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Temime-Smaali, Nassima. "Rôle de la Topoisomérase IIIα dans la structure des télomères des lignées ALT et modulation par un ligand de l'ADN G-quadruplexe : la télomestatinee." Reims, 2009. http://theses.univ-reims.fr/exl-doc/GED00001021.pdf.
Full text
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Bourd-Boittin, Katia. "Rôle des métalloprotéinases matricielles (MMPs) dans l'odontologie." Paris 5, 2005. http://www.theses.fr/2005PA05M001.
Full textAbstract:
La dégradation protéolytique des constituants de la matrice extracellulaire par les métalloprotéinases matricielles (MMPs) joue un rôle majeur dans l'odontogénèse. Après avoir identifié la présence et le profil d'expression des gélatinases (MMP-2 et MMP-9), de la MMP-20 et des TIMP-1 et -2 dans l'incisive de rat, nous avons cherché à mieux comprendre comment les MMPs et plus particulièrement les gélatinases et la MMP-20 pouvaient agir dans les processus d'organisation et de minéralisation des matrices dentaires. L'inhibition de leur activité par un inhibiteur synthétique des MMPs à large spectre, le Marimastat, dans un modèle des germes embryonnaires de souris en culture, a pertubé les mécanismes de nucléation dans la matrice dentinaire et a provoqué des pertubations sévères de la mise en place et par conséquent de la minéralisation de l'émail. Ces importantes altérations observées au niveau structural sont associées à des modifications au niveau moléculaire. En présence de Marimastat, deux des protéines majoritaires du tissu dentaire, la sialoprotéine dentinaire (DSP) et plus particulièrement l'amélogénine s'accumulent de manière anormale dans la matrice extracellulaire. Ces pertubations se traduisent par une modification de leurs différentes formes moléculaires. Ceci démontre la nécessité de la dégradation progressive de ces constituants matriciels. Le clivage de l'amélogénine par la MMP-20 a déjà été rapporté. En revanche, la dégradation protéolytique de la DSP par des protéases n'a jamais été décrite auparavant, nous avons pu montrer que la DSP mais aussi l'amélogénine sont clivées de manière rapide et totale par la MMP-2 recombinante. Par contre la MMP-9 n'a pas d'effet sur ces deux protéines dans les mêmes conditions expérimentales. La large distribution de la MMP-2 au sein des tissus dentaires, ainsi que sa capacité à dégrader certains constituants spécifiques des matrices dentaires permettent de lui attribuer un rôle majeur en association avec la MMP-20 dans l'établissement et la minéralisation de la dentine et de l'émailThe proteolytic degradation of the ECM components by the matrix metalloproteinases (MMPs) is thought to play a crucial role in odontogenesis. The aim of this thesis was to analyse the expression of several MMPs, namely MMP-2, MMP-9 and MMP-20, as well as of their physiological inhibitors, the TIMP-1 and TIMP-2 during tooth development and study their role in the formation and maturation of dental matrices. The two gelatinases (MMP-2 and MMP-9), enamelysin (MMP-20) and TIMP-1 and -2 have shown a developmentally regulated expression and specific localization within the developing tootth. The role of these MMPs in the processing and mineralization of the dental matrix was further studied in an organotypic culture model of developing mouse tooth germ. The inhibition of the MMPs activity in this model by a broad spectrum synthetic inhibitor, Marimastat, altered dental matrix nucleation and caused severe disruptions of enamel organisation and mineralization. These macroscopic effects was associated with significant modifications at the molecular level. MMP inhibition deregulated the molecular processing of two major dental matrix proteins, amelogenin and dental sialoprotein (DSP), coinciding with their accumulation and the loss of their normal distribution. While the cleavage of amelogenin by MMP-20 has been extensively studied, that of DSP has not been previously described. Our experiments provide evidence that MMP-2 is able to efficiently degrade DSP as well as amelogenin, while under the same conditions, MMP-9 had no effect. Based on the intense expression and large distribution of MMP-2 and its importance in the processing of the dental matrix, we suggest a major role for this enzyme, in association with MMP-20, in the maturation and mineramization of dentin and enamel
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Hannetel, Henri. "Connaissances nécessaires pour la confection d'une prothèse fixée esthétique sur pilier naturel." Reims, 2012. http://www.theses.fr/2012REIMO048.
Full textAbstract:
L’esthétique dentaire occupe une place de plus en plus importante dans l’exercice quotidien de notre profession. La demande croissante des patients, oblige le chirurgien dentiste à connaître les concepts actuels de l’esthétique, lui permettant de les appliquer et ainsi satisfaire chaque demande. Cette thèse reprend les différentes solutions esthétiques que l’on pourra apporter aux patients. Que ce soit la prothèse fixée céramo-metallique, la tout céramique ou alors la facette. La mise en œuvre de ces dernières sera également traitée.
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Garcia, Aurélie. "Établissement de modèles cellulaires de cancer du sein et de l'ovaire permettant l'étude des effets des récepteurs des œstrogènes sur la proliférération et l'activation de gènes." Montpellier 1, 2010. http://www.theses.fr/2010MON1TA07.
Full textAbstract:
Les récepteurs des oestrogènes a et β (REa et REβ) régissent de manière opposée l'expression de gènes nécessaires à la prolifération et à la différentiation cellulaire. Leur activité transcriptionnelle dépend d'un ligand naturel et de molécules environnementales capables de perturber leur fonctionnement. Les cancers du sein et de l'ovaire peuvent être hormono-dépendants. Les thérapies visant à contrecarrer la progression des cancers du sein exprimant le REa reposent sur son inactivation par inhibition de la production d'oestrogènes et inhibition de son activité. L'hormonothérapie n'est pas proposée pour traiter les cancers de l'ovaire, en raison d'une résistance de nova qu'il faudrait mieux comprendre. Il est également nécessaire de mieux appréhender les mécanismes de la résistance acquise dans le cas de cancers du sein{ afin de rechercher de nouvelles thérapies. L'objectif de cette thèse a été de préciser les effets des RE sur la prolifération cellulaire et l'activation des gènes. Pour cela, nous avons établi des modèles cellulaires bioluminescents de cancer du sein et de l'ovaire, dont la bioluminescence est dépendante des ligands oestrogéniques. Ces lignées nous ont permis de préciser les effets de ligands sélectifs naturels, synthétiques et environnementaux sur l'activation de gènes par les RE a et β. L'autre volet de ce travail a consisté à établir d'autres modèles bioluminescents mammaires et ovariens permettant d'étudier la prolifération cellulaire et tumorale in vitro et in vivo. Nous démontrons également l'intérêt de ces modèles pour l'étude du mécanisme d'acquisition de l'hormono-résistance et la recherche de nouveaux traitements antitumorauxEstrogen Receptors a and β (ERa and ERβ), which are members of the nuclear receptors superfamily, impact on cell proliferation and difrrentiation genes expression in an opposite manner. Both transcription factors activity belong to a natural ligand, but also to many environmental molecules, efficient to bind and disrupt their mechanism. Breast and ovarian cancers can be hormono-dependant cancers. Therapies aimed at counteract ERa positive breast cancers progression are mainly based on its invalidation. Nowadays, two strategies are applied: estrogen production inhibition using aromatase inhibitors, and ERa activity inhibition by anti-estrogens. On the contrary, hormono-therapy is not proposed for ovarian cancer treatment, because of a de nova resistance which remains to be better understood. It also appears essential to improve our knowledge about breast cancer resistance acquisition mechanisms, in order to research new therapies. The aim of this work was first to precise estrogen actions on~ cell proliferati n and target genes activation. For that, we established estrogen-responsive bioluminescent breast and ovarian cancers models. These cell lines allowed us to determine effects of naturat synthetic and environmental selective ligands on natural and synthetic genes activation through ERa and ERβ. The other part of this study consisted in establishing other breast and ovarian bioluminescent cell lines, allowing us to study cell and tumor proliferation in vitro and in vivo. We also show these bioluminescent models relevance to investigate hormono-resistance acquirement mechanisms and new anti-tumoral treatments
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Rivière, Christel. "Fonction et régulation de l'activité de la chimiokine SDF-1 et de son récepteur CXCR4 dans la mégacaryopoïèse." Paris 11, 2000. http://www.theses.fr/2000PA11T054.
Full textAbstract:
La libération des mégacaryocytes matures hors de la moelle osseuse est indispensable pour la production des plaquettes. Les mécanismes de cette libération ne sont pas clairement élucidés. Les chimiokines et leurs récepteurs ont été impliqués dans la régulation de la migration des cellules hématopoïétiques vers un site spécifique, mais également dans leur rétention dans ce site. Nous avons étudié le rôle de la chimiokine SDF-I et de son récepteur CXCR4 dans la mégacaryopoïèse, et montré que CXCR4 est exprimé dans les mégacaryocytes et les plaquettes, avec une expression croissante au cours de la maturation. Contrairement à son expression, la fonctionnalité du récepteur en réponse à SDF-I est diminuée au cours de cette différenciation. CXCR4 est couplé aux protéines Gay pour la transduction du signal. Dans une approche de RT-PCR en utilisant des oligonucléotides dégénérés, nous avons montré que plusieurs membres de la famille des protéines ROS, protéines impliquées dans la régulation négative des récepteurs couplés aux protéines Gαβγ, sont exprimés dans les mégacaryocytes matures et les plaquettes. L'expression des ARNm de RGS2 et ROSI6 augmente au cours de la maturation mégacaryocytaire, contrairement aux ROS, -1, -3 et -5. Seule l'expression de ces deux ROS sont régulées positivement par SDF-1 montrant leur rôle spécifique dans la régulation de la fonction de CXCR4. La surexpression de ROSI, RGS2, RGS3, et RGSI6, à la fois dans unelignée cellulaire mégacaryocytaire MO7e et dans des mégacaryocytes produits in vitro, conduisent à une inhibition de la réponse à SDF-1, aussi bien en migration que dans l’activation des MAP Kinases. L'ensemble de ce travail montre que le couple CXCR4/SDFI est impliqué dans la régulation de la migration des temps précoces de la mégacaryopoïèse. Ils suggèrent que la régulation positive de RGS2 et ROS16 au cours de la mégacaryopoïèse joue un rôle dans la perte de la fonction de CXCR4 et leur sortie de la moelle vers la circulationMature megakaryocytes migration out of the bone marrow represents the ultimate step for platelet production and their release into the blood circulation. Regulation of this mechanism remains to be determined. Chemokines and their receptors play a major role in regulating cell migration towards specifie site, but also in cell retention. We studied the role of the SDF-I chemokine and its receptor CXCR4 during megakaryopoiesis. CXCR4 is expressed in megakaryocytes and platelets with an increasing expression during this differentiation process. Nevertheless, in opposite to CXCR4 expression, response to SDF-1 is down regulated during megakaryocyte maturation. CXCR4 signal transduction is mediated through heterotrimeric G protein αβγ. Using RT- PCR with degenerate oligonucleotides, we showed expression of severa! ROS proteins family members, negative regulators of G protein coupled receptor signaling, in megakaryocytes and platelets. RGS2 and RGS16 transcript levels, but not ROSI, RGS3 and ROSS, increase during megakaryocyte differentiation. Only these two ROS are transcriptionnaly upregulated in response to high concentrations ofSDF-1, revealing a specifie role in downregulating CXCR4 function. ROSI, RGS2, RGS3, and RGS16 overexpression in a megakaryocytic cellline MO7e and in megakaroyctes obtained in vitro lead to an inhibition ofSDF-1 response as weil as in migration and MAP kinases activation assays. This whole work implies CXCR4/SDF-I proteins in regulation of early stages of megakaryocyte migration. Our results suggest that upregulation of RGS2 and ROS16 expression during MK maturation plays a crucial role in CXCR4 loss of function and megakaryocyte release into the blood circulation
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Hezzaz-Bouchahm, Nadia. "Etude du stress oxydant et de sa modulation par le dialyseur Vitabran chez les sujets hémodialysés." Reims, 2010. http://www.theses.fr/2010REIMM204.
Full textAbstract:
L’@insuffisance rénale chronique est associée à une augmentation du stress oxydant. Celui-ci est dû à une surproduction de formes réactives de l’oxygène et à une diminution des défenses antioxydantes. Il participe aux complications associées à l’urémie, en particulier aux complications cardiovasculaires. Il est mesuré par quantification des produits terminaux d’oxydation. L’objectif de la thèse a été de mettre au point les techniques de dosage de plusieurs marqueurs du stress oxydant d’une part et d’étudier in vivo, l’influence d’une membrane de dialyse antioxydante (Vitabran ; polysulfone greffée en vitamine E) sur le stress oxydant et la formation des produits avancés de glycation chez les patients en hémodialyse conventionnelle, d’autre part. Nous avons réévalué le dosage des S-nitrosothiols (RSNO) par fluorimétrie en utilisant le Diaminonaphtalène (DAN) chez des sujets insuffisants rénaux chroniques (IRC). Initialement décrit pour la détermination des nitrites et des RSNO dans les échantillons environnementaux, ce dosage a ensuite été utilisé pour mesurer ces composés dans les matrices biologiques. Nous montrons qu’avec quelques modifications cette technique peut être utilisée pour détecter des concentrations plasmatiques de nitrites de l’ordre du nanomolaire. Nous montrons que les taux de nitrite plasmatique sont identiques chez les sujets témoins et les patients dialysés. Par contre, cette technique de mesure ne permet pas de mesurer les taux de RSNO plasmatiques. Nous avons également mis au point les techniques pour mesurer la peroxidation lipidique (TBARS ; thiobarbituric acid reactive substances), l’oxydation des protéines (AOPP ; advanced oxidative protein products) et la pentosidine, un produit avancé de glycoxydation. Nous avons ensuite étudié l’effet d’une membrane VitabranE, constituée de polysulfone recouverte de vitamine E, sur les marqueurs de stress oxydant et sur l'activation des polynucléaires neutrophiles. Il s’agit d’une étude prospective, randomisée, en cross-over, incluant 36 patients en hémodialyse chronique comparant des dialyseurs en polysulfone (PS) et des dialyseurs en polysulfone contenant de la vitamine E (PS-VE). Nous n’avons pas trouvé de différence significative entre ces deux dialyseurs en ce qui concerne le taux plasmatique de pentosidine, de TBARS et d’AOPP, la bioincompatibilité testée par l'activation des neutrophiles était identique avec les deux dialyseurs. Cette étude n’a pas montré d’effet antioxydant de la membrane Vitabran, recouverte de vitamine E, sur le stress oxydant chez les sujets hémodialysés. Il est possible que l’amélioration de la biocompatibilité des membranes en polysulfone, ne permette plus d’observer l’effet antioxydant des membranes de dialyse recouvertes de vitamine E. Une seconde possibilité est que l’effet antioxydant de la membrane Vitabran ne s’exerce pas sur toutes les réactions d’oxydo-réduction mais plutôt sur la peroxydation lipidique, la vitamine E étant un antioxydant liposoluble. Notre étude n’était pas assez puissante pour montrer une petite différence des marqueurs de peroxydation lipidique. Il faudrait envisager une étude avec un nombre de patients plus important et des techniques de dosage plus spécifiques.@Chronic renal failure is associated with increased oxidative stress. This is due to overproduction of reactive oxygen forms and reduced antioxidant defenses. It participates in the complications associated with uremia, particularly cardiovascular complications. It is measured by quantifying end products of oxidation. The aim of the thesis was to develop techniques for the determination of several markers of oxidative stress on the one hand and to study in vivo the influence of a dialysis membrane antioxidant (Vitabran; polysulfone grafted vitamin E) on oxidative stress and formation of advanced glycation end products in patients on conventional hemodialysis, on the other hand. We have reassessed the determination of S-nitrosothiols (RSNO) by fluorimetry using diaminonaphthalene (DAN) in patients with chronic renal failure (CRF). Initially described for determination of nitrite and RSNO in environmental samples, this assay was then used to measure these compounds in biological matrices. We show that with some modifications this technique can be used to detect plasma concentrations of nitrite at the nanomolar level. We show that plasma nitrite levels were identical in control subjects and dialyzed patients. However, this measurement technique does not measure the rate of plasma RSNO. We have also developed techniques to measure lipid peroxidation (TBARS, thiobarbituric acid reactive substances), protein oxidation (AOPP, advanced oxidative protein products) and pentosidine, an advanced glycoxidation products. We then studied the effect of a membrane VitabranE consisting of polysulfone coated vitamin E on oxidative stress markers and activation of neutrophils. This is a prospective, randomized, crossover, study, including 36 patients in chronic hemodialysis dialyzers comparing polysulfone (PS) and polysulfone dialyzers containing vitamin E (PS-VE). We found no significant differences between these two dialyzers in terms of the plasma pentosidine, TBARS and AOPP, the bio-incompatibility tested by activation of neutrophils was identical with the two dialyzers. This study showed no effect of the antioxidant Vitabran membrane covered with vitamin E on oxidative stress in hemodialysis patients. It is possible that the improvement of biocompatibility of polysulfone membranes, no longer allows observing the anti-oxidant dialysis membranes coated with vitamin E. A second possibility is that the antioxidant effect of the membrane Vitabran is not exerted on all the redox reactions but rather on lipid peroxidation, vitamin E is a fat-soluble antioxidant. Our study was not powerful enough to show a small difference in markers of lipid peroxidation. Consideration should be given a study with a larger number of patients and with more specific assays
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Fanchon, Stéphanie. "Effets de deux inhibiteurs de métalloprotéases (marimastat® et CT1166®) et d'un facteur de croissance (TGFβ-1) sur l'odontogénèse." Paris 5, 2005. http://www.theses.fr/2005PA05M005.
Full textAbstract:
Afin de préciser le rôle des métalloprotéases dans l'odontogénèse, nous avons d'abord testé les effets de deux inhibiteurs synthétiques de métalloprotéases matricielles, le marismatat® et la CT1166® sur des cultures organotypiques de germes dentaires d'embryons de souris. Après avoir validé notre modèle, nous avons montré une réelle implication des MMPs dans la formation de l'émail et dans la minéralisation de la dentine, en particulier des MMP-2, -9, -3 et -20. Les modifications structurales s'accompagnent de modifications moléculaires analysées aussi à l'échelle ultrastructurale. L'inhibition des MMPs entraîne le changement d'expression de certaines molécules, en particulier de l'amélogénine, la DSP, la décorine, du biglycan et du TGFβ. Puis, nous avons cherché à préciser les effets du TGFβ et plus particulièrement du TGFβ-1 dans les phénomènes de prolofération, de différenciation et d'expression de certaines molécules. Nous avons analysé le modèle de culture organotypique autorisant une supplémentation en TGFβ-1 et parallèlement étudié des souris mutantes surexprimant le TGFβ. Ces deux modèles présentent des modifications des matrices amélaire et dentinaire. Nos résultats révèlent un émail poreux, aprismatique présentant alors une architecture pertubée, une prédentine avec une densité accrue de fibrillles de collagène et une dentine hypominéralisée, ayant toutes les caractéristiques d'une ostéodentine depuis la jonction entre le manteau dentinaire et la dentine circumpulpaire. Ceci démontre l'implication des MMPs et du TGFβ dans l'odontogénèse. Il reste maintenant à préciser leurs mécanismes d'actionIn order to study the role of matrix metalloproteinases in odontogenesis, two MMPs inhibitors, marimastat® and CT1166®, were tested on an organotypic culture model of embryonic mouse tooth germs. MMPs are really implicated in the processing and mineralization of the dental matrix, possibly MMP-2, -9, -3 and -20. Macroscopic effects are associated with significant modifications at the molecular and ultrastructured levels. MMPs inhibition deregulated the molecular processing of e few molecules studied here, namely amelogenin, dental sialprotein, decorine, biglycan andTGFβ. Then, in order to get a better understanding of the TGFβ effects and more precisely on cell proliferation and differenciation, and espression of molecules, organotypic toooth germ culture were supplemented with TGFβ. They were analyzed. Along this way, mutant mice overexpressing TGFβ have been studied. These two models provide evidence that enamel and dentin matrix are altered. Enamel was porous, aprismatic with a malformed architecture. Predentin displayed a denser collagen fibrils accumulation and dentin was hypomineralized, and apparently revealed as an osteodentin rather than orthodentin in the circumpulpal dentin, whereas the mantle dentin was not altered. These results provide evidence that MMPs and TGFβ are implicated in odontogenesis. The mechanisms of these interactions remain to be elucidated
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Perbet, Romain. "Rôle des vésicules extracellulaires dans la propagation de la protéine Tau." Thesis, Lille 2, 2020. http://www.theses.fr/2020LIL2S023.
Full textAbstract:
L’agrégation de tau intra-neuronale est une caractéristique commune d’un groupe hétérogène de maladies neurodégénératives appelées tauopathies. Dans certaines d’entre elles, la pathologie affecte une région cérébrale avant de se propager à d’autres régions.Cette évolution stéréotypée dans le temps et dans l’espace est probablement liée à une propagation de type prion d’espèces de tau ayant des propriétés de recrutement. Ces espèces pathologiques de tau identifiées dans le liquide interstitiel cérébral (ISF) de souris transgéniques et dans le liquide céphalorachidien humain (LCR) peuvent être internalisées par des cellules et induire une agrégation intracellulaire de tau (Takeda et al., 2016). Ces espèces pathologiques sont encore mal caractérisées mais plusieurs mécanismes potentiellement impliqués dans leur propagation ont été démontrés. Parmi eux nous avons démontré que tau est sécrétée dans les vésicules extracellulaires (EV) (Dujardin et al., 2014).Dans ce contexte nous avons voulu : 1/ vérifier l’hypothèse selon laquelle la protéine Tau pathologique est présente dans les VE extraites de tissus de patients atteints de différentes Tauopathies et que ces dernières peuvent induire de la pathologie chez l’animal. 2/ détecter des espèces pathologiques de Tau dans les VE contenues dans le plasma et le LCR, potentiels biomarqueurs de Tauopathies. 3/déterminer si de la protéine Tau peut être transférée d’un neurone à un astrocyte et dans le cas échéant, de déterminer la/les voies de transfert.Afin de tester la présence de tau avec potentiel de recrutement dans les EV extraites d’ISF de patients atteints de tauopathie set de souris transgéniques nous avons utilisé un biosenseur biologique sensible et spécifique. Nos résultats démontrent que des EV extraites d’ISF de patients atteints de maladie d’Alzheimer, de paralysie supranucléaire progressive (PSP) et de souris Tau30 contiennent de la tau pro-nucléantes. Ces capacités de recrutement sont corrélées à la sévérité de la pathologie pour la MA (préfrontal>occipital>cervelet) et induisent de la pathologie chez la souris transgénique. La présence de tau dans ces VE supporte l’idée que les EV pourraient avoir un rôle dans la propagation de tau.Nous avons également démontré par différentes approches in-vitro que la protéine Tau peut être transférée de neurone à astrocyte. Ce transfert se fait principalement par les vésicules extracellulairesIntra-neuronal accumulation of tau protein aggregates is one of the common feature of a group of heterogeneous neurodegenerative diseases called tauopathies. In some of them, the pathology will first affect a region before spreading to other regions.This staging could be linked to the prion-like propagation of pathological seed-competent tau species. These seeds, identified in transgenic mice interstitial fluid (ISF) and in human cerebrospinal fluid (CSF) are uptaken by cells and induce subsequent intracellular tau aggregation (Takeda et al., 2016). The pathological species of tau which are spreading are not yet well characterized but several mechanisms mediating their transfer (secretion and capture) have been highlighted. Among them, we demonstrated that tau is secreted in extracellular vesicles (EV´s) (Dujardin et al., 2014). We also know that neurons are implicated in this transfer but the role of glial cells is unknown.In this context, we wanted to: 1 / demonstrate that pathological Tau protein is present in EVs extracted from brain of patients suffering from different Tauopathy and that those EVS induce pathology in animals. 2 / detect pathological Tau species in EVs extracted from plasma and CSF, potential biomarkers of Tauopathies. 3 / demonstrate that Tau protein can be transferred from neuron to astrocyte and, if so, to determine the transfer pathway.To test the seeding potential of EV’s containing in ISF derived from human brain of patient presenting tauopathies, and Tau 30 mouse brain we have used a sensitive and specific tau biosensor assay. Our results demonstrate that EVs isolated from ISF of AD patient, PSP patient and Tau 30 mouse contain seed prion-like properties. The ability of these seeds to recruit tau seems to be correlated to the severity of tau pathology (prefrontal>occipital>cerebellum) for AD. This might reflect the slight presence of neurofibrillary degeneration as well as extracellular tau in this pathology in comparison to AD. Finally, the presence of seeds-containing EV’s in the extracellular space supports the idea that these shuttles might be implied in the prion-like propagation of tau pathology in Humans. Additionally, tau pathology spreading is driven by EV’s rather than by free-floating tau species.We also demonstrated that tau can be transferred from neuron to astrocyte; this transfer is more efficient with EV’s than with free floating tau.These data open new avenues for therapeutic interventions that might targets the toxic and propagative species
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Rignon-Bret, Jean-Marie. "Étude comparative de différents systèmes d'enregistrement du rapport intermaxillaire chez des édentés totaux présentant une pathologie acquise mais réversible des articulations temporo-mandibulaires : matérialisation et visualisation des résultats grâce à l'articulateur R.B. et une étude tomographique." Paris 5, 1986. http://www.theses.fr/1986PA05A001.
Full text
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Lemaire, Julie. "MicroARN : biomarqueurs et cibles thérapeutiques en oncogenèse." Thesis, Lille 2, 2021. http://www.theses.fr/2021LIL2S006.
Full textAbstract:
Les microARN (miARN) représentent une classe de petits ARN non codants régulateurs de l’expression génique. Ils sont impliqués dans de nombreuses fonctions cellulaires et moléculaires essentielles. De plus, leur dérégulation joue un rôle important dans le processus de tumorigenèse. En effet, certains miARN ont été décrits comme des oncogènes ou des gènes suppresseurs de tumeur. Ces travaux de thèse s’inscrivent dans ce contexte. Ainsi, une première étude a consisté à identifier les miARN exprimés de manière différentielle dans les cellules tubulaires rénales proximales en réponse à une exposition au cadmium, un composé environnemental présentant des propriétés carcinogènes. Cette étude permet de suggérer que certains de ces miARN pourraient présenter un intérêt en tant que biomarqueurs d’exposition au cadmium.Dans une seconde étude, nous avons évalué les propriétés pro-tumorales de miR-92a-3p dans les cancers pulmonaires non à petites cellules. Nos données obtenues in vitro suggèrent que le ciblage de miR-92a-3p par des oligonucléotides antisens pourrait représenter une stratégie thérapeutique pertinente. Un modèle murin d’adénocarcinome pulmonaire (modèle CCSPCre-LSL-KrasG12D) a été mis en place et permettra de tester l’effet pharmacologique de ce type d’inhibiteurs.Au total, ces travaux soulignent l’importance des miARN en tant que biomarqueurs et cibles thérapeutiques dans le domaine du cancerMicroRNAs (miRNAs) represent a class of small non-coding RNAs that regulate geneexpression. They are involved in many essential cellular and molecular processes such as celldeath or differentiation. In addition, their deregulation plays an important role in thetumorigenesis. Indeed, many miRNAs have been described as oncogenes or tumor suppressorgenes. In this context, this thesis work focused on the potential role played by miRNAs inkidney and lung cancers. Indeed, a first part consisted in identifying miRNAs differentially expressed in proximal renal tubular cells in response to cadmium exposure, an environmental compound with carcinogenic properties. This data suggests that some of these miRNAs could be of interest as biomarkers of cadmium exposure.In the second part of this thesis, we evaluated the tumorigenic properties of miR-92a-3p innon-small cell lung cancers. Our in vitro data suggests that targeting miR-92a-3p by antisense oligonucleotides could represent a relevant anticancer therapeutic strategy. Furthermore, amouse model of pulmonary adenocarcinoma (CCSP-Cre-LSL-KrasG12D model) has been developed to test the pharmacological effect of this therapeutic strategy.Overall, this work highlights the importance of miRNAs as biomarkers and therapeutic targets in the field of cancer
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Radi-Abokhair, Maiada. "Reconstruction tridimensionelle de la morphogenèse du pancréas chez l'homme et chez le rat pendant la période embryonaire du stade 12 au stade 23." Montpellier 1, 2010. http://www.theses.fr/2010MON1TA08.
Full textAbstract:
L'étude porte sur la morphogenèse du pancréas depuis l'apparition des premières cellules des deux bourgeons pancréatiques, dorsal et ventral, et ce dès le stade 12 du développement embryonnaire, jusqu'à la formation du pancréas définitif au stade 23 qui correspond à la fin de la période embryonnaire à la Sème semaine post-ovulatoire. Cette étude est effectuée à partir de coupes embryonnaires sériées de 45 spécimens, comprenant 9 embryons humains et 36 embryons de rat. Après acquisition des images microphotogràphiques des coupes, les reconstructions tridimensionnelles sont réalisées pour chaque stade du développement, avec le logiciel informatique:MRI Object Modeling Workbench, développé par le CNRS de Montpellier (département CRBM de l'équipe P. Travo, V. Baecker) La dynamique du développement, la fusion des deux bourgeons pancréatiques et les phénomènes de rotation sont observés clairement. La connaissance des étapes au cours de la morphogenèse du pancréas en reconstnlction tridimensionnelle apporte des éléments pour la démarche diagnostique et la prise en charge thérapeutique des diverses affections de cet organe qui trouvent leur origine au cours de la période embryonnaire. La simi1itude du suivi de la morphogenèse du pancréas chez l'homme et chez le rat, montre que l'embryon de rat offre un bon modèle expérimentalThe study based on the morphogenesis of the pancreas since the appearance of the first ceIls in both pancreatic buds, dorsal and ventral, and right from stage 12 of the embryonic deveiopment, to the final formation of the pancreas at stage 23 which corresponds to the end of the embryonic period during the Sth post-ovulatory week. This study was performed using seriai embryonic sections of 45 specimens, including 9 human embryos and 36 embryos of rats. After the acquisition of micro photographie images of the. Sections, three-dimensional reconstructions were performed for each stage of development, with the :MRI computer software Object 1v1odeling Workbench, developed by the CNRS in Montpellier (Department :MERC-CNRS team Travo P. , VLBaecker). . The dynamics of development, the fusion of the two pancreatic buds and the phenomena of rotation were clearly observed. The knowledge of the stages during the morphogenesis of the three-dimensional reconstruction of the pancreas provides elements for the diagnostic approach and the therapeutic management of various diseases of the body, which oecur during the embryonic period. The similarity of the morphogenesis of the pancreas in humans and rats shows that the rat embryo provides a good experimentaI model
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Bustamante, Jacinta Cecilia. "Défaut héréditaire de CYBB et prédisposition mendélienne aux infections mycobactériennes." Paris 5, 2007. http://www.theses.fr/2007PA05A003.
Full textAbstract:
Le syndrome de susceptibilité mendélienne aux infections mycobactériennes (MSDM) est un syndrome rare caractérisé par une susceptibilité accrue à des germes intracellulaires peu virulents (bacille de Calmette-Guérin, mycobactéries environnementales) sans évidence d'autre infection (sauf des infections à salmonelles). Des mutations causales de six gènes affectent la boucle d'activation IL12/IL23-IFNγ. Nous avons étudié quatre hommes d'une famille non consanguine ; avec des infections mycobactériennes récurrentes. Nous avons identifié deux régions d'intérêt sur le chromosome X avec un LOD score maximum de 1,93. Une mutation, Q231P, a été retrouvée sur le gène CYBB chez ces patients. CYBB, élément essentiel du système NADPH dans les phagocytes, est responsable d'un autre déficit immunitaire, la granulomatose septique chronique. Cette mutation affecte uniquement l'explosion oxydative dans les macrophages dérivés in vitro. Ce travail permet de définir une nouvelle forme liée au chromosome X du MSMD, et il indique que l'explosion oxydative est importante pour l'immunité antimycobactérienne dans les macrophages tissulaires chez l'hommeMendelian susceptibility to mycobacterial disease (MSMD) is a rare syndrome conferring predisposition to clinical disease caused by weakly virulent mycobacteria (bacille Calmette Guérin vaccines and environmental mycobacteria), as well as more virulent. M. Tuberculosis and salmonella. Mutations found in six genes involved IL12/IL23-IFNγ mediated immunity. We studied a multiples family in which four otherwise healthy adult males show mycobacterial diseases (BCG-osis and tuberculosis). By multipoint linkage analysis, a maximal Lod score of 1. 93 was found for two candidate regions on X-chromosome. The patients harbor a novel mutation in CYBB (Q231P), which abolishes the respiratory burst in monocyte-derived macrophages. This gene is an essential component of NADPH in phagocytes. Germline CYBB mutations are commonly associated with chronic granulomatous disease. The MSMD-causing mutation in CYBB selectively affects the respiratory burst in macrophages. This experiment of nature indicates that the pathway in human macrophages is crucial for protective immunity to mycobacteria
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de, Beco Simon. "Homéostasie mécanique des épithéliums : rôle de la dynamique du cytosquelette et des jonctions adhérentes." Paris 11, 2009. http://www.theses.fr/2009PA11T115.
Full text
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Carcaillon, Laure. "Hémostase, athérothrombose et démence vasculaire au cours du vieillissement." Paris 11, 2010. http://www.theses.fr/2010PA11T079.
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Bodineau-Mobarak, Agnès. "Inflammation gingivale au cours de la parodontite chronique : effet du vieillissement et apport de la thérapie photodynamique." Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05M004.
Full textAbstract:
La première partie de ce travail est une analyse comparative des tissus gingivaux inflammatoires de personnes âgées de plus de 75 ans par rapport à ceux d'adultes d'âge moyen, tous atteints de parodontite chronique. Nous montrons chez les sujets âgés : (1) un déficit en lymphocytes T CD4+, (2) une diminution des cellules de Langerhans intra-épithéliales, (3) une augmentation des cellules dendritiques dermiques, (4) une augmentation des cellules dendritiques matures, (5) une moindre dégradation du réseau collagénique et une diminution de la sécrétion de la forme active de la MMP-9. Parallèlement, nous évaluons les effets de la thérapie photodynamique (PDT) à travers l'étude de prélèvements gingivaux obtenus dans le cadre d'un essai clinique et à l'aide de tissus reconstruits in vitro. Nos résultats ne montrent pas d'effet de la PDT sur le comportement des fibroblastes en culture mais l'étude in vivo révèle l'effet immuno-modulateur de la PDT sur les tissus gingivaux inflammatoiresThe first part of this work is a comparative analysis of inflammatory gingival tissues between elderly (more than 75) and middle-aged adults, with chronic periodontitis. We demonstrate in elderly : (1) a deficit in T helper lymphocytes, (2) a decrease in intraepithelial Langerhans cells, (3) an increase in dermal dendritic cells, (4) an increase in dendritic cells with a mature phenotype, (5) a lesser degradation of the collagen network associated with a decrease in the secretion of active form of MMP-9. At the same time, we evaluate the effects of PhotoDynamic Therapy (PDT) in the treatment of periodontal disease, through the analysis of gingival samples obtained in a clinical trial and of connective tissues reconstructed in vitro. Our results do not demonstrate any effect of PDT on the behavior of fibroblasts in culture; however, the clinical trial reveals the immunomodulatory effect of PDT in inflammatory gingival tissues
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Carrard, Julie. "Impact d'une exposition aux nanoparticules de carbone couplées au benzo(a)pyrène sur la réponse inflammatoire dans des modèles expérimentaux d'asthme." Thesis, Lille 2, 2020. http://www.theses.fr/2020LIL2S004.
Full textAbstract:
L'asthme allergique est une maladie inflammatoire chronique des voies aériennes. Elle se caractérise par le recrutement de cellules inflammatoires incluant les lymphocytes T helper (Th)CD4+ de type 2, producteurs d'interleukine (IL)-4, IL-5 et IL-13, ainsi que les éosinophiles, les mastocytes et les basophiles. La prévalence de l'asthme ne cesse d'augmenter ces dernières décennies et les modifications génétiques ne peuvent être les seules responsables. La pollution atmosphérique, et notamment particulaire, est suspectée de participer à cette tendance à la hausse. Les particules atmosphériques peuvent être classées selon leur diamètre aérodynamique, parmi lesquelles on retrouve les particules ultrafines (< à 100 nm). Ces dernières sont potentiellement plus nocives en raison de leur petite taille qui leur confère la capacité de se déposer profondément dans l'arbre bronchique. Elles sont également capables d'adsorber des molécules telles que les hydrocarbures aromatiques polycycliques. Or, certains de ces hydrocarbures, tels que le benzo(a)pyrène, sont connus pour être nocifs pour la santé et notamment pour l'appareil respiratoire. Nous nous sommes intéressés aux effets d'une exposition aux particules ultrafines liées au benzo(a)pyrène, sur la réponse inflammatoire dans deux modèles expérimentaux d'asthme induits par un allergène. Pour cela, nous avons utilisé un modèle simplifié de particules issues d'un processus industriel, que nous appellerons donc« nanoparticules ».Dans notre premier modèle, une exposition chronique aux nanoparticules de carbone couplées ou non au benzo(a)pyrène, a été réalisée chez des souris C57Bl/6 sensibilisées par voie intranasale à l'allergène Dermatophagoïdes pteronyssinus. Les nanoparticules n'ont eu aucun effet sur le recrutement cellulaire dans le lavage broncho-alvéolaire induit par l'allergène. De manière surprenante, la co-administration des nanoparticules avec l'allergène a diminué l'hyperréactivité bronchique par rapport à l’allergène seul. A l’inverse, au niveau tissulaire, la coexpositionaux nanoparticules couplées au benzo(a)pyrène avec l’allergène induit une forte augmentation de l'expression des cytokines Th2 et du recrutement de cellules inflammatoires dans le tissu pulmonaire par rapport aux souris sensibilisées. De plus, cette co-exposition modifie le type de cellules recrutées par rapport à l'allergène, avec une augmentation du nombre de neutrophiles, de cellules NKT-like, des cellules T CD8+, des monocytes/macrophages Ly6C+ etLy6C-. Ces résultats n'ont pas été retrouvés lors d'une co-exposition de l’allergène avec les nanoparticules non couplées au benzo(a)pyrène.Dans notre deuxième modèle, une exposition aux nanoparticules de carbone, couplées ou non au benzo(a)pyrène, a été réalisée chez des souris C57Bl/6 sensibilisées par voie intranasale avec une faible dose de l'allergène Dermatophagoïdes farinae. Les résultats préliminaires ont montré un effet adjuvant des nanoparticules avec l'allergène sur la production d'immunoglobulines E et sur l'infiltrat inflammatoire dans le lavage broncho-alvéolaire, principalement composé d'éosinophiles. L'expression des cytokines Th2 est également augmentée par la co-administration de l’allergène avec les nanoparticules non couplées au benzo(a)pyrène, mais pas avec celles couplées. La co-exposition aux nanoparticules couplées au benzo(a)pyrène avec l’allergène induit néanmoins l'expression de l'Il-33, une alarmine produite par l'épithélium, également pro-Th2.En conclusion, nos résultats suggèrent que les nanoparticules ont un impact sur l'inflammation chez les souris sensibilisées à l'allergène dans nos deux modèles expérimentaux. Cependant, la dose, la quantité et la nature des allergènes ainsi que des nanoparticules inhalées semblent influencer la réponse induite in vivoAllergic asthma is a chronic inflammatory disease of the airways. It is characterized by therecruitment of inflammatory cells including CD4+ type 2 helper T-lymphocytes (Th), interleukin(IL)-4, IL-5 and IL-13 producers, eosinophils as well as mast cells and basophils. The prevalenceof asthma has continued to increase in recent decades and genetic changes cannot be solelyresponsible Air pollution, especially particulate matter, is suspected to be part of this rising trend.Atmospheric particles can be classified according to their aerodynamic diameter, includingultrafine particles (< 100 nm). These particles are potentially more harmful because of their smallsize, which gives them the ability to settle deep in the bronchial tree. They are also able to adsorbmolecules such as polycyclic aromatic hydrocarbons. However, some of these hydrocarbons,such as benzo(a)pyrene, are known to be harmful to health and in particular to the respiratorysystem. We investigated the effects of exposure to benzo(a)pyrene-bound ultrafine particles onthe inflammatory response in two experimental models of allergen-induced asthma. For this, weused a simplified model of particles from an industrial process that we call « nanoparticles ».In our first model, chronic exposure to carbon nanoparticles coupled or not to benzo(a)pyrene,was performed in C57Bl/6 mice sensitized intranasally to the allergen Dermatophagoidespteronyssinus. Nanoparticles had no effect on cell recruitment in allergen-inducedbronchoalveolar lavage. Surprisingly, co-administration of nanoparticles with the allergendecreased bronchial hyperreactivity compared to allergen alone. In contrast, we observed aneffect on lung tissue when co-exposed to benzo(a)pyrene-coupled nanoparticles and allergen.Indeed, this co-exposure induced a strong increase in Th2 cytokine expression and cellrecruitment in lung tissue compared to sensitized mice. In addition, this co-exposure modify thetype of cells recruited by the allergen, with an increase in the number of neutrophils, NKT-likecells, CD8+ T cells, Ly6C+ and Ly6C- monocytes/macrophages. These results were not found inco-exposure to nanoparticles not coupled to benzo(a)pyrene.In our second model, exposure to carbon nanoparticles, coupled or not with benzo(a)pyrène, wasperformed in C57Bl/6 mice sensitized intranasally with a low dose of the allergenDermatophagoides farinae. Preliminary results showed an adjuvant effect of nanoparticles withthe allergen on immunoglobulin E production but also on the inflammatory infiltrate in thebroncho-alveolar lavage, mainly composed of eosinophils. The expression of Th2 cytokines isalso increased by the administration of allergen with nanoparticles uncoupled to benzo(a)pyreneand not with benzo(a)pyrene-coupled particles. But, co-exposure of allergen withbenzo(a)pyrene-coupled nanoparticles induces the expression of Il-33, an alarmin produced bythe epithelium, which is also pro-Th2. In conclusion, our results suggest that nanoparticles have an impact on inflammation in allergensensitizedmice in our two experimental models. However, the dose, the amount of allergen andthe nature of the inhaled nanoparticles appear to influence the induced response in vivo
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Neyraud, Vincent. "L'ubiquitination des GTPases Ral : Un nouveau mécanisme de régulation diu trafic intracellulaire de Ral et des micro-domaines menmbranaires lipidiques." Paris 11, 2010. http://www.theses.fr/2010PA11T085.
Full text
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Bousaleh, Mohamed. "Définir de nouvelles cibles thérapeutiques pour l´hépatite alcoolique : nécessité d´une approche translationnelle." Thesis, Lille 2, 2019. http://www.theses.fr/2019LIL2S041.
Full textAbstract:
L’hépatite alcoolique (HA) est une maladie complexe de mauvais pronostic. L’arsenal thérapeutique se limite souvent au traitement par corticoïde. Cependant, 40% des patients ne répondent pas au traitement et la transplantation hépatique est la dernière issue pour leur survie. L’HA est caractérisé par une importante infiltration de polynucléaires neutrophiles (PNN), et paradoxalement l’infection de ces patients est fréquente et liée à la mortalité. D’autre part, notre groupe a démontré un important défaut de régénération hépatique caractérisé par une diminution de la prolifération des hépatocytes dans l’HA. Le but de notre étude était de déterminer les mécanismes cellulaires à l’origine du défaut de régénération hépatique dans l’HA, d’explorer les mécanismes physiopathologiques impliqués dans l’interaction du PNN et de l’hépatocyte, et d’évaluer la capacité migratoire des PNN circulants au cours de l’HA.Notre étude a mis en évidence la voie Hippo/YAP comme étant profondément altérée dans l’HA. L’activation de l’effecteur YAP était anormalement induite dans les hépatocytes de patients HA. Cette activation hépatocytaire induisait une dédifférenciation et une perte de fonctionnalité des hépatocytes. L’inhibition de YAP par la dobutamine dans des hépatocytes primaires isolés de patients HA était capable de limiter le processus de dédifférenciation. Ces données suggèrent que cibler YAP représente une stratégie thérapeutique innovante pour la prise en charge de l’HA. Nos travaux ont aussi permis d’identifier la voie NOD1 comme acteur principal dans l’interaction PNN/hépatocytes par le biais de l’expression de molécules d’adhésion. Nos résultats suggèrent cette voie comme cible thérapeutique pour limiter les lésions hépatiques induite par le PNN. De plus, au cours de l’HA, une dérégulation de la voie IL33/sST2 était impliquée dans la migration des PNN. Nous avons démontré une diminution de la capacité migratoire des PNN circulant au cours de l’HA. Le traitement des PNN par l’IL33 était capable de compenser ce défaut migratoire, ce qui représente outil intéressant pour prévenir les risques infectieux dans l’HAAlcoholic hepatitis (AH) is a complex disease associated to a poor prognosis. The therapeutic arsenal is limited to corticosteroid treatment. However, 40% of patients do not respond to the treatment and liver transplantation represents the last option for their survival. AH is characterized by a large infiltration of polymorphonuclear neutrophils (PMN), and paradoxically the infection of these patients is a frequent event related to mortality. On the other hand, our group has demonstrated in AH an important defect of hepatic regeneration characterized by a decrease in hepatocytes proliferation, and the formation of ductular reaction. The aim of our study was to determine the cellular mechanisms causing the defect of liver regeneration in AH, to explore the pathophysiological mechanisms involved in the interaction of the PMN and hepatocytes, and to evaluate the migratory capacity of the PMN.Our work has highlighted the Hippo/YAP pathway as profoundly altered during AH. The effector YAP was aberrantly activated in AH hepatocytes. This led to the dedifferentiation and the loss of function of hepatocytes. The treatment of AH-isolated hepatocytes by the YAP inhibitor, dobutamine, limited the dedifferentiation process. Targeting YAP appears as an innovative strategy for AH management. Our work also identified the NOD1 pathway as a major actor in the PNN/hepatocyte interaction through expression of adhesion molecules. Our results suggest that NOD1 is an interesting target to limit PMN-induced liver injury. In addition, during AH, deregulation of the IL33 / sST2 pathway was involved in PNN migration. We have demonstrated a decrease in the migratory capacity of circulating PMNs. The treatment of PMN by IL33 was able to compensate for this migratory defect, which represents an interesting tool to prevent infectious risks during AH
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Poncet, Anaïs. "Modulation de l’activité des cellules dendritiques par la réponse UPR induite lors de l’infection à Toxoplasma gondii." Thesis, Lille 2, 2019. http://www.theses.fr/2019LIL2S038.
Full textAbstract:
Toxoplasma gondii (T. gondii) est un parasite intracellulaire obligatoire responsable d’une zoonose cosmopolite, la toxoplasmose. Chez les sujets sains, les parasites de type II persistent sous forme de kystes cérébraux, responsables de maladies mentales sévères et augmentant le risque d’apparition de maladies neurodégénératives. Le contrôle de la toxoplasmose chronique dépend de la sécrétion de l’interleukine pro-inflammatoire IL-12 par les cellules dendritiques (DCs) permettant l’activation des lymphocytes T CD8+ (LTs CD8+) cytotoxiques et la sécrétion de l’IFN-g. Les LTs CD8+ jouent un rôle clé dans l’élimination des cellules parasitées durant la phase aigüe de l’infection, mais aussi dans l’établissement d’une immunité protectrice à long terme. Afin de survivre et persister, T. gondii sécrète de nombreux facteurs de virulence qui modulent les réponses immunitaires de son hôte.Des travaux récents ont mis en évidence le rôle clé de la réponse UPR (Unfolded Protein Response) dans la régulation des réponses immunitaires. La réponse UPR est une réponse cytoprotectrice induite durant un stress cellulaire déclenché lors de variations dans l’homéostasie protéique et lipidique au sein du réticulum endoplasmique mais aussi lors d’un stress infectieux. Jusqu’à présent, l’influence de l’infection par T. gondii sur la réponse UPR n’est pas connue. Nous avons émis l’hypothèse que l’induction de l’UPR par T. gondii dans les DCs pourrait moduler leur capacité de présentation antigénique et la sécrétion de cytokines inflammatoires, impactant ainsi la dissémination et la persistance du parasite.En utilisant, des DCs déficientes pour certains effecteurs de l’UPR (IRE1a et XBP1s), nous avons examiné l’impact de leur activité sur les DCs infectées. In vitro, nos résultats ont montré que T. gondii active la voie IRE1a de l’UPR d’une manière dépendante de la voieMyD88 et contrôle ainsi la production des cytokines pro-inflammatoires IL-6 et IL-12 et la présentation antigénique d’antigènes parasitaires par le CMH-I. Dans les souris infectées,la voie IRE1a est spécifiquement activée dans la sous-population de cDC1 et régule l’activation des LTs CD8+, essentiels à la production de l’IFN-g. De plus, les souris déficientes pour IRE1a et XBP1 spécifiquement dans les DCs ne contrôlent pas la prolifération des parasites et succombent à l’infection aigüe. Notre étude révèle donc un rôle protecteur essentiel de cette voie dans les DCs pour combattre l’infection à T. gondiiThe intracellular parasite Toxoplasma gondii (T. gondii) is one of the most common zoonotic pathogen invading all animals, including humans. In healthy individuals, type II parasite persists in cysts in the central nervous system leading to severe mental disorders and increasing the risk of developing neuro degenerative diseases. The control of chronic toxoplasmosis relies on dendritic cells (DCs) functions that activate the IL-12- induced Tcell IFN-g-derived response. In order to survive, T. gondii secretes an arsenal of virulencefactors that modulate host immune responses; however the interplay between DCs andT. gondii has been poorly explored. Recent studies highlighted the intricate molecularcross-talk between the Unfolded Protein Response (UPR) and the innate pathways. TheUPR response is a cytoprotective response induced during a cellular stress triggered byan imbalance in protein and lipid homeostasis, but also during intracellular pathogen infection.So far, nothing is known about the influence of T. gondii infection on the UPR.We hypothesized that T. gondii induction of the UPR could modulate the antigenic presentationability and cytokine secretion of DCs, thereby impacting parasite disseminationand persistence. Using, Bone-Marrow-derived DC (BMDCs) and mice deficient for the ERsensor IRE1a and the transcription factor XBP1, we examined the impact of the UPR onDC responses and T cell activation. Our results demonstrated that T. gondii infectionactivates the IRE1a arm of the UPR in BMDCs in a MyD88 dependent manner, therebyinducing a unique set of secreted pro-inflammatory cytokines. We also demonstrated thatthis pathway regulates MHC-I presentation of secreted parasite antigens. In infected mice,we found that the IRE1a/XBP1s pathway is specifically activated in splenic cDC1s, regulatesT CD8+ cell responses and thus, the IFN-g production. In addition, IRE1a/XBP1deficient mice do not control parasite proliferation and succomb during the acute phaseof the infection. Therefore, our work revealed an essential protective role of the IRE1abranch of the UPR in DCs to fight T. gondii infection
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Jourdain, Marie-Laure. "Analyse phénotypique et fonctionnelle des ostéoclastes et de leurs précurseurs dans la maladie osseuse liée à la mucoviscidose Inflammation and CFTR-related bone remodeling in patients in cystic fibrosis CFTR-deficient pigs display alterations of bone microarchitecture and composition at birth Overexpression of RANKL in osteoblasts: a possible mechanism of susceptibility to bone disease in cystic fibrosis." Thesis, Reims, 2019. http://www.theses.fr/2019REIMO201.
Full textAbstract:
L’augmentation de l’espérance de vie des patients atteints par la mucoviscidose (CF, Cystic Fibrosis) est associée à des complications extra-pulmonaires dont la prévalence augmente avec l’âge, comme c’est le cas pour la maladie osseuse ou le diabète, représentant une véritable problématique pour la qualité de vie des patients CF. Le déficit osseux lié à la mucoviscidose reste encore incomplètement caractérisé et la compréhension de l’impact du défaut de fonction du canal CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane conductance Regulator) sur la physiologie osseuse est indispensable pour proposer de nouvelles stratégies thérapeutiques. La mutation la plus fréquente de CFTR (F508del) dans les ostéoblastes est associée à un ratio RANK-L/OPG élevé susceptible de stimuler l’ostéoclastogenèse. L’objectif de ce travail était d’étudier l’impact du défaut d’activité de CFTR sur les précurseurs ostéoclastiques et leur différenciation ainsi que l’activité fonctionnelle des ostéoclastes CF. Nous avons pu mettre en évidence qu’il existe une surexpression des récepteurs RANK et M-CSF à la surface des précurseurs ostéoclastiques issus de patients porteurs de la mutation G551D de CFTR. Par ailleurs, nous avons démontré que le phénotype ostéoclastique est fortement impacté par la mutation F508del, ainsi que la voie de la S1P, médiateur prépondérant dans la circulation des précurseurs ostéoclastiques entre les compartiments sanguins et osseux. L’ensemble de ces données et la mise en évidence d’un profil résorptif perturbé des ostéoclastes lorsque l’activité de CFTR est déficiente, suggèrent qu’il existe une dérégulation de la résorption, et plus largement du remodelage osseux chez les patients CFThe increasing life expectancy of patients with cystic fibrosis (CF) is associated with extra-pulmonary complications which prevalence increases with age, such as bone disease or diabetes, that impact the quality of life of CF patients. The bone deficit related to cystic fibrosis is still incompletely characterized and the understanding of the impact of CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane conductance Regulator) defect on bone physiology is essential to propose new therapeutic strategies. The most common mutation of CFTR, (F508del) in osteoblasts is associated with a high RANK-L/OPG ratio that may stimulate osteoclastogenesis. The aim of this work was to study the impact of CFTR defective activity on osteoclast precursors and their differentiation as well as the functional activity of CF osteoclasts. We have demonstrated that there is an overexpression of the RANK and M-CSF receptors on the surface of osteoclastic precursors derived from patients carrying the CFTR G551D mutation. Furthermore, we have revealed that the osteoclasts phenotype is strongly impacted by the F508del mutation as well as the S1P pathway, a prominent mediator for the circulation of osteoclastic precursors between blood and bone compartments. All of these data and the demonstration of a disturbed resorptive osteoclasts profile when CFTR activity is deficient suggest that there is a dysregulation of resorption and more widely of bone remodeling in CF patients
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Azria, Elie. "Sur les voies de la connaissance médicale : de la recherche clinique aux incertitudes de la pratique du soin : A propos de la controverse de l'accouchement des fœtus en présentation du siège." Paris 11, 2010. http://www.theses.fr/2010PA11T022.
Full text
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Luu, Duc-Nam. "Proposition et formalisation d’un modèle méthodologique pour la mise en place d’une stratégie d’éco-conception ainsi que des outils de déploiement pour son implémentation. Application au domaine de la pharmaceutique." Electronic Thesis or Diss., Paris, HESAM, 2023. http://www.theses.fr/2023HESAE033.
Full textAbstract:
Les enjeux environnementaux prennent une place majeure au sein de nos sociétés modernes. L’activité Humaine contribue à la dégradation de l’environnement et les industriels ont le devoir de limiter l’impact des solutions qu’ils proposent et mettent sur le marché. L’éco-conception est une des démarches de la conception pour le développement durable qui permet d’intégrer les aspects environnementaux en amont, lors des phases de développement. La pénétration de ses pratiques au sein d’industriels nécessite une intégration verticale et horizontale. L’intégration horizontale concerne les aspects stratégique, tactique et opérationnels tandis que l’intégration horizontale focalise sur les aspects de changement culturel et de facteurs humain. Cette thèse de doctorat s’intéresse à l’intégration de l’éco-conception au sein d’une entreprise multinationale pharmaceutique. L’objectif du projet s’est attaché à venir formaliser les concepts pour cette intégration dans l’industrie pharmaceutique afin de soutenir la transition des pratiques interne de ce secteur. La variété et complexité des aspects de l’éco-conception, ainsi que les défis à la fois techniques et organisationnelles de l’industrie pharmaceutique doivent être pris en compte afin de fournir une approche de transition cohérente. Les expérimentations de ces travaux ont été menées avec un partenaire, industriel pharmaceutique à l’échelle internationale, en collaboration avec les Arts et Métiers, campus de Paris. Les travaux menés ont permis de poser les bases d’un modèle d’intégration de l’éco-conception au sein de l’industrie pharmaceutique, avec des outils d’accompagnement associésEnvironmental issues take a major place in our modern societies. Human activity contributes to the degradation of the environment and manufacturers have the duty to limit the impact of the solutions they offer and put on the market. Eco-design is one of the approaches of Design for Sustainability which makes it possible to integrate environmental aspects, during the development phases. The penetration of its practices within industrials requires vertical and horizontal integration. Horizontal integration concerns the strategic, tactical and operational aspects while horizontal integration focuses on the aspects of cultural change and human factors. This doctoral thesis focuses on the integration of eco-design within a multinational pharmaceutical company. The objective of the project was to formalize the concepts for its integration in the pharmaceutical industry in order to support the transition of internal eco-design practices in this sector. The variety and complexity of eco-design aspects, as well as both the technical and organizational challenges of the pharmaceutical industry must be taken into account in order to provide a coherent transition approach. The experiments for this work were carried out with a partner, an international pharmaceutical industry, in collaboration with the Arts et Métiers, Paris campus. The work carried out has made it possible to lay the foundations of an eco-design integration model within the pharmaceutical industry, with associated support tools
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UREÑA, MARTÍN Carlos. "Study of Caveolae Mechanotransduction Under 3D Compressive Stresses : Comparative Analysis of 2 Models Mimicking Structural and Mechanical Tumor Characteristics." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2019. http://www.theses.fr/2019SACLS525.
Full textAbstract:
La mécanique et le stress compressif jouent un rôle important dans la progression tumorale. Récemment, plusieurs approches ont été développées pour tester le stress en compression dans des modèles 3D in vitro. Dans le présent travail, nous montrons d’abord la pertinence de la compression dans l’organisation des fibroblastes associés au cancer (CAF), en enveloppant les cellules cancéreuses lors d’une compression isotrope 3D dans des capsules d’alginate creux. Dans ce système, les CAF couvrent les cellules cancéreuses en présence de compression selon un processus impliquant vraisemblablement une réorganisation du dépôt de fibronectine et non un réarrangement passif des deux sphéroïdes. Dans la deuxième partie de ce travail, nous avons étudié la réaction des composants de la cavéole au stress en compression.Les cavéoles sont des invaginations de la membrane plasmique capables d'amortir la tension de la membrane, protégeant ainsi la cellule de son éclatement. Nous montrons ici comment les cavéoles réduisent leur présence lors de la compression3D à court terme et comment cette compression inhibe l'activation de STAT1 et STAT3 induite par l'interféron. De plus, les effets à long terme des contraintes de compression sur les sphéroïdes entraînent également la perte du composant cavéole EHD2, une ATPase centrale pour la stabilité des cavéoles sur la membrane. Enfin, nous avons trouvé différentes voies avec une transcription modifiée du gène après un stress compressif. Parmi eux, nous avons caractérisé l'effet de la perte decavéoline-1 sur la libération d'exosomes sous compression 3DMechanics and compressive stress play an important role in tumor progression. Recently, several approaches have been developed to test compressive stress in 3D in vitro models. In the present work, we first show the relevance of compression in the organization of cancer associated fibroblasts (CAFs), enwrapping cancer cells upon 3D isotropic compression in capsules of hollow alginate. In this system, CAFs cover cancer cells in the presence of compression by a process which most likely involves fibronectin deposition reorganization, and not a passive rearrangement of the two spheroids. In the second part of this work, we investigated the response of caveolae components to compressive stress. Caveolae are plasma membrane invaginations which are able to buffer membrane tension, thus protecting the cell from bursting. Here, we show how caveolae reduce their presence under 3D short term compression, and how this compression inhibits interferon induced STAT1 and STAT3 activation. Moreover, long term effects of compressive stress in spheroids result also in loss of the caveolae component EHD2, acentral ATPase for caveolae stability on the membrane. Lastly, we found different pathways with altered gene transcription after compressive stress. Among them, we characterized the effect of caveolin-1 loss on the release of exosomes under 3Dcompression
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Saleh, Yara. "Etude de la pathogénicité pulmonaire des polluants atmosphériques nanoparticulaires." Thesis, Lille 2, 2019. http://www.theses.fr/2019LIL2S014.
Full textAbstract:
Introduction : Des études épidémiologiques montrent que les polluants atmosphériques particulaires augmentent le risque de morbidité et de mortalité liées à des maladies respiratoires. La toxicité des particules dépend de leur composition chimique, leur conférant des propriétés mutagènes et/ou cancérogènes, mais également de leur granulométrie qui va conditionner leur pénétration et rétention dans les voies respiratoires.Les particules fines (PF<2,5μm) et surtout les particules ultrafines (PUF<0,1μm) peuvent ainsi atteindre les voies aériennes les plus profondes où leur épuration s’effectuera lentement par clairance macrophagique. Bien que les PUF possèdent une réactivité de surface et donc une toxicité potentielle plus élevées que les PF, leur impact toxicologique réel reste à déterminer.Matériels et méthodes : Pour ce projet, nous avons comparé l’impact sur la santé respiratoire d’une exposition prolongée à des PF et PUF collectées sur un même site urbano-industriel. Après caractérisation physico-chimique des particules (granulométrie, composition surfacique, élémentaire, en HAP), nous avons exposé des souris BALB/c par voie intranasale de manière aiguë à des doses uniques croissantes de PF ou de PUF (10, 50 ou 100 μg) et de manière subchronique pendant 1 mois ou 3 mois, à raison de 3 doses de 10 μg de particules par semaine. Les souris ont été ensuite sacrifiées, des lavages broncho-alvéolaires (LBA) ont été réalisés et différents tissus (sang, poumons, foie, fémurs) ont été prélevés pour effectuer des analyses toxicologiques.Résultats : La composition chimique élémentaire des PF et PUF n’a pas montré de différences majeures mais atteste leur origine industrielle par leur richesse en certains métaux. Par ailleurs, une teneur légèrement supérieure en HAP a été détectée dans les PF par rapport aux PUF. Pour toutes les conditions expérimentales, aucun effet génotoxique et/ou mutagène in vivo n’a été mis en évidence (tests des comètes, des micronoyaux, Pig-A négatifs). En revanche, l’étude de la cellularité des LBA, la quantification de l’expression génique des cytokines et l’analyse histologique des tissus pulmonaires suggèrent la survenue d’une inflammation chronique chez les souris exposées. L’apparition de zones lésionnelles étendues3est cependant plus précoce et plus marquée dans les poumons des souris exposées aux PUF. Des analyses transcriptomiques ont montré d’une part que le nombre de gènes dérégulés croît avec la dose et le temps d’exposition, et d’autre part que ce nombre est largement supérieur chez les souris exposées aux PUF par rapport à celles exposées aux PF. L’identification des principales voies de signalisation les plus significativement impactées confirme que les PUF induisent une réponse des tissus pulmonaires plus intense et plus précoce que les PF.En ce qui concerne les études épigénétiques, une dérégulation de la méthylation de l’ADN, des modifications d’histones et de l’expression génique de certains miARN était plus prononcée chez les souris exposées aux PUF. L’analyse fonctionnelle en cours des miARN spécifiquement dérégulés par les PUF, ou dérégulés communément par les PUF et les PF, devrait permettre l’identification de leurs ARNm cibles.Conclusion : Les résultats issus de ce projet suggèrent que les PUF ont un impact plus nocif sur la santé respiratoire que les PF, et devraient permettre l’identification de nouveaux biomarqueurs d’atteintes tissulaires. Les informations issues de ce projet pourront être transmises aux différents organismes en charge des polluants atmosphériques et de leurs effets sur la santé [...]Background: Air pollution is one of the leading causes of premature death worldwide. Among air pollutants, particulate matter (PM) is a major health risk factor, through the development of pulmonary diseases. The toxicity of PM depends on their chemical composition and size which increases their mutagenic and/or carcinogenic properties and determine their penetration and retention in the respiratory tract. Fine particles (FP <2,5μm) and ultrafine particles (UFP <0,1μm) can thus reach the deepest airways where their purification will be carried out slowly by macrophage clearance. Compared to FP, less is known about the toxicological impact of UFP.Methods: We first compared the impact of prolonged exposure to PF and PUF collected on the same urban-industrial site on the respiratory health in mice. After physicochemical characterization of the particles (granulometry, surface composition, elementary composition, PAH), BALB/c mice were intranasally exposed to increasing single doses of PF or PUF (10, 50 or 100 μg) and subchronically for 1 month or 3 months, to 3 doses of 10 μg of particles per week. Mice were then sacrificed, bronchoalveolar lavages (BAL) were performed and different samples (blood, lungs, liver, femurs) were taken for toxicological analyses.Results: The elemental chemical composition of FP and UFP did not show any major differences but highlights their industrial origin due to their high content of metals. On the other hand, a slightly higher PAH content was detected in FP compared to PUF. For all experimental conditions, no in vivo genotoxic and / or mutagenic effects were detected (comet, micronucleus, Pig-A negative tests). However, the study of the cellularity of BAL, the quantification of cytokine gene expression and histological analysis of lung tissue suggest the occurrence of chronic inflammation in exposed mice lungs. More extended lesioned areas were, however, observed in the UFP-exposed mice. Transcriptomic analyses have shown, on the one hand, that the number of deregulated genes increases with the dose and the time of exposure, and on the other hand that this number is much higher in mice exposed to UFP compared to those exposed to FP. The identification of the main signalling pathways most5significantly impacted confirms that UFP induce greater and earlier lung tissue response than PF. Concerning the epigenetic analyses, deregulation of DNA methylation, histone modifications, and gene expression of some miRNAs was more pronounced in PUF-exposed mice. The ongoing functional analysis of miRNAs specifically deregulated by PUFs, or commonly deregulated by PUFs and PFs, should allow the identification of their target mRNAs.Conclusion: The results of this study suggest that UFP have greater impact on the respiratory system than FPs which would allow the identification of new biomarkers of tissue damage. The information resulting from this project can be transmitted to the different organizations in charge of air pollutants and their effects on health, to the concerned authorities and to the industries in order to contribute to make better decisions regarding the reduction of emissions of particulate pollutants of greatest concern. They will thus help to update the current regulations in order to include UFP and limit their emissions
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Hertault, Adrien. "Conception et évaluation d’un stent actif pro-cicatrisant basé sur la polydopamine, un polymère biocompatible et bioinspiré." Thesis, Lille 2, 2019. http://www.theses.fr/2019LIL2S031.
Full textAbstract:
Introduction : La resténose intra-stent (RIS) est induite par une prolifération incontrôlée des cellules musculaires lisses (CML) après l'implantation d'une stent métallique nu (BMS). Elle est associée à la récurrence des symptômes et à des coûts de santé supplémentaires. Les stents à élution médicamenteuse, dits « actifs », ont démontré leur efficacité sur la RIS, mais induisent un risque élevé de thrombose aiguë tardive due à une réendothélialisation tardive des mailles. La polydopamine (PDA), un polymère biocompatible inspiré du mucus secrété par les moules, promouvrait la prolifération de cellules endothéliales (CE) et inhiberait la prolifération des CMV in-vitro, ce qui suggère un effet pro-cicatrisant potentiel sur la paroi vasculaire. De plus, la polydopamine exprime des fonctions amines, catéchols et quinones à sa surface et peut être utilisée comme ancrage pour un autre agent thérapeutique. Le but de ce travail était 1) d'évaluer l'impact d'un stent enduit de PDA sur la RIS, 2) de concevoir un stent vasculaire à base de PDA délivrant une autre substance pro-cicatrisante, l'hémine.Méthodes : Dans la première partie de cette étude, les revêtements PDA étaient obtenus par immersion de disques de cobalt-chrome ou de stents dans une solution de dopamine. La biocompatibilité et l'hémocompatibilité étaient vérifiées in vitro. Le potentiel pro-cicatrisant était étudié in vitro par culture d'EC et de CML d'origine humaine sur les différents échantillons. L'effet pro-cicatrisant était étudié in-vivo après implantation de stents en position aortique chez le rat. La RIS était évaluée en microscopie optique par quantification du rapport néointima/media (n/m) après coloration éosine/hématoxilline. La qualité de la réendothélialisation des mailles était évaluée par microscopie électronique à transmission (MET). Les voies moléculaires potentiellement impliquées dans un effet pro-cicatrisant étaient étudiées par analyses Western Blot.Dans la deuxième partie de ce travail, les surfaces revêtues de PDA étaient modifiées avec de la polyéthylèneimine (PEI) pour améliorer l'expression des fonctions amines. Ce revêtement modifié était caractérisé et sa cytocompatibilité évaluée in vitro. Cette surface modifiée était ensuite utilisée pour immobiliser l'hémine. Les surfaces fonctionnalisées étaient caractérisées et la quantité d'hémine greffée déterminée. L'effet pro-cicatrisant potentiel du stent à l'hémine était évalué in vitro et in vivo.Résultats : Les surfaces de PDA démontraient un effet pro-cicatrisant in-vitro par rapport au chrome-cobalt nu. Les stents PDA montraient une réduction significative de la RIS par rapport aux stents nu (rapport n/m = 0,48 (+/- 0,26) contre 0,83 (+/- 0,42), p<0,001) dans le modèle de rat. Les analyses en TEM confirmaient la réendothélialisation des mailles dans chaque groupe et révélaient une couche de néointima plus mince dans le groupe PDA que dans le groupe BMS. Les analyses Western blot permettaient d'identifier une tendance à une activation accrue de la phosphorylation de la MAPK p38 et de ses effets antiprolifératifs sur les CML, ce qui pourrait expliquer les résultats observés lors des analyses histomorphométriques.L'immobilisation de la PEI sur les revêtements PDA permettait d'enrichir avec succès les surfaces en fonctions amines sans diminuer leur cytocompatibilité. L'hémine était ensuite greffée par création de lien amides (environ 10 ng d'hémine par cm²). Les surfaces enduites d'hémine ne montraient pas de supériorité in-vitro ou in-vivo par rapport au PDA seul.Conclusion : L'effet pro-cicatrisant attendu du revêtement PDA sur la paroi artérielle semble confirmé dans ce modèle in-vivo. Ce polymère biocompatible pourrait limiter intrinsèquement la RIS. De plus, il offre la possibilité d'immobiliser d'autres médicaments pertinents sur sa surface afin d'obtenir un effet synergique potentielIntroduction: In-stent restenosis (ISR) is induced by an uncontrolled smooth muscular cells (SMC) proliferation after bare metal stent (BMS) implantation. It is associated with recurrence of symptoms and additional health costs. Drug-eluting stents have demonstrated efficiency on ISR but induce a high risk of late acute thrombosis due to a delayed struts reendothelialization. Polydopamine (PDA), a biocompatible polymer inspired from mussels byssus, has been reported to promote endothelial cells (EC) and inhibit SMC proliferation in-vitro, thus suggesting a potential pro-healing effect on the vascular wall. Furthermore, polydopamine expresses amine, catechol and quinone functions on its surface and can be used as an anchor for another therapeutic agent. This study aimed at 1) evaluating the impact of a PDA-coated stent on in-stent restenosis (ISR), 2) designing a vascular stent with a potential additional pro-healing drug, hemin, immobilized via the PDA layer.Methods: In the first part of this study, PDA coatings were obtained by dip coating of cobalt-chromium disks or stents in a dopamine solution. Disk samples were used to evaluate biocompatibility and hemocompatibility. The pro-healing potential was investigated in-vitro by seeding human EC and SMC on the different samples. In-vivo experimentations were conducted to assess the pro-healing effect in a rat model. ISR was evaluated in optic microscopy with quantification of the neointima/media (n/m) ratio after eosin/hematoxillin coloration. Quality of the struts reendothelialization was assessed with transmission electron microscopy (TEM). Molecular pathways involved in a potential pro-healing effect were investigated with western blot analyses.In the second part of this work, PDA-coated surfaces were modified with polyethylenimine (PEI) to enhance the expression of amine functions. This modified coating was characterized and cytocompatibility was assessed in-vitro. This modified surface was used to immobilized hemin, a therapeutic agent, on the sample surfaces. Functionalized surfaces were characterized, and presence of the therapeutic agent was assessed and quantified. The potential healing effect of the hemin-stent was evaluated in-vitro and in-vivo.Results: PDA surfaces demonstrated a pro-healing effect in-vitro compared to bare chromium-cobalt. PDA stents demonstrated a significant reduction in ISR compared to bare metal stents (ratio n/m = 0.48 (+/- 0.26) versus 0.83 (+/- 0.42), p<0.001) in the rat model. TEM analyses confirmed the presence of neointima surrounding the struts in each group and revealed a thinner neointima layer in the PDA-stent group compared to BMS, with similar ultrastructures of the cells facing the arterial lumen. Western blot analyses identified a trend to an increased activation of p38 MAPK phosphorylation and its anti-proliferative effects on vascular SMC which could explain the results observed in the histomorphometric analyses.Immobilization of PEI was achieved through Michael addition and Shift base reaction on PDA coatings, and successfully enriched the surfaces with amino groups without decreasing cytocompatibility. Hemin was successfully grafted on the PDA-PEI surfaces via amide bounds (approximately 10ng of hemin per cm²). Hemin-coated surfaces demonstrated no superiority in-vitro or in-vivo to PDA alone.Conclusion: The expected pro-healing effect of PDA-coating on the arterial wall seems to be confirmed in this in-vivo model. This biocompatible polymer could intrinsically limit in-stent restenosis. Additionally, it also offers the possibility to immobilize many relevant drugs on its surface through amine functions providing potential synergistic effects
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Garçon, Damien. "Effet intestinal de PCSK9 au delà du métabolisme du cholestérol : focus sur la lipémie postprandiale et l'allergie alimentaire." Thesis, Nantes, 2020. http://www.theses.fr/2020NANT1011.
Full textAbstract:
PCSK9 (ProProtein Convertase Subtilisin Kexin Type 9) est le 3e gène responsable de l’hypercholestérolémie familiale. En effet, PCSK9 est un inhibiteur naturel du récepteur au LDL. Les patients présentant des mutations gain de fonction pour PCSK9 sont à très haut risque concernant les maladies cardiovasculaires. En plus de son impact sur le métabolisme du cholestérol, PCSK9 joue un rôle dans un autre facteur de risque cardiovasculaire : la lipémie postprandiale. Ce phénomène caractérisé par une élévation des triglycérides plasmatiques après un repas est facteur de risque des maladies cardiovasculaires dans certaines pathologies notamment chez les patients diabétiques de type 2. Il a été montré que les modèles murins déficients pour PCSK9 ont une réduction de leur lipémie postprandiale. Lors de ma thèse, nous avons montré par l’utilisation de modèle de souris déficiente, l’inhibition de PCSK9 par anticorps anti-PCSK9 et le développement d’un modèle original de déficience intestinale de PCSK9 que la forme circulante de PCSK9 est cruciale dans le phénomène de lipémie postprandiale. Au delà du métabolisme des lipides, il a été montré que PCSK9 joue un rôle dans les réponses inflammatoires, notamment au cours d’un choc septique. Lors de ma thèse, nous avons observé l’impact de la déficience et de l’inhibition de PCSK9 sur le développement de l’allergie alimentaire. Nous avons mis en évidence que l’absence de PCSK9 protège de l’apparition des symptômes de l’allergie. Ma thèse a donc permis de mettre en lumière un rôle de PCSK9 au delà du métabolisme du cholestérol et au niveau intestinalPCSK9 (ProProtein Convertase Subtilisin Kexin Type 9) is the 3rd gene responsible for familial hypercholesterolemia. Indeed, PCSK9 is a natural inhibitor of the LDL receptor. Patients with PCSK9 gain function mutations are at very high risk for cardiovascular disease. In addition to its impact on cholesterol metabolism, PCSK9 plays a role in another cardiovascular risk factor: postprandial lipemia. This phenomenon, characterized by a rise in plasma triglycerides after a meal, is a risk factor for cardiovascular disease in certain pathologies, particularly in patients with type 2 diabetes. It has been shown that mouse models deficient in PCSK9 have a reduction in their postprandial lipemia. During my thesis, we showed by using deficient mouse models, inhibition of PCSK9 by anti-PCSK9 antibodies and the development of an original model of intestinal PCSK9 deficiency that the circulating form of PCSK9 is crucial in the phenomenon of postprandial lipemia. Beyond lipid metabolism, PCSK9 has been shown to play a role in inflammatory responses, particularly during septic shock. In my thesis, we observed the impact of PCSK9 deficiency and inhibition on the food allergy development. We showed that the absence of PCSK9 protects against the onset of allergy symptoms. My thesis has therefore highlighted the role of PCSK9 beyond cholesterol metabolism and at the intestinal level
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Dos, Santos Célia. "Implication de la région C-terminale de l'Héparin Affin Regulatory Peptide (HARP) dans l'inhibition de la prolifération des glioblastomes et mise en évidence d'interactions entre ce facteur de croissance et d'autres Heparin Binding Growth Factors (HBGFs)." Paris 11, 2010. http://www.theses.fr/2010PA11T082.
Full text
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Tirou, Linda. "Rôle de la voie de signalisation Sonic Hedgehog dans les cellules Glast positives du cerveau de souris adulte C9C5 Positive Mature Oligodendrocytes are a Source of Sonic Hedgehog in the Mouse Brain Hedgehog Controls Quiescence and Activation of Neural Stem Cells in the Adult Ventricular-Subventricular Zone." Thesis, université Paris-Saclay, 2020. http://www.theses.fr/2020UPASL022.
Full textAbstract:
La voie Sonic Hedgehog (Shh) est active dans le cerveau de rongeur adulte où elle participe au maintien des cellules souches neurales (CSNs), aux interactions entre neurones et astrocytes et à la réparation des tissus. Chez l’adulte, les astrocytes régulent l’apport énergétique et l’activité des neurones et seraient les principales cellules répondant au signal Shh. Cependant, l’implication de la voie Shh dans les fonctions astrocytaires est mal connue. Au cours de ma thèse, j’ai étudié le rôle de la voie Shh dans les astrocytes à l’aide de diverses approches génétiques, moléculaires, biochimiques et pharmacologiques. J’ai notamment utilisé la lignée de souris transgéniques Glast-CreERT2-YFP-Ptc-/- (YFP-Ptc-/-), un modèle de délétion conditionnelle du récepteur Patched (Ptc) dans les cellules Glast+, et les contrôles YFP-Ptc+/+. La recombinaison par tamoxifène des souris YFP-Ptc-/- à l’âge adulte a conduit à la délétion de Ptc et à l’expression du rapporteur YFP dans les cellules Glast+, à savoir les astrocytes, les CSNs et leur descendance. J’ai effectué la première analyse détaillée par smFISH (single molecule fluorescent in situ hybridization) des transcrits de la voie Shh dans les astrocytes de plusieurs régions cérébrales dont l’hypothalamus. De plus, j’ai identifié une sous-population d’oligodendrocytes (OLs) matures, exprimant CC1, Olig2 et Sox10, comme source potentielle de ligand Shh pour les astrocytes et les neurones Ptc+ du cerveau postnatal. J’ai démontré la présence de la protéine et des transcrits de Shh dans ces OLs avec l’anticorps monoclonal C9C5 ciblant spécifiquement Shh et par smFISH, respectivement.La caractérisation du phénotype métabolique des souris YFP-Ptc+/+ et YFP-Ptc-/- à différents âges a révélé l’implication de la voie Shh astrocytaire dans la régulation de l’homéostasie énergétique (HE). En effet, l’activation de la voie Shh dans les astrocytes Glast+ est associée à une sensibilité plus importante au glucose démontrée par des tests de tolérance au glucose et à l’insuline. Cet effet est maintenu au cours du temps et est associé à des niveaux sanguins d’insuline plus faibles. De plus, les souris YFP-Ptc-/- sont caractérisées par une absence de prise de poids. Elles présentent une réduction des tissus adipeux s’accompagnant d’une augmentation de l’oxydation des acides gras mesurée par cage métabolique. A l’inverse, la prise alimentaire, l’activité locomotrice et la température corporelle ne sont pas modifiées. Ainsi, l’activation de la signalisation Shh astrocytaire bloque les altérations métaboliques associées à l’âge ou induites par l’obésité. Au niveau cellulaire, la délétion de Ptc n’affecte pas l’entrée de glucose dans des cultures primaires d’astrocytes suggérant que les effets observés sont médiés par un autre mécanisme. Dans l’hypothalamus, une région clé pour le contrôle de l’HE, l’activation de la voie Shh astrocytaire a entraîné une augmentation de l’expression des gènes de la voie de l’insuline. L’ensemble de ces données suggère l’idée d’une nouvelle fonction de la voie Shh dans les astrocytes, importante pour la régulation hypothalamique de l’HE. L’analyse du phénotype des souris YFP-Ptc+/+ et YFP-Ptc-/- a également révélé un rôle clé de la voie Shh dans la balance entre quiescence et activation des CSNs au sein de la zone ventriculaire-sous ventriculaire des ventricules latéraux, une des principales niches neurogéniques chez l’adulte. L’activation de cette voie dans les CSNs induit, à long terme, une hausse du nombre de CSNs quiescentes tandis que les CSNs activées et leur descendance sont très diminuées, affectant la neurogénèse dans cette région. Dans l’ensemble, ce travail met en avant de nouvelles propriétés de la signalisation Shh qui vont permettre d’approfondir la compréhension des fonctions de la voie dans le cerveau adulte, et élargir le potentiel thérapeutique de ses modulateurs pharmacologiques aux maladies neurodégénératives, démyélinisantes et métaboliquesDuring embryogenesis, the Sonic Hedgehog (Shh) signaling pathway plays a key role in neural patterning. The pathway is still active in the adult rodent brain where it participates to the maintenance of neural stem cells (NSCs), to neuronal and glial circuitry and to tissue repair (Ruat et al, Top. Med. Chem., 2015). In the adult brain, the astrocytes, glial cells regulating trophic support and activity of neurons, are proposed as the main Shh-responsive cells (Garcia et al, J. Neurosci., 2018). However, the implication of Shh signaling in these astrocytic functions is still poorly characterized. Here, I investigated the role of Shh signaling in astrocytes using various genetic, molecular, biochemical and pharmacological approaches. I used the transgenic mouse line Glast-CreERT2-YFP-Ptc-/- (YFP-Ptc-/-), a model of conditional deletion of the Shh receptor Patched (Ptc) in Glast-expressing cells, and their control littermates, YFP-Ptc+/+ mice. Tamoxifen-mediated recombination in YFP-Ptc-/- mice during adulthood led to Ptc deletion and YFP reporter expression specifically in Glast+ cells, namely astrocytes, NSCs and their progeny. I provided the first detailed analysis of Shh pathway transcripts expression (Ptc, Gli1, Gli2, Gli3) in astrocytes using single-molecule fluorescent in situ hybridization (smFISH) combined to immunohistofluorescence in various brain regions, including the hypothalamus. Moreover, I identified a subpopulation of mature oligodendrocytes (OLs), expressing the OLs markers CC1, Olig2 and Sox10, as a potential source of Shh ligand for these astrocytes and for neurons expressing Ptc in the postnatal brain. I demonstrated the presence of Shh protein and transcripts in these cells using the specific Shh monoclonal antibody C9C5 and smFISH, respectively. The characterization of YFP-Ptc+/+ and YFP-Ptc-/- mice metabolic phenotype at different timepoints revealed the implication of astrocytic Shh pathway in the regulation of whole body energy insulin tolerance tests. This effect was maintained over time and associated to lower blood insulin levels. YFP-Ptc-/- mice also exhibited a strong lean phenotype related to the absence of body weight gain. They presented a reduction of white and brown adipose tissues accompanied by an increase of fatty acid oxidation evaluated in metabolic cage, while food intake, locomotor activity and body temperature were not altered. Thus, the activation of astrocytic Shh signaling counteracted age-associated but also diet-induced metabolic alterations. At the cellular level, Ptc deletion did not affect glucose uptake in primary astrocyte cultures suggesting that these effects are mediated by another mechanism. In the hypothalamus, a key region in the control of energy homeostasis, the activation of astrocytic Shh pathway led to an increase of insulin signaling genes expression. Altogether, these data argue for a novel important role of Shh signaling in astrocytes for hypothalamic regulation of energy metabolism. The phenotype analysis of YFP-Ptc+/+ and YFP-Ptc-/- mice also revealed a key role of Shh signaling in orchestrating the quiescence and activation of NSCs in the ventricular-subventricular zone of the lateral ventricles, one of the main adult neurogenic niche. Long term activation of Shh pathway in NSCs induced an increase of quiescent NSCs number while activated NSCs and their progeny were strongly depleted affecting neurogenesis in this region. Overall, this work highlights novel properties of Shh signaling that will allow deeper understanding of its functions in the adult brain, and widens the therapeutic potential of pharmacological modulators of this pathway to neurodegenerative, demyelinating and metabolic disorders
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Quilbe, Alexandre. "Évaluation in vitro et in vivo de deux nouvelles stratégies thérapeutiques ciblées dans l'adénocarcinome pancréatique : une immunothérapie ciblant l’Immune Checkpoint Galectine-9 et une thérapie photodynamique ciblant le récepteur folate." Thesis, Lille, 2020. https://pepite-depot.univ-lille.fr/RESTREINT/EDBSL/2020/2020LILUS034.pdf.
Full textAbstract:
Nous et d’autres équipes avons montré, qu’une augmentation de la prévalence des lymphocytes T régulateurs (Treg), favorisait la progression de la tumeur, en inhibant notamment la réponse immune anti-tumorale. Dans ce contexte, le laboratoire a développé une nouvelle stratégie d’immunothérapie active visant à inhiber spécifiquement l'activité suppressive des lymphocytes T régulateurs naturels humains (CD4+ CD25high FoxP3+ CD127-/Low). Celle-ci consiste en l’utilisation d’un anticorps (Ac) monoclonal (Brevet WO2015185875) ciblant la Galectine-9 (Gal-9) produite par les Treg et celle portée par les exosomes tumoraux. De façon très intéressante, il a été récemment montré dans un modèle murin de cancer pancréatique (ADKP), une augmentation significative de la Gal-9 intra-tumorale. Par ailleurs, une augmentation de la prévalence périphérique et intra-tumorale des Treg a également été décrite dans ce cancer. Ainsi, le cancer du pancréas parait être une cible privilégiée pour une immunothérapie ciblant la Galectine-9. Dans ce contexte, notre objectif a été d’évaluer in vitro et in vivo l’efficacité de notre Ac anti-Gal-9 dans différents modèles d’ADKP. Dans un premier temps, en collaboration avec le Dr Isabelle Van Seuningen (JPARC, Lille) nous avons évalué l’expression de la Gal-9 et la prévalence des Treg dès les stades les plus précoces de la carcinogenèse pancréatique dans un modèle murin transgénique et évaluer l’efficacité de notre Ac anti-Gal-9 sur ces lésions précoces. Nos données établissent que la neutralisation de la Gal-9 est parvenue à limiter l’infiltration en Treg et la progression des lésions néoplasiques dans ce modèle. Par ailleurs, afin d’anticiper l’utilisation d’une immunothérapie anti-Gal-9 chez l’homme, nous avons validé dans 4 lignées différentes de cancers pancréatiques humaines (Capan-1, Capan-2, MIAPaCa-2, PANC-1), l’expression génique (RT-QPCR) et protéique de la Gal-9 (IF, WB et cytométrie). Nous avons également montré que ces lignées étaient capables de sécréter la Gal-9 notamment via des exosmes (ELISA). Nos résultats suggèrent également que l’utilisation de l’Ac anti-Gal-9 permet de neutraliser les exosomes tumoraux d’ADKP et de limiter la croissance tumorale dans un modèle murin humanisé d’ADKPEn parallèle de ces travaux, nous avons initié un programme de recherche visant à évaluer une nouvelle stratégie dans l’ADKP : la Thérapie Photodynamique (PDT). Cette photothérapie basée sur l’utilisation d’un photosensibilisateur (PS) et d’une lumière de longueur d’onde spécifique, a déjà fait ses preuves en oncologie. De plus, il existe un rationnel pour penser que la PDT pourrait impacter la réponse immunitaire, en faveur d’une immunoactivation. Au laboratoire, nous disposons d’un nouveau PS (PS-FOL/PS2), protégé par un brevet récemment publié (WO2019 016397-A1). Ce PS2 est associé à une molécule d’acide folique ciblant le récepteur folate 1 (FOLR1) avec une forte affinité. Or, FOLR1 est exprimé dans 100% des ADKP, voire surexprimé dans 30 % des cas. Dans ce contexte, l’objectif du projet est d’évaluer l’efficacité de la PDT au PS2 sur 4 lignées humaines d’ADKP : Capan-1, Capan-2, MiaPaca-2 et Panc-1. Nous avons pu, ainsi, valider l’expression génique et protéique de FOLR1 sur ces 4 lignées, puis nous avons confirmé l’efficacité de la PDT couplée au PS2, sur ces lignées d’ADKP. Nos travaux montrent entre autres que les milieux conditionnés de ces cellules traitées par la PS2-PDT avaient un effet prolifératif sur le système immunitaire humain. Enfin, nous avons montré que la PS2-PDT semblait limiter la croissance tumorale dans un modèle in vivo de souris immunodéprimées (SCID) humanisées par transplantation sous-cutanée de cellules MIAPaCa-2.En conclusion, nos investigations suggèrent non seulement que la PS2-PDT est une thérapie ciblée efficace dans le traitement de l’ADKP mais aussi qu’elle permet d’activer le système immunitaire et de jouer le rôle d’une véritable vaccination adjuvante anti-cancéreuseRecently, other and our team have demonstrated that a high regulatory T lymphocytes (Treg) prevalence promotes tumor progression by inhibiting anti-tumor immune response. This was further substantiated by other studies on various cancer models. Using this knowledge, our laboratory has developed a new immunotherapy strategy targeting immunosuppressive activity of human natural Treg (CD4+ CD25high FoxP3+ CD127-/Low). This strategy targets Galectin-9 (Gal-9) produced and secreted by Treg cells using an anti Gal-9 monoclonal antibody (Patent WO2015185875). Thus, for the first time, we demonstrated that an anti-Gal-9 immunotherapy can significantly limit tumor growth in a humanized mouse model of nasopharyngeal carcinoma. In parallel, it have been shown a high Gal-9 expression in a mouse model of pancreatic cancer (PDAC), and a high prevalence of circulating and infiltrating Treg in PDAC patients. Thus, PDAC appears to be a privileged target for our anti-Gal-9 immunotherapy. In this context, our main objective was to evaluate the in vitro and in vivo efficacy of our anti-Gal-9 immunotherapy in PDAC. In close collaboration, with Dr. Isabelle Vanseuningen (JPARC, Lille), we were first able to evaluate the expression of Gal-9 and the prevalence of Treg from the earliest stages of pancreatic carcinogenesis in a transgenic mouse model. We have also evaluated the efficiency of anti-Gal9 treatment on tumor pancreatic progression. Our data demonstrated that the neutralization of Gal-9 was successful in limiting Treg infiltration along with neoplastic lesion progression. In a second time, in order to anticipate the use of this immunotherapy in humans, we also validated Gal-9 expression (RT-qPCR, Immunofluorescence, Western blot and cytometry) in 4 different human pancreatic cancer lines (Capan-1, Capan-2, MIAPaCa-2, PANC-1). Interestingly, we showed that these lines secrets Gal-9 in particular via exosomes (ELISA, Western-Blot). Finally, in vivo results suggested that our anti-Gal-9 antibody limits not only exosomes immunosuppressive impact, but also the tumor growth in a humanized mouse model of PDAC.Furthermore, we have initiated a novel study to evaluate a new therapeutic strategy for PDAC: The Photodynamic Therapy (PDT). PDT is based on the use of a non-toxic photosensitizer (PS) and a light excitation. Upon accumulation in the neoplasm and subsequent photo-excitation, the PS generates reactive oxygen species to elicit tumoral cytotoxicity. In the recent years, PDT has already proved its worth in the field of oncology. There is indeed a rationale to think that PDT could impact the immune response, in favor of immunoactivation against the tumor. In the laboratory, we have a new folate-coupled PS (PS2), protected by a recently published patent (WO2019 016397-A1, January 24, 2019), which binds with folate receptor 1 (FOLR1). FOLR1 is expressed in 100% of ADKPs, and even over-expressed in 30%. In this context, the objective was to evaluate the efficacy of PDT on 4 human PDAC lines: Capan-1, Capan-2, MiaPaca-2 and Panc-1. We validated the genomic and proteomic expression of FOLR1 on the 4 PDAC cell lines. Subsequently, we confirmed the efficacy of PS2 mediated PDT our 4 tumor cell lines. Our results also demonstrated that PDT affects the cytokine secretion of cancer cell lines and the conditioned media of these PS2-PDT-treated cells had a proliferative effect on the human immune system. Finally, we showed that PS2-PDT limits the tumor growth of our immunocompromised humanized mice (SCID) model with subcutaneously transplanted MIAPaCa-2 cells.In conclusion, our investigations suggest not only that PS2-PDT is an effective targeted therapy in the treatment of ADKP but also that it activates the immune system and plays the role of a real adjuvant anti-cancer vaccination
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Guillon, Jordan. "Caractérisation moléculaire de mécanismes d’échappement à la sénescence : définition d'une hétérogénéité de la sénescence Regulation of senescence escape by TSP1 and CD47 following chemotherapy treatment Regulation of senescence escape by the cdk4–EZH2–AP2M1 pathway in response to chemotherapy tRNA biogenesis and specific aminoacyl-tRNA synthetases regulate senescence stability under the control of mTOR. Proteomics approaches to define senescence heterogeneity and chemotherapy response Chemotherapy-induced senescence, an adaptive mechanism driving resistance and tumor heterogeneity." Thesis, Angers, 2020. http://www.theses.fr/2020ANGE0005.
Full textAbstract:
La sénescence est induite suite à l’érosion télomérique, l’activation d’oncogènes ou en réponse à la chimiothérapie. Ce mécanisme de suppression tumorale empêche la prolifération de cellules anormales et la transformation. Cependant, certains travaux ont montré qu’en réponse à la chimiothérapie la sénescence constitue davantage un mécanisme d’adaptation permettant aux cellules tumorales d'échapper. Ainsi, nous avons caractérisé de nouveaux mécanismes d’échappement permettant de définir une hétérogénéité de sénescence. Lors de nos études, nous avons observé que la stabilité de ce mécanisme suppressif est régulée épigénétiquement par EZH2. Cette méthylase module l’expression d’AP2M1, une protéine d’endocytose nécessaire à l’échappement. La pérennité de la sénescence est également modulée par les facteurs sécrétés du SASP tels que la TSP1. Cette glycoprotéine limite, par interaction avec son récepteur CD47, l’émergence de cellules persistantes. La réduction de l’expression de ce récepteur favorise alors l'échappement à la sénescence. Enfin, la biosynthèse des ARNt module également la stabilité de ce mécanisme suppressif. Lors de l’émergence de cellules persistantes, mTOR favorise l’expression d’ARNt spécifiques et la résolution du stress protéique. L’expression des ARNt-ligases correspondantes est alors nécessaire à l’échappement. Ainsi, la sénescence est plus hétérogène que ce qui était initialement décrit. Sa stabilité est perturbée par l’expression de régulateurs épigénétiques, de protéines de l’endocytose, de récepteurs spécifiques et par la dérégulation de la biosynthèse d’ARNtSenescence is induced as a result of telomeric shortening, activation of oncogenes or in response to chemotherapy. This tumour suppression mechanism prevents the proliferation of abnormal cells and transformation. However, some studies have shown that in response to chemotherapy, senescence is more of an adaptation mechanism allowing tumour cells to escape. Thus, we have characterized new escape mechanisms allowing to define senescence heterogeneity. During our studies, we observed that the stability of this suppressive mechanism is epigenetically regulated by EZH2. This methylase modulates the expression of AP2M1, an endocytosis protein required for escape. The stability of senescence is also modulated by secreted SASP factors such as TSP1. By interaction with its receptor CD47, this glycoprotein limits the emergence of persistent cells. The reduction in the expression of this receptor then favours the escape of senescence. Finally, tRNA biosynthesis also modulates the stability of this suppressive mechanism. During the emergence of persistent cells, mTOR promotes the expression of specific tRNAs and the resolution of protein stress. The expression of the corresponding tRNA ligases is then required for escape. Thus, senescence is more heterogeneous than initially described. Its stability is disturbed by the expression of epigenetic regulators, endocytosis proteins, specific receptors and by the deregulation of tRNA biosynthesis
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Le, Guern Rémi. "Colonisation digestive par entérobactéries productrices de carbapénémase dans un modèle murin : aggravation de la pneumopathie à Pseudomonas aeruginosa." Thesis, Lille 2, 2019. http://www.theses.fr/2019LIL2S033.
Full textAbstract:
L’altération du microbiote digestif provoquée par une antibiothérapie augmente le risque de colonisation par des bactéries multirésistantes. Dans un modèle murin, nous avons étudié l’impact d’une colonisation digestive par entérobactéries productrices de carbapénémase (EPC) sur la sévérité d’une pneumopathie à Pseudomonas aeruginosa. Les souris colonisées par EPC présentaient une pneumopathie plus sévère (score clinique et perméabilité alvéolo-capillaire), ainsi qu’une mortalité plus élevée par rapport aux groupes contrôles ou ayant simplement reçu une injection de clindamycine. Une transplantation de microbiote fécal restaurait le pronostic. Les cellules dendritiques et les lymphocytes T CD4 étaient diminués au niveau pulmonaire dans le groupe colonisé par EPC. Au niveau du microbiote digestif, on observait une quasi-extinction des Muribaculaceae associée à une expansion du genre Hungatella chez les souris colonisées par EPC. Certains métabolites du tryptophane potentiellement impliqués dans la réponse immunitaire étaient modifiés dans le groupe colonisé par EPC. Une colonisation digestive asymptomatique peut ainsi entraîner des effets délétères sur la réponse de l’hôteAntibiotics disrupt the gut microbiota, and are considered a risk factor of colonization by multidrug-resistant bacteria. In a murine model, we studied the impact of digestive colonization with carbapenemase-producing Enterobacteriaceae (CPE) on the severity of Pseudomonas aeruginosa pneumonia. Mice colonized by CPE presented a more severe pneumonia (clinical score and alveolocapillary permeability) and a higher mortality compared to controls or mice that received only clindamycin. Fecal microbiota transplant was associated with better outcomes. After infection by P. aeruginosa, lung dendritic cells and CD4 T lymphocytes were decreased in mice colonized by CPE. Gut microbiota was specifically altered in mice colonized by CPE: Muribaculaceae relative abundance was greatly reduced, associated with an expansion of the Hungatella genus. Tryptophan metabolites were modified by CPE colonization. Asymptomatic digestive colonization with CPE had a detrimental effect on the host response to P. aeruginosa pneumonia
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Gilles, Mélissa. "Nouvelles fonctions de la protéine Tau dans le métabolisme des ARN." Thesis, Lille 2, 2018. http://www.theses.fr/2018LIL2S054.
Full textAbstract:
Les tauopathies regroupent un ensemble de maladies neurodégénératives caractérisées par une agrégation intra-neuronale des protéines Tau hyper et anormalement phosphorylées. L’accumulation de ces lésions altère l’activiténeuronale conduisant, à terme, à la mort des cellules. Bien qu’il ait été déterminé que Tau joue un rôle central dans le développement de ces pathologies, il reste encore de nombreuses zones d’ombre concernant la compréhension de son activité physiologique. La protéine Tau a été initialement décrite comme régulant la dynamique des microtubules au sein des neurones. Cependant, de nombreuses études ont démontré que Tau n’est finalement pas qu’une simple MAP (microtubule associated proteins), mais une protéine pléiotropique impliquée dans de nombreux mécanismes selon sa localisation cellulaire. Au niveau cytoplasmique, la protéine Tau régule notamment le transport axonal et le trafic d’organites, la croissance neuritique ou encore la transmission synaptique. Tau est également présente au niveau nucléaire où elle participe à la protection des acides nucléiques, au maintien de l’hétérochromatine péricentromérique et à la régulation de l’expression des gènes ribosomaux. Récemment, plusieurs travaux ont identifié une interaction entre Tau et diverses protéines impliquées dans le métabolisme des ARN. De manière intéressante, des altérations du métabolisme des acides nucléiques ont été observées chez les patients atteints de tauopathies. Ces données permettent de suggérer que Tau puisse également être impliquée dans ces mécanismes.Afin de déterminer le possible rôle de Tau dans le métabolisme des ARN, nous avons effectué une recherche de nouveaux partenaires protéiques de Tau par une approche de tandem affinity purification (TAP) couplée à de la spectrométrie de masse. L’ARN hélicase à boite DEAD DDX5 a été identifiée grâce à cette technique. DDX5 est une protéine impliquée dans de nombreux mécanismes régulant le métabolisme des ARN tels que la transcription, l’épissage, la biogénèse des micro ARN et des ARNribosomaux ou encore la dégradation des ARNm par la voie NMD (nonsensemediated-mRNA decay).Au cours de cette étude nous avons validé l’interaction entre Tau et DDX5 pardifférentes méthodes in vitro et in cellulo. Dans les mêmes conditions expérimentales,nous avons démontré la présence de DDX17, une autre ARN hélicase à boite DEAD,dans ce complexe et mis en évidence que cette interaction est régulée par la présenced’ARN. Nous avons identifié les séquences de Tau impliquées dans l’interaction avecDDX5 et révélé qu’elles se trouvent au niveau de son domaine riche en proline.L’utilisation de systèmes rapporteurs nous a permis de démontrer que Tau régulepositivement la dégradation des ARNm par la voie NMD de façon DDX5 dépendante.Nos résultats révèlent également que Tau régule négativement l’épissage des pré-ARNm et contrôle l’expression des facteurs d’épissage PTBP1 et PTBP2. De façonintéressante, il est connu que le NMD peut contrôler l’expression de protéinesimpliquées dans l’épissage par le système « Alternative splicing coupled to NMD »(AS-NMD) suggérant que l’effet de Tau dans l’épissage, observé dans nos résultats,puisse dépendre de l’activation de la voie NMD en amont. L’utilisation du mutantpathologique Tau P301S et de mutants phosphomimétiques nous a permis de mettreen évidence que la régulation de Tau dans la voie NMD dépend de son état dephosphorylation notamment au niveau de la thréonine 231, un site localisé au niveaude son domaine riche en proline connu pour être phosphorylé dans les tauopathies.Ces résultats révèlent de nouvelles fonctions de Tau dans le métabolisme des ARN etsuggèrent un impact de la pathologie Tau dans la régulation de la voie NMDTauopathies are neurodegenerative diseases characterized by an intraneuronalaggregation of hyperphosphorylated Tau proteins. The accumulation of these lesionsinduces neuronal dysfunctions leading to cells death. It has been established that Taudysfunctions play a central role to the neurodegenerative process. However, thephysiological functions of these proteins are still incompletely understood. Tau was first described as a microtubule associated protein involved in microtubule stabilization.However, it has been shown that Tau displays additional functions depending of itscellular localization. In the cytoplasm, Tau regulates axonal transport, synapticfunctions and signaling pathway. Tau was found also in the nuclear compartmentwhere it is involved in nucleic acid protection, organization of neuronal pericentromericheterochromatin and expression of ribosomal genes. In addition, studies have demonstrated an interaction between Tau and several RNA binding proteins, known to play a role in RNA metabolism. Moreover, dysfunctions of this mechanism havebeen reported in tauopathies.To gain insights into roles of Tau in RNA metabolism, we used tandem affinity purification coupled to mass spectrometry to identify novel interaction partners. Weidentified DDX5, a DEAD box RNA helicase, as a novel interacting partner. DDX5 is aprotein involved in several RNA metabolic processes such as, transcription, splicing,ribosome and micro RNA biogenesis and nonsense mediated mRNA decay (NMD). Inthis work, we validated Tau-DDX5 interaction and identified the Tau sequence involvedin the interaction. We also showed that this interaction is modulated in a RNA dependent manner and identified the presence of DDX17, another DEAD box RNAhelicase, in this complex. Our results demonstrated that Tau positively regulatesmRNA degradation by NMD pathway in a DDX5 dependent manner. We also shownthat Tau negatively regulates pre-mRNA splicing and expression of splicing factorsPTBP1 and PTBP2. The NMD is known to modulate expression of some splicingfactors through a system called “Alternative splicing coupled to NMD” (AS-NMD)suggesting that Tau effect on splicing could be dependent of NMD activation.Interestingly, Tau phosphorylation, especially the threonine 231 known to be involvedin tauopathies, increased the effect of Tau on NMD pathway.Altogether, our results highlight a link between Tau and the DEAD box RNA helicaseDDX5 and demonstrate an unexpected role of Tau in regulating splicing and NMD pathway. Our findings suggest that a loss of Tau functions may participates directly tothe splicing and NMD target genes misregulation observed in tauopathies
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Rivera-Millot, Alex. "Mécanismes de l’homéostasie du cuivre chez un pathogène strictement humain, Bordetella pertussis." Thesis, Lille 2, 2020. http://www.theses.fr/2020LIL2S009.
Full textAbstract:
Le cuivre est devenu un élément essentiel à la plupart des organismes vivants depuis l’apparition de l’oxygène dans l’atmosphère terrestre il y a 2,7 milliards d’années. Ce métal est utilisé dans de nombreux processus biologiques, mais les propriétés chimiques qui le rendent indispensable sont également à l’origine de sa toxicité. Cette ambivalence du cuivre a fait que tous les organismes ont développé divers systèmes permettant un maintien extrêmement strict de l’homéostasie de ce métal. Certains organismes comme les amibes ont également mis à profit ses propriétés toxiques pour la prédation d’autres organismes unicellulaires par la phagocytose. Un des mécanismes qui leur permet ensuite de tuer leurs proies est l’empoisonnement par les métaux, et en particulier par le cuivre. La phagocytose a perduré au cours de l’évolution jusqu’à constituer un acteur essentiel de l’immunité des métazoaires, dont l’humain fait partie. Les systèmes de détoxification du cuivre mis en place par les organismes procaryotes ont donc été sélectionnés par la pression exercée lors de la phagocytose. C’est ainsi que les bactéries pathogènes ont acquis des systèmes de survie à la phagocytose, dont des mécanismes de l’homéostasie du cuivre. Ces mécanismes sont variés et dépendent de la niche écologique de chaque bactérie. Les connaissances sur ce sujet se concentrent essentiellement sur les bactéries environnementales ainsi que sur quelques bactéries pathogènes, principalement intracellulaires. Ici, c’est l’homéostasie du cuivre chez Bordetella pertussis qui a été au centre de ces travaux de thèse. Cette bactérie est l’agent étiologique de la coqueluche et présente la particularité d’être un pathogène totalement dépendant de son hôte. De plus, sa niche écologique est extrêmement restreinte, se limitant à l’épithélium de l’arbre respiratoire supérieur de l’humain. Cette bactérie constitue donc un modèle nouveau pour l'étude du rôle du cuivre dans la relation hôte-pathogène. Ces travaux ont mis en évidence la perte de la plupart des systèmes de l’homéostasie du cuivre chez B. pertussis. Néanmoins, un système de détoxification original avec une régulation double a été découvert, composé de la métallochaperonne cytoplasmique CopZ et de deux enzymes impliquées dans la détoxification du stress oxydant. Les travaux de cette thèse ont permis d’émettre l’hypothèse que ce système propre aux Bordetella est impliqué dans la survie à la phagocytose par les cellules immunitaires, seule source d’excès de cuivre dans la niche écologique de B. pertussis. La métallochaperonne CopZ détoxifie le cuivre libre par complexation et les deux enzymes permettent de réduire la concentration de peroxyde d’hydrogène à l’origine du stress oxydant causé par les réactions de Fenton et d’Haber-Weiss. La co-régulation de ce système par le cuivre et le peroxyde d’hydrogène permet son activation sélective et très dynamique en réponse aux mécanismes liés à la phagocytose. Le rapport entre coût énergétique de ce système pour la bactérie et la protection qu’il lui assure doit être suffisamment favorable pour qu’il ait été spécifiquement sélectionné dans l’évolution de ce pathogène très spécialisé.Ces travaux ont permis de déterminer les mécanismes de tolérance au cuivre présents chez B. pertussis, ainsi que la sélection évolutive que ces systèmes ont subie chez BordetellaCopper has become an essential element for most living organisms since the adventof oxygen in the Earth’s atmosphere, 2.7 billion years ago. This metal is used in manybiological processes. However, the electronic properties that make it crucial for life are alsowhat makes it poisonous. This ambivalent biological impact has forced organisms to acquirean increasing number of mechanisms dedicated to maintaining a strict control over copperhomeostasis. In addition, a few organisms such as amoebae have taken advantage of its toxicproperties. Those lower eukaryotes have developed a complex predation mechanism to feedon other unicellular organisms, phagocytosis, and make use of metal poisoning, in particularcopper, to kill their preys. Phagocytosis has persisted over the course of evolution to becomea key actor of innate immunity in metazoans, including humans. Copper detoxificationmechanisms developed by prokaryotic organisms have likely been selected through thepressure exerted by phagocytosis. In particular, copper homeostasis regulation mechanismsare part of the strategies adopted by pathogenic bacteria to survive phagocytosis. Thesemechanisms vary depending on the ecological niche of each species. Studies on this topichave mainly focused on environmental bacteria and on pathogenic bacteria, especially thosewith an intracellular lifestyle. Copper homeostasis in Bordetella pertussis is at the centre ofthis thesis. This bacterium is the etiologic agent of whooping cough whose peculiarity is to bestrictly dependent on its host. Furthermore, its ecological niche is very limited, as it onlyinfects the human upper respiratory epithelium. This bacterium represents a new model tostudy the role of copper in host-pathogen relationships. This work has revealed the loss ofmost copper homeostasis systems in B. pertussis. An original detoxification mechanism witha composite regulation has been identified that includes the cytoplasmic metallochaperoneCopZ and two enzymes catalyzing detoxification of peroxides. This thesis work has led to thefollowing hypothesis: this system, which is a distinctive feature of the Bordetella genus, isinvolved in survival to phagocytosis, the only situation where the bacterium experiencescopper excess in its ecological niche. The metallo-chaperone CopZ mediates thedetoxification of free copper by complexation, and together the two enzymes decrease theconcentration of hydrogen peroxide, which causes oxidative stress through the Fenton andHaber-Weiss reactions. The co-regulation of this system by copper and hydrogen peroxideresults in a very dynamic and selective activation, specific to phagocytosis-relatedmechanisms. This system offers a sufficiently favorable cost-benefit balance to have beenselected over the course of the evolution of this host-restricted pathogen.This work has led to the identification of copper tolerance mechanisms in B. pertussisand to the description of their evolutionary selection among Bordetellae
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Boukpessi, Tchilalo. "Rôle de protéines non collagéniques dans la physiopathologie de la dentine humaine." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05M002.
Full textAbstract:
Ce travail a pour objectif principal d'étudier la physiopathologie de la matrice dentinaire. Dans ce but, deux modèles de pathologie de la dentine ont servi de support : la carie dentinaire et la dentine hypophosphatémique. A travers ces modèles, nous avons cherché à mieux comprendre le rôle des protéines non collagéniques dans la minéralisation, la structure et la dégradation de la dentine humaine. Dans le premier modèle, le rôle des MMPs dentinaires dans la dégradation des protéines de la dentine cariée a été tout particulièrement développé. Ainsi, nous avons essayé de comprendre comment la MMP-3 (dont la présence dans la dentine humaine mature a été démontrée pour la première fois par ce travail) initiait la libération des molécules de la matrice extracellulaire dentinaire à partir de dentine humaine artificiellement déminéralisée. Ce premier travail ouvre des perspectives d'une part en ternie de réparation de la dent, la dégradation de matrice pouvant fournir des peptides bioactifs, et d'autre part et à plus court terme, en terme de thérapeutique adhésive. En effet, un traitement de la dentine par des MMPs pourrait améliorer le collage d'un composite à la dentine traitée. Le deuxième modèle concerne la dentine de dents de patients atteints de rachitisme hypophosphatémique lié à la mutation de PHEX. Chez ces patients, des défauts de minéralisation de la dentine sont observés. Nous avons étudié la structure, la composition et la distribution des molécules de la matrice extracellulaire dentinaire de dents temporaires provenant de patients hypophosphatémiques. Nous avons ainsi montré une accumulation des protéines de la matrice sous forme dégradée au niveau des plages de dentine non minéralisée. Dans ces conditions pathologiques, MEPE semble jouer un rôle critique et notre travail a ^contribué àjme meilleure compréhension de ses fonctionsThe aim of this work was to study the physiopathology of dentin extracellular matrix. With this end, two models of pathological dentin were carried out : artificial caries-affected dentin and hypophosphatemic dentin. Through these models, we tried to better understand the role of non collagenous proteins in the mineralization, the structure and the degradation of human dentin. Therefore, in the first model, we investigated how recombinant MMP-3 initiates the release of ECM molecules from artificially demineralized human dentin. That way, we identified for the first time to the best of our knowledge, the presence of endogenous MMP-3 in mature dentin. In this first approach, the use of MMP-3 as a potential agent for dentin preparation may improve resin adhesion. The second model concerned dentin from hypophosphatemic patients. Familial hypophosphatemic rickets results from the mutation of the PHEX gene. Patients have reported to display important dentin defects, and therefore, we explored the dentin structure, composition, and distribution of ECM molecules in hypophosphatemic human deciduous teeth. The abnormal presence of low-molecular weight protein complexes in large interglobular spaces was shown. In these pathological conditions, MEPE seems to display important role and our work aimed to better understand this function
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Razy-Krajka, Florian. "Etude des systèmes monoaminergiques de l'ascidie Ciona intestinalis : De la différenciation au comportement : hypothèses d'homologies." Paris 11, 2010. http://www.theses.fr/2010PA11T005.
Full text
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Lorrain, Jean-Louis. "Figures de la souffrance psychique : approche éthique." Paris 11, 2009. http://www.theses.fr/2009PA11T117.
Full textAbstract:
La figure, porte d'entrée de la perception, permet un parcours éthique à travers le Corps/Esprit de l'homme souffrant dans sa dimension neurale et sociétale. La recherche d'un substrat à la souffrance sollicite les neurosciences et conduit à s'interroger sur la conscience, phénomène et mystère. La créativité, vectrice de la souffrance, rend visible l'invisible. Les arts permettent l'indicible. La poétique et le politique sont proposés comme émergences face à l'impuissance de la science. L'homme souffrant, revisité par le visage, offre à l'éthique sa précarité et sa fragilité, comme puissance soulevant la complexité de la subjectivité et l'intentionnalité, rendant possible une proposition de transcendance laïque. La souffrance de l'éthique, liée au post-humanisme, demande une refondation de l'éthique construite sur la responsabilité, la résistance, le refus d'abandon. L'éthique devient l'interface entre l'humanité et le monde souffrant, dont la souffrance est constitutiveAs the front door of perception, the figure enables an ethical joumey through the mind-body of man, suffering in his neural and societal dimension. Searching for a substrate to sufferance calls for neurosciences and leads us to ponder over conscience, a mysterious phenomenon. As a vector of sufferance, creativity makes the invisible visible and art enables the unspeakable. Poetics and politics are presented as emergences against the impotence of science. Man suffering, altered by emotion, shows ethics his precariousness and frailty as powers raising the complexity of subjectivity and intent, making possible a suggestion of sucular transcendence. The sufferance of ethics, related to posthumanism, requires a re-foundation of ethics based upon responsibility, resistance, and the will not to abandon. Ethics becomes the interface between humanity and the suffering world, whose sufferance is intrinsic
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Feliu, Catherine. "Implication des récepteurs P1 et P2 dans la protection des cellules endothéliales au cours de l’hypoxie-reoxygenation Complementary Role of P2 and adenosine receptors in ATP induced-anti-apoptotic effects against hypoxic injury of HUVECs Current knowledge on the role of P2Y receptors in cardioprotection against ischemia-reperfusion Intra-extracellular quantification of nucleotides and adenosine using UHPLCHRMS: improvement of robustness by the use of ascorbic acid in mobile phase Description of the novel cytoprotective action pathways of ticagrelor against hypoxic lesions at the endothelium." Thesis, Reims, 2019. http://www.theses.fr/2019REIMM202.
Full textAbstract:
Au cours de l’ischémie cardiaque, la lésion est initiée au niveau de l’endothélium, et progresse aux cardiomyocytes environnants. La signalisation purinergique joue un rôle important au cours d’épisodes l’ischémie/reperfusion (I/R). De multiples travaux ont portés sur l’étude des mécanismes de protection des nucléotides et nucléosides, sans pour autant étudier leurs rôles spécifiques sur l’endothélium. Dans ce travail, nous mettons en évidence une augmentation des concentrations extracellulaires en ATP et adénosine provenant de l’endothélium soumis à une hypoxie. Au niveau endothélial, nous mettons en évidence un effet protecteur de l’ATP extracellulaire ainsi qu’un rôle complémentaire des récepteurs P2 et P1. Les récepteurs P2 impliquent les voies de signalisation PI3K, ERK1/2, le canal mKATP et mettent également en jeu la NOS. La protection médiée par les récepteurs P1 implique les voies MEK/ERK1/2, PKA et NOS. Dans un second temps, nous rapportons un nouveau mécanisme cytoprotecteur du ticagrelor, indépendant des éléments figurés du sang et de son effet antiagrégant plaquettaire. Ce mécanisme est initié par l’augmentation de la biodisponibilité de l’adénosine extracellulaire qui déclenche les effets protecteurs via ses récepteurs A3 et A2A. Ceci peut expliquer, en partie, les effets cardioprotecteurs du ticagrelor décrit chez l’homme. L’ensemble de nos données conforte le rôle protecteur de l’ATP et de l’adénosine vis-à-vis de l’hypoxie au niveau endothélial et suggèrent un rôle bénéfique de ces médiateurs dans diverses ischémies notamment cardiaque, rénale ou cérébraleDuring cardiac ischemia, the lesion is triggered in the endothelium and progresses to the surrounding cardiomyocytes. Purinergic signalling plays an important role during ischemia/reperfusion (I/R) events. Many studies have been carried out to study the mechanisms of protection of nucleotides and nucleosides, without studying their specific roles on the endothelium. In this work, we report an increase in extracellular concentrations of ATP and adenosine from the endothelium exposed to hypoxia. We report a protective effect of extracellular ATP and a complementary role of the P2 and P1 receptors. P2 receptors protective effects involve the PI3K, ERK1/2, mKATP channel signalling and also involve NOS. The protection mediated by the P1 receptors involves the MEK/ERK1/2, PKA and NOS. In a second step, we describe a new cytoprotective mechanism of ticagrelor, independent of the blood element and its antiplatelet anti-aggregating effect. This mechanism is initiated by the increased of extracellular adenosine bioavailability, which triggers protective effects via its A3 and A2A receptors. This may explain, in part, the reported cardioprotective effects of the ticagrelor in clinical studies. Together, our data support the protective role of ATP and adenosine against deleterious effects ofendothelium hypoxia and suggest a beneficial role for these mediators in different ischemia, including cardiac, renal or cerebral ischemia
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Balland, Églantine. "Rôle des tanycytes de l’éminence médiane dans le transport de la leptine de la périphérie vers l’hypothalamus." Thesis, Lille 2, 2012. http://www.theses.fr/2012LIL2S053.
Full textAbstract:
Le noyau arqué hypothalamique (ARH) est un composant majeur des circuits neuronaux qui régulent la balance énergétique. Cependant les mécanismes d’entrée des hormones périphériques dans l’ARH sont peu connus. L’ARH est adjacent à l’éminence médiane (ME), où des cellules épendymales hautement spécialisées appelées tanycytes son tprésentes. Les corps cellulaires des tanycytes bordent le troisième ventricule et leurs prolongements basaux contactent le plexus de capillaires fenêtrés de la ME. Récemment, il a été proposé que les tanycytes joueraient un rôle dans la régulation de la barrière sang hypothalamus métabolique. Leur localisation privilégiée à l’interface entre le sang et le cerveau suggère que ces cellules pourraient être la cible directe de nombreux signaux hormonaux périphériques, incluant l’hormone adipocytaire qu’est la leptine. La compréhension des mécanismes régissant le transport de la leptine est fondamentale car cela apporterait de nouvelles pistes pour la détermination des mécanismes cellulaires impliqués dans la résistance à la leptine accompagnant l’obésité.Le but de ce travail de thèse était de déterminer si les tanycytes de la ME pouvaient être responsable du transport de la leptine vers l’hypothalamus et dans ce cas, si ils pouvaient être impliqués dans les mécanismes de résistance à la leptine associée à l’obésité.Dans un premier temps, nous avons étudié le transport de la leptine vers l’hypothalamus à travers diverses approches. Les expériences de western-blots ont révélé que la leptine injectée en périphérie est retrouvée de manière séquentielle dans la ME puis dans le MBH, de plus le délai d’activation du récepteur à la leptine suit la même séquence. Par ailleurs, nous avons observé que la leptine s’accumule dans la ME n’atteignant pas l’hypothalamus chez les souris obèses (modèles db/db et DIO) qui ont perdu la capacité à activer le récepteur à la leptine. L’utilisation de leptine fluorescente a permis de démontrer que la leptine est internalisée de manière polarisée dans les tanycytes de la ME,l’internalisation a lieu au niveau des prolongements qui contactent les capillaires fenêtrés puis la leptine est transportée vers le pôle apical. De plus, nous avons démontré par immunohistochimie que ces tanycytes constituent le premier type cellulaire de la ME à répondre à une injection prériphérique de leptine par l’activation de P-STAT3.L’administration d’un antagoniste de la leptine a permis de mettre en évidence que l’internalisation de la leptine dans les tanycytes est dépendante de l’activation du récepteur à la leptine.L’utilisation d’un modèle in vitro, les cultures primaires de tanycytes, constitue un outil permettant l’étude détaillée des mécanismes responsables du transport de la leptine. Les expériences menées sur ces cultures ont confirmé les résultats obtenus in vivo et montrent que la libération de la leptine par les tanycytes, étape du transport qui est bloquée chez les souris obèses, est sous la dépendance de l’activation de la voie de signalisation ERK. L’utilisation d’un agent pharmacologique capable d’activer la voie de signalisation ERK dans les tanycytes permet de restaurer le transport de la leptine de la ME vers le MBH chez les souris obèses.En définitive, ces résultats apportent d’importantes informations sur la compréhension du transport central de la leptine et pourraient aider à expliquer les mécanismes responsables de la résistance à la leptine associée à l’obésitéThe arcuate nucleus of the hypothalamus (ARH) is a critical component of the neural circuits that regulate energy balance. However, little is known about how peripheral signals reach the ARH to mediate their central effects. The ARH is adjacent to the median eminence (ME), where highly specialized ependymal cells called tanycytes are found. The cell bodies of tanycytes are lining the floor of the third ventricle and their end-feet are contacting the rich capillary plexus with fenestrated endothelium of the ME. Tanycytes have recently been proposed to play a role in blood-hypothalamus barrier regulation. Their privileged location at the interface between the blood and the brain suggests that these cells might be direct target for a variety of peripheral signals, including the adipocyte-derived hormone leptin. The understanding of leptin transport mechanisms is fundamental as it may provide new insights into cellular processes involved in leptin resistance linked to obesity.The aim of this work was to determine wether tanycytes of the median eminence could be responsible for leptin entry in the hypothalamus and in this case if they could be involved in the mechanisms responsible for obesity-associated leptin resistance.We first investigated leptin uptake into the hypothalamus through several approaches in vivo. Western-blot experiments revealed that peripherally injected leptin is sequentially found in ME and later in MBH, moreover the timing of the leptin receptor activation appears to follow the same sequence. In contrast, we observed that leptin failed to reach the hypothalamus and was seen to accumulate in the ME in obese mice (db/db and DIO models) that has lost the capacity of activating LepRb signaling pathways in the ME. The use of fluorescent leptin demonstrated that leptin is internalized in ΜΕ tanycytes in a polarized manner, leptin is uptaken at the level of the basal processes contacting fenestrated capillaries and transported toward the apical pole. In addition, we showed that these tanycytes are the first cell type in the median eminence to respond to peripheral leptin injection through the activation of P-STAT3 detected by immunohistochemistry. The use of a leptin antagonist showed the dependence of leptin receptor(s) activation for leptin internalization in tanycytes. Then, the use of tanycyte primary cultures as an in vitro model system allowed us to study leptin transport mechanisms more in detail. Experiments performed on cultured tanycytes confirmed our in vivo findings and showed that the release of leptin from tanycytes, which is blocked in obese mice, depends on the activation of the X signaling pathway. The use of a pharmacological compound able to activate the X signaling pathway in tanycytes can rescue leptin transport from ME to MBH in obese mice. Altogether this data may provide valuable information in the understanding of central leptin transport and may help to explain mechanism underlying obesity-associated leptin resistance
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Kezai, Mohamed. "Association de l'infection chronique à Toxoplasma gondii avec la schizophrénie : étude épidémiologique et rôle potentiel de l'activation de la voie des kynurénines dans le système nerveux central de l'hôte infecté." Thesis, Lille, 2020. http://www.theses.fr/2020LILUS013.
Full textAbstract:
La toxoplasmose est une maladie zoonotique causée par le parasite Toxoplasma gondii, un protozoaire qui traverse la barrière hémato-encéphalique pour atteindre le système nerveux central (SNC) où il infecte plusieurs types cellulaires notamment les astrocytes, les neurones et les microglies. Ce parasite intracellulaire obligatoire ne persiste sous forme de kystes qu’au sein des neurones aboutissant à une infection chronique pouvant durer toute la vie de l’hôte infecté. La toxoplasmose latente cérébrale est accompagnée par une augmentation de la concentration en dopamine et glutamate et d’une inflammation chronique de bas grade, notamment causée par une activation des microglies et des astrocytes. La schizophrénie est une maladie mentale touchant 1% de la population mondiale caractérisée par le développement de graves troubles cognitifs et psychiatriques. Cette maladie qui s’établit à l’adolescence est corrélée à une inflammation chronique du SNC et à l’activation de la voie des kynurénines (KP) dans les astrocytes activés. L’activation de la voie KP résulte en la production de l’acide kynurénine (KYNA) par les astrocytes, un métabolite neuroactif qui altère les fonctions neuronales à forte concentration. Nous nous sommes intéressés au cours de cette thèse au lien pouvant exister entre la toxoplasmose et la schizophrénie. En particulier, nous avons exploré si l’infection latente par T. gondii active la voie KP et la production de métabolites neuroactifs comme le KYNA ou l’acide quinoléique. D’une part, une première étude épidémiologique menée sur un échantillon de la population algérienne à forte prévalence pour la toxoplasmose indique une association significative entre la schizophrénie et le statut infectieux avec une séroprévalence de 70% chez les patients atteints de schizophrénie contre 52,9% chez les témoins et un odds ratio (OR) calculé de 2,081. Cette association est plus prononcée chez les sujets de moins de 38 ans (OR= 2.715), suggérant que l'infection par le parasite T. gondii pourrait favoriser l'apparition de la schizophrénie. D’autre part, notre étude menée à l’institut pasteur de Lille a montré que l’infection chronique à long terme (6 mois) de souris C57BL/6 par des souches de type II induit un environnement inflammatoire dans le SNC caractérisé par la production de cytokines pro-inflammatoires et anti-inflammatoires et de manière importante, induit l’activation de la voie KP. Par ailleurs, après utilisation d’une autre souche parasitaire de type II moins virulente, nos résultats ne semblent pas montrer de corrélation directe entre le niveau d’inflammation et le niveau d’activation de la voie KP, suggérant une action directe de l’infection, qui pourrait être liée à l’activation des astrocytes et microglies par le parasite. Nos résultats obtenus in vitro sur des cultures d’astrocytes primaires ont confirmé nos précédents résultats obtenus dans le SNC de souris chroniquement infectées. En effet, l’infection par une souche de type II induit une forte activation des astrocytes caractérisée par l’augmentation de l’expression des molécules du CMH-I, le recrutement de la protéine GFAP autour de la vacuole parasitaire et la production de cytokines pro- et anti-inflammatoires. En outre l’infection des astrocytes induit l’activation de la voie des KP mise en évidence par l’expression des enzymes IDO-1, IDO-2 et KATII. De manière intéressante, nos résultats suggèrent que le parasite diminue l’activation des astrocytes, probablement via des facteurs parasitaires secrétés. Notre étude révèle donc que l’infection chronique par le parasite T. gondii module l’activité astrocytaire ainsi que l’activation de la voie des kynurénines, un mécanisme qui pourrait potentiellement favoriser l’apparition ou le développement des troubles cognitifs observés chez les patients schizophrènesToxoplasmosis is a zoonotic disease caused by the parasite Toxoplasma gondii, a protozoan that crosses the blood-brain barrier to reach the central nervous system (CNS) where it infects several cell types including astrocytes, neurons and microglia. This obligate intracellular parasite only persists as cysts in neurons resulting in a life-long chronic infection. Latent cerebral toxoplasmosis is correlated by an increase in the levels of dopamine and glutamate and the establishment of low-grade chronic inflammation, notably caused by the activation of microglia and astrocytes. Schizophrenia is a mental illness affecting 1% of the world's population characterized by the development of severe cognitive and psychiatric disorders. This disease, which develops at the adolescence, is correlated with a chronic inflammation of the CNS and the activation of the kynurenine pathway (KP) in activated astrocytes. Activation of the KP results in the production of kynurenic acid (KYNA) by astrocytes, a neuroactive metabolite that alters neuronal functions at high concentrations. In this project, we aimed to investigate a putative functional link between toxoplasmosis and schizophrenia. In particular, we explored whether latent infection by T. gondii activates the KP and the production of neuroactive metabolites such as KYNA and quinolinic acid. On one hand, an epidemiological study carried out in a sample of the Algerian population characterized by a high prevalence for toxoplasmosis indicates a significant association between schizophrenia and the T. gondii infectious status with a seroprevalence of 70% in patients with schizophrenia against 52.9 % in controls and a calculated odds ratio (OR) of 2.081. This association is more pronounced in subjects under 38 years of age (OR = 2.715), suggesting that infection could promote the onset of schizophrenia. On the other hand, our study carried out at Pasteur Institute of Lille showed that a long-term chronic infection (6 months) of C57BL/6 mice by a type II strain induces an inflammatory environment in the CNS characterized by the production of pro-inflammatory and anti-inflammatory cytokines and importantly, induces the activation of the kynurenine pathway. Furthermore, after using another less virulent type II parasitic strain, our results do not show a direct correlation between the level of inflammation and the level of the activation of the KP, suggesting a direct action of the infection, which could be related to the activation of astrocytes and microglia by the parasite. Our results obtained in vitro on primary astrocyte cultures confirmed our previous results obtained in the CNS of chronically infected mice. Infection with a type II strain induces a strong activation of astrocytes characterized by increased expression of MHC-I molecules, the recruitment of the GFAP protein around the parasitic vacuole and the production of pro- and anti-inflammatory cytokines. In addition, the infection of astrocytes induces the activation of the KP demonstrated by the increased expression of the enzymes IDO-1, IDO-2 and KATII. Interestingly, our results suggest that the parasite decreases the activation of astrocytes, possibly via secreted parasitic factors. Our study therefore reveals that chronic infection with T. gondii modulates astrocytic activity as well as the activation of the kynurenine pathway, a mechanism that could potentially promote the appearance or development of the cognitive disorders observed in schizophrenic patients
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Mogrovejo, Valdivia Alejandra. "Conception et évaluation d'un pansement à libération de deux principes actifs pour le traitement des plaies chroniques." Thesis, Lille 2, 2018. http://www.theses.fr/2018LIL2S046.
Full textAbstract:
Les plaies chroniques présentent un risque d’infection entrainant un retard de la cicatrisation et des douleurs intenses. Ils restent un problème de santé publique car leur prise en charge génère un coût élevé. Les pansements à base d’argent sont largement utilisés pour traiter les plaies déjà infectées ou présentant un risque infectieux. Néanmoins, les effets toxiques de l’argent envers les fibroblastes et les kératinocytes entraînent une perception limitée de l’efficacité remettant en cause leur bénéfice. Dans ce contexte, le projet de thèse a consisté en la conception d’un pansement à libération de deux principes actifs : un sel d’argent pour traiter l’infection et de l’ibuprofène pour soulager la douleur. Le pansement est enrobé par un système multicouches (PEM) afin de ralentir la diffusion de l’argent vers la plaie et au même temps fournir un environnement humide. Dans un premier temps, un textile en polyester a d’abord été fonctionnalisé soit par le chitosan, soit par la β-cyclodextrine tous les deux réticulés par l’acide citrique afin de former des charges négatives en surface du polyester, pour ensuite charger l’argent dans le textile. Puis le système PEM a été construit par la technique de « dip-coating » en utilisant le chitosan comme polyelectrolyte positif et la poly-cyclodextrine comme polyelectrolyte négatif. Après, un traitement thermique a été réalisé pour stabiliser les assemblages. Le système PEM a présenté une évolution linéaire en terme de gain de masse en fonction du nombre de couches déposées. La quantité d’argent et d’ibuprofène chargé sur les supports a été de 240 μg/cm2 et de 200 μg/cm2, respectivement. D’autre part, le profil de libération de l’argent atteint 3 μg/cm2 à 72 heures tandis que la libération de l’ibuprofène est prolongée jusqu’à 6 heures dans le PBS, sous conditions statiques. Les études biologiques ont montré la cytocompatibilité du pansement vers les cellules épithéliales embryonnaires de poumon humain (lignée L132) et une excellente activité antibactérienne contre les souches S. aureus et E. coli. Finalement, une étude préliminaire a été réalisée in vivo chez la souris C3H/HE présentant une plaie infectée par E. coli. Les pansements testés ont été appliqués sur les plaies et maintenus pendant 3 jours. Seul le pansement ne contenant pas d’argent (contrôle négatif) présentait encore une colonisation par E. coliChronic wounds present a risk of infection, delaying the healing process and leading to severe pain. Chronic wounds represent a public health problem that generates high costs. Silver dressings are widely used to treat wounds already infected or with a risk of infection. Nevertheless, the toxic effect of silver toward fibroblasts and keratinocytes generates a perception lack of efficacy and cost effectiveness, and question their effectiveness as well as its safety. The goal of this work was to design a wound dressing releasing two active ingredients: a silver salt to treat the infection and ibuprofen to relieve the pain. The dressing was coated by a layer-by-layer (L-b-L) system to slow down silver diffusion into the wound and at the same time provide a moist environment to the wound. First, a nonwoven polyester textile was functionalized by chitosan or by β-cyclodextrin polymer, both crosslinked with citric acid under curing conditions to form a thermofixed negatively charged layer at the surface textile to then loaded silver onto the textile. Next, a L-b-L system was built on the support by alternating self-deposition of CHT as cationic polyelectrolyte and cyclodextrin polymer as anionic polyelectrolyte. A curing process was applied to stabilize the L-b-L system. L-b-L system showed a linear evolution of the weight gain in relation to number of layers formed. Loaded silver and ibuprofen reached up to 240 μg/cm2 and 200 μg/cm2 respectively. Silver was released up to 3 μg/cm2 after 3 days in PBS under static conditions, and ibuprofen was released up to 6 hours under the same parameters. Biological studies proved the dressing cytocompatibility using human lung normal cell lines (L132). In vitro microbiological evaluation showed greater antibacterial activity of the dressing against S. aureus and E. coli. Finally, a preliminary in vivo study was performed in C3H/HE mice with a wound infected by E. coli. The dressings tested were applied to the wounds and were maintained for 3 days. Only the free silver-dressing (negative control) showed a colonization by E. coli
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Carvalho, Kévin. "Rôle des récepteurs adénosinergiques A2A dans la maladie d'Alzheimer." Thesis, Lille 2, 2019. http://www.theses.fr/2019LIL2S030.
Full textAbstract:
L'accumulation neuronale de protéines tau hyperphosphorylées et agrégées (« pathologie tau ») est corrélée au déclin cognitif dans la maladie d'Alzheimer. Les mécanismes liant tau à la perte de mémoire demeurent néanmoins mal connus. Différentes données épidémiologiques et expérimentales suggèrent que la consommation régulière de caféine réduit le risque de développer la maladie d'Alzheimer ainsi que les lésions et déficits cognitifs associés. Les effets protecteurs de la caféine ont été attribués au blocage des récepteurs à l'adénosine A2A (A2ARs), qui sont retrouvés augmentés dans le cerveau des patients atteints de la maladie d'Alzheimer, en corrélation avec le développement de la pathologie tau et des déficits cognitifs. Ces observations suggèrent ainsi un lien entre la dysrégulation cérébrale des récepteurs A2A, le développement de la pathologie tau et des déficits de mémoire dans la maladie d'Alzheimer. De manière intéressante, les récepteurs A2A sont dérégulés à la fois au niveau neuronal mais aussi au sein des astrocytes, sans que l’impact respectif de ces changements sur l’évolution pathologique de la MA ne soit connu. Dans ce contexte, l’objet de ce travail de thèse est d'explorer la relation entre la dysrégulation des A2ARs, la pathologie tau et les troubles synaptiques/cognitifs associés, en reproduisant les dysrégulations neuronale et astrocytaire du récepteur dans un nouveau modèle transgénique de la maladie d'Alzheimer.Nous avons développé un modèle conditionnel (Tet-Off) permettant la surexpression du A2AR dans les neurones CaMKII+ ou dans les astrocytes GFAP+. Ce modèle a été croisé avec la lignée de souris THY-Tau22, qui développe progressivement une pathologie tau hippocampique associée à un déclin des fonctions mnésiques ainsi qu’à un développement de processus neuroinflammatoires et une perte synaptique. Dans les différents groupes expérimentaux, nous avons notamment évalué les conséquences de la surexpression neuronale ou astrocytaire des récepteurs sur le développement de la pathologie tau et les altérations fonctionnelles associées (apprentissage et mémoire). Ces travaux chez la souris s’accompagnent également d’investigations post-mortem chez des patients atteints de dégénérescences lobaires fronto-temporales présentant des agrégats de tau (FTLD-tau).Nos travaux démontrent d’une part une augmentation neuronale du récepteur A2AR dans le cortex temporal de patients atteints de FTLD-tau avec mutation du gène MAPT P301L, une tauopathie pure. D’autre part, la surexpression neuronale du A2AR chez les souris THY-Tau22, mimant les modifications observées chez les patients, conduit à une augmentation hippocampique de l'hyperphosphorylation de tau, associée à une perte des synapses glutamatergiques, en lien avec la production microgliale de protéines du complément C1q, conduisant à une aggravation des troubles de la mémoire. Parallèlement, nous montrons que la surexpression astrocytaire du A2AR exacerbe les altérations de mémoire spatiale des souris THY-Tau22, en lien avec une augmentation de la phosphorylation et de l'agrégation de tau ainsi que des processus neuroinflammatoires hippocampiques associés.L’ensemble de ces données suggèrent que la dysrégulation des A2ARs retrouvée chez les patients atteints de la maladie d'Alzheimer mais aussi de FTLD-tau contribue au développement des troubles cognitifs, en favorisant l’émergence de la pathologie Tau ainsi que les pertes synaptiques associées, via des changements délétères de la communication neuro-gliale. Ces données suggèrent ainsi que le blocage des récepteurs adénosinergiques A2A est une option thérapeutique à envisager plus avant dans le contexte des tauopathiesNeuronal accumulation of hyperphosphorylated and aggregated tau proteins (referred to as “tau pathology”) is correlated with cognitive decline in Alzheimer’s disease (AD) but the mechanisms underlying tau-induced memory deficits remain unclear. Epidemiological and experimental studies pointed out that chronic caffeine consumption reduces AD risk, associated lesions as well as related cognitive deficits. These protective effects were ascribed to the blockade of adenosine A2A receptors (A2ARs), which have been found upregulated in AD patient’s brains in correlation with tau pathology development and cognitive deficits. These observations suggest a link between A2AR dysregulation, tau pathology development and memory loss in AD. Interestingly, both neuronal and astroglial A2AR appear to be dysregulated in AD, but the specific impact of each cell-specific change on AD progression remain unknown. In this context, the goal of this PhD work is to get insights towards the relationship between A2AR dysregulation, tau pathology development and associated synaptic/cognitive deficits, by inducing neuronal or astrocytic A2AR upsurge in a new transgenic mouse model of AD.To address this question, we have developed a new conditional model (Tet-Off) allowing the A2AR overexpression in CaMKII-positive neurons or GFAP-positive astrocytes. This model was crossed with THY-Tau22 mice, which progressively develops a hippocampal Tau pathology associated with memory decline, associated with neuroinflammatory processes and synaptic loss. In the different experimental groups, we have evaluated the consequences of neuronal or astrocytic upsurge of the A2ARs towards tau pathology and functional impairments (learning and memory). In addition, we also investigated post-mortem tissue of patients with frontotemporal lobar degeneration with tau aggregates (FTLD-tau).First, we show a neuronal upsurge of A2AR in the temporal cortex of FTDL-tau patients with MAPT P301L mutation, a pure tauopathy. The neuronal upregulation of A2AR in THY-Tau22 mice, modelizing these pathological changes, led to an hippocampal increase of tau hyperphosphorylation, associated with glutamatergic synapse loss, linked to the accumulation of the microglial complement protein C1q, leading to the worsening of spatial memory impairments. Additionally, we found that astrocytic A2AR overexpression worsened spatial memory impairments of THY-Tau22 mice. These effects were associated with an increased Tau phosphorylation together with the upregulation of hippocampal neuroinflammatory processes.Altogether, these data suggest that A2AR dysregulation seen in the brain of AD and FTLD-tau patients contributes to the development of Tau-induced cognitive impairments by increasing tau pathology and associated synaptic loss through detrimental neuro-immune changes. These data suggest that the blockade of adenosinergic A2A receptors is a therapeutic option to consider in the context of tauopathies
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Hoarau, Gautier. "Caractérisation du mycobiome intestinal et fécal chez les patients atteints de maladie de Crohn, et leurs parents sains du premier degré." Thesis, Lille 2, 2016. http://www.theses.fr/2016LIL2S033/document.
Full textAbstract:
Introduction : La maladie de Crohn (MC), maladie inflammatoire chronique intestinale, est une maladie multifactorielle, d’origine inconnue. La dysbiose bactérienne a été largement évoquée dans la pathogénèse de la MC. Notre objectif était de caractériser la flore fongique, conjointement à la flore bactérienne au cours de formes familiales de MC.Méthodes: Nous avons utilisé une plateforme de séquençage à haut débit pour caractériser la flore fongique et bactérienne fécale, échantillonnée dans 9 familles multiplexes atteints de MC (20 patients, et 28 sujets sains apparentés), et 4 familles contrôles (21 individus sains non apparentés). Une analyse bioinformatique a été réalisée pour analyser l’abondance, la biodiversité, et les interactions microbiennes.Résultats : Le microbiote fécal des membres issus des familles multiplexes était statistiquement différent de celui des membres issus des familles contrôles. L’analyse en composantes principales a montré qu’au sein des familles multiplexes, les membres malades et sains partageaient un répertoire fongique commun. Les patients MC avaient en revanche un microbiote enrichi en Candida tropicalis, Escherichia coli et en Serratia marcescens, et appauvri en bactéries dites bénéfiques (Faecalibacterium prausnitzii). De plus les taux d’ASCA (Anticorps anti- S. cerevisiae), marqueur sérologique de MC étaient corrélées à la présence de C. tropicalis (P = .01). Enfin nous avons mis en évidence une synergie entre C. tropicalis, E. coli, et S. marcescens, suggérant une interaction microbienne in vivo participant à l’initiation de l’inflammation intestinale. Ces données ont été validées par la suite avec un modèle de biofilm.Conclusion : Dans ces formes familiales de MC, les interactions microbiennes entre bactéries et champignons sont déterminantes dans l’initiation de la réponse inflammatoireIntroduction: Crohn's disease (CD) results from a complex interplay between host genetic factors and endogenous microbial communities.Methods: In the current study, we used Ion Torrent sequencing to characterize the gut bacterial microbiota (bacteriome) and fungal community (mycobiome) in patients with CD and their non-diseased first degree relatives (NCDR) in 9 familial clusters living in Northern France/Belgium, and in healthy individuals from 4 families living in the same area (non-CD unrelated, NCDU). Principal components analysis, diversity, and abundance analyses were conducted and CD-associated inter- and intra-kingdom microbial correlations determined. Significant microbial interactions were identified and validated using single- and mixed-species biofilms.Results: CD and NCDR groups clustered together in the mycobiome, but not in bacteriome. Microbiota of familial (CD, NCDR) samples were distinct from that of non-familial (NCDU) samples. Abundance of Serratia marcescens (SM), Escherichia coli (EC) was elevated in CD patients, while that of beneficial bacteria was decreased. Abundance of the fungus Candida tropicalis (CT) was significantly higher in CD compared to NCDR (P = .003), and positively correlated with levels of anti–Saccharomyces cerevisiae antibody (ASCA). Abundance of CT was positively correlated with SM and EC, suggesting these organisms interact in the gut. The mass and thickness of Triple species (CT+SM+EC) biofilm were significantly higher than single and double species biofilm. CT biofilms comprised of blastospores, while double and triple species biofilms were enriched in hyphae. SM used fimbriae to co-aggregate or attach with CT/EC, while EC closely apposed with CT. Conclusion: Specific inter-kingdom microbial interactions may be key determinants in CD
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Perrier, Anabelle. "Etude du trafic intracellulaire de la protéine M du coronavirus du syndrome respiratoire du Moyen-Orient (MERS-CoV)." Thesis, Lille 2, 2019. http://www.theses.fr/2019LIL2S018.
Full textAbstract:
Les coronavirus sont une famille de virus émergents, comme l’ont montré les émergences récentes des coronavirus SARS-CoV (Severe acute respiratory syndrome coronavirus) et MERS-CoV (Middle-East respiratory syndrome coronavirus), pathogènes pour l’homme. Nous ne disposons ni d’antiviraux spécifiques ni de vaccins pour lutter contre les coronavirus.Des quatre protéines structurales du virus, la protéine M est le moteur de l’assemblage viral. Exprimée seule en cellules, elle peut dépasser le site d’assemblage dans la voie de sécrétion. Nous avons confirmé la localisation de MERS-M dans le TGN(trans-golgi network) et identifié deux signaux dans son domaine C-terminal impliqués dans son trafic : un signal DxE d’export du réticulum, et un signal KxGxYR de rétention dans le TGN. Le signal DxE avait déjà été identifié sur une autre protéine virale, tandis que le signal KxGxYR est un nouveau motif. Pour confirmer son rôle nous avons construit des chimères entre MERS-M et la protéine M du coronavirus IBV (Infectious bronchitis virus), localisée dans le compartiment intermédiaire entre le RE et le Golgi (ERGIC), et démontré que pour les deux protéines le domaine C-terminal est déterminant pour leur localisation spécifique.Un second projet de caractérisation de l’activité antivirale de la digoxigénine contre le HCoV-229E a été initié. Nous avons démontré que cette drogue inhibe le virus à une étape post-entrée, avec une concentration inhibitrice médiane (IC50) de 250nM, et qu’elle n’est pas toxique pour les cellules à cette concentration. Elle inhibe aussi l’infection par le virus de l’hépatite C, et elle semble cibler une étape précoce de la réplication des virus RNA (+)Coronaviruses are an important family of emerging pathogens, as shown by therecent emergence of pathogenic SARS-CoV (Severe acute respiratory syndromecoronavirus) and MERS-CoV (Middle-East respiratory syndrome coronavirus) in the lasttwo decades. There are still some knowledge gaps concerning the biology ofcoronaviruses and we do not have any specific treatment or vaccine.Among the four structural proteins of the virus, the M protein is considered to bethe motor of viral assembly. Expressed alone in cells, M proteins can go beyond theassembly site of the virus (Endoplasmic reticulum-Golgi intermediate compartment,ERGIC) in the secretory pathway. We confirmed MERS-M localization in the Trans-Golginetwork (TGN) and identified two signals involved in its intracellular trafficking in its Cterminaldomain: a DxE ER export signal, and a KxGxYR TGN retention signal. The DxEsignal was already identified on another viral protein, whereas the KxGxYR signal is anew motif. To confirm the role of KxGxYR signal in TGN retention, we constructedchimeras between MERS-M and the protein M of the Infectious bronchitis virus (IBV),located in the ERGIC. Our results suggest that for both MERS-M and IBV-M the Cterminaldomain is determinant for the specific localization of the proteins.We also initiated a project on the characterization of the antiviral activity ofdigoxigenin against HCoV-229E. Our results demonstrated that it inhibits HCoV-229E ata post-entry step, with an IC50 of 250nM, and that it is not toxic at this concentration.Digoxigenin also inhibits hepatitis C virus (HCV) and likely has an effect on an early stepof replication of RNA (+) viruses
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Lequeux, Audrey. "Impact du ciblage du domaine de liaison de HIF-1α avec HIF-1β sur le paysage immunitaire du mélanome Targeting HIF-1 Alpha Transcriptional Activity Drives Cytotoxic Immune Effector Cells into Melanoma and Improves Combination Immunotherapy Hijacker of the Antitumor Immune Response: Autophagy is Showing its Worst Facet Impact of Hypoxic Tumor Microenvironment and Tumor Cell Plasticity on The Expression of Immune Checkpoints Improving Cancer Immunotherapy by Targeting the Hypoxic Tumor Microenvironment: New Opportunities and Challenges." Thesis, université Paris-Saclay, 2020. http://www.theses.fr/2020UPASL026.
Full textAbstract:
L’hypoxie est une caractéristique majeure des tumeurs solides et elle est capable d’induire un microenvironnement tumoral immunosuppressif. Nous avons étudié l’impact de l’inhibition du domaine de liaison de HIF-1α avec HIF-1β sur le paysage immunitaire du mélanome murin B16-F10. Le ciblage de ce domaine de liaison inhibe l’activité transcriptionnelle de HIF-1α dans les cellules B16-F10 in vitro. In vivo, l’inhibition de l’activité transcriptionnelle de HIF-1α dans le mélanome B16-F10 montre une diminution significative de la croissance tumorale et une amélioration consistante de la survie des souris. La croissance tumorale est restaurée dans les souris immunodéficientes, soulignant l’importance du système immunitaire dans le contrôle de la croissance du mélanome. L’étude du phénotype des cellules immunitaires intra-tumorales révèle une augmentation de l’infiltration des cellules Natural Killer (NK), des lymphocytes T CD4+, des T régulateurs, des macrophages de type M1 et M2 et des cellules dendritiques lorsque l’activité transcriptionnelle de HIF-1α est inhibée. La déplétion de cellules NK dans notre modèle expérimental restaure la croissance tumorale, soulignant le rôle des NK dans la surveillance du mélanome B16-F10. Le changement du paysage immunitaire observé dans notre modèle corrèle également avec une modification du réseau de cytokines caractérisé par une nette augmentation de la sécrétion de CCL5 et de CCL2. En conclusion, cette étude met en évidence le rôle de HIF-1α dans le contrôle de la croissance et le remodelage du paysage immunitaire du mélanome B16-F10. Elle indique la possibilité de combiner un inhibiteur de HIF-1α avec une immunothérapie basée sur le blocage des points de contrôle immunitaire pour étendre leur efficacité et leur bénéfice thérapeutiques à un plus grand nombre de patients cancéreuxHypoxia is a major feature of solid tumors and is able to induce a tumor immunosuppressive microenvironment. Here, we investigated the impact of inhibiting of the binding domain of HIF-1α to HIF-1β on the immune landscape of B16-F10 melanoma. Targeting this binding domain inhibits the transcriptional activity of HIF-1α in B16-F10 cells in vitro. In vivo, inhibiting the transcriptional activity of HIF-1α in B16-F10 melanoma shows a significant decrease in tumor growth and a consistent improvement in mice survival. Tumor growth is restored in immunodeficient mice, highlighting the critical role of the immune system in controlling melanoma growth. The phenotyping of intra-melanoma immune cells reveals an increase in Natural Killer (NK), CD4+ T cells, regulatory T cells, M1 and M2 macrophages and dendritic cells. NK depletion restores tumor growth in our experimental model, highlighting the role of NK cells in melanoma surveillance. The alteration of the immune landscape that we observed also correlates with a clear increase of secreted CCL5 and CCL2. In conclusion, this study highlights the role of HIF-1α in controlling the growth and the immune landscape of B16-F10 melanoma. It indicates the opportunity of combining HIF-1α inhibitors with immune checkpoint blockade to extend immune checkpoint blockade efficiency and therapeutic benefit to a larger number of cancer patients
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Chabot, Thomas. "Modulation de l'activité du Rad51 par le récepteur tyrosine kinase c-Met dans la réparation des cassures double-brin de l'ADN." Thesis, Nantes, 2020. http://archive.bu.univ-nantes.fr/pollux/show.action?id=360755d5-6a18-407f-9af7-fe215a83747f.
Full textAbstract:
L'instabilité génomique due à la dérégulation des voies de réparation de l'ADN peut être à l’initiation de cancer et entraîner par la suite une résistance à la chimiothérapie et à la radiothérapie. La compréhension de ces mécanismes biologiques est donc essentielle dans la lutte contre le cancer. RAD51 est la protéine centrale de la voie de réparation des cassures double-brin de l'ADN par recombinaison homologue. Cette réparation conduit à une réparation fidèle de l'ADN. L'activité recombinase de la protéine RAD51 est finement régulée par des modifications post- traductionnelles telles que la phosphorylation. Au cours de la dernière décennie, de plus en plus d’études, suggèrent l'existence d'une relation entre les récepteurs à activité tyrosine kinases, souvent suractivés et impliqués dans l’agressivité et la prolifération cancéreuse, et la réparation de l'ADN. Parmi ces récepteurs à activité tyrosine kinases, le duo c-Met/HGF-SF est souvent muté, sur exprimé ou activé constitutivement dans de nombreux cancers et son inhibition a été montrée comme induisant une diminution de la réparation par recombinaison homologue. Au travers de cette thèse, nous montrons pour la première fois que c-Met est capable de phosphoryler la protéine RAD51 sur quatre résidus tyrosine localisés principalement dans l'interface monomère- monomère du nucléofilament de la recombinase humaine. Nous montrons l’implication de ces phosphorylations sur l’activité de RAD51 dans les différentes étapes de la recombinaison homologue. L'ensemble des résultats obtenus suggère le rôle possible de ces modifications dans la régulation de RAD51 et souligne l'importance de c-Met dans la réponse aux lésions de l'ADNGenomic instability due to deregulation of DNA repair pathways may be at the onset of cancer and subsequently lead to resistance to chemotherapy and radiotherapy. Understanding these biological mechanisms is therefore essential in the fight against cancer. RAD51 is the core protein of the homologous recombinant double-stranded DNA repair pathway. This repair leads to faithful DNA repair. The recombinase activity of the RAD51 protein is finely regulated by post-translational modifications such as phosphorylation. Over the last decade, more and more studies have suggested the existence of a relationship between receptors with tyrosine kinase activity, which are often overactivated and involved in aggressiveness and cancer proliferation; and DNA repair. Among these receptors with tyrosine kinase activity, the c-Met/HGF-SF duo is often mutated, over-expressed or constitutively activated in many cancers and its inhibition has been shown to induce a decrease in repair by homologous recombination. Through this thesis, we show for the first time that c-Met is able to phosphorylate the RAD51 protein on four tyrosine residues located mainly in the human recombinase nucleofilament monomer- monomer interface. We show the implication of these phosphorylations on the activity of RAD51 in the different steps of homologous recombination. All the results obtained suggest the possible role of these modifications in the regulation of RAD51 and underline the importance of c-Met in the response to DNA damage
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Ducastel, Sarah. "Le récepteur nucléaire FXR dans les cellules L entéroendocrines : régulateur de la réponse aux acides gras à chaîne courte, métabolites du microbiote intestinal." Thesis, Lille 2, 2019. http://www.theses.fr/2019LIL2S022.
Full textAbstract:
Le contrôle de l’homéostasie du glucose est le résultat d’un dialogue étroit entre les différents organes métaboliques par l’intermédiaire de messages nerveux et hormonaux. Parmi les mécanismes de régulation, l’incrétine GLP-1 (Glucagon-Like Peptide-1), produite et sécrétée par les cellules entéroendocrines de type L dans l’intestin en réponse à la prise alimentaire, potentialise la sécrétion d’insuline par le pancréas. Au début de ma thèse, j’ai participé aux travaux de l’équipe qui ont permis de montrer que l’activation du récepteur nucléaire Farnesoid X Receptor (FXR) diminue la production et la sécrétion de GLP-1 en réponse au glucose. Cependant, comme il existe de nombreux autres stimuli de la sécrétion de GLP-1, nous avons ensuite cherché à savoir si FXR régule également d’autres voies de sécrétion de GLP-1. En particulier, le microbiote intestinal participe au contrôle de l'homéostasie énergétique par la fermentation des fibres alimentaires, produisant dans le colon des acides gras à chaîne courte (SCFAs) qui favorisent la sécrétion de GLP-1 en se liant à leurs récepteurs membranaires FFAR2 et FFAR3. L’objectif suivant de mes travaux de thèse a donc été d’étudier le rôle de FXR dans la réponse des cellules L du colon aux SCFAs.La sécrétion de GLP-1 en réponse aux SCFAs a été évaluée ex vivo dans des explants intestinaux de souris traitées avec le GW4064, agoniste synthétique de FXR, dans des colonoïdes murins issus de souris WT et FXR KO, in vitro dans les cellules L murines GLUTag et humaines NCI-H716 activées avec le GW4064 et in vivo chez des souris WT et FXR KO après supplémentation en prébiotiques(fructanes de type inuline) pour augmenter la production de SCFAs dans le colon. L’expression des récepteurs aux SCFA FFAR2 et FFAR3 a également été examinée dans ces différents modèles et la voie de signalisation intracellulaire de type Gαq de FFAR2 a été évaluée in vitro.La sécrétion de GLP-1 induite par les SCFAs est inhibée dans les explants de côlon de souris traitées par le GW4064 et améliorée dans les colonoïdes FXR KO. L’activation in vitro de FXR inhibela sécrétion de GLP-1 en réponse aux SCFAs et aux ligands synthétiques de FFAR2, principalement en diminuant l’expression de FFAR2 et sa signalisation intracellulaire de type Gαq. Les souris FXR KO présentent une augmentation de l’expression de FFAR2 dans le côlon et des taux plasmatiques de GLP-1 augmentés lors de la supplémentation en prébiotiques.L’ensemble de mes résultats de thèse montrent donc que l’inhibition de FXR augmente la sécrétion de GLP-1 par les cellules L entéroendocrines en réponse au glucose et aux métabolites du microbiote intestinal, les SCFAs. La combinaison de l’utilisation d’antagonistes ou de dé-activateurs de FXR dans l’intestin avec une supplémentation en prébiotiques peut ainsi être une approche thérapeutique prometteuse pour stimuler l’axe incrétine dans le traitement du diabète de type 2 et des maladies du foie gras non alcoolique telles que la NASH (Non Alcoholic SteatoHepatitis)The control of glucose homeostasis is the result of a close dialogue between the different metabolic organs through nervous and hormonal messages. Among the regulatory mechanisms, the incretin GLP-1 (Glucagon-Like Peptide-1), produced and secreted by enteroendocrine L cells in the intestine in response to food intake, enhances insulin secretion by the pancreas. At the beginning of mythesis, we have shown first that activation of the nuclear Farnesoid X Receptor (FXR) decreases theproduction and the secretion of GLP-1 in response to glucose. However, there are many other stimuli ofGLP-1 secretion. In particular, the intestinal microbiota participates in the control of energy homeostasisby fermentation of dietary fibers, producing short chain fatty acids (SCFAs) in the colon which promotethe secretion of the incretin GLP-1 by binding to their transmembrane receptors FFAR2 and FFAR3 inenteroendocrine L cells. We therefore investigated whether FXR could also regulate other GLP-1secretion pathways in L cell and the aim of my thesis work was then to study the role of FXR in colonicL cell response to SCFAs.GLP-1 secretion in response to SCFAs was evaluated ex vivo in intestinal biopsies from micetreated with GW4064, a synthetic agonist of FXR, in murine colonoids from WT and FXR KO mice, invitro in murine L cells GLUTag and human L cells NCI-H716 activated with GW4064 and in vivo inWT and FXR KO mice after supplementation with prebiotics (inulin type fructans) to increase SCFAsproduction in the colon. Expression of the SCFAs receptors FFAR2 and FFAR3 were also examined inthese different models and FFAR2 Gαq-signalling pathway was evaluated in vitro.SCFA-induced GLP-1 secretion is blunted in colon explants from mice treated with GW4064 and improved in FXR KO colonoids. In vitro activation of FXR inhibits GLP-1 secretion in response toSCFAs and synthetic ligands of FFAR2, mainly by decreasing FFAR2 expression and FFAR2 Gαqsignallingpathway. FXR KO mice exhibit an increased FFAR2 expression in colon and increased plasma GLP-1 levels after prebiotic supplementation.Overall my thesis results show that FXR inhibition increases GLP-1 secretion byenteroendocrine L cells in response to glucose and to gut microbiota-metabolites, the SCFAs. Thecombination of FXR antagonists with prebiotic supplementation can thus be a promising therapeuticapproach to stimulate the incretin axis in the treatment of type 2 diabetes and non-alcoholic fatty liverdiseases such as NASH (Non-Alcoholic SteatoHepatitis)
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Manaii, Racha. "Étude du comportement mécanique en fatigue et à l'impact du composite lin/ Elium." Electronic Thesis or Diss., Paris, HESAM, 2021. http://www.theses.fr/2021HESAE027.
Full textAbstract:
Les avantages apportés par les fibres naturelles dans le secteur des matériaux composites sont multiples : la légèreté, de bonnes propriétés mécaniques spécifiques, un coût compétitif et un impact environnemental réduit. Au vu de ces atouts, l’intérêt pour ces fibres a multiplié les études scientifiques les concernant notamment en regard des objectifs d’un développement durable. Cependant, l’utilisation de ces matériaux dans des pièces de structure est assujettie à la connaissance de leur comportement à long terme et face aux différents chargements dynamiques et répétitifs. Dans ce contexte, l’objectif de cette thèse est d’étudier le comportement mécanique d’un composite à fibres de lin et matrice Elium® en fatigue et à l’impact. Dans un premier lieu, cette étude a permis de déterminer les propriétés mécaniques du matériau en traction et à suivre l’endommagement induit par le biais d’observations microscopiques et des analyses en émission acoustique. Par la suite, pour arriver à répondre à la problématique liée à la résistance et l’endurance en fatigue, la campagne expérimentale réalisée a permis une estimation de la limite LCF/HCF et d’étudier l’endommagement en chargement répétitif du matériau. Enfin, la réponse au choc basse vitesse a été étudiée. Différents outils ont permis d’étudier la réponse à l’impact. Les résultats ont également montré un fort potentiel de réparation après impact du composite, à défaut de rupture de fibres, et ceci grâce à la résine thermoplastique l’Elium®The advantages brought by natural fibers in the composite materials sector are multiple: lightness, good specific mechanical properties, competitive cost and reduced environmental impact. In view of these advantages, the interest for these fibers has multiplied the scientific studies concerning them, in particular with regard to the objectives of a sustainable development. However, the use of these materials in structural parts is subject to the knowledge of their long-term behavior and in front of the various dynamic and repetitive loads. In this context, the objective of this thesis is to study the mechanical behavior of a flax fiber composite and Elium® matrix in fatigue and impact. In a first step, this study allowed to determine the mechanical properties of the material in traction and to follow the induced damage by means of microscopic observations and acoustic emission analysis. Then, in order to answer the problem related to the resistance and endurance in fatigue, the experimental campaign carried out allowed an estimation of the LCF/HCF limit and to study the damage in repetitive loading of the material. Finally, the response to low speed impact was studied. Different tools were used to study the impact response. The results also showed a strong potential of repair after impact of the composite, in the absence of fiber rupture, and this thanks to the thermoplastic resin Elium®
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Kane, Mariame Selma. "Etude des altérations mitochondriales dans les neuropathies optiques associées aux mutations du gêne OPA1." Thesis, Angers, 2016. http://www.theses.fr/2016ANGE0075.
Full textAbstract:
L’atrophie optique autosomique dominante (ADOA) est une maladie mitochondriale rare. Les cellules ganglionnaires de la rétine (CGRs) et les axones qui forment le nerf optique dégénèrent entraînant une perte visuelle progressive. Cette neuropathie héréditaire est liée aux mutations du gène OPA1. Différentes atteintes du système nerveux central, périphérique et autonome ont été rapportés chez des patients ADOA syndromiques avec des variations de l'âge d'apparition et de la gravité. La protéine mitochondriale OPA1 est impliquée dans la fusion mitochondriale, la constriction des crêtes et la maintenance du génome mitochondrial. La conjonction d’une dynamique mitochondriale perturbée, d’une instabilité l'ADNmt et d’une altération de la phosphorylation oxydative mitochondriale précipiterait la mort des CGRs et autres cellules neuronales. Les fibroblastes de patients ADOA permettent d’étudier la physiopathologie des différentes mutations du gène OPA1. Une caractérisation biochimique et par microscopie fluorescente nous a permis d’isoler des cellules de patients ADOA syndromiques présentant un défaut de couplage mitochondrial et un réseau mitochondrial hyperfragmenté. Nous avons montré une altération de la compaction de l’ADNmt et de la distribution des nucléoïdes. Une étude des voies autophagiques des cellules mutées OPA1 montre une corrélation entre le défaut de couplage et l’activation de la mitophagie. Ces mécanismes physiopathologiques sont en accord avec l’aspect progressif de l’ADOA. La recherche de pistes thérapeutiques nous a permis de mettre en évidence un effet bénéfique d’un inhibiteur spécifique d’une histone-déacétylase, la tubacine, sur le phénotype des cellules mutées OPA1. L’hyper-acétylation des microtubules permet une réversion du phénotype du réseau mitochondrial, une biogénèse mitochondriale et une amélioration du défaut de couplage mitochondrialAutosomal dominant optic atrophy (ADOA) is a rare mitochondrial disease. Retinal ganglion cells (RGCs) and axons that form the optic nerve degenerate, resulting in progressive visual loss. This hereditary neuropathy is linked to mutations of the OPA1 gene. Various alterations of the central nervous system, peripheral and autonomous have been reported in syndromic ADOA patients with variation in age of onset and severity. The mitochondrial protein OPA1 is involved in mitochondrial fusion, cristae constriction and mitochondrial genome maintenance. The conjunction of disturbed mitochondrial dynamics, mtDNA instability and impaired mitochondrial oxidative phosphorylation precipitate RGCs and other neuronal cells death. The use of ADOA patients’ fibroblasts allows the pathophysiology study of different OPA1 mutations. Biochemical characterization and fluorescent microscopy allowed the isolation of syndromic ADOA patients with mitochondrial network defects and mitochondrial uncoupling. We showed an alteration of mtDNA compaction and nucleoids’ distribution. A study of the autophagic pathways in OPA1-mutated cells showed a correlation between partial uncoupling and an increased mitophagy response. These pathophysiological mechanisms are consistent with the progressive aspect of ADOA. The search for therapeutic approaches highlighted the beneficial effect of tubacine, a specific histone deacetylase’s inhibitor, on OPA1-mutated-cells’ phenotype. Microtubules hyper-acetylation led to a reversal of mitochondrial network phenotype, an increased mitochondrial biogenesis and a tighter mitochondrial coupling
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Bouté, Mélodie. "Etude des mécanismes impliqués dans le remodelage bronchique dans un modèle expérimental d’asthme sévère d’endotype Th2/Th17." Thesis, Lille 2, 2020. http://www.theses.fr/2020LIL2S002.
Full textAbstract:
L’asthme allergique sévère est une pathologie inflammatoire chronique conséquence d’uneréponse inappropriée de l’organisme à un l’allergène. Cette pathologie, qui représente unproblème de santé publique, peut se caractériser par un infiltrat pulmonaire à neutrophiles,associé à un remodelage bronchique accentué, souvent résistant aux thérapeutiqueshabituelles (corticoïdes inhalés), et à une expression de cytokines de type Th17, menant à un profil Th2/Th17. Les cytokines Th17 comme l’IL-17 et l’IL-22 sont trouvées dans les expectorations induites de patients asthmatiques et ont des propriétés pro-inflammatoires dans le cas de l’asthme allergique. L’IL-22 est impliquée dans le recrutement de neutrophiles,dans le remodelage tissulaire et est connue pour être induite suite à l’infection par des pathogènes de l’enfance qui contribuent au développement et aux exacerbations de l’asthme.Ces pathogènes sont reconnus par un récepteur intracellulaire de l’immunité innée, NOD2,présent au niveau des cellules épithéliales et dendritiques. Ce récepteur est capable de reconnaitre un peptidoglycane, le muramyl dipeptide. Un effet synergique pourrait ainsi existerentre des éléments environnementaux que sont les allergènes et différents agents infectieuxaux quels nous sommes confrontés dans la petite enfance qui pourraient avoir un effet adjuvant sur la production d’IL-22. Pour répondre à cela, un modèle murin d’asthme chronique neutrophilique à l’allergène de chien a été développé au laboratoire, reproduisant l’asthme sévère d’endotype Th2/Th17. La première partie du projet a évalué les effets de la costimulation par NOD2 dans ce modèle chronique, en particulier le remodelage des voies aériennes et l’origine cellulaire de la production d’IL-22. Si l’hypothèse testée d’un effet adjuvant de NOD2 sur les paramètres de l’asthme sévère n’a pas été confirmée, la formation d’inductible Tissu Lymphoïde Associé aux Bronches (iBALT) dans ce modèle nous a faitpoursuivre la caractérisation phénotypique et mécanistique de la formation de ces follicules.Dans ce contexte, l’implication d’un facteur de transcription, exprimé par les cellules Th17 etessentiel à la production d’IL-22, l’Aryl hydrocarbon receptor (AhR) a été évalué. Dans notre modèle, un antagoniste de l’AhR inhibe certains paramètres de l’asthme sévère dont la production d’IL-22, mais à l’inverse, va augmenter la formation des iBALTs en diminuant légèrement la production d’IL-10. La seconde partie a pour but de déterminer le rôle de l’IL-22dans ce modèle chronique d’asthme expérimental à l’allergène de chien, par l’utilisation de souris déficientes en IL-22. Nous observons que l’absence d’IL-22 atténue certaines réponses associées à l’asthme dont, le recrutement de neutrophiles, l’hyperréactivité bronchique, les paramètres liés à la formation de iBALTs, mais ne modifie pas la réponse humorale. La dernière partie de ce projet, vise à identifier les cellules cibles impliquées dans les effets dépendant de l’IL-22, grâce à des souris déficientes en IL-22Ra1, une sous-unité du récepteur de l’IL-22 exprimé, notamment, sur les cellules épithéliales ou les cellules musculaires lisses/myofibroblastes. Les premiers résultats montrent un effet des deux types cellulaires surle recrutement cellulaire global, et des cellules musculaires lisses pour la résistance des voies aériennes et la réponse humorale.En conclusion, nos résultats indiquent que l’IL-22 est une cible de choix dans le cadre d’un traitement de l’asthme allergique sévère. L’ensemble de ce projet devrait permettre la mise en évidence de nouveaux mécanismes impliqués dans l’asthme sévère et ouvrir la voie vers de nouvelles stratégies thérapeutiques pulmonaires locales, ciblant l’IL-22Ra1 et potentiellement le remodelage bronchique. Un des indicateurs de sévérité de l’asthme mais pour lequel aucun traitement n’est disponible en dehors de la thermoplastieSevere allergic asthma is a chronic inflammatory disease of the airways in response in anallergen. This disease is a public health problem and can be associated with bronchialremodeling, for which no treatment is yet available, except thermoplasty with neutrophilrecruitment in the lung, and Th17 cytokine production as well as mixed Th2/Th17 responses.Among Th17 cytokines, IL-17 and IL-22 are pro-inflammatory cytokines in asthma and arefound in sputum of asthmatics patients. IL-22 is involved in neutrophil recruitment, tissueremodeling and is induced in response to infectious agents, some of which can promote thedevelopment and exacerbation of asthma. These pathogens are recognized by an innateimmunity receptor, NOD2, present in epithelial and dendritic cells. This receptor is able torecognize a peptidoglycan named muramyl di peptide. So, our hypothesis was that costimulation between an allergen and the NOD2 ligand could promote the development of severe allergic asthma through IL-22. To answer this, a murine model of chronic neutrophilic asthma induced by dog allergen has been developed in the laboratory, which reproduces theTh17 severe asthma endotype. The PhD project has been divided in three parts. The first onehas evaluated the effects of NOD2 co-stimulation in the model of chronic dog-inducedexperimental asthma, in particular on lung remodeling, and the cellular origin of IL-22. Despitethe absence of adjuvant effect of NOD2 co-stimulation on asthma parameters, the discoveryof induced Bronchus-Associated Lymphoid Tissue (iBALT) in this model prompted us to pursuethe phenotypic and mechanistic characterization of the formation of these follicles. Atranscription factor, Aryl hydrocarbon receptor (AhR) expressed in Th17 cells and necessaryfor IL-22 production, has been studied in our model. An AhR antagonist inhibited someparameters of asthma including IL-22 production but also increased the formation of iBALTswith decreased IL-10 production. The aim of the second part was to determine the role of IL-22 in the chronic experimental model by using IL-22 deficient mice. IL-22 deficiency induced adecrease in lung neutrophil recruitment, airway hyperresponsiveness, and parametersassociated with iBALT formation, but not modification in humoral response. The last partconsisted in identifying the target cells involved in the IL-22 dependent effects, by using CreLoxP mice allowing to specifically delete the IL-22 receptor, IL-22Ra1 from epithelial or smoothmuscle cells. The first results show that both cells types are involved in Broncho-AlveolarLavage cell recruitment whereas only smooth muscle cells are involved in airwayhyperresponsiveness and humoral response. In conclusion, our results show that IL-22R is a target for treatment of severe allergic asthma.Altogether this project should identify novel mechanisms involved in this disease and opensthe way towards novel therapeutic strategies in severe asthma, potentially by localadministration targeting IL-22R, and potentially bronchial remodelling, an indicator of severeasthma
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Hueso, Thomas. "Impact et conséquences de l’atteinte de la barrière intestinale au cours du traitement des leucémies aiguës myéloïdes." Thesis, Lille 2, 2019. http://www.theses.fr/2019LIL2S020.
Full textAbstract:
La chimiothérapie d’induction et de consolidation suivie d’allogreffe de cellulessouches hématopoïétiques (allo-CSH) constitue le traitement de référence de la plupartdes leucémies aiguës myéloblastiques (LAM). Ces fortes doses de chimiothérapies sontresponsables d’une atteinte de la barrière intestinale à l’origine de complicationsinfectieuses et immunologiques, telles que la réaction aiguë du greffon contre l’hôte (GvH).Dans un premier temps l’objectif était d’évaluer au cours d’une étudetranslationnelle, l’impact et les conséquences de cette chimiothérapie d’induction sur labarrière intestinale. Pour cela, nous avons évalué sur une série de 15 patients atteints deLAM, les paramètres cliniques, biologiques (citrulline plasmatique et acide gras à chainecourte dans les selles) et microbiologiques (qPCR et séquençages des fèces) avant lachimiothérapie d’induction (T0), pendant la phase d’aplasie (T1) et après la sortie d’aplasie(T2). Tous les patients ont présenté une fièvre et ont nécessité l’administrationd’antibiotiques à large spectre après la chimiothérapie. Une septicémie à E. coli estsurvenue chez 26 % d’entre eux. Leur citrulline s’est effondrée à T1 avant de se normaliserprogressivement à T2. Il existait une diminution de la diversité α et β à T1 qui persistait àT2 avec une diminution de la plupart de populations bactériennes, exceptées pour lesentérobactéries, les entérocoques et les lactobacilles.Cette chimiothérapie d’induction a ensuite été adaptée pour pouvoir êtreadministrée, sans ajout d’aucun antibiotique, à des souris sauvages (WT) et à des souristransgéniques dont le mucus intestinal est renforcé (Tg222) afin d’évaluer : i. lesdommages intestinaux (citrulline plasmatique et analyse des coupes histologiques d’iléonavec marquage de l’apoptose (TUNEL) et de la prolifération cellulaire (PCNA)); ii. lemicrobiote adhérent iléale (qPCR et séquençage des fragments d’iléon) ; iii.. latranslocation intestinale de Salmonella (S) Typhimurium administrée par gavage oral. Chezces souris, la chimiothérapie provoquait une baisse de l’ensemble des lignées sanguines,de la citrulline et une atteinte iléale avec augmentation de l’apoptose, de la prolifération cellulaire et une baisse du nombre de cellules en gobelets. Trois jours après la fin de lachimiothérapie, on constatait une meilleure réparation tissulaire, avec un taux de citrullineet une diversité α plus élevés chez les souris Tg222 comparé aux souris WT. Les Tg222étaient également moins sensibles à la translocation intestinale à S. Typhimurium.Dans un second temps, la citrulline plasmatique et la réactivité des macrophages(issus de monocytes circulants) ont été étudiés après stimulation in vitro par différentsdérivés microbiens, sur une série de patients, avant que ne soit débuté leurconditionnement d’allo-CSH. Dans cette étude, une citrulline basse et l’augmentation de lasécrétion d’IL-6 et d’IL-10 par les macrophages avant la greffe étaient prédictifs de lasurvenue d’une GvH après la greffe.Une étude d’une cohorte sur 191 patients a confirmé qu’une citrulline pré-greffebasse (< 26 μmol/l) constituait un facteur de risque indépendant de survenue d’une GvHdigestive sévère et de mortalité précoce [...]Induction chemotherapy with consolidation followed by allogeneic stem celltransplantation (allo-SCT) remains the standard of care in patients with acute myeloidleukemia (AML). But, high dose chemotherapy is responsible for intestinal impairmentresponsible for complications such as septicemia and Graft vs. Host disease (GvH) afterallo-SCT. The aim of this work was to investigate the specific impact and consequences ofinduction chemotherapy on intestinal barrier in case of AML.First of all, we investigated on 15 patients with AML, clinical, biological (citrullineand short-chain fatty acid) and microbial (qPCR and sequencing on feces) parametersbefore induction chemotherapy (T0), during aplasia (T1) and after hematological recovery(T2). An induction chemotherapy model was designed in a mouse model (Wt mice) withoutantibiotics and in a transgenic model able to release in intestinal lumen a recombinantprotein strengthening mucosal layer (Tg222). Intestinal damage was investigated withplasmatic citrulline level, terminal ileum mucosa analysis on histological slides withapoptosis (TUNEL) and cellular proliferation (PCNA) staining. Adherent microflora wasassessed with qPCR and sequencing on ileum section. Intestinal translocation wasassessed after oral gavage of Salmonella (S). Typhimurium. The fifteen patients hadneutropenic fever and received broad-spectrum antibiotics after chemotherapy completion.Septicemia with E. coli was diagnosed in 26 % of patients. Plasma citrulline level collapsedat T1 and reached normal value at T2. The alpha and beta diversity decreased significantlyand remained low at T2 with a decrease of all bacteria except for enterobacteria,enterococcus and lactobacillus. In mouse model, chemotherapy induced a transientdecrease of all blood counts, and citrulline level. We observed also a terminal ilealimpairment depicted by the increase of apoptosis and PCNA staining and a decrease ofgoblet cells. Three days after the chemotherapy completion, we observed a higher tissuerepair, citrulline level and a preserved alpha diversity in Tg222 mice compared to Wt mice.Intestinal translocation of S. Typhimurium was also lower than in Wt mice.Secondly, plasmatic citrulline level and in vitro macrophage reactivity wereassessed after microbial stimulation with (PAMP) in patients before allo-SCT procedure.Then, the plasma citrulline level as a predictive surrogate marker of GvH was investigatedin a large cohort of patients. Before allo-SCT procedure, a low citrulline level and anincrease of IL-6 and IL-10 released by macrophages were predictive of GvH. A large studywith 191 patients confirmed that a low citrulline level before allo-SCT procedure was anindependent risk factor of intestinal GvH.Intestinal impairment during induction chemotherapy was responsible for a transientepithelial impairment and prolonged dysbiosis leading to bacterial colonization andtranslocation. Before conditioning regimen, a low citrulline level and increased macrophagereactivity reflect sub-clinical damage and are predictive of GvH after allo-SCT procedure. Inmice, mucosal layer strengthening as a proof of concept may enhance tissue repair,maintain microbial diversity and could limit bacterial translocation after high dosechemotherapy