Dissertations / Theses: 'Développement embryonnaire de la drosophile'

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Roumengous, Solange. "Reprogrammation cellulaire et morphogenèse épithéliale pendant le développement embryonnaire chez la drosophile." Thesis, Nice, 2015. http://www.theses.fr/2015NICE4113.

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Abstract:

Les changements de forme et les mouvements des cellules constituant les tissus relèvent de la morphogenèse épithéliale. Dans les tissus segmentés les compartiments antérieurs et postérieurs représentent des domaines morphogénétiques indépendants constitués de lignées cellulaires distinctes et séparées par des barrières biophysiques. Le laboratoire a montré que lors de la fermeture dorsale de l’embryon de drosophile, certaines cellules des segments centraux de l’ectoderme, appelées « Cellules Mixer » (CMs), sont reprogrammées pour traverser la frontière segmentale dans un phénomène qui prend le nom de « mixing ». La reprogrammation des CMs est JNK dépendante induisant l’expression de novo du gène engrailed (en). La mise au point de nouveaux outils génétiques a permis de révéler le rôle de deux familles de gènes impliqués dans les mécanismes de reprogrammation et de mixing : le gène Polycomb (Pc) et les gènes Hox. La technique de DNA-FISH, qui analyse l’interaction entre Pc et le PRE d’en, a ainsi montré que la voie JNK induit l’expression de novo d’en par dé-répression de l’activité Pc dans les CMs. De manière intéressante l’analyse approfondie des mutants Pc a dévoilé que les gènes Hox abdominal-A (abdA) et Abdominal-B (AbdB) contrôlent le domaine du mixing. Des expériences de gain et perte de fonction ont par la suite confirmé le rôle positif d’abdA et le rôle négatif d’AbdB dans le mixing. En conclusion, l’ensemble des résultats obtenus ont permis de dévoiler la présence d’un réseau génétique composé de par JNK, en, Pc et les gènes Hox contrôlant les mécanismes de reprogrammation cellulaire et de remodelage des frontières segmentales au cours du développement normal
Tissue morphogenesis relies on patterned cell shape changes and movements taking place in specific morphogenetic domains. In segmented tissues, anterior and posterior compartments represent independent morphogenetic domains which are made of distinct lineages separated by boundaries. We previously reported on a rare event leading to the exchange of specific ‘Mixer Cells’ (MCs) between compartments of the ectoderm. During dorsal closure, MCs, which are of anterior origin, cross the boundary to integrate the adjacent posterior compartment through de novo expression of the posterior determinant Engrailed (En). This reprograming process is dependent on JNK signalling and is restricted to the central abdominal region. Here, we show that JNK signalling represses Polycomb (Pc) expression and that loss of Pc leads to an absence of MCs reprogramming. FISH-DNA coupled to immunostaining further shows that MCs fate transition is accompanied by a release of the en promoter from the repressing Pc bodies. Interestingly, our genetic data reveal that spatial control of MCs reprograming depends on the activity of the Hox genes abdominal-A (abdA) and Abdominal-B (AbdB). In their respective domains, abd-A promotes mixing while abd-B behaves as a strong repressor, thus restricting cell mixing to the central abdominal region. Together, these results provide new insights into the mechanisms of developmental reprogramming, showing that segment boundary plasticity relies on regional control of cell remodelling involving a gene regulatory network composed of JNK, en, Pc, and Hox activities

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Supatto, Willy. "Imagerie multiphoton quantitative et ablation laser par impulsions femtosecondes pour l'étude de l'expression génétique mécano-sensible chez l'embryon de drosophile sauvage." Paris 7, 2005. http://www.theses.fr/2005PA077210.

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Abstract:

Le développement d'un embryon met en jeu une chorégraphie complexe de mouvements cellulaires régulés très précisément dans l'espace et dans le temps. Ces mouvements morphogénétiques sont contrôlés par une cascade d'expressions génétiques. Dans ce processus de régulation, nous nous intéressons à i'existence potentielle d'une boucle de rétroaction mécanique. En particulier, au cours de la gastrulation de l'embryon de drosophile, l'expression de twist, un gène du développement essentiel à la morphogénèse, a été identifiée comme mécano-sensible. Afin d'étudier ce phénomène, nous avons développé des approches permettant de visualiser, de quantifier et de moduler les mouvements morphogénétiques in vivo. Nous montrons tout d'abord que les techniques de microscopîe non linéaire, telles que la microscopie de fluorescence excitée à deux photons (2PEF) et ia microscopie de génération de troisième harmonique (THG) permettent de visualiser ie développement de l'embryon en 3D. Les d'images sont analysées en adaptant la vélocimétrie par image de particules (P!V) afin de quantifier précisément les mouvements et les déformations cellulaires. De plus, une nouvelle technique de dissection laser à l'aide d'impulsions femtosecondes a fait l'objet d'une caractérisation expérimentale et biologique et est utilisée pour moduler les mouvements morphogénétiques de façon non-invasive. Enfin, approche « toute optique » a permis de démontrer 'expression mécano-sensible de twist dans les cellules du pôle antérieur de l'embryon, à l'aide d'une méthode physique (non génétique) dans un contexte d'embryon sauvage, et de corréler cette expression aux domaines de déformation cellulaire
The development of an embryo involves a complex choreography of cell movements that are highly regulated both in time and space. These morphogenetic movements are controlled by cascades of gene expression. We are interested in the potential role of a mechanical feedback in this regulation process. More specifically, the expression of twist, a developmental gene involved in the control of morphogenesis, has been identified as mechano-sensitive during Drosophiia melanogaster gastrulation, The precise study of this process required to develop novel approaches that enabled us to visualize, quantify and modulate morphogenetic movements in vivo, in this thesis, we first demonstrate that non linear microscopies, such as two-photon excited fluorescence (2PEF) microscopy and third harmonie generation (THG) microscopy, are highly appropriate to image embryo development in 3D. These are analyzed by using particle image velocimetry (PiV) in order to quantify cell movements and deformations. In addition, a novel technique of laser surgery using femtosecond pulses is experimentally and biologically characterized and is used to modulate morphogenetic movements in a non-invasive way. Finally, this ail optical and non-genetic approach provide novel insight into the issue of twist mechano-sensitive expression in anterior pole cells. In particular, the correlation between gene expression and specific cell deformations is demonstrated In wild-type embryos

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Kambris, Zakaria. "Fonctions transcriptionnelles des protéines HOX et rôles des molécules à domaine TIR au cours du développement embryonnaire de la drosophile." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2002. http://www.theses.fr/2002STR13174.

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Mariol, Marie-Christine. "Le développement embryonnaire chez Drosophila melanogaster : étude génétique et clonage d'un gène de polarité segmentale nécessaire au développement normal de l'embryon, le gène fused." Paris 6, 1987. http://www.theses.fr/1987PA066512.

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Zhang, Yan. "Implementation of anti-apoptotic peptide aptamers in cell and "in vivo" models of Parkinson's disease." Thesis, Lyon, École normale supérieure, 2012. http://www.theses.fr/2012ENSL0788.

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Abstract:

La maladie de Parkinson (PD) est considérée comme la deuxième maladie neurodégénérative la plus fréquente. L'examen post-mortem de patients parkinsoniens et des modèles physiologiques d’études de la maladie de Parkinson suggèrent la participation de la mort cellulaire programmée, l'inflammation et l'autophagie dues au stress oxydatif, à des mutations ou l’agrégation de protéines au sein des neurones DA. Les aptamères peptidiques sont de petites protéines combinatoires, consistitués d’une plateforme (dans notre cas, la thiorédoxine humaine, hTRX) et une boucle variable insérée dans le domaine actif de hTRX. Deux aptamères peptidiques ont été identifiés par la sélection fonctionnelle. L’aptamère peptide 32 (Apta-32) ,est spécifique liant deux paralogues T32 impliqués dans le processus d'endocytose. L’aptamère peptidique 34(Apta-34) lie à une cible "T34", une protéine pro-apoptotique ayant un rôle dans la voie apoptotique provenant du noyau. Le travail de cette thèse visait à étudier la fonction anti-apoptotique de nos deux aptamères peptidiques dans deux modèles d’étude de la maladie de Parkinson: un modèle cellulaire (in vitro) et un modèle transgénique D. melanogaster (in vivo). Deux toxines majeures ont été appliquées dans ce travail, 6-hydroxindopamine (6-OHDA) et le paraquat, un pesticide couramment utilisé. Nos observations montrent que la drosophile exprimant Apta-32 dans tous les neurones ont montré une meilleure résistance après 48h de traitement avec le paraquat comparé à deux autre aptamères peptidiques, Apta-34 et Apta-TRX (sans boucle de contrôle variable). Une autre étude a révélé un défaut dans la phagocytose des corps apoptotiques au cours du développement embryonnaire de la drosophile exprimant Apta-32 dans les macrophages, ce qui suggère qu’Apta-32 pourrait participer à et peut-être interférer avec le processus de l’autophygie, et que Apta-32 pourrait protéger contre l'autophagie induite par paraquat dans les neurones
Parkinson’s disease is considered as the second most common neurodegenerative disease. Although the cause of the progressive cell loss of PD remains unclear to date, programmed cell death, inflammation and autophagy due to oxidative stress, gene mutations or protein aggregations within DA neuron have been suggested as potential causes. Peptide aptamers are small combinatorial proteins, with a variable loop inserted into a scaffold protein, human thioredoxin, hTRX. They are used to facilitate dissection of signaling networks by modulating specific protein interactions and functions. Two peptide aptamers were identified by functional selection which inhibit Bax-dependent cell death in mammalian models. One peptide aptamer (Apta-32) is binding two paralogues involved in endocytotic trafficking T32. The second peptide aptamer (Apta-34) is binding to a target "T34", a pro-apoptotic protein mediating apoptosis emanating from the nucleus. The work of my PhD thesis aimed to investigate the anti-apoptotic function of our two peptide aptamers in different PD models including cell model (in vitro), brain tissue slice and D. melanogaster (in vivo) ; in particular their impact on neuron survival after exposure to specific toxins. Two major toxins were applied in this work, 6-hydroxindopamine (6-OHDA) and Paraquat, a commonly used pesticide. Our observations indicated that Drosophila expressing Apta-32 in all neurons showed more resistance 48h after treatment with Paraquat, compared to drosophila expressing Apta-34 or TRX. Another study revealed a defect in phagocytosis of apoptotic bodies in drosophila embryo’s expressing Apta-32 in macrophage, suggesting Apta-32 could be involved in, and perhaps interfere with, the process of autophagy. This suggests that Apta-32 could protect against paraquat induced autophagy in neurons

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Daulny, Anne. "Implication de la protéine DSP1 dans le contrôle génétique du développement embryonnaire précoce de Drosophila melanogaster." Orléans, 2003. http://www.theses.fr/2003ORLE2031.

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Abstract:

La protéine DSP1 ("Dorsal Switch Protein 1") de Drosophila melanogaster appartient à la famille des protéines HMGB ("High Mobility Group B"), capable de reconnaître l'ADN sans spécificité de séquence. Dans le but de comprendre la fonction biologique de la protéine DSP1, nous avons isolé au laboratoire un mutant perte de fonction de ce gène. Nous nous sommes intéressés à un trait phénotypique particulier de ce mutant : la perte partielle ou totale du quatrième segment abdominal. Par des expériences d'immunolocalisation in situ sur des embryons, nous avons montré que la perte de ce segment était corrélée à une diminution de l’expression du gène de segmentation knirps (kni). Des expériences d'interactions génétiques suggèrent que la protéine DSP1 interagit avec la protéine Bicoi͏̈d (BCD) qui est un activateur du gène kni. Nous avons confirmé in vitro l'interaction physique entre les protéines DSP1 et BCD par les méthodes de Biacore et de "far-western". Ces techniques ont permis de déterminer que les domaines minima nécessaires à l'interaction entre les deux protéines sont les domaines HMG de DSP1 et l’homéodomaine de BCD. Cette interaction a ensuite été mise en évidence in vivo par co-immunoprécipitation des deux protéines à partir d'un extrait protéique d'embryon de drosophile. En retardement sur gel, la protéine DSP1 n'augmente pas la liaison de BCD à ses sites de fixation sur la région régulatrice de kni. Enfin, nous avons montré en utilisant la technique d’immunoprécipitation de la chromatine pontée, que la protéine DSP1 était présente sur la région régulatrice du gène kni. L'ensemble de ces résultats suggère que la protéine DSP1 agit de concert avec la protéine BCD pour activer le gène kni en agissant comme un facteur de remodelage de la région régulatrice de ce gène.

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Pouille, Philippe-Alexandre. "Biomécanique de la gastrulation chez Drosophila Melanogaster." Paris 7, 2009. http://www.theses.fr/2009PA077048.

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Abstract:

L'embryogenèse implique les réseaux d'interaction de gènes, la différenciation épigénétique et les cascades biochimiques, mais aussi les propriétés physiques des tissus, afin de contrôler précisément les changements morphologiques. Le modèle animal est Drosophila Melanogaster] l'événement morphogénétique étudié est l'invagination du mésoderme ventral lors de la gastrulation, qui se déroule en deux étapes principales : une phase lente de constriction stochastique des apex suivie d'une phase rapide de contraction globale. La thèse analyse les composants biomécaniques de l'embryon précoce et la dynamique de la gastrulation. Une structure élémentaire est choisie, un modèle hydrodynamique est construit et l'invagination simulée pour un premier résultat : un unique processus actif est suffisant pour reproduire en détail les changements phénotypiques durant l'invagination, à l'exception de la phase stochastique. Les gènes et les voies de transduction biochimiques impliquées sont analysés et la nécessité d'une boucle de rétroaction entre constriction stochastique et contraction globale est discutée ; une hypothèse de capteur mécanique est proposée et testée expérimentalement. De nouvelles simulations implémentant le contrôle génétique et biochimique ainsi que la boucle de rétroaction dans la modélisation biomécanique illustre la validité de la proposition : la contraction globale des apex conduisant à l'invagination ventrale est induite par une boucle de rétroaction positive des contraintes mécaniques accumulées lors de la constriction stochastique
Embryogenesis involves genetic network, epigenetic differentiation and biochemical cascades, but also physical properties of the tissues, to shape a precise morphology at each step of the process. The animal model used is Drosophila Melanogaster] the morphogenetic event studied is the invagination of ventral mesoderm during gastrulation, which proceeds in two main steps: a slow phase of apical stochastic constrictions followed by a rapid phase of global apex contraction. The thesis analyses the biomechanical components of the early embryo and the dynamics of its gastrulation. An elementary structure is selected, a hydrodynamic model is constructed and the invagination simulated, providing a first result: one active process alone is sufficient to reproduce in details the phenotypic changes during invagination, except the first stochastic phase of constriction. The genetic network and biochemical pathways involved are analysed and the need of a mechanical feedback linking the stochastic constriction to global contraction is discussed; ahypothesis of the mechanical sensor is proposed and tested experimentally. New simulations implementing the genetic and biochemical control and the presumed feedback mechanism into the former biomechanical modelling illustrates the accuracy of the assumption: the global contraction of the ventral cell apices leading to invagination is induced by a positive feedback from the mechanical constrains accumulated during previous stochastic constriction

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Schaerlinger, Bérénice. "Rôle de la sérotonine dans le développement embryonnaire précoce de Drosophila melanogaster : Etude d'un mutant ponctuel du récepteur 5-HT2Dro." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2004. https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2004/SCHAERLINGER_Berenice_2004.pdf.

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Abstract:

Outre son rôle de neurotransmetteur au niveau du système nerveux central, la sérotonine est importante pour la régulation de la migration cellulaire chez l'oursin ou la souris. De précédents travaux ont montré le rôle de la sérotonine et du récepteur 5-HT2Dro au cours de la gastrulation chez la drosophile. Le récepteur 5-HT2Dro est exprimé transitoirement au cours du développement de la drosophile. L'étude d'une souche déficiente dans le locus du gène du récepteur 5-HT2Dro a indiqué que la présence de ce récepteur est nécessaire à l'intercalation cellulaire au cours de la gastrulation. Ce travail a permis la mise en évidence et l'étude d'un mutant ponctuel dans le gène du récepteur 5-HT2Dro. Cette mutation gain de fonction est létale et la plupart des embryons homozygotes pour une souche isogénique (M51) meurent pendant le développement précoce. De plus ces embryons présentent un phénotype cuticulaire " fantôme " traduisant un défaut de gastrulation. Nous avons montré que la vitesse de migration des cellules est 4 fois plus élevée dans les embryons mutants par rapport aux embryons sauvages. La présence d'une seconde mutation dans la région 67A2-67D13 sur le chromosome contenant la mutation gain de fonction (l(3R)4830b) semble compenser le phénotype de la souche M51. En effet, les embryons l(3R)4830b présentent un défaut de gastrulation moins important que les embryons M51 et meurent plus tard lors du développement. Cette létalité tardive a permis de mettre en évidence le rôle du récepteur 5-HT2Dro dans la régulation de l'expression tardive de Wingless. En effet, les embryons porteurs de la double mutation présentent un phénotype " A4 sans denticule " associé à une expression ectopique de Wingless dans le 4ème segment abdominal des embryons. Ce travail de thèse démontre le rôle majeur du récepteur 5-HTDro au cours de la gastrulation de drosophile. De plus, il a permis de mettre en évidence un rôle du récepteur 5-HT2Dro sur la régulation tardive de Wingless
Serotonin, known as a neurotransmitter in the central nervous system, plays an important role during cell migration in sea urchin, mice as well. Previous studies have shown that serotonin and its 5-HT2Dro receptor are important during germband extension in drosophila. Indeed, 5-HT2Dro receptor is transiently expressed during early embryogenesis. Removal of the 5-HT2Dro locus in a deleted drosophila strain allows us to prove the essential role of serotonin and its receptor for correct cell intercalation during germband extension. This work underlined a new point mutant in the 5-HT2Dro receptor gene. The point mutation is located in the N-terminal domain and confers to the receptor a gain of function. Most of homozygote embryos for the isogenic strain containing point mutant in 5-HT2Dro gene (M51) die during germband extension. M51 embryos display a “ghost” cuticular phenotype accompanied by a gastrulation defect. Indeed, time lapse video experiment demonstrated that cell migration speed is 4 times higher in M51 embryos compared to wild type embryos. However, the presence of a second mutation at 67A2-67D13 locus, on the same chromosome than 5-HT2Dro gain of function mutation in the l(3R)4830b, seems to compensate M51 phenotype. L(3R)4830b embryos present a less severe gastrulation defect and die later during germband retraction. The late lethality of l(3R)4830b embryos allowed us to show a new role for serotonin in the late regulation of Wingless expression. Indeed, an “denticle missing in A4” phenotype observed in homozygote l(3R)4830b embryos is due to an ectopic expression of Wingless specifically in fourth abdominal segment. Thus, this work demonstrates the major role of serotonin and 5-HT2Dro receptor during germband extension. It also showed that serotonin is able to regulate Wingless expression during late stages of drosophila embryogenesis. The signalling pathway involved in that process remains to be elucidated

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Merle, Mélody. "Un modèle d'Ising asymétrique pour la régulation génétique." Thesis, Sorbonne université, 2019. http://www.theses.fr/2019SORUS617.

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Abstract:

La régulation génétique joue un rôle majeur dans le développement embryonnaire. La structure d’un organisme est prédéfinie par des motifs spatio-temporels d’expression de gènes précurseurs. Les processus de régulation impliquant plusieurs gènes sont souvent représentés comme des réseaux de régulation génétique (RRG). Dans cette thèse, je présente un nouveau modèle de RRG avec une composante spatiale. Ce modèle est une variante du modèle d’Ising, désigné pour avoir un nombre minimal de paramètres. Ces paramètres, les interactions entre gènes et leur portée, ont des rôles similaires aux paramètres d’un automate cellulaire de réaction-diffusion. Ce modèle est capable de former des motifs complexes, tel que des motifs de Turing, ce qui n’avait jamais été observé dans des modèles de type Ising avec interactions à courte portée, et le paramètre d’ordre associé ne dépend pas de la taille du système. Ce modèle est appliqué à la segmentation dans le développement précoce de la Drosophile, en particulier à la régulation du gène eve. Une méthode d’échantillonnage issue de la physique statistique est employée, l’algorithme Wang-Landau. Il permet d’identifier les sous-volumes de l’espace des phases qui sont solution pour produire un motif donné. La comparaison de résultats obtenus sur des données en 1D ou en 3D montre que les espaces des solutions s’intersectent mais ne sont pas confondus. Enfin, cette thèse questionne cette vision sous forme de réseau et redéfinit un code régulation génétique dont l'adapteur serait le gène domain, une séquence encadrant le locus du gène dans le génome
Gene regulation is a major actor of embryonic development. The structure of an organism is predefined by spatio-temporal patterns of expression from precursors genes. Regulation processes involving multiple genes are often represented by Gene Regulation Networks (GRN). In this thesis I present a novel spatial model of GRN. This model is a variant of the Ising model and is designed to have a minimal number of parameters. Its parameters, inter-actions between genes and the corresponding range of interaction, have similar roles to those of a reaction-diffusion automata. This model is able to form complex patterns, such as Turing patterns, which has never been osbserved before in short-range Ising-like models. This model is applied to early stage segmentation of Drosophila, in particular to the regulation of the gene eve. A sampling method, the Wang-Landau algorithm, is applied to the model. It is used to identify, within the parameter space, sub-volumes of networks producing a given pattern. The comparison of results obtained from 1D or 3D data show the solutions spaces intersect but are not identical. Finally, this thesis question the view of gene regulation in terms of networks, and redefined a gene regulation code whose adaptor would be the gene domain, a sequence surrounding the gene locus along the genome

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Perez, Romero Carmina Angelica. "Noise and robustness downstream of a morphogen gradient : Quantitative approach by imaging transcription dynamics in living embryos." Electronic Thesis or Diss., Sorbonne université, 2019. https://accesdistant.sorbonne-universite.fr/login?url=https://theses-intra.sorbonne-universite.fr/2019SORUS306.pdf.

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Abstract:

La différenciation des cellules est souvent déclenchée par les gradients de molécules appelées morphogènes. Un paradigme simple pour l’étude des morphogènes est le gradient de Bicoid, qui détermine l’identité cellulaire le long de l’axe antéro-postérieur chez la mouche du vinaigre. Ce facteur de transcription permet l'expression rapide de son principal gène cible, hunchback, dans la moitié antérieure de l’embryon dans un domaine d’expression avec une bordure très franche. En utilisant le système MS2 rendant fluorescents des ARN dans les embryons vivants, nous avons montré que la transcription au promoteur d’hunchback est « bursty ». De manière surprenante, il suffit de 3 minutes, après la première détection de transcription à l’antérieur, pour que la bordure franche du domaine d’expression soit précisément positionnée au milieu de l’embryon. Afin de mieux comprendre le rôle des facteurs de transcription autres que Bicoid dans ce processus, j’ai utilisé une double stratégie impliquant des gènes rapporteurs MS2 synthétiques combinés à l’analyse du gène rapporteur hunchback MS2 dans des contextes génétiques mutants. L’analyse des gènes rapporteurs synthétiques indique que Bicoid est capable d’activer la transcription à elle seule en se fixant sur le promoteur mais de manière stochastique. La fixation d’Hunchback sur un promoteur régulé par Bicoid réduit cette stochasticité alors que Caudal agirait comme un gradient postérieur répresseur. L’ensemble de ces travaux apporte un éclairage nouveau sur les mécanismes assurant une réponse transcriptionnelle précise en aval du morphogène Bicoid
During development, cell differentiation frequently occurs upon signaling from gradients of molecules, called morphogens. A simple paradigm to study morphogens is the Bicoid gradient, which determines antero-posterior patterning in fruit fly embryos. This transcription factor allows the rapid expression of its major target gene hunchback, in an anterior domain with a sharp boundary. Using the MS2 system to fluorescently tag RNA in living embryos, we were able to show that the ongoing transcription process at the hunchback promoter is bursty Surprisingly, it takes only 3 minutes, from the first hints of transcription at the anterior to reach steady state with the setting of the sharp expression border in the middle of the embryo. To better understand the role of transcription factors other than Bicoid in this process, I used a two-pronged strategy involving synthetic MS2 reporters combined with the analysis of the hunchback MS2 reporter in various mutant backgrounds. The synthetic reporter approach, indicate that Bicoid is able to activate transcription on its own when bound to the promoter but in a stochastic manner. The binding of Hunchback to the Bicoid-dependent promoter reduces this stochasticity while Caudal might act as a posterior repressor gradient. Altogether, this work provide a new light on the mechanisms insuring a precise transcriptional response downstream of Bicoid

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Ibnsouda, Saad. "Structure, expression et évolution du gène serendipity-alpha de la drosophile : un gène requis pour la cellularisation de l'embryon." Toulouse 3, 1993. http://www.theses.fr/1993TOU30110.

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Abstract:

Le developpement embryonnaire de la drosophile commence par une succession de 13 mitoses rapides et synchrones qui aboutit a la formation d'un syncytium constitue d'une monocouche reguliere d'environ 5000 noyaux localises au cortex de l'uf. La cellularisation intervient pendant l'interphase du quatorzieme cycle mitotique. Il y a formation d'un epithelium monocellulaire: c'est le stade blastoderme cellulaire. Mon travail de these comporte une comparaison des structures, sequence et expression du gene sry dans plusieurs especes de drosophile. Cette comparaison montre des regions hautement conservees dans la proteine sry et une faible homologie de sequence avec des proteines du cytosquelette caracterisees chez les vertebres. La transformation heterospecifique de d. Melanogaster par le gene sry de d. Pseudoobscura montre une conservation fonctionnelle du gene entre ces deux especes et revele une expression plus complexe qu'initialement decrite. 4 motifs conserves dans le promoteur de ce gene apparaissent comme des sites potentiels de cis-regulation de la transcription. Le role de ces motifs a ete confirme in vivo dans des lignees transgeniques. L'immunocytologie sur embryons entiers a l'aide d'anticorps anti-proteine sry , confirme que cette proteine est accumulee en fin du 13eme cycle au-dessus de chaque noyau cortical puis localisee au niveau du sillon d'invagination de la membrane au cours de la cellularisation. Ces resultats ouvrent de nouvelles perspectives pour l'etude du couplage chronologique entre les divers evenements moleculaires, cellulaires et morphogenetiques qui interviennent lors de la transition entre blastoderme syncitial et blastoderme cellulaire, et l'etude du controle au niveau transcriptionnel de cette transition

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Liabeuf-Le, Goff Emilie. "Implications des complexes Polycomb et Trithorax au cours du développement précoce chez Ciona intestinalis." Thesis, Montpellier 2, 2012. http://www.theses.fr/2012MON20193.

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Abstract:

Implications des complexes Polycomb et Trithorax au cours du développement précoce chez Ciona intestinalisLes protéines des groupes Polycomb (PcG) et Trithorax (TrxG) ont été initialement découvertes chez Drosophila melanogaster. Ces deux groupes sont classiquement connus pour leurs rôles respectifs de répresseurs et d'activateurs épigénétiques qui contrôlent et maintiennent les états chromatiniens au cours du temps. Ces facteurs régulent de nombreux gènes cibles dont les gènes homéotiques. Au cours de ma thèse, j'ai étudié trois composants de ces deux groupes : Enhancer of zeste (E(z)), appartenant au complexe PRC2 du PcG et responsable du dépôt de la marque de répression génique H3K27me3, Polyhomeotic (Ph), appartenant au complexe PRC1 du PcG et dont le rôle exact reste à déterminer, et Trithorax (Trx), appartenant au complexe TAC1 du TrxG et responsable du dépôt de la marque d'activation génique H3K4me3. Jusqu'à présent, aucune étude n'a abordé la régulation épigénétique via les PcG et TrxG chez l'ascidie solitaire Ciona intestinalis. Cette espèce présente un cluster des gènes Hox désorganisé et ne possède pas la protéine Polycomb (Pc) du PRC1, responsable de la reconnaissance de la marque de répression H3K27me3 déposée par la protéine E(z).Nos travaux montrent que la protéine E(z) est fonctionnelle et conserve son activité méthyltransférase sur le résidu H3K27 chez Ciona intestinalis. Nous avons ensuite observé, par des expériences de knockdown par micro-injection de morpholinos, que les inhibitions protéiques d'E(z), Ph et Trx ont des conséquences dramatiques sur la différenciation et la mise en place des différents tissus au cours du développement larvaire, notamment sur la mise en place de la notochorde puisque celle-ci est totalement absente chez les morphants E(z) et Ph. Les défauts de phénotype du morphant E(z) sont corrélés à la perte du dépôt d'H3K27me3 et nous avons mis en évidence, lors de l'inhibition d'E(z), une dérépression des gènes tissu-spécifiques impliqués dans le développement embryonnaire précoce alors que les gènes tardivement exprimés sont réprimés. De plus, l'expression des gènes Hox n'est pas significativement modifiée au cours du développement embryonnaire lorsque la protéine E(z) est inhibée, à l'exception du gène Hox12 qui est déréprimé, comme attendu.L'ensemble de ces résultats permet d'émettre l'idée innovante selon laquelle les protéines des PcG et TrxG jouent un rôle déterminant dans la régulation de l'expression génique lors de l'embryogénèse de Ciona intestinalis tout en ayant une implication mineure dans la régulation de l'expression des gènes Hox à ce stade du développement
Implications of Polycomb and Trithorax complexes in the early development of Ciona intestinalisPolycomb and Trithorax group (PcG and TrxG) proteins were discovered originally in Drosophila melanogaster. Both groups are classically known for their roles in the maintenance of silenced and active chromatin states over time, respectively. These factors regulate many target genes including the homeotic genes. During my PhD, I studied three components of these two groups: Enhancer of zest (E(z)), belonging to the PRC2 complex of PcG and responsible for H3K27me3 mark deposit for gene repression, Polyhomeotic (Ph), belonging to the PRC1 complex of PcG whose role remains to be determined, and Trithorax (Trx), belonging to the TAC1 complex of TrxG and responsible for H3K4me3 mark deposit for gene activation. Until now, no study addresses the epigenetic regulation mediated by PcG and TrxG in the solitary ascidian Ciona intestinalis. This specie has a disorganized Hox cluster and in which the Polycomb (Pc) protein of PRC1, responsible for the recognition of the repressive H3K27me3 mark, is absent.Our work shows that the E(z) protein is functional and retains its methyltransferase activity on H3K27 residue in Ciona intestinalis. Then, we demonstrated, by knockdown experiments with morpholino microinjection, that the inhibition of E(z), Ph and Trx has dramatic consequences on differentiation and on the establishment of different tissues during larval development, particularly on the notochord establishment since it is totally absent in E(z) and Ph morphants. E(z) morphant phenotypic defects are correlated with lack of H3K27me3 mark deposit and we highlighted that, during the E(z) inhibition, tissue-specific genes implied in early development are de-repressed while late-expressed genes are down-regulated. In addition among Hox genes, only Hox12 expression is significantly modified and found to be de-repressed in E(z) morphant context, as expected.Altogether, our results present the innovative idea that the PcG and TrxG proteins play a major role in the gene expression regulation during embryogenesis of Ciona intestinalis while having a minor involvement in the regulation of Hox genes expression at this stage of development

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Dubuis, Julien. "Quantifying positional information during early embryonic development." Paris 6, 2012. http://www.theses.fr/2012PA066388.

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Girardot, Charles. "Deciphering enhancer activity in Drosophila based on transcription factor occupancy and chromatin state chromatin state characterization." Phd thesis, Université Pierre et Marie Curie - Paris VI, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00829472.

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Abstract:

La caractérisation des modules cis-régulateurs (CRM) ainsi que de leur activité sont essentiels pour comprendre la régulation des gènes au cours du développement des métazoaires. La technique de l'immunoprécipitation de la chromatine suivie du séquenage à haut débit de l'ADN (ChIP-seq) constitue une approche puissante pour localiser les CRM. Afin de localiser des facteurs génériques au sein de tissus spécifiques, nous avons développé une approche ChIP-seq sur des noyaux triés par cytométrie de flux et localisons des modifications post-traductionelles de l'histone H3, ainsi que l'ARN polymérase II (PolII) dans le mésoderme de la Drosophile. Nous montrons que les CRM actifs sont caractérisés par la présence d'H3 modifiés (K27Ac et K79me3) et de PolII. De plus, la présence et la forme des signaux correspondants à ces marques corrèlent dynamiquement avec l'activité des CRM. Enfin, nous prédisons la présence de CRM actifs et confirmons leur activité in vivo à 89%. Paralllement, nous étudions comment cinq facteurs essentiels au développement cardiaque se coordonnent en cis au sein du mésoderme dorsal, précurseur des mésodermes cardiaque (MC) et viscéral (MV). Nous démontrons que ces facteurs sont recrutés en tant que collectif au niveau des CRM cardiaques via un nombre limité de sites de fixation et en l'absence de contraintes architecturales. En outre, nous découvrons que ces facteurs cardiaques sont recrutés au niveau de CRM actifs dans le MV voisin et activement réprimés dans le MC, reflétant ainsi l'origine tissulaire commune de ces deux populations cellulaires. Nous concluons que les CRM impliqués dans le développement peuvent présenter une empreinte développementale.

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Bataille, Laetitia. "Mécanismes de régulation de l'hématopoïèse embryonnaire chez la Drosophile." Toulouse 3, 2006. http://www.theses.fr/2006TOU30050.

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Abstract:

L'hématopoïèse regroupe les phénomènes menant à la formation des différents types de cellules sanguines. Chez l'embryon de Drosophile, les prohémocytes génèrent deux types cellulaires, les plasmatocytes et les cellules à cristaux. Nous avons entrepris de caractériser les mécanismes de régulation de l'hématopoïèse chez la Drosophile. Nous avons montré que le gène serpent code pour deux isoformes du facteur de transcription GATA, Serpent, dont l'activité est modulée par recrutement de cofacteurs de type FOG (U-Shaped) et RUNX (Lozenge). D'autre part, nous avons montré in vivo que la ségrégation des deux lignages sanguins à partir d'une population de prohémocytes bipotents est un processus très dynamique, contrôlé par un mécanisme en deux étapes. Cette régulation fait intervenir Lozenge et Glial-Cell-Missing (Gcm) et Gcm2. Cette régulation contrôle précocement la détermination des précurseurs et tardivement le maintient de l'identité de ces cellules dans les phases de différenciation
Haematopoietic development give rise to different specialised blood cell types. In Drosophila embryo, the blood cell progenitors (prohemocytes) give rise to two differentiated cell types : plasmatocytes and crystal cells. We have investigated the mechanism of regulation of this process in the fruit fly. We have shown that serpent encodes different isoforms and that the activity of the GATA transcription factor Serpent is modulated by different cofactors, U-Shaped (FOG) or Lozenge (RUNX), during haematopoiesis. Secondly, we have undertaken an in vivo analysis of the mechanism of segregation of the two embryonic blood cell lineages. We find that prohemocytes are bipotent progenitors, which the fate is determined by a dynamic interplay between the lineage-specific transcription factors, Gcm/Gcm2 and Lz. The resolution of the choice of blood cell fate correspond to an original two-steps process in which Gcm/Gcm2 control the initiation and next the maintenance of the crystal cell fate

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Carayon, Alexandre. "Mise en place de l'identité musculaire durant la myogenèse embryonnaire chez la drosophile." Thesis, Toulouse 3, 2018. http://www.theses.fr/2018TOU30107.

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Abstract:

La diversité morphologique des muscles squelettiques permet la précision et la coordination des mouvements propres à chaque espèce animale. L'établissement du patron musculaire a lieu au cours du développement embryonnaire durant le processus de myogenèse. Il a été décomposé en quatre étapes chez la drosophile : la spécification de groupes de myoblastes équivalents (groupes promusculaires) à des positions précises du mésoderme, la sélection d'une ou plusieurs cellules progéniteurs à partir de chaque groupe, la division asymétrique des progéniteurs en cellules fondatrices des muscles, et enfin, la fusion d'une cellule fondatrice avec un nombre défini de myoblastes compétents pour la fusion qui forme une myofibre syncytiale. Ce processus aboutit à la mise en place d'un patron stéréotypé de muscles morphologiquement distincts par leur taille, orientation, forme, et sites d'attachement au squelette ; ces caractères définissant l'identité du muscle. Chez la drosophile, chacun des 30 muscles par hémisegment de la larve est constitué d'une seule myofibre. Il a été proposé que l'identité morphologique de cette fibre soit contrôlée par une combinatoire de facteurs de transcription identitaires (FTi) exprimés par la cellule fondatrice. Mon projet de thèse a porté sur le contrôle transcriptionnel de l'identité musculaire, avec comme modèle d'étude, un muscle dorso-latéral de la larve de drosophile, le muscle DA3 dont un FTi est Collier/EBF (Col). La transcription de col est activée dans un groupe promusculaire, puis transitoirement dans les quatre progéniteurs issus de ce groupe, avant d'être maintenue spécifiquement dans la myofibre DA3. Dans des embryons mutants pour col, le DA3 est transformé en muscle plus dorsal, DA2. Les travaux précédents de l'équipe ont montré que la transcription de col dans le lignage DA3 est contrôlée par deux modules cis-régulateurs, EarlyCRM et LateCRM, séparés physiquement sur le chromosome et agissant séquentiellement. Leur chevauchement temporel d'activité restreint au progéniteur DA3 et l'autorégulation directe du LateCRM ont mené à l'hypothèse d'un mécanisme de " passage de témoin " entre ces deux CRM, spécifique au progéniteur DA3. L'objectif de ma thèse était de tester cette hypothèse et de comprendre comment une information temporelle et spatiale intégrée par un CRM est transmise à un autre CRM, pour définir une identité cellulaire, une question fondamentale au-delà du cas d'espèce que constitue le muscle DA3.[...]
The morphological diversity of skeletal muscles allows the precision and coordination of movements specific to each animal species. Establishment of a stereotypic pattern of muscles takes places during the process of myogenesis. Studies in Drosophila, an insect model, have identified four steps in this process: the specification of equivalence groups of myoblasts (promuscular clusters) at defined positions within the somatic mesoderm, the selection of progenitor(s) from each group, asymmetric division of each progenitor into post-mitotic muscle founder cells, and finally the fusion of each founder cell with a given number of fusion competent cells to form a syncytial myofiber. This dynamic, integrated process leads to establishing a stereotyped pattern of morphologically distinct muscles which can each be distinguished, based on size, orientation, shape, sites of attachment to the skeleton, all properties defining muscle identity. In the Drosophila larva, each of the about 30 different muscles per hemisegment is made of a single myofiber. It has been proposed that final morphology of a myofiber reflects the combinatorial code of identity Transcription Factors (iTF) expressed by its founder cell, although many questions remain unanswered. My thesis project aimed at better understanding the mechanism of specification of muscle identity, using as model a dorso-lateral muscle of the Drosophila larva, the DA3 muscle whose identity is controlled by the Collier/EBF (Col) iTF. col transcription is activated in one promuscular cluster, transient in the 4 progenitors issued from this cluster and stably maintained in the DA3 myofiber. In col mutant embryos, the DA3 muscle is transformed into a more dorsal, DA2-like muscle. Previous work has shown that col transcription in the DA3 lineage is controlled by two cis-regulatory modules (EarlyCRM and LateCRM), physically distant on the chromosome and acting sequentially. The temporal overlap of EarlyCRM and LateCRM in the DA3 progenitor and direct col autoregulation via the LateCRM led to hypothesize a handover between the two CRM in the DA3 progenitor. One goal of my thesis project was to challenge this hypothesis and understand how positional and temporal information integrated by EarlyCRM could be memorized via LateCRM, in order to specify cell identity, a fundamental question of developmental biology beyond the specific case of the Drosophila DA3 muscle. [...]

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Cavey, Matthieu. "Organisation spatiale de l'adhérence intercellulaire par le cytosquelette d'actine dans l'épithélium embryonnaire de drosophile." Aix-Marseille 2, 2008. http://theses.univ-amu.fr.lama.univ-amu.fr/2008AIX22092pdf.

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Abstract:

L'adhérence intercellulaire, responsable de la cohésion des tissus, est maintenue par les protéines transmembranaires E-Cadhérines (E-Cad) qui sont liées dynamiquement via β- et α-Caténine au cytosquelette d'actine. Afin de mieux comprendre comment cette interaction dynamique stabilise l'adhérence et comment les molécules E-Cad sont distribuées à la surface des cellules, j'ai utilisé au cours de ma thèse l'épithélium embryonnaire de drosophile. Mes travaux mettent en évidence deux nivaux de contrôle de l'adhérence par l'actine. Des filaments d'actine qui se renouvellent lentement maintiennent localement les molécules E-card en agrégats stables. D'autres filaments, qui se renouvellent rapidement, contrôlent la localisation de ces agréagats en les immobilisant par un mécanisme d'ancrage impliquant α-Caténine. Mes travaux identifient la principale fonction de α-Caténine dans le contrôle de l'adhérence et démontrent que d'adhérence est organisée spatialement à la surface cellulaire
Intercellular adhesion, crucial for tissue cohesion, is maintained by E-Cadherin (E-Cad) transmembrane proteins which are dynamically linked to the actin cytoskeleton via β- and α-Catenin. To understand how this dynamic interaction stabilizes adhesion and how E-Cad molecules are distributed at the cell surface, i have used drosophila embryonic epithelial cells during my phD. My work reveals two levels of control of adhesion by actin. One population of actin filaments with a slow turnover maintains locally E-Card molecules in stable aggregates. Another population of filaments, with rapid turnover, controls the localization of these aggregates by immobilizing them by an anchoring mechanism which involves α-Catenin. This work identifies the main function of α-Catenin in adhesion control and demonstrates that adhesion is spacially organized at the cell surface

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Ghysen, Alain. "Le développement du système nerveux chez la drosophile." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 1991. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/213073.

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Monnier, Paul. "Locus H19 et contrôle épigénétique du développement embryonnaire." Paris 6, 2013. http://www.theses.fr/2013PA066767.

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Abstract:

H19 fut un des premiers gènes décrits comme étant soumis à l’empreinte parentale, un mécanisme qui conduit à une expression monoallélique des gènes en fonction de leur origine parentale. Cependant, sa fonction précise est restée longtemps inconnue. Nous avons récemment montré au laboratoire en utilisant des modèles perte- et gain-de-fonction que le locus H19 est impliqué dans le contrôle de la croissance embryonnaire via la trans-régulation d’un réseau de gènes soumis à l’empreinte parentale (IGN pour Imprinted Gene Network). L’objectif de ma thèse a été de disséquer les mécanismes moléculaires impliqués dans la régulation de cet IGN par H19, un gène qui a la particularité de produire un long ARN non codant ainsi qu’un micro ARN, le miR-675. En collaboration avec le groupe du Dr Wolf Reik, nous avons pu identifier la fonction du miR-675 comme un inhibiteur de la croissance placentaire à travers la répression du gène Igf1r, le récepteur du facteur de croissance Igf2. En parallèle, nous avons identifié un rôle pour la forme longue de l’ARN H19 dans l’embryon. Il réprime plusieurs cibles de l’IGN, dont le gène Igf2, par le recrutement de la protéine MBD1 au niveau de régions différentiellement méthylées impliquées dans le contrôle de l’expression de ces gènes. MBD1 est une protéine impliquée dans le maintien de marques épigénétiques répressives comme la triméthylation de H3K9, une marque d’histones perdue au niveau des gènes cibles de H19 dans notre modèle perte-de-fonction
The H19 locus produces a 2. 3kb non-coding RNA (ncRNA) as well as a micro RNA, the miR-675. It is located at the distal part of the chromosome 7 in mice close to the Igf2 gene. These genes were among the first genes described to be imprinted. Therefore, this locus served as a paradigm to understand molecular mechanisms that drive genomic imprinting, an epigenetic process that leads to monoallelic expression of genes in a parent-of-origin dependent manner. However, the precise function of the H19 locus still remains unclear. Our laboratory recently showed that H19 is a trans-repressor of nine genes, including Igf2, of an imprinted gene network (IGN) involved in growth control of the embryo. The main purpose of my PhD was to decipher mechanisms through which H19 exerts this control. In collaboration with the group of Wolf Reik, we participated to an in-depth analysis of the miR-675. We found that it was linked to the repression of placental growth through the direct targeting of the Igf1r mRNA that encodes for the receptor through which Igf2 exerts its growth promoting effect. Nevertheless, the miR-675 appears to have no effect on the expression of the IGN, thus leading to the conclusion that the H19 mediated downregulation of 9 genes of this network is achieved by the H19 full-length RNA. We showed that this RNA represses several of these targets through an interaction with the MBD1 protein. This protein is involved in the maintenance of the repressive H3K9me3 histone mark. We found that the H19 RNA is necessary to the recruitment of MBD1 to some of its targets, including the Igf2 gene

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Assemat, Emeline. "Récepteurs endocytiques multiligands et développement embryonnaire : expression et fonction de la cubiline et de la mégaline pendant le développement embryonnaire chez les rongeurs." Paris 6, 2005. http://www.theses.fr/2005PA066040.

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Huang, Kai-Lian. "L'asymétrie du cerveau chez la drosophile : développement, fonction et évolution." Paris 11, 2006. http://www.theses.fr/2006PA112043.

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Abstract:

Nous avons identifié une nouvelle structure dans le complexe central chez Drosophila melanogaster (D. Melanogaster), nommé le corps asymétrique (AB). Cette structure située dans l'hémisphère droit est constituée d'axones neuronaux car elle exprime fasciclin II. De façon surprenante, l'AB est impliquée dans la formation de la mémoire à long terme (MLT) car les mouches symétriques présentent une mémoire à court terme normale mais une absence complète de MLT à 4 jours. En revanche, j'ai montré que les mouches symétriques ont une meilleur ARM, (pour " anaesthesia-resistant memory "), un autre type de mémoire consolidé qui n'a pas besoin de synthèse protéique. L'AB est conservée au cours de l'évolution. D'après notre étude de l'AB, quatre espèces appartenant au sous-groupe melanogaster (D. Sechellia, D. Mauritiana, D. Simulans et D. Melanogaster) présentent ce caractère. Quatre espèces plus éloignées de D. Melanogaster (D. Ananassae, D. Malerkotliana, D. Takahashii et D. Willistoni) contiennent également l'AB, mais avec plus de variabilités morphologiques. L'ensemble de ces résultats suggère que l'apparition de l'asymétrie est apparue 3 fois indépendamment au cours de l'évolution des drosophiles. Nous avons obtenu par mutagenèse 4 mutants de l'AB. Les gènes ont ensuite été clonés et identifiés : chameau, tramtrack (ttk) et Ecdyson-induced protein 75B (Eip75B). L'identification du gène ttk suggère que la mise en place de l'AB est issue du déterminisme neurone/glie. En outre, l'identification du gène Eip75B suggère que l'AB fait parti des neurones remaniés sous contrôle de l'ecdysone
We found the asymmetrical body (AB) in the Drosophila melanogaster (Dm) brain. This asymmetrical structure expresses the neuronal Fasciclin II protein and is thought to be composed by neuronal axons. AB presents in the right hemisphere. AB seems to involve in the formation or retrieval of the long-term memory because four-day long-term memory was not evident in wild-type flies with a symmetrical brain. In wild-type laboratory strains, three categories of flies are observed: right-sided AB forms in the majority of flies, but left-sided AB and bilateral ABs are also formed. This distribution of symmetrical and asymmetrical flies is not due to genetic variability, as a similar phenotypic frequency was observed in an isogenic Dm strain. We studied brain asymmetry in various Drosophila species and found that the AB is not conserved in all of them. Out of 29 species studied, only 8, including Dm, show an AB-like structure. The results suggest that 1) brain asymmetry has appeared on several independent occasions during the evolution of Drosophila, and 2) the apparition of asymmetry in a species is accompanied by a diversity of brain structures that may sustain behavioral diversity. We obtained 4 AB mutant lines after a mutagenesis and identified 3 genes: chameau, tramtrack and Ecdyson-induced protein 75B. The identification of those genes suggests: (1) le development of AB might be controlled by a cell fate determination (neuron/glia) ; (2) AB might submit a remodeling due to the ecdyson during the metamorphosis

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Jacob, Yves. "Etude de la regulation de l'expression du gene kruppel au cours du developpement embryonnaire de la drosophile." Paris 7, 1992. http://www.theses.fr/1992PA077088.

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Abstract:

Les genes de type gap jouent un role majeur dans le developpement embryonnaire de la drosophile, se sont en effet, les premiers genes zygotiques impliques dans le processus de segmentation. Plusieurs facteurs maternels et zygotiques interviennent dans la regulation de l'expression precoce du gene de type gap kruppel (kr) mais, tant leurs cibles que leurs mecanismes d'action ne sont pas pleinement elucides. Afin d'identifier les facteurs en trans necessaires a l'expression correcte de kr nous avons entrepris dans un premier temps de dissequer methodiquement un fragment de 4,1kb de sequence 5 flanquantes. Cette premiere approche utilisant la technique de transgenese a permis d'isoler differentes regions regulatrices. A partir des resultats obtenus par l'analyse des sequences et la recherche de sequence consensus pour des facteurs de transcription, nous avons tente de realiser un element regulateur synthetique minimal pouvant induire l'expression precoce d'un gene reporter. Dans une troisieme approche, afin de correler le degre d'occupation in vivo des sites precedemment identifies avec l'activite du gene, nous presentons une nouvelle methode combinant les techniques d'empreinte genomique et le tri de cellules embryonnaires

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Olivier, Christelle. "Développement du lignage oligodendrocytaire dans le cerveau embryonnaire de poulet." Paris 12, 2001. http://www.theses.fr/2001PA120040.

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Abstract:

This work examines the spatio-temporal development of the oligodendrocyte lineage in the bird embryo. The first part deals with the specification ofthe oligodendrocyte progenitors and the second part provides a study oftheir migration patterns. In the mouse the oligodendrocytes emerge from restricted and isolated territories along the neural tube which are characterised by the expression ofthe gene transcript plp/dm2O (Spassky et al 1998). My work consisted in the first instance in establishing if in the avian model the expression of the gene plp/dm2O also defines an oligodendrocyte lineage, as is the case in mammals. A comparative study has been carried out concerning the expression ofthe gene pip /dm2O as well as ofestablished markers ofthe oligodendrocyte lineage during the course ofthe embryonic development ofthe chick. This has allowed us to propose a map of ventricular foci of oligodendrogenesis and to show that oligodendrocyte emergence is very precocious and concomitant with the appearance of the first neurons. My studies have subsequently been directed towards the migration pathways of the oligodendrocyte precursors from their original focus. Using the system of embryonic chimerism between quail and chick and with the collaboration of I. Cobos and S. Martinez we have shown a subdivision of cerebral oligodendrocytes into a caudal population with radial and limited migration displaying a segmentary development, and a rostral population which is prosencephalic and shows extensive tangential migration
Ce travail examine le developpement spatio-temporel du lignage oligodendrocytaire chez l'embryon d'oiseau. Une premiere partie concerne la specification des progeniteurs oligodendrocytaires. Une seconde etudie les migrations des progeniteurs oligodendrocytaires. Chez la souris, des cellules oligodendrocytaires emergent de territoires restreints et discontinus le long du tube neural caracterises par l'expression des transcrits du gene plp/dm20 spassky et al. , 1998. Mon travail a d'abord consiste a savoir si chez l'oiseau, comme chez les mammiferes, l'expression du gene plp/dm20 defini egalement un lignage cellulaire oligodendrocytaire. Une etude comparative de l'expression du gene plp/dm20 et de marqueurs etablis du lignage oligodendrocytaire a ete conduite au cours du developpement embryonnaire chez le poulet. Elle a permis de proposer une cartographie des foyers ventriculaires d'oligodendrogenese et de demontrer que l'emergence des oligodendrocytes est tres precoce et concomitante a celle des premiers neurones. Mon etude a ensuite concerne les voies de migration des precurseurs oligodendrocytaires depuis leur foyer d'origine. En utilisant le systeme des chimeres embryonnaires caille-poulet et grace a la collaboration d'i. Cobos et s. Martinez, nous avons mis en evidence une compartimentation des oligodendrocytes cerebraux en une population caudale aux migrations radiaires limitees et au developpement segmentaire, et une population rostrale, prosencephalique, aux migrations tangentielles extensives. Nous avons egalement montre que chez le poulet l'aire entopedonculaire est la source unique de tous les oligodendrocytes du telencephale

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Liu, Zichuan. "Topologie nucléaire et reprogrammation embryonnaire au cours du développement préimplantatoire." Versailles-St Quentin en Yvelines, 2011. http://www.theses.fr/2011VERS0047.

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Abstract:

L’organisation du génome semble jouer un rôle important dans l’expression des gènes. L’objectif de cette thèse était de tester cette hypothèse au cours de la reprogrammation, après fécondation ou transfert de noyau (TN) chez les mammifères. Nous avons utilisé en TN des noyaux de cellules somatiques et nous avons analysé l’hétérochromatine péricentrique et centrique connue pour former des super-structures chromatiniennes. Après TN, un remodelage vers une organisation de type embryonnaire a été observé mais avec de fréquentes anomalies. Un traitement transitoire avec la TSA (inhibiteur d’histones désacétylases) a nettement amélioré ce remodelage ainsi que le développement à terme. Nous avons aussi dérivé des cellules souches pluripotentes induites (iPS) de souris à partir de plusieurs types de cellules somatiques. Après TN de ces cellules, un rajeunissement des télomères a été observé, en corrélation avec le potentiel de développement des embryons TN. L’ensemble de ces résultats suggère qu’une réorganisation spatio-temporelle adéquate de l'hétérochromatine constitutive dans l’embryon très précoce est essentielle pour le développement ultérieur
Genome organization is thought to have an important role in gene expression. The objective of this thesis was to test this hypothesis during mammalian early reprogramming after fertilization and upon nuclear transfer (NT), in mouse and rabbit. First, we used somatic cells as donors for NT. We focused on pericentric/centric heterochromatin known to form higher-order chromatin structures. We observed that remodeling into an embryonic-like organization occurs after NT also anomalies were frequently observed. Remarkably, a transient treatment with the histone deacetylase inhibitor TSA, clearly improved remodeling; this correlated with further developmental potential. Second, we performed NT with induced pluripotent stem cells (iPS cells) derived from different somatic cells. We observed rejuvenation of telomeres after NT that correlated with developmental potential of these NT. Together, the results suggest that proper spatio-temporal reorganization of constitutive heterochromatin at the very early embryonic stages is essential for further development

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Thisse, Bernard. "Clonage et étude de l'expression d'un gène impliqué dans le développement embryonnaire de la drosophile le gène Twist /." Grenoble 2 : ANRT, 1987. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb376103112.

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Fernandes, Isabelle. "Etude fonctionnelle des protéines à domaine Zona Pellucida au cours de la morphogenèse épidermique embryonnaire chez la Drosophile." Toulouse 3, 2009. http://thesesups.ups-tlse.fr/767/.

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Abstract:

Le domaine Zona Pellucida (ZP) définit une famille de protéines membranaires conservées au cours de l'évolution. Cependant le rôle de ces protéines au cours du développement reste encore mal caractérisé. Par une approche génétique chez la drosophile, nous montrons qu'un ensemble de huit protéines ZPD est nécessaire à la réorganisation localisée du compartiment apical au cours de la morphogenèse épidermique embryonnaire. Malgré la conservation structurale des domaines ZP, ces protéines possèdent des fonctions spécifiques dans le remodelage de la forme apicale des cellules épidermiques. En effet, la perte de fonction de l'une des protéines ZPD ne peut être compensée par la surexpression d'une autre. Chacune de ces protéines se localise dans des régions distinctes du domaine apical ne se recouvrant que très partiellement. De plus, l'absence d'une protéine ZPD entraîne un détachement localisé entre la membrane et la matrice extracellulaire apicale (aECM). Ainsi, chacune de ces protéines s'accumule dans une sous-région distincte du compartiment apical, où elle va organiser des interactions entre la membrane apicale et l'aECM. Nous montrons que cet échafaudage de protéines ZPD est nécessaire pour sculpter la forme des extensions cellulaires et maintenir l'intégrité apicale des cellules qui vont les former. Les protéines ZPD révèlent une sous-compartimentalisation fonctionnelle de la membrane apicale, nécessaire au contrôle du changement de la forme des cellules épithéliales au cours du développement
The Zona Pellucida Domain (ZPD) defines a conserved family of membrane-anchored matrix proteins that are as yet poorly characterized with respect to their functions during development. Using genetic approaches in flies, we show here that a set of 8 ZPD proteins is required for the localized reorganization of embryonic epidermal cells during morphogenesis. Despite varying degrees of sequence conservation, these ZPD proteins exert specific and non-redundant functions in the remodeling of epidermal cell shape. Each one accumulates in restricted sub-regions of the apical compartment, where it organizes local interactions between the membrane and the extracellular matrix. In addition, ZPD proteins are required to sculpture the actin-rich cell extensions and maintain appropriate polarization of the apical compartment. These results on ZPD proteins therefore reveal a functional sub-compartmentalization of the apical membrane and its role in the polarized control of epithelial cell shape during development

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Thisse, Bernard. "Clonage et etude de l'expression d'un gene implique dans le developpement embryonnaire de la drosophile : le gene twist." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 1987. http://www.theses.fr/1987STR13166.

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Goriely, Anne E. "Origine et développement du système nerveux périphérique de l'embryon de Drosophile." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 1991. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/213014.

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Pélissier, Anne Denise Eva. "Etude de la morphogenèse épithéliale dans l'embryon de drosophile." Aix-Marseille 2, 2006. http://theses.univ-amu.fr.lama.univ-amu.fr/2006AIX22036.pdf.

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Abstract:

J’ai étudié deux événements majeurs de la morphogenèse épithéliale : la formation et le remaniement de l’épithélium. Mon modèle était l’épithélium primaire de l’embryon de drosophile. J’ai montré que pendant la cellularisation, l’endosome de recyclage est un intermédiaire clé pour la croissance de la membrane plasmique qui intègre le trafic des voies de sécrétion et de recyclage. Après la cellularisation, l’intercalation cellulaire épithéliale conduit à l’extension de la bande germinale. J’ai d’abord montré que l’endocytose dépendant de la clathrin contrôle l’adhérence cellulaire dans ce contexte en fragmentant les jonctions adhérentes. J'ai aussi étudié comment les jonctions sont remodelées d’une façon spatio-temporelle stéréotypée. J’ai découvert un nouveau régulateur clé de ce processus, CdGAPr. CdGAPr est activé par Myosin II seulement dans les jonctions adhérentes à désassembler, où il recrute les Rho-GTPases activées pour remodeler les jonctions
I studied two major aspects of epithelial morphogenesis : epithelial formation and remodelling. My model was the primary epithelium of the Drosophila embryo. First, by characterising intracellular traffic pathways during cellularisation, I identified the recycling endosome as a key intermediate for plasma membrane growth which integrates traffic from the secretory pathway and from the plasma membrane. After cellularisation, epithelial cell intercalation leads to the germ band elongation. I first showed that in this context clathrin-dependant endocytosis regulates cell adhesion by partitioning homophilic adhesion complexes thus allowing for junction remodelling and epithelial dynamics. I also studied how junctions are remodelled in a spatio-temporal stereotyped fashion during cell intercalation. I identified CdGAPr as a new key regulator of this process. CdGAPr is activated by Myosin II only in shrinking adherens junctions, where it recruits activated Rho-GTPases to remodel junctions

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Massicotte, Lyne. "Traduction des ARNM maternels d'ovocytes bovins impliqués dans le développement embryonnaire." Thesis, Université Laval, 2006. http://www.theses.ulaval.ca/2006/23641/23641.pdf.

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Abstract:

Durant sa croissance, l’ovule entrepose des organelles, des protéines et des ARNm dits maternels qui permettront de supporter les premières étapes du développement embryonnaire dans le but primordial d’activer le génome embryonnaire. Un ovocyte capable de supporter cette étape est dit compétent au développement embryonnaire. Le premier objectif avait pour but de déterminer des populations d’embryons ayant différents niveaux de compétence au développement. Le développement d’une nouvelle approche, la triple sélection consiste à utiliser en même temps deux caractères reliés à l’ovule tels que la taille d’origine de son follicule et la morphologie de son complexe cumulus-ovocyte, et un caractère relié à l’embryon, soit le temps du premier clivage. Les différentes populations générées par la sélection permettront ainsi la recherche des facteurs de compétence au développement. Le deuxième objectif avait pour but de connaître le protéome traduit de la traduction des ARNm maternels lors du développement embryonnaire, ainsi que de connaître les besoins constants en protéines de l’embryon, mais également de l’ovocyte, soit les protéines "housekeeping" maternels. Cette expérience a démontré clairement que suite à la reprise de la méiose (Coenen et al., 2004) et ensuite de la fécondation, la traduction des ARNm maternels présente un continuum d’évènements qui mène à l’activation du génome embryonnaire. Malgré un réservoir commun d’ARNm, les besoins lors de la maturation de l’ovocyte et lors du développement de l’embryon sont loin d’être les mêmes. Seulement une cinquantaine de protéines sont communément traduites lors de ces deux évènements cellulaires. Onze de ces protéines ont été identifiées : les protéines de choc thermique 71 et 70, la cyclophiline A (2 fois), la glutathione-S-transférase mu 5, la protéine épithéliale liant les acides gras, la 2,3-biphosglycérate mutase, la sous-unité epsilon TCP-1 de la chaperonine, l’ubiquitine carboxyl-terminal hydrolase isozyme L1, l’enzyme conjuguant l’ubiquitine E2D3 et l’isoforme alpha et gamma de l’actine. Le troisième objectif avait pour but de déterminer des facteurs de compétence au niveau de l’embryon à 2-cellules basé sur les populations observées lors de la triple sélection. Nous ii avons compris la traduction des ARNm maternels dans les embryons incompétents au développement. Ces derniers présentent une traduction basale des ARNm maternels, tandis que les plus compétents présentent bon nombre de protéines exclusives qui représentent des facteurs de compétence potentiels. Afin d’identifier ces facteurs de compétence, nous avons pu observer que les protéines traduites lors du développement embryonnaire ne sont que transitoires, observation supportée également par la seconde expérience. Les protéines ne s’accumulent pas dans le cytoplasme rendant ainsi leur identification très difficile. Malgré tout, six protéines ont été identifiées: la thiolase cytosolique, l’isocitrate déshydrogénase, la peroxiredoxine 6, la sous-unité alpha du proteasome-6 et la thiamine triphosphatase. Deux protéines « housekeeping » d’origine maternelle découvertes durant l’expérience précédente sont également moins présentes dans les embryons non compétents. De ces expériences de protéomique a découlé une nouvelle méthode de confirmation de l’identification des protéines, la confirmation in silico. Le génome et le protéome de Bos taurus étant limité, l’identification de nos protéines a souvent été faite soit chez d’autres espèces ou uniquement à partir de fragments d’ADN des banques de EST de Bos taurus. Cette méthode permet donc de reconstruire le messager bovin, d’en traduire la protéine bovine, d’identifier le patron peptidique théorique et de le comparer à nos résultats de séquençage, augmentant ainsi le recouvrement de notre protéine. En conclusion, la protéomique de la compétence au développement de l’ovocyte bovin a permis l’identification de candidats qui comparativement à la génomique sont plus restreints. Une nouvelle méthode a découlé de ces expériences. La confirmation in silico permet maintenant la confirmation des protéines identifiées sans utilisation de matériel supplémentaire.
During the growth and the maturation of the oocyte, organelles, proteins and mRNA known as maternal are stockpiled in order to prepare and supply material to the developing embryo in the main goal to activate the embryonic genome. An oocyte that is able to supply to this step is called developmental competent. The objective of the first experiment was to determine an embryos population with different level of developmental competence. The triple selection lies in two characters related to the oocyte, which are the follicular size and the morphology of the COC and one is related to the embryo, which is the time of first cleavage post insemination. The different population generated by this selection has provided a population highly competent to development and a population lacking developmental competence that will be useful for the study of developmental competence. The objective of the second experiment was the study of the proteomic of the translated maternal mRNA during the early embryo development. We wanted to know which proteins play the role of maternal housekeeping proteins during oocyte maturation and early embryo development. This experiment has clearly demonstrated that when the oocyte resume meiosis (Coenen et al., 2004) and after fertilization, the translated protein pattern follows a continuum events which conducts embryo to his activation. Although they are supply by the same reservoir of mRNA, the needs of the oocyte and the embryo are different. Only about fifty proteins are commonly translated during oocyte maturation and early development. Eleven of them have been identified: HSC71; HSP70; CypA (2 times); UCHL1; GSTM5; Cct5; E-FABP; 2,3-BPGM, ubiquitin-conjugating enzyme E2D3; and β- actin/γ-actin. The third experiment consists of the discovery of factors related to developmental competence. Three populations from the triple selection with high, low and developmental competence was compared by a proteomic study. This study has shown that developmental incompetent embryos translate a minimum of maternal mRNA, which the majority is the embryo housekeeping found in the previous study. Whereas high and low developmental iv competent embryos present shared and exclusive translated proteins, these proteins represent potential factors related to developmental competence. By trying to identify these proteins, we have found that most translated proteins are transient and are not accumulated in the cytoplasm. In spite of this observation, we have identified six proteins: cytosolic thiolase, isocitrate dehydrogenase 1, peroxiredoxin 6, proteasome-α6, hypothetical protein My027 and thiamine triphosphatase. Two maternal housekeeping proteins were also missing for the incompetent 2-cell embryos: UCH-L1 and CypA. From these experiments, a new method of protein identification confirmation, called in silico confirmation, was developed. As the genome and the proteome of Bos taurus is limited, the protein identification was made in foreign species or from Bos taurus EST databases. This method as made possible to rebuilt the bos taurus messager, to translate the bovine protein, find his theoretical peptide mass fingerprint and compare it to the experimental spectrum and thus increase the number of matched peptides. In conclusion, the proteomic study on the developmental competence of the bovine oocyte has identified of a reduce number of candidates compared to genomic studies. A new method has been developed during this work. The in silico confirmation allowed the confirmation of protein identification without additional material.

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Mucchielli, Marie-Laurence. "Caractérisation de gènes à homéoboîtes impliqués dans le développement embryonnaire murin." Aix-Marseille 2, 1997. http://www.theses.fr/1997AIX22016.

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Abstract:

Ce travail a consiste a rechercher des homeogenes murins impliques dans le developpement du systeme nerveux, et plus particulierement des homologues fonctionnels et structuraux du gene phox2a. Les deux strategies utilisees, le criblage d'expression a l'aide d'un site reconnu par phox2a et le criblage par pcr avec des oligonucleotides degeneres de banques construites a partir d'embryons de 11-12 jours pc, nous ont permis de cloner plusieurs nouveaux genes a homeoboites. Deux d'entre eux, otlx2 et barx1, ont ete etudies plus precisement. Otlx2 appartient a la famille paired. Son homologue humain rieg est implique dans une pathologie hereditaire humaine, le syndrome de rieger. Otlx2 s'exprime a partir de 7,5 jours pc dans divers endroits de l'embryon. Nous avons etudier son profil d'expression dans le cerveau, l'hypophyse et le germe dentaire, mais il s'exprime aussi dans le mesoderme des somites, les precurseurs musculaires du bourgeon des membres, ainsi que dans le mesenchyme perioculaire. Otlx2 s'exprime precocement dans l'epithelium oral et se restreint ensuite aux derives epitheliaux des germes dentaires. Il est present dans la poche de rathke (future adenohypophyse) des le debut de sa formation. A 9,5 jours pc, otlx2 apparait dans le cerveau anterieur puis son expression se limite progressivement a certains noyaux. Son profil d'expression correle avec le modele de segmentation prosomerique du cerveau anterieur. Barx1, un homeogene de la famille barh1, s'exprime a 8,5 jours pc dans du mesenchyme derives des cretes neurales des premier et deuxieme arcs branchiaux ainsi que dans le territoire presomptif de l'estomac. Ensuite, il s'exprime dans divers territoires mesenchymateux de la face puis, se restreint progressivement a la papille mesenchymateuse des molaires. Il n'est jamais detecte dans la papille des incisives. Barx1 pourrait donc etre implique dans la differenciation des molaires par rapport a celle des incisives

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Borensztein, Maud. "Rôle des gènes Myod et Igf2 dans le développement embryonnaire murin." Paris 6, 2010. http://www.theses.fr/2010PA066374.

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Abstract:

Le développement du muscle squelettique murin s’effectue sous le contrôle de plusieurs facteurs de transcription tels que Myod et Myf5. Les facteurs de croissance IGF (Igf1 et Igf2) sont également impliqués. Pour étudier les interactions entre Myod et Igf2, un modèle murin d’invalidation de ces gènes a été obtenu. Bien que les animaux simples mutants soient viables, les souris Myod-/- Igf2-/- présentent une létalité périnatale, due à une insuffisance respiratoire. Des analyses histologiques, à 18,5 dpc, ont montré une atrophie importante du diaphragme ainsi qu’une hypertrophie du tissu adipeux brun des doubles mutants en comparaison aux contrôles. Etonnamment, l’atrophie musculaire est spécifique du diaphragme et s’explique par un nombre réduit de fibres. De plus, une désorganisation importante des sarcomères a été mise en évidence et la capacité contractile du diaphragme est sévèrement réduite en comparaison aux diaphragmes contrôles. Enfin, les interactions moléculaires ont été étudiées dans le diaphragme et les muscles des cuisses à 18,5 dpc. Nous avons pu montrer l’existence d’une boucle de rétrocontrôle négative entre Myod et Igf2, au niveau transcriptionnel, ainsi qu’un contrôle de l’expression de Myod et Myf5 par Igf2, de façon spécifique au diaphragme. Des expériences de ChIP ont mis en évidence une fixation du facteur de transcription Myod au niveau d’une séquence activatrice contrôlant l’expression du locus Igf2/H19, spécifiquement dans les tissus mésodermiques. Enfin, une expérience de 3C a permis de corroborer l’interaction de cette séquence activatrice du mésoderme avec le promoteur H19, permettant l’introduction d’un nouvel acteur dans la myogenèse.

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Reignier, Arnaud. "Analyses du développement embryonnaire humain pré-implantatoire : comprendre pour mieux choisir." Thesis, Nantes, 2020. http://www.theses.fr/2020NANT1033.

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Abstract:

Depuis les débuts de !'Assistance Médicale à la Procréation, le choix de l'embryon à transférer est une problématique majeure. En plus de l'évaluation morphologique embryonnaire, la technologie time-lapse avec l'analyse de la morphocinétique offre des résultats prometteurs mais pas une amélioration franche de la sélection embryonnaire étant donné l'hétérogénéité des cohortes étudiées et le caractère manuel de l'annotation embryonnaire. L'analyse externalisée de plusieurs modèles morphocinétiques prédictifs de la grossesse, et principalement le KIDScore ™ Day 5, sur notre base de données a confirmé une corrélation entre le score embryonnaire et les chances de grossesse mais aussi leur faible pouvoir prédictif de la grossesse. Une revue de la littérature conclut à l'absence de paramètre morphocinétique capable de prédire suffisamment précisément le statut chromosomique de l'embryon. La technologie time-lapse ne peut donc pas être utilisée seule dans ce but et ne peut pas substituer la biopsie embryonnaire et l'analyse génomique associée dans le DPI-A ou la recherche de translocation. Les résultats précédents pouvant être expliqués par une hétérogénéité dans l'annotation manuelle de la morphocinétique embryonnaire couplée à l'absence d'étude multicentrique de grande échelle, nous avons développé un outil d'annotation morphocinétique totalement automatisé par analyse d'images. Cet outil est capable d'annoter rapidement et de façon reproductible des larges bases de données morphocinétiques
Since the beginning of Assisted Reproduction, the choice of the embryo to be transferred has been a major issue. ln addition to the morphological evaluation, time-lapse technology with morphokinetic analysis offers promising results but not a clear improvement in embryo selection, given the heterogeneity of the cohorts studied and the manual nature of embryo annotation. The externalized analysis of several morphokinetic models predictive of pregnancy, mainly KIDScore™Day 5, on our database has confirmed a correlation between embryo score and chances of pregnancy but also their low predictive power of pregnancy. A review of the literature concluded that no morphokinetic parameter is capable of predicting the chromosomal status of the embryo with sufficient accuracy. Therefore, time-lapse technology alone cannot be used for this purpose and cannot substitute embryo biopsy and associated genomic analysis in PGD-A or translocation research. Since the previous results can be explained by heterogeneous manual annotation of morphokinetics events in addition to the lack of large-scale studies, we have developed a fully automated morphokinetic annotation tool by image analysis. This tool is able to quickly and reproducibly annotate large morphokinetic databases

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Jenzer, Céline. "Physiopathologie de l’autophagie au cours du développement embryonnaire chez Caenorhabditis elegans." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2016. http://www.theses.fr/2016SACLS201.

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Abstract:

La macroautophagie est un processus cellulaire qui permet la dégradation et le recyclage de constituants cytoplasmiques par formation de vésicules à double membrane, les autophagosomes qui fusionnent ensuite avec les lysosomes. Ce processus intervient dans divers processus physiologiques tels que le développement, la longévité, la mort cellulaire et dans des pathologies humaines comme des cancers ou maladies neurodégénératives. Mes travaux de thèse ont révélé l’existence de rôles séquentiels et spécifiques des protéines autophagiques, LGG-1 et LGG-2, homologues d’Atg8/LC3 chez le nématode Caenorhabditis elegans. Cette étude a été réalisée dans l’embryon précoce sur une population particulière d’autophagosomes responsables d’un processus physiologique stéréotypé : la dégradation des mitochondries paternelles au moment de la fécondation. Nous avons montré que LGG-1 est recruté au niveau des autophagosomes précoces et permet le recrutement de LGG-2 qui intervient plus tardivement dans le processus autophagique pour permettre la fusion des autophagosomes avec les lysosomes. De plus, la fonction de LGG-1 peut être complémentée par son homologue humain témoignant de l’intérêt du système modèle C. elegans pour l’analyse des homologues d’Atg8.Par ailleurs, des études récentes ont démontré que la protéine autophagique LC3 était recrutée au cours de la phagocytose des corps apoptotiques. Ce processus a été appelé LAP pour LC3-associated phagocytosis. Par des approches génétiques et cellulaires, utilisant la microscopie optique et électronique, j’ai montré qu’il existait une implication différente de protéines autophagiques LGG-1 et LGG-2 dans la dégradation des corps apoptotiques chez C. elegans. La protéine LGG-2, spécifiquement, joue un rôle dans la cellule phagocytaire afin de dégrader le corps apoptotique. Ces travaux suggèrent également une implication de l’autophagie dans le corps apoptotique pour permettre la phagocytose
Macroautophagy is a major ubiquitous catabolic process which allows the bulk degradation and recycling of cytoplasmic constituents by formation of double membrane vesicles called autophagosomes which then fuse with lysosomes. This process is involved in a large variety of physiological processes such as development, anti-aging, cell death and in human pathologies like cancers or neurodegenerative diseases. My thesis work revealed the existence of sequential and specific roles of autophagic proteins LGG-1 and LGG-2, homologs of Atg8/LC3 in Caenorhabditis elegans. In this study, we focused on a particular population of autophagosomes involved in a physiological process in early embryos: the degradation of paternal mitochondria during fertilization. We showed that LGG-1 is recruited at the early autophagosomes and allows LGG -2 recruitment which acts later in the autophagic process to allow the fusion of autophagosomes with lysosomes. Moreover, the function of LGG -1 can be complemented with its human homologs revealing the interest of the C. elegans model system for analyzing Atg8 homologs.Furthermore, recent studies have identified the recruitment of autophagic proteins during phagocytosis of apoptotic cells in the so called LC3-associated phagocytosis (LAP). By genetic and cellular approaches, using optical and electron microscopy, I showed that there is a different involvement of autophagic proteins, LGG-1 and LGG-2 in the degradation of apoptotic cells in C. elegans. LGG-2 protein, specifically, plays a role in phagocytic cell to degrade apoptotic corpses. Moreover, this work suggest a function of autophagy in the apoptotic corpses to allow phagocytosis

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Hamidi, Jamal. "Etude des stades précoces de développement embryonnaire : coculture in vitro dans l'oviducte et sur mono couches de cellules épithéliales tubaires." Lyon, INSA, 1990. http://www.theses.fr/1990ISAL0022.

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Abstract:

Chez de nombreuses espèces de mammifères, les embryons résultant d'une fécondation in vitro ou manipulés aux stades précoces de développement, se bloquent ou voient leur viabilité sévèrement altérée. Deux hypothèses sont relatées dans la littérature concernant l'origine du blocage embryonnaire : l'une privilégiant les facteurs cytoplasmiques maternels, l'autre faisant intervenir de manière équivalente le cytoplasme et le noyau. Nos résultats, obtenus avec les expériences de rétro-croisements, plaident plutôt en faveur d'une hypothèse cytoplasmique. Dans l'étude des relations oviducte-embryon, les résultats sont souvent contradictoires, notamment pour l'hormona-dépendance. La coculture d'embryons dans l'oviducte impubère in vitro sans traitement hormonal et sans sérum, nous a permis d'affirmer la non hormona-dépendance des facteurs embryo-trophiques et l'aptitude de l'oviducte impubère à assurer le développement embryonnaire précoce. D'autre part, nous avons montré que les sécrétions tubaires in vivo comme in vitro, ne sont pas embryo-dépendants : la présence d'embryons n'induit pas d'augmentation d'AMP cyclique ni d'influx d'acides aminés libres dans l'oviducte. La coculture d'embryons sur des monocouches de cellules épithéliales tubaires, comme dans le cas de coculture dans l'oviducte in vitro, a permis des taux importants de déblocage embryonnaire avec maintien de la chronologie, de la morphologie et de la viabilité embryonnaire. Ces performances ne semblent ni spéci-spécifiques ni strictement tissu-spécifiques
[Embryos of many species of mammals do not lead to normal cleavage and development, with lost of viability, when they are manipulated in vitro out of their natural site. Two hypothesis are described in literature about the origin of this "Cell-block" : One is related to maternal cytoplasmic factors, the second one equally involves cytoplasm and nucleus. Our results, obtained with back-cross experiments, are in agreement with cytoplasmic hypothesis. In the study of oviduct-embryo relationships and of "embryo-trophic factors" implication, results are always contradictory, especially for hormone dependence (WHITTINGHAM, 1968 ; MINAMI et al. , 1988). Using the technique of coculture in prepubertal oviduct, without any serum addition or hormonal treatment, we can now assert the non hormone dependence of embryotrophic factors and the aptitude of prepubertal oviduct to sustain the early embryo development (HAMIDI et al. , 1988 ; MENEZO et al. , 1989). Moreover, we have demonstrated that the tubular secretions are not embryo dependent: embryo don't induce increased cAMP level nor amino acids influx in the oviduct. Furthermore, using a substitute of serum, Ultroser G, we obtained for the first time a confluent monolayers of epithelial cells derived from mouse oviduct. Embryo coculture on those monolayers allowed an important level of embryo development with maintenance of chronology, morphology and viability. This performance does not seem specie-specific nor strictly tissue-specific. About the metabolism of glucoside, the modification of culture medium by epithelial cells (monolayers), is in agreement with the observation of CHA TOT et al. (1989) ; however, this result is not confirmed by the use of other cell supports. ]

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Delmas, Vincent. "Morphométrie du rein au cours du développement embryonnaire et chez l'homme adulte." Paris 5, 1985. http://www.theses.fr/1985PA05S008.

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Hamel, Patrice. "Modélisation de la chronologie du développement embryonnaire du meunier noir, catostomus commersoni." Thèse, Université du Québec à Trois-Rivières, 1996. http://depot-e.uqtr.ca/5124/1/000626117.pdf.

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Schaeffer, Valérie. "Rôle de Bicoid chez la drosophile : intercations avec Hunchback et Torso." Montpellier 2, 1999. http://www.theses.fr/1999MON20102.

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Abstract:

Lors du developpement precoce de la drosophile, le plan de l'embryon est defini par quatre systemes maternels. La molecule-cle du systeme anterieur est bicoid, facteur de transcription a homeodomaine. Il a ete montre que bicoid etait aide par un autre morphogene anterieur, hunchback. Bod et hb sont capables d'agir en synergie pour organiser un developpement anterieur correct. Le mecanisme moleculaire propose pour cette synergie fait intervenir des facteurs specifiques de la machinerie generale de transcription, les tafs. Dans un premier temps, nous avons ete amenes a tester la signification biologique des ces resultats in vivo. Des mouches transgeniques portant des deletions de la proteine bicoid ont montre que les domaines putatifs d'activation de la transcription de bicoid etaient dispensables pour son activite in vivo. Ceci suggere que les interactions observees in vitro avec des composants specifiques de la machinerie generale de transcription ne sont pas essentiels pour un developpement anterieur correct. Le systeme terminal anterieur a longtemps ete implique dans la modification de l'activite de bcd. A l'extremite la plus anterieure, tor est connu pour avoir une fonction negative sur l'activite de bcd (retraction des genes cibles de bcd) tandis que dans les regions posterieures de la tete presomptive, tor semble plutot augmenter la fonction de bcd. Dans une deuxieme partie, nous montrons que de multiples copies de bcd sont capables de restaurer le phenotype anterieur des mutants du systeme terminal. Ceci signifie que le seul role de tor dans l'anterieur est d'aider bcd a effectuer sa fonction. Nous avons aussi montres que tor n'agit pas sur bcd mais qu'il existe deux voies d'activation differentes des genes cibles de tor et bcd. Ces observations sont consistantes avec l'hypothese de l'apparition recente d'un centre morphogenetique anterieur (bcd et anterieur tor) chez les dipteres superieurs.

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Sakr, Samy. "Fonction différentielle des protéines du groupe Polycomb durant le développement de la drosophile." Thesis, Montpellier 1, 2011. http://www.theses.fr/2011MON1T021/document.

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Abstract:

Les complexes du groupe Polycomb (PcG) sont des répresseurs transcriptionnels capables de maintenir un état inactivé de la chromatine au niveau de leurs gènes cibles via des modifications post-traductionnelles des histones. Historiquement définis comme des répresseurs des gènes homéotiques, les protéines du PcG sont maintenant reconnues comme des répresseurs de gènes contrôlant le cycle cellulaire. Dans cette étude nous avons appréhendé l'implication des gènes du PcG E(z), Su(z)12, Pc, ph, Sce, Scm et Psc-Su(z)2 dans le contrôle de l'état prolifératif des cellules épithéliales des disques imaginaux in vivo. En utilisant des mutations nulles de ces gènes, nous avons étudié l'implication de ces protéines dans des processus biologiques tels que la prolifération, la croissance cellulaire, la différentiation et l'apoptose dont la dérégulation est associée à la tumorigénèse. Au cours de ce travail, nous avons constaté que les complexes du PcG ne se comportent absolument pas comme attendu : non seulement les différentes protéines composants le complexe PRC1 n'assument pas les mêmes fonctions, mais, par ailleurs, les complexes PRC1 et PRC2 ne collaborent pas et présentent même des effets antagonistes. Ainsi, nous avons répartit ces protéines dans deux sous-groupes : Le premier contient PH et Psc-Su(z)2 et agit comme suppresseur de tumeurs. Le deuxième groupe contient E(z), Su(z)12 et PC, des protéines qui favorisent la prolifération cellulaire plutôt que de l'inhiber. Enfin, nous avons recherché les cibles dont la dérégulation pourrait corréler avec les phénotypes associés à ces mutants. Nous avons identifié que certaines voies de signalisations impliquées dans le développement de l'œil de la Drosophile sont régulées de façon opposés par les protéines de ces deux sous-groupes
Polycomb group (PcG) proteins are transcriptional repressors that were historically identified as regulators of homeotic genes. However, PcG proteins are now recognized as repressors of genes controlling the cell cycle. In this study we analyzed the role of the PcG genes E(z), Su(z)12, Pc, ph, Sce, Scm, and Psc-Su(z)2 in control of proliferation of epithelial cells in imaginal discs in vivo. Using null mutations of these genes, we investigated the involvement of these proteins in growth, differentiation and cell polarity. Surprisingly, we found that mutation of specific PcG proteins induce differential effects on the overall growth of the eye-antennal imaginal disc. In particular, we investigated the involvement of these proteins in biological processes such as proliferation, cell growth, differentiation and apoptosis, whose deregulation is associated with tumorigenesis. In this work, we found that PcG complexes do not behave as expected: different PRC1 proteins components do not assume the same functions, and PRC1 and PRC2 complexes may actually induce antagonistic effects. Thus, we have divided these proteins into two subgroups: The first contains PH and Psc-Su(z)2 and acts as tumor suppressors. The second group contains E(z), Su(z)12 and PC, and these proteins appear to favor cell proliferation. Finally, we looked for targets whose deregulation may correlate with the mutant phenotypes. We have identified several signaling pathways involved in Drosophila eye development that are regulated in an opposing manner in mutants of these two subgroups

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Jay, Philippe. "Identification et caractérisation de nouveaux gènes exprimés au cours du développement embryonnaire humain." Montpellier 1, 1997. http://www.theses.fr/1997MON1T003.

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Assou, Saïd. "Étude du transcriptome du développement embryonnaire précoce humain : ovocyte et cellules souches embryonnaires." Montpellier 1, 2008. http://www.theses.fr/2008MON1T014.

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Abstract:

La première semaine du développement embryonnaire humain (de la fécondation au stade blastocyste) comporte une série d'événements qui transforme des cellules hautement spécialisées, les cellules germinales, en des cellules indifférenciées au potentiel développemental extraordinairement vaste, les cellules souches embryonnaires humaines (CSEh). La compréhension de ces évènements est essentielle pour les progrès de l'assistance médicale à la procréation (AMP) et de la médecine régénératrice, deux domaines majeurs de la médecine de demain. Utilisant la technologie innovante des puces à ADN, nous nous sommes intéressés à l'expression des gènes dans les extrêmes de cette première semaine de développement : les ovocytes et les CSEh. Grâce à l'optimisation récente des techniques d'analyse du transcriptome, permettant d'étudier de très petites quantités de matériel cellulaire, nous avons obtenu le profil transcriptionnel des ovocytes humains au cours de leur maturation. Ce travail a montré que la sécurine PTTG3 et la kinase AURKC sont préférentiellement exprimés dans les ovocytes durant la méiose. Des facteurs de croissance fortement exprimés dans les ovocytes ont été aussi identifiés, tels que TNFSF13, FGF9, FGF14 et IL4, ainsi que les facteurs de transcription : OTX2, SOX15 et SOX30. L'analyse des cellules du cumulus, qui entourent les ovocytes, a permis la caractérisation des facteurs de communication inter-cellulaire mis en jeu par l'ovocyte au cours de sa maturation. Ces informations sont essentielles pour mieux appréhender la biologie ovocytaire, identifier de nouveaux marqueurs de maturité et de qualité ovocytaire, et elles ouvrent la voie à une stratégie de sélection des meilleurs embryons candidats à l'implantation basée sur l'analyse moléculaire des cellules du cumulus, afin d'améliorer le taux de succès de l'AMP. En parallèle, nous nous sommes intéressés aux CSEh. Ces cellules sont issues de la masse cellulaire interne du blastocyste (MCI), ont des propriétés d'auto-renouvellement et de différenciation qui en font des candidats attractifs pour une utilisation en thérapie cellulaire. Nous avons réussi la dérivation de 3 nouvelles lignées françaises de CSEh et avons étudié leur transcriptome, ainsi que celui de plus de 20 CSEh internationales. Également, nous avons identifié de nouveaux marqueurs membranaires tels que CD24 et la sémaphorine SEMA6A. Ces données transcriptomes ont été intégrées dans un atlas internet d'expression que nous avons créé : Amazonia http://amazonia. Montp. Inserm. Fr. Nous avons enfin, comparé le transcriptome des ovocytes et celui des CSEh, afin de mieux comprendre les évènements moléculaires qui sous-tendent la première semaine du développement humain. Ces résultats révèlent en particulier que le protéasome reste fortement surexprimé dans ces deux types cellulaires, par rapport à plus de 200 échantillons de tissus somatiques, suggérant ainsi un rôle de cette voie de dégradation protéique dans le maintien de la pluripotence. L'ensemble de ce travail a mené directement à des propositions pour l'amélioration des conditions de culture des CSEh, en particulier la mise au point d'un milieu de culture dépourvu de protéines animales, et pour l'amélioration de la reprogrammation cellaire des cellules adultes en cellules souches pluripotentes induites (iPS).

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Ruaud, Anne-Françoise. "Contrôle temporel du développement post-embryonnaire de Caenorhabditis elegans par des signalisations neuroendocrines." Paris 6, 2006. http://www.theses.fr/2006PA066581.

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Bellacosa, Alfonso. "Le locus MED1 dans la réparation de l'ADN et lors du développement embryonnaire." Paris 11, 2004. http://www.theses.fr/2004PA112247.

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Abstract:

L'enzyme de réparation de l'ADN par excision de bases MED1 (également connu sous le nom de MBD4) a été initialement identifiée comme une protéine interagissant avec la protéine de réparation de l'ADN pour défaut d'appariement MLH1. Cette dernière protéine agit comme une N-glycosylase de thymine et d'uracil au niveau des sites de mauvais appariements G:T et G:U des sites CpG. Les agents de méthylation forment une classe de drogues antitumorales et cause une cytotoxicité en induisant la formation de methylguanine-06 (06-meG). La 06-meG peut induire une mauvaise incorporation de thymine lors de la réplication, générant des mauvais appariements 06-meG:T. La protéine MED1 possède une activité thymine glycolsylase au niveau des mauvais appariements 06-meG. Nous avons généré des souris dont le gêne MED1 a été inactivé et avons préparé des fibroblastes embryonnaires de souris (MEFs) à partir de différents génotypes de Med1. A la différence des MEFs sauvages et hétérozygotes, les MEFs Med1-/- ne s'arrête pas en G2M ou ne rentre pas en apoptose lorsqu'elles sont traitées avec un agent méthylant comme le MNNG (N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine). La résistance des MEFs Med1-/- au MNNG est due à un mécanisme de tolérance, la quantité de dommage sur l'ADN est accumulée mais n'active pas l'activation de l'arrêt des cellules dans le cycle au niveau des points de vérification. Une létalité embryonnaire est observée dans le cas de l'allèle Med1 dont les axons 1 à 3 sont délétés mais pas dans le cas ou les exons 2 à 5. Cette différence de mortalité, peut être expliquée par l'inactivation du gêne voisin Wdr10; le gène Wdr10 partage une partie de l'exon 1 de Med1 dans l'orientation opposé
The base excision repair enzyme MED1 (also known as MBD4), identified as an interactor of the mismatch repair (MMR) protein MLH1, acts as a thymine and uracil DNA N-glycosylase specific for G:T and G:U mismatches at CpG sites. Methylating agents are a class of antitumor drugs that cause cytotoxicity by inducing O6-methyguanine (O6-meG). O6-meG can direct misincorporation of thymine during replication, generating O6-meG:T mismatches. MED1 was found to exhibit thymine glycosylase activity on O6-meG:T mismatches. We generated mice with targeted inactivation of the Med1 gene and prepared mouse embryonic fibroblasts (MEFs) with different Med1 genotype. Unlike wild type and heterozygous cultures, Med1-/- MEFs failed to undergo G2-M cell cycle arrest and apoptosis upon treatment with the methylating agent Nmethyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG). Resistance of Med1-/- MEFs to MNNG was due to a tolerance mechanism, because DNA damage accumulated but did not elicit checkpoint activation. Interestingly, steady state amounts of several MMR proteins are reduced in Med1-/MEFs, in comparison to Med1+/+ and Med1+/+ MEFs. Thus, MED1 has an additional role in DNA damage response to anti-tumor agents and is associated with integrity of the MMR system. Embryonic lethality in mice was caused by homozygosity for the targeted Med1 allele lacking exons 1 to 3, but not for the allele lacking exons 2 to 5. This discrepancy maybe explained by concurrent inactivation of neighboring gene Wdr10. Wdr10 shares a portion of exon 1 with Med1 in the opposite orientation. This suggests that the two genes may represent a functional unit necessary for normal development

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Lefeuvre, Bruno. "Rôle de l'innervation dans la myogénèse au cours du développement embryonnaire chez l'oiseau." Nantes, 1995. http://www.theses.fr/1995NANT2018.

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Abstract:

Nous avons analysé l'influence de l'innervation sur la différenciation des myoblastes des muscles lent anterior latissimus dorsi (ald) et rapide posterior latissimus dorsi (pld) de l'embryon de caille. In ovo, des cinq jours, les myotubes primaires de l'ald et du pld accumulent les isomyosines cardiaque ventriculaire, embryonnaire rapide et lentes (sm1 et sm3). Au septième jour l'ald exprime l'isoforme lente adulte sm2. L'évolution vers le phénotype adulte est marquée par la repression de l'isoforme cardiaque ventriculaire dans les deux muscles et l'inhibition de la myosine rapide embryonnaire dans l'ald vers dix jours, cette isoforme persistant dans le pld. Afin d'empêcher toute innervation des deux muscles, l'ablation du tube neural a été réalisée au stade dix-neuf somites. Dans ces conditions l'expression de la myosine cardiaque ventriculaire est inhibée dans les deux muscles et l'isoforme lente sm2 n'apparait pas dans l'ald. La myogenèse primaire a lieu, comme en témoigne l'expression de l'isomyosine rapide embryonnaire. Toutefois, les muscles aneuraux s'atrophient et dégénèrent. L'analyse de la différenciation in vitro des myotubes dérivés des myoblastes présomptifs lents et rapides ne montrent pas de différence au niveau des programmes d'expression des isomyosines. L'addition de neurones a des cultures de myoblastes d'ald induit l'apparition de l'isoforme lente adulte sm2. Dans les cultures de myoblastes provenant d'ébauches musculaires n'ayant jamais été innervées, suite a l'ablation du tube neural, l'expression des mhc est similaire a celle décrite précédemment, les myotubes forment des syncitia d'aspect compact renfermant de nombreux noyaux et présentent une désorganisation des myofibrilles. Ces résultats démontrent que le tube neural contrôle la différenciation des myotubes primaires et secondaires et notamment l'expression des isoformes de la myosine.

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Picardo, Michel. "Origine embryonnaire et propriétés morpho-physiologiques des neurones hubs de l'hippocampe en développement." Thesis, Aix-Marseille, 2012. http://www.theses.fr/2012AIXM4057.

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Abstract:

Nous avons récemment mis en évidence des neurones GABAergiques jouant un rôle de « hub » dans l'hippocampe immature, orchestrant la synchronisation neuronale via une arborisation axonale dense. Dans ma thèse, j'ai d'abord montré, grâce à des enregistrements électrophysiologiques par paires, que les hubs étaient connectés à de nombreux neurones par des synapses GABAergiques fonctionnelles (Bonifazi et al. 2009). Puis, en utilisant des souris mutantes conditionnelles où les neurones sont marqués en fonction de leur origine embryonnaire, j'ai démontré que les neurones GABAergiques générés le plus tôt formaient une famille de hubs. Ces neurones sont toujours présents chez l'adulte et deviennent des neurones GABAergiques de projection extrahippocampique. Ceci suggère que la fonction de ces neurones serait maintenue, du moins anatomiquement, au stade adulte
We have recently demonstrated the existence of functional hubs driving network synchronizations in the developing hippocampus. Hubs are a subpopulation of GABAergic neurons displaying widespread axonal projections. During my PhD, using paired electrophysiological recordings, I have shown that hub cells are synaptically connected to a large number of neurons (Bonifazi et al. 2009). Next, using genetic fate mapping approaches, I have demonstrated that early born GABAergic neurons constitute a subpopulation of hub cells. These pioneer hub cells remain into adulthood and develop into GABAergic neurons with an extrahippocampal projection (Picardo et al. 2011). This suggests that hub function may to retained into adulthood, at least structurally

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Soggia, Andrea. "Développement embryonnaire du pancréas chez la souris : étude du rôle de HIF-1alpha." Thesis, Paris 5, 2014. http://www.theses.fr/2014PA05T016/document.

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Abstract:

Le pancréas est une glande mixte à composantes endocrine et exocrine. Le tissu endocrine, essentiellement composé de cellules bêta productrices d’insuline, joue un rôle prépondérant dans le maintient de l’homéostasie glucidique. La perte qualitative ou quantitative des cellules bêta conduit au développement de pathologies caractérisées par une hyperglycémie chronique et connues sous le nom de diabète. Le développement de stratégies thérapeutiques innovantes, thérapie cellulaire ou médecine régénérative, pour guérir le diabète repose sur une connaissance précise des mécanismes développementaux impliqués dans la formation des cellules bêta. Ainsi, au delà de l’intérêt cognitif, il est primordial de comprendre au mieux les évènements cellulaires et moléculaires qui régissent l’organogénèse pancréatique pour offrir des thérapies alternatives. Le développement embryonnaire s’effectue dans un environnement où la pression partielle en oxygène (pO2) est faible. Par ailleurs, une étude menée au sein du laboratoire a montré que la pO2 influence la différenciation des cellules bêta pancréatique in vitro. En effet, lorsque des pancréas embryonnaires sont cultivés sur filtre en hypoxie (pO2=3%), le développement des cellules bêta est drastiquement diminué comparativement à une condition de 21% d’O2. Le facteur de transcription HIF-1 (Hypoxia Inducible Factor-1), composé d’une sous-unité alpha sensible au niveau d’oxygène et d’une sous-unité bêta constitutivement présente, permet à la cellule de s’adapter à un environnement pauvre en O2, notamment en favorisant la formation de nouveaux vaisseaux sanguins au cours d’un processus appelé angiogénèse. L’objectif de ma thèse était d’étudier le rôle de HIF-1alpha au cours du développement embryonnaire du pancréas in vivo. Pour cela, nous avons utilisé des lignées murines génétiquement modifiées permettant de stabiliser constitutivement la protéine HIF-1alpha dans l’épithélium pancréatique. En utilisant ce modèle murin, nous avons montré que la différenciation endocrine et le développement des cellules bêta est altéré dans les pancréas mutants comparativement aux contrôles. Par ailleurs, en utilisant une approche pharmacologique in vitro conduisant à l’ablation des cellules endothéliales du pancréas, nous avons pu restaurer une différenciation endocrine comparable aux contrôles. Ce travail a permis d’éclaircir le rôle de HIF-1 et de la vascularisation au cours du développement embryonnaire du pancréas. Nos résultats indiquent que ces paramètres doivent être pris en compte pour améliorer les protocoles actuels permettant de générer des cellules bêta in vitro
The pancreas is an endoderm-derived organ which is composed by both an exocrine and an endocrine compartment. Within the endocrine tissu, insulin-producing beta-cells are essential for the regulation of glucose homeostasis. The loss of beta-cells can lead to pathologies such as diabetes. Currently, people suffuring from diabetes can be treated but not permanently cured. The development of innovating therapeutical approaches, like cellular therapy or regenerative medecine, relies on the precise knowledge of the mechanisms regulating the ontogenesis of pancreatic beta-cells. Different studies have linked proper embryonic development and low-oxygen tension (pO2). Specifically, when embryonic pancreases are cultured in vitro under a hypoxic condition (pO2=3%), the beta-cells development is impaired compared to a normoxic condition (pO2=21%). Different pathways are involved in the cell adaptation to hypoxia, such as the ubiquitous Hypoxia Inducible Factor 1-alpha (HIF-1alpha). The aim of my PhD project was to elucidate the role of HIF-1alpha during pancreatic development in vivo. To do so, we used genetically modified mice allowing the constitutive stabilization of HIF-1alpha in pancreatic epithelial cells. We have shown that HIF-1alpha stabilization leads to a reduction of endocrine differentiation and beta-cells development. Moreover, using a pharmacological approach in vitro consisting in deleting endothelial cells, we rescued the endocrine differentiation in the mutant pancreases. In conclusion, my data demonstrated the negative influence of both HIF-1 and endothelial cells on endocrine differentiation processes

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Taelman, Vincent. "Etude du facteur de transcription XHRT1 dans le développement embryonnaire chez le xénope." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2005. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/211002.

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Abstract:

Le laboratoire d’Embryologie Moléculaire étudie les mécanismes moléculaires contrôlant le développement embryonnaire et utilise comme système expérimental l’embryon de xénope. En collaboration le laboratoire du Dr Daniel Christophe, nous avons abordé l’étude du gène XHRT1 chez le xénope. Ce gène est l’orthologue du gène HRT-1/Hey1/Hesr-1/HERP2/CHF2 de souris. Celui-ci, avec deux autres protéines apparentées (HRT2 et HRT3) forme une sous-famille de facteurs de transcription de type bHLH-O qui se différencient des autres facteurs bHLH-O par l’absence d’un motif carboxy-terminal de séquence « WRPW » et par la présence d’un nouveau motif carboxy-terminal conservé de séquence « TEI/VGAF ». Le rôle de ces facteurs HRT dans le développement est encore actuellement mal connu.

Dans un premier temps, nous avons déterminé le profil d’expression de XHRT1 au cours de l’embryogenèse. Nous avons observé que ce gène est fortement exprimé au stade neurula dans le plancher du tube neural, et que plus tardivement celui-ci est exprimé dans différentes régions du système nerveux, dans les somites et le dans le pronéphros. Comme attendu pour un membre de la famille des facteurs bHLH-O, nous avons également observé que l’expression précoce de HRT1 au niveau du plancher du tube neural est bien régulée par la voie de signalisation Notch.

Dans un deuxième temps, nous nous sommes intéressés au rôle et au mode d’action du facteur XHRT1 dans le développement du plancher du tube neural. Nous avons pu montrer que XHRT1 agit comme répresseur transcriptionnel et que cette répression nécessite la présence du domaine bHLH et de séquences en aval de celui-ci. Nous avons montré en embryon que la surexpression précoce de XHRT1 induit un blocage de l’expression des marqueurs du mésoderme et une augmentation de marqueur du plancher du tube neural, ce qui est en accord avec le modèle selon lequel la voie de signalisation Notch interviendrait dans le choix de la destinée des cellules de la région médiane en inhibant la différenciation des cellules en notocorde et en favorisant leur différenciation en cellules du plancher du tube neural. XHRT1 n’étant cependant activé qu’à partir du stade neurula, nous avons conclu que les effets observés n’étaient probablement pas dus à XHRT1 mais à un autre facteur bHLH-O apparenté exprimé plus précocement dans les cellules de la ligne mediane de l’embryon. Afin d’éviter ces effets non spécifiques précoces, nous avons utilisé un vecteur d’expression de XHRT1 permettant un contrôle temporel de l’activité de la protéine. Nous avons ainsi montré que l’activation de XHRT1 au stade neurula dans l’ectoderme inhibe la différenciation des cellules précurseurs neurales en neurones et qu’il pourrait ainsi jouer un rôle important dans le développement du plancher du tube neural. Nos résultats ont montré également que XHRT1 est capable d’homo- et hétérodimériser in vivo avec les facteurs Xhairy1 et Xhairy2b coexprimés avec XHRT1 dans le plancher du tube neural. Enfin, nous avons montré que les propriétés de dimérisation de XHRT1 sont dépendantes non seulement du domaine bHLH, mais aussi du domaine Orange et des séquences situées en aval, séquences jouant un rôle important dans le choix du partenaire.

Des travaux récents ayant montré que la voie de signalisation Notch joue un rôle important dans le développement du rein, nous avons voulu déterminer l’importance de XHRT1 dans le développement du pronéphros. Nos résultats ont montré que XHRT1 ainsi que d’autres facteurs bHLH-O sont exprimés de manière dynamique, d’abord dans le glomus puis dans la partie dorso-antérieure de l’ébauche du pronéphros à l’origine des tubules proximaux, et que leur expression est régulée positivement par Notch. La surexpression de XHRT1 à la fin de la neurulation inhibe la formation du canal et du tubule distal, tandis que l’inhibition de la traduction de la protéine entraîne une réduction de l’expression de marqueurs spécifiques des tubules proximaux et du glomus. Ces résultats démontrent que XHRT1 joue un rôle important comme médiateur de la voie de signalisation Notch dans le pronéphros.
Doctorat en sciences, Spécialisation biologie moléculaire
info:eu-repo/semantics/nonPublished

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González, Morales Nicanor. "L'intestin adulte comme modèle d'étude de l'asymétrie droite-gauche chez la Drosophile : couplage entre la myosine ID et la polarité planaire dans l'asymétrie droite-gauche chez la Drosophile." Thesis, Nice, 2014. http://www.theses.fr/2014NICE4071/document.

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Abstract:

L’asymétrie Droite-Gauche (DG) est responsable de l’empaquetage et l’enroulement stéréotypé des organes internes au cours du développement. Chez la Drosophile, l’intestin postérieur adulte (AHG) se développe asymétriquement selon l’axe DG en formant une boucle dextrale. Comme pour tous les organes asymétriques DG de la Drosophile, la mise en place de l’axe DG nécessite l’expression de la myosine non conventionnelle de type I : MyoID. Cette myosine se lie à la DE-Cadherine au niveau des jonctions adhérentes (AJ) pour mettre en place l’axe DG, mais le mécanisme moléculaire qui transforme la chiralité de MyoID en une morphogenèse asymétrique DG est totalement inconnu. Le AHG est un long tube situé au milieu de l’abdomen, qui présente une boucle dextrale dans sa partie proximale. Il se développe à partir d’un groupe de progéniteurs formés de deux populations de cellules : H1 et H2. Dans cette étude, nous avons mis en évidence que MyoID contrôle la formation de la boucle dextrale du AHG grâce à son interaction avec la cadhérine atypique Dachsous dans les cellules H1. De plus, nous avons pu mettre en évidence que la signalisation Dachsous-Fat est activée à travers les cellules H2 entrainant leur polarisation du coté droit, et ainsi formant l’enroulement du AHG. Les cellules H1 sont transitoires, elles disparaissent lors des premières heures de la métamorphose. Cependant, l’information dextrale générée dans les cellules H1 perdure dans les cellules H2 grâce à l’action coordonnée des composants de la polarité planaire. Nous montrons que la polarité planaire contrôle l’établissement de l’asymétrie DG en aval de MyoID, en transmettant l’information DG dans le AHG
Stereotyped left right (LR) asymmetry ensures proper looping of internal organs. In Drosophila, the adult hindgut (AHG) has a clear stereotypical dextral loop and, like all LR asymmetric organs, require MyoID for correct orientation. MyoID is an unconventional myosin type I that binds to DE-Cadherin, this association is required for proper LR establishment; however the mechanism that translates MyoID chirality into proper morphogenesis remains unknown. The AHG is a long tube coiled dextrally and located in the middle of the abdominal region. It develops from a cluster of progenitors containing two different populations of cells, H1 and H2. Here, we show that MyoID controls the AHG dextral loop by binding to the atypical cadherin Dachsous in H1 cells. Further, Ds-Fat signaling propagates towards the H2 cells which in turn become polarized towards the right and consequently loop. H1 is a transient population of cells that wear off in the first hours of metamorphosis; nevertheless the dextral information generated in H1 is maintained in H2 cells due to the cooperative action of PCP components. We demonstrate that the molecular basis of the LR establishment downstream of MyoID action lies in the PCP system, which has a double role transmitting and maintaining a dextral signal in the AHG. Thus, we provide for the first time a link in L/R morphogenesis between Drosophila and vertebrates in which PCP mutants result in L/R defects. Furthermore, in our attempts to better understand the evolution of L/R morphogenesis we found the recently co-Appearance of a myoID cis-Regulatory element and the AHG dextral loop, during Drosophila evolution, suggesting that changes in myoID express

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Abi, Nahed Roland. "Les phospholipases A2 au cours de la fécondation et du développement embryonnaire préimplantatoire : mécanismes moléculaires d'action et développement thérapeutique." Thesis, Université Grenoble Alpes (ComUE), 2015. http://www.theses.fr/2015GREAV031/document.

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La dégradation des fonctions de reproduction masculine dans les dernières décennies, et par suite, la baisse du taux de fertilité chez l'homme a renforcé les démarches de recherche des causes d'infertilité masculine, qu'elles soient génétiques, ou environnementales, mettant en œuvre les perturbateurs endocriniens ou d'autres produits reprotoxiques. Par ailleurs, les traitements palliatifs tels que l'aide médicale à la procréation ne permettent qu'à 1 couple sur deux d'obtenir une grossesse. La recherche vise donc également à définir de nouvelles pistes d'amélioration de ces techniques. Les phospholipases A2 (PLA2) sont des enzymes abondamment exprimées dans les organes reproducteurs mâles, le sperme éjaculé et dans le tractus génital femelle. Elles jouent des rôles importants dans la capacitation, la réaction acrosomique (RA) et la fécondation. Nous avons montré au laboratoire que la PLA2 murine secrétée de groupe X (mGX) est présente dans l'acrosome des spermatozoïdes de souris. Elle est libérée au cours de la RA et s'avère un inducteur puissant de la RA. Les mécanismes permettant ces effets sont encore mal connus. Par l'utilisation d'inducteurs et d'inhibiteurs des PLA2, sur des modèles murins wild type ou KO pour certaines PLA2, ce travail montre que durant la capacitation, l'activation des iPLA2 β permet de déclencher une RA spontanée dans une sous-population spécifique de spermatozoïdes. Au cours de la RA induite par la progestérone (P4), On a pu aussi valoriser le rôle des iPLA2 β qui initie la cascade de la RA et permet que les sPLA2 soient activées pour amplifier le déroulement de la réaction acrosomique. Par ailleurs, ce travail montre que l'effet de mGX sur le taux de fécondation et de développement embryonnaire ne dépend pas du taux de la RA. Cet effet obtenu grâce à mGX n'est pas observé avec d'autres sPLA2 (murine ou humaine), ni avec la P4 ce qui lui confère une propriété espèce dépendante
For the last ten years, the impairment of the male reproductive functions has highly increased, while the use of assisted reproductive techniques has also increased. Despite this evolution, the pregnancy rates obtained in in vitro fertilization (IVF) remain low, as only one in two couples will obtain a pregnancy after 4 attempts. Research has to discover new ways to gain in reproductive impact. Hence, many studies have recently been developed to test molecules that could improve the IVF results. Phospholipases A2 (PLA2s) are part of these molecules. They play an important role, because of their abundant expression in: male reproductive organs, in ejaculated sperm and in the female tract. Several studies have suggested a role for members of the secreted phospholipase A2 family in capacitation, acrosome reaction (AR), and fertilization. We demonstrated previously that sperm from mGX knock-out mice had a severely impaired fertilization potential in vitro, but the molecular nature of these enzymes and their specific functions have remained elusive. Our aims were to study the mechanism of the acrosome reaction by focusing on different kinds of PLA2 using inhibitors and knockout mice for each type of PLA2. We demonstrate the importance of iPLA2β in spontaneous AR occurring during capacitation. We also show that iPLA2β and sPLA2 of group X are both involved in progesterone (P4)-induced AR in mouse sperm. In addition we show that in the mouse neither P4 nor any of the other sPLA2s tested are able to mimic the IVF improvement obtained with mGX-treatment. We also demonstrate that this improvement obtained with phospholipase A2 murine group X is not dependent on the rate of AR. These results demonstrate that sPLA2s are not commutable in the context of mouse sperm fertility, indicating that group X sPLA2 is unique to improve fertility outcome

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Vanolst, Luc. "Pannier et le développement de la Drosophile : Un modèle de choix pour l'étude in vivo des enhancers." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2006. https://publication-theses.unistra.fr/restreint/theses_doctorat/2006/VANOLST_Luc_2006.pdf.

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Dissertations / Theses on the topic 'Développement embryonnaire de la drosophile'

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