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Dissertations / Theses on the topic 'Dosage immunologique'
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Girault, Isabelle. "Identification et dosage immunologique de lésions de l'ADN." Grenoble 1, 1995. http://www.theses.fr/1995GRE10123.
Full textAbstract:
Divers facteurs (agents oxydants, rayonnements) peuvent engendrer des modifications de bases de l'adn. Le premier volet de ce travail de these a consiste a identifier les produits de degradation des bases pyrimidiques par l'ozone. L'identification de ces composes a permis de mettre en evidence deux nouveaux derives et de conclure a un mecanisme d'action specifique. La suite du travail concerne la preparation d'anticorps diriges contre des modifications de bases de l'adn. Nous avons mis au point une nouvelle methode de preparation des antigenes destines a la production d'anticorps utilises pour la detection immunologique des lesions de l'adn. Ainsi, des anticorps polyclonaux diriges contre la 8-oxo-7,8-dihydroguanine (8-oxogua) ont ete obtenus. L'utilisation de ces anticorps a permis de preparer des colonnes d'immunoaffinite, en vue de prepurifier la 8-oxogua a partir de fluides biologiques. D'autres applications ont ete realisees avec des anticorps monoclonaux. Il s'agit du dosage de 8-oxogua et de dimeres de thymine (thy<>thy) dans de l'adn isole et cellulaire. Cependant, la specificite de l'anticorps dirige contre 8-oxogua s'est averee insuffisante pour doser cette lesion par immunologie. Par contre, l'anticorps dirige contre les thy<>thy a permis de mettre en evidence, par un dosage elisa, la formation de ce defaut dans un adn isole ayant subi l'action de l'uv du vide lors du vol spatial biopan. Par ailleurs, un dosage par cytometrie en flux a permis de detecter les dimeres de thymine directement dans l'adn cellulaire irradie par le rayonnement uv-b. Dans une derniere partie, nous avons recherche des anticorps specifiques de la 8-oxogua dans le serum de diabetiques de type i. Ce travail a permis de mettre en evidence des auto-anticorps diriges, non pas contre la lesion de l'adn recherchee, mais contre l'albumine humaine traitee par naio#4 et nabh#4
2
Antoine, Catherine. "Mise au point d'un dosage enzymo-immunologique des peptido-leucotriènes." Paris 5, 1989. http://www.theses.fr/1989PA05P179.
Full text
3
Absi, Léna. "Contribution au dosage des anticorps antipneumolysine." Lyon 1, 1988. http://www.theses.fr/1988LYO1T005.
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4
Verdoucq, Virginie. "Approche immunologique de la structure de la ciclosporine : application à son dosage." Paris 5, 1991. http://www.theses.fr/1991PA05P142.
Full text
5
Daynes, Aurélien. "Dosage de protéines sériques par la méthode d'agglutination magnétique." Paris 6, 2013. http://www.theses.fr/2013PA066307.
Full textAbstract:
Les tests de diagnostic in vitro sont désormais un acteur majeur dans le domaine de la santé. Il existe un besoin de tests rapides détectant de faibles concentrations en biomarqueur. Le test d’agglutination magnétique a été mis au point pour répondre à ce besoin. Des anticorps greffés sur des particules superparamagnétiques permettent la formation d’agrégats de particules en présence de marqueur en quelques minutes seulement grâce à l’application d’un champ magnétique. La formation d’agrégats est généralement révélée par une méthode turbidimétrique. La première partie de ce travail de thèse à consisté à comprendre les phénomènes observés par cette méthode. Un modèle d’agglutination a été mis au point, permettant de prédire le nombre d’agrégats formés en fonction de la concentration en biomarqueur introduite. Ce modèle a été confronté à des résultats expérimentaux. Les essais menés ont permis de mettre en avant l’influence de la méthode d’application du champ magnétique sur l’agrégation, notamment en présence de quantités importantes d’analyte. Des concentrations de l’ordre du picomolaire sont détectées en moins d’une minute. Afin de détecter des concentrations plus faibles, une méthode de lecture individuelle, basée sur les principes de la cytométrie de flux, a ensuite été utilisée. La diminution du bruit de fond permet d’atteindre des limites de détection de l’ordre de la dizaine à la centaine de femtomolaires environ. Les paramètres influant sur le dosage, notamment la taille des particules et l’intensité du champ magnétique appliqué, ont été étudiés. Ces travaux ouvrent la possibilité de doser un grand nombre de protéines par la méthode d’agglutination magnétiqueIn vitro diagnostic is now a major actor in the domain of healthcare. There is a need for quick assays able to detect low concentrations of biomarker. Magnetic agglutination assay have been developed in that purpose. Antibodies grafted on superparamagnetic particles allow the formation of aggregates in a few minutes, thanks to the application of a magnetic field. Aggregates are generally observed by a turbidimetric method. First part of that work consisted in understanding the phenomena observed by turbidimetry. An agglutination model was developed, allowing predicting the number of aggregates formed, depending on the biomarker concentration. The model was confronted to experimental results. Experiments showed the effect of the way magnetic field was applied on aggregation, especially when important quantities of analyte were used. Concentrations around one picomolar were detected in less than one minute. In order to detect lower concentrations, an individual detection method, relying on the principles of flow cytometry, was then used. Decreasing of the background noise allowed reaching limits of detection of tens to hundreds of femtomolars. Parameters important to the assay, especially the size of the particles and the intensity of the magnetic field, were studied. This work make possible to detect a large variety of proteins, using the magnetic agglutination technique
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Verdun, Antoine. "Détection et dosage d'une substance endogène de type imidazoline : approche immunologique et hypothèses physio-pathologiques." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 1992. http://www.theses.fr/1992STR1M201.
Full text
7
Samaan, Ghassan. "Contribution à l'étude de la myoglobine humaine : purification, dosage, intérêts cliniques." Lyon 1, 1987. http://www.theses.fr/1987LYO1T023.
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8
Mestre, Philippe. "Interet du dosage radio-immunologique de l'erythropoietine chez des patients atteints d'affections hematologiques diverses : a propos de 200 cas." Aix-Marseille 2, 1990. http://www.theses.fr/1990AIX20228.
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9
Fortin, Carol. "Application immunohistologique, immunocytologique et dosage radio-immunologique de la préalbumine embryonnaire à l'aide d'anticorps polyclonaux et monoclonaux." Master's thesis, Université Laval, 1985. http://hdl.handle.net/20.500.11794/33650.
Full textAbstract:
Les tumeurs humaines sont associées à la production d'antigènes oncofoetaux qu'on utilise comme moyen de diagnostic dans le dépistage du cancer. Un de ces antigènes, la préalbumine embryonnaire, découverte par Kalashnikov , Tatarinov et leurs collaborateurs est associée à différents sarcomes et tumeurs des tissus mous. Des anticorps polyclonaux et monoclonaux contre l'EPA ont permis de détecter la présence à de cet antigène à la surface de certaines lignées cellulaires humaines cancéreuses par des méthodes d'immunofluorescence et d'immunoperoxydase indirectes. Les mêmes anticorps prouvent l'absence de cet antigène sur des lignées cellulaires normales. Les anticorps ont permis aussi la caractérisation histologique d'un angiosarcome du foie par rapport au foie normal. Il est maintenant possible de faire un dosage radioimmunologique grâce à une courbe tracée à partir de solutions de référence dans un tampon PBS. Certaines tumeurs humaines sont associées à la production d'antigènes oncofoetaux qu'on utilise comme moyen diagnostique dans le dépistage du cancer. Parmi ces antigènes 1'a 1phafoetoprotéine (AFP) et l'antigène carcinoembryonnaire (CEA) sont principalement associés aux carcinomes. Kalashnikov, T atarinov et leurs collaborateurs ont décrit une nouvelle protéine oncofoetale, la préalbumine emryonnaire (EPA) associée à différents sarcomes et tumeurs des tissus mous. La purification de cette protéine a permis de produire des anticorps polyclonaux et monoclonaux. Les anti-EPA monoclonal et polyclonal ont permis de détecter la présence de cet antigène à la surface de certaines lignées cellulaires humaines cancéreuses par des méthodes d'immunofluorescence et d'immunoperoxydase indirectes. Les mêmes anticorps ne révèlent pas la présence de cet antigène sur des lignées cellulaires normales. Les anticorps monoclonaux et polyclonaux ont permis aussi la caractérisation histologique de l'angiosarcome du foie par rapport à un foie normal. Cette tumeur présente chez les travailleurs du chlorure de vinyle à Shawinigan est mortelle à presque 100%, puisque dépistée à un stade avancé. La dernière partie constitue une étape pré liminaire vers le dosage sérique de l'EPA par essai radioimmunologique dosage. Il est donc maintenant possible de faire un dosage très sensible grâce à une courbe tracée à partir de solutions de référence dans un tampon PBS. Il est certain que ces tests ne constitueront pas à eux seuls des tests cliniques universels pour la détection des maladies néoplasiques de type sarcomateux. Il est quand même très important de penser à une application clinique car avec d'autres tests complémentaires, ils permettront de faire un diagnostic plus certain avec un traitement plus adéquat.Montréal Trigonix inc. 2018
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Arbault, Patrice. "Développement et validation clinique d'un dosage immunologique d'un nouveau marqueur de la résorption osseuse : la pyridinoline urinaire." Lyon 1, 1994. http://www.theses.fr/1994LYO1T181.
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Bonnot-Lours, Sophie. "Dosage radio-immunologique de la thyroxine libre par immunoextraction : contrôle de qualité, comparaison avec des méthodes non isotopiques." Paris 5, 1991. http://www.theses.fr/1991PA05P164.
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Richard, Anne-Sophie. "Contrôle précoce de la spécificité d'un dosage immunologique par la mesure de l'immunoréactivité de fractions obtenues après chromatographie liquide : application au dosage radioimmunologique de la trimégestone." Paris 5, 1997. http://www.theses.fr/1997PA05P057.
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Salmain, Michèle. "Synthese de derives metal-carbonyles de medicaments : application au dosage immunologique d'haptenes par infrarouge a transformee de fourier." Paris 6, 1990. http://www.theses.fr/1990PA066680.
Full textAbstract:
Le greffage d'entites metal-carbonyles sur une molecule possedant une activite biologique conduit a des substances presentant plusieurs bandes d'absorption intenses et specifiques en spectroscopie infrarouge. Cette propriete originale est associee, dans la plupart des cas a la conservation d'une bonne reconnaissance moleculaire pour des proteines cibles. La validation du concept d'immunodosage par infrarouge a transformee de fourier (i. R. I. A. ) a ete effectuee au cours de ce travail sur la base de la synthese d'haptenes metallo-carbonyles derives du methotrexate et de la carbamazepine; sur l'optimisation des conditions de detection par irft et sur l'etude de la reconnaissance de ces haptenes metallocarbonyles derives de la carbamazepine pour des anticorps specifiques. Une courbe d'etalonnage pour la mesure du phenobarbital plasmatique a ete obtenue pour la premiere fois par cette methode
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Garbado, Catherine. "Mise au point et validation du dosage radio-immunologique du SR 47063 agoniste potassique (SANOFI recherche), premières évaluations pharmacocinétiques chez le volontaire sain." Paris 5, 1994. http://www.theses.fr/1994PA05P016.
Full text
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Carles, Perrin Bénédicte Weryha Georges. "Essai de validation du dosage des anticorps anti-récepteur de la TSH par une méthode immunologique Elisa sur une série de 218 cas." [S.l.] : [s.n.], 2002. http://www.scd.uhp-nancy.fr/docnum/SCDMED_T_2002_CARLES_PERRIN_BENEDICTE.pdf.
Full text
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Neuburger, Laure-Marie. "DÉVELOPPEMENT DE DOSAGES IMMUNOLOGIQUES PAR FLUORESCENCE. Perspectives pour l'élaboration d'un capteur en flux des agents de la menace." Phd thesis, AgroParisTech, 2006. http://pastel.archives-ouvertes.fr/pastel-00004770.
Full textAbstract:
Cette thèse s'inscrit dans le cadre de la recherche de procédés de détection rapides et sensibles des agents de la menace biologique. Nous avons étudié une nouvelle méthode de dosage immunologique par transfert d'énergie par résonance de fluorescence (FRET) adaptable à un dosage en flux. Cette méthode est basée sur l'emploi d'un réactif trifonctionnel (tripode) comportant i) un fluorophore Donneur (D), ii) un analogue de la molécule à doser (analyte) et iii) une fonction permettant son immobilisation sur une phase solide. La liaison d'un anticorps anti-analyte marqué avec un fluorophore Accepteur (A) entraîne une diminution de la fluorescence de D (quenching). La présence de l'analyte induit une compétition pour la liaison de l'anticorps avec le tripode et restaure ainsi la fluorescence de D. Le procédé permet d'obtenir un signal localisé et cumulatif et la réalisation de dosages successifs sur une même surface régénérée par ajout d'anticorps. L'évaluation du procédé a été effectuée en plaque de microtitration sur des petites molécules (substance P, atrazine, aflatoxine) et des protéines (β-lactoglobuline, toxine botulinique, ricine). Les propriétés spectrales des fluorophores, le rapport A/D et la distance A-D conditionnent fortement l'efficacité du FRET et donc la sensibilité du dosage qui dépend toutefois surtout des caractéristiques d'affinité relatives de l'anticorps envers l'analyte et envers le tripode. Idéalement l'anticorps devrait présenter une bonne affinité pour le tripode et une encore meilleure pour l'analyte. Des essais de mesure avec circulation de fluide, effectués dans une microcellule en verre en employant comme détecteur une caméra CCD montée sur un microscope à fluorescence, ont montré la faisabilité d'une détection en flux et permettent d'envisager le développement d'un biocapteur fonctionnant selon ce principe. Un autre procédé basé sur la discrimination des fluorophores en solution et immobilisés est également présenté, permettant de développer un dosage rapide et simultané de plusieurs composés.
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Candelon, Nicolas. "Conception et développement d'une nouvelle méthode d'analyse de précuseurs cysteinyles d'arômes du vin et d'indicateurs de maturité." Thesis, Bordeaux 1, 2010. http://www.theses.fr/2010BOR14145/document.
Full textAbstract:
Les analyses physico-chimiques des arômes du vin prennent aujourd’hui un essor considérable pour faciliter la prise de décision des professionnels de la vigne et du vin. Des analyses performantes, pour un certain nombre de molécules parmi les plus pertinentes, ont été développées (GC-MS, LC-MS). Cependant les techniques utilisées ne sont pas facilement transposables au sein des exploitations. L’objectif de cette thèse est donc de proposer un nouveau type de dosage peu onéreux et simple à mettre en œuvre. La technique envisagée est le dosage immunologique (tests ELISA) qui permet, pour quelques Euros, de doser directement sur le terrain les molécules pertinentes sans préparation préalable des échantillons. Les molécules visées (alkylméthoxypyrazines et précurseurs cystéinylés de thiols volatiles) sont présentes dans les vins de Cabernet Sauvignon et de Sauvignon blancAnalytical methods for the detection and quantification of wines aroma typically utilise HPLC-MS or GC-MS. The methods require some isolation and concentration step preceding the analysis. Enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) are becoming either alternative complementary analytical tools to conventional methods because of their rapidity, sensitivity, selectivity, and low cost. In this Thesis, the applicability of ELISAs for detection and quantification of precursors of volatile thiols and alkylmethoxypyrazines, which have been isolated from wines, made from Cabernet Sauvignon or Sauvignon Blanc, are described
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PHILOMIN, VALERIE. "Marquage de catecholamine et de cortisol par des clusters du cobalt et du molybdene. Application au dosage immunologique du cortisol par infra-rouge a transformee de fourier." Paris 6, 1991. http://www.theses.fr/1991PA066281.
Full textAbstract:
Parmi les nombreuses applications de la chimie organometallique nous nous sommes plus particulierement interessee a la possibilite qu'elle offre de marquer specifiquement des molecules d'interet biologique. En effet l'introduction d'unites acetyleniques complexees par des entites co#2(co)#6 et mo#2cp#2(co)#4 conduit a des substances presentant plusieurs bandes d'absorption intenses et specifiques detectees par infra-rouge a transformee de fourier. Dans la premiere partie, nous avons montre qu'il est possible d'obtenir une selectivite de marquage d'une molecule polyfonctionnelle tel que le derive dimethoxyles de la dopamine. Suivant les conditions operatoires et la nature du metal employe dans les clusters, il est possible d'orienter la reaction vers des produits contenant un ou deux marqueurs organometalliques. Dans la seconde partie, nous avons etudie la faisabilite d'un immunodosage du cortisol par la methode cmia (carbonyl metallo immuno assay) utilisant comme traceur un derive du cortisol complexe par co#2(co)#6 et comme methode de detection l'infra-rouge a transformee de fourier. Nous avons pour la premiere fois realise une caracterisation complete par cmia d'antiserums anti-cortisol et un dosage du cortisol d'un serum de malade. Au cours de ces travaux nous avons cherche a comparer les resultats obtenus en cmia avec ceux provenant d'un immunodosage ria classique utilisant un marqueur radioactif. Nous avons demontre qu'il est possible par cmia de doser de facon fiable et reproductible des substances presentes dans le sang dans la gamme des picomoles/ml
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La, Fournière Laurence de. "Préparation et caractérisation des anticorps monoclonaux anticolipase pancréatique de porc : Approche immunologique de l'étude des relations structure-fonction de la colipase : Application au dosage immunoenzymatique de la colipase." Aix-Marseille 1, 1989. http://www.theses.fr/1989AIX11223.
Full textAbstract:
Dix anticorps monoclonaux ont ete prepares a partir d'hybridomes obtenus par fusion de cellules de myelome et de cellules de la rate de souris immunisees avec la procolipase pancreatique de porc. Six d'entre eux inhibent l'activite du systeme procolipase-lipase en empechant la colipase de se fixer a l'interface triglyceride-eau. Leurs epitopes sont situes dans, ou a proximite de la region du co-facteur qui se fixe specifiquement au lipide. Un de ces anticorps (acm 72. 11) reagit avec la procolipase de porc mais n'a pas d'effet sur l'activite de la colipase activee par la trypsine. De plus, il empeche la proteolyse limitee de la procolipase par la trypsine au niveau de la liaison arg#5-gly#6. Les tests d'additivite (cotitrations par paires) effectues a l'aide du test elisa et les experiences d'immunoactivation nous ont permis de proposer la localisation des epitopes des anticorps monoclonaux par rapport aux domaines essentiels pour la fixation de la colipase au substrat lipidique. Enfin, les anticorps polyclonaux et monoclonaux anticolipase de porc ont ete utilises pour mettre au point un dosage immunoenzymatique de type elisa de la colipase (formes precurseur et activee) dans le suc pancreatique humain et de porc et dans la poudre lyophylisee de pancreas de porc. Cette methode est plus sensible que la methode titrimetrique et ne necessite pas l'inactivation de l'activite lipase de l'echantillon
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Doermann, Franck. "Intérêt du dosage sérique de l'antigène galactomannane par méthode ELISA chez les patients présentant un risque d'aspergillose invasive dans un service d'hématologie." Bordeaux 2, 1999. http://www.theses.fr/1999BOR2P039.
Full text
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Vin-Capiaumont, Josette. "Production d'anticorps monoclonaux dirigés contre des peptides de 3, 4 et 6 acides aminés identifiés dans le sérum humain : essai de mise au point d'un dosage immunologique du peptide HWESAS." Nancy 1, 1999. http://www.theses.fr/1999NAN19905.
Full textAbstract:
Le plasma humain contient des facteurs de croissance peptidiques de petit poids moléculaire potentialisant in vitro certaines actions biologiques des insulin-like growth factors. Récemment, trois de ces peptides, ayant comme structure HWESAS, HWE et WGHE, ont été caractérisés et purifiés. L'obtention d'anticorps monoclonaux à l'aide de peptides de courte séquence est difficile. Le présent travail présente la production d'anticorps monoclonaux à l'aide de ces peptides comportant 6, 4 et 3 résidus seulement. Après immunisation de souris par des peptides homologues de synthèse couplés à une hémocyanine maléimidée, les hybridomes sont préparés selon les techniques classiques. Les anticorps monoclonaux obtenus sont caractérisés. Leur spécificité, déterminée par des tests d'inhibition, montre qu'ils reconnaissent les peptides originels et des peptides dérivés à condition que l'extrémité C terminale ne soit pas modifiée. Leurs constantes d'affinité, sont comprises entre 0,89 et 3,89 108 M-1. Du fait d'une impossibilité de marquage de ces peptides par l'125 I, l'anticorps dirigé contre HWESAS sert à mettre au point un dosage immunoenzymatique préliminaire qui permet de déterminer, chez des sujets sains, des concentrations de ce peptide de l'ordre de 2µg/ml. Ce taux est significativement diminué dans l'insuffisance rénale chronique pour redevenir normal après une transplantation rénale réussie. Ces résultats suggèrent que le rein pourrait jouer un rôle important dans la production et/ou le métabolisme de cet hexapeptide. L'obtention de ces anticorps monoclonaux ouvre des perspectives pour une meilleure compréhension de l'origine et des modes d'action de ces facteurs de croissance de petit poids moléculaireHuman plasma contains low molecwar weight growth factors potentiating certain in vitro biological effects of insulin-like growth factors. Recently three peptides were identified with HWESAS, HWE and WGHE as respective structures. Although it is difficult to product monoclonal antibodies directed against peptides characterized by a structure consisting of an amino acid number below 8, this study describes the production of such antibodies for peptides having 6, 4, or 3 residus. The mice immunizations were performed with homologous synthetic peptides coupled to a maleimide activated keyhole limpet hemocyanin and the hybridomas were prepared by standard techniques. By using an inhibition test, the specificity of monoclonal antibodies was deterrninated : they cross-reacted with original peptides as well as derivated peptides only when C terminus was not modified. Concerning the affinity, measured by non competitive enzyme immunoassay, the values range from 0,89 to 3,89 108 M-1. In addition, an ELISA was developped with antibodies directed against HWESAS to measure the serie concentration of this peptide in humans. The levels of peptide observed in healthy subjects were about 2µg/ml, they were dramatically decreased in chronic renal failure but norrnalized after a successful renal transplantation. These findings suggest that the kidney may play an important role in the production and/or metabolism of this hexapeptide. Such monoclonal antibodies will be useful tools for elucidation of low molecular weight growth factor production leading to a better understanding of their physiological and pathological significances
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Prin-Mathieu, Christine. "Immunoanalyse des produits de sécrétion : application au dosage du caséinomacropeptide dans le lait bovin et a l'étude des cellules immunocompétentes au cours de la mammite bovine." Nancy 1, 1998. http://www.theses.fr/1998NAN10267.
Full textAbstract:
La qualité du lait est encore de nos jours un souci pour les producteurs et les industriels laitiers. Dans ce travail, le degré de protéolyse de la caséine a été évalué par dosage du caséinomacropeptide (CMP). La réponse des cellules immunocompétentes du sang et du lait a été étudiée lors d'une mammite expérimentale à Staphylococcus aureus. Un dosage du CMP par immunonéphélémétrie microparticulaire a été mis au point et appliqué à différents types de laits. Une étude du point isoélectrique du CMP dans des laits de vache de races différentes a été réalisée. L'activation des leucocytes du sang et du lait lors d'une mammite expérimentale a été évaluée par mesure de l'expression de molécules de surface Bola I, Bola II, CD14 et CD62L et d'activités enzymatiques intracellulaires (élastase, collagénase, cathepsine D). Un dosage des caséines et du CMP a été réalisé par immunonéphélémétrie dans des laits de quartiers infectés et de référence. Le dosage du CMP par immunonéphélémétrie est applicable au lait bovin. Un seuil de concentration au-delà duquel on peut suspecter une protéolyse de la caséine a été défini. La concentration en CMP est très élevée dans le colostrum. Une augmentation de la concentration en CMP a été mise en évidence dans des laits de différentes qualités bactériologiques. La protéolyse de la caséine a été suivie dans des laits conservés à 4°C. Ce dosage permet de détecter l'augmentation de la concentration de CMP dans des laits surchargés en lactosérum. Le dosage de CMP dans les fromages blancs a montré une augmentation progressive de la concentration lors de leur conservation. Dans le modèle de mammite un pic d'activation des leucocytes du sang périphérique est détecté au 17ème jour de l'infection. Le nombre de cellules somatiques du lait augmente dès le 2ème jour, l'expression des antigènes de surface des leucocytes et les activités enzymatiques sont relativement stables au cours du temps. La comparaison des leucocytes du lait et du sang indique une augmentation de l'activation des macrophages et des polynucléaires neutrophiles (PN) dans le lait. Il y a une diminution de l'activité collagénase des leucocytes du lait par rapport à ceux du sang mais une augmentation des activités élastase et cathepsine D des polynucléaires neutrophiles. La qualité du lait est modifiée comme en témoigne les variations de concentration des caséines et du CMP.
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Catrin, Benoit. "Etude de l'interêt du dosage des D. Dimeres dans le diagnostic précoce des T. V. P. En unité de long séjour : étude prospective." Bordeaux 2, 1993. http://www.theses.fr/1993BOR2M208.
Full text
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Maselli, Magali. "Faisabilité d'une electrooptode pour les immunodosages par chimiluminescence." Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 1992. http://www.theses.fr/1992INPL114N.
Full textAbstract:
Notre étude porte sur la faisabilité d'un immunodosage par une électrooptode. L'objectif est d'associer une optode active et une électrode, afin de créer localement le système d'oxydation nécessaire à une réaction de chimiluminescence permettant de révéler et de mesurer la réaction immunochimique intervenant dans le dosage de médicaments. Trois sujets d'études sont donc développés: 1) élaboration d'une optode active (greffage covalent, sur une fibre en polymethylmethacrylate, d'immunoglobulines anti-théophylline); 2) obtention d'un antigène chimiluminescent (synthèses de dérives de la théophylline marques par le (n-4-aminobutyl)-n-ethylisoluminol); 3) mise au point de système d'oxydation par voie électrochimique (création locale de persulfates et de peroxyde d'hydrogène par oxydation anodique de sulfates)
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Hamidi, Sofiane. "Etudes de la monocytopoïèse issue de cellules hESC ou iPSC." Paris 7, 2013. http://www.theses.fr/2013PA077266.
Full textAbstract:
Mon travail a consisté à caractériser la monocytopoïèse dérivée d'hESC et à confirmer in-vitro que les macrophages obtenus partageaient les mêmes fonctions homéostatiques que ceux dérivés de foetus. J'ai ensuite dérivé des lignées d'iPSC à partir de cellules CD34+ d'un sujet sain et muté JAK2V617F. Ma première étude a consisté à comparer les macrophages issus de la différenciation d'hESC à ceux issus d'iPSC contrôle. Cette partie de mon travail a permis de montrer que les macrophages issues d'IPSC sont très proches de ceux dérivées de hESC mais présentent des différences significatives dans la sécrétion de certaines molécules de la réponse inflammatoire à l'IFN-y et au LPS. Enfm nous avons souhaité étudier grâce à la technologie des iPSC l'implication de la voie JAK/STAT dans le phénotype fonctionnel des macrophages embryonnaires et dans leur défaut de réponse à l'IFN-7 et au LPS. Les résultats préliminaires ne montrent ni de différences dans la polarisation des monocytes/ macrophages JAK2V617F, ni d'altération dans l'activation de STAT1 via l'IFN-7. Les différences ontogéniques sont donc liées soit à des modifications épigénétiques dans les gènes impliqués dans l'inflammation ou dans les partenaires de STAT1. Un travail encore plus préliminaire a été d'explorer les éventuelles indépendances au bFGF des iPS( pluripotentes. En effet un travail de Griffiths et al a montré que les mESC JAK2V617F pouvaient mainteni leur phénotype pluripotent en l'absence de LIF via son action nucléaire indirecte sur le promoteur de Nanog Les résultats préliminaires montrent que les lignées d'IPSC JAK2V617F humaines pouvaient maintenir li phénotype pluripotent et cela en l'absence de bFGFMy work was focused on the monocyte and macrophage lineages. We have shown that Monocyte/macrophage derived from ES cells are cells extremely specialized in tissue remodeling, pro-angiogenesis and immune suppression but with low inflammatory potential. I have investigated the characteristics of monocytes/macrophages from iPS. Those monocyte/macrophage were quite similar to hESC derived, but exhibited more inflammatory potential suggesting some incomplete reprogrammation during derivation of IPS. We hypothesize that the decrease or absence of inflammatory potential of the monocyte/macrophages could be related to a decrease activation of the JAK2/STAT pathway induced by IFN-y and GM-CSF, two cytokines implicated in MI polarization. In this purpose we derive iPS from patient harboring the JAK2V617F mutation, a gain of fonction mutation associated with myéloproliférative neoplasm. In preliminary results, no significant differences were observed in the polarization of JAK2V617F or JAK2WT monocyte/Macrophages derived from IPS. Furthermore we found that IFN-y was capable to normally induce STAT1 activation in these cells suggesting that the blockage in inflammatory response is downstream STAT1 and may be related to epigenetic regulation of inflammatory gens. Finally I have obtained preliminary results showing that JAK2V617F may induce independence to bFGF of the pluripotent iPSC, a result very similar to those reported by Griffiths and al on JAK2V617F mESC who could maintain their pluripotent phenotype without addition of LIF. This was not related to the induction of the canonical STAT pathway but to an effect of nuclear JAK2 on the epigenetic regulation of Nanog
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Grassi, Jacques. "Etude immunologique des cholinesterases. Utilisation de l'acetylcholinesterase de gymnote en tant que marqueur dans des dosages immunologiques." Paris 6, 1990. http://www.theses.fr/1990PA066150.
Full textAbstract:
La these est composee de deux parties precedees d'une introduction generale decrivant les proprietes des cholinesterases. Dans la premiere partie, sont decrites les differentes etudes entreprises sur la caracterisation de la structure et de la fonction des cholinesterases. Ces travaux sont presentes sous la forme de 7 publications precedees d'un resume en francais. Dans le premier article, nous avons essaye de mettre en evidence une parente immunologique entre les formes asymetriques de l'ache et differents types de collagene. Dans le deuxieme article, nous abordons l'etude immunologique de l'ache de cerveau de rat. Les articles 3 et 4 sont consacres a des etudes de biologie moleculaire qui ont permis de caracteriser les precurseurs de l'ache des poissons electriques (gymnote et torpille) et de cloner un cdna d'une sous-unite catalytique de l'ache de torpille. Les articles 6 et 7 decrivent les proprietes de 2 series d'anticorps monoclonaux diriges contre l'ache des poissons electriques. La deuxieme partie de la these presente de facon beaucoup plus systematique, l'ensemble des travaux realises dans notre laboratoire sur l'utilisation de l'ache de gymnote en tant que marqueur dans des dosages immunologiques. Toutes les etapes aboutissant a la mise au point des dosages sont presentees de facon detaillee. A la fin de cette deuxieme partie, sont presentes 8 articles illustrant l'application de la methode au dosage de differentes substances d'interet biologique. Le travail effectue demontre clairement que l'ache de gymnote est un marqueur parfaitement adapte a la mise au point de dosages immunologiques
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Matt, Muriel. "Concept et développement d'un immunodosage par polarisation de fluorescence de biomolécules à fonction carboxyle : application à la prostaglandine E1 et au thromboxane B2." Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 1993. http://docnum.univ-lorraine.fr/public/INPL_T_1993_MATT_M.pdf.
Full textAbstract:
Une des méthodes immunologiques pouvant être appliquée au dosage de biomolécules de faible masse moléculaire est la polarisation de fluorescence. Cette méthodologie a été appliquée aux biomolécules à fonction carboxyle telles que les éicosanoïdes, et en particulier au thromboxane B2, métabolite de la membrane plaquettaire impliqué dans l'hémostase et la thrombose. Les conditions opératoires d'amidification ont été optimisées après la synthèse et la purification du marqueur fluorescent, une fluorescéine fonctionnalisée par une fonction amine. La dérivation de la prostaglandine E1 (PGE1), et du thromboxane B2 (TxB2) a permis d'obtenir des traceurs fluorescents qui ont été purifiés par chromatographie sur couche mince. Leurs caractéristiques spectrales ont été déterminées. La conservation de l'immunréactivité a été vérifiée dans différents systèmes utilisant des marqueurs isotopiques ou enzymatiques. La praticabilité de l'immunodosage a été montrée pour la PGE1. La méthodologie a pu être transposée au TxB2. Le TxB2 libéré par les plaquettes après activation par un agent pro-agrégant a été dosé. Les résultats obtenus sont en accord avec les données bibliographiques
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Cheret, Philippe. "Contribution au développement du test métalloimmunologique : application aux antidépresseurs tricycliques." Dijon, 1987. http://www.theses.fr/1987DIJOS028.
Full text
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Ahaded, Abdellah. "Dosage immuno-enzymatique des alloanticorps anti-érythrocytaires au cours de l'immunisation fœto-maternelle application aux anticorps anti-D (RH1rh1) et anti-K (KEL1) chez la femme enceinte." Paris 5, 1999. http://www.theses.fr/1999PA05S020.
Full textAbstract:
La maladie hémolytique du nouveau-né (MHNN) est provoquée par des igg anti-érythrocytaires d'origine maternelle. Ces igg sont le plus souvent diriges contre l'antigene d (rh1). Les MHNN causées par les igg anti-k (kel1) sont moins fréquentes mais souvent très sévères. Le taux des igg maternels est un paramètre important pour apprécier la gravite d'une MHNN. Une méthode Elisa originale a été mise au point (article 1). Elle permet le dosage en valeur absolue des igg et des sous-classes d'igg anti-d. Cette méthode a été appliquée à l'étude des sérums de femmes enceintes et des préparations d'anti-d (articles 1 et 2). La concentration moyenne des igg anti-d dans le sérum de 14 femmes enceintes est de 2,0 g/ml dont 61,8% sont des igg1 et 26,9% des igg3. Le pourcentage d'igg1 peut varier de 92,9% a 8,6%, et inversement celui des igg3 de 86,4% à 2,5%. La concentration moyenne des igg anti-d dans le sérum de 15 sujets volontairement immunises est de 19,8 g/ml dont 79,3% sont des igg1 et 18,1% des igg3. Le pourcentage des igg1 et des igg3 anti-d varie dans les mêmes proportions que dans les sérums de femmes enceintes. Dix préparations d'igg anti-d utilisées pour la prévention de la MHNN ont été analysées. La concentration moyenne de ces préparations est de 50,5 g/ml d'anti-d dont 12,7% sont des igg3. Enfin, nous avons calibré le contenu en igg anti-d de la préparation de référence internationale 68/419. Pour le dosage des igg anti-k nous avons mis au point une méthode différente (article 3). Elle a été appliquée à l'étude de 8 cas sévères de MHNN. La concentration des igg maternels est comprise entre 1 et 4 g/ml dont 98% sont des igg1. Nous avons pu montrer que de faibles concentrations d'ac anti-k peuvent être responsables de MHNN sévères. En conclusion, l'ensemble des travaux présentes dans cette thèse contribue à une meilleure évaluation quantitative des ac anti-d et anti-k responsables de LA MHNN.
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Etienne, Emmanuelle. "Dosages immunométriques d'haptènes à l'aide du procédé SPIE-IA : application aux dosages de la thyroxine, de la thyrolibérine et du peptide NAcSDKP." Paris 5, 1998. http://www.theses.fr/1998PA05CD01.
Full textAbstract:
Depuis plusieurs années, le Laboratoire D'études Radio-Immunologiques (LERI, Service de Pharmacologie et d' Immunologie, CEA Saclay) développe une recherche originale dans le domaine de l' immunologie analytique dont le but est d' améliorer les performances de dosages immunologiques appliquées aux haptènes. Dans le cadre de ces travaux, un nouveau procédé appelé SPIE-IA (pour Solid-Phase-Immobilized-Epitope ImmunoAssay) a été mis au point. Le SPIE-IA se déroule en quatre étapes qui sont les suivantes : - étape 1 : Capture immunologique de l'haptène par un anticorps spécifique. - Etape 2 : Immobilisation covalente de l'haptène par un réactif chimique bifonctionnel. - Etape 3 : Libération de l'épitope, l'haptène est toujours lié de façon covalente à la phase solide mais l'épitope est extrait du paratope. - Etape 4 : Réaction avec l'anticorps traceur, spécifique de l'haptène et marqué par l'acétylcholinestérase. L'objectif de ce travail a été d' entendre le domaine d' application du SPIE-IA à d'autres haptènes et notamment à ceux pour lesquels un couplage chimique impliquant des fonctions amines primaires n'était pas possible. Au cours de ce travail, nous avons décrit la mise au point de trois dosages d'haptènes (Thyroxine, Thyrolibérine et peptide NAcSDKP) basés sur l'utilisation du procédé SPIE-IA. Pour le dosage SPIE-IA appliqué au dosage de la Thyroxine, nous avons montré, pour la première fois que la réaction conduisant à l'immobilisation covalente de l'haptène pouvait être réalisée par voie photochimique. Dans ce cas, le procédé prend le nom de Photo-SPIE-IA. Pour le dosage SPIE-IA appliqué au dosage de la Thyrolibérine, nous avons montré que le procédé pouvait être appliqué à un haptène dépourvu de fonction amine primaire. Une étape de prédérivation est nécessaire pour introduire une fonction amine primaire mais aussi pour augmenter l'affinité de la Thyrolibérine, l'agent de dérivatisation sélectionné était l'APEA (2-(4-amino-phenyl)éthylamine). Pour le dosage SPIE-IA du peptide NAcSDKP, essais réalisés ont montré que le procédé ne fonctionnait pas, bien que l'haptène possède une fonction amine primaire. C'est la raison pour laquelle, nous avons appliqué la stratégie de dérivatisation, mais cette fois ci dans le but d'introduire un groupement photoactivable, afin de doser le NAcSDKP par le procédé Photo-SPIE-IA. Dans le cas du peptide NAcSDKP, l'agent de dérivatisation sélectionné était le N-succinimidyl-6-[4'-azido-2'-nitrophenylamino]hexanoate. En conclusion, l'ensemble des résultats obtenus ont permis de montrer que : -l'immobilisation covalente peut être réalisée par irradiation directe aux UV, - le procédé peut être appliqué aux haptènes ne possédant pas de fonction amine primaire. Dans ce cas, une étape de prédérivatisation est nécessaire avant le dosage SPIE-IA proprement dit.
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Limoges, Benoît. "Contribution au developpement et a la mise au point d'une nouvelle technique de dosage immunologique de medicaments a l'aide d'une electrode modifiee par un film polymere de nafion et de medicaments marques par un groupement redox cationique ou procationique." Clermont-Ferrand 2, 1993. http://www.theses.fr/1993CLF21534.
Full textAbstract:
L'objet du memoire est le developpement et la mise au point d'une nouvelle technique d'immunodosage simple, sensible et peu couteuse. L'originalite du concept repose sur la detection par voltammetrie a vague carree, de medicaments marques par un systeme redox cationique ou procationique, a l'aide d'une electrode modifiee par un film de nafion jouant le role de capteur electrochimique amplificateur. Le nafion est un polymere polyanionique. Lorsqu'il est depose a la surface d'une electrode, il est capable de preconcentrer par echange d'ions les molecules marquees, et de favoriser ainsi leur detection a des concentrations tres faibles. L'accumulation peut etre effectuee en circuit ouvert si la molecule est cationique, ou en appliquant un potentiel de facon a transformer une molecule procationique en molecule cationique. La methode a ete mise au point pour un immunodosage competitif homogene. Le marquage de plusieurs medicaments amines a ete effectue a partir de trois marqueurs electroactifs modeles: le ferrocene et le nitroxyde, tous deux procationiques, et le cobalticinium, cationique. Nous avons verifie que ces medicaments marques s'accumulent effectivement dans le film de nafion et que les signaux ainsi obtenus sont largement amplifies par rapport a ceux obtenus en l'absence de film. Avant d'appliquer cette technique d'immunodosage a la determination quantitative de medicaments, nous avons du optimiser, avec l'aide d'un medicament marque modele, de nombreux parametres intervenant sur les performances analytiques du capteur. Le plus important d'entre eux fut le procede d'obtention du depot, et c'est grace a la mise au point d'un procede de cuisson bien controle que nous avons pu obtenir des films conduisant a des mesures reproductibles et sensibles. D'autres parametres ont ete etudies tels que l'epaisseur du film, le temps d'accumulation, la rotation de l'electrode, la force ionique, la nature du tampon, les caracteristiques du marqueur lui-meme et plus precisement d u medicament marque, ou encore le potentiel impose, qui influent sur la sensibilite du signal. En parallele, nous avons cherche a montrer si l'analyte, ou bien ses metabolites, ou encore d'autres substances eventuellement presentes dans l'echantillon a analyser, peuvent interferer sur le signal de detection de la molecule marquee. Nous avons ainsi observe que certaines amines hydrophobes, en raison de leur protonation aux ph physiologiques, peuvent inhiber le signal car elles entrent en competition avec la molecule marquee. En derivant la fonction amine par une fonction carboxylate, donc chargee negativement, nous avons supprime l'interference. Enfin, nous avons etudie l'influence eventuelle de la matrice biologique de l'echantillon a doser (serum, urine,. . . ). Il s'est avere que le serum interfere de facon importante sur la detection de molecules marquees au ferrocene ou au nitroxyde, et au contraire, tres faiblement sur les molecules marquees au cobalticinium. Nous avons interprete ce phenomene par l'existence d'une interaction importante entre les proteines du serum et les molecules marquees de types neutre et hydrophobe. L'analyse de l'ensemble des differents resultats, nous a permis de cerner au mieux les limites du systeme. Dans les meilleures conditions d'accumulation, nous avons atteint une limite de detection de 10##9 mol. L##1. Dans une etape suivante, nous avons procede a l'evaluation du principe de la methode en caracterisant l'immunoreactivite des anticorps (specificite, affinite, titre,. . . ) vis-a-vis du medicament marque associe. Puis, de la, nous avons effectue l'immunodosage competitif homogene de differents medicaments a ph physiologique, ce qui nous a permis de tracer leur courbe d'etalonnage, et ainsi de valider le principe de la methode. L'immunodosage de la phenytoine, un anti-epileptique, a ete conduit jusqu'au stade clinique pour le dosage d'echantillons seriques de patients, et les resultats obtenus ont ete compares aux mesures realisees par chromatographie liquide
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Montillet, Jean-Luc. "Dosage radioimmunologique du zinniol : application a l'etude de cette toxine dans l'alternariose de la carotte." Toulouse 3, 1986. http://www.theses.fr/1986TOU30208.
Full textAbstract:
Un dosage radioimmunologique specifique du zinniol a ete au point; les etapes de ce travail ont ete les suivantes: - synthese d'une molecule immunogene (conjugue zinniol-proteine porteuse). - obtention d'anticorps specifique (4 ci/mmole). - mise au point du dosage radioimmunologique valide du point de vue de sa specificite, de sa reproductibilite et de sa sensibilite (limite de detection 0,14 nn/essai). Cet outil a permis de realiser des dosages sur des plantes infectees. Ces resultats inedits montrent que la molecule est emise tres rapidement dans les tissus infectes (12 h apres inoculation).
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Najeme, Farid. "Etude d'antigènes de cellules gliales du système nerveux central : protéine basique de la myéline dans la sclérose en plaques et l'encéphalomyélite allergique expérimentale. Expression de l'antigène 6.17 dans les astrocytes au cours du développement." Bordeaux 2, 1995. http://www.theses.fr/1995BOR28331.
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El, Bari Nezha. "Étude de l'antigénicité de la caséine B et de ses produits de dégradation : Mise au point du dosage de la caséine B dans le lait par immunonéphélémétrie à supports microparticulaires." Nancy 1, 1989. http://www.theses.fr/1989NAN10055.
Full textAbstract:
Ce travail s'appuie sur la connaissance de l'antigénicité de la caséine béta pour réaliser deux objectifs, d'une part l'évaluation de la faisabilité d'un dosage différentiel de produits de dégradation, caséine Gamma 2 ou PP5, par rapport à la protéine native, et d'autre part la mise au point du dosage de celle-ci dans le lait par une technique d'immunodosage originale : l'immunonéphélémétrie à supports microparticulaires. L'étude de l'antigénicité de ces protéines bénéficie de l'application au lait de la technique de "Western blotting", dont on confirme le pouvoir analytique puissant, le fin pouvoir discriminant, la spécificité élevée et la grande adaptabilité
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Schlemmer, Dimitri. "Développement de méthodes analytiques pour mesurer les analogues nucléosidiques anti-VIH, leurs métabolites actifs et leur intégration dans l'ADN." Paris 6, 2003. http://www.theses.fr/2003PA066302.
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Carrie, Marie-Luce. "Dosages immunologiques de la progestérone par bioluminescence : comparaison de l'utilisation des anticorps monoclonaux et polyclonaux." Montpellier 2, 1987. http://www.theses.fr/1987MON20050.
Full textAbstract:
Les reactions de bioluminescence peuvent conduire a des dosages sensibles comparables aux dosages radioimmunologiques mais avec un protocole plus simple et plus rapide. L'utilisation d'un support sur lequel sont immobilises les enzymes de luminescence et un anticorps a permis la mise au point d'un dosage de la progesterone directement dans le serum et sans aucune etape de separation. Criteres de selection des anticorps monoclonaux et modele de la reaction de competition
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Le, Saint Cécile. "Mise au point de dosages immunologiques du Saquinavir et du ddATP et leurs applications cliniques." Nice, 2001. http://www.theses.fr/2001NICE5700.
Full textAbstract:
Les polythérapies anti-VIH (HAART) ont considérablement amélioré la survie des patients, mais ont vu émerger des phénomènes d’échappement thérapeutiques, probablement dus à des concentrations intracellulaires de la molécule antivirale insuffisantes. Un des moyens d’appréhender l’échappement thérapeutique pourrait être la détermination de la concentration des molécules antivirales dans les cellules cibles. Ainsi, nous avons développé des techniques de dosages immunologiques sensibles et spécifiques pour le Saquinavir et pour le métabolite actif de la ddI, le ddATP. Pour le Saquinavir (SQV), nous avons produit des anticorps dirigés directement contre la molécule administrée. Ces anticorps ont été caractérisés par deux tests immunologiques (ELISA et RIA) possédant une sensibilité suffisante pour permettre la quantification plasmatique et cellulaire du SQV dans les échantillons biologiques. Pour le ddATP, nous avons développé deux approches. La première, dite « indirecte » a consisté à produire des anticorps dirigés contre le motif commun à tous les métabolites phosphorylés de la ddI, c’est-à-dire la ddA. Une approche « directe » a consisté à produire des anticorps dirigés contre la ddATP en utilisant soit le ddATP soit une molécule isostère du ddATP. La sélection de la molécule isostère a été basée sur des analogies structurale et électronique entre les deux molécules. Les anticorps anti-ddA, anti-ddATP et anti-isostère du ddATP ont été caractérisés en RIA. L’étude de la spécificité des anticorps anti-isostère du ddATP montre que le chaînon citrate est un bon substituant du chaînon pyrophosphate pour la production d’anticorps dirigés contre une molécule triphosphorylée. Les anticorps anti-isostère du ddATP ont été utilisés pour le dosage « direct » du ddATP et le dosage « indirect » des métabolites phosphorylés de la ddA après séparation su cartouche anionique puis déphosphorylation. Les dosages immunologiques du SQV et du ddATP ont été validés sur un modèle cellulaire in vitro utilisant des cellules monocytaires circulantes. Ils nous ont également permis de déterminer les taux plasmatiques de SQV et de ddI chez des patients ainsi que la quantification cellulaire du ddAMP, du ddADP et du dd ATP chez cinq patients en polythérapieHighly active antiretroviral therapy (HAART) dramatically improves rates of mortality and morbility due to HIV infections. Unfortunately, clinical failures are observed partly due to inefficient cellular concentration of drug enable to suppress the viral load. The determination of intracellular contents of drugs in targets cells should be contributed to optimize the antiviral treatment by a therapeutic drug monitoring (TDM). In this order we developed highly specific and sensitive immunological techniques directed against the Saquinavir (SQV) and against the active metabolite of ddI, the ddATP. The anti-SQV antibodies were characterized using two sensitive immunological methods (ELISA and RIA) allowing the quantification of plasma and cellular contents of HIV patients. For the quantification of ddATP, we developed two immunological approaches. The first one named “indirect” method, use the ddA as hapten. Then, the determination of the ddI phosphorylated metabolites contents are performed after purification and dephosphorylation of biological samples. The second one, named “direct” approach, use the ddATP molecule and an isostère of ddATP as haptens? The isostère molecule was selected on structural and electronic analogies basis between the ddATP and the isostère molecules. The anti-ddATP, the anti-isostere and anti-ddA antibodies were characterized using the same radioactive probe. The specificity study of anti-isostere antibodies allows us to conclude that the substitution of pyrophosphate by citrate moiety is a useful alternative to produce antibodies against phosphorylated molecules. The ddATP radioimmunoassay was used to determine in an in vitro model (peripheral blood mononuclear cells) the intracellular contents of all the phosphorylated forms of ddA (ddAMP, ddADP and ddATP). The ddI plasma content and the dd AMP, ddATP and ddATP intracellular contents were measured in five patients infected by HIV and treated by polythérapie
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Carrie, Marie-Luce. "Dosages immunologiques de la progestérone par bioluminescence comparaison de l'utilisation des anticorps monoclonaux et polyclonaux /." Grenoble 2 : ANRT, 1987. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb376036431.
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Cao, Hong Ha. "The fabrication process of microfluidic devices integrating microcoils for trapping magnetic nano particles for biological applications." Thesis, Paris 11, 2015. http://www.theses.fr/2015PA112150/document.
Full textAbstract:
Le but de cette étude est de concevoir, fabriquer et caractériser une puce microfluidique afin de mettre en oeuve la capture de nanoparticules magnétiques fonctionnalisées en vue de la reconnaissance d’anticorps spécifiques (couplage d’une très grande spécificité et sensibilité). Après avoir modélisé et simulé les performances de la microbobine intégrée dans le canal de la puce microfluidique en prenant soin de limiter la température du fluide à 37°C, la capture devant être effective, le microsystème est fabriqué en salle blanche en utilisant des procédés de fabrication collective. La fabrication du microdispositif en PDMS a aussi donné lieu à l’optimisation de procédés de modification de surface afin d’assurer la ré-utilisation du microdispositif (packaging réversible) et la limitation de l’adsorption non spécifique. L’immobilisation des anticorps su les billes (300 nm) a été menée à l’intérieur du canal en utilisant un protocole de type ELISA éprouvé. Le procédé a montré qu’il était également efficient pour cet environnement puisque nous avons pu mettre ne évidence la capture de nanoparticulesIn this study, a concept of microfluidic chip with embedded planar coils is designed and fabricated for the aim of trapping effectively functionalized magnetic nanobeads and immobilizing antibody (IgG type). The planar coils as a heart of microfluidic chip is designed with criterion parameters which are optimized from simulation parameters of the maximum magnetic field, low power consumption and high power efficiency by FE method. The characterization of microcoils such as effectively nanobeads (300 nm) at low temperature (<37oC) is performed and confirmed. The channel network in PDMS material is designed for matching with entire process (including mixing and trapping beads) in microfluidic chip. A process of PDMS’s surface modification is also carried out in the assemble step of chip in order to limit the non-specific adsorption of many bio substances on PDMS surface. The microfluidic chip assemble is performed by using some developed techniques of reversible packaging PDMS microfluidic chip (such as stamping technique, using non-adhesive layer, oxygen plasma combining with solvent treatment). These packaging methods are important to reused microchip (specially the bottom substrate) in many times. The immobilization of antibody IgG-type is performed inside microfluidic chip following the standard protocol of bead-based ELISA in micro test tube. The result showed that IgG antibodies are well grafted on the surface of carboxyl-beads (comparing to result of standard protocol); these grafted antibodies are confirmed by coupling them with labeled second antibody (Fab-FITC conjugation)
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Kaeuffer, Dominique. "L'amplification enzymatique liée aux dosages immunologiques : expérimentation sur un cycle d'amplification à deux enzymes, avec détection électrochimique." Bordeaux 2, 1993. http://www.theses.fr/1993BOR2P006.
Full text
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Neuburger, Laure-Marie. "Développement de dosages immunologiques par fluorescence : Perspectives pour l’élaboration d’un capteur en flux des agents de la menace." Paris, Institut national d'agronomie de Paris Grignon, 2006. http://pastel.paristech.org/4770/01/These-Neuburger_LM.pdf.
Full textAbstract:
Agents de la menace biologique. Nous avons étudié une nouvelle méthode de dosage immunologique par transfert d’énergie par résonance de fluorescence (FRET) adaptable à un dosage en flux. Cette méthode est basée sur l’emploi d’un réactif trifonctionnel (tripode) comportant i) un fluorophore Donneur (D), ii) un analogue de la molécule à doser (analyte) et iii) une fonction permettant son immobilisation sur une phase solide. La liaison d’un anticorps anti-analyte marqué avec un fluorophore Accepteur (A) entraîne une diminution de la fluorescence de D (quenching). La présence de l’analyte induit une compétition pour la liaison de l’anticorps avec le tripode et restaure ainsi la fluorescence de D. Le procédé permet d’obtenir un signal localisé et cumulatif et la réalisation de dosages successifs sur une même surface régénérée par ajout d’anticorps. L’évaluation du procédé a été effectuée en plaque de microtitration sur des petites molécules (substance P, atrazine, aflatoxine) et des protéines (β-lactoglobuline, toxine botulinique, ricine). Les propriétés spectrales des fluorophores, le rapport A/D et la distance A-D conditionnent fortement l’efficacité du FRET et donc la sensibilité du dosage qui dépend toutefois surtout des caractéristiques d’affinité relatives de l’anticorps envers l’analyte et envers le tripode. Idéalement l'anticorps devrait présenter une bonne affinité pour le tripode et une encore meilleure pour l'analyte. Des essais de mesure avec circulation de fluide, effectués dans une microcellule en verre en employant comme détecteur une caméra CCD montée sur un microscope à fluorescence, ont montré la faisabilité d’une détection en flux et permettent d’envisager le développement d’un biocapteur fonctionnant selon ce principe. Un autre procédé basé sur la discrimination des fluorophores en solution et immobilisés est également présenté, permettant de développer un dosage rapide et simultané de plusieurs composésThis thesis was devoted to the design of fluorescence immunoassays aiming at the detection of biological warfare agents. We developed a new concept of competitive immunoassay for continuous flow detection involving a fluorescence resonance energy transfer (FRET). This procedure is based on the use of an heterotrifunctional reagent (tripod) bearing i) a fluorophore donor (D), ii) a molecule structurally close to the target and iii) a linker to the solid phase. The binding of an anti-target antibody labeled with an acceptor molecule (A) on the tripod generates the decrease of the donor emission via the FRET phenomenon (quenching). The presence of the target competiting with the tripod for the binding to the antibody leads to an increase of the fluorescence signal. The solid phase can be easily further reactivated by adding the labeled antibody. This method was evaluated in microtiter plates using small molecules (substance P, atrazine, aflatoxine) and larger proteins (β-lactoglobuline, botulinum toxin, ricin). Spectral properties of the dyes, A/D ratio and A-D distance were demonstrated to have largely influenced FRET efficiency and hereby the sensitivity of the assay. The sensitivity also strongly depends on the binding characteristics of the antibody. The main difficulty lies on the relative affinity characteristics of the antibody towards the tripod and the analyte, since the antibody should exhibit ideally a strong affinity for the tripod and even stronger affinity for the analyte. Assays performed in glass microcells using a CCD camera and a fluorescence microscope allowed continuous-flow detection and are promising for the build-up of a biosensor. We also present a simple method for performing rapid assays in microtiter plates thanks to the difference in fluorescence signal observed between free and immobilized dyes which proved to be efficient for the design of a simultaneous multiplexed immunoassay
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Gombauld, Edith. "Contribution du dosage de la cyclosporine A au suivi thérapeutique des transplantations." Bordeaux 2, 1992. http://www.theses.fr/1992BOR2P018.
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Faure, Henri. "Dosage des fractions libres et liées du zinc sérique : intérêt de ces fractions." Université Joseph Fourier (Grenoble), 1986. http://www.theses.fr/1986GRE18001.
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Poquet, Marie-Noëlle. "Interleukine 2 et transplantation cœur-poumons, dosage du récepteur soluble de l'interleukine 2 dans le lavage bronchio-alvéolaire et dans le sang chez les transplantés pulmonaires et cardio-pulmonaires." Bordeaux 2, 1993. http://www.theses.fr/1993BOR23118.
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Cot, Marie-Camille. "L'hybridation lymphocytaire appliquée à la production d'anticorps monoclonaux anti-méthotrexate : étude de faisabilité d'un dosage par immunonéphélémétrie à supports microparticulaires." Montpellier 1, 1987. http://www.theses.fr/1987MON13515.
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Phạm, Hùng. "Cinétique intraleucocytaire de la colchicine chez des volontaires sains." Paris 5, 1992. http://www.theses.fr/1992PA05P159.
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Tjollyn, Sophie. "Les anticorps, un outil au service de la chimie : applications à la cyclisation de l'époxysqualène ainsi qu'aux dosages de l'ergostérool et de l'acide 2,4-dichlorophénoxyacétique." Aix-Marseille 3, 1997. http://www.theses.fr/1997AIX30106.
Full textAbstract:
L'ensemble de ce travail a ete effectue dans l'optique de creer et de developper au sein du laboratoire d'activation selective en chimie organique, un axe immunologie. En collaboration avec des partenaires universitaires et industriels, trois projets de recherche fondamentale et appliquee ont ete entrepris. Dans un premier temps, nous avons essaye d'appliquer le concept des anticorps catalytiques a la reaction de cyclisation de l'epoxysqualene en lanosterol. L'objectif etait de mimer le site actif de l'enzyme responsable de cette transformation, la squalene lanosterol cyclase, par le biais des anticorps. Des souris ont ete immunisees avec un antigene derive du lanosterol. Le manque de specificite des immunoglobulines obtenues vis-a-vis du squelette steroidien n'a pas permis de poursuivre les travaux relatifs a la catalyse. Une seconde partie a ete consacree a l'elaboration de dosages immunoenzymatiques de substances bioactives presentes a l'etat de traces dans le domaine de l'environnement. Un premier projet a concerne le dosage de l'ergosterol, un marqueur permettant d'apprecier une contamination fongique de produits vegetaux. Les anticorps obtenus n'ont pas presente l'activite escomptee. Le second projet, quant a lui, a consiste a doser l'acide 2,4-dichlorophenoxyacetique ou 2,4-d tres largement employe comme herbicide ou comme hormone de croissance. L'immunogene synthetise s'est revele etre une bonne cible antigenique. Les anticorps specifiques du 2,4-d ont ete isoles et ont permis l'ebauche d'une trousse de dosage direct dont la sensibilite est au moins 10 fois superieure a celle des dosages classiques par clhp. Enfin, une modelisation des protocoles eia non competitifs et competitifs a corrobore la representation lineaire postulee de la courbe etalon, elargissant ainsi tres largement le domaine de validite de l'analyse.
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Portolan, Frédérique. "Recherche sur les antiviraux anti-VIH : synthèse des immunogènes de l'indinavir et du nelfinavir, mise au point des dosages radio-immunologiques de ces anti-protéases." Nice, 2001. http://www.theses.fr/2001NICE5624.
Full textAbstract:
Ce travail vise à développer des dosages radio-immunologiques de l’IDV et du NFV, deux anti-protéases utilisées en chimiothérapie anti-VIH. Pour cela, nous avons préparé les haptènes et les immunogènes de l’IDV et du NFV en vue d’obtenir les anticorps nécessaires au développement du dosage. Aussi , nous avons développé le premier dosage RIA de l’Indinavir. L’immunisation de lapins par le conjugué IDV-4(S)-HS-KLH et l’utilisation du traceur IDV-4(S)-HS-GT-I* pour la caractérisation des anticorps nous ont permis de sélectionner un immunosérum présentant un titre élevé (1/4. 10 puissance 4) et une affinité importante (IC indice 50 de 1,3. 10 puissance -9 M). Ce dernier possède une spécificité intéressante puisqu’aucune autre anti-PR n’est reconnue par les anticorps anti-IDV. Cette caractéristique nous permettra de doser des échantillons provenant de patients traités par l’IDV. Nous avons appliqué ce dosage à un modèle in vitro mimant les conditions physiologiques permettant d’évaluer les taux intracellulaires de l’IDV. Les premiers résultats montrent des quantités voisines de 2 nmoles. Uns stratégie similaire a été appliquée au NFV. L’immunisation a été réalisée à l’aide de l’immunogène NVF-AcO-BSA. Les premiers anticoprs anti-NFV obtenus ont été caractérisés à l’aide d’un traceur NFV-I*. Dans ces conditions, l’immunosérum sélectionné possède un titre de 1/3000ème et une affinité de 10 puissance -7 M. Cependant, ce dosage nous a semblé trop peu sensible pour la détermination des taux intracellulaires de cette anti-PR. Nous avons alors préféré développer un autre dosage du NFV en changeant la structure chimique de l’immunogène : NFV-AcO-βAla-KLH. La caractérisation des anticorps, à l’aide du traceur NFV-AcO-βAla-GT-I* a permis de sélectionner un immunosérum présentant un titre de 1/1,5. 10 puissance 6. L’affinité des anticorps (4. 10 puissance -9 M) est suffisante pour doser les quantités intracellulaires de NFV. De plus, ce dosage est spécifique puisque les anticorps ne reconnaissent pas les anti-PR utilisées dans le traitement du SIDA.
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Maldiney, Régis. "Nouvelle approche methodologique du dosage et de la localisation de phytohormones par des techniques immunologiques : application a la tomate, lycopersicon esculentum mill., cv. craigella et a un mutant, lateral suppressor." Paris 6, 1988. http://www.theses.fr/1988PA066382.
Full textAbstract:
La premiere partie du travail est consacree a l'elaboration d'une methode permettant la purification d'extraits vegetaux afin de doser simultanement plusieurs hormones vegetales (aia; aba; 9rz et 9rip) par une methode immunoenzymatique (elisa) utilisant le systeme avidine-biotine. La seconde partie, montre que l'absence de bourgeons axillaires chez le mutant lateral suppressor du cv. Craigella de la tomate est probablement due a des modifications du metabolisme des hormones endogenes entrainant des variations de leurs teneurs
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Maldiney, Régis. "Nouvelle approche méthodologique du dosage et de la localisation de phytohormones par des techniques immunologiques application à la tomate, Lycopersicon esculentum Mill. cv craigella et à un mutant latéral suppressor /." Grenoble 2 : ANRT, 1988. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb376155810.
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