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Dahmani, Amina. "Développement de tolérance immunologique envers la greffe de myoblastes allogéniques, une thérapie potentielle pour la dystrophie musculaire de Duchenne." Thesis, Université Laval, 2013. http://www.theses.ulaval.ca/2013/29819/29819.pdf.
Full textAbstract:
La transplantation de myoblastes (TM) est une des thérapies potentielles des plus prometteuses pour la dystrophie musculaire de Duchenne (DMD). Une des limites de cette approche est le rejet des myoblastes du donneur par le système immunitaire de l’hôte. L’induction d’une tolérance immunologique envers les myoblastes greffés permettrait de contourner les effets secondaires conséquents à une immunosuppression soutenue, aujourd’hui indispensable à la survie de la greffe. Notre objectif est donc d'induire une tolérance immunologique via l’établissement d’un chimérisme mixte par un protocole non-myéloablatif, chez des souris dystrophiques. Le protocole testé a permis d'induire une tolérance périphérique transitoire au donneur ainsi que l'établissement de taux variables de chimérisme mixte. Cependant, il n’a pas permis d’induire une tolérance à la TM. Bien que nous n’avons pas obtenu les résultats escomptés quant à la TM, des améliorations, telle qu’une association à court terme à la rapamycine, pourraient être envisagées en vue d'une application en clinique.Myoblast transplantation (MT) is one of the most promising potential therapies for Duchenne muscular dystrophy (DMD). One limitation of this approach is the rejection of the donor myoblast by the host immune system. Induction of donor-specific immune tolerance would avoid the toxicities of chronic immunosuppressive therapy that is currently required to prevent graft rejection. Our objective is to induce immunological tolerance through the establishment of mixed-chimerism using a non-myeloablative protocol, into DMD mice. Our results show that the tested protocol permits the induction of transient peripheral tolerance status to the donor. It also allows the establishment of variable rate of mixed-chimerism. However, this protocol failed to induce tolerance to MT. Although we did not obtain the expected results on the MT, improvements, such as association with a short-term rapamycin treatment, may be considered to enhance the outcome of the proposed protocol in perspective of clinical application for DMD patients.
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Metlej, Racha. "Étude du profil immunogénique des fibres révertantes dans la dystrophie musculaire de Duchenne." Thesis, Université Laval, 2012. http://www.theses.ulaval.ca/2012/29039/29039.pdf.
Full textAbstract:
La dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) est une maladie neuromusculaire
récessive liée au chromosome X. Elle se manifeste par une dégénérescence musculaire
progressive, menant finalement à la perte de la marche et à la mort. Elle est causée par
une mutation au niveau du gène dmd codant pour une protéine, la dystrophine. Cette
mutation altère le cadre de lecture normal du gène causant la perte de l’expression de
la dystrophine, essentielle pour la protection des muscles contre la dégénérescence suite
à l’effort. Par contre, la majorité des patients DMD ainsi que la souris mdx (modèle
animal de la DMD), expriment de rares fibres musculaires révertantes qui expriment la
dystrophine. Cette expression est due à une mutation somatique qui restore le cadre de
lecture normal du gène et mène à la synthèse d’une dystrophine recombinante.
Il a été suggéré que la dystrophine exprimée par les fibres révertante puisse induire
une tolérance immunologique, conduisant à l’accumulation des fibres révertantes. Alternativement,
ces rares fibres révertantes peuvent provoquer une réponse auto-immune
qui limiterait les approches thérapeutiques visant à réexprimer la dystrophine. Dans
mon étude, j’ai cherché à vérifier si la dystrophine néoformée provoque une réponse
immunitaire dans la souris mdx.
Tout d’abord, j’ai examiné, par immunohistochimie, les Tibialis antérieurs (TA) de
souris mdx (souris dystrophiques) et Rag/mdx (dystrophiques et lymphopéniques) afin
de comparer le nombre de fibres révertantes entre les souris immunocompétentes et les
souris immunodéficientes. Cette étude permettait donc d’évaluer l’influence du système
immunitaire sur la présence des fibres révertantes.
Ensuite, j’ai tenté de vérifier, in vivo, la présence d’une réaction immunitaire cellulaire
envers la dystrophine. Des splénocytes de souris mdx et 10J ont alors été transférés
par injection intra-veineuse dans des souris Rag et Rag/mdx. Les muscles de ces dernières
ont été examinés par marquage immunohistochimique afin de détecter la présence d’infiltration
de cellules immunitaires autour des fibres révertantes.
iii
Enfin, pour étudier la réponse humorale, j’ai examiné les sérums de souris mdx
par immunohistochimie et Western-Blot, afin de vérifier si des anticorps contre la dystrophine
étaient présents.
Mes travaux ont montré que les souris immunodéficientes avaient un nombre plus
élevé de fibres dystrophine-positives, ce qui suggère que le système immunitaire est impliqué
dans l’élimination des fibres révertantes chez les souris mdx immunocompétentes.
En plus, la détection d’une infiltration de lymphocytes T dans les muscles de souris
Rag/mdx, contenant des fibres révertantes, vient appuyer notre hypothèse. Cependant,
le sérum de souris mdx ne contenait pas d’anticorps contre la dystrophine. Ces résultats
suggèrent que les fibres révertantes n’induisent pas une tolérance immunitaire envers la
dystrophine néoformée et qu’au contraire, elles induisent l’activation du système immunitaire.
Cette activation se traduit par une réponse à médiation cellulaire et n’implique
probablement pas une réponse à médiation humorale.Duchenne muscular dystrophy (DMD) is an X-linked recessive neuromuscular disease. It is characterized by progressive muscle degeneration, eventually leading to loss of ambulation and death. It is caused by a mutation in the dmd gene which encodes for the dystrophin protein. This mutation alters the normal reading frame of the gene causing the loss of dystrophin expression, essential for the protection of muscles from degeneration, following an effort. However, the majority of DMD patients and mdx mice (animal model of DMD) have rare revertant muscle fibers that express dystrophin. This expression is due to a somatic mutation, which restores of the normal reading frame of the gene and leads to the synthesis of a recombinant dystrophin. It was suggested that the dystrophine expressed by the revertant fibers could induce immunological tolerance, leading to the accumulation of revertant fibers. Alternatively, these rare revertant fibers could induce an autoimmune response that limits the success of therapeutical approaches to induce the expression of dystrophin. The aim of my study was to verify whether the newly formed dystrophin triggers an immune response in the mdx mouse. The Tibialis anterior (TA) muscle of mdx (dystrophic) and Rag/mdx (dystrophic, lymphopenic) mice were first examined by immunohistochemical staining to compare the number of revertant fibers present in immunocompetent and immunodeficient mice. This study allowed us to evaluate the influence of the immune system on the presence of revertant fibers. The presence of a potential cellular immune response against dystrophin was then investigated in vivo. Splenocytes from mdx and 10J mice were transferred intravenously into Rag and Rag/mdx. The muscules of these mice were examined by immunohistochemical staining to detect the presence of immune cellular infiltration around the revertant fibers. Finally, to study the humoral response, I examined sera from mdx mice using immunohistochemical staining and Western blotting to check for antibodies against dystrophin. My research showed that immunodeficient mice had a significantly higher number v of dystrophin-positive fibers, suggesting that the immune system is involved in the elimination of revertant fibers in immunocompetent mdx mice. In addition, T cells obtained from mdx mice and injected in Rag/mdx mice infiltrated muscles of Rag/mdx mice containing revertant fibers supporting the hypothesis that mdx mice do make a cellular immune response against the dystrophin revertant fibers. However, the mdx mouse serum did not contain any antibodies against dystrophin. These results suggest that revertant fibers do not induce an immune tolerance to the newly formed dystrophin, but on the contrary, they trigger the activation of the immune system. This activation results in a cell-mediated immunity but not a humoral immunity.
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Stephan, Lionel. "AMÉLIORATION DE LA TRANSPLANTATION DE MYOBLASTES, UN TRAITEMENT POSSIBLE DE LA DYSTROPHIE MUSCULAIRE DE DUCHENNE. Utilisation de la forme active de la vitamine D3 et obtention d'une tolérance immunologique par l'administration de drogues cytoréductrices." Thesis, Université Laval, 2008. http://www.theses.ulaval.ca/2008/25367/25367.pdf.
Full textAbstract:
La dystrophie musculaire de Duchenne, maladie héréditaire causée par la mutation du gène codant la protéine appelée dystrophine, se caractérise par une dégénérescence musculaire progressive et létale. Présentement, c’est une maladie incurable. La transplantation de cellules myogéniques (TM) est une des approches thérapeutiques envisagées pour améliorer la condition et l’espérance de vie des patients. Cette thérapie consiste à prélever des myoblastes d’un donneur sain et de les transplanter dans les muscles d’un patient dystrophique. Cette approche comporte plusieurs difficultés, dont la survie des myoblastes post-transplantation. Premièrement, les myoblastes injectés meurent rapidement et massivement, le succès de la transplantation ne reposant alors que sur une faible portion de cellules transplantées. Tous les facteurs impliqués dans cette mortalité cellulaire ne sont pas encore déterminés. Néanmoins, il est établi que la régénération musculaire se base sur les capacités de prolifération et de différenciation des myoblastes. Le premier article de cette thèse propose l’administration de la forme active de la vitamine D3 pour compenser la perte initiale des myoblastes injectés. Nous avons confirmé l’effet mitogénique et morphogénique de la vitamine D3 sur les myoblastes humains permettant ainsi, via son administration, d’augmenter le succès des TMs. La deuxième partie de cette thèse traite du rejet immunitaire lié à la TM allogénique. Actuellement, pour bloquer ce rejet, les approches cliniques proposent une immunosuppression soutenue des patients, se révélant toxique à long terme et augmentant le risque de contracter des maladies iatrogènes. Une autre procédure, moins délétère, repose sur le développement d’une tolérance immunologique, via l’établissement d’un chimérisme hématopoïétique mixte. Pour obtenir ce chimérisme, les procédures existantes nécessitent un lourd conditionnement des patients, incluant l’injection d’anticorps bloquants ou déplétants, ainsi qu’une irradiation pancorporelle. Le deuxième article de ce manuscrit propose l’administration de drogues cytoréductrices, déjà connues et approuvées en clinique. Ce protocole conduit au développement d’un statut de tolérance stable ainsi que le maintien à long terme des TMs. Les travaux effectués au cours de cette thèse proposent donc deux solutions pour circonvenir à la destruction précoce et plus tardive des myoblastes transplantés. Ces deux approches pourraient réduire l’aspect invasif de l’essai clinique basé sur la TM.Duchenne muscular dystrophy is a fatal neuromuscular recessive disease characterized by widespread muscle damage throughout the body. No cure is currently available this disease. Myoblast transplantation (MT) is an interesting approach to enhance the life quality and life expectancy of patients. This therapy consists in harvesting myoblasts of a non-dystrophic donor and in transplanting them in dystrophic muscles. This approach involves many drawbacks and predominantly the loss of the grafted cells in post-transplantation period. Firstly, an important part of injected myoblasts quickly dies following their injection. Thus, the graft success relies on the survival of a little proportion of grafted cells. The pathways involved in this important death of cells are not well established. However, following a muscle injury, the muscular regeneration depends on the proliferation and the differentiation of myoblasts. In a first study, we propose an administration of the activated form of vitamin D3 on human myoblasts to compensate the early loss of injected cells. Actually, some previous studies demonstrated that this vitamin acted directly on myoblasts, regulating their proliferation and fusion. We have confirmed these effects and demonstrated that the administration of the vitamin D3 enhances the success of human MT. The second part of this thesis broaches the specific immune rejection associated with the allogeneic MT. Currently, Duchenne patients are treated with chronic immunosuppression for MT. However, the problem in humans is that the long-term use of immunosuppressive treatments has adverse effects: nephrotoxicity, increased cancer risk etc... Mixed-haematopoietic chimerism is a promising approach to circumvent sustained immunosuppression but most of proposed protocols need antibodies treatment or host irradiation. The second study of this thesis shows that we have developed a protocol based on a short term administration of two cytoreductive drugs, both approved for clinical use. The mixed-chimerism development obtained with our conditioning regimen promotes donor specific stable tolerance. Taken together, this thesis gives two solutions to circumvent the early and late destruction of transplanted myoblasts. These approaches could be further included in the clinical essay developed for the Duchenne muscular dystrophy by promoting the efficiency and decrease the clinical risk related to the MT.
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Létourneau, Martin. "L'utilisation de lymphocytes T régulateurs pour modeler la réponse immunitaire envers les myoblastes greffés." Master's thesis, Université Laval, 2009. http://hdl.handle.net/20.500.11794/20864.
Full textAbstract:
La dystrophie musculaire de Duchenne est une maladie neuromusculaire affectant un garçon sur 3200. Cette maladie se caractérise par l'absence d'une simple protéine, la dystrophine, qui assure normalelnent l'intégrité des fibres musculaires. Sans cette protéine, les fibres musculaires sont plus facilement endommagées, provoquant une dégénérescence musculaire. Rapidement, les facultés locomotrices diminuent, confinant habituellement le patient à un fauteuil roulant vers l'âge de 10 ans. L'utilisation d' une assi stance respiratoire s'avère généralement nécessaire au début de la vingtaine et le décès peut survenir dès l'âge de 17 ans. Les patients atteignent rarement la trentaine. La thérapie cellulaire se situe parmi les traitements curatifs potentiels et consiste à implanter au patient dystrophique des myoblastes contenant le gène normal de la dystrophine. Évidemment, cette thérapie présente quelques inconvénients, dont une réaction immune du patient contre les myoblastes transplantés. C'est ici qu'interviennent les travaux présentés dans ce mémoire avec comme objectif principal d'utiliser les Iymphocytes T régulateurs (Tregs) afin de créer un protocole de tolérance non-toxique pour les patients dystrophiques. Jusqu 'à maintenant, nous avons réussi à isoler efficacement et de manière reproductible ces Tregs en utilisant une armada d'anticorps spécifiques. Plus précisément, nous avons actuellement une pureté moyenne se situant entre 90% et 95%. Par après, en démontrant l'expression du FoxP3 au sein de ces cellules, ces travaux prouvent hors de tout doute que les cellules purifiées sont des Tregs au sens propre du tenne. Finalement, par des essais in vitro, nous avons efficacement démontré que les Tregs isolés conservaient leur capacité immunorégulatrice. En effet, suite à une stimulation artificielle, les lymphocytes T CD4⁺ mis en co-culture avec un ratio de Tregs de 1:4 se divisent deux fois moins que ceux sans Tregs. Afin de conclure ces travaux, il reste deux étapes majeures avant de crier victoire. Premièrement, il faut réussir à multiplier des Tregs spécifiques afin d'en avoir un nombre suffisant et d'avoir une plus grande spécificité. Deuxièmement, il faudra les réintroduire chez un modèle animal afin de tester s' ils empêchent le rejet d' une greffe allogénique.
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Preuße, Corinna. "Common and distinct immunological aspects in acquired inflammatory myopathies and inherited muscular dystrophy." Doctoral thesis, Humboldt-Universität zu Berlin, Lebenswissenschaftliche Fakultät, 2014. http://dx.doi.org/10.18452/17075.
Full textAbstract:
Die heterogene Gruppe der Myopathien kann sowohl die Funktion des Muskels beeinflussen, als auch andere Organsysteme. Erworbenen Muskelerkrankungen sind theoretisch behandelbar, jedoch stehen zumeist nur sehr unspezifische Behandlungsoptionen zur Verfügung, während für vererbte Formen bisher keine kausalen Therapiemöglichkeiten bekannt sind. In dieser Arbeit wurden drei verschiedene Muskelerkrankungen untersucht. Gemeinsam ist ihnen ein jeweils charakteristischer Einstrom von Entzündungszellen, wobei die Zusammensetzung des Zellinfiltrates (z.B. Lymphozyten oder Makrophagen) bei den verschieden Erkrankungen unterschiedlich war. Weiterhin unterscheidet sich das zugrunde liegende Zytokinmilieu für die einzelnen untersuchten Entitäten. Daher war es Ziel der Arbeit, die genauen Interaktionen zwischen den Immunzellen zu untersuchen, sowie die charakteristischen Phänomene der Erkrankungen (Hypoxie, Entzündung und Fibrose). Nekrotisierende Myopathien können sowohl durch eine immun-vermittelte Genese, als auch durch Kontakt mit toxischen Substanzen ausgelöst werden und beide Subgruppen können klar durch morphologische Kriterien, als auch durch spezielle Immunaspekte unterschieden werden. Makrophagen waren hier die vorherrschende Zellpopulation und im gesamten Muskel verteilt. Patienten mit Dermatomyositis dagegen zeigten ein typisches perifaszikuläres Atrophiemuster und hypoxische Effekte, wobei beide Phänomene deutlich ausgeprägter bei juvenilen, als bei adulten Patienten vorkamen. Erbliche Myopathien (z.B. Muskeldystrophie Duchenne) können ebenfalls entzündliche Infiltrate aufweisen und die Entwicklung von Fibrose in der Skelettmuskulatur ist dabei ein Hauptkriterium der Muskelfaserdegeneration. Ein neu entwickelter computer-basierter Algorithmus wurde genutzt, um diese Entwicklung zu quantifizieren. Die Menge an Bindegewebe steigt mit dem Alter der Patienten, während bei älteren Patienten außerdem ein fettgewebiger Umbau ein wichtiger Aspekt der Pathologie war.The heterogeneous group of myopathies can affect the skeletal muscle or other organ systems and comprise a huge number of different entities. Acquired myopathies are potentially treatable, but there are often only unspecific treatment options, while there is no causative cure for inherited forms of myopathies. In this work, three different entities were analyzed, which all share common aspects of the immune response, but also feature distinct immunological aspects as well. They have an inflammatory part in common, which is mainly regulated by influx of immune cells. However, the composition of these cellular infiltrates (e.g. lymphocytes or macrophages) was varying between the diseases. In addition, the respective cytokine milieu was highly specific in the examined entities. Thus, the aim of the study was to precisely examine interactions between immune cells, and analyze characteristic pathological phenomena (hypoxia, inflammation and fibrosis). Necrotizing myopathies have an immune-mediated background or showed a toxic aetiology and both sub-groups can be distinguished by their morphological characteristics and certain immune aspects. Here macrophages are the predominant cell population and are spread throughout the muscle. Analyses of patients suffering from dermatomyositis showed a typical perifascicular pattern of atrophy, as well as effects of hypoxia and the described features are in general more pronounced in juvenile dermatomyositis than in the adult form. Inherited myopathies (e.g. Duchenne muscular dystrophy) harbor significant inflammatory infiltrates as well and development of fibrosis was a major feature of skeletal muscle degeneration. A computer-based algorithm was used to quantify fibrosis. The amount of connective tissue increased with the age of patients, while at late stage of disease fatty transformation was an additional important issue.
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Camirand, Geoffrey. "Développement d'un protocole d'induction de tolérance immunologique applicable à la transplantation de myoblastes comme traitement de la dystrophie musculaire de Duchenne." Thesis, Université Laval, 2004. http://www.theses.ulaval.ca/2004/21784/21784.pdf.
Full textAbstract:
La transplantation de myoblastes (cellules précurseurs du muscle) est une thérapie potentielle prometteuse pour le traitement de la dystrophie musculaire de Duchenne. À ce jour, aucun traitement efficace n’existe pour cette maladie. Cette thérapie consiste en l’injection des cellules directement dans le muscle malade. Comme tous les autres types de transplantation allogénique, les myoblastes sont rapidement rejetés par le système immunitaire, mais le rejet peut être contrôlé par l’emploi soutenu d’immunosuppresseurs. L’utilisation de ces immunosuppresseurs serait idéale si ce n’était de leurs effets indésirables importants. Pour contourner ce problème, il est possible d’induire une tolérance immunologique envers les myoblastes transplantés. Cet état de tolérance peut-être induit par deux voies principales : la tolérance périphérique et la tolérance centrale. Plusieurs protocoles d’induction de tolérance périphérique et centrale ont été démontrés efficaces dans la littérature chez des modèles animaux et, dans certains cas, chez l’humain. Nous avons donc appliqué certains de ces protocoles d’induction de tolérance à la transplantation de myoblastes. Lors de cette étude, il est démontré que l’induction de tolérance périphérique, avec les protocoles utilisés, n’ont permis que la prolongation de la survie des myoblastes et qu’une modulation centrale du système immunitaire pourrait améliorer les résultats de survie. C’est pourquoi nous nous sommes tournés vers l’utilisation de protocoles non-myéloablatifs de greffe de moelle osseuse utilisant des anticorps monoclonaux bloquant les signaux d’activation des lymphocytes. Par le développement de chimérisme, nous avons démontré, pour la première fois, l’induction d’une tolérance robuste et spécifique à la transplantation de myoblastes, sans aucune immunosuppression soutenue. Cette démonstration montre que l’induction de tolérance par modulation centrale pourrait un jour être appliquée à un traitement de transplantation de myoblastes pour la dystrophie musculaire de Duchenne, améliorant ainsi l’espoir d’une qualité de vie meilleure pour ces jeunes malades.
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Métézeau, Philippe. "Cytométrie en flux : application a l'étude de l'endocytose de ligands membranaires : cinétique, action de divers agents, mécanismes fondamentaux et intérêt." Paris 7, 1985. http://www.theses.fr/1985PA077067.
Full textAbstract:
Dans la première partie technique, descriptive et prospective, nous rappelons le principe de la Cytométrie en Flux, ses applications récentes et les domaines nouveaux qu'elle pourrait permettre d'aborder. Nous décrivons ensuite un appareil qui permet de concentrer les particules triées et, par ailleurs, l'intérêt pour le tri de chromosomes d'analyser le signal de fluorescence selon ses diverses composantes. Dans la seconde partie, nous décrivons un protocole permettant une étude rapide et précise de l'endocytose d'un ligand membranaire. Cette méthodologie est appliquée à divers ligands (anticorps, concanavaline A, lipopolysaccharide) et divers types cellulaires (lymphocytes, fibroblastes, chondrocytes, humain, marin ou de lapin). Enfin, nous comparons l'endocytose d'immunoglobulines de surface par le lymphocyte du sang, provenant de sujets sains ou de patients atteints de dystrophie musculaire de Duchenne.
8
Dufour, Christine. "L'implication de rage dans l'amélioration de la greffe de myoblastes." Thesis, Université Laval, 2010. http://www.theses.ulaval.ca/2010/27017/27017.pdf.
Full text
9
Matecki, Stefan. "Fonction respiratoire et myopathie de Duchenne." Montpellier 1, 1997. http://www.theses.fr/1997MON11135.
Full text
10
Duchêne, Benjamin. "Utilisation des technologies CRISPR/Cas9 pour le développement d'approches thérapeutiques pour le traitement de la dystrophie musculaire de Duchenne." Doctoral thesis, Université Laval, 2019. http://hdl.handle.net/20.500.11794/35436.
Full textAbstract:
La dystrophie musculaire de Duchenne, est une maladie qui résulte d’une mutation dans le gène codant pour la dystrophine. Cette mutation entraine l'absence de la protéine dystrophine dans les fibres musculaires et mène à une dégénérescence des différents muscles ce qui engendre une défaillance cardiorespiratoire suivie d’un décès prématuré. La récente découverte du système CRISPR/Cas9 ouvre de nouvelles perspectives pour le développement d’un traitement curatif pour la DMD. A l’aide d’un ARNg, reconnaissant une séquence cible protospacer localisée à proximité d’un PAM (protospacer adjacent motif), l’endonucléase Cas9 génère une coupure double brin dans l’ADN. Il a été démontré que l’utilisation d’une paire d’ARNgs ciblant des introns permettait de générer de larges délétions et de restaurer un cadre de lecture propice à l’expression d’une dystrophine tronquée dans des cellules de patients DMD. Cependant, cette approche ne prend pas en considération la structure de la dystrophine qui résulte de cette délétion. Il a été suggéré que chez les patients atteints de la dystrophie musculaire de Becker, produisant une dystrophine tronquée mais fonctionnelle, la sévérité de la maladie serait reliée au type de délétion et à la structure de la dystrophine qui en résulte. Il semble donc pertinent de travailler au développement d’une approche qui prend aussi en considération la structure des répétitions de type spectrine. D’autre part, le système CRISPR/Cas9 envahit progressivement toutes les sphères des sciences de la vie et soulève par la même occasion des questions de sécurité pour les patients. En effet, la possibilité de mutations hors-cible ou d’une réponse immunitaire dirigée contre ces endonucléases pourrait freiner l’application clinique de ces outils. Ainsi nous avons envisagé différentes approches qui contribueraient à limiter des tels effets pouvant s’avérer néfastes pour les patients. Nos résultats montrent qu’il est possible d’utiliser la Cas9 de S.aureus ainsi qu’une paire d’ARNgs ciblant des exons pour induire une délétion dans l’ADN génomique. Cette délétion permet la formation d’un exon hybride qui restaure non seulement le cadre de lecture du gène de la dystrophine[1], mais contribue aussi à la formation d’une répétition de type spectrine hybride correctement phasée. Lors de nos expérimentations, nous avons été capables d’induire la production de dystrophine in vitrosur des lignées de cellules de quatre patients DMD et in vivodans un modèle de souris dystrophique. Ensuite, avec la technologie du Feldan Shuttle nous avons montré qu’il était possible d’induire l’édition du gène de la dystrophine (gène humain ou murin) en livrant directement des complexes ribonucléoprotéiques dans le muscle d’une souris dystrophique. Cette édition a permis d’induire l’expression de protéine dystrophine dans les fibres musculaires, mais cette approche reste pour le moment réduite à des applications localisées. Enfin, nous avons démontré que l’inactivation de l’activité autocatalytique du ribozyme N79 serait une stratégie envisageable pour contrôler l’expression d’une endonucléase. Présentement, ce système n’a fait ses preuves que lors d’expérimentations in vitro, mais il ouvre la porte au développement de nouveaux moyens de contrôler pharmacologiquement l’édition du génome par le système CRISPR/Cas9. Finalement, l’ensemble de ces travaux contribuent à une meilleure compréhension des défis à relever pour mettre au point un traitement curatif pour la dystrophie musculaire de Duchenne, de façon plus efficace et sécuritaire.Duchenne Muscular Dystrophy is one of the most severe genetic disease. It is caused by a mutation in the dystrophin gene. Such mutation is responsible for the absence of the dystrophin protein in the muscles thus leading to muscle wasting and to a premature death following cardiorespiratory failure. The discovery of the CRISPR/Cas9 systems opened the path for the establishment of curative treatments for genetic diseases, such as DMD. A Cas9 endonuclease can generate a double strand break in the DNA at a targeted locus through a guide RNA that specifically recognize a DNA protospacer sequence located closed to a protospacer adjacent motif (PAM). Recent work published by others demonstrated that the use of a pair of sgRNAs targeting introns permitted to create a genomic deletion that restores the DMD gene reading frame thus leading to de novosyn thesis of a truncated dystrophin protein. However, such deletion does not consider the resulting structure of the central part of the dystrophin. In Becker muscular dystrophic patients, a truncated dystrophin protein is synthesized but the severity of the disease could be related to the structure of this protein. Consequently, it seems relevant to develop a therapeutic approach that considers the structure of the spectrin-like repeat that forms the central rod-domain of the dystrophin protein. Further more, while CRISPR/Cas9 is on the rise it also raises safety issues for patients. Indeed, off-target mutations and immune response directed against such endonuclease can occur thus preventing the possibility of starting clinical trials. Consequently, there is an increasing need to develop safer approaches that may counter such undesirable effects. Our results demonstrated the feasibility of inducing a large genomic deletion with the Cas9 from S. aureus with a pair of sgRNAs targeting exons. Such deletion allows the formation of a hybrid exon that could, in addition to restoring the expression of the dystrophin protein, restore the correct structure of the spectrin-like repeat in its central rod-domain. We have been able to demonstrate such dystrophin expression in vitroand in vivoin four different DMD patient cell lines and in a dystrophic mouse model, respectively. Next, we envisioned the delivery of Cas9/sgRNA ribonucleoprotein complexes using the Feldan Shuttle technology. We provided proof-of-principle that such delivery permits the editing of the dystrophin gene in the TA of mouse models. Following the editing, dystrophin protein expression was restored in the treated muscles of a dystrophic mouse model. Since this approach remains restricted to in situ treatments, further development should be addressed to allow systemic delivery of Cas9/sgRNA. Finally, we provided evidence that the self-catalytic activity of the ribozyme N79 can be controlled using toyocamycin. Even if it only demonstrated its efficacy in vitro, this system opens the path to the development of a different tool for the pharmacological induction of endonuclease protein expression. Finally, this work contributes to the improvement of our understanding for the establishment of a potent and safe therapy to find a cure for DMD.
11
LANG, CATHERINE. "Aspects moleculaires des myopathies de duchenne et de becker." Strasbourg 1, 1994. http://www.theses.fr/1994STR15058.
Full text
12
Bénony, Hervé. "Les Aspects psychopathologiques dans la myopathie de Duchenne de Boulogne." Lille 3 : ANRT, 1990. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb37611751n.
Full text
13
Bénony, Hervé. "Les aspects psychopathologiques dans la myopathie de Duchenne de Boulogne." Paris 5, 1989. http://www.theses.fr/1989PA05H057.
Full text
14
Goyenvalle, Aurélie. "Développement d'une stratégie thérapeutique pour la dystrophie musculaire de Duchenne : Restauration du cadre de lecture par saut d'exon." Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077104.
Full textAbstract:
La plupart des cas de Dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) sont causés par des mutations dans le gène de la dystrophine qui interrompent le cadre de lecture de l'ARNm. Dans certains cas, l'exclusion artificielle d'un exon permet de restaurer ce cadre de lecture, donnant naissance à une dystrophine plus courte, mais tout de même fonctionnelle. L'objectif de ce travail a été de produire in situ à partir de vecteurs viraux, des molécules d'ARN ciblant les sites spécifiques d'épissage du gène de la dystrophine, pour induire le saut des exons associés à la maladie pendant l'épissage du pré-ARNm. Pour cela, nous avons choisi d'utiliser le petit ARN nucléaire U7 (U7snRNA) comme « navette » et avons dans un premier temps construit un vecteur AAV spécifique du gène de la dystrophine murine, permettant un saut très efficace de l'exon ciblé. Ce saut d'exon induit ainsi une restauration massive et stable de dystrophine, associée à une amélioration significative du phénotype dystrophique chez la souris. En parallèle de ces travaux sur le modèle murin mdx, nous avons développé cette approche sur le modèle canin GRMD de la dystrophie musculaire de Duchenne, et mis en évidence l'efficacité du saut d'exons multiples permettant une restauration importante de dystrophine. Ces résultats très prometteurs obtenus chez la souris mdx et chez le chien GRMD, nous ont conduit à appliquer cette stratégie sur le gène humain de la dystrophine et en particulier sur l'exon 51 pour lequel nous avons pu mettre en évidence un saut d'exon très efficace. L'ensemble de ces résultats indique l'efficacité de l'approche du saut d'exon médiée par U7snRNA, qui pourrait concerner près de 80% des patients DMDMost cases of Duchenne muscular dystrophy (DMD) are caused by dystrophin gene mutations that disrupt the mRNA reading frame. In some cases, forced exclusion of a single exon can restore the reading frame, given rise to a shorter, but still functional dystrophin protein. Our objective in this work was to produce antisense sequences targeting splice junctions of dystrophin gene to induce removal of disease-associated exons during pre-mRNA processing. To achieve this exon-skipping, we proposed to use the U7 small nuclear RNA as carrier and we first developed AAV vectors harboring chimeric U7snRNA carrying antisense sequences able to promote skipping of exon 23 of the murine dystrophine gene. After intramuscular or intra-arterial injection in mdx mice, we detected efficient skipping of the exon 23 and a long term rescue of dystrophin expression. We next evaluated this strategy in the canine GRMD model and showed the possibility to skip several exons, leading to a very large restoration of dystrophin in injected muscles. These promising results obtained on the mouse and canine models led us to develop the strategy on the human dystrophin gene and especially on the exon 51. We confirmed the skipping of the exon 51 both in vitro in patient myoblasts after transduction with the lentiviral vector and in vivo after intramuscular injection of an AAV-U7ex51 vector in the transgenic hDMD mouse. This study provides evidence on the efficiency of the U7snRNA mediated exon skipping strategy for Duchenne muscular dystrophy, that could concern more than 80% of patients and offers very promising tools for clinical treatment of DMD
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Fayssoil, Abdallah. "Phénotypage cardiaque des dystrophies musculaires à l'aide des ultrasons." Thesis, Versailles-St Quentin en Yvelines, 2014. http://www.theses.fr/2014VERS0062/document.
Full textAbstract:
Les myopathies d’origine génétique sont des pathologies musculaires en rapport avec des anomalies génétiques. Les myopathies sont à l’origine d’un handicap physique majeur et affectent souvent la fonction respiratoire et parfois le cœur. Nous nous sommes intéressés à la caractérisation myocardique de 4 types de myopathies d’origine génétique à l’aide de l’échocardiographie Doppler : myopathie de Duchenne, sarcoglycanopathies, MELAS syndrome et maladie de Pompe.Nous avons analysé la fonction cardiaque dans 2 modèles murins de dystrophies musculaires: la souris mdx et la souris sgca null. En clinique, nous avons analysé la fonction cardiaque des sujets atteints de myopathie de Duchenne, de sarcoglycanopathies, de MELAS syndrome et de maladie de Pompe en échocardiographie Doppler.Dans les modèles animaux, nous avons retrouvé des anomalies myocardiques chez la souris mdx et chez la souris sgca null. Chez l’homme, l’atteinte myocardique est sévère chez les sujets atteints de myopathie de Duchenne et certains patients présentent un asynchronisme ventriculaire soulevant les indications éventuelles de resynchronisation myocardique. Les sujets atteints de gamma sarcoglycanopathies présentent de façon significative des anomalies de contraction du ventricule gauche comparativement aux sujets atteints d’alpha-sarcoglycanopathies. La fonction ventriculaire droite et gauche est préservée chez les sujets atteints de maladie de Pompe. Les sujets atteints de MELAS présentent des hypertrophies du ventricule gauche. L’analyse génétique retrouve une corrélation significative entre le taux d’hétéroplamie et la survenue d’événements cliniquesMuscular dystrophies are genetic neuromuscular disorders that affect skeletal muscle. We sought to assess heat involvement in four genetic muscular disorders : Duchenne muscular dystrophy, sarcoglycanopathies, MELAS and adulte Pompe disease. In animal models, we sought to assess, using Echocardiography Doppler, mdx mice and sgca null mice. Myocardiac abnormalities were found in mdx mice and sgca null mice. Clinical studies found severe cardiac impairment in Duchenne muscular dystrophies and ventricular asynchrony was found in patients with severe heart failure. Patients with gamma sarcoglycanopathy have significant alteration of left ventricular function in comparison with patients with alpha sarcoglycanopathy. Left and right ventricular function were preserved in patients with Pompe disease. Left ventricular hypertrophy was found in patients with MELAS. Genetic analysis disclosed significant correlation between heteroplasmy and significant clinical events
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Chaussenot, Rémi. "Neurobiologie des troubles cognitifs des modèles murins de la myopathie de Duchenne." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2017. http://www.theses.fr/2017SACLS127/document.
Full textAbstract:
La dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) est un syndrome neuromusculaire dû à des mutations dans le gène dmd qui conduisent à la perte d’expression des dystrophines, protéines normalement exprimée dans différents tissus y compris le cerveau. Le profil cognitif des patients est hétérogène et la présence d’une déficience intellectuelle dépend de la position des mutations dans le gène. Cette variabilité s’explique par la complexité du gène dmd qui comprend plusieurs promoteurs internes permettant l’expression cérébrale de plusieurs dystrophines de tailles différentes. Dans ce travail de thèse, nous nous sommes intéressés à deux dystrophines : la dystrophine complète (Dp427), normalement exprimée dans le muscle et le cerveau et absente chez tous les patients DMD, et la forme la plus courte de dystrophine, la Dp71, produit cérébral majeur du gène dmd absente dans un sous-groupe de patients. Ces deux dystrophines ont des fonctions cellulaires différentes : La Dp427, normalement exprimée dans les synapses inhibitrices en interaction avec les récepteurs du GABA, joue un rôle dans la plasticité synaptique, l’apprentissage et la mémoire. Sa perte conduit à des déficits cognitifs modérés. La Dp71, majoritairement exprimée dans les astrocytes périvasculaires, contribue à l’ancrage de canaux ioniques impliqués dans l’homéostasie cérébrale et joue aussi un rôle dans la synapse glutamatergique. La perte de Dp71 aggrave fortement les déficits associés à la perte de Dp427 chez les patients et conduit à une déficience intellectuelle sévère. Les relations génotypes-phénotypes restent à préciser et on suppose qu’au-delà de la sévérité des déficits, la nature même des altérations cognitives, ainsi que que la présence de troubles sensoriels, cognitifs, exécutifs et neuropsychiatriques, dépendent des formes de dystrophines touchées. Pour étudier le rôle de ces deux dystrophines, nous avons utilisé deux modèles murins : la souris mdx uniquement déficiente en Dp427, et la souris Dp71-null uniquement déficiente en Dp71. Une étude comportementale à large spectre nous a permis de mieux caractériser le phénotype associé à la perte de Dp427 et de Dp71, en précisant l’intégrité de la perception et du traitement des stimuli sensoriels auditifs, des réponses émotionnelles et de la réactivité au stress, des performances d’apprentissage, ainsi que de certaines composantes des fonctions exécutives, comme la mémoire de travail spatiale et la flexibilité comportementale. Ce travail a été complété par des études collaboratives visant à caractériser le rôle de la Dp71 dans la plasticité corticale et à développer une approche de thérapie génique pour restaurer la fonction de la Dp427 chez la souris mdx. Nous montrons que la perte de Dp427 perturbe les fonctions GABAergiques, les réponses émotionnelles induites par un stress ainsi que la mémoire émotionnelle et la mémoire à long terme, sans altération majeure des fonctions sensorielles et exécutives. Nous montrons aussi qu’une thérapie génique basée sur des injections systémiques d’oligonucléotides antisens, porteurs de chimies spécifiques et passant la barrière hémato-encéphalique, est capable de restaurer une Dp427 fonctionnelle par la technique du saut d’exon et de compenser les altérations émotionnelles des souris mdx. La perte de Dp71 a un impact différent : Elle altère la balance excitation/inhibition et la plasticité synaptique corticale et perturbe l’apprentissage, la flexibilité comportementale et la mémoire de travail dans des tâches d’apprentissage spatial. Notre étude de ces modèles murins a donc permis de clarifier les relations génotype-phénotype et les bases neurobiologiques de cette maladie, et d’identifier des phénotypes utiles pour valider l’efficacité de traitements ciblant le cerveau dans des études précliniquesDuchenne muscular dystrophy (DMD) is a neuromuscular syndrome caused by mutations in the dmd gene, leading to the loss of dystrophin proteins, which are normally expressed in various tissues including the brain. Patients exhibit heterogenous cognitive profiles and the presence of intellectual disability depends on the location of the mutation within the gene. This variability can be explained by the complexity of the dmd gene, which includes several internal promoters leading to the cerebral expression of several dystrophins of different sizes. In this thesis work, we focused on two dystrophins : the full-length dystrophin (Dp427) normally expressed in muscle and brain and lost by all DMD patients, and the shortest dystrophin, Dp71, major cerebral product of the dmd gene that is absent in a subgroup of patients. These two dystrophins have distinct cellular functions : Dp427, normally interacting with GABA receptors in inhibitory synapses, plays a role in synaptic plasticity, learning and memory. Its loss leads to mild cognitive deficits. Dp71, mostly expressed in perivascular astrocytes, contributes to the anchoring of ionic channels involved in brain homeostasis and also plays a role in glutamatergic synapses. Dp71 loss strongly aggravate the deficits associated with the loss of Dp427 in patients and lead to severe intellectual disability. Genotype-phenotype relationships need be further specified and it is assumed that beyond deficits severity, the actual nature of cognitive alterations, as well as the presence of sensorial, cognitive, executive and neuropsychiatric disturbances, depend on the specific forms of dystrophin affected by mutations. To study the role of these two dystrophins, we used two mouse models : the mdx mouse that only lacks Dp427, and the Dp71-null mouse that only lacks Dp71. A extensive behavioral study allowed us to better characterize the phenotype associated with the loss of Dp427 and Dp71, detailing integrity of perception and processing of auditory sensory stimuli, of emotional responses and stress reactivity, of learning performance, and of components of executive functions, such like spatial working memory and behavioral flexibility. The work has been completed by collaborative studies aimed at characterizing the role of Dp71 in cortical plasticity and at developing gene therapy approaches to rescue Dp427 function in the mdx mouse. We demonstrate that Dp427 loss perturbs GABAergic functions, stress-induced emotional responses, as well as emotional and long-term memories, without major alterations of sensory and executive functions. We also show that a gene therapy based on systemic injections of antisens oligonucleotides holding specific chemistries and crossing the blood-brain barrier enables Dp427 functional rescue by exon-skipping strategy and alleviates emotional disturbances in mdx mice. The loss of Dp71 has a distinct impact : It alters cortical excitation/inhibition balance and plasticity and disrupt learning, behavioral flexibility and working memory in spatial learning tasks. Our study of these mouse models therefore enabled to clarify the genotype-phenotype relationships and neurobiological bases of this disease, and identified valuable phenotypes to validate treatment efficacy in future brain-targeting preclinical studies
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Perrin, Arnaud. "Augmentation de l'expression de la chaine α1 de la laminine 111, un potentiel traitement pour la Dystrophie musculaire de Duchenne." Master's thesis, Université Laval, 2016. http://hdl.handle.net/20.500.11794/27259.
Full textAbstract:
La protéine hétérotrimérique laminine-111 permet le lien entre la matrice-extracellulaire et l’intégrine α7β1 du sarcolemme, remplaçant ainsi dans les muscles dystrophiques, des liens normalement assurés par le complexe de la dystrophine. L’injection de laminine-111 dans des souris mdx a permis, entre autre, l’augmentation de l'expression de l'intégrine α7β1, d’empêcher les bris du sarcolemme lors de la contraction musculaire, de restaurer un niveau normal de la créatine kinase sérique, ainsi que d’augmenter la résistance et la force dans les muscles déficients en dystrophine. Ces résultats suggèrent que l'augmentation de la laminine-111 est un potentiel traitement pour la DMD. Les chaines β1 et γ1 de la laminine sont déjà exprimées dans le muscle humain adulte, mais la chaine α1 de la laminine (Lamα1) est exprimée uniquement pendant le stade très précoce 16 cellules de l'embryogenèse. Nous avons donc développé une méthode alternative à l’injection répétée de Laminine-111 en induisant l'expression endogène du gène LAMA1, afin de reformer le complexe trimérique α1β1γ1, la laminine 111. Ceci a été réalisé avec une technologie récente, le système CRISPR/Cas9, dont la Cas9 a été désactivée (dCas9) puis couplée à un domaine d’activation de la transcription, le VP160 (dCas9-VP160). L’utilisation d’un ou plusieurs ARN guides (ARNg) a permis de cibler le promoteur du gène LAMA1. L’ARNm de Lamα1 (qRT-PCR) ainsi que la protéine (immunohistochimie et immunobuvardage) n’ont pas été détecté dans le contrôle négatif, des myoblastes murins (C2C12). Cependant, une expression significative a été observée dans ces myoblastes transfectés avec des plasmides codant pour dCas9-VP160 et un ARNg. L’analyse protéique in vivo, dans des muscles de souris électroporés avec le même plasmide, a démontré une forte augmentation de la chaine α1 de la laminine. Des augmentations plus importantes de l’ARNm de Lamα1 ont été observées en utilisant 2 ARNg, suggérant un effet synergique. L’augmentation de l’expression de Lamα1 par le système de CRISPR/Cas9 devrait être étudiée d’avantage afin de vérifier si cette stratégie pourrait s’avérer efficace dans des cas de myopathies.Laminin-111 protein complex links the extra-cellular matrix to integrin α7β1 in sarcolemma, thus replacing in dystrophic muscles links normally insured by dystrophin complex. Laminin-111 injection in mdx mouse increased expression of integrin α7β1, stabilized sarcolemma, restored serum creatine kinase to wild-type levels, and protected muscles from exercised-induced damages. These results suggested that increased Laminin-111 is a potential therapy for DMD. Laminin β1 and γ1 chains are expressed in adult human muscle but laminin α1 (LAMA1) gene is expressed only during embryogenesis. We thus developed an alternative method to Laminin-111 protein repeated administration by inducing expression of the endogenous LAMA1 gene. This was done with the CRSPR/Cas9 system, i.e., by targeting the LAMA1 promoter with one or several gRNAs and a dCas9 coupled with the VP160 transcription activation domain. LAMA1 mRNA (qRT-PCR) and proteins (immunohistochemistry and western blot) were not detected in the control C2C12 myoblasts. However, significant expression was observed in cells transfected and in mouse muscles electroporated with plasmids coding for dCas9-VP160 a gRNA. Larger synergic increases were observed by using 2 or 3 gRNAs. Increased expression of LAMA1 by the CRISPR/Cas9 system will have to be further investigated to verify whether this could be a treatment for several myopathies.
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Koenig, Michel. "Biologie moléculaire des myopathies de Duchenne de de Becker." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 1990. http://www.theses.fr/1990STR1M022.
Full text
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Julien, de Zelicourt Antoine-Jean de. "Rôle délétère de CD38 dans la myopathie de Duchenne et bénéfices thérapeutiques de son inhibition." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2019. http://www.theses.fr/2019SACLS501.
Full textAbstract:
La dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) est une maladie génétique touchant le gène DMD sur le chromosome X, entraînant l'absence d'une protéine du cytosquelette : la dystrophine. Son incidence à la naissance est d’environ un nouveau-né sur 3500 garçons. La dystrophine étant normalement exprimée dans tous les types musculaires, son absence se manifeste par une dégénérescence progressive des muscles squelettiques, lisses et cardiaque, conduisant au décès du patient vers l'âge de 30 ans par insuffisance cardiaque ou respiratoire.Deux caractéristiques majeures de la DMD sont, d'une part, une concentration calcique cytoplasmique anormalement élevée, liée notamment à une activation excessive des récepteurs à la ryanodine (RyRs) et, d'autre part, un déficit en NAD+ entraînant une altération du métabolisme énergétique. Cette dérégulation majeure de l’homéostasie calcique, couplée au déficit énergétique, conduisent in fine à la mort cellulaire.L'enzyme CD38 est justement un consommateur important de NAD+, afin de produire deux seconds messagers, le NAADP et l'ADPR cyclique, connus pour être des modulateurs positifs des RyRs. Le rôle de CD38 n’étant pas connu dans la DMD, et son activité pouvant être délétère dans cette pathologie, nous avons donc émis l'hypothèse que son inhibition pourrait être bénéfique sur ces deux aspects importants de la pathologie.Afin de vérifier cette hypothèse, nous avons réalisé plusieurs expériences chez la souris mdx, le modèle murin de la DMD. Tout d’abord, notre étude montre que CD38 est plus exprimée et plus active chez la souris mdx que chez la souris WT, renforçant ainsi l’intérêt de la cibler dans la DMD. Afin de tester le potentiel thérapeutique de notre stratégie, nous avons traités des souris mdx avec un inhibiteur de CD38. Chez les souris traitées, l’endurance est améliorée et la force musculaire restaurée. Afin d’approfondir le rôle de CD38 chez la souris mdx sur le long terme, nous avons ensuite généré un double mutant en croisant des souris mdx avec des souris CD38-/-. Nous avons d'abord évalué l'impact de CD38 sur la consommation de NAD+, en mesurant les taux de NAD+ dans différents muscles : nos résultats montrent un déficit majeur de NAD+ dans tous les tissus de souris mdx, et une restauration à des valeurs normales chez la souris mdx/CD38-/-. Nous observons également une réduction considérable de l'activité calcique spontanée dans les cardiomyocytes de souris mdx/CD38-/-, associée à une normalisation de la sensibilité des RyRs dans ces cellules. Pour étudier les effets fonctionnels de l'inhibition de CD38 dans la DMD, nous avons ensuite évalué des paramètres clés de cette pathologie. Les données obtenues chez la souris mdx/CD38-/- montrent une importante amélioration du phénotype histologique et fonctionnel, avec une réduction de la fibrose musculaire accompagnée de bénéfices importants sur les performances musculaires et respiratoires ainsi qu’un rétablissement total de la fonction cardiaque. Enfin, dans un protocole de stress bêta-adrénergique, la délétion de CD38 chez la souris mdx a également permis de prévenir les dommages histologiques et l'hypertrophie cardiaque induits par l'isoprotérénol, qui simule l'apparition d'une cardiomyopathie chez les patients atteints de DMD.Notre étude montre que CD38, plus active et plus exprimée chez la souris mdx, contribue de manière importante à son phénotype dystrophique. Une réduction de son activité permet de réduire l’excès de Ca2+, de rétablir le niveau de NAD+, et d’obtenir des bénéfices fonctionnels importants chez la souris. Enfin, notre étude sur des myotubes humains issus de patients DMD montre qu’un anticorps anti-CD38 réduit l’excès de Ca2+ libéré, soulignant ainsi que notre stratégie innovante ciblant CD38 pourrait être rapidement disponible pour les patients, grâce au développement d’anticorps thérapeutiques anti-CD38 déjà sur le marchéDuchenne muscular dystrophy (DMD) is the most common rare disease, affecting about one in 3500 newborn boys in the world. This genetic disease originates from the loss of function of a gene carried by the X chromosome, encoding dystrophin, a protein of the subsarcolemmal cytoskeleton complex. Dystrophin is normally expressed in all muscle types and its absence leads to membrane fragility. The disease is manifested by progressive degeneration of skeletal, smooth and cardiac muscles, which leads to the patient death at about 30 years of age, due to cardiac or respiratory failure.Two major consequences of the absence of dystrophin are a muscular abnormal high cytoplasmic Ca2+ concentration linked to an excessive ryanodine receptors activation, and a deficit in cellular NAD+ levels leading to impaired energetic metabolism. This Ca2+ dysregulation will induce many pathophysiological Ca2+-dependent processes which, coupled with energetic impairment, leads to muscle cells necrosis or apoptosis.Interestingly, the enzyme CD38, is an important NAD+ consumer through its production of two-second messengers, namely NAADP and cyclic ADPR, known to be positive modulators of ryanodine receptors. Actually, CD38 contribution to DMD pathophysiology is not known. We hypothesized that CD38 activity could be deleterious in this pathology, and thus that its inhibition could be beneficial in DMD.We performed experiments in the mdx mouse, which is the main DMD rodent model. The first highlight of our study is that CD38 is actually more expressed and more active in the mdx mouse compared to WT, showing its high potential as therapeutic target in DMD. We then performed as proof of concept pharmacological experiments with a CD38 inhibitor. We found that mdx mice treated displayed endurance (grid time) and strength (grip test) restored to normal values. In order to study the long term role of CD38 in the mdx mouse, we then generated double mutant by crossing mdx mice with CD38-/- mice. We first evaluated the impact of CD38 on NAD+ consumption, by measuring NAD+ levels in various muscle tissues in mdx and in mdx/CD38-/-mice. Our data showed a dramatic deficit of NAD+ levels in all muscles extracted from mdx mice, whereas NAD+ levels were fully restored to normal values in mdx/CD38-/-mice. We also observed a considerable reduction in the pathological spontaneous Ca2+ activity in cardiomyocytes extracted from mdx/CD38-/- mice, associated with a normalization of RyR sensitivity. To further evaluate the beneficial effects of targeting CD38 in DMD, we then measured key histological and functional parameters in the mdx/CD38-/- mouse. The data obtained in mdx/CD38-/- mice demonstrated that deletion of CD38 in mdx mice strongly improves the structural and functional phenotype since we have a clear reduction in the onset of fibrosis and a very significant improvement of skeletal and respiratory function and a full recovery of the cardiac function. Finally, we show that deleting CD38 in mdx mice also prevented isoproterenol-induced heart failure and hypertrophy, a protocol which simulates the onset of cardiomyopathy in DMD patients.All these data strongly support the hypothesis that CD38 is a major contributor of the DMD phenotype and that a reduction in CD38 activity could prevent or delay the cellular damages resulting from both a deficit in NAD+ levels and a disruption of Ca2+ homeostasis in DMD. Last but not least, our study shows that the treatment of human myotubes derived from DMD patient with an anti-CD38 antibody reduces excessive Ca2+ release in these cells. This result strongly suggest that our innovative strategy could be rapidly applied in DMD patients, thanks to the recent development of human therapeutic anti-CD38 antibodies
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Duprès, Alban. "Interface cerveau-machine hybride pour pallier le handicap causé par la myopathie de Duchenne." Thesis, Lille 1, 2016. http://www.theses.fr/2016LIL10148/document.
Full textAbstract:
La palliation du handicap moteur est la principale application actuelle des interfaces cerveau-machine (ICM). Cette thèse décrit une interface cerveau-machine hybride, conçue spécifiquement pour des patients souffrant de myopathie de Duchenne. Notre ICM hybride exploite les signaux issus de capteurs électroencéphalographiques (EEG), électromyographiques (EMG), et de joysticks. Leur traitement nous permet de détecter un mouvement ou une intention de mouvement à différents niveaux de la commande motrice. Les signaux joysticks sont utilisés tant que le patient est capable de les activer, puis à mesure que la motricité se dégrade avec l’évolution de la maladie, l’ICM hybride prend en compte les signaux EMG et enfin les signaux EEG. Nous avons développé une méthode originale de traitement des signaux EEG, qui permet à un expert humain de sélectionner les valeurs caractéristiques qui lui semblent les plus discriminantes. Les performances de cette méthode ont été évaluées sur une base de données qui sert de référence dans la communauté ICM, ainsi que sur des données que nous avons enregistrées sur des sujets sains. Notre ICM hybride permet le contrôle de trajectoire d’un mobile à partir de trois actions, correspondant à un mouvement ou une intention de mouvement de la main droite, de la main gauche, et des deux mains simultanément. Un degré de liberté supplémentaire peut être envisagé en intégrant la détection d’une intention de mouvement des piedsBrain-machine interfaces (BMI) have been considered since many years as the most promising approach to the palliation of severe motor handicap. This thesis describes a hybrid brain-machine interface, designed specifically for patients suffering from Duchenne muscular dystrophy. Our hybrid BMI uses signals recorded by electroencephalography (EEG), electromyography (EMG), and joystick sensors. Signal processing enables the hybrid BMI to detect a movement or movement intent at different levels of the motor command chain. Joysticks are used as long as the patient is able to activate them, then when motricity deteriorates with the disease evolution, the hybrid BMI takes EMG signals into account and finally EEG signals. We have developed an original method for processing EEG signals, allowing the system to select features that a human expert considers as the most discriminant. Performance has been assessed on a data set used as a reference in the BMI community, as well as on data that we have recorded from healthy subjects in our laboratory. Our hybrid BMI controls the trajectory of a moving object – either real or virtual – through three actions, corresponding to a movement or an intent of movement of the right hand, the left hand, or both hands simultaneously. An additional degree of freedom can be considered by integrating the detection of attempted feet movements
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LABORIE, SOPHIE. "Les dystrophinopathies, a l'exception de la myopathie de duchenne : a propos de quatre cas." Toulouse 3, 1994. http://www.theses.fr/1994TOU31538.
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Hankard, Régis. "Etude de la depense energetique chez l'enfant atteint de myopathie de duchenne de boulogne." Lille 2, 1993. http://www.theses.fr/1993LIL2M334.
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Matecki, Stefan. "Muscles respiratoires et myopathie de Duchenne : de la physiologie appliquée à la physiologie cellulaire." Montpellier 1, 2002. http://www.theses.fr/2002MON1T005.
Full textAbstract:
La baisse severe et progressive de la force des muscles respiratoires des enfants porteurs d'une myopathie (dmd) represente le probleme majeur de ces patients. [. . . ] notre premier objectif a ete de developper des mesures standardisees de la fonction des muscles respiratoires. Grace a ceux-ci nous avons pu mettre en evidence qu'un programme de reentrainement de ces muscles permettait une amelioration de leur endurance. Nous avons ensuite essaye de comprendre les mecanismes de cette amelioration en etudiant l'influence de l'exercice sur la fibre musculaire dystrophique. [. . . ] afin de mieux comprendre les eventuelles interactions entre la malnutrition decrite chez les enfants atteints de myopathie et l'effet d'un reentrainement sur l'endurance des muscles respiratoires, nous avons voulu preciser l'effet d'une denutrition prolongee sur la respiration mitochondriale du diaphragme de rat. Nous avons observe que 5 semaines de denutrition alterent l'ensemble de la respiration mitochondriale. Ce travail met donc l'accent sur l'effet benefique du reentrainement des muscles respiratoires qui semble passer par un mecanisme regulateur des proteines associees a la dystrophine et sur l'importance de la denutrition qui peut alterer cet effet.
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Nicolas, Aurélie. "Etude in silico de dystrophines tronquées dans les myopathies de Duchenne et de Becker." Rennes 1, 2012. https://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01343326.
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La dystrophine est une protéine impliquée dans les myopathies de Duchenne (DMD) et de Becker (BMD). Malgré les nombreuses recherches cliniques et thérapeutiques effectuées sur la DMD, le rôle moléculaire précis de la dystrophine est largement méconnu rendant la corrélation entre génotype et phénotype difficile à établir. Elle est pourtant indispensable pour proposer de nouvelles thérapies aux patients. C'est pourquoi nous proposons d'étudier la fonctionnalité des dystrophines mutées exprimées chez les patients BMD afin de la corréler aux phénotypes cliniques. La base de données eDystrophin permet d’avoir un aperçu global des phénotypes associés à ces mutations ainsi qu’une vue d’ensemble des conséquences de chaque mutation répertoriée sur les propriétés d’interactions et la structure 3D de la protéine par l’intermédiaire de modèles par homologie. De plus, La majorité des mutations répertoriées sont des délétions d’exons entiers tronquant une partie du domaine central composé de 24 répétitions homologues à la spectrine. L’utilisation combinée des informations répertoriées dans eDystrophin, de la modélisation et de la dynamique moléculaire a mis en évidence deux types de structures à la jonction des délétions : des répétitions hybrides conservant la structure en faisceau de trois hélices des répétitions natives et des répétitions fracturées ne conservant pas cette structuration. Les analyses des dynamiques moléculaires indiquent que les répétitions fracturées sont globalement plus délétères que les répétitions hybrides. Une première corrélation a pu être établie avec les phénotypes cliniques d’une cohorte de patientsDystrophin is involved in Duchenne (DMD) and Becker (BMD) Muscular Dystrophies. A lot of clinical and therapeutic researches are published on DMD but precise molecular role of dystrophin is largely unknown, and consequently the correlation between genotype and phenotype is difficult to establish. However, this relation is essential to offer new therapies to patients. That is why we propose to study function of BMD patient mutated dystrophin to correlate with clinical phenotypes. The database eDystrophin provides an overview of phenotypes associate with these mutations and consequences of each mutation on function and 3D-structures of mutated protein through homology models. The great majority of these mutations are exon deletions located in the central rod domain composed by 24 spectrin-like repeats. The use of eDystrophin, models and molecular dynamics highlights two types of structures at the deletion junction: hybrid repeats that reconstitute a triple coiled-coil like native repeats and fractional repeats that do not reconstitute this structure. Molecular dynamics analysis reveals that fractional repeats may be more deleterious than hybrid repeats A first correlation between clinical phenotypes and the protein structure is established
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Gayraud, Jérôme. "Approche pharmacologique dans la myopathie de Duchenne : nécessité d'un pré-requis sur la fonction respiratoire." Montpellier 1, 2007. http://www.theses.fr/2007MON1T042.
Full textAbstract:
La myopathie de Duchenne, DMD, est la plus grave et la plus fréquente des dystrophies musculaires. La fonction des muscles respiratoires joue un rôle clé dans cette pathologie puisque dans 70% des cas, le décès du patient survient à la suite d'une défaillance respiratoire. Ces dernières années, des progrès importants ont été réalisés concernant les différentes thérapeutiques de cette pathologie. Pour appréhender les effets de tout essai thérapeutique, notre premier objectif a été d'apprécier l'évolution longitudinale de la fonction respiratoire de sujets atteints de DMD. Cette étude longitudinale montre qu'à un stade précoce, la pression maximale inspiratoire (PImax), reflet de la force des muscles inspiratoires, est un meilleur marqueur de l'atteinte respiratoire, mais qu'à un stade avancé, les paramètres ventilatoires fournissent plus d'informations au sujet de la progression de la maladie et sont plus faciles à mesurer. Ces résultats ont un intérêt clinique important dans le suivi des enfants DMD. Cependant, avant d'appliquer une thérapeutique chez le patient DMD, il faut tester son efficacité sur le modèle anima de cette pathologie, la souris mdx. Notre second objectif a donc été d'étudier l'évolution des paramètres respiratoires de la souris mdx en fonction de l'âge au repos et en réponse à un stimulus hypercapnique qui représente la force des muscles respiratoires. Nous montrons que la réponse à l'hypercapnie diminue avec l'âge parallèlement aux changements histologiques des muscles respiratoires. Parmi les thérapeutiques pharmacologiques, les donneurs de NO, comme la L-Arginine, entraînent une amélioration de la fonction contractile du diaphragme. Cependant, l'augmentation du NO peut entraîner des effets bénéfiques mais aussi délétères. Notre troisième objectif a donc été d'évaluer les effets d'un traitement à la L-Arginine sur les mécanismes cellulaires impliqués dans le processus physiopathologique. Cette étude montre que l'augmentation du NO est associée à une amélioration du phénotype dystrophique du diaphragme de la souris mdx, de la réponse au stress mécanique et de l'homéostasie calcique, sans aucun effet délétère sur la respiration mitochondriale, le stress oxydant et l'apoptose. Ce travail est un pré-requis indispensable compte tenu des nouvelles thérapeutiques qui pourront être appliquées dans un avenir proche.
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Carre-Pierrat, Maïté Ségalat Laurent. "Recherche de gènes et de molécules freinant la dégénérescence musculaire chez deux modèles de la myopathie de Duchenne le nématode Cænorhabditis elegans et la souris mdx /." [s.l.] : [s.n.], 2006.
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Grisoni, Karine. "Analyse génétique du complexe de la dystrophine chez le nématode caenorhabditis elegans." Lyon 1, 2003. http://www.theses.fr/2003LYO10128.
Full textAbstract:
Le nématode Caenorhabditis elegans possède un homologue de la dystrophine (DYS-1), produit du gène muté dans la myopathie de Duchenne. Chez les mammifères, cette protéine musculaire est associée à un complexe protéique, le dystrophin glycoprotein complex (DGC). Nous présentons d'abord un modèle de myopathie dystrophine dépendant chez C. Elegans obtenu en combinant des mutations des gènes dys-1 et hlh-1, homologue du facteur myogénique MYO-D. La surexpression de dyc-1 chez ce nématode myopathe réduit nettement les défauts musculaires. Dyc-1 code pour un homologue de la protéine mammifère CAPON, partenaire de l'enzyme nNOS. Nous montrons que chez la souris, CAPON est exprimée dans les muscles squelettiques où son expression est modulée par nNOS, au cours des processus de croissance, développement et régénérescence. Enfin, nous montrons par des arguments génétiques et biochimiques l'existence d'un complexe de la dystrophine chez C. Elegans similaire au DGC mammifère.
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Agudelo, Daniel. "Développement d'un traitement thérapeutique pour la dystrophie musculaire de Duchenne à l'aide des protéines TALENs ou Cas9." Master's thesis, Université Laval, 2017. http://hdl.handle.net/20.500.11794/27455.
Full textAbstract:
La dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) est une maladie héréditaire liée au chromosome X. Elle est principalement causée par la délétion d’un ou plusieurs exons du gène DMD, ce qui entraine un changement du cadre de lecture et l’obtention d’une protéine dystrophine tronquée et inactive. L’édition de génome par les systèmes TALEN ou CRISPR/Cas9 est devenue dans les dernières années un grand espoir pour le développement de traitements pour ce type de maladie. Dans ce travail, nous illustrons la faisabilité d’un traitement pour la DMD en utilisant les protéines TALENs ou le complexe CRISPR/Cas9 purifiés. Ces protéines sont donc transduites afin de générer des cassures double brin dans l’ADN génomique. Ainsi, la correction de cette mutation par recombinaison non homologue pourra corriger le cadre de lecture du gène codant pour la protéine dystrophine, produisant ainsi une protéine tronquée, mais active, telle que pour les patients Becker. Bien que les protéines TALENs montrent une bonne activité in vitro, l’efficacité de coupure n’a pas pu être observée dans les cellules, ce qu’indiquerait un défaut lors de la transduction protéique. Toute fois, dans le cas du système CRISPR/Cas9, l’essai surveyor a permis d’observer les produits de coupure attendus lors de la transduction de ce système avec des lipides cationiques. Ceci indique donc que le système CRISPR/Cas9 peut être utilisé de façon efficace sous forme protéique tout en ciblant le gène DMD. Finalement, l’utilisation de ce système a été confirmée in vivo chez la souris hDMD, où il a été possible d’observer la présence des délétions ciblées. La transduction de protéines en utilisant le système CRISPR/Cas9 illustre donc une approche thérapeutique prometteuse dans le but de développer un traitement pour les maladies génétiques.Duchenne muscular dystrophy (DMD) is an hereditary disease linked to chromosome X. It is mainly caused by the deletion of one or more exons of the DMD gene, which causes a change in the reading frame, obtaining a truncated and inactive protein. Genome editting by TALEN or CRISPR/cas9 systems has become in the recent years a powerfull tool for developing treatments for this type of disease. However, the use of plasmids encoding these systems leads to a prolonged expression, which may increase the off-target risk. Thus, it is important to note that today, viruses vectors remain the most effective delivery system for these plasmids, which always entails a risk of integration into the genome, increasing the probability of side effects for a treatment. In this work, we illustrate the development of a genome edditing treatment for DMD, but using purified protein TALENs or Cas9. These proteins are transduced in order to generate double strand breaks in the genomic DNA. Thus, the correction of this mutation by non-homologous end joining can correct the reading frame of the gene, producing a functional Dystrophin protein, as for Becker patients. Although TALEN proteins show a good activity in vitro, the cut-effectiveness has not been observed in the cells. It would indicate a defect in the protein transduction. However, in the case of CRISPR/cas9 system, we have obtained the expected cleavage products during the transduction with cationic lipids in both cell lines. These results are similar with those obteined when the plasmids coding for both systems were transfected. This indicates that the CRISPR/cas9 system can be used effectively in protein form while targeting a gene specifically. Protein therapy using the CRISPR/cas9 system can be a promising method in order to develop an alternative treatment for genetic diseases. Finally, in order to confirm that this system can be used in vivo, we will soon test it in the hDMD mouse model, containing the complete human DMD gene.
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Relizani, Karima. "The function of Activin receptor type IIB signaling in adult skeletal muscle." Thesis, Paris 6, 2014. http://www.theses.fr/2014PA066284/document.
Full textAbstract:
La myostatine, un facteur de croissance de la famille des TGF-β dont la voie de signalisation agit via l'Activine récepteur de type IIB (ActRIIB), a été identifié comme un régulateur négatif important de la croissance du muscle squelettique. Toutefois, son effet sur le métabolisme énergétique musculaire et sur la fonction du muscle reste largement inexploré. Dans mes travaux de thèse, j'ai étudié la conséquence de l'inhibition de la voie de signalisation ActRIIB sur le métabolisme musculaire, et ceci dans deux modèles expérimentaux, i) les souris constitutives knock-out myostatine et ii) après l'administration pharmacologique de l'ActRIIB soluble chez les souris adultes. Nos résultats démontrent que les souris knock-out myostatine développent une forte fatigabilité, une diminution de la respiration mitochondriale et une signature moléculaire qui tend vers un métabolisme glycolytique. Comme ces résultats peuvent s'expliquer par une conversion congénitale vers des fibres musculaires glycolytiques rapides chez ces souris, j'ai étudié l'effet de l'inhibition de la voie de signalisation ActRIIB chez la souris adulte. J'ai fourni des preuves, notamment pour la souris mdx, modèle animal de la myopathie de Duchenne, que l'inhibition de l'ActRIIB, malgré une distribution de typage de fibres qui reste normale, conduit à une intolérance extrême à l'exercice. Cela a été associé à une augmentation pathologique des taux de lactate sérique ainsi que des caractéristiques prononcées de la myopathie. Plus en détail, l'analyse biochimique et moléculaire montre que l'inhibition de la voie de signalisation ActRIIB diminue l'expression de la protéine porine, réduit la capillarisation musculaire et provoque une déficience de la phosphorylation oxydative. Je montre aussi que l’ActRIIB régule les composants clés du métabolisme musculaire, comme PPARß, Pgc1α, et PDK4, optimisant ainsi les différentes composantes du métabolisme énergétique musculaire. En somme, mes résultats démontrent que l’inhibition de l’ActRIIB provoque une myopathie métabolique, en particulier dans le contexte d’un muscle dystrophique, chez lequel un stress métabolique sous-jacent existe déjà. En conclusion, je ne peux pas recommander l'utilisation de l’inhibition de la voie de signalisation de l’ActRIIB comme stratégie thérapeutique pour les maladies musculairesMyostatin, a growth factor of the TGF-β family that signals through the activin receptor-IIB (ActRIIB), has been identified as an important negative regulator of skeletal muscle growth. However, its effect on muscle energy metabolism and energy dependent muscle function remains largely unexplored. I here investigated the consequence of impaired ActRIIB signaling for muscle metabolism in two experimental models, i) the constitutive myostatin knockout mice and ii) following pharmacological administration of soluble ActRIIB in adult mice. Our results demonstrate that myostatin knockout mice develop a strong fatigability, a decrease in mitochondrial respiration and a molecular signature towards a glycolytic metabolism. As these findings may be explained by the congenital shift towards fast glycolytic muscle fibers in these mice, I investigated the effect of inhibition of ActRIIB signaling in adult mice. I provide evidence, notably for the mdx mouse, model for Duchenne muscular dystrophy, that ActRIIB blockade, despite an unchanged fiber type distribution, leads to extreme exercise intolerance. This was associated with pathologically increased serum lactate levels and myopathic features. In-depth biochemical and molecular analysis demonstrates that blockade of ActRIIB signaling down-regulates the ATP channel porin, reduces muscle capillarization and leads to a consecutive deficiency in oxidative phosphorylation. I also show that ActRIIB regulates key determinants of muscle metabolism, such as Pparβ, Pgc1α, and Pdk4, thereby optimizing different components of muscle energy metabolism. Taken together, my results demonstrate that ActRIIB blockade provokes a metabolic myopathy, especially in the context of dystrophic muscle, in which an underlying metabolic stress already exists. In conclusion, I cannot recommend the use of ActRIIB signaling blockade as a therapeutic strategy for muscle diseases
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Lacourpaille, Lilian. "Caractérisation des propriétés contractiles et élastiques du muscle : application à l'évaluation des patients atteints de la dystrophie musculaire de Duchenne." Nantes, 2014. http://www.theses.fr/2014NANT3027.
Full textAbstract:
La production de force musculaire implique des processus électro-chimiques et mécaniques. Les études réalisées sur des modèles animaux indiquent que ces mécanismes peuvent être altérés par certaines pathologies neuromusculaires. Toutefois, peu d’études se sont attachées à les caractériser in vivo chez des patients atteints de la dystrophie musculaire de Duchenne (DMD). Ces travaux visent à évaluer les effets de la DMD sur les propriétés contractiles (délai électromécanique) et élastiques (raideur) du muscle. Dans une première partie nous avons développé la technique d’évaluation du délai électromécanique par échographie ultrarapide chez des sujets sains. Plus précisément, nous avons quantifié l’influence de la tension passive et de l’intensité de stimulation électrique musculaire sur les processus électrochimiques et mécaniques impliqués dans le délai électromécanique. L’utilisation de cette technique a notamment permis de mieux comprendre les modalités de transmission de la force musculaire au cours d’une contraction musculaire électriquement évoquée. Dans la deuxième partie de ce travail nous nous sommes attachés à caractériser l’effet de la DMD sur les propriétés contractiles et élastiques du muscle. Nos résultats indiquent que le délai électromécanique du biceps brachii est augmenté chez les patients atteints de la DMD. À partir des mesures échographiques nous avons pu attribuer ce résultat à un allongement du délai entre le début de mouvement des fascicules musculaire et le début de production de force. Ce résultat montre une détérioration de la transmission de force musculaire qui contribue à la perte de force des patients. Enfin, nous avons mis en évidence une augmentation « généralisée » de la raideur musculaire chez les patients atteints de la DMD (i. E. , 5 des 6 muscles testés). Cette augmentation de raideur était corrélée à l’âge du patient (i. E. , stade de la pathologie) uniquement pour le gastrocnemius medialis. Ces travaux expérimentaux apportent de nouvelles informations sur les mécanismes participant à la réduction des capacités de production et de mobilité des patients atteints de la DMD. Des études longitudinales permettront de déterminer si ces techniques pourraient bénéficier au suivi des patients et plus particulièrement au cours des essais cliniquesMuscle force production involves electro-chemical and mechanical processes. Animal studies showed that some of these processes are altered by neuromuscular pathologies. Only a few studies have characterized such processes in vivo patients with Duchenne muscular dystrophy (DMD). This work aim to assess the effect of DMD on both contractile (electromechanical delay) and elastic properties (stiffness) of muscle. The first part of this work focused on the development of techniques to assess the electromechanical delay using ultrafast ultrasound in healthy participants. More precisely, we quantify the influence of passive tension and electrical stimulus intensity on both electro-chemical and mechanical processes involved in electromechanical delay. This technique provides especially a better understanding of the mechanisms involved in muscle force transmission during electrically evoked muscle contraction. During the second part of this work we characterized the effect of DMD on both muscle contractile and elastic properties. Our results showed that biceps brachii electromechanical delay is increased in patients with DMD. Using ultrafast ultrasound we imputed this result to a lengthened of the delay between the onset of muscle fascicles motion and the onset of force production. It indicated that the muscle force transmission is altered and it contributes to the decrease in muscle force of DMD patients. Finally, we found a “widespread” increase of muscle stiffness inpatients with DMD (five out of the six tested muscles). This increase was positively correlated to the age of the patients (i. E. , stage of the disease) only for the gastrocnemius medialis. This series of studies provides novel insights into the mechanisms contributing to the decrease in force production and mobility in DMD patients. Further experiments are necessary to determine the sensitivity of these methods to monitor patients, especially during clinical trials
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Tuffery-Giraud, Sylvie. "Les myopathies de Duchenne et de Becker : contribution à l'étude de la pathologie moléculaire du gène de la dystrophine (délétions et mutations ponctuelles)." Montpellier 1, 1994. http://www.theses.fr/1994MON1T031.
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Gilgenkrantz, Hélène. "Pathologie moleculaire des myopathies de duchenne et de becker : contribution a l'etude des deletions." Lyon 1, 1990. http://www.theses.fr/1990LYO1M062.
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Iyombe, Jean-Paul, and Jean-Paul Iyombe. "Correction du gène de la dystrophine avec les nucléases à doigts de zinc." Master's thesis, Université Laval, 2013. http://hdl.handle.net/20.500.11794/24598.
Full textAbstract:
La thérapie génique sans transfert de gène utilisant les endonucléases de restriction spécifiques est une des approches thérapeutiques qui visent à la mise au point d’un traitement curatif de la dystrophie musculaire de Duchenne (DMD). Afin de corriger le gène de la dystrophine avec les nucléases à doigt de zinc (ZFNs) en ciblant l’exon 50, nous avons produit les protéines ZFNs dans les bactéries et les avons purifiées. Les résultats obtenus après les essais in vitro montrent que les ZFNs produites reconnaissent d’une manière spécifique la séquence cible située au niveau de l’exon 50 du gène DYS et peuvent y générer d’une manière précise les coupures double-brin. Ils montrent également que les protéines ZFNs produites peuvent être transfectées, avec ou sans agent de transfection, dans les myoblastes des patients dystrophiques Duchenne en culture.La thérapie génique sans transfert de gène utilisant les endonucléases de restriction spécifiques est une des approches thérapeutiques qui visent à la mise au point d’un traitement curatif de la dystrophie musculaire de Duchenne (DMD). Afin de corriger le gène de la dystrophine avec les nucléases à doigt de zinc (ZFNs) en ciblant l’exon 50, nous avons produit les protéines ZFNs dans les bactéries et les avons purifiées. Les résultats obtenus après les essais in vitro montrent que les ZFNs produites reconnaissent d’une manière spécifique la séquence cible située au niveau de l’exon 50 du gène DYS et peuvent y générer d’une manière précise les coupures double-brin. Ils montrent également que les protéines ZFNs produites peuvent être transfectées, avec ou sans agent de transfection, dans les myoblastes des patients dystrophiques Duchenne en culture.
Gene therapy without gene transfer using specific restriction endonucleases is a therapeutic approaches aimed at the development of a cure for Duchenne muscular dystrophy (DMD). To correct the dystrophin gene with zinc finger nucleases (ZFNs) targeting exon 50of DYS gene, we produced ZFNs proteins in bacteria and purified them. The results obtained after in vitro assays show that ZFNs produced specifically recognize a target sequence located in exon 50 of the gene DYS and can be generated in a precise manner the double strand breaks. They also show that ZFNs produced proteins can be transduced with or without agent transduction, in cultured myoblasts of patients’ Duchenne dystrophy.
Gene therapy without gene transfer using specific restriction endonucleases is a therapeutic approaches aimed at the development of a cure for Duchenne muscular dystrophy (DMD). To correct the dystrophin gene with zinc finger nucleases (ZFNs) targeting exon 50of DYS gene, we produced ZFNs proteins in bacteria and purified them. The results obtained after in vitro assays show that ZFNs produced specifically recognize a target sequence located in exon 50 of the gene DYS and can be generated in a precise manner the double strand breaks. They also show that ZFNs produced proteins can be transduced with or without agent transduction, in cultured myoblasts of patients’ Duchenne dystrophy.
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Quenneville, Simon. "Vers une thérapie génique ex vivo de la dystrophie musculaire de Duchenne : approches lentivirale et intégrase PhiC31." Thesis, Université Laval, 2007. http://www.theses.ulaval.ca/2007/24614/24614.pdf.
Full textAbstract:
La dystrophie musculaire de Duchenne est une maladie génétique liée au chromosome X qui atteint un garçon sur 3 500. Cette maladie est caractérisée par l'absence de dystrophine à la surface des fibres musculaires. Sans cette protéine, les fibres se brisent plus fréquemment et une faiblesse musculaire progressive apparait. Les patients décèdent généralement au début de la vingtaine. Il n'y a présentement aucun traitement pour cette pathologie. La greffe de cellules myogéniques est une thérapie possible, mais se heurte à un rejet par le système immunitaire du patient. Pour contourner ce problème, il est possible de développer une thérapie génique ex vivo, basée sur la greffe de cellules autologues modifiées génétiquement. Malheureusement, aucune technique efficace de modification génétique des cellules n'était disponible il y a quatre ans.
Nous avons testé deux nouvelles techniques de modification génétique. Une première est non virale et la seconde utilise les lentivirus. La première consiste à transfecter un plasmide d'expression de la dystrophine par Nucléofection. Pour intégrer les séquences, un second plasmide, codant pour l'intégrase PhiC31, est aussi introduit dans les cellules. Cette technique nous a permis de stabiliser des plasmides allant de 7 kb à 21 kb, ce qui en fait les plus grosses séquences jamais stabilisées dans des cellules de culture primaire humaine. Cette expression a pu être détectée dans les fibres musculaires après une greffe. Nous avons aussi utilisé des lentivirus pour effectuer une modification génétique des cellules. Ce vecteur viral est très efficace pour introduire des cassettes d'expression pour des versions tronquées de la dystrophine. L'expression de cette dystrophine est détectable in vitro, mais aussi in vivo après la transplantation. De plus, une cassette servant à faire le saut d'exon thérapeutique a aussi été introduite dans des cellules myogéniques et a permis de faire exprimer une dystrophine presque complète par des cellules issues de patients DMD. Cette expression a aussi été détectée dans des modèles murins. Ces travaux constituent une preuve de principe de la faisabilité d'une thérapie génique ex vivo pour la DMD. Plusieurs améliorations restent à apporter, mais il semble que ces travaux laissent croire qu'un essai clinique sera réalisable.Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a severe X-linked muscle genetic illness that afflicts one boy per 3 500. Cell therapy is a possible cure for this illness that usually kills patients around age 25. Transplantation of the heterologus myogenic cells is, however, restricted by the immune rejection by the patient. Ex vivo gene therapy offers an evasion to this problem. Introduction of the therapeutic gene into the patient’s own myogenic precursor cells, followed by transplantation is the base of this therapeutic. Four years ago, no efficient procedure to stably modify myogenic cells was available. New gene introduction techniques were thus tested in the present thesis. The first one is a non-viral method. We used a new transfection technology (Nucleofection) to introduce plasmid DNA coding for dystrophin with success. To stabilize the expression, human myogenic cells were co-nucleofected with a PhiC31 expressing plasmid. This integrase was capable of stabilising expression plasmids ranging from 7 kb to 21 kb. This very large sequence was the largest plasmid ever stabilised into human primary cultured cells. The presence of full-length dystrophin protein was detected in vitro and confirmed in vivo, after the transplantation of the myogenic precursor. Another technique was used: the lentiviral vectors. These viral vectors were designed to deliver an expression cassette for a truncated version of the dystrophin gene. The viral vector was efficient at modifying the cells. The expression was shown in vitro and in vivo after the transplantation of the modified cells. The lentiviral vectors were also essayed to deliver a U7 exon skipping cassette into DMD cells. It was then possible to demonstrate that this introduction led to the expression of a quasi normal dystrophin protein in vitro. The expression was also shown in vivo after the transplantation into SCID mice model. A non-viral approach combining nucleofection and the PhiC31 integrase may eventually permit safe auto-transplantation of genetically modified cells. The utilisation of lentiviral vectors also provided evidences that an ex vivo gene therapy is possible for DMD. We believe these results are paving the way to an eventual clinical trial for ex vivo gene therapy.
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Chaigneau, Anne. "Aspects pragmatiques du langage et dystrophie musculaire de Duchenne : étude comparative des interactions verbales en milieu familial." Poitiers, 1999. http://www.theses.fr/1999POIT5006.
Full text
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Sanson, Mathilde. "Recherche de nouvelles cibles thérapeutiques dans la myopathie de Duchenne basée sur des miRNAs dérégulés nouvellement identifiéss." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2018. http://www.theses.fr/2018SACLE047.
Full textAbstract:
La myopathie de Duchenne (DMD) est une maladie pédiatrique incurable causée par l’absence ou l’expression fortement réduite de la dystrophine. La DMD touche un garçon sur 3500-5000 et cause leur décès par arrêt cardio-respiratoire, le plus souvent à la troisième ou quatrième décennie de leur vie. Les myofibres du muscle dystrophique subissent des cycles successifs de dégénérescence et régénérescence, jusqu’à l’épuisement du potentiel régénératif. Les tissus musculaires sont remplacés par des tissus fibrotiques et adipeux. Actuellement, aucune solution médicale satisfaisante n’existe pour traiter la DMD. Le traitement de routine consiste en une administration de glucocorticoïdes. Les futures thérapies développées incluent, en particulier, le transfert de gène et le saut d’exon. Cependant, les résultats des essais cliniques ces dernières années ont indiqué que la restauration de l’expression de la dystrophine n’est pas probablement pas suffisante. L’une des hypothèses est que la restauration de l’expression de la dystrophine ne suffit pas à inverser une pathologie dystrophique à un stade avancé. De ce fait, il est nécessaire d’étudier les mécanismes, l’impact et la réversibilité de pathologies secondaires. Dans ce contexte, la première partie de ma thèse a consisté à sélectionner un miRNA dérégulé d’un intérêt particulier, impliqué dans une pathologie secondaire de la DMD. Des travaux préliminaires de mon groupe de recherche (avant mon arrivée) ont identifié un grand nombre de miRNAs dérégulés dans la DMD. Dans la première partie de ma thèse, j’ai quantifié certain de ces miRNAs dans des biopsies musculaires du modèle GRMD (model canin de la DMD) et sélectionné miR-379, un miRNA normalisé par les glucocorticoïdes selon nos données préliminaires. J’ai ensuite identifié et validé EIF4G2 comme cible directe de miR-379. EIF4G2 est un facteur de traduction impliqué dans le contrôle cellulaire de l’apoptose, de la différenciation et de l’activité mitochondriale. J’ai ensuite identifié une cible traductionnelle d’EIF4G2, nommée ici ProtX, une protéine connue pour être impliquée dans l’activité mitochondriale. Pour des raisons de confidentialité et de brevetabilité, l’identité exacte de cette protéine ne peut pas être révélée dans ce résumé. J’ai ensuite démontré dans des myoblastes humains et des cellules iPS que miR-379, EIF4G2 et ProtX sont impliqués dans la régulation de l’activité mitochondriale et le contrôle de l’engagement cellulaire (des cellules iPS) et la différenciation myogénique. Il est intéressant de noter que ProtX a été envisagé précédemment comme un modifier potentiel dans la DMD. Je présente dans cette thèse une voie de signalisation qui pourrait expliquer l’action des glucocorticoïdes sur les dysfonctionnements mitochondriaux chez les patients DMD. L’un des futurs objectifs de mon groupe de recherche est l’évaluation dans des modèles de la DMD du potentiel thérapeutique de la surexpression de ProtXDuchenne Muscular Dystrophy (DMD) is a paediatric muscle disease that affects one in 3500-5000 boys and causes death by cardio-respiratory failure, most often at the third or fourth decade of life. DMD is caused by the lack or the drastically reduced expression of dystrophin. The myofibers in the dystrophic muscle undergo successive cycles of degeneration and regeneration, until exhaustion of the regenerative potential. The degenerated contractile tissues are replaced by fatty fibrotic tissue. At present, there is no satisfactory medical solution for the DMD disease. Routine treatment is of glucocorticoid drugs. Therapeutic development effort is focused in particular on gene replacement and exon skipping technologies. However, disappointing results from recent years’ clinical trials employing these experimental therapies indicated that restored dystrophin expression might not be enough. One hypothesis is that the restoration of dystrophin expression is not enough for the reversion of an advanced-stage dystrophic pathology. Accordingly, in order to propose complementary therapeutic solutions, it is necessary to investigate the mechanisms, impact and reversion of secondary pathologies. In this context, the first part of my thesis comprised a screening for miRNAs that might be involved in DMD secondary pathology. Early work in our research group (before my arrival) identified a large number of dysregulated miRNAs in DMD. Thus, I profiled some of these miRNAs in muscle biopsies of the GRMD (a dog model for DMD), and selected for further investigations miR-379, which is, according our previous data in the group, glucocorticoid responsive in DMD. I then identified and validated the EIF4G2 gene as a direct target of miR-379. EIF4G2 is a translation factor that is involved in the control of apoptosis differentiation, and mitochondrial activities. I then identified a translational target of EIF4G2, named here ProtX, known to be involved in mitochondrial activity. For confidentiality reasons, the exact identity of this protein cannot be disclosed yet. In a set of experiments in human myoblast and iPS cells, I then demonstrated that miR-379, EIF4G2 and ProtX are involved in the tuning of mitochondrial activity and in the control of cellular engagement (of IPS cells) and myogenic differentiation. Interestingly, ProtX has been suggested in the past as a potential modifier in the DMD disease. Taken together, I am presenting here a signalling pathway that might link the glucocorticoid response to mitochondrial dysfunction in DMD patients. A future goal of our research group is the evaluation of the therapeutic potential thus signalling pathway in the DMD disease in animal model experimentation
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Mills, Philippe. "Utilisation de l'IGF-1 et d'un dérivé peptidique synthétique pour favoriser le succès d'un traitement contre la dystrophie musculaire de Duchenne." Thesis, Université Laval, 2007. http://www.theses.ulaval.ca/2007/24604/24604.pdf.
Full textAbstract:
La dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) est une maladie dégénérative qui touche les jeunes garçons. L’absence de dystrophine, une protéine présente à la surface des fibres musculaires, entraîne la faiblesse des muscles caractéristique de la maladie. Plusieurs approches sont envisagées pour ralentir la progression mais aussi traiter la myopathie de Duchenne. La transplantation de cellules myogéniques ou myoblastes est une avenue qui permet de réintroduire la dystrophine dans les muscles atteints. La procédure consiste à injecter des cellules saines, contenant le gène normal de la dystrophine, aux patients. Malheureusement, certains problèmes sont associés avec cette approche. En effet, une perte cellulaire massive est observée dans les jours suivant la greffe. Ce déficit quantitatif peut être en partie compensé en injectant de grandes quantités de myoblastes. Par ailleurs, les cellules myogéniques se dispersent peu lors de leur injection dans le muscle. Il est donc nécessaire de faire de multiples injections rapprochées afin de traiter un muscle entier. Les facteurs de croissance sont de petits peptides qui peuvent moduler plusieurs activités cellulaires. Le facteur de croissance similaire à l’insuline (IGF-1) favorise la prolifération, la différenciation et la survie des cellules myogéniques. L’IGF-1 possède plusieurs isoformes comme le facteur de croissance associé au dommage mécanique (MGF). Les travaux présentés dans cette thèse démontrent qu’un peptide synthétique contenu dans le MGF favorise, quant à lui, la prolifération des myoblastes. De nouvelles fonctions pro-migratoires furent démontrées pour les deux peptides. En effet, l’IGF-1 et le peptide synthétique MGF sont en mesure de promouvoir la migration des cellules myogéniques humaines in vivo en modulant certains systèmes protéolytiques. D’autre part, mes travaux ont aussi démontré que le peptide MGF contribue au succès de la transplantation lorsqu’il est administré par injections intramusculaires ou sous-cutanées. Cette amélioration est possiblement causée par la capacité pro-mitogénique du peptide MGF qui compenserait un peu la perte cellulaire suite à l’injection. L’utilisation de l’IGF-1 et/ou du peptide synthétique MGF pourrait donc aider à diminuer le nombre d’injections requises pour traiter un muscle tout en contribuant au succès de la transplantation de myoblastes chez des patients atteints de dystrophie musculaire de Duchenne.Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a degenerative disease that affects young boys. The absence of the dystrophin, a protein located on the surface of the muscular fibers, contributes to muscle weakness that characterizes the disease. Many approaches are considered not only to slow down the progression but also to treat Duchenne myopathy. Myogenic cell or myoblast transplantation is an avenue which enables the reintroduction of the normal dystrophin gene in the affected muscles. The procedure consists of injecting normal cells, which contain the normal dystrophin gene, to the patients. Unfortunatly, some problems are associated with this approach. In fact, a massive cellular lost is observed during the days just after the graft. The injection of large quantities of myoblasts can make up for this quantitative deficit. Moreover, the myogenic cells do not migrate a lot when they are injected in the muscle. It is therefore necessary to make multiple close injections in order to treat an entire muscle. Growth factors are small peptides that can modulate many cellular activities. The insulin-like growth factor (IGF-1) favours myogenic cells proliferation, differentiation and survival. IGF-1 possesses many isoforms like the mechano growth factor (MGF). The results presented in this thesis demonstrate that a synthetic peptide within the MGF also favours myoblast proliferation. New pro-migratory functions have been demonstrated for both IGF-1 and MGF synthetic peptide. Indeed, they are both able to promote in vivo migration of human myogenic cells by modulating important proteolytic systems. On the other hand, my results have also demonstrated that the MGF peptide can increase the transplantation success when murine receivers are treated by intramuscular injections or systemic administration. This improvement is possibly caused by the MGF peptide pro-mitogenic capacity which could compensate for the initial cell lost. IGF-1 and MGF synthetic peptide could be used to help diminish the number of injections required to treat a muscle while contributing to myoblast transplantation success in patients affected by Duchenne muscular dystrophy.
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Vulin, Adeline Blot Stéphane. "Restauration de la dystrophine par saut d'exons chez le modèle canin GRMD ; Augmentation de la masse musculaire par inhibition de la myostatine rationnel thérapeutique pour DMD ? /." Créteil : Université de Paris-Val-de-Marne, 2007. http://doxa.scd.univ-paris12.fr:8080/theses-npd/th0394255.pdf.
Full textAbstract:
Thèse de doctorat : Biologie cellulaire et moléculaire : Paris 12 : 2005.Version électronique uniquement consultable au sein de l'Université Paris 12 (Intranet). Titre provenant de l'écran-titre. Bibliogr. : 150 réf.
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Wzee, Raghda Al. "La régulation de l'expression des canaux TRPC1 par la voie calcineurine/NF-AT dépendante du calcium dans les cellules musculaires squelettiques déficientes en dystrophine." Poitiers, 2011. http://www.theses.fr/2011POIT2259.
Full textAbstract:
La protéine transmembranaire TRPC1 est un constituant important des canaux cationiques dans les fibres musculaires squelettiques. Ces canaux sont altérés dans les cellules musculaires dystrophiques de souris mdx. L'altération de ces canaux TRPC1 provoque des entrées de calcium trop importantes dans les cellules musculaires, ce qui déstabilise l'homéostasie calcique et participe à la mort de ces cellules. L'entrée de calcium est connue pour moduler, via la voie calcineurine/NF-AT, l'expression de certains gènes. Dans ce contexte, l'objectif du doctorat était d'analyser l'expression de TRPC1 dans les cellules musculaires normales et dystrophiques et de déterminer si une élévation du calcium intracellulaire est à son tour impliquée dans l'augmentation de l'expression de ces canaux via la voie calcineurine/NF-AT. De plus, nous examinons l'effet protecteur des inhibiteurs pharmacologiques contre cette voie sur la viabilité cellulaire. Les résultats de RT-PCR quantitative et Western blot montrent une augmentation de l'expression de l'ARNm et de la protéine TRPC1 respectivement, dans les myotubes SolC1 et SolD6 dépolarisés par KCl. Une élévation du calcium cytoplasmique suite à la dépolarisation pourrait stimuler l'expression de TRPC1 en activant la voie calcineurine/NF-AT. La Cyclosporine A, inhibiteur de la calcineurine, diminue l'effet potentiateur de la dépolarisation KCl sur l'expression de TRPC1. L'extinction de TRPC1 par siRNA permet d'augmenter la viabilité des myotubes déficients en dystrophine. Cette stratégie ou le blocage pharmacologique présenterait un intérêt thérapeutique en protégeant de la mort cellulaire provoquée par les influx calciques altérésThe transmembrane protein TRPC1 is an important element of cationic channels in skeletal muscle fibres. These channels are altered in muscular dystrophic cells from mouse mdx. A dysfunction of these TRPC1 channels induced excessive entries of calcium into muscular cells that destabilizes calcium homeostasis and contributes to cell death. An entry of calcium is known for modulating, via the calcineurin/NFAT pathway, the expression of some genes. That's why, we propses that the calcineurin/NFAT pathway could play a role in increased expression of TRPC1 protein. In this context, the objective of the thesis work was to analyse expression of TRPC1 in normal and dystrophic muscular cells, and to determine if an intracellular calcium increase is involved, in turn, in the increase of expression of these channels via the calcineurin/NFAT pathway. Results obtained by means of quantitative RT-PCR and Western blot showed an increase of expression of TRPC1 mRNA and protein respectively into SolC1 and SolD6 myotubes depolarized by KCl. Elevation of cytoplasmic calcium following the depolarization can stimulate the expression of TRPC1, by activing the calcineurin/NFAT pathway. Cyclosporin A, an inhibitor of calcineurin, diminished the potentiator effect of KCl depolarization on TRPC1 expression. Extinction of TRPC1 by siRNA enhanced cell viability of dystrophin-deficient myotubes. This strategy or pharmacological agents could present therapeutical interest by preventing the cell death induced by these altered calcium influxes
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Le, Hir Maëva. "Développement de stratégies thérapeutiques de trans-épissage pour la maladie de Huntington et la dystrophie musculaire de Duchenne, et étude du maintien des vecteurs AAV dans un contexte musculaire dystrophique." Paris 6, 2013. http://www.theses.fr/2013PA066294.
Full textAbstract:
La dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) est due à des mutations du gène DMD causant l’absence de protéine dystrophine (Dys). La structure modulaire de la Dys a permis d’envisager une stratégie de saut d’exon thérapeutique pour permettre l’expression d’une Dys tronquée mais fonctionnelle. Tous les exons n’étant pas dispensables, l’équipe a développé une stratégie de trans-épissage thérapeutique (TET) pour réparer la fin des transcrits DMD. Des transcrits réparés ainsi que de la Dys issue du TET ont été détectés in vivo. Une stratégie d’échange d’exon (EE) a aussi été développée, a fait ses preuves in vitro puis a été évaluée in vivo chez des souris wt et mdx par injection de vecteurs AAV exprimant les molécules d’EE. La détection des génomes viraux (GV) a révélé une différence du nombre de GV présents dans les muscles injectés wt vs mdx, nous faisant supputer que les cycles de dégénérescence/régénération caractérisant les muscles dystrophiques pouvaient causer une perte des GV. Nous avons étudié le maintien des GV d’AAV dans 3 modèles DMD : les souris mdx et double KO (DMD-/-UTRN-/-), et le chien GRMD. Une perte des GV a été observée dans ces 3 modèles : à court terme si la dose de vecteur thérapeutique injectée est insuffisante ou si le vecteur n’est pas thérapeutique, et à long terme après injection d’une dose optimale de vecteur thérapeutique. Le TET étant pertinent pour les maladies dominantes, nous avons développé une stratégie de TET pour réparer les transcrits HTT, dont l’expansion de la séquence polyQ de l’exon 1 cause la maladie de Huntington. Des transcrits trans-épissés ont été détectés in vitro de façon reproductible, mais en faible quantitéDuchenne muscular dystrophy (DMD) is caused by mutations in DMD gene which abolish the synthesis of dystrophin protein (Dys). The modular structure of Dys allowed to imagine a therapeutic exon skipping strategy, in order to express a truncated but functional Dys. As all exons are not dispensable, a therapeutic trans-splicing strategy has been developed in the team to repair the end of DMD transcripts. Repaired transcripts and a small amount of dystrophin resulting from trans-spliced transcripts were detected in vivo. An exon exchange (EE) strategy was also developed, and showed its efficiency in vitro. It was then tested in vivo in wt and mdx mice by injections of AAV vectors encoding exon exchange molecules. The detection of AAV viral genomes (VG) revealed an important difference between VG copy numbers contained in wt vs mdx injected muscles, suggesting that degeneration/regeneration cycles characterising dystrophic muscles could cause a loss of VG. We studied AAV VG persistence in three models of DMD: mdx and double KO (DMD-/-UTRN-/-) mice, and GRMD dog. A loss of VG was observed in the three models: in the short term when the dose of therapeutic vector injected is unsufficient or when the vector is not therapeutic, and in the long term even when an optimal dose of therapeutic vector is injected. As therapeutic trans-splicing is relevant for dominant diseases, we developed a trans-splicing strategy to repair HTT transcripts, in which polyQ sequence expansion in exon 1 leads to Huntington disease. We developed pre-trans-splicing molecules and tested them in vitro: trans-spliced transcripts were detected in a reproducible way, but always in low amounts
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Divet, Alexandra. "Rôle des mécanismes intracellulaires de régulation du calcium dans la dystrophie musculaire de Duchenne : approche physiologique, pharmacologique et moléculaire." Nantes, 2003. http://www.theses.fr/2003NANT2039.
Full textAbstract:
Le but de ce travail est d'étudier les fonctions du réticulum sarcoplasmique (RS) des muscles EDL et soléaire de souris mdx. Les résultats montrent, dans les deux types de muscles, un ralentissement de la charge en Ca2+ sans modification de la capacité maximale de stockage. Une altération des mécanismes de charge pourrait impliquer la Ca2+-ATPase et/ou la présence d'une fuite passive de Ca2+. Les résultats issus d'approches physiopharmacologiques, biochimiques et moléculaires indiquent, dans l'EDL mdx, une diminution de la sensibilité à un inhibiteur de la Ca2+-ATPase du RS, associée à l'expression de son isoforme lente SERCA2a. Dans le soléaire mdx seule une importante fuite de Ca2+ du RS a été observée, impliquant les canaux calciques : récepteurs à la ryanodine et à l'inositol triphosphate. Ces résultats soulignent le rôle majeur du RS dans la perturbation de l'homéostasie calcique des cellules musculaires dystrophiques impliquant différents mécanismes selon le type musculaire.
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Hamoudi, Dounia. "Implication de la voie RANK/RANKL/OPG dans la physiopathologie musculaire et potentiel thérapeutique de l’anti-RANKL pour la dystrophie musculaire de Duchenne." Doctoral thesis, Université Laval, 2021. http://hdl.handle.net/20.500.11794/69507.
Full textAbstract:
La dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) est une maladie génétique neuromusculaire provoquée par des mutations du gène codant pour la dystrophine situé sur le chromosome Xp21. L'absence de cette protéine membranaire engendre une dégénérescence progressive des cellules, une augmentation de la concentration du calcium intracellulaire, des dommages oxydatifs, inflammatoires et ultimement une fibrose musculaire. Les patients souffrent également de plusieurs autres anomalies dont les plus importantes sont la cardiomyopathie et l'ostéoporose. Il n'y a actuellement aucune stratégie curative pour la DMD. Les corticostéroïdes sont prescrits pour prolonger la mobilité et l'espérance de vie, mais sont associés à une ostéotoxicité élevée. Bien qu'il existe une association entre l'ostéoporose et la dégénérescence musculaire, nous avons été les premiers à étudier le rôle du récepteur-activateur du facteur nucléaire kB (RANK), son ligand RANKL et du récepteur soluble ostéoprotégérine (OPG), principaux régulateurs du remodelage osseux, dans le contexte des maladies musculaires. Nos travaux antérieurs montrent que les myotubes différenciés secrètent l'OPG, expriment le récepteur RANK à leurs surfaces et dans le contexte de DMD l'expression de l'ARNm de RANK est 4 fois plus élevée dans les muscles de souris dystrophiques comparativement aux muscles sains. L'objectif de la présente thèse vise à exploiter cette voie afin de comprendre le mécanisme d'action de ces cytokines sur la physiopathologie musculaire et d'établir une stratégie thérapeutique pour la DMD en traitement unique ou combinée aux glucocorticoïdes. Dans un premier temps, nous avons investigué l'impact de la neutralisation systémique à long terme de RANKL sur l'intégrité et la fonction musculaire et osseuse dans un modèle sévère de dystrophie déficient en dystrophine/haploinsuffisant en utrophine. Ensuite, nous avons étudié les rôles physiopathologiques de l'OPG sur les tissus musculaires en caractérisant la fonction musculaire de souris déficientes en OPG. Finalement, nous avons débuté une étude sur l'effet de neutralisation systémique de RANKL sur l'ostéoporose associée à un traitement au deflazacort, un glucocorticoïde prescrit pour la DMD. Ainsi nous avons démontré que le traitement à long terme à l'anti-RANKL améliore la fonction et l'intégrité musculaire et osseuse chez les souris dystrophiques et protège contre l'ostéoporose induite par les glucocorticoïdes. À l'opposé, l'absence d'OPG induit, possiblement via RANKL, une faiblesse osseuse et musculaire et une atrophie sélective des fibres musculaires les plus puissantes. Ces avancées repoussent les connaissances au sujet de la voie RANK/RANKL/OPG au sein de la communication muscle-os et appuient l'anti-RANKL comme perspective thérapeutique chez les patients atteints de la DMD.
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Cheikh, Anissa Rahma. "Développement de stratégies pour améliorer la survie des myoblastes humaines in vitro et in vivo dans le cadre d'une thérapie cellulaire pour la dystrophie musculaire de Duchenne." Master's thesis, Université Laval, 2009. http://hdl.handle.net/20.500.11794/20794.
Full textAbstract:
[Préconditionnement hypoxique des myoblastes humains ; préconditionnement pharmacologique des myoblastes humains].Problématique: La transplantation des myoblastes est une approche thérapeutique potentielle pour la dystrophie musculaire de Duchenne. Un des facteurs limitant de cette approche est la mort précoce de près de 80 % des myoblastes transplantés durant les premiers jours suivant la greffe. Nous avons vérifié si le préconditionnement hypoxique et pharmacologique des myoblastes humains permettait de réduire leur taux de mortalité in vitro. Par ailleurs, un 'cocktail' pro-survie constitué de facteurs anti-apoptotiques a été utilisé dans le but d'en tester l'effet sur la survie des myoblastes in vivo. Méthode: In vitro, la mortalité a été évaluée par marquage à l'Annexine V et par analyse au FACS. In vivo, la quantité de cellules vivantes a été estimée par scintigraphie en mesurant la quantité de carbone 14 radioactif incorporé dans l'ADN des myoblastes. Résultats: In vitro, le préconditionnement hypoxique des myoblastes permet d'augmenter le taux de prolifération des myoblastes. Le préconditionnement pharmacologique des myoblastes au DETA-NO (10 muM), un donneur d'oxyde nitrique permet d'améliorer leur survie in vitro (p
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Latroche, Claire. "Organization and function of the vascular network and its interactions with satellite cells in normal and pathological muscle." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2015. http://www.theses.fr/2015USPCB121/document.
Full textAbstract:
Le muscle strié squelettique est un tissu richement vascularisé. Cependant, les vaisseaux ne sont pas seulement des pourvoyeurs d'oxygène et de nutriments, mais participent activement à l'homéostasie tissulaire en interagissant avec les cellules souches musculaires. La Dystrophie Musculaire de Duchenne (DMD) est une pathologie associée à un dommage musculaire, des cycles de nécrose/régénération, un remodelage tissulaire et une plasticité vasculaire. Nous avons en effet, démontré par des études in vivo un défaut d'organisation du réseau vasculaire en 3D grâce au croisement entre une souris mdx et une souris Flk1-GFP (modèle murin de la DMD fluorescente pour les cellules endothéliales), ainsi qu'une atteinte histologique du réseau vasculaire (analyse quantitative et morphométrique des vaisseaux) incluant un défaut de vascularisation des fibres musculaires. L'atteinte histologique est associée à un défaut de perfusion du muscle que nous avons démontré en RMN (résonnance magnétique nucléaire), une technique sophistiquée et non invasive nous permettant d’étudier à la fois la perfusion et le métabolisme énergétique. Dans le modèle du muscle strié squelettique, qui régénère complètement après une lésion, l'angiogenèse et la myogenèse sont concomitantes. Notre hypothèse générale est que le couplage entre myogenèse et angiogenèse est altéré dans les myopathies dégénératives mais leurs mécanismes cellulaires et moléculaires restent mal connus. Nos travaux ont mis en évidence l'existence d'un couplage cellulaire et moléculaire fonctionnel entre la myogenèse et l'angiogenèse en utilisant des modèles in vitro et in vivo dans lesquels les cellules endothéliales (ECs) et les cellules précurseurs myogéniques (MPCs) sont associées. Nos résultats montrent que MPCs et ECs s'attirent réciproquement, suggérant la sécrétion de facteurs chimiotactiques spécifiques. Les ECs stimulent fortement l'entrée des cellules souches du muscle dans le programme de différenciation myogénique (prélude indispensable à la formation des structures multinucléées et contractiles). Nous avons également démontré, grâce à une technique de coculture en 3 dimensions, que les MPCs présentent un potentiel pro-angiogénique important, permettant la formation de structures vasculaires différenciées. Ces résultats ont été validés in vivo (angiogenèse en plug sous-‐cutanés) et démontrent ainsi que la myogenèse et l'angiogenèse sont des processus couplés au cours de la régénération musculaire. Nous avons identifié trois déterminants moléculaires mis en jeu, suite à l’analyse d’un transcriptome des cellules souches musculaires et des cellules endothéliales, isolées à partir du muscle à différents temps au cours de la régénération. Ces données indiquent que l'environnement vasculaire contrôle le destin des cellules souches musculaires, qui en retour, interagissent sur leur environnement proche. Par ces interactions, les cellules vasculaires jouent donc un rôle central dans le remodelage tissulaire après un phénomène destructif. Ce travail montre pour la première fois que l'organisation et la fonction des vaisseaux sont altérées au cours des pathologies musculaires dégénératives et l'importance des interactions entre cellules souches du parenchyme et cellules endothéliales des vaisseaux dans la régulation de l'homéostasie tissulaire, et ouvrent une réflexion sur la prise en compte du processus d'angiogenèse associé étroitement à la réparation tissulaire – ici la myogenèse – dans une perspective thérapeutiquesSkeletal muscle is highly vascularized and has the outstanding capacity to regenerate ad integrum after an injury. Beyond oxygen and nutriment supply, new functions for vessels have been recently identified, through the interactions vessel cells establish with muscle stem cells. Duchenne Muscular Dystrophy is characterized by the lack of dystrophin, a sarcolemma anchoring protein, and by cycles of necrosis/regeneration, tissue and vessel remodeling that lead to progressive loss of muscle force. In this severe context, our aim was to decipher alterations of the vascular network structural organization and better understand the functional repercussions on the muscle tissue. We performed a confrontation between morphological and functional approaches using a non-invasive protocol. Histology and morphometry were performed using Flk1GFP/+ crossed with mdx mice (model for the human DMD where all blood vessels express GFP). Multiparametric and functional nuclear magnetic resonance consisted in simultaneous acquisition of arterial spin labelling imaging of perfusion and 31P spectroscopy of phosphocreatine kinetic. We demonstrated for the first time that the vascular system displayed marked alterations in 12 month--‐old mdx mice, more specifically at the capillary scale. Histological results confirmed these observations showing strong perturbations of the microvascular network that are directly linked to the muscle lesions. In parallel, we analyzed the repercussions of these disruptions on skeletal muscle physiology. Our results demonstrated that after a hypoxic stress, blood perfusion was decreased in mdx mouse. During skeletal muscle regeneration, myogenic precursor cells (MPCs) interact with neighboring cells to expand and differentiate. Among them, endothelial cells (ECs) have to be considered. Their close proximity suggests that myogenesis and angiogenesis take place together during muscle regeneration. Our aim was to investigate the existence of such a coupling and to identify the underlying molecular mechanisms. We demonstrated a functional interplay between the two cell types as both cells attracted each other, suggesting the secretion of specific attractive factors. ECs strongly stimulated MPC differentiation and using 3D co-cultures, we revealed that MPCs promoted angiogenesis. These results were validated in vivo using matrigel plug assay. By analyzing transcriptomic from ECs and MPCs sorted at different time points during muscle regeneration, we evidenced and validated the role of the 3 novel molecules regulating angiogenesis/myogenesis coupling: Apelin, Oncostatin M and Periostin, that each plays specific roles during early and late phases of muscle regeneration. Thus, interactions between vessel cells and MPCs seem to play a central role in the tissue remodeling after an injury. Collectively our results point out, for the first time, strong perturbations of the vascular network with functional repercussions on muscle tissue perfusion in dystrophinopathic muscle. In light of our results evidencing the coupling between myogenesis and angiogenesis during skeletal muscle regeneration, due to the specific interactions between ECs and MPCS, it is likely that, coupling between myogenesis and angiogenesis could be affected in pathological context
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Decrouy, Anne. "Découverte et première tentative d'explication d'un défaut d'endothermogénèse musculaire dans le modèle murin de la myopathie de Duchenne." Poitiers, 1992. http://www.theses.fr/1992POIT2253.
Full textAbstract:
Le produit genique qui fait defaut chez les patients atteints de dystrophie musculaire de duchenne (dmd), ainsi que chez la souris mdx (mutante de la souche c57b1/10), est une proteine de 420 kda, la dystrophine, dont l'absence dans la membrane plasmique des cellules musculaires squelettiques s'accompagne d'un accroissement de permeabilite sarcolemmale au calcium, et d'une concentration elevee de calcium libre dans le sarcoplasme propre a activer certaines proteases. Cette activation pourrait etre a l'origine de la degenerescence lente et inexorable des fibres musculaires qui conduit les patients dmd a une mort precoce. A ce titre, la souris mdx differe des patients dmd dans la mesure ou ses muscles jouissent d'un grand pouvoir de regeneration qui, en permettant a l'animal de vivre presque normalement, en fait un modele tres utile pour l'etude de la maladie. Nous avons decouvert, grace a une analyse microcalorimetrique, un defaut d'endothermogenese specifique dans les muscles de souris mdx compares a leurs homologues chez la souris temoin (c57b1/10). Ce defaut peut s'expliquer en partie par une reduction du cout energetique de l'homeostasie calcique, consequence d'une diminution de la recirculation d'ion calcium a travers la membrane du reticulum sarcoplasmique. L'essentiel du defaut d'endothermogenese semble toutefois lie a un manque d'utilisation (non de captation) du glucose par les muscles de souris mdx en l'absence d'insuline. Le mecanisme de cette perte de capacite d'utiliser un substrat energetique, sa relation a l'absence de dystrophine dans le sarcolemme et son role dans la degenerescence cellulaire sont inconnus. Leur etude pourrait ouvrir de nouvelles perspectives de traitement de la dmd
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HEILIG, ROLAND. "Identification du gene de la myopathie de duchenne : caracterisation du messager chez le poulet : etude de la dystrophine." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 1989. http://www.theses.fr/1989STR13011.
Full textAbstract:
La myopathie de duchenne (dmd), maladie hereditaire grave liee au chromosome y. Isolement d'un point d'acces au locus dmd, par une marche genomique, les auteurs ont isole une region de 230 kb de ce gene gigantesque. Une etude structurale comparative entre deux especes eloignees (homme et poulet) a permis d'identifier une region de la proteine soumise a tres forte pression selective. Chez la souris, le mutant "max" pourrait correspondre a l'homologue de la mutation dmd et constituer a ce titre un modele animal de choix pour l'etude de certains aspects de la pathologie humaine
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Jovenet, Anne-Marie. "Apprentissage utile de l'espace chez les adolescents atteints de myopathie Duchenne de Boulogne : déficits à compenser ou schèmes à développer ?" Paris 5, 1996. http://www.theses.fr/1996PA05H009.
Full textAbstract:
L'objectif de la thèse est de proposer un cadre théorique nouveau pour étudier comment les adolescents atteints de myopathie duchenne de Boulogne réalisent des apprentissages dans le domaine de la représentation de l'espace. En effet, les travaux recenses par l'auteur s'appuient sur les résultats de ces sujets à des épreuves standardisées pour conclure à leur infériorité. L'interprétation est alors basée sur le manque d'expériences motrices. Or, l'évolution des intérêts pour les "procédures" ou pour les "fonctionnements différents" ainsi que la théorie de G. Vergnaud permettent de poser très différemment les problèmes. Le suivi de certains sujets sur quatre ans, la comparaison des résultats et des conduites, sur différentes taches de représentation spatiale font état d'une supériorité des myopathes les plus handicapes par rapport à leurs pairs et aux valides de même âge. Perception et activités d'imagerie mentale favorisent la reconnaissance des invariants nécessaire à la résolution de la tâche. L'action est alors le résultat d'un travail de la représentation. L'auteur propose une grille d'analyse permettant de visualiser les interactions entre moyens de prises d'information et de contrôle, opérations de pensée, aides a l'apprentissage. La thèse apporte donc à la communauté scientifique une meilleure connaissance de ces sujets et un nouvel éclairage sur les activités de représentationThe purpose of the thesis is to put forward a new theoretical framework to study how the teenagers affected by duchenne muscular dystrophy succeed in learning how to represent space. Actually the works listed by the author rely upon the results of these subjects submitted to standard tests in order to conclude that they are inferior. Then the interpretation is based on the lack of motive action. Yet the evolution of the interests for the procedures or for the different processes as well as the theory of the representation by g. Vergnaud help to lay down the problems differently. Following some subjects over four years, comparing the results and the processes show that the most handicapped children with muscular dystrophy are superior to their peers and to the able-bodied of the same age. The perception and activity of mental pictures favour the recognition of the necessary elements to achieve the task. The act is thus the result of a work of representation. The author proposes an analytical grid which helps to figure out the interactions between the means to catch information and to control, thinking and the help to learning. The thesis brings a better knowledge of these subjects and a new clarification regarding the act of representation to the scientific community
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Desguerre, Isabelle. "Subphénotypes de la maladie de Duchenne et caractérisation de la myofibrose dystrophique humaine et expérimentale." Phd thesis, Université Paris-Est, 2008. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00462105.
Full textAbstract:
La dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) est la maladie neuromusculaire la plus fréquente de l'enfant. Son évolution progressive inexorable conduit habituellement au décès dans la troisième décade. La DMD constitue cependant une affection hétérogène pour la sévérité de l'atteinte musculaire, cognitive et cardiaque, et cette hétérogénéité n'est pas totalement expliquée par la localisation des mutations dans le gène de la dystrophine. Ma thèse comporte trois volets: (1) une analyse clinique multivariée d'une cohorte de DMD suivie à long terme qui nous a permis de définir 4 phénotypes distincts de DMD; (2) une étude de corrélation clinico-pathologique qui a identifié la fibrose endomysiale précoce comme seul facteur histologique prédictif de sévérité motrice; (3) la mise au point d'un modèle murin original de myofibrose dystrophique chez la souris mdx déficiente en dystrophine. 1- Étude multiparamétrique clinique. La saisie par la même équipe des données fonctionnelles musculaires, cardiaques, respiratoires et cognitives de 75 patients atteints de DMD (tous génotypés et présentant une absence complète de dystrophine musculaire), suivis pendant >10 ans, a permis d'établir un modèle multiparamétrique satisfaisant à deux dimensions principales, cognitive et motrice, et de définir 4 clusters phénotypiques : (i) DMD cognitive et motrice congénitale (20%), (ii) DMD classique (28%), (iii) DMD motrice pure modérée (22%), (iv) DMD motrice pure sévère (30%). La corrélation génotypephénotype était restreinte à la seule atteinte cognitive. Des indicateurs pronostics précoce ont été identifiés et validés sur une 2ème série de 34 patients. 2- Étude histopathologique. Les variations de sévérité de l'atteinte musculaire n'étant pas expliquées par la génétique moléculaire, nous avons cherché à corréler les paramètres moteurs et la biopsie musculaire prélevée dans le quadriceps à un stade précoce (3-7 ans) chez 25 patients (analyse stéréologique des images numérisées pour les paramètres élémentaires: nécrose/régénération, fibres hypercontractées, adipocytes, fibrose endomysiale et périmysiale). Seule la fibrose endomysiale était associée à un pronostic moteur défavorable (p<0.002) attesté par l'âge de perte de marche, la force du quadriceps et le testing musculaire global à 10 ans. Cette fibrose endomysiale dissociait les capillaires des myofibres (écartement x 2.5), et s'accompagnait d'une augmentation sélective des macrophages CD206+ activés dans la voie alterne (M2) et d'une diminution relative des cellules satellites musculaires (p<0.0001). Ces données suggèrent un rôle clé de la fibrose endomysiale (et des macrophages M2 profibrosant) et dans la sévérité clinique de la DMD. 3- Étude expérimentale. Ces éléments rendent nécessaire la mise au point d'un modèle expérimental de myofibrose dystrophique, la souris mdx présentant peu de fibrose et un déficit moteur modéré et tardif. Nous avons mis au point une nouvelle méthode de lésion musculaire focale profibrosante du tibialis antérieur chez la souris mdx (piqûres multiples quotidiennes pendant 15 jours). Une fibrose endomysiale attestée par un fort immunomarquage du collagène I (à 8, 30, 60 et 90 jours) a été quantifiée et corrélée à la perte de la force musculaire dans la patte lésée (comparée au muscle contralatéral). Ces résultats légitiment et préparent les futures stratégies thérapeutiques "anti-fibrosantes" dans la DMD
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Dominique, Jean-Christophe. "Amélioration du taux de greffe de cellules myogéniques pour la dystrophie musculaire de Duchenne : surexpression du récepteur à l'IGF-1 sur des cellules humaines et utilisation du facteur de croissance MGF." Thesis, Université Laval, 2009. http://www.theses.ulaval.ca/2009/25962/25962.pdf.
Full textAbstract:
La transplantation de myoblastes est une thérapie envisagée pour le traitement de la Dystrophie musculaire de Duchenne (DMD). La mort précoce des cellules injectées et leurs faibles migrations limitent son succès. Le MGF-Ct24E, un peptide synthétique qui représente le peptide E de l’isoforme Ec de l’IGF-1, a été utilisé. Il a augmenté la prolifération cellulaire en médiant son effet par un récepteur différent de celui à l’IGF-1. Des injections systémique et intramusculaire ont amélioré le taux de greffe, ce qu’un pré-traitement et une co-injection du peptide n’a pas permis. La surexpression du récepteur à l’IGF-1 avec un lentivirus a augmenté la prolifération des cellules et n’a eu aucun effet sur leur différentiation. La sélection de cellules surexprimant fortement le récepteur à l’IGF-1 et phosphorylant fortement Akt a amélioré le succès de transplantation. Ces résultats offrent une perspective encourageante pour l’amélioration de la transplantation cellulaire pour des patients atteints de DMD.Myogenic cells transplantation is one of the promising therapies to treat dystrophic patients. Early cells death and poor migration are important problems who limit this therapy’s success. MGF-Ct24E, a synthetic copy of the peptide E from the IGF-1 Ec isoform, was used. The peptide increases the proliferation of cells and did no effect on the differentiation. Injected systematically and intramuscularly, MGF-Ct24E increased the graft success. When the cells were pretreated with the peptide and co-injected with it, no increase in the graft success was seen. The overexpression of IGF-1 receptor on human cells with a lentivirus increased the proliferation rate and did no effect on their differentiation. When the cells were selected for a high expression of the IGF-1 receptor and for a high phosphorylation of Akt, the graft success was increased. Together, those results are offering an interesting avenue for the amelioration of cells transplantation in DMD.
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Massoudi, Ali. "Les cellules souches mésenchymateuses du tissu adipeux humain : étude de leur potentiel myogénique." Nice, 2007. http://www.theses.fr/2007NICE4012.
Full textAbstract:
Notre laboratoire a isolé à partir de tissu adipeux provenant de nouveau-né, une population de cellules souches mésenchymateuses, dénommé cellules hMADS (human Multipotent Adipose-tissue Derived Stem cells). Les cellules hMADS présentent à l’échelle clonale les propriétés fondamentales associées aux cellules souches telles que la multipotence et l’auto-renouvellement. Après extravasion, in vitro ou consécutive à leur transplantation dans un organe secondaire, les cellules souches mésenchymateuses pourraient se différencier en des types cellulaires inhabituels. Nos résultats antérieurs montraient en effet que les cellules hMADS pouvaient, après transplantation dans le muscle Tibialis anterior de la souris mdx, contribuer à la formation de myofibres contenant des noyaux humains et exprimant la dystrophine humaine. L’objectif de ce travail a été d’élucider le mécanisme par lequel les cellules hMADS contribuent à la formation de myofibre squelettique. Dans ce but, nous avons essayé « d’allumer » le programme myogénique en testant sur ces cellules de nombreuses conditions de culture. Seules les expériences de co-cultures avec des myoblastes ont permis de mettre en évidence la contribution des cellules hMADS à la formation de myotubes hybrides. Ces myotubes présentent un phénotype « normale » et expriment de nombreux gènes musculaires codés par les noyaux issus de la fusion de cellules hMADS, dont la dystrophine. Enfin, nous avons démontré que la conversion myogénique des cellules hMADS dans ces conditions n’était pas due à un processus de « détermination/différenciation », mais à une programmation subie des noyaux hMADS. Cette programmation se produirait après la fusion et nécessiterait l’action des facteurs de transcription myogénique (Myogenic Regulatory Factors) codés par les noyaux issus des myoblastesOur laboratory has isolated from human infant adipose tissue, a mesenchymal stem cell population, named hMADS cells (human Multipotent Adipose-Derived Stem cells). HMADS cells exhibit at the single-cell level fundamental stem cell properties such self-renewal and multipotentiality. In addition, mesenchymal stem cells may have an intrinsic capacity to differentiate into supplementary cell types in culture or after transplantation. Previously we have shown that hMADS cells were able to restore dystrophin expression after transplantation in mdx mice. In the current study, we investigated the mechanism of skeletal muscle phenotype acquisition by hMADS cells. We first tested various culture conditions to induce an intrinsic myogenic program in hMADS cells. Myotube formation and muscle determination/differentiation factors, i. E. Pax7, myf-5, MyoD and myogenin were assessed. No myogenic conversion could be detected under these conditions. In contrast, when co-cultured with myoblasts, hMADS cells reproducibly contributed to hybrid myotube formation, expressed several muscle differentiation markers and had the ability to restore dystrophin expression in human dystrophic background. Interestingly, this myogenic conversion was not associated by the expression of key transcription factors for muscle determination/differentiation. Therefore, our results clearly demonstrated that acquisition of myogenic identity by hMADS cells did not occur via a bona fide determination/differentiation process. We propose a model of myogenic conversion of human mesenchymal stem cells derived from adipose tissue in which, only after fusion, transcription factors of myoblasts were able to program hMADS genome toward the skeletal muscle lineage