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Dissertations / Theses on the topic 'Diagnostic biologique'
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1
Vergnot, Vincent. "Diagnostic biologique des adénomes cortisoliques infracliniques." Bordeaux 2, 1998. http://www.theses.fr/1998BOR23044.
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2
Rivalan, Olivier. "Brucellose : diagnostic biologique, épidémiologie et prophylaxie." Bordeaux 2, 1992. http://www.theses.fr/1992BOR2P027.
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3
Pomies, Catherine. "La maladie d'Alzheimer : perspectives de diagnostic biologique." Bordeaux 2, 1998. http://www.theses.fr/1998BOR2P046.
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4
Baylet, Sandrine. "Techniques appliquées au diagnostic biologique des mycoses." Paris 5, 1999. http://www.theses.fr/1999PA05P205.
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5
Eclache-Saudreau, Virginie. "Thrombopénies induites par l'héparine : difficultés du diagnostic biologique." Paris 5, 1989. http://www.theses.fr/1989PA05P121.
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6
Levillayer, Hugues. "Diagnostic biologique du paludisme d'importation : apport de l'ICT Malarie P.F.R." Paris 5, 1999. http://www.theses.fr/1999PA05P054.
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7
Lalloyer, Michel. "Diagnostic biologique de la vaginose bactérienne (vaginite non spécifique)." Montpellier 1, 1988. http://www.theses.fr/1988MON11161.
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8
Chaabane, Rym. "La néphropathie du diabétique : étiologie, diagnostic et surveillance biologique." Strasbourg 1, 1985. http://www.theses.fr/1985STR10462.
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9
Tardy-Poncet, Brigitte. "Diagnostic biologique et traitement des thrombopénies induites par l'héparine." Saint-Etienne, 1993. http://www.theses.fr/1993STET6413.
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10
Lafargue, Christophe. "Analyse biologique quantitative non instrumentée." Bordeaux 2, 1994. http://www.theses.fr/1994BOR2P052.
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11
Olanié, Florian Amador del Valle Gilles. "Les tests biologiques en parodontologie." [S.l.] : [s.n.], 2008. http://castore.univ-nantes.fr/castore/GetOAIRef?idDoc=50576.
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12
Escoffier, Patricia. "Application de la protéomique clinique au diagnostic biologique de la toxoplasmose oculaire." Paris 6, 2010. http://www.theses.fr/2010PA066032.
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La toxoplasmose oculaire (TO) représente la première source d’inflammation du segment postérieur de l’œil. Le diagnostic est principalement ophtalmologique, cependant le recours au diagnostic biologique est indispensable en cas de formes cliniques atypiques et vise à mettre en évidence dans l’humeur aqueuse (HA) une synthèse locale d’anticorps anti-toxoplasmiques (Coefficient de Desmont, Western blot) ou le parasite (PCR). Le manque de sensibilité de ces méthodes nécessite la réalisation des 3 techniques et donc un volume important d’HA et ne permet d’atteindre qu’une sensibilité égale à 80 %. Dès lors, ce projet visait à identifier en protéomique clinique des biomarqueurs de la TO (protéines de l’hôte ou du parasite) dans l’HA afin de développer de nouveaux tests diagnostiques. Compte tenu de la faible disponibilité des prélèvements d’HA chez l’homme, ces travaux se sont basés sur deux volets : 1) Le développement de modèles expérimentaux (modèle animal, enkystement de T. Gondii dans des cellules épithéliales pigmentaires rétiniennes humaines (ARPE 19) et incubation du toxoplasme dans l’HA) recréant un contexte d’infection oculaire par T. Gondii et 2) L’analyse par spectrométrie de masse (SM) des échantillons biologiques issus de ces modèles et d’une banque humaine d’HA incluant des HA de patients atteints de TO. Au total, 45 protéines potentiellement spécifiques d’une TO ont été identifiées par 2D-LC-MS/MS (23 protéines parasitaires et 22 protéines de l’hôte), ainsi que des profils protéiques différentiels (56 pics protéiques) détectés par MALDI-TOF. Ces biomarqueurs potentiels pourront être validés pour le développement d’un nouveau diagnostic de la TO.
13
Arthaud, Anne. "Physiopathologie et diagnostic biologique des ascites cirrhotiques et de leurs complications infectieuses." Paris 5, 1988. http://www.theses.fr/1988PA05P021.
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14
CHENU, PIERRE. "La giardiase chez l'enfant : comparaison de 5 methodes de diagnostic biologique ; a propos de 10 cas." Lille 2, 1991. http://www.theses.fr/1991LIL2M293.
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15
Dietsch, Marie Laure. "Approche clinique, biologique et économique des phéochromocytomes." Paris 5, 1993. http://www.theses.fr/1993PA05P086.
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16
Pons, Jean-Luc. "Validation par l'antériorité delta-check : expérience de l'hôpital d'Argenteuil." Paris 5, 1991. http://www.theses.fr/1991PA05P185.
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17
Vicente, dos Santos Victor. "Etude des relations phylogénétiques entre les genres de Phytoseiidae (Acari Mesostigmata) et implications pour la lutte biologique." Electronic Thesis or Diss., Montpellier, SupAgro, 2017. http://www.theses.fr/2017NSAM0009.
Full textAbstract:
Cette thèse porte sur la taxonomie des acariens prédateurs de la famille des Phytoseiidae, dont certaines espèces sont utilisées en lutte biologique pour contrôler des acariens ravageurs et quelques petites espèces d’insectes. La taxonomie de ces organismes de petite taille (<500 μm), i.e. identification spécifique et relations entre les taxa, est essentiellement basée sur des caractères morphologiques. Ces caractères parfois difficiles à visualiser, à interpréter (variations intra et inter-taxa, analogies) et en faible nombre rendent l’identification des espèces et la classification actuelle sujette à certaines interrogations ; aucune analyse phylogénétique ne soutient en effet la taxonomie de cette famille. De plus les marqueurs moléculaires développés jusqu’à aujourd’hui ne permettent pas de définir de façon fiable les relations entre les taxa supraspécifiques. Ce travail présente deux objectifs: (i) caractériser via des outils moléculaires l’identité spécifique de deux taxa utiles en lutte biologique et établir des règles de décision moléculaire sur la base de plusieurs concepts analytiques et (ii) déterminer via le développement de nouveaux marqueurs moléculaires les relations supraspécifiques à l’intérieur de la tribu des Euseiini puis au niveau de l’ensemble de la famille. Concernant le diagnostic spécifique, ce travail a montré à travers l’exemple d’Amblyseius swirskii et Phytoseius finitimus l’utilité d’approches intégratives comprenant plusieurs marqueurs, du fait de la forte variation des marqueurs mitochondriaux au niveau intraspécifique. Les valeurs maximales des distances génétiques entre spécimens d’une même espèce (9%, 23% et 2.8 % pour 12S ARNr, CYTB ADN mt et ITSS) ont été établies. Concernant les relations supraspécifiques, des nouveaux marqueurs moléculaires ont été développés. La combinaison de six marqueurs moléculaires (12S ARNr, CYTB ADN mt, COI ADN mt, ITSS, 28S ARNr, HSP90) permet désormais de résoudre les différents rangs taxonomiques à investiguer. L’application de ces marqueurs à la tribu des Euseiini et à l’ensemble de la famille a permis de conclure quant à la validité de certains taxa. Par exemple, ce travail a montré la monophylie des Euseiini et des représentants des sous- tribus considérés. Le genre Iphiseius ne semble en revanche pas valide et inclus dans le genre Euseius. Des analyses morphologiques, biogéographiques et écologiques (plantes-hôtes) réalisées au niveau de l’ensemble de la tribu sur la base d’une compilation bibliographique, ont permis d’émettre des scénarios quant à l’origine ouest gondwanienne de ce taxon sur des plantes de Rosidées et quant à l’évolution de certains caractères morphologiques.Ce travail de thèse ouvre des perspectives d’étude des relations entre les genres de Phytoseiidae du fait des nouveaux marqueurs développés. Les études doivent se poursuivre pour (i) étendre le panel de marqueurs disponibles et surtout (ii) augmenter l’échantillonnage des espèces à inclure dans les analyses en lien avec leurs caractéristiques bioécologiques afin de déterminer comment les relations phylogénétiques peuvent constituer un outil de prédiction de ces caractéristiques utiles à connaître pour la mise en œuvre de la lutte biologique (proies, plantes, nourriture alternative)This thesis deals with the taxonomy of predatory mites of the family Phytoseiidae, that contains several species used in biological control of pest mites and small insects. The taxonomy of these minute organisms (<500 μm), i.e. specific identification and phylogenetic relationships, is essentially based on morphological characters. These characters, which are sometimes difficult to visualize, interpret (variations in intra and inter-taxa, analogies) and in small numbers, make the identification of species and the current classification questionable. No phylogenetic analysis supports the taxonomy of this family. Moreover, the molecular markers developed up to now are not adapted to define reliable relations between supraspecific taxa. This work aims at: (i) characterizing using molecular markers the identity of two species useful in biological control and establishing molecular decision rules based on several analytical concepts and (ii) determining via the development of new markers the supraspecific relations within the Euseiini tribe and then at the level of the whole family. For the specific diagnosis, this work has shown through the example of Amblyseius swirskii and Phytoseius finitimus the usefulness of integrative approaches including several markers, due to the strong variation in mitochondrial markers at the intraspecific level. Maximum genetic distance values between specimens of the same species (9%, 23% and 2.8% for 12S rRNA, CYTB DNA mt and ITSS) were established. Concerning supraspecific relationships, new molecular markers have been developed. The combination of six molecular markers (12S rRNA, CYTB DNA mt, COI DNA mt, ITSS, 28S rRNA, and HSP90) now allows resolving different supraspecific ranks to be investigated. The application of these markers to the tribe Euseiini and to the family shows that certain taxa were valid. For example, this work emphasizes the monophyly of the Euseiini and representatives of the sub-tribes considered. The genus Iphiseius seems to not be valid and is included in the genus Euseius. Morphological, biogeographical and ecological analyses (host plants) carried out at the level of the whole tribe on the basis of a bibliographic compilation, emphasized the West Gondwanaland origin of this taxon on plants of Rosidae and the evolution of certain morphological characters. This thesis opens new insights for studying the relationships between the genera of Phytoseiidae due to the new markers developed. Studies should continue to (i) extend the panel of available markers and (ii) increase the sampling of species to be included in analyses related to their bio-ecological characteristics in order to determine how phylogenetic relationships can predict interesting life traits for biological control implementation (prey, plants, alternative food)
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Dubosc, de Pesquidoux Olivier. "La maladie de Marfan : mise au point d'un diagnostic biologique par immunomarquage de la fibrilline." Université Claude Bernard - Lyon I, 1994. http://www.theses.fr/1994LYO1M098.
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19
Vicente, dos Santos Victor. "Etude des relations phylogénétiques entre les genres de Phytoseiidae (Acari Mesostigmata) et implications pour la lutte biologique." Thesis, Montpellier, SupAgro, 2017. http://www.theses.fr/2017NSAM0009/document.
Full textAbstract:
Cette thèse porte sur la taxonomie des acariens prédateurs de la famille des Phytoseiidae, dont certaines espèces sont utilisées en lutte biologique pour contrôler des acariens ravageurs et quelques petites espèces d’insectes. La taxonomie de ces organismes de petite taille (<500 μm), i.e. identification spécifique et relations entre les taxa, est essentiellement basée sur des caractères morphologiques. Ces caractères parfois difficiles à visualiser, à interpréter (variations intra et inter-taxa, analogies) et en faible nombre rendent l’identification des espèces et la classification actuelle sujette à certaines interrogations ; aucune analyse phylogénétique ne soutient en effet la taxonomie de cette famille. De plus les marqueurs moléculaires développés jusqu’à aujourd’hui ne permettent pas de définir de façon fiable les relations entre les taxa supraspécifiques. Ce travail présente deux objectifs: (i) caractériser via des outils moléculaires l’identité spécifique de deux taxa utiles en lutte biologique et établir des règles de décision moléculaire sur la base de plusieurs concepts analytiques et (ii) déterminer via le développement de nouveaux marqueurs moléculaires les relations supraspécifiques à l’intérieur de la tribu des Euseiini puis au niveau de l’ensemble de la famille. Concernant le diagnostic spécifique, ce travail a montré à travers l’exemple d’Amblyseius swirskii et Phytoseius finitimus l’utilité d’approches intégratives comprenant plusieurs marqueurs, du fait de la forte variation des marqueurs mitochondriaux au niveau intraspécifique. Les valeurs maximales des distances génétiques entre spécimens d’une même espèce (9%, 23% et 2.8 % pour 12S ARNr, CYTB ADN mt et ITSS) ont été établies. Concernant les relations supraspécifiques, des nouveaux marqueurs moléculaires ont été développés. La combinaison de six marqueurs moléculaires (12S ARNr, CYTB ADN mt, COI ADN mt, ITSS, 28S ARNr, HSP90) permet désormais de résoudre les différents rangs taxonomiques à investiguer. L’application de ces marqueurs à la tribu des Euseiini et à l’ensemble de la famille a permis de conclure quant à la validité de certains taxa. Par exemple, ce travail a montré la monophylie des Euseiini et des représentants des sous- tribus considérés. Le genre Iphiseius ne semble en revanche pas valide et inclus dans le genre Euseius. Des analyses morphologiques, biogéographiques et écologiques (plantes-hôtes) réalisées au niveau de l’ensemble de la tribu sur la base d’une compilation bibliographique, ont permis d’émettre des scénarios quant à l’origine ouest gondwanienne de ce taxon sur des plantes de Rosidées et quant à l’évolution de certains caractères morphologiques.Ce travail de thèse ouvre des perspectives d’étude des relations entre les genres de Phytoseiidae du fait des nouveaux marqueurs développés. Les études doivent se poursuivre pour (i) étendre le panel de marqueurs disponibles et surtout (ii) augmenter l’échantillonnage des espèces à inclure dans les analyses en lien avec leurs caractéristiques bioécologiques afin de déterminer comment les relations phylogénétiques peuvent constituer un outil de prédiction de ces caractéristiques utiles à connaître pour la mise en œuvre de la lutte biologique (proies, plantes, nourriture alternative)This thesis deals with the taxonomy of predatory mites of the family Phytoseiidae, that contains several species used in biological control of pest mites and small insects. The taxonomy of these minute organisms (<500 μm), i.e. specific identification and phylogenetic relationships, is essentially based on morphological characters. These characters, which are sometimes difficult to visualize, interpret (variations in intra and inter-taxa, analogies) and in small numbers, make the identification of species and the current classification questionable. No phylogenetic analysis supports the taxonomy of this family. Moreover, the molecular markers developed up to now are not adapted to define reliable relations between supraspecific taxa. This work aims at: (i) characterizing using molecular markers the identity of two species useful in biological control and establishing molecular decision rules based on several analytical concepts and (ii) determining via the development of new markers the supraspecific relations within the Euseiini tribe and then at the level of the whole family. For the specific diagnosis, this work has shown through the example of Amblyseius swirskii and Phytoseius finitimus the usefulness of integrative approaches including several markers, due to the strong variation in mitochondrial markers at the intraspecific level. Maximum genetic distance values between specimens of the same species (9%, 23% and 2.8% for 12S rRNA, CYTB DNA mt and ITSS) were established. Concerning supraspecific relationships, new molecular markers have been developed. The combination of six molecular markers (12S rRNA, CYTB DNA mt, COI DNA mt, ITSS, 28S rRNA, and HSP90) now allows resolving different supraspecific ranks to be investigated. The application of these markers to the tribe Euseiini and to the family shows that certain taxa were valid. For example, this work emphasizes the monophyly of the Euseiini and representatives of the sub-tribes considered. The genus Iphiseius seems to not be valid and is included in the genus Euseius. Morphological, biogeographical and ecological analyses (host plants) carried out at the level of the whole tribe on the basis of a bibliographic compilation, emphasized the West Gondwanaland origin of this taxon on plants of Rosidae and the evolution of certain morphological characters. This thesis opens new insights for studying the relationships between the genera of Phytoseiidae due to the new markers developed. Studies should continue to (i) extend the panel of available markers and (ii) increase the sampling of species to be included in analyses related to their bio-ecological characteristics in order to determine how phylogenetic relationships can predict interesting life traits for biological control implementation (prey, plants, alternative food)
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Larue, Catherine. "Apport de la technologie des anticorps monoclonaux au diagnostic biologique de l'infarctus du myocarde." Rouen, 1992. http://www.theses.fr/1992ROUES033.
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Le diagnostic biologique de l'infarctus aigu du myocarde (IAM) s'appuie principalement sur la détermination des concentrations des enzymes et de certains constituants protéiques intracellulaires des cellules myocardiques, libérées dans la circulation sanguine après un IAM. Des anticorps monoclonaux (AcM) dirigés contre 2 protéines contractiles cardiaques (les chaînes lourdes de myosine d'une part, et la troponine I cardiaque (TnI) d'autre part) ont été préparés afin de les utiliser in vitro et in vivo. Le dosage immunoradiométrique de la myosine cardiaque a mis en évidence la corrélation existante entre le taux de la myosine circulante après un IAM et la taille de la nécrose, et a montré son efficacité dans le cadre du pronostic de survie des patients après IAM, grâce à des études d'observation et de suivi à long terme. Les essais d'utilisation de ces mêmes AcM anti-myosine fragmentés et couplés à des traceurs radioactifs de forte énergie (Gamma) ont permis de démontrer in vivo la visualisation rapide de la nécrose myocardique en immunoimagerie. L'obtention de nombreux AcM dirigés contre la TnI cardiaque a permis de repérer le meilleur couple d'AcM pour la réalisation d'un dosage immunoenzymométrique spécifique et rapide. L'utilisation en clinique cardiaque fait du dosage de la TnI non seulement un nouvel outil de diagnostic précoce et spécifique, mais aussi un moyen potentiel d'investigation de la reperméabilisation d'un vaisseau occlus après fibrinolyse
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Pertuis, Lancelin Frédérique. "Etude de l'activité télomérase dans les tumeurs épithéliales de la vessie." Paris 5, 1998. http://www.theses.fr/1998PA05P063.
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22
Géhin, Thierry. "Les meditests : examens biologiques rapides d'orientation clinique dans le cabinet medical." Nancy 1, 1992. http://www.theses.fr/1992NAN11194.
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23
THELLIEZ, EMMANUEL. "Diagnostic biologique de la toxoplasmose oculaire : etude des differents isotypes specifiques dans l'humeur aqueuse." Reims, 1993. http://www.theses.fr/1993REIMM039.
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24
Navenot, Jean-Marc. "Diagnostic et suivi biologique de l'hemoglobinurie nocturne paroxystique : contribution a l'etude de la physiopathologie." Nantes, 1996. http://www.theses.fr/1996NANT15VS.
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Bouffard, Marc. "Conception, modélisation et simulation in silico d'un nanosystème biologique artificiel pour le diagnostic médical." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2016. http://www.theses.fr/2016SACLS302/document.
Full textAbstract:
Le diagnostic médical, se fait traditionnellement, par l'examen des symptômes cliniques, puis en cherchant sur des prélèvements (sang, urine, biopsies, etc.) la présence (ou l'absence) simultanée des bio-marqueurs des diverses pathologies envisagées par le médecin. La recherche des bio-marqueurs se fait a l'aide d'équipements importants, dans un laboratoire d'analyse; les résultats étant communiqués au médecin, qui va les interpréter en appliquant un algorithme de diagnostic médical.Nous avons voulu regrouper dans un seul dispositif, pour une pathologie donnée, la détection des bio-marqueurs et une implémentation de l'algorithme de diagnostic approprié. La présence ou l'absence d'un bio-marqueur peut être représentée par une variable booléenne, et l'algorithme de diagnostic par une fonction booléenne complexe dont la valeur indiquera la présence de la pathologie ciblée.Notre dispositif de diagnostic sera un nano-calculateur biochimique artificiel dans lequel les informations logiques seront représentées par des métabolites et les calculs effectués par un réseau enzymatique synthétique. Pour réaliser ce calculateur, il a été nécessaire d'établir un fondement théorique des réseaux logiques enzymatiques. Nous avons ensuite utilisé cette théorie pour définir ce qu'est un circuit logique enzymatique et comment il calcule correctement la fonction booléenne associée. Pour des raisons de modularité et de réutilisabilité, nous avons décidé de concevoir des bibliothèques de portes logiques enzymatiques implémentant les opérateurs booléens de base, puis d'assembler ces briques de base pour obtenir le réseau enzymatique complet. J'ai donc conçu et développé deux outils logiciels, NetGate et NetBuild, qui vont réaliser automatiquement ces opérations.NetGate, qui va créer des bibliothèques contenant des centaines de portes logiques enzymatiques obtenues à partir de réseaux métaboliques d'organismes existants. Auparavant, il était nécessaire d'analyser manuellement ces réseaux métaboliques pour extraire chaque porte.NetBuild, qui va utiliser une bibliothèque de portes (par exemple créée par NetGate) et les assembler pour construire des circuits qui calculent une fonction booléenne donnée. Ces circuits utilisent comme entrées des métabolites spécifiques (par exemple: bio-marqueurs d'une pathologie) et produisent en sortie une espèce moléculaire facilement détectable (par colorimétrie par exemple)The medical diagnosis is traditionally done by examining the clinical symptoms and by searching in samples (blood, urine, biopsies, etc.) for the simultaneous presence (or absence) of biomarkers of the various pathologies considered by the doctor. The search for biomarkers is conducted using large equipments in a specialised laboratory; The results being communicated to the doctor, who will then interpret them by applying a medical diagnostic algorithm.We wanted to combine in a single device, for a given disease, the detection of its biomarkers and an implementation of the appropriate diagnostic algorithm. The presence or absence of a biomarker can be represented by a boolean variable, and the diagnostic algorithm by a complex boolean function whose value indicates the presence of the targeted disease. Our diagnostic device is an artificial biochemical nano-computer in which logical information is represented by metabolites and the computations performed by a synthetic enzymatic network. To build this computer, it has been necessary to establish a theoretical basis of enzymatic logical networks. We then used this theory to define what an enzymatic logic network is, and how it computes correctly the associated boolean function. For modularity and reusability reasons, we decided to design libraries of enzymatic logic gates that implement basic boolean operators, and then to assemble these building blocks to get the complete logic enzymatic network. So, I have designed and developed two software tools, NetGate and NetBuild, which will automatically perform these operations.NetGate creates libraries containing hundreds of enzymatic logic gates obtained from the metabolic networks of living organisms. Before that, it was necessary to manually analyse these metabolic networks in order to extract each logic gate.NetBuild uses a library of logic gates (for example created using NetGate) and assembles them to build circuits that compute a given boolean function. These circuits use specific metabolites for its inputs (for example the biomarkers of a pathology) and produce a readily detectable molecular species (using colorimetry for example)
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Cagin, Jérôme Bach-Ngohou Botum Kalyane. "Diagnostic biologique des hyperplasies congénitales des surrénales au CHU de Nantes analyse rétrospective sur 8 années /." [S.l.] : [s.n.], 2008. http://castore.univ-nantes.fr/castore/GetOAIRef?idDoc=49201.
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27
Defever, Thibaut. "Un nouveau concept d’analyse biologique : la PCR électrochimique en temps réel." Dijon, 2008. http://www.theses.fr/2008DIJOS051.
Full textAbstract:
Le développement d’un nouveau concept d’analyse biologique permettant de suivre en temps réel la réplication de séquences cibles d’ADN lors d’une PCR constitue l’objectif de ce travail. Nous avons envisagé le suivi de la PCR par des mesures électrochimiques, lesquelles présentent un certain nombre d’avantages (robustesse, faible coût, miniaturisation aisée,. . . ) contrairement aux méthodes commercialisées, basées sur des approches optiques. Un état de l’art sur l’amplification et la détection de fragments d’ADN sera d’abord décrit, en particulier la PCR en temps réel. Diverses méthodes non optiques de détection de l’ADN, notamment électrochimiques, seront également proposées. La première approche envisagée repose sur l’oxydation catalytique d’une base de l’ADN (dGTP) par un médiateur redox : Ru(bpy)32+. Les mesures obtenues à partir de ce couple, bien que peu reproductibles, font cependant la preuve de la faisabilité du concept. L’utilisation d’un nouveau couple : Os(bpy)32+/7-deaza-dGTP, dont le pic d’oxydation se situe à un potentiel plus bas, a permis d’améliorer les capacités de la méthode et d’atteindre une limite de détection de 30 aM. Toutefois celle-ci est environ 200 fois moins performante qu’une technique commerciale utilisant des sondes TaqMan™. Une nouvelle approche basée sur l’intercalation d’un complexe d’osmium dans le double brin de l’ADN a permis d’améliorer grandement les performances de notre PCR pour atteindre des résultats proches des techniques commerciales tant en termes de limite de détection que de sensibilité. Ces résultats démontrent ainsi l’intérêt de l’électrochimie comme nouvel outil de mesure de fragments d’ADN par PCR en temps réelThe aim of this work is to develop a new method for detection of the DNA amplification during the PCR. This technique based on the electrochemical signal gives to the method advantages as reliability, low cost and amenable for miniaturization in contrast to the fluorescent techniques usually used, which are expensive, bulky and fragile. First of all, we present a state of the art concerning different methods used to replicate specific sequences of DNA by enzymatic reactions which are based on fluorescent methods. In this chapter, we pay particular attention to the real time PCR and other non-optic methods of DNA detection, especially electrochemical one. The first approach developed in this work is based on the catalytic oxidation of a triphosphate nucleoside by a redox mediator. The weak reproducibility of the measures made with the couple mediator/base, Ru(bpy)32+/dGTP, is due to the high potential of oxidation of the dGTP. Nevertheless, the proof of concept is done. Another couple: Os(bpy)32+/7-deaza-dGTP, with a lower potential of oxidation, improve the performances of the method. So it is possible to detect 30 aM of viral DNA but this detection limit is about 200 times worse than the commercial kit using fluorescent probes as TaqMan™. Then a new concept was proposed based on the utilisation of an osmium-complex DNA intercalator. Results obtained showed good performances compared with TaqMan™ probes in terms as detection limit or sensitivity. These results emphasize electrochemistry as a new tool to detect DNA by real-time PCR
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Hardy, Béatrice. "Les possibilités de l'automatisation de la formule sanguine dans le diagnostic du paludisme." Paris 5, 1993. http://www.theses.fr/1993PA05P065.
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29
Mata, Esther. "Évaluation des méthodes de diagnostic biologique et caractérisation physicochimique des ige spécifiques en allergo-anesthésie." Nancy 1, 1993. http://www.theses.fr/1993NAN19427.
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30
Donnet, Anne. "L'EEG de sommeil dans le diagnostic différentiel entre démence et dépression : un nouveau marqueur biologique." Aix-Marseille 2, 1989. http://www.theses.fr/1989AIX21904.
Full text
31
Pierre, Michel. "Diagnostic de la fatigue des sols en culture de blé : analyse de la composante biologique." Dijon, 1985. http://www.theses.fr/1985DIJOS067.
Full textAbstract:
Etude générale bibliographique. Etude de la fatigue des sols dans des systèmes culturaux (monoculture, rotation) : test biologique, simulation sous serre. Etude de la dynamique des nécroses racinaires, de la flore fongique associée, de l'agressivité des isolats fongiques (études au champ et en bac de culture). Essais réalisés pour une collection de sols de différentes régions de France provenant d'expérimentations multilocales de l'ITCF.
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GILARDI, ELISABETH. "Contribution a l'etude des nouveaux marqueurs biologiques dans le diagnostic et le traitement de l'osteoporose trabeculaire." Nice, 1988. http://www.theses.fr/1988NICE6006.
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33
Sommer, Sandrine. "Les procédures en biologie médicale : exemple des examens de parasitologie." Paris 5, 2001. http://www.theses.fr/2001PA05P017.
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34
Durand, Rémy. "Leishmania infantum : diagnostic par PCR et traitements vectorisés in vivo." Paris 12, 1997. http://www.theses.fr/1997PA120046.
Full textAbstract:
La leishmaniose viscerale (lv) s'etend depuis quelques annees en plusieurs regions du monde a la suite de changements epidemiologiques tels que l'urbanisation ou les mouvements de populations. Dans le meme temps, des coinfections leishmania/virus de l'immunodeficience humaine (vih) sont de plus en plus souvent rapportees, principalement sur le pourtour du bassin mediterraneen. L'amelioration du diagnostic biologique de la lv et l'evaluation de nouveaux traitements antileishmaniens ont constitue les objectifs de notre travail. Une technique de pcr pour le diagnostic des leishmanioses et plus particulierement pour le diagnostic de l. Infantum dans le cadre de l'association au vih a ete developpee. Des mesures physiques (locaux et materiels adaptes) et chimiques (decontamination enzymatique par emploi de l'uracyl-d-glycosylase) ont ete prises de maniere a eviter les faux positifs. Un controle interne de type heterologue, permettant la detection des inhibiteurs de la reaction, a ete developpe de maniere a eviter les faux negatifs. La technique a ete optimisee avec detection des produits d'amplification par technique elisa ce qui a permis d'augmenter la sensibilite et de controler la specificite de l'amplification. La pcr diagnostique a ete evaluee par comparaison avec les techniques classiques de diagnostic de leishmaniose : - aucun faux positif par pcr n'a ete observe pour les 77 sujets non atteints de leishmaniose au moment du prelevement. Ces sujets n'ont pas declare de leishmaniose dans les 12 mois ayant suivi le prelevement. - les prelevements positifs a l'examen direct et/ou a la culture ont toujours ete positifs par pcr a l'exception d'un cas. - la pcr a ete positive pour 6 prelevements provenant de patients leishmaniens connus alors que examens directs et cultures etaient negatifs. La vectorisation consiste a masquer les molecules actives au sein d'une particule capable de les conduire jusqu'a leur cible et de ne les liberer qu'a ce moment. Les phenomenes de toxicite sont donc normalement diminues, accroissant l'index therapeutique de la molecule vectorisee. Les principaux vecteurs synthetises au cours de ce travail ont ete des nanoparticules de polymethacrylate, des nanoparticules d'acide poly (d,l-lactique) et des liposomes. L'activite antileishmanienne des nanoparticules chargees par la pentamidine et des liposomes charges par l'amphotericine b (amb) a ete evaluee au moyen d'un modele original associant la souris balb/c et l. Infantum. La plus forte augmentation d'activite antileishmanienne apportee par la vectorisation a ete observee pour les nanoparticules de polymethacrylate chargees par la pentamidine (activite multipliee par 6). La faible biodegradabilite de ces nanoparticules constitue cependant un handicap par rapport aux autres vecteurs evalues dans ce travail. Les nanoparticules d'acide (d,l) lactique, liant la pentamidine de maniere plus labile, ont multiplie l'activite de la pentamidine par 3. L'ultrastructure des leishmanies observee apres traitement par la pentamidine chargee sur des nanoparticules de polymethacrylate n'a pas montre d'alterations specifiques ou plus importantes que celles observees avec la pentamidine libre.
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Kania, Dramane. "Développement d’outils et de stratégies pour le diagnostic et le suivi biologique des infections VIH, VHB et VHC dans les pays à ressources limitées." Thesis, Montpellier 1, 2014. http://www.theses.fr/2014MON1T017/document.
Full textAbstract:
Le diagnostic et le suivi des infections par le VIH, VHB et VHC restent un défi dans les pays à faibles ressources qui sont par ailleurs les plus touchés. Il est urgent de pouvoir disposer d'outils de biologie simples, fiables et peu chers pour le contrôle de ces infections virales. Le défi est immense d'un point de vue clinique et politique de santé. L'objectif de ce travail de recherche effectué dans le cadre de la présente thèse est de développer et valider des stratégies et de nouveaux outils de biologie adaptés au diagnostic et au suivi des hépatites virales et de l'infection VIH dans les pays à ressources limitées. Dans un premier temps, nous avons investigué sur les résultats de sérologie VIH discordants, car en biologie et en pratique clinique, il est important d'établir le statut sérologique réel des personnes dépistées avec des résultats clairs pour une prise de décision adéquate à l'échelle individuelle. Dans ce travail, nous avons trouvé que les résultats discordants par l'algorithme de dépistage des femmes enceintes au Burkina Faso, étaient dans 94% des cas de faux positifs dus au test Determine™ HIV-1/2 et 4% de faux négatifs liés au test Genie II™ HIV-1/HIV-2. En matière de santé publique, les femmes présentant ce type de résultat peuvent être considérées comme séronégatives dans les centres où des investigations supplémentaires ne sont pas possibles, surtout dans les pays comme le Burkina Faso où la prévalence de l'infection est basse avec une faible diversité génétique. Dans un second temps, nous avons focalisé nos travaux sur la faisabilité d'une stratégie de dépistage qui combine la détection des trois infections (VIH, VHB et VHC) sur une seule carte DBS. Dans cette étude pilote, nous avons démontré que le DBS collecté en parallèle au test rapide VIH dans un centre de dépistage volontaire permet d'une part de faire la confirmation du VIH par immunoblot, et d'autre part de compléter par le diagnostic des hépatites B et C par ELISA suivi de western blot et PCR pour la confirmation pour le VHC. Cette stratégie peut servir de modèle pour promouvoir et vulgariser le dépistage des hépatites virales B et C dans les pays à ressources limitées. Le DBS peut servir de contrôle et de confirmation du diagnostic du VIH, VHB et VHC. Par la suite, nous avons évalué la performance de deux tests de 4ème génération immunoluminométriques (Elecsys® HIV Combi PT assay, Roche Diagnostics et Liaison® XL Murex HIV Ab/Ag test, DiaSorin) sur des échantillons séchés sur papier filtre en comparaison au test de diagnostic rapide et aux échantillons de sérum frais prélevés chez les patients en primo-infection VIH. Ces travaux ont clairement montré que les deux tests de 4ème génération réalisés sur papier filtre offrent de bonnes performances dans le diagnostic de la primo-infection par rapport aux tests de diagnostic rapide sur sérum frais. Cette méthode peut être utilisée pour détecter précocement le VIH chez les personnes difficiles à atteindre et les populations vivant dans des zones périphériques des pays à ressources limitées. Enfin, nous avons mis au point une technique de PCR en temps réel de détection et de quantification de l'ADN du VHB. A cet effet, nous sommes partis de deux PCR « maison » ciblant deux régions génomiques différentes (gène X pour la qPCR 1 et gène S pour la qPCR 2) en comparaison à un test commercial de charge virale (Cobas AmpliPrep/Cobas TaqMan HBV Test, version 2.0, Roche Diagnostics). La qPCR 2 avec un seuil de détection à 91 UI/ml (vs 104 UI/ml pour la qPCR 1) a montré une meilleure performance dans la quantification de l'ADN du VHB. Cette qPCR 2 peu chère est aujourd'hui produite sous forme de kit par une start-up appelée OMUNIS. Ce kit en développement fera l'objet d'une évaluation multicentrique en France, en Afrique et en Asie du Sud-Est à travers un réseau de laboratoires sous la promotion de l'ANRSDiagnosis and management of hepatitis B, hepatitis C and HIV infections are a real challenge in middle and low-income countries. There is an urgent need for simple, reliable and inexpensive tools to control these infections in high prevalence sittings like Africa and Asia. The challenge is immense in clinical and public health policy hands. The main goal of this research work performed for our PhD is the development and validation of strategies and tools to diagnose and monitor HIV, HBV and HCV infections in resource-constrained countries. At a first step, we investigated the results of HIV discordant results, since it is important to establish the real HIV status of people tested with clear results for appropriate decision-making in biological and clinical practice. This work show that discordant results obtained in the algorithm of HIV screening among pregnant women in Burkina Faso, are false positive results in 94% of cases due to the Determine™ HIV-1/2 immunochromatographic test and false negative results in 4% of cases due to the Genie II ™ HIV-1 / HIV-2 test. In public health practice, women with this type of result can be considered as negative for HIV testing in centers where additional investigations are not possible, especially in countries like Burkina Faso with a low incidence and a low genetic diversity of HIV.In a second step, we focused our work on the feasibility of a screening strategy that detects HIV, HBV and HCV infections into a single card of DBS. In this pilot study, we demonstrated that DBS collected in parallel to HIV rapid testing in a voluntary counseling and testing center allows HIV confirmation using immunoblotting, and an additional testing by diagnosing HBV and HCV using ELISA followed by immunoblotting and PCR for HCV confirmation. This strategy can serve as a model to promote and scale-up the screening of HBV and HCV in resource-limited countries. DBS can be served as control and confirmation of HIV, HBV and HCV diagnosis. Furthermore, we evaluated the performance of two 4th generation chemiluminescent immunoassays (Elecsys HIV Combi PT assay, Roche Diagnostics and Liaison XL Murex HIV Ab/Ag test, DiaSorin) tested on filter paper samples in comparison to rapid diagnostic test and fresh serum samples from patients with acute HIV infection. These studies have clearly shown that the two 4th generation tests performed on filter paper offer good performance in terms of sensitivity for the diagnosis of HIV infection in its early phases compared with rapid diagnostic tests. This approach may be used in combination with HIV rapid tests in hard-to-reach individuals and populations living in remote areas of when an early HIV infection is suspected since rapid tests do not offer appropriate performance in this case.Finally, we developed a real-time PCR for HBV DNA detection and quantification. In this study, we evaluated two in-house PCR targeting two different regions of HBV genome (X gene for qPCR 1 and S gene for qPCR 2) in comparison with a commercial Roche HBV DNA test (Cobas AmpliPrep / Cobas TaqMan HBV Test, version 2.0, Roche Diagnostics) as a gold standard. The qPCR 2 with a low detection limit of 91 IU/ml (vs 104 IU/ml for 1 qPCR) showed a better performance in HBV DNA quantification. This inexpensive qPCR with best performance characteristics is producing by a start-up called OMUNIS. This kit will be evaluated in France, in Africa and in South and East Asia in a research study funded by ANRS (France REcherche Nord & sud Sida-hiv Hépatites)
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Robine, Michel. "Utilisation des électrodes sélectives en biologie clinique." Paris 5, 1989. http://www.theses.fr/1989PA05P096.
Full text
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Dupuis, Arnaud. "Diagnostic biologique, caractérisation moléculaire et identification de nouveaux gènes impliqués dans des thrombopathies congénitales non étiquetées." Thesis, Strasbourg, 2015. http://www.theses.fr/2015STRAJ078/document.
Full textAbstract:
Les thrombopathies congénitales sont des pathologies au phénotype hémorragique hétérogène dues à des anomalies fonctionnelles des plaquettes sanguines parfois associées à des anomalies morphologiques et/ou à une thrombopénie. Les outils diagnostic disponibles permettent de corréler une anomalie fonctionnelle plaquettaire à un déficit protéique voire à une mutation d’un gène spécifique. Cependant, en 2015, au moins 50% des thrombopathies restent non étiquetées. Dans ce contexte, le laboratoire d’hémostase de l’EFS Alsace et l’unité INSERM UMR S949 travaillent de concert à l’identification et à la caractérisation de ces pathologies. Ainsi, nous avons mis en évidence trois nouvelles mutations du récepteur P2Y12 dans trois familles différentes. La mutation p.His187Gln a été entièrement caractérisée sur des plaquettes fraiches du patient et dans un modèle cellulaire adapté. La reproduction des deux autres mutations (p.Tyr259Cys et p.Phe95Ser) est en cours. Nous avons par ailleurs identifié une famille dont trois membres sont atteints d’une maladie du pool vide non syndromique et nous suspectons grâce au séquençage d’exome effectué que le transporteur de nucléotides VNUT est impliqué dans la pathologieInherited platelets disorders (IPD) are pathologies associated with heterogeneous bleedingphenotypes. They are due to functional platelets deficiency that may come with morphological abnormalities and/or thrombocytopenia. Available diagnosis tools are used to link a functional deficiency to a protein defect and in some instances to a specific genetic mutation. However, in 2015 at least 50% of IPD are still not identified. In this context, the haemostasis laboratory of the EFS Alsace together with INSERM UMR S949 team are working to diagnose and characterize these pathologies. Thus, we found three new P2Y12 receptor variants in three different families. The mutation p.His187Gln has been fully characterized on blood fresh platelets coming from one patient and in an appropriate cellular model. The reproduction of the two other mutations (p.Tyr259Cys and p.Phe95Ser) is currently ongoing. We also studied a family in which three members are carrying a delta storage pool disease. The full exome sequencing analysis leads us to suspect the involvement of the nucleotides transporter VNUT in this pathology
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Couchouron, Anne. "Diagnostic biologique du lupus anticoagulant : étude de la spécificité des tests de coagulation dépendants des phospholipides." Bordeaux 2, 1994. http://www.theses.fr/1994BOR2P012.
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Cochard-Becquet, Cendrine. "Interet d'un systeme expert dans l'aide au diagnostic d'un syndrome inflammatoire biologique chez un sujet age." Nantes, 1992. http://www.theses.fr/1992NANT074M.
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BOUTROUX, DOMINIQUE. "Interet des examens biologiques sanguins dans le diagnostic etiologique des pancreatites aigues : etude retrospective de 72 patients." Rennes 1, 1992. http://www.theses.fr/1992REN1M080.
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Piquée, Marie Claude. "Apport du laboratoire dans le diagnostic de l'infection materno-foetale." Paris 5, 1989. http://www.theses.fr/1989PA05P044.
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Rodier, Marie-Hélène. "Activités protéolytiques de candida albicans : mises en évidence de gélatinases ; purification et localisation d'une métallopeptidase : application au diagnostic biologique des candidoses et implication dans la pathogénécité." Poitiers, 1999. http://www.theses.fr/1999POIT1401.
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Mounanga, Christian-Nazaire. "Outils biocliniques d'évaluation et de contrôle dans les programmes internationaux de lutte contre les filarioses humaines." Tours, 2004. http://www.theses.fr/2004TOUR4050.
Full textAbstract:
Les filarioses concernent plus de 600 millions de sujets dans le monde et leurs conséquences ont conduit l'OMS au lancement des programmes de lutte. Nous avons étudié les outils d'évaluation, d'intervention et de contrôle des programmes. Nous avons mesuré les indices microfilarien et de séroprévalence respectivement en parasitologie par goutte épaisse, frottis sanguin, biopsie cutanée exsangue, leucoconcentration et en sérologie par ELISA, immunoempreinte, électrosynérèse, immunoélectrophorèse bidimensionnelle, immunochromatographic Test ICT. Les fractions antigéniques d'Ascaris lumbricoides ont été testées avec les sérums du Gabon, des Comores et du Yémen. En évaluation, la clinique, la leucoconcentration et la biopsie sont des références. En contrôle, l'ICT qui détecte les antigènes de Wuchereria bancrofti et l'ELISA restent incontournables ; les autres outils sont d'utilisation difficiles en campagne de masse. L'antigène ascaridien est d'une valeur suffisante pour le diagnosticFilariasis affects more 600 million people in the world and their consequences drove the World Health Organization (WHO) to launch the campaign against filariasis. We studied tools for evaluation and control of these programmes. We measured parasitological indice by thick, thin blood films, skin snips, leucoconcentration and serological indice by ELISA, western blotting, electrosyneresis, immunoelectrophoresis bidimensional, immunochromatographic Test ICT. Antigens fractions of Ascaris lumbricoides (FSom, FLpc, FOg) have been tested. Serums have been gotten to Gabon, to the Comores and Yemen. We showed in assessment, the clinic diagnosis, the leucoconcentration and the skin snip are reference tools. In control, the ICT for detection of circulating antigens of Wuchereria bancrofti and the ELISA are absolutely necessary. The other tools remain difficult to use in mass campaign against filariasis. Ascaris antigen was revealed of a sufficient value for the diagnosis
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Guillon, François-Xavier. "Biocapteurs Electrochimiques de microARNs pour le Diagnostic Médical." Thesis, Paris Sciences et Lettres (ComUE), 2017. http://www.theses.fr/2017PSLEC002/document.
Full textAbstract:
Les microARN (miARN), qui sont des ARN de 21 à 25 bases, constituent la dernière classe de régulateurs de l'expression génétique découverte. Environ 1500 ont été identifiés chez l'homme à ce jour. Les miARN sont des biomarqueurs de nombreuses pathologies (cancers et maladies cardiovasculaires, auto-immunes (sclérose en plaque), neurodégénératives (Alzheimer, Parkinson) et infectieuses (SIDA, CHIKV)) et l'ambition du projet doctoral est de réaliser un prototype de biocapteur électrochimique qui permette leur détection directe dans des fluides biologiques d'origine humaine (sérum) à des concentrations très faibles, du picomolaire (10^-12 M) au subattomolaire (10^-16 M), sans amplification par réaction de polymérisation en chaîne (PCR)MicroRNAs (miRNA), which are 21 to 25 base length RNAs, are the last discovered class of genetic expression regulators. Nowadays, about 1500 human miRNAs have been identified. MiRNA are biosensors of many pathologies (cancers, cardiovascular, auto-immune (multiple sclerosis),neurodegenerative (Alzheimer, Parkinson)and infectious diseases (AIDS, CHIKV)) and the doctoral project ambition is to develop an electrochemical biosensor prototype for miRNA direct detection in biological human fluids (serum) at very low concentrations, from picomolar (10^-12 M) to subattomolar (10^-16 M), without amplification by polymerisation chain reaction (PCR)
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Antonetti, Didier. "La coqueluche : apport de la PCR dans le diagnostic biologique de la maladie et aspects épidemiologiques régionaux." Montpellier 1, 1999. http://www.theses.fr/1999MON11035.
Full text
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Le, Corre Laure. "Données actuelles de l'exploration fonctionnelle thyroi͏̈dienne." Paris 5, 1992. http://www.theses.fr/1992PA05P133.
Full text
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George, Marie Christine. "Les marqueurs biologiques de l'alcoolisme : importance de l'acétaldéhyde." Paris 5, 1990. http://www.theses.fr/1990PA05P197.
Full text
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Orsini, Etienne. "Utilisation d'une technologie magnétique pour la capture et la détection rapide d’acides nucléiques." Electronic Thesis or Diss., Université Grenoble Alpes, 2024. http://www.theses.fr/2024GRALY020.
Full textAbstract:
Cette thèse, issue de la collaboration entre le laboratoire des matériaux et du génie physique et la start-up MagIA diagnostics, présente un certain nombre d’avancées techniques permettant le développement d'une technologie rapide de détection d’acides nucléiques utilisant des nanoparticules magnétiques et des micro-aimants.MagIA diagnostics est une start-up qui développe des tests immunologiques rapides et portables, dans le but de les réaliser en dehors du laboratoire d’analyse sur le lieu de prise en charge du patient (point-of-care). Ces tests sont basés sur une technologie combinant micro-aimants, nanoparticules magnétiques et détection par fluorescence, le tout sans étape de lavage. Pour réaliser ses immuno-essais, MagIA diagnostics fonctionnalise des nanoparticules magnétiques avec des anticorps ou des antigènes spécifiques. L’échantillon contenant la molécule à détecter est incubé avec les nanoparticules magnétiques fonctionnalisées et un anticorps de détection couplé à une molécule fluorescente. Après 10 min, les nanoparticules sont capturées localement sur des micro-aimants. La détection de la molécule d'intérêt est réalisée en mesurant la différence de fluorescence entre le signal spécifique observé sur les micro-aimants et le signal à l'extérieur des micro-aimants. Un premier lecteur de laboratoire fonctionnel est aujourd’hui en test dans des laboratoires d’analyse (MagIA analyzer). Actuellement, un prototype pour le dépistage combiné du VIH, du VHC et du VHB est en phase finale de développement, et l’étude de validation clinique est prévue en 2024 en vue de son marquage CE.L’objectif de cette thèse est d’exploiter les briques technologiques de MagIA diagnostics (micro-aimants, nanoparticules et détection de fluorescence localisée) pour réaliser les différentes étapes d’un test de biologie moléculaire en format point-of-care : purification des acides nucléiques, amplification d’une séquence cible et détection de l’ADN amplifié. Cette preuve de concept a été réalisée sur des plasmides.Un protocole rapide d’extraction et de purification de plasmide en tube utilisant des nanoparticules de silice a tout d’abord été mis en place. Nous l’avons utilisé pour mettre au point une méthode originale de magnétophorèse, associant une cartouche microfluidique dotée de micro-aimants et des particules de silice magnétiques, qui permet de transporter des molécules d’ADN d’intérêt d’un compartiment microfluidique à un autre, avec une contamination minime entre les solutions. Cette solution technique sera exploitée pour automatiser la purification des acides nucléiques.Une fois les acides nucléiques isolés, ils sont amplifiés à l’aide d’un thermocycleur. L’étape d’amplification peut être réalisée par PCR ou de façon isothermale par LAMP. Pour permettre une détection spécifique, les amplifications sont réalisées avec des amorces modifiées avec de la biotine et des amorces couplées à des molécules fluorescentes. Les amplicons obtenus sont alors biotinylés et fluorescents.Nous avons enfin montré que l’appareil MagIA analyzer développé pour réaliser la détection des tests immunologiques peut être adapté pour la détection des amplicons biotinylés et fluorescents. Pour ce faire, les amplicons de PCR ou de LAMP sont incubés avec des nanoparticules magnétiques fonctionnalisées avec de la streptavidine. Le mélange est ensuite injecté dans une cartouche contenant des micro-aimants. Les nanoparticules ayant capturé les amplicons biotinylés fluorescents sont localement capturées sur les micro-aimants. La cartouche est insérée dans le lecteur développé par MagIA, et une mesure de fluorescence différentielle entre le signal spécifique sur les micro-aimants et le signal entre les micro-aimants est effectuée. La comparaison des résultats obtenus en qPCR ou en LAMP en temps réel montrent la grande sensibilité et la bonne spécificité de notre système de détectionThis thesis, the result of collaboration between the Materials and Engineering Physics Laboratory and start-up MagIA diagnostics, presents a number of technical advances enabling the development of a rapid nucleic acid detection technology using magnetic nanoparticles and micro-magnets.MagIA diagnostics is a start-up developing rapid, portable immunoassays for point-of-care testing outside the laboratory. These tests are based on a technology combining micro-magnets, magnetic nanoparticles and fluorescence detection, all without a washing step. To perform its immunoassays, MagIA diagnostics functionalizes magnetic nanoparticles with specific antibodies or antigens. The sample containing the molecule to be detected is incubated with the functionalized magnetic nanoparticles and a detection antibody coupled to a fluorescent molecule. After 10 min, the nanoparticles are captured locally on micro-magnets. The molecule of interest is detected by measuring the difference in fluorescence between the specific signal observed on the micro-magnets and the signal outside the micro-magnets. A first functional laboratory reader is currently being tested in analysis laboratories (MagIA analyzer). A prototype for combined screening of HIV, HCV and HBV is currently in the final stages of development, with a clinical validation study scheduled for 2024 with a view to CE marking.The aim of this thesis is to exploit MagIA diagnostics' technological building blocks (micro-magnets, nanoparticles and localized fluorescence detection) to carry out the various stages of a point-of-care molecular biology test: purification of nucleic acids, amplification of a target sequence and detection of the amplified DNA.This proof-of-concept was carried out on plasmids, using a rapid protocol for plasmid extraction and purification in tubes using silica nanoparticles.We used it to develop an original magnetophoresis method, combining a microfluidic cartridge equipped with micro-magnets and magnetic silica particles, which enables DNA molecules of interest to be transported from one microfluidic compartment to another, with minimal contamination between solutions. This technical solution will be used to automate nucleic acid purification. Once the nucleic acids have been isolated, they are amplified using a thermocycler.The amplification step can be performed by PCR or isothermally by LAMP. For specific detection, amplifications are performed with biotin-modified primers and primers coupled to fluorescent molecules.The amplicons obtained are then biotinylated and fluorescent.Finally, we have shown that the MagIA analyzer developed for immunoassay detection can be adapted to detect biotinylated and fluorescent amplicons.To achieve this, PCR or LAMP amplicons are incubated with streptavidin-functionalized magnetic nanoparticles. The mixture is then injected into a cartridge containing micro-magnets.The nanoparticles that have captured the fluorescent biotinylated amplicons are locally captured on the micro-magnets.The cartridge is inserted into the reader developed by MagIA, and a differential fluorescence measurement between the specific signal on the micro-magnets and the signal between the micro-magnets is performed. Comparison of the results obtained with qPCR or LAMP in real time shows the high sensitivity and good specificity of our detection system
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Martelet, Armelle. "Détection et identification de bactéries dans des matrices complexes par amplification phagique et spectrométrie de masse." Paris 6, 2013. http://www.theses.fr/2013PA066577.
Full textAbstract:
Depuis quelques années, le développement de nouvelles méthodes de détection de bactéries est un enjeu grandissant dans le domaine du diagnostic in vitro, tant pour déterminer l’origine d’une maladie ou d’une contamination, que pour assurer la sécurité des consommateurs. L’objectif principal de ces méthodes alternatives est de réduire le délai de rendu des résultats et/ou d’améliorer l’efficacité de détection. Pour répondre à ce besoin, la spectrométrie de masse (MS) s’est révélée particulièrement avantageuse du point de vue de la réduction du temps d’analyse. Cependant, une étape de culture en amont est toujours nécessaire afin d’obtenir suffisamment de cellules pour les analyses. Les phages sont des virus bactériens qui présentent de nombreux avantages pour la détection des bactéries tels que leur spécificité d’infection et leur simplicité d’utilisation. Le couplage de la MS à l’amplification phagique pourrait se présenter comme une alternative pour réduire le temps de culture en amont de l’analyse. Au travers de ce travail de thèse, nous avons exploré cette voie alternative de détection des bactéries, en combinant l’amplification phagique à une analyse par chromatographie liquide couplée à la MS pour des applications dans des matrices complexes telles que les aliments. Les travaux ont été menés en trois grandes étapes. La première étape a consisté en la découverte de marqueurs protéiques de l’amplification phagique pour plusieurs modèles de phage/bactérie : T4/Escherichia coli, SPP1/Bacillus subtilis, MS2/E. Coli, M13/E. Coli et Felix-01/Salmonella enterica. L’utilisation de la MS à haute résolution (incluant les approches de type bottom-up et top-down) nous a permis d’identifier et de caractériser finement des protéines phagiques appartenant à deux familles distinctes : structurales et non-structurales. Des analyses ciblées (LC-MS en mode SRM) ont ensuite été développées pour les marqueurs de trois modèles (T4, SPP1 et MS2). Dans la deuxième étape, nous avons combiné ces analyses ciblées avec une préparation d’échantillon pour la détection des bactéries après amplification phagique. Les protéines non-structurales n’avaient jusqu’à présent jamais été exploitées pour la détection des bactéries, et, pour la première fois, des applications en matrices alimentaires (jus d’orange, cassoulet) ont été décrites. Enfin, dans la troisième étape, nous avons amélioré les performances de la méthode de détection du modèle T4/E. Coli. L’introduction d’une séparation immunomagnétique des particules virales après amplification au sein des bactéries hôtes a permis de détecter jusqu’à 1 cfu/mL d’E. Coli dans une matrice alimentaire complexe (lait).
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Baswaid, Saced Haj. "Les ecdystéroi͏̈des chez les Mammifères : recherche sur leur origine, leur nature et leur signification clinique, à l'intérieur ou hors du contexte parasitaire." Montpellier 2, 1990. http://www.theses.fr/1990MON20055.
Full textAbstract:
Le probleme des ecdysteroides chez les mammiferes a ete etudie de facon systematique et a partir de grands echantillons, afin d'evaluer leur interet clinique potentiel, dans un contexte parasitaire ou hors de ce contexte. La principale technologie utilisee est le ria associe a la hplc. Les principaux resultats sont: 1) mise en evidence de composes de type ecdysteroide chez deux parasites syphacia obvelata (nematode) et dicrocoelium dendriticum (trematode); 2) chez le hamster, comme chez l'homme, aucune correlation n'a pu etre mise en evidence entre les taux d'ecdysteroides sanguins ou urinaires et la charge parasitaire. Cela remet en cause la possibilite de depister une helminthiase par la mesure de ce parametre; 3) par contre, il est apparu que de forts taux d'ecdysteroides pouvaient etre rencontres chez des malades souffrant de pathologies diverses. Il faut noter que cette situation etait toujours associee a une pathologie severe; 4) l'analyse hplc a montre que le taux d'ecdysteroides chez les patients etait du a l'apparition dans l'urine de composes qui ne se presentent pas chez les personnes saines; 5) l'etude experimentale chez la souris a montre que la flore intestinale joue un role essentiel dans le metabolisme de ces produits, et sans doute dans l'apparition des composes immunoreactifs rencontres chez les patients. Ces elements permettront de reorienter les recherches pour tenter de comprendre l'origine et le metabolisme des ecdysteroides chez les mammiferes