loci in 17q12 and 3q13. 12 by linkage analysis of a consanguineous family. An exome analysis of the patients is still in progress. This work, open also the involvment of the microRNAs in this field
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Pin, Didier. "Traitement de l'épidermolyse bulleuse dystrophique canine par greffe de feuillets épidermiques génétiquement modifiés." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077166.
Full textAbstract:
Les epidermolyses bulleuses dystrophiques recessives (ebdr) sont des genodermatoses dues a des mutations du gene codant le collagene vii. Des travaux recents ont montre que les retrovirus transferent efficacement l'adnc codant le collagene vii dans les keratinocytes primaires ebdr qui produisent des epitheliums transplantables exprimant le transgene curatif a long terme chez la souris immunodeficiente (scid). Pour valider la therapie genique chez un hote immunocompetent, les cellules souches epidermiques de deux chiens presentant une forme spontanee d'ebdr due a une mutation du gene codant le collagene vii, ont ete transduites a l'aide du vecteur retroviral mscv-col7-vsvg exprimant le collagene vii canin. Des feuillets epidermiques, prepares in vitro a partir de ces cellules genetiquement corrigees, ont ete transplantes sur les chiens ebdr. Le suivi des greffes et l'analyse des greffons 1, 2 et 5 mois apres la greffe montrent -1) une prise de greffe a 8 jours -2) le developpement d'un epiderme adherent au derme sous jacent -3) l'absence de signe inflammatoire ou de signe de rejet et l'absence de reaction immunitaire a mediation cellulaire (lt cd4 et cd8) et a mediation humorale (ac anti-collagene 7) -4) la presence du transgene, 5 mois apres la greffe, dans les keratinocytes a l'origine des holoclones (cellules souches epidermiques) -5) la transcription du transgene et la traduction de l'arnm correspondant -6) la presence de collagene vii a la jonction dermo-epidermique et dans les keratinocytes supra-basaux. Ce premier essai clinique chez un hote immunocompetent demontre que la therapie genique ex vivo de l'ebdr permet une correction fonctionnelle durable de la maladie<br>RECESSIVE DYSTROPHIC EPIDERMOLYSIS BULLOSA (RDEB) IS A GENODERMATOSIS CAUSED BY GENETIC MUTATIONS THAT HAMPER THE EXPRESSION OF COLLAGEN TYPE VII (COLVII). IT WAS SHOWN THAT RETROVIRAL VECTORS EFFICIENTLY TRANSFER THE COLVII CDMA INTO PRIMARY HUMAN RDEB KERATINOCYTES, REVERT THE RDEB PHENOTYPE RECOMBINANT COLVII AFTER GRAFTING ONTO SCID MICE. THE FEASIBILITY OF A GENE THERAPY APPROACH FOR RDEB WAS FURTHER VERIFIED IN A DOG MODEL OF SPONTANEOUS RDEB ASSOCIATED WITH AN AMINO ACID SUBSTITUTION IN THE COLLAGENIC DOMAIN OF COLVII. AUTOLOGOUS EPITHELIA MADE IN VITRO USING KERATINOCYTES TRANSFECTED WITH THE RETROVIRAL VECTOR MSCV-COL7-VSVG EXPRESSING THE WILD TYPE OF THE CANINE COLLVIIWERE GRAFTEl ONTO TWO RDEB DOGS. EIGHT DAYS AFTER IMPLANTATION, THE GRAFTED SITES CLINICALLY APPEARED TO BEAR A NORMAL SKIN. AT MONTH 1, NO CLINICAL SIGN OF INFLAMMATION OR IMMUNE REJECTtON OR EPIDERMAL DETACHMENT WAS OBSERVED. AT MONTH 2, EXAMINATION OF BIOPSIES OF THE GRAFTED AREAS SHOWED RESTORATION OF THE DERMAL-EPIDERMAL ADHESION, A STRONG IMMUNOREACTIVITY OF THE BASEMENT MEMBRANE TO ANTI-COLVII ANTIBODIES AND ABSENCE OF CELLULAR AND HUMORAL IMMUNE RESPONSE DESPITE A PERSISTENT EXPRESSION OF THE RECOMBINANT COLVII. AT MONTH 5, THE TRANSGÈNE PRESENTS IN EPIDERMAL STEM CELLS AND EXPRESS THE WILC TYPE COLLAGEN VII TRANSCRIPTS AND PROTEINS. THE PROTEINS ARE LOCATED AT THE DERMAL-EPIDERMAL JUNCTION AND IN THE CYTOPLASM OF ALL KERATINOCYTES. THESE RESULTS STRONGLY SUGGEST THAT RDEB CAN BE SUCCESSFULLY TREATED BY GENE TRANSFER WITHOUT ANY DETECTABLE ADVERSE EFFECT AND FOR A LONG TIME
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Tourret, Jérôme. "Génération de la diversité génétique au sein de l'espèce Escherichia coli et relation avec la phylogénie et la virulence." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2010PA05T061.
Full textAbstract:
Les liens entre diversité génétique, phylogénie et virulence au sein de l’espèce E. Coli ont été étudiés par quatre travaux : Les génomes de 20 souches ont été comparés, permettant de préciser le core et le pangénome, de confirmer la structure clonale de l’espèce et de montrer que la recombinaison n’est pas répartie uniformément le long du chromosome. La fréquence de recombinaison chromosomique a été mesurée dans quatorze souches d’E. Coli. Elle est polymorphe et inductible. Des mutants de la souche 536 comportant des délétions simples ou multiples des îlots de pathogénicité ont été testés sur un modèle de septicémie de la souris. Ceci a montré qu’ils n’ont pas la même importance dans la virulence extra-intestinale et qu’ils ont un effet additifs. Le quatrième travail a montré une synergie de virulence extra-intestinale entre une souche non pathogène et une souche virulente d’E. Coli. L’ensemble des résultats montre que la virulence est un caractère complexe et polygénique<br>The links between genetic diversity, phylogeny and extra-intestinal virulence in E. Coli have been explored through four works: The genomes of 20 strains have been compared, allowing to precisely define the core and pangenomes, to confirm the clonal structure of the species and to show that recombination events are not homogeneously scattered throughout the chromosome. Chromosomic recombination frequency have been measured in fourteen strains and shown to be polymorphic and inducible. Pathogenicity island single or multiple deletion mutants of strain 536 have been assessed on a mouse septicemia model. They do not participate equally to virulence and have an additive virulent effect. An extra-intestinal virulence synergy has been evidenced between a pathogenic and a non virulent strain of E. Coli. These results show that virulence is a complex and polygenic phenomenon
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Teixeira, Luis. "Syndrome de Kallmann-de Morsier : caractérisation de deux nouveaux gènes responsables, PROK2 et PROKR2, et étude de la migration des cellules neuroendocrines à GnRH au cours de l'embryogénèse." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05T032.
Full textAbstract:
Le syndrome de Kallmann de Morsier (KS) est défini par l'association d'un déficit de l'olfaction et d'un hypogonadisme hypogonadotrope du a un déficit en gonadolibérine ou GnRH. Les neurones synthétisant la GnRHl migrent pendant l'embryogenèse en suivant le trajet des neurones olfactifs vers le télencéphale. Dans une première partie, nous montrons que des mutations dans le gène codant pour la prokinéticine 2 (PROK2) et son récepteur PROKR2 sont responsables de 9% des cas de KS. Les mutations trouvées sont principalement faux-sens, responsables de pertes de fonction. Nous discutons des cas de transmission digénique ou oligogénique de mutation PROKR2 et d'autres gènes KS, trouvées chez des malades KS. Nous montrons que PROKR2 et FGFR1 peuvent être co-exprimés dans les mêmes neurones suggérant une relation possible entre les voies de signalisation FGF/FGFR1 et PROK2/PROKR2. La seconde partie de cette thèse porte sur l'étude de la migration des neurones synthétisant la GnRHl. Il a été montré un défaut de migration des neurones à GnRHl, accumulés dans la région nasale haute chez un fœtus KS. Nous avons montré le défaut de migration des neurones synthétisant la GnRHl chez quatre foetus humains arhinencéphales dont un fœtus KS. Ces résultats nous ont permis de définir une séquence foetopathologique olfactogenitale montrant pour différentes anomalies génétiques conduisant a une anomalie de développement du système olfactif, sont associées chez l'homme a un arrêt prématuré de la migration des neurones synthétisant la GnRHl. Nous proposons l'hypothèse que le défaut de migration des neurones synthétisant la GnRHl est commun a toutes les situations ou existe une arhinencéphalie<br>Kallmann syndrome (KS) combines hypogonadotropic hypogonadism and anosmia. Anosmia is related to the absence or hypoplasia of the olfactory bulbs and tracts. Hypogonadism is due to gonadotropin-releasing hormone (GnRH) deficiency, which presumably results from a failure of the embryonic migration of neuroendocrine GnRH cells from the olfactory epithelium to the forebrain. In the first part, we foxind that mutations in PROKR2 and PROK2, encoding prokineticin receptor-2 and prokineticin-2, are présent in 9% of patients with KS. These mutations are mainly missense mutations resulting in loss of fonction. In addition, we discussed of the digenic or oligogenic mode of inheritance of PROKR2 and others genes involved in KS. Furthermore, we showed that PROKR2 and FGFR1 are co-expressed in same neurons, suggesting cross-talk between the FGF/FGFR1 and PROK2/PROKR2 signaling pathway. In the second part of the thesis, we observed that neuroendocrine cells synthetizing GnRHl migration defect is common in four arhinencephalie fetuses, including on fetus with KS. Based on these results we defined an olfacto-genital fetopathological sequence in human, that is to say different genetic developmental diseases resulting in abnormal olfactory development are responsible for a defect in migration of neuroendocrine cells synthetizing GnRHl
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Benko, Sabina. "Altérations génomiques à grande distance d'éléments non-codants conservés et dérégulation d'expression tissu-spécifique au locus SOX9." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05T039.
Full textAbstract:
SOX9, gène majeur du développement, est localisé au sein d'un désert génique représentant son domaine de régulation. Les mutations du gène SOX9 résultent en un syndrome polymalformatif la dysplasie campomelique (PC). Les endophénotypes de la PC dans leurs formes isolés - séquence de Pierre Robin (SPRi) et anomalies de différentiation sexuelle (DSDi) — peuvent survenir suite à des altérations (translocations, délétions, mutations ponctuelles) des régions non-codantes au locus SOX9. Des études in vitro et in vivo indiquent que ces altérations, localisées a grande distance par rapport à SOX9 (>l,2Mb/SPR; >500kb/DSD), concernent les éléments conservés au cours de l'évolution ayant une fonction régulatrice d'expression tissu et stade spécifique. Les altérations identifiées chez les patients SPRi ou ADSi affecteraient l'expression tissu spécifique respectivement dans le mésenchyme mandibulaire ou les gonades pendant que les autres domaines d'expression de SOX9 resteraient intacts<br>SQX9 is a major developmental gene mapping to a vast gene desert that encompasses its regulatory domain. The SOX9 gene coding equence mutations result in campomelic dysplaisa (CD), a complex polymalformative syndrome. We showed that alterations of non-coding sequences (translocations, deletions or point mutations) at the SOX9 locus result in isolated CD endophenotypes namely Pierre Robin sequence (iPRS) and disorders of sex developpement (iDSD). Both in vitro and in vivo studies indicate that those alterations, located at great distance with respect to SOX9 coding sequences (>1,2Mb/iPRS; >500kb/iDSD), comprise regions conserved throughout the evolution that function as regulatory elements driving tissue specific gene expression of SOX9. We suggest that alterations identified in iPRS and iDSD patients represent a tissue specific loss of SOX9 expression in the mandibular mesenchyme or the developing gonad respectively, while other territories of normal SOX9 expression remain intact
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Maupetit, Mehouas Stéphanie. "La pseudohypoparathyroïdie de type 1b, un modèle d’étude des mécanismes d’empreinte au locus GNAS." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T025.
Full textAbstract:
Chez les mammifères, l’expression de certains gènes, dont le locus GNAS, est restreinte à un seul des deux allèles parentaux suite à des modifications épigénétiques (méthylation de l’ADN ou modification des histones) de leurs promoteurs. Ce locus soumis à l’empreinte parentale produit différents transcrits et protéines en utilisant des promoteurs distincts. Le transcrit Gsa (sous unité alpha stimulatrice des protéines G) est exprimé de façon biallélique dans la majorité des tissus sauf dans certains tissus (tubule rénal, thyroide, hypophyse) où son expression est monallélique. L’expression des 4 autres transcrits (XLas, NESP55, A/B et AS) est le plus souvent monoallélique et sous le contrôle de promoteurs différentiellement méthylés (DMRs). La pseudohypoparathyroïdie de type 1b (PHP1b) est une pathologie de l’empreinte au locus GNAS. Elle se caractérise par une résistance à la PTH, parfois à la TSH, deux hormones dont les récepteurs sont couplés aux protéines Gsa. La PHP1b est causée par un défaut de méthylation maternel du DMR A/B du locus GNAS responsable d’un défaut d’expression de Gsa de l’allèle maternel. Il en résulte un défaut complet d’expression de Gsa dans les tissus où celle-‐ci est soumise à l’empreinte parentale. Deux formes de PHP1b ont été décrites: une forme autosomique dominante (AD-‐PHP1b) et une forme sporadique (Spor-‐PHP1b). L’AD-‐ PHP1b est causée par une délétion génomique récurrente localisée en amont du locus GNAS et associée à une anomalie de méthylation restreinte au DMR A/B. La forme sporadique se caractérise par un défaut global de méthylation des 4 DMRs de GNAS : perte de méthylation des DMRs A/B, AS, et XL et gain de méthylation du DMR NESP. L’objectif de mon travail était d‘identifier et de caractériser les mécanismes complexes et mal connus qui régissent l’établissement et le maintien de la méthylation du locus GNAS, reflet de l’empreinte parentale à l’aide d’un modèle humain, la PHP1b. Pour cela j’ai proposé de : caractériser le défaut épigénétique du locus GNAS dans une cohorte de patients atteints de PHP1b. L’observation d’un défaut d’empreinte parentale du locus GNAS chez une patiente présentant un phénotype perte de fonction de GNAS, démontre un impact physiologique plus important de ce défaut d’empreinte que ne l’évoquait la littérature(mariot et al. , jcem 2007). Par ailleurs, la mise au point et l’utilisation de deux méthodes d’analyse quantitative de la méthylation ont permis d’identifier plusieurs sous-‐groupes de patients atteints de PHP1b. On distingue en fonction de l’état de méthylation des DMRs du locus GNAS, un groupe présentant i) un défaut complet de méthylation, ii) un défaut partiel de méthylation et enfin iii) un défaut complet de méthylation sauf au DMR XL, où la méthylation est partielle. (maupetit et al. , jmg 2010). Ces données suggèrent qu’il existe plusieurs mécanismes à l’origine du défaut d’empreinte chez les patients atteints de PHP1b. Etudier les mécanismes moléculaires régissant la méthylation des DMRs du locus GNAS. Pour finir, le séquençage du locus GNAS permettra d’explorer l’hypothèse alternative d’une anomalie en cis, capable d’entrainer un défaut d’empreinte. Ces travaux participent à l’effort scientifique entrepris pour comprendre les mécanismes génétiques et épigénétiques qui régissent l’empreinte parentale et contribuent à une meilleure compréhension de la pseudohypoparathyroïdie de type 1b<br>GNAS is a complex locus submitted to genomic imprinting: the expression of transcripts is restricted to one allele in a parent of origin manner depending of the methylation status of their promoter. A rare disease, pseudohypoparathyroidism type 1b (PHP1b) is characterized by a loss of genomic imprinting, characterized by methylation abnormalities of the locus and leading to abnormal expression of transcrits. The objectives of my work was: i) to characterized the epigenetic defect at the GNAS locus in a cohort of patients affected with PHP1b. Three sub-‐clusters of PHP1b have been identified on the basis of their methylation pattern at the GNAS locus, leading to the hypothesis that distinct molecular mechanisms lead to distinct methylation pattern in PHP1b patients. Ii) to studied molecular mechanisms, which control the methylation at the GNAS locus. We tested the hypotheses that PHP1b could be due at least in some cases, to an epigenetic mosaic. The confirmation of this epigenetic mosaicism is demonstrated by the analysis of the methylation pattern at the GNAS locus in clonal cells obtained from cultured fibroblasts of a patient affected with Spor-‐PHP1b. Furthemore, we hypothesized that a putative global imprint disorder could be involved in some PHP1b patients. We investigate the methylation pattern of 6 imprinted loci in Spor-‐PHP1b patients. In collaboration with Irene Netchine’s team (Inserm UMR-‐S938 Team 4), we found 5 out of 63 PHP1b patients present with an incomplete loss of imprinting at several imprinted loci. A trans acting factor may be responsible of these incomplete losses of imprinting at several imprinted loci
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Boissel, Sarah. "Approche génétique des bases moléculaires et physiopathologiques de formes autosomiques recessives de retard mental." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05T031.
Full textAbstract:
Le retard mental (RM) est défini par « un fonctionnement intellectuel significativement inférieur à la moyenne, associé à des limitations des fonctions adaptatives, qui se manifeste avant l’âge de 18 ans » (DSM-IV). Il touche 2-3% de la population et est le handicap majeur le plus fréquent de l’enfant. Si 15 % des RM peuvent être attribués à des facteurs environnementaux et 30-35 % à des causes génétiques connues, l’étiologie de la maladie reste pourtant inconnue dans plus de 50% des cas, laissant les patients et leur famille sans explication ni perspective de traitement. La compréhension des bases physiopathologiques des RM constitue donc l’un des grands défis scientifiques et médicaux des prochaines années. Les travaux de l’équipe de Laurence Colleaux visent, entre autres, à contribuer au démembrement génétique des formes autosomiques récessives de RM et à apporter des éléments de réponse quant aux mécanismes physiopathologiques sous-jacents. Dans cette optique, nous avons pu constituer une large cohorte de 41 familles consanguines multiplex avec des enfants atteints de RM sans étiologie connue. Les familles les plus informatives sont étudiées par la méthode de cartographie par autozygotie, qui s’appuie sur l’étude de familles consanguines multiplex pour localiser des gènes de maladies autosomiques récessives rares. Le travail de thèse présenté dans ce manuscrit s’inscrit dans ce projet de recherche et a porté sur l’analyse de trois familles consanguines multiplex dans lesquelles ségrége une forme syndromique ou isolée de RM. Ce mémoire développe l’identification et l’analyse fonctionnelle de trois nouveaux gènes responsables de formes autosomiques récessives de RM et ouvre des perspectives intéressantes quant aux mécanismes physiopathologiques responsables des phénotypes observés dans ces trois familles. Le premier chapitre détaille l’analyse de la famille Ha, dans laquelle les enfants sont atteints d’un RM non syndromique, et identifie COMMD4 comme un très bon gène candidat de RM. Le deuxième chapitre présente l’étude de la famille Be, qui a donné lieu à la caractérisation du gène MED23 dans un RM isolé, apportant ainsi le premier exemple d’une mutation dans une des sous-unités du complexe Mediator associée à une déficience intellectuelle isolée. Le troisième chapitre développe l’analyse d’une grande famille où ségrège un retard psychomoteur associé à des anomalies congénitales multiples. Il apporte la démonstration qu’une mutation inactivatrice du gène FTO est responsable d’un nouveau syndrome létal et illustre le premier exemple d’une maladie liée à un défaut de la réparation par déméthylation oxydative des lésions méthylées de l’ADN<br>Mental retardation (MR) is characterized by deficits in higher brain functions that result in significant limitations in adaptive and cognitive skills. It is the most frequent handicap in children and young adults, affecting 2-3% of the general population. However, the cause of MR remains unexplained in most cases, leaving families without accurate diagnosis and genetic counseling. Understanding the biological bases of these disorders is therefore an important medical and scientific challenge for the next years. This manuscript describes the analysis of three consanguineous multiplex families in which isolated or syndromic MR segregates. This thesis develops the identification using autozygosity mapping and functional analyses of three novel genes responsible for autosomal recessive MR. First, we study the family Ha, in which affected children present with non syndromic MR, and identify COMMD4 as a good candidate gene for MR. Second, we report on a MED23 mutation resulting in isolated MR, providing the first example of a mutation in the Mediator complex associated with pure mental deficiency. Third, we study a large family in which patients show psychomotor retardation with multiple congenital anomalies. We show that an inactivating FTO mutation is responsible for a novel lethal syndrome, illustrating the first example of a human disorder related to the defect of an AlkB-related protein
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Burnichon, Nelly. "Caractérisation des altérations génétiques constitutionnelles et somatiques des phéochromocytomes / paragangliomes." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05T028.
Full textAbstract:
Les paragangliomes (PGL) sont des tumeurs rares qui se développent aux dépens des paraganglions parasympathiques et sympathiques. On appelle phéochromocytome (PHEO) un PGL développé dans la médullosurrénale. Les PHEO/PGL sont malins dans 10‐15% des cas et génétiquement déterminés dans environ 30% des cas. Les gènes de prédisposition au PHEO/PGL connus lorsque ce projet a débuté étaient les gènes VHL, RET, NF1, SDHB, SDHC et SDHD. Le gène SDHB prédispose aux formes malignes et de mauvais pronostic de la maladie. Au cours de ces travaux de thèse, nous nous sommes tout d’abord intéressés à la génétique constitutionnelle des PHEO/PGL puis aux événements somatiques participant à l’apparition de ces tumeurs. Nous avons mené l’étude génétique d’une cohorte de 445 sujets porteurs de PGL, chez qui nous avons identifié une mutation d’un gène SDHx dans 54% des cas. Cette étude a permis de dégager des corrélations génotype/phénotype pour cibler le test génétique chez les patients atteints de formes familiale ou sporadique de la maladie. Nous nous sommes ensuite intéressés aux nouveaux gènes de prédisposition au PHEO/PGL. Nous avons identifié et validé fonctionnellement la première mutation du gène SDHA et étudié l’implication de nouveaux gènes rapportés récemment (IDH1, IDH2 et TMEM127) dans la cohorte de PHEO/PGL du réseau COMETE. Nous avons ensuite étudié les altérations génétiques somatiques se produisant au sein des PHEO/PGL. Nous avons caractérisé les pertes et gains chromosomiques et étudié le transcriptome de 202 PHEO/PGL dans le cadre du programme Carte d’Identité des Tumeurs. Ces travaux ont permis de réaliser une classification précise et une caractérisation des tumeurs génétiquement déterminées, ont conduit à l’identification de mutations somatiques des gènes VHL et RET dans environ 15% des tumeurs sporadiques et ont mis en évidence des gènes différentiellement exprimés ainsi que l’amplification de la région 17q dans les tumeurs malignes, en particulier celles liées à SDHB<br>Paragangliomas (PGL) are rare tumors arising from parasympathetic or sympathetic paraganglia. A pheochromocytoma (PHEO) is a PGL that arises from the adrenal medulla. PHEO/PGL are malignant in 10‐15% of cases and genetically determined in about 30% of cases. The PHEO/PGL susceptibility genes identified when this project began were the VHL, RET, NF1, SDHB, SDHC and SDHD genes. SDHB gene mutations predispose to malignancy and poor prognosis in affected patients. During this thesis project, we have studied PHEO/PGL constitutional genetics and characterized somatic events involved in the emergence of such tumors. We performed the genetic characterization of a cohort of 445 patients with PGL, in which we have identified an SDHx mutation in 54% of cases. This study allowed identifying genotype/phenotype correlations for a targeted genetic testing in patients with familial or sporadic forms of the disease. We have then evaluated the implication of new PHEO/PGL predisposing genes. We have identified and functionally validated the first SDHA gene mutation and studied the recently identified genes (IDH1, IDH2 and TMEM127) in the PHEO/PGL COMETE cohort. We have then studied somatic genetic alterations that occur within PHEO/PGL. We have characterized chromosomal losses and gains, and studied the transcriptome of 202 PHEO/PGL in the context of the Carte d’Identité des Tumeurs program. These studies have led to a precise classification and characterization of genetically determined tumors and to the identification of somatic mutations in VHL and RET genes in approximately 15% of sporadic tumors. They revealed differentially expressed genes as well as a gain of chromosome arm 17q in malignant PHEO/PGL, and particularly those linked to SDHB gene mutations
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Beldjord, Chérif. "Defauts moleculaires du locus beta dans les thalasseies en algerie. Description d'un modele original impliquant un defaut d'epissage de l'arn messager." Paris 5, 1990. http://www.theses.fr/1990PA05S001.
Full textAbstract:
Les thalassemies, maladies genetiques de l'hemoglobine, ont ete et sont l'objet de deux types d'approches : par leur frequence et leur gravite, elles ont justifie des etudes epidemiologiques et diagnostiques ; parce que le gene de globine est bien connu et que les mutants sont multiples, elles ont constitue des modeles d'etude des mecanismes de regulation. Dans ce travail, les deux problematiques ont ete abordees. 1/ a partir d'une serie representative de sujets homozygotes, nous avons pu determiner les defauts moleculaires responsables, leur environnement genique, et l'impact de cet environnement sur l'expression phenotypique. 2/ au cours de cette etude systematique, nous avons pu, chez un sujet presentant une forme clinique moderee, mettre en evidence un defaut moleculaire original. Il s'agit d'une mutation ponctuelle au niveau de la sequence polypyrimidique du deuxieme intron, region dont la fonction etait mal connue jusque la. Des etudes fonctionnelles, realisees a partir du gene clone, ont demontre que ce defaut, dont la traduction est essentiellement un retard dans la cinetique de l'epissage, aboutit a un deficit quantitatif en arn messager ; de plus, ce defaut s'accompagne, quoique de facon minoritaire, d'anomalies quantitatives de l'epissage.
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Flavigny, Jeanne. "Anomalies génétiques de la cardiomyopathie hypertrophique familiale : de leur identification à l'analyse de leurs conséquences ex vivo et in vitro." Paris 5, 2001. http://www.theses.fr/2001PA05CD01.
Full textAbstract:
La cardiomyopathie hypertrophique familiale (CMH) est caractérisée par une hypertrophie du ventricule gauche et est transmise selon un mode autosomique dominant. Les analyses génétiques ont montré que 9 gènes codant tous des protéines du sarcomère cardiaque sont impliqués dans cette maladie. Parmi ceux ci,nous avons choisi d'étudier le gène MYL2 codant la chaîne légère régulatrice ventriculaire de la myosine et le gène MYBPC3 codant la protéine C cardiaque (cMyBPC) afin de savoir : 1) si des anomalies du gène MYL2 associées jusqu'alors à un phénotype rare pouvaient aussi être responsables de formes classiques de CMH, 2) quels sont les mécanismes moléculaires de la CMH associés aux mutations du gène MYBPC3? Dans la première partie, nous avons analysé les 7 exons du gène MYL2 et identifié 2 nouvelles mutations dans des familles présentant des formes classiques de CMH. Dans la deuxième partie, nous avons analysé ex vivo les conséquences des mutations du gène MYBPC3. Cette analyse a apporté les résultats suivants : (1) Dans les cardiomyocytes de rats foetaux, quatre cMyBP-Cs tronquées humaines ayant perdu les sites majeurs d'interaction avec la myosine et/ou avec la titine sont moins stables et s'incorporent moins bien le sarcomère que la cMyBP-C normale ou mutée. Leur expression est associée à une altération de la striation endogène dans 30 à 50 pour cent des cas. (2) Dans les cellules COS, une cMyBP-C tronquée, ne possédant plus les sites COOH-terminaux de liaison à la titine et à la myosine modifie l'organisation des filaments de α-myosine de rat. (3) Par analyse protéique fine, un troisième site putatif de liaison à la myosine (MyHC) a été identifié dans le domaine NH2-terminal de la cMyBP-C humaine. En conclusion, dans le contexte de la CMH, ce travail a montré qu'il n'existe pas de phénotype particulier pour un gène donné et que les mutations du gène MYBPC3 décalant le cadre de lecture semblent aussi agir par un effet dominant-négatif sur la structure et/ou l'assemblage du sarcomère. Une meilleure connaissance des partenaires sarcomériques de la cMyBP-C ainsi qu'une évaluation ex vivo ou in vivo des effets des cMyBP-Cs anormales sur la fonction du cardiomyocyte permettront de mieux comprendre les mécanismes moléculaires par lesquels les mutations MYBPC3 conduisent au développement de la CMH
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Jonquoy, Aurélie. "Physiopathologie et approche thérapeutique des chondrodysplasies liées à FGFR3." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T009.
Full textAbstract:
L'achondroplasie, l'hypochondroplasie et le nanisme thanatophore font partie d'une famille de chondrodysplasies sévères causées par des mutations gain de fonction dans le gène FGFR3. Une meilleure compréhension du rôle de ce gène au cours de l'ossification endochondrale est essentielle pour aborder les causes de ces pathologies et développer de nouveaux outils thérapeutiques. L'étude au cours du temps du phénotype des souris Fgfr3Y367C/+, atteintes de chondrodysplasie, montre que l'activation constitutive de Fgfr3 induit des défauts de prolifération, de différenciation chondrocytaire, et d'invasion vasculaire au niveau cartilage. Ces défauts sont responsables d'un raccourcissement de la plaque de croissance et de la hauteur de l'os trabéculaire, et d'un retard d'apparition des noyaux d'ossification épiphysaire. Nous avons également montré que Fgfr3, considéré jusque là comme régulateur négatif de la croissance osseuse, pouvait également réguler positivement ce processus. Nous avons testé, grâce à un système de culture organotypique de fémurs, l'effet d'un nouvel inhibiteur de tyrosine kinase, A31, sur l'ossification endochondrale. La croissance spectaculaire des fémurs Fgfr3Y367C/+ montre pour la première fois l'effet positif d'un tel inhibiteur sur ce processus. Cette approche pharmacologique nous permet également de mieux caractériser les anomalies osseuses dans ces chondrodysplasies. Nos résultats suggèrent que l'activation constitutive de Fgfr3 entraîne la sortie du cycle cellulaire et la différenciation prématurée des chondrocytes, et supportent le développement d'inhibiteurs de tyrosine kinase comme approche thérapeutique des chondrodysplasies<br>Achondroplasia, hypochondrodysplasia and thanatophoric dysplasia belong to a severe chodrodysplasias family, caused by FGFR3 gain of function mutations. A better understanding of the role of this gene during endochondral ossification is crucial to determine the cause of the disease and develop new pharmaceutical strategies. By studiyng the phenotype of chondrodysplasic Fgfr3Y367C/+ mice during development, we showed that constitutive activation of Fgfr3 disrupted proliferation and differentiation of chondrocytes, as well as vascular invasion of cartilage. These defects result in shortening of both the growth plate and the trabecular bone, and in delayed secondary ossification center formation. We also showed that Fgfr3 has a dual effect, as both a negative and a positive regulator of the endochondral ossification process. I tested the effect of a novel tyrosine kinase inhibitor, on endochondral ossification, using a limb explant culture system. Spectacular bone growth of Fgfr3Y367C/+ showed, for the fist time, the positive effect of such an inhibitor on bone growth. This pharmaceutical approach also allowed us to better characterized bone defects in these chondrodysplasias. Our results suggest that constitutive activation of Fgfr3 induces cell cycle exit and premature differentiation of chondrocytes, and support the development of tyrosine kinase as as therapeutic approaches for chondrodysplasias
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Malan, Valérie. "Apport des nouveaux outils de cytogénétique moléculaire à la définition clinique et moléculaire de nouveaux syndromes." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05T025.
Full textAbstract:
Les anomalies chromosomiques constituent la principale cause de retard mental (RM) et de malformation congénitale. De nos jours, la CGH (Comparative Genomic Hybridization) array a supplanté le caryotype pour l’étude globale du génome en offrant une résolution 10 à 100 fois supérieure. L’étude de patients avec un retard mental syndromique par cette technique a permis de détecter environ 10 à 15% de remaniements chromosomiques non visibles sur le caryotype. L’objectif de mon travail était d’apporter des éléments de réponse sur les causes chromosomiques et moléculaires de formes syndromiques de retard mental grâce à l’utilisation de ce nouvel outil de cytogénétique moléculaire. Dans le premier volet de ma thèse, la recherche systématique d’anomalies chromosomiques cryptiques chez les patients présentant un retard mental idiopathique a permis de décrire deux nouveaux syndromes cliniquement reconnaissables à savoir la microdélétion 19q13. 11 et la microduplication Xq27. 3q28. Dans la deuxième partie de mon travail, j’ai exploré par CGH array une cohorte de patients avec une avance staturale syndromique sans base génétique. Cette cohorte comprenait des patients présentant une entité cliniquement reconnaissable (syndrome de Sotos, syndrome de Weaver. . . ) et des patients sans syndrome spécifique connu. A l’aide d’une puce de moyenne résolution (1 Mb), cinq anomalies pathogènes (5%) ont été identifiés. Ces résultats nous ont conduit à étudier en CGH array haute résolution (Agilent 244K) 18 patients de cette cohorte sans cause moléculaire. Deux délétions non chevauchantes localisées en 19p13. 3 et interrompant le même gène NFIX (nuclear factor I/X) ont ainsi été détectées chez deux patients. Le gène NFIX a alors été considéré comme un gène candidat chez 76 sujets présentant une avance staturale syndromique. Par séquençage directe, nous avons identifié une mutation non-sense hétérozygote chez une patiente diagnostiquée "Sotos-like". Ces trois patients ont un phénotype très similaire suggérant que l’haploinsuffisance de NFIX est responsable d’un syndrome de type Sotos-like. Les souris mutantes Nfix-/- ont un phénotype différent s’apparentant au syndrome de Marshall-Smith (MSS). Nous avons donc émis l’hypothèse que des mutations de NFIX puissent aussi être responsables de ce syndrome. De ce fait, nous avons identifié des mutations hétérozygotes chez 9 patients MSS. L’étude des conséquences de ces mutations sur la stabilité du transcrit NFIX muté nous a amené à proposer que la variation de l’efficacité du mécanisme du processus de Nonsense-mediated mRNA decay soit à l’origine de la distinction phénotypique entre les syndromes de Sotos-like et de Marshall-Smith. Notre travail apporte un nouvel exemple de l’intérêt de la CGH array dans l’identification de nouveaux syndromes ainsi que dans la découverte des bases moléculaires des pathologies mendéliennes<br>Chromosome abnormalities are the leading cause of mental retardation (MR) and congenital malformations. Today, because of its greater resolution (10 to 100), array CGH (Comparative Genomic Hybridization) supersedes karyotype analysis when a whole genome analysis is required. Using array CGH, 10-15% of chromosomal abnormalities are detected in patients presenting with mental retardation. The first objective of the present study was, using this novel molecular cytogenetic tool, to investigate chromosome abnormalities observed in patients presenting with a syndromic form of mental retardation. This study allowed to describe two novel clinically recognizable syndromes associated respectively with a 19q13. 11 microdeletion and Xq27. 3q28microduplication. In the second part of my thesis, a cohort of patients presenting with a syndromic overgrowth syndrome was explored using this novel approach. This cohort included patients with a clinically recognizable entity such as Sotos syndrome or Weaver syndrome as well as patients presenting with a nonspecific overgrowth conditions. Using a 1 Mb resolution BAC microarray, five pathogenic chromosome abnormalities were identified. This led us to investigate further the “negative branch” of the cohort (18 patients) using a high resolution array CGH (Agilent 244K). Interestingly, two 19p13. 3 non overlapping deletions disrupting the same gene NFIX were detected in two patients. Subsequently, the NFIX gene was studied at the molecular level in 76 patients presenting with an overgrowth syndrome. We identified by direct sequencing a heterozygous mutation of the NFIX gene in a patient with a “Sotos-like” phenotype. As the phenotype of these three patients were very similar, we hypothesized that haploinsufficiency of NFIX gene was causal. Interestingly, Nfix-/- mutant mice have a phenotype reminiscent of Marshall-Smith syndrome (MSS). This led us to screen MSS patients for NFIX mutations. We identified NFIX mutations in 9 MSS patients. The study of the consequences of these mutations on the stability of the mutated NFIX transcript led us to suggest that variation in efficiency of the process of “Nonsense-mediated mRNA decay” could explain the phenotypic differences between the Sotos-like syndrome and the Marshall-Smith syndrome. In conclusion, the present work illustrates the value of array CGH in identifying novel chromosomal disorders and in establishing the molecular basis of well described Mendelian diseases
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Mugniery, Emilie. "Impact de l'activation constitutive de FGFR3 sur l'ossification endochondrale." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T032.
Full textAbstract:
FGFR3 (Fibroblast Growth Factor Receptor 3) est un récepteur à activité tyrosine kinase dont les mutations faux sens entrainent son activation constitutive et sont responsables d’une famille de chondrodysplasies dont la forme la plus fréquente est l’achondroplasie. Cette pathologie touche 1 enfant sur 15 000 et a pour signes cliniques un nanisme rhizomélique, des membres courts, une cage thoracique étroite et une macrocéphalie. Les mutations activatrices de FGFR3 sont responsables d’un disfonctionnement de l’ossification endochondrale La compréhension du rôle de FGFR3 dans l’ossification endochondrale est un pré requis à la mise en place de traitements adaptés aux chondrodysplasies. L’objectif de ma thèse était d’étudier l’impact de l’activation constitutive de FGFR3 sur les différentes étapes de l’ossification endochondrale. Ce travail a été réalisé grâce à l’étude de différents modèles murins exprimant la mutation activatrice Y367C soit de manière ubiquitaire (CMV-FGFR3 Y367C/+), soit dans le cartilage (Col II-FGFR3 Y367C/+), soit dans l’os (Col IFGFR3Y367C/+). Les études réalisées sur les souris CMV-FGFR3 Y367C/+ nous ont permis de mettre en évidence l’implication de FGFR3 dans la prolifération et la différenciation chondrocytaire. Nous avons démontré que FGFR3 était un régulateur positif de la prolifération durant la période anténatale et négatif durant la période postnatale. Nos résultats suggèrent également que l'activation constitutive de FGFR3 entraîne une sortie prématurée des chondrocytes du cycle cellulaire ayant pour conséquence leur différenciation anormale. L’étude de la formation des centres d’ossification primaire et secondaire montre que l’activation constitutive de FGFR3 entraine des défauts majeurs du processus de formation osseuse. Nous avons mis en évidence chez les souris CMV-FGFR3 Y367C/+ un retard de la formation du centre d’ossification secondaire, d’importants défauts de la spongieuse primaire ainsi que de l’os trabéculaire. L’étude en parallèle des modèles CMV-FGFR3 Y367C/+, Col II-FGFR3 Y367C/+ et Col I-FGFR3 Y367C/+ âgés de trois semaines montre que les défauts du processus de formation du tissu osseux sont principalement la conséquence directe du défaut de chondrogénèse observé et mettent en évidence une régulation paracrine de l’ossification par les chondrocytes durant la croissance. En revanche, à l’âge adulte nous avons montré que FGFR3 régulait de manière autocrine la formation osseuse. L'ensemble des données obtenues permet une meilleure compréhension du rôle de Fgfr3 et de l'impact de ses mutations sur l'ossification endochondrale<br>FGFR3 (Fibroblast growth factor receptor 3) is a tyrosine kinase receptor. FGFR3 gain of function missense mutations lead to a family of chondrodysplasias due to a dysregulation of endochondral ossification. To study the impact of FGFR3 activating mutation on endochondral ossification, we studied several mouse models which expressed the activating Fgfr3 mutation Y367C ubiquitously, in cartilage or in osteoblasts. In the ubiquitous mouse model, we demonstrated that FGFR3 was a positive and negative regulator of chondrocyte proliferation during antenatal and postnatal stage, respectively. Moreover our data suggested that FGFR3 activating mutation led to premature exit of cell cycle of the chondrocytes resulting in their abnormal differentiation. Major defects in the bone formation process was observed in the primary and secondary ossification centers when the activating mutation was present in the cartilage. In three week old mice, we concluded that these bone defects were due to a direct failure of chondrogenesis and that trabecular bone formation was under paracrine regulation by the chondrocytes. In adulthood, FGFR3 regulated bone formation by an autocrine mechanism
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Hammoumi, Saliha. "Etude des facteurs susceptibles de favoriser ou de limiter l'infecton des cellules humaines par le virus de l'encéphalomyocardite." Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077210.
Full textAbstract:
Dans le but d'évaluer le risque de transmission de l'EMCV de l'animal, en particulier le porc, à l'homme, notamment lors de xénotransplantations, nous nous sommes intéressés aux facteurs susceptibles de favoriser ou de limiter cette transmission par l'étude de l'interaction du virus avec des cellules humaines. Des outils permettant la mise en évidence de la multiplication du virus aux différentes étapes de l'infection ont été développés. Notamment, pour le suivi de la synthèse des protéines, un virus recombinant exprimant l'EGFP a été créé. Celui-ci, était pathogène pour la souris, à l'instar du virus parental. L'EGFP a pu être détectée par autofluorescence in vitro dans les cellules infectées et in vivo sur des empreintes de cerveaux de souris. Le pouvoir infectieux de différentes souches virales sur des lignées et des cellules primaires humaines, reflétant le tropisme du virus chez l'animal, a été analysé. Les résultats montrent que l'infection des cellules dépend du type cellulaire et de la souche virale et que l'adsorption varie essentiellement en fonction des souches. Par comparaison des séquences de capside, des acides aminés jouant un rôle probable dans cette adsorption ont été mis en évidence. L'analyse des partenaires cellulaires impliqués dans l'attachement a permis de montrer que l'adsorption de la souche 1086C est dépendante des acides sialiques et que la lysine 231 de VP1 jouerait un rôle important dans cette liaison. Par ailleurs, l'adsorption de la souche B279/95 est indépendante des acides sialiques mais dépend des héparanes sulfates. Ceci suggère l'utilisation probable de co-récepteurs portant des héparanes sulfates ou des acides sialiques<br>In order to evaluate the transmission risk of EMCV, from animal, mainly pig, to human, especially during xenotransplantations, we were interested in factors likely to support or limit this transmission by studying the interaction of EMCV with human cells. Tools allowing the detection of the virus multiplication at the various stages of the infection were developed. In particular, for the follow-up of the proteins synthesis, a recombinant EMCV expressing EGFP was created. The recombinant virus was pathogenic for mouse like the parental virus. EGFP could be detected by autofluorescence in vitro in infected cells and in vivo on prints of mouse brains. The infectious power of various viral strains on human cell lines and primary cells, reflecting the tropism of the virus in animal, was analysed. The results indicated that the infection of the cells depends on the cellular type and the viral strain and that adsorption varies primarily according to the strains. By comparison of the sequences of capsid, amino acids playing a probable part in this adsorption were highlighted. The analysis of the cellular partners implied in the attachment made it possible to show that the adsorption of the strain 1086C is dependent on sialic acid and that lysine 231 of VP1 would play an important part in this connection. In addition, the adsorption of the B279/95 strain is independent of sialic acid but depends on heparanes sulfates. This suggests the probable use of co-receptors carrying heparane sulfates or sialic acids
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Mazzolini, Julie Emilie. "Etude des mécanismes moléculaires de la phagocytose dans les macrophages et de sa perturbation par le VIH-1." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T001.
Full textAbstract:
La phagocytose est un mode d'internalisation de microorganismes et de débris qui conduit à la formation d'une vacuole intracellulaire de taille supérieure à 0,5 microns. Ce mécanisme est initié par l'activation de récepteurs présents à la surface des phagocytes professionnels comme les macrophages et dépend d'une intense polymérisation d'actine et d'une réorganisation de la membrane plasmique faisant intervenir une exocytose à partir de compartiments intracellulaires. Les endosomes de recyclages marqués par AP1, VAMPS et le TNFa, ainsi qu'une sous-population d'endosomes tardifs marqués par VAMP7, participent à cette exocytose. Nous avons étudié les localisations respectives de l'actine polymérisée et des ompartiments vésiculaires, par microscopie à onde évanescente. Nous avons utilisé un système de phagocytose frustrée où la cellule « phagocyte à l'infini » et s'étale sur des ligands des récepteurs phagocytaires, ainsi qu'un nouveau système que nous avons développé pour étudier la fermeture des phagosomes. D'après nos observations, l'actine-F s'accumule en périphérie de la cellule et dans les extrémités des pseudopodes alors que l'actine se dépolymérise au centre et dans la coupe phagocytaire, lieu où le trafic vésiculaire est plus actif. Ce modèle est à compléter pour préciser les acteurs moléculaires impliqués dans les étapes de progression et de fermeture des phagosomes. Le virus de l'immunodéficience humaine de type 1 (VIH-1) infecte les macrophages, ce qui provoque une déficience de phagocytose de ces cellules. Un des facteurs de virulence majeur du VIH-1 est la protéine Nef (Facteur négatif) connue pour perturber l'organisation du cytosquelette d'actine ainsi que le trafic subcellulaire. Nous avons observé que l'infection par le VIH-1 et l'expression de Nef en particulier inhibe la phagocytose par divers récepteurs des macrophages. La protéine Nef altère fortement le recrutement à la coupe phagocytaire des endosomes de recyclage porteurs d'AP1, de VAMPS et du TNFa. À contrario, Nef ne perturbe pas l'accumulation de VAMP7 ni celui de l'actine-F. Pour inhiber la phagocytose Nef requiert son site de myristylation et ses motifs LL, DD et PXXP. Enfin, nous avons constaté que Nef interagit avec AP1 via son motif LL, ce qui conduit sans doute à la perturbation des réorganisations membranaires nécessaires pour une phagocytose efficace, alors que l'actine n'est pas altérée. Mon travail de thèse a permis d'apporter des éléments nouveaux sur les mécanismes cellulaires et moléculaires de la phagocytose et de mieux comprendre les dysfonctionnements observés chez les macrophages de patients infectés par le VIH<br>Phagocytosis is a mechanism of internalization of microorganisms and debris that leads to the formation of an intracellular vacuole larger than 0. 5 microns. This mechanism is initiated by the activation of receptors on the surface of professional phagocytes such as macrophages and depends on an intense actin polymerization and reorganization of the plasma membrane involving exocytosis from intracellular compartments. Recycling endosomes bearing AP1, VAMPS and TNFa, and a subpopulation of late endosomes bearing VAMP7, participate in the exocytosis. We investigated the respective locations of the polymerized actin and vesicular compartments, by evanescent wave microscopy. We used the "frustrated phagocytosis" system where cells try to "phagocyte to infinity" and spread on the ligands of phagocytic receptors, as well as a new system that we developed to study the step of phagosome closure. According to our observations, F-actin accumulates in the cell periphery and in the tips of pseudopodia while actin depolymerizes in the center of the phagocytic cup, where vesicular trafficking is more active. This model is to be completed to clarify the molecular players involved in the different stages of progression and closure of phagosomes. The human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) infects macrophages, which causes a déficience of phagocytosis of thèse cells. One of thé major virulence factors of HIV-1 is thé Nef (négative factor) protein, known to disrupt thé organization of thé actin cytoskeleton and subcellular trafficking. We observed that infection with HIV-1, and expression of Nef in particular, inhibits phagocytosis by différent receptors in macrophages. Nef protein significantly alters thé recruitment at thé phagocytic cup of recycling endosomes bearing AP1, VAMPS and TNFa. In contrast, Nef does not interfère with thé accumulation of VAMP7 nor that of F-actin. To inhibit phagocytosis Nef requires its myristoylation site and thé LL, DD and PXXP motifs. Finally, we found that Nef interacts with thé AP1 motif via thé LL motif, probably leading to thé disruption of membrane reorganization required for efficient phagocytosis, whereas actin is not altered. My thesis work helped bring new éléments on thé cellular and molecular mechanisms of phagocytosis and to better understand thé dysfunctions observed in macrophages of HIV-1-infected patients
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Mastrogiannaki, Maria. "Rôle des facteurs de transcription HIF (Hypoxia Inducible Factors) hépatiques et intestinales dans la régulation de l'homéostasie du fer." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T008.
Full textAbstract:
L’hepcidine est une hormone hépatique qui joue un rôle central dans la régulation de l’homéostasie du fer. Son expression diminue en réponse à la déficience en fer et l’hypoxie, conditions où l’absorption intestinale du fer est augmentée. Les facteurs HIF (Hypoxia Inducible Factors), HIF-1 et HIF-2, sont de facteurs de transcription régulés par le fer et l’hypoxie et sont les régulateurs centraux de l’homéostasie de l’oxygène chez les mammifères. Durant ma thèse, j’ai produit des modèles murins invalidés pour HIF dans le foie ou l’intestin afin d’explorer dans des conditions physiopathologiques le lien entre la signalisation HIF et i) la régulation de l’expression hépatique de l’hepcidine et ii) la régulation de l’absorption intestinale du fer. J’ai montré que, HIF-2 dans le foie n’est pas nécessaire à la répression de l’hépcidine par la déficience en fer ou l’hypoxie. En revanche, j’ai mis en évidence le rôle crucial joué par ce facteur qui, stabilisé en conditions physiopathologiques, peut induire indirectement la repression de l’hepcidine via la production de l’erythropoietine (EPO. Au niveau de l’intestin, j’ai montré que HIF-2, et non HIF-1, contrôle l’absorption intéstinale du fer en régulant l’expression de protéines DMT1 (Divalent Metal Transporter 1) et DCYTB (Duodenal cytochrome b) qui permettent le transport du fer dans les entérocytes. J’ai finalement montré que HIF-2 est impliqué dans la régulation de l’hyperabsorption du fer dans un modèle de souris génétiquement modifiées qui présentent des symptômes d’hémochromatose héréditaire (HH). HH est une maladie génétique caractérisée par un faible taux d’hepcidine et une accumulation excessive de fer dans le foie et d’autres organes. Ainsi, ces résultats suggèrent un rôle prédominant de HIF-2 dans la régulation physiopathologique de l’absorption intestinale du fer et ouvre la perspective de nouveaux traitements thérapeutiques de l’anémie et des maladies reliées à une surcharge en fer<br>Hepcidin, a liver expressed hormone, is the central regulator of iron homeostasis and is decreased in response to hypoxia and iron deficiency. In contrast, intestinal iron absorption is upregulated during these conditions. Hypoxia Inducible Factors, HIF-1 and HIF-2, are ironand hypoxia-regulated transcription factors, and the central regulators of mammalian oxygen homeostasis. During my thesis, I generated intestinal-specific and liver-specific HIF knockout mouse models in order to investigate in physiopathological conditions the links between HIF signaling and i) the regulation of hepatic hepcidin expression, and ii) the regulation of intestinal iron absorption. I demonstrated that HIF-2 is dispensable for the regulation of hepcidin in conditions of iron deficiency or hypoxia. However, I showed that HIF-2, upon stabilized in physiopathological conditions, induces hepcidin repression, indirectly through increased Erythropoietin (EPO) production and the regulation of erythropoiesis. In the intestine, I showed that HIF-2, but not HIF-1, controls iron absorption by regulating the expression of DMT1 (Divalent Metal Transporter-1) and DCYTB (Duodenal cytochrome b) proteins which import iron in the enterocytes. Finally, I demonstrated that HIF-2 is involved in the regulation of iron hyper-absorption in a genetic mouse model of hereditary hemochromatosis (HH). HH is a genetic disorder characterized by abnormally low hepcidin expression and excessive iron accumulation in the liver and parenchyma. These findings suggest a prominent role of HIF-2 in the physiopathological regulation of intestinal iron absorption and may provide new therapeutical perspectives for the treatment of anemias and iron overload-associated disorders
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David, Benjamin. "Contribution rabbinique à la réflexion éthique : transmission des maladies génétiques et Eugénisme." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05T029.
Full textAbstract:
L'objet de la thèse est d'analyser la contribution rabbinique à la réflexion éthique vis-à-vis des solutions proposées par la médecine quant à la transmission de maladies génétiques. Après avoir démontré que les sages de l'époque talmudique connaissaient les risques de transmission des maladies génétiques, nous présentons des cas cliniques de couples. Chacun de ces cas soulève une problématique médicale et éthique que nous analyserons. Le sujet principal est le diagnostique préimplantatoire (DPI) qui permet d'éviter la naissance d'un enfant malade. Dans quels cas cliniques cette technique est éthiquement acceptable et dans quels cas est-elle considérée comme de l'eugénisme? Un couple qui risque de transmettre une maladie génétique à ses enfants a t-il l'obligation d'en avoir ? Est-il obligé de faire un DPI ? Quant à l'eugénisme, nous démontrerons que c'est une notion totalement étrangère au judaïsme et que ses pratiques sont contraires aux lois juives<br>The objective of this thesis is the analysis of Jewish ethic's perspective regarding the medical solutions of the transmission of genetic diseases. After we have proved that the Talmudic scholars recognized the dangers of transmitting genetic diseases we will present clinical cases. Each one presents a medical and ethical problem that we will analyse. The principal subject is preimplantation genetic diagnosis (PGD) that allows the prevention of bearing a sick child. In which clinical cases is this procedure ethically acceptable and in which is it considered eugenics? Are a couple who are at risk to have a child with a genetic disease obliged to bear children? Are they obliged to undergo PGD? Regarding eugenics we will prove that this notion is entirely antithetical to Judaism and the practice of eugenics stands in direct contradiction to Jewish law
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Nicolino, Marc. "Glycogénose Type II (Maladie de Pompe) : approche d'une thérapie génique et caractérisation des anomalies moléculaires." Paris 5, 1999. http://www.theses.fr/1999PA05CD17.
Full text
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Piguet, Françoise. "Brain gene therapy for metachromatic leukodystrophy : towards clinical trial." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T010.
Full textAbstract:
La leucodystrophie métachromatique (LDM) est une maladie de surcharge lysosomale causée par la déficience de l’arylsulfatase A (ARSA), enzyme lysosomale impliquée dans la dégradation des sulfatides. Ce déficit enzymatique conduit à l’accumulation de sulfatides dans le système nerveux central et périphérique, entrainant une démyélinisation sévère et une dégénérescence neuronale. La forme infantile tardive est la forme la plus fréquente et la plus sévère de la pathologie, avec une évolution rapide et un décès des patients avant l’âge de 5 ans. Aucun traitement n’est actuellement disponible mais diverses stratégies thérapeutiques sont en cours d’évaluation. Du fait de la rapidité du processus neurodégénératif et de l’imperméabilité de la barrière hémato-encéphalique à l’ARSA, l’injection intracérébrale d’un vecteur viral codant l’ARSA semble l’approche thérapeutique la plus appropriée. L’injection intracérébrale d’un vecteur adeno-associé (AAV) de sérotype 5 codant l’ARSA a prouvé son efficacité pour la correction du phénotype dans le modèle murin de la pathologie. Cependant, avant d’envisager une application clinique, l’évaluation de l’efficacité et surtout de la tolérance de notre approche devait être réalisée dans un cerveau de plus grand volume. Chez le primate non-humain, nous avons démontré qu’un nombre limité d’injections intracérébrales du vecteur AAV5/ARSA entrainait une large diffusion du vecteur (37 à 46% de l’hémisphère injecté) et de l’ARSA recombinante (jusqu’à 33mm), ainsi qu’une augmentation significative de l’activité ARSA dans 50-65% de l’hémisphère injecté, sans aucun signe de toxicité. L’un des challenge majeur de la thérapie génique intracérébrale pour les maladies lysosomales est la mise en place d’une thérapie capable de traiter l’ensemble du cerveau, c'est-à-dire permettrait une large diffusion du gène et / ou de la protéine mais surtout le ciblage des cellules impliquées dans la pathologie. Le vecteur AAVrh. 10 a été démontré récemment comme permettant une meilleure diffusion de la protéine thérapeutique dans le cerveau de rongeurs après injection intracérébrale. Par conséquent nous avons décidé d’évaluer l’intérêt de ce sérotype dans notre modèle de la pathologie. L’injection de vecteur AAVrh. 10/ARSA dans le cerveau de souris LDM symptomatiques a permis une correction plus rapide (2 mois) et plus complète de la surcharge en sulfatides et des lésions histologiques en comparaison avec l’AAV5/ARSA. De plus, nous avons démontré la présence de l’enzyme thérapeutique dans les oligodendrocytes (la cellule cible de la LDM), et la quantité de C24:0-sulfatide, un isoforme de sulfatides présent exclusivement dans les oligodendrocytes, était complètement corrigée, ce qui constitue un résultat d’importance majeure d’un point de vue thérapeutique. L’utilisation d’un vecteur AAVrh. 10/GFP, nous a de plus permis de caractériser plus précisément le transport axonal et le tropisme cellulaire de l’AAVrh. 10, en démontrant notamment l’existence d’un transport rétrograde. Devant ces résultats encourageants, une étude d’efficacité et de tolérance a été réalisée chez le primate. Quatre primates ont été injecté uni ou bilatéralement avec le vecteur AAVrh. 10/ARSA de grade clinique (1. 1. 1011GC/hemisphere), dans des régions de la substance blanche déterminée au moyen d’une IRM. Dans un but clinique, la procédure chirurgicale a été optimisée afin de permettre l’injection simultanée des 12 sites, réduisant ainsi le temps de chirurgie. La tolérance de la procédure a été évalué par des tests neurologiques séquentiels et des IRM cérébrales. Les animaux ont été analysés 3 mois post injection. Nous avons démontré une diffusion importante du vecteur (jusqu’à 90% de l’hémisphère injecté) et une augmentation de l’activité ARSA allant jusqu’à 31% dans l’ensemble de l’hémisphère injecté. Comparé à nos précédents résultats avec l’AAV5, l’utilisation d’une dose 20 fois plus faible de vecteur conduit à une diffusion similaire dans l’hémisphère injecté, une quantité plus importante de vecteur dans l’hémisphère non-injecté et surtout une augmentation plus importante de l’activité ARSA. Une étude de toxicologie chez le primate est actuellement en cours avant de débuter un essai clinique de phase I/II pour des patients atteints de formes rapidement évolutives de LDM<br>Metachromatic leukodystrophy (MLD) is a lethal lysosomal storage disorder of the CNS and PNS due to a deficiency in arylsulfatase A (ARSA) enzyme that results in sulfatide accumulation, demyelination and neuronal degeneration. The late infantile form of MLD is the most frequent and severe form of the disease, death of patients occuring before the age of 5 years. No treatments are currently available for MLD, even if new therapeutic approaches are under evaluation. Given the rapid course of neurodegeneration and the impermeability of the blood brain barrier to the ARSA enzyme, direct brain delivery of ARSA through gene therapy vector seems to be the most suitable therapeutic approach. Intracerebral delivery of Adeno-Associated viral vector of serotype 5 (AAV5) encoding human ARSA was shown to efficiently correct the phenotype of the MLD mouse model. However, before moving towards clinical trial, efficiency and tolerance of the procedure needed to be evaluated in a larger size brain. In normal non-human primates, we demonstrated that a limited number of intracerebral injections of AAV5/ARSA vector led to a widespread diffusion of the vector (37-46% of the injected hemisphere) and ARSA enzyme (up to 33 mm), as well as a significant increase in ARSA activity in 50-65% of the injected hemisphere, without any signs of toxicity. One of the main challenges for brain gene therapy in LSDs is to provide a therapy allowing the treatment of the entire brain, which requires widespread delivery of the normal gene and/or protein, but also the targeting of the right type of cells. AAVrh. 10 vector was recently shown to give a better diffusion of therapeutic proteins in the rodent brain after intracerebral administration. For this reason, we decided to evaluate this serotype in our therapeutic strategy. In symptomatic MLD mice, AAVrh10/ARSA vector injection resulted in a more rapid and complete correction of sulfatide storage and brain neuropathology 2 months after intracerebral injections in comparison with AAV5/ARSA vector. Importantly, ARSA enzyme was detected in oligodendrocytes, the targeted cell in MLD, and the levels of oligodendrocyte-specific sulfatide isoforms (C24:0-sulfatide) were completely corrected, a result of major importance for therapeutic intervention. Using an AAVrh. 10/GFP vector, we also characterized more precisely the axonal transport and cell tropism of AAVrh. 10 vector and demonstrated the existence of retrograde transport of the vector. Given these encouraging results, safety and efficiency study was performed in non-human primates. GLP-grade AAVrh. 10/ARSA vector was injected in one or both hemispheres (1. 1. 1011 VG/hemisphere) in white matter areas selected using brain MRI. In a clinical perspective, surgical device was optimized to allow simultaneous infusion of 12 deposits, thus reducing time of surgical procedure. Tolerance of the procedure was assessed by sequential neurobehavioral tests and brain MRI. Animals were analyzed 3 months post-injection. We documented diffusion of the vector in up to 90% and increased activity of ARSA enzyme up to 31% in the injected hemisphere. As compared to our previous results with AAV5/ARSA, the use of a 20-fold lower dose of AAVrh. 10 vector led to increased amounts of vector in the non-injected hemisphere and increased level of ARSA activity in the injected hemisphere. Toxicological evaluation is currently ongoing in NHP, prior to a phase I/II clinical trial for rapidly evolutive forms of MLD
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Haase, Georg. "Thérapie génique de maladies dégénératives des motoneurones et transfert de gènes dans le nerf lésé." Paris 5, 1999. http://www.theses.fr/1999PA05CD05.
Full textAbstract:
Les maladies dégénératives des motoneurones de l'homme, les amyotrophies spinales infantiles et la sclérose latérale amyotrophique (SLA), ont en commun une perte progressive de motoneurones spinaux conduisant à une atrophie et paralysie musculaires. Les facteurs neurotrophiques ont été considérés comme molécules candidatez pour le traitement de ces maladies mais leur administration a été compliquée par la biodisponibilité limitée ou la toxicité des protéines recombinantes. Nous avons développé le transfert adénoviral de gènes de facteurs neurotrophiques afin de produire ces protéines in vivo à des taux constants et/ou de mieux cibler leur action vers les motoneurones. Des vecteurs adénoviraux codant pour NT-3 (neurotrophine-3), BDNF (brain-derived neurotrophic factor) et CNTF (ciliary neurotrophic factor) ont été mis au point et leur fonctionnalité a été démontrée ex-vivo. Leur potentiel thérapeutique a été testé dans le modèle pmn (progressive motor neuronopathy). Les souris pmn non-traitées développent une atrophie et parésie musculaire progressives et meurent prématurément. La survie moyenne des souris pmn injectées en intramusculaire avec le vecteur NT-3 était augmentée de plus de 50%. Nos analyses histologiques et électrophysiologiques chez ces souris ont démontré une amélioration des fonctions neuromusculaires, une réduction de la dégénérescence axonale ainsi qu'une réinnervation des fibres musculaires par induction de la repousse axonale. L'étude de la biodistribution des ARNs et de la protéine NT-3 a révélé que ces effets étainet dûs à la libération de NT-3 dans la circulation générale. La coadministration des vecteurs NT-3 et CNTF a amélioré l'ensemble des paramètres thérapeutiques tandis que l'injection du vecteur BDNF restait sans effet bénéfique. En comparant les effets d'injections intramusculaires, intraveineuses et intracérébroventriculaires du vecteur CNTF, nous avons déterminé la meilleure voie d'administration pour cette cytokine. Nos résultats représentent le premier exemple d'une amélioration de la survie dans une affection neurodégénérative par thérapie génique avec adénovirus et ouvrent de nouvelles perspectives thérapeutiques dans la SLA. L'utilisation de facteurs neurotrophiques a été suggéré pour accélérer ou guider la repousse axonale après lesion nerveuse. Nous avons évalué la capacité des cellules de Schwann du rat à exprimer le transgène lacZ après injection intranerveuse de différents vecteurs de transfert de gène. Jusqu'à 18% des cellules de Schwann des nerfs lésés étaient infectés par un vecteur adénoviral mais l'expression de lacZ diminuait progressivement au cours du temps. Une immunosupression par Cyclosporine A ou l'induction d'une tolérance immunitaire ont permis de réduire la réponse inflammatoire et d'augmenter l'expression du transgène. Le transfert de gène dans le nerf périphérique représente une stratégie originale pour administrer des facteurs neurotrophiques dans le compartiment clos de la périnèvre et pourrait à l'avenir constituer un complément au traitement chirurgical des lésions nerveuses.
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Delva, Laurent. "Rôle de la CRABPII dans la résistance secondaire de la leucémie aiguë promyélocytaire traitée par l'acide rétinoïque : Implication de la CRABPII dans son métabolisme et dans la transcription de gènes sensibles à son action." Paris 5, 1995. http://www.theses.fr/1995PA05CD02.
Full textAbstract:
Ces dernières années, des progrès significatifs ont été effectués sur la structure, le métabolisme et le mécanisme d'action de la vitamine A et de ses dérivés métaboliques, tel que l'acide rétinoïque. Nous avons démontré d'induction d'une protéine spécifique de l'acide rétinoïque, la CRABPII (Cellular Retinoic Acid Binding Protein II), dans les cellules hématopoïétiques de patients atteint d'une leucémie aiguë promyélocytaire (LAM3) et traités par l'acide rétinoïque tout-trans (ATRA). La CRABPII fut tout d'abord caractérisée dans les cellules d'une ligue promyélocytaire (NB4). De plus, nous avons montré que les cellules leucémiques de patients en rechute après un traitement par l'ATRA fut observée. Nous avons pu suggérer que, chez les patients LAM3 en rechute yant des taux elevés de protéines impliquées dans la métabolisation de l'AR, l'impossibilité d'obtenir une concentration intranucléaire efficace d'AR puisse être un premier marqueur témoin de la résistance et de la rechute. Nous avons donc estimé nécessaire d'approfondir le rôle de la CRABPII dans le métabolisme de l'acide rétinoïque. Nous avons mis en evidence une fonction transactivatrice de la CRABPII dans les cellules hématopoïétiques myéloïdes sensibles à l'action de l'acide rétinoïque. C'est la première fois que la CRABPII est découverte impliquée dans un complexe protéïque nucléaire. La fonction transactivatrice de la CRABPII ne semble pas spécifique d'un système cellulaire particulier et est liée à la présence d'acide rétinoïque. Nous avons également montré une localisation nucléaire de la CRABPII de façon endogène dans des cellules myéloïdes et après transfection dans les cellules COS. En outre, nous avons établi un rôle éminent de la CRABPII dans la granulopoïèse normale. Cette observation permet d'associer la CRABPII avec la RARα dans l'engagement granulocytaire de la cellule souche hématopoïétique. Nos recherches nous ont permis de découvrir un rôle spécifique de marqueur de résistance pour la CRABPII dans le traitement de la LAM3 par l'ATRA. De plus, une nouvelle fonction de la CRABPII au sein du mécanisme d'action des rétinoïdes fut établie.
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Lemarchand, Patricia. "Thérapie génique des maladies respiratoires : Transfert de gènes par voie vasculaire à l'aide de vecteurs adénoviraux." Paris 5, 1995. http://www.theses.fr/1995PA05CD01.
Full textAbstract:
L'endothélium vasculaire représente une cible privilégiée pour la thérapie génique, par ses capacités de sécrétion de protéines directement dans la circulation sanguine. Nous avons étudié l'efficacité , les spécificités, et les limites potentielles du transfert de gènes par vecteur adénoviral dans l'endothélium vasculaire. La première approche a consisté à évaluer le transfert du gène ß-galactosidase (ßgal) et de l'ADNc de α1-antitrypsine humaine in vitro dans des cellules endothéliales humaines, puis in vivo dans des segments d'artère carotide et de veine jugulaire de moutons. Les vecteurs adénoviraux sont efficaces pour le transfert de gènes dans les cellules endothéliales en culture, et in vivo dans l'endothélium vasculaire ; l'expression génique est limitée à l'endothélium, et le transitoire, disparaissant en quelques semaines. La seconde approche a évalué le transfert de gènes par voie vasculaire destiné au traitement de maladies respiratoires. Chez le mouton, le transfert et l'expression du gène ßgal ont été obtenus dans l'endothélium des circulations pulmonaire et bronchique, et dans les cellules épithéliales au voisinage des vaisseaux exprimant la ßgal. A partir de ces résultats, nous avons élargi le champ d'application des vecteurs adénoviraux à la pathologie cardiovasculaire. Le transfert du gène ßgal par vecteur adénoviral, est efficace dans la néointima artérielle (modèle de resténose après angioplastie), et dans les fibres musculaires cardiaques (modèle du rat) ; l'expression y est également transitoire. La dernière approche a porté sur une application potentielle du transfert de gènes par voie vasculaire avec les vecteurs adénoviraux : la protection contre le stress oxydant. La construction d'un vecteur adénoviral contenant de l'ADNc de la catalase humaine, nous a permis d'augmenter la protection conférée à des cellules en culture par le transfert du gène de la catalase, contre le stress oxydant. En conclusion, les vecteurs adénoviraux représentent un moyen efficace encore limité de transfert de gènes dans les vaisseaux, dont les applications potentielles sont multiples.
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Gillion-Boyer, Olivia. "Rôles de PLCE1 et INF2 dans la physiopathologie des podocytopathies héréditaires." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T044.
Full textAbstract:
Au cours des dernières années, l’étude des formes héréditaires de podocytopathies a permis d’identifier de nombreux gènes codant des protéines podocytaires, et de préciser la structure et le fonctionnement de la barrière de filtration glomérulaire. Par une analyse mutationnelle conduite sur une cohorte de 139 patients avec un syndrome néphrotique, nous avons identifié 9 nouvelles mutations du gène PLCE1. De façon inattendue dans une maladie autosomique récessive, nous avons observé une pénétrance incomplète dans 3 familles suggérant une oligogénie ou le rôle de gènes modificateurs et/ou de facteurs environnementaux, bien que le criblage de 19 gènes candidats n’ait pas permis d’identifier de variant causal. Par ailleurs, nous avons confirmé le rôle prépondérant du gène INF2 dans les podocytopathies autosomiques dominantes. Nous avons montré que la majorité des mutations se situe dans le domaine N-terminal de la protéine qui joue un rôle dans son autoinhibition en se liant à son domaine C-terminal, mais qui interagit également avec IQGAP1, autre protéine du podocyte et du cytosquelette. Enfin, du fait de l’interaction connue entre INF2, MAL et Cdc42, actrices essentielles de la myélinisation périphérique, nous avons émis l’hypothèse qu’INF2 pourrait être impliqué dans l’association particulière d’une podocytopathie avec la neuropathie de Charcot-Marie-Tooth. Nous avons criblé 16 familles et effectivement identifié une mutation chez 75% d’entre elles. Nous avons montré l’expression d’INF2 et de MAL dans le nerf périphérique, ainsi que leur colocalisation et interaction dans les cellules de Schwann, et observé une altération de l’interaction des mutants d’INF2 avec Cdc42<br>During the last decade, the identification of several podocyte genes in hereditary forms of podocytopathies has allowed to refine the glomerular filtration barrier structure and function. We conducted a mutational analysis on a worldwide cohort of 139 patients with nephrotic syndrome and identified 9 novel mutations of the PLCE1 gene encoding the phospholipase Cε1. Surprisingly in an autosomal recessive disease, we observed an incomplete penetrance in 3 pedigrees suggestive of oligogenic inheritance or genetic and/or environnemental modifiers, although the screening of 19 candidate genes failed to identify a causative variant. We confirmed the major role of INF2 encoding a diaphanous-related formin in autosomal dominant podocytopathies. We showed that most INF2 mutations are located in the N-terminal domain of the protein which is involved in its autoinhibition through the binding to its C-terminus, and also interacts with another podocyte and cytoskeletal component IQGAP1. Since INF2 interacts with MAL (Myelin And Lymphocyte protein) and the Rho GTPase Cdc42, essential players of the peripheral myelination process, we hypothesized that INF2 mutations could be involved in the intriguing association of a podocytopathy with the Charcot Marie Tooth peripheral neuropathy. We screened a cohort of 16 families with this neurorenal phenotype and identified mutations in 75% of them. We showed that INF2 is expressed in Schwann cells, where it colocalizes and interacts with MAL, and that mutations in INF2 alter INF2 interaction with Cdc42. This suggests that INF2 mutations could disturb the INF2-MAL-Cdc42 pathway and its role in myelin formation and maintenance
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Brisset, Sophie. "Apport de l'hybridation génomique comparative (CGH) sur puce en cytogénétique constitutionnelle : applications à l'étude de remaniements télomériques et à l'analyse chromosomique d'une cellule unique." Paris 5, 2006. http://www.theses.fr/2006PA05N03S.
Full textAbstract:
L'hybridation génomique comparative (CGH) sur chromosomes et sur puce à ADN (CGH microrray) permettent une analyse globale des déséquilibres chromosomiques du génome. La première partie de ce travail a concerné l'étude de remaniements télomériques par CGH sur puce. Nous avons analysé par les deux techniques de CGH des fœtus à nuque épaissie. La CGH sur puce nous a permis de caractériser précisément un remaniement chromosomique déséquilibré diagnostiqué chez un fœtus à nuque épaissie. La deuxième partie a concerné l'analyse CGH sur une cellule unique. Une première étape a été la mise au point d'une méthode d'amplification de l'ADN de lymphocytes isolés, normaux et trisomiques 21, par DOP-PCR. La CGH sur puce a donné un profil corrélant avec l'anomalie chromosomique attendue. Ainsi, l'analyse chromosomique d'une cellule unique ou d'un petit groupe cellulaire apparaît prometteuse, pouvant être appliquée dans différents domaines tels que le diagnostic prénatal ou la cancérologie<br>Comparative genomic hybridisation (CGH) on metaphase spreads and microarray CGH are genome-wide analyses of DNA copy number imbalances. First of all, we studied telomeric rearrangements by microarray CGH. Fetuses with increased nuchal translucency have been analysed with conventional and microarray CGH. Precise characterisation of a de novo unbalanced chromosomal abnormality has been achieved using microarray CGH. Secondly, we performed CGH analysis of a single cell. A reliable DOP-PCR protocol have been developed to amplify single lymphocytes DNA. Trisomy 21 has been detected on a single lymphocyte by microarray CGH. Chromosomal analysis of a single cell or few cells is promising and should be applied in prenatal diagnosis or cancer
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Beraud, Mélanie. "Le locus yciGFE(katN) du régulon sigma S : régulation différentielle chez E.coli et Salmonella par H-NS et le régulateur YncC." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077107.
Full textAbstract:
En phase stationnaire de croissance ou en réponse à certains stress, les Enterobactéries s'adaptent, notamment par la mise en place du régulon sigma S. La sous unité as (codé par le gène rpoS) de l'ARM polymérase est un facteur a dont l'expression et l'activité sont extrêmement régulées et qui joue un rôle majeur dans la résistance généralisée au stress, la formation de biofilms et la virulence de Salmonella enterica sérovar Typhimurium. Nous avons utilisé la technologie ProteinChip SELDI-TOF afin de caractériser le protéome de mutants de Salmonella, en particulier un mutant du gène yncC. Ce gène, de fonction inconnue, fait partie du régulon sigma S et code un régulateur potentiel de la famille GntR/FadR. Nous avons ainsi pu identifier des cibles potentielles de YncC, que nous avons validées par des études in vivo et in vitro. Ces cibles sont organisées en operon, yclGFEkatN, qui appartient au régulon sigma S et code pour une catalase et des protéines de fonctions inconnues. Cet operon est réprimé par H-NS, une protéine du nucléoïde connue pour éteindre l'expression de nombreux gènes, en particulier ceux acquis par transfert horizontaux. L'opéron est en partie présent chez Escherichia coli K-12 où il est également régulé par sigma S , YncC et H-NS. Cependant, les mécanismes de régulation de son expression dans les 2 espèces sont différents. L'acquisition de cet operon résulte très probablement d'un transfert horizontal mais cet événement semble plus récent dans le cas de E. Coli K-12 que dans le cas de Salmonella. L'acquisition ancestrale des gènes yclGFEkatN chez Salmonella a probablement permis d'intégrer cet operon, et de moduler la régulation de son expression, au sein du régulon sigma S<br>The a regulon is set up to allow Enterobacteria to adapt to stationary phase of growth or in response to some stresses. The RNA polymerase subunit sigma S (encoded by rpoS) is a a factor whose expression and activity are tightly regulated and it plays a major role in general stress resistance, biofilm formation and virulence of Salmonella enterica serovar Typhimurium. Our study deals with the functional characterization of the as regulon. We used the ProteinChip SELDI- TOF technology in order to characterize the proteome of Salmonella mutants, including the yncC mutant. The sigma S- dependent gene yncC is of unkown function and encodes a putative regulatory protein that belongs to the GntR/FadR family of transcriptional regulators. Potential targets for YncC regulation were identified and subsequently validated by in vivo and in vitro experiments. These belong to the sigma S-dependent operon yclGFEkatN, which encodes a catalase and proteins of unknown function. The yclGFEkatN operon is repressed by H-NS, an histone-like protein known to repress the expression of numerous genes, especially horizontally acquired genes. The operon is partially present in Escherichia coli K-12 where it is also regulated by sigma S, YncC and H-NS. However, levels of expression and mechanisms of regulation the operon are different in the two species. This operon has probably been acquired by horizontal gene transfer in both species, but more recently in E. Coli K-12 than in Salmonella. Presumably, the ancestral acquisition of the yciGFEkatN genes in Salmonella has allowed integration of this operon, and tight regulation of its expression, within the sigma S regulatory network
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Collod, Gwenaëlle. "Hétérogénéité du syndrome de Marfan." Paris 5, 1996. http://www.theses.fr/1996PA05CD01.
Full textAbstract:
Le syndrome de Marfan (MFS) est une maladie autosomique dominante du tissu conjonctif, caractérisée par des anomalies touchant essentiellement trois systèmes : squelettique, oculaire et cardio-vasculaire. Jusqu'à ce jour, seules des mutations dans le gène de la fibrilline (FBN1), localisé sur le chromosome 15 ,et, composant majeur du réseau microfibrillaire, étaient reconnues comme responsables de ce syndrome. Nous avons étudié une famille de plus de 200 individus présentant une forme incomplète du syndrome de Marfan puisqu'aucune anomalie du système oculaire n'a été observée. L'implication de la fibrilline dans l'apparition de la maladie a été exclue par des études de liaison démontrant l'existence d'un deuxième locus (MFS2) et donc d'une hétérogénéité génétique dans ce syndrome. Des études de liaison, réalisées à l'aide de marqueurs microsatellites anonymes régulièrement répartis sur l'ensemble du génome, nous ont permis de localiser le gène MFS2 sur le bras court du chromosome 3. Deux recombinaisons critiques placent actuellement le gène MFS2 dans un intervalle de moins de 6cM entre les marqueurs D3S1293 et D3S1567, localisés en 3p24. 2-p25. Dans cette région du bras court du chromosome 3, a été localisé le gène codant pour la fibuline de type 2 (FBLN2). Cette protéine de la matrice extra-cellulaire récemment identifiée représentait un excellent candidat tant sur le plan positionnel que sur le plan fonctionnel. Pour évaluer l'identité possible entre MFS2 et FBLN2, nous avons combiné 3 approches : protéique, moléculaire et génétique. L'analyse protéique n'a révélé aucune anomalie et l'analyse moléculaire a permis d'identifier 2 marqueurs polymorphes. Par approche gène candidat, trois recombinants ont été identifiés démontrant ainsi que FBLN2 n'était pas le gène MFS2. D'autre part, bien que l'hétérogénéité génétique du syndrome ait été confirmée par la découverte d'une seconde famille Finlandaise, recombinant avec les marqueurs du gène FBN1, aucune évaluation de l'étendue de cette hétérogénéité n'a encore été réalisée. Pour évaluer la contribution des mutations du locus MFS2 au syndrome de Marfan, nous avons établi une étude collaborative internationale. Son objectif est de réunir un nombre suffisamment important de familles pour évaluer le pourcentage de familles liées soit au locus FBN1 soit au locus MFS2. Les résultats de l'analyse correspondant à l'étude de 11 premières familles évaluent le nombre a de familles liées à FBN1 à 65%, le nombre ß de familles liées au locus MFS2 à 20%, et le nombre ? de familles qui ne sont liées ni à FBN1 et ni au locus MFS2 à 15%. Enfin, les travaux de recherche de ces dernières années ont montré que des anomalies moléculaires dans le gène codant pour la fibrilline localisé en 15q15-q21 (gène FBN1) sont associées tant aux formes classiques, variantes et néonatales du syndrome de Marfan qu'à un ensemble de pathologies ne représentant qu'une partie seulement des symptômes du MFS. Bien que de nombreuses mutations aient déjà été identifiées, il n'a pas encore été possible d'établir des corrélations génotype/phénotype. Dans le cadre d'une collaboration internationale dont l'objectif est la caractérisation d'un très grand nombre de défauts moléculaires de ce gène, nous avons entrepris une recherche de mutations chez une quarantaine de cas index présentant soit une forme classique, soit une forme incomplète de MFS. L'analyse des 5 premiers exons a permis de mettre en évidence des profils anormaux pour trois individus. Afin d'analyser l'ensemble des altérations délétères identifiées, nous avons constitué une base de données Marfan (regroupement de toutes les mutations publiées ainsi que du phénotype clinique associé à la mutation) et élaboré un programme informatique afin d'établir des corrélations génotype/phénotype.
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Galasso-Fauque, Patricia. "Assistance médicale à la procréation : conséquences épigénétiques et transcriptionnelles dans le modèle murin." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T003.
Full textAbstract:
Chaque année les entants obtenus après Assistance Médicale à la Procréation (AMP) représentent une part importante des naissances (environ 2,4% en France). Dès l'introduction des techniques d'AMP, des études ont été menées pour évaluer leur impact sur la santé des enfants. La notion de risque épigénétique a été évoquée et un lien avec les pathologies associées à des anomalies de l'empreinte parentale comme le syndrome de Beckwith-Wiedemann, a été suggéré. De plus, les différentes étapes du cycle de l'empreinte parentale accompagnent toutes les phases de la reproduction. L'objectif de la thèse développé dans le modèle murin était d'évaluer l'impact de chacune des étapes nécessaires au déroulement d'une AMP (stimulation hormonale, fécondation in vitro et culture embryonnaire) sur les marques épigénétiques telles que la méthylation de l'ADN et sur les modifications d'expression des gènes. Notre travail expérimental a porté dans un premier temps sur la période préimplantatoire en utilisant le gène H19 comme biomarqueur. Nous avons montré d'importantes altérations des profils de méthylation des régions régulatrices de ce gène dans les embryons issus d'une fécondation in vitro. Le travail a ensuite été étendu à la période post-implantatoire, en étudiant l'ensemble du locus H19-Igf2 sur les embryons et les placentas et en analysant le transcriptome placentaire. Nos résultats montrent l'induction de dérégulations du locus H19-Ig/2 ainsi que d'un panel d'autres gènes soumis à empreinte. De plus en réponse aux manipulations in vitro des embryons le transcriptome placentaire présente des modifications qui semblent contribuer au maintien d'un développement normal de l'embryon. Ces données apportent des éléments nouveaux dans la connaissance des mécanismes impliqués et des conséquences inhérentes aux modifications de l'empreinte et des régulations transcriptionnelles mises enjeu dans les manipulations liées à l'AMP<br>Children born from assisted reproductive technologies (ART) account for a large proportion of all births (around 2. 4% in France). Since the introduction of assisted reproductive technologies (ART), many studies have been conducted in order to evaluate their impact upon the children's health born in such a way. The epigenetic risk notion was invoked and a link between ART and diseases associated with imprinting alterations such as Beckwith-Wiedemann syndrome (BWS) was suggested. The epigenetic « life cycle » of imprinting concerns all phases of fertilization. The aim of this work was to investigate the consequences of each manipulation associated to ART practices such as superovulation, in vitro fertilization and embryo culture, on DNA methylation/gene expression patterns in mice. Firstly, we were able to show that in vitro fertilization and embryo culture result in methylation defects of the control regions surrounding the H19 gene, considered as a relevant biomarker at the blastocyst stage. Given these results, our work was extended to the post-implantation period analysing the imprinted H19-Igf2 locus in embryos and placentas and the transcriptomic data in placental tissues. Altered expressions of a set of imprinted genes including H19 and Ig/2 genes in post-implantation embryos and placentas were found. Moreover, expression modulations found in the placental transcriptomic analysis induced by the ART, could be crucial for obtaining a fairly normal embryonic development. These data have improved the knowledge on the processes and consequences involved in the modifications of genomic imprinting and transcriptional regulations, induced by ART manipulations